Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биосинтез и метаболизм N-ацилдофаминов в тканях и клетках животных

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биосинтез и метаболизм N-ацилдофаминов в тканях и клетках животных"

Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. акад. М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН (ИБХ РАН)

БИОСИНТЕЗ И МЕТАБОЛИЗМ И-АЦИЛДОФАМИНОВ В ТКАНЯХ И КЛЕТКАХ ЖИВОТНЫХ

03.00.04 — Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата химических наук

На правах рукописи

Акимов Михаил Геннадьевич

Москва —2009

1 к ^

003469978

Работа выполнена в лаборатории оксилипинов Учреждения Российской академии наук института биоорганической химии им. акад. М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН (ИБХ РАН)

Научный руководитель: доктор химических наук, профессор Безуглов Владимир Виленович

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор Румш Лев Давидович доктор химических наук Сергеева Марина Глебовна

Ведущая организация:

Учреждение Российской академии наук Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН (ИБР РАН)

Защита состоится «20» мая 2009 года / часов на заседании специализированного совета Д 002.019.01 при УРАН институте биоорганической химии им. акад. М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН по адресу: ГСП-7, Москва В-437, ул. Миклухо-Маклая, д. 16/10.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке УРАН института биоорганической химии им. акад. М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН

Автореферат разослан «20» апреля 2009 г.

Ученый секретарь специализированного совета доктор физ-мат. наук

-Олейников В. А.

1 Общая характеристика работы

1.1 Актуальность проблемы

N-ацилдофамины (NADA) — это сравнительно новая группа сигнальных липидов широкого спектра действия, относящихся к семейству нейролипинов. Они представляют собой амиды дофамина и жирных кислот. На сегодняшний день NADA в виде дофаминамидов арахидоновой, пальмитиновой, олеиновой и стеариновой кислот были идентифицированы в головном и спинном мозге млекопитающих.

Являясь лигандами ванилоидного рецептора VR1 и каннаби-ноидного рецептора СВ1, рассматриваемая группа нейролипинов реализует большую часть своих функциональных возможностей в рамках каннабиноидно-ванилоидной системы. N-ацилдофамины вызывают сокращение бронхов и мочевого пузыря, модулируют синаптическую пластичность гиппокампа, повышают чувствительность животных к повышению температуры (гиперальгезия), стимулируют выброс вещества Р и пептида, родственного кальцитониновому пептиду (CGRP). Последние эффекты представляют особый интерес, поскольку они характерны для передачи болевых импульсов. Кроме того, N-ацилдофамины обладают каннабими-метическим и вазодилатирующим действием и взаимодействуют с рядом внутриклеточных мишеней: ингибируют каскад арахидоновой кислоты, вследствие чего происходит угнетение активации тромбоцитов, влияют на активность некоторых фосфатаз, что приводит к подавлению транскрипции генома некоторых вирусов, и оказывают иммуносупрессирующее действие.

Учитывая множественность эффектов NADA в живом организме, детальное понимание механизмов их биосинтеза и метаболизма представляет особый интерес, поскольку может дать контроль над одной из защитных сигнальных систем организма. Например, повышение содержания N-арахидоноилдофамина в клетках, зараженных вирусом HIV-1, будет эффективно подавлять экспрессию его генов, управление ванилоидной системой ноцицепторов — способ облегчения патологических и лечения хронических болей.

Знание путей метаболизма М-ацилдофаминов поможет выявить новые, ранее ускользавшие от исследователей способы регулирования системы нейротрансмиттеров и пути интеграции сигнальных систем живого организма.

На сегодняшний день продемонстрирована только принципиальная возможность образования 1Ч-арахидоноилдофамина из арахидоновой кислоты и дофамина или тирозина; детали этого процесса неизвестны. О катаболизме известно немного больше: установлена возможность низкоэффективного гидролиза некоторых молекул данной группы гидролазой амидов жирных кислот, показано метилирование >1-арахидоноилдофамина в гомогенате печени, обнаружено окисление некоторых нейролипинов циклооксигеназой. Таким образом, знания о процессах метаболизма М-ацилдофаминов остаются достаточно скудными и это явление нуждается в дополнительном изучении.

1.2 Цели исследования

Целью данной работы было установление путей биосинтеза и катаболизма М-ацилдофаминов в организме животных разных видов.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Изучить биосинтез М-ацилдофаминов в печени и органах нервной системы крысы, культурах клеток млекопитающих, а также в гомогена-тах пресноводной гидры.

2. Исследовать окислительные этапы биосинтеза М-ацилдофаминов в модельной системе.

3. Исследовать метилирование М-ацилдофаминов в печени и нервной системе крысы, а также в пресноводных гидрах.

4. Исследовать сульфатирование М-ацилдофаминов в печени и нервной системе крысы, а также в гомогенате пресноводных гидр.

5. Исследовать окислительный метаболизм катехольного ядра М-ацил-дофаминов в тканях крысы и модельных системах.

1.3 Научная новизна и практическая значимость

Автором было впервые показано, что процесс биосинтеза 1Ч-ацил-дофаминов протекает в организме крысы без участия кофермента А и стимулируется АТФ, причём наиболее эффективными предшественником данных веществ является комбинация свободной жирной кислоты с тирозином, а при биосинтезе с промежуточным образованием М-ацилтирозина стадия декарбоксилирования должна предшествовать стадии окисления. Несомненным приоритетом данного исследования является идентификация М-докозагексаеноилдофамина в тканях пресноводных гидр Н. аНеп-иа1а и Н. magnipapillaía и обнаружение биосинтеза ЪГ-ацилдофаминов в полном гомогенате этих организмов.

Автором были значительно уточнены имевшиеся ранее данные о метилировании И-ацилдофаминов в цитозольной фракции органов крысы. Впервые была исследована возможность метилирования Ы-ацилдофаминов в микросомальной фракции органов крысы и в полном гомогенате пресноводных гидр Н. аиепиШа и Н. magnipapillata.

В результате проведённого исследования впервые было продемонстрировано сульфатирование дофаминамидов арахидоновой, докоза-гексаеновой, олеиновой и стеариновой кислот, причём для превращения Ы-докозагексаеноилдофамина в головном мозге определены кинетические параметры процесса. Впервые было зафиксировано сульфатирование И-ацилдофаминов в полном гомогенате пресноводных гидр Н. аНетШа и Н. тсщтрарШма.

Приоритетными являются данные о взаимодействии Л-ацилдофаминов с окислительными системами митохондрий и плазма-леммы печени и органов нервной системы крысы. Впервые продемонстрирована способность ацилированных длинноцепочечными полиненасыщенными жирными кислотами л-этиламино-о-бензохинонов вступать в реакцию с 8Н-содержащими агентами с образованием ковалентных аддук-тов, в том числе с белками, что приводит к олигомеризации последних. Эти данные могут быть использованы для диагностики нейродегенеративных

заболеваний и, возможно, для создания новых терапевтических подходов при лечении этих заболеваний.

Настоящая работа призвана заполнить существующий пробел в области метаболизма эндованилоидов дофаминового ряда. В результате проведённых исследований становятся ясны основные пути превращений, которые претерпевают N-ацилдофамины, а также основные принципы их биосинтеза. Основываясь на полученных данных, возможно проведение дальнейших работ, направленных на установление регуляторов системы метаболизма этих веществ и точного позиционирования их в сигнальной сети целого организма.

Кроме того, полученные знания о метаболизме NADA могут в будущем послужить основой для создания лекарственных препаратов, направленных на коррекцию работы каннабиноидно-ванилоидной системы.

1.4 Апробация работы и публикации

Основные материалы диссертации были доложены и обсуждены на XVII и XIX зимних молодежных научных школах «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии» (Москва, ИБХ РАН, 2005 и 2007 гг.), на VIII чтениях, посвященных памяти академика Ю. А. Овчинникова (Москва, ИБХ РАН, 2006 г.), на II Российском симпозиуме по химии и биологии пептидов (Санкт-Петербург, 2005 г.), а также на Всероссийской конференции, посвященной 90-летию со дня рождения академика Т. М. Турпаева «Механизмы нервных и нейроэндокринных регуляций» (Президиум РАН, Москва, 2008 г.).

По теме диссертации опубликовано 4 работы в отечественных журналах.

1.5 Структура и объём работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, результатов и их обсуждения, выводов, списка литературы и одного приложения. Работа изложена на 175 страницах машинописного текста, содержит 38 рисунков и 11 таблиц. Библиографический указатель содержит 138 источников литературы.

2 Содержание работы1

Установлению механизмов метаболизма сигнальных молекул ва-нилоидного ряда каннабиноидно-ванилоидной системы предшествовал теоретический анализ возможных превращений в рамках метаболического пути N-арахидоноилдофамина (AA-DA). После построения теоретической метаболической карты мы приступили к экспериментальной проверке существования метаболических путей и установлению их базовых биохимических свойств (специфическая активность).

В качестве субстратов были выбраны производные следующих жирных кислот: арахидоновой (обнаружены in vivo, являются агонистами VR1, СВ1 и модулируют активность транскрипционных факторов), олеиновой (обнаружены in vivo и являются наиболее активными ванилоидами), стеариновой (обнаружены ш vivo, являются представителями класса насыщенных малоактивных молекул), докозагексаеновой (не обнаружены in vivo, высокоактивны в модельных экспериментах, кислота является незаменимой и выступает в роли предшественника оксигеназных высокоактивных продуктов).

В качестве объектов исследования были выбраны препараты следующих тканей:

• печень — ткань с наиболее богатым набором ферментов, обеспечивающая выведение и детоксификацию инородных и своих молекул;

• головной мозг — отдел нервной системы, где действие эндованилои-дов весьма выражено;

• спинной мозг с дорсальными корешками — важная часть нервной системы, где зафиксирован наибольший после головного мозга уровень N-арахидоноилдофамина.

1 Принятые сокращения: АА — арахидоновая кислота, DHA — докозагексаено-вая кислота, DHA-DA — N-докозагексаеноилдофамин, AA-DA — N-арахидоноилдофа-мин, NADA — N-ацилдофамины, AA-Tyr (AA-Y) — N-арахидоноилтирозин, DHA-Tyr — N-докозагексаеноилтирозин, DA — дофамин, ТНР — тетрагидробиоптерин, SАМ — S-аденозилметионин, РР — пиридоксаль фосфат, АА-ТА—N-арахидоноилтирамин, INT — иодонитротетразолиевый фиолетовый, AA-DAQ — N-арахидоноил-п-этиламино-о-бензохинон, IY — иодотирозин

Кроме того, для анализа биохимических процессов в живых системах были использованы клеточные линии феохромацитомы PC 12 и глиомы Сб. Первая обладает хорошо выраженными системами биосинтеза и метаболизма катехоламинов, а вторая имеет глиальное происхождение, хорошо откликается на действие эндованилоидов и в определённой степени моделирует нервную систему. Поскольку одним из наиболее примитивных организмов, где зафиксировано выраженное действие ацилдофаминов, является пресноводная гидра, были проведены работы и на полных гомоге-натах двух её видов: Н. attenuata и Н. magnipapillata.

2.1 Биосинтез N-ацилдофаминов

2.1.1 Биосинтез в системах in vitro

Наши исследования мы начали с проверки принципиальной возможности биосинтеза N-арахидоноилдофамина в полных гомогенатах печени, спинного и головного мозга крысы. Для этого тритий-меченую арахидо-новую кислоту инкубировали с тирозином или дофамином с добавлением кофакторов основного фермента биосинтеза катехоламинов тирозин гидроксилазы и без них. Мы зафиксировали образование NADA во всех изученных тканях, однако условия продуктивных реакций обладали определенной вариабельностью (Таблица 1).

Важно отметить, что при инкубации арахидоновой кислоты с тирозином как в присутствии кофакторов, так и без них, появление ожидаемого пика N-арахидоноилтирозина (АА-Туг) не наблюдается.

Мы предположили, что данный факт свидетельствует о том, что данное вещество чрезвычайно эффективно превращается в другие продукты.

Затем была проведена отдельная серия экспериментов по детальному изучению влияния различных кофакторов на эффективность биосинтеза (Рисунок 1). В качестве субстратов реакции использовали тритиймеченые арахидоновую кислоту в сочетание с тирозином и N-арахидоноилтирозин, продукты реакции анализировали методом высокоэффективной ТСХ (вэТСХ) со сцинтилляционным счётом. Оказалось, что добавление кофакторов тирозин гидроксилазы стимулирует образование AA-DA из обоих

Таблица 1 — Исследование метаболизма И-арахидоноилдофамина с использованием [3Н]-АА, [3Н]-АА-Туг, [3Н]-АА-ОА. Анализ проводили офВЭЖХ с детектированием радиоактивности. Условные обозначения: АА-ЗМеОА — 1Ч-арахидоноил-3-0-метил-дофамин; АА — арахидоновая кислота, БАМ — 8-аденозилметионин; КАОРН — никотинамиддинукле-отидфосфат, восстановленная форма; ТНР — тетрагидробиоптерин; нд — не тестировали. Количество внесённого радиоактивного субстрата (АА, АА-Туг, АА-ОА) - 46,7 пмоль, объём инкубации 200 мкл, 2 мг/мл белка

Продукт Условия эксперимента

реакции АА, АА, Туг, АА-Туг АА-Туг, АА, AA-DA AA-DA,

Туг ТНР, NADPH, Fe, Mg ТНР, NADPH, Fe DA SAM

печень (пмоль)

АА-Туг 0,0 0,0 0,0 0,6 0,0 0,0 нд

AA-DA 12,5 0,7 0,0 0,7 0,0 0,0

AA-3MeDA 0,9 4,6 0,8 0,0 0,0 0,0

АА 8,4 20,8 10,1 13,1 2,3 0,6

спинной мозг (пмоль)

АА-Туг 0,0 0,0 нд 1,80 0,0 нд 0,0

AA-DA 0,9 0,4 0,60 0,8 0,0

AA-3MeDA 0,0 0,0 6,30 0,0 0,0

АА 9,7 17,3 2,10 21,9 10,5

головной мозг (пмоль)

АА-Туг 0,0 0,0 нд 1,40 0,0 нд 0,0

AA-DA 1,9 6,7 0,70 0,0 0,0

AA-3MeDA 10,2 1,5 0,60 4,3 9,6

АА 0,0 5,8 0,00 13,2 2,6

субстратов, NADH практически не оказывает действия, а влияние ингибитора тирозин гидроксилазы иодотирозина варьирует в зависимости от субстрата и ткани.

В головном мозге биосинтез N-ацилдофаминов был изучен более детально. Помимо AA-DA мы проверили возможность образования N-докозагексаеноилдофамина (DHA-DA) из тритиймеченой докозагексае-

Условия реакции головной мозг

спиннои мозг

М-Туг AA-Tyr boiled AA-Tyr, Fe, ТНР AA-Tyr, Fe, ТНР, РР AA-Tyr, Fe, ТНР, РР, IY AA-Tyr, Fe, ТНР, РР, boited АА+Туг AA+Tyr boiled AA+Tyr, Fe, ТНР, Мд АА+Туг, Fe, ТНР, РР, Мд АА+Туг, Fe, ТНР, РР, IY, Мд АА+Туг, Fe, ТНР, РР, Мд, boiled AA-Tyr, Fe, ТНР, NADPH АА+Туг, Fe, ТНР, NADPH, Мд AA-Tyr, Fe, ТНР, РР, NADPH АА+Туг, Fe, ТНР, РР, NADPH, Мд

Рисунок 1 — Диаграммы распределения радиоактивности между основными компонентами экстракта различных тканей. Приведены вклады каждого компонента (окрашенная зона соответствующего цвета) в суммарную радиоактивность дорожки ТСХ (весь столбик). Серые области —N-арахидоноилтирозин,светло-серые области — N-арахидоноилдофамин, чёрные области — арахидоновая кислота. АА-Туг — N-арахидоноилтирозин, ТНР — тетрагидробиоптерин, IY — ио-дотирозин, Туг — тирозин, АА — арахидоновая кислота, РР — пиридок-сальфосфат, boiled — контроль.

новой кислоты и тирозина, тирамина и дофамина с подавлением неферментативного окисления. Было установлено, что DHA-DA синтезируется в гомогенате головного мозга; процесс наблюдается в нефракционирован-ном гомогенате, в шероховатом эндоплазматическом ретикулуме, а также, в следовых количествах, в цитозольной фракции. Последний факт может быть следствием неполного отделения мембран от цитозоля на стадии гомогенизации. Биосинтез с использованием тирозина, но не других аминов, стимулирует добавление АТР и подавляет иодотирозин, однако, этот эффект проявляется только для полного гомогената, что может свидетельствовать о вовлечении систем различной клеточной локализации в регуляцию биосинтеза N-ацилдофаминов.

Для проверки значимости конъюгации жирных кислот с кофермен-том А при биосинтезе N-ацилдофаминов мы ввели тритиймеченые анало-

ги кислот С 18:2 и С20:3 и их СоА-производных в инкубацию с тирозином с шмогенатом печени и с тирозином, тирамином и дофамином с гомоге-натом головного мозга как в присутствии, так и в отсутствие кофакторов тирозин гидроксилазы. Продукты реакции анализировали вэТСХ и ВЭЖХ с детектированием радиоактивности. Оказалось, что при инкубации СоА-эфиров жирных кислот с тирозином на ТСХ детектируются только продукты их гидролиза (70 ± 1%) и, предположительно, встраивания в фосфоли-пиды (8 ± 1%) по механизму ремоделлинга, тогда как свободные жирные кислоты в гомогенате печени, напротив, превращаются в N-ацилдофамины (24 ± 1%) и соответствующие метилированные производные (11 ± 1%)2. В головном мозге продуктивным был биосинтез только из С20:3, причём эффективность аминов в качестве субстратов убывала в ряду тирозин > тирамин > дофамин. Полученные данные указывают на то, что биосинтез NADA в организме крысы обеспечивается иными путями активации жирной кислоты.

Для получения детальной информации о том, какова последовательность стадий окисления и декарбоксилирования при биосинтезе N-ацилдофаминов, мы проинкубировали возможные промежуточные продукты (амиды арахидоновой кислоты с тирамином, дофамином и 3,4-дигидроксифенилаланином) с тирозиназой. Эта оксидаза должна была моделировать действие фермента тирозин гидроксилазы, который тонко регулируется и, скорее всего, осуществляет окисление предшественника NADA in vivo. Оказалось, что только окисление N-ацилтирамина приводит к формированию стабильного дофаминамида. В случае АА-Tyr и AA-DOPA ожидаемые продукты в инкубационной смеси обнаружены не были. Эти данные позволяют предположить, что при биосинтезе NADA N-ацилтирозин сначала должен подвергаться декарбоксилированию, а затем окислению.

2 Указано содержание радиоактивного продукта в процентах от общей радиоактивности реакционной смеси.

2.1.2 Биосинтез в системах ex vivo

С целью изучения биосинтеза N-ацилдофаминов ex vivo была проведена инкубация клеток культуры глиомы С6 и феохромацитомы РС12, предварительно насыщенных арахидоновой (АА) или докозагексаеновой (DHA) кислотами, с дофамином (DA) и без него. Был изучен базальный и стимулированный биосинтез NADA (Таблица 2).

Таблица 2 — Накопление ^ацилдофаминов и их предшественников в культурах клеток. Указаны продукты, идентифицированные в инкубационной среде.

Стимул Культура клеток (субстрат)

С6 (АА, DA) С6 (АА) PC 12 (DHA) PC 12 (АА)

Без стимула АА-Tyr АА-Туг DHA-Tyr —

КС1 АА-Туг АА-Туг DHA-DA АА-Tyr

А23187 AA-DA АА-Туг — АА-Tyr

В культуре клеток PC 12 была проведена предынкубация с докозагексаеновой и арахидоновой кислотой, после чего клетки обрабатывали высокой концентрацией К+ или кальциевого ионофора А23187 в течение получаса. При этом оказалось, что в случае инкубации с докозагексаеновой кислотой после обработки клеток калием обнаруживается пик DHA-DA, подтверждённый данными масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением (ESI); без добавления эффектора методом авторадиографии фиксируется только пятно на уровне N-арахидоноилтирозина. В случае инкубации клеток с арахидоновой кислотой с последующим добавлением кальциевого ионофора или калия пик, совпадающий со стандартом AA-DA, отсутствовал, но авторадиографическим методом был зарегистрирован продукт, совпадающий по подвижности со стандартом N-арахидоноилтирозина. Можно предположить, что без стимуляции в этой культуре образуется предшественник N-ацилдофамина, который при необходимости быстро преобразуется в конечный продукт.

В культуре клеток глиомы С6 формирование продукта, совпадающего со стандартом АА-Tyr, зафиксировано как без стимулов, так и после

обработки калием и А23187. AA-DA появлялся только при одновременном внесении в среду инкубации дофамина и А23187. Напрашивается вывод о способности глиомы только к прямой конъюгации дофамина с жирной кислотой или о более сложной по сравнению с PC 12 системой регуляции биосинтеза AA-DA.

2.1.3 Биосинтез в гомогенатах пресноводных гидр

Пресноводная гидра была выбрана нами в качестве экспериментального объекта потому, что это один из наиболее древних в эволюционном плане организмов, в котором обнаружены сам дофамин, система его биосинтеза и показано влияние N-арахидоноилдофамина на процессы регенерации.

Работы по изучению биосинтеза N-ацилдофаминов в организмах пресноводных гидр Hydra attenuata и Hydra magnipapillata мы начали с экстракции суммарной фракции липидов из гомогенатов указанных животных и их исследования методом масс-спекгрометрии (ESI) с прямым вводом в режиме образования положительно заряженных ионов. В масс-спектрах мы идентифицировали ионы с m/z, соответствовавшими дофами-намидам олеиновой, арахидоновой и докозагексаеновой кислот, а также их О-метилированных производных. Там же были зафиксированы ионы соответствующих свободных жирных кислот, что свидетельствует в пользу возможности образования их дофаминамидов. После этого мы исследовали возможность биосинтеза N-арахидоноил- и N-докозагексаеноилдофамина в полных гомогенатах гидр с применением авторадиографии. Накопление соответствующих продуктов было зафиксировано при инкубации свободной жирной кислоты и тирозина, тирамина или дофамина (перечисление в порядке снижения эффективности субстрата). Однако, сравнительные эксперименты с использованием тритиймеченых аналогов СоА-эфиров жирных кислот (см. выше) показали, что в организме гидры, в отличие от млекопитающих, производительность биосинтеза N-ацилдофаминов из свободных жирных кислот ниже, чем из их СоА-эфиров. Это позволяет

предположить, что в организме гидры задействован именно этот путь активации жирной кислоты.

2.2 Биохимические превращения N-ацилдофаминов

2.2.1 Гидролиз

К началу наших исследований было установлено, что традиционный для нейролипинов путь инактивации — гидролиз — играет очень малую роль для N-ацилдофаминов. Скорость этого процесса по данным ДиМарцо и соавт. (2002) не превышает 20 пмоль/минхмг белка в головном мозге и 12,2 пмоль/минхмг в печени, более того, процесс гидролиза протекает не до конца, но останавливается после использования 20—30% субстрата. Следовательно, этот процесс с трудом может обеспечить оперативную инактивацию и тем более недостаточен для защиты от экзогенных NADA. В экспериментах по исследованию биосинтеза N-ацилдофаминов мы получили близкие данные о низкой эффективности гидролиза как самого N-арахидоноилдофамина, так и большей части его возможных предшественников и метилированных производных. По данным ВЭЖХ, устойчивость к гидролизу в гомогенате печени крысы возрастала в ряду К-арахидоноил-3,4-дигидроксифенилаланин < N-арахидоноилдофамин < N-арахидоноилтирозин < N-арахидоноилтирамин « ^арахидоноил-4-0-метилдофамин < N-арахидоноил-З-О-метилдофамин. Гомогенат спинного мозга проявлял очень низкую, обнаруживаемую лишь радиоизотопными методами, гидролитическую активность. В головном мозге накопление арахидоновой кислоты можно было наблюдать без использования радиоизотопных методов, но её количество было в 2,5-3 раза меньше, чем в гомогенате печени. В гомогенате Н. magnipapillata мы зафиксировали только гидролиз AA-DA со скоростью на уровне 8 пмоль/минхмг, в Н. attenuata гидролизуются AA-DA(13 пмоль/минхмг) и DHA-DA (23 пмоль/минхмг).

2.2.2 Метилирование

Далее мы исследовали метилирование дофаминамидов олеиновой, арахидоновой, докозагексаеновой и стеариновой кислот в цитозольной

фракции печени, головного и спинного мозга крысы. Продукты реакции экстрагировали по модифицированному методу Фолча и анализировали методом вэТСХ с последующей денситометрией. Мы установили, что до-фаминамиды ненасыщенных жирных кислот метилируются во всех органах (Рисунок 2), что подтверждается данными ESI-масс-спектрометрии. " Без внесения кофактора СОМТ метилирования NADA не наблюдалось, что свидетельствует в пользу участия этого фермента в рассматриваемом превращенииКак видно из графика, в печени NADA метилировались с наибольшей эффективностью, а в головном и спинном мозге производительность этого процесса была почти в четыре раза ниже (Рисунок 2).

AA-DA DHA-DA OI-DA

Рисунок 2 — Метилирование NADA цитозольной фракцией спинного, головного мозга и печени крыс. Черные столбцы - спинной мозг, серые столбцы - печень, белые столбцы - головной мозг

Однако накопления метилированного продукта N-стеароилдофамина нам обнаружить не удалось. Вероятным объяснением этого факта является высокая (даже по сравнению с другими N-ацилдофаминами) гидрофобность данного вещества, которая может делать его недоступным для фермента катехол О-метилтрансферазы.

Гипотеза о возможности метилирования N-ацилдофаминов в препаратах микросом вышеупомянутых органов не была подтверждена. К нашему удивлению, ожидаемый продукт не был обнаружен не только методом ТСХ, но даже гораздо более чувствительным методом микроко-

лоночной ВЭЖХ и ТСХ с использованием меченных тритием исходных веществ. Либо высокая специфичность данной системы не даёт ей использовать ацилированные субстраты, либо мембранная локализация ориентирует её сайт связывания таким образом, что гидрофобные, склонные к встраиванию в липидный бислой N-ацилдофамины не могут с ним продуктивно взаимодействовать.

N-ацилдофамины, проинкубированные с гомогенатами обеих пресноводных гидр, не давали метилированных продуктов, что не согласовывалось с полученными ранее автором данными по исследованию эндогенного состава дофаминамидов и их метаболитов в организмах гидр методом масс-спектромерии. Это кажущееся противоречие может быть объяснено тем, что, возможно, в организме гидры рассматриваемый путь превращений протекает в принципиально иных, по сравнению с млекопитающими, условиях.

2.2.3 Сульфатирование

Для количественной оценки активности сульфотрансфераз по отношению к N-ацилдофаминам было использовано фотометрическое детектирование с использованием метиленового синего. Для построения калибровочной кривой использовали стандарт N-арахидоноил-О-сульфодофамина синтезированный действием комплекса пиридин-S03 на N-арахидоноилдофамин (масс-спектр: m/z 519,5824 [М]+, вычислено 519,2655; m/z 520,5852, [М+Н]+, вычислено 520,2733).

Автором установлено, что в печени сульфатированию подвергаются все изученные N-ацилдофамины (Рисунок 3), причем активность фермента в отношении N-арахидоноилдофамина оказалась одной из самых низких.

Было установлено, что арил сульфотрансфераза цитозольной фракции гомогената головного мозга взаимодействует с DHA-DA с Кт= 17,76 мкМ, а максимальная скорость (Vmax) для этой реакции составляет 3,66 нмоль/минхмг общего белка. Необычной особенностью изученного процесса было отсутствие сульфатирования N-арахидоноилдофамина в голов-

4.0

5

х

1 3.0 s "2 с;

0

1 2.0 >

1.0

о

AA-DA DHA-DA OI-DA

Рисунок 3 — Специфическая активность арилсульфотрансферазы цито-зольной фракции органов крысы относительно различных нейро-липинов. Чёр-ные столбцы — печень, белые столбцы — спинной мозг, серые столбцы — го-ловной мозг

I

ном мозге и N-стеароилдофамина в тканях нервной системы, свидетель-

1 ствукнцее об определённой субстратной специфичности фермента в этих

I

тканях.

Сульфатирование в полном гомогенате пресноводной гидры Н. magnipapillcita исследовали только для AA-DA и DHA-DA. Было установлено, что оба эти вещества сульфатируются, причём специфическая активность ферментных систем гидры относительно AA-DA существенно I выше DHA-DA (2,54 по сравнению с 0,91 нмоль/минхмг).

2.2.4 Окисление

При изучении биосинтеза N-ацилдофаминов было замечено, что i эффективность экстракции AA-DA из гомогената в два раза ниже, чем его ' предшественника, N-арахидоноилтирозина. Была выдвинута гипотеза, что причиной наблюдаемого явления может быть образование ковалент-ных сшивок между SH-группами белков или иных молекул гомогена-' та и окисленной формой N-ацилдофамина, что приводит к уменьшению количества AA-DA в экстракте. Для проверки данного предположения был синтезирован N-арахидоноил-и-этиламино-о-бензохинон реакцией

т

^ АА

N-арахидоноилдофамина с тетрахлор-о-бензохиноном. Реакционная способность данного вещества, как и ожидалось, оказалась весьма высокой: он с лёгкостью образовывал конъюгаты с 2-меркаптоэтанолом (масс-спектр: [М+Н]+ m/z определ. 516,4584, вычислено 516,3147, [М+К]+ m/z определ. 554,4126, вычислено 554,2706) и различными белками (Рисунок 4), причём большая часть реакции протекала в первые несколько секунд после смешивания.

д 1 2 3 М Б 1 2 3 4 М

Рисунок 4 — Модификация белков AA-DAQ. A: G-CSF (денат. усл., 12% общ. конц. акриламида), 1 — G-CSF + AA-DAQ, 2 — G-CSF контроль, 3 — G-CSF стандарт, М — маркер; Б: инсулин (денат. усл., пептидный электрофорез), 1 — инсулин рН 6,5, 2 — инсулин рН 6,5 + AA-DAQ, 3 — инсулин рН 8, 4 — инсулин рН 8 + AA-DAQ

Добавление цистеина к N-арахидоноил-п-этиламино-о-бензохи-нону приводило не к формированию аддукта, а к его восстановлению до исходного N-ацилдофамина. Продуктами инкубации хинона с белками были олигомеры последних, причём степень олигомеризации прямо зависела от избытка хинона.

Следующим этапом работы было изучение окисления N-арахидоноилдофамина в биологических системах. Известно, что тирозиназа может окислять

дофамин до соответствующего хинона. Было показано, что при инкубации NADA с водным раствором тирозиназы без введения дополнительных

компонентов накопление хинона зафиксировать не удается, однако в присутствии цистеина в инкубационной среде происходит практически полное преобразование N-ацилдофамина в цистеиновый аддукт.

Далее, используя препараты митохондрий и плазмалеммы печени крыс, мы изучили окисление N-ацилдофаминов оксидазами по сопряженной реакции восстановления иодонитротетразолиевого фиолетового (INT) с фотометрическим детектированием (Рисунок 5, Рисунок 6).

Рисунок 5 — Скорости накопления восстановленной формы INT (пмоль/мин х мг общего белка) митохондриальной фракцией печени крысы в зависимости от добавленных веществ (конечная концентрация 10 мкМ). Разли-чия между всеми образцами, кроме группы АА-ТА, АА-Туг, 01-DA достоверны (метод Холм-Сидака, р < 0,05).

вый уровень восстановления INT (6,3 пмоль/минхмг). Введенные в инкубационную смесь AA-DA и DHA-DA ускоряли восстановление INT, в то время как другие N-ацилдофамины и предшественники AA-DA снижали скорость восстановления красителя ниже фоновой, что может говорить об их ингибирующем действии на данную ферментную систему.

В цитоплазматических мембранах окисляются все дофами-намиды, кроме производного стеариновой кислоты, а также их пред-

х 12

t 10 -

В митохондриальной фракции был зафиксирован высокий фоно-

Рисунок 6 — Скорость восстановления INT при добавлении N-ацилдофаминов и их ближайших метаболитов (конечная концентрация 10 мкМ) в цитоплазматических мембранах печени.

полагаемые предшественники (N-арахидоноилтирамин, N-арахидо-ноилтирозин). При этом скорость восстановления INT в присутствие N-докозагексаеноилдофамина была максимальной (1,9 нмоль/минхмг).

В инкубации препаратов плазмалеммы, где основным донором электронов был NADPH, N-ацилдофамины, их метаболиты и предшественники выступали в качестве слабых ингибиторов его окисления. Концентрационная зависимость AA-DA и DHA-DA имела противоположный характер. Максимальный эффект AA-DA в мембранах головного мозга (ингибирование на 34 ± 7%) достигался при его конечной концентрации 5 мкМ и последовательно ослабевал при её снижении. Для DHA-DA на том же препарате мембран, напротив, наибольшее ингибирование окисления NADPH (39 ± 6%) зафиксировано при концентрации 0,05 мкМ; при её повышении ингибирование уменьшалось.

2.3 Заключение

В результате проведённой работы удалось уточнить пути метаболизма N-ацилдофаминов в тканях животных (Рисунок 7). Для выполнения

Рисунок 7 — Метаболическая схема N-ацилдофаминов на примере AA-DA по результатам исследований. СОМТ — катехол О-метилтрансфераза, AST — арилсульфотрансфераза, HR — гидролазы, ОХ— оксидазы. 1 —AA-DA, 2 — AA-3MDA, 3 — N-арахидоноил-З-О-сульфодофамин, 4 — арахидоновая кислота, 5 — N-арахидоноил-п-этиламино-о-бензохинон, 6 — аддукт N-арахидоноилдофамина.

сигнальных функций 1Ч-ацилдофамины синтезируются путём конъюгации жирной кислоты и тирозина с последующим его декарбоксилированием и окислением до дофамина. Поскольку в результате окисления могут образовываться высокореакционноспособные хиноны, реакция должна жёстко контролироваться. В специальных или патологических условиях синтез может происходить с вовлечением других аминов, дофамина и тирамина.

По-видимому, биосинтез N-ацилдофаминов с разными остатками жирной кислоты может быть тканеспецифичным, о чём свидетельствует значительная разница в эффективности биосинтеза из разных жирных кислот, обнаруженная в культуре клеток РС12, особенности биосинтеза в культуре клеток глиомы, а также тканевые различия в эффективности метаболизма. Механизм активации субстрата перед конъюгацией у млекопитающих остаётся неустановленным, однако, это АТФ-зависимый процесс, не использующий кофермент А.

Основной путь сигнальной инактивации N-ацилдофаминов — это метилирование, результатом которого является резкое снижение аффинности как к ванилоидному рецептору VR1 (Di Marzo), так и к каннабиноид-ному рецептору СВ1 (Бобров М.Ю.), причём метилируются только ненасыщенные ванилоиды. Рассматриваемые вещества распознаются исключительно цитоплазматической катехол О-метилтрансферазой. Скорость процесса метилирования (от 0,15 до 160 пмоль/минхмг) такова, что он может справиться только с небольшим количеством субстрата, сравнимым с его обнаруженной в тканях нервной системы концентрацией. При превышении количества N-ацилдофаминов или при попадании их из экзогенного источника подключается вторая, более высокопроизводительная система — сульфатирование (0,5 до 1,5 нмоль/минхмг). Этот путь метаболизма отличает тканевая специфичность относительно дофаминамидов арахидо-новой и стеариновой кислот: первый из них не сульфатируется в головном мозге, а второй сульфатируется исключительно в печени. Биологическое значение обнаруженной особенности пока не ясно.

Окисление катехольной группы представляет собой вполне возможный, но имеющий специальное значение путь. При наличии нужного сигнала молекулы ненасыщенных N-ацилдофаминов могут достаточно быстро (до 2 нмоль/минхмг) окисляться системами плазмалеммы и ми-тохондрий.Продуктами их окисления являются высокореакционноспособ-ные о-хиноны, которые с лёгкостью образуют ковалентные аддукты с суль-фгидрильными группами белков и иных компонентов клетки. Результатом этого процесса может быть инактивация различных компонентов клетки,

прежде всего, систем окисления. Это может иметь важное значение, например, при борьбе с трансформированными клетками, для которых электрон-транспортные системы плазмалеммы являются жизненно необходимыми.

В эволюционно более древнем животном — пресноводной гидре — также наблюдается биосинтез AA-DA и DHA-DA, о чем свидетельствует и идентификация этих молекул в экстракте липидов из гомогенатов Hydra attenuata и Hydra magnipapillata. В отличие от млекопитающих у гидры наблюдается СоА-зависимый путь активации жирной кислоты при биосинтезе NADA. Катаболизм дофаминамидов у гидры тоже отличается: сульфатирование N-ацилдофаминов наблюдается, а метилирование в гомогенатах не происходит и этот путь требует уточнений. Кроме того, автором зафиксирован низкоэффективный (не более 23 пмоль/минхмг) гидролиз AA-DA и DHA-DA; вероятно, роль этого процесса у пресноводной гидры так же незначительна, как у млекопитающих.

3 Выводы

1. Установлено, что в исследованных моделях биосинтез Ы-ацилдофаминов может осуществляться путём конъюгации жирной кислоты и дофамина или в результате превращения Ы-ацилтирозина. Определены тканевые и видовые различия в протекании этого процесса.

2. При биосинтезе с промежуточным образованием 1Ч-ацилтирозина де-карбоксшшрование молекулы предшествует окислению.

3. Дофаминамиды ненасыщенных жирных кислот метилируются в цито-зольных фракциях в печени и отделов нервной системы крысы, тогда как в микросомальной фракции метилирование К-ацилдофаминов не детектируется.

4. Сульфатирование Ы-ацилдофаминов является ещё одним путём их метаболизма во всех исследованных тканях крысы, а также в пресноводной гидре Н. magnipapillata.

5. 1Ч-ацилдофамины являются модуляторами активности оксидаз митохондрий и плазмалеммы. Продукт их окисления по катехольной группе реагирует с белками, вызывая их олигомеризацию.

4 Список публикаций с основными результатами работы

4.1 Статьи

1. Безуглов В.В., Блаженова A.B., Бобров М.Ю., Акимов М.Г., Грецкая Н.М., Назимов И.Л., Андрианова E.JI., Шарко О.Л., Новиков A.B., Краснов Н.В., Кисель М.А., Шевченко В.П., Шевченко К.В., Вьюнова Т.В., Мясоедов Н.Ф. Арахидоноиламинокислоты и арахидоноилпепти-ды: синтез и свойства // Биоорг. химия. — 2006. — Т. 32, № 3. — С. 258—267.

2. Акимов М.Г., Грецкая Н.М., Шевченко К.В., Шевченко В.П., Мясоедов Н.Ф., Безуглов В.В., Бобров М.Ю. Новые аспекты биосинтеза и метаболизма N-ацилдофаминов в тканях крысы // Биоорг. химия. — 2007. — Т. 33, № 6. — С. 648—652.

3. Акимов М.Г., Маркова Л.Н., Остроумова Т.В., Безуглов В.В. N-арахидоноилдофамин — возможный регулятор скорости закладки щупалец у пресноводной гидры при регенерации // Онтогенез. — 2008. — Т.39,№ 1. —С. 66—71.

4. Акимов М.Г., Назимов И.В., Грецкая Н.М., Зинченко Г.Н., Безуглов В.В. Сульфатирование N-ацилдофаминов и N-арахидоноилсеротонина в тканях крысы // Биохимия. — 2009. — Т. 74, № 6.— С. 836-841.

4.2 Опубликованные тезисы конференций и доклады

1. Акимов М.Г., Бобров М.Ю., Безуглов В.В. Судьба N-арахидоноилдофамина в клетке // Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии: тез. докл. XVII зимней молодежной научной школы, ИБХ РАН, Москва, 7—10 февраля 2005 г. — М, 2005. — С. 13.

2. Грецкая Н.М., Блаженова A.B., Андрианова Е.Л., Акимов М.Г., Бобров М.Ю., Безуглов В.В., Шевченко В.П., Шевченко К.В., Мясоедов Н.Ф. От ациламинокислот к N-ацилпептидам // Тез. докл. II Российского

симпозиума по химии и биологии пептидов, Санкт-Петербург, 2005 г. —СПб., 2005, —С. 36.

3. Акимов М.Г., Шевченко В.П., Шевченко К.В., Мясоедов Н.Ф., Безуглов В.В. Метаболизм М-арахидоноилдофамина в гомогенатах печени и головного мозга крысы // Тез. докл. VIII чтений, посвящ. памяти акад. Ю. А. Овчинникова, ИБХ РАН, Москва, 25—27 октяября 2006 г. — М., 2006. —С. 103.

4. Акимов М.Г., Грецкая Н.М., Безуглов В.В. Метаболизм эндогенных дофаминамидов жирных кислот в тканях крысы. // Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии: тез. докл. XIX зимней молодежной научной школы, ИБХ РАН, Москва, 7—9 февраля 2007 г. — М., 2007. — С. 5.

5. Акимов М.Г., Маркова Л.Н., Безуглов В.В. Метаболизм М-дофаминамидов арахидоновой и докозагексаеновой кислот в гомоге-нате Н. п^шрарПЫа // Механизмы нервных и нейроэндокринных регуляций: тез. докл. Всероссийской конференции, посвященной 90-летию со дня рождения акад. Т. М. Турпаева, Президиум РАН, Москва, 24—26 ноября 2008 г. — М., 2008. — С. 22—23.

Заказ № 158/04/09. Подписано в печать 16.04.2009. Тираж 100 экз. Усл. п. л. 1,5 РПК «ДипГрин». Тел.: +7 (495) 335-3582 www.deepgreen.ruinfo@deepgreen.ru

Содержание диссертации, кандидата химических наук, Акимов, Михаил Геннадьевич

1 Оглавление.

2 Основные обозначения и сокращения.

3 Введение.

4 Метаболизм нейролипинов в организме животных.

4.1 Введение.'.

4.2 Биосинтез нейролипинов.

4.2.1 М-ацилэтаноламиды [20].

4.2.2 Первичные амиды жирных кислот.

4.2.3 ]М-ациламинокислоты [40].

4.2.4 2-ацилглицерины [19, 47].

4.2.5 М-ацилдофамины.

4.2.6 Альтерантивные пути биосинтеза.

4.3 Катаболизм нейролипинов.

4.3.1 Гидролазный путь [38, 67, 68].

4.3.2 Оксигеназный метаболизм нейролипинов [47, 68].

4.3.3 Другие пути катаболизма.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Акимов, Михаил Геннадьевич

8 Выводы

1. Установлено, что в исследованных моделях биосинтез 1М-ацилдофаминов может осуществляться путём конъюгации жирной кислоты и дофамина или в результате превращения Ы-ацилтирозина. Определены тканевые и видовые различия в протекании этого процесса.

2. При биосинтезе с промежуточным образованием Ы-ацилтирозина декар-боксилирование молекулы предшествует окислению.

3. Дофаминамиды ненасыщенных жирных кислот метилируются в цито-зольных фракциях в печени и отделов нервной системы крысы, тогда как в микросомальной фракции метилирование М-ацилдоф ам и н о в не детектируется.

4. Сульфатирование 1Ч-ацилдофаминов является ещё одним путём их метаболизма во всех исследованных тканях крысы, а также в пресноводной гидре Н. magnipapillata.

5. >1-ацилдофамины являются модуляторами активности оксидаз митохондрий и плазмалеммы. Продукт их окисления по катехольной группе реагирует с белками, вызывая их олигомеризацию.

7 Заключение

В результате проведённой работы удалось уточнить пути метаболизма ]Ч-ацштдофаминов в тканях животных (Рис. 40).

Рис. 40 — Метаболическая схема N-ацштдофаминов на примере АА-DA по результатам исследований. СОМТ — катехол О-метилтрансфераза, AST — арилсульфотрансфераза, HR — гидролазы, ОХ— оксидазы. 1 — АА-DA, 2 — AA-3MDA, 3 — N-арахидоноил-З-О-сульфодофамин, 4 — арахидо-новая кислота, 5 — М-арахидоноил-я-этиламино-о-бензохинон, 6 — аддукт N-арахидоноилдофамина.

Для выполнения сигнальных функций N-ацилдофамины синтезируются путём конъюгации жирной кислоты и тирозина с последующим его декарбок-силированием и окислением до дофамина. Поскольку в результате окисления могут образовываться высокореакционноспособные хиноны, реакция должна жёстко контролироваться. В специальных или патологических условиях синтез может происходить с вовлечением других аминов, дофамина и тирамина. По-видимому, биосинтез N-ацилдофаминов с разными остатками жирной кислоты может быть тканеспецифичным, о чём свидетельствует значительная разница в эффективности биосинтеза из разных жирных кислот, обнаруженная в культуре клеток PC 12, особенности биосинтеза в культуре клеток

S. глиомы, а также тканевые различия в эффективности метаболизма. Механизм активации субстрата перед конъюгацией у млекопитающих остаётся неустановленным, однако, это АТФ-зависимый процесс, не использующий кофер-мент А.

Основной путь сигнальной инактивации 1чГ-ацилдофаминов — это метилирование, результатом которого является резкое снижение аффинности как к ванилоидному рецептору УЯ1 [16], так и к каннабиноидному рецептору СВ1 (Бобров М.Ю., личное сообщение), причём метилируются только ненасыщенные ванилоиды. Рассматриваемые вещества распознаются исключительно цитоплазматической катехол О-метилтрансферазой. Скорость процесса метилирования (от 0,15 до 160 пмоль/минхмг) такова, что он может справиться только с небольшим количеством субстрата, сравнимым с его обнаруженной в тканях нервной системы концентрацией. При превышении количества Ы-ацилдофаминов или при попадании их из экзогенного источника подключается вторая, более высокопроизводительная система — сульфати-рование (0,5 до 1,5 нмоль/минхмг). Этот путь метаболизма отличает тканевая специфичность относительно дофаминамидов арахидоновой и стеариновой кислот: первый из них не сульфатируется в головном мозге, а второй сульфа-тируется исключительно в печени. Биологическое значение обнаруженной особенности пока не ясно.

Окисление катехольной группы представляет собой вполне возможный, но имеющий специальное значение путь. При наличии нужного сигнала молекулы ненасыщенных Ы-ацилдофаминов могут достаточно быстро (до 2 нмоль/минхмг) окисляться системами плазмалеммы и митохондрий. Продуктами их окисления являются высокореакционноспособные о-хиноны, которые с лёгкостью образуют ковалентные аддукты с сульфгидрильными группами белков и иных компонентов клетки. Результатом этого процесса может быть инактивация различных компонентов клетки, прежде всего, систем окисления. Это может иметь важное значение, например, при борьбе с трансформированными клетками, для которых электрон-транспортные системы плазмалеммы являются жизненно необходимыми.

В эволюционно более древнем животном — пресноводной гидре — также наблюдается биосинтез AA-DA и DHA-DA, о чем свидетельствует и идентификация этих молекул в экстракте липидов из гомогенатов Hydra atte-nuata и Hydra magnipapillata. В отличие от млекопитающих у гидры наблюдается СоА-зависимый путь активации жирной кислоты при биосинтезе NADA. Катаболизм дофаминамидов у гидры тоже отличается: сульфатиро-вание N-ацилдофаминов наблюдается, а метилирование в гомогенатах не происходит и этот путь требует уточнений. Кроме того, автором зафиксирован низкоэффективный (не более 23 пмоль/минхмг) гидролиз AA-DA и DHA-DA; вероятно, роль этого процесса у пресноводной гидры так же незначительна, как у млекопитающих.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата химических наук, Акимов, Михаил Геннадьевич, Москва

1. O'sullivan S.E., Kendall D.A., Randall M.D. Characterisation of the vasorelaxant properties of the novel endocannabinoid N-arachidonoyl-dopamine (NADA). // Br. J. Pharmacol.— 2004.— V. 141.— Pp. 803-812.

2. De Petrocellis L., Chu C.J., Moriello A.S., Kellner J.C., Walker J.M., Di Marzo V. Actions of two naturally occurring saturated N-acyldopamines on transient receptor potential vanilloid 1 (TRPV1) channels. // Br. J. Pharmacol.—2004.—V. 143.—Pp. 251-256.

3. Przegalinski E., Filip M., Zajac D., Pokorski M. N-oleoyl-dopamine increases locomotor activity in the rat. // Int. J. Immunopathol. Pharmacol.— 2006.—V. 19.—Pp. 897-904.

4. Маркова JI.H., Остроумова T.B., Безуглов B.B., Бузников Г.А. Влияние арахидоноилдофамина, галоперидола и их смесей на регенерацию пресноводной гидры Hydra attenuata // Онтогенез.— 2004.— V. 35.— Pp. 367-374.

5. De Petrocellis L., Melck D., Bisogno T., Milone A., Di Marzo V. Finding of the endocannabinoid signalling system in Hydra, a very primitive organism: possible role in the feeding response // Neuroscience.— 1999.— V. 92.— Pp. 377-387.

6. Hendler R.W. Possible involvement of lipids in protein synthesis. // Science.— 1958.—V. 128.—Pp. 143-144.

7. Colodzin M., Bachur N.R., Weissbach H., Udenfriend S. Enzymatic formation of fatty acid amides of ethanolamine by rat liver microsomes. // Bio-chem. Biophys. Res. Commun.— 1963.—V. 10— Pp. 165-170.

8. Devane W.A., Dysarz F.A.R., Johnson M.R., Melvin L.S., Howlett A.C. Determination and characterization of a cannabinoid receptor in rat brain. // Mol. Pharmacol.— 1988.— V. 34.— Pp. 605-613.

9. Cravatt B.F., Prospero-Garcia O., Siuzdak G., Gilula N.B., Henriksen S.J., Boger D.L., Lerner R.A. Chemical characterization of a family of brain lipids that induce sleep. // Science.— 1995.—V. 268.—Pp. 1506-1509.

10. Saghatelian A., Trauger S.A., Want E.J., Hawkins E.G., Siuzdak G., Cravatt B.F. Assignment of endogenous substrates to enzymes by global metabolite profiling. // Biochemistry.— 2004.— V. 43.— Pp. 14332-14339.

11. Saghatelian A., Cravatt B.F. Discovery metabolite profiling—forging functional connections between the proteome and metabolome. // Life Sci.— 2005.—V. 77.—Pp. 1759-1766.

12. Sugiura T., Kishimoto S., Oka S., Gokoh M. Biochemistry, pharmacology and physiology of 2-arachidonoylglycerol, an endogenous cannabinoid receptor ligand. // Prog. Lipid Res — 2006.— V. 45.— Pp. 405-446.

13. Okamoto Y., Wang J., Morishita J., Ueda N. Biosynthetic pathways of the endocannabinoid anandamide. // Chem. Biodivers.— 2007.— V. 4.— Pp. 1842-1857.

14. Bachur N.R., Masek K., Melmon K.L., Udenfriend S. Fatty acid amides of ethanolamine in mammalian tissues. // J. Biol. Chem.— 1965.— V. 240.— Pp. 1019-1024.

15. Di Marzo V., Fontana A., Cadas H., Schinelli S., Cimino G., Schwartz J.C., Piomelli D. Formation and inactivation of endogenous cannabinoid anandamide in central neurons // Nature.— 1994.— V. 372.— Pp. 686-691.

16. Reddy P.V., Schmid P.C., Natarajan V., Schmid H.H. The role of cardiolipin as an acyl donor in dog heart N-acylethanolamine phospholipid biosynthesis. // Biochim. Biophys. Acta.— 1983.— V. 751.— Pp. 241-246.

17. Schmid H.H., Schmid P.C., Natarajan V. N-acylated glycerophospholipids and their derivatives. // Prog Lipid Res.— 1990.— V. 29.— Pp. 1-43.

18. Natarajan V., Reddy P.V., Schmid P.C., Schmid H.H. N-Acylation of etha-nolamine phospholipids in canine myocardium. // Biochim. Biophys. Acta.— 1982.—V. 712.—Pp. 342-355.

19. Wang J., Ueda N. Biology of endocannabinoid synthesis system. // Prostaglandins Other Lipid Mediat.— 2008.—

20. Schmid P.C., Reddy P.V., Natarajan V., Schmid H.H. Metabolism of N-acylethanolamine phospholipids by a mammalian phosphodiesterase of the phospholipase D type. // J. Biol. Chem.— 1983 — V. 258.—Pp. 93029306.

21. Bisogno T. Endogenous cannabinoids: structure and metabolism. // J. Neu-roendocrinol —2008.—V. 20 Suppl 1.—Pp. 1-9.

22. Simon G.M., Cravatt B.F. Anandamide Biosynthesis Catalyzed by the Phosphodiesterase GDE1 and Detection of Glycerophospho-N-acyl Ethanola-mine Precursors in Mouse Brain. // J. Biol. Chem.— 2008.— V. 283.— Pp. 9341-9349.

23. Liu J., Wang L., Harvey-White J., Osei-Hyiaman D., Razdan R., Gong Q., Chan A.C., Zhou Z., Huang B.X., Kim H.-Y., Kunos G. A biosynthetic pathway for anandamide. // Proc. Natl. Acad. Sei. U S A.-— 2006.— V. 103.—Pp. 13345-13350.

24. Mcfarland M.J., Barker E.L. Lipid rafts: a nexus for endocannabinoid signaling? I I Life Sci.— 2005.— V. 77.— Pp. 1640-1650.

25. Arafat E.S., Trimble J.W., Andersen R.N., Dass C., Desiderio D.M. Identification of fatty acid amides in human plasma. // Life Sci.— 1989.— V. 45.— Pp. 1679-1687.

26. Bisogno T., Sepe N., De Petrocellis L., Mechoulam R., Di Marzo V. The sleep inducing factor oleamide is produced by mouse neuroblastoma cells. // Biochem. Biophys. Res. Commun.— 1997.—V. 239,—Pp. 473-479.

27. Merkler D.J., Merkler K.A., Stern W., Fleming F.F. Fatty acid amide biosynthesis: a possible new role for peptidylglycine alpha-amidating enzyme and acyl-coenzyme A: glycine N-acyltransferase. // Arch. Biochem. Biophys.— 1996.—V. 330.—Pp. 430-434.

28. Alexander S.P.H., Kendall D.A. The complications of promiscuity: endocannabinoid action and metabolism. // Br. J. Pharmacol.— 2007.— V. 152.— Pp. 602-623.

29. Merkler D.J., Chew G.H., Gee A .J., Merkler K.A., Sorondo J.-P.O., Johnson M.E. Oleic acid derived metabolites in mouse neuroblastoma N18TG2 cells. //Biochemistry.—2004.—V. 43.—Pp. 12667-12674.

30. Farrell E.K., Merkler D.J. Biosynthesis, degradation and pharmacological importance of the fatty acid amides // Drug Discovery Today.— 2008.— V. 13,— Pp. 558-568.

31. Driscoll W.J., Chaturvedi S., Mueller G.P. Oleamide synthesizing activity from rat kidney: identification as cytochrome c. // J. Biol. Chem.— 2007.— V. 282.—Pp. 22353-22363.

32. Guan Z., Li S., Smith D.C., Shaw W.A., Raetz C.R.H. Identification of N-acylphosphatidylserine molecules in eukaryotic cells. // Biochemistry.— 2007,—V. 46,—Pp. 14500-14513.

33. Cain B.D., Singer M., Donohue T.J., Kaplan S. In vivo metabolic intermediates of phospholipid biosynthesis in Rhodopseudomonas sphaeroides. // J. Bacterid.— 1983.—V. 156.—Pp. 375-385.

34. Saghatelian A., Mckinney M.K., Bandell M., Patapoutian A., Cravatt B.F. A FAAH-regulated class of N-acyl taurines that activates TRP ion channels. // Biochemistry.— 2006,— V. 45.— Pp. 9007-9015.

35. Reilly S.-J., O'shea E.M., Andersson U., O'byrne J., Alexson S.E.H., Hunt M.C. A peroxisomal acyltransferase in mouse identifies a novel pathway for taurine conjugation of fatty acids. // FASEB J.— 2007.— V. 21.— Pp. 99107.

36. Marzo V., Bisogno Т., Petrocellis L. The Biosynthesis, Fate and Pharmacological Properties of Endocannabinoids // Cannabinoids.— Heidelberg, 2005.—Pp. 147-185.

37. Акимов М.Г., Грецкая Н.М., Шевченко К.В., Шевченко В.П., Мясоедов Н.Ф., Безуглов В.В., Бобров М.Ю. Новые аспекты биосинтеза и метаболизма N-ацилдофаминов в тканях крысы // Биоорг. Химия.— 2007.— Т. 33.— Pp. 648-652.

38. Liu X., Yamada N., Maruyama W., Osawa T. Formation of dopamine ad-ducts derived from brain polyunsaturated fatty acids: Mechanism for Parkinson's disease. // J. Biol. Chem.— 2008.—V. 283. — 34887-34895.

39. Fukui T., Axelrod B. Amino acid incorporation into lipoidal material by cell-free liver preparations // JACS.— 1959.— V. 81.— Pp. 1259-1260.

40. Bachur N.R., Udenfriend S. Microsomal synthesis of fatty acid amides // J. Biol. Chem.— 1966.—V. 241.—Pp. 1308-1313.

41. Muderhwa J.M., Schmid P.C., Brockman H.L. Regulation of fatty acid 180 exchange catalyzed by pancreatic carboxylester lipase. 1. Mechanism and kinetic properties. //Biochemistry.— 1992.—V. 31.— Pp. 141-148.

42. Deutsch D.G., Chin S.A. Enzymatic synthesis and degradation of ananda-mide, a cannabinoid receptor agonist. // Biochem. Pharmacol.— 1993.— V. 46.—Pp. 791-796.

43. Ueda N., Kurahashi Y., Yamamoto S., Tokunaga T. Partial purification and characterization of the porcine brain enzyme hydrolyzing and synthesizing anandamide. // J. Biol Chem.— 1995.— V. 270.— Pp. 23823-23827.

44. Schmid P.C., Schwindenhammer D., Krebsbach R.J., Schmid H.H. Alternative pathways of anandamide biosynthesis in rat testes. // Chem. Phys. Lipids.— 1998,—V. 92.—Pp. 27-35.

45. Ansari G.A.S., Kaphalia B.S., Khan M.F. Fatty acid conjugates of xenobio-tics // Toxicol. Lett.— 1995.— V. 75.— Pp. 1-17.

46. Ahmad F., Kaphalia B.S., Khan M.F., Ansari G.A.S. Fatty-acid anilides a new conjugation pathway of aniline // Biochem. Arch.— 1993.— V. 9.— Pp. 111-118.

47. Kaphalia B.S., Ansari G.A.S. Purification and characterization of rat pancreatic fatty acid ethyl ester synthase and its structural and functional relationship to pancreatic cholesterol esterase. // J. Biochem. Mol. Toxicol.— 2003.—V. 17.—Pp. 338-345.

48. Kaphalia B.S., Fritz R.R., Ansari G.A. Purification and characterization of rat liver microsomal fatty acid ethyl and 2-chloroethyl ester synthase and their relationship with carboxylesterase (pi 6.1). // Chem. Res. Toxicol.— 1997.—V. 10.—Pp. 211-218.

49. Khan S.H., Kaphalia B.S., Ansari G.A.S. In vitro conjugation of ethanolamine with fatty acids by rat liver subcellular fractions. // J. Toxicol. Environ. Health A.— 2005.— V. 68,— Pp. 667-676.

50. Golczak M., Imanishi Y., Kuksa V., Maeda T., Kubota R., Palczewski K. Lecithin:retinol acyltransferase is responsible for amidation of retinylamine, a potent inhibitor of the retinoid cycle. // J. Biol. Chem.— 2005.— V. 280.— Pp. 42263-42273.

51. Ruiz A., Winston A., Lim Y.H., Gilbert B.A., Rando R.R., Bok D. Molecular and biochemical characterization of lecithin retinol acyltransferase. // J. Biol. Chem.— 1999.— V. 274,—Pp. 3834-3841.

52. Rando R.R. Membrane-bound lecithin-retinol acyltransferase. // Biochem. Biophys. Res. Commun.—2002.—V. 292.—Pp. 1243-1250.

53. Macdonald P.N., Ong D.E. A lecithimretinol acyltransferase activity in human and rat liver. // Biochem. Biophys. Res. Commun.— 1988.— V. 156.— Pp. 157-163.

54. Jauhiainen M., Yuan W., Gelb M.H., Dolphin P.J. Human plasma lecithin-cholesterol acyltransferase. Inhibition of the phospholipase A2-like activity by sn-2-difluoroketone phosphatidylcholine analogues. // J. Biol. Chem.— 1989.—V. 264.—Pp. 1963-1967.

55. Gómez-Ruiz M., Hernández M., De Miguel R., Ramos J.A. An overview on the biochemistry of the cannabinoid system. // Mol. Neurobiol.— 2007.— V.36.— Pp. 3-14.

56. Vandevoorde S., Lambert D.M. The multiple pathways of endocannabinoid metabolism: a zoom out. // Chem. Biodivers.— 2007.— V. 4.— Pp. 18581881.

57. Ueda N., Yamamoto S. Anandamide amidohydrolase (fatty acid amide hydrolase). // Prostaglandins Other Lipid Mediat.— 2000.— V. 61.— Pp. 1928.

58. Mulder A.M., Cravatt B.F. Endocannabinoid metabolism in the absence of fatty acid amide hydrolase (FAAH): discovery of phosphorylcholine derivatives of N-acyl ethanolamines // Biochemistry.— 2006.— V. 45.— Pp. 11267-11277.

59. Wei B.Q., Mikkelsen T.S., Mckinney M.K., Lander E.S., Cravatt B.F. A second fatty acid amide hydrolase with variable distribution among placental mammals. // J. Biol. Chem.— 2006.— V. 281.— Pp. 36569-36578.

60. Tsuboi K., Takezaki N., Ueda N. The N-acylethanolamine-hydrolyzing acid amidase (NAAA) // Chem. Biodivers.— 2007.— V. 4.— Pp. 1914-1925.

61. Сергеева М.Г., Варфоломеева A.H. Каскад арахидоновой кислоты // Москва: Народное образование, 2006.— 255 с.

62. Chandrasekharan N.V., Simmons D.L. The cyclooxygenases. // Genome Biol.—2004.—V. 5.—Pp. 241.

63. Phillis J.W., Horrocks L.A., Farooqui A.A. Cyclooxygenases, lipoxygenases, and epoxygenases in CNS: their role and involvement in neurological disorders. // Brain Res. Rev.— 2006 — V. 52.— Pp. 201-243.

64. Prusakiewicz J.J., Kingsley P.J., Kozak K.R., Marnett L.J. Selective oxygenation of N-arachidonylglycine by cyclooxygenase-2. // Biochem. Biophys. Res. Commun.— 2002.—V. 296,—Pp. 612-617.

65. Prusakiewicz J.J., Turman M.V., Vila A., Ball H.L., Al-Mestarihi A.H., Di Marzo V., Marnett L.J. Oxidative metabolism of lipoamino acids and vanilloids by lipoxygenases and cyclooxygenases. // Arch. Biochem. Biophys.— 2007.— V. 464.— Pp. 260-268.

66. Brash A.R. Lipoxygenases: occurrence, functions, catalysis, and acquisition of substrate. // J Biol Chem.— 1999.— V. 274.— Pp. 23679-23682.

67. Turman M.V., Kingsley P.J., Rouzer C.A., Cravatt B.F., Marnett L.J. Oxidative metabolism of a Fatty Acid amide hydrolase-regulated lipid, arachido-noyltaurine. // Biochemistry.— 2008.— V. 47.— Pp. 3917-3925.

68. Fleming I. Cytochrome P450 epoxygenases as EDHF synthase(s). // Pharmacol. Res.— 2004,—V. 49.—Pp. 525-533.

69. El Fangour S., Balas L., Rossi J.-C., Fedenyuk A., Gretskaya N., Bobrov M., Bezuglov V., Hillard C.J., Durand T. Hemisynthesis and preliminary evaluation of novel endocannabinoid analogues. // Bioorg. Med. Chem. Lett.— 2003.—V. 13.—Pp. 1977-1980.

70. Herrlich P., Sekeris C.E. Identifizierung von N-Acetyl-noradrenalin im Urin eines Patienten mit Neuroblastom // Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem.— 1962.— V. 58.—Pp. 607-608.

71. Bioque G., Abian J., Bulbena O., Rosello-Catafau J., Gelpi E. Metabolism ofN-phenyllinoleamide by rat liver. // J. Chromatogr.— 1993.— V. 615.— Pp. 191-196.

72. Markey S.P., Dudding T., Wang T.C. Base- and acid-catalyzed interconversions of O-acyl- and N-acyl-ethanolamines: a cautionary note for lipid analyses.//J. Lipid Res.— 2000.— V. 41.—Pp. 657-662.

73. Lambert D.M., Muccioli G.G. Endocannabinoids and related N-acylethanolamines in the control of appetite and energy metabolism: emergence of new molecular players. // Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care.— 2007.—V. 10.—Pp. 735-744.

74. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem.— 1951.— V. 193.— Pp. 265-275.

75. Folch J., Lees M., Stanley G.S. A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissues. // J. Biol. Chem.— 1957.— V. 226.— Pp. 497-509.

76. Lesko L., Donion M., Marinetti G.V., Hare J.D. A rapid method for the isolation of rat liver plasma membranes using an aqueous two-phase polymer system. //Biochim. Biophys. Acta.— 1973.—V. 311—Pp. 173-179.

77. Laposata M., Reich E.L., Majerus P.W. Arachidonoyl-CoA synthetase. Separation from nonspecific acyl-CoA synthetase and distribution in various cells and tissues // J Biol Chem.— 1985.— V. 260.— Pp. 11016-11020.

78. Zazo J.A., Casas J.A., Mohedano A.F., Gilarranz M.A., Rodriguez J.J. Chemical pathway and kinetics of phenol oxidation by Fenton's reagent // Environ. Sci. Technol.— 2005.— V. 39.—Pp. 9295-9302.

79. Mijangos F., Varona F., Villota N. Changes in solution color during phenol oxidation by Fenton reagent // Environ. Sci. Technol.— 2006.— V. 40.— Pp. 5538-5543.

80. Zhou Q., Zuniga M.A. Quinone methide formations in the Cu(2+)-induced oxidation of a diterpenone catechol and concurrent damage on DNA. // Chem. Res. Toxicol.—2005.—V. 18.—Pp. 382-388.

81. Dubinskii V.Z., Belyakov V.A., Roginskii V.A., Miller V.B. Kinetics of the autooxidation of galvinoxyl by molecular oxygen // Russ. Chem. Bull.— 1975.—

82. Jeffery D.R., Roth J. A. Characterization of membrane-bound and soluble catechol-O-methyltransferase from human frontal cortex. // J. Neurochem.— 1984.— V. 42.— Pp. 826-832.

83. Roth J.A. Membrane-bound catechol-O-methyltransferase: a réévaluation of its role in the O-methylation of the catecholamine neurotransmitters. // Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol.— 1992 —V. 120 —Pp. 1-29.

84. Maines M.D. Current protocols in toxicology // New York: John Wiley, 1999.

85. Goldenberg H., Crane F.L., Morre D.J. NADH oxidoreductase of mouse liver plasma membranes // J. Biol. Chem.— 1979.— V. 254.— Pp. 2491-2498.

86. Bachurin S.O., Shevtsova E.P., Kireeva E.G., Oxenkrug G.F., Sablin S.O. Mitochondria as a target for neurotoxins and neuroprotective agents. // Ann. N. Y. Acad. Sci.— 2003.—V. 993.—Pp. 334-344; discussion 345-339.

87. Hastings T.G., Zigmond M.J. Identification of catechol-protein conjugates in neostriatal slices incubated with 3H.dopamine: impact of ascorbic acid and glutathione // J. Neurochem.— 1994.— V. 63.— Pp. 1126-1132.

88. Kuhn D.M., Arthur R.E., Thomas D.M., Elferink L.A. Tyrosine hydroxylase is inactivated by catechol-quinones and converted to a redox-cycling quino-protein: possible relevance to Parkinson's disease // J. Neurochem.— 1999.—V. 73.—Pp. 1309-1317.

89. Kuczenski R. Soluble, membrane-bound, and detergent-solubilized rat striatal tyrosine hydroxylase. pH-dependent cofactor binding // J. Biol. Chem.— 1973.—V. 248.—Pp. 5074-5080.

90. Presch I., Birnbacher R., Herkner K., Lubec G. The effect of estradiol and ovariectomy on tyrosine hydroxylase, tyrosine aminotransferase and phenylalanine hydroxylase // Life Sci.— 1997.— V. 60.— Pp. 479-484.

91. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA // Москва: МедиаСфе-ра, 2002.—312 с.

92. Мецлер Д. Биохимия: Химические реакции в живой клетке // Москва: Мир, 1980.—Т. 1—3.

93. Balsinde J., Balboa М.А., Dennis E.A. Antisense inhibition of group VI Ca2+-independent phospholipase A2 blocks phospholipid fatty acid remodeling in murine P388D1 macrophages // J. Biol. Chem.— 1997.— V. 212.-— Pp. 29317-29321.

94. Okuno S., Fujisawa H. A new mechanism for regulation of tyrosine 3-monooxygenase by end product and cyclic AMP-dependent protein kinase // J. Biol. Chem.— 1985.—V. 260.— Pp. 2633-2635.

95. Karhunen T., Tilgmann C., Ulmanen I., Julkunen L, Panula P. Distribution of catechol-O-methyltransferase enzyme in rat tissues // J. Histochem. Cyto-chem.— 1994.—V. 42.—Pp. 1079-1090.

96. Flatmark T. Catecholamine biosynthesis and physiological regulation in neuroendocrine cells // Acta Physiol. Scand.— 2000.— V. 168.— Pp. 1-17.

97. Hong J., Shu-Leong H., Tao X., Lap-Ping Y. Distribution of catechol-O-methyltransferase expression in human central nervous system // Neuroreport.— 1998.—V. 9.— Pp. 2861-2864.

98. Huh M.M., Friedhoff A J. Multiple molecular forms of catechol-O-methyltransferase. Evidence for two distinct forms, and their purification and physical characterization // J. Biol. Chem.— 1979.— V. 254.— Pp. 299308.

99. Weinshilboum R.M., Otterness D.M., Szumlanski C.L. Methylation pharmacogenetics: catechol O-methytransferase, thiopurine methyltransferase, and histamine N-methyltransferase // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol.— 1999.—V. 39.—Pp. 19-52.

100. Mannisto P.T., Kaakkola S. Catechol-O-methyltransferase (COMT): biochemistry, molecular biology, pharmacology, and clinical efficacy of the new selective COMT inhibitors // Pharmacol. Rev.— 1999.— V. 51.— Pp. 593-628.

101. Eisenhofer G., Coughtrie M.W., Goldstein D.S. Dopamine sulphate: an enigma resolved // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. Suppl.— 1999.— V. 26.—Pp. S41-53.

102. Rein G., Glover V., Sandler M. Multiple forms of phenolsulphotransferase in human tissues: selective inhibition by dichloronitrophenol // Biochem. Pharmacol.— 1982.—V. 31.—Pp. 1893-1897.

103. Campbell N.R., Loon J.A.V., Weinshilboum R.M. Human liver phenol sul-fotransferase: assay conditions, biochemical properties and partial purification of isozymes of the thermostable form // Biochem. Pharmacol.— 1987.—V. 36.—Pp. 1435-1446.

104. Roy A.B., Trudinger P.A. The biochemistry of inorganic compounds of sulphur // Cambridge: University Press, 1970.— 399 p.

105. Wang P.C., Kuchel O., Buu N.T., Genest J. Catecholamine glucuronidation: an important metabolic pathway for dopamine in the rat // J. Neurochem.— 1983.—V. 40.—Pp. 1435-1440.

106. Eisenhofer G. Catecholamine Metabolism: A Contemporary View with Implications for Physiology and Medicine // Pharmacol. Rev.— 2004.— V. 56.—Pp. 331-349.

107. Novakovic I., Vujcic Z., Bozic T., Bozic N., Milosavic N., Sladic D. Chemical modification of b-lactoglobulin by quinones // J. Serb. Chem. Soc.— 2003.— V. 68.— Pp. 243-248.

108. Xu Y., Stokes A.H., Roskoski R., Vrana K.E. Dopamine, in the presence of tyrosinase, covalently modifies and inactivates tyrosine hydroxylase // J. Neurosci. Res.— 1998.—V. 54,—Pp. 691-697.

109. Graham D.G. Oxidative pathways for catecholamines in the genesis of neu-romelanin and cytotoxic quinones // Mol. Pharmacol.— 1978.— V. 14.— Pp. 633-643.

110. Richard Willstätter A.P. Ueber Chinon-dimethylimin // Chem. Ber.— 1905.— V. 38.— Pp. 2244-2251.

111. Horner L., Teichmann K.-H., Weber K.-H., Geyer E. Zur Kenntnis der o-Chinone, XXV: Darstellung und Eigenschaften von o-Chinonen mit elektro-philen Substituenten // Chem. Ber.— 1965.— V. 98.— Pp. 1233-1245.

112. Wessely F., Budzikiewicz H., Metlesics W. Zur Konstitution der o-Chinondiacetate (2,2-Diacetoxy-cyclohexadienone) // Monatshefte für Chemie / Chemical Monthly.— 1959.—V. 90.—Pp. 121-133.

113. Novakovic I., Vujcic Z., Bozic T., Bozic N., Milic D., Solaja B., Gasic M.J., Sladic D. Protein covalent modification by biologically active quinones // J.Serb. Chem. Soc.— 2004.—V. 69.—Pp. 901-907.

114. Berridge M.V., Tan A.S. Cell-surface NAD(P)H-oxidase: relationship to trans-plasma membrane NADH-oxidoreductase and a potential source ofcirculating NADH-oxidase // Antioxidants & redox signaling.— 2000.— V. 2.— Pp. 277-288.

115. Sun I.L., Navas P., Crane F.L., Morre D.J., Low H. NADH diferric transferrin reductase in liver plasma membrane // J. Biol. Chem.— 1987.— V. 262.—Pp. 15915-15921.

116. Morre D.J., Sun E., Geilen C., Wu L.Y., De Cabo R., Krasagakis K., Orfa-nos C.E., Morre D.M. Capsaicin inhibits plasma membrane NADH oxidase and growth of human and mouse melanoma lines. // Eur. J. Cancer.— 1996,—V. 32A.—Pp. 1995-2003.

117. Morre D. Cell surface NADH oxidases (ECTO-NOX proteins) with roles in cancer, cellular time-keeping, growth, aging and neurodegenerative diseases // Free Radic. Res.— 2003.— V. 37.— Pp. 795-808.