Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Биотехнологические методы в системе производства оздоровленного посадочного материала и селекции плодовых и ягодных растений

ВАК РФ 06.01.07, Плодоводство, виноградарство

Автореферат диссертации по теме "Биотехнологические методы в системе производства оздоровленного посадочного материала и селекции плодовых и ягодных растений"

На правах рукописи

С (I

ВЫСОЦКИЙ Валерий Александрович

Б ИОТЁХН ОЛОГЙЧЕСКИЕ МЕТОДЫ В СИСТЕМЕ ПРОИЗВОДСТВА ОЗДОРОВЛЕННОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И СЕЛЕКЦИИ ПЛОДОВЫХ И ЯГОДНЫХ РАСТЕНИЙ

(06.01.07 - плодоводство и 03.00.12 - физиология растений)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора сельскохозяйственных наук

Москва - 1998

Работа выполнена во Всероссийском селекционно-технологическом институте садоводства и питомниководства Российской Академии сельскохозяйственных наук

Научный консультант - член-корреспондент РАСХН, доктор сельскохозяйственных наук, профессор ТРУШЕЧКИН В. Г.

Официальные оппоненты: академик РАСХН, член-корреспондент РАН,

доктор биологических наук, профессор БУТЕНКО Р. Г.

доктор сельскохозяйственных наук, профессор ПИЛЬЩИКОВ Ф.Н.

академик Академии аграрного образования, доктор сельскохозяйственных наук, профессор ТРУНОВ И. А.'

Ведущее учреждение - Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и селекции плодовых растений ■ ■

Защита состоится ".. ЯегЛЯ............... 1998 г.

в "13" час на заседании диссертационного совета Д 020.20.01 Всероссийского селекционно-технологического института садовод- ' ства и питомниководства. 115598, Москва, Загорьевская/ 4

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского селекционно-технологического института садоводства и питомниководства ' •' . ч

Автореферат разослан "Ж.".. ........... 1998 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

кандидат с.-х. наук ___ ПРИН^ВА Л'А'

/ —

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Интенсификация современного сельскохозяйственного производства требует широкого использования высокотехнологичных приемов. В частности, в садоводстве прослеживается четкая тенденция повышения требований к качеству посадочного материала и его сортименту. Это ставит задачи получения оздоровленного посадочного материала плодовых и ягодных растений, решение которых связано с необходимостью использования высоких технологий оздоровления и тестирования. С другой стороны, сокращение сроков создания новых генотипов с хозяйственно-ценными свойствами, ускорение их внедрения в производство, создание и содержание коллекций ценных форм также являются важными задачами сельскохозяйственной науки. '

Решению эт^х проблем может способствовать применение относительно новых биотехнологических приемов, которые до недавнего времени считались сугубо лабораторными. Среди основных преимуществ этих приемов наиболее часто называют следующие: возможность получения посадочного материала, свободного от вирусных, грибных и бактериальных болезней, клещей и нематод; быстрое размножение ценного клона растения; получение в большом количестве вегетативного потомства трудноразмножаемых в обычных условиях форм растений; работа в лабораторных условиях круглый год и планирование выпуска растений к определенному сроку; возможность длительного хранения растительного материала без контакта с внешней средой; возможность обмена материалом в международном масштабе без риска занести карантинных вредителей, а также возможность получения форм с измененной плоидностыо. .сомаклональных вариантов и трансгенных растений. - '

Однако, для плодовых и ягодных растений отсутствовали технологии получения и размножения растений на искусственных питательных средах, не были отработаны приемы надежного получения расте-ний-регенерантов в культуре пыльников, каллусов и других эксплан-тов типа листовых дисков.

Совершенствование техники культуры изолированных тканей и органов плодовых и ягодных растений с учетом биологических особен-

ностей и факторов культивирования, повышение их технологичности и эффективности, сочетание различных приемов оздоровления, клональ-ного микроразмножения, хранения стерильных культур и тестирования, получение растений-регенерантов из различных тканей и органов существенно расширит возможности этих методов в системе производства оздоровленного посадочного материала и в селекционном процессе.

Цель и задачи исследований. Основная цель исследований заключалась в разработке и совершенствовании технологий клонального микроразмножения и регенерации плодовых и ягодных растений из различных органов и тканей для использования в системе производства оздоровленного посадочного материала и ускорения селекционного процесса.

Для достижения поставленной цели требовалось:

- разработать надежные методы регенерации плодовых и ягодных растений из изолированных апексов на искусственных питательных средах; ' ,

- определить факторы культивирования (состав питательных сред, физические условия), обеспечивающие высокую эффективность клонального микроразмножения;

- выяснить роль сортовых и видовых особенностей в процессах регенерации растений в культуре in vitro;

- отработать составы питательных сред, последовательность операций и способы аппликации регуляторов роста, обеспечивающие высокую укореняемость микропобегов;

- разработать надежные способы адаптации пробирочных растений к нестерильным условиям;

- выяснить возможность нетрадиционных комбинаций приемов оздоровления плодовых и ягодных растений с культурой in vitro;

- определить место биотехнологических приемов в системе производства оздоровленного посадочного материала плодовых и ягодных культур;

- проследить изменения в поведении эксплантов и растений в процессе' длительного культивирования на искусственных питательных средах и после адаптации к нестерильным условиям;

- изучить возможность использования методов культуры изолированных тканей и органов для ускорения селекционного процесса и получения новых форм плодовых и ягодных растений.

Научная новизна. Проведено детальное изучение процессов регенерации и клонального микроразмножения основных видов плодовых и ягодных растений умеренного климата с учетом их биологических особенностей. Дано обоснование и показана целесообразность двухэ-тапного получения растений при использовании изолированных апексов при получении оздоровленного посадочного материала. Определены условия водной термотерапии изолированных апексов, на примере земляники, в сочетании с культурой In vitro, позволяющие повысить эффективность оздоровления. Прослежено изменение коэффициента размножения и потенций к ризогенезу в процессе субкультивирования. что позволило дать конкретные рекомендации по'' оптимальному числу субкультивирований для каждого вида растений. На этапе микроразмножения показана возможность использования нетрадиционных препаратов с цитокининовой активностью и комбинаций цитокининов с некоторыми препаратами негормональной природы для увеличения коэффициента размножения. Показана возможность использования микропрививок In vitro в системе производства оздоровленного посадочного материала некоторых трудноукореняемых форм плодовых растений. Обосновано и' доказано преимущество кратковременных обработок микропобегов индукторами корнеобразования, по сравнению с введением последних в питательную среду. Изучены роль температурных воздействий и эффект предварительного культивирования побегов на средах с пониженным-содержанием регуляторов роста на процессы ризогенеза' у разных видов плодовых и ягодных растений. Для использования в селекционной практике на основе данных, полученных при изучении регенерации изолированных апексов древесных растений, разработан способ на основе оригинальной питательной среды, позволяющий получать растения из изолированных на 20-23 день после опыления зародышей . косточковых пород, а . также генетически идентичные копии сеянцев плодовых культур в ювенильной фазе. Изучены факторы, влияющие на генетическую стабильность растений в процессе клонального- мйкроразмножения и разработаны рекомендации снижающие риск получения уклоняющихся форм. Изучен процесс регенерации. растений в культуре комплексных эксплантов, пыльников каллусов и листовых дисков, на основании чего разработаны приемы получения растений регенерантов земляники в культуре пыльников, листовых эксплантов и. каллусов земляники, листовых эксплантов и каллусов малины, ежевики, косточковых культур.

На защиту выносятся основныеполо.жения концепции использования биотехнологических приемов в системе получения, ускоренного размножения оздоровленного посадочного материала плодовых и ягодных растений и в селекционном процессе включающей:

- разработанную модель двухэтапного получения растений плодовых культур из изолированных апексов:

- приемы эффективного клонального микроразмножения конкретных видов плодовых и ягодных растений с учетом специфических факторов культивирования (модифицированные и оригинальные питательные среды, способы индукции ризогенеза, адаптации пробирочных растений);

- использование комбинации термотерапии эксплантов и культуры in vitro для повышения эффективности оздоровления;'

- способы получения растений-регенерантов в культуре пыльников, листовых эксплантов, каллусов, незрелых зародышей.

Практическая значимость и реализация результатов исследований. Отработаны технологические процессы получения из изолированных апексов растений основных видов плодовых культур умеренного климата и методы их клонального микроразмножения, разработаны приемы микропрививок in vitro трудноукореняемых форм, методы регенерации ряда видов растений в культуре изолированных пыльников, листовых эксплантов, зародышей ранних.фаз развития, получения генетических близнецов сеянцев без вывода их из ювенильной фазы, разработаны рекомендации по снижению риска появления уклоняющихся форм в процессе микроразмножения.

Результаты законченных исследований вошли в рекомендации Го-сагропрома РСФСР "Промышленная технология возделывания малины (1989 г.), в "Методические указания по клональному микроразмножению подвоев и сортов яблони" (ВАСХНИЛ, 1985), в "Методические указания по клональному микроразмножению красной и черной смородины" (1986), по микроклональному размножению сортов и подвоев косточковых культур (Агропромиздат, 1987), в "Методические указания по выращиванию сеянцев вишни из зародышей, изолированных на ранних стадиях развития (ВАСХНИЛ, 1988), которые служат руководством • для ускоренного размножения,посадочного материала перечисленных культур и.использования в селекционных программах. Результаты разработок легли в основу стандарта отрасли ОСТ 10 067-95 "Посадочный материал плодовых и ягодных культур, полученный in vitro"..

Ряд приемов, питательных сред и элементов технологий зарегистрированы в качестве изобретений и на них получены авторские свидетельства и патенты: A.C. N 636628 (1978. г.). N 1261587 (1986 г.). N 1279082 (1986 г. ). N 1493187 (1989 г.), N 1554838 (1989 Г.). N 1591887 (1990 Г. ). N 1658929 (1991 Г.). N 1685323 (1991 Г.), N 1695854 (1991 г.)., И 1706481 (1991 г.). N 1720597 (1991 Г.), N 1738169 (1992 г.). N 1750492 (1992 г.). патенты РФ N2013946 (1994 Г.). N 2063681 (1996 г. ) И N 2080059 (1997 .Г.).

Законченные разработки по теме были переданы в "Союзплодоп-ром" МПОХ СССР для использования при производстве оздоровленного посадочного материала, Дальневосточному НИИ сельского хозяйства (г.Хабаровск). НИИ садоводства Сибири им. М.А.Лисавенко (г. Барнаул). Институту биофизики СО АН СССР (г. Красноярск), Россошанской зональной плодово-ягодной опытной станции. Донецкой опытной станции садоводства (г. Артем), Куйбышевской опытной станции. Кабардино-балкарской зональной опытно-селекционной станции (г. Нальчик), Российской научно-исследовательской хмелеводческой станции, совхозу "Победа" (г. Клин), Северо-Западному НПО "Бело-горка" (Ленинградская обл:), Селекцентру Всероссийкого научно-исследовательского института цветоводства и субтропических культур (Сочи), НПЦ биотехнологии "Фитогенетика" (г.Тула), Крымской опытно-селекционная станция Всероссийского научно-исследовательского института растениеводства имени Н.И.Вавилова.

Полученный материал регулярно передавали научным учреждениям и высшим учебным заведениям по садоводству, опытным станциям и сельскохозяйственным предприятиям России и стран бывшего СССР.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены и обсуждены на 1 Всесоюзной конференции "Регуляторы роста и развития растений" (Москва, 4981 г.), на 4 Всесоюзной конференции "Культура клеток растений и биотехнология"(Кишинев, 1983), на международной конференции "Биология культивируемых клеток и биотехнология' (Новосибирск. 1988), на 2 Международной конференции "Биология культивируемых клеток и биотехнология"(Алматы, 1993), на 3 и 4 Международных конференциях "Регуляторы роста и развития растений" (Москва, 1995. 1997),на Международной научной конференции "Актуальные проблемы биотехнологии в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии" (Москва, 1996). на симпозиуме стран-членов СЭВ .по регуляторам роста растений (Польша, 1983), на совещани;;

стран-членов СЭВ по теме 1.10.1 "Разработка меристемных методов размножения, обеспечивающих получение стерильного посадочного материала" (Кишинев, 1984), на Всероссийском совещании "Актуальные проблемы развития питомниководства и научное обеспечение отрасли" (Москва, 1993), на научно-методическом совещании "Достижения селекции и новые способы интенсивного размножения ягодных культур" (Брянск-Кокино, 1994), на совещании-семинаре "Питомниководс-тво-96"(Москва, 1995) и других конференциях, совещаниях, семинарах по садоводству и питомниководству союзного, республиканского и зонального характера (1980- 1995 г.г.), представлены на 7 Международный конгресс по культуре тканей и клеток растений (Амстердам, 1990).

Публикации. Основные положения диссертации опубликованы в 110 работах.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 321 страницах машинописного текста, состоит из введения, 20 разделов, 7 из которых, в основном, обзорного и общетеоретического, а 13 -экспериментального содержания, включая обсуждение результатов, выводов, рекомендаций для практического использования, списка литературы из 557 источников, в том числе 352 зарубежных авторов, содержит 57 таблиц и 17 рисунков.

СОСТОЯНИЕ ВОПРОСА И ОСНОВНЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ

На основе литературных данных и результатов собственных разработок приведена краткая история развития метода культуры изолированных тканей и органов, описаны основные области его применения, рассмотрены основные факторы, лимитирующие получение полностью развитых растений на искусственных питательных средах, охарактеризованы различные модели размножения растений in vitro. Дан критический анализ современных методов оздоровления, используемых в системе производства оздоровленного посадочного материала плодовых и. ягодных растений, обсуждены возможности биотехнологических методов для создания новых форм растений и поддержания коллекций ценных генотипов in vitro.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В экспериментальной работе использовали, в зависимости от преследуемых целей, различные ткани и органы /апексы, боковые и верхушечные почки, листовые экспланты. пыльники, зародыши/ районированных и перспективных сортов-земляники, малины, малино-еже-вичных гибридов, ежевики, смородины черной, смородины красной, крыжовника, облепихи, сортов и подвоев вишни, сливы, яблони, груши. видов и форм актинидии, ирги и других культур.

В основу методики были положены общепринятые, классические приемы работы с культурами изолированных тканей и органов растений /Р.Г.Бутенко. 1964/, которые в течение более 20 лет работы постоянно совершенствовались, модифицировались и адаптировались для решения конкретных задач, что нашло отражение в изданных методических рекомендациях по работе с целым рядом видов растений.

Результаты экспериментов обрабатывали методами дисперсионного анализа, путем расчетов ошибки средней и вычисления доверительного интервала, сравнения долей методом угла (Н.А.Плохинский, 1970; Б.А.Доспехов. 1973). В экспериментах по оптимизации составов питательных сред использовали стандартные пакеты программ для персональных компьютеров РС-386 AT "STATGRAPH" и "F0XGRAPH" для выведения уравнений регрессии и построения поверхности отклика. В ряде случаев, для обработки результатов экспериментов с разным числом повторностей были созданы оригинальные программы для оценки достоверности влияния различных факторов.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ 0ДН0ЭТАПН0Г0 ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕНИЙ IN VITRO ДЛЯ ОЗДОРОВЛЕНИЯ РАСТЕНИЙ

Исследования по культуре изолированных тканей и органов, успехи в синтезе регуляторов роста с различным спектром действия, изучение физиолого-биохимических аспектов роста и развития растений позволили в 50-х-60-х годах создать методики, . обеспечивающие .получение растений на искусственных питательных средах из изолированных апексов, размером 0,5-1,0 мм. Эти приемы нашли широкое применение для оздоровления и, в первую очередь, от вирусной инфекции.

На землянике эти приемы оказались достаточно эффективными.

процент успешной регенерации зависел, главным- образом, от генотипа, что дало проводить комплексное оздоровление,' в том числе освобождать растения от нематодной инвазии. Эффективность составила 100% в случае стеблевой немагоды и до 85% при поражении земляничной.

Последний факт заставил нас искать альтернативные пути оздоровления. Как известно, основным приемом освобождения растений земляники от нематод является водная термотерапия. В своих исследованиях в качестве исходного материала использовали не целые растения, а изолированные апексы. Проведенная оценка толерантности апексов к повышенном температурам показала, что жизнеспособность эксплантов после термообработки практически не снижается (табл. 1).

Таблица 1.

Регенерационная способность изолированных апексов земляники сорта Гренада после обработки горячей водой

(1=48*0

Экспозиция Высажено Инфицировано Регенериро- % регене-

(мин) апексов (шт.) (шт.) вало (шт.) рации '

15 20 2 II 61

30 20 3 10 59

45 20 1 9 47

60 20 1 14 74

Контроль 20 0 15 75

Такая высокая резистентность апексов земляники, по сравнению с нативными объектами, по-видимому объясняется большей устойчивостью меристематических клеток и тканей. Возможно, в целом растительном организме происходит нарушение функции отдельных орга-

нов и. в первую очередь, корневой системы.

Особенно привлекательным такой прием оказался для комплексного оздоровления. Растения земляники, полученные в результате комбинации методов суховоздушной термотерапии, водной термотерапии апексов и последующей их культуры In vitro на 100% оказались здоровыми. Этот прием был зарегистрирован в качестве изобретения.

Модель одноэтапного получения растений была использована и на малине, однако попытки применить ее для кустарниковых и древесных видах плодовых и ягодных растений показали чрезвычайно низкую эффективность

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДВУХЭТАПНОЙ МОДЕЛИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ И РАЗМНОЖЕНИЯ ПЛОДОВЫХ И ЯГОДНЫХ РАСТЕНИЙ IN VITRO

Рабочая гипотеза, в основу которой положена двухэтапная схема получения растений, в окончательном виде была сформулирована в середине 70-х годов. Разработка этой гипотезы сделало необходимым детальное изучение потребностей апексов в элементах питания, регуляторах роста и физических условиях культивирования. Известно, что побеги хвощей, плаунов и папоротников хорошо развиваются на простых средах, лишенных витаминов и регуляторов роста. Более сложные среды необходимы для покрытосеменных растений. По-видимому, в процессе эволюции растительные организмы постепенно утратили независимость одних тканей и органов от других. Вероятно поэтому изолированные апексы в условии нарушенных коррелятивных связей требуют для образования побегов присутствия в питательной среде препаратов с цитокининовой активностью. Регуляторы роста этой группы способны также снимать эффект апикального доминирования и вызывать массовое образование дополнительных побегов. Развившиеся побеги могли быть укоренены на питательных средах после кратковременной обработки ауксинами или в присутствии последних.

После экспериментального подтверждения приведенных положений способ получения и размножения древесных и кустарниковых форм плодовых и ягодных растений был оформлен в качестве изобретения и явился основой для дальнейшего совершенствования методов клональ-ного микроразмножения и использования в системе производства оздоровленного посадочного материала.

Для земляники способ размножения оказался весьма перспективным

и хорошо воспроизводимым для абсолютного большинства сортов. На протяжении более чем 20 лет работы нами не обнаружено ни одного сорта земляники, который нельзя было размножить in vitro, хотя влияние сортовых особенностей прослеживалось достаточно четко. За этот период в экспериментах были использованы экспланты следующих сортов: Алая зорька. Амулет, Барон Солемахер, Боровицкая, Брайтон, Вола, Волшебница, Гренада. Гора Эверест, Деданка. Деснянка, Джеско, Дивная, Добрыня, Дукат. Дочь Пурпуровой, Жемчужница. Женева, Зенга-Зенгана. Зенга Тигайга, Зенит, Зефир, Золушка, Ко-кинская ранняя. Кокинская поздняя. Красавица Загорья. Кулон, Маковка, Профьюжен, Рапелла, Редгонтлит. Редстар, Родник, Роксана, Рубиновый кулон. Северянка. Спасская, Талка, Тристар, Трибьют, Фестивальная, Флорида. Фрагинетта, Фракунда, Хавиланд, Холидей. Эльвира, Элсанта и другие.

Использование двухэтапной схемы для получения растений малины красной из изолированных апексов позволило существенно увеличить выход оздоровленных растений и добиться высокой воспроизводимости результатов. Различные изменения в составе питательных сред выявили благоприятный эффект снижения концентрации аммонийного азота на первых этапах культивирования и возможность замены 6-бензнла-минопурина тидиазуроном в концентрациях приблизительно на порядок ниже. Сортовые особенности оказывали существенное влияние на коэффициент размножения. Разработанные и усовершенствованные способы получения растений в культуре in vitro, позволили оздоровить л провести первичное размножение таких сортов как Алый парус. Бальзам. Бабье лето, Валдай, Каскад, Киржач, Лазаревская', Латам, Малаховка, Метеор, Новость Кузьмина, Оттава, Солнышко, Скромница, Спутница, Таганка, Шоша и некоторых других.

Особый интерес представляют приемы,' разработанные, для размножения in vitro таких форм ремонтантной малины для которых получение посадочного материала в обычных условиях затруднено. Нами экспериментально показана возможность размножения некоторых таких Форм (табл. 2).

Возможно, низкий коэффициент размножения у этих форм в природных условиях связан с пониженным содержанием, в тканях веществ, обладающих цитокининовой активностью. Если это предположение окажется верным, то нормальный гормональный статус таких растений может быть восстановлен методами генетической инженерии путем пе-

Таблица.2.

Число и средний размер дополнительных побегов разных форм ремонтантной малины в зависимости от состава питательной среды и сортовых особенностей

Сорт, Регуляторы Среднее число Средний

форма роста дополнительных побегов размер побегов

(шт.) (мм)

БАП 1.5+

ИМК 0,05 12,1+3.1 19,2+4,5

ИПА 5,0+

ИМК 0,05 . 10.6+2,8 22.5+4.2

Ш 0,1 8,2+3,6 14.8+5.0

БАП 1,5+

ИМК 0,05 3,4±1,2 23,3±5,2

ИПА 5.0+

ИМК 0, 05 ' 2.6+1,5 5. 5+4. 8

тог о. 1 3.1+1,3 18,413.2

БАП 1,5+

ИМК 0,05 8,3+2,1 13, 5+3, 8

ИПА 5,0+

ИМК 0,05 6.4+2,4 16,0*3,2

тог о, 1 6,6±3.5 , 10.2+3.8

БАП 1,5+

ИМК 0.05 ' 11,8+3,0 27,9±5,8

ИПА 5.0+

ИМК 0,05 9,5±4,6 28. 016,4

Ш 0,1 7,6+3,8 18, 8+6,4

реноса бактериального гена, ответственного за синтез цитокинина (генные конструкции для этого уже созданы). Однако вопрос о сохранении ремонтантных качеств таких форм остается открытым до проведения специальных экспериментов. С другой стороны, наличие среди ремонтантных малин хорошо размножающихся форм может служить

подтверждением, что признак ремонтантное™ не обязательно связан со специфическим содержанием цитокинина в тканях' растений.

Близкие результаты' были получены с ежевикой (Агавам, Дарроу. Торнфри), малино-ежевичными гибридами (Логанберри, Тейберри, Мол-линг Санберри) и малиной черной (Кумберленд). Во всех случаях было показано преимущество использования в качестве материнских более молодых растений. Выявлены и некоторые закономерности в требовании эксплантов на первых этапах культивирования к элементам питательных сред. Для эксплантов разных сортов ежевики наилучшее развитие было получено на средах Мурасиге-Скуга и Ли и де Фоссар-да, тогда как экспланты Тейберри хорошо развивались на среде Андерсона, модифицированной для малины, что может служить косвенным подтверждением Тейберри к малинам, вследствие гибридного происхождения.

Не вызывает'затруднений получение и размножение in vitro растений смородины черной и смородины красной при использовании в качестве исходных эксплантов изолированных апексов размером 0,251,0 мм, хотя сортовые особенности оказывают существенное влияние как на регенерационную способность, так и на коэффициент размножения.

Среди изученных видов рода Ribes наименее воспроизводимые результаты были получены с крыжовником. Как показали наши исследования успех культивирования зависел от температурных условий и сортовых особенностей (табл. 3).

Введение в стерильную культуру эксплантов вишни, сливы, яблони, груши осложнялось выделением в питательную среду, окислением и поликонденсацией веществ фенольной природы. Снизить отрицательный эффект этого явления возможно путем регулярных пересадок на первых этапах культивирования, добавлением в питательную среду высокомолекулярного поливинилпирролидона, обработкой эксплантов перед посадкой антиокислителями (диэтилтиокарбомат натрия, аскорбиновая кислота) и культивированием эксплантов при пониженной температуре (18-20^0.

В результате многолетних экспериментов отмечено, что подвойные формы древесных растений при культивировании in vitro характеризуются большим коэффициентом размножения, по сравнению с сортами и обладают повышенной способностью к ризогенезу (табл. 4).

Таблица 3.

Реакция изолированных апексов разных сортов крыжовника на температурные условия культивирования

Темпера- Средняя длина Число листьев Число допол-С О Р Т тура,0 С побега, мм на эксплант, нительных

шт. почек, шт.

Смена 18 16,4+2,6 ' 4,2*1,0 3, 5±1,7

22 12,512,2 4.5*1,2 2.8+1, 1

26 ' 10,2+1,8 3,8+0,9 1,5+0,9

Северный

Капитан 18 18,3+3,5 5.0+1,8 3,6*1,7

22 ' 15.3+3,0 4,2+1.6 3,0+1.6

26 . • 11,4+2,9 4.0±1.2 1,7*0,8

Русский . 18 10.612.6 4.2*1.8 2,4+1,2

22 8,4+1,6 3,4+1,6 1.5±1,0

26 4,8+1,1 3,1*1.0 1,1+0,6

Разработанные нами приемы двухступенчатого получения растений из изолированных апексов и их клонального размножения с успехом были использованы на ирге (сем. 5?озасеае), облепихе (сем. Е1аея-nal.es), сортах актинидии китайской, формах актинидии коломикта и актинидии аргута (сем. АсМпШасеае), сирени обыкновенной (сем. 01еасеае), различных видах жимолости (сем. Сарг1Го11асеае), сортах пиона лекарственного, молочноцветкового и их межвидовых гибридах (сем. Раеоп1а), нарциссе (сем. ЫПасеае), гладиолусе (сем. 1Пс1асеае), сортах различных групп роз (сем. Ноэасеае), хмеле (сем. СаппаЬасеае), а также кизильнике блестящем (сем. Новасеае). гиацинте (сем. Ш1асеае), секполии фиалкоцветной (сем. Сезпег1а-сеае), филодендроне (сем. Агасеае), ананасе (сем. ВготеИасеае). кофе (сем. КиМасеае), орхидеях (сем. ОгсМйасеае), лимоннике ки-

■ • Таблица 4.

Развитие изолированных апексов разных форм яблони в первом субкультивировании.

Регенерировало Размер число Число почек Сорт, подвой эксплантов, % экоплан- листьев на эксплант

та, мм шт. шт.

Антоновка 9 0.0 20. 0 7,0 3.0

Годден Делишес: 86,2 22,0 6,0 3,2

Коричное новое 94,2 12,0 2,9 1,3

Лобо 94,1 13,6 2,7 1,6

Мелба 100,0 22.0 11.8 2.5

КВ-30 76,0 15,2 4,8 1.8

КВ-43 68,0 16,4 5.2 ' 1.7

54-118 100,0 17,5 16,5 3.5

57-233- - 20, 0 11,8 3,5

57-490 100,0 20,7 8,6 5,3

57-545 - 22,1 19,3 3,1

62-396 100,0 17,0 6,1 4.8

3-4-25 90,0 18,5 9,2 4,4

3-5-33 83,3 18,3 4,5 3,3

3-47-77 - 20,0 12,6 ' 2,0

3-1-91 - • 17,9 5,9 3,0

НСР 05 4,3' _ ' 2,2

тайском (сем. БсМзапйгасеае) и некоторых других видах, всего более чем из 16 различных семейств.

одной из проблем при микроразмножении является повышение коэффициента размножения, что позволяет сократить число чубкультиви-рований, необходимых для получения требуемого количества материала. Это может быть осуществлено за счет повышения в питательной среде содержания цитокинина. Однако высокие концентрации 6-бенэи-

ламинопурина приводят к появлению аномальных побегов и увеличивают риск возникновения мутационных изменений. Следовательно, простым повышением концентрации цитокинина коэффициент размножения можно увеличить без ущерба для качества конечной продукции только до определенного предела, обусловленного свойствами системы экс-плант-экзогенный цитокинин. Альтернативный путь - . использование негормональных препаратов, способных повлиять на проявление апикального доминирования, в частности, трииодбензойной кислоты, специфически ингибирущей транспорт ауксинов. Использование этого препарата позволило существенно повысить коэффициент размножения у ряда сортов и форм косточковых культур (табл. 5).-'

Таблица 5.

Влияние трииодбензойной кислоты на коэффициент размножения различным форм вишни

Контроль Концентрация ТИБК, мг/л

Сорт, подвой 6-6АП

1,0 мг/л • 1,0 2,0 5,0 10,0

п-з 27,0 28,9 14,9 4.8 1,0

П-7 . 25,2 28,6 , 11.6 9.1 1.0

ВП-1 20,9 28,2 19,4 9,5 1,5

Владимирская 14,4 21,1 16,8 13,6 12,0

.Любская 15,7 19,8 11.9 8,0 . 6,2

Шубинка 12,8 13,9 И, 1 10,4 5,7

Это направление представляется весьма перспективным ' и оригинальным, а сам способ контроля коэффициента размножения был зарегистрирован в качестве изобретения.

Другим направлением может стать использование препаратов с более высокой цитокининовой активностью или различных их комбинаций В качестве примера можно привести уже упоминавшийся тидиазурон или использование совместно с 6-бензиламинопурином изопентенила-

минопурина, что повышает долю побегов с нормальной морфологией и несущих нередуцированные листья.

КОНТРОЛЬ РИЗОГЕНЕЗА У КУЛЬТИВИРУЕМЫХ IN VITRO ЭКСПЛАНТОВ

Важным моментом в двухэтапной модели является укоренение развившихся побегов. При интенсивном размножении образуемые конгломераты состоят, в основном, из укороченных побегов. Для эффективного укоренения и последующего развития растений наиболее пригодны побеги длиной более 15 мм.

Повысить относительное количество побегов длиной более 15 мм можно путем культивирования эксплантов на средах, ' способствующих росту побегов. Как показано нашими экспериментами, такими средами могут быть среды,содержащие пониженные концентрации 6-бензилами-нопурина (0,1-0,2 мг/л) или комбинации 6-бензиламинопурина с гиб-берелловой кислотой (5,0 мг/л). . Использование сред с одним цито-кинином оказалось предпочтительнее, так как присутствие в питательной среде гиббереллина хотя и позволяло в коротких сроки добиться элонгации побегов, могло снизить выход укорененных растений более чем в два раза, что объясняется накоплением побегами гибберелловой кислоты в процессе культивирования (табл. 6).

В этих случаях отсутствовала активная стимуляция процесса каллусогенеза вследствие совместного влияния экзогенных ауксинов и остаточных цитокининов, что также положительно сказывалось на корнеобразовании.

Индукция корнеобразования может быть проведена дйумя путями: 1) включение препаратов группы ауксина в состав питательных сред и 2) обработка базальных участков побегов ауксинами с последующим культивированием на средах, свободных от регуляторов роста.

Накопленный экспериментальный материал показывает неоспоримые преимущества последнего способа, по сравнению с введением ауксинов в питательную среду (табл. 7). Причем,,положительный'эффект кратковременных обработок проявлялся не только в отношении процента укоренений, но и в отношении числа развившихся корней на побег и средней длины каждого корня. Такая ситуация легко объяснима с точки зрения характера действия ауксинов. Процесс собственно индукции ризогенеза кратковременный, поэтому присутствие

Таблица 6.

Качественный состав конгломератов и укореняемость побегов в зависимости от концентрации 6-бензиламинопурина в питательной

среде

Культура Сорт, Концентрация % побег 0 в % укоре-

форма БАП, мг/л <5 мм 6-15 мм >15 ММ ' нения

Малина Бабье 2.0 34 30 36 80+8. 4

лето 0,2 8 34 58 92Л0.0

Смородина Загад- 2,0 35 45 20 72+12,0

черная ка . 0,2 10 30 60 96+14,2

Малино- Тей- 2,0- 26 38 36 88+9, 6

ежевичный берри 0,2 8 32 60 94+10,2

гибрид (

Вишня Кентиш 2.0 40 40 20 60+6.5

МОрелла 0,2 6 44 50 92+11.4

Яблоня 57-545 2.0 48 44 ' 8 33+9, 8

0,2 12 36 52 76+13.1

Груша Желтая 2,0 51 34 15 46114, 5

0,2 ' 1.6 39 45 68+12,2

ауксинов необходимо только на первых этапах. Дальнейший контакт развивающихся корней с этими веществами бесполезен и даже нежелателен.

Для культур, характеризующихся высоким коэффициентом размножения и относительной легкостью укоренения нами был разработан простой эффективный прием, позволяющий существенно снизить затраты за счет ликвидации ряда операций и экономии питательных сред.

Таблица •7-.

Укореняемость микропобегов (%) разных видов растений в зависимости от способа индуктора ризогене'за

Способ аппликации ауксина

Культура Сорт, форма _

В среде Замачивание Пудра

Малина

Малино-

ежевичный

гибрид

Алый парус Бабье лето, Скромница

Тейберри

Смородина Загадка черная Наследница Смородина Голландская

красная

красная

Вишня Владимирская Молодежная

Слива

Яблоня

Груша

Память Тимирязева Скороспелка красная

Голден Дели-шес

ММ 106 '

Березка Лада

Актинидия Аргута

Коломикта

80, 0+8,5

92,0+10,0

87,4+4,5

80, 2±6, 5

78,0*5,6 60, 0*4, О 75,0+0,0

64, 2+7,5 74, 2+4, 5

56, 8+3, 2

25. 0+5, О

18,6*3,4

56,4±4,4

33,3+5,0 16,2+6,0

60. 0±8,6 58,3*4,2

96,6±3, 8 100 100

100

92, 0+4, 2 95,0±3, 2 90,0+5. О

88, 6+3,2 90, 0+4,7

80,2+4,2

56,8+6,4

50,0+0,0

80, 2+4, 6

52, 3+4. 2 56.5*3,2

100 92,4+6.4

97.4+3,2 98,2+4,2 100

90, 0+2, О

■ 94,5+4,6 95,0+5.6 85,0*2,9

76,5+5,5 92,5+3,2

80,0+4,0

40, 0+0, О

52.2+7,5

84, 2±6, 4

50, 0+8. 2 48,4*5.2

100 87,2+7.0

Сущность его заключается в следующем. Предшествующее укоренению субкультивирование ■ проводят на жидкой или полужидкой питательной среде с содержанием 6-бензиламинопурина 0,1-0,25 мг/л. .После того, как цитокинин будет в значительной степени использован, в культуральные сосуды вносят, раствор индуктора ризогенеза и продолжают культивирование до массового образования корней. Частота укоренения побегов земляники в таких условиях составила 78%. черной смородины - 67%, что вполне сопоставимо с результатами при раздельном укоренении в индивидуальных сосудах.

Считается, Ч*го среди многих факторов, оказывающих влияние на процессы ризогенеза In vitro, большую роль играет' температура. Для изучения различных температурных режимов на укоренение побегов нами была сконструирована специальная установка, обеспечивающая заданную температуру в зоне ризогенеза. Результаты показали, что в случае относительно легкоукореняемых форм частота укоренения побегов при пониженных температурах (15 и 19°С) практически не/зависит от использования экзогенных ауксинов (табл. 8) и приблизительно одинакова в контрольном варианте, и в варианте с обработкой базальных участков побегов ауксинсодержащей пудрой после фазы элонгации ■ побегов, обеспечивающим максимальную укореняе-мость. Повышение температуры до 25°С существенно снижало процент укоренения в контрольном варианте, но практически не оказывало влияния на укореняемость обработанных.ауксином побегов. Вопреки ожиданиям такая же ситуация имела место и в вариантах, когда инкубированию при повышенной температуре подвергали только зону корнеобразования (базальная часть побегов). Возможным объяснением такого эффекта может служить более интенсивное разрушение натив-ных ауксинов и ко-факторов укоренения в культивируемых побегах при повышенных температурах вследствие активизации некоторых ферментных систем, например, ИУК-оксидазы. В обработанных ауксинами побегах возникающий дефицит эндогенных ауксинов в какой то мере компенсируется экзогенными, что препятствует снижению частоты укоренения. Аналогичные результаты были получены и с другими ма-лино-ежевичными гибридами этой' группы.

Таблица 8.

Развитие корневой системы у побегов Тейберри в зависимости от температурных условий культивирования , . и способа аппликации ауксина

Способ аппликации Температура % укоренения Среднее Средняя

ауксина культиви- число длина

рования корней. корней.

шт. мм

Введение ИМК в 15t 35,1 2.4 4,9

питательную сре- 19 "С 40,0 1.8 7.7

ду (после разм- 25°С 52,0 2,2 16.0

ножения. 25/15°С *) 40,0 1.5 6.1

БАП 1,2 мг/л)'

Обработка ИМК 15°С 61,1 4.0 3.0

содержащей пуд- 19°С 75.0 2.1 7.2

рой (после разм- 25° С 90,0 3,1 9.1

ножения, 25/15°С 90.0 2,9 6,3

БАП 1,2 МГ/Л)

Обработка ИМК- 15"С 90,3 3,1 9,1

содержащий пуд- 19°С 100 4.3 11,2

рой (после элон- 25°С 94,7 3,7 14,5

гации. 25/15°С 95,0 4,4 ' 7,8

БАП 0.2 мг/л)

Контроль (без 15°С 94,'1 2,6 ' 27,9

обработки аук- 19"С 82,4 2,6 30,4

сином после 25° С 50, 0 1,6 33.4

элонгации. 25/15°С 52,9 2, 1 23,6

БАП 0,2 мг/л)

НСР ' 05 - 0,2 . 3,8

*) 25ÖC в зоне корнеобразования. 15°С - "надземная" часть

В целом, как показывает практика, существует определенная корреляция между ризогенной способностью микропобегов in vitro и зеленых черенков. Однако, укореняемость побегов in vitro была существенно выше. Объяснением этому, помимо более благоприятных условий. могут быть процессы реювенилизации. Нами отмечено изменение коэффициента размножения с числом субкультивирований. Аналогичное явление имеет место и в отношении частоты укоренения. Нарастание вегетативной продуктивности и повышение частоты укоренения побегов возможно, с;одной стороны, связано с. процессами оздоровления культивируемых эксплантов, а с другой связано с реювени-лизацией, увеличением в эксплантах доли молодых клеток, изменениями биохимического состава и анатомо-морфологической подготовленностью тканей к регенерации.

АДАПТАЦИЯ ПРОБИРОЧНЫХ РАСТЕНИЙ К НЕСТЕРИЛЬНЫМ УСЛОВИЯМ v

Перенос пробирочных 'растений в нестерильные условия представляет собой важнейший этап, способный, в случае, неудачи, полностью перечеркнуть всю предшествующую работу. На этом этапе приходится учитывать два основных фактора характеризующих пробирочные растения: анатомо-морфологический, заключающийся в отсутствии или сниженном количестве кутикулярного воска, слабо развитой хло-ренхйме, ненормально- функционирующих устьицах и физиолого-биохи-мический, отражающий пониженную способность к фотосинтезу, вследствие их фотогетеротрофности при культивировании на средах, содержащих источники углеводов. .

В процессе работы задачу перевода пробирочных растений в нестерильные условия решали для конкретных видов растений. Общими моментами практически для всех видов были следующие: подготовка листового аппарата к условиям пониженной влажности, перевод на фотоавтотрофный тип питания, стимуляция развития адвентивных корней in vivo, обеспечение стерильности субстратов на первых этапах . после высадки.

Адаптацию листового аппарата пробирочных растений можно начинать непосредственно в культивационных сосудах, снимая полностью или нарушая герметичность покрытий, а для предотвращения развития

микрофлоры наносить на поверхность питательной среды раствор системного фунгицида или продолжать культивирование' на аппарате рол-лерного типа в состоянии вращения с ориентацией по горизонтальной оси.

Нами было установлено, что роль корней, развившихся In vitro, в обеспечении жизнедеятельности растений в почвенных субстратах незначительна (табл. 9). Это дало основание для отработки приемов высадки неукорененных микрочеренков в стерильные почвенные субстраты. Усовершенствованный способ позволил повысить выход материала с помощью черенкования укоренившихся в стерильном субстрате побегов и на него был получен патент. • Для относительно легко образующих адвентивные корни форм нами был предложен способ заглубленной посадки пробирочных растений.

Таблица 9.

Состояние кбрневой системы растений сливы Скороспелка красная спустя 2 нед после высадки из пробирок

Срок В а р и а н т

Показатели наблю- Сохранение Укорачивание Удаление

дения корней корней корней

Число корней, Перед 3.0 2,0 1.9 '

шт. высадкой

Общая длина 5.2 3.4 3,3

корней, см

Длина стебля, ем 7,0 5,1 4,8

Число корней. Через 3,9 4,0 4,4 '

шт. 2 нед

Общая длина 15,3 11,3 10,7

корней, см

Длина стебля, см 10,1 6,9 '6,8

Прирост корней, см 10.1 9,6 10.7

Прирост стебля, см 3,2 1,8 2,2

НСР 05: прирост стебля 1,0

Для трудноукореняющихся форм при массовом производстве оздоровленного посадочного материала целесообразно'использовать метод

микропрививок, который может быть осуществлен как in vitro, так и на адаптированные здоровые растения.

Массовое производство растений неизбежно поставило вопрос о генетической стабильности посадочного материала, получаемого в процессе микроразмножения, поскольку в ряде случаев было отмечено появление растений, которые вели себя после выхода из пробирок иначе, нежели чем исходные формы. В наших экспериментах наиболее часто встречались изменения типа секториальных химер, карликовость. изменение габитуса. Очень редко наблюдали и более крупные изменения, такие как, например, потеря розеточности у земляники.

Изменения могут носить генетический характер или быть модификациями (морфозами). Последние исчезают со временем, а частота их проявления может быть гораздо выше, по сравнению с мутациями, и зависит от условий культивирования.

В целом, более чем 20-летний опыт показывает, что при соблюдении определенных условий можно существенно уменьшить риск появления уклоняющихся форм. Это, прежде всего, использование сред, препятствующих образованию каллусной ткани, размножение по отдельным мери-клонам для облегчения контроля за происхождением растений, регулярные апробации на сохранение помологических признаков и другие мероприятия.

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСНИХ ПРИЕМОВ ДЛЯ СОЗДАНИЯ НОВЫХ ФОРМ РАСТЕНИЙ

В селекционной практике, помимо приемов клонального микроразмножения, позволяющих в сжатые сроки размножить новые гибриды, мутанты и другие ценные формы, все более широкое применение находят биотехнологическиё методы культуры на искусственных питательных средах семян, изолированных зародышей, пыльников, листовых экс-плантов и других тканей и органов.

Культура семян. Этот прием целесообразно использовать при ограниченном количестве семян и низкой их всхожести. Он позволяет проводить искусственную скарификацию во время посадки и при комбинации с техникой микроразмножения получать из одного семени несколько растений, что повышает вероятность сохранения ценных

генотипов. Нашими работами показано, что использование культуры семян может повысить всхожесть у ежевики до 80%, у малины черной - до 43%. Присутствие в питательной среде 6-бензиламинопурина позволило получить из каждого семени до четырех побегов. Этот факт может быть использован для получения и тиражирования генетических "близнецов" без вывода их из ювенильной фазы,- что необходимо для постановки специальных экспериментов, в частности, для определения влияния доли того или иного фактора внешней среды на формирование растительного организма в онтогенезе.

Культура изолированных зародышей. В настоящее время получение на искусственных питательных средах сеянцев из зародышей, завершивших свое развитие в материнских тканях или близких к завершению, не представляет особых сложностей. Однако, для селекционеров эти методы не всегда приемлемы, так как в случае проявления, несовместимости при отдаленных скрещиваниях абортирование зародыша происходит на самых ранних фазах развития и получение гибридных сеянцев из них остается проблематичным. Используя подходы стимуляции меристематических клеток и тканей, разработанные для изолированных апексов, нам удалось получить растения из зародышей, изолированных на 20-22 день после опыления (табл. 10).

Видимо потребности меристематических клеток в факторах роста остаются сходными в процессе онтогенеза, хотя их компетентность может быть различной. Используемые питательные среды позволили получить- от каждого зародыша по несколько идентичных копий, избежать прохождения покоя при пониженных температурах, что упрощает процесс выращивания и сокращает время получения сеянцев. Кроме того, на средах модифицированного состава отмечена индукция развития побегов на изолированных семядолях, что /также повышает сохранность уникальных генотипов даже в случае гибели точки роста.

Культура изолированных пыльников. - каллусов,- листовых зксплан-тов. Особенно интересным аспектом применения биотехнологических методов является возможность индукции генетических изменений для придания растительным организмам необходимых признаков.

, В настоящее время наиболее эффективными методами индукции изменений считаются следующие (D.J.James, 1987):

1) регенерация из так называемых комплексных зксплантов для получения сомаклональных и гаметоклональных вариантов. 2) мутаге-

Таблица 10.

Развитие зародышей вишни (Орловская ранняя от свободного опыления), изолированных через 20-23 сут после опыления, в присутствии различных регуляторов роста.

Регуляторы роста, мг/л

Показатели __

Контроль БАП 0,2 БАП 1,0 БАП 0.2+ГК 10,0

Число учетных

зародышей, шт. 15 15 20 20

Развились в

проростки, шт. О 0 20 19

Число проростков

с корнями, ШТ. О О II 14

Средняя длина корней, мм

Число проростков, развивших листья, шт. О

Среднее число листьев, шт.

Число зародышей с . дополнительными побегами, шт. О

Выход растений, шт. О

3,3

11,4

18

17

15.;

з, 1

18

17-

0

нез In vitro с последующей регенерацией растений, 3) получение растений с. измененной плоидностью, 4) различные операции с протопластами, 5) генетическая трансформация с использованием векторов. Практически все перечисленные позиции могут быть осуществле-

Таблица П.

Органогенез в культуре листовых дисков малины сорта Скромница в зависимости от концентрации ИМК и длительности культивирования при пониженной освещенности.

Концентрация ИМК (мг/л)

Длительность культивирования при пониженной освещенности (суток)

Экспланты Среднее число Средняя с побега- побегов на длина по-ми {%) эксплант (шт.) бегов

(мм)

0 0 0 0 0

0 с и 0 0 0

О 10 10 1.010 7.010.4

О 15 5 1.01:0 5. 0±0. 3

О 20 5 1.010 5. ОЮ. 3

0.5 0 30 1. 9±0. 4 4.010.4

0.5 5 15 1.310.3 6.510.7

0.5 10 10 1.0±0 2. 010.2

0.5 15 50 1.210.2 3. 710.8

0.5 20 25 1.410.2 6.6Ю.7

1.0 0 30 1.8±0. 5 6. НО. 8

1.0 5 40 .. 1. 6±0. 3 5. 010.7

1. 0 10 30 2.0*0.5 7.5+1.0

1.0 .15 35 2.4±0. 8 9. 9±1. 4

1.0 20 25 1.0+0 4: 0£0. 5

2.0 0 50 1.910.3 9.011. 1

2.0 5 20 1.010 8. 310.9

2.0 10 20 ' 1.310,3 7. 010. 8

2.0 15 0 0 0

2.0 20 15 1.0±0 6.3±0.6

5.0 0 5 1.0±0 3.0Ю.2

5.0 . 5 0 • 0 0

5.0 10 20 1.010 4.5+0.6

5.0 15 0 0 0

5.0 ■ 20 0 ' ■ ' -.0 0

Концентрация ИМК :" Г = 11.? * 3.3**" Р = 8.9*"**"

Взаимодействие концентрации

ИМК и длительности культи- < ' •

вирования -Г = 1.9 Гф < Гт Р = 2 5**"

ны только при наличии надежных способов регенерации растений из тех или иных типов эксплантов.

В результате наших разработок стало возможным получать расте-ния-регенеранты в культуре листовых дисков земляники, малины и некоторых косточковых растений, в культуре каллусной ткани земляники и вишни, а также добиться эффективной регенерации в культуре пыльников земляники. Для этого проводили многофакторные эксперименты с привлечением методов математического планирования, в которых были выявлены специфические требования культивируемых эксплантов к условиям культивирования, включая минеральный и гормональный состав питательных сред, световой режим, смену состава питательных сред, культуру в перемешиваемых жидких средах (табл. И).

Показана высокая эффективность препарата тидиазурона в культуре листовых эксплантов малины для индукции регенерации побегов. Этот препарат обеспечивал повышение частоты регенерации приблизительно в два раза, по сравнению с 6-бензиламинопурином, и позволил добиться получения растений даже у тех форм, для которых использование БАП было бесполезным. Кроме того действие Тд1 меньше зависело от генетических особенностей растений-источников эксплантов.

ВКЛЮЧЕНИЕ РАЗРАБОТАННЫХ ПРИЕМОВ В СИСТЕМУ ПРОИЗВОДСТВА ОЗДОРОВЛЕННОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И СХЕМЫ ПОЛУЧЕНИЯ НОВЫХ ФОРМ РАСТЕНИЙ ДЛЯ ЦЕЛЕЙ СЕЛЕКЦИИ

Существует достаточно много различных схем использования биотехнологических приемов для получения и размножения оздоровленного посадочного материала конкретных видов растений (В.Г.Трушечкин и др., 1984). Анализ информации по этому вопросу показал, что целесообразность включения таких приемов в процессы оздоровления и размножения зависит от степени.разработки метода, его эффективности (с точки зрения терапевтического эффекта и коэффициента размножения) и технологичности. Мы рекомендуем в питомниководстве плодовых и ягодных 'растений использовать биотехнологические приемы в трех основных Аспектах: культура апексов для целей оздоровления, культура органов для ускоренного размножения, хранение стерильных культур для создания коллекций оздоровленных форм.

С фитосанитарной точки зрения основным критерием свободы растений от патогенных организмов может быть только тестирование по •полной схеме. Поэтому, на первом этапе культуры in vitro одной из основных задач является скорейшее получение материала, который может быть подвергнут анализу на присутствие патогена. Как правило, таким материалом служат адаптированные к.нестерильным условиям растения или, что возможно при использовании иммуноферментного анализа, пролиферирующие In vitro культуры..

В зависимости от результатов тестирования исходные стерильные культуры могут быть использованы для клонального микроразмножения или повторения процесса оздоровления. В последнем случае целеро-образно использовать термотерапию in vitro, хемотерапию, культуру апексов побегов, развившихся in vitro, микропрививки или комбинации перечисленных приемов (рис. 1).

Создание своеобразного банка ценных форм может оказаться полезным и для селекционеров, .особенно для хранения экземпляров быстро вступающих в фазу плодоношения, например, земляники. Это позволит, в случае необходимости, включать такие формы в запланированные скрещивания, экономить значительные земельные площади, работать . с проверенным оздоровленным материалом, уменьшить риск ■ потерять единичные экземпляры ценных доноров, особенно, если они не являются эндемичными формами.

Другие возможные применения биотехнологических методов для целей селекции схематически представлены на рис.2.

Классическим приемом в селекционной практике; стало использование, культуры изолированных зародышей для получения новых форм, особенно при отдаленных скрещивании. .Наряду с культурой семян техника культуры изолированных зародышей может/' применяться и для получения генетических, "близнецов" сеянцев, /

Культуру пыльников также 'можно уже считать' общепринятым методом, обеспечивающим получение гаплоидных организмов и изогенных линий. Эта же техника дает возможность селектирования гаметокло-нальных вариантов. /'..''

Многообещающим направлением является Получение трансгенных растений, развитие которого в отношении плодовых и ягодных растений становится реальным после создания надежных приемов регенерации полностью развитых растений в культуре эксплантов типа листовых дисков.

Рис. I. Схема включения биотехнологических приемов в систему производства оздоровленного посадочного материала

ИСХОДНЫЕ ФО РМЫ

ХРАНЕНИЕ IN VITRO

¡;

КУЛЬТУРА ФОРСИРОВАННОЕ

АПЕКСОВ РАЗМНОЖЕНИЕ

КАЛЛУСНАЯ МУТАГЕНЕЗ

КУЛЬТУРА IN VITRO

КУЛЬТУРА ПЫЛЬНИКОВ

КУЛЬТУРА

КОМПЛЕКСНЫХ

ЭКСПЛАНТОВ

КУЛЬТУРА ИЗОЛИРОВАННЫХ ЗАРОДЫШЕЙ

КУЛЬТУРА СЕМЯН

ПОЛУЧЕНИЕ РАСТЕНИЙ С ИЗМЕНЕННОЙ ПЛОИДНОСТЫ)

СОМАКЛОНАЛЬНЫЕ ВАРИАНТЫ

ТРАНСГЕННЫЕ РАСТЕНИЯ

ОТДАЛЕННЫЕ.ГИБРИДЫ

I

ПОЛУЧЕНИЕ /ГЕНЕТИЧЕСКИХ!/ "БЛИЗНЕЦОВ"

Рис. 2.

I

Использование Оиотехнологических приемов в селекции плодовых и ягодных растений

Все перечисленные методы могут существенно расширить генетическую базу плодовых и ягодных растений для создания новых форм, а уровень их разработки на сегодняшний день вполне пригоден для практического использования.

ЭКОНОМИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ

ПРИЕМОВ

Техника культуры изолированных тканей и органов in vitro, как и любой другой прием имеет свои преимущества и недостатки, к преимуществам относят: возможность комплексного оздоровления, высокий коэффициент размножения, гибкость процесса, возможность получения большого количества растений за короткое время, возможность хранения и накопления пробирочных растений для высадки в оптимальные сроки.

С другой стороны, практическое использование биотехнологических методов требует создания специализированных лабораторий с соответствующим оборудованием, высококвалифицированного штата сотрудников, тщательного отбора исходных форм по всем показателям, так как примесь и зараженные рядом патогенов экземпляры не могут быть удалены до высадки растений в нестерильные условия. К недостаткам метода можно также отнести и то, что In vitro ' получается материал плохо подготовленный для выращивания в нестерильных условиях, требующий дополнительных затрат для достижения растениями стандартных показателей.

Тем не менее, культура изолированных апексов, ; используемая в качестве инструмента оздоровления самостоятельно или в сочетании с термотерапией или хемотерапией, в ряде случаев может стать единственным способом получения оздоровленного посадочного материала. На фоне достаточно больших затрат по. тестированию, содержанию индикаторов, амортизации,лабораторного оборудования и тепличных площадей, себестоимость растений, произведенных биотехнологическими методами представляется относительно невысокой. Повышение же эффективности оздоровления,- со всеми вытекающими отсюда последствиями, уже сделало эти методы стандартными для производства оздоровленного посадочного материала.

Что касается собственно клонального микроразмножения растений,

достоинства и недостатки которого были отмечены ранее, то его экономическая целесообразность должна быть оценена в каждом конкретном случае. Так, при размножении единичных оздоровленных и тестированных экземпляров для получения большого количества растений, ■ используемых для закладки маточных насаждений, эти методы вполне оправданы и рентабильны, поскольку высокий коэффициент размножения и возможность в течение короткого времени получить большое количество материала позволяют существенно сократить время внедрения его в производство и затраты на тестирование.

Проведенные нами расчеты показывают, что себестоимость микро-размноженных растений может составлять от 0,5 до 5 рублей за единицу, в зависимости от вида. Существенную долю в себестоимости занимают амортизационные отчисления на лабораторное оборудование (табл. 12). Поэтому снижение себестоимости может быть достигнуто за счет увеличения ежегодной продукции.

На сегодняшний день, область использования методов клонального микроразмножения ограничивается размножением особо ценных форм и, в первую очередь, исходных оздоровленных тестированных растений, что и обуславливает высокую рентабильность использования этих приемов.

В селекционной практике форсированное тиражирование элитных отборов позволяет на несколько лет сократить сроки сортоиспытания и внедрения новых сортов в производство; Разработанный способ получения растений из незрелых зародышей, обеспечивающий развитие от каждого эмбриона нескольких идентичных генотипов и исключающий период охлаждения, существенно увеличивает выход гибридных организмов и дает возможность довести практически; каждый образовавшийся зародыш до взрослого организма.. Ряд наиболее важных моментов, которые обеспечивает использование био^ехнологических приемов в садоводстве, в обобщенном виде представлены в табл. 13.

Таким образом, использование биотехнологических методов в садоводстве дает как непосредственный экономический эффект, связанный с получением посадочного материала с повышенным качеством . в более короткие сроки, что обеспечивает прибавку урожая, повышение коэффициента размножения, так и дополнительные положительные моменты, связанные с ускорением внедрения новых форм в производство, сокращение площадей, занятыми коллекционными насаждениями, сокращением сроков получения новых гибридных форм и возможностью

Таблица 12.

Расчет себестоимости 1000 растений, полученных в процессе клонального микроразмножения

Наименование статей затрат Сумма (руб.)

Стоимость реактивов 175,6

Электроэнергия 97, 0

. Вода 8,6

Лабораторная посуда . 100,0

Заработная плата с начислениями 176,0

Прочие затраты 50. 0

Всего затрат 607,2

Прочие и прямые затраты(включая

амортизационные отчисления на

лабораторное оборудование 30,36

Накладные расходы 475,2

ИТОГО: 1112,76

Таблица 13.

Эффективность использования биотехнологических

приемов в садоводстве

Показатели Положительный эффект

Эффективность оздоровления до 100%

Увеличение коэффициента размножения 10-40?

Сокращение площадей для хранения

коллекционного материала ■ в 50-100 раз

Сокращение сроков внедрения новых

сортов и форм в производство на 2-3 года

Сохранение ценных генотипов при

использовании культуры зародышей до 100%

Сокращение сроков улучшения сортов'

и Форм по отдельным признакам до 1-2 лет

„...„.,..,,......... ,__________________________________т.---

улучшения существующих сортов по отдельным признакам.-

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1.В результате многолетних исследований (1974-1996 г.г.) разработаны и усовершенствованы эффективные приемы получения в культуре изолированных апексов и клонального микроразмножения растений малины, ежевики, смородины черной, смородины красной, крыжовника, подвоев и сортов вишни, сливы, яблони, груши, ирги, актинидии и ряда декоративных видов, базирующиеся на двухэтапной схеме, защищенной ■ авторским свидетельством на изобретение (А.С. N626728), а также на использовании оригинальных питательных сред как для этапов собственно размножения (A.C. N1279082), так и для этапов укоренения (A.C. N1706481). и способах адаптации пробирочных растений к нестерильным условиям (A.C. N1493187, N1591887, N1706481, N1720597). ' ■

2. Использование методов культуры изолированных апексов существенно повышает эффективность оздоровления плодовых и ягодных растений, как в качестве самостоятельного приема, так и в комбинации с термотерапией или химиотерапией. Разработанный на основе изучения резистентности отдельных органов растений к повышенной температуре прием сочетания водной термотерапии перед введением апексов в стерильную культуру позволяет освободится от клещей и нематодной инвазии у растений земляники (А.С. N1658929).

3. На регенерационную способность в культуре изолированных апексов, листовых дисков и других типов эксплантов, а также на коэффициент размножения in vitro существенное влияние оказывают генетические особенности размножаемой формы, /сорта и вида растения. У плодовых древесных растений подвойные/формы. как правило, обладали большей регенерационной способностью и характеризовались большим коэффициентом размножения, по сравнению с сортами, что коррелирует с их поведением при размножений традиционными способами. . /

4. Экспериментально показана возможность для некоторых видов растений негормонального контроля коэффициента размножения путем включения в питательную среду препаратов, блокирующих транспорт ауксинов. Этот.факт позволил разработать оригинальный состав питательных сред для этапа микроразмнокения (A.C. N1279082), что

привело к повышению эффективности разработанных приемов микроразмножения и увеличению общего выхода растений.

5. Контроль ризогенеза у размноженных in vitro побегов возможно осуществлять путем изменения состава питательных сред на этапе. предшествующим укоренению, способа аппликации индуктора ризогенеза и. в отдельных случаях, изменением температурных условии культивирования.

6. Длительность культивирования in vitro существенно влияет на поведение эксллантов, изменяя коэффициент размножения и способность к ризогенезу, что, вероятно, связано с процессами реювени-лизации, индуцируемыми специфическими условиями стерильной культуры. Анализ результатов сравнительной оценки характеристик зке--плантов и растений в процессе длительного культивирования позволил обосновать оптимальные сроки культивирования in vitro различных видов плодовых и ягодных растений, что нашло отражение в разработанных ОСТах на "Посадочный материал плодовых и ягодных культур. полученный in vitro".

7. Подбором состава питательных сред, условий культивирования и соответствующей модели размножения можно свести к минимуму риск появления уклоняющихся форм при массовом производстве посадочного материала.

8. Применение разработанных питательных -сред и приемов культивирования изолированных зародышей (A.C. N1261587) позволяет повысить выход гибридных растений за счет использования эмбрионов ранних фаз' развития, получения от каждого зародыша нескольких побегов и сократить сроки выращивания растений путем исключения этапа культивирования при пониженных температурах.

9. Разработанные приемы получения растений-регенерантоп в культуре пыльников, каллусов различного происхождения, листовых дисков (Патент РФ N2063681) могут быть использованы для создания новых форм плодовых и ягодных растений путе.м отбора сомаклональ-ных вариантов, получения гаплоидов и изогенных линий, полиплоиди-зации, мутагенеза in vitro и получения трансгенных растений.

10. Экономический эффект от использования методов клонального микроразмножения достигается как за счет возможности получать от единичных экземпляров несколько тысяч растений в течение относительно короткого времени, вне зависимости от сезона, проводить комплексное оздоровление от патогенов, для которых другие приемы

неэффективны, так и за счет увеличения у полученных In vitro экземпляров потенций к дальнейшему вегетативному размножению, вследствие процессов реювенилизации, экономии площадей для хранения ценных форм растений в несколько десятков раз- и сокращения сроков создания оздоровленных маточников на 1-2 года.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ПРАКТИЧЕСКОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

Для повышения эффективности оздоровления и ускорения процессов размножения оздоровленных экземпляров включать в систему производства биотехнологические приемы с использованием методов культуры изолированных апексов. Практиковать новые сочетания культуры органов in vitro с традиционными способами оздоровления (А.С N 1658929).

При работе с конкретными видами растений руководствоваться разработанными методиками ("Методические указания по клональному микроразмножёнию подвоев и сортов яблони" (ВАСХНИЛ, 1985); "Методические указания по клональному микроразмножению красной и черной смородины"(1986), по микроклональному размножению сортов и подвоев косточковых культур (Агропромиздат; 1987), "Промышленная ■ технология возделывания малины (1989 г.).

Для повышения выхода укорененных пробирочных растений- использовать прием предварительного культивирования конгломератов почек и побегов на средах с пониженным содержанием 6-бензиламинопурина (до 0,25 мг/л) с последующий кратковременной обработкой базальных частей побегов препаратами группы ауксинов и культивированием на обедненных питательных средах, лишенных регуляторов роста.

Адаптацию пробирочных растений конкретных культур к нестерильным условиям проводить на основе разработанных нами оригинальных приемов, повышающих выход растений (A.C. N1493187, A.C. N1591887, A.C. N1720597). ■'

Для снижения"риска появления в процессе размножения уклоняющихся форм использовать составы питательных сред и приемы,, препятствующие образованию каллусной ткани и Ограничивать число субкультивирований по ОСТ 10 067-95 "Культуры ивкодные стерильные из меристем-плодовых и ягодных культур".

Для повышения эффективности культуры зародышей in vitro, изолированных в ранних фазах эмбриогенеза, тиражирования генотипов,

сокращения времени получения гибридных сеянцев, за счет исключения этапа культивирования при пониженных температурах использовать составы питательных сред по A.C. N1261587 и приемы, изложенные в "Методических указаниях по выращиванию сеянцев вишни из зародышей. изолированных на ранних стадиях развития" (М..ВАСХНИЛ. 1988).

Получение растений-регенерантов земляники в культуре пыльников земляники целесообразно получать при последовательном изменении состава питательных сред по следующей схеме: 1-й этап - стимуляция образования каллусной ткани в присутствии 6-бензиламинопурина (1.0 мг/л) и индолилуксусной кислоты (2.0 мг/л); 2-ой этап - пролиферация каллуса в присутствии кинетина (0,5-1,0 мг/л) и 2,4-Д (1,0 мг/л); 3-ий этап - регенерация растений в присутствии 6-бензиламинопурина (0,5-1,0 мг/л) и индолилуксусной кислоты (0,5-1,0 мг/л).

Регенерацию растений в культуре листовых дисков малины и земляники следует осуществлять на питательных средах содержащих 6-бензиламинопурин (1,0-2,0 мг/л) и индолилмасляную кислоту /1,02,0 мг/л при культивировании в первые 5-15 сут. в условиях пониженной освещенности (100 лк) и последующим выращиванием при освещенности 3,5-7,0 клк (Патент РФ N 2080059).

СПИСОК ОСНОВНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Высоцкий В.А. Действие некоторых регуляторов роста на изолированные, меристематические верхушки черной смородины // Плодоводство и ягодоводство нечерноземной полосы, - М. ,1976,- Т. IX. -С.101-107.

2. Высоцкий В.А., Попов».Г.. Трушечкин В.Г. Регенерация изолированных меристематических верхушек древесных растений/Плодоводство и ягодоводство Нечерноземной полосы. - М., 1976.- Т.9.-С. 89-100.

3. Высоцкий А.А., Попов А.С.. Трушечкин В.Г. Регенерационная способность верхушек черной смородины под влиянием различных ростовых веществ и условий культивирования// Сельскохозяйственная биология.- 1976,- Т.XI.- С.879-875.

4. Попов Ю.Г., Высоцкий В.А., Трушечкин В.Г. Культура изолированных стеблевых верхушек вишни // Физиология растений.- 1976.-

Т. 23,- U 3,- С. 513-518.

5. Попов Ю.Г.. Высоцкий В.А. Культура стеблевых верхушек in vitro как метод ускоренного размножения плодовых и •годных растет НИЙ // Вестник с.-х. науки.- 1978.- N 4,- С! 124- 127.

6. Высоцкий В. А., Трушечкин В. Г., Попов ¡0. Г. Способ размножения древесных растений : A.C. М 626728 от 29.12.1975 //Б.И. 1978.- N 37.

7. Высоцкий В.А., Трушечкин В.Г. Поглощение элементов питания зксплантами черной смородины в присутствии 6-бензиламинопури-на/ Плодоводство и ягодоводство Нечерноземной полосы.- М..1976.-Т.XIII,- С.52-54.

8. Высоцкий В.А., Поликарпова Ф.Я., Трушечкин В.Г. Использование 6-бензиламинопурина для размножения плодовых и ягодных культур // Регуляторы роста и развития растений / Тезисы докладов 1 Всесоюзной конференции.- М.:"Наука".1981.- С.155-156.

9. Высоцкий В.А.. Тарашвили З.Т. "Микроразмножение" здорового посадочного материала ягодных культур У/ Садоводство.- 1982. -N3,- С. 22-24. '

10. Трушечкин В.Г.. Высоцкий В.А., Леонтьев-Орлов O.A. Размножение клоповых подвоев яблони методом культуры ткани // Сельскохозяйственная биология,- 1982.- Т. XVII,- N 4,- С. 455-457.

11. Трушечкин В.Г.. Высоцкий В.А.. Деменко В.И. Тъканни кул-тури // Овощарство (НРБ).- 1982,- Т.61.- N8.- С.39-42.

12. Высоцкий В.А.. Дьякова Т.Н.. Трушечкин В.Г. Культура органов и тканей в цветоводстве: сирень // Цветоводство.-.1982.- N 6,- с.17.

13. Высоцкий В. А. Применение методов культуры изолированных тканей и органов для размножения плодовых и ягодных растений // Ягодоводство в Нечерноземье, - 1982,- С. 30-41.

14: Олешко Е. В., Трушечкин В. Г.,- Высоцкий В. А. Размножение ялояовых подвоев вишни // Садоводство, - 1983.- N 3. - С. 20-21.

15. Высоцкий В.А., Леонтьев-Орлов O.A. Микроклональное размножение подвоев яблони // Садоводство. - 1983,- N 7,- С.20-21.

16. Высоцкий В.А, , Культура изолированных тканей и органов плодовых растений: оздоровление и микроклональное размножение // Сельскохозяйственная биология,- 1983,- N7.- С.42-47.

17. Острейко С. А.. Высоцкий В. А.. Зубк'ова Н.Ф. . Возможность использования веществ с цитокининовой активностью в процессе мик-

роразмножения плодовых и ягодных растений //Культура клеток растений и биотехнология / Тез. докл. IV Всесоюзной конференции (3-6 октября), Кишинев., "Штиинца",- 1983,- С. 114-115.

18. Ипполитова Н.Я.. Высоцкий В.А.. Талалаева Г.А. Микрокло-нальное размножение пионов // Цветоводство.- 1984,- 11 1,- с.34.

19. Трушечкин В. Г.. Метлицкий 0. 3., Высоцкий В. Д.. Акинин

H. И. Пути обеззараживания земляники от нематод // Сэдоводство. ~ 1984,- N 7,- С. 20-21.

20. Еникеев Х.К., Высоцкий В.А., Плотникова Г.А. Развитие зародышей' вишни и черешни в культуре In vitro, изолированных на ранних стадиях эмбриогенеза // Сельскохозяйственная биология.-1984,- Н 11. - С. 46-48.

21. Трушечкин В.Г.. Высоцкий В.А., Походенко А.П. Производство безвирусного посадочного материала земляники // Садоводство.-

1984,- М П. - С. 19-21.

22. Высоцкий В.А. Усовершенствование способов получения растений малины из изолированных меристематических верхушек /Ягодо-водство в Нечерноземье. М., 1984.- С. 3-8.

23. Трушечкин В.Г., Высоцкий В.А. Предпосылки для микрокло-нального размножения подвоев и скелетообразователей груши // Плодоводство Нечерноземной полосы / СО. . Трудов НИЗИСНП.- М., 1984.-С.8-14.

24. Трушечкин В.Г.. Высоцкий В.А. Клональное микроразмножение плодовых и ягодных культур // Плодоовощное хозяйство,- 1985.- N

I.- С. 43-46.

25. Попов В.И., Высоцкий В.А., Туктагулов И.М. Условия культивирования изолированных апексов хмеля для клонального микроразмножения // Физиология растений,- 1985.- Т.32.- Вып. 6,-С. 1191-1195. .

26. Высоцкий В.А., Олешко Е.В. Совершенствование питательной среды для микроклонального размножения вишни // Агротехника и сортоизучение плодовых культур / Сб.научных трудов НИЗИСНП, М.,

1985.- С. 72-76.

27. Еникеев Х.К., Высоцкий В.А., Плотникова Г.А. Питательная среда для культивирования зародышей .косточковых культур //А. С. N 1261587.SU, А 01 НЗ/00. опубл. БИ N 37, 07.10.1986.

28. Трушечкин В.Г., Олешко Е.В. Высоцкий В.А. Питательная среда для размножения растений в культуре тканей // А. С. N

1279082 ОТ 22 августа 1986.

29. АлехиоГ.Д., ' Высоцкий В. А. Клональное микроразмножение роз. // Физиология'и биохимия культурных растений,- Киев. "Науко-ва Думка".- 1986,- Т. 18.- N 5,- С.489-493.

30. Высоцкий В.А. Клональное микроразмножение растений / Культура клеток растений и биотехнология. Тез.докл. IV. Всесоюзной конференции. Кишинев.. "Шпшнца". - 1983. - С. 6-7.

31. Высоцкий В.А. Результаты использования регуляторов роста в процессах оздоровления и микроразмножения плодовых растений // Pestycydy.- 1986.- NR 314,- С. 79-86:

32. Высоцкий В.А.. Литвиненко И.С. Производство оздоровленного посадочного материала яблони // Достижения науки и техники А.П.К.- 198?.- N2.- С.25-2?. '■ •

33. Высоцкий В.А.. Паршина О.В. Способ получения в ювенильной/ фазе генетических близнецов сеянцев черной смородины //Известия Сибирского отделения АН СССР. Новосибирск,- 1987.- Вып.2.-' С. 119-122. "

34. Белошапкина 0.0., Высоцкий В. А... Хайбулина Л.М., Влияние 4 ингибиторов вирусов на частоту появления эмбриональных леталей у -Arabldopsls thailana ' //Проблемы интенсификации плодоводства / ' Сб. науч. трудов ТСХА.- М.. 1987,- С. 48-52.

35. Высоцкйй В. А. Клональное микроразмножение некоторых форм груши // Биология культивируемых клеток и биотехнология /Тезисы докл. междун. конференции.- Новосибирск.- 1988,. - Т. 2.-С. 318-319. . ■ .. '■'--.

36. Высоцкий В. А.. Олешко Е. В. Использование микропрививок при клональном микроразмножении косточковых культур // Сельскохозяйственная биология,- 1988.- N 4.-' С. 75-77.

37. Высоцкий В.А. Перспективы внедрения микроразмножения в производство // Садоводство и виноградарство.- 1988,- N12.-С.-14-17. ' ■ ' ' ■ .'\ - '

38. Корнацкйй С. А. , Высоцкий В. А., Трушечкин В. Г. Способ, пересадки растений, выращенных in vitro на питательной среде в культивационных сосудах с покрытием, в нестерильных условиях / // А.С., N 1493187, SU. А 01 Н 3/00, опубл. БИ N 26, 15.07.89:

. 39. Высоцкий В. А. Клональное.микроразмножение плодовых расте- • ний и декоративных кустарников /'/ Никроразмножение и оздоровление -растений в промышленном плодоводстве и цветоводстве V Сб. научных

трудов ВНИИС им. И.В.Мичурина. - Мичуринск. 1989,- С. 3-3.

.' 40. Высоцкий В. А. Использование методов культуры изолированных тканей и органов для оздоровления и ускоренного размножения плодовых и ягодных растений / Селекция плодовых и ягодных культур. - Новосибирск. 1989.- С. 132-138.

41. Высоцкий В.А., Герасимова Н. В. Клональное микроразмножение в системе производства оздоровленного посадочного материала малины /Ягодоводство в Нечерноземье. М., 1989,- С. 65-74.

42. Vysotskyi V.A. Clonal mlcropropagatlon of some pear root-stocks ■// Abstr.VII th International Congress on Plant Tissue and Cell Culture.- Amsterdam.. 24-25 June 1990,- Netherlands.- 1Э90,-P. 140.

43. Высоцкий В.А., Бартенева Л.В. Способ пересадки расте-ний-регенерантов в почвенный субстрат //А. С. М 1591887, SU, А 01 Н 3/00, опуб. Б. И. N 34, 15.09.1990.

44. Высоцкий В. А., Бартенева Л.В. Особенности клонального .микроразмножения актинидии // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. - М., "Наука", - 1991,- С. 213-216.

45. Упадышев М.Т..- Высоцкий В. А. Размножение ежевики и малины черной методом культуры тканей // Садоводство и виноградарство. -1991,- N 6.- С. 24-27.

46. Веретенникова Н.П., Высоцкий В.А. -Способ получения оздоровленного посадочного материала земляники: А.С. N.Г658929, от 30.12.1982 (Россия) // Б. И. 1991, N 24. .

47. Высоцкий В.А., Упадышев М.Т. Способ выращивания растений in vitro // A.C.N 1685323,- SU А 01 Н 4/00. опубл. Б.И. II 39,23.10.91.

48. Высоцкий В.А.. Корнацкий С.А. Изменение коэффициента размножения и укореняемости 'микропобегов сливы при длительном культивировании in vitro //Агротехника, защита от вредителей и болезней, механизация в плодоводстве в ИЗ РСФСР. - М., 1992.-С. 14-20.

49. Высоцкий В.А., Упадышев М.Т. Регенерация вегетативных органов листовыми дисками и другими эксплантами рода Rubus in vitro // Физиология растений, - 1992.- Т. 39. - Вып. 3. - С. 584-591.

50. Высоцкий В.А., Упадышев М.Т. Морфозы при клональном микроразмножении Rubus occidentalis и Rubus frutlcosus (Rosaceae) // Ботанический журнал. - 1992,- Т. 77,- N 7,- С. 85-91.

51. Высоцкий В.А.. Шершень И.А. Способ размножения растений in vitro // А. С. N 1738169. SU А 01 Н 4/00. опубл. Б. И. N 21.07.06.92. •

52. Высоцкий В.А. Ризогенез у микропобегов малино-ежевичных гибридов при различных температурах //Тез. докладов II Международной конференции "Биология культивируемых клеток растений и биотехнология". - Алматы. 1993,- Т. 2,- С. 210.

53. Высоцкий В.А.. Данькова Е.В. Регенерация косточковых, культур из корневого и листового каллусов // Плодоводство г Нечерноземье. - М. . 1993. - С. 70-75. .

54. Высоцкий В.А.. Хамукова Ф:М. Возможности регенерации растений земляники и малины из каллусов различного происхожде-ния//йгодоводство в Нечерноземье, - М.. 1993. - С. 19-24. .

55. Упадышев М.Т.. Высоцкий В. А.. Перспективы использования метода кулЪтуры тканей и органов в селекционной работе с ежевикой и малиной черной // Использование клеточно-тканевых'культур и селекционных биотехнологий в растениеводстве, - Новосибирск,1993.-Вып. 1/2,- С. 45-54.

56. Высоцкий В. А.. Соломонова Ф,Н. Регенерация побегов малины красной комплексными'эксплантами в зависимости от условий,культи-' вирования // Плодоводство и ягодоводство России.- М.,' 1994.- С. 58-62. ' . , ' . •

57. Высоцкий В.А. Опыт клонального микроразмножения ирги // Плодоводство и ягодоводство России /Сб.трудов ВСТИСП.- М.,1995.-С. 123-127. - ;

58. Высоцкий В.А. О генетической стабильности при'клональном микроразмножении плодовых и ягодных культур // Сельскохозяйственная биология."-1995,- N 5,- С. 57-63. '

59. Высоцкий В.А. Способ выращивания растительных культур in vitro и питательная среда для его осуществления // Патент РФ .N 20. ОТ 20.'07.1996.

60. Высоцкий В.А. Особенности клональйого микроразмножения некоторых форм ремонтантной малины / Плодоводство и ягодоводство России,- 1996,- Т.3,- С.90-95. '... !

• 61.. Высоцкий В.А., Соломонова Ф.Н. /Способ получения расте-ний-регенерантов малины In vitro // Патент РФ. N 2080059, опубл. БИ N 15. -27.05.1997.

Содержание диссертации, доктора сельскохозяйственных наук, Высоцкий, Валерий Александрович

В в е д е н и е.

1. Области применения и краткая история метода культуры изолированных тканей и органов растений.

2. Предпосылки для использования культуры in vitro в процессах оздоровления и размножения плодовых и ягодных растений.

3. Основные факторы, лимитирующие получение растений на искусственных питательных средах.

3.1. Состав питательной среды.

3.2. Генетические особенности растений-источников эксплантов.36^

3.3. Строение инициального экспланта.

3.4. Физиологическое состояние растений-источников эксплантов.

3.5. Предварительная подготовка эксплантов.

3.6. Физические условия культивирования.

4. Основные модели и этапы клонального микроразмножения растений.

4.1. Модели размножения.

4.2. Этапы клонального микроразмножения.

5. Методы оздоровления плодовых и ягодных растений в системе производства оздоровленного посадочного материала.

6. Использование биотехнологических приемов в селекции растений.59 ^

7. Создание коллекций ценных форм растений in vitro.

8. Методические аспекты работы со стерильными культурами тканей и органов.

8.1. Организация лаборатории и основные принципы работы с изолированными тканями и органами.

8.1.1. Приготовление питательных сред.

8.1.2. Отбор и подготовка материала.

8.1.3. Обеспечение стерильности при работе с изолированными тканями и органами.

8.2. Методы статистической обработки результатов экспериментов.

9. Практическое использование одноэтапного способа получения растений в культуре изолированных апексов.

10. Использования двухэтапной модели для получения и размножения плодовых и ягодных растений In vitro.

10.1. Земляника.

10.2. Малина красная.

10.3. Ежевика, малина черная, малино-ежевичные гибриды.

10.4. Смородина черная, смородина красная, крыжовник.

10.5. Вишня и слива.

10.6. Яблоня и груша.

10.7. Другие культуры.

И. Возможности увеличения коэффициента размножения при культивировании эксплантов на питательных средах.

12. Повышение на этапе размножения доли побегов, пригодных к укоренению.

13. Контроль ризогенеза у культивируемых In vitro эксплантов.

14. Изменение регенерационной способности эксплантов в зависимости от длительности культивирования In vitro.

15. Адаптация пробирочных растений к нестерильным условиям.

16. Использование техники микропрививок при клональном микроразмножении плодовых растений.

17. Совершенствование биотехнологических приемов для создания новых форм растений.

17.1. Культура семян.210^

17.2. Культура изолированных зародышей.

17.3. Культура пыльников, каллусов, листовых дисков.

18. Вопросы генетической стабильности при клональном микроразмножении плодовых культур.

19. Практическое использование биотехнологических методов в системе производства оздоровленного посадочного материала и для целей селекции.

20. Экономические аспекты использования биотехнологических приемов.

О б щи е в ы в о д ы.

Рекомендации для практического использования.

Л и т е р а т у р а.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Биотехнологические методы в системе производства оздоровленного посадочного материала и селекции плодовых и ягодных растений"

Актуальность проблемы. Интенсификация современного сельскохозяйственного производства требует широкого использования высокотехнологичных приемов. В частности, в садоводстве прослеживается четкая тенденция повышения требований к качеству посадочного материала и его сортименту. Это ставит задачи получения оздоровленного посадочного материала плодовых и ягодных растений, решение которых связано с необходимостью использования высоких технологий оздоровления и тестирования. С другой стороны, сокращение сроков создания новых генотипов с хозяйственно-ценными свойствами, ускорение их внедрения в производство, создание и содержание коллекций ценных форм также являются важными задачами сельскохозяйственной науки.

Решению этих проблем может способствовать применение относительно новых биотехнологических приемов, которые до недавнего времени считались сугубо лабораторными. Среди основных преимуществ этих приемов наиболее часто называют следующие: возможность получения посадочного материала, свободного от вирусных, грибных и бактериальных болезней, клещей и нематод; быстрое размножение ценного клона растения; получение в большом количестве вегетативного потомства трудноразмножаемых в обычных условиях форм растений; работа в Лабораторных условиях круглый год и планирование выпуска растений к определенному сроку; возможность длительного хранения растительного материала без контакта с внешней средой; возможность обмена материалом в международном масштабе без риска занести карантинных вредителей, а также возможность получения форм с измененной плоидностью, сомаклональных вариантов и трансгенных растений.

Однако, для плодовых и ягодных растений отсутствовали технологии получения и размножения растений на искусственных питательных средах, не были отработаны приемы надежного получения расте-ний-регенерантов в культуре пыльников, каллусов и других эксплан-тов типа листовых дисков.

Совершенствование техники культуры изолированных тканей и органов плодовых и ягодных растений с учетом биологических особенностей и факторов культивирования, повышение их технологичности и эффективности, сочетание различных приемов оздоровления, клональ-ного микроразмножения, хранения стерильных культур и тестирования, получение растений-регенерантов из различных тканей и органов существенно расширит возможности этих методов в системе производства оздоровленного посадочного материала и в селекционном процессе.

Цель и задачи исследований. Основная цель исследований заключалась в разработке и совершенствовании технологий клонального микроразмножения и регенерации плодовых и ягодных растений из различных органов и тканей для использования в системе производства оздоровленного посадочного материала и ускорения селекционного процесса.

Для достижения поставленной цели требовалось: - разработать надежные методы регенерации плодовых и ягодных растений из изолированных апексов на искусственных питательных средах;

- определить факторы культивирования (состав питательных сред, физические условия), обеспечивающие высокую эффективность клонального микроразмножения;

- выяснить роль сортовых и видовых особенностей в процессах регенерации растений в культуре in vitro;

- отработать составы питательных сред, последовательность операций и способы аппликации регуляторов роста, обеспечивающие высокую укореняемость микропобегов;

- разработать надежные способы адаптации пробирочных растений к нестерильным условиям;

- выяснить возможность нетрадиционных комбинаций приемов оздоровления плодовых и ягодных растений с культурой in vitro;

- определить место биотехнологических приемов в системе производства оздоровленного посадочного материала плодовых и ягодных культур;

- проследить изменения в поведении эксплантов и растений в процессе длительного культивирования на искусственных питательных средах и после адаптации к нестерильным условиям;

- изучить возможность использования методов культуры изолированных тканей и органов для ускорения селекционного процесса и получения новых форм плодовых и ягодных растений.

Научная новизна. Проведено детальное изучение процессов регенерации и клонального микроразмножения основных видов плодовых и ягодных растений умеренного климата с учетом их биологических особенностей. Дано обоснование и показана целесообразность двухэ-тапного получения растений при использовании изолированных апексов при получении оздоровленного посадочного материала. Определены условия водной термотерапии изолированных апексов, на примере земляники, в сочетании с культурой in vitro, позволяющие повысить эффективность оздоровления. Прослежено изменение коэффициента размножения и потенций к ризогенезу в процессе субкультивирования, что позволило дать конкретные рекомендации по оптимальному числу субкультивирований для каждого вида растений. На этапе микроразмножения показана возможность использования нетрадиционных препаратов с цитокининовой активностью и комбинаций цитокининов с некоторыми препаратами негормональной природы для увеличения коэффициента размножения. Показана возможность использования микропрививок in vitro в системе производства оздоровленного посадочного материала некоторых трудноукореняемых форм плодовых растений. Обосновано и доказано преимущество кратковременных обработок микропобегов индукторами корнеобразования, по сравнению с введением последних в питательную среду. Изучены роль температурных воздействий и эффект предварительного культивирования побегов на средах с пониженным содержанием регуляторов роста на процессы ризогенеза у разных видов плодовых и ягодных растений. Для использования в селекционной практике на основе данных, полученных при изучении регенерации изолированных апексов древесных растений, разработан способ на основе оригинальной питательной среды, позволяющий получать растения из изолированных на 20-23 день после опыления зародышей косточковых пород, а также генетически идентичные копии сеянцев плодовых культур в ювенильной фазе. Изучены факторы, влияющие на генетическую стабильность растений в процессе клонального микроразмножения и разработаны рекомендации снижающие риск получения уклоняющихся форм. Изучен процесс регенерации растений в культуре комплексных эксплантов, пыльников каллусов и листовых дисков, на основании чего разработаны приемы получения растений регенерантов земляники в культуре пыльников, листовых эксплантов и каллусов земляники, листовых эксплантов и каллусов малины, ежевики, косточковых культур.

На защиту выносятся основныеположения концепции использования биотехнологических приемов в системе получения, ускоренного размножения оздоровленного посадочного материала плодовых и ягодных растений и в селекционном процессе включающей:

- разработанную модель двухэтапного получения растений плодовых культур из изолированных апексов;

- приемы эффективного клонального микроразмножения конкретных видов плодовых и ягодных растений с учетом специфических факторов культивирования (модифицированные и оригинальные питательные среды, способы индукции ризогенеза, адаптации пробирочных растений);

- использование комбинации термотерапии эксплантов и культуры in vitro для повышения эффективности оздоровления;

- способы получения растений-регенерантов в культуре пыльников, листовых эксплантов, каллусов, незрелых зародышей.

Практическая значимость и реализация результатов исследований. В итоге проведенных исследований были отработаны технологические процессы получения из изолированных апексов и клонального микроразмножения основных видов плодовых растений умеренного климата, разработаны приемы микропрививок in vitro трудноукореняемых форм, методы регенерации ряда видов растений в культуре изолированных пыльников, листовых эксплантов, зародышей ранних фаз развития, получения генетических близнецов сеянцев без вывода их из ювенильной фазы, разработаны рекомендации по снижению риска появления уклоняющихся форм в процессе микроразмножения.

Результаты законченных исследований вошли в рекомендации Го-сагропрома РСФСР "Промышленная технология возделывания малины" (1989 г.), в "Методические указания по клональному микроразмножению подвоев и сортов яблони" (ВАСХНИЛ, 1985), в "Методические указания по клональному микроразмножению красной и черной смородины" (1986), по микроклональному размножению сортов и подвоев косточковых культур (Агропромиздат, 1987), в "Методические указания по выращиванию сеянцев вишни из зародышей, изолированных на ранних стадиях развития (ВАСХНИЛ, 1988), которые служат руководством для ускоренного размножения посадочного материала перечисленных культур и использования в селекционных программах. Результаты разработок легли в основу стандарта отрасли ОСТ 10 067-95 "Посадочный материал плодовых и ягодных культур, полученный In vitro".

Ряд приемов, питательных сред и элементов технологий зарегистрированы в качестве изобретений и на них получены авторские свидетельства и патенты: A.C. N 636628 (1978 г.), N 1261587 (1986 г.), N 1279082 (1986 г.), N 1493187 (1989 г.), N 1554838 (1989 Г.), N 1591887 (1990 г.), N 1658929 (1991 г.), N 1685323 (1991 Г.), N 1695854 (1991 Г.), N 1706481 (1991 Г.), N 1720597 (1991 г.), N 1738169 (1992 г.), N 1750492 (1992 г.), патенты РФ N 2013946 (1994 г.), N 2063681 (1996 г.) и N 2080059 (1997 г.).

Законченные разработки по теме были переданы в "Союзплодоп-ром" МПОХ СССР для использования при производстве оздоровленного посадочного материала, Дальневосточному НИИ сельского хозяйства (г.Хабаровск), НИИ садоводства Сибири им. М.А.Лисавенко (г. Барнаул), Институту биофизики СО АН СССР (г. Красноярск), Россошанс

- и кой зональной плодово-ягодной опытной станции, Донецкой опытной станции садоводства (г. Артем), Куйбышевской опытной станции, Кабардино-балкарской зональной опытно-селекционной станции (г. Нальчик), Российской научно-исследовательской хмелеводческой станции, совхозу "Победа" (г. Клин), Северо-Западному НПО "Бело-горка" (Ленинградская обл.), Селекцентру Всероссийкого научно-исследовательского института цветоводства и субтропических культур (Сочи), НПЦ биотехнологии "Фитогенетика" (г.Тула), Крымская опытно-селекционная станция Всероссийского научно-исследовательского института растениеводства имени Н. И. Вавилова.

Полученный материал регулярно передавали научным учреждениям и высшим учебным заведениям по садоводству, опытным станциям и сельскохозяйственным предприятиям России и стран бывшего СССР.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены и обсуждены на 1 Всесоюзной конференции "Регуляторы роста и развития растений" (Москва, 1981 г.), на 4 Всесоюзной конференции "Культура клеток растений и биотехнология"(Кишинев, 1983), на международной конференции "Биология культивируемых клеток и биотехнология" (Новосибирск, 1988), на 2 Международной конференции "Биология культивируемых клеток и биотехнология"(Алматы, 1993), на 3 Международной конференции "Регуляторы роста и развития растений" (Москва, 1995), на Международной научной конференции "Актуальные проблемы биотехнологии в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии" (Москва, 1996), на симпозиуме стран-членов СЭВ по регуляторам роста растений (Польша, 1983), на совещании стран-членов СЭВ по теме 1.10.1 "Разработка меристемных методов размножения, обеспечивающих получение стерильного посадочного материала" (Кишинев, 1984), на Всероссийском совещании "Актуальные проблемы развития питомниководства и научное обеспечение отрасли"(Москва, 1993), на научно-методическом совещании "Достижения селекции и новые способы интенсивного размножения ягодных культур" (Брянск-Кокино, 1994), на совещаниисеминаре "Питомниководс-тво-96"(Москва, 1995) и других конференциях, совещаниях, семинарах по садоводству и питомниководству союзного, республиканского и зонального характера (1980-1995 г.г.). представлены на 7 Международный конгресс по культуре тканей и клеток растений (Амстердам, 1990).

Публикации. Основные положения диссертации опубликованы в 110 работах.

Заключение Диссертация по теме "Плодоводство, виноградарство", Высоцкий, Валерий Александрович

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1.В результате многолетних исследований (1974-1996 г.г.) разработаны и усовершенствованы эффективные приемы получения в культуре изолированных апексов и клонального микроразмножения растений малины, ежевики, смородины черной, смородины красной, крыжовника, подвоев и сортов вишни, сливы, яблони, груши, ирги, актинидии и ряда декоративных видов, базирующиеся на двухэтапной схеме, защищенной авторским свидетельством на изобретение (A.C. N626728), а также на использовании оригинальных питательных сред как для этапов собственно размножения (A.C. N1279082), так и для этапов укоренения (A.C. N1706481), и способах адаптации пробирочных растений к нестерильным условиям (A.C. N1493187, N1591887, N1706481, N1720597).

2. Использование методов культуры изолированных апексов существенно повышает эффективность оздоровления плодовых и ягодных растений, как в качестве самостоятельного приема, так и в комбинации с термотерапией или химиотерапией. Разработанный на основе изучения резистентности отдельных органов растений к повышенной температуре прием сочетания водной термотерапии перед введением апексов в стерильную культуру позволяет освободится от клещей и нематодной инвазии у растений земляники (A.C. N1658929).

3. На регенерационную способность в культуре изолированных апексов, листовых дисков и других типов эксплантов, а также на коэффициент размножения in vitro существенное влияние оказывают генетические особенности размножаемой формы, сорта и вида растения. У плодовых древесных растений подвойные формы, как правило, обладали большей регенерационной способностью и характеризовались большим коэффициентом размножения, по сравнению с сортами, что коррелирует с их поведением при размножении традиционными способами.

4. Экспериментально показана возможность для некоторых видов растений негормонального контроля коэффициента размножения путем включения в питательную среду препаратов, блокирующих транспорт ауксинов. Этот факт позволил разработать оригинальный состав питательных сред для этапа микроразмножения (A.C. N1279082), что привело к повышению эффективности разработанных приемов микроразмножения и увеличению общего выхода растений.

5. Контроль ризогенеза у размноженных in vitro побегов возможно осуществлять путем изменения состава питательных сред на этапе, предшествующим укоренению, способа аппликации индуктора ризогенеза и, в отдельных случаях, изменением температурных условий культивирования.

6. Длительность культивирования in vitro существенно влияет на поведение эксплантов, изменяя коэффициент размножения и способность к ризогенезу, что, вероятно, связано с процессами реювени-лизации, индуцируемыми специфическими условиями стерильной культуры. Анализ результатов сравнительной оценки характеристик эксплантов и растений в процессе длительного культивирования позволил обосновать оптимальные сроки культивирования in vitro различных видов плодовых и ягодных растений, что нашло отражение в разработанных ОСТах на "Посадочный материал плодовых и ягодных культур, полученный in vitro".

7. Подбором состава питательных сред, условий культивирования и соответствующей модели размножения можно свести к минимуму риск появления уклоняющихся форм при массовом производстве посадочного материала.

8. Применение разработанных питательных сред и приемов культивирования изолированных зародышей (A.C. N1261587) позволяет повысить выход гибридных растений за счет использования эмбрионов ранних фаз развития, получения от каждого зародыша нескольких побегов и сократить сроки выращивания растений путем исключения этапа культивирования при пониженных температурах.

9. Разработанные приемы получения растений-регенерантов в культуре пыльников, каллусов различного происхождения, листовых дисков (Патент РФ N2063681) могут быть использованы для создания новых форм плодовых и ягодных растений путем отбора сомаклональ-ных вариантов, получения гаплоидов и изогенных линий, полиплоиди-зации, мутагенеза in vitro и получения трансгенных растений.

10. Экономический эффект от использования методов клонального микроразмножения достигается как за счет возможности получать от единичных экземпляров несколько тысяч растений в течение относительно короткого времени, вне зависимости от сезона, проводить комплексное оздоровление от патогенов, для которых другие приемы неэффективны, так и за счет увеличения у полученных in vitro экземпляров потенций к дальнейшему вегетативному размножению, вследствие процессов реювенилизации, экономии площадей для хранения ценных форм растений в несколько десятков раз и сокращения сроков создания оздоровленных маточников на 1-2 года.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ПРАКТИЧЕСКОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

Для повышения эффективности оздоровления и ускорения процессов размножения оздоровленных экземпляров включать в систему производства биотехнологические приемы с использованием методов культуры изолированных апексов. Практиковать новые сочетания культуры органов in vitro с традиционными способами оздоровления (А.С N 1658929).

При работе с конкретными видами растений руководствоваться разработанными методиками ("Методические указания по клональному микроразмножению подвоев и сортов яблони" (ВАСХНИЛ, 1985), "Методические указания по клональному микроразмножению красной и черной смородины"(1986), по микроклональному размножению сортов и подвоев косточковых культур (Агропромиздат, 1987), "Промышленная технология возделывания малины (1989 г.).

Для повышения выхода укорененных пробирочных растений использовать прием предварительного культивирования конгломератов почек и побегов на средах с пониженным содержанием 6-бензиламинопурина (до 0,25 мг/л) с последующий кратковременной обработкой базальных частей побегов препаратами группы ауксинов и культивированием на обедненных питательных средах, лишенных регуляторов роста.

Адаптацию пробирочных растений конкретных культур к нестерильным условиям проводить на основе разработанных нами оригинальных приемов, повышающих выход растений (A.C. N1493187, A.C. N1591887, A.C. N1720597).

Для снижения риска появления в процессе размножения уклоняющихся форм использовать составы питательных сред и приемы, препятствующие образованию каллусной ткани и ограничивать число субкультивирований по ОСТ 10 067-95 "Культуры'исходные стерильные из меристем плодовых и ягодных культур".

Для повышения эффективности культуры зародышей in vitro, изолированных в ранних фазах эмбриогенеза, тиражирования генотипов, сокращения времени получения гибридных сеянцев, за счет исключения этапа культивирования при пониженных температурах использовать составы питательных сред по A.C. N1261587 и приемы, изложенные в "Методических указаниях по выращиванию сеянцев вишни из зародышей, изолированных на ранних стадиях развития" (М.,ВАСХНИЛ, 1988).

Получение растений-регенерантов земляники в культуре пыльников земляники целесообразно получать при последовательном изменении состава питательных сред по следующей схеме: 1-й этап - стимуляция образования каллусной ткани в присутствии 6-бензиламинопурина (1,0 мг/л) и индолилуксусной кислоты (2,0 мг/л); 2-ой этап - пролиферация каллуса в присутствии кинетина (0,5-1,0 мг/л) и 2,4-Д (1,0 мг/л); 3-ий этап - регенерация растений в присутствии 6-бензиламинопурина (0,5-1,0 мг/л) и индолилуксусной кислоты (0,5-1,0 мг/л).

Регенерацию растений в культуре листовых дисков малины и земляники следует осуществлять на питательных средах содержащих 6-бензиламинопурин (1,0-2,0 мг/л) и индолилмасляную кислоту 1,0-2,0 мг/л при культивировании в первые 5-15 сут в условиях пониженной освещенности (100 лк) и последующим выращиванием при освещенности 3,5-7,0 клк (Патент РФ N 2080059).

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, доктора сельскохозяйственных наук, Высоцкий, Валерий Александрович, Москва

1. Абраменко P.M. Получение безвирусной суперэлиты земляники ме-тодом культуры верхушечных меристем //Вирусные болезни плодово-ягодных культур и винограда в Молдавии." 1973.- N 2.- С. 26-50.

2. Аксенова Н.П., Константинова Т.Н., Баврина Т.В., Чайлахян М.Х.

3. Взаимодействие света и фитогормонов в регуляции двух типов репродуктивного морфогенеза // Докл. АН СССР.-1986.- Т. 290.- N 2.- С. 508-512.

4. Алехно Г.Д., Высоцкий В.А. Клональное микроразмножение роз.

5. Физиология и биохимия культурных растений.- Киев; "Наукова Думка", 1986.- Т.18.- N 5,- С.489-493.

6. Ангелова И., Ковачева Г., Петкова С. Влияния на различниясъотношения на нитратния и аммонивия азот в храни-телния разтвор върху съдържаниета на абсциниевата киселина в сълътогледови растения //Физиология растений (НРБ). 1985.- Т.Н. - N 2.- С. 46-50.

7. Атанасов А., Влахова М. Направлёния исследований в области генной инженерии в растениеводстве // Международный сельскохозяйственный журнал,- 1987,- N 3.- С. 53-54.

8. Афонина O.A., Гаврикова Л.И., Деменко В.И. Влияние состава питательной среды на микроразмножение крыжовника и регенеративную способность пыльников земляники //Удобрения и регуляторы роста в садоводстве.- Л., 1985.-С.101-106.

9. Белошапкина 0.0. Сортовая реакция земляники на оздоровление методом культуры меристемы // Проблемы вегетативного размножения в садоводстве / Сб. науч.тр.ТСХА.- М., 1985.- С.119-122.

10. Белошапкина 0.0., Высоцкий В. А.,' Хайбулина Л.М. Влияние ингибиторов вирусов на частоту появления эмбриональных деталей у Arabidopsls thaliana //Проблемы интенсификации плодоводства / Сб.науч.трудов ТСХА.- М., 1987.-С.48-52.

11. Берестова Г.Н. Полиморфизм и особенности биологии дальневосточных видов актинидии и лимонника китайского // Автореферат дисс. канд. биол.наук. Л, 1977,- 21 с.

12. Бурдасов В.М. Элементы физиологии эмбриогенеза и культура незрелых зародышей яблони / Автореферат дисс.канд. биол.наук.- Иркутск, 1972.- 22 с.

13. Бурдасов В.М. Пути использования метода изолированных зародышейв селекции яблони // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений,- М., 1979.- С. 52-57.

14. Бурова Э.Л. Культура изолированных зародышей ирисов // Интродукция растений, Минск, 1976.- С. 23-29.

15. Бутенко Р. Г. Применение метода культуры изолированных верхушечных почек для изучения процесса роста и органогенеза растений // Физиология растений,- I960.- Т.7.-N 6.- С.715-723.

16. Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений,- М.:"Наука, 1964,- С. 23-29.

17. Бутенко Р.Г. Технология in vitro в сельском хозяйстве

18. С.-х. биология. 1983.- N 5,- С. 5.

19. Бутенко Р.Г. Индукция морфогенеза в культуре тканей растений

20. Гормональная регуляция онтогенеза растений.- М., 1984,- С. 42-54.

21. Бутенко Р.Г. Культура изолированных протопластов, клеток итканей в решении задач физиологии растений //Новые направления в физиологии растений,- М.:"Наука" 1985.-С.16-32.

22. Бутенко Р.Г., Вардия Т. К вопросу получения целых растений вкультуре ткани табака // Рост и клеточная дифферен-цировка растений. М.: "Наука" 1967,- С. 158-168.

23. Бутенко Р.Г., Лунева М.3. Применение метода стерильных культурдля выращивания отдаленных гибридов Nicotiana // Физиология растений,- 1966.- Т. 13,- Вып.4.- С. 733-736.

24. Бутова Г.П., Скробова Л.Л. Морфогенез и регенерация растенийдуба черешчатого в культуре in vitro // Физиология растений,- 1988,- Т. 35,- N 5,- С. 1023-1030.

25. Васильева В.Е., Батыгина Т.Б. Культивирование in vitro зародышей и семяпочек лотоса, изолированных на различных стадиях развития // Физиология растений.- 1981.-Т. 28.- N 2,- С. 319-327.

26. Воробьева Г.А., Приходько Н.И. Использование культуры зародышейin vitro для получения межвидовых гибридов томатов // Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции.-М. , 1980,- Т. 67,- ВЫП. 3,- С. 69-73.

27. Вердеревская Т.Д., Кеглер Ч., Вивол Т.Ф., Калашян Ю.А., Косаковская О.И., Абраменко И.Н., Чернец A.M., Полипковс-кий А.И. и др. Технология производства безвирусного посадочного материала плодовых, ягодных культур и винограда. М., 1989.- 167 с.

28. Веретенникова Н.П., Высоцкий ВЛ. Способ получения оздоровленного посадочного материала земляники:

29. A.C. N. 1658929, от 30.12.1982 (Россия) //Б.И. 1991,1. N 24.

30. Винклер Г., Лайнгер Б. Оздоровление картофеля от вирусов методом культуры меристемы // Картофель и овощи.-1970,- N 8,- С. 9-10.

31. Высоцкий В.А. Действие некоторых регуляторов роста на изолированные меристематические верхушки черной смородины // Плодоводство и ягодоводство нечерноземной полосы.-М., 1976.- Т. IX.- С. 101-107.

32. Высоцкий В.А. Регенерационная способность изолированных меристематических верхушек черной смородины и вишни и методы получения из них целых растений // Дисс. канд. биол. наук, 1978.- 165 с.

33. Высоцкий В.А. Применение методов культуры изолированных тканей и органов для размножения плодовых и ягодных растений // Ягодоводство в Нечерноземье,- 1982,- С.30-41.

34. Высоцкий В.А. Клональное микроразмножение растений / Культураклеток растений и биотехнология. Тез.докл. IV. Всесоюзной конференции. Кишинев : "Штиинца", 1983.- С.6-7.

35. Высоцкий В.А. Усовершенствование способов получения растениймалины из изолированных меристематических верхушек /Ягодоводство в Нечерноземье.-М., 1984,- С.3-8.

36. Высоцкий В.А. Результаты использования регуляторов роста впроцессах оздоровления и микроразмножения плодовых растений // Pestycydy.- 1986.- МИ 314.- С.79-86.

37. Высоцкий В.А. Клональное микроразмножение некоторых форм груши

38. Биология культивируемых клеток и биотехнология /Тезисы докл. междун. конференции.- Новосибирск,1988. Т. 2.- С. 318-319.

39. Высоцкий В.А. Клональное микроразмножение плодовых растений идекоративных кустарников // Микроразмножение и оздоровление растений в промышленном плодоводстве и цветоводстве / Сб. научных трудов ВНИИС им. И.В.Мичурина.-Мичуринск, 1989.- С. 3-8.

40. Высоцкий В.А. Ризогенез у микропобегов малино-ежевичных гибридов при различных температурах // Тез. докладов II Международной конференции "Биология культивируемых клеток растений и биотехнология",- Алматы, 1993.-Т. 2,- С. 210.

41. Высоцкий В.А. Опыт клонального микроразмножения ирги // Плодоводство и ягодоводство России / Сб. трудов ВСТИСП.-М., 1995.- С. 123-127. '

42. Высоцкий В.А., Бартенева Л.В. Особенности клонального микроразмножения актинидии // Биология культивируемых клеток и биотехнология / Тезисы докл. Международной конференции.- Новосибирск, 1988.- Т.2.- С.317-318.

43. Высоцкий В.А., Бартенева Л.В. Способ пересадки растений-регенерантов в почвенный субстрат //А. С. N 1591887» 311» А 01 Н 3/00, опуб. Б. И. N 34, 15.09.1990.

44. Высоцкий В.А., Бартенева Л.В. Особенности клонального микроразмножения актинидии // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений.- М.; "Наука", 1991.-С.213-216.

45. Высоцкий В.А., Герасимова Н.В. Клональное микроразмножение всистеме производства оздоровленного посадочного материала малины / Ягодоводство в Нечерноземье. М.,1989.- С. 65-74.

46. Высоцкий В.А., Данькова Е. В. Регенерация косточковых культур изкорневого и листового каллусов // Плодоводство в Нечерноземье.- М., 1993.- С. 70-75.

47. Высоцкий В.А., Дьякова Т.Н. Микроклональное размножение декоративных кустарников // Культура клеток растений и биотехнология / Тез. докл. IV Всесоюзной конференции (3-6 октября 1983),-Кишинев: "Штиинца", 1983. -С. 134.

48. Высоцкий В.А., Корнацкий С.А. Изменение коэффициента размножения и укореняемости микропобегов сливы при длительном культивировании In vitro //Агротехника, защита от вредителей и болезней, механизация в плодоводстве в ИЗ РСФСР. М., 1992.- С. 14-20.

49. Высоцкий В.А., Лапинская М.П. Размножение гладиолусов In vitro

50. Цветоводство.- 1991.- N 1.- С.13-14.

51. Высоцкий В.А., Леонтьев-Орлов O.A. Микроклональное размножениеподвоев яблони // Садоводство,- 1983,- N 7.- С.20-21.

52. Высоцкий В.А., Литвиненко И. С. Производство оздоровленногопосадочного материала яблони // Достижения науки и техники А. П. К, 1987.- N2.- С. 25-27.

53. Высоцкий В.А., Олешко Е.В. Совершенствование питательной средыдля микроклонального размножения вишни // Агротехника и сортоизучение плодовых культур / Сб.научных трудов НИЗИСНП.-М., 1985.- С. 72-76.

54. Высоцкий В.А., Олешко Е.В. Использование микропрививок приклональном микроразмножении косточковых культур // Сельскохозяйственная биология.- 1988.- N 4,-С.75-77.

55. Высоцкий В.А., Паршина О.В. Способ получения в ювенильной фазегенетических близнецов сеянцев черной смородины //Известия Сибирского отделения АН СССР,-Новосибирск, 1987,- Вып. 2.- С. 119-122.

56. Высоцкий В.А., Плотникова Г.А. Методические указания по выращиванию сеянцев вишни из зародышей, изолированных на разных стадиях развития.-М.',"ВАСХНИЛ'| 1988.- 16 с.

57. Высоцкий В.А., Соломонова Ф.Н. Регенерация побегов малины красной комплексными эксплантами в зависимости от условий культивирования // Плодоводство и ягодоводство россии. м., 1994,- с. 58-62.

58. Высоцкий В.А., Соломонова Ф.Н. Повышение частоты регенерациирастений земляники в культуре пыльников путем изменения содержания регуляторов роста в питательной среде

59. Тезисы докл. Третьей международной конференции "Регуляторы роста и развития растений".- М., 1995.-С. 220-221.

60. Высоцкий В.А., Упадышев М. Т. Способ выращивания растений Invitro // A.C.N 1685323.- SU А 01 Н 4/00, опубл. Б.И. N 39.- 23. 10.91.

61. Высоцкий В.А., Упадышев М.Т. Морфозы при клональном микроразмножении Rubus occidentalis и Rubus fruticosus (Rosa-ceae) // Ботанический журнал,- 1992.- Т.77.- N 7.-С. 85-91.

62. Высоцкий В.А., Упадышев М.Т. Регенерация вегетативных органовлистовыми дисками и другими эксплантами рода Rubus in vitro // Физиология растений,- 1992,- Т. 39.-Вып.3.- С.584-591.

63. Высоцкий В.А., Хамукова Ф. М. Возможности регенерации растенийземляники и малины из -каллусов различного происхожде-ния//Ягодоводство в Нечерноземье.- М., 1993,- С.19-24.

64. Высоцкий В.А., Шершень И.А. Способ размножения растений invitro // А.С. N 1738169, SU А 01 Н 4/00, опубл. Б.И. N 21.- 07.06.92.

65. Высоцкий В.А., Шершень И.А. Разрезнокорончатые нарциссы: интенсивные методы размножения // Цветоводство.- 1993.-N 4.- С. 14.

66. Высоцкий В.А., Бартенева Л.В. Упадышев М.Т. Введение в культуру дикорастущих видов актинидии, способы размножения плодовых и ягодных культур //Сб. научных трудов ВНИИС им. И.В.Мичурина. -Мичуринск, 1990. С. 39-40.

67. Высоцкий В.А., Дьякова Т.Н., Трушечкин В.Г. Культура органов итканей в цветоводстве: сирень // Цветоводство.- 1982.-N 6.- С. 17.

68. Высоцкий В.А., Поликарпова Ф.Я., Трушечкин В.Г. Использование6.бензиламинопурина для размножения плодовых и ягодных культур // Регуляторы роста и развития растений / Тез. докл.I Всесоюзной конференции. М.: "Наука1981.-С.155-156.

69. Высоцкий В.А., Попов Ю.Г., Трушечкин В.Г. Регенерация изолированных меристематических верхушек древесных растений in vitro / Плодоводство и ягодоводство Нечерноземнойполосы. Т. IX,- М., 1976.- С. 89-100.

70. B.А., Трушечкин В.Г., Попов Ю.Г. Регенерационная способность верхушек черной смородины под влиянием различных ростовых веществ и условий культивирования // Сельскохозяйственная биология,- 1976,- Т.XI.1. C.879-885.

71. В.А., Трушечкин В.Г., Попов Ю.Г. Способ размножения древесных растений : А. С. N 626728 от 29.12.1975 //Б. И. 1978.- N 37.

72. B.А., Упадышев М.Т., Хамукова Ф.Н. Регенерация побегов земляники и малины в культуре каллусных тканей и листовых дисков // Тезисы докладов II Международной конференции "Биология культивируемых клеток растений и биотехнология",- Алматы, 1993.- С. 49.

73. Выхристова Г.И. Культура изолированных зародышей нарцисса

74. Цветоводство.- 1981,- N6.- С. 89-99.

75. Гаврикова Л. И., Трушечкин В.Г. Культура пыльников земляники

76. Проблемы интенсификации садоводства в Нечерноземной зоне РСФСР: Сб. научн.трудов ТСХА.- М., 1989.1. C.73-76.

77. Гартель Л.Ф., Мелик-Саркисов О.'с. Трансгенные растения длясельского хозяйства: первые достижения // Вестник науки.- 1990.- N 4.- С. 57-61.

78. Геринг X., Цоглауер К., Гоффман Б., Пинкер И. Влияние ауксинаи красного света на корнеобразование у побегов березы in vitro //Культура клеток растений и биотехнология.-М., 1986.- С. 106-110.

79. Глушак Л.Е., Шабря Г.Р., Свитайло A.M. Отбор здоровых исходныхрастений кустовых ягодников // Сад1вництво.- Киев, 1983.- Вып. -31.- С. 36-38.

80. Голубинская Е.С. Культура изолированных зародышей пиона

81. Труды I Всесоюзной конференции / Культура изолированных органов, тканей и клеток растений .- М.: "Наука1; 1970,- С. 931-933.

82. Горбаренко Н.И., Жук И.П. Оздоровление картофеля, пораженноговирусами методом культуры меристем // С.-х. биология.-1971.- N 2.- С. 267-279.

83. Гродзинский Д.М. Старение у растений // Надежность и элемен64. Высоцкий65. Высоцкий66. Высоцкийтарные события процессов старения биологических объектов.- Киев: "Наукова Думка" 1986,- С. 6-9.

84. Гуральчук Ж.3., Петрова С.А., Гудков И.Н. Влияние цинка и магния на продолжительность клеточного цикла в корневой меристеме кукурузы // Клеточный цикл растений в онтогенезе.- Киев., 1988.- С.128-140.

85. Деменко В.И., Трушечкин В.Г. Хранение растений земляники

86. Биология культивируемых клеток и биотехнология / Тез. докл. Междун. науч. конф. 2-6 августа 1988.-Новосибирск, 1988.- С.393.

87. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта,- М.: "Колос", 1985.351 с.

88. Еникеев Х.К., Высоцкий В.А., Плотникова Г.А. Развитие зародышейвишни и черешни в культуре In vitro, изолированных на ранних стадиях эмбриогенеза // Сельскохозяйственная биология.- 1984,- N П.- С. 46-48.

89. Еникеев Х.К., Высоцкий В.А., Плотникова Г.А. Питательная средадля культивирования зародышей косточковых культур // A.C., N 1261587. SU, А 01 Н 3/00, опубл. БИ N 37, 07.10.86.

90. Заузолкова Н.П. Микроразмножение алычи. Проблемы интенсификациисовременного садоводства // Тез. док. науч. конф. молодых ученых.- Мичуринск,- 1990,- С. 165-166.

91. Здруйковская-Рихтер А.И. Воспитание зародышей семян алычи,полученных от вторичнсзго (осеннего) цветения // Агробиология.- 1954.- N 4,- С.130-133.

92. Здруйковская-Рихтер А.И. Получение раносозревающих форм черешни

93. Cerasus avium) из зародышей в культуре in vitro // Доклады советских ученых к 19 Международному конгрессу по садоводству. М., 1974.- С.82-85.

94. Здруйковская-Рихтер А.И. Культура незрелых зародышей от межвидовой гибридизации и свободного опыления //Бюлл. Глав, бот. сада. М., 1980,- Вып. 115,- С. 5-8.

95. Здруйковская-Рихтер А.И. Культура зародышей in vitro и получение новых форм растений / Автореферат дисс. доктора биол. наук,- 1981 а. 33 с.

96. Здруйковская-Рихтер А.И. Культура in vitro зародышей хурмы отмежвидовой гибридизации // Бюлл. Глав. бот.сада.1981 б, ВЫП. 121.- С. 84-86.

97. Зубкус Л.П. Культура зародышей и семян в искусственных питательных средах как метод интродукции декоративных растений Сибири // Труды I Всесоюзной конференции "Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. М.: "наука'; 1970.- С. 45-47.

98. Егорова Н.А., Резник С.А. Исследование культуры изолированныхпыльников кориандра в связи с индукцией андрогенеза // Физиология растений.- 1982.- Т. 29.- N 1.-С.142-149.

99. Ивановская Е.В. Культура гибридных зародышей на искусственнойсреде // ДАН СССР.- 1946.- Т. 54.- N5.-0. 449-452.

100. Ивановская Е.В. Цитоэмбриологические исследования пшеницы и ееотдаленных гибридов // Автореферат дисс. доктора биол. наук. М., 1976.- 34 с.

101. Изворска Н. Индуциране на растения от малини и касис по меристемен път чрез растежни регулатори // Физиология на растенията. 1979.- Т.-5.- N4.- С. 36-40.

102. Ипполитова Н.Я., Высоцкий В.А., Талалаева Г.А. Микроклональноеразмножение пионов // Цветоводство.- 1984.- N 1.-С. 34.

103. Капица О.С., Андреева Э.И. Оздоровление растений картофеля от

104. У-вируса с помощью культур меристем // Вирусные болезни с/х растений и меры борьбы с ними: Труды V всесоюзного совещания по вирусным болезням.- Киев, 1966.- 176-180.

105. Катаева Н.В. Параметрическое регулирование морфогенеза и клонального микроразмножения растений на примере герберы и фрезии // Автореф. дисс. . канд. биол. наук. М., 1982,- 24 с.

106. Катаева Н.В., Бутенко Р. Г. Клональное микроразмножение растений.- М.: "Наука", 1983.- 96 с.

107. Качармазов В., Изворска Н. Използуване на верхови меристеми отягодови ластуни за получаване на растения, свободни от вируси / Вирусни болезти по растенията,- София, 1974.-С. 25-31.

108. Кеглер X., Кляйнхемпель X., Вердеревская Т. Борьба с вируснымиболезнями плодовых культур / Борьба с вирусными болезнями растений. М.: ''Агропромиздат? 1986. -С. 326-356.

109. Кефели В.И. Природные ингибиторы роста и фитогормоны.- М.:1. Наука? 1974,- 253 с.

110. Кефели В.И. Рост растений и фотоморфогенез // Физиология растений,- 1987,- Т. 34,- N 4,- С. 685-697.

111. Кляйнхемпель X. Свойства фитопатогенных вирусов и симптомыболезней / Борьба с вирусными болезнями растений.-М.: "Агропромиздат," 1986.- С. 36-88.

112. Кожин А.В., Кравцов П.В., Скоробогатова Е.П. Действие тиаминаи рибофлавина на рост 'и развитие изолированных зародышей груши и яблони в условиях стерильной культуры // Физиология растений, 1973,- Т. 20,- N 6.-С.1285-1288.

113. Константинова Т. Н., Аксенова Н. П., Сергеева JI. И., Чайлахян М. X.

114. Взаимное влияние света и гормонов на регуляцию морфо-генетических процессов в культуре In vitro // Физиология растений.- 1987.- Т. 34.- N 4.- С. 795-802.

115. Корнацкий С.А. Особенности клонального микроразмножения сливыв системе производства оздоровленного посадочного материала // Автореферат дис. канд.с.-х.наук. М., 1991.- 19 с.

116. Корнацкий С.А., Высоцкий В.А. Способ выращивания привитыхрастений // А.С., N 1750492, SU, А 01 G 1/00, опубл. Б. И. N 28, 30.07.92.

117. Корнацкий С.А., Высоцкий В.А., Трушечкин В.Г. Способ пересадкирастений, выращенных In vitro на питательной среде в культивационных сосудах с покрытием, в нестерильных условиях // А.С., N 1493187, SU, А 01 Н 3/00, опубл. БИ N 26, 15.07.89.

118. Корнацкий С.А., Высоцкий В.А., Трушечкин В.Г. Проблемы клонального микроразмножения косточковых культур /Достижения в плодоводстве в Нечерноземной зоне РСФСР. М., 1991.- С.104-116.

119. Корнацкий С.А., Высоцкий В.А., Трушечкин В.Г. Способ размножения растений //Патент РФ N 2013946 на изобретение, R.U. , CI А 01 Н 4/00, опубл. БЮЛЛ. N И, 15.06.94.

120. Коротаева М.С., Попов Ю.Г., Трушечкин В.Г., Ярославцев Е.И.

121. О регенерации стеблевых верхушек малины // Биологические науки.- 1975.- N 10,- С.133-136.

122. Коршикова Н.Г. Получение отдаленных гибридов лилий методомкультуры зародышей на искусственной среде // Бюл. Глав. бот. сада. М.: "Колос?- 1980.- В. 120.- С. 77-80.

123. Кравцов П.В., Евсеева Р.П. Каллусогенез изолированных семяпочек и зародышей яблони и груши в культуре In vitro в процессе развития // Бюлл.науч.инф. ЦГЛ.- Мичуринск, 1977.- Вып. 7.

124. Кравцов П.В., Касьянова В.Г. Культура изолированных зародышейкак метод преодоления стерильности отдаленных гибридов плодовых растений //Физиология растений.- 1968.-Т. 15.- ВЫП. 5,- С. 931-933.

125. Кравцов П.В., Касьянова В.Г. Опыт применения культуры изолированных зародышей для преодоления стерильности отдаленных гибридов плодовых растений // Труды ЦГЛ им. И.В.Мичурина. Мичуринск,,- 1969.- С. 236-244.

126. Кравцов П.В., Кравцова Л.В., Семенова В.Д. Рост изолированныхзародышей яблони на среде с различными концентрациями агара в стерильной культуре // Бюл.науч.инф. ЦГЛ им. И.В.Мичурина. Мичуринск,- 1971,- Вып. 18 . - С. 43-48.

127. Крылова Н.В., Лебедева Е.Г., Казачкова Л.А. Оздоровлениекартофеля от вирусов методами культуры меристемы и термотерапии // Вирусные болезни растений Дальнего Востока: Труды Биол.почв.института. Новая сер.,1973.-Т. 14.- N 117.- С. 116-126.

128. Кулаева О.Н. Влияние корней на обмен веществ листьев в связис проблемой действия на лист кинетина // Физиология растений.- 1962.- Т. 9.- N 2,- С. 229-239.

129. Кулаева О.Н. Цитокинины и их физиологическое действие // Успехи современной биологии.- 1967,- Т.63,- N. 1.- С.28-53.

130. Кулаева О.Н. Цитокинины, их структура и функция. М.: "Наука','1973.- 264 с.

131. Кулаева О.Н., Баскаков Ю. А., Борисова H.H., Кузнецов В.В.,

132. Цибуля Л.В., Шаповалов А. А. Исследования цитокинино-вых свойств дефолианта ДРОП и гербицида ДРХ-4189. //Физиология растений.- 1982.- Т.29,- N 3.- С.266-273.

133. Курсаков Г.А. Опыт применения искусственной культуры зародышейпри отдаленной гибридизации сливы // Труды ЦГЛ им. И.В.Мичурина. Мичуринск, 1967.- Т. 9.- С. 120-126.

134. Курсаков Г.А. Применение культуры изолированных зародышей приотдаленной гибридизации сливы // Культура изолированных органов, тканей и клеток. М.: "Наука^' 1970 а.-С. 47-50.

135. Курсаков Г.А. Межродовая и межвидовая гибридизация плодовыхкультур и искусственная культура зародышей // Отдаленная гибридизация растений и животных.- М., 1970 б. -С.123-126.

136. Курсаков Г.А. Применение искусственной культуры зародышей invitro при отдаленных скрещиваниях косточковых культур // Труды ЦГЛ им.И.В.Мичурина.- Мичуринск, 1974 а. -Т. 15.- С. 11-22.

137. Курсаков Г.А. Опыт использования и пути применения искусственной культуры зародышей в селекции зимостойких форм плодовых растений // Биофизические и физиолого-биохи-мические исследования плодовых и ягодных культур,- М.: "Колос, 1974 б. С. 141-145.

138. Курсаков Г.А. Применение искусственной культуры зародышей итканей при отдаленной гибридизации плодовых растений // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений.-М. , 1979,- С. 70-77.

139. Курсаков Г.А. Развитие творческого наследия И.В.Мичурина

140. Бюл. науч. инф. ЦГЛ.- 1980,- Вып. 35.- С. 5-11.

141. Курсаков Г.А. Фонд отдаленных гибридов и полиплоидовгенетический резерв решения селекционных программ / Генетические основы и методы селекции плодовых и ягодных растений,- Мичуринск, 1981.- С.3-9.

142. Курсаков Г.А., Панфилкина Т.И. Применение искусственной культуры зародышей при отдаленной гибридизации моравской рябины // Бюл.науч.инф.ЦГЛ им.И.В.Мичурина.- Мичуринск, 1976.- Вып. 23.- С. 3-6.

143. Курсаков Г.А., Кравцов П.В., Харитонова E.H., Чувашина Н.П.,

144. Седышева Г.А. Цитоэмбриологичеокое изучение и применение искусственной культуры зародышей при отдаленной гибридизации плодовых и ягодных растений // Труды ЦГЛ им.И.В.Мичурина. Мичуринск,- 1973.- Т. 14,- С. 193-206.

145. Леонтьев-Орлов O.A. Разработка клонального микроразмноженияяблони // Диссертация на соискание ученой степени кандидата с.-х. наук. М., 1987.- 177 с.

146. Леонтьев-Орлов O.A., Трушечкин В.Г., Высоцкий В.А. Особенностикультивирования изолированных апексов яблони In vitro / Плодоводство в Нечерноземной полосе.- М., 1988.-С.21-30.

147. Луткова E.H., Жуков О.С., Кравцов П.В. Применение искусственной культуры зародышей при изучении биологии трудно-прорастающих семян // Влияние физико-химических факторов на растительные организмы,- Тамбов,- 1974.-С. 119-120.

148. Маруненко И.М., Кучко A.A., Бутенко Р.Г. Физиологическиеаспекты получения гаплоидов картофеля методом культуры пыльников // Физиология растений.- 1988.-Т.35.- N 1. С.136-143.

149. Мезенцев A.B. Культура клеток и тканей растений в Канаде

150. Сельское хозяйство за рубежом.- 1982.- N 3.-С.18-26.

151. Мельников П. В., Пастернак Т.П., Глеба Ю. Ю., Сытник K.M.

152. Способ получения генетически трансформированных растительных объектов.- A.C., N 1698291.- 1991.-Бюлл. N. 6.

153. Мещерякова Н.И., Банков В.Ф. Гормональная регуляция побегообразования в изолированной культуре апикальных меристем розы эфиромасличной // Регуляторы роста и развития растений / Тез. докл. I Всесоюз. конф.- М.: "Наука",- 1981.- С.166-167.

154. Миглавс У.Я. Применение метода культуры апикальных меристемдля оздоровления сортов "Лаймдота","Ранний желтый" от X, Y-вирусов // Труды ЛСХА. 1971,- Вып. 40,- С. 34-40.

155. Михальчик Л.С. Ускоренное выращивание посадочного материалаяблони для интенсивных насаждений Нечерноземной зоны

156. РСФСР // Автореферат дисс. . канд.с.-х. наук.- М., 1990.- 17 с.

157. Муромцев С.Г., Ванюшин Б.Ф. Биотехнология на службе сельскогохозяйства. М.: "Знание? 1989.- 34 с.

158. Некрасова Т.В. Культура изолированных почек плодовых растений

159. Физиология растений,- 1964,- Т.Н. N 1.- С. 127-134.

160. Неделчева С., Ганева Д. Размножение in vitro на три вегетативни подложки от род Prunus // Растен. науки.- 1985.-Т. 22.- N 8.- С. 98-104.

161. Новикова В.М. Культивирование зародышей винограда в условияхin vitro в связи с селекцией // Автореферат диссканд. наук, Кишинев^ 1979.- 18 с.

162. Олешко Е.В., Трушечкин В.г., Высоцкий В.а. Размножение ¡клановых подвоев вишни // Садоводство.- 1983.- N 3.-С.20-21.

163. Осипов Ю.В., Морозова Т.М. Рекомендации по технологии размножения черной смородины однопочковыми черенками.- М. * "Колос", 1983.- 17 с.

164. Острейко С.А., Панькова Т.Ф. A.C. N 403388 // Открытия, изобретения, промышленные образцы, товарные знаки,- 1973.-N 43.

165. Острейко С.А. Роль естественного отбора в онтогенезе растенийосновы цитоклональной теории онтогенеза) // Физиология растений.- 1985,- Т. 32.- N 3,- С. 585-604.

166. Павлова М.К. Культура неоплодотворенных завязей и семяпочек:возможности и перспективы // Сельскохозяйственная биология.- 1987.- N 1.- С. 27-31.

167. Павлова М.К., Банникова В.П. Преодоление перекрестной несовместимости при отдаленной гибридизации методом культивирования незрелых зародышей гибридных семян // Сельскохозяйственная биология.- 1974,- Т.9.-N 1.- С. 23-27.

168. Пирузян Э.С., Андрианов В.М. Плазмиды агробактерий и генетическая инженерия растений. М.: ''Наука'! 1985.- 280 с.

169. Плохинский H.A. Биометрия. М.; Из-во МГУ, 1970,- С.368.

170. Поддубная-Арнольди В.А., Селезнева В.А. Орхидеи и их культуpa.- М., 1953,- С. 173.

171. Полевой В.В., Саламатова Т.е. Физиология роста и развитиярастений.- Л.:'Из-во Ленинградского университета, 1991.- 239 с.

172. Поликарпова Ф.Я., Турецкая Р.Х. Вегетативное размножениерастений с применением стимуляторов роста.- М.; "Наука", 1968.- 94 с.

173. Поликарпова Ф.Я., Высоцкий В.А., Тарашвили З.Т. Методическиеуказания по клональному микроразмножению черной и красной смородины. М.» 1986.- 16 с.

174. Понтович В.Э. Тканевые и гормональные взаимодействия при раннем эмбриогенезе In vitro // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений.- М., 1979,- С.104-112.

175. Попов В.И., Высоцкий В.А., Туктагулов И.М. Условия культивирования изолированных апексов хмеля для клонального микроразмножения // Физиология растений.- 1985.-Т. 32.- Вып. 6.- С. 1191-1195.

176. Попов Ю.Г. Оздоровление земляники, пораженной вирусными заболеваниями, с помощью культуры изолированных меристема-тических верхушек // Сельскохозяйственная биология.-1974.- Т. 9,- N 5.- С. 694-697.

177. Попов Ю.Г. Культура In vitro меристематических верхушек стеблякак метод оздоровления и размножения растений // Биологические науки.- 1976.- N 6. С. 13-24.

178. Попов Ю.Г. Оздоровление и размножение плодовых и ягодных растений методом культуры меристематических: Методические указания. М., 1979,- 30 с.

179. Попов Ю. Г., Высоцкий В.А. Культура стеблевых верхушек in vitroкак метод ускоренного размножения плодовых и ягодных растений // Вестник с.--х. науки.- 1978,- N 4,- С. 124-127.

180. Попов Ю.Г., Равкин A.C. Применение метода культуры меристематических верхушек в селекционной работе с земляникой // Тканевые и клеточные культуры в селекции растеАний.- м.; "Колос", 1979.- С.115-123.

181. Попов Ю.Г., Трушечкин В.Г. Получение растений малины и земляники из верхушек побегов в культуре in vitro / Культура изолированных органов, тканей и клеток растений.- М.: "Наука" 1970.- С.315-319.

182. Попов Ю.Г., Трушечкин В.Г.Получение растений земляники методомкультуры изолированных верхушек побега // Плодоводство и ягодоводство нечерноземной полосы /Сб. научных работ НИЗИСНП,- 1972.- Т. 4,- С. 184-193.

183. Попов Ю.Г., Щелкунова С.Е. Регенерация верхушки стебля Rubusidaeus L.in vitro в связи с наличием в питательной среде регуляторов роста // Ботанический журнал. 1973.

184. Т. 58. N 10.- С. 1515-1520.

185. Попов Ю.Г., Высоцкий В.А., Трушечкин В.Г. Культура изолированных стеблевых верхушек вишни // Физиология растений.-1976.- Т. 23,- N 3,- С. 513-518.

186. Привалов Г.Ф. Модифицирующее действие ауксина на индуцированную мутационную изменчивость растений Acer negungo L. // Генетика. 1980.- Т. 16. - N 12.- С. 2176-2185.

187. Сафразбекян С.А., Урманцева В.В., Катаева Н.В. Роль сахарозыв регуляции морфогенеза каперса in vitro // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений,- М.: "Наука',' 1991.- С. 192-196.

188. Свириденко Э.И., Бурдасов В.М., Дудченко О.П. Получение регенерантов облепихи в культуре ткани // Тез. докл. Международной конференции "Биология культивируемых клеток и биотехнология". Новосибирск, • 1988.- Т.2.- С.347.

189. Спицин И.П. Культура зародышей вишни, черешни и вишне-черешневых гибридов на искусственной среде // Биологический сборник.- Тамбов, 1972.- С.76-79.

190. Тарашвили З.Т., Высоцкий В.А. Размножение черной и краснойсмородины in vitro / Труды НИИ садоводства, виноградарства и виноделия Груз.ССР.- Тбилиси., 1984.-С.176-185.

191. Толочко В.В., Гамбург К. 3. Возможные функции миоинозита врастениях // Успехи современной биологии,- 1978.-Т. 85,- N 1,- С. 50-62.

192. Трофимец JI. И., Князев В. А., Хромова Л. М., Егорова Л. И. ОздоАровление картофеля от вирусных болезней методом верхушечной меристемы // С.-х. биология,- 1975,- Т. 10,-N 5.- С. 760-765.

193. Трушечкин В.Г., Высоцкий В.А. Предпосылки для микроклонального размножения подвоев и скелетообразователей груши // Плодоводство Нечерноземной полосы / Сб. Трудов НИЗИСНП.- М., 1984.- С. 8-14.

194. Трушечкин В.Г., Высоцкий В.А. Клональное микроразмножение плодовых и ягодных культур // Плодоовощное хозяйство.-1985.- N 1.- С. 43-46.

195. Трушечкин В.Г., Высоцкий В.А., Леонтьев-Орлов O.A. Размножениеклоновых подвоев яблони методом культуры ткани // Сельскохозяйственная биология,- 1982,- Т. XVII.-N 4.- С. 455-457.

196. Трушечкин В.Г., Высоцкий В.А., Леонтьев-Орлов O.A. Методические указания по клональному микроразмножению подвоев и сортов яблони. М., 1985,- 19 с.

197. Трушечкин В.Г., Высоцкий В.А., Олешко Е.В. Микроклональноеразмножение сортов и подвоев косточковых культур /Методические указания, М.: ВО "Агропромиздат", 1987.-17 с.

198. Трушечкин В.Г., Высоцкий В.А., Походенко А.П. Производствобезвирусного посадочного материала земляники // Садоводство,- 1984.- N П.- С.19-21.

199. Трушечкин В.Г., Метлицкий 0.3., Высоцкий В.А., Акинин Н.И.

200. Пути обеззараживания земляники от нематод // Садоводство.- 1984.- N 7.- С. 20-21.

201. Трушечкин В.Г., Олешко Е.В. Высоцкий В.А. Питательная средадля размножения растений в культуре тканей // A.C. N 1279082 от 22 августа 1986.

202. Турецкая Р.Х., Гуськов A.B. Роль ауксинов, их кофакторов иингибиторов в ризогенезе // Метаболизм и механизм действия фитогормонов: Тр. Всес. конф.- Иркутск, 1979.- С. 21.

203. Турецкая Р.Х., Гуськов A.B., Блайс В., Коф Э.М., Кефели В. И.,

204. Кутачек М. Возможная роль фенольных соединений в росте и ризогенезе черенков // Физиология растений.-1976,- Т. 23.- N 4.- С.760-764.

205. Туровская Н.И., Стрыгина О.В. Микроклональное размножениемалины // Садоводство и виноградарство,- 1990.-N 8.- С. 26-29.

206. Упадышев М. Т. Клональное микроразмножение и особенностирегенерации растений ежевики и малины черной in vitro / Канд.дисс. на соискание ученой степени кандидата с.-х. наук,- 1992,- 211 с.

207. Упадышев М.Т., Высоцкий В.А. Клональное микроразмножениеежевики и малины черной / Новое в ягодоводстве Нечерноземья. М., 1990.- С. 56-65.

208. Упадышев М.Т., Высоцкий В.А. Размножение ежевики и малинычерной методом культуры тканей // Садоводство и виноградарство. 1991.- N 6.- С. 24-27.

209. Упадышев М.Т., Высоцкий В.А. Совершенствование процессаклонального микроразмножения ежевики и малины черной /Совершенствование технологии выращивания ягодных культур в Нечерноземье.- М. 1992 а.-С.42-53.

210. Упадышев М.Т., Высоцкий В.А. Способ подготовки растенийрегенерантов к посадке в нестерильные условия // A.C. N 1720597, SU, А 01 H 5/00, опубл. Б.И. N И, 23.03.92 б.

211. Упадышев М.Т., Высоцкий В.А. Питательная среда для укорененияпобегов ежевики // A.C. N 1706481, SU, А 01 H 4/00, опубл. Б. И. N 3, 23.01.92 в.

212. Упадышев М.Т., Высоцкий В.А. Регенерационная способность эксплантов рода Rubus в Зависимости от длительности культивирования in vitro // С.-х. биология.- сер. "Биология растений".- 1995.- N 1.- С. 85-89.

213. Харченко П.И. Получение гаплоидов и гомозиготных линий у рисаметодом in vitro: Автореф.дисс.канд.биол. наук.-Л. ,1986.- 19 с.

214. Хурошвилли К.Г. Культура изолированных зародышей и тканей какметод селекции цитрусовых // Бюл.науч.исс. ин-та чая и субтропических культур.- 1957.- N 1,- С.180-197.

215. Цицин Н.В., Петрова К.А. О гибридизации пшеницы с элимусомгигантским // Отдаленная гибридизация в семействе злаковых.- М.: Из-во АН СССР, 1958.- С.19-40.

216. Шамина З.Б. Андрогенез и получение гаплоидов в культурепыльников и микроспор //Культура клеток растений.-М.Наука11, 1981. С. 124-135.

217. Шенгелия Л.Н., Бутенко Р.Г. Метод микропрививок цитрусовых вкультуре In vitro / Культура клеток растений и биотехнология.- Кишинев, 1983.- С.116-117.

218. Шпаяр Д. Хозяйственное значение вирусных болезней культурныхрастений / Борьба с вирусными болезнями растений.-М.: Агропромиздат, 1986. С.9-36.

219. Щекотова Л.А., Жуков О.С., Влияние света на культуру пыльников плодовых растений // 6 Всеросс. конф. по фотоэнергетике растений / Сб.тез.докл.- Львов,1980.-С.82-83.

220. Щелкунова С.Е., Изучение условий, способствующих регенерациирастений малины из меристематических верхушек: Автореф. дисс. канд. биол. наук. М., 1973.- 31 с.

221. Щелкунова С.Е., Попов Ю.Г. Получение свободных от вирусоврастений малины путем культуры изолированных апексов //Физиология растений,- 1970,- Т. 17.- N 3.- С. 618-622.

222. Юркова Г.Н., Сирант Л.В., Труханов В.А. Прямая регенерациярастений из мезофильных клеток растений // Цитология и генетика,- 1989,- Т.23,- N 1.- С.68-69.

223. Юсуфов А.Г. Культура изолированных листьев. М. :'*Наука! 1988.102 с.

224. Яковлев С.П. Разработка способов культивирования недоразвитыхзародышей и завязей груши // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений,- М., 1979,- С.93-99.

225. Abbott A.J., Whiteley Е. Culture of Malus tissues in vitro.1.

226. Multiplication of apple plants from isolated shoot apices // Sci.Hort.- 1976,- N 4,- P. 2.

227. Abou Mandour A.A., Hartung W. The effect of abscisic acid andincreasing osmotic potential of media on growth and root regeneration of Zea mays callus // Plant Physiol.- 1986.- V. 122.- N 2,- P. 129-145.

228. Adams A.N. Elimination of viruses from the hop (Humulus lupulus by heat therapy and meristem culture //The Journal of Hortic. Sci. 1975.- V. 50. - N2.- P. 151-160.

229. Aerts J. Survey of viruses and mycoplasmas in strawberry

230. Neth. J. Plant Path.- 1974.- V. 80,- N 2.- P. 215-227.

231. Aerts J. Ervaringen met, lang microvermeerdering becomen,virusurije aardbeiplanten / Mededel. Fakult. Land-bouwwetenschappen Gent. 1979.- V.44.- P. 981-991.

232. Amato F.D. The problem of genetic stability in cultivation ofplant tissue and cell //International biological prog-ramm 2: Crop Genetic resources for today and tomorrow.- New York, 1975.- P. 373.

233. Amos F.B., Wasson C.E. Producing mature plants from embryosexciesed from dry corn (Lea mays L.) caryopsea // Argon J.- 1973.- V. 65. N 3,- P. 508-509.

234. Anagnostakis S.L. In vitro culture of immature embruos ofamerican elm // Hort. Science. 1977.- V. 12.- N 1,-P. 44.

235. Anderson W.C. Tissue culture propagation of red and blackraspberries, Rubus idaeus and Rubus occidentalis // Acta Horticulturae. 1980.- N 112.- P.13-20.

236. Anderson M.H., Abbot A.J., Wiltshire S. Micropropagation ofstrawberry plants in vitro Effect of growth regulators on incidence of multi-apex abnormality // Sclent.Hort. 1982.- V. 16,- P. 331-341.

237. Apte P.V., Laloraya M.M. Inhibitory action of phenolic compounds on abscisic acid induced abscission // J. Exp. Bot. - 1982,- V.33.- N 135.- P. 826-830.

238. Arnold S. Von Erihsson T. Induction of adventitions buds onembryos of Norway spruse grown in vitro //Physiol. Plantarum. 1978.- V.44 m. - Fasc.3.- P. 283-287.

239. Askani A., Beiderbeck R. Preservation of the differentiatedstate of mesophyll cells in vitro // Ann.Bot.- 1988.-V. 61.- N 3.- P. 393-394.

240. BaJaJ J.P.S., Kumar P., Singh M.M., Labana K. Interspecifichybridisation in the genus Arachis through embruocul-ture // Euphytica. 1982.- V. 31.- N2.- P. 365-370.

241. Ball T. Development in sterile culture of stem tips and subjacement regions of Tropaeolum majus L. and of Lupinus albus L. // Amer. Journal of Botany. 1946.- V. 33.-N 5,- P. 301-318.

242. Baruch R., Quak F. Virus-free plants of Iris "Wedgwood"obtained by meristem culture // Neth. J. Plant Path.- 1966.- V. 72. P. 270-273.

243. Batten G.B., Wardlow I.F. Senescence and grain developmentin wheat plants grown-with contrasting phosphorusregimes // Austral.J.Plant Physiol.- 1987.- V. 14.-N 3,- P. 253-265.

244. Baumann G. Möglichkeiten und Grenzen der Virus freimachung von

245. Himbeeren durch Gewebekultur // Obstbau (Bonn).-1981.- Jg. 6.- H.3.- S. 88-89.

246. Beech M.G., Crisp C.M., Simpson S.E., Atkinson D. The effectof in vitro cytokinin concentration on the fruiting and growth of conventionaly propagated strawberry runner progeny // Journal of Horticultural Science.-1988.- V.63.- N 1.- P. 77-81.

247. Belkengren R.O., Miller P.W. Culture of apical meristems of

248. Fragaria vesca strawberry plants as a method of excluding latent A virus // PL Dis.Reptr.- 1962.-V.46.- P.119-121.

249. Bert V., Munsterman E., Honey Guy, Van der Salm Theo

250. Transgenic tobaco plants expressing a modified Bacillus thuringensis cry IC gene // J.CellBiochem.- 1992.-Suppl.16F.- P.213.

251. Bhoiwani S.S., Mullins K., Cohen D. In vitro propagation of

252. Pyrus pyrifolia // Scientia Horticulturae.- 1984.-V. 23. N 3.- P. 247-254.

253. Bini G. Moltiplicazione "in vitro" di Actinidia chinensis PL

254. Techniche di colture "in vitro" per la propagazione su vasta scala delle specie ortoflorofrutticole.-Pistoia., 1979.- P.211-218.

255. Bitters W.P., Murashige T., RanganT.S. Nauer E.H., Roistacher C.N., Holliday P.B. Healthy trees from test-tube // Citrograph,-1972. V. 57. - N 3.- P. 85-86.

256. Boleriola-Lucus C., Millins M.G. Micropropagation of two

257. French prune cultivars ( Prunus domestica L.)// Agronomie.- 1984.- V. 4. N 5.- P. 473-477.

258. Böttcher I., Zoglauer K., Goring H. Induction and reversionof vitrification of plants cultured in vitro // Physiol. Plant.- 1988.- V.72.- N 3,- P.560-564.

259. Bourgin I.F., Nitsch I.P. Obtenion de Nicotiana haploides apartir a'etamines cultivels in vitro // Ann.Phys. Veg. 1967,- V. 9.- P. 377-382.

260. Boxus Ph. La culture de meristemes de Prunus // Note preliminalre relative d lespece P.Pandora. / Bulletin des Recherches agronomiques de Gembloux.- 1971-V. 6,-N 1-2.- P. 3-5.

261. Boxus Ph. The production of strawberry plants by in vitromicropropagatoin // J.Hortic.Sc.- 1974 a.- V. 49.-N 3,- P. 209-210.

262. Boxus Ph. La micropropagation "in vitro" du fraisier // Proc.

263. XIX intern, hortic. congr.- 1974 b.- V. la. P. 65.

264. Boxus Ph. Commercial production of strawberry plants produced by meristem culture and micropropagation // Coll Sel. 15.- Florales Int., Montreal.- 1981.-P. 310-348.

265. Boxus Ph. Assainissement des arbres fruitiers et du frasierpar culture de meristemes // Parasitica.- 1984.-V. 40. N 2-3.- P. 139-155.

266. Boxus Ph., Quoirin M. La cultur de meristemes apicoux de quelques especes de Prunus // Bull.Soc.roy.bot. Belg.-1974.- V. 107,- N 1.- P.91-101.

267. Boxus Ph., Quoirin M. Compartement en pepiniere d'arbresfruitierers issus de culture in vitro // Acta Hortic.- 1977.- N 78.- P. 373-379.

268. Boxus Ph., Damiano C., Brasseur E. Strawberry // Handbook of

269. Plant Cell Culture / Crop Species.- 1984,- V.3.-P. 453-486.

270. Brennan R., Davidson D., Wilshin A., Millam S. An assessmentof the in vitro multiplication rates of fourteen black currant cultivars // The Journ. of Horticultural Science.- 1989.- V.64.- N 6.- P.679-681.

271. Broertjes C. Mutation breeding of vegetatlvely propagatedcrops // 5-th Cong. Eur. Assoc. Plant breeding Res., Eucarpia, Milan, 1968,- P. 139-165.

272. Broertjes C. Use in plant breeding of acute, chronic or fractionated doses of X-rays or fast neutrons as illustrated with leaves of Santpaulia // Agric. Res. Rep. 776,1972.- Wageningen.- V.77.- P. 1-74.

273. Broerteles C. Induced variability in plant breeding // Centre

274. Agric. Publ.Doc., Wageningen, 1982.

275. Broome O.C., Zimmerman R.H. In vitro propagation of blackberry

276. Hort. Sci.- 1978.- V. 13.- N 2.- P. 151-153.

277. Campbell A.J. Apple virus inactivation by heat therapy and tippropagation // Nature.- 1962,- V. 195,- N 4840.- P. 520.

278. Carr D.J. Metabolitic and hormonal regulation of growth anddevelopment // Trends in plant Morphogenesis. USA. -1966.- P.253-283.

279. Carre M., Martin-Tanquy J., Mussillon P., Martin C. La culturede meristemes et la multiplication vegetative "in vitro" au service de la pepiniere // Bull. Petits Fruits.- 1979. V. 14.- P. 7-49.

280. Cheema G.S., Sharma D.P. In vitro propagation of apple

281. Plant Cell Cult. / Crop Improvement: Plenum Press.-1983.- P.309-307.

282. Chena N. Studying the possibilities of obtaining virus-freestrawberry plants by meristem culture / Proceedings XVIIIth International Horticultural Congress.-Tel Aviv. 1970.- P. 211.

283. Chena N., Chena N. Studies on the production of virus-freestrawberry plants using meristem cultures // Proc. XIX intern, hortic. Congr.- 1974.- V. la.-P.223.

284. Chena N., Prodan D., Botez M., Zambrovicz E., Coman T.

285. The heat therapy to obtain virus-free strawberry plants // Annalele Inst. Cercetari Pentru Protectie Plantelor. 1973,- V.9.- P. 73-79.

286. Cheng T.-Y. Adventitious bud formation in culture of Douglas

287. Fir (Pseudotsuga menziesii (Mirb.)Franco). //Plant Sci. Lett.- 1975.- V. 5. P. 97-102.

288. Christiansen J., Fonnesbeach M. Prevention by polyvinylpyrrolidone of growth inhibition of Hamamelis shoot tips grown in vitro and broconing of the agar medium // Acta Horticulturae.- 1975.- V.54.- P.101-104.

289. Collins G.B., Vian W.E., Phyllips G.C. Use of 4-amino-3,5,6trichloropicolinic acid as an auxin source in plant tissue cultures // Crop Sei.- 1978,- V.18.- P.286-288.

290. Cornai L., Facciotti D., Hiatt W. Expression in plants of mutant aro A gene from Salmonella typhimurium convers tolerance to glyphosate // Nature.- 1985.- V. 317.-P.741-744.

291. Cynlai G., Jekkel Z., Heszky L.E. A selective auxin and cytokinin bioassay based on root and shoot formation in vitro // J.Plant Physiol., 1995,- V.145,- P. 379-382.

292. Dahmen W.J., Mock J.J. Effect of nutrient media compasition ongrowth seedlings from intact seeds and excised embruos of maize (Zea mays L. )// Crop. Ac.- 1972.- V. 12. N 4.-P. 549-550.

293. Damiano C., Faedy W., Cobianchi D. Prove di stolonizzazione invivaio e osservacioni agronomiche su plate di fragola ottenute da colture in vitro // Frutticoltura.- 1980.-V. 42. N 1.- P. 51-60.

294. Debergh P.C., Maene L.J. A scheme for ornamental plants bytissue culture // Sei.Hort.- 1981,- V. 14.- N 4.-P.335-345.

295. De Block M., Botterman J., Vandewiele M. Engineering herbicideresistance in plants by expression of a detoxifying enzyme // EMBO J.- 1987,- V.6.- P. 2513-2518.

296. De Lange J.H., Willers P., Magda N. Elimination of nematodesfrom Ginger (Zingiber officinale Roscoe) by tissue Culture // J. Hort. Sei.- 1987.- V. 62. N2,- P. 249-252.

297. Desjardins Y., Gosselin A. Influence des concentrations hormonales, du milieu de culture et d'un antioxidant sur le tempts de doublage des tiges de framboisiers "Madawas-ka" cultived in vitro // Can.J. Plant. Sei.- 1987.-V. 67. N 3.- P. 863-869.

298. Diaz-Perez J.C., Shackel K.A.; Sutter E.G. Effects of in vitro formed roots and acclimatization on water status and gas exchange of tissue-cultured apple shoots // J.Amer.Soc.Hort.Sei.- 1995.- V. 120.- N 3.-P. 435-440.

299. Dijkstra J., van Oosten A.A. Culture experiments with strawberryes // Ann. Report, Research Station for Fruit Growing., Wilhelminadorp. The Netherlands.- 1979.-P.28-30.

300. Dolezel J., Novak J., Luzny J. Embruo development and in vitroculture of Allium cepa and its interspecific hybrids // L. Pf lanzenzucht. 1980,- V. 85.- N 3. - P. 177-184.

301. Donelly D.J., Vidaver W.E. Leaf anatomy of red raspberry transferred from culture to soil // J. Am.Soc.Hortic. Sci.-1984 a.- V. 109,- P. 172-176.

302. Donelly D.J., Vidaver W.E. Pigment content and gas exchange ofred raspberry in vitro and ex vitro // J.Amer.Soc.Hortic. Sci.- 1984 b.- V. 109,- P. 177-181.

303. Donovan A.M., Morgan R., Yalobra-Piagnani C., Ridout M.S.,

304. James D.J., Garlett M.M. Assesment of somaclonal variation in apple I. Resistance to the fire blight pathogen, Erwinia amylovora // The Journal of Horticultural Science.- 1994 a.- V. 69.- N 1.- P. 105-113.

305. Donovan A.M., Ridont M.S., Jantes D.J. Assesment of somaclonalvariation in apple. II. Rooting ability and shoot proliferation in vitro // The Journal of Horticultural Science.- 1994,b.- V.69.- N 1.- P. 115-122.

306. Druart Ph. Plantlet regeneration from root callus of different

307. Prunus apecies // Scientia Horticulturae.- 1980.-V. 12.- N 4.- P. 339-342.

308. Druart Ph. Embryogenese somatique et obtention de plantuleschez Prunus incisa x serrula (GM 9) culture in vitro // Bull. Rech. agron. Gembloux. 1981.- V. 16.- N 3,-P. 205-220.

309. Dutcher R.D., Powell L.E. Culture of apple shoot from buds invitro // J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1972.- V.97.- N 4,-P.511-514.a

310. Earle E.D., Langhans R.W. Propagation of Chrysanthemum in vitro. 1.Multiple plantlets from shoot tips and establishment of tissue cultures // J.Amer.Soc. Hort.Sci.-1974 a.- V. 99. N2.- P. 128-131.

311. Earle E.D., Langhans R.W. Propagation of Chrisanthemum invitro. 11.Production, .growth and flowering of plant-lets from tissue cultures // J. Amer. Soc. Hort. Sci. -1974 b.- V. 99. N 4.- P. 352-358.

312. Elliot R.F. Axenic culture of meristem tips of Rosa multiflora

313. Planta. 1970.- V.95.- N2.- P. 183-186.

314. Elliot R.F. Axenic culture of shoot apices of apple // N.Z.J.

315. Bot.- 1972.- V. 10,- N 2.- P. 254-258.

316. Fabbri A., Sutler E., Dunston S.K. Anatomical changes inpersistent leaves of tissue-cultured strawberry plants after removal from culture // Scientia Horticulturae. 1986.- V.28.- P. 331-337.

317. Fasolo F., Zimmerman R.H., Fordham I. Adventitious shootformation on excised leaves of In vitro grown shoots of apple cultivars // Plant Cell tissue organ cult.-1989.- V. 16.- N 2,- P. 75-87.

318. Fellenberg G. Developmental physiology // Progress in botany

319. Eds.: H. Ellenberg, K. Esser, H. Merxmuller, E.Shnerpf, H. Ziegler.- Springer. Berlin, Heidelberg, New York., 1976.- V. 38. - P. 167-186.

320. Feucht W., Schmid P.P.S., Schimmelptend H, Theiler-Hedtrich C.,

321. Schmidtt A. Lage-scale trial of raspberries propagated in vitro: 0,68 % of off-types and enzyme pattern of atypical fruits // Erwerbsobstbau.- 1985.- J. 27,-P. 167-169.

322. Finchh B.F., Kunert K.I. Vitamins C and E: an antioxidativesystem against herbicide-induced lipid peroxidation in higher plants // J.Agric and Food Chem.-1985.-V.33.- N 4.- P. 574-577.

323. Finne A. Micropropagation of Rubus spp. // J.agr.Sc. in Finland.- 1986,- V. 58.- N 4.- P. 193-196.

324. Fillatti J., Kiser J., Rose R., Comai L. Efficient transfer ofa glyphosate tolerance gene into tomato using a binary Agrobacterium tumefaciens vector // Bio Technol.1987.- V. 5.- P. 726-730.

325. Fiola J.A., Hassan M.A., Swartz H.J., Bors R.H., McNicols R.

326. Effect of thidiazuron, light fluence rates and kana-micin on in vitro shoot organogenesis from excised Rubus cotyledons and leaves // Plant Cell Tissue Organ Cult.- 1990,- V. 20.- N 3.- P. 223-228.

327. Fischhoff D., Bowdish K., Perlak F. Insect tolerant transgenictomato plants // Bio Technol.-1987.- V.5.- P. 807-813.

328. Flegg J.J.M., Mc Namara D.G. The elimination of strawberryleaf nematode Aphelenchoides fragariae from the English nuclear stock propagation scheme / Procedings of the 10th Int.cong. of Plant Protection., Bringhton.-1983.- V. 2.- P. 878.

329. Follet I.M., Douglas I.A. Effect of nitrate: ammonium rationson growth of asparagus seedlings in sand culture // N.Z. I.Exp. Agr.- 1987.- V. 15.- N4,- P. 497-499.

330. Fossard R.A. Tissue culture propagation. The horizons of tissue culture propagation / A seminar directed by Dr. R.A. Fossard for N.S.W.Assotiation of Nurserymen Ltd., University of Sydney., 3-4 December 1977.- P.1-14.

331. Frett J.I., Dirr M.A. Effect of nitrogen and calcium stickplant nutrition on Petunia hubrida leaf and anther explants growth in vitro // Sci.Hort. (Neth.).-1986.- V. 28.- N 3,- P. 289-298.

332. Fulford R.M., Justin H.F.W. Propagation in vitro of fruitplants. Field performance of self-rooted apple and pear scions // Report of East Mailing Res. Stn. for 1980.- 1980.- P. 87.

333. Gamborg O.L. Plant cell cultures: Nutrition and media

334. Cell Culture and Somatic Cell genetics of Plants / Ed. J.K.Vasil.- Academic Press., New York, 1984.-V. 1.- P. 18-26.

335. Gamborg O.L., ShylukJ.P., ShachinE.A. Isolation, fusion andculture of plant protoplasts // Plant Tissue Culture: Methods and Application in Agriculture / Ed. T.A.Thrpe.

336. Academic Press., New York, 1981.- P.115-153.

337. Gautheret R. Culture du tissu cambial // C.R.Acad.Sci.- 1934.

338. Ser.D.- V. 198.- P. 2195-2196.

339. Gautheret R.J. Manuel technique de culture des tissues vegetaux. Priface Alexis Caler Masson., Paris.- 1942.

340. Gebhardt K. Development of a sterile cultivation system forrooting of shoot tip cultures (red raspberries) in duroplast foam // Plant.Sei.- 1985.- V.39.- N2.-P.141-148.

341. Georg L., Rao P.S. In vitro induction of pollen embryos andplantlets in Brassica Juncea through anther culture // Plant Sei. Lett.- 1982.- V.26.- P. 111-116.

342. Gilles G. De aardbeimijt een nienwe methode voor het bekomenvan gezond plantgoed // Ous Fruitteeltblad.- 1971.-V. 15.- P. 22-24.

343. Glascock C., Kamoun S., Tyler B., Ryals J., Alexander Danny

344. Transgenic tobacco resistant to Phytophtora parasitica: analysis of expression and activity of a novel patogénesis related (PR) protein SARS.2 // J. Cell. Biochem. 1992.- Suppl.l6F.- P. 215.

345. Gliemeroth K. Schulz D. In vitro Kultur von Strauchenbeerenobst zur Bereitstellung gesunden Pflanzenmaterials // Gartenbau.- 1982,- H. 7.- S. 213-215.

346. Golosin B., Radojevic L. Micropropagation of apple rootstocks

347. Acta Horticulturae.- 1987,- V.2.- N 212.- P. 589-594.

348. Green C.E., Phillips R.L. Plant regeneration from tissue cultures of maize // Crop Sei. 1975.- V. 15. - P. 417-421.

349. Grout B.W. Wax development of leaf sur faces of Brassicaderacea var. Currawong regeneration from meristem culture // Plant Sei. Lett.- 1975.- V.5.- P.401-405.

350. Grout B.W., Millan S. Photosynthetic development of micropropagation strawberry plantlets following transplanting // Ann. Bot.- 1985,- V. 55. P. 129-131.

351. Guha S., Maheswary S.C. In vitro production of embryos fromanthers of Datura // Nature.- 1964.- N 10,- P.497.

352. Haberlandt G. Kulturversuche mit isolierten Pflanzenzellen

353. Sitzungsber. Akad. der Wiss.Wien., Math.-Natur-Wiss. Reine., 1902.- Bd.111.- S.69-92.

354. Hackett W.P., Anderson J.M. Aseptic multiplication and maintenance of differentiated carnation shoot tissue derived from shoot apices // Proc. Amer. Soc. Hort. Sci.- 1967,- V. 90. P. 365-369.

355. Hakkart F.A., Quak F. Effect of heat treatment of young plantson freeing Chrysanthems from virus B by means of meristem culture // Neth.J. of Plant Pathology.-1964,- V. 70. N 5.- P. 154-157.

356. Harada H. In vitro organ culture of Actinidia chinensis PL asa technique for vegetative multiplication // J. Hort. Sci.- 1975.- V. 50.- N 1.- P. 81-83.

357. Hasegawa P.M., Murashige T., Takatori F.H. Propagation of

358. Asparagus through shoot apex culture. II. Light and temperature requirements, transplantability of plants and cytohistological characteristics. // J.Amer.Soc. Hortic. Sci.- 1973.- V. 98. N 2,- P. 143-148.

359. Havranek P. Obtaining and productivity of virus-free clones ofthe common garlic (Allium sativum L.) // Proc. XIX Inter. Hortic. Cong. 1974.- V. 1 a. - P. 272.

360. Hauser B., Geiger E.-M., Horn W. Eignung von Gellan undverschiedenen Agarqualitaten fur Gewebekulturen von Kalanchoe Hybriden // Gartenbauwissenschaft.-1988.- B. 53.- N 4,- S. 166-169.

361. Heller R. Recherches sur la nutrition minerale des tissuesvegetaux cultures in vitro // These., Paris, et Ann. Sci. Natur.: Bot.Biol. et Veget. 1953.-V. 14.- P. 1-223.

362. Hemenway C., Fang R.-X., Kanicwski W. Analisis of the mechanism of protection in transgenic plants expressing the potato virus X coat protein or its antisense RNA // EMBO J.- 1988.- N 7.- P. 1273-1280.

363. Hempel M. Application of growth regulators for in vitropropagation of ornamental plants // Acta Hort.-1979.- V. 91. P. 247-260.

364. Herler P.K., Palevitz B.A. Microtubules and microfilaments

365. Ann. Rev. Plant. Physiol. 1974,- V.25.- P. 309.

366. Hickman A.J., Varma A. Viruses in horseradish. // Plant

367. Pathology.- 1968.- V. 17,- N 1.- P. 26-30.

368. Hollings M., Stone O.M. Atempts to eliminate chrysanthemumstunt from chrysanthemum by meristem-tip culture after heat-treatment // Annals of Applied Biology.-1970.- V. 65. N 2,- P. 311-315.

369. Holmes F.O. Elimination of spermivirus from the nightingalechrysanthemum // Phytopathology.- 1956.- V.46.-P.599-600.

370. Homes I., Dubus F., Bourdan I. Cold storage of plant tissuecuture // Plant tissue culture 1982: Int.cong. of plant tissue and cell culture held et Tokyo and Lake Yamanake 11-16 July 1982,- Yapan,1982.-P.801-802.

371. Horsch R.B., Klee H.J. Rapid assey of foreign gene expressionin leaf discs transformed by A. tumefaciens: role of T-DNA borders in transfer process // Proc. Nat. Acad. Sci.- 1986. V.83.- P. 4428-4432.

372. Horsch R.B., Fry J., Hoffman N.L., Wallroth M., Eichholtz D.,

373. Rogers S.G., Fraley R.T. A simple and general methods for transferring genes into plants // Science.-1986.- V.227.- P.1229-1231.

374. Howard B.H. Propagation Rootstocks for fruit crops/ Ed.R.C.Romand R.C.Rom and R.F.Carlson. London, John Walley & Sons,Inc., 1987.- P.29-77.

375. Howard B.H., Jones O.P., Vasek J. Growth characteristics ofapparenyly rejuvenated plum shoots // J. of Hort. Sci. 1989 a. - V. 64. - N 2.- P. 157-162.

376. Howard B.N., Jones O.P., Vasek J. Long-term improvement in therooting of plum cutting following apparent rejuvenation // J.Hort. Sci.- 1989 b.- V. 64. N 2,- P. 147-156.

377. Hu C.I., Wang P.J. Meristem shoot tip and bud culture // Handbook of plant cell culture / Ed. EvansD.A., Sharp W.P., Ammirato P.V., Jamada J. Macmilan, New York.-1983.- V.1.- P. 177-227.

378. Hu Han Crop improvement by anther culture // XV Intern.Congr.of Genetics.- 1983.- P.121.

379. Hu Han, Liying X., Jiankang J., Xingzhi W. Production of aneuploides and heteroploids of pollen-derived plants // Plant tissue culture / Ed. Fujiwara A.: Tokio, 1982.- P. 412-424.

380. Hussey G. In vitro growth of vegetative tomato shoot apices

381. J. Exp. Bot.- 1971.- V. 22. N7.- P. 688-701.

382. Hussey G. In vitro methods of plant propagation // Sei.Hort.1975.- V. 25. N 1,- P. 24-28.

383. Hutbanen D.P., Converse R.H. Temporary symptom remission ofstrawberry june yellows and witches broom by use of Oxytetracycline // Phytopathology.- 1971.-V.61.- P. 1137-1139.

384. Huth W. Kultur von Himbeerpflanzen aus apikalen Meristemen

385. Gartenbauwissenschaft.- 1979.- V.44.- N 2.-S.53-55.

386. Jacobs G., Allan P., Borman C.H. Tissue culture studies on rose: use of shoot tips explants. I.Auxin: cytokinin effects// Agroplantae. 1969,- V.l. - N 3-4,- P. 179-187.

387. Janick J., Skirvin R.M. Variability in geranium derived fromcallus culture // Proc. XIX intern.hortic.congr.-1971. V. lb. - P. 885.

388. Johansson L., Anderson B., Eriksson T. Improvement of antherculture technique: activated charcoal bound in agar medium in combination with liquid medium and elevated CO concentration // Physiol.Plant.-1982.- V. 54.-P. 24-30.

389. Jochansson L., Wallin Q., Gedin A., Nyman M., Petterson E.,

390. Svensson M. Anther and protoplast culture in apple and strawberry // Verksamhetsberattelse 1986-1987, Swedish Univ. of Agric. Sci. Division Fruit Bre-ding. BALSGARD.- 1988,- P. 83-92.

391. Johnson F., Eglitis M. Suppression of strawberry virus symptoms with radio-frequency energy // Phytopathology.-1969.- V. 59. N 1.- P. 1-13.

392. Jonard R. Micrografting and its application to tree improvement // Biotechnology-in Agriculture and Forestry 1. Trees I. / Ed.J.P.S. Baj'aj. Springer-Verlag. Berlin, Heidelberg, New York, Tokyo.- 1986.- P.31-48.

393. Jones O.P. Effect of benzyladenine on isolated apple shoots

394. Nature.- 1967.- V.215.- N 5109.- P. 1514-1515.346. James347. James348. James349. James

395. Jones O.P. Effect of phloridzin and phloroglucinol an appleshoots // Nature.- 1976.- V.262.- P. 392-393.

396. Jones O.P. Metodi ed applicazloni della propagazione "In vitro" delle plante de frutto // Tecniche di colture "in vitro" per la propagazione sa vasta scala delle specie ortoflorofrutticole, Pistoia.- 1979 a.- P.95-106.

397. Jones O.P. Propagation in vitro of apple trees and other woodyfruit plants: method and applications //Scientific. Hort.- 1979 b.- V.30.- N 2.- P. 44-48.

398. Jones O.P., Hopgood M.E. The succesful propagation in vitro oftwo rootstocks of Prunus: the plum rootstock Pixy (P.insititia) and the cherry rootstock F12/1 (P.avium) // J. Hort Sci.- 1979.- V. 54. N 1.- P. 63-66.

399. Jones O.P., Vine S.J. The cullture of goosberry shoot tips foreliminating virus // The Journal of Horticultural Science.- 1968.- V.43.- N 3,- P. 289-292.

400. Jones O.P., Hopgoot M.E., O'Farrel D. Propagation in vitro offruit trees// Rep.East Mailing Res. Stn.- 1976.- P.79.

401. Jones O.P., Marks T.R., Waller B.J. Propagation in vitro

402. Reports of East Mailing Research Station for 1981.-1982.- 159 p.

403. Jones O.P., Pontikis C.A., Hopgood M.E. Shoot and root development in vitro // Rep. East Mailing Res. Stn.- 1977.-P.176-178.

404. Jones O.P., Pontikis C.F., Hopgood M.E. Propagation in vitroof five apple scion cultivars // Jour, of Hortic. Science.- 1979.- V. 54. N 2.- P. 155-158.

405. Jones O.P., Waller B.J., Beech M.G. The production of strawberry plants from callus cultures // Plant Cell Tissue Organ Cult. 1988.- V. 12,- N 3.- P. 235-241.

406. Kao K.N. Chromosomal behavior in somatic hybrids of soybean

407. Nicotiana glauca) // Mol.Gen.Genet.- 1977.- V.150.-P. 225-230.

408. Kartha K.K., Gamborg O.L., ConstabelF., Shyluk J.P. Regeneration of cassava plants from apical meristems // Plant Science Letters.- 1974.- V.2.- N 2.-P.107-113.

409. Kassanis B. The use tissue culture to produce virus-freeclones from Infected potato varieties.

410. Ann. appl. Biol.- 1957.- V.45.- N 3,- P. 422-427.

411. Kassanls B., Varma A. The production of virus-free clones ofsome British potato varieties // Ann.appl.Biol.-1967,- V. 59. N 3,- P. 447-450.

412. Katkade P.G., Wetherbee P. Light naphtaleneacetic acid interaction on morphogenesis in asparagus tissue culture // Z.Pflanzenphysiol.- 1983.- V.110,- N 3.- P.281-284.

413. Kaul V., Miller R.M., Hutchinson J.F., Richards D. Shoot regeneration from stem and leaf explants of Dendranthema grandiflora Tzvelev (syn. Chrysanthemum morifolium Ramat) // Plant Cell Tissue Organ Cult. 1990.- V. 21.-N 1.- P. 21-30.

414. KeS., Skirvin R.H., McPheeters K.D., Otterbacher A.G., Galletta G. In vitro germination and growth of Rubus seeds and embrios// Hort.Science.-1985.- V.20.- P.1047-1049

415. Keller W.A., Armstrong K.C. High frequency production of microspore-derived plants from Brassica napus anther cultures // Z. Pf lanzenzuechtg. 1978.- B. 20,- S. 100-108.

416. Kender W., Corpenter S. Stimulation of lateral bud growth ofapple trees by 6-benzylaminopurine // J.Amer.Soc. Hort. Sci. 1972,- V. 97,- N 3.- P. 377-380.

417. Kerns H.R., Meger M.M. Tissue culture propagation of Acer x

418. Freemanii using thidiazuron to stimate shoot tip proliferation //Hort Science.- 1986,- V. 21.- P. 1209-1210.

419. Knudson L. Nonsymbiotic germination of orcchid seeds

420. Bot.Gaz.- 1922,- V. 73. N 1.- P. 1-25.

421. Kodandaramaiach J., Venkataramaiach C., Rao P.G., Rao K.N.

422. Effect of B group vitamins on the endogenous cytokinin levels of cluster bean (Cyamopsis tetragonoloba) // Proc. Nat. Acad. Sci. (India).- 1984,- V. 54.- N 2.-P.95-98.

423. Kohlenbach H.W. Comparative Somatic embryogenesis // Frontiers of plant tissue culture / Proc.4th Inter. Cong. Plant Tissue, Cell Culture.-Calgary, • 1978,- P.59-66.

424. Kumar S., Tayal M.S. Effect of phenols and gibberellic acidon the germination and seedling growth of some legumes //J.Indian Bot.Soc.- 1982,- V.61.- N 2-3,- P. 125-128.- зоб

425. Lane W.D. Regeneration of apple plants from shoots meristemtips //Plant Science Letters.- 1978.- V. 13.- P. 281-285.

426. Lane W.D. Regeneration of pear plants from shoot meristem-tips

427. Plant Sc. Letters.- 1979,- V. 16.- N 2/3.- P. 337-342.

428. Larson R.A. The antioxidation of higher plants //Phytochemistry. 1988.- V. 27. - N 4.- P. 969-978.

429. Lee Y.B., Kim Y.R. Shoot formation in tissue culture of petiole and leafe blade segments of strawberry // Stud. Inst. Hortic. Kyoto Univ., 1979.-V. 9. P. 78-82.

430. Lemaitre R. Rapport annuel.// Centre d'etudes pour la recuperation des energies residuelles /Gembloux.- 1979.-P. 52-56.

431. Letouze R., Beauchesne G. Action d'eclairements monochromatiques sur la rhizogenese de tissue Topinambour // C.R.Acad. Sci./Paris.- 1969,- V.269.- P. 1528-1531.

432. Letham D.S. Regulators of cell division in plant tissues.

433. A comprasion of hte activities of zeatin and other cytokinins in vitro bioasseys // Planta.-1967.- V. 74. N 3.- P. 288-242.

434. Logemann J., Jach G., Logemann S., Leach R., Wolf G.,

435. Mundy J., Oppencheim A., Chet I., Schell J. Expression of ribosome inhibiting protein (RIP) or a bacterial chitinase leads to fungal resistance in transgenic plants // Cell Biochem.- 1992.- Suppl. 16 F.- P.217.

436. Lundergan C.A., Janick I. Regulation of apple shoot proliferation and growth in vitro // Hort.Res.- 1980.-V. 20. N 1.- P. 19-24.

437. Lyrene P.M., Perry J.L. Blueberries (Vaccinium spp.) // Biotechnology in Agriculture and Forestry 6. Crops II /Ed.Y.P.S.BajaJ. Springer-Verlag.- Berlin, Heidelberg, New York, 1988.- V.6.- P. 181-198.

438. Maggs D.H. Genetic resources in pistache // Plant Genetic

439. Resourses/ Newsletter.- 1973,- V.29.- P. 7-15.

440. Maia E., Betachini В., Beck D., Marais A. Regeneration de

441. Renocules par culture d'apex in vitro // Ann. Phy-topathol. 1973.- V. 5. - N 2,- P. 125-129.

442. Marani F. La colture dei meristemi apicali nel risanato delgarofuno delle virosi // L'Italia agricola. -1968.- V. 105.- N 2.- P. 167-172.

443. Martin-Tanguy J., Cabanne F., Perdizet E., Martin C. The distribution of hydroxycinnamic acidamides in flowering plants // Phytochemistry. 1978.- V.17.- P.1927-1928.

444. Martinez J., Roessel J.Z., Hugard J., Jonard R. L'utilisationdu micrograffage in vitro pour 1'etude des greffes incompatibles // C.R. Acad. Sci.- 1981.- ser. D. -V. 292. N 16.- P. 961-964.

445. Matsumoto H., Abe S., Takeda J. Changes of polysomes incucumber plant due to Ca deficiency // Plant and Cell Phys.- 1987.- V.28.- N6.- P. 1153-1157.

446. Mc Grew J.R. Eradication of latent C virus in the Suvanncevariety of strawberry by heat plus excised runner tip cultire // Phytopathology.- 1965.- V.55.- P. 480-481.

447. McNamara D.G. Aphelenchoides in strawberries // East Mailing

448. Research Station Report for 1985,- 1985.- P.122.

449. McNicol R.J., Gracham J. In vitro regeneration of Rubus fromleaf and stem segments // Plant Cell Tissue Organ Cult. 1990.- V. 21. - Ml. - P. 45-50.

450. Melchers G., Labib G. Somatic hybridization of plants byfusion of protoplasts. 1.Selection light-resistant hybrids of "Haploid" light-sensitive varieties of tobacco // Mol. Gen. Genet.- 1974.- V. 135,- P. 277-294.

451. Mellor F.C., Stace-Smidth R. Virus-free potatoes by tissueculture // Applied and fundamental aspects of plant cell, tissue and organ cultures /Ed. J.Reinert, Y.P.S.Bajaj.- Springer, Berlin, Hedelberg, New-York, 1977.- P. 616-635.

452. Mengel K., Geurtran G. Relationship between iron chlorosis andalkalinity in Zea mays // Physiol. Plant. 1988,- V. 72.1. N 3,- P. 460-465.

453. Merkle S. Erdbeervermehrung durch Meristemkultur.Erfahrungenaus der Praxis // Obstbau. ( Bonn),-1981. Jg. 6.- H.3.-S.95-96.

454. Miah M.A., Earle E.D., Khush G.S. Inheritance of callus formation ability in ather cultures of rice (Orisa sativa L.) // Theor. and Appl. Genet.- 1985.- V.70.- N2,1. P.113-116.

455. Misic P.D., Vinterhalter D.V., Todorovic R.R. Embryo cultureof early cultivars of european plum (Prunus domestica L. ) // Jugoslovensko vocarstvo.- 1980.- V. 1-2.- 14.-51/52.- S. 66-67.

456. Molot P.M., Leroux J.P., Nourlsseau J.G. Regeneration par culture d'apex de clones de fraisiers infectes de façon chronique par le Phytophtora cactorum // C.R. 3e Congres Un. Phytopathi Mediter. Lisbonne, 1972.-P.87-92.

457. Molot P.M., Nourisseau J.G., Leroux J.P., Navatel J.C.,

458. Cermain P. Le Phytophtora cactorum sur frasier connaissances actuelles. Misse an point des methodes de lutte // CIIFL-DOC. 1973.- V.40.- P. 1-12.

459. Moore M.B. Early development of ponderose pine (Pinus ponderosa Laws) embryos on a defined culture medium // Silvae Genet.- 1976.- Bd. 25.- H. 1.- S. 23-25.

460. Morel G.M. La culture in vitro du meristeme apical de certaines Orchidees // C.r. Acad.Sci.- 1963,- V. 256.-N 23.- P. 4955-4957.

461. Morel G.M. Tissue culture a new means of clonal propagationof orchids // Am.Orchid Soc.Bull.- June 1964.-P.473-478.

462. Morel G. Morphogenesis of stem apical meristem cultivated invitro: application to clonal propagation // Phytomor-phology. 1972.- V. 22. - N 3-4.- P. 265-277.

463. Morel G. Meristem culture techniques for the long storage ofcultivated plants // International biological programm 2: Crop genetic resources for today and tomorrow.-New York, 1975.- P. 327-333.

464. Morel G., Martin C. Querison de dahlia attents d'une maladie avirus // C.R. Acad.Sci.- 1952.- V.235.- N 21.-P.1324-1325.

465. Morel G., Martin C., Muller J.F. La question des pommen deterre attelnyes de maladlesa virus // Annals de phy-siologia vegetale.- 1968.- V.10.- N 2.- P.113-139.

466. Morlnl S. Indaginl prellminarl sulla micropropagazione delmelo // Tecniche dicolture "In vitro" per la propaga-zlone su vasta scala delle specie ortoflorofrutticole / Ed.E.Bellini.- Italia., Plstoia, 1979,- P.135-146.

467. Moritsugu M., Kawasaki T. Effect of calcium on the absorptionand translocation of heavy metals in excised barley roots // Plant and Soil.- 1987.- V. 100,- N 1-3.-P.21-34.

468. Mullin P.H., Schlegel D.E. Cold storage maintainance of strawberry meristem plantlets // Hort.Science. 1976.-V.11.- N 2.- P.100-101.

469. Munoz C.E., Lyrene P.M. In vitro attempts to overcome thecrossincompatibility between Vaccinium corymbosum L. and V.elliottii // Theor.and Appl. Genet.- 1985.-V. 69. N 5-6.- P. 591-596.

470. Murashige T. Plant propagation through tissue cultures // Ann.

471. Rev. Plant Physiol.- 1974,- V.25.- P. 135-166.

472. Murashige T. Clonal crops through tissue culture //Plant Tissue Cult, and Its Biotechnol.Appl., Berlin., etc.: Spring. Verl., 1977.- P. 395-403.

473. Murashlge T., Nakano R. Chromosome complement as a determinant of the morphogenlc potential of tobacco cells // Am. J. Botany.- 1967.- V.54.- P. 963-970.

474. Murashlge T., Skoog F. A revised medium for rapid growth andbioassays with tobacco tissue cultures // Physiol. Plant. 1962.- V. 15.- N 3.- P. 473-497.

475. Murashlge T., Shabde M.N., Hasegawa P.M., Tacatorl F.H.,

476. Jones J.B. Propagation of Asparagus through shoot apex culture. I.Nutrient medium for formation of plantlets //J. Am.Soc.Hortlc.Sc.-1972,- V.97.- N 2.- P. 158-161.

477. Nakamura A., Yamada T.', Kadotanl N. Itagaki R., Oka M. Studies on the gaploid method of breeding in tobacco // SABRAO J.- 1974,- V.6.- P. 107-131.

478. Navarro L., Roistacher C.N., Murashige T. Improvement of shoottip grafting in vitro for virus-free citrus // J.Amer. Soc.Hort. Sci.- 1975.- V. 100.- N 5.- P. 471-479.

479. Nelson R., McCormik S., Dellannay X. Virus tolerants, plantgrowth and field performance of transgenic tomato plants expressing coat protein from tobacco mosaic virus // Bio Technol. 1988.- V.6.- P. 403-409.

480. Nemeth G. Induction of rooting // Biotechnology in Agriculture and forestry 1. Trees 1. Ed. Y.P.S.Bajaj. Springer-Verlag.- Berlin, Heidelberg, 1986.- P.49-64.

481. Nesticky M., NavacF.J., Dolezelova M., Piovarci A. Vplyvkultivachych podmienik na rast izolovacenich embryi kukurice // Genet. Slecht. 1983,- R. 19.- C.2.-S.127-134.

482. Niemerowicz-Szczytt K., Mulepszy S. Micropropagation from themeristems and young leaves of Fragaria // Bull.Pol. Acad. Sci. Biol. Sci.- 1980.- CI. 2.- V.28.- N 5.-P.335-340.

483. Niemirowicz-Szczytt K., Zakrzewska Z. Fragaria x ananassaanther culture // Bull. Pol. Acad. Sci. 1980,- CI. 2,-V. 28. - N 5.- P. 341-347.

484. Niemerowicz-Szczytt K., Ciupka B., Malepszy S. Polyploids from

485. Fragaria vesca L. meristems, induced by colchycine in the in vitro culture // Bull.Pol. Acad.Sci.- 1984.1. V. 32. P. 57-63.

486. Nienwkirk K., van Fordham J., Zimmerman R.H. Thidiazuron stimulation of apple shoot proliferation in vitro // Hortscience.- 1987.- V.21.- P. 516-518.

487. Nishi S., Oosava K. Mass production method of virus-freestrawberry plants through meristem callus // J. Agric. Res. Quart. 1973.- V.7.- P. 189-194.

488. Nitsch C. La culture de pollen isole sur milieu synthetique

489. Cr. Acad. Sei. Paris.- 1974.- V.278.- P. 1031-1034.

490. Nitch J.P., Nitch C. Auxin-development growth of excised Helianthus tuberosus // Amer. J. Bot.- 1956.- V. 43. -P.839-851.

491. Nitsch C., Norrell B. Effect d'un choc thermique sur le pouvoir embruogene du polIon de Datura innoxia culture dans l'anthere on isole de l'anthere // Cr.Acad. Sei. Paris.- 1973.- V. 276. - P. 303-306.

492. Ockendon D.J. The ploidy of plants obtained from anther culture of cauliflowers (Brassica oleraceae) Var. botrytis // Ann. Appl. Biol. 1988.- V. 113.- P. 319-325.

493. Oosawa K.,Takayanagi K. High yielding variants in strawberryderived from anther culture // Plant Tissue Culture. /Ed.Fujiwara A.: Tokyo, 1982.- P.765-766.

494. Oertel C. Virus-frien Erdbeerpflanzen durch Wärmebehandlung,

495. Meristemkultur und in vitro-Vermehrung in der Erhaltungszuchtung // Gartenbau.- Berlin., 1984.-J.31.- H. 1.- S. 15-16.

496. Paludan N. Klorotisk Spaething og Dvaergsyge hos Chrysanthemum1.flektionsfors og termoterapi og Meristem Kultur // Tidsskrift for Planteavl. 1974.- V.78.- P. 85-90.

497. Paterson K.E. Polarity regeneration in excised leaves of Crassula argentea II. Auxin transport inhibitors and auxin-cytokinin interaction // Can.J. of Botany.-1983.- V.61.- N 4.- P. 1064-1074.

498. Pena-Iglesias A., Ayuso P. Meristem-tip culture of garlic:

499. Elimination of viruses from infected bulbs and rapid multiplication of virus-free clones // Proc.XIX Int. Hortic. Congr. 1974,- V. la. - P. 62.

500. Pennazio S. Effect of adenine and kinetin on development ofcarnation meristem tips cultured in vitro // J. Hort. Sc.- 1975.- V. 50. N2.- P. 161-164.

501. Pennazio S. Terapia di virosi del garofano // Colt. Prot.1976.- An. 5.- N. 12.- P. 51-53.

502. Pennel D. Micropropagation the pros and cons // Grower.1987 a.- V. 95. N 17.- P. 58-59.

503. Pennel D. Strawberry micropropagation within the U.K. // Commision of European Communities Biological Sciences in vitro culture of strawberry plants / EUR 10871 EN-FR. Ed. by P. Boxus and P.Larvor.- 1987 b. P. 27-34.

504. Phillips D.J., Mattews G.J. Growth and development of carnation shoot tips in vitro // Bot.Gaz.- 1964,- V. 125.-N 1,- P. 7-12.

505. Pieniazek J. The growth in vitro of isolation apple-shoot tipsfrom young seedlings on media containing growth regulators // Bulletin de .L'Academie Polonaise des Sciences / Seria des sciences biologiques.- 1968,- V.16.-N 3.- P. 179-183.

506. Pieniazek J., Jankiewicz L.S. Development of collateral budsdue to benzylaminopurine in dormant apple shoots // Bulletin de L'Academie polonaise des science /Seric des sciences biologiques.- 1966.- V.14.- N 3.-P.185-187.

507. Pillai S.K., Hildebrandt A.C. In vitro differentiation of geranium (Pelargonium Hortorum Bailey) plants from apical meristems // Phyton.- 1968.- V.25.- N 2,- P. 81-87.

508. Populer C. Old apple and pear cultivars in Belgium //Plant

509. Genetic Resources Newsletter.- 1955.- V.40.- P.6-7.

510. Powell L.E., Edgerton L.J. Apple bud explantants as a screening test for growth regulating chemicals // Hort Science.- 1974.- V.9.- N 3.- Sec. I. P. 191-192.

511. Powell A.P., Nelson R., De B. Delay of diasease development intransgenic plants that express the tobacco mosaic virus coat protein gene // Science.- 1986.- V. 232.-P.738-743.

512. Predieri S., Malavasi F.F.F. High frequency shoot regeneration from leaves of apple rootstock M26 // Plant Cell Tissue Cult.- 1989.- V. 17.- N 2,- P. 132-143.

513. Predieri S., Malavasi F.F.F., Passey A.J. Regeneration from invitro leaves of "Conference" and other pear cultivars // J. Hortic. Sci.- 1989.- V. 64. N 5.- P. 553-559.

514. Pua Eng-Chong, Chong Calvin. Regulation of in vitro shoot androot regeneration in Maspur apple by sorbitol (D-glu-citol) and related carbon sources // J.Amer. Soc.Hort. Sci. 1985.- V. 110,- N 5.- P. 705-709.

515. Pua Eng-Chong, Radolsky E., Phorpe T.A. Retention of shoot regeneration capacity of tobacco callus by Na SO // Plant Cell Reports.- 1985.- V.4.- N 5.- P. 255-228.

516. Pundeva P.S., Zagorska N. A. Using the method of tissue cultures for overcoming interspecific incompatibility and hibrid sterility in genus Capsicum // Dokl. Bui.AN.-1984.- V. 37. N 7.- P. 939-942.

517. Putz C. Obtention de framboisiers (Var. Bois blancs) sans viru;spar la technique des cultures de meristemes // Ann. Phytopathol. 1971.- V.3.- N 4.- P. 493-501.

518. Pyott J.L., Converse R.H. In vitro propagation of heat-treatedred raspberry clones // Hort Science.- 1981,- V. 16. -P.308-309.

519. Ramaiach J.K., Reddy K.B., Kumar P.J. Uptake of major elementsinfluenced by B-vitamins in green gram (Vigna radiata L.) // Proc.Nat. Acad.Sci. (India).- 1989,- V.57.- N 3.-P.303-308.

520. Reinert J., Bajaj Y.P.S., Heberle E. Induction of haploid tobacco plants from isolated pollen // Protoplasma.-1975,- V.84.- P.191-196.

521. Roberts-Ochlschlager S.L., Dunwell J.M. Barley anther culture: pretreatment on mannitol stimulates production of microspore-derived embryos // Plant Cell Tissue Organ Cult.- 1990,- V. 20. N 3,- P. 235-240.

522. Rosati P., Gaggioli D., Giunchi L. Genetic stability of micropropagated loganberry plants // J. of Hort. Sci.-1986.- V.61.- N 1.- P. 33-41.

523. Rosati P., Marino G., Swierczewski C. In vitro propagation of

524. Japanese plum (Prunus salicina Lindl cv.Calita) //J. Am. Soc. Hortic. Sci.- 1980.- V. 105.- P. 126-129.

525. Rubluo A., Kartha K.K. In vitro culture of shoot apical meristems of various Phaseolus species an cultivars // J. Plant Physiol. 1985,- V. 119,- N 5,- P. 425-434.

526. Sachs T., Thimann K.V. Release of lateral buds from apical dominance // Nature. 1964,- V. 201.- N 4922,- P. 939-940.

527. Salonen M.L. Influence of ammonium and nitrate nutrition onlevels of ammonium nitrate and total nitrogen in callus of Atropa belladonna (Solanaceae) // Annals Bota-nici Tenneci.- 1984.- V.24.- N 4,- P. 364-381.

528. Saltveit M.E., Fonteno W.C. Auxin transport in Dracena marginata stems // J.of the Amer. Soc. for Hort.Sci.-1983,- V. 108.- N 2.- P. 183-186.

529. Sarvar M. The effect of different media and culture techniqueson planting efficiency of strawberry mesophyll cells in culture // Physiol. Plant. „-1984. V.760.- N 1.-P.57-60.

530. Schaeffer G.W., Baenzier P.S. Anther culture and pollen plantregeneration in wheat (Triticum aestivum L.em.Thell) // Plant tissue culture / Ed.Fujiwara A.: 1982.-P. 553-556.

531. Schaffer D.W., Damiano C., Scott D.H., McGrew J.R., Krul W. R.,

532. Reinhard E.: Munich.- 1978 a. P. 330-336.

533. Schieder 0. Somatic hybrids of Datura innoxia Mill, x discolor

534. Bernh. and of D.innoxia x D. stramonium L.var.Totula L. // Mol. Gen. Genet.- 1978 b.- V. 162.- P. 113-119.

535. Seibert M., Wetherbee P. J., Job D.D. The effect of light intensity and spectralguality on growth and shoot initiation in tobacco callus // Plant Physiol. 1975.-V.56.- P.130-139.

536. Shinkle J.R., Jones R.L. Inhibition of stem elongation in cucumis seedlings by blue light requires calcium // Plant Physiol. 1988.- V.86.- N 3,- P. 960-966.

537. Shu-Chin Huang, Millikan D.F. In vitro micropropagating of apple shoot tips //J. Hort. Sci.- 1982.- V. 15. P. 741-743.

538. Singh C.B., Mirsa R.K., Gour V.K. In vitro culture of wheat,triticale and rice embryos // Indian J. Genet. Plant Breedg. 1976,- V.36.- N 3,- P. 367-370.

539. Singh R.P., Singh B.D., Singh R.B. Effect of buffer and pH ongrowth and protein content of carrot(Daucus carota L.) in liquid shake culture // Proc. Indian Acad. Sci. Plant Sci. 1981,- V. 90. - N 3,- P. 183-188.

540. Skirvin R.M., ChuM.C., Mann L.L., Joung H., Sullian J., Fermanian T. Stability of tissue culture medium pH as a function of autoclaving, time and cultured plant material // Plant Cell Reports.- 1986,- N 5.-P.292-294.

541. Skoog F. Cytokinins in regulation of plant growth // Genes,

542. Enzymes and Populations / Basic Life Sciences. V.2. Plenum Pres. New-York-London.- 1973.- P.147-184.

543. Skoog F., Miller C.O. Chemical regulation of growth and organformation in plant tissues cultured in vitro // Symp. Soc. Exp. Biol.- 1957,- V. 11,- P. 118-130.

544. Smirnoff N., Stewart G.R. Nitrogen assimilation and Zinc toxity to zinc-tolerant and nontolerant clons of Descham-psia caespitosa (L.) // New Phytol.- 1987,- V. 107.1. N 4.- P. 671-680.

545. Smith R.H. Murashlge T. In vitro development of the Isolatedshoot apical meristem of angiosperms // Amer.J.Bot.-1970.- V. 57. N 5.- P. 562-568.

546. Smith A.R., Van Staden J. Cytokinins in excised embryos and endosperm of Zea mays L. growth under aseptic conditions // Z. Pflanzenphysiol. 1976.- Bd.93.- H.2.- S. 95-103.

547. Snir I. A micropropagation system for sour cherry // Sci.

548. Hortic.- 1983.- V. 19.- N 1.- P. 85-90.

549. Snir I. Red raspberry (Rubus idaeus) // Biotechnology in Agriculture and Forestry 6. Crops II (Ed. Y. P. S. BaJaJ). -1988.- V. 6. P. 124-141.

550. Sobczykiewicz D. Preliminary note on mass production ofraspberry plants through placing unrooted plantlets obtained from meristem cultures directly in the soil // Fruit Science Reports. 1980.- V.7.- N 1.- P. 1-2.

551. Sobczykiewicz D. Mass production of raspberry by meristemculture // Acta Horticulturae.- 1987.- V.2.- N 212.-P.607-609.

552. Sriskandarajan S., Mullins M.G., Nair Y. Induction of adventitious rooting in vitro in difficult-to-propagate caltivars of apple //'Plant Science Letters.- 1982.-V. 24. N 1.- P. 1-9.

553. Stafford A., Davies D.R. The culture of immature pea embruos

554. Ann. Bot.- 1979.- V. 44. N 3.- P. 315-321.

555. Standardi A. La "micropropagazione nella moltiplicazione dell'

556. Actinidia // Riv.frutticolt. e ortofloricolt.- 1983.-V. 45. N 2.- P. 17-22.

557. Staniland L.N. Hot water treatment of strawberry runners

558. Plant Path.- 1953.- V.2.- N 1.- P. 44-48.

559. Steward F.D., Bidwell R.G.S., Jemm E.W. Nitrogen metabolism,respiration and growth // J. Exp. Bot.- 1958,- V.9.-P. 11-42.

560. Stolz L.P. Growth regulator effects on growth and developmentof exised mature iris embryos in vitro // Hort.Science. 1977,- V. 12.- N 5.- P. 495-497.

561. Stone O.M. Factors affecting the growth of carnation shootapices // Ann. appl. Biol. 1963.- V.52.- N 2.1. P.199-207.

562. Stone O.M. The elimination of four viruses from carnation andsweet William by meristem-tip culture // Ann. appl. Biol.- 1968,- V.62.- P.119-122.

563. Stontemger V.T., Britt O.K. The behaviour of tissue cultureof English and Algeriani ivy in different growth phases // Am. J.Bot.- 1965,- V.52.- P.805-810.

564. Sunderland N., Dunwell J.M. Anther and pollen culture // Planttissue and cell cultire / Ed. by Street H.E.: Oxford, Blackwell,- 1977,- P.223-265.

565. Sutter E., Langhaus R.W. Formation of epicuticular wax and effect on water loss in cabbage plants regenerated from shoot-tip culture // Can. J. Bot. 1982,- V.60.-P.2896-2902.

566. Svobodova J. Elimination of viruses by means of callus tissueculture // Proc.Intern.Cong.Plant Viruses.- Wagenin-gen, 1966,- P. 48-53.

567. Swartz H.G., Galetta G.J., Zimmerman R.H. Field performanceand phenotypic stability of tissue culture-propagated strawberris // J.Am.Soc.Hort. Sci.- 1981,- V.106.-P. 667-675.

568. Sykes J.T. Tree crops // Crop Genetic Resources for Today and

569. Tomorrow / Ed.0.N. Frankel and J.G.Hawkes.- University Press, Cambridge., 1975.- P.123-137.

570. Szakacs E., Kovacs G., Pauk J., Barnabas B. Substitution analysis of callus induction and plant regeneration from anther culture in wheat (Triticum aestivum L.) // Plant Cell Reports.- 1988.- V.7.- P. 127-129.

571. Theiler R. Einsatz der Gewebekultur zur Anzucht pathogenfreier

572. Pflanzen; Möglichkeiten und Probleme ihrer Anwendung // Erwerbsobstbau. 1980.- Jg. 22,- S. 226-231.

573. Thomas V., Mehta A.R. Effect of phlorogluciol on shoot growthand initiation of roots in carob tree cultures grown1. vitro //Plant Cell Cult. / Crop improvement: Plenum Press.- 1983.- P.451-457.

574. Titel C., Ehwald R., Zoglauer K., Hellming A. A parenchymaticmedium solidifier for plant in vitro culture // Plant Cell Reports.- 1987.- V.6.- P. 473-475.

575. Trikoli D.D., Carney K.J., Quemada H., Russel P.F.,

576. Russel McM.J., Boeshore M.L., Groff D.W., Hadden K., Hubbard J.P. Transgenic squash plants exibit coat protein mediated protection under field condition // J. Cell Biochem. 1992.- Suppl.l6F.- P. 222.

577. Tukey H.B. Artificial culture methods for isolated embryos ofdecidious fruits // Proc.Amer.Soc.Hort.Sci.- 1934.-V.32.- P.313-322.

578. Tulecke W.R. A tissue derived from the pollen of Ginkgo biloba

579. Science. 1953.- V. 117.- P. 599-600.

580. Turner N.O., Connel K., Nelson R. Expression of alfalfa mosaicvirus coat protein gene confers crossprotection in transgenic tobacco and tomato plants // EMBO J.- 1987.1. V.328.- P.33-37.

581. Vaeck M., Peynaerts A., Hofte H. Transgenic plants protectionfrom insect attack // Nature.- 1987,- V.328.- P.33-37.

582. Vagera J., Hanackowa H. Embryo kultura soje-technika kultivace a moznisti vyuziti // Rostl. Vyroba.- 1979.- R. 25.-C.4.- S. 349-360.

583. Van Os H. Production of virus-free carnation by means ofmeristem culture // Neth.J.Plant Path.- 1964,- V.70.-P. 18-26.

584. Vasil I.K., Vasil V. Clonal propagation // Intern.Rev.of Cytol.

585. Suppl.11 A: Perspectives in Plant Cell and Tissue Culture N. I.:Acad.press.- 1980,- P.145-173.

586. Vertesy J. Experiments on the propagation of virus-freeraspberry propagation material by merystem culture // Acta Hortic.- 1979.- V. 95. P. 77-78.

587. Vine S.J. Improved culture of apical tissues for production ofvirus-free strawberries // J. Hortic. Sci. 1968.- V.43.~1. N 3,- P. 293-297.

588. Vine S.J., Jones O.P. The culture of shoot tips of hop (Humulus lupulus L.) to eliminate viruses // J.Hort.Sci.-1969.- V. 44.- N 3.- P. 281-284.

589. Vysotskyi V.A. Clonal micropropagation of some pear rootstocks

590. Abstr.VII th International Congress on Plant Tissue and Cell Culture.- Amsterdam., 24-25 June 1990.-Netherlands; 1990.- P. 140.

591. Vojiatzi C., Voyiatzis D.G., Tsiakmaki V. In vitro shoot proliferation rates of the rose cv.(hybrid tea) "Dr.Ver-hage", as affected by apical dominance regulating substances // Scientia Horticulturae.- 1995.- V.61.-N 3-4.- P. 241-250.

592. Wainwright H., Flegmann A.W. The micropropagation of gooseberry (Ribes uva-crispa L.) II.In vitro propagation and in vivo establishment // Journal of Horticultural Science.- 1985.- V.60.- N4.- P.485-491.

593. Walkey D.G.A. The production of virus-free rhubarb by apicaltip-culture // The Journal of Horticultural Science.-1968.- V. 43. N 3,- P. 283-287.

594. Walkey D.G.A. Production of apple plantlets from axillary butmeristems // Canad. J. Plant Sci.- 1972.- V.52.- N 6.-P.1085-1086.

595. Walkey D.G.A., Cooper V.C., Crisp P. The production of virusfree cauliflowers by tissue culture // J.Hortic.Sci.-1974.- V. 49. N 3.- P. 273-275.

596. Walkey D.G.A., Fitzpatrick J., Woolefit J.M.J. The inactivation of virus in cultured shoot tips of Nicotiana rusti-ca L. // J. Gen. Virol.- 1969,- V.5.- P. 237-241.

597. Wanas W.H., Collow J.A., Lindsey A.W. Growth limitation forthe conservation on Pea genotypes // Plant Tissue Culture and its Agricultural applications / Butter-worths. , London, 1986.- P.285-290.

598. Wareing P.F. Phase change and vegetative propagation // Improving vegetatively propagated crops.- Academic Press Limited.- 1987.- P.263-270.

599. Webster С.A., Jones O.P. Micropropagation of the apple rootstock M.9: effect of sustained subculture on apparent refuvenation in vitro // J.Hort.Sei. 1989.- V.64.~ N 4.- P. 421-428.

600. Wehrsuhn G., Fritze G. Fragen.fur Nahrmedium in der Pflanzeichen in vitro Kultur // Humbold-Universitat zu Berlin.

601. Pat. N 2635700, DDR. с 30.05.1984 / МКИ С. 12 N 5/00, опубл. 31.07.1985.

602. Weil В. Virus-free Hortensien durch Meristemkultur // Gartenwelt.- 1977.- V. 77,- N 5.- P. 109-110.

603. Welander M. In vitro culture of rapsberry (Rubus idaeus) formass propagation // J.Hortic.Sei.-1985.- V.60.- N 4,-P.493-499.

604. Wenzel G. Anther culture and its role in plant breeding //Proc.

605. Symp.Plant, tissue culture "Genetic manipulation and somatic hybridization of plant cells. Eds. Rao P.S., HebleM.R., Chadha M.S.: Bombay,- 1980.- P. 68-78.

606. Wethereil D.F. Introduction to in vitro propagation // Avery

607. Publishing Group Inc., Wayre.- New Jersey.- 1982.-88 p.

608. Wetzstein H.Y., Sommer H.E. Leaf anatomy of tissue cultured1.quidambar stgraciflua (Hamamelidaceae) during acclimatization // Am. J. Bot. 1982.- V.69.- P. 1579-1586.

609. White Ph.R. Influence of some enviroment conditions on thegrowth of excised root tips of wheat seedlings in liquid media// Plant Physiol.- 1932.- V.4.- P.613-628.

610. White P.R. Controlled differentiation in a plant tissue

611. Bull Torrey Bot.Club.- 1939.- V.66.- P.507-513.

612. White Ph. A handbook of plant tissue culture // Cattel, Lancaster Press.- 1943.- V. 4. P. 791-794.

613. Wilkins C.P., Dodds J.H. Tissue culture conversation of woodyspecies / Tissue culture of trees. Ed. J.H.Dodds. Croom Helm, London, Canberra, 1983.- P.113-136.

614. Wills A.B. June yellows of strawberry // Virus deseases ofsmall fruits and grapevines / Ed. N.W.Frazier.Univ. of California., Division of Agricultural Sciences ., Berkeley, 1970.- P. 55-56.

615. Withers L.A. Institutes Working on Tissue Culture for Genetic

616. Conversation IBPGR Secretiat. Rome, 1982.- 36 p.

617. Zatyko J.M., Simon I. In vitro culture of ovaries of Rubusspecies // Acta Agronom.Acad.Scient Hung.- 1975.-V. 24. N 3-4.- P. 277-281.

618. Zillis M.R., Meyer M.M. Rapid in vitro germination of immaturedormant embryos // Comb.Proc.(Internat. Plant Propagators. Soc. Mill, town) . 1976,- V. 26.- P. 272-275.

619. Zimmerman R.H., Broome O.C. Phloroglucinol and in vitro rooting of apple cuttings // J. Am. Soc. Hort. Sci. 1981.-V. 106.- P. 648-652.

620. Zimmerman R.H., Fordham I. Simplified method for rooting applecultivars in vitro // J.Amer.Soc.Hort.Sci.- 1985.-V. 110.- N 1.- P. 34-38.

621. Zimmerman R.H., Olivia B.C. In vitro propagation of apple cultivars // Hort Science.- 1979.- V. 14.- N 3.- P. 478.

622. Zhao H.X. Pear shoot tip culture in vitro // Acta Botanica

623. Sinica.- 1982.- V. 24. N4.- P. 392-394.

624. Zornosa I.» Carpena 0.» Nijera A., Penalosa I. Effect of lightintensity on NH+tolerance in tomato plants // Plant and Soil.- 1987.- V. 102.- N 1.- P. 93-97.

625. Yasawa S., Asahara T. Bulbil formation of Dioscorea oppositacultured in vitro // Met.Coll.Agr. Kyoto Univ.- 1979.-V. 113.- P. 39-53.

626. Yu Dan-Hua, Meredith C.P. The influence of expiant origin ontissue browning and shoot production in shoot tip cultures of grapevine // J.Amer.Soc.Hort. Sci.- 1986.-V. 11.- N 6.- P. 972-975.