Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Генетическое разнообразие вируса гепатита B в группах коренного населения Сибири

ВАК РФ 03.01.00, Физико-химическая биология

Автореферат диссертации по теме "Генетическое разнообразие вируса гепатита B в группах коренного населения Сибири"

На правах рукописи

Мануйлов Виктор Александрович

Генетическое разнообразие вируса гепатита В в группах коренного населения Сибири

03.01.00 - молекулярная биология

Автореферат

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

2 ¡ ОКТ 2015

Кольцове 2015

005563588

Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор"» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, пос. Кольцово Новосибирской области.

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

Нетесов Сергей Викторович, доктор биологических наук, член-корреспондент РАН, профессор, ФГАОУ ВО Новосибирский национальный исследовательский государственный университет

Жарков Дмитрий Олегович, доктор биологических наук, доцент, ФГБУН Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения РАН

Таранин Александр Владимирович, доктор биологических наук, ФГБУН Институт молекулярной и клеточной биологии Сибирского отделения РАН

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов имени М.П. Чумакова»

Защита диссертации состоится «13» НОЯБРЯ 2015 г. в 11-00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.020.01 при ФБУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» по адресу: р.п. Кольцово, Новосибирского района, Новосибирской области, 630559, тел. 8(383) 336-74-28

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» и на интернет-сайте http://www.vector.nsc.ru.

Автореферат разослан «_»_2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор биологических наук, профессор

В.А. Белявская

Общая характеристика работы Введение и актуальность исследования

Вирус гепатита В (ВГВ) относится к одним из наиболее опасных отдаленными последствиями инфекций вирусов человека. В мире насчитывается 250-300 млн. хронических носителей ВГВ, причем этот показатель продолжает увеличиваться с ростом населения планеты. Среди 15-25% хронических носителей ВГВ со временем разовьется цирроз печени или гепатоцеллюлярная карцинома. От этих заболеваний в мире в год умирает около 1 млн. человек (Ом е1 а1., 2012)

ВГВ человека входит в семейство Нерас1паутс1ае. Кольцевой геном ВГВ представлен ДНК размером около 3200 н. Различия в структуре поверхностного антигена вируса - HBsAg, позволяют выделить 9 серологических субтипов этого белка (ау\у1, ау\у2 и т. д.), при этом описаны аминокислотные замены, определяющие принадлежность к каждому субтипу (Ыогскг е! а1., 1992Ь). Филогенетическая классификация ВГВ, основанная на различиях в последовательностях геномных ДНК вирусных изолятов, позволяет в настоящее время разделить их на 8 генотипов (обозначаемых А-Н) и не менее 24 субгенотипов ВГВ (Могс1ег й а1., 2004).

Встречаемость различных генотипов, субгенотипов ВГВ и субтипов HBsAg в разных географических регионах варьирует (Ыогс1ег е! а1., 2004; также цит. по обзору КигЬапоу е1 а1., 2010 и другим). Генотип А (субтипы HBsAg аул- 1 и наиболее

распространен в странах Северо-Западной Европы, Северной Америки (субгенотип А1) и Африки (субгенотип А2). Генотипы В (субтипы ау\у1 и ас!\у2) и С (главным образом, ас1г, а<1щ+/-, ауг и ас1\у2) превалируют в Юго-Восточной Азии и Океании. При этом субгенотип В1 наиболее часто встречается в Японии, В2 и В4 - в Китае и Вьетнаме, ВЗ - в Индонезии и Полинезии, С1 и С2 - в Восточной Азии, СЗ и С4 - в Океании, Австралии и Новой Зеландии. Генотип О (ау\у2, аулуЗ и ас1\у2) наиболее широко распространен в мире и доминирует в странах Средиземноморского бассейна, на Ближнем Востоке, Индии, а также в России и странах бывшего СССР. Субгенотип

02 является доминирующим в России и соседних странах, однако субгенотипы 01 и

03 также циркулируют на данной территории (цит. по работе Чуланов, 2013, Та11о й а1., 2008, и другим) Генотип Е (ау\у4) преобладает в странах Западной Африки, Р (ау\у4 и ас!\¥4) - Центральной и Южной Америки. Несколько изолятов генотипа в (ас!\у2) обнаружены в Северной Америке и Западной Европе, спорадическая встречаемость генотипа Н (ас!\у4) описана для Центральной Америки и Калифорнии.

Серологическая и филогенетическая классификации ВГВ являются взаимодополняющими инструментами в руках исследователя и применяются в зависимости от того, изучаются ли антигенные характеристики этого патогена, или же генетические. В последние годы получены данные о влиянии генетических и серологических особенностей ВГВ на клиническую картину заболевания, чувствительность и специфичность существующих методов диагностики и эффективность вакцинопрофилактики данного патогенна (цит. по обзору Као, 2011, и другим). Кроме того, высокая вариабельность ВГВ представляет возможности для проведения исследований, связанных с эволюцией вируса, историей и динамикой его распространения среди населения Земного шара ^¡ттопск, 2001; Рагазкеу^Б й а1., 2013). Такие исследования выполняются в различных регионах мира.

В то же время, существующие данные, касающиеся разнообразия ВГВ в сибирском регионе и в России в целом, до сих пор весьма ограничены, что не позволяет создать целостную молекулярно-эпидемиологическую картину в отношении данной инфекции. Исследования молекулярно-генетического разнообразия ВГВ, циркулирующего в относительно изолированных группах коренного населения Сибири, в которых возможно существование отдельных уникальных филогенетических ветвей данного патогена, позволяют выявить эволюционные различия в популяциях ВГВ в этом обширном регионе.

В настоящей работе приведены обобщенные результаты исследований параметров изолятов ВГВ в нескольких группах коренного населения, проживающих в удаленных районах севера, юга и востока Сибири.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы являлось изучение частоты встречаемости ВГВ, его генотипов, субгенотипов и субтипов (серотипов поверхностного белка вируса -НВзА§) в группах коренного населения ряда районов Сибири и анализ полученных данных.

Задачи исследования:

1. Определить частоту встречаемости HBsAg методом ИФА в группах коренного населения Сибири: алтайцев и казахов Республики Алтай; телеутов Кемеровской области; бурят и русских Иркутской области; хантов, коми, ненцев, селькупов Ямало-Ненецкого автономного округа (ЯНАО); долган, нганасан и кетов Красноярского края.

2. Определить встречаемость генотипов и субгенотипов ВГВ в перечисленных группах.

3. Определить встречаемость субтипов HBsAg в перечисленных группах.

4. Сравнить исследованные группы коренного населения Сибири между собой по изучаемым параметрам и сделать выводы о характеристиках ВГВ в этих группах и различиях между ними.

Научная новизна и практическая ценность

Впервые получены данные о встречаемости ВГВ и его вариантов (генотипов, субгенотипов), а также уточнены данные по встречаемости субтипов HBsAg для групп коренного населения Сибири: алтайцев и казахов Республики Алтай, телеутов Кемеровской области, бурят и русских Иркутской области, хантов, коми, ненцев и селькупов ЯНАО, кетов, долган и нганасан Красноярского края. Полученные данные являются оригинальными и должны учитываться при организации эпиднадзора за вирусными гепатитами среди коренных жителей Сибири, а также совершенствовании средств диагностики и вакцинопрофилактики гепатита В с учетом разнообразия вариантов ВГВ, циркулирующих на данной территории.

Апробация результатов диссертации и публикации

По теме диссертации опубликовано 3 научные статьи в журналах, рекомендованных ВАК при Минобрнауки РФ. Результаты исследований были представлены на Российской научно-практической конференции «Генодиагностика инфекционных болезней» (Новосибирск, 2005 г.), Международной научно-практической конференции «Геномные технологии в медицине и медицинское образование на рубеже веков» (Республика Казахстан, Алматы, 2006 г.), XIII Международном конгрессе по приполярной медицине (Новосибирск, 2006 г.), VII Российской научно-практической конференции с международным участием «Вирусные гепатиты - эпидемиология, диагностика, лечение и профилактика» (Москва, 2007 г.), VIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика - 2014» (Москва).

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 118 страницах текста, включает 6 таблиц и 12 рисунков и содержит введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты и обсуждение, выводы, а также список литературы, состоящий из 240 источников отечественных и зарубежных авторов.

Дизайн исследования и обследуемые группы

Исследовали 5657 образцов плазмы крови, полученных от коренных жителей Сибири в 1993-2006 гг. Доноров объединили в территориальные группы в соответствии с таблицей 1. Данные о половозрастном составе групп приведены в таблице 2. Национальности доноров определяли на основе опроса обследуемых лиц (таблица 1). Все обследованные лица дали письменное информированное согласие на участие в исследовании. Проведение исследования одобрено этическим комитетом ГНЦ ВБ "Вектор".

Образцы исследовали в ИФА для определения HBsAg. HBsAg-позитивных доноров учитывали как инфицированных ВГВ. Для них проводился ПЦР-анализ на присутствие ДНК ВГВ. Образцы, положительные в ПЦР, учитывали как изоляты ВГВ; для них проводили определение нуклеотидной последовательности (секвенирование) ДНК фрагмента генома ВГВ, соответствующего области Pre-Sl/Pre-S2/S-reHa. Размер секвенированных последовательностей составил 1647-1680 нуклеотидов в зависимости от генотипа.

Для полученных последовательностей, а также прототипных, полученных из базы данных GenBank, проводили филогенетический анализ для определения принадлежности к генотипу и субгенотипу (рисунок 1). Для этого использовали метод UPGMA и двухпараметрическую модель Кимуры. Причисление исследуемого изолята к определенному генотипу и субгенотипу выполняли в случае, если этот изолят занимал свое место на ветви филогенетического дерева, включающей прототипные изоляты только одного генотипа (субгенотипа) и не включавшей изоляты других генетических групп. Применимость именно метода UPGMA для определения субгенотипа ВГВ по последовательности фрагментов области Рге-Sl/Pre-S2/S-reHa была показана в основополагающей работе (Norder et al., 2004), посвященной исследованию субгенотипов ВГВ, а позднее подтверждена другими авторами (Tallo et al., 2008). Использование альтернативных методов

филогентическго анализа, в частности, метода максимального правдоподобия (ML), не улучшило качество полученных результатов.

Субтип HBsAg определяли путем анализа последовательности S-гена ВГВ.

Для каждой из исследуемых групп был определен набор из 10 параметров: 1) встречаемость HBsAg (отношение HBsAg-позитивных образцов к числу всех образцов в группе); 2) встречаемость генотипа А; 3) генотипа С; 4) субгенотипа D1; 5) D2; 6) D3; 7) генотипа D неидентифицировнных субгенотипов; 8) субтипа HBsAg ayw2; 9) ayw3; 10) других субтипов (в случае 2-10 встречаемость определялась как отношение числа изолятов данного типа в группе к числу всех изолятов группы) (таблица 1). Затем группы попарно сравнивали между собой по этим параметрам с использованием статистических критериев хи-квадрат и Фишера. Множественные сравнения проверяли с использованием поправки Бонферрони.

Таблица 1. Результаты в территориальных группах. Наиболее характерные для каждой группы результаты выделены серой заливкой.

№ Область/район Годы сбора Шифры обра тон Основная напион-сть Кол-во обратной ИНэЛц (+) Кол-во нюлятон Геног ииы/субгенотипы Субтнны ИНчАц

А С 1)1 Г)2 Г» Г)* ау»2 ау\уЗ Другие

1. Республика Алтай 425 41 9,6% 28 0 0 Ш 35,7% 1 3,6% 16 57.1% 1 3,6% 27 96,4% 1 3,6%, 0

1.1 Кош-Агачский район 1999-2000 А-гн Казахи 194 10 5.2% 7 0 0 6 85,7% 0 0 1 14,3% 7 100% 0 0

1.2 Усгь-Канскнй район 1993, 1995, 1997 А-Мв Алтайцы 231 31 13,4% 21 0 0 4 19,0% 1 4,8% 16 76,2% 0 20 95,2% 1 4,8% 0

2. Кемеровская область (Ьеловекий район) 2003 Кс-ВЕК Тслеуты 137 14 10.2% 5 0 0 3 60,0% 0 0 2 40,0% 4 80,0% 0 1 20,0%

3. Иркутская область 1,391 84 6,0% 43 1 2.3% 3 7,0% 12 27,9% 9 20,9% 14 32,6% 4 9.3% 25 58,1% 13 30,2% 5 1 1,6%

3.1 Аларский район 2005 1-АЬ Буря гы 487 40 8,2% 24 0 2 8,3% 2 8,3% 5 20.8% 12 50,0% 3 12,5% 14 58,3% 7 29.2% 3 12,5%

3.2 Нукутский район 2006 |-ыи Буряты 654 35 5,4% II 1 9,1% 1 9,1% 3 27,3% 4 36,4% 2 18,2% 0 3 27,3% 6 54,5% 2 18,2%

3.3 Иркутский район 2 003-2005 1-1К Русские 250 9 3,6% 8 0 0 7 87,5% 0 0 1 12,5% 8 100% 0 0

4. ЯНАО 3,183 51 1,6% 33 2 6,1% 1 3,0% 2 6,1% 20 60,6% 5 15,2% 3 9,1% 10 30,3% 18 54,5% 5 15,2%

4.1 Шурышкарскнй район 1999, 2000-2002 у-внии, У-Р1Т Ханты, коми 932 27 2,9% 20 0 0 1 5,0% 15 75,0% 2 10,0% 2 10,0% 5 25,0% 14 70,0% 1 5,0%

4.2 Приуральский район 2003-2005 У-РИ Ненцы 1,263 10 0,8% 5 0 0 1 20,0% 1 20,0% 2 40,0% 1 20,0% 3 60,0% 1 20,0% 1 20,0%

4.3 Красноселькупскнй район 2006 У-КЯ Селькупы 284 2 0,7% 1 0 1 100% 0 0 0 0 0 0 1 100%

4.4 Пуровекии район 1992-1993 У-ЗАМ Пенны 704 12 1,7% 7 2 28,6% 0 0 4 57,1% 1 14,3% 0 2 28,6% 3 42,9% 2 28,6%

5. Красноярский край 521 61 11,7% 34 0 6 17,6% 22 64,7% 2 5,9% 4 11,8% 0 25 73.5% 2 5,9% 7 20,6%

5.1 Дулилскнй район 2000 Кг-Ви Долганы, нганасаны 408 54 13,2% 32 0 6 18,8% 22 68,7% 0 4 12,5% 0 25 78,1% 0 7 21,9%

5.2 Туруханский район 20СЮ Кг-ТН Кеты 113 7 6,2% 2 0 0 0 2 100% 0 0 0 2 100% 0

6. ВСЕГО 5,657 251 4,4% 143 3 2,1% 10 7,0% 49 34,2% 32 22,4% 39 27,3% 10 7,0% 91 63,6% 34 23,8% 18 12,6%

Примечание: О* - пзоля ты, отнесенные к генотипу О, которые не могли быть отнесены ник одному из исследованных суб[ енотипов.

Таблица 2. Носители НВэАд в половозрастных группах. Результаты с достоверными различиями выделены серой заливкой.

№ Область/район Мужчины Женщины < 35 лет > 35 лет Комментарий

1. Республика Алтай 21/191 11,0% 20/234 8.5% 26/253 10,3% 15/172 8.7% Нет достоверных различий

1.1 Кош-Агачскнй район 6/106 5.7% 4/88 4,5% 7/139 5.0% 3/55 5.5% Нет достоверных различий

1.2 Усть-Канскнй район 15/85 17,6% 16/146 11,0% 19/114 16,7% 12/117 10,3% Нет достоверных различий

2. Кемеровская область (Беловский район) 4/56 7,1% 10/81 12,3% 1/45 2,2% 13/92 14,1% В группе старше 35 лег инфицированных больше, чем в группе моложе 35 лет (р>0,95)

3. Иркутская область 26/455 5,7% 58/936 6,2% 38/597 6,4% 46/794 5,8% Нет достоверных различий

3.1 Аларский район 13/157 8,3% 27/330 8.2% 17/187 9,1% 23/300 7,7% Нет достоверных различий

3.2 Нукутский район 11/202 5,4% 24/452 5,3% 15/272 5,5% 20/382 5,2% Нет достоверных различий

3.3 Иркутский район 2/96 2,1% 7/154 4.5% 6/138 4,3% 3/112 2,7% Нет достоверных различий

4. ЯНАО 21/1109 1,9% 30/2074 1,4% 30/1903 1,6% 21/1280 1,6% Нет достоверных различий

4.1 Шурышкарский район 7/245 2,9% 20/687 2,9% 14/425 3,3% 13/507 2,6% Нет достоверных различий

4.2 Приуральский район 4/482 0,8% 6/781 0,8% 6/845 0,7% 4/418 1,0% Нет достоверных различий

4.3 Красноселькупский район 2/113 1,8% 0/171 0% 1/206 0.5% 1/78 1,3% Нет достоверных различий

4.4 Пуровскнй район 8/269 3,0% 4/435 0.9% 9/427 2,1% 3/277 1,1% Нет достоверных различий

5. Красноярский край 28/224 12,5% 33/297 11,1% 37/388 9,5% 24/133 14,5% В группе старше 35 лет инфицированных больше, чем в группе моложе 35 лет (р>0,975)

5.1 Дудинский район 23/170 13,5% 31/238 13,0% 37/325 11,4% 17/83 20,5% В группе старше 35 лет инфицированных больше, чем в группе моложе 35 лет (р>0,95)

5.2 Туруханский район 5/54 9,3% 2/59 3,4% 0/63 0% 7/50 14,0% В группе старше 35 лет инфицированных больше, чем в группе моложе 35 лет (р>0,99)

6. ВСЕГО 100/2035 4,9% 151/3622 4.2% 132/3186 4,1% 119/2471 4,8% Нет достоверных различий

0.01

Рисунок 1.

Филогенетическое дерево исследованных и прототипных изолятов ВГВ (продолжение на следующей странице), ю

Рисунок 1 (продолжение).

Филогенетическое дерево исследованных и прототипных изолятов ВГВ. Шифры исследованных изолятов (совпадают с обозначениями в таблице 1), выделены жирным шрифтом. Курсивом указана национальность донора, включая метисов. Прямоугольником справа от шифра обозначен субтип HBsAg соответствующего изолята: черный - ау\у2, белый - аушЗ, для других субтипов приведено буквенное обозначение. Для прототипных последовательностей указан шифр базы данных ОепВапк и название территории, на которой данный изолят был получен. Ветви генотипов и субгенотипов отмечены соответствующими буквами. Приведены индексы поддержки узлов, превышающие 60, а также масштаб шкалы генетических расстояний.

Основные результаты и их обсуждение Результаты для всей исследованной группы

Данные, полученные при исследовании всех 5 657 собранных образцов, приведены в таблице 1. Частота встречаемости HBsAg во всей группе коренного населения (4,4%), по-видимому, близка к доле хронических носителей ВГВ среди городского населения Сибири (Баяндин и др., 2004).

Всего обнаружено 143 изолята ВГВ. Последовательности ДНК ВГВ, полученные в настоящей работе, депонированы в базе данных ОепВапк с уникальными шифрами 1X090605-1X090724, 1X125364-1X125386. Результаты филогенетического анализа последовательностей представлены на рисунке 1. Среди обнаруженных изолятов превалировал генотип Б ВГВ (91%), при этом субгенотипы 01, 02 и 03 были представлены в сходных пропорциях (34%, 22% и 27% соответственно). Также обнаружен генотипы С (7%) и А (2%). Среди субтипов HBsAg преобладал ау\у2 (64%), вклад ау\уЗ (24%) также был выраженным (таблица 1). Субтипы НВзА§ для каждого из образцов указаны на рисунке 1.

Такая картина разнообразия ВГВ не противоречит опубликованным ранее работам, выполненным на территории Сибири (Нетесова и др., 2004; Чуланов, 2013). При этом соотношение субгенотипов ВГВ и субтипов НВзАд существенным образом различалось в отдельных территориальных группах, вошедших в исследование.

Республика Алтай (юго-запад Сибири; казахи, алтайцы)

Встречаемость НВзАд в образцах данной группы составила 9,6%, что свидетельствует о ее принадлежности к высокоэндемичным по распространенности инфекции ВГВ (Ма^оНв « а1., 1991). Доля носителей НВбА§ в группе Республики Алтай достоверно1 превышала этот показатель в группах Иркутской области и ЯНАО. Наиболее часто встречающимися субгенотипами ВГВ в группе были ОЗ (57,1%) и 01 (35,7%). Частота встречаемости субгенотипа БЗ была более высокой по сравнению с таковой среди изолятов Кемеровской области, ЯНАО и Красноярского края. Субгенотип встречался чаще, чем в изолятах ЯНАО, но реже, чем в изолятах Красноярского края. Субгенотип В2 был минорным (3,6%), его встречаемость среди

1 Здесь и далее приведены только отличия в сравнениях, для которых -значение критерия Р<0,05, при этом сами численные данные в большинстве случаев опушены для удобства чтения.

изолятов Республики Алтай была меньшей по сравнению с таковыми из ЯНАО. Доминирующим субтипом HBsAg в группе образцов Республики Алтай оказался ayw2 (96,4%), что было больше, чем в Иркутской области и ЯНАО. Встречаемость субтипа ay\v3 (3,6%) была ниже, чем в Иркутской области и ЯНАО (таблица 1). В предшествующих работах (Нетесова и др., 2004), было также показано доминирование субтипа ayw2 в Республике Алтай (93-100%).

Два района Республики Алтай, вошедших в исследование, существенно отличались между собой по исследуемым характеристикам. При сравнении групп этих районов (Кош-Агачского и Усть-Канского), обнаружены различия по встречаемости HBsAg (5,2% и 13,4% соответственно), субгенотипов D1 (85,7% и 19,0%) и D3 (0% и 76,2%) (таблица 1). Это свидетельствует о том, что, между группами населения этих районов практически отсутствует передача ВГВ. С учетом географической близости двух этих районов, это может быть объяснено различным этническим составом групп: донорами образцов в Кош-Агачском районе были казахи, в Усть-Канском - алтайцы.

Кемеровская область (юго-запад Сибири; телеуты)

Небольшая численность данной группы не позволила получить достоверные различия в большинстве сравнений с другими группами. Тем не менее, высокоэндемичная (встречаемость HBsAg - 10,2%) группа Кемеровской области отличалась от низкоэндемичной группы ЯНАО по встречаемости субгенотипа D1 (60,0%). В группе образцов Кемеровской области не было обнаружено ни одного изолята субгенотипа D2 или субтипа ayw3, поэтому доли изолятов этих типов, равные 0%, оказались достоверно ниже аналогичных, полученных для ЯНАО. Встречаемость субгенотипа D3 в группе Кемеровской области, также равная 0%, была ниже, чем в группе Республики Алтай (таблица 1). В группе телеутов был обнаружен один изолят с субтипом HBsAg ayw4 (субгенотип DI); ранее существование этого нетипичного для генотипа D субтипа в Сибири было показано в работе (Tallo et al., 2004).

Иркутская область (юго-восток Сибири; буряты, русские)

Данная группа отнесена к среднеэндемичным по встречаемости ВГВ (6,0%). Этот показатель был выше, чем в ЯНАО, но ниже, чем в Республике Алтай и Красноярском крае. Среди субгенотипов ВГВ в группе Иркутской области не было

доминирующего: 01, 02 и ОЗ были представлены примерно равными долями (таблица 1). Встречаемость субгенотипа 01 (27,9%) была выше, чем в ЯНАО, но ниже, чем в Красноярском крае. Субгенотип Б2 (20,9%) обнаруживался в группе Иркутской области реже, чем в группе ЯНАО. Среди субтипов HBsAg в группе Иркутской области превалировал ау\у2 с частотой встречаемости 58,1%, что больше, чем в ЯНАО, но меньше, чем в группе Республики Алтай. Доля субтипа ау\уЗ в группе Иркутской области (30,2%) была больше, чем в Республике Алтай (р>0,975) и Красноярском крае.

В исследование вошло три района Иркутской области. Сравнение групп Аларского и Нукутского районов (обе представлены преимущественно этническими бурятами), не выявило между ними достоверных различий ни по одному из исследуемых параметров. Группы Аларского и Иркутского районов (последняя группа состояла из русского населения) отличались по встречаемости HBsAg (8,2% и 3,6% соответственно, р>0,95). Кроме того, в Аларском районе превалировал субгенотип ОЗ (50% против 0% в Иркутском районе, р>0,95), а в Иркутском - 01 (87,5% по сравнению с 8,3% в Аларском районе, р>0,999). При сравнении Нукутского и Иркутского районов различия получены во встречаемости субгенотипа 01 (27,3% и 87,5% соответственно, р>0,95), субтипов ау\у2 (27,3% и 100%, р>0,99) и ау\уЗ (54,5% и 0%, р>0,95) (таблица 1). Заметные отличия параметров инфекции ВГВ в группах, представленных преимущественно бурятами и русскими, очевидно, говорят о том, что передача ВГВ между этими группами редка. Следует отметить, что в группах Аларского и Нукутского района (буряты) обнаружены в том числе три изолята ВГВ генотипа С (вероятно, «завозных»), один изолят - генотипа А ВГВ (Нукутский район), в то время как все 8 изолятов Иркутского района были генотипа О. Из необычных субтипов HBsAg обнаружены два изолята с ас1щ+ (субгенотип С1), два - ас!\у2 (один -субгенотипа А2 и один - генотипа О неопределенного субгенотипа) и один - субтипа ау\у4 (субгенотип ОЗ) (рисунок 1).

Ямало-Ненцкий автономный округ (северо-запад Сибири; ханты, коми, ненцы, селькупы)

Группа ЯНАО во многом отличалась от всех остальных групп, вошедших в исследование. Как уже отмечалось, в данной группе был обнаружен достоверно более низкий уровень встречаемости HBsAg (1,6%) по сравнению со всеми группами

других регионов (таблица 1). Низкая (0-2%) встречаемость HBsAg среди ненцев и коми в соседнем с ЯНАО регионе - Ненецком автономном округе, была отмечена и другими исследователями (Dobrobeeva et al., 2005; Netesova et al., 2003).

Группа ЯНАО была единственной, в которой превалировали субгенотип D2 и субтип ayw3. Встречаемость субгенотипа D2 в ЯНАО (60,6%) была выше, чем в других группах (р>0,999 для Республики Алтай, Иркутской области и Красноярского края и р>0,95 для Кемеровской области). Встречаемость субгенотипа D1 в ЯНАО (6,1%), напротив, была ниже, чем в других группах (р>0,99 для Республики Алтай, р>0,95 для Кемеровской и Иркутской областей, р>0,999 для Красноярского края). Доля субгенотипа D3 (15,2%) в ЯНАО была меньшей по сравнению с Республикой Алтай (р>0,995). Субтип ayw3 в ЯНАО встречался чаще (54,5%), чем в группах Республики Алтай (р>0,999), Кемеровской области (р>0,95) и Красноярского края (р>0,999). В то же время, субтип ayw2 обнаруживался в ЯНАО реже (30,3%) по сравнению с группами Республики Алтай (р>0,999), Иркутской области (р>0,95) и Красноярского края (р>0,999). Среди других субтипов стоит отметить три изолята с субтипом adw2 (два субгенотипа А2 и один - D3), один - ayw4 (субгенотип генотипа D не определен). Интересно, что единственный исследованный изолят ВГВ из Красноселькупского района был субгенотипа С1, субтип adrq+ (рисунок 1).

Встречаемость преимущественно субтипа ayw3, характерного для изолятов ВГВ субгенотипа D2 (Norder et al., 2004) среди ненцев и хантов ЯНАО (42% и 100% соответственно) ранее была выявлена в работе (Нетесова и др., 2004).

Группы четырех районов ЯНАО практически не различались между собой по параметрам инфекции ВГВ (таблица 1). Исключение составили Шурышкарский и Приуральский районы, между которыми зафиксированы отличия в долях HBsAg-позитивных носителей (2,9% и 0,8% соответственно, р>0,999) и изолятов субгенотипа D2 (75,0% и 20,0%, р>0,95). Во всех остальных попарных сравнениях районов ЯНАО между собой не было выявлено различий по всем исследуемым параметрам. Таким образом, можно" предположить, что в ЯНАО, несмотря на различную этническую принадлежность его коренных жителей, значительные размеры округа и низкую плотность населения, существует общая популяция ВГВ, не разделенная эпидемиологическими барьерами. В то же время, вероятно, ЯНАО в целом изолирован от проникновения ВГВ со стороны групп населения других областей, вошедших в исследование.

Красноярский край (север Сибири; долганы, нганасаны, кеты)

Данная группа отнесена к высокоэндемичным в отношении инфекции ВГВ. Частота встречаемости HBsAg в группе составила 11,7%, что было выше, чем в группах Иркутской области (р>0,999) и ЯН АО (р>0,999) (таблица 1). Ранее столь высоких уровней встречаемости HBsAg в северных районах центральной и западной Сибири зафиксировано не было; авторы некоторых предшествующих работ (Нетесова и др., 2004; Dobrodeeva et al., 2005, и другие), полагали, что встречаемость ВГВ должна уменьшаться с юга на север Сибири.

В группе Красноярского края превалировал субгенотип D1 (64,7%), его доля в этой группе была выше по сравнению с группами Республики Алтай (р>0,95), Иркутской области (р>0,995) и ЯНАО (р>0,999). Встречаемость субгенотипа D2 в группе Красноярского края (5,9%), как и во всех остальных группах, была ниже, чем в группе ЯНАО (р>0,999). Доля также минорного для данной группы субгенотипа D3 (11,8%) была меньшей по сравнению с группой Республикой Алтай (р>0,999). Значительная часть изолятов Красноярского края принадлежала к генотипу С ВГВ (17,6%), в то время как, например, ни в одном из 28 изолятов Республики Алтай ВГВ генотип С не был выявлен (таблица 1, подробнее см. ниже). Все эти изоляты принадлежали к субгенотипу С1 (субтип adrq+) (рисунок 1). Как и во всех остальных группах, за исключением ЯНАО, в группе Красноярского края доминировал субтип ayw2 (73,5%, р>0,999 по сравнению с ЯНАО). Доля субтипа ayw3 (5,9%), в свою очередь, оказалось меньшей, чем в группе ЯНАО (р>0,999). Также был обнаружен один изолят ayw4 (субгенотип D1), что подтверждает его широкую распространенность в Сибири (Tallo et al., 2004).

Два района Красноярского края, вошедшие в исследование, не различались достоверно ни по одному из определяемых параметров (таблица 1). Вероятно, это связано не столько с эпидемиологической однородностью этих районов, сколько с небольшой численностью группы из Туруханского района, не позволившей осуществить корректный статистический анализ. Поэтому основной вклад в описанные выше характеристики группы Красноярского края внесла более многочисленная группа Дудинского района. Так, в ней обнаружены все признаки, характерные для группы Красноярского края в целом: высокая встречаемость HBsAg, доминирование субгенотипа D1 и субтипа ayw2, значительный вклад изолятов генотипа С. Два изолята ВГВ, выделенные из образцов крови кетов Туруханского

района, отнесены к субгенотипу D2 и субтипу ayw3, которые не были обнаружены в образцах крови долган и нганасан Дудинского района, но, в то же время, являются эндемичными для ЯНАО, граничащего с западом Туруханского района.

Подводя промежуточный итог, можно заключить следующее. Среди коренного населения Сибири существуют несколько обособленных вирусных популяций ВГВ разных типов, при этом субгенотип D1 (субтип ayw2) превалирует в группах казахов Республики Алтай, Кемеровской области, русских Иркутской области и Дудинского района Красноярского края; D2 (ayw3) - в ЯНАО; D3 (ayw2) - в группах алтайцев Республики Алтай и Аларского района Иркутской области, что свидетельствует о существовании в прошлом нескольких различных источников инфекции ВГВ в Сибири.

Генотип С ВГВ в Сибири

Обнаружение на крайнем севере Красноярского края (Дудинский район занимает полуостров Таймыр) значительной доли изолятов генотипа С ВГВ (17,6%), интересно само по себе, принимая во внимание тот факт, что этот генотип является эндемичным для стран Юго-Восточной Азии. В совокупности с данными других исследователей эта находка может служить свидетельством существования в настоящем или прошлом пути передачи ВГВ с востока на запад северной Сибири. Так, в соседней Республике Саха (Якутия) зафиксирован высокий уровень встречаемости изолятов ВГВ генотипа С (24,1%) и случаев микст-инфекций генотипами С и D (13,8%) (Лобзин и др., 2004), при высокой эндемичности ВГВ в целом (встречаемость HBsAg на уровне 10,8-23,8%) (Кузин и др., 2004), что близко к показателям Дудинского района Красноярского края. Генотип С обнаруживается и в более восточных областях, где он появился, очевидно, с миграциями монголоидов в северную Америку через Аляску (Livingston et al., 2007). При помощи иммуноферментного анализа с использованием высокоспецифичных моноклональных антител был установлен субтип HBsAg adrq+, генотип С ВГВ в 8 (33%) из 24 образцов крови жителей г. Анадырь, Чукотский АО (Цой и др., 2009). Сходная доля изолятов ВГВ генотипа С (25%) в Чукотском АО отмечена в работе других авторов, использовавших для этих целей методы ПЦР и секвенирования ДНК ВГВ (Чуланов, 2013). Кроме того, единственный изолят генотипа С, полученный в нашем исследовании в

Красноселькупском районе ЯНАО (расположенном южнее и западнее Таймыра), оказался филогенетически схожим с изолятами субгенотипа С1 из Дудинского района Красноярского края (рисунок 1), что, возможно, говорит о вовлечении в указанный северный путь передачи ВГВ населения и более западных областей Сибири. В любом случае, обнаружение ВГВ генотипа С в северных районах Сибири необходимо учитывать практикующим врачам-инфекционистам, поскольку клиническая картина заболевания, развивающегося при инфекции генотипа С может существенно отличаться от таковой при инфекции генотипом D ВГВ (цит. по обзору Као et al., 2011).

Возможные пути передачи ВГВ у коренного населения Сибири

Нам не удалось получить достоверную эпидемиологическую информацию о факторах риска в отношении инфекции ВГВ, действующих в исследуемых группах. Тем не менее, ряд косвенных признаков позволяет утверждать, что среди коренного населения Сибири действуют пути передачи ВГВ, не связанные с основными факторами риска, характерными для городских сообществ Сибири: внутривенным употребление наркотических средств и рискованным сексуальным поведением (Шустов, 2003; Кочнева и др., 2005; Баяндин и др., 2007).

Так, при сравнении встречаемости HBsAg в половозрастных группах всех исследованных областей и районов (таблица 2), показано, что среди исследуемых лиц уровень инфицирования не связан с полом или возрастом до 35 лет. Напротив, для групп Кемеровской области и Красноярского края показано увеличение риска инфицирования с возрастом (таблица 2). Следовательно, факторы риска передачи ВГВ одинаково действуют на всех участников группы, и вероятность заражения в течение жизни закономерно увеличивается с возрастом. Если бы основными путями передачи вируса были половой и употребление наркотиков, то мы обнаружили бы увеличение доли инфицированных людей в возрасте 15-35 лет,.а также среди мужчин, поскольку именно эти группы наиболее подвержены упомянутым рискам (Шустов, 2003; Ray Kim, 2009).

Данные других авторов также говорят о том, что в группах коренного населения Сибири передача парентеральных инфекций слабо связана с употреблением наркотических средств и половыми связями (Зотова, 2010; Netesova et al., 2003). Таким образом, существующие пути передачи ВГВ в исследованных группах

(вероятно, различные для разных групп, что отражается в значительной разнице в эндемичности ВГВ) до сих пор неясны и их обнаружение могло бы быть предметом будущих исследований.

Результаты в национальных группах

Поскольку исследование проводилось на материале коренных народностей Сибири, интересно было бы выяснить, насколько национальная принадлежность доноров коррелирует с вариантами ВГВ, циркулирующими среди них. При этом нужно учитывать два фактора, осложняющих такой анализ. Во-первых, национальность в нашей работе определялась на основе опроса, то есть была субъективным показателем. Во-вторых, в исследуемых группах было значительное количество людей со смешанным происхождением (метисов), причем количество вариантов таких метисов не позволяет выделить каждый из них в отдельную группу. Поэтому, несмотря на то, что анализ разнообразия ВГВ в национальных группах был выполнен и результаты его приведены ниже, этот анализ может рассматриваться только как дополнительная обработка данных, полученных для территориальных групп районов и областей, и к его результатам нужно относиться с определенной долей осторожности.

Всего выделены 12 национальных групп, которые перечислены в таблице 3. Одиннадцать из них были образованы по мононациональному признаку - алтайцы, буряты и т. д. Двенадцатая группа включила всех людей, национальности которых не относятся к понятию «коренных» (т.н. «пришлое население»), и численность которых не позволяла для каждой национальности выделить отдельную группу. Поскольку в этой группе 81% составляли люди славянского происхождения, она получила условное название «русских».

Из 5 657 лиц, вошедших в исследование, 4 441 были определены как принадлежащие к одной национальности (вклад предков отличной национальности не превышал 1/8). Оставшиеся 1 216 человека со смешанным происхождением были распределены по группам таким образом, что если человек имел среди своих предков, например, и хантов, и коми, он попадал одновременно в обе эти группы. Таким образом, суммарная численность национальных групп превышала численность общей группы на 1 216 человек (на 21,5%). Правомерность такого подхода, разумеется, нуждается в обсуждении, однако он позволил избавиться от проблем, связанных с

анализом данных по метисам. Кроме того, если допустить существование неких специфических факторов поведения, ответственных за особенности инфицирования ВГВ лиц какой-либо определенной национальности, то в смешанных семьях, одним из членов которых будет человек этой национальности, скорее всего, эти факторы будут действовать вне зависимости от происхождения остальных членов семьи.

Таблица 3. Результаты в национальных группах. Наиболее характерные для каждой группы результаты выделены серой заливкой.

Регион Национальноеть Кол-во образцов HUsAg (+) Кол-во изолято в Гепотипы/субгемотипы Субтнпы 1 [ 11 s A LT

А С DI D2 D3 D* ayw2 ayw3 Другие

Республика Алтай Алтайцы 237 32 13,5% 22 0 0 5 22,7% 1 4,6% 16 72,7% 0 20 90,8% 1 4,6% 1 4,6%

Казахи 200 10 5,0% 7 0 0 6 85,7% 0 0 1 14,3% 7 100% 0 0

Кемеровская область Телеугы 131 14 10,7% 5 0 0 3 60,0% 0 0 2 40,0% 4 80,0% 0 1 20,0%

Иркутская область Буряты 1042 72 6,9% 34 1 2,9% 3 8,8% 4 11,8% 9 26,5% 14 41,2% 3 8,8% 16 47,1% 13 38,2% 5 14,7%

ЯНАО Хаиты 1176 26 2,2% 18 0 0 0 13 72,2% 4 22,2% 1 5,6% 4 22,2% 13 72,2% 1 5,6%

Коми 521 10 1,9% 7 0 0 1 14,3% 4 57,1% 1 14,3% 1 14,3% 4 57,1%, 3 42,9% 0

Ненцы 13% 17 1,2% 9 2 22.2 % 0 2 22,2% 4 44,5% 1 11,1% 0 4 44,5% 3 33,3% 2 22,2%

Селькупы 226 0 0 - - - - - - - - -

Красноярский край Долганы 207 28 13,5% 18 0 5 27,8 % 10 55,5% 0 3 16,7% 0 12 66,7% 0 6 33,3%

Нганасаны 231 27 11,7% 15 0 1 6,7% 12 80,0% 0 2 13,3% 0 14 93,3% 0 1 6,7%

Кеты 116 7 6,0% 2 0 0 0 2 100% 0 0 0 2 100% 0

Везде «Русские» 1393 50 3,6% 30 0 6 20,0 % 17 56,7% 4 13,3% 0 3 10,0% 16 53,3% 6 20,0% 8 26,7%

ВСЕГО 6876 293 4,3% 167 3 1,8% 15 9,0% 60 35,9% 37 22,2% 41 24,5% 11 6,6% 101 60,5% 41 24,5% 25 15,0%

Примечание: О* - изоляты, отнесенные к генотипу О, которые не могли быть отнесены ни к одному из исследованных субгенотипов.

Следует отметить, что в большинстве случаев национальные и территориальные группы практически совпадали. Так, 97,5% всех алтайцев, вошедших в исследование, проживали на территории Усть-Канского района Республики Алтай, 97,0% казахов -в Кош-Агачском районе Республики Алтай, 99,8% всех бурят - в Нукутском и Аларском районах Иркутской области, 100% нганасанов и 99,0% долганов — в Дудинском районе Красноярского края, 97,4% кетов - в Туруханском районе Красноярского края, 99,4% хантов и 99,2% коми — в Шурышкарском и Приуральском районах ЯНАО, 94,9% ненцев - в Пуровском и Приуральском районах ЯНАО, 98,7% селькупов - в Красноселькупском районе ЯНАО, 100% телеутов — в Беловском районе Кемеровской области.

Количественные данные по разнообразию ВГВ в национальных группах представлены в таблице 3. При сравнении групп между собой по 10 исследуемым параметрам, получены следующие основные результаты.

Группа алтайцев, состоящая из 237 человек, оказалась высокоэндемичной по встречаемости НВвАд (13,5%). По этому показателю она достоверно отличалась от низко- и среднеэндемичных групп казахов (5,0%, р>0,99), которые проживают в той же республике; бурят (6,9%, р>0,99); хантов (2,2%, р>0,999); коми (1,9%, р>0,999); ненцев (1,2%, р>0,999); селькупов (0%, р>0,999); кетов (6,0%, р>0.95) и обобщенной группы «русских» (3,6%, р>0,999). Среди алтайцев циркулирует в основном субгенотип БЗ ВГВ (72,7%), и по этому показателю они отличны от групп казахов (р>0,99), телеутов (р>0,99) и «русских» (р>0,999), у которых 03 не обнаружен вообще; а также групп бурят (41,2%, р>0,95), хантов (22,2%, р>0,99), коми (14,3%, р>0,95), ненцев (11,1%, р>0,99), долган (16,7%, р>0,999) и нганасан (13,3%, р>0,999). Из субтипов HBsAg у казахов с наиболее высокой частотой встречается ау\у2 (90,8%), что отличает их от бурят (47,1%, р>0,99), хантов (22,2%, р>0,999), ненцев (44,5%, р>0,95) и даже «русских» (53,3%, р>0,99) (напомним, что ау\у2 -доминирующий субтип в России и Сибири).

Среднеэндемичная по встречаемости ВГВ группа казахов (5,0%) превышала по этому показателю группы северо-западных народностей - хантов (2,2%, р>0,95), коми (1,9%, р>0,95), ненцев (1,2%, р>0,999) и селькупов (0%, р>0,999). Доминирующим среди казахов был субгенотип (85,7%), и частота его встречаемости намного превышала этот показатель, полученный для алтайцев (22,7%, р>0,99), бурят (11,8%, р>0,999), хантов (0%, р>0,999), коми (14,3%, р>0,95) и ненцев (22,2%, р>0.95), то есть групп, в которых превалировали субгенотипы О 2 и ОЗ. Субтип ау\у2 у казахов (100%)

встречался чаще, чем у бурят (47,1%, р>0,95), хантов (22,2%, р>0,999), ненцев (44,5%, р>0,95), кетов (0%, р>0,95) и «русских» (53,3%, р>0,95).

Среди телеутов показатель встречаемости НВзА§ был высоким - 10,7%, и закономерно превышал значения, полученные для низкоэндемичных народностей северо-запада Сибири - хантов (2,2%), коми (1,9%), ненцев (1,2%) и селькупов (0%) (р>0,999 во всех случаях), а также «русских» (3,6%, р>0,999). Встречаемость субгенотипа 01 (60%) у телеутов была выше, чем у бурят (11,5%, р>0,95) и хантов (0%, р>0,99). Доминирующим субтипом HBsAg в группе телеутов был ау\у2 (80%), его встречаемость оказалась выше, чем в группе хантов (22,2%, р>0,95). Никаких других достоверных отличий группы телеутов от остальных обнаружено не было, вероятно, в связи с малой численностью группы.

Группа бурят была наиболее гетерогенной по показателям встречаемости вариантов ВГВ. В ней единственной обнаруживались все возможные из изученных нами генотипов, субгенотипов ВГВ и субтипов НВвАд. В этом отношении наиболее интересным было сравнение группы бурят с группой «русских» (также отличавшейся разнообразием ВГВ), поскольку в Иркутской области, где было получено основное количество образцов от бурят, они проживают рядом с русским населением. От «русских» группа бурят отличалась более высокой встречаемостью НВэАд (6,9% против 3,6%, р>0,999) и ВГВ субгенотипа БЗ (41,2% и 0%, р>0,999). Из-за высокой частоты встречаемости HBsAg, буряты по этому показателю отличались и от хантов (2,2%), коми (1,9%), ненцев (1,2%) и селькупов (0%, р>0,999 для всех сравнений). Другой заметной характеристикой группы бурят была относительно высокая встречаемость субтипа ау\уЗ, по этому параметру группа превосходила группы долган (0%, р>0,99) и нганасан (0%, р>0,95).

Четыре народности северо-запада Сибири - ханты, коми, ненцы, селькупы — были очень близки между собой, и не отличались ни по одному из исследуемых параметров. Исключение составляет только крайне низкая встречаемость НВвАд у селькупов (0% в нашем исследовании), которая была даже ниже, чем у хантов (2,2%) и коми (1,9%) (р>0,95 для обоих сравнений). Это говорит о том, что передача ВГВ между жителями ЯНАО происходит безотносительно их этнической принадлежности. Признаки, характерные для этих четырех групп, были наиболее выражены у хантов (за счет величины самой группы и значительного количества изолятов ВГВ). Так, встречаемость изолятов субгенотипа Б2 среди хантов (72,2%) была выше, чем практически во всех других группах: у алтайцев (4,6%, р> 0,999), казахов (0%,

р>0,99), бурят (26,5%, р>0,99), долган (0%, р>0,999), нганасан (0%, р>0,999) и «русских» (13,3%, р>0,999). Частота обнаружения субгенотипа ЭЗ у хантов (22,2%) была выше, чем у русских (0%, р>0,95). Встречаемость субтипа ау\уЗ, превалировавшего среди хантов (72,2%), была также выше, чем в остальных группах: алтайцев (4,6%, р>0,999), казахов (0%, р>0,99), телеутов (0%, р>0,99), долган (0%, р>0,999), нганасан (0%, р>0,999) и «русских» (20,0%, р>0,999). Группы коми и ненцев демонстрировали схожие результаты при сравнениях, но с меньшими значениями достоверности из-за невысокого количества обнаруженных в них изолятов. Интересно, что группа ненцев достоверно отличалась от группы «русских» по встречаемости генотипа А ВГВ (22,2% и 0%, р>0,95).

Группы долган и нганасан, проживающих совместно на Таймыре (Дудинский район Красноярского края) достоверно не отличались между собой ни по одному из исследуемых параметров, что говорит об отсутствии эпидемиологических барьеров в отношении передачи ВГВ между их представителями. С кетами, обитающими в соседнем Тураханском районе, эти группы также не демонстрировали никаких отличий (вероятно, из-за малой численности обследованной группы кетов), за исключением различий во встречаемости субтипа ау\у2 у нганасан и кетов (93,3% и 0%, р>0,95), и ау\уЗ у кетов, долган и нганасан (100%, 0% и 0% соответственно, р>0,99 для обоих сравнений). Разнообразие ВГВ среди и долган, и нганасан, было схоже с группой «русских», за исключением более высокой встречаемости патогена (13,5% у долган и 11,7% у нганасан против 3,6% у русских; р>0,999 в обоих случаях), а также встречаемости субгенотипа 03 у долган (13,7% против 0% у русских, р>0,95) и субтипа ау\у2 у нганасан (93,3% и 53,3% у русских, р>0,95). Из других особенностей групп долган и нганасан можно отметить значительную частоту встречаемости ВГВ генотипа С у долган (27,8%), которая превышала таковую для алтайцев и хантов (0%, р>0,95 для обоих сравнений); высокую распространенность субгенотипа у долган (55,5%), который встречался чаще, чем у бурят (11,8%, р>0,99), хантов (0%, р>0,999) и коми (14,3%, р>0,95); а также более высокий показатель встречаемости субтипа ау\у2 у нганасан по сравнению с бурятами (93,3% и 47,1%, р>0,99).

В целом, разнообразие ВГВ для национальных групп практически полностью совпало с результатами, полученными для групп районов и областей. Действительно, можно выделить несколько групп, отличающихся между собой по характеристикам ВГВ: на юго-западе Сибири это обособленные группы алтайцев (в которой

превалирует субгенотип БЗ) и казахов (Э1); на северо-западе - объединенная группа хантов, коми, селькупов и ненцев (02, субтип ау\уЗ) которые практически не отличаются между собой по исследуемым характеристикам, но заметно отличны от всех остальных групп, вошедших в исследование; на юго-востоке - бурят (03); на севере - общая группа долганов и нганасанов Таймыра (01 с заметной долей генотипа С).

Заключение

Таким образом, результаты настоящей работы по выявлению НВзЛд в пяти обследованных регионах Сибири свидетельствуют о наличии трех высокоэндемичных групп по распространенности инфекции ВГВ: алтайцев Республики Алтай (13,4%), долганов и нганасан Красноярского края (13,2%), телеутов Кемеровской области (10,2%), в которых необходимо проведение массовых мероприятий по профилактике ВГВ-инфекции.

Определение генотипов ВГВ в 143 изолятах показало, что 130 (90,9%) из них относятся к генотипу О, 10 (7%) - к генотипу С, и только 3 (2,1%) - к генотипу А. Установлена различная встречаемость субгенотипов ВГВ в изолятах обследованных групп: субгенотип 01 (субтип ау\у2) превалировал в изолятах групп казахов Республики Алтай (85,7%), телеутов Кемеровской области (60%), русских Иркутской области (87,5%), долганов, нганасан Красноярского края (68,8%); 02 (ау\уЗ) - в изолятах групп хантов, коми (75%), ненцев Пуровского района (57,1%) ЯНАО; 03 (ау\у2) — в изолятах групп алтайцев Республики Алтай (76,2%) и бурят Аларского района Иркутской области (50%). Генотип С (ас!^+) ВГВ обнаружен в изолятах групп Дудинского района Красноярского края, Аларского и Нукутского районов Иркутской области, Красноселькупского района ЯНАО; генотип А выявлен в изолятах групп Пуровского района ЯНАО и Нукутского района Иркутской области. Полученные данные говорят о существовании в прошлом нескольких различных источников инфекции ВГВ в популяциях коренного населения Сибири, а также их эпидемиологической обособленности друг от друга. В совокупности с результатами, которые уже получены, или будут в будущем получены на изучаемой территории, настоящее исследование способствует созданию единой картины циркуляции ВГВ в Сибири, его разнообразия и эволюционной истории, а также прогнозированию возможных новых вызовов практическому здравоохранению в отношении этого опасного заболевания.

Выводы

1. Определена частота встречаемости HBsAg в группах коренного населения Сибири. Обнаружены высокоэндемичные по распространенности ВГВ группы алтайцев Усть-Канского района Республики Алтай (13,4%); телеутов Беловского района Кемеровской области (10,2%); долган и нганасан Дудинского района Красноярского края (13,2%); среднеэндемичные группы казахов Кош-Агачского района Республики Алтай (5,2%); бурят Аларского и Нукутского районов Иркутской области (6,9%); русских Иркутского района Иркутской области (3,6%); низкоэндемичная группа хантов, коми, ненцев и селькупов Шурышкарского, Приуральского, Красноселькупского и Пуровского районов ЯНАО (1,6%).

2. Определены частоты встречаемости генотипов и субгенотипов ВГВ в группах коренного населения Сибири. Во всех без исключения группах наиболее распространен генотип Б ВГВ (91% всех изолятов). Субгенотип превалирует в группах казахов Республики Алтай (85,7%); телеутов Кемеровской области (60%); русских Иркутской области (87,5%); долган и нганасан Красноярского края (68,7%). Субгенотип 02 превалирует в группах хантов, коми, ненцев и селькупов ЯНАО (60,6%); кетов Красноярского края (100%). Субгенотип БЗ превалирует в группах алтайцев Республики Алтай (76,2%); бурят Иркутской области (41,2%).

3. Определены частоты встречаемости субтипов НВвАд в группах коренного населения Сибири. Субтип ау\у2 превалирует в группах казахов (95,2%) и алтайцев (100%) Республики Алтай; телеутов Кемеровской области (80%); бурят (47,1%) и русских (100%) Иркутской области; долган и нганасан Красноярского края (78,1%). Субтип аулуЗ превалирует в группах хантов, коми, ненцев и селькупов ЯНАО (54,5%); кетов Красноярского края (100%).

4. Выявлена высокая частота встречаемости изолятов ВГВ генотипа С (субгенотип С1, субтип а<1^+) в группе долган и нганасан Красноярского края (п-ов Таймыр) — 18,8%. Обнаружены три изолята генотипа А (2,1% от общего количества): два в ЯНАО, один — в Иркутской области.

5. Проведенный статистический анализ полученных данных показал, что перечисленные группы коренного населения изолированы друг от друга в отношении передачи ВГВ.

Благодарности

Исследование проведено при поддержке грантов НШ-65387.2010.4, НШ-6086-2004.4, НШ-387.2008.4, гранта МФТИ №00012/00049, Госконтракта № 02.740.11.0767, гранта The Swedish Institute №01543/2006 и гранта РФФИ №05-0680333. Сбор всех образцов проводили сотрудник Лаборатории популяционной этногенетики ИЦиГ СО РАН под руководством Л.П. Осиповой. Автор благодарит Р.В. Дульбеева, Л.Р. Алексееву, Ю.Н. Тулугоева, Ю.К. Булсунаева за помощь в организации сбора образцов. ИФА проводился на базе ЗАО «Вектор-Бест» силами И.Г. Нетесовой и Л.В. Безугловой. Молекулярно-биологическая часть работы выполнена автором лично на базе ГНЦ ВБ «Вектор» при методической и направляющей поддержке В.Б. Локтева, В.А. Тернового, Г.В. Кочневой, Е.В. Чуб, Р.Б. Баяндина, A.B. Шустова, С.А. Походни, а также на базе Шведского института по контролю над инфекционными заболеваниями при поддержке Н. Norder и L.O. Magnius.

Список работ, опубликованных по теме диссертации Статьи в научных журналах:

1. Мануйлов В.А., Нетесова И.Г., Осипова Л.П., Шустов A.B., Баяндин Р.Б., Кочнева Г.В., Нетесов C.B. Генетическая вариабельность изолятов вируса гепатита В у населения Шурышкарского района Ямало-Ненецкого Автономного Округа. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. - 2005. - № 4. - С. 30-34.

2. Мануйлов В.А., Осипова Л.П., Нетесова И.Г., Чуб Е.В., Цой Л.В., Дульбеев Р.В., Алексеева Л. P., Norder H., Magnius L.O., Нетесов C.B. Встречаемость субгенотипов вируса гепатита В и субтипов HBsAg у коренного населения севера и юго-востока Сибири. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. -2010,- №4.-С. 31-35.

3. Мануйлов В.А., Осипова Л.П., Нетесова И.Г., Чуб Е.В., Безуглова Л.В., Norder H., Magnius L.O., Нетесов C.B. Распространенность различных генотипов и субтипов HBs-антигена вируса гепатита В в группах коренного населения Сибири. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. - 2015. - № 1. — С. 28-35.

Участие в конференциях с публикацией тезисов доклада в сборнике трудов:

1. Мануйлов В.А., Нетесова И.Г., Осипова Л.П., Нетесов C.B. Генетическая вариабельность изолятов вируса гепатита В, циркулирующих среди населения Ямало-

27

Ненецкого Автономного Округа. // Материалы Российской научно-практической конференции «Генодиагностика инфекционных болезней». Новосибирск, 25-27 октября 2005 г. - С. 53-54.

2. Мануйлов В.А., Нетесова И.Г., Осипова Л.П., Нетесов C.B. Генетическая вариабельность вируса гепатита В среди населения Западной Сибири. // Материалы Международной научно-практической конференции «Геномные технологии в медицине и медицинское образование на рубеже веков». Республика Казахстан, Алматы, 18-20 мая 2006 г. - С. 208-209.

3. Нетесова И.Г., Посух О.Л., Осипова Л.П., Мануйлов В.А., Нетесов C.B. Частота встречаемости серологических маркеров инфекций гепатитов В и С у населения Туруханского района Красноярского края. // Материалы XIII Международного конгресса по приполярной медицине. Новосибирск, 12-16 июня 2006 г.-С. 188-189.

4. Мануйлов В.А., Чуб Е.В., Нетесова И.Г., Осипова Л.П., Цой Л.В., Norder H., Magnius L.O., Нетесов C.B.. Различная встречаемость субгенотипов вируса гепатита В и субтипов HBsAg у коренного населения Сибири. // Материалы VII Российской научно-практической конференции с международным участием «Вирусные гепатиты - эпидемиология, диагностика, лечение и профилактика». Москва, 29-31 мая 2007 г. -С. 64-65.

5. Мануйлов В.А., Осипова Л.П., Нетесова И.Г., Чуб Е.В., Безуглова Л.В., Norder H., Magnius L.O., Нетесов C.B. Встречаемость HBsAg, субтипов HBsAg и субгенотипов вируса гепатита В в группах коренного населения Сибири. // Сборник трудов VIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика - 2014». Москва, 18-20 марта 2014 г. - Т. 1. — С. 143-145.

список использованных сокращений

ВГВ - вирус гепатита В

ИФА - иммуноферментный анализ

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ЯНАО - Ямало-Ненецкий автономный округ

HBsAg - hepatitis В surface antigen (поверхностный антиген вируса гепатита В) UPGMA — unweighted pair group method using arithmetic averages, метод невзвешенных попарных средних

Подписано в печать 11.09.2015 г. Печать офсетная. Бумага офсетная. Формат 60x84/16. Усл. печ. л. 2,5 Тираж 100 экз. Заказ № 280

Отпечатано в типографии «Срочная полиграфия» ИП Малыгин Алексей Михайлович 630090, Новосибирск, пр-т Академика Лаврентьева, 6/1,

оф.104

Тел. (383) 217-43-46, 8-913-922-19-07