Частота встречаемости маркеров, генетическое разнообразие и факторы риска инфицирования вирусом гепатита B в различных группах населения Новосибирской области и Алтайского края

Баяндин, Роман Борисович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Частота встречаемости маркеров, генетическое разнообразие и факторы риска инфицирования вирусом гепатита B в различных группах населения Новосибирской области и Алтайского края
ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Частота встречаемости маркеров, генетическое разнообразие и факторы риска инфицирования вирусом гепатита B в различных группах населения Новосибирской области и Алтайского края"

На правах рукописи

2 О АВГ 2009

Баяндин Роман Борисович

ЧАСТОТА ВСТРЕЧАЕМОСТИ МАРКЕРОВ, ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ И ФАКТОРЫ РИСКА ИНФИЦИРОВАНИЯ ВИРУСОМ ГЕПАТИТА В В РАЗЛИЧНЫХ ГРУППАХ НАСЕЛЕНИЯ НОВОСИБИРСКОЙ ОБЛАСТИ И АЛТАЙСКОГО КРАЯ

03.00.03 - молекулярная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Кольцово - 2009

003475374

Работа выполнена в ФГУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Минздравсоцразвития России.

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Нетесов Сергей Викторович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, доцент Тикунова Нина Викторовна кандидат биологических наук Гашникова Наталья Матвеевна

Ведущая организация:

Научно-исследовательский институт молекулярной биологии и биофизики (НИИМББ) СО РАМН (г. Новосибирск).

Защита состоится « 2 » октября 2009 г. в ^ часов на заседании диссертационного совета Д.208.020.01 при ФГУН «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» по адресу: ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор», Кольцово Новосибирской области, 630559, тел. (8-383) 336-74-28.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного научного центра вирусологии и биотехнологии «Вектор».

Автореферат разослан «V » ^ 2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

Карпенко Л.И.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Болезнь, вызываемая вирусом гепатита В (ВГВ), является одной из важнейших медицинских проблем не только в Российской Федерации, но и во всем мире. По оценкам Всемирной Организации Здравоохранения на нашей планете около 2 миллиардов человек имеют серологические маркеры, свидетельствующие о контакте с ВГВ-инфекцией в прошлом, а ежегодная заболеваемость острым ВГВ в мире составляет 5 миллионов человек (Kane et al., 1999); число же хронически инфицированных ВГВ людей превышает 350 миллионов человек (Zuckerman et al., 2000).

В России по оценкам экспертов ВОЗ и российских специалистов около 6.7 млн. человек являются носителями ВГВ, то есть примерно 4.7% населения (Magdzik, 2000). В 90-е годы ежегодная заболеваемость ВГВ в России возросла в несколько раз, увеличившись с 18.1 случаев на 100 тыс. населения в 1992 до 43.8 случаев в 1999 году. Благодаря различным программам вакцинации в 2008 показатель заболеваемости удалось снизить до 4.04 на 100 тыс. населения. (ЗНиСО, 1995-2009, www.fcgsen.ru/). Однако показатели заболеваемости ВГВ в России пока еще значительно превосходят таковые в развитых странах Западной Европы и Северной Америки. В 2006 году заболеваемость ВГВ в США составляла 1.62 случая на 100 тыс. населения (www.cdc.gov/mmwr/PDF/wk/mni5804.pdQ. в Италии - 1.8, в Германии - 1.4, при этом средняя заболеваемость по Европейскому Союзу составила 1.5 случая на 100 тыс. населения (www.ccdc.em'ina.cu/en/files/pdf/Publications/081215 AER long 2008.r>dO. Несмотря на успехи в снижении заболеваемости ВГВ, на своевременную диагностику и профилактику в России заболеваний, вызванных ВГВ, до сих пор тратится заметно меньше средств и усилий, чем того требует данная проблема. В результате значительное число заболевших людей узнают об инфицировании ВГВ, когда болезнь уже переходит в хроническую форму. При этом в РФ большинство новых случаев инфекции ВГВ до сих пор регистрируется среди молодых людей 15-29 лет. Это угрожает появлением через 20-25 лет большого количества тяжёлых больных с последствиями хронического гепатита - циррозом и гепато-целлюлярной карциномой.

В настоящее время все изученные изоляты ВГВ по отличиям в нуклеотидных последовательностях их геномов группируют в восемь генотипов, обозначаемых латинскими буквами с А по Н. Различия между последовательностями геномов изолятов ВГВ разных генотипов составляет более 8%. Встречаемость и соотношения генотипов в различных районах планеты широко варьируют. Генотип А широко распространён в Европе, встречается в Северной Америке, Южной и Восточной Африке; генотипы В и С - в Юго-Восточной Азии. Генотип D доминирует в Европе, странах Ближнего Востока, Индии и Северной Африке. Генотип Е превалирует в Западной Африке, а генотип F - в Южной Америке. Генотип G выявлен в Западной Европе и Северной Америке, а генотип Н в Центральной Америке и Японии. В России имеются данные о встречаемости генотипов ВГВ в Москве (Abe et al., 2004), Санкт-Петербурге (Морозов, 2003), Самаре (Flodgren et al., 2000), Ямало-Ненецком автономном округе (Мануйлов и др., 2005) и Якутии (Морозов 2003). Во всех этих регионах, за исключением Якутии, доля генотипа D составляет 90% и выше; в небольшом количестве встречаются генотипы А и С. В Якутии генотип D также является самым распространенным, но встречается в чуть менее 40% случаев, примерно по 25% приходится на генотипы А и С, а остальные случаи - смешанное инфицирование несколькими генотипами ВГВ (Морозов, 2003).

подобные исследования пока не проводились, но, поскольку их актуальность очевидна, а методы генотипирования начинают внедряться в медицинскую практику, то их проведение - дело ближайшего будущего.

Для дальнейшего наиболее эффективного противодействия ВГВ-инфекции необходимы более подробные данные, которые могут быть получены с помощью молекулярно-эпидемиологических исследований частоты встречаемости маркеров, генотипического разнообразия ВГВ, путей передачи и факторов риска среди различных популяционных групп. Хотя основные пути передачи ВГВ известны, для выяснения наиболее важных путей и механизмов передачи, преобладающих'в конкретной стране или регионе, а также для выявления наиболее важных упущений в практике здравоохранения, необходимо проводить дополнительные исследования с целью выявления регион-специфических факторов риска и групп, подвергающихся наибольшей опасности заражения. Изучение частоты встречаемости маркеров, сбор эпидемиологически значимой информации и анализ факторов риска в различных группах позволяют увидеть и количественно оценить особенности распространения ВГВ-инфекции, незаметные при простом скрининговом исследовании населения отдельного контингента или одной отдельно взятой популяционной группы.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы являлось определение частоты встречаемости маркеров, генетического разнообразия и факторов риска инфицирования вируса гепатита В в различных группах населения Новосибирской области и Алтайского края.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Определить частоту встречаемости HBsAg среди следующих групп: медицинские работники, пациенты наркологического диспансера и инфекционных больниц, пациенты поликлиники.

2. Выявить и проанализировать факторы риска инфекции ВГВ в обследованных группах.

3. Выявить геномную ДНК ВГВ путем исследования методом ПЦР образцов сывороток, положительных в ИФА тестах на серологические маркеры ВГВ.

4. Определить первичную структуру рге52/5 области генома ВГВ для выявленных изоля-тов путем прямого секвенирования ПЦР-положительных образцов.

Научная новизна и практическая значимость работы.

1. Впервые определены частоты встречаемости маркеров ВГВ инфекции в нескольких популяционных группах жителей Новосибирской области и Алтайского края.

2. Оценена относительная роль различных факторов риска инфицирования ВГВ в разных популяционных группах. Показано, что риск инфицирования ВГВ нозокомиальными путями в этих группах в Новосибирской области и Алтайском крае невелик, а основные факторы риска напрямую связаны с рискованным социальным поведением и, косвенно, с исходными низкими социальным и экономическим статусами представителей исследуемых групп.

3. Впервые показано, что в Новосибирской области циркулируют три генотипа ВГВ: А, С и О. На территории Алтайского края выявлены только генотипы А и й И в Новосибирской области, и в Алтайском крае доминирующим является генотип Б, генотипы А и С встречаются гораздо реже.

4. При анализе последовательностей изолятов генотипов А и В выявлены регион-специфические замены, не встречавшиеся в мире ранее. Некоторые их этих замен встречались сразу у нескольких изолятов; отдельные регион-специфические замены были обнаружены как в последовательностях изолятов, выделенных в Новосибирской области, так и в последовательностях изолятов, циркулирующих в Алтайском крае.

5. Показано, что в Новосибирской области и Алтайском крае доминируют определенные варианты изолятов ВГВ. Эти же варианты ВГВ широко распространены в целом ряде стран Европы, Азии, Африки и Южной Америки.

Положения, выноснмые на защиту.

1. Частота встречаемости HBsAg в различных популяционных группах составила: пациенты наркологического диспансера - 8.4%; пациенты центра СПИД - 35%; пациенты горбольницы Барнаула №5 - 36.5%; медицинские работники - 5.4%; пациенты поликлиники - 3.6%.

2. Основные факторы риска инфицирования ВГВ напрямую связанны с рискованным социальным поведением (внутривенным употреблением наркотиков, наличием повышенного количества половых партнеров в течение жизни, гомосексуальными контактами) и, косвенно, с низкими экономическим и социальным статусами (статусом безработного, пребыванием в местах лишения свободы, отсутствием среднетехнического или высшего образования).

4. На территории Новосибирской области циркулируют изоляты ВГВ трех генотипов (А, СиБ),в исследуемых группах жителей их встречаемость была следующей: генотип О составил 97.1%, генотип А - 1.7%, генотип С - 1.2%. В исследуемой группе жителей Алтайского края обнаружены только генотипы АиБ. Генотип О доминирует - 98.6%, доля генотипа А составила 1.4%.

Публикации и апробация работы. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи в журналах, рекомендованных для опубликования основных результатов диссертаций на соискание ученой степени кандидата биологических наук.

Результаты работы были представлены на следующих международных конференциях: 6-ой Ежегодный съезд Европейского Общества Клинической Вирусологии и 8-ая Конференция по Современной ситуации в области Хронических Вирусных Гепатитов (Лион, Франция, 23-30 августа, 2003); ХШ-й Международный вирусологический конгресс (Сан-Франциско, США, 23-28 июля, 2005); Российская научно-практическая конференция «Генодиагностика инфекционных болезней» (Новосибирск, Россия, 25-27 октября, 2005); XIV Международный вирусологический конгресс (Стамбул, Турция, 10-15 августа, 2008).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 157 страницах, содержит 15 таблиц и И рисунков. Состоит из «Введения», глав «Обзор литературы», «Материалы и методы» и «Результаты и обсуждение», «Заключение», «Выводы», «Список литературы», а также «Приложения». Список литературы включает в себя 277 ссылок.

Вклад автора. Результаты работы, за исключением анкетирования пациентов и ИФА тестов, получены лично автором.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Обследуемые группы. В 2000-2002 гг. в отделе молекулярной вирусологии флави-вирусов и вирусных гепатитов ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» было проведено два схожих мо-лекулярно-эпидемиологических исследования по изучению распространенности, геноти-пического разнообразия, факторов риска и путей передачи ВГВ. В рамках первого исследования в Новосибирской области были обследованы четыре группы населения: пациенты Муниципального городского наркологического диспансера г. Новосибирска (МГНД); пациенты Новосибирского областного центра по борьбе со СПИД и другими инфекционными заболеваниями (центр СПИД); пациенты поликлиники Новосибирской районной больницы №1 (НРБ-1), обратившиеся к врачам-терапевтам по поводу любого заболевания; медработники МГНД, НРБ-1, центра СПИД, больницы скорой медицинской помощи №2 (БСМП-2) г. Новосибирска. Каждая из четырех групп составляла 500 человек. В рамках

второго исследования в Алтайском крае была обследована группа из 1043 пациентов клиники инфекционных болезней горбольницы №5 г. Барнаула, поступивших с признаками острого гепатита. Исследования были одобрены этическим комитетом ГНЦ ВБ «Вектор». Все участники привлекались к исследованию на добровольной основе после подписания ими информированного согласия.

Анкетирование. Нами совместно со специалистами отделения вирусных гепатитов CDC (Атланта, США) была разработана анкета, которая включала широкий спектр вопросов, основные разделы были следующие. ^Индивидуальный анамнез, состояние здоровья на момент обследования. 2) Нозокомиальные факторы риска. 3) Факторы профессионального риска. 4) Факторы риска, связанные с особенностями поведения и привычками. 5) Факторы риска со стороны ближайшего окружения. 6) Социально-экономические данные. 7) Результаты лабораторных исследований. Анкетирование добровольцев проводили врачи соответствующего медицинского учреждения или сотрудники ГНЦ ВБ «Вектор» с медицинским образованием.

ИФА тесты. ИФА тесты проводились в лицензированной лаборатории МСЧ-163 ФМБА, Кольцово, НСО. Все собранные сыворотки были тестированы на наличие: HBsAg, антител к HBsAg (IgM + IgG), антител к HBcAg (IgM + IgG) тест-системами производства ЗАО «Вектор-Бест» (Россия). Тестирование выполнялось по инструкции фирмы производителя на приборе SpectraCount («Packard Bioscience Company», США).

Выделение ДНК из сыворотки крови. К 50 мкл сыворотки крови добавляли 300 мкл лизирующего раствора (1% SDS, 10 мМ ЭДТА, 0.1 мМ 2-меркаптоэтанол) и инкубировали при 65°С в течение 30 минут. Далее экстрагировали равным объёмом фенола, насыщенного буфером ТЕ (10 мМ Трис-HCl и 1мМ ЭДТА, рН=8.0). Центрифугировали, отбирали верхнюю фазу, ее снова экстрагировали равным объемом хлороформа. Нуклео-тидный материал осаждали изопропанолом в течение 10 минут при -20°С, центрифугировали при 20800xg в течение 30 минут. Осадок промывали охлажденным (-20°С) 70% этиловым спиртом и растворяли в 25 мкл дистиллированной воды. В ПЦР брали 5 мкл ДНК.

Полимеразиая цепная реакция. Амплификацию ДНК ВГВ осуществляли в 30 мкл смеси, содержащей 60 мМ Трис-HCl, 25 мМ KCl, 1.5 мМ MgCb, 10 мМ 2-меркаптоэтанола, 0.1% Тритона Х-100, по 0.2 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата, 0,15 мкМ праймеров, 2 ед. Taq ДНК-полимеразы (Медиген, Россия). Температурные условия амплификации для разных пар праймеров подбирали экспериментально (типичные условия: 95°С-1 мин, Тотжига-1 мин, 72°С -1 мин, 40 циклов).

Выделение ДНК из агарозного геля. Продукты амплификации идентифицировали в 1 .5% агарозном геле, окрашивая гель 1 мкМ раствором бромистого этидия и рассматривая в УФ свете. Участки агарозного геля, содержащие амплифицированные фрагменты ДНК ВГВ, вырезали и измельчали. Выделение ДНК осуществляли при помощи набора QIAEX II Gel Extraction Kit («Qiagen», Германия) по инструкции фирмы производителя. Концентрацию ДНК определяли на спектрофотометре SmartSpec Plus («BioRad», США), измеряя оптическую плотность на длине волны 260 нм.

Определение иуклеотидиых последовательностей. Определение нуклеотидных последовательностей продуктов амплификации проводили с использованием автоматического секвенатора Beckman Coulter CEQ2000 XL. Использовали наборы реактивов CEQ DTCS Kit (Beckman-Coulter, Cat# 608000) согласно инструкции производителя. Определение проводили дважды, в независимых экспериментах.

Анализ нуклеотидных последовательностей. Для сравнения последовательностей ДНК исследованных нами образцов с литературными данными использовали последовательности прототипных изолятов, взятые из GenBank. Множественное выравнивание нуклеотидных последовательностей выполняли с помощью программы ClustalX VI.64b. Филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей осуществляли с помощью программы Mega v.2.1. Статистическую достоверность группирования последовательностей проверяли бутстреп тестом.

Анализ эпидемиологических дачных. Данные анкетирования пациентов, а также результаты молекулярно-диагностических тестов анализировались с помощью программы Epi Info 2005 (http://www.cdc.gov/epiinfo'). Статистическую значимость связей между факторами риска и статусом по маркёрам инфекции ВГВ оценивали с помощью критерия Хи-квадрат с поправкой Иетса на непрерывность и критерия Краскела-Уоллиса. Оценку достоверности различий рассчитывали с помощью двустороннего точного критерия Фишера. Критическое значение достигнутого уровня значимости для ситуации двустороннего оценивания было 5%. Для сравнения факторов риска по величине эффекта вычисляли отношения шансов (odds ratio, OR) с 95% доверительными интервалами.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1.1. Частота встречаемости серологических маркеров ВГВ в обследованных группах

С 2000 по 2002 год были обследованы 4 группы жителей Новосибирской области и 1 группа жителей Алтайского края общим количеством 3043 человека. После анкетирования у каждого респондента была взята проба крови. Далее образцы сывороток тестировались в ИФА тестах, HBsAg-положительные образцы исследовали методом ПЦР preS2/S области генома ВГВ. Амплифицированные фрагменты ДНК были секвенированы и гено-типированы.

1.1.1. Встречаемость серологических маркеров ВГВ у пациентов поликлиники НРБ-1

Пациенты поликлиники НРБ-1 составляли в данном исследовании группу сравнения, т.к. обращались по поводу любых заболеваний, не обязательно связанных с заболеваниями печени (чаще всего не связанными), а также в связи с тем, что возрастные кривые мужчин и женщин данной группы качественно совпадали с возрастными кривыми мужчин и женщин нашей страны, полученные по результатам переписи населения в 2002 году. Половозрастной состав исследованных групп представлен в таблице!.

Таблица 1. Половозрастной состав групп, исследованных в 2000-2002 гг.

Группа п Обследованные Мт-Мах возраст/ средний возраст

Пациенты поликлиники НРБ-1 500 163(32,6%) мужчин 16-83 лет/37,3 года

337 (67,4%) женщин 17-96 лет/41,6 года

Пациенты центра СПИД 500 315(63,0%) мужчин 14-88 лет/28,3 года

185 (37,0%) женщин 14-81 лет/34,3 года

Пациенты МГНД 500 403 (80,6%) мужчин 16-70 лет/ 36,7 года

97 (19,4%) женщин 18-68 лет/31,1 года

Медработники 500 69(13,8%) мужчин 17-63 лет/34,2 года

431 (86,2%) женщин 17-67 лет/ 37,2 года

Пациенты горбольницы №5 Барнаула 1043 626 (60%) мужчин 13-119 лет/29.2 года

417(40%) женщин 13-77 лет/31.2 года

Наименьшая частота встречаемости НВ8А§ была выявлена у пациентов поликлиники НРБ-1 - 3.6%. В этой выборке HBsAg-пoлoжитeльными являлись 4.9% мужчин и 3.0% женщин, т.е. соотношение ВГВ-инфицированных мужчин к женщинам составило 1.63. Такое соотношение характерно для многих стран мира и оно варьирует в пределах 1.5-1.7 ^Иерап] е1 а1, 2006), что связано с тем, что мужчины чаще употребляют наркотики внутривенно, более склонны к рискованному поведению и меньше заботятся о здоровье.

1.1.2. Встречаемость серологических маркеров ВГВ среди медицинских работников

Среди группы медицинских работников частота встречаемости HBsAg была выше - 5.4%, что, вероятно, связано с повышенным профессиональным риском заражения ВГВ. У мужчин этой группы встречаемость HBsAg составила 8.7%, у женщин - 4.9%, т.е. составляло 1:1.78, что выше, чем в группе пациентов поликлиники. Медицинские работники

представляют собой выборку людей, хорошо понимающих пути передачи ВГВ, и, как показал детальный анализ, такое соотношение ВГВ-инфицированных мужчин и женщин объясняется предпочитаемой профессиональной специализацией. Из 69 медработников-мужчин было 32 хирурга и 8 анестезиологов. Среди женщин набор медицинских специальностей оказался гораздо шире, и далеко не все специальности были связаны с высоким риском контакта с кровью. Среди медработников-женщин HBsAg выявлен в основном у медсестер и сотрудников диагностических лабораторий, а у медработников-мужчин НВ8А£ был найден среди хирургов, анестезиологов, медбратьев.

При обследовании медработников, учитывающем их место работы, самая низкая встречаемость HBsAg была обнаружена среди медперсонала МГНД - 2.2% (Табл. 2). Вероятно, это связано с тем, что в данном учреждении медикам в основном не приходится работать с пациентами с острым ВГВ или выполнять хирургические операции. Примерно на одном уровне была встречаемость HBsAg среди медработников поликлиники НРБ-1 (4.8%) и БСМП-2 (4.6%). При этом показатели оказались выше, чем в группе пациентов НРБ-1, что связано с повышенным профессиональным риском заражения в этих больницах. Наибольшая встречаемость HBsAg среди медработников была выявлена у персонала центра СПИД - 18.2%, в центре СПИД также была выявлена высокая частота встречаемости анти-ВГС-9.5% (Шустов и др. 2004), что говорит о высоком профессиональном риске заражения парентерально передающимися инфекциями в этом медицинском заведении или о недостаточных мерах личной безопасности персонала во время работы.

Таблица 2. Встречаемость серологических маркеров ВГВ среди медицинских

работников различных лечебных учреждений Новосибирской области.

БСМП-2 НРБ-1 МГНД цСПИД Все

медработники

(п=218) (п=145) (п=93) (п=44) (п=500)

4.6% 4.8% 2.2% 18.2% 5.4%

НВ8Аё (Ю) (7) (2) (8) (27)

22.0% 22.8% 23.7% 20.5% 22.4%

анти-НВс (48) (33) (22) (9) (112)

30.3% 42.8% 24.7% 25.0% 32.4%

анти-НВв (66) (62) (23) (П) (162)

Вакцинированы 22.4% 44.8% 12.9% 20.5% 27%

против ВГВ (49) (65) (12) (9) (135)

1.1.3. Встречаемость серологических маркеров ВГВ среди пациентов центра СПИД

Частота встречаемости НВ8А§ среди пациентов центра СПИД составила 35.0%. Такой высокий показатель объясняется тем, что большое число пациентов исходно поступили с острыми вирусными гепатитами. Среди мужчин частота встречаемости HBsAg составила 36.5%, среди женщин - 32.4%, составляя соотношение 1.13.

Особенностью контингента цСПИД было то, что значительную часть пациентов составляли жители сельских районов, близлежащих к Новосибирску. Отметим, что более 66% принявших участие в исследовании пациентов-добровольцев являлись молодыми людьми 30 лет и моложе. Весьма высокой оказалась доля пациентов, употребляющих наркотические препараты внутривенно - 37%, а среди лиц 30 лет и моложе наркотики внутривенно употребляли 51.8%. При сравнении лиц, употребляющих и не употребляющих наркотики внутривенно, были выявлены статистически достоверные различия по частоте встречаемости НВзА§ - 42.7% и 30.3%, соответственно (р<0.05). При этом, если потребители инъекционных наркотиков (ПИН) использовали совместно шприцы и иглы, то встречаемость HBsAg у них возрастала до 45.8%.

1.1.4. Встречаемость серологических маркеров ВГВ среди пациентов МГНД

Среди пациентов наркологического диспансера частота встречаемости НВ$А$ составила 8.4%; такое относительно невысокое значение связано с тем, что данное медучреждение

не является инфекционной клиникой, а также в связи с тем, что значительную часть пациентов в нем составляют лица с алкогольной, а не наркотической зависимостью.

В этой группе доля лиц, употребляющих наркотики внутривенно, составила 45.2%, а среди лиц 30 лет и моложе - 86.4%. К нашему удивлению в данной группе HBsAg встречался чаще среди женщин - 10.3%, чем среди мужчин - 7.9%, хотя различие не было статистически достоверно. Как оказалось, в данной выборке доля женщин-ПИН была значительно выше доли мужчин-ПИН. О факте внутривенного употребления наркотиков сообщили 61.9% женщин, в то время как среди мужчин было примерно поровну употребляющих наркотические препараты внутривенно и злоупотребляющих алкоголем (41.2% и 40.2% соответственно). При этом лица, употребляющие наркотики внутривенно, практически не употребляли алкоголя, а страдающие алкогольной зависимостью не употребляли наркотические препараты (только пять человек, четыре мужчины и одна женщина употребляли как наркотики, так и алкоголь).

Сравнение между группами пациентов, употреблявших наркотики, и пациентов, употреблявших алкоголь (независимо от пола), показало, что встречаемость HBsAg оказалась более чем в два с половиной раза выше среди лиц, употреблявших наркотики, чем у потребителей алкоголя (12.4% против 4.8%, р<0.05). Суммарные результаты встречаемости серологических маркеров всех обследованных групп представлены в таблице 3.

Таблица 3. Встречаемость серологических маркеров в обследованных группах

Пациенты Медики Пациенты Пациенты Пациенты

НРБ-1 (п=500) цСПИД горбольницы МГНД

(п=500) (п=500) г.Барнаула (п=500)

(п=1043)

HBsAg 3.6% 5.4% 35.0% 36.5% 8.4%

(1В) (27) (175) (381) (42)

анти-HBcAg 24.4% 22.4% 51.0% 26.6%' 50.4%

(122) (112) (255) (277) (252)

анти-HBsAg 23.8% 32.4% 20.8% - 32.6%

(119) (162) (104) (163)

HBsAg-полож. 1.63 1.78 1.13 1.025 0.77

муж/жен

ПИН' 1.4% 0.4% 37% 11.6% 45.2%

(7) (2) (185) (121) (226)

HBsAg 28,6% 5.2% 42.7% 48,8% 12.4%

среди ПИН (2/7) 26/496 (79/185) (59/121) (28/226)

HBsAg среди не 3,2% 50% 30.3% 34,8% 5.1%

явл. ПИН (16/493) (1/2) (95/314) (319/917) (14/274)

антитела только класса IgM; потребители инъекционных наркотиков

1.1.5. Встречаемость маркеров ВГВ среди пациентов клиники инфекционных болезней городской больницы г. Барнаула

Наибольшее значение встречаемости HBsAg выявлено среди пациентов клиники инфекционных болезней горбольницы №5 г. Барнаула - 36.5%, т.к. в основном и состояла из пациентов с острыми вирусными гепатитами. Среди мужчин и женщин частота встречаемости HBsAg составила 36.9% и 36% соответственно (соотношение 1.025).

Отбор пациентов в данную выборку происходил в течение 5 кварталов с сентября 2001 года по декабрь 2002 года. Была обнаружена интересная закономерность в отношении доли ПИН в каждом квартале исследования. В среднем во всей выборке было 11.6% ПИН. При этом в первом квартале доля ПИН составила 17.9%. В каждом последующем квартале она заметно снижалась: 2-м квартале - 11.5%, 3-м - 7.9%, 4-м - 7.0%, а в 5-м -4.7%. Такое снижение, вероятно, было связано с временным прекращением поставок героина из Афганистана из-за проведения антитеррористической операции после событий 11 сентября 2001 года. В Новосибирской области отбор групп и работа с ними в основном

происходила до этих событий, и такой закономерности - снижение количества потребителей инъекционных наркотиков со временем - выявить не удалось.

1.2. Анализ факторов риска инфицирования ВГВ

Путем совместной обработки анкетных данных пациентов и результатов ИФА анализа был проведен статистический анализ с целью выявления факторов риска заражения ВГВ. Факторы риска были вычислены в отношении двух серологических маркеров: HBsAg и aнти-HBcAg. Эти маркеры в целом показывали схожую картину в определении факторов риска по различным вопросам анкеты, но различались по величине 01* или данные по одному из маркеров не попадали в доверительный интервал. Поэтому в дальнейшем приводятся данные как для HBsAg, так и для aнти-HBcAg (фактор риска по HBsAg обозначен ОК|, а для aнти-HBcAg - ОИг), если один из факторов не приводится, значит, его значение не попало в доверительный интервал.

1.2.1. Анализ факторов риска инфицирования ВГВ среди исследуемых групп жителей Новосибирской области

Анализ факторов риска заражения ВГВ был рассчитан для каждой исследуемой группы отдельно. Исследование факторов риска в каждой группе отдельно позволило выявить характерные различия факторов риска и путей передачи ВГВ-инфекции в этих группах населения Новосибирской области. Также расчет был проведен для всех четырех обследуемых групп вместе. Полученные данные продемонстрировали, что для некоторых вопросов анкеты, для которых не удалось найти статистически достоверных связей с инфицированием ВГВ в каждой конкретной группе или значения факторов риска были невысоки, такие связи были выявлены в объединенной группе. Данное обстоятельство свидетельствует о том, что статистической мощности исследования группы в 500 человек по отдельным вопросам анкеты не всегда было достаточно. В связи с этим анализ факторов риска был также проведен в объединенной группе (все 4 исследуемые группы), отдельно среди групп мужчин, женщин, лиц до 30 лет включительно и лиц старше 30 лет (Табл. 4).

Среди четырех исследуемых групп только в группе пациентов центра СПИД риск серопозитивности по ВГВ оказался достоверно выше среди мужчин, чем среди женщин (01*2=2.14), что, вероятно, связано с тем, что большинство ПИН в этом учреждении были мужчины. В МГНД, как уже было отмечено, доля женщин-ПИН была выше доли мужчин-ПИН, а в группах медработников и пациентов поликлиники доли ПИН были незначительны. Риск серопозитивности для мужчин был выше также в объединенной группе, группах лиц до 30 лет и старше 30 лет (01*|,2 от 1.41 до 2.68), что, по всей видимости, также связано с употреблением наркотиков. Молодой возраст респондента как фактор риска проявился во всех группах, за исключением медработников и пациентов поликлиники, при этом максимальные значения достигались в группе пациентов МГНД (01*2=4.36). В группах медработников и пациентов поликлиники молодой возраст демонстрировал связь с пониженным риском инфицирования ВГВ (01*2=0.48 и 01*2=0.41, соответственно) поскольку в этих группах, как уже отмечалось, доля ПИН была незначительна, к тому же меньший стаж медработников молодого возраста делал меньшим риск заражения в ходе профессиональной деятельности. В группе медработников, в объединенной группе, в группах ранжированных по полу и возрасту фактором защиты являлась вакцинация против ВГВ (О1*1,2=от 0.18 до 0.38). Но поскольку перед вакцинацией людей далеко не всегда проверяют, инфицированы ли они ВГВ или нет, т.к. стоимость вакцины сопоставима со стоимостью ИФА-тестов, то у отдельных респондентов были обнаружены как HBsAg, так и ан-ти-HBsAg. Из-за этого было сложнее оценить защитное действие вакцинации и, вероятно, это повлияло на значения факторов риска.

К нашему удивлению не было обнаружено взаимосвязи риска заражения ВГВ с большинством нозокомиальных факторов: переливаниями крови и ее продуктов, акупунктурой, госпитализациями в медучреждения по поводу любых заболеваний, кроме заболеваний печени или родов, хирургическими операциями (включая аборты), хирургическими

операциями в ротовой полости или горле, общими анестезиями. Связь пониженного риска заражения ВГВ с госпитализациями в медучреждения по поводу любых заболеваний, кроме заболеваний печени или родов в группах мужчин (01*[=0.28), лиц молодого возраста (01*1=0.40), объединенной группе (СЖ1=0.48), а также в группе пациентов центра СПИД связана с тем, что в этих группах за медицинской помощью в основном обращаются лица, не употребляющие наркотики, а ПИН пренебрегают своим здоровьем. Этим же обусловлено наличие связи пониженного риска сероиозитивности с хирургическими операциями в ротовой полости или горле. Связь с пониженным риском серопозитивности также выявлена в отношении хирургических операций (включая аборты) в группах женщин ((Ж, =0.54), мужчин (01*2=0.70), лиц старше 30 лет (0к,=0.41, 01*2=0.28) в группе пациентов МГНД (01*2=0.52) и объединенной группе (01*1=0.59, 01*2=0.80), поскольку большинство лиц, имевших эти медицинские процедуры, составляли люди старше 30 лет, и доля ПИН среди них была значительно ниже, чем среди людей молодого возраста. Не было выявлено связи между заражением ВГВ и контактами с кровью на работе в группах, ранжированных по медучреждениям, кроме группы из МГНД (01*1=4.33), где из 11 человек, имевших контакты с кровью на работе, 6 были HBsAg-пoлoжитeльными и из них 5 употребляли наркотики внутривенно. В объединенной группе, в группах мужчин, женщин, лиц моложе 30 лет и лиц старше контакты с кровью на работе коррелировали с пониженным риском серопозитивности, что, вероятно, связано со знаниями путей передачи и мерами предосторожности. Отсутствие связей в группах ранжированных по медучреждениям, говорит о том, статистической мощности группы в 500 человек недостаточно.

Из нозокомиальных процедур факторы риска выявлены в отношении хирургических операций в ротовой полости или горле в группе женщин (01*2=2.36); общих анестезий (01*2=1.75) в группе медработников; госпитализаций в лечебные учреждения по поводу любых заболеваний (01*2=1.68) в группе пациентов поликлиники; а также медицинской помощи, оказанной за рубежом, в группах женщин (01*1=2.53) и лиц старше 30 лет (01*1=1.98), что, по всей видимости, было связано с посещением Казахстана и Таиланда.

Процедуры пирсинга и татуирования показывали связь с пониженным риском серопозитивности во всех группах, за исключением группы мужчин, где это было фактором риска (01*1=1.36). К сожалению, вопрос о пирсинге и тату не был разделен на два вопроса отдельно для каждой процедуры, хотя татуирование травматичнее и риск заражения выше. Большинство утвердительно ответивших на этот вопрос составляли женщины с пирсингом ушей, и во всех группах, кроме группы мужчин, большая доля женщин с пирсингом ушей маскировала риски инфицирования ВГВ при татуировании.

Большое значение на риски заражения оказывали социальное поведение и социально-экономический статус. Во всех группах, за исключением групп медработников и пациентов поликлиники, пребывание в местах лишения свободы хотя бы в течение недели демонстрировало повышенный риск серопозитивности (01*2 от 1.91 до 3.27), что связано с образом жизни данной категории граждан, а также, возможно, с гомосексуальными контактами в местах лишения свободы. Факторы, характеризующие более высокий социальный статус, такие как высшее образование, наличие работы, доход выше прожиточного минимума коррелировали с пониженным риском заражения ВГВ практически во всех группах (01*|,2 от 0.32 до 0.66). Напротив, образование не выше среднего, статус безработного, доходы на уровне прожиточного минимума выступали значимыми факторами риска (01*1,2 от 1.37 до 3.08). Вероятно, это объясняется тем, что эта категория граждан проявляет меньше заботы о своем здоровье, более склонна к рискованному поведению, меньше осведомлена о путях передачи ВГВ и других инфекций.

Выявлена связь инфицирования ВГВ со злоупотреблением алкоголем несколько раз в неделю, при этом максимальные значения факторов риска оказались в группах медработников и пациентов поликлиники (ОИ|=4.8 и 01*1=6.68, соответственно), т.е. в группах, где были самые низкие доли ПИН. В группе пациентов МГНД на фоне большой доли ПИН употребление алкоголя коррелировало с пониженным риском заражения ВГВ

Таблица 4. Факторы риска инфицирования ВГВ среди обследованных жителей Новосибирской области.

Фактор Общая цСПИД МГНД Медики НРБ-1 Женщины Мужчины <30 лет >31 лет

(2000) (500) (500) (500) (500) (1050) (950) (900) (1100)

ОЯ, ОЯ, 01*1 оя. оя, ои. оя, оя. оя,

ОЫ2 ОЫ2 оя2 ОЯ2 01Ь ОЯг

Пол м/ж 1,92 - - - - - - 1.95 -

2,03 2.14 - - - - - 2.68 1.41

Возраст до 30 лет 1.75 2,18 - - - 1.99 2.72 - -

2.54 2.28 4.36 0.48 0.41 - 2.18 - -

Переливание крови - - - - - - - - 0.40

Акупунктура - - - - - - - - -

Вакцинация против ВГВ 0.18 - - - - 0.26 0.15 0.07 0.38

0.23 - - 0.38 - 0.30 0.20 0.13 0.34

Госпитализации по поводу любых заболеваний, кроме заболеваний печени или родов

0.48 0.40 - - - - 0.28 0.40 -

- 0.37 - - 1.68 - - - -

Хирургические операции 0.59 - - - - 0.54 - - -

(включая аборты) 0.80 - 0.52 - - - 0.70 - -

Хирургические операции в - - - - - 2.36 - - -

ротовой полости или горле 0.72 - 0.52 - - - - 0.72 -

Общая анестезия 0.74 - - - - - - - -

- - 0.63 1.75 - - - - -

Пирсинг или татуировка 0.59 - - 0.39 - 0.50 - 0.64 0.61

- - - - - - 1.36 - -

Медпомощь за рубежом - - - - - - - - -

- - - - - 2.53 - - 1.98

Контакты с кровью на 0.43 - 4.33 - - 0.38 - 0.25 -

работе 0.47 - - - - 0.62 0.48 0.21 -

Таблица 4. Продолжение,

Фактор Общая цСПИД мгнд Медики НРБ-1 Женщины Мужчины <30 лет >31 лет

Пребывание в местах - - - - - - - - -

лишения свободы < недели 2.74 1.91 2.46 - - 2.40 2.40 3.27 2.12

Среднее 2.23 - 1.92 2.93 - 2.47 1.76 2.39 -

образование 1.69 1.56 - - - 1.37 1.56 2.27 -

Высшее 0.58 - - - - - 0.52 0.34 -

образование 0.55 - 0.41 - - 0.56 0.51 0.30 -

Полная 0,57 - 0.32 - - 0.38 - 0.66 -

Занятость 0.46 - 0.32 - - 0.47 0.51 0.38 0.63

Безработный 1.82 - 3.03 - - 3.92 - - 2.23

4.15 1.88 3.8 - 2.65 5.59 2.96 5.25 2.20

Доход выше 0.55 - - - - 0.50 - 0.56 -

прожиточного минимума - - - - - - 0.72 0.59 -

На уровне 1.9 - - - - - - - 3.00

прожиточного минимума - - - - - - - - -

Алкоголь несколько раз в 1.57 - - 4.8 6.68 - - 1.98 -

неделю (>100 мл спирта) - 0.51 - - - - - -

Наркотики 3.35 11.92 4.40 - 1.72 2.63 2.52 2.45 3.12

внутривенно 8.29 8.25 11.88 - 5.12 7.25 6.58 10.96 5.74

Количество половых партеров в течение жизни

4 1.39 - - - - - - - -

2.08 1.98 1.69 - 1.43 1.96 3.27

5 1.52 - - - - - - 1.46 -

2.15 2.02 1.84 - 1.59 1.98 3.39

6 1.60 - - 1.90 - - - 1.62 -

2.29 2.30 1.71 - 1.82 2.03 3.70

Гомосексуальные контакты - - - - - - - - -

5.23 - - - - - - - -

Половые контакты с - - - - - - 2.16 - -

больными гепатитом 2.03 2.48 15.10 - - 1.83 3.77 3.10

(01*2=0.51). Максимальные значения факторов риска практически во всех группах, за исключением медработников, выявлены в отношении внутривенного употребления наркотиков (ORi.2 0t2.45 до 11.92).

Повышенный риск заражения ВГВ выявлялся в большинстве групп при количестве половых партнеров в течение жизни равного 4 и достигал максимума при 6 указанных половых партнерах, после чего практически не менялся. При этом максимальные значения факторов риска оказались в группе лиц моложе 30 лет (ОЯ2=3.27), а минимальные в группе женщин (ОЯ2=1.43). В группах лиц старше 30 лет и пациентов поликлиники не было обнаружено связи количества половых партнеров в течение жизни с риском заражения ВГВ, а среди медработников такая связь прослеживалась, начиная с 6 половых партнеров. Высокие значения факторов риска в общей группе выявлены в отношении гомосексуальных контактов между мужчинами (01*2=5.23) и половых контактах с больными ВГВ во всех группах, кроме медработников, пациентов поликлиники и лиц старше 30 лет (OR2 от 1.83 до 15.10).

1.2.2. Анализ факторов риска инфицирования ВГВ среди пациентов клиники инфекционных болезней городской больницы г. №5 Барнаула

Анализ факторов риска заражения ВГВ был проведен для всей группы пациентов, а также отдельно для мужчин, женщин, лиц 30 и моложе, лиц старше 30 лет. В данной выборке изучались факторы заражения острым ВГВ (Табл.5).

Среди пациентов этой выборки повышенный риск инфицирования ВГВ у мужчин в сравнении с женщинами был обнаружен только среди лиц старше 30 лет (OR2=2.49). Возраст пациента до 30 лет выступал как фактор риска в группе женщин (OR|=2.77, OR2=4.72), в группе мужчин (ОК1=1.51) и во всей группе пациентов (ОК)=1.95, ОК2=2.19).

Не было обнаружено факторов риска, связанных с нозокомиальной передачей инфекции. Во всей группе проявилась связь риска серопозитивности с донорством крови (ОК]=7.01), что объясняется тем, что за сдачу крови выплачивалось денежное вознаграждение, и значительное число доноров составляли лица без определенного места жительства. Причиной их заражения был не факт сдачи крови, а образ жизни и рискованное поведение до сдачи крови. Не было выявлено связи между заражением ВГВ и контактами с кровью последние 6 месяцев, процедурой гемодиализа, трансплантацией почек, уколами иглой последние 6 месяцев, инъекциями, внутривенными процедурами, хирургическими операциями, абортами, анестезией, посещением дантиста. Связь с пониженным риском заражения ВГВ выявлена в отношении процедур эндоскопии и зондирования во всей группе пациентов ^|=0.72, OR2=0.67).

Удалось выявить повышенный риск татуирования во всей группе пациентов (Ои2=1.79) и в группе мужчин (OR2=1.66), т.к. в этой анкете вопросы о пирсинге и татуировках были отдельными вопросами. Напротив, в отношении процедуры пирсинга и посещения парикмахера не выявлено связи с заражением ВГВ. Также не выявлено связи заражения ВГВ с совместным использованием щеток, полотенец и бритв.

Гораздо больше связей было обнаружено по вопросам, связанным с социально-экономическим статусом и социальным поведением. Пониженный риск серопозитивности был связан с факторами, обычно отражающими социальное благополучие: высшее образование (ОИьг от 0.15 до 0.59); наличие работы (ОК|,2 от 0.49 до 0.78); статус семейного человека (ORь2 от 0.20 до 0.64); наличие машины (ОЯьа от 0.41 до 0.72). Соответственно повышенный риск заражения повышенный риск заражения ВГВ выявлен в отношении: образования не выше среднего (ORl,2 от 1.43 до 2.33); отсутствия работы (ОИьг от 1.98 до 3.61); статуса разведенного или не состоящего в браке (ORь2 от 1.22 до 3.47); проживания в общежитии ((№¡,2 от 2.40 до 3.33), кроме группы старше 30 лет что, вероятно, связано с большей склонностью к рискованному поведению, меньшей заботой о своем здоровье и меньшей осведомленностью о путях передачи ВГВ в молодом возрасте.

В группе пациентов горбольницы Барнаула половой путь передачи ВГВ имел большее значение, чем среди обследованных групп Новосибирской области. Данное обстоятельство связано с тем, каким образом были отобраны эти группы для участия в исследованиях.

Для пациентов центра СПИД и МГНД заражение ВГВ через внутривенное употребление наркотиков имело большее значение, чем для пациентов горбольницы Барнаула, где доля ПИН составила 11.6% (см. раздел 1.1.5.), против 37% и 45.2% в центре СПИД н МГНД, соответственно. Пациенты поликлиники и медработники представляли собой довольно благополучные выборки, доли ПИН и полового пути передачи среди них были самые низкие из всех из всех исследуемых групп. Пациенты горбольницы Барнаула изначально отбирались в данную группу, как больные острыми вирусными гепатитами, и поскольку риск инфицирования нозокомиальнымн путями оказался очень незначительным, а доля ПИН ниже, чем в среднем среди всех групп жителей Новосибирской области (11.6% против 21%), то большее значение приобрел половой путь заражения.

Повышенный риск заражения выявлен во всех группах среди респондентов, имевших 2 и более половых партнеров в последние 6 месяцев до заболевания. Самыми высокими оказались значения в группах женщин (ORi=3.82, OR2=5.15) и группе старше 30 лет (0R|=2.93 OR2=4.51), а самыми низкими - в группе мужчин (OR,=l .90, OR2=l .90) и в группе лиц до 30 лет. При этом всего лишь 5.1% женщин и 6% лиц старше 30 лет имели 2 и более половых партнеров, тогда как в группе мужчин и лиц до 30 лет процент респондентов, имевших 2 и более половых партнеров за последние полгода, составлял 30.3% и 27.9%, соответственно. Если же количество половых партнеров в последние полгода у респондента равнялось 3 или более, то значения факторов риска возрастали только в группе старше 30 лет: при 3 половых партнерах - ORi=4.02, OR2=5.14; при 5 партнерах - OR|=5.62, OR2=4.93. Во всей группе пациентов, группе до 30 лет и группе мужчин в этом случае факторы риска значительно не изменялись, а в группе женщин не обнаружено статистически достоверных связей. Высокие значения факторов риска инфицирования ВГВ в группе женщин связаны с более высоким риском микротравм слизистых половых органов в сравнении с мужчинами, а также с тем, что ВГВ может передаваться женщине со спермой. Повышенные риски среди лиц старше 30 лет объясняются большим временем полового акта (в среднем), и соответственно, большей вероятностью получения микротравм, а также снижением защитных сил организма с возрастом.

Риск серолозитивности по ВГВ был еще выше для тех, кто имел половой контакт с лицами своего пола. Данный фактор риска ярко проявился среди мужчин (ORi=8.78, OR2=5.55) и в группе лиц до 30 лет (OR,=7.09), что также связано с сексуальными контактами между мужчинами. Использование презервативов коррелировало с повышенным риском заражения ВГВ во всей группе пациентов (ORi=1.64, OR2=1.66), в группе женщин (ORj=2.49, OR2=2.03) и среди лиц молодого возраста (OR|=1.51). В последнее время проведено множество исследований, направленных на выяснение эффективности защиты презервативов от заболеваний, передающихся половым путем. В исследованиях, проведенных в США, показано, что от 0.9% до 22.8% презервативов различных марок могут пропускать вирусные частицы и сперму через микропоры (Voeller et al., 1994), при этом по данным другого исследования средний объем спермы, протекающий через латексные презервативы, составил 10"5мл (Lytle et al„ 1997). Тем не менее, на сегодняшний день презервативы являются самым эффективным средством против ЗППП. Выявленные повышенные риски заражения ВГВ чаще всего связаны неправильным использованием презервативов, что приводит к разрывам (Carey et al., 1999), с использованием презервативов не на весь период полового акта, а только как средство предотвращения нежелательной беременности или же использованием презервативов с новым партнером только при первых половых контактах.

Внутривенное употребление наркотиков как фактор риска ярче всего проявило себя в группе старше 30 лет (OR,=4.72, C)R2=5.00), в объединенной группе (OR>=2.78, OR2=2.55) и в группе мужчин (ORi=2.73). Связь с повышенным риском серопозитивности была выявлена в отношении употребления алкоголя несколько раз в неделю.

2.1. Генетическое разнообразие изолятов ВГВ, циркулирующих в Новосибирской области и Алтайском крае

Выявляемость ДНК ВГВ в ПЦР тесте среди HBsAg-положительных образцов

Таблица 5. Факторы риска инфицирования ВГВ в различных подгруппах у пациентов клиники инфекционных болезней городской больницы № 5 г. Барнаула

Фактор Мужчины Женщины Все пациенты 30 лет и моложе старше 30 лет

01*, 0(*2 ОЯ, 01*2 01*, 01*2 ОЯ, 01*2 01*1 ОИ2

Пол м/ж - - - - - - - 2.49

Моложе 30 лет 1.51 - 2.77 4.72 1.95 2.19 - - -

Контакт с кровью в течение 6 месяцев/гемодиализ или трансплантации почек/лечение в госпитале в течение 6 месяцев до болезни/инъекции/внутривенные процедуры/уколы иглой последние б месяцев/хирургические операции/аборты/анестезия/посещение дантиста.

- - - - - - - -

Эндоскопия или зондирование - - - 0.72 0.67 - -

Делали ли вы татуировки 1.66 - - 1.79 - -

Делали ли вы пирсинг - - - - - - - - -

Посещение парикмахерской - - - - - - - - _ -

педикюр последние 6 месяцев - - - - - -

Общие щетки, полотенца, бритвы?

Среднее образование 1.56 1.43 1.91 2.13 1.69 1.69 1.46 _ 1.82 2.33

Высшее образование 0.58 0.49 0.36 0.15 0.48 0.32 0.59 0.39 0.56 0.38

Семейное положение

Женат/замужем 0.64 0.61 0.48 0.20 0.57 0.44 0.66 0.56 0.52

Не женат/не замужем 1.47 1.44 2.00 3.47 1.67 2.03 - - 2.35

Разведён 1.22 - - - - 2.04 3.15 4.98 -

Проживание в общежитии 2.40 3.96 4.42 2.63 3.08 3.33 2.79 2.75 -

Безработный 2.42 3.09 1.98 2.08 2.04 2.17 2.81 3.61 _ -

Работа полный день 0.68 0.78 0.58 0.49 0.64 0.65 0.63 0.71 -

Таблица 5. Продолжение

Фактор Мужчины Женщины Все пациенты 30 лет и моложе старше 30 лет

еж, ок. СЖ, СЖ, (Ж, СЖ, СЖ, (Ж, СЖ, СЖ,

Наличие: автомобиля - - 0.66 0.41 0.72 0.67 0.68 0.68 -

Наличие: телевизора - 0.14 - 0.25 - 0.28 -

Количество половых партнёров противоположного пола в последние 6 месяцев до заболевания

1 и более - 2.22 1.87 1.65 1.7 - - -

2 и более 1.9 1.9 3.60 4.09 1.96 2.01 1.53 1.47 2.98 4.00

3 и более 2.01 1.76 - 1.98 1.75 1.52 3.74 4.03

4 и более 2.04 1.52 _ - 1.93 - - 4.27 3.31

5 и более 1.85 _ - - 5.62 4.93

Использование презервативов во время полового контакта

- 2.49 2.03 1.64 1.66 1.51 - - -

Половой контакт с лицом своего пола в течение 6 месяцев

Да 8.79 5.55 - - - - 7.09 - -

Болели ли вы сифилисом или гонорей?

Да 2.50 5.90 2.65 2.44 2.04 - 4.72 5.00

Употребление наркотиков внутривенно?

Да 2.73 - - 2.78 2.55 - - 4.72 5.00

Употребление наркотиков через нос?

2.09 - - - - -

Употребление наркотиков через нос в последние 6 месяцев?

Да - - - - 1 - -

Алкоголь несколько раз в неделю (более 100 мл спирта в неделю)

Да 1 - - 1.82 1.74 1.38 1.53 - - [ 2.12 3.38

варьировала в различных группах от 65.!% до 72.2%, составляя в среднем 66.7%. Всего было секвенировано 246 образцов сывороток, 173 образца из Новосибирской области и 73 образца из Алтайского края. Впервые было показано, что на территории Новосибирской области циркулируют изоляты ВГВ трех генотипов А, С и D, их встречаемость в исследуемых группах была следующей: генотип D составил 97.1 %, генотип А - 1.7%, генотип С - 1.2%. В группе пациентов из Алтайского края обнаружены только генотипы А и D. Доминирующим также был генотип D - 98.6%, доля генотипа А составила 1.4%.

2.1.1 Филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей изолятов ВГВ, циркулирующих в Новосибирской области и Алтайском крае

Секвенирование и генотипирование проводилось по preS2/S области генома вируса. Размер секвенированного фрагмента ДНК составил 303 нуклеотида, первый нуклеотид соответствует 133 нуклеотиду изолята Х02496. При построении множественного сравнения выяснилось, что значительное число последовательностей были идентичны в данной области генома ВГВ, после анализа одинаковые последовательности представлены в единичном экземпляре. Секвснированные последовательности были депонированы в электронную базу GenBank.

Нуклеотидные замены всех полученных нами последовательностей были изучены на предмет уникальности. Для этого наши последовательности сравнивались с нуклеотид-ными последовательностями из базы GenBank при помощи программы Blast (http://www.ncbi.nlm.iiih.Eov/BLAST'). Данный анализ позволил выявить регион-специфические замены у 12.6% (31/246) последовательностей ВГВ. Наиболее распростра-

Таблица 6. Таблица регион-специфических замен ВГВ.

Кол-во Позиция регион-специфические Синонимичные/

замен замены замены несинонимичные

генотип D 0

KG V! 92

SGF138 6 А ИТ, G60T, Т83С, 0Ш 4Asp->Val

A143G, С158А, T159G ннн 53Thr->Lys

RIG427 6 А11Т, G60T, Т83С, А1 П 4Asp->Val

A143G, С158А, T159G _ ни 53Thr->Lys

AMV108 2 С17Т, С295Т C29ST 99Leu->Phe

KNG80 2 С17Т, С295Т C29ST 99Leu->Phe

RIG 139 2 С17Т, С295Т С295Т 99Leu->Phe

ООВ54 2 С14Т, С295Т С295Т 99Leu->Phe

SGF41 4 С17Т, Т135С, Т171С, Т135С syn: Thr

С295Т Т171С syn:Leu

C'2"JJ 99Leu->Phe

RIG315 3 G8T, С17Т, Т46С SKf 3Gly->Val

R1G401 6 G8T. С17Т, Т46С, ВПГ8 3Gly->Val

Т83С, Т159С, G245T

KGV210 2 G8T.CI7T Hgk 3GIy->Vai

KGV211 2 G8T, С17Т йй 3Gly->Val

RIG76 3 G8T, С17Т, T46G Щв 3Gly->Val,

T46G 16Phe->Val

BTG71 2 А156С, C243G А156С >2syn:Gly, 81syn:Arg

C243G

R1G26 2 С17Т, C243G C243G 81syn:Arg

KGV303 2 C14G, С270А C14G 5Pro->Arg

R1G505 3 AT 11, С276А, T278G ШЙШР 4Asp->Val

шЯш 92syn:Leu, 93Phe-

г.-н. >Cys

BTG32 2 С276А, T278G я|щ 92syn:Leu, 93PJie-

ÉMii» >Cys

ненные регион-специфические замены представлены в таблице 6. Регион-специфические замены были обнаружены для последовательностей генотипов D и А, среди 2 последовательностей генотипа С таких замен найдено не было. Как оказалось, некоторые регион-специфические замены встречались не в единичных случаях, а сразу у нескольких последовательностей, при этом, например, замена С295Т, встречалась как у последовательностей из Новосибирской области (4 последовательности), так и из Алтайского края (1 последовательность). Наиболее распространенными регион-специфическими заменами были С295Т и G8T, встречающиеся у 5 последовательностей; замена A11Т найдена у 3 последовательностей; CI58A, C243G и пара замен С276А, T278G встречались у 2 последовательностей. Все остальные замены были обнаружены в единственном варианте, что, по всей видимости, говорит о том, что они менее распространены и менее характерны для изоля-тов ВГВ из Новосибирской области и Алтайского края. Наличие регион-специфических нуклеотидных замен говорит о том, что в Новосибирской области и Алтайском крае происходит обособленная эволюция ВГВ, что представляет большой интерес для дальнейшего исследования их влияния на клинические особенности заболевания ВГВ, а также для поиска и выявления "вакцин-ускользающих" мутантных штаммов.

При анализе множественного сравнения нуклеотидных последовательностей обращает на себя внимание большое количество идентичных между собой последовательностей изучаемого участка генома ВГВ. В исследуемом участке генома ВГВ нуклеотидная последовательность изолята KGV192 была идентична нуклеотидным последовательностям 62 изолятов (25.6% от общего числа), AMV14 - 81 изоляту (33.3%), HIA33 - 11 (4.9%), MOI64 - 10, GAA146 - 5, ООВЗ - 4, KGV450 - 3, RIG280 - 3, KNG39 - 3, AMV108 - 2, KGV210 - 1, BTG32 - 1, SGF138 - 1. При этом среди идентичных между собой последовательностей встречались последовательности, как из Новосибирской области, так и из Алтайского края, что говорит о высокой гомологии изолятов ВГВ, циркулирующих в этих регионах. Данное обстоятельство можно легко объяснить тесными социальными и экономическими связями, близким географическим расположением данных субъектов РФ. Однако среди наиболее распространенных идентичных между собой последовательностей с помощью Blast (http://www.nchi.nlm.nih.gov/BLAST) также была выявлена 100% гомология в исследуемом участке генома ВГВ с последовательностями, выделенными не только на территории России и республик бывшего СССР, но и в других странах (Табл. 7).

Так, для KGV192-подобных изолятов 100% гомология выявлена с 209 изолятами, выявленными в Белоруссии, Латвии, Эстонии, Узбекистане, Таджикистане, Монголии, Китае, Тайване, Индии, Пакистане, Иране, Турции, Египте, Тунисе, Испании, Италии, Франции, Нидерландах, Ирландии, т.е. практически во всей Евразии (за исключением Юго-Востока континента) и в двух странах Северной Африки. Остальные изоляты генотипа D не имели такого широкого распространения и встречались в основном либо в Европе, либо (реже) в Азии. АМ\Ч4-подобные изоляты имели 100% гомологию с 19 последовательностями из Белоруссии, Латвии, Эстонии, Венгрии, Нидерландов и, исходя из географии, можно сделать вывод об их Европейском происхождении.

Для Н1АЗЗ-подобных изолятов было найдено 10 идентичных на данном участке генома изолятов из Нидерландов, Германии, Турции, Эстонии. Среди 3 изолятов, на 100% гомологичных САА146-подобным изолятам, были обнаружены только изоляты из Франции, Нидерландов, Турции, т.е. с территории Европы, не входившей в СССР. Напротив, 6 изолятов со 100% гомологией с М0164-подобными изолятами встречались только на территории Белоруссии и Эстонии, что говорит об их происхождении и циркуляции в бывшем СССР.

Гораздо меньше идентичных последовательностей удалось обнаружить в Азии. ООВЗ-подобные изоляты были гомологичны на 100% с последовательностью лишь одного изолята, выделенного в Индии, а КСУ450-подобные изоляты были идентичны только последовательности одного изолята из Китая.

Для других изолятов генотипа О 1Ш280, КИ039, АМУ108, КОУ2Ю, ВТС32, 8СИ38, также имевших идентичные себе в данном участке генома ВГВ изоляты, не было найдено на 100% гомологичных изолятов из ОепВапк.

Еще одним изолятом, имеющим большое количество изолятов из вепВапк со 100% гомологией, является КЮ67, относящийся к генотипу А и обнаруженный в Новосибирской области в единственном варианте. Для Ш067 было найдено 217 изолятов, из которых 138 были выявлены в Нидерландах в общенациональном исследовании молекулярной эпидемиологии острого ГВ и 1 изолят - АВ126580 - выявлен в России в Москве. Другие изоляты, идентичные КЮ67 в данном участке генома ВГВ, были выявлены в Эстонии, Латвии, Белоруссии, Таджикистане, Венгрии, Польше, Франции, Италии, Бельгии, Японии, ЮАР, а также по одному изоляту было найдено в Западной Африке, Венесуэле и Бразилии, что является свидетельством его очень широкого распространения, в мире, но не в Новосибирской области и Алтайском крае.

Таблица 7. Сравнение гомологии некоторых изолятов ВГВ из Новосибирской области и Алтайского края с изолятами ВГВ из ОепВапк._

Изоляты Гомология Длина п.о. % Последовательности из вепВапк

KGV192 (63 последоват.) 303/303 100% Е11414110 (Белоруссия), ЕР103281 (Индия), АВ330370 (Таджикистан), 00995856 (Италия), ЕР584653 (Пакистан), Р(2988496 (Нидерланды), 00991754 (Ирландия), АВ263412 (Монголия), АВ222712 (Узбекистан), РЯХ) 1996 (Турция), ЕШ87446 (Китай), ЕШ94433 (Эстония), ЕШ77503 (Франция), АУ391895 (Иран), АИ214660 (Тунис), АУ603465 (Латвия), А1297881 (Тайвань), АВ 104723 (Египет), А»627224 (Испания) и другие

AMV14 (82 последоват.) 303/303 100% ЕШ94428 (Эстония), ЕШ14117 (Белоруссия), 00988499 (Нидерланды), АМ040680 (Венгрия), АУ603457 (Латвия)

HIA33 (12 последоват.) 303/303 100% 00412441 (Нидерланды), АР043594 (Германия), Р.Ю01943 (Турция), ЕШ94432 (Эстония)

М0164 (11 последоват.) 303/303 100% ЕШ14109, (Белоруссия), ЕШ94436 (Эстония)

GAA146 (6 последоват.) 303/303 100% ЕШ77496 (Франция), 00412433 (Нидерланды) Р1001985 (Турция)

оовз (5 последоват.) 303/303 100% ЕР103279 (Индия)

KGV450 (4 последоват.) 303/303 100% АР280817 (Китай)

RIG67 303/303 100% Еи908798 (Италия), АВ453983 (Япония), ЕШ94395 (Эстония), ЕШ14102 (Белоруссия), АВ330372 (Таджикистан), ЕР514277 (Италия), ЕР443213 (Нидерланды), АМ295799 (Франция), 00631637 (Нидерланды), АУ254519 (Венесуэла), АУ934763 (3. Африка), АУ344104 (Бразилия), АМ040682 (Венгрия), АР297624 (ЮАР), г35717 (Польша), АУ603466 (Латвия), АР090841 (Бельгия), АВ 126580 (Россия) и другие

Полученные результаты говорят о том, что, несмотря на наличие регион-специфических замен у 12.6% выявленных нами последовательностей, в природе существует несколько предпочтительных вариантов, циркулирующих в большом количестве стран практически без изменений. Вероятно, что эти варианты получили такое широкое распространение благодаря определенным эволюционным преимуществам (например: скорости репликации, эффективности передачи, устойчивости к факторам внешней среды, меньшей инфекционности, избеганию иммунного ответа хозяина и др.).

Выводы

1. Частота встречаемости HBsAg вируса гепатита В в различных популяционных группах Новосибирской области и Алтайского края в 2000-2002 годах составила: больные из клиники инфекционных болезней городской больницы .№5 г. Барнаула - 36.5%, пациенты Новосибирского областного центра СПИД (цСПИД) - 35.0%; клиенты муниципального городского наркологического диспансера (МГНД) - 8.4%; пациенты поликлиники Новосибирской районной больницы №1 (НРБ-1) - 3.6%.

2. В объединенной группе медицинских работников различных лечебных учреждений Новосибирской области частота встречаемости HBsAg составила 5.4%. Частота встречаемости HBsAg среди медицинских работников различных лечебных учреждений Новосибирской области была следующей: в МГНД - 2.2%; в БСМП-2 - 4.6%; поликлиника НРБ-1 - 4.8%; цСПИД - 18.2%.

3. В Новосибирской области в 2000-2002 годах были выявлены три генотипа ВГВ: А, С и D. Их встречаемость в исследуемых группах была следующей: генотип D составлял 97.1%, генотип А - 1.7%, генотип С - 1.2%. В группе жителей Алтайского края были обнаружены только генотипы А и D; доминирующим также оказался генотип D - 98.6%; доля генотипа А составила 1.4%.

4. Значительное число изолятов, выделенных в Новосибирской области и Алтайском крае, имели идентичные нуклеотидные последовательности фрагмента preS2/S области генома ВГВ. Доля KGV192-jio;io6hlix изолятов от общего числа обнаруженных нами изолятов составила 25.6% (63/246). Доля АМ\Ч4-подобных изолятов составила 33.3% (82/246). Доля других изолятов, имевших идентичные нуклеотидные последовательности, варьировала в пределах от 4.9% до 0.9%. Доля изолятов с уникальными последовательностями составила 19.1%.

5. Наиболее распространенные нуклеотидные последовательности фрагмента preS2/S области генома ВГВ в Новосибирской области и Алтайском крае встречались также многократно и в других странах мира. Для КСУ192-подобных изолятов в международной базе GenBank было найдено 209 идентичных последовательностей этого фрагмента генома изолятов практически со всей Евразии и двух стран Северной Африки. Для изолята RIG67 было обнаружено 217 изолятов с идентичной нуклеотидной последовательностью в исследуемом участке генома из стран Европы, некоторых стран Азии, Африки и Южной Америки. Для остальных изолятов с идентичными нуклеотидными последовательностями количество изолятов из других стран с идентичной нуклеотидной последовательностью варьировало от 2 до 19. Их географическая распространенность была уже: либо Европа, либо Азия. Широкая распространенность этих изолятов в мире может говорить о том, что они имеют эволюционные преимущества в сравнении с другими, менее распространенными изолятами.

6. У 12.6% (31/246) выявленных нами изолятов выявлены регион-специфические нуклеотидные замены. Некоторые регион-специфические нуклеотидные замены выявлены сразу у нескольких изолятов: замены С295Т и G8T обнаружены у 5 изолятов, замена А11Т обнаружена у 3 изолятов, замены С158А, C243G, С276А и T278G обнаружены у 2 изолятов, что говорит о том, что эти замены являются характерными и распространенными для нашего региона и что в данном регионе может происходить независимая от других регионов эволюция генома ВГВ.

7. Основные факторы риска инфицирования ВГВ оказались напрямую связанными с рискованным социальным поведением. Наибольшее значение имели: внутривенное употребление наркотиков (ORi,2 от 2.45 до 11.88); наличие повышенного в сравнении со средним количества половых партнеров в течение жизни (ORi,2 от 1.43 до 5.62); гомосексуальные контакты у мужчин (OR 1,2 от 5,23 до 8.79). Повышенный риск инфицирования ВГВ был ассоциирован с низким социально-экономическим статусом респондента: пребыванием в местах лишения свободы (ORi,2 от 1.91 до 3.27), стату-

сом безработного (ORij от 1.82 до 5.59), отсутствием среднетехнического или высшего образования (ORi,2 от 1.56 до 2.93).

8. Повышенные риски заражения ВГВ при получении медицинской помощи в обследованных в 2000-2002 годах группах населения были выявлены в отношении общих анестезий (OR2=1.75) в группе медработников; госпитализаций в лечебные учреждения по поводу любых заболеваний (С®2=1.68) в группе пациентов поликлиники; хирургических операций в ротовой полости или горле в группе женщин (OR2=2.36). Не выявлено повышенных рисков инфицирования ВГВ для таких медицинских процедур, как переливание крови и ее продуктов, введение антигемофильного фактора, хирургические операции, аборты, хирургические операции в ротовой полости или горле (кроме группы женщин), общая анестезия (кроме группы медработников), гемодиализ, инъекции, эндоскопия и зондирование, а также госпитализации в медицинские учреждения по поводу любых заболеваний (кроме пациентов поликлиники).

Результаты диссертации изложены в следующих публикациях:

Статьи:

1.Баяндин Р.Б., Шустов A.B., Кочнева Г.В., Сиволобова Г.Ф., Гражданцева A.A., Акинфеева Л.А., Ракова И.Г., Алешина М.В., Букин В.Н., Орловский В.Г., Беспалов B.C., Нетесов C.B. Генотипическое разнообразие изолятов и факторы риска инфекции вирусом гепатита В у отдельных групп населения Новосибирской области. Инфекционные болезни 2004; том 4, №3: 39-44.

2. Кочнева Г.В., Гражданцева A.A., Сиволобова Г.Ф., Шустов A.B., Гаврилова И.В., Чуб Е.В., Баяндин Р.Б., Терновой В.А., Чаусов Е.В., Акинфеева Л.А., Гранитов В.М., Сахарова Е.Г., Губанова Л.И., Орловский В.Г., Нетесов C.B. Этиология острых гепатитов и генотипическое разнообразие вирусов гепатитов А, В, С и Е в трех регионах Сибири. Инфекционные болезни, 2005, том 3, №1: 26-31.

3. Баяндин Р.Б., Шустов A.B., Кочнева Г.В., Сиволобова Г.В., Гражданцева A.A., . Локтев В.Б., Гранитов В.М., Нетесов C.B. Частота встречаемости маркеров, распределение генотипов и факторы риска вирусом гепатита В у пациентов инфекционного отделения городской больницы города Барнаула. Инфекционные болезни 2007; том 5, №1: 5-10.

Тезисы конференций:

1. A.V.Shustov, G.F.Sivolobova, A.A.Grazdantseva, G.V.Kochneva, I.V.Gavrilova, R.B.Bayandin, L.A.Akinfeeva, S.V.Netesov, A.Zelicoff. The prevalence and risk factors of HCV and HBV infection among health care workers in Novosibirsk regional hospitals XII-th International congress of virology (Paris, France, July 25-30, 2002), pp 343.

2. A.V. Shustov, I.V. Gavrilova, V.A. Ternovoi, T.N. Rudzevich, E.V.Chub, R.B. Bayandin, G.V. Kochneva, A.A. Grazhdantseva, G.F. Sivolobova, M.O. Favorov, and S.V. Netesov. Genotypes of hepatitis A, B, and С viruses circulating in the population of Western Siberia. 6-th annual Conference of European Society of Clinical Virology (Lion, France, august 23-30, 2003), pp. 221.

3. C.B. Нетесов, A.B. Шустов, И.В. Гаврилова, В.А. Терновой, Р.Б. Баяндин, Г.В. Кочнева, A.A. Гражданцева, Г.Ф. Сиволобова, H.A. Маркович, В.М. Гранитов, Л.И. Губанова, Е.Г. Сахарова. Вирусные гепатиты в Западной Сибири за сорок лет в сравнении с данными по России и другим странам. Материалы V Российской научно-практической конференции "Гепатит В, С и D - проблемы диагностики, лечения и профилактики" (г.Москва, Россия, 3-5 июня, 2003), с.206-207.

4. A.B. Шустов, И.В. Гаврилова, В.А. Терновой, Т.Н. Рудзевич, Е.В.Чуб, Р.Б. Баяндин, Г.В. Кочнева, A.A. Гражданцева, Г.Ф. Сиволобова, М.О. Фаворов, Б. Дж. Ро-бертсон, C.B. Нетесов. Генотипы вирусов А, В и С, циркулирующих среди населе-

ния Западной Сибири. Генотипы вирусов А, В и С, циркулирующих среди населения Западной Сибири. Материалы V Российской научно-практической конференции "Гепатит В, С и D 22 - проблемы диагностики, лечения и профилактики" (г. Москва, Россия, 3-5 июня, 2003), с.352-353.

5. Баяндин Р.Б., Шустов A.B. Изучение частоты встречаемости маркёров и генотипи-ческого разнообразия вируса гепатита В среди некоторых групп населения Новосибирской области. XIV Научная конференция-конкурс молодых ученых ГНЦ ВБ "Вектор" (р.п. Кольцово, 26-27 июня, 2003), с 32-33.

6. Баяндин Р.Б., Кочнева Г.В., Сиволобова Г.Ф., Гражданцева A.A., Нетесов C.B. Частота встречаемости маркеров, генотипическое разнообразие изолятов и факторы риска инфекции вирусом гепатита В у отдельных групп населения Новосибирска и Барнаула // Молекулярная диагностика инфекционных болезней: Материалы Международной научно-практической конференции. (Минск, 17-18 мая, 2007), с. 82-83.

7. R.B. Bayandin, G.V. Kochneva, S.V Netesov. Isolates genotypic variability and risk factors of HBV infection among different groups of Novosibirsk and Barnaul population. XIV International Congress of Virology (Istanbul, 10-15 august, 2008) pp. 278-279.

9. Баяндин Р.Б. Частота встречаемости маркеров, генетическое разнообразие изолятов и факторы риска инфицирования вирусом гепатита у отдельных групп населения Новосибирской области и Алтайского края. Научно-практическая конференция «Биологическая безопасность в современном мире». (Оболенск, 21-22 апреля, 2009), с 40-41.

Благодарности

Автор прииосит свою благодарность:

C.B. Нетесову за терпеливое научное руководство, A.B. Шустову за переданный научный опыт и помощь в организации исследований, В.Б. Локтеву за ценные консультации, В.А. Терновому за ценные советы и обсуждение работы, Г.В. Кочневой за внимательное рассмотрение работы и высказанные объективные замечания, А.Н. Швалову за техническую помощь.

Также я весьма признателен: И.В. Плясуновой, В.А. Мануйлову, Е.В. Чуб, Г.Ф. Си-волобовой, A.A. Гражданцевой, С.А. Походне за плодотворное сотрудничество и ценные предложения.

Автор выражает особую благодарность Л.А. Акинфеевой за выполнение работы в части тестирования образцов сывороток в ИФА.

Отпечатано в типографии Новосибирского государственного технического университета 630092, г. Новосибирск, пр. К. Маркса,20, тел./факс (383) 346-08-57, ngtu@ngs.ru формат 60 х 84/16, объем 1.5 п.л., тираж 100 экз. заказ № 320 подписано в печать 31.07.09г.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Баяндин, Роман Борисович

Введение.

Глава 1. Литературный обзор.

1.1.1. Классификация вируса гепатита В.

1.1.2. История открытия вируса гепатита В.

1.1.3. Вирусные частицы.

1.1.4. Физико-Химические свойства.

1.2. Структура генома ВГВ.

1.2.1. Регуляторные элементы вирусной репликации.

1.2.2. Белкн вируса гепатита В.

1.2.2.1. Поверхностные белки.

1.2.2.2. HBcAg и HBeAg.

1.2.2.3. Р белок.

1.2.2.4.Х белок.

1.3. Жизненный цикл и репликация ВГВ.

1.4. Генотипы вируса гепатита В.

1.4.1. Классификация п географическая распространенность.

1.4.2. Генотипы ВГВ и клинические особенности течения инфекции.

1.4.3. Генотипы ВГВ и эффективность антивирусной терапии.

1.5. Эпидемиология вируса гепатита В.

1.5.1. Географическая распространенность ВГВ.

1.5.2. Пути передачи ВГВ инфекции.

1.6. Клиническое течение ВГВ.

1.6.1. Острый ВГВ.

1.6.2. Хронический ВГВ.

1.6.2.1. HBeAg-позитивный хронический ВГВ.

1.6.2.2. HBeAg-негативный хронический ВГВ.

1.6.2.3. Носптельство HBsAg.

1.6.3. Цирроз.

1.6.4. Первичный рак печени.

1.7. Вакцинация против ВГВ.

1.7.1. Успехи вакцинации.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1. Описание исследований.

2.2. Обследуемые группы.

2.3. Анкетирование.

2.4. Забор крови и храпение сывороток.

2.5. Диагностические тест-системы.

2.6. Реактивы, ферменты и олигонуклеотиды.

2.7. Выделение ДНК из сыворотки крови.

2.8. Амплификация.

2.9. Выделение ДНК из агарозного геля.

2.10. Определение иуклеотидпых последовательностей.

2.11. Анализ иуклеотидпых последовательное гей.

2.12. Анализ эпидемиологических данных.

Глава 3. Результаты и обсуждение.

3.1. Встречаемость маркеров ВГВ среди различных групп населения Западной

Сибири.

3.1.1. Встречаемость маркеров ВГВ среди посетителей поликлиники НРК-1.

3.1.2. Встречаемость маркеров ВГВ среди пацпетов центра СПИД.

3.1.3. Встречаемость маркеров ВГВ среди пациенюв МГНД.

3.1.4. Встречаемость маркеров ВГВ среди медицинских работников.

3.1.5. Встречаемость маркеров ВГВ среди пациентов инфекционной клшшкн городской больницы города Барнаула.

3.2. Анализ факторов риска инфицирования ВГВ.

3.2.1. Анализ факторов риска инфицирования ВГВ среди пациентов центра СПИ Д.

3.2.2. Анализ факюров риска инфицирования ВГВ среди пациентов МГНД.

3.2.3. Анализ факторов риска инфицнрования ВГВ среди медицинских работников

3.2.4. Анализ факторов риска инфицирования ВГВ среди посештелей поликлиники НРБ-1.

3.2.5. Анализ факторов риска инфицирования ВГВ среди всех исследуемых групп жителей Новосибирской области.

3.2.6. Анализ факторов риска инфицирования ВГВ среди пациентов инфекционной клиники городской больницы №5 города Барнаула.

3.3. Геношпическое разнообразие изолятов ВГВ, циркулирующих в Новосибирской обласш п Алтайском крае.

3.3.1. Филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей изоляюв ВГВ, циркулирующих в Новосибирской области и Алтайском крае.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Частота встречаемости маркеров, генетическое разнообразие и факторы риска инфицирования вирусом гепатита B в различных группах населения Новосибирской области и Алтайского края"

Актуальность проблемы.

Болезнь, вызываемая вирусом гепатита В (ВГВ), является одной из важнейших медицинских проблем не только в Российской Федерации, но и во всем мире. По оценкам Всемирной Организации Здравоохранения на нашей планете около 2 миллиардов человек имеют серологические маркеры, свидетельствующие о контакте с ВГВ-инфекцией в прошлом, а ежегодная заболеваемость острым ВГВ в мире составляет 5 миллионов человек (Kane et al., 1999); число же хронически инфицированных ВГВ людей превышает 350 миллионов человек (Zuckerman et al., 2000).

В России по оценкам экспертов ВОЗ около 6.7 млн. человек являются носителями ВГВ, то есть примерно 4.7% населения (Magdzik, 2000). В 90-е годы ежегодная заболеваемость ВГВ в России возросла в несколько раз, увеличившись с 18.1 случаев на 100 тыс. населения в 1992 до 43.8-42.5 случаев в 1999-2000 годах (Рис.1). В последующие годы ситуация изменилась, и началось значительное снижение заболеваемости ВГВ в России: в 2001 она составила 34.9, в 2002 году - 19.7, в 2007 снизилась до 5.26, а в 2008 году показатель заболеваемости составил 4.04 случая на 100 тыс. населения (ЗНиСО, 1995-2009, www.fcgsen.ru/). Такое значительное снижение заболеваемости стало возможным благодаря организованной государственными структурами борьбы с наркотиками, программам вакцинации новорожденных, начавшейся с 2000 года, экспериментальной программы вакцинации подростков, медработников и других групп риска, осуществлявшейся несколько лет Фондом Вишневской-Ростроповича, и масштабной массовой вакцинации основных групп риска против ВГВ, предпринятой в рамках приоритетной национальной программы «Здоровье», начиная с 2006 года. Однако показатели заболеваемости ВГВ в России пока еще значительно превосходят таковые в развитых странах Западной Европы и Северной Америки. В 2006 году заболеваемость ВГВ в США составляла 1.62 случая на 100 тыс. населения

-♦-•Россия «-о—США *• — Италия

Чехия Казахстан -о—Германия

Рисунок 1. Динамика ежегодной заболеваемости ВГВ в различных странах (ЗНиСО, 1995-2009. Инфекционные заболевания в России: Статисшческий справочник, М-1992, www.fcirscn.ru/. www.ecdc.europa.eu/ , www.cdc.gov). w\vw.cdc.&ov/mmwr/PDF/wlc/mm5804.pdf)n показатель заболеваемости в Чехии составил 3 случая на 100 тыс. населения, в Италии - 1.8, в Германии — 1.4, при этом средняя заболеваемость по Европейскому Союзу составила 1.5 случая на 100 тыс. населения

Cwwvv.ecdc.europa.eu/en/files/pdf/Publications/081215 AER long 2008.pdQ.

Несмотря на успехи в снижении заболеваемости ВГВ, на своевременную диагностику и профилактику в России заболеваний, вызванных ВГВ, до сих пор тратится заметно меньше средств и усилий, чем того требует данная проблема. В результате значительное число заболевших людей узнают об инфицировании ВГВ, когда болезнь уже переходит в хроническую форму. При этом в РФ большинство новых случаев инфекции ВГВ до сих пор регистрируется среди молодых людей 15-29 лет. Это угрожает появлением через 20-25 лет большого количества тяжёлых больных с последствиями хронического гепатита -циррозом и гепатоцеллюлярной карциномой.

В настоящее время все изученные изоляты ВГВ по отличиям в нуклеотидных последовательностях их геномов группируют в восемь генотипов вируса, обозначаемых латинскими буквами с А по Н. Различия между последовательностями геномов изолятов ВГВ разных генотипов составляет более 8% (Arauz-Ruiz et alv 2002; Magnius et al., 1995; Norder et al., 1992; Norder et al., 1993; Norder et al., 1994; Okamoto et al., 1988; Stuyver et al., 2000). Встречаемость и соотношение генотипов в различных районах планеты широко варьируют. Так, генотип А широко распространён в Европе, встречается в Северной Америке, Южной и Восточной Африке. Областью преимущественного распространения генотипов В и С является Юго-Восточная Азия. Генотип D доминирует в Европе, странах Ближнего Востока, Индии и Северной Африке. Генотип Е превалирует в Западной Африке, а генотип F — в Южной Америке. Генотип G выявлен в Западной Европе и Северной Америке, а генотип Н в Центральной Америке и Японии (Arauz-Ruiz et al., 2002; Magnius et al., 1995; Norder et al., 1992; Norder et al., 1993; Norder et al., 1994; Okamoto et al., 1988; Stuyver et al., 2000). В настоящее время в России имеются данные о встречаемости генотипов ВГВ в Москве (Abe et al., 2004),, Санкт-Петербурге (Морозов, 2003), Самаре (Flodgren et al., 2000), Ямало-Ненецком автономном округе (Мануйлов и др., 2005) и Якутии (Морозов 2003). Во всех этих регионах, за исключением Якутии, доля генотипа D составляет 90% и выше; в небольшом количестве встречаются генотипы А и С. В Якутии генотип D также является самым распространенным, по встречается в чуть менее 40% случаев, примерно по 25% приходится на генотипы А и С, а остальные случаи — смешанное инфицирование несколькими генотипами ВГВ (Морозов, 2003).

В последнее время появляется все больше публикаций, где отмечается связь между клиническим течением инфекции и генотипами ВГВ. Рядом авторов отмечается, что генотипы ВГВ могут по-разному влиять на такие признаки течения инфекции, как скорость сероконверсии HBeAg, частота хронизации, продолжительность иммунотолерантной фазы, риск развития рака печени, реактивация ВГВ после трансплантации печени (Chu et al., 2003; Chu et al., 2004; Као et al., 2000а; ICramvis et al. 2002; Pang et al., 2004; Sugauchi et al., 2002). В России подобные исследования пока не проводились, но, поскольку их актуальность очевидна, а методы гепотипировапия начинают внедряться в медицинскую практику, то их проведение - дело ближайшего будущего.

Для дальнейшего наиболее эффективного противодействия ВГВ-инфекции необходимы более подробные данные, которые могут быть получены с помощью молекулярно-эпидемиологических исследований частоты встречаемости маркеров, генотипического разнообразия ВГВ, путей передачи и факторов риска среди различных популяционных групп. Основными путями распространения ВГВ, как парентерально передающейся инфекции, являются половые контакты, внутривенное и интраназальное употребление наркотических препаратов, вертикальная передача от матери/отца к ребенку (Wang et al., 2003b), близкие контакты, совместное использование некоторых бытовых вещей, пирсинг, татуирование, различные медицинские процедуры, нарушающие целостность кожных покровов и слизистых оболочек. Однако для выяснения наиболее важных путей и механизмов передачи, преобладающих в конкретной стране или регионе, а также для выявления наиболее важных упущений в практике здравоохранения, необходимо проводить дополнительные исследования с целью выявления регион-специфических факторов риска и групп, подвергающихся наибольшей опасности заражения. Изучение частоты встречаемости маркеров, сбор эпидемиологически значимой информации и анализ факторов риска в различных группах позволяют увидеть п количественно оценить особенности распространения ВГВ-инфекции, незаметные при простом скрининговом исследовании населения отдельного контингента или одной отдельно взятой популяционной группы.

Целями настоящего исследования являлись:

Определение частот встречаемости различных маркеров ВГВ и генетического разнообразия изолятов ВГВ в пробах, полученных от представителей различных популяционных групп Новосибирской области и

Алтайского края, а также анализ факторов риска инфицирования ВГВ в этих группах.

Задачи исследования:

1. Определить частоту встречаемости HBsAg среди следующих популяционных групп: медицинских работников, пациентов наркологического диспансера и инфекционных больниц, пациентов поликлиники.

2. Выявить и проанализировать факторы риска инфекции ВГВ в обследованных популяционных группах.

4. Определить первичную структуру preS2/S области генома ВГВ для выявленных изолятов путем прямого секвенирования Неположительных образцов.

5. Провести филогенетический анализ последовательностей preS2/S области и определить генотипическое разнообразие изолятов ВГВ, выделенных из проб жителей Новосибирской области и Алтайского края. Провести сравнение указанных последовательностей с последовательностями из международных баз данных.

Научная новизна

3. Впервые показано, что в Новосибирской области циркулируют три генотипа ВГВ: А, С и D. На территории Алтайского края выявлены только генотипы А и D. И в Новосибирской области, и в Алтайском крае доминирующим является генотип D, генотипы А и С встречаются гораздо реже.

4. При анализе последовательностей изолятов генотипов А и D выявлены регион-специфические замены, не встречавшиеся в мире ранее. Некоторые их этих замен встречались сразу у нескольких изолятов; отдельные регион-специфические замены были обнаружены как в последовательностях изолятов, выделенных в Новосибирской области, так п в последовательностях изолятов, циркулирующих в Алтайском крае.

5. Показано, что в Новосибирской области и Алтайском крае доминируют определенные варианты ВГВ. Эти же варианты ВГВ широко распространены в целом ряде стран Европы, Азии, Африки и Южной Америки.

Практическая значимость

Данные об основных факторах риска инфицирования ВГВ среди различных групп показывают, что риск заражения нозокомиальными путями невелик, что позволяет сфокусировать внимание и усилия в борьбе с распространением данной инфекции на профилактической работе с группами лиц склонными к рискованному социальному поведению.

Выявление регион-специфических нуклеотидных замен у изолятов Новосибирской области и Алтайского края представляет большой интерес для дальнейшего исследования их влияния на клинические особенности заболевания ВГВ, а также для поиска и выявления "вакцин-ускользающих" мутантных штаммов.

В связи с результатами, полученными в ходе данного исследования, для наиболее эффективной борьбы с распространением ВГВ в нашей стране наряду с проведением кампаний по вакцинации необходимо более наглядное и доступное разъяснение всему населению в целом и особенно людям молодого возраста, лицам с низким социальным и экономическим статусами, а также лицам, склонным к рискованному поведению и к потреблению инъекционных наркотиков, информации о наиболее актуальных для региона путях передачи ВГВ, вреде для здоровья и возможных отдаленных последствиях заболевания ВГВ. Было бы целесообразным введение соответствующих разделов в образовательные программы и курсы для школьников (Основы безопасности жизни) и студентов, которые могли бы помочь не только в целях борьбы 'и профилактики распространения гепатита В, но и в целях борьбы с другими инфекциями.

Положения, выносимые на защиту

1. Частота встречаемости HBsAg в различных популяционных группах составила: среди пациентов наркологического диспансера - 8.4% случаев; среди пациентов центра СПИД — 35%; у медицинских работников - 5.4%; пациенты поликлиники — 3.6%; пациентов инфекционной клиники -36.5%.

2. Основные факторы риска инфицирования ВГВ напрямую связаны с рискованным социальным поведением (внутривенным употреблением наркотиков, наличием повышенного количества половых партнеров в течение жизни, гомосексуальными контактами) и, косвенно, с низкими экономическим и социальным статусами (статусом безработного, пребыванием в местах лишение свободы, отсутствием среднетехнического или высшего образования).

3. Риск заражения ВГВ при получении медицинской помощи среди исследованных групп невелик. Не выявлено повышенных рисков заражения при переливании крови, получении антигемофильного фактора, общих хирургических операциях, процедурах гемодиализа, эндоскопии и зондирования, акупунктуры. Вместе с тем выявлена повышенная частота встречаемости хронического гепатита В у некоторых категорий медработников. 4. На территории Новосибирской области циркулируют изоляты ВГВ трех генотипов (А, С и D) со следующим распределением: генотип D составил 97.1%, генотип А - 1.7%, генотип С - 1.2%. В Алтайском крае обнаружены только генотипы А и D. генотип D доминирует — 98.6%, доля генотипа А составила 1.4%.

Апробация работы

Результаты работы были представлены на следующих Российских и Международных конференциях: V-я Российская научно-практическая конференция «Гепатит В, С и D - проблемы диагностики, лечения и профилактики» (Москва, Россия, 3-5 июня 2003); 1-я Международная конференция «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, Россия, 26-28 октября 2004); XII-й Международный вирусологический конгресс (Париж, Франция, 25-30 июля 2002); 6-ой Ежегодный съезд Европейского Общества Клинической Вирусологии и 8-ая Конференция по Современной ситуации в области Хронических Вирусных Гепатитов (Лион, Франция, 23-30 августа 2003); XIII-й Международный вирусологический конгресс (Сан-Франциско, США, 23-28 июля 2005); Российская научно-практическая конференция «Генодиагностика инфекционных болезней» (Новосибирск, Россия, 25-27 октября 2005г); XIV Международный вирусологический конгресс (Стамбул, Турция, 10-15 августа 2008).

По материалам диссертации опубликованы 3 статьи в журнале, который входит в список ВАК.

Вклад автора

Результаты работы, за исключением анкетирования пациентов и проведения ИФА, получены лично автором.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 149 страницах, содержит 14 таблиц и 11 рисунков. Состоит из «Введения», глав «Обзор литературы», «Материалы и методы» и «Результаты и обсуждение», «Заключение», «Выводы», «Список литературы», а также «Приложения». Список литературы включает в себя 277 ссылок.

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Баяндин, Роман Борисович

Выводы

1. Частота встречаемости HBsAg вируса гепатита В в различных популяционных группах Новосибирской области и Алтайского края в 2001 -2002 годах составила: пациенты клиники инфекционных болезней городской больницы №5 г. Барнаула - 36.5%, пациенты Новосибирского областного центра СПИД (цСПИД) - 35.0%; пациенты муниципального городского наркологического диспансера (МГНД) — 8.4%; пациенты поликлиники Новосибирской районной больницы №1 (НРБ-1)- 3.6%.

2. В объединенной группе медицинских работников различных лечебных учреждений Новосибирской области частота встречаемости HBsAg составила 5.4%. Частота встречаемости HBsAg среди медицинских работников различных лечебных учреждений Новосибирска была следующей: в МГНД - 2.2%; в БСМП-2 - 4.6%; поликлиника НРБ-1 -4.8%; цСПИД - 18.2%.

3. В Новосибирской области в 2001-2002 годах были выявлены три генотипа ВГВ: А, С и D. Их встречаемость была следующей: генотип D составлял 97.1%, генотип А - 1.7%, генотип С - 1.2%. В Алтайском крае были обнаружены только генотипы А и D; доминирующим также оказался генотип D — 98.6%; доля генотипа А составила 1.4%.

4. Значительное число изолятов, выделенных в Новосибирской области и Алтайском крае, имели идентичные нуклеотидные последовательности фрагмента preS2/S области генома ВГВ. Доля КОУ192-подобных изолятов от общего числа, обнаруженных нами, изолятов составила 25.6% (63/246). Доля АМУ14-подобных изолятов составила 33.3% (82/246). Доля HIA-33 подобных — 4.9%. Доля других изолятов, имеющих идентичные нуклеотидные последовательности, варьировала в пределах от 4.4% до 0.9%. Доля изолятов с уникальными последовательностями - 19.1%.

5. Наиболее распространенные нуклеотидные последовательности фрагмента preS2/S области генома ВГВ в Новосибирской области и Алтайском крае встречались также многократно и в других странах мира. Для KGV192-подобных изолятов в международной базе GenBank было найдено 209 идентичных последовательностей этого фрагмента генома изолятов практически со всей Евразии. Для изолята RIG67 было обнаружено 217 изолятов с идентичной нуклеотидной последовательностью в исследуемом участке генома из стран Европы, некоторых стран Азии, Африки и Южной Америки. Для AMV 14-подобных найдено 19 изолятов с идентичной первичной структурой, для HIA33 - 12 изолятов, MOI64 — 11 изолятов, GAA146 - 6 изолятов, ООВЗ-подобные - 5 изолятов. Широкая распространенность этих изолятов в мире может говорить о том, что они имеют эволюционные преимущества в сравнении с другими, менее распространенными изолятами.

6. У 12.6% (31/246) выявленных нами изолятов выявлены уникальные нуклеотидные замены. Некоторые уникальные нуклеотидные замены выявлены сразу у нескольких изолятов: замены С295Т и G8T обнаружены у 5 (разных) изолятов, замена Al 1Т обнаружена у 3 изолятов, замены С158А, C243G, С276А и T278G обнаружены у 2 (разных) изолятов, что говорит о том, что эти замены являются характерными для нашего региона и что в данном регионе может происходить независимая от других регионов эволюция генома ВГВ.

7. Основные факторы риска инфицирования ВГВ оказались напрямую связанными с рискованным социальным поведением. Наибольшее значение имели: внутривенное употребление наркотиков (ORi о от 2.45 до 11.88); наличие повышенного в сравнении со средним количества половых партнеров в течение жизни (OR12 от 1.43 до 5.62); гомосексуальные контакты у мужчин (ORi.2 5.23 до 8.79). Повышенный риск инфицирования ВГВ косвенно был связан с низким социально-экономическим статусом респондента: пребыванием в местах лишения свободы (ORt 2 от 1.91 до 3.27), статусом безработного (ORi.2 от 1.82 до 5.59), отсутствием среднетехнического или высшего образования ((Ж|д от 1.56 до 2.93).

8. Риски заражения ВГВ при получении медицинской помощи в обследованных в 2001-2002 годах группах населения были выявлены в отношении общих анестезий (OR2=T.75) в группе медработников; госпитализаций в лечебные учреждения по поводу любых заболеваний (OR2=1.68) в группе пациентов поликлиники; хирургических операций в ротовой полости или горле в группе женщин (OR2=2.36). Не выявлено повышенных рисков инфицирования ВГВ для таких медицинских процедур, как переливание крови и ее продуктов, введение антигемофильного фактора, хирургические операции, аборты, хирургические операции в ротовой полости или горле (кроме группы женщин), общая анестезия (кроме группы медработников), гемодиализ, инъекции, эндоскопия и зондирование, а также госпитализации в медицинские учреждения по поводу любых заболеваний (кроме пациентов поликлиники).

Благодарности

Автор приносит свою благодарность:

С.В. Нетесову за терпеливое научное руководство, А.В. Шустову за переданный научный опыт и помощь в организации исследований, В.Б. Локтеву за ценные консультации, В.А. Терновому за ценные советы и обсуждение работы, Г.В. Кочневой за внимательное рассмотрение работы и высказанные объективные замечания, А.Н. Швалову за техническую помощь.

Также я весьма признателен: И.В. Плясуновой, В.А. Мануйлову, Е.В. Чуб, Г.Ф. Сиволобовой, А.А. Гражданцевой, С.А. Походне за плодотворное сотрудничество и ценные предложения.

Данная работа была выполнена при поддержке грантов CRDF RB0-893 и МНТЦ-1637Р.

Заключение

Целями настоящей работы являлись сравнительное изучение частоты встречаемости маркеров, генотипического разнообразия и факторов риска инфицирования ВГВ среди различных групп населения Новосибирской области и Алтайского края в период 2001-2002 годов. Для этого была выбрана схема поперечного (одномоментного) исследования, которая и позволила решить поставленные нами задачи.

В проведенных нами исследованиях наибольшая частота встречаемости HBsAg — 36.5% - была выявлена среди пациентов инфекционной клиники г. Барнаула т.к. они изначально составляли выборку пациентов - больных острыми вирусными гепатитами. Среди пациентов центра СПИД HBsAg был выявлен в 35.0% случаев, то есть примерно на таком же уровне; хотя в данном медучреждении доля больных острыми вирусными гепатитами составляла чуть более половины пациентов, а остальные были госпитализированы с другими инфекциями. Почти такой же высокий уровень частоты встречаемости HBsAg среди пациентов центра СПИД, как и в выборке больных острыми гепатитами, вероятно, связан с тем, что в центре СПИД 37% пациентов являлись ПИН, тогда как среди пациентов инфекционной клиники г. Барнаула только 11.6% пациентов употребляли наркотики внутривенно. В группе пациентов МГНД доля лиц, употребляющих наркотики, составляла 45.2% и, тем не менее, HBsAg-положительными были всего 8.4%, поскольку критерием для госпитализации в данное лечебное учреждение являлось не наличие вирусных гепатитов (или других инфекций), как в инфекционных клиниках, а наркотическая зависимость. Наименьшая частота встречаемости HBsAg составила 3.6% и была выявлена в группе посетителей поликлиники НРБ-1, которая в нашем исследовании фактически являлась группой сравнения.

В объединенной группе медицинских работников HBsAg-положительных оказалось больше, чем в группе сравнения - 5.4%, что связано с повышенным профессиональным риском заражения ВГВ. Медработники обследовались из 4 медицинских учреждений, и частота встречаемости HBsAg в них сильно варьировала. Минимальная распространенность HBsAg зафиксирована среди медработников МГНД - 2.2%; практически на одном уровне встречаемость HBsAg оказалась среди медперсонала больницы скорой медицинской помощи и поликлиники р.п. Кольцове — 4.6% и 4.8%, соответственно. Среди медработников центра СПИД частота встречаемости HBsAg была максимальной — 18.2%, и с учетом того, что частота встречаемости анти-ВГС среди медработников центра СПИД составила 9.5% (Шустов и др., 2004), можно говорить о высоком профессиональном риске заражения парентерально передающимися инфекциями в этом медицинском заведении. Известно, что частота встречаемости HBsAg среди медицинского персонала зависит от профиля лечебного учреждения и специальности медработника. В связи с этим персонал инфекционных клиник имеет одни из самых высоких рисков инфицирования различными инфекциями. Так, в исследовании (Акимкин и др., 1997) доли HBsAg-положительных медработников были максимальны в инфекционном (10.8%), гепатологическом (11.2%) и кожно-венерологическом (11.1%) отделениях, хотя все же значительно ниже, чем среди медицинских работников центра СПИД.

Появление все большего количества данных о влиянии генотипов ВГВ на различные клинические особенности протекания заболевания и эффективность лечения говорит об актуальности информации о генотипическом разнообразии и количественном соотношении генотипов ВГВ в различных регионах России. Впервые нами было показано, что на территории Новосибирской области циркулируют три генотипа ВГВ: А, С и D, а на территории Алтайского края обнаружены генотипы А и D. И в Новосибирской области, и в Алтайском крае доминирующим является генотип D, гораздо реже встречаются генотипы А и С. Сходные распределения генотипов со значительным преобладанием генотипа D выявлены и в других регионах РФ (Abe et al., 2004; Flodgren et alv 2000; Huy et al., 2003; Мануйлов и др., 2005), за исключением Якутии, где генотип D хотя и был самым распространенным, но составлял менее 40% от общего числа выявленных случаев (Морозов, 2003). Полученные данные о генотипическом разнообразии ВГВ должны учитываться в медицинской практике. К t сожалению, преобладание генотипа D на территории России неблагоприятно с клинической точки зрения, поскольку среди ВГВ-инфицированных пациентов с генотипом D инфекция чаще протекает в тяжелой форме, реже встречается продолжительная ремиссия и исчезновение ДНК, а также отмечается более высокая доля^ больных с повышенным уровнем AJIT по сравнению с пациентами, инфицированными ВГВ генотипа A (Kidd-Ljunggren et al., 2004; Sanchez-Tapias et al., 2002; Thakur et al., 2002).

Анализ нуклеотидных последовательностей выявленных нами изолятов ВГВ показал, что значительное число секвенированных нуклеотидных последовательностей было идентично в исследуемом участке генома и встречалось как в Новосибирской области, так и в Алтайском крае. Так, в исследуемом участке генома первичная структура данного фрагмента генома изолята KGV192 была идентична первичной структуре 62 изолятов, AMV14 -81 изоляту; для других наиболее распространенных нуклеотидных последовательностей идентичными были последовательности от 1 до 11 изолятов. Кроме того, для большинства изолятов с идентичными первичными структурами данного фрагмента генома были найдены на 100% гомологичные нуклеотидные последовательности из базы данных GenBank, выявленные в других странах. Наибольшее количество последовательностей со 100% гомологией было найдено для изолятов KGV192 и RIG67. Для KGV192 было обнаружено 209 идентичных последовательностей практически со всей Евразии (за исключением Юго-Востока континента), а также с Севера Африки. Для RIG67 география оказалась еще шире: 100% гомологичные последовательности выявлены в России, Европе, Таджикистане Японии, Западной Африке, ЮАР, Венесуэле и Бразилии. Для других изолятов распространенность последовательностей со 100% гомологией была не так широка и ограничивалась либо Европой, либо Азией. По всей видимости, изоляты, имеющие очень широкое географическое распространение, являются более древними, что и дало возможность этим изолятам занять столь значительные территории. Кроме того, такое широкое распространение скорей всего стало возможным благодаря наличию у этих изолятов определенных эволюционных преимуществ, таких как скорость репликации вируса, избегание иммунного ответа и меньшая инфекционность и др.

В то же время анализ нуклеотидных последовательностей позволил выявить уникальные замены у 12.6% собранных нами изолятов, что свидетельствует о наличии территориально обособленных эволюционных процессов. Это имеет большое значение для дальнейшего исследования влияния данных замен на клиническую картину заболевания ВГВ, и для изучения на предмет выявления "вакцин-ускользающих" мутантных штаммов. Выявление уникальных замен у 12.6% изолятов также может свидетельствовать о том, что эти изоляты уже долго циркулируют на этой территории, а остальные, возможно, были недавно завезены в наш регион из других областей РФ или из других стран.

Для двух последовательностей ВГВ генотипа С на 100% гомологичными в изучаемом районе оказались только изоляты, выделенные от обезьян, тогда как наиболее гомологичные последовательности от человека имели 4 замены. Возможность передачи ВГВ от человека к обезьянам показана в давних экспериментах с подкожным заражением этих животных слюной HBsAg-положительных людей (Scott et al., 1980). В этих экспериментах тестировали кровь обезьян на наличие HBsAg после заражения, но первичная структура ДНК ВГВ не была определена и более поздних публикаций, подтверждающий эти данные, нами найдено не было. На сегодняшний день не зафиксировано случаев инфицирования ВГВ людей от обезьян, тем не менее, возможно, что заражение произошло при контактах с обезьянами или людьми, контактировавшими с обезьянами.

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что риски заражения ВГВ нозокомиальными путями среди обследованных групп Новосибирской области и Алтайского края относительно невелики. Факторы риска были выявлены лишь в отношении общих анестезий в группе медработников; госпитализаций в лечебные учреждения по поводу любых заболеваний, кроме болезней печени или родов в группе пациентов поликлиники; хирургических операций в ротовой полости или горле в группе женщин; при получении медицинской помощи за рубежом в группах женщин и лиц старше 30 лет, что, по всей видимости, было связано с посещением Казахстана и Таиланда. При этом не было выявлено повышенных рисков инфицирования ВГВ при таких медицинских процедурах, как переливание крови и ее продуктов, введение антигемофильного фактора, хирургические операции, аборты, хирургические операции в ротовой полости или горле (кроме группы женщин), общая анестезия (кроме группы медработников), гемодиализ, инъекции, эндоскопия и зондирование, а также при госпитализациях в медицинские учреждение по поводу любых заболеваний, кроме болезней печени или родов (кроме группы пациентов поликлиники). Эти данные сильно разнятся с данными, полученными в Кабардино-Балкарии, где нозокомиальными путями были заражены 45.3% (Кузин и др., 2005). Из всего этого можно сделать вывод о том, что меры по противодействию внутрибольничному заражению ВГВ в Новосибирской области и Алтайском крае достаточно эффективны, хотя и требуют дальнейшей работы для полного устранения всех возможных путей инфицирования пациентов и медицинских работников в лечебных учреждениях.

При проведении травматичных процедур вне медицинских учреждений в Новосибирской области и в Алтайском крае выявлены факторы риска заражения ВГВ в отношении татуирования, что связано с возможным несоблюдением санитарных норм в салонах по оказанию данной услуги.

Большое значение в плане корреляций с встречаемостью HBsAg имели экономический статус и социальное поведение респондентов. Высшее образование, работа полный рабочий день, статус семейного человека, уровень дохода выше прожиточного уровня, наличие машины демонстрировали связь с пониженным риском инфицирования ВГВ. Напротив, риск заражения был повышенным у респондентов со средним (и ниже) образованием, уровнем дохода на уровне прожиточного минимума, безработных или частично занятых, не состоящих в браке, пребывавших в местах лишения свободы. При этом минимальное влияние социальных факторов на статус ВГВ-инфицированных наблюдалось среди медицинских работников и посетителей поликлиники НРБ-1 как наиболее благополучных в этом плане групп.

Основные факторы риска в группах пациентов центра СПИД и МГНД были связаны с внутривенным и интраназальным употреблением наркотических препаратов. В группе пациентов поликлиники НРБ-1, хотя и были получены высокие значения OR, употребляли наркотики всего 1.4%, а среди медицинских работников еще меньше - 0.4% (возможно в этих группах некоторые респонденты скрыли факт употребления наркотиков). Среди пациентов инфекционной клиники г. Барнаула, несмотря на то, что доля ПИН была ниже, чем среди пациентов центра СПИД и МГНД, она все же составляла 11.6%, что все-таки значительно больше, чем в группах медработников и пациентов поликлиники. При этом доля ПИН среди пациентов из Алтайского края снизилась с 17.9% в первом квартале до 4.7% в пятом квартале исследования, поскольку отбор пациентов происходил после событий 11 сентября 2001 года, и из-за антитеррористической операции в Афганистане лидеры движения Талибан приняли решение прекратить поставки героина на год с целью увеличения цен на этот наркотик (из интервью посла США в России Джона Байерли интернет изданию gazeta.ru).

Поскольку пациенты инфекционной клиники г. Барнаула изначально составляли группу больных острыми ВГ, а доля ПИН в этой группе со временем значительно снизилась, большее значение приобрел половой путь передачи ВГВ. В этой выборке риски инфицирования половым путем оказались выше среди женщин и лиц до 30 лет, чем среди мужчин и лиц старше 30 лет, хотя последние были более склонны к рискованному поведению, и в Новосибирской области риски инфицирования половым путем среди мужчин и лиц до 30 лет были выше. В Алтайском крае группы мужчин и лиц до 30 лет также были более склонны к рискованному поведению, но ввиду того, что половой путь передачи ВГВ имел в этой выборке большее значение, чем в Новосибирской области, а вероятность передачи ВГВ половым путем выше среди женщин и лиц старше 30 лет, факторы риска инфицирования ВГВ приобрели здесь более высокое значение.

Полученные результаты наглядно показывают, что в нашем регионе заражению вирусом гепатита В в основном подвержены люди, склонные к рискованному социальному поведению и пренебрежительно относящиеся к своему здоровью, причем большинство составляют молодые люди 30 лет и моложе. Проблема усугубляется тем, что в значительном числе случаев болезнь, вызванная ВГВ, протекает бессимптомно и человек узнает о том, что он инфицирован, случайно (например, при обращении к врачу по другому поводу) или когда болезнь уже доходит до стадии цирроза или рака печени. В связи с этим было бы целесообразно ввести обязательное тестирование на ВГВ раз в несколько лет в ходе плановых медицинских осмотров, что могло бы уменьшить отрицательные последствия ВГВ для здоровья из-за своевременного обнаружения инфекции и значительно снизить экономический ущерб от последствий, вызванных ВГВ и ВГС, который ежегодно превышает 2 млрд. рублей (Онищенко, 2001). Поскольку основные пути передачи ВГВ -внутривенное употребление наркотиков и незащищенные половые контакты -необходимо введение образовательных курсов для школьников и студентов, в которых бы рассказывалось о путях передачи и последствиях ВГВ. На государственном уровне необходимо через СМИ, и особенно через телевидение проводить систематические разъяснения опасности незащищенного секса, огромного вреда для здоровья, связанного с употреблением наркотиков и пропаганды здорового образа жизни.

Для эффективного противодействия ВГВ-инфекции также следует улучшить координацию региональных властей всех субъектов Российской Федерации, поскольку в последнее время нередки случаи, когда молодые люди в возрасте 16-18 лет при поступлении в учебные заведения или прохождении службы в армии в другом регионе РФ, не имеют возможности закончить начатый курс вакцинации против ВГВ, что не приводит к появлению протективного уровня антител в крови этих молодых людей и, следовательно, не исключает возможность заражения ВГВ.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Баяндин, Роман Борисович, Кольцово

1. Инфекционные заболевания в России: Статистический справочник, М-1992. с 244.

2. Морозов, В. Молекулярно-генетическая характеристика вариантов вируса гепатита В, циркулирующих в Санкт-Петербурге и Якутии // Автореф. канд. биол. наук. —С-Петербург, 2003-18 с.

3. Онищенко Г.Г. О состоянии заболеваемости вирусными гепатитами в Российской Федерации и неотложных медицинских мерах по ее стабилизации. // Вопр. вирусол. 2001 - Т.45, №4. - с. 4-7.

4. Abe К., Hayakawa E., Sminov A.V., Rossina A.L., Ding X., Huy T.T., Sata T. and Uchaikin V.F. Molecular epidemiology of hepatitis В, C, D and E viruses among children in Moscow, Russia. // J. Clin. Virol. 2004. - V.30 - p.57-61.

5. Acharya S.K., Madan K., Dattagupta S. and Panda S.K. Viral hepatitis in India. // Natl. Med. J. India. 2006. - V.19 - p.203-217.

6. Allain J.P. Occult hepatitis В virus infection: implications in transfusion. // Vox Sang. 2004. - V.86 - p.83-91.

7. Allain J.P. Epidemiology of Hepatitis В virus and genotype. // J. Clin. Virol. -2006. V.36 Suppl 1 - S12-S17.

8. Allain J.P., Candotti D., Soldan K., Sarkodie F., Phelps В., Giachetti C., Shyamala V., Yeboah F., Anokwa M., Owusu-Ofori S. and Opare-Sem O. The risk of hepatitis В virus infection by transfusion in Kumasi, Ghana. // Blood. -2003,-V.101 p.2419-2425.

9. Almeida J.D., Rubenstein D. and Stott E.J. New antigen-antibody system in Australia-antigen-positive hepatitis. // Lancet. 1971. - V.2 - p. 1225-1227.

10. Alter M.J. and Margolis H.S. The emergence of hepatitis В as a sexually transmitted disease. // Med. Clin. North Am. 1990. - V.74 - p. 1529-1541.

11. Andre F.E. and Zuckerman A.J. Review: protective efficacy of hepatitis В vaccines in neonates. //J. Med. Virol. 1994. - V.44 - p.144-151.

12. Arauz-Ruiz P., Norder H., Robertson B.H. and Magnius L.O. Genotype H: a new Amerindian genotype of hepatitis В virus revealed in Central America. // J. Gen. Virol. 2002. - V.83 - p.2059-2073.

13. Arbuthnot P., Capovilla A. and Kew M. Putative role of hepatitis В virus X protein in hepatocarcinogenesis: effects on apoptosis, DNA repair, mitogen-activated protein kinase and JAK/STAT pathways. // J. Gastroenterol. 1 lepatol. -2000.-V.15-p.357-368.

14. Avazova D., Kurbanov F., Tanaka Y., Sugiyama M., Radchenko I., Ruziev D., Musabaev E. and Mizokami M. Hepatitis В virus transmission pattern and vaccination efficiency in Uzbekistan. // J. Med. Virol. 2008. - V.80 - p.217-224.

15. Badr I.I., Farghaly A.G., Koura M.R., Mohamed H.F., Hassan E.M. and Kotkat A.M. Health status assessment of drug addicts in Alexandria. // J. Egypt. Public Health Assoc. 1998. - V.73 - p.275-296.

16. Banerjee A., Kurbanov F., Datta S., Chandra P.K., Tanaka Y., Mizokami M. and Chakravarty R. Phylogenetic relatedness and genetic diversity of hepatitis В virus isolates in Eastern India. // J. Med. Virol. 2006. - V.78 - p. 1164-1174.

17. Bartenschlager R. and Schaller H. The amino-terminal domain of the hepadnaviral P-gene encodes the terminal protein (genome-linked protein) believed to prime reverse transcription. // EMBO J. 1988. - V.7 - p.4185-4192.

18. Bartenschlager R. and Schaller H. Hepadnaviral assembly is initiated by polymerase binding to the encapsidation signal in the viral RNA genome. // EMBO J. 1992. - V.l 1 - p.3413-3420.

19. Batayneh N. and Bdour S. Risk of perinatal transmission of hepatitis В virus in Jordan. // Infect. Dis. Obstet. Gynecol. 2002. - V.10 - p. 127-132.

20. Batina A., Kabemba S. and Malengela R. Infectious markers among blood donors in Democratic Republic of Congo (DRC). // Rev. Med. Brux. 2007. -V.28 - p.145-149.

21. Beasley R.P. Hepatitis В virus. The major etiology of hepatocellular carcinoma. // Cancer. 1988. - V.61 - p.1942-1956.

22. Beasley R.P., Hwang L.Y., Lin C.C., Ко Y.C. and Twu S.J. Incidence of hepatitis among students at a university in Taiwan. // Am. J. Epidemiol. -1983a. V.l 17 -p.213-222.

23. Beasley R.P., Hwang L.Y., Lin C.C., Leu M.L., Stevens C.E.; Szmuness W. and Chen K.P. Incidence of hepatitis В virus infections in preschool children in Taiwan. // J. Infect. Dis. 1982. - V.l46 - p.l98-204.

24. Beasley R.P., Trepo C., Stevens C.E. and Szmuness W. The e antigen and vertical transmission of hepatitis B-surface antigen. // Am. J. Epidemiol. -1977. V.105 - p.94-98.

25. Blumberg B.S., Alter H.J. and Vishich S. A "New" antigen in leukemia sera. // JAMA. 1965. - V.191 - p.541-546.

26. Bolke E. and Flehmig B. New epidemiological patterns of hepatitis A and В infections in Germany. // Zentralbl. Hyg. Umweltmed. 1995. - V.196 - p.511-514.

27. Bonanni P., Pesavento G., Bechini A., Tiscione E., Mannelli F., Benucci C. and Nostro A.L. Impact of universal vaccination programmes on the epidemiology of hepatitis B: 10 years of experience in Italy. // Vaccine. 2003. - V.21 - p.685-691.

28. Bond W.W., Favero M.S., Petersen N.J. and Ebert J.W. Inactivation of hepatitis В virus by intermediate-to-high-level disinfectant chemicals. // J. Clin. Microbiol. 1983. - V.18 - p.535-538.

29. Bond W.W., Favero M.S., Petersen N.J., Gravelle C.R., Eberl J.W. and Maynard J.E. Survival of hepatitis В virus after drying and storage for one week.//Lancet. 1981. - V.l -p.550-551.

30. Braconier J.H. and Nordenfelt E. Serum hepatitis at a home for the aged. // Scand. J. Infect. Dis. 1972. - V.4 - p.79-82.

31. Bulk R.D., Hwang L.Y., Ho G.Y., Shafritz D.A. and Beasley R.P. Outcome of perinatal hepatitis В virus exposure is dependent on maternal virus load. // J. Infect. Dis. 1994. - V.l70 - p. 1418-1423.

32. Butsashvili M., Tsertsvadze Т., McNutt L.A., Kamkamidze G., Gvetadze R. and Badridze N. Prevalence of hepatitis B, hepatitis C, syphilis and HIV in Georgian blood donors. // Eur. J. Epidemiol. 2001. - V.17 - p.693-695.

33. Cacoub P., Ohayon V., Sekkat S., Dumont В., Sbai A., Lunel F., Benslimane A., Godeau P. and Archane M.I. Epidemiologic and virologic study of hepatitis С virus infections in Morocco . // Gastroenterol. Clin. Biol. 2000. -V.24 - p. 169-173.

34. Carey R.F., Lytle C.D. and Cyr W.H. Implications of laboratory tests of condom integrity. // Sex Transm. Dis. 1999. - V.26 - p.216-220.

35. Carman W., Thomas H. and Domingo E. Viral genetic variation: hepatitis В virus as a clinical example. // Lancet. 1993. - V.341 - p.349-353.

36. Carman W.F., Zanetti A.R., Karayiannis P., Waters J., Manzillo G., Tanzi E., Zuckerman A.J. and Thomas H.C. Vaccine-induced escape mutant of hepatitis В virus. // Lancet. 1990. - V.336 - p.325-329.

37. Chang M.H. Chronic hepatitis virus infection in children. // J. Gastroenterol. Hepatol. 1998. - V.13 - p.541-548.

38. Chang M.H. Hepatitis В virus infection. // Semin. Fetal Neonatal Med. 2007. - V.12-p.l60-167.

39. Chen C.C., Yen C.H., Wu W.Y., Hu S.W., Chen S.C., Bell W.R. and Lee M.C. Epidemiology of hepatitis В virus infection among young adults in Taiwan, China after public vaccination program. // Chin Med. J. (Engl. ). 2007. -V.120 - p.1155-1 158.

40. Chen H.L., Chang M.H., Ni Y.H., Hsu H.Y., Lee P.I., Lee C.Y. and Chen D.S. Seroepidemiology of hepatitis В virus infection in children: Ten years of mass vaccination in Taiwan. // JAMA. 1996. - V.276 - p.906-908.

41. Chien R.N., Yeh C.T., Tsai S.L., Chu C.M. and Liaw Y.F. Determinants for sustained HBeAg response to lamivudine therapy. // Hepatobgy. 2003. -V.38 - p.1267-1273.

42. Chu C.M., Hung S.J., Lin J., Tai D.I. and Liaw Y.F. Natural history of hepatitis В e antigen to antibody seroconversion in patients with normal serum aminotransferase levels. // Am. J. Med. 2004. - V.l 16 - p.829-834.

43. Courouce-Pauty A.M., Lemaire J.M. and Roux J.F. New hepatitis В surface antigen subtypes inside the ad category. // Vox Sang. 1978. - V.35 - p.304-308.

44. Dane D.S., Cameron C.H. and Briggs M. Virus-like particles in serum of patients with Australia-antigen-associated hepatitis. // Lancet. 1970. - V. 1 -p.695-698.

45. Devesa M., Rodriguez С., Leon G., Liprandi F. and Pujol F.H. Clade analysis and surface antigen polymorphism of hepatitis В virus American genotypes. // J. Med. Virol. 2004. - V.72 - p.377-384.

46. Doitsh G. and Shaul Y. A long HBV transcript encoding pX is inefficiently exported from the nucleus. // Virology. 2003. - V.309 - p.339-349.

47. Doitsh G. and Shaul Y. Enhancer 1 predominance in hepatitis В virus gene expression. //Mol. Cell Biol. 2004. - V.24 - p. 1799-1808.

48. Dominguez A., Bruguera M., Vidal J., Plans P. and Salleras L. Changes in the seroepidemiology of hepatitis В infection in Catalonia 1989-1996. // Vaccine. -2000. V.18 - p.2345-2350.

49. Ertekin V., Selimoglu M.A. and Altinkaynak S. Sero-epidemiology of hepatitis В infection in an urban paediatric population in Turkey. // Public Health. -2003. -V. 117 -p.49-53.

50. Fattovich G. Natural history and prognosis of hepatitis B. // Semin. Liver Dis. -2003.-V.23 -p.47-58.

51. Feitelson M.A. Products of the "X" gene in hepatitis В and related viruses. // Hepatology. 1986. - V.6 - p. 191 -198.

52. Feitelson M.A., Zhu M., Duan L.X. and London W.T. Hepatitis В x antigen and p53 are associated in vitro and in liver tissues from patients with primary hepatocellular carcinoma. // Oncogene. 1993. - V.8 - p.l 109-1 117.

53. Felsenstein J. Confidence limits on phylogenies: an approach using the bootstrap. //Evolution. 1985. - V.30 - p.787-791.

54. Felsenstein J. PHYLIP phylogeny interference package. // Cladistics. - 1989. - V.5 - p. 164-166.

55. Francis D.P. Hepatitis В virus vaccine. An opportunity for control. // JAMA. -1983.- V.250 -p.l891-1892.

56. Funk M.L., Rosenberg D.M. and Lok A.S. World-wide epidemiology of HBeAg-negative chronic hepatitis В and associated precore and core promoter variants. // J. Viral Hepat. 2002. - V.9 - p.52-61.

57. Galibert F., Mandart E., Fitoussi F., Tiollais P. and Charnay P. Nucleotide sequence of the hepatitis В virus genome (subtype ayw) cloned in E. coli. // Nature. 1979. - V.281 - p.646-650.

58. Ganem D. and Prince A.M. Hepatitis В virus infection—natural history and clinical consequences. //N. Engl. J. Med. 2004. - V.350 - p.l 118-1129.

59. Goudeau A. and Dubois F. Incidence and prevalence of hepatitis В in France. // Vaccine. 1995. - V.13 Suppl 1 - S22-S25.

60. Guidotti L.G., lshikawa Т., Hobbs M.V., Matzke В., Schreiber R. and Chisari

61. F.V. Intracellular inactivation of the hepatitis В virus by cytotoxic T lymphocytes. // Immunity. 1996. - V.4 - p.25-36.

62. Hadler S.C., de Monzon M.A., Lugo D.R. and Perez M. Effect of timing of hepatitis В vaccine doses on response to vaccine in Yucpa Indians. // Vaccine.- 1989. V.7-p.l06-110.

63. Harpaz R., McMahon B.3., Margolis H.S., Shapiro C.N., Havron D., Carpenter

64. G., Bulkow L.R. and Wainwright R.B. Elimination of new chronic hepatitis В virus infections: results of the Alaska immunization program. // J. Infect. Dis. -2000.-V.181 p.413-418.

65. Higgins D.G., Bleasby A.J. and Fuchs R. CLUSTAL V: improved software for multiple sequence alignment. // Comput. Appl. Biosci. 1992. - V.8 - p. 189191.

66. Hoefs J.C., Renner I.G., Askhcavai M. and Redeker A.G. Hepatitis В surface antigen in pancreatic and biliary secretions. // Gastroenterology. 1980. - V.79- p.191-194.

67. Floofnagle J.H. and Lau D. New therapies for chronic hepatitis B. // J. Viral Hepat. 1997. - V.4 Suppl 1 - p.41-50.

68. Hsu Y.S., Chien R.N., Yeh C.T., Sheen I.S., Chiou H.Y., Chu C.M. and Liaw Y.F. Long-term outcome after spontaneous HBeAg seroconversion in patients with chronic hepatitis B. // Hepatology. 2002. - V.35 - p. 1522-! 527.

69. Huang J.M., Huang Т.Н., Qiu H.Y., Fang X.W., Zhuang T.G., Liu H.X., Wang Y.H., Deng L.Z. and Qiu J.W. Effects of hepatitis В virus infection on human sperm chromosomes. // World J. Gastroenterol. 2003. - V.9 - p.736-740.

70. Huo T.I., Wu J.C., Lee P.C., Chau G.Y., Lui W.Y., Tsay S.H., Ting L.T., Chang F.Y. and Lee S.D. Sero-clearance of hepatitis В surface antigen in chronic carriers does not necessarily imply a good prognosis. // Hepatology. -1998.- V.28 p.231-236.

71. Huy T.T., Ushijima H., Sata T. and Abe K. Genomic characterization of HBV genotype F in Bolivia: genotype F subgenotypes correlate with geographic distribution and T(1858) variant. //Arch. Virol. 2006. - V.l 51 - p.589-597.

72. Hyams K.C. Risks of chronicity following acute hepatitis В virus infection: a review. // Clin. Infect. Dis. 1995. - V.20 - p.992-1000.

73. Ip H.M., Lelie P.N., Wong V.C., Kuhns M.C. and Reesink H.W. Prevention of hepatitis В virus carrier state in infants according to maternal serum levels of HBV DNA. // Lancet. 1989. - V. 1 - p.406-410.

74. Jenison S.A., Lemon S.M., Baker L.N. and Newbold J.E. Quantitative analysis of hepatitis В virus DNA in saliva and semen of chronically infected homosexual men. //J. Infect. Dis. 1987. - V.l 56 - p.299-307.

75. Jilg W., Hottentrager В., Weinberger K., Schlottmann K., Frick E., Holstege A., Scholmerich J. and Palitzsch K.D. Prevalence of markers of hepatitis В in the adult German population. // J. Med. Virol. 2001. - V.63 - p.96-102.

76. Jilg W., Schmidt M. and Deinhardt F. Vaccination against hepatitis B: comparison of three different vaccination schedules. // J. Infect. Dis. 1989. -V.l60 - p.766-769.

77. Kann M. Nucleoprotein transport of HBV capsid particles. // Methods Mol. Med. 2004. - V.95 - p.213-226.

78. Kann M., Lu X. and Gerlich W.H. Recent studies on replication of hepatitis В virus. // J. Hepatol. 1995. - V.22 - p.9-13.

79. Kann M., Schmitz A. and Rabe B. Intracellular transport of hepatitis В virus. // World J. Gastroenterol. 2007. - V.l 3 - p.39-47.

80. Kao J.IT, Chen P.J., Lai M.Y. and Chen D.S. Hepatitis В genotypes correlate with clinical outcomes in patients with chronic hepatitis B. // Gastroenterology. -2000a. V.l 18 -p.554-559.

81. Kao J.H., Liu C.J. and Chen D.S. Hepatitis В viral genotypes and lamivudine resistance. // J. Hepatol. 2002. - V.36 - p.303-304.

82. Kao J.H., Wu N.H., Chen P.J., Lai M.Y. and Chen D.S. Hepatitis В genotypes and the response to interferon therapy. // J. Hepatol. 2000b. - V.33 - p.998-1002.

83. Karayiannis P., Novick D.M., Lok A.S., Fowler M.J., Monjardino J. and Thomas H.C. Hepatitis В virus DNA in saliva, urine, and seminal fluid of carriers of hepatitis В e antigen. // Br. Med. J. (Clin. Res. Ed). 1985. - V.290 -p.l853-1855.

84. Kekule A.S., Lauer U., Weiss L., Luber B. and Hofschneider P H. Hepatitis В virus transactivator HBx uses a tumour promoter signalling pathway. // Nature. 1993. - V.361 - p.742-745.

85. Kenney J.M., von Bonsdorff C.H., Nassal M. and Fuller S.D. Evolutionary conservation in the hepatitis В virus core structure: comparison of human and duck cores.// Structure. 1995. - V.3 - p.l009-1019.

86. Kew M.C. Progress towards the comprehensive control of hepatitis В in Africa: a view from South Africa. // Gut. 1996. - V.38 Suppl 2 - S31-S36.

87. Khan A., Kurbanov F., Tanaka Y., Elkady A., Sugiyama M., Dustov A. and Mizokami M. Epidemiological and clinical evaluation of hepatitis B, hepatitis C, and delta hepatitis viruses in Tajikistan. // J. Med. Virol. 2008. - V.80 -p.268-276.

88. Khattak M.F., Salamat N., Bhatti F.A. and Qureshi T.Z. Seroprevalence of hepatitis В, С and HIV in blood donors in northern Pakistan. // J. Рак. Med. Assoc. 2002. - V.52 - p.398-402.

89. Kidd-Ljunggren K., Miyakawa Y. and Kidd A.H. Genetic variability in hepatitis B^viruses. // J. Gen. Virol. 2002. - V.83 - p.1267-1280.

90. Kidd-Ljunggren K., Myhre E. and Blackberg J. Clinical and serological variation between patients infected with different Hepatitis В virus genotypes. //J. Clin. Microbiol. 2004. - V.42 - p.5837-5841.

91. Kim Y.S., Ahn Y.O. and Kim D.W. Familial clustering of hepatitis В and С viruses in Korea. // J. Korean Med. Sci. 1994. - V.9 - p.444-449.

92. Kimura M. A simple method for estimating evolutionary rates of base substitutions through comparative studies of nucleotide sequences. // J. Mol. Evol. 1980. - V.16-p.l 11-120.

93. Knipe D.M. и др. Fields Virology. Издательство "Lippincott-Raven Publishers", Philadelphia, 2001 г.,

94. Kobayashi H., Tsuzuki M., Koshimizu K., Toyama PI., Yoshihara N., Shikata Т., Abe K., Mizuno K., Otomo N. and Oda T. Susceptibility of hepatitis В virus to disinfectants or heat // J. Clin. Microbiol. 1984. - V.20 - p.214-216.

95. Kock J., Baumert T.F., Delaney W.E., Blum H.E. and von Weizsacker F. Inhibitory effect of adefovir and lamivudine on the initiation of hepatitis В virus infection in primary tupaia hepatocytes. // Hepatology. 2003. - V.38 -p.1410-1418.

96. Kock J. and Schlicht H.J. Analysis of the earliest steps of hepadnavirus replication: genome repair after infectious entry into hepatocytes does not depend on viral polymerase activity. // J. Virol. 1993. - V.67 - p.4867-4874.

97. Koff R.S., Slavin M.M., Connelly J.D. and Rosen D.R. Contagiousness of acute hepatitis B. Secondary attack rates in household contacts. // Gastroenterology. 1977. - V.72 - p.297-300.

98. Kramvis A. and Kew M.C. Relationship of genotypes of hepatitis В virus to mutations, disease progression and response to antiviral therapy. // J. Viral Hepat. 2005. - V.12 - p.456-464.

99. Kramvis A. and Kew M.C. Epidemiology of hepatitis В virus in Africa, its genotypes and clinical associations of genotypes. // Hepatol. Res. 2007. -V.37 - S9-S19.

100. Kramvis A., Weitzmann L., Owiredu W.K. and Kew M.C. Analysis of the complete genome of subgroup A' hepatitis В virus isolates from South Africa. // J. Gen. Virol. 2002. - V.83 - p.835-839.

101. Kumar S., Tamura K., Jakobsen I.B. and Nei M. MEGA2: molecular evolutionary genetics analysis software. // Bioinformatics. 2001. - V.17 -p. 1244-1245.

102. Kupcinskas L., Petrauskas D., Petrenkiene V. and Saulius K. Prevalence of hepatitis В virus chronic carriers and risk factors for hepatitis В virus infection among lithuanian army soldiers. // Mil. Med. 2007. - V.l 72 - p.625-627.

103. Lanford R.E., Notvall L., Lee H. and Beames B. Transcompiementation of nucleotide priming and reverse transcription between independently expressed TP and RT domains of the hepatitis В virus reverse transcriptase. // J. Virol. -1997.-V.71 p.2996-3004.

104. Lee C.L., Hsieh K.S. and Ко Y.C. Trends in the incidence of hepatocellular carcinoma in boys and girls in Taiwan after large-scale hepatitis В vaccination. // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2003. - V.12 - p.57-59.

105. Lee D.H., Kim J.H., Nam J.J., Kim H.R. and Shin H.R. Epidemiological findings of hepatitis В infection based on 1998 National Health and Nutrition Survey in Korea. // J. Korean Med. Sci. 2002. - V. 17 - p.457-462.

106. Lee W.M. Hepatitis В virus infection. // N. Engl. J. Med. 1997. - V.337 -p. 1733-1745.

107. Lemon S.M., Layden T.J., Seeff L., Suzuki H., Nishioka K., Mishiro S. and Johnson L. The 20th United States-Japan Joint Hepatitis Panel Meeting. // Hepatology. 2000. - V.31 - p.800-806.

108. Levine O.S., Vlahov D., Koehler J., Cohn S., Spronk A.M. and Nelson K.E. Seroepidemiology of hepatitis В virus in a population of injecting drug users.

109. Association with drug injection patterns. // Am. J. Epidemiol. 1995. - V.142 -p.331-341.

110. Levy M. and Koren G. Hepatitis В vaccine in pregnancy: maternal and fetal safety. // Am. J. Perinatol. 1991. - V.8 - p.227-232.

111. Li J.S., Tong S.P., Wen Y.M., Vitvitski L., Zhang Q. and Trepo C. Hepatitis В virus genotype A rarely circulates as an HBe-minus mutant: possible contribution of a single nucleotide in the precore region. // J. Virol. 1993. -V.67 - p.5402-5410.

112. Li L., He J. and Zhao L. Epidemiologic features of viral hepatitis in Fujian . // Zhonghua Liu Xing. Bing. Xue. Za Zhi. 1998. - V.19 - p.89-92.

113. Liang T.J., Blum H.E. and Wands J.R. Characterization and biological properties of a hepatitis В virus isolated from a patient without hepatitis В virus serologic markers. // Hepatology. 1990. - V.12 - p.204-212.

114. Liaw Y.F., Tai D.I., Chu C.M. and Chen T.J. The development of cirrhosis in patients with chronic type В hepatitis: a prospective study. // Hepatology. -1988.-V.8-p.493-496.

115. Lieberman H.M., Tung W.W. and Shafritz D.A. Splenic replication of hepatitis В virus in the chimpanzee chronic carrier. // J. Med. Virol. 1987. - V.21 -p.347-359.

116. Limentani A.E., Elliott L.M., Noah N.D. and Lamborn J.K. An outbreak of hepatitis В from tattooing. // Lancet. 1979. - V.2 - p.86-88.

117. Lin S.M., Sheen I.S., Chien R.N., Chu C.M. and Liaw Y.F. Long-term beneficial effect of interferon therapy in patients with chronic hepatitis В virus infection. // Hepatology. 1999. - V.29 - p.971-975.

118. Ling R., Mutimer D., Ahmed M., Boxall E.H., Elias E., Dusheiko G.M. and Harrison T.J. Selection of mutations in the hepatitis В virus polymerase during therapy of transplant recipients with lamivudine. // Hepatology. 1996. - V.24 -p.711-713.

119. Loeb D.D., Hirsch R.C. and Ganem D. Sequence-independent RNA cleavages generate the primers for plus strand DNA synthesis in hepalitis В viruses: implications for other reverse transcribing elements. // EMBO J. 1991. - V. 10 - p.3533-3540.1. Vv

120. Loeb K.R., Jerome K.R., Goddard J., Huang M., Cent A. and Corey L. High-throughput quantitative analysis of hepatitis В virus DNA in serum using the TaqMan fluorogenic detection system. // Hepatology. 2000. - V.32 - p.626-629.

121. Lok A.S. Hepatitis В infection: pathogenesis and management. // J. Hepatol. -2000. V.32 - p.89-97.

122. Lytle C.D., Routson L.B., Seaborn G.B., Dixon L.G., Bushar H.F. and Cyr W.H. An in vitro evaluation of condoms as barriers to a small virus. // Sex Transm. Dis. 1997. - V.24 - p.161-164.

123. Magdzik W.W. Hepatitis В epidemiology in Poland, Central and Eastern Europe and the newly independent states. // Vaccine. 2000. - V.l8 Suppl 1 -S13-S16.

124. Magnius L.O. and Espmark A. A new antigen complex co-occurring with Australia antigen. // Acta Pathol. Microbiol. Scand. В Microbiol. Immunol. -1972. V.80-p.335-337.

125. Magnius L.O. and Norder H. Subtypes, genotypes and molecular epidemiology of the hepatitis В virus as reflected by sequence variability of the S-gene. // Intervirology. 1995. - V.38 - p.24-34.

126. Mahoney F.J. Update on diagnosis, management, and prevention of hepatitis В virus infection. // Clin. Microbiol. Rev. 1999. - V.12 - p.351-366.

127. Marsano L.S., West D.J., Chan I., Hesley T.M., Cox J., Hackworlh V. and Greenberg R.N. A two-dose hepatitis В vaccine regimen: proof of priming and memory responses in young adults. // Vaccine. 1998. - V.l6 - p.624-629.

128. Mayerat C., Mantegani A. and Frei P.C. Does hepatitis В virus (HBV) genotype influence the clinical outcome of HBV infection? // J. Viral Hepat. -1999. V.6 - p.299-304.

129. McMahon B.J. Epidemiology and natural history of hepatitis B. // Semin. Liver Dis. 2005. - V.25 Suppl 1 - p.3-8.

130. McMahon B.J., Alberts S.R., Wainwright R.B., Bulkow L. and Lanier A.P, Hepatitis B-related sequelae. Prospective study in 1400 hepatitis В surface antigen-positive Alaska native carriers. // Arch. Intern. Med. 1990. - V.l50 -p. 1051-1054.

131. McMahon B.J., Schoenberg S., Bulkow L., Wainwright R.B., Fitzgerald M.A., Parkinson A.J., Coker E. and Ritter D. Seroprevalence of hepatitis В viral markers in 52,000 Alaska Natives. // Am. J. Epidemiol. 1993. - V.l38 -p.544-549.

132. Mikhailov M.I., Gomberg M.A., Dolzhanskaya N.A. and Koubanova A.A. Significance of sexual route of transmission of hepatitis В and С in Russia. // Int. J. STD AIDS. 2002. - V.13 Suppl 2 - p.9-11.

133. Milich D.R., Chen M.K., Hughes J.L. and Jones J.E. The secreted hepatitis В precore antigen can modulate the immune response to the nucleocapsid: a mechanism for persistence. // J. Immunol. 1998. - V.160 - p.2013-2021.

134. Moolla N., Kew M. and Arbuthnot P. Regulatory elements of hepatitis В virus transcription. // J. Viral Hepat. 2002. - V.9 - p.323-331.

135. Morozov V., Pisareva M. and Groudinin M. Homologous recombination between different genotypes of hepatitis В virus. // Gene. 2000. - V.260 -p.55-65.

136. Mosley J.W. The epidemiology of viral hepatitis: an overview. // Am. J. Med. Sci. 1975. - V.270 - p.253-270.

137. Mushahwar I.K., McGrath L.C., Drnec J. and Overby L.R. Radioimmunoassay for detection of hepatitis В e antigen and its antibody. Results of clinical evaluation. // Am. J. Clin. Pathol. 1981. - V.76 - p.692-697.

138. Nassal M. Hepatitis В virus replication: novel roles for virus-host interactions. // Intervirology. 1999. - V.42 - p. 100-116.

139. Nassal M., Junker-Niepmann M. and Schaller H. Translational inactivation of RNA function: discrimination against a subset of genomic transcripts during HBV nucleocapsid assembly. // Cell. 1990. - V.63 - p.l357-1363.

140. Nassal M. and Schaller H. Hepatitis В virus replication—an update. // J. Viral Hepat. 1996. - V.3 - p.217-226.

141. Netesova I.G., Swenson P.D., Osipova L.P., Gubina M.A., Posukh O.L. and Netesov S.V. Determination of HBsAg subtypes in Western Siberian part of Russia. // J. Med. Virol. 2003. - V.71 - p.l83-187.N

142. Neurath A.R., Kent S.B., Parker K., Prince A.M., Strick N., Brotman B. and Sproul P. Antibodies to a synthetic peptide from the preS 120-145 region of the hepatitis В virus envelope are virus neutralizing. // Vaccine. 1986. - V.4 -p.35-37.

143. Newman M., Suk F.M., Cajimat ML, Chua P.K. and Shih C. Stability and morphology comparisons of self-assembled virus-like particles from wild-type and mutant human hepatitis В virus capsid proteins. // J. Virol. 2003. - V.77 -p. 12950-12960.

144. Niederau C., Heintges Т., Lange S., Goldmann G., Niederau C.M., Mohr L. and Haussinger D. Long-term follow-up of HBeAg-positive patients treated with interferon alfa for chronic hepatitis B. //N. Engl. J. Med. 1996. - V.334 -p. 1422-1427.

145. Norder H., Courouce A.M. and Magnius L.O. Complete genomes, phylogenetic relatedness, and structural proteins of six strains of the hepatitis В virus, four of which represent two new genotypes. // Virology. 1994. - V.l 98 - p.489-503.

146. Norder I I., Hammas B. and Magnius L.O. Typing of hepatitis В virus genomes by a simplified polymerase chain reaction. // J. Med. Virol. 1990. - V.31 -p.215-221.

147. Nurgalieva Z.Z., Hollinger F.B., Graham D.Y., Zhangabylova S. and Zhangabylov A. Epidemiology and transmission of hepatitis В and С viruses in Kazakhstan. // World J. Gastroenterol. 2007. - V.13 - p. 1204-1207.

148. Okamoto H., Tsuda F., Sakugawa H., Sastrosoewignjo R.I., Imai M., Miyakawa Y. and Mayumi M. Typing hepatitis В virus by homology in nucleotide sequence: comparison of surface antigen subtypes. // J. Gen. Virol. -1988. V.69 ( Pt 10) - p.2575-2583.

149. Ono-Nita S.K., Kato N., Shiratori Y., Lan K.H., Yoshida H., Carrilho F.J. and Omata M. Susceptibility of lamivudine-resistant hepatitis В virus to other reverse transcriptase inhibitors. // J. Clin. Invest. 1999. - V.103 - p. 16351640.

150. Oon C.J. and Chen W.N. Current aspects of hepatitis В surface antigen mutants in Singapore. // J. Viral Hepat. 1998. - V.5 Suppl 2 - p.l7-23.

151. Ornoy A. and Tenenbaum A. Pregnancy outcome following infections by coxsackie, echo, measles, mumps, hepatitis, polio and encephalitis viruses. // Reprod. Toxicol. 2006. - V.21 - p.446-457.

152. Pan C.Q. and Zhang J.X. Natural History and Clinical Consequences of Hepatitis В Virus Infection. // Int. J. Med. Sci. 2005. - V.2 - p.36-40.

153. Pang A., Yuen M.F., Yuan H.J., Lai C.L. and Kwong Y.L. Real-time quantification of hepatitis В vims core-promoter and pre-core mutants during hepatitis E antigen seroconversion. // J. Hepatol. 2004. - V.40 - p. 1008-1017.

154. Papatheodoridis G.V., Manesis E. and Hadziyannis SJ. The long-term outcome of interferon-alpha treated and untreated patients with HBeAg-negative chronic hepatitis B. // J. Hepatol. 2001. - V.34 - p.306-313.

155. Parana R. and Almeida D. HBV epidemiology in Latin America. // J. Clin. Virol. 2005.-Y.34 Suppl 1 -S130-S133.

156. Parkin D.M., Bray F., Ferlay J. and Pisani P. Estimating the world cancer burden: Globocan 2000. //Int. J. Cancer. 2001. - V.94 - p. 153-156.

157. Perrillo R.P., Gelb L., Campbell C., Wellinghoff W., Ellis F.R., Overby L. and Aach R.D. Hepatitis В e antigen, DNA polymerase activity, and infection of household contacts with hepatitis В virus. // Gastroenterology. 1979. - V.76 -p.1319-1325.

158. Pokorski R.J. and Ohlmer U. Long-term morbidity and mortality in Chinese insurance applicants infected with the hepatitis В virus. // J. Insur. Med. 2001. - V.33 - p. 143-164.

159. Prince A.M. Relation of Australia and SH antigens. // Lancet. 1968. - V.2 -p.462-463.

160. Prince A.M., Lee D.H. and Brotman B. Infectivity of blood from PCR-positive, HBsAg-negative, anti-HBs-positive cases of resolved hepatitis В infection. // Transfusion. 2001. - V.41 - p.329-332.

161. Prince A.M., Stephan W. and Brotman B. beta-propiolactone/ultraviolet irradiation: a review of its effectiveness for inactivation of viruses in blood derivatives. // Rev. Infect. Dis. 1983. - V.5 - p.92-107.

162. Raney A.K., Johnson J.L., Palmer C.N. and McLachlan A. Members of the nuclear receptor superfamily regulate transcription from the hepatitis В virus nucleocapsid promoter. //J. Virol. 1997. - V.71 - p. 1058-1071.

163. Raney A.K., Zhang P. and McLachlan A. Regulation of transcription from the hepatitis В virus large surface antigen promoter by hepatocyte nuclear factor 3. // J. Virol. 1995. - V.69 - p.3265-3272.

164. Ribeiro R.M., Lo A. and Perelson A.S. Dynamics of hepatitis В virus infection. // Microbes. Infect. 2002. - V.4 - p.829-835.

165. Sanchez-Tapias J.M., Costa J., Mas A., Bruguera M. and Rodes J. Influence of hepatitis В virus genotype on the long-term outcome of chronic hepatitis В in western patients. // Gastroenterology. 2002. - V.123 - p.l 848-1356.

166. Scaglioni P.P., Melegari M. and Wands J.R. Posttranscriptional regulation of hepatitis В virus replication by the precore protein. // J. Virol. 1997. - V.7I -p.345-353.

167. Schaefer S. Hepatitis В virus taxonomy and hepatitis В virus genotypes. // World J. Gastroenterol. 2007. - V.13 - p. 14-21.

168. Schiff E.R., de Medina M.D., Kline S.N., Johnson G.R., Chan Y.K., Shorey J., Calhoun N. and Irish E.F. Veterans Administration cooperative study on hepatitis and dentistry. // J. Am. Dent. Assoc. 1986. - V.l 13 - p.390-396.

169. Schmitt S., Glebe D., Alving K., Tolle Т.К., binder M., Geyer H., binder D., Peter-Katalinic J., Gerlich W.H. and Geyer R. Analysis of the ore-. // J. Biol. Chem. 1999. - V.274 - p.11945-11957.

170. Scott R.M., Snitbhan R., Bancroft W.H., Alter H.J. and Tingpalapong M. Experimental transmission of hepatitis В virus by semen and saliva. // J. Infect. Dis. 1980.- V.142-p.67-71.

171. Seeger C. and Mason W.S. Hepatitis В virus biology. // Microbiol. Mol. Biol. Rev. -2000. V.64-p.51-68.

172. Sen N., Cao F. and Tavis J.E. Translation of duck hepatitis В virus reverse transcriptase by ribosomal shunting. // J. Virol. 2004. - V.78 - p.l 175111757.

173. Serpeau D., Mannoni P., Dhumeaux D. and Berthelot P. Hepatitis-associated antigen in human bile. // Lancet. 1971. - V.2 - 1266.

174. Seto E., Mitchell P.J. and Yen T.S. Transactivation by the hepatitis В virus X protein depends on AP-2 and other transcription factors. // Nature. 1990. -V.344 - p.72-74.

175. Shepard C.W., Simard E.P., Finelli L., Fiore A.E. and Bell B.P. Hepatitis В virus infection: epidemiology and vaccination. // Epidemiol. Rev. 2006. -V.28 - p.l 12-125.

176. Soldan K., Gay N.J., Allain J.P., Llewelyn C., Jones C., Reeves I. and Ramsay M. The prevalence of hepatitis В infection in adults with no recognized increased risk of infection. // J. Infect. 2000. - V.41 - p. 198-199.

177. Sommer G., van Bommel F. and Will H. Genotype-specific synthesis and secretion of spliced hepatitis В virus genomes in hepatoma cells. // Virology. -2000.-V.271 p.371-381.

178. Stevens C.E., Beasley R.P., Tsui J. and Lee W.C. Vertical transmission of hepatitis В antigen in Taiwan. // N. Engl. J. Med. 1975. - V.292 - p.771-774.

179. Stuyver L., De Gendt S., Van Geyt C., Zoulim F., Fried M., Schinazi R.F. and Rossau R. A new genotype of hepatitis В virus: complete genome and phylogenetic relatedness. // J. Gen. Virol. 2000. - V.81 - p.67-74.

180. Summers J., O'Connell A. and Millman I. Genome of hepatitis В virus: restriction enzyme cleavage and structure of DNA extracted from Dane particles. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1975. - V.72 - p.4597-4601.

181. Summers J., Smith P.M. and Horwich A.L. Hepadnavirus envelope proteins regulate covalently closed circular DNA amplification. // J. Virol. 1990. -V.64-p.2819-2824.

182. Sun D. and Nassal M. Stable HepG2- and Huh7-based human hepatoma cell lines for efficient regulated expression of infectious hepatitis В virus. // J. Hepatol. 2006. - V.45 - p.636-645.

183. Suzuki S., Sugauchi F., Orito E., Kato H., Usuda S., Siransy L., Arita I., Sakamoto Y., Yoshihara N., El Gohary A., Ueda R. and Mizokami M. Distribution of hepatitis В virus (HBV) genotypes among HBV carriers in the

184. Cote d'lvoire: complete genome sequence and phylogenetic relatedness of HBV genotype E. // J. Med. Virol. 2003. - V.69 - p.459-465.

185. Tang J.R., Hsu H.Y., Lin H.H., Ni Y.H. and Chang M.H. Hepatitis В surface antigenemia at birth: a long-term follow-up study. // J. Pediatr. 1998. - V.l33 - p.374-377.

186. Tang S. Study on the mechanisms and influential factors of intrauterine infection of hepatitis В virus . // Zhonghua Liu Xing. Bing. Xue. Za Zhi. -1991.-V.12-p.325-326.

187. Tedder R.S., Ijaz S., Gilbert N., Barbara J.A., Corden S.A., Gilson R.J. and Boxall E.H. Evidence for a dynamic host-parasite relationship in e-negative hepatitis В carriers. // J. Med. Virol. 2002. - V.68 - p.505-512.

188. Terre S., Petit M.A. and Brechot C. Defective hepatitis В virus particles are generated by packaging and reverse transcription of spliced viral RNAs in vivo. //J. Virol. 1991. - V.65 - p.5539-5543.

189. Thakur V., Guptan R.C., Kazim S.N., Malhotra V. and Sarin S.K. Profile, spectrum and significance of HBV genotypes in chronic liver disease patients in the Indian subcontinent. // J. Gastroenterol. Hepatol. 2002. - V.l7 - p. 165170.

190. Thiers V., Nakajima E., Kremsdorf D., Mack D., Schellekens H., Driss F., Goudeau A., Wands J., Sninsky J., Tiollais P. and . Transmission of hepatitis В from hepatitis-B-seronegative subjects. //Lancet. 1988. - V.2 - p. 1273-1276.

191. Tipples G.A., Ma M.M., Fischer K.P., Bain V.G., Kneteman N.M. and Tyrrell D.L. Mutation in HBV RNA-dependent DNA polymerase confers resistance to lamivudine in vivo. // Hepatology. 1996. - V.24 - p.714-717.

192. Toukan A.U. Hepatitis В in the Middle East: aspects of epidemiology and liver disease after infection. // Gut. 1996. - V.38 Suppl 2 - S2-S4.

193. Tovo P.A., Lazier L. and Versace A. Hepatitis В virus and hepatitis С virus infections in children. // Curr. Opin. Infect. Dis. 2005. - V.l8 - p.261-266.

194. Vildosola G.H. Hepatitis В vaccination impact on acute disease, chronic carriers and hepatocarcinoma incidence. // Rev. Gastroenterol. Peru. 2000. -V.20-p.414-421.

195. Viviani S., Jack A., Hall A.J., Maine N., Mendy M„ Montesano R. and Whittle H.C. Hepatitis В vaccination in infancy in The Gambia: protection against carriage at 9 years of age. // Vaccine. 1999. - V.17 - p.2946-2950.

196. Voeller В., Nelson J. and Day C. Viral leakage risk differences in latex condoms. //AIDS Res. Hum. Retroviruses. 1994. - V.10 - p.701-710.

197. Wai C.T., Chu C.J., Hussain M. and Lok A.S. HBV genotype В is associated with better response to interferon therapy in HBeAg(+) chronic hepatitis than genotype C. // Hepatology. 2002. - V.36 - p. 1425-1430.

198. Walsh В., Maguire H. and Carrington D. Outbreak of hepatitis В in an acupuncture clinic. // Commun. Dis. Public Health. 1999. - V.2 - p. 137-140.

199. Wang G.H. and Seeger C. The reverse transcriptase of hepatitis В virus acts as a protein primer for viral DNA synthesis. // Cell. 1992. - V.71 - p.663-670.

200. Wang G.H. and Seeger C. Novel mechanism for reverse transcription in hepatitis В viruses. // J. Virol. 1993. - V.67 - p.6507-6512.

201. Wang J.S., Chen H. and Zhu Q.R. Transformation of hepatitis В serologic markers in babies born to hepatitis В surface antigen positive mothers. // World J. Gastroenterol. 2005. - V.l 1 - p.3582-3585.

202. Wang J.S., Zhu Q.R. and Wang X.H. Breastfeeding does not pose any additional risk of immunoprophylaxis failure on infants of HBV earner mothers. // Int. J. Clin. Pract. 2003a. - V.57 - p. 100-102.

203. Wang S., Peng G., Li M., Xiao H., Jiang P., Zeng N. and Wang Z. Identification of hepatitis В virus vertical transmission from father to fetus by direct sequencing. // Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health. 2003b. -V.34 - p.106-113.

204. Wang W.L., London W.T. and Feitelson M.A. Hepatitis В x antigen in hepatitis В virus carrier patients with liver cancer. // Cancer Res. 1991. - V.51 - p.4971-4977.

205. Wang X., Ding D. and Sun B. Epidemiological feature of hepatitis В in Zaozhuang City, Shandong Province . // Zhonghua Shi Yan. He. Lin. Chuang. Bing. Du Xue. Za Zhi. 2002. - V. 16 - p.267-269.

206. Weber M., Bronsema V., Bartos H., Bosserhoff A., Bartenschlager R. and Schaller H. Hepadnavirus P protein utilizes a tyrosine residue in the TP domain to prime reverse transcription. // J. Virol. 1994. - V.68 - p.2994 -2999.

207. Weinberger K.M., Wiedenmann E., Bohm S. and Jilg W. Sensitive and accurate quantitation of hepatitis В virus DNA using a kinetic fluorescence detection system (TaqMan PCR). // J. Virol. Methods. 2000. - V.85 - p.75-82.

208. Wounderlich G. and Bruss V. Characterization of early hepatitis В virus surface protein oligomers. //Arch. Virol. 1996. - V.141 - p.l 191-1205.

209. Yanase Y., Ohida Т., Kaneita Y., Agdamag D.M., Leano P.S. and Gill C.J. The prevalence of HIV, HBV and HCV among Filipino blood donors and overseas work visa applicants. // Bull. World Health Organ. 2007. - V.85 - p. 131-137.

210. Yu M.W., Hsu F.C., Sheen I.S., Chu C.M., Lin D.Y., Chen C.J. and Liaw Y.F. Prospective study of hepatocellular carcinoma and liver cirrhosis in asymptomatic chronic hepatitis В virus carriers. // Am. J. Epidemiol. 1997. -V.145 - p.1039-1047.

211. Yu X. and Mertz J.E. Critical roles of nuclear receptor response elements in replication ofhepatitis В virus. //J. Virol. 2001. - V.75 - p.l 1354-11364.

212. Zhang J., Zou S. and Giulivi A. Epidemiology ofhepatitis В in Canada. // Can. J. Infect. Dis. 2001. - V.12 - p.345-350.

213. Zhang X., Zoulim F., Habersetzer F., Xiong S. and Trepo C. Analysis of hepatitis В virus genotypes and pre-core region variability during interferontreatment of HBe antigen negative chronic hepatitis B. // J. Med. Virol. 1996. -V.48-p.8-16.

214. Zhu Y., Yamamoto Т., Cullen J., Saputelli J., Aldrich C.E., Miller D.S., Litwin S., Furman P.A., Jilbert A.R. and Mason W.S. Kinetics of hepadnavirus loss from the liver during inhibition of viral DNA synthesis. // J. Virol. 2001. -V.75 -p.311-322.

215. Zuckerman J.N. and Zuckerman A.J. Current topics in hepatitis B. // J. Infect. -2000. V.41 -p.130-136.

Информация о работе

Баяндин, Роман Борисович
кандидата биологических наук
Кольцово, 2009
ВАК 03.00.03

Диссертация

Частота встречаемости маркеров, генетическое разнообразие и факторы риска инфицирования вирусом гепатита B в различных группах населения Новосибирской области и Алтайского края - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы