Биотехнология получения сорбционных материалов (энтеросорбентов) с заданными свойствами

Филь, Аревик Аркадиевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биотехнология получения сорбционных материалов (энтеросорбентов) с заданными свойствами
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Биотехнология получения сорбционных материалов (энтеросорбентов) с заданными свойствами"

На правах рукописи

Филь Аревик Аркадиевна

БИОТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЦИОННЫХ МАТЕРИАЛОВ

(ЭНТЕРОСОРБЕНТОВ) С ЗАДАННЫМИ СВОЙСТВАМИ

03.00.23 — биотехнология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биолошческих наук

Ставрополь, - 2006

Работа выполнена в Ставропольском государственном университете

Научный руководитель:

доктор технических наук, профессор Кунижев Станислав Мухадинович

Официальные оппоненты:

Академик РАСХН

доктор сельскохозяйственных наук

Петрова Ледцмила Николаевна

доктор биологических наук Жарникова Ирина Викторовна

Ведущая организация:

Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН

Защита диссертации состоится 29 ноября 2006 года в 12 часов на заседании регионального диссертационного совета ДМ 212.256.04 при Ставропольском государственном университете по адресу: 355009, г. Ставрополь, ул. Пушкина, д. 1, корпус 2, ауд. 506.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ставропольского государственного университета по адресу: 355009, г. Ставрополь, ул. Пушкина, д. 1, корпус 1.

Автореферат разослан » октября 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук Джандарова Т.И.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Одна из важных задач биотехнологии - разработка сорбционных материалов и дальнейшее их применение в медицине и медицинской промышленности в качестве незаменимых материалов для гсмо- и энтеросорбции.

Среди различных методов синтеза носителей для иммобилизации биологических комплексов перспективно направление биотехнологии по получению композиционных сорбентов с Заданными свойствами (\Veyl \У., 1951; ЬеЬобаЯ., 1978;Брыкалов А.В., 1996; Ефременко В.И., 1996). Данные носители отличаются стандартностью состава, обладают высокой проницаемостью д ля соответствующего субстрата, исключают неспецифическую сорбцию и подверженность микробиологической атаке.

Энтеросорбенты, используемые для связывания метаболитов, токсинов и других веществ в пищеварительном тракте перспективны при решении проблем регулирования питания человека, для снижения поступления в организм экологически вредных веществ (в том числе радионуклидов, пестицидов, тяжелых металлов), профилактики и лечения ряда заболеваний.

В связи с этим актуальной является проблема создания эффективного и безопасного энтеросорбента, предназначенного для очищения организма от токсикантов лекарственных препаратов.

Использование в качестве основы энтеросорбентов микрокристаллической целлюлозы обусловлено тем, что она естественным образом улучшает самоочищение кишечника. Обладая тонизирующим действием на ткани кишечника, усиливает перистальтику и помогает избавиться от контаменан-тов и слизи, тем самым, улучшая усвоение питательных веществ и воды.

Модифицированием поверхности МКЦ и аэросила можно увеличить сорбционную способность энтеросорбента. Использование в качестве модификатора белкового комплекса казеина позволяет энтеросорбенту сочетать свойства, как адсорбента, так и хемосорбента.

Поэтому для современной биотехнологии актуальна разработка сорбционных материалов с заданными полифункциональными свойствами и дальнейшее их применение в медицине и медицинской промышленности в качестве специфических материалов для энтеррсорбции.

Настоящая работа выполнялась в соответствии с планом научных исследований Южного Научного Центра РАН по теме «Построение моделей высокоэффективных сорбентов биологического и медицинского назначения с заданными свойствами и функциями на основе соиммобилизованных материалов» (тема № 00-04-04 научной программы фундаментальных исследований РАН).

Цель работы и задачи исследования. Целью настоящей работы является разработка энтеросорбентов с заданными полифункциональными свойствами.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. синтезировать базовые сорбенты на основе микрокристаллической целлюлозы и аэросила с различным содержанием казеина, гетерогенизи-рованного на поверхности жесткой матрицы;

2. изучить сорбционную емкость разработанных сорбентов относительно ионов серебра и кобальта;

3. исследовать влияние ионов адсорбента (на примере ионов серебра) на структуру субмицеллы казеина;

4. оптимизировать факторы: удельной поверхности носителя и массовой доли казеина, влияющих на адсорбционные свойства сорбентов;

5. рассмотреть возможности использования разработанных сорбентов в качестве основы для энтеросорбции относительно избытка лекарственных препаратов, вызывающих отравления.

Научная новизна. Впервые удалось получить энтеросорбент с полифункциональными свойствами на основе природных материалов.

Изучены сорбционные свойства разработанных материалов относительно одно- и двухвалентного ионов. В работе представлены данные о влиянии ионов серебра на структуру субмицеллы казеина. Они свидетельствуют о значительной диссоциации мицелл казеина в присутствии ионов серебра в изученном диапазоне концентраций (от 0,01 до 0,1М) в 1М СНзСООН (рН 2,9), т.е. ниже ИЭТ белка (рН 4,8).

Проведена оптимизация факторов: удельной поверхности носителя и массовой доли казеина, влияющих на адсорбционные свойства сорбентов. Выявлено, что увеличение массовой доли казеина уменьшает удельную поверхность сорбента, формируя тем самым пористую структуру носителя. Максимальная адсорбция по ионам серебра и кобальта наблюдается при концентрации казеина от 4 до 8 мае. %, удельной поверхности от 20 до 40 м2/г сорбента.

Впервые данные сорбенты использованы в качестве основы для энтеросорбции избытка лекарственных препаратов.

Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретически обоснована и практически доказана возможность использования белкового комплекса казеина для синтеза высокоэффективных сорбентов. Разработана базовая модель полифункционального энтеросорбента. Разработан и утвержден пакет нормативно-технической документации на препарат (ТУ 9229-014-02080718-06), Коллективом авторов (Кунижев С.М., Воробьева О.В, Филь А.А., Анисенко О.В., Бородина Т.Н.) получены положительное решение

на выдачу патента по заявке «Способ получения иммобилизованной уре-азы» (№2004115002 от 17 мая 2004г.) и патент по заявке «Способ получения сорбента» (№ 2004115003 от 18 мая 2004г). В рамках VII Международного выставки - салона «Высокие технологии. Инновации и инвестиции» (г. Санкт-Петербург) проекту «Сорбционные материалы в промышленности» Оргкомитетом присуждена золотая медаль. На IV Московском международном салоне инноваций и инвестиций разработка отмечена серебряной медалью (Москва, 2005). На Московской международной выставке «Биотехнология и медицина» (Москва, 2006) разработки Сорбент и Антидот отмечены бронзовой медалью.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. технология получения сорбентов с заданными свойствами на основе микрокристаллической целлюлозы и аэросила, гетерогенизированных белковым комплексом казеина;

2. влияние ионов серебра на структуру субмицеллы казеина, гетероге-низированного на носителе;

3. оптимизация массовой доли белкового комплекса при формировании пористой структуры сорбента;

4. определение сорбционной емкости разработанных энтеросорбентов относительно лекарственных препаратов.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на научно-практических конференциях: VII Международной выставке - салоне «Высокие технологии. Инновации и инвестиции» (Санкт-Петербург, 2002), XIV международной научно-технической конференции «Реактив — 2003» (Москва, 2003), 7-ой Пущинской школе-конференции «Биология - наука 21 века» (Пущино, 2003), Всероссийской научной конференции, «Катализ и сорбция в биотехнологии, химии, химических технологиях и экологии» (Тверь, 2003), XVI Международной научно-технической конференции. «Химические реактивы, реагенты и процессы малотоннажной химии» (Уфа, 2003), 9-ой Пущинской школе-конференции «Биология — наука 21 века» (Пущино, 2005), Московской международной выставке «Биотехнология и медицина» (Москва, 2006).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 15 научных работ и патент.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит го введения, 5 глав теоретических и экспериментальных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 207 работ, в том числе 138 работ отечественных авторов и 69 работ зарубежных авторов и приложения. Работа изложена на 124 страницах машинописного текста, иллюстрирована 8 таблицами и 29 рисунками.

Материалы и методы исследований

В качестве материалов используемых для синтеза сорбентов использованы целлюлоза микрокристаллическая производства Lachema (Chemapol, Praha-Crechoslovakia), (С6Н10О5)п, с молекулярной массой (162,14)п, аэросил (ГОСТ 9428-60) с содержанием основного вещества Si02 — 99%,, СоС12 х.ч., AgN03 х.ч.

В качестве модификатора поверхности сорбентов использовался натив-ный казеин и его фракции. Объектами исследования служили синтезированные сорбенты.

Структуру полученных сорбентов исследовали с помощью инфракрасного Фурье- спектрометра «Infralum FT— 810». Адсорбцию ионов кобальта определяли фотоколориметрически на ФЭК-56 с зеленым светофильтром при длине волны Х= 590 нм. Адсорбцию ионов серебра проверяли методом титриметрии. Определение молекулярных параметров мицеллы казеина проводили методом статистического лазерного светорассеяния на приборе LS-01 (VA Instruments, Санкт-Петербург, Россия), используя вертикально-поляризованный свет с длиной волны 633 нм. Анализ сорбции лекарственных препаратов проводили методом ГЖХ на хроматографе «ЦВЕТ-500». Для анализа адсорбции феназепама использовали метод спек-трофотометрии в УФ области на приборе AQV-50 фирмы «Shimadzu».

Экспериментальные данные обрабатывались с помощью статистического комплекса Statistic V6 с привлечением пакета программ статистические нейронные сети (Statistic Neural Networks).

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Синтез сорбентов. Рассмотрены модели синтеза сорбентов, используемых в дальнейшем для энтеросорбции. Синтез сорбентов осуществлен методом формирования пористой структуры носителя в присутствии казеина.

В качестве основного компонента синтеза выбран аэросил - материал на основе диоксида кремния Si02, поверхность которого содержит сила-нольные группы (-Si-OH), способные к участию в ковалентном связывании и микрокристаллическая целлюлоза МКЦ, которая по своим свойствам близка к натуральной целлюлозе, встречающейся в виде естественного компонента в пищевых продуктах. Как и другие пищевые волокна действует в организме двумя путями: механически и сорбционно, кроме того, МКЦ сорбирует тяжелые металлы, радионуклиды и т.п.

В качестве модификатора поверхности выбрана фракция молочного белка - казеина, так как он имеет уникальное расположение гидрофобно-гидро-фильных структур, обусловливающих их отличие в поверхностно-активных свойствах этого белка от других, и обладает более слабым поверхностным натяжением, что способствует более полной адсорбции на поверхности.

Технологии получения сорбентов на основе казеина, иммобилизованного на МКЦ и аэросиле, представлены на рисунках 1 и 2.

Рисунок 1 - Схема получение Рисунок 2 - Схема получения

сорбента на основе сорбентов на основе неорганического

микрокристаллической целлюлозы носителя аэросила

Исследование емкости сорбентов относительно ионов серебра и кобальта. Для решения поставленных задач проведены исследования сорбцион-ной емкости сорбентов относительно ионов серебра и кобальта. На рисунке 3 представлены данные по удельной адсорбции относительно ионов серебра компонентов сорбента и самого сорбента.

Кривая адсорбции сорбента МКЦ + казеин (рис.3) имеет вид изотермы адсорбции Ленгмюра и описывается уравнением локализованной адсорбции на однородной поверхности при адсорбции в виде мономолекулярного слоя. Адсорбционные процессы на поверхности сорбента аэросил + казеин по ионам ^^представлены кривой, характерной для полислойной адсорбции,

и могут быть описаны уравнением Брунауэра, Эммета и Теллера (БЭТ). В этой связи можно предположить, что имеет место взаимодействие молекул адсорбата друг с другом, где каждый адсорбированный поверхностью ион становится центром связывания с ионом из раствора.

Для выяснения вопроса о том, как влияют процессы сорбции ионов на структуру казеина, с тем, чтобы в дальнейшем дать оценку роли белкового комплекса в получении носителей, проведен анализ влияния ионов серебра на мицеллу казеина методами статистического и динамического светорассеяния.

Данные светорассеяния, свидетельствуют о диссоциации мицелл казеина в присутствии ионов серебра в изученном диапазоне (от 0,01 до 0,1М) в 1М СН3СООН (рН 2,9), т.е. ниже ИЭТ белка (рН 4,8). Этот результат обусловлен нарушением внутримолекулярных электростатических взаимодействий, стабилизирующих мицеллу казеина в диапазоне рН от 3 до 5,5 в результате экранирования части заряженных групп казеина ионами серебра.

Сопоставляя данные по адсорбции ионов серебра из раствора на поверхность сорбента с результатами исследований их влияния на структуру мицеллы казеина, можно отметить, что при растворении казеина, в данном случае в 1М растворе уксусной кислоты, глобулярная форма наноча-стиц казеина нарушается. Гетерогенизация поверхности твердой матрицы вновь образованным комплексом дает возможность увеличить количество активных групп на носителе, что является следствием изменения повышения внутримолекулярного взаимодействия, стабилизирующего структуру мицеллы казеина. Кроме того, казеин жестко закреплен на носителе, что дает возможность избежать диссоциации его наночастиц под воздействием различных ионов в растворе и получить термодинамически устойчивый сорбционный комплекс.

а |

5 п 4 -

3 -2 -

3 § н 0

0.1

-Казеин -МКЦ

- МЕСЦ+5мас.% казеина

0.2 0,3 0.4

С рап. мэлъ/я

Рисунок 3 - Удельная адсорбция относительно ионов Ag+ компонентов, составляющих структуру сорбента и самого сорбента на основе микрокристаллической целлюлозы (МКЦ) и казеина

0,2 -0 -0

1.4 -1 1.2 -

0,1 0,2 0,3 0,4

Проведены исследования сорбцион-ной емкости разработанных сорбентов относительно ионов кобальта. На рисунке 4 представлены данные по удельной адсорбции сорбента аэроси-л+казеин и его компонентов относительно

♦ Казеин

С раек Со2+а людь/а

—»—Аэросил

• * Аэросил+5мас.% казеина

Рисунок 4 - Удельная адсорбция относительно ионов кобальта.

Со2+на поверхность сорбента из раствора, можно сделать вывод, что они подобны кривым на рисунке 3. Разница состоит лишь в том, что процент связывания ионов кобальта с сорбентом на основе МКЦ и казеина выше, чем сорбента на основе аэросила и казеина.

Данное обстоятельство можно объяснить не только процессами, связанными с наличием активных групп, входящих в состав казеинового комплекса, но и самой структурой сорбционной матрицы. Кроме того, ионы кобальта в отличие от ионов серебра оказывают незначительное влияние на мицеллу казеина, тем самым, не нарушая имеющих место межмолекулярных взаимодействий.

Сопоставляя полученные результаты адсорбционных процессов, протекающих на поверхности компонентов, входящих в состав сорбента аэросил + казеин, и самого сорбента можно сделать выводы, что казеин, гетерогенизи-рованный на поверхности носителя, значительно увеличивает сорбционную емкость. Этот результат наглядно демонстрирует рисунок 4. В связи с этим целесообразно оценить влияние массовой доли казеина в сорбенте на изменение удельной поверхности носителя и, следовательно, изменение сорбционной емкости. Полученные данные оценки представлены в таблице 1.

Анализ результатов исследования подтверждает предположение о том, что увеличение массовой доли казеина уменьшает удельную поверхность сорбента, формируя тем самым пористую структуру носителя посредством сшивания белковых молекул, находящихся на поверхности и, кроме того, поверхностные группы вносят значительный вклад в процессы адсорбции из раствора.

ионов Со2+компонентов, составляющих структуру сорбента и самого сорбента на основе аэросила и казеина

Анализируя кривые адсорбции относительно различной концентрации ионов

Таблица 1 - Влияние массовой доли казеина на изменение удельной поверхности и сорбционных свойств сорбентов на основе аэросила и казеина

Образец Компонентный состав Удельная поверхность Буд^'/г Сорбционная емкость сорбентов по ионам, §=(Со - СКУ Со-100%, отн. %

Ай+ Со

1 Аэросил 175 14,0±0.2 24,1±0,2

2 Аэросил + 1 мас.% казеина 35±0,1 26,2±0,3 30,(Ш),1

3 Аэросил + 3 мас.% казеина 27±0,1 42,4±0,1 33,6±0Л

4 Аэросил + 5 мас.% казеина 24±0,1 65,2±0,2 58,8±0,2

Р<0,05; п=3

Проведена оптимизация факторов: удельной поверхности носителя и массовой доли казеина, влияющих на адсорбционные свойства сорбентов. Для этой цели применено униформ-ротатабельное планирование эксперимента.

Пусть,

X, — процент казеина, мае. %;

Х2 — удельная поверхность сорбента, м2/г.

Эти факторы совместимы и не коррелируют между собой.

По полученным результатам выведено уравнение регрессии в натуральном выражении, характеризующее удельную адсорбцию сорбентов на основе аэросила и казеина (У, 2 - ммоль/г сорбента) относительно процентного содержания казеина в сорбенте и удельной поверхности носителя:

У1,2= Ь1 + Ь2'Х1 + Ь3,Х2 + + Ь4'ХГХ2 + Ь5'Х12 + Ьб'Х22

Адекватность этого уравнения была проверена по критериям Фишера. Вероятность составила 0,95 при уровне значимости 0,05.

На рисунках 5, 6 в результате реализации матрицы планирования, показано влияние входных факторов на выходные данные. В частности, на рисунках представлены поверхности отклика, которые характеризуют зависимость величины удельной адсорбции ионов серебра и кобальта (У12), соответственно, от заданных параметров (Х,,Х2).

В результате исследований было установлено, что максимальная адсорбция по ионам серебра и кобальта наблюдается при концентрации казеина от 4 до 8 мае. %, удельной поверхности от 20 до 40 м2 /г сорбента. В данном случае можно заключить, что адсорбционные процессы протекают на поверхности, которая содержит большое число активных групп, входящих в состав казеинового комплекса, гетерогенизированного на аэросиле.

зи Э^&ев РЫ (1-3 3^100 с) 2 - 9,6457+0,4181 *х-0,0б5*у-0,0128*х**^0,0021 *^"у-0Д'О1*у*у

Удел____________г________

м^гсорбента

Концентрация казеина, ыас.%

12 8 4 0

Рисунок 5 - Диаграмма оптимизации величины удельной поверхности и концентрации казеина при анализе адсорбционных свойств сорбента аэросил + казеин относительно ионов серебра

Рисунок 6 — Диаграмма оптимизации величины удельной поверхности и концентрации казеина при анализе адсорбционных свойств сорбента аэросил + казеин относительно ионов кобальта

Использование разработанных сорбентов в качестве энтеросорбентов.

В связи с этим исследовали эффективность использования полученных сорбентов как средств, предназначенных для очищения организма от токсикантов

30 Эг^асе РЫ(2-2 ЗУЧООс) Z - -0,0743+0,0507*х-0,0057*у-0,0005 *х*х+5Д587Е-.3 *х*у+5,2441Б-7 *у *у

Удельна*

о *

м /г сорбента

2 Концентрация казеина, мае. %

лекарственных препаратов. В качестве лекарственных препаратов использованы препараты димедрола, анестезина, новокаина.

Исследование сорбции избыточных доз лекарственных препаратов проводили в среде «искусственного» желудочного сока. На рисунках 7 и 8 представлены хроматограммы анестезина до сорбции и после нее соответственно.

Исследована микроструктура разработанных энтеросорбентов на российском микроскопе «МИКМЕД-2» при увеличении от 40 до 80 раз. Были исследованы энтеросорбенты на основе как аэросила, так и микрокристаллической целлюлозы с различным содержанием казеина. Для систематизации данных и определения размеров частиц были сделаны микрофотографии на фоне шкалы размером 1000 мкм (1 мм) с минимальным делением 10 мкм.

Рисунок 7 - Хроматограмма Рисунок 8 - Хроматограмма содержания анестезина в содержания анестезина в

растворе до сорбции растворе после сорбции

Полученные результаты подтверждаются анализом структурных характеристик, изученных другими методами.

Для анализа групп, находящихся на поверхности энтеросорбента, которые участвуют в процессе связывания ионов серебра и кобальта, а также лекарственных препаратов сняты ИК - спектры.

По данным ИК- спектроскопии наблюдается сдвет основного волнового числа и небольшое изменение формы пика, соответствующего волновым числам 3300 см1, 1620 см"1 и 1100 см1, что свидетельствует об образовании связей между катионами серебра и кобальта и группами С-О, N-11 и БьО-Б!, находящимися на поверхности энтеросорбента. Наличие полосы поглощения около 1600 см ? в спектрах указывает на наличия гидроксильных групп, принадлежащих адсорбированным молекулам.

Кремнеземы с гидроксилированной поверхностью специфически адсорбируют молекулы, обладающие звеньями или связями с локально сосредоточенной на периферии электронной плотностью — свободными электронными парами, п- связями (вода, спирты, амины и т.д.).

Вместе с тем благодаря слабо кислому характеру силанольных гидро-ксильных групп на поверхности чистых образцов кремнеземов передача протона на адсорбированные молекулы не происходит, и взаимодействие ограничивается образованием с молекулами водородных связей.

Наличие в спектрах поглощения валентных колебаний свободных функциональных карбонильных и иммино-групп подтверждает химическую модификацию казеином. Эти группы в свою очередь способны к разнообразным специфическим взаимодействиям, что подтверждается графиками влияния концентрации лекарственных препаратов на удельную адсорбцию (рис. 9,10).

180

1 160 140

1С (2, О о 5 к носителя 120 100 60 60

3 КС >1 40 20 0

0 5 10 15 20

-♦- А-380+5% казеина А-175+5% казеина С раВН" мг/мп

Рисунок 9 - Влияние концентрации новокаина на удельную адсорбцию

Рисунок 10 — Влияние концентрации димедрола на удельную адсорбцию

Зависимости удельной адсорбции анестезина, новокаина и димедрола от времени представлены на рисунках 11, 12 и 13 соответственно.

"8.

Время, ч

I А-380+3% казеина Р А-175+5% казеина

Рисунок 11 — Зависимость удельной адсорбции анестезина от времени

ю 5 & §

¡2

1 2 12

Время, ч

! А-380+5% казеина □ А-175+3% казеина

Рисунок 12 — Зависимость удельной адсорбции новокаина от времени

Рисунок 13

ю В

о. С?

О «

й- ё

з 1

з «

>а 1-,

И 2

« **

175+5% казеина □А-380+3% казеина

Зависимость удельной адсорбции димедрола от времени

Как видно из графиков максимальная адсорбция для анестезина наступает уже по истечении 2 часов, а для новокаина и димедрола время максимальной адсорбции составляет 12 часов.

Полученные данные по удельной адсорбции свидетельствуют о значительной сорбционной емкости разработанных энтеросорбентов относительно избыточных доз лекарственных препаратов, в частности таких, как анестезин, новокаин и димедрол.

Для оценки безопасности использования энтеросорбентов в качестве средств, применяемых при передозировке лекарственными препаратами исследованы процессы десорбции в среде «искусственного» кишечного сока, для того, чтобы избежать вторичной интоксикации, избыточными дозами препарата.

Полученные данные свидетельствует о незначительной десорбции или об ее отсутствии. Исходя из этого, можно исключить возможность повторной интоксикации вследствие десорбции в кишечнике комплекса энтеро-сорбент - лекарственный препарат.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В соответствии с целью и поставленными задачами проведенных исследований по одному из основных направлений биотехнологии - разработке новых сорбционных материалов с заданными свойствами- удалось разработать матрицы, которые обладают рядом преимуществ: развитой удельной поверхностью, термостабильностью, механической устойчивостью, малым изменением объема гранул при изменении рН или ионной силы, наличием функциональных групп, пригодных для селективной иммобилизации.

Разработана технология получения базовых энтеросорбентов на основе микрокристаллической целлюлозы (МКЦ) и пирогенной двуокиси кремния аэросила путем гетерогенизации поверхности природным высокомолекулярным соединением белковой природы - казеином.

Установлено влияние модификатора поверхности — казеина на структурные характеристики и сорбционную емкость сорбента. Выявлено, что с увеличением содержания казеина уменьшается удельная поверхность сорбентов. Соответственно меняются и радиусы мезопор сорбентов, так как пористая структура формируется посредством сшивания белковых молекул, находящихся на поверхности, с образованием крупнопористых частиц сорбента.

Полученные данные по удельной адсорбции свидетельствуют о значительной сорбционной емкости разработанных энтеросорбентов относительно избыточных доз лекарственных препаратов, в частности таких, как, анестезин, новокаин и димедрол.

ВЫВОДЫ

1. Теоретически обоснована и практически доказана возможность использования белкового комплекса казеина для синтеза высокоэффективных сорбентов. Разработана технология получения базовой модели сорбентов на основе микрокристаллической целлюлозы и пирогенной двуокиси кремния аэросипа, поверхность которых гетерогенезирована белковым комплексом.

2. Изучена сорбционная емкость сорбентов относительно ионов серебра и кобальта. Кривая адсорбции сорбента МКЦ + казеин имеет вид изотермы адсорбции Ленгмюра и описывается уравнением локализованной адсорбции на однородной поверхности при адсорбции в виде мономолекулярного слоя. Адсорбционные процессы на поверхности сорбента аэро-сил + казеин относительно ионов -¿¿^представлены кривой, характерной для полислойной адсорбции.

3. Исследовано влияние ионов адсорбента на структуру субмицеллы казеина. Данные светорассеяния свидетельствуют о диссоциации мицелл казеина в присутствии ионов серебра в изученном диапазоне концентраций (от 0.01 до 0.1М) в 1М СН3СООН (рН 2.9), т.е. ниже ИЭТ белка (рН 4.8). При этом, диссоциация мицелл казеина сопровождается понижением гид-рофильности белковой поверхности, что обусловлено как экспонированием гидрофобных участков казеина в водную среду в результате диссоциации мицелл казеина, так и экранированием заряда на белке за счёт добавления AgN03. Последнее - наиболее очевидно при наибольшей изученной концентрации нитрата серебра, а именно 0.1 М.

4. Проведена оптимизация факторов: удельной поверхности носителя и массовой доли казеина, влияющих на адсорбционные свойства сорбентов. Установлено, что максимальная адсорбция по ионам серебра и кобальта наблюдается при концентрации казеина от 4 до 8 мае. %, удельной поверхности от 20 до 40 м2 /г сорбента. В данном случае можно заключить, что адсорбционные процессы протекают на поверхности, которая содержит большое число активных групп, входящих в состав казеинового комплекса, гетерогенизированного на аэросиле.

5. Исследована возможность использования энтеросорбентов в качестве средств, применяемых при передозировках лекарственными препаратами. В среде «искусственного» желудочного сока изучены процессы сорб-

ции избыточных доз таких лекарственных препаратов как анестезин, новокаин и димедрол. Сорбционная емкость для различных препаратов варьирует в диапазоне от 45% до 90%. Проведенные исследования по десорбции лекарственных препаратов с разработанных энтеросорбентов в среде «искусственного» кишечного сока показали, что десорбция во всех случаях не превышала 1-2%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

В технологии получения полифукциональных энтеросорбентов рекомендуем в качестве исходных компонентов для синтеза использовать микрокристаллическую целлюлозу, аэросил с удельной поверхностью 200-380 м2/г, казеин в концентрации 5 мас.%. Для суспендирования казеина использовать гидроксид натрия с концентрацией не более 10%.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Воробьева О.В., Кунижев С.М., Анисенко О.В., Филь A.A., Бородина ТЛ. Биосорбенты на основе казеина // Материалы VII Всероссийского Конгресса «Политика здорового питания в России». — Москва, 12-14 ноября 2003.-С.108-109.

2. Воробьева О.В., Кунижев С.М., Анисенко О.В, Филь A.A.. Сорбенты на основе белкового комплекса казеина. I. Структурные характеристики сорбентов // Вестник Ставропольского государственного университета. — 2003.-Вып. 34.-С. 111-115.

3. Воробьева О.В., Анисенко О.В., Филь A.A., Кальницкая Е.Н О возможности использования биосорбентов для решения экологических проблем химических производств // Материалы XVI Международной научно-технической конференции. Апрель 2003г., "Химические реактивы, реагенты и процессы малотоннажной химии". - Уфа, 2003. - С. 184-189.

4. Воробьева О.В., Анисенко О.В., Филь A.A. Сорбционные свойства адсорбентов на основе природных полимерных носителей// Материалы. Всероссийской научной конференции 17 мая, «Катализ и сорбция биотехнологии, химии, химических технологиях и экологии». — Тверь, 2003. - С.61-63.

5. Воробьева О.В., Филь A.A., Анисенко О.В. Биотехнология энтеросорбентов // Материалы II Московского международного Конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития».—Москва, 10-14 ноября 2003. - ч.2 - С.243.

6. Анисенко О.В., Кальницкая E.H., Филь A.A. Проблема синтеза биосорбентов на основе аэросила и казеина // 7-ая Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология — наука XXI века». 14-18 апреля 2003 года. — Пущино, 2003. - С.85.

7. Воробьева О.В., Кунижев С.М., Анисенко О.В., Филь A.A. Сорбенты для медицинской биотехнологии // Наука Москвы и регионов. - 2004. - № 1. - С.71-74.

8. Филь A.A., Воробьева О.В., Степовенко О.В. Синтез сорбентов, содержащих ионы серебра // Материалы второго съезда общества биотехнологов России.- Москва, 2004.-С. 147-148.

9. Воробьева О.В., Кунижев С.М., Анисенко О.В, Филь A.A.. Исследование свойств биосорбентов медицинского назначения // Материалы III Московского международного Конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития». - Москва, 14-18 марта 2005. - 4.1 - С.325.

10. Анисенко О.В., Филь A.A., Воробьева О.В., Щербатенко A.B. Разработка методов иммобилизации в-галактозидазы // 9-ая Путинская школа-конференция молодых ученых «Биология - наука XXI века». 18-22 апреля 2005 года.-Пущино,2005.-С.336-337.

И. Филь A.A., Воробьева О.В., Анисенко О.В., Сгеповенко О.В. Использование сорбентов для выведения из организма токсикантов лекарственных препаратов // 9-ая Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология - наука XXI века». 18-22 апреля 2005 года. - Пущино, 2005. - С.367.

12. S. М. Kunizhev, O.V. Vorobyeva, A.A. Fill. Biosorbents for reception of biocatalysts of medical purpose// Nova Science Publishers, Industrial Application of Biotechnology, New York, 2005. - Gl. VI.

13. Филь A.A. Энтеросорбенты как антидоты // Материалы третьего съезда общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова.- Москва,

2005.-С. 147-148.

14. Воробьева О.В., Филь A.A., Жарникова Т.В., Яворчук Т.В. Сорбенты для диагностики особо опасных инфекций // Материалы Московской международной конференции «Биотехнология и медицина». — Москва,

2006.-С.243.

15. Филь A.A., Воробьева О.В., Аванесян С.С., Карчинская Т.А. Биотехнология получения антидотов // Материалы Московской международной конференции «Биотехнология и медицина». - Москва, 2006. - С.397.

16. Пат. 2257951 Российская Федерация, МПК8 В 01 J 20/00. Способ получения сорбентов / Кунижев С.М., Воробьева О.В., Филь АЛ, Анисенко О.В., Бородина Т.Н.; заявитель и патентообладатель Ставропольский государственный университет. -№2004115003/15 ; заявл. 18.05.04 ; опубл. 10.08.05, Бюл. № 48 (II ч.). - 5 с.

Подписано в печать 26.10.2006 Формат 60x84 1/16 Усл.печ.л. 1,1 Уч.-изд.л. 0,98 Бумага офсетная__Тираж 100 экз._ Заказ 380

Отпечатано в Издательско-полиграфическом комплексе Ставропольского государственного университета. 355009, Ставрополь, ул.Пушкина, 1.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Филь, Аревик Аркадиевна

Введение

ГЛАВА 1. СОРБЦИОННЫЕ МАТЕРИАЛЫ В МЕДИЦИНЕ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТЩОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

ГЛАВА 2. НОСИТЕЛИ ДЛЯ ИММОБИЛИЗАЦИИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

2.1 Особенности носителей, используемых для иммобилизации биологически активных веществ

2.1.1 Органические полимерные носители

2.1.2 Носители на основе дисперсных кремнеземов

2.2 Модифицирование поверхности твердых носителей макромолекулами биополимеров

ГЛАВА 3. ОБЪЕКТЫ, УСЛОВИЯ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Характеристика реагентов используемых для получения сорбентов

3.2 Организация работы и методы планирования эксперимента

3.3 Методы определения структуры сорбентов

3.4 Методы определения сорбционной емкости сорбентов

3.5 Методы определения мицеллы казеина

3.6 Методы математической и статистической обработки

ГЛАВА 4. СИНТЕЗ БАЗОВЫХ СОРБЕНТОВ

ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЯ СВОЙСТВ РАЗРАБОТАННЫХ СОРБЕНТОВ

ГЛАВА 6. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ СОРБЕНТОВ В КАЧЕСТВЕ ПРЕПАРАТОВ, ПРИМЕНЯЕМЫХ ПРИ ОТРАВЛЕНИЯХ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биотехнология получения сорбционных материалов (энтеросорбентов) с заданными свойствами"

Актуальность проблемы. Основные направления современной биотехнологии предусматривают разработку сорбционных материалов с целью дальнейшего их использования при конструировании высокоэффективных препаратов для гемо- и энтеросорбции, препаратов иммобилизованных ферментов, тест-систем для иммуноферментного и иммунофлуоресцентного анализа.

Среди различных методов синтеза носителей для иммобилизации биологических комплексов перспективно направление биотехнологии по получению композиционных сорбентов с заданными свойствами (Weyl W., 1951; Leboda R., 1978; Брыкалов A.B., 1996; Ефременко В.И., 1996). Данные носители отличаются стандартностью состава, обладают высокой проницаемостью для соответствующего субстрата, исключают неспецифическую сорбцию и подверженность микробиологической атаке.

Использование в качестве основы энтеросорбентов микрокристаллической целлюлозы обусловлено тем, что она естественным образом улучшает самоочищение кишечника. Обладая тонизирующим действием на ткани кишечника, усиливает перистальтику и помогает избавиться от старых токсичных загрязнений и слизи, тем самым улучшая усвоение питательных веществ и воды.

Модифицированием поверхности МКЦ и аэросила можно увеличить сорбционную способность энтеросорбента. Использование в качестве модификатора белкового комплекса казеина позволяет энтеросорбенту сочетать свойства как адсорбента, так и хемосорбента.

Поэтому для медицинской биотехнологии актуальным является разработка сорбционных материалов с заданными свойствами и дальнейшее их применение в медицине и медицинской промышленности в качестве специфических материалов для энтеросорбции, в частности, разработка эффективного и безопасного энтеросорбента в качестве антидота, предназначенного для очищения организма от токсикантов лекарственных препаратов.

Цель работы и задачи исследования. Цель диссертационной работы -разработка энтеросорбентов с заданными полифункциональными свойствами.

Для достижения поставленной цели в работе решались следующие задачи:

- синтезировать базовые сорбенты на основе микрокристаллической целлюлозы и аэросила с различным содержанием казеина, гетерогенизиро-ванного на поверхности жесткой матрицы;

- изучить сорбционную емкость разработанных сорбентов относительно ионов серебра и кобальта;

- исследовать влияние ионов адсорбента (на примере ионов серебра) на структуру субмицеллы казеина;

- оптимизировать факторы: удельной поверхности носителя и массовой доли казеина, влияющих на адсорбционные свойства сорбентов;

- рассмотреть возможности использования разработанных сорбентов в качестве основы для энтеросорбции относительно избытка лекарственных препаратов, вызывающих отравления.

Изучены сорбционные свойства разработанных материалов относительно одно- и двухвалентного ионов. В работе представлены данные о влиянии ионов серебра на структуру субмицеллы казеина. Они свидетельствуют о значительной диссоциации мицелл казеина в присутствии ионов серебра в изученном диапазоне концентраций (от 0,01 до ОДМ) в 1М СН3СООН (рН 2,9), т.е. ниже ИЭТ белка (рН 4,8).

Впервые данные сорбенты использованы в качестве основы для энтеро-сорбции избытка лекарственных препаратов.

Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретически обоснована и практически доказана возможность использования белкового комплекса казеина для синтеза высокоэффективных сорбентов. Разработана базовая модель полифункционального энтеросорбента. Разработан и утвержден пакет нормативно-технической документации на препарат (ТУ 9229014-02080718-06), Коллективом авторов (Кунижев С.М., Воробьева О.В, Филь А.А., Анисенко О.В., Бородина Т.Н.) получены положительное решение на выдачу патента по заявке «Способ получения иммобилизованной уреазы» (№2004115002 от 17 мая 2004г.) и патент по заявке «Способ получения сорбента» (№ 2257951 от 17 мая 2004г).

В рамках VII Международного выставки - салона «Высокие технологии. Инновации и инвестиции» (г. Санкт-Петербург) проекту «Сорбционные материалы в промышленности» Оргкомитетом присуждена золотая медаль. На

IV Московском международном салоне инноваций и инвестиций разработка отмечена серебряной медалью (Москва, 2005). На Московской международной выставке «Биотехнология и медицина» (Москва, 2006) разработки Сорбент и Антидот отмечены бронзовой медалью.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. технология получения сорбентов с заданными свойствами на основе микрокристаллической целлюлозы и аэросила, гетерогени-зированных белковым комплексом казеина;

2. влияние ионов серебра на структуру субмицеллы казеина, гетеро-генизированного на носителе;

3. оптимизация массовой доли белкового комплекса при формировании пористой структуры сорбента;

4. определение сорбционной емкости разработанных энтеросорбен-тов относительно лекарственных препаратов.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научно-практических конференциях:

VII Международной выставке - салоне «Высокие технологии. Инновации и инвестиции» (Санкт-Петербург, 2002), XIV международной научно-технической конференции «Реактив - 2003» (Москва, 2003), 7-ой Пущинской школе-конференции «Биология - наука 21 века» (Пущино, 2003), Всероссийской научной конференции, «Катализ и сорбция в биотехнологии, химии, химических технологиях и экологии» (Тверь, 2003), XVI Международной научно-технической конференции. «Химические реактивы, реагенты и процессы малотоннажной химии» (Уфа, 2003), 9-ой Пущинской школе-конференции «Биология - наука 21 века» (Пущино, 2005), Московской международной выставке «Биотехнология и медицина» (Москва, 2006).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 15 научных работ и патент.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, 5 глав теоретических и экспериментальных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 207 работ, в том числе 138 работ отечественных авторов и 69 работ зарубежных авторов и приложения. Работа изложена на 116 страницах машинописного текста, иллюстрирована 8 таблицами и 29 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Филь, Аревик Аркадиевна

выводы

1. Теоретически обоснована и практически доказана возможность использования белкового комплекса казеина для синтеза высокоэффективных сорбентов. Разработана технология получения базовой модели сорбентов на основе микрокристаллической целлюлозы и пирогенной двуокиси кремния (аэросила), поверхность которых гетерогенезирована белковым комплексом.

2. Изучена сорбционная емкость сорбентов относительно ионов серебра и кобальта. Кривая адсорбции сорбента МКЦ + казеин имеет вид изотермы адсорбции Ленгмюра и описывается уравнением локализованной адсорбции на однородной поверхности при адсорбции в виде мономолекулярного слоя. Адсорбционные процессы на поверхности сорбента аэросил + казеин относительно ионов ^'представлены кривой, характерной для полислойной адсорбции.

3. Исследовано влияние ионов адсорбента на структуру субмицеллы казеина. Данные светорассеяния свидетельствуют о диссоциации мицелл казеина в присутствии ионов серебра в изученном диапазоне концентраций (от 0.01 до 0.1М) в 1М СНзСООН (рН 2.9), т.е. ниже ИЭТ белка (рН 4.8). При этом, диссоциация мицелл казеина сопровождается понижением гидрофильности белковой поверхности, что обусловлено как экспонированием гидрофобных участков казеина в водную среду в результате диссоциации мицелл казеина, так и экранированием заряда на белке за счёт добавления AgNOз. Последнее - наиболее очевидно при наибольшей изученной концентрации нитрата серебра, а именно 0.1М.

5. Исследована возможность использования энтеросорбентов в качестве средств, применяемых при передозировках лекарственными препаратами. В среде «искусственного желудочного сока» изучены процессы сорбции избыточных доз таких лекарственных препаратов как анестезин, новокаин и димедрол. Сорбционная емкость для различных препаратов варьирует в диапазоне от 45% до 90%). Проведенные исследования по десорбции лекарственных препаратов с разработанных энтеросорбентов в среде «искусственного» кишечного сока показали, что десорбция во всех случаях не превышала 1-2%.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В соответствии с целью и поставленными задачами проведенных исследований по одному из основных направлений биотехнологии - разработке новых сорбционных материалов с заданными свойствами- удалось разработать базовые матрицы, которые обладают рядом преимуществ: развитой удельной поверхностью, термостабильностью, механической устойчивостью, малым изменением объема гранул при изменении рН или ионной силы, наличием функциональных групп, пригодных для селективной химической модификации.

Разработана технология получения базовых энтеросорбентов на основе микрокристаллической целлюлозы (МКЦ) и пирогенной двуокиси кремния (аэросила) путем гетерогенизации поверхности природным высокомолекулярным соединением белковой природы - казеином. Технологический процесс синтеза энтеросорбентов включал следующие стадии: получение гидрогеля на основе аэросила и казеина, переход гидрогеля в ксерогель, механическое измельчение и фракционирование.

Установлено влияние модификатора поверхности - казеина на структурные характеристики и сорбционную емкость сорбента. Выявлено, что с увеличением содержания казеина уменьшается удельная поверхность сорбентов. Соответственно меняются и радиусы мезопор сорбентов, так как пористая структура формируется посредством сшивания белковых молекул, находящихся на поверхности, с образованием крупнопористых частиц сорбента. Также при синтезе данных сорбционных материалов в качестве растворителя казеина был использован раствор щелочи (гидроксид натрия), присутствие которого способствует агрегации мицелл в крупные частицы, что в свою очередь значительно увеличивает объем мезопор.

Изучена удельная адсорбция относительно ионов серебра и кобальта. Проведены исследования по влиянию ионов адсорбента (на примере серебра) на структуру субмицеллы казеина.

Для разработанных энтеросорбентов сняты ИК-спектры для анализа поверхностных групп. Данные ИК-спектроскопии показали, что разработанные энтеросорбенты имеют большое количество активных групп, входящих в состав белкового комплекса, иммобилизованного на поверхности носителя и способствующих протеканию адсорбционных процессов из раствора на поверхность.

Развитая поверхность и присутствие большого числа активных функциональных групп, входящих в состав казеинового комплекса, иммобилизованного на аэросиле и микрокристаллической целлюлозе, позволила использовать сорбенты в качестве матриц для иммобилизации избыточных доз лекарственных препаратов.

Полученные данные по удельной адсорбции свидетельствуют о значительной сорбционной емкости разработанных энтеросорбентов относительно избыточных доз лекарственных препаратов, в частности таких, как, анестезин, новокаин и димедрол.

Все исследования сорбции лекарственных препаратов были проведены в условиях «искусственного желудочного сока». Были исследованы также процессы десорбции в условиях «искусственного кишечного сока». Во многих случаях процессы десорбции вообще отсутствуют, а иногда не превышают 0,13%. Полученные данные говорят о возможности использования данных сорбционных материалов в качестве антидотов в медицине и медицинской промышленности.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Филь, Аревик Аркадиевна, Ставрополь

1. Алексеева Н.Ю., Аристова В.П., Патратий А.П. Состав и свойства молока как сырья для молочной промышленности: Справочник. - М.: Агро-промиздат, 1986. -С.238.

2. Алесковский В.Б. Стехиометрия и синтез твердых соединений. -Л.: Наука, 1976.- 139 с.

3. Анисенко О.В., Кунижев С.М., Денисова Е.В., Воробьева О.В. Разработка биосорбентов на основе ß-казеина и аэросила // 6-я Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология-наука XXI века».- Тула, 2002. Tl. - С.211.

4. Анисенко О.В., Степавенко О.В., Щербатенко A.B. Способы иммобилизации уреазы на неорганических носителях // «Биология наука XXI века» 8-я международная Пущинская школа-конференция молодых ученых. 17-21 мая 2004 -Пущино, 2004. - С.249.

5. Ахрем A.A., Свиридонов О.В., Стельченок O.A. Способ иммобилизации протосубтилина // АС №810815,С12N11/00-1981.

6. Бебрис Н.К., Киселев A.B., Никитин Ю.С. Получение чистого макропористого кремнезема аэросила адсорбента для газовой хроматографии// Коллоидный журнал. 1967. - Т.29. - №3. - С. 326 - 332.

7. Безбородов A.M., Куликова A.K. Фундаментальные науки народному хозяйству. - М.: Наука,1990. - С.253-255.

8. Белявская Т.А., Большова Т.А., Брыкина Г.Д. Хроматография неорганических веществ. М.: Высшая школа, 1986 г. 296 с.

9. Березин И.В., Мартынек K.M. Введение в прикладную энзимоло-гию.-М.: МГУ, 1982. С.26-100.

10. Березин И.В., Клесов Л.А. Практический курс химии ферментативной кинетики. М.: МГУ, 1976. - С.15-17.

11. Брей В.В. Теоретическая и экспериментальная химия. 1982. -Т. 18. - №1. - С. 122- 125.

12. Бробст K.M. Методы исследования углеводов. -М.: Мир, 1975. -348 с.

13. Брухман Э.Э. Прикладная биохимия. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981.-294 с.

14. Брыляков В.М., Хасанханова М.Н., Шаповалов О.И. Способ получения микрокристаллической целлюлозы // SV 1479455.С08В15/02. -1974.

15. Варфоломеев С.Д., Гуревич К.Г. Биокинетика: практический курс. -М.: Гранд, 1999. 715 с.

16. Варфоломеев С.Д., Калюжный С.В. Биотехнология. Кинетические основы микробиологических процессов. М.: Высшая школа, 1990. -304с.

17. Вериченко С.Б., Повжиткова М.С., Лысенко М.К. Адсорбция пепсина желудочного сока активированным углем // Физиол. журнал. -1986. Т. 32, №3. - С. 293 - 297.

18. Волькенштейн М.В. Структура и стабильность биологических макромолекул. -М.: Мир, 1973. 85 с.

19. Волькенштейн Ф.Ф. Электронные процессы на поверхности полупроводников при хемосорбции,- М.:Наука, 1987. -432 с.

20. Воробьева О.В., Анисенко О.В. Сорбенты на основе белкового комплекса казеина. I. Структурные характеристики сорбентов // Вестник Ставропольского государственного университета. 2003. - Вып. 34. -С. 111-115.

21. Гайда A.B., Староверов С.М. Модифицированные кремнеземные носители в биотехнологии // Журнал Всес. хим. общества им. Д.И. Менделеева. 1989. - Т.34. - №3. - С.350-361.

22. Гаринова М.И., Лепиянин Г. В., Антонова Л. Ф., Хавкин Ю.А. Способ получения иммобилизованных белков //SV 1500670,C12N11/00. -1989.

23. Герман А.Б., Неклюдов А.Д. Получение и свойства иммобилизованной аминоацилазы Streptoverticilium olivoreticuli // Прикладная биохимия и микробиология. -2001. -Т. 37. № 1. - С. 63-66.

24. Глегг P.E., Танг Л.Дж., Бруэр Р.Дж.Д. Фракционирование Целлюлоза и ее производные. Под ред. Н.Байклза, Л.Сегала. М.: Мир, 1974. -Т.1. - С.382-412.

25. Голиков А.П. Метод расчета кислотно-основных характеристик сорбента по результатам потенциометрического титрования. //Журн.физ.химии, 1995.-Т.69, №4. -С.664-667.

26. Голубев В.Н., Фархан А.Х. Профилактика токсичного отека легких пектиновыми препаратами // Тез. докл. II Межд. симп. "Питание и здоровье: биол. акт. добавки к пище", М. 1996г. М., 1996. - С.36

27. Горбатова К.К. Биохимия молока. М.: Пищевая пром-ть, 1980. -354 с.

28. Грег С., Синг Л. Адсорбция, удельная поверхность, пористость. -М.: Мир,1985. -360 с.

29. Давиденко Т.Н. Трасформация азотсодержащих соединений с использованием биокатализаторов. Атореф. дисс. доктора хим. наук. Физико-химический институт им. A.B. Богатского АН Украины. Одесса, 1989.

30. Давидова Е.Г., Рачинская В.В. Сорбция белков на ионообменных целюлозах // Прикладная биохимия и микробиология. -1977.- Т.З. №3. -С.341-345.

31. Действие водорастворимых сорбентов на внешнесекреторную функцию печени / JI.C. Василевская, Л.Г. Игнатенко, Я.И. Лапук и др. // Вопр. питания. 1992. - №4. - С. 48 - 51.

32. Дубинин М.М. Физико-химические основы сорбционной техники. М.: Госхимтехиздат, 1932. -381с.

33. Дудкин М.С., Щелкунов Л.Ф. Пищевые волокна и новые продукты питания (обзор) // Вопр. питания. 1998. - №2. - С. 35 - 41.

34. Дьяченко П.Ф. Исследование белков молока. Труды ВНИМИ.-1959.-Вып. 19. - С.28-32.

35. Евтюгин Г.А., Будников Г.К., Никольская Е.Б. Биосенсоры для определения ингибиторов ферментов в окружающей среде // Успехи химии. 1999. - Т.68 (12). - С.1142-1160.

36. Еремин А.Н. Соиммобилизация супероксиддисмутазы, каталазы и пероксидазы //Прикладная биохимия и микробиология-2001. -Т. 37. -№ 1.С. 53-62.

37. Ефременко В.И. Магносорбенты в микробиологических исследованиях. Ставрополь, 1996. - 130 с.

38. Жидомиров Г.М., Михейкин И.Д. Кластерное приближение в квантовохимических исследованиях хемосорбции и поверхностных структурам.,1984.-161 с. (Итоги науки и техники.Строение молекул и химическая связь.-М.:ВИНИТИ,1984.Т.9)

39. Золотов Ю.А. Аналитическая химия. В 2-х т. М.: Химия, 1999.-280с.

40. Измайлова В.Н., Ребиндер П А. Структурообразование в белковых системах. -М.: Наука,1974. С.68.

41. Иммергут Э.Х. Целлюлоза. М.: Лесная промышленность, 1967. -С.114-117.

42. Каравайко Г.И., Галицкая Н.Б., Авакян З.А. Способ получения твердых биосорбентов для извлечения металлов // RV 2045574.C12N11/08. -1995.

43. Карнаухов А.П. Глобулярная модель пористых тел корпускулярного строения // Кинетика и катализ. 1971. - Т.12. -№4. - С.1025 - 1033.

44. Кельцев Н.В. Основы адсорбционной техники. М.: Химия, 1984.-С.280.

45. Киселев A.B. Химическое строение силикагеля и его адсорбционные свойства.-в кн.: Повнрхностные химические соединения и их роль в явлениях адсорбции. М.: Издательство московского университета, 1957, с. 90-128.

46. Киселев A.B. Новые адсорбционные методы измерения величины поверхности адсорбентов.- Успехи химии, 1945,14,№5, с. 367-394.

47. Киселев A.B., Лукьянович В.М., Никитин Ю.С. Влияние температуры гидротермальной обработки на изменение структуры пор и скелета модельного силикагеля // Коллоидный журнал. 1969. -Т. 31. -№3. - С.388-393.

48. Киселев A.B., Никитин Ю.С., Оганесян Э.Б. Влияние продолжительности гидротермальной обработки на изменение пор и скелета промышленного силикагеля // Коллоидный журнал. -1969. -Т. 31.- №5.-С.525-531.

49. Клячко Гурвич A.A. Методы определения удельной поверхности.-М.: Изд-во АН СССР, 1961. -№ Ю.-185 с.

50. Колотуша Т.Т., Полонская И.Н., Белякова Л.А. и др. Способ получения носителей для иммобилизации органических соединений // АС №1153975.В 01120/10.- 1985.

51. Кольцов С.И. Синтез твердых веществ методом молекулярного наслаивания. Автореферат дис. докт. хим. наук. Ленинград, 1971.

52. Кольцов С.И., Алесковский В.Б. Силикагель, его строение и физико-химические свойства. Л.: Госхимиздат, 1953.-96 с.

53. Коршак В.В., Штильман М.И. Полимеры в процессах иммобилизации и модификации природных соединений. М.: Наука, 1984. - 264 с.

54. Кочетков Н.К., Бочков А.Ф., Дмитриев Б.А. и др. Химия углеводов. М.: Химия. - 1967. - 350с.

55. Кошелев С.А., Давиденко Т.И., Кирш Ю.Э., Пашкин И.И., Кузькина И.Ф. // Прикладная биохимия и микробиология. -1994. Т.ЗО, №3. -С.349-353.

56. Куликова А.К., Гомартели М.М., Церетели А.К., Безбородов A.M., Квеситадзе Г.И., Билай Т.И. // Прикладная биохимия и микробиология 1989.- Т.25. - № 6. - С.734-746.

57. Куликова А.К., Летунова Е.В. // Прикл. биохимия и микробиология.- 1970. Т.20.- № 1. - С. 133-137.

58. Кулис Ю.Ю., Песлякене М.В. Способ иммобилизации алкоголь-оксидазы.// SU 1615179 1990.

59. Куличинский Ю.Л., Малашенко Т.А., Фирсова В.И. Способ получения белкового сорбента// SU 1680715,С08 Hl/00, B01J20/30, С08 15/20/1991.

60. Краткий справочник физико-химических величин. Ленинград, 1967.- 140 с.

61. Крусир Г.В., Кравченко И.В., Черно Н.К, Давиденко Т.И., Севастьянова Е.В. Иммобилизация ферментов на пищевых волокнах // Прикладная биохимия и микробиология. 1994. - Т.ЗО. - №6. - С. 849 - 856.

62. Кунижев С.М., Серов A.B., Денисова Е.В., Аполохова С.Ф., Воробьева О.В., Анисенко О.В. // Заявка 2002105544 (РФ) Способ получения сорбентов. Положительное решение от 7 марта 2002. 7 с.

63. Кунижев С.М., Денисова Е.В. Информационный листок «Биофильтры нового поколения». Ставрополь: Изд-во СГУ, 2001. 2 с.

64. Кунижев С.М., Воробьева О.В., Денисова Е.В., Анисенко О.В. Разработка способа получения универсальной матрицы для энтеросорбен-тов //Материалы 1-го Международного Конгресса «Биотехнология состояние и перспективы». - Москва, 2002. - С. 75.

65. Кухтин A.B., Еремеев H.JL, Беляева JI.A., Казанская Н.Ф. Взаимосвязь между состоянием термочувствительной матрицы и активностью иммобилизованной в ней уреазы // Биохимия.-1997.- Т.62. Вып. 4. -С.437-443.

66. Лазарев А.Н. Колебательные спектры и строение силикатов. Л.: Наука, 1968.-С.218.

67. Ласкорин В.Н. Сорбенты на основе силикагеля в радиохимии. -М.: Атомиздат, 1977. 303с.

68. Липковская H.A., Кольчинский А.Г., Сильченко С.С., Чуйко A.A. Влияние кислотности на окислительно-восстановительный потенциал рН-независимой редокс-пары, иммобилизованной на кремнеземе. // Журн.физ.химии, -Т.67, №12. 1993. -С.2452-2454.

69. Лисичкин Г.В., Кудрявцева Т.Ф., Сердан A.A. Модификационные кремнеземы в сорбции, катализе хроматографии. М.: Химия, 1986. -С.246.

70. Лисичкин Г.Д. Достижения и перспективы химического модифицирования поверхности минеральных веществ // Журн. Всесоюзн. хим. об-ва. им. Д.И. Менделеева. 1989. - Т. 34. - №3. - С. 291 - 297.

71. Лишевская М.О., Вирник А.Д., Роговин З.А. Введение новых функциональных групп в макромолекулу модифицированной целлюлозы, содержащей ароматические аминогруппы. Москва, 1963. - 165с.

72. Лобанов В.В., Горлов Ю.И. Напряженность электростатического поля в окрестности силинальной группы поверхности 8Ю2 // Журн.физ.химии.-Т.69, №4. -1995. -С. 652-654.

73. Любченко П.Н. Клиническая лабораторная диагностика. Москва, 1994. С.6-7.

74. Макаров К.А., Зытнер ЯД. Синтенз биополимерных материалов и препаратов методами электрохимической (со)полимеризации и (со)иммобилизации. Применение новых биополимерных материалов в медицине Ленинград, 1979. - 230 с.

75. Макаров.К.А., Кабардин С.А. Иммобилизованные биопрепараты в медицине. М.: Медицина, 1980. - 125 с.

76. Макушин Е.М., Тур Л.Т. Способ получения сорбента // АС 615089 С 08 В 15/00.- 1978.

77. Манченко Л.В. Аэросил, его свойства, применение и технические условия. Львов, 1965.-С. 183.

78. Матюшин Ю.Н., Корчатова Л.И., Сопин В.Ф. Исследование влияния условий высушивания целлюлозы на теплоту ее сгорания. I Всесоюзная конференция по синтезу целлюлозы и его регуляции.: Тез.докл. -Казан, 1980. С 36.

79. Медянцева Э.П., Вертлив М.Г., Будников Г.К. Ионы металлов как эффекторы ферментов // Успехи химии. 1998. - Т.67(3). - С.247-253.

80. Мессмер Р. Полуэмперические методы расчета электронной структуры. В 2Т., М.:Мир, 1980. Т.2. -272 с.

81. Мешкова Н.П., Северин С.Е. Практикум по биохимии. М.: Изд-воМГУ, 1979.-430 с.

82. Неймарк И.Е. Химия поверхности кремнеземов и ее роль в явлениях адсорбции и полимеризации.- Изв. отделение химических наук. Волгоградская академия наук, 1968, кн.4, с.59-74.

83. Неймарк Н.Е. Синтетические минеральные адсорбенты и носители катализаторов. Киев: Наукова Думка, 1982. - С. 15-19.

84. Неймарк Н.Е., Шайнфайн Р.Ю., Кругликова Н.С. К вопросу о формировании пористой структуры силикагеля // Коллоидный журнал. -1964. Т.26. - №4. - С. 595 - 599.

85. Николаев В.Г., Пролеева В.В. Метод энтеросорбции в лечении острых кишечных заболеваний // Тез. докл. науч. конф. "Сорбц. методы детоксикации в клинике", Минск, 1983 г. Минск, 1983. - С.41.

86. Николаев В.Г., Стрелко В.В. Гемосорбция на активированных углях. К.: Наукова думка, 1979. - 286с.

87. Николаев В.Г., Стрелко В.В. Теоретические основы и сферы практического применения энтеросорбции // Тез. докл. "Сорбц. методы детоксикации и иммунокоррекции в медицине", Харьков, 1982г. Харьков, 1982г.-С. 112-114.

88. Пак В.Н. Строение поверхностных комплексов, полученных в результате взаимодействия УОС13 с силикагелем и аэросилом.// Журн. физ. хим. 1976. - Т.50. - №6. - С. 1404-1410.

89. Пак В.Н Оптические спектры кремнеземов в области 200-400 нм //Журн. физ. -хим. -1975. -Т.49. Ш1.-С.2938-2939.

90. Плюгачева Е.И., Метелица Д.И. Иммобилизация уреазы из соевых бобов // Прикладная биохимия и микробиология. 1994. -Т.30. - №6. -С. 842-847.

91. Понькина Н.А., Иойлева К.А. Исследование адсорбции красителей сосновым лигнином // Труды конф. АН СССР "Вопросы использования древесины в сульфатно-целлюлозном производстве", Петрозаводск, 1963 г. Петрозаводск, 1963. - Вып. 38, С. 26 - 30.

92. Портной O.A., Николаев В.Г., Фридман Л.И. Исследование сорбции биологических веществ активированными углеродными волокнами // Химико-фармац. журнал. 1984. - №3. - С. 360 - 364.

93. Постнов В.Н., Макаров к.А., Кольцов С.И., Алесковский В.Б. Свойства неорганических матриц для твердофазного синтеза пептидов. -Докл. АН СССР, 1977. №3. - С.599-600.

94. Постнова A.M., Пак В.И., Кольцов С.И. Исследование протонной кислотности титаносодержащих силикагелей, полученных методом молекулярного наслоения // Журн. физ. хим. -1981.- Т.35. С. 2140-2142.

95. Пугачевич П.П., Бегляров A.B., Лавыгин А.И. Поверхностные явления в полимерах. М.: Химия, 1982. - 198 с.

96. Пучкаев A.B. и др. Влияние природы поверхностно-активных веществ на стабильность уреазы // Биохимия.-1997. Т.62. -Вып.9.- С.1171-1181.

97. Пучкаев A.B., Метелица Д.И. Стабильность уреазы в водных растворах и обращенных мицеллах аэрозоля ОТ в октане // Биохимия. 1996. -Т.61.- Вып.5. - С. 826-834.

98. Пучкаев A.B., Метелица Д.И. Влияние степени гидратации обращенных мицелл аэрозоля ОТ и концентрации солюбилизированной уреазы на её стабильность // Биохимия.- 1996.- Т.61. Вып.Ю. - С. 18741882.

99. Пушкарь В.Г., Ефременко В.И., Климова И.М., Гавенский С.Д. Приготовление и применение магнитных сорбентов для изучения антигенов микроорганизмов // ЖМЭИ. -1985. №12. - С.ЗО - 34.

100. Раскин М.Н., Егоров А.Е., Васильева Г.Г., Кательникова Н.Е., Петропавловский Г.А. Способ получения МКЦ // АС № (11) 751808 30.07.80. Бюл. №28.

101. Рахимов K.P. Механизм усвоения лактозы в онтогенезе человека и животных. Ташкент, 1991. -С. 381.

102. Ребриев A.B., Ивашкевич С.П., Старо дуб Н,Ф., Керча С.Ф., Маслюк А.Ф. Электрохимический сенсор на основе фотополимерных мембран для определения мочевины // Укр. биохим. ж. -2001. Вып. 73. - №1.-С.133-141.

103. Ремезова О.В., Беляков H.A., Трюфанов В.Ф. Сравнительная активность некоторых природных и синтетических энтеросорбентов при экстремальной гиперлипидемии // Вопр. питания. 1992. - №5 - 6. - С. 52 - 55.

104. Роговин З.А., Шорыгина H.H. Химия целлюлозы и ее спутников. -М.: Госхимиздат, 1953.- .678с.

105. Рогожин C.B., Варламов В.П., Вальковский Д.Г. Получение модифицированных кремнеземов для присоединения биологически активных соединений // Изв. АН СССР .- 1975. №8. - С.1718-1720.

106. Русанов А.И. Применение термодинамически искривленной поверхности к описанию адсорбционных процессов. В кн.: Адсорбция и пористость. - М.: Наука, 1973. - С. 173-181.

107. Самошина И.М., Лотменцова Е.Ю., Борисова В.И., Нахапетян Л.А. // Прикл. биохимия и микробиология. 1985. - Т.21.- № 6. - С.745-752

108. Староверов С.М., Никитин Ю.С., Лисичкин Г.В. Журн. Всесоюзн. хим. об-ва. им. Д.И. Менделеева. 1982, т.56, №11, с.2813-2817.

109. Степанова З.Н., Грищенко С.И., Стручак C.B., и др. Способ получения сорбента для аффинной хроматографии //SV 1578137.С08В15/00,В01120/24.20/30. -1990.

110. Строение внеклеточных гетерогликанов некоторых видов крип-тококков / Г.А. Витковская, Г.М.Самаркина, Е.П. Ананьева // Биоорган, химия 1998. - №10. - С. 1405 - 1412.

111. Тагер A.A. Физикохимия полимеров. 3-е изд. М.: Химия, 1978. -544 с.

112. Танабэ К. Твердые кислоты и основания. М.: Мир, 1973. - 250с.

113. Тарасевич Ю.И., Смирнова В.А., Монахова Л.И. Адсорбция альбумина на глинистых материалах // Коллоид, журн. -1975.-Т.37. №5.-С.912-917.

114. Тарчевский И.А., Марченко Г.Н. Биосинтез и структура целлюлозы. М.: Наука, 1985. - 279 с.

115. Тенфорд Ч. Физическая химия полимеров. Из-во «Химия», М, 1965.

116. Тетин А. Химия и физика молока. М.: Пищевая промышленность, 1979. - 624 с.

117. Тертых В.А., Павлов В.В., Ткаченко К.И., Чуйко A.A. О размещении структурных гидроксильных групп на поверхности аэросила // Теор. иэксперим. химия.-1975. Т.П.- №3.-С. 415-420.

118. Тривен М. Иммобилизованные ферменты.- М.: Мир, 1983. -208 с.

119. Улезло И.В., Церетели А.К., Портная И.Б., Безбородов A.M. ß-галактозидаза супертермофильной бактерии Thermoanaerobium sp. 2905 и ее иммобилизация // Прикладная биохимия и микробиология. -2001. -Т. 37.-№ 1.-С. 48-52.

120. Фениксова Р.В. Гидролитические ферменты микроорганизмов и их применение в народном хозяйстве. М.: Наука, 1972. - 20 с.

121. Храмцов А.Г. Молочный сахар. М.: Пищепромиздат, 1987. - 280с.

122. ЦеретелиА.К., Куликова А.К., Шиян С.Д., Тихомирова A.C.// Прикл. биохимия и микробиология. 1980. - Т.12.-№ 6. -С. 902-908.

123. Цизин Г.И., Формановский A.A., Михура И.В. Аминокарбок-сильное производное целлюлозы в качестве сорбента для концентрирования тяжелых металлов и способ его получения// SV 1702659.С08В 15/06,ВО 1120/26. 1993.

124. Чанг Т.М. Искусственные клетки. К.: Наукова думка, 1979. -208с.

125. Черкасов А.Н., Пасечник В.А. Мембраны и сорбенты в биотехнологии. Л.: Химия, 1991. - 240с.

126. Чернавина И.А. Физиология и биохимия микроэлементов. М.: Высшая школа, 1970. - С.309-401.

127. Чертов В.М., Джамбаева Д.Б., Неймарк И.Е. Влияние условий гидротермальной обработки гидрогеля кремниевой кислоты на структуру и свойства ксерогеля // Коллоидный журнал. -1965. -№27. Вып.2. -С.499-502.

128. Чуйко А.А, Тертых В.А., Казаков К.П., Павлов В.В. Исследование процессов хемосорбции четыреххлористого титана на поверхности кремнезема.// Сб-к Адсорбция и адсорбенты. -1980,- №8. -С.39-43.

129. Шевчук А.В., Николаев В.Г. Энтеросорбция в клинике аллергических заболеваний // Тез.докл.науч. конф. "Моделирование, медико-техн. и математич. обеспечение лечебно-диагностич. процесса", Харьков, 1983г. С. 277-278.

130. Шуваев В.А., Харитонов В.Д., Кунижев С.М. Способ определения объема пустот в порошкообразных молочных продуктах // А.С. № 807176.-1981.

131. Щелкунов Л.Ф., Дудкин М.С., Корзун В.Н. Пища и экология. Одесса: Оптимум, 2000. 517с.

132. Щербухин В.Д., Кондырева А.В., Миронова А.И., Грюнер B.C. // Прикл. биохимия и микробиология. -1970. -Т. 6. № 4. - С. 467 - 470.

133. Эскин В.Е. Рассеяние света растворами полимеров и свойства макромолекул. Л.: Наука, 1986. 288с.

134. Янкауекайте Д.П., Дикчювене А. А., Паулюконис А.Б. Способ модификации полисахаридов // АС 732278. С 08В15/06. 1980.

135. Aguado José, Romero M.Dolores, Rodriguez Lourdes, Calles José A. Thermal deakttivation of free immobilized (3-glucosidas from Pénicillium fu-niculosum // Biotechnol.Prog.-1995 -11, №1.-P.104-106.

136. Akasaki.,Susuki M., Funakochi J., Jamashina J. //J. Biochem. 1976. V.80.- № 6 P. 1195-1200.

137. Alexsander G. B., Heston W. M., Yler R.K. The solubility of amorphous silica in water // J. Phys. Chem. 1954. - № 6. P. 453 - 455.

138. Arnon D.I. Ferredoxin and photosynthesis // Science, 1965. P. 149.

139. Bachofen R., Buchanan B.B., Arnon D.I. Ferredoxin as a reductant in pyruvate synthesis by a bacterial extract. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S. - 1964. -P. 51, 690.

140. Bates W.K., Hedman S.C., Woodward D.O.// J. Bacteriol. -1967.-V. 93. -№ 5. P. 1631-1637.

141. Berendsen. G.E., Pikart K.A., de Galan L.- J. Liquid Chromatogr., 1980, v.3, №10, p. 1437-1464.

142. Ben Bassat A., Zeikus J.G. // Arch. Microbiol. -1981. V. 128.- №2.-P. 365-369.

143. Borgium G.B., Sternberg M.Z.// J. Food Sci. -1972. V. 37- .№ 3,-P. 619-623.

144. Borman Stu, Enzymes immobilized in polymeric microcapsule arrays, Chem. and Eng. News. 1994. - 72, -№ 22. - C. 17.

145. Broughton R.L., Leung R., Lamberti F.V., Zimmermann J. Clinical applications of heparinase , Artif, Cells, Blood Substitut. and Immobilizat. Bio-technol. 1994. - 22, №5. - P.340.

146. Brown J. C., Tiffin L.O., Specht A.W., Resnicky J.W. Stability and concentration of metal chelates factors in iron chlorosis of plants // Agron. J. -1961.-P. 778-779.

147. Burchard W., in: S. B. Ross-Murphy (Ed.), Physical Techniques for the Study of Food Biopolymers, Blackie Academic and Professional, Glasgow, 1994, p.151-213.

148. Cojocaru D.C., Artenie V.G., Tanase Elvira.Immobilization of amy-loglucosidase on solid supports through covalent finding // An. Sti. Univ.Sec-1993. 39. - P.161-164.

149. De Коек P.C., Morrison R.J. The metabolism of chlorotic leawes// Amino acids. Biochem. J. 1958. - P.344-367.

150. Dickson R.C., Dickson L.R., Markin J.S. // J. Bakteriol. 1979.-V.139.- № 1. - P.52-61.

151. Eliot-Laize C., Semenova M. G. and Dickinson E. Heat-induced and colloid-induced reversible gelation of caseinate based emulsions at around body temperature. (2005), Melbourne, Food Hydrocolloids, Abstract at the conference.

152. Chen Zun, Kong Wei, Zhou Hui, Li Wei, Shen Jia-Cong. Исследование по иммобилизации глюкоамилазы на привитой крахмальной подложке// Shengwu huaxue zazhi. Chin. Biochem. j.- 1995.- 11.- №2. -P.150-154.

153. Chonde Y., Paul M Acrylate based adsorbent rtsin for the immobilization of enzymes //Pat. 4897352.USA C12B11/08. 1990.

154. Furusaki S., Nozava Т., Nomuras S. Membrane enzyme reactor with simultaneous separation using electrophoresis //Bioprocess Eng.-1990. -V5 № 2.-P.73-78.

155. Gardaer D.L., Emmerling D.S. Biomedical applications of immobilized Enzimes and Proteins // Ed. T.M.S. Chang. N.Y. Plenum Press.- 1977.- P. 163-167.

156. Gastello F., Moreno B. // J. Dairy Sci. 1983. - V.66.- № 8.- P.1616-1621.

157. Greenberg S.A., Sinelair D. The polimerisation of silicic Acid. // J. Phys. Chem. 1955. - № 5. P. 435 - 440.

158. Holt, C. Structure and stability of bovine casein micelle. Adv. Protein Chem., 1992, 43,63-151.

159. Hlling P.J.,Dunnill P. Improved nonporous magnetie supports fog immobilized enzumes //Biotechnol and bioeng. -1979.-V.21.- №3. P.393-416.

160. Huang Fang Cheng, Ju Yi-Hsu. Improved activity of a lipase by vacuum drying on to a hydrophobic microporous support //Biotechnol.Techn.-1994.-V.8.-№ 11-P. 827-830.

161. Hughes, R.C. Mac-2: A versatile galactose-binding protein of mammalian tissues // Glycobiology. 1994. - V.4. - P.5-12.

162. Huzjak D., Huzjak lasna, Krizanik I. The stability of (3 galaktosidase (Aspegillus oryzae) immobilized on Eupergit C.// Pregramb.-tehnol. I biotehnol. rew. - 1994. - V.32 - № 4. - P. 177 - 179.

163. Ichijo Hisao, Najasawa Iunichi Yamauchi Aizo. Immobilization of biocatalysis with poly (vinyl alcohol) supports // J. Biotechnol. 1990. - V.14.-№2.-P. 169-178.

164. Kumar, V., Ramakrishnan, S., Teerit, T., Knowles, J.K.S., Hartley, B.S. Saccharomyces cerevisiae cells secreting and Aspergillus niger |3-galactosidase grow on whey permeate //Biotechnology. 1992. - №10.- P.82-85.

165. Kunigev, S.M., Denisova, E.V., Shuvaev, V.A. Study of requirements of an enzymatic hydrolysis of lactose // Proceeding of UNESCO medikal center «Unona», -Essentuki. 2001. - V.5. - P. 198-200.

166. Leboda R. Discussion modification mechanism of texture and structure of Silica gels with alcogols // Pol. J. Chem. 1978. - № 7/8. - P. 1479 -1486.

167. Mathur N.K., Narang C.K., Williams R.E. Polymers as aids in organic chemistry // New York: Academic Press, 1980.

168. Mayerhold M., Rechnitz. G. Methods Enzymol.- 1980. -P. 439-443.

169. Marx-Figini M., Schulz G.V. Die Viskosimetrische Molekulargewichts bestimung von Cellulosen und Cellulosennitraten unter Standartbedigun-gen. Makromol. Chem., 1962. - Bd.54. - S. 102-118.

170. M.Low.,N.Ramansubramanian.J.Phys.Chem.,70,2740,1966.

171. N.Cant,L.Little,Canad.J.Chem.,42,802,1964;43,1252, 1965.

172. Pappenheimer, J.R., Reiss, K.Z. Adsorption of nutrients by solvent drag // J. Membr. Biol. 1987. - V.100. - P. 432-436.

173. Paulson K.N., Kurtz L.T. Michaelis contant of soil urease // Soil. Sei. Soc. Amer. Proc. 1970,- Y.34 - № 1. - P. 70-72.

174. Pettet N.M. Soil urease activity, stability and kinetic properties // Soil. Biol. Biochem. 1976. -V.9. - № 6. -P. 479-484.

175. Pavi, D.E., Robinson, M.P. Handbook of enzyme biotechnology // Nutr. Metabol. 1976. - V.20. - P.351-363.

176. J.Porath, P.Flodin. Nature, 1959. P.183

177. Rhoads W.A., Wallace A. Possible involvement of dark fixation of C02 in lime-induced chlorosis// Soli Sci. 89, 5 - 1960. - P.56.

178. Ridha S.H.,Crauford R., Tamine.A.I. The quality of Cheddar cheose prodused from lactose hydrolysed milk //Dairy Ind. Int.- 1983.- V. 48.- №.12.-P. 17, 20-22.

179. Roig M.G., Slade A., Kennedy J.F., Tayler D.W., Garaito M.G. Investigations of stabilies, pH, and temperature profiles and kinetic parameters of glucoamylase immobilized on plastic supports // Appl.Biochem and Biotech-nol.A.-1995.-V.50.-№1 -P.l 1-33.

180. Sammer J.B. Enzymes. -1951. P. 1-2, 873.

181. Sing K.S. W., Madelew J.D. The Surface properties of silica gels // J. Appl. Chem. 1953. - № 3. - P. 12 - 15.

182. Schafhauser D.Y., Storey K.B. Immobilization of glucose isomerase onto granular chicken bone//Appl. Biochem. and Biotechnol. 1992. - V.32. -P. 79-87.

183. Shan Yamini, Shan Dushyant, Patel R. B., Trivedi B. M. Immobilisation of urease in calcium alginate gels// Res and Ind 1995 -V.40 -№1. - P.23-27.

184. Sheffield Deborah J., Harry Tim R., Smith Arnold J., Rogers Lyndon J. Immobilisation of bromoperoxidase from Corallina officinalis Biotechnol. Techn. 1994. - V.8- № 8. - P. 579-582.

185. Snoeren, T. H. M., van Markwigk B. and Montford, R. (1980) Biochem. Biophys. Acta, 622, 268-276.

186. Snyder L.R,Ward J.W.-Ibid., 1966, v.70, №12, p.3941-3952.

187. Tanaka K.c.a.- Bull. Chem. Soc. Japan, 1980,v.53, №5, p. 1242-1246.

188. Til H.P., Feron, V.J., Immel, H.R. Chronic (89-week) feeding study with hydroxypropyl distarch phosphate, starch acetate, lactose and sodium alginate in mice // Food Chem. Toxicol. 1986. - V.24. - P.825-834.

189. Tripurari S., Indu B.P., Deb S. Pore structure of silikagel // J. Appl. Chem. and Biotechnol. 1978.- № 9. - P. 633 - 677.

190. Verstracten L.M. Inferaction between urease activity and soil charac-teries-tics // Agrochimica. 1978. - V.22 - № 56. - P. 455-464.

191. Virto Maria D., Agud Isabel, Montero Sol, Blanco Alilua. Kinetic properties of soluble and immobilized Candida rugoza lipase //Appl. Biochem and Biotechnol. -1995. -V.50.- №2 P.127-136.

192. W. Burchard, in: S. B. Ross-Murphy (Ed.), Physical Techniques for the Study of Food Biopolymers, Blackie Academic and Professional. Glasgow, 1994.-P. 151-213.

193. Werner W., Halasz I.-Ibid., 1980, v.18, №6, p. 277-283.

194. Weyl W., Hausser E. Bildung und Strruktur von Silicagelen // Kolloid. Z. 1951.-№ 11.-S. 72-76.

195. Widmer F., Leuba J. // Eur. J. Biochem. 1979- V. 100. -.№2.- P.559-567.

196. Wright Wayne W/, Baez Juan Carlos, Vanderkooi Jane M. // (Mixed trehalose/sucrose glasses used for protein incorparation as studied by infrareg and optical spectroscopy // J. Biochem. 2002.- V.307.- №1.- P.167-172.

197. Xu.Chen Lizi jiaowan yu xifu// Ion Exch. and Absorp. 1993. —V. 9. -№6.-P. 381-485.

Информация о работе

Филь, Аревик Аркадиевна
кандидата биологических наук
Ставрополь, 2006
ВАК 03.00.23

Диссертация

Биотехнология получения сорбционных материалов (энтеросорбентов) с заданными свойствами - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы