Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Деградация фосфатазы CDC25A в клетках линии Hela: механизм и влияние на клеточный цикл

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Голоудина, Анастасия Равильевна

ГЛАВА 1. ВВЕДЕНИЕ.

1.1. Актуальность проблемы

1.2. Цели и задачи исследования.

1.3. Основные положения, выносимые на защиту.

1.4. Научная новизна работы.

1.5. Теоретическое и практическое значение работы.

1.6. Апробация работы.

1.7. Объём и структура диссертации.

ГЛАВА 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Регуляция клеточного цикла.

2.1.1. Циклин-зависимые киназы и регуляция их активности.

2.1.1.1.Регуляция активности циклин-киназных комплексов с помощью регуляторной субъединицы циклина.

2.1.1.2. Регуляция активности циклин-зависимых киназ путем их фосфорилирования.

2.1.1.3. Регуляция активности циклин-зависимых киназ путем связывания с ингибиторами.

2.2. Контрольные точки клеточного цикла.

4 2.2.1. Роль белков ATM, ATR и их мишеней в функционировании контрольных точек.

2.2.2. Роль р38 МАРК в функционировании контрольных точек.

2.2.3. Молекулярные механизмы остановки клеточного цикла в фазе Gi.

2.2.4. Молекулярные механизмы остановки клеточного цикла в фазе S.

2.2.5. Молекулярные механизмы остановки клеточного цикла в фазе G2.

2.3. Фосфатазы Cdc25: структура и функции.

2.3.1. Фосфатаза Cdc25C.

2.3.2. Фосфатаза Cdc25B.

2.3.3. Фосфатаза Cdc25A.

2.3.3.1. Регуляция активности фосфатазы Cdc25A путем фосфорилирования.

2.3.3.2. Механизм протеасомной деградации фосфатазы т Cdc25A.

2.3.3.3. Регуляция активности фосфатазы Cdc25A путем связывания с белком 14-3-3ст.

2.4. Клетки линии HeLa.

ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА.

3.1. Получение клеточных линий с индуцибельной экспрессией различных форм фосфатазы Cdc25A и их культивирование.

3.2. Плазмиды и сайт-специфический мутагенез.

3.3. Облучение клеток, вызов осмотического шока, обработка клеток ингибиторами киназ, ингибиторами белкового синтеза и протеасомной деградации.

3.4. Анализ содержания белков методом иммуноблоттинга.

3.5. Определение скорости синтеза ДНК.

3.6. Подавление экспрессии киназы Chkl с помощью siRNA к Chkl.

3.7. Анализ функциональной активности мутантной формы фосфатазы Cdc25A in vitro.

3.8. Определение количества митотических клеток. f 3.9. Анализ распределения клеток по фазам клеточного цикла.

3.10. Анализ функциональной активности циклин-киназных комплексов in vitro.

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ.

4.1. Замена Ser75 на Ala отменяет деградацию Cdc25A в делящихся клетках

4.2. Деградация фосфатазы Cdc25A после повреждения ДНК зависит от фосфорилирования по Ser75.

4.3. Разные киназы отвечают за деградацию Cdc25A после различных стрессовых воздействий.

4.4. Анализ уровня фосфорилирования фосфатазы Cdc25A после различных стрессовых воздействий.

4.5. Анализ распределения по фазам цикла клеток HeLa, экспрессирующих различные формы Cdc25A.

4.6. Киназы р38 и Chkl участвуют в остановке синтеза ДНК после стрессовых воздействий.

4.7. Клетки останавливают синтез ДНК после облучения, несмотря на присутствие постоянно активной Сс1с25А.

4.8. Киназы р38 и СЬк1 участвуют в остановке клеточного цикла на границе перехода вг—после стрессовых воздействий.

4.9. Экспрессия стабильной формы Сс1с25А позволяет увеличить количество клеток, преодолевших контрольную точку Ог/М после стрессовых воздействий.

4.10. Анализ активности циклин-зависимых киназ сс!к2 и сс!с2 в клеточных линиях, экспрессирующих различные формы фосфатазы Сас25А.

ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ.

5.1. Изучения сайтов фосфорилирования Сс1с25А, участвующих в регуляции ее стабильности.

5.2. Разные киназы фосфорилируют Сс1с25А после разных стрессовых воздействий.

5.3. Анализ осуществления клетками НеЬа контрольных точек.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Деградация фосфатазы CDC25A в клетках линии Hela: механизм и влияние на клеточный цикл"

ГЛАВА 1. ВВЕДЕНИЕ 1.1. Актуальность проблемы

Деление клетки - сложный многоэтапный процесс, нарушение строгой регуляции которого может стать причиной трансформации или гибели клетки. После получения сигнала к делению клетка переходит из фазы покоя во в фазу вь в которой запускаются процессы, необходимые для синтеза ДНК (фаза Б). После завершения фазы Б клетка вступает в фазу Ог, где готовится к разделению на две дочерние клетки, которое происходит в митозе (фаза М). Прохождение клетки по циклу регулируется циклин-зависимыми киназами, активность которых зависит от фосфорилирования и дефосфорилирования по определенным сайтам и взаимодействия с позитивными и негативными белками-регуляторами. В случае повреждения ДНК прохождение клетки по циклу может быть остановлено в контрольных (сверочных) точках клеточного цикла - на границах перехода О^Б, вг/М и в митозе. Таким образом клетка получает возможность исправить полученные повреждения и не допустить передачу дочерним клеткам мутационных изменений ДНК.

Семейство фосфатаз Сс1с25 управляет прохождением по клеточному циклу, дефосфорилируя и активируя циклин-зависимые киназы. Известно три фосфатазы семейства Сс1с25 - А, В и С. Фосфатазы Сс1с25В и С последовательно активируются в фазе Ог клеточного цикла и дефосфорилируют киназу Сс1с2 в составе комплекса с циклином В1, обеспечивая этим вхождение клетки в митоз см. обзор: Nilsson, Hoffmann, 2000). Фосфатаза Cdc25A способна f дефосфорилировать как циклин-зависимую киназу Cdk2 в комплексе с циклином Е или А в Gi фазе клеточного цикла, так и Cdc2 в комплексе с циклином В1 при переходе G2—>М (Galaktionov, Beach, 1991; Jinno et al., 1994; Hoffmann et al., 1994; Blomberg et al., 1999; Mailand et al., 2002).

Работа фосфатаз семейства Cdc25 строго контролируется, так как их постоянная активность может привести к ускорению прохождения клетки по циклу. Поэтому после завершения перехода из одной фазы клеточного цикла в другую происходит инактивация фосфатаз, которые принимали участие в этом процессе. То же самое наблюдается при остановке клеточного цикла в ответ на стрессовые воздействия. Процесс инактивации фосфатаз семейства Cdc25 начинается с фосфорилирования по определенным остаткам серина, которые f находятся в консенсусной последовательности связывания с белком 14

3-3g. После образования комплекса фосфатаз с белком 14-3-3g они переходят из ядра в цитоплазму, таким образом пространственно разъединяясь со своими мишенями (Gabrielli et al., 1997; Peng et al., 1997). Известно, что после повреждения ДНК фосфорилирование и дезактивация фосфатазы Cdc25C осуществляется киназой Chkl (Peng et al., 1997; Sanchez et al., 1997), а фосфатазы Cdc25B - киназами Chkl и p38 МАРК (mitogen-activated protein kinase) (Bulavin et al., 2001).

Регуляция активности фосфатазы Cdc25A в делящихся клетках и в ответ на стрессовые воздействия осуществляется путем убиквитин-зависимой протеасомной деградации (Mailand et al., 2000; Molinari et al., 2000; Falck et al, 2001), которая запускается после ее фосфорилирования киназами Chkl или Chk2. Деградация Cdc25A приводит к повышению уровня фосфорилирования циклин-киназных комплексов, что, в свою очередь, приводит к остановке клеточного цикла. Однако вопрос о сайтах Сс1с25А, фосфорилирование которых запускает каскад событий, приводящий к ее деградации, оставался открытым. Фосфорилирование фосфатазы Сёс25А млекопитающих по 8ег123 вызывает деградацию белка после действия ионизирующей радиации (Ра1ск е1 а1., 2001). Однако для Сёс25А шпорцевой лягушки Хепориэ 1аеУ1з сайтом, фосфорилирование по которому необходимо для деградации белка, оказался 8ег73 (соответствующий 8ег75 млекопитающих), в то время как аналог 8ег123 у Хепорш 1аеу1з никак не влиял на стабильность Сс1с25А (ЗЫггийа еХ а1., 2002).

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Голоудина, Анастасия Равильевна

ВЫВОДЫ

1. В нормальных условиях и после повреждения ДНК ультрафиолетовым или ионизирующим излучением фосфорилирование фосфатазы Сс1с25А осуществляется киназой СЬк1. Фосфорилирование фосфатазы Сс1с25А по Бег75 способствует протеасомной деградации белка. Мутация Сс1с25А по Бег75 приводит к стабилизации белка.

2. В условиях осмотического шока Сс1с25А быстро деградирует, причем фосфорилирование и последующую деградацию Сс1с25А инициирует киназа р38-МАРК.

3. Активность киназы СЬк1 после повреждения ДНК и киназы р38 после облучения ультрафиолетом и осмотического стресса необходима для остановки клеточного цикла в фазе 8 и на границе фаз 02/М.

4. Экспрессии стабильной формы Сс1с25А недостаточно для продолжения синтеза поврежденной ДНК после облучения клеток или действия осмотического шока.

5. Стабильная форма Сс1с25А способствует вхождению клеток в митоз после действия ДНК-повреждающих факторов и осмотического шока.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ

Goloudina A., Yamaguchi Н., Cherviakova D., Appela Е., Fornace A. and Bulavin D. 2003. Regulation of human Cdc25A stability by serin 75 phosphorylation is not sufficient to activate an S-phase checkpoint. Cell Cycle. 2(5):473-8.

Goloudina A.R. Pospelov V.A. 2003. Regulation of human Cdc25A stability and its role in cell cycle progression. Mol. Biol, of the Cell, Suppl., v. 14, p. 19a.

Голоудина A.P., Аксенов Н.Д., Поспелов B.A. 2004. Регуляция стабильности фосфатазы Cdc25A в нормальных и стрессовых условиях. Цитология. 44 (5): 423-430.

Голоудина А.Р., Поспелов В.А. 2004. Роль киназы р38 в остановке клеточного цикла в ответ на стрессовые условия. Цитология. 44 (5): 431-436.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Голоудина, Анастасия Равильевна, Санкт-Петербург

1. Голоудина А.Р., Аксенов Н.Д., Поспелов В.А. (2004) Регуляции стабильности фосфатазы Cdc25A в нормальных и стрессовых условиях. Цитология. 44: 423-430.

2. Голоудина А.Р., Поспелов В.А. (2004) Роль киназы р38 в остановке клеточного цикла в ответ на стрессовые условия. Цитология. 44: 431436.

3. Розанов Ю.М. (1998) Проточная цитометрия. С. 221-231 в кн.: Методы культивирования клеток. Ленинград. Изд. Наука.

4. Ando Т., Kawabe Т., Ohara Н., Ducommun В., Itoh М, Okamoto Т. (2001) Involvement of the interaction between p21/Wafl and proliferating cell nuclear antigen for the maintenance of G2/M arrest after DNA damage. J. Biol. Chem. 276: 42971-42977.

5. Baldin V., Cans C., Knibiehler M., Ducommun B. (1997) Phosphorylation of human CDC25B phosphatase by CDKl-cyclin A triggers its proteasome-dependent degradation. J. Biol. Chem. 272: 32731-32734.

6. Banin S., Moyal L., Shieh S., Taya Y., Anderson C., Chessa L., Smorodinsky N., Prives C., Reiss Y, Shiloh Y„ Ziv Y. (1998) Enhanced phosphorylation of p53 by ATM in response to DNA damage. Science. 281: 1674- 1677.

7. Bartek J., Lukas J. (2001) Mammalian Gr and S-phase checkpoints in response to DNA damage. Curr. Opin. Cell Biol. 13: 738-47.

8. Bartek J., Lukas J. (2003) Chkl and Chk2 kinases in checkpoint control and cancer. Cancer Cell. 3: 421-429.

9. Bell S., Dutta A. (2002) DNA replication in eukaryotic cells. Annu. Rev. Biochem. 71:333-374.

10. Bernardi R., Liebermann D., Hoffmann B. (2000) Cdc25A stability is controlled by the ubiquitin-proteasome pathway during cell cycle progression and terminal differentiation. Oncogene. 19: 2447-2454.

11. Blasina A., Price B., Turenne G., McGowan C. (1999) Caffeine inhibits the checkpoint kinase ATM. Curr. Biol. 9: 1135-1138.

12. Blomberg I., Hoffmann I. (1999) Ectopic expression of Cdc25A accelerates the Gi/S transition and leads to premature activation of cyclin E-and cyclin A-dependent kinases. Moll. Cell. Biol. 19: 6183-6194.

13. Booher R., Holman P., Fattaey A. (1997) Human Mytl is a cell cycle-regulated kinase that inhibits Cdc2 but not Cdk2 activity. J. Biol. Chem. 272: 22300-22306.

14. Bulavin D., Higashimoto Y, Popoff I., Gaarde W., Basrur V., Potapova O., Appella E., Fornace A. (2001) Initiation of a G2/M checkpoint after ultraviolet radiation requires p38 kinase. Nature. 411: 102-107.

15. Bulavin D., Amundson S., Fornace A. (2002) p38 and Chkl kinases: different conductors for the G2/M checkpoint symphony. Curr. Opin. Genet. Dev. 12: 92-97.

16. Bulavin D., Higashimoto Y., Demidenko Z, Meek S., Graves P., Phillips C., Zhao H., Moody S., Appella E., Piwnica-Worms H., Fornace A. (2003) Dual phosphorylation controls Cdc25 phosphatases and mitotic entry. Nat. Cell Biol. 5:545-551.

17. Bulavin D., Demidenko Z, Phillips C., Moody S., Fornace A. (2003) Phosphorylation of Xenopus Cdc25C at Ser285 interferes with ability to activate a DNA damage replication checkpoint in pre-midblastula embryos. Cell Cycle. 2: 263-266.

18. Carson C., Schwartz R., Stracker T., Lilley C., Lee D., Weitzman M. (2003) The Mrell complex is required for ATM activation and the G2/M checkpoint. EMBO J. 24: 6610-6620.

19. Chan T., Hermeking H., Lengauer C., Kinzler K., Vogelshtein B. (1999) 14-3-3Sigma is required to prevent mitotic catastrophe after DNA damage. Nature. 401: 616-620.

20. Chen M., Hurov J., White L., Woodford-Thomas T., Piwnica-Worms H. (2001) Absense of apparent phenotype in mice lacking cdc25c protein phosphatase. Mol. Cell. Biol. 21: 3853-3861.

21. Chen et al., (2000) The 1.7 A crystal structure of human cell cycle checkpoint kinase Chkl: implication for Chkl regulation. Cell. 100: 681692.

22. Chen M.-S., Ryan C., Piwnica-Worms H. (2003) Chkl kinase negatively regulates mitotic function of Cdc25A phosphatase through 14-3-3 binding. Mol. Cell. Biol. 23: 7488-7497.

23. Coleman T., Dunphy W. (1994) Cdc2 regulatory factors. Curr. Opin Cell Biol. 6: 877-882.

24. Conklin D., Galaktionov K., Beach J. (1995) 14-3-3 proteins associate with cdc25 phosphatases. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 92: 7892-7896.

25. Cortez D„ Wang Y., Qin J., Elledge S. (1999) Requirement of ATM-dependent phosphorylation of brcal in the DNA damage response to doublestrand breaks. Science. 286: 1162-1166.

26. Costanzo V., Robertson K., Bibikova M., Kim E., Grieco D., Gottesman M, Carroll D., Gautier J. (2001) Mrell protein complex prevents doublestrand break accumulation during chromosomal DNA replication. Mol. Cell. 8: 137-147.

27. Dmitrieva N., Bulavin D., Fornace Al. Jr, Burg M. (2002) Rapid activation of G2/M checkpoint after hypertonic stress in renal inner medullary epithelial (IME) cells is protective and requires p38 kinase. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99: 184-189.

28. Dmitrieva N., Bulavin D., Burg M. (2003) High NaCl causes Mrell to leave the nucleus, disrupting DNA damage signaling and repair. Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 285: F266-F274.

29. Donzelli M., Squatrito M, Ganoth D., Hershko A., Pagano M., Draetta G. (2002) Dual mode of degradation of Cdc25A phosphatase. EMBO J. 21: 4875-4884.

30. Donzelli M., Draetta G. (2003) Regulating mammalian checkpoints through Cdc25 inactivation. EMBO rep. 4: 671-676.

31. Draetta G., Eckstein J. (1997) Cdc25 protein phosphatases in cell proliferation. Biochem. Biophys. Acta. 1332: M53-M63.

32. Drapkin R., Le Roy G., Cho H., Akoulitchev S., Reinberg D. (1996) Human cyclin-dependent kinase-activating kinase exists in three distinct complexes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93: 6488-93.

33. Dutta A., Bell S. (1997) Initiation of DNA replication in eukaryotic cells. Ann. Rev. Cell Biol. 13: 293-332.

34. Ekholm S., Reed S. (2000) Regulation of Gj cyclin-dependent kinases in the mammalian cell cycle. Curr. Opin. Cell Biol. 12: 676-684.

35. El-Deiry W., Tokino T., Velculescu V., Levy D., Parsons R., Trent J., Lin D„ Mercer W., Kinzler K., Vogelshtein B. (1993) WAF1, a potential mediator of p53 tumor suppression. Cell. 75: 817-825.

36. Elledge S. (1996) Cell cycle checkpoint: preventing the identity crisis. Science. 274: 1664-1672.

37. FalckJ., Mailand N., Syljuasen R., BartekJ., Lukas J. (2001) The ATM-Chk2-Cdc25A checkpoint pathway guards against radioresistant DNA synthesis. Nature. 410: 842-847.

38. Fisher R., Morgan D. (1994) A novel cyclin associates with M015/CDK7 to form the CDK-activating kinase. Cell. 78:713-24.

39. Gabrielli B., Clark J., McCormack A., Ellem K. (1997) Ultraviolet light-induced G2 phase cell cycle checkpoint blocks cdc25- dependent progression into mitosis. Oncogene. 15: 749-758.

40. Galaktionov K., Beach D. (1991) Specific activation of Cdc25 tyrosine phosphatase by B-type cyclins: evidence for multiple roles of mitotic cyclins. Cell. 67: 1181-1194.

41. Galaktionov K., Lee A., Eckstein J., Draetta G., Meckler J., Loda M., Beach D. (1995) Cdc25 phosphatases as potential human oncogenes. Science. 269: 1575-1577.

42. Galaktionov K., ChenX., Beach D. (1996) Cdc25 cell-cycle phosphatase as a target of c-myc. Nature. 382: 511-517.

43. Gatei M., Scott S., Filippovitch I., Soronika N., Lavin M., Weber B., Khanna K. (2000) Role for ATM in DNA damage-induced phosphorylation of BRCA1. Cancer Res. 60: 3299-304.

44. Glover D., Hagan I., Tavares A. (1998) Polo-like kinases: a team that plays throughout mitosis. Genes Dev. 12: 3777-3787.

45. Goldberg M., Stuki M, Falk J., D'Amours D., Rahman D., Pappin D., Bartek J., Jackson S. (2003) Mdcl is required for intra-S-phase DNA damage checkpoint. Nature. 241: 952-956.

46. Graves P., Lovly C., Uy G., Piwnica-Worms H. (2001) Localisation of human Cdc25C is regulated both by nuclear transport and 14-3-3 binding. Oncogene. 20: 1839-1851.

47. Graves P., Yu L., Schwarz J., Gales J., Sausville E., O'Connor P., Piwnica-Worms H. (2000) The Chkl protein kinase and the Cdc25C regulatory pathways are targets of the anticancer agent UCN-01. J. Biol. Chem. 275: 5600-5605.

48. Guo C., D'Anna J., Larner J. (1999) The radiation-induced S-phase checkpoint is independent of CDKN1A. Radiat. Res. 151: 125-132.

49. Guo Z., Kumagai A., Wang S., Dunphy W. (2000) Requirement for Atr in phosphorylation of Chkl and cell cycle regulation in response to DNA replication blocks and UV-damaged DNA in Xenopus egg extracts. Genes Dev. 14: 2745-2756.

50. Hassepass /., Voit R., Hoffmann I. (2003) Phosphorylation at Serin 75 is required for UV-mediated degradation of human Cdc25A phosphatase at the S-phase checkpoint. J. Biol. Chem. 278: 29824-29829.

51. Harper J., Adami G., Wei N., Keyomarsi K., Elledge S. (1993) The p21/Waf Cdk-interacting protein Cipl is a potent inhibitor of G1 cyclin-dependent kinases. Cell. 75: 805-816.

52. Hickman E., Moroni M., Helin K. (2002) The role of p53 and pRB in apoptosis and cancer. Curr. Opin. Genet. Dev. 12: 60-66.

53. Hoffmann /., Clarke P., Marcote M., Karsenti E., Draetta G. (1993) Phosphorylation and activation of human cdc25-C by cdc2-cyclin B and its involvement in the self-amplification of MPF at mitosis. EMBO J. 12: 5363.

54. Hoffmann /., Draetta G., Karsenti E. (1994) Activation of the phosphatase activity of human cdc25A by a cdk2-cyclin E dependent phosphorylation at the Gi/S transition. EMBO J. 13: 4302-4310.

55. Hwang A., Maity A., McKenna W., Muschel R. (1995) Cell cycle-dependent regulation of the cyclin B1 promoter. J. Biol. Chem. 270: 2841928424.

56. Jin P., Gu Y., Morgan D. (1996) Role of inhibitory CDC2 phosphorylation in radiation-induced G2 arrest in human cells. J. Cell. Biol. 134:963-970.

57. Jinno S., Suto K., Nagata A., Igarashi M., Kanaoka Y., Nojima H., Okayama H. (1994) Cdc25A is a novel phosphatase functioning early in the cell cycle. EMBO J. 13: 1549-1556.

58. Jessus C., Beach D. (1992) Oscillation of MPF is accompanied by periodic association between cdc25 and cdc2-cyclin B. Cell. 68: 323-332.

59. Karlsson C, Katich S., HagtingA., Hoffmann I., Pines J. (1999) Cdc25B and Cdc25C differ markedly in their properties as initiators of mitosis. J. Cell Biol. 146: 573-584.

60. Kastan M., Zhan Q., el-Deiry W., Carrier F., Jacks T., Walsh W., Plunkett B., Vogelshtein B., Fornace A. J. (1992) A mammalian cell cycle checkpoint pathway utilizing p53 and gADD45 is defective in ataxia-telaniestasia. Cell. 71: 587-597.

61. Kawa.be T., Suganuma M., Ando T., Kimura M., Hori H., Okamoto T. (2002) Cdc25C interacts with PCNA at G2/M transition. Oncogene. 21: 1717-1726.

62. Kessis T., Slebos R., Nelson W., Kastan M, Plunkett B., Han S., Lorincz A., HedrickL., ChoK . (1993) Human papillomavirus 16 E6 expression disrupts the p53-mediated cellular response to DNA damage. Proc Natl Acad Sei USA. 90: 3988-92.

63. KhosraviR., MayaR., Gottlieb T„ OrenM., Shiloh Y., Shkedy D. (1999) Rapid ATM-dependent phosphorylation of MDM2 precedes p53 accumulation in response to DNA damage. Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 96: 14973-7.

64. Kim S., Li C., Maler J. (1999) A maternal form of the phosphatase Cdc25A regulates early embryonic cell cycles in Xenopus laevis. Dev. Biol. 212:381-391.

65. Knudsen K, Booth D., Naderi S., Sever-Chroneos Z, Fribourg A., Hunton I., Feramisco JWang J., Knudsen E. (2000) Rb-dependent S-phase response to DNA damage. Mol. Cell. Biol. 20: 7751-7763.

66. Krause D., Jonnalagadda J., Gatei M., Sillje H., Zhou B., Nigg E., Khanna K. (2003) Suppression of Tousled-like kinase activity after DNAdamage or replication block requires ATM, NBS1 and Chkl. Oncogene. 22: 5927-37.

67. Krek W., Nigg E. (1991) Mutations of p34cdc2 phosphorylation sites induce premature mitotic events in HeLa cells: evidence for a double block to p34cdc2 kinase activation in vertebrates. EMBO J., 10: 3331-41.

68. Mailand N., Falck J., Lukas C, Syljuasen R., Welcker M., Bartek J., Lukas J. (2000) Rapid destruction of human Cdc25A in response to DNA damage. Science. 288: 1425-1429.

69. Mailand N., Podtelejinikov A., Groth A., Mann M., Bartek J., Lukas J. (2002) Regulation of G2/M events by Cdc25A through phosphorylation-dependent modulation of its stability. EMBO J. 21: 5911-5920.

70. Maser R., Mirzoeva O., Wells J., Olivares J., Williams B., Zinkel R, Farnham P., PetriniJ. (2001) Mrell complex and DNA replication: linkage to E2F and sites of DNA synthesis. Moll. Cell. Biol. 21: 6006-6016.

71. Matlashewski G. (1989) The cell biology of human papillomavirus transformed cells. Anticancer Res. 9:1147-1156.

72. Matsuoka S., Huang M., Elledge S. (1998) Linkage of ATM to cell cycle regulation by the Chk2 protein kinase. Science. 282: 1893-7.

73. Millar J., Blevitt J., Gerace L., Sadhu K., Featherstone C, Russel P. (1991) p55CDC25 is a nuclear protein required for the initiation of mitosis in human cells. Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 88: 10500-10504.

74. Molinari M., Mercurio C., Dominguez J., Goubin F., Draetta G. (2000) Human Cdc25A inactivation in response to S phase inhibition and its role in preventing premature mitosis. EMBO rep. 1: 71-79.

75. Moreno S., Nurse P., Russell P. (1990) Regulation of mitosis by cyclic accumulation of p80cdc25 mitotic inducer in fission yeast. Nature. 344: 549552.

76. Mueller P., Coleman T., Kumagai A., Dunphy W. (1995) Mytl: a membrane-associated inhibitory kinase that phosphorylates Cdc2 on both threonine-14 and tyrosine-15. Science. 270: 86-90.

77. Muschel R., Zhang H., Iliakis G., McKenna W. (1992) Effects of ionizing radiation on cyclin expression in HeLa cells. Radiat. Res. 132: 153-157.

78. NiggE. (1998) Polo-like kinases: positive regulators of cell division from start to finish. Curr. Opin. Cell Biol. 10: 776-783.

79. Nilsson I., Hoffmann I. (2000) Cell cycle regulation by the Cdc25 phosphatase family. Prog. Cell Cycle Res. 4: 107-114.

80. Nishijima H., Nishitani H., Seki T., Nishimoto T. (1997) A dual-specificity phosphatase Cdc25B is an unstable protein and triggers p34(cdc2)/cyclin B activation in hamster BHK21 cells arrested with hydroxyurea. J. Cell Biol. 138: 1105-1116.

81. Norbury C., Nurse P. (1992) Animal cell cycles and their control. Annu. Rev. Biochem. 61: 441-470.

82. Nurse P. (1990) Universal control mechanism regulating onset of M phase. Nature. 344: 503-508.

83. Nyberg K., Michelson R., Putham C., Weinert T. (2002) Toward maintaining the genome: DNA damage and replication checkpoints. Annu. Rev. Genet. 36:617-656.

84. Ogg S., Gabrielli B., Piwnica-Worms H. (1994) Purification of a serine kinase that associates with and phosphorylates human Cdc25C on serine 216. J. Biol. Chem. 269: 30461-30469.

85. Parker L., Piwnica-Worms H. (1992) Inactivation of the p34cdc2-cyclin B complex by the human WEE1 tyrosine kinase. Science. 257: 1955-1957.

86. Peng C., Graves P., Thoma R., Wu Z, Shaw A., Piwnica-Worms H. (1997) Mitotic and G2 checkpoint control: regulationof 14-3-3 protein binding by phosphorylation of Cdc25C on Serine-216. Science. 277: 15011505.

87. Peng C., Graves P., OddS., Thoma R., Byrnes M., Wu Z, Stephenson M., Piwnica-Worms H. (1998) C-TAK1 protein kinase phosphorylates human Cdc25C on serine 216 and promotes 14-3-3 protein binding. Cell Growth Differ. 9: 197-208.

88. Peters J. (1998) SCF and APC: the Yin and Yang of cell cycle regulated proteolysis. Curr. Opin. Cell Biol. 10: 759-768.

89. Petrini J. (2000) The Mrell complex and ATM: collaborating to navigate S phase. Curr. Opin. Cell Biol. 12: 293-6.

90. Pfleger C., Kirschner W. (2000) The KEN box: an APC recognition signal distinct from the D box targeted by Cdhl. Genes Dev. 14: 655-665.

91. Pines J., Hunter T. (1991) Human cyclins A and B1 are differentially located in the cell and undergo cell cycle-dependent nuclear transport. J. Cell Biol. 115: 1-17.

92. Pines J. (1995) Cyclins, CDKs and cancer. Semin. Cancer Biol. 6: 63-72.

93. Pines J. (1999) Four-dimensional control of the cell cycle. Nature Cell Biol. 1: E73-E-79.

94. Piwnica-Worms H. (1999) Cell cycle. Fools rush in. Nature. 401: 535537.

95. Powell S., DeFrank J., Connell P., Eogan M., Preffer F., Dombkowski D., Tang W„ FriendS. (1995) Differential sensitivity of p53(-) and p53(+)cells to caffeine-induced radiosensitization and override of G2 delay. Cancer Res. 55: 1643-1648.

96. Rotman G., Shiloh Y. (1999) ATM: A mediator of multiple responses to genotoxic stress. Oncogene. 18:6135-6144.

97. Sadhu K., Reed S., Richardson H., Russel P. (1990) Human homologue of fission yeast cdc25 mitotic inducer is predominantly expressed in G2. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 87: 5139-5143.

98. Saha P., Eichbaum Q., Silberman E., Mayer B., Dutta A. (1997) p21/WafCIP1 and Cdc25A: competition between an inhibitor and an activator of cyclin-dependent kinases. 17: 4338-4335.

99. Sanchez Y., Wong C., Thoma R., Richman R., Wu Z., Piwnica-Worms H., Elledge S. (1997) Conservation of the Chkl checkpoint pathway in mammals: linkage of DNA damage to Cdk regulation through Cdc25. Science. 277: 1497-1501.

100. Sherr C. (1994) Gi phase progression: cycling on cue. Cell. 79: 551-555.

101. Sherr C., Roberts J. (1995) Inhibitors of mammalian Gl cyclin-dependent kinases. Genes Dev. 9: 1149-1163.

102. Shimuta K., Nakajo N., Uto K., Hayano Y„ Okazaki K., Sagata N. (2002) Chkl is activated transiently and targets Cdc25A for degradation at the Xenopus midblastula transition. EMBO J. 21: 3694-3703.

103. Smits V., Klompmaker R., Arnaud L., Rijksen G., Nigg E., Medema R.2000) Polo-like kinase-1 is a target of the DNA damage checkpoint. Nat.1. Cell Biol. 2: 672-676.

104. Stewart G., Wang B., Rignell S., Taylor A., Elledge S. (2003) MDC1 is a mediator of the mammalian DNA damage checkpoint. Nature. 421: 961-966.

105. Stillman B. (1996) Cell cycle control of DNA replication. Science. 274: 1659-1664.

106. Straus/eld U., Lab be J., Fesquet D., Cavadore J., Pikard A., Sadhu K., Russel P., Doree M. (1991) Dephosphorylation and activation of a p34cdc2/cyclin B complex in vitro by human Cdc25 protein. Nature. 351: 242-245.

107. Toyoshima F., Moriguchi T., Wada A., Fukuda M., Nishida E. (1998) Nuclear export of cyclin B1 and its possible role in the DNA damage-induced G2 checkpoint. EMBO J. 17: 2728-2735.

108. Vogelshtein B., Lane D., Levine A. (2000) Surfing the p53 network. Nature. 408: 307-310.

109. Wang X., McGowan C., Zhao M., He L., Downey J., Fearns C., Wang Y., Huang S., Han J. (2000) Involvement of the MKK6-p38gamma cascade in gamma-radiation-induced cell cycle arrest. Mol Cell Biol. 20: 4543-52.

110. Wang Y, Cortez D., Yazdi P., NeffN., Elledge S., Qin J. (2000) BASC, a super complex of BRCA1-associated proteins involved in the recognition v and repair of aberrant DNA structures. Genes Dev. 14: 927-939.

111. XiaoZ., ChenZ., Gunasekera A., Sowin T., Rosenberg S., FesikS., Zhang H. (2003) Chkl mediates S and G2 arrests through Cdc25A degradation in response to DNA-damaging agents. J. Cell Biol. 278: 21767-21773.

112. Xiong Y., Zhang H., Beach D. (1992) D-type cyclins associate with multiple protein kinases and the DNA replication and repair factor PCNA. Cell. 71:505-514.

113. Xu B., Kim S., Kastan M. (2001) Involvement of Brcal in S-phase and G2-phase checkpoints after ionizing irradiation. Mol. Cell Biol. 21: 3445-50.

114. Xu B., Kim S-T., Lim D-S., Kastan M. (2002) Two molecularly distinct G2/M checkpoints are induced by ionizing irradiation. Mol. Cell. Biol. 22: 1049-1059.

115. Yang J., Yu Y, Duerksen-Hughes P. (2003) Protein kinases and their involvement in the cellular responses to genotoxic stress. Mutat. Res. 543: 31-58.

116. Yao Y., Slosberg E., Wang L., Hibshoosh H., Zhang Y., Xing W., Santella R., Weinstein I. (1999) Increased susceptibility to carcinogen-induced mammary tumors in MMTV-Cdc25B transgenic mice. Oncogene. 18: 51595166.

117. Zhao H., Watkins JL., Piwnica-Worms H. (2002) Disruption of the checkpoint kinase 1/cell division cycle 25A pathway abrogates ionizing radiation-induced S and G2 checkpoints. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99: 14795-14800.

118. Zhou B., Elledge S. (2000) The DNA damage response: putting checkpoints in perspective. Nature. 408: 433-439.1. БЛАГОДАРНОСТИ