БИОПРЕПАРАТ ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ РОСТА И ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ ОТ БОЛЕЗНЕЙ НА ОСНОВЕ BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS ВКПМ В-11008

Сираева, Зульфия Юнысовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
БИОПРЕПАРАТ ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ РОСТА И ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ ОТ БОЛЕЗНЕЙ НА ОСНОВЕ BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS ВКПМ В-11008
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "БИОПРЕПАРАТ ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ РОСТА И ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ ОТ БОЛЕЗНЕЙ НА ОСНОВЕ BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS ВКПМ В-11008"

Снраева Зульфира Юнысовна

БИОПРЕПАРАТ ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ РОСТА И ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ ОТ БОЛЕЗНЕЙ НА ОСНОВЕ BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS ВКПМ В-11008

03.02.03 - микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 5 НОЯ 2012

Казань-2012

005054984

Работа выполнена на кафедре микробиологии биолого-почвенного факультета ФГАОУВПО «Казанский (Приволжский) федеральный университет»

Научный руководитель:

кандидат биологических наук, доцент - Захарова Наталия Георгиевна Официальные оппоненты:

Багаева Татьяна Вадимовна - доктор биологических наук, профессор, заведующая кафедрой биотехнологии Казанского (Приволжского) федерального университета, Казань;

Дегтярева Ирина Александровна - доктор биологических наук, заведующая лабораторией агроэкологии и микробиологии государственного научного учреждения "Татарский научно-исследовательский институт агрохимии и почвоведения" Российской академии сельскохозяйственных наук, Казань.

Ведущая организация: ГНУ Татарский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии, Казань.

Защита состоится « 15 » ноября 2012 г. в 13.00ч. на заседании диссертационного совета Д 212.081.08 при ФГАОУВПО «Казанский (Приволжский) федеральный университет» по адресу: 420008, г. Казань, ул. Кремлевская, д. 18, главное здание, ауд. 211. Факс 8(843) 238-71-21, 233-78-40. E-mail: zsiraeva@yandex.ru

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке им. Н.И. Лобачевского Казанского (Приволжского) федерального университета по адресу: г. Казань, ул. Кремлевская, д. 35.

Автореферат разослан « СЗ » _о 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

Абрамова З.И.

Актуальность. Ведущий вклад в мировой экологический кризис по загрязненности почв и сельскохозяйственных продуктов питания вносит массовое применение пестицидов и минеральных удобрений (Соколов и др., 2010; Pitann et al., 2009; Frossard et al., 2009). Вместе с тем, в условиях сложной фитосанитарной ситуации на посевах сельскохозяйственных культур, значительной пораженности посевного и посадочного материала и инфицированности пахотных земель фитопатогенными микроорганизмами полный отказ от использования средств защиты растешш и агрохимикатов невозможен (Захаренко, 2012; Hajihasani et al., 2012). Распространение таких опасных болезней, как корневые гнили, мучнистая роса, ржавчина, фузариоз, пятнистости различной этиологии, фитофтороз, бактериозы, часто носит эпифитотийный характер и приводит к чрезвычайно высоким потерям урожая, а заселение почвы комплексами токсинообразующих грибов сопровождается порчей продукции (Говоров и др., 2011; Гагкаева и др., 2011; Торопова и др., 2011; Miller et al., 2009; Petter & McMullen, 2010; Hajihasani et al., 2012).

Однако высокая стойкость пестицидов, неспецифичность их действия и накопление в окружающей среде токсических остатков неизбежно приводит к глубоким изменениям в экосистемах: формированию устойчивых рас возбудителей болезней (Чекмарев, 2012; Heimbach, 2010); уменьшению численности полезных членов микробиоты природных биоценозов (Сысоева и др., 2010); снижению биологической активности почвы (Турусов и др., 2010; Mikanova & Simón, 2009).

В сложившихся условиях мировое сельскохозяйственное производство ориентировано на экологизацию (Bigler, 2010; Pérez-García et al., 2011; Yin et al., 2011; Mohammadi, 2012). Достигнутый к настоящему времени уровень биологизации растениеводства варьирует в отдельных странах от 1.5-2.0 (США) до 9.0-10.0% (Швеция) (Kabaluk et al., 2010). В ряде стран Западной Европы на значительных площадях сельхозугодий реализуется программа полного отказа от применения средств химической защиты или предоставления биометоду значительных преимуществ (Andermatt, 2010; Gessler et al., 2010).

Отставание России в области биологической защиты растений от развитых стран, по мнению исследователей, велико (Говоров и др., 2011; Захаренко, 2011а; Dznn, 2009). В «Концепции развития аграрной науки и научного обеспечения агропромышленного комплекса Российской Федерации на период до 2025 года», принятой РАСХН, важное значение отводится созданию инновационных биопрепаратов по защите растений, которые позволят снизить пестицидную нагрузку на единицу площади и содержание остаточных количеств пестицидов в продукции растениеводства, сохранить биоразнообразие, стабилизировать фитосанитарную обстановку, сократить уровень потерь урожая и увеличить

уровень рентабельности производства (Гончаров, 2011; Говоров и др., 2011; Санин и др., 2012).

Одним из наиболее перспективных направлений в борьбе с возбудителями заболеваний растений является использование биопрепаратов на основе бактерий из рода Bacillus. В настоящее время известен ряд препаратов на основе бацилл (фитоспорин-М, бактофит, гамаир, интеграл и другие), однако в некоторых случаях их применение характеризуется недостаточной фунгицидной активностью против корневых и прикорневых гнилей (Зазимко и Найденов, 2009; Саранцева и др., 2011; Курылева и Фатыхов, 2012), листостеблевых болезней (Зазимко и Долженко, 2011), неспецифической плесневой микрофлоры (Злотников и др., 2007; Саранцева и др., 2011), а также сдвигом равновесия в сообществе микроорганизмов в сторону увеличения возбудителей болезней, сокращению численности сапрофитной почвенной микробиоты, что негативно воздействует на фитосанитарное состояние почвы и снижает урожайность (Кравец и др., 2010; Зазимко и Долженко, 2011).

Самым существенным ограничением многих используемых, в том числе бациллярных, биопрепаратов в рамках экологического земледелия является их функциональная моно- или дивалентность. Вместе с тем, представляет интерес с точки зрения современных агротехнологий применение в сельскохозяйственном производстве биопрепаратов комплексного действия, обладающих несколькими видами полезной активности (фунгицидной, рострегулирующей, азотфиксирующей, фосфатмобилизующей, позитивным действием на показатели плодородия почвы) (Петров и Чеботарь, 2011; Todd et al., 2010; Pérez-García et al., 2011; Mohammadi, 2012).

В связи с вышеизложенным, целыо настоящей работы явилось создание и обоснование эффективности применения в сельскохозяйственном производстве биопрепарата комплексного действия на основе бактерий из рода Bacillus.

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

1. Выделить региональные штаммы бактерий из рода Bacillus и отобрать штамм, обладающий антагонистической активностью по отношению к фитопатогенным микромицетам, способностью синтезировать ферменты (хитиназу, фосфатазу, нитрогеназу), не проявляющий токсического действия по отношению к растительным и животным объектам.

2. Разработать технологию получения жидкой препаративной формы биопрепарата с использованием в качестве источника сырья отходов промышленных производств и подобрать специальные компоненты, обеспечивающие сохранение жизнеспособности штамма-продуцента биопрепарата и его активностей в процессе хранения.

3. Определить влияние биопрепарата на показатели биологической активности почвы и ее плодородие (активность потаенных ферментов,

способность к мобилизации фосфатов из труднорастворимых соединений фосфора и нитрогеназную активность почвы).

4. Установить уровень пораженности семян различных сортов яровых зерновых культур фитопатогеннымн микроорганизмами до и после обработки зерен биопрепаратом.

5. Определить влияние химических фунгицидов, инсектицидов и гербицидов на жизнеспособность клеток штамма-продуцента биопрепарата и эффективность протравливания семян яровых зерновых культур при совместном применении биопрепарата с химическими фунгицидами, взятыми в производственных и половинных от рекомендованных в производстве дозах.

6. Оценить эффективность применения биопрепарата в качестве протравителя семян в условиях производственных испытаний.

Научная новизна. Впервые выделен региональный штамм, относящийся к виду Bacillus amyloliquefaciens, одновременно обладающий комплексом свойств: антагонистической активностью к широкому спектру возбудителей заболеваний растений; стимулирующим действием на рост и развитие растений; способностью фиксировать молекулярный азот в чистой культуре, воспроизводимой в условиях почвенного экоценоза; фосфатмобилизующей активностью; позитивным действием на ферментативную активность почвы; не проявляющий токсического эффекта на растительные и животные объекты; совместимый с используемыми в сельскохозяйственном производстве фунгицидами на основе манкоцеба, мефеноксама, карбендазима, беномила, хлорокиси меди, флудиоксонила, тирама, тритиконазола, инсектицидами на основе тиаметоксама, бенсултапа, ацетамиприда, фипронила, гербицидами на основе глифосата, клопиралида.

Впервые разработан биопрепарат, способствующий при протравливании семян яровых культур пшеницы и ячменя снижению уровня их пораженности на 96.5-100.0% и обеззараживанию зерен от возбудителя оливковой плесени (Cladosporium herbarum), черной (Xcmthomonas sp.) и базальной пятнистости (Pseudomonas sp.) зерновых культур, плесневых грибов из родов Pénicillium и Мисог. Показано, что одним из механизмов реализации антагонистического действия В.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 является синтез хитиназы.

Научно-практическая значимость работы. Результаты работы способствуют решению проблемы стабилизации фитосанитарного состояния семенного фонда и посевов зерновых культур, повышения уровня почвенного плодородия и урожайности растений. Штамм-продуцент биопрепарата депонирован в ВКПМ при ФГУП ГосНИИгенегика (Москва) под коллекционным номером ВКПМ В-11008. На основе В.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 обоснована технология производства биопрепарата в жидкой форме с использованием в качестве сырья для культивирования бактерий отхода

зерноперерабатывающего производства (пшеничные отруби) и в качестве стабилизатора биомассы, консерватора и прилипателя гуматов, обеспечивающих продление срока хранения биопрепарата.

Отработан способ применения (протравитель семян) и норма расхода (1.5 л/т) биопрепарата для улучшения фитосанитарного состояния семенного фонда яровых зерновых культур и посевов яровой пшеницы. Показанная нами в лабораторных исследованиях и производственных испытаниях эффективность предпосевной обработки биопрепаратом зерен яровой пшеницы позволяет нам рекомендовать биопрепарат к использованию в сельскохозяйственном производстве в качестве протравителя семян. Установленная в работе эффективность совместного применения биопрепарата с химическими фунгицидами, взятыми в половинных от рекомендуемых нормах расхода, а также совместимость с гербицидами и инсектицидами, позволяют нам рекомендовать биопрепарат к использованию в интегрированных системах защиты растений.

Положения, выносимые на защиту:

1. Из выделенных изолятов бацилл штамм B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 обладает антагонистической активностью к широкому спектру возбудителей заболеваний растений и стимулирующим действием на рост и

развитие растений.

2. Применение биопрепарата, созданного на основе B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008, позволяет повысить уровень почвенного плодородия и режим минерального питания растений вследствие наличия фосфатмобилизующей активности, повышения активности почвенных ферментов, способности к фиксации молекулярного азота.

3. Биологическая эффективность биопрепарата, используемого в качестве протравителя семян яровой пшеницы при норме расхода 1.5 л/т зерна, против основных болезней яровой пшеницы составляет в среднем 56.2-82.4%.

4. Биопрепарат совместим с химическими фунгицидами, инсектицидами и гербицидами. Протравливание семян зерновых культур баковыми смесями бацизулина с фунгицидами сопровождается устранением ретардантного действия фунгицидов.

Связь работы с научными программами и собственный вклад автора в исследования. Работа выполнена в соответствии с тематическим планом КФУ, регистрационный номер 01200955076, «Механизмы регуляции функциональной активности клеток». Научные положения диссертации и выводы базируются на результатах собственных исследований автора.

Апробация работы. Материалы диссертации представлены на II съезде Хитинового общества и VII Международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана» (Санкт-Петербург-Репино,

2003); Международной конференции «Роль почвы в формировании естественных и антропогенных ландшафтов» (Казань, 2003); научно-практической конференции «Биотехнологии - на поля Татарстана» (Казань,

2004); Международной научной конференции «Экология и биология почв» (Ростов-на-Дону, 2004); II Международной научной конференции «Биотехнология - охране окружающей среды» и III школе-конференции молодых ученых «Сохранение биоразнообразия и рациональное использование биологических ресурсов» (Москва, 2004); IX Международной конференции «Окружающая среда для нас и будущих поколений» (Самара, 2004); Всероссийской научной конференции «Современные аспекты экологии и экологического образования» (Казань, 2005); Международной научной конференции «Проблемы устойчивого функционирования водных и наземных экосистем» (Ростов-на-Дону, 2006).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 печатных работ, из них 6 статей в центральных отечественных рецензируемых журналах: Вестник Российской Академии сельскохозяйственных наук, Токсикологический вестник и Ученые записки Казанского университета, секция естественные науки.

Место выполнения работы. Казанский (Приволжский) федеральный университет.

Структура Ii объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов и обсуждения, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Работа изложена на 196 страницах машинописного текста, включает 16 рисунков и 32 таблицы. Библиография содержит 297 наименований, в том числе 98 - зарубежных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В качестве основных объектов: исследования использовали выделенные из различных экологических ниш региональные штаммы бактерий из рода Bacillus, коллекционные (ВКМ, Москва; ВНИИЗР, Санкт-Петербург) и региональные штаммы фитопатогенных микромицетов, семена различных сортов яровых культур пшешщы и ячменя, белые беспородные крысы, химические фунгициды, гербициды, инсектициды и почвенные образцы чернозема выщелоченного тяжелосуглинистого, отобранного на территории Республики Тататрстан.

Определение уровня антагонистической активности бактерий. Антагонистическую активность штаммов Bacillus выявляли методом лунок (Егоров, 1994). Оценку антагонистичгской активности осуществляли на 7-е сут инкубации по диаметру стерильных зон в грибном газоне, образующихся вокруг лунок.

Определение ферментативной активности бактерий. Общую хитиназную активность определяли по количеству образующихся в результате гидролиза хитина редуцирующих Сахаров с динитросалицилловым реагентом (ДНС-мегод) (Актуганов, 2000). Удельную активность определяли как отношение величины общей ферментативной активности в культуральной жидкости к величине оптической плотности роста (СФ-46, >-=590 нм) и

выражали в усл.ед.

Активность ФМЭ определяли с использованием в качестве субстрата п-нитрофенилфосфата (Лещинская, 1980) и выражали в мкМ расщепленного субстрата, гидролизуемого 1 мл ферментного раствора за 1 мин инкубации. Для пересчета использовали калибровочную кривую зависимости поглощения раствора при >.=410 нм от концентрации «-нитрофенола.

Нитрогеназную активность Bacillus определяли ацетиленовым методом, который основан на способности ннтрогеназы восстанавливать ацетилен до этилена в количестве, пропорциональном количеству азота, с использованием газового хроматографа (Калининская и др., 1981). Активность ннтрогеназы

выражали в мкг Ы2/млхч.

Определение фитотоксическои активности штаммов Bacillus.

Фитотоксическую активность штаммов Bacillus исследовали методом замачивания семян растений и по методу Берестецкого (Лещинская, 1993). Наличие фитотоксинов в составе выделяемых бактериями метаболитов выявляли по накоплению биомассы наземной и корневой частей проростков, показателям всхожести и энергии прорастания семян.

Выявление цитогенотокеической активности штаммов Bacillus. Цитогенетическую токсичность выявляли по изменению митотической активности клеток пророщенных семян лука репчатого Allium сера (сорт Каба) и скерды зеленой Crépis capillaris (Дубинина, 1978). Анализ аберраций проводили метафазным методом на пророщенных семенах скерды (Семенов и др., 2000).

Определение токсичности штаммов Bacillus для теплокровных животных. Определение параметров токсичности штаммов Bacillus для теплокровных животных проводили в соответствии с методическими указаниями (Методические указания, 1991). Параметры острой токсичности изучали при однократном внутрижелудочном введении бактериальных культур в дозах l.OxlO10, 0.5x10ю, 0.25х1010 КОЕ/кг массы тела животного (по 12 самцов и 12 самок на дозу) с последующим наблюдением за животными в течение 14 суток, хронической токсичности - при внутрижелудочном введении малых доз (1.0x10s, 1.0x107, 1.0x10б КОЕ/кг) по 5 раз в неделю в течение 6 месяцев (по 12 самцов и 12 самок на дозу). Определение острой дермальной токсичности проводили путем накожной аппликации салфетки, пропитанной

бактериальной культурой без разведения или 50%-ным водным раствором (в дозах 0.25х1010 или 0.125><1010 КОЕ/кг соответственно). В контрольных вариантах использовали стерильную воду в эквивалентном объеме. Дисбиотическое действие штаммов Bacillus в остром, хроническом эксперименте и при изучении кумулятивного эффекта выявляли путем анализа бактериоценоза кишечника. Для выявления энтеробакгерий использовали селективные среды: Эндо, Левина, Плоскирева, Олькешщкого. Гемолнзирующую и кокковую микрофлору выявляли на МПА с добавлением 5% донорской крови. Анаэробы и микроаэрофилы выделяли в специальных полужидких средах для выращивания бифидобактерий и лактобактерий. Микроскопическое изучение структуры сердца, легких, селезенки, тимуса, лимфоузлов, печени, почек, кишечника у животных, получивших максимальные испытываемые дозы, проводили после приготовления гистологических препаратов (Ромейс, 1953). Диссеминационный эффект в остром и хроническом экспериментах определяли методом отпечатка частей органов на поверхность МПА. Клинические анализы периферической крови белых крыс проводили согласно (Меньшиков, 1987).

Определение таксономической принадлежности штамма-продуцента биопрепарата. Фенотипичесюте признаки штамма-продуцента биопрепарата изучали согласно (Сайманова и Захарова, 1980; Захарова и др., 2005). Таксономическую принадлежность штамма определяли при помощи анализа сигнатурных нуклеотидных последовательностей генов 16S рРНК и gyrA в базе данных GenBank/EMBL/DDBJ (http://wvvw.ncbi.nlm.nih.govt с помощью множественного выравнивания в программе BLASTn

(http://www.ncbi.n1m.nih.gov/BLASTA). ПЦР-амплификацию фрагментов генов проводили по стандартной методике (Sambrook et al., 2001) в циклере MJ Mini Personal Thermal Cycler (Bio-RAD, Сингапур) с использованием синтезированных ООО «НПФ Синтол» (Россия, Москва) универсальных прокариотических праймеров (Weisburg et al., 1991) в случае гена 16S рРНК и видоспецифических праймеров (Clerck et al., 2004) в случае гена gyrA.

Продукты ПЦР-амплификации анализировали электрофорезом в 1%-м агарозном геле. Визуализацию ДНК проводили в УФ-свете на трансиллюминаторе UV Transilluminator TFP-MYWL (Vilber lourmat, Франция), регистрировали с помощью фотографической системы Gel Imager GI-2 (Helicon, Japan). Фрагменты гена из агарозного геля выделяли с помощью набора AxyPrep DNA Gel Extraction Kit (AxyGen biosciences, USA) согласно протоколу фирмы-изготовителя. ДНК-секвенирование проводили с использованием универсальных праймеров (Weisburg et al., 1991) в случае гена 16S рРНК и видоспецифических праймеров (Clerck et al., 2004) в случае гена gyrA, синтезированных ООО «НПФ Синтол» (Россия, Москва).

Условия хранения и культивирования штамма-продуцента биопрепарата. Штамм-продуцент биопрепарата хранили в музейной культуре на МПА под слоем минерального масла при температуре +4°С. Препарат получали методом глубинного культивирования. В качестве посевного материала использовали суточную культуру с титром не менее 1.0x10' КОЕ/мл, который вносили в количестве 5-10 об.%, дающем оптическую плотность суспензии 0.1 ед. (1=590 нм, /=10 мм). Культивирование бактерий проводили в колбах Эрленмейера емкостью 250 мл при соотношении объёма среды к объёму

колбы 1:7.5 в условиях аэрации (180 об/мин).

Подбор оптимальной для культивирования штамма-продуцента питательной среды. При подборе оптимальной для культивирования бактерий питательной среды в качестве экспериментальных использовали мелассную, пшеничную, картофельно-глюкозную среды (Семенов, 1990), мелассно-кукурузную и пшенично-кукурузную с дополнительным внесением в состав исходных сред кукурузного экстракта из расчета 1.0 г/л. Титр жизнеспособных клеток (N) определяли путем высева предельных разведений клеточной суспензии на МПА с последующим подсчетом КОЕ в 1 мл среды; количество спор - методом высева на МПА предельных разведений суспензии, выдержанной при температуре 90°С в течение 45 мин, с последующим подсчетом КОЕ в 1 мл (Звягинцев, 1991). Аминный азот и содержание Сахаров определяли общепринятыми методами (Ксренман, 1975).

Подбор специальных компонентов биопрепарата. В экспериментах по подбору специальных компонентов биофунгицида в бактериальную культуру вносили ПВС (Sigma, USA), Na-КМЦ (Sigma, USA) и СГК (Селен, Россия) до концентрации 2.0 и 3.0 об.%. Оценивали гитр жизнеспособных клеток и спор, антагонистическую и фитотоксическую активность через 7 сут после внесения.

Определение влияния биопрепарата на ферментативную активность почвы. Обработку почвы биопрепаратом проводили согласно рекомендациям (Хазиев, 2005). Уреазную активность почвы регистрировали, применяя метод Галстяна; протеолитическую активность почвы определяли методом Галстяна и Арутюняна; целлюлазную активность - биохимическим методом, используя в качестве субстрата Na-КМЦ (Хазиев, 2005). Контролем служила почва, стерилизованная сухим жаром в режиме 180°С, 1 ч.

Определение активности азогфиксацин почвы. Активность азотфиксации в почве определяли ацетиленовым методом, который основан на способности нитрогеназы восстанавливать ацетилен до этилена в количестве, пропорциональном количеству азота (Звягинцев, 1991).

Определение фосфатмобилизующей активности штамма-продуцента в жидких питательных средах проводили в условиях стационарного культивирования в жидкой среде Муромцева, содержащей неорганические

(Са3(Р04)2, РеР04, А1Р04) или органические (фитат глицерофосфат)

соединения фосфора (500 мг/л среды). Среды засевали стандартными взвесями культуры в экспоненциальной фазе роста из расчета 2.0хЮ6 КОЕ/мл. Контролем служили среды с фосфатом без инокулята. В модельном опыте образцы почвы инокулнровали бактериальной суспензией (2.0x107 КОЕ/г абсолютно сухой почвы). Через 1 и 3 месяца инкубации определяли содержание подвижного фосфора по методу Кирсанова (Агрохимические методы, 1975).

Изучение эффективности применения биопрепарата в качестве протравителя семян зерновых культур. Семена яровых культур пшеницы и ячменя протравливали общепринятым полусухим способом (Смелик и др., 2011) при норме высева всхожих семян 6 млн. зерен на 1 га, нормах расхода биопрепарата 1.5 л/т зерна (расход рабочей жидкости - 10 л/т), эталонных фунгицидов - в соответствии с рекомендованными (Список, 2012). Оценку пораженности обработанных и необработанных семян зерновых культур проводили, используя метод анализа семян во влажной камере и метод развития болезней проростков зерновых культур (ГОСТ 12044-93).

Влияние пестицидов на жизнеспособность клеток бактерий. Влияние пестицидов на жизнеспособность клеток бацилл оценивали методом чашечного подсчета (Луста, 1990). Для этого готовили смеси бактериальной суспензии (конечный титр 5.0*109 кл/мл) с фунгицидами (максим, премис тотал, ридомил МЦ, ТМТД, феразим, фундазол, хлорокись меди), инсектицидами (актара, базудин, банкол, корадо, моспилан, регент) и гербицидами (лонтрел, раундап).

Определение эффективности протравливания семян биопрепаратом совместно с химическими фунгицидами проводили путем обработки зерен пшеницы (сорт Люба) и ячменя (сорт Раушан) баковыми смесями биопрепарата 1.5 л/т семян (1.5-2.9x107 КОЕ/зерно) с половинными от производственных дозами ТМТД, премиса тотал, фундазола, феразима (Список, 2012).

Определение эффективности биопрепарата в защите яровой пшеницы от болезнен. Производственные испытания биопрепарата в качестве протравителя семян проводили по методике полевых и вегетационных опытов (Доспехов, 1985) и в соответствии с указаниями (Сычев и др., 2009). Эталонами сравнения служили фитоспорин-М, п (0.2 кг/т), дивиденд стар, кс (1.0 л/т), колфуго дуплет, кс (2.0 л/т), премис двести, кс (0.2 л/т) (Список, 2012). Площадь делянок по каждому из вариантов - 1.5 га, повторность пятикратная, предшественник - яровой ячмень. Учет распространенности и интенсивности развития болезней пшеницы, а также фенологические наблюдения за ростом и развитием растений осуществляли в соответствии с рекомендациями ВНИИЗР (Ишкова и др., 2002) и Госхимкомиссии РФ (Методические указания, 1985). Структуру урожая определяли по 100 растениям, отобранным из средних проб сноповых образцов. Содержание клейковины и белка в зерне оценивали

стандартными методами (Личко, 2004). Экономическую эффективность биопрепарата рассчитывали как разность между стоимостью сохраненного урожая зерна на единицу площади на обработанном и контрольном вариантах.

Статистическую обработку результатов осуществляли с помощью электронных таблиц Excel и программы Origin 7.0. Достоверность различий оценивали с помощью t-критерия Стьюдента (р<0.05). При статистической обработке результатов производственных испытаний (Доспехов, 1985) определяли средние арифметические и их доверительные интервалы для уровня вероятности 95%. Для оценки существенности частных различий вычисляли ошибку опыта, ошибку разности средних и наименьшую существенную разность (НСР05) в абсолютных величинах для 5%-ного уровня значимости.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Оцепка антагонистической активности штаммов Bacillus

Путем многоступенчатого скрининга по комплексу полезных признаков из выделенных региональных изолятов бацилл нами был отобран штамм Bacilliis sp.3, проявляющий высокий уровень антагонистической активности к широкому спектру возбудителей заболеваний различных сельскохозяйственных культур: Fusarium graminearum, F.oxysporum, F.sambucinum, F.solani, Bipolaris sorokiniana, Alternaría alternata, A.solani, Rhizoctonia solani, Botrytis cinerea, Verticillium dahliae, Cladosporium herbariim. Oospora pustulans, Colletotríchiim sp. Диаметр зон ингибировашм роста коллекционных штаммов фитопатогенных грибов варьировал в зависимости от вида микромицета от 34.6±2.3 до 41.8±2.5 мм, региональных — от 16.9±0.5 до 38.6±1.8 мм.

Оценка хптиназной, фосфатазной п нитрогеназнои активностей штамма Bacillus sp.3

В последние годы проводится интенсивное исследование гидролитического комплекса бациллярных ферментов (хитиназы, протеазы, целлюлазы, глюконазы и др.) (Chebotar et al., 2009; Solanki et al, 2012), в котором основную роль в разрушении хитина клеточных стенок грибов несет хитиназа (Мелентьев и др., 2001; Balhara et al., 2011). Нами было установлено, что удельная активность хитиназы в культуральной жидкости Bacillus sp.3 составила 14.9±1.0, 4.1±0.3 и 4.8±0.2 усл. ед. на 6, 8 и 10 сут инкубации соответственно. Это дает нам основания предполагать, что в основе реализации антагонистического потенциала штамма может лежать синтез хитиназы.

К числу перспективных для создания биопрепаратов микроорганизмов относятся штаммы бацилл, способные переводить труднодоступные соединения фосфора в доступные для растений формы (Pérez-García et al., 2011; Mohammadi, 2012). В связи с этим, нами была изучена способность Bacillus sp.3 синтезировать фосфатазу. Согласно результатам, фосфатазная активность

Bacillus sp.3 составила 0.56±0.07, 0.18±0.01 и 0.26±0.02 усл. ед. на 6, 12 и 18 ч инкубации соответственно.

Активность нитрогеназы в культуральной жидкости Bacillus sp.3 на 8 и 16 ч инкубации составляла 4.1±0.3хЮ2 и 5.9±0.04х10"2 мкг Ы2/млхч соответственно. Пик активности зарегистрирован в культуре на 24 ч роста (12.0±0.07х10 мкг N2Am><4). В течение последующего периода культивирования активность фермента снижалась и составила на 96 ч 3.4±0.04хЮ"2 мкг Nz/млхч.

Токсикологическая оценка штаммов Bacillus

В дальнейшей работе нами была проведена токсикологическая оценка безопасности применения Bacillus sp.3 для растительных и животных объектов.

Согласно полученным данным, Bacillus sp.3 не оказывал токсического действия в отношении проростков кукурузы и гороха (стандартных тест-объектов) и проявил стимулирующее действие на растения пшеницы, которое выражалось в повышении всхожести (на 26% относительно контроля) и энергии прорастания (на 15%) семян, увеличении биомассы наземной и корневой частей растений (на 27 и 61% соответственно).

Анализ клеток корешков Crépis capillaris при их проращивании в клеточной суспензии Bacillus sp.3 без разведения позволил выявить отсутствие ингибирующего действия на митотическую активность. При разведении суспензии в соотношении 1:10, 1:100, 1:200 митотнческий индекс достоверно увеличивался в 1.2-2.5 раза по сравнению с аналогичными разведениями среды.

Результаты клинических наблюдений общей физиологической активности и массы тела животных, гематологические и биохимические анализы крови, патоморфологические и гистологические исследования показали отсутствие негативного влияния Bacillus sp.3 на теплокровные объекты. Штамм не диссеминировал в кровь и внутренние органы экспериментальных животных. Это соответствует данным литературы об отсутствии у штаммов-продуцентов биопрепаратов адаптационной способности к тканевому размножению (Омельянец, 1992). Внутрижелудочное введение бактериальной культуры ни в одном из вариантов опыта не приводило к нарушениям количественных и качественных взаимоотношений кишечной микрофлоры организма. Согласно гигиенической классификации пестицидов, штамм относится к пестицидам IV класса опасности (малоопасные).

Выраженная антагонистическая активность в отношении фитопатогенных грибов, способность к синтезу ферментов, отсутствие токсического действия штамма Bacillus sp.3 позволили нам рассматривать изолят в качестве продуцента биопрепарата. На основании анализа сигнатурной последовательности гена gyrA штамм идентифицирован нами как B.amyloliquefaciens и депонирован во

Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов при ФГУП ГосНИИгенетика под коллекционным номером ВКПМ В-11008.

Технология получения и оценка стабильности при хранении жидкой препаративной формы биопрепарата

Одним из приоритетных способов получения биопрепаратов является глубинное культивирование штаммов-продуцентов (Захаренко и др., 2004).

Как видно из рис. 1, при выращивании бактерий на пшенично-кукурузной среде на 18 ч инкубации выход биомассы составил 5.9+0.3 г/л и достоверно не изменялся в стационарной фазе. Количество жизнеспособных клеток с конца экспоненциальной фазы роста до конца стационарной фазы варьировало от 1 28±0 02 до 1.29±0.04хЮ10 КОЕ/мл. Выход спор на 18, 20, 22, 24 и 26 ч инкубации составил 50.8, 84.4, 92.2, 93.7 и 94.6% соответственно. Содержание остаточного сахара в среде снизилось с исходного уровня 23.8% до 13.1%, аминного азота - с 15.1 до 1.9% и не изменялось при дальнейшем культивировании.

¡НШШ

биомасса г/л; рН

12 16 20 24 28 32

—■ - количество жизнеспособных клеток —■— количество спор

-1-1—Г"П—г—

12 16 20 24 28 32

время, ч

- биомасса

- рН среды

Рис. 1. Динамика роста и интенсивности спорообразования, накопления биомассы и изменения рН среды при культивировании В.атуЬНдифаеп* ВКПМ В-11008 на пшенично-кукурузной среде

Изучение режимов культивирования В.атуЫ'щифсшт ВКПМ В-11008 показало, что максимальная антагонистическая активность и наибольший выход биомассы достигается при 28°С (Табл. 1), максимальное проявление фунгистатической активности - при кислотности среды в интервале 6.0-8.0, а ростовая активность в диапазоне рН от 5.0 до 9.0 (Табл. 1). Это рассматривается нами как преимущественная характеристика штамма-продуцента биопрепарата

в условиях совместного использования со химическими пестицидами, при смешивании которых возможно снижение кислотности до рН 5.5-6.0 (Хайбуллин, 2000), а также в условиях прогрессирующего закисления пахотных почв (Лукманов и др., 2010; Чекмарев и др., 2011).

Таблица 1.

Влияние температуры культивирования и рН питательной среды на антагонистическую активность В.ату/оИдис/ааеги ВКПМ В-11008 при выращивании на

пшенично-кукурузной среде (26 ч инкубации)

Диаметр зон ингибировалия роста, мм

Параметр культивирования Bipolaris Alternaría Fusarium

sorokiniana alternata graminearum

Температура, °С 20 19.4±1.0 26.7±0.8 35.5±0.8

28 24.0±0.8 33.1±0.7 40.2±0.9

37 18.8±0.6 28.5±1.1 36.0±0.8

рн 5.0 20.7±0.9 30.2±0.8 35.4±0.7

6.0 25.9±0.8 36.2±1.1 43.8±1.1

7.0 26.5±1.1 37.0±1.0 44.Ш.2

8.0 24.6±1.0 35.9±0.7 42.9±0.8

9.0 21.5±0.9 32.0±0.6 36.0±0.7

С целью сохранения жизнеспособности B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008, стабилизации микробной биомассы и увеличения адсорбционной способности клеток и спор нами была проведена сравнительная оценка влияния внесения в состав бактериальной суспензии ПВС, Na-КМЦ и СГК, взятых в концентрациях 2.0 и 3.0 об.%. Внесение в бактериальную культуру СГК (2.0%) в качестве стабилизатора биомассы, пленкообразователя и прилипателя обеспечивало сохранение жизнеспособности клеток B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 на уровне 99%, исходной антагонистической и ростстимулирующей активностей. Биопрепарат в жидкой препаративной форме, в состав которого были введены СГК (2.0 об.%), получил рабочее название бацизулин.

Действие бацизулина на ферментативную активность почвы Важным показателем уровня эффективного плодородия почвы является ее ферментативная активность, отражающая деятельность почвенной биоты (Бабушкина и др., 2008). В связи с этим, исследовали влияние биопрепарата на уреазную, протеазную и целлюлозолитическую активности почвы.

Как видно из данных, представленных на рис. 2, на 1 сут после внесения биопрепарата в почву происходит резкое увеличение уреазной активности — на 86.0% по сравнению с контролем. На 7 сут эффект стимулирования активности уреазы снижается до 48.4%. На 15 сут выявлено повышение уреазной активности до 72.2% по сравнению с контролем и последующее понижение на 30 и 45 сут до уровня контроля.

0,8 90

0 1 7 15 30 45 сутки ■ контроль КЗ бацшулин

Рис. 2. Влияние бацизулина на уреазную активность почвы

Внесение биопрепарата оказывает незначительное влияние на активность протеазы на 1, 7, 15 сут в сторону ее увеличения, не превышающего 24.3% относительно контроля (Рис. 3). Однако на 30 и 45 сут происходит усиление активности фермента (на 50.5 и 59.0% соответственно).

0 1 7 15 30 45

сутки

■ контроль К] бацизулин

Рис. 3. Влияние бацизулина на протеазную активность почвы

Важной характеристикой трансформации органического вещества является проявление целлюлозолитической активности в почве (Бабушкина и др., 2008). Данные проведенных нами исследований показали, что внесение биопрепарата оказывает достоверное стимулирующее действие на активность почвенной целлюлазы (от 10.6 до 23.8% по сравнению с контролем).

Влияние бацизулина на нитрогеназную активность почвы

Определение влияния биопрепарата на процесс потенциальной азотфиксации показало, что наибольший эффект стимулирования нитрогеназной активности на протяжении опыта отмечался на 1, 7 и 15 сут -47.3, 88.6 и 30.7% соответственно по сравнению с контролем (Рис. 4).

100 80

3 60

S" о к

§ 40

Ъй

ч. 20 О4

я а

15 30 45 сутки

сутки

I контроль

Нбацизулин

Рис. 4. Влияние бацизулина на нитрогеназную активность почвы

Солюбилизация штаммом B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 труднорастворимых органических и неорганических соединений фосфора

Штамм B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 характеризуется способностью к мобилизации фосфора из его труднодоступных органических и неорганических соединений с накоплением в питательной среде Р205 за 6 сут инкубации в количестве от 32 до 230 мг/л (Табл. 2, 3), что сопоставимо с солюбилизирующей активностью коммерческих штаммов бацилл, входящих в состав биоудобрений (Prassanna et al., 2011; Mohammadi, 2012).

Таблица 2.

Накопление Р205 в процессе pocrii B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 в средах с

Источник фосфатов в питательной среде Содержание жизнеспособных клеток, КОЕ/мл Накопление Р2О5 в культуральной жидкости, мт/л pH

0 сут (хЮ6) 6 сут (*109) 3 сут 6 сут 0 сут 6 сут

Фитин 2.0±0.15 0.5±0.18 32.1±2.4 62.9±4.7 7.0 6.0

Глицерофосфат 2.0±0.15 3.2±0.24 58.3±4.2 184.0±5.5 7.0 5.5

Таблица 3.

Накопление Р2О5 в средах с труднодоступными неорганическими соединениями фосфора в _процессе развития B.amyloliquefaciens ВКГТМ В-11008

Источник фосфатов в питательной среде Содержание жизнеспособных клеток, КОЕ/мл Накопление Р2О5 в культуральной жидкости, мг/л pH

х10' 0 сут х10ч 6 сут 3 сут 6 сут 0 сут 6 сут

Са3(Р04)2 2.0±0.15 2.5±0.05 88.0±3.2 230.3±5.7 7.0 5.6

А1Р04 2.0±0.15 1.6±0.10 48.4±1.8 86.8±4.0 7.0 5.3

FeP04 2.0±0.15 1.0±0.10 35.9±2.0 54.5±3.8 7.0 5.0

По доступности для B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 органические соединения фосфора распределяются следующим образом: глицерофосфат > фитин (Табл. 2), а минеральные: Са3(Р04)2 > А1Р04 > FeP04 (табл. 3). Следует отметить наличие способности B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 растворять фосфат железа и алюминия, так как, по данным литературы, продуценты многих биопрепаратов на основе B.suttilis (фитоспорин-М, интеграл и другие) не могут растворять FeP04, а 10 из них - также и Al РО4 (Egorshina et al., 2011).

Возможность усиления фосфорного питания растений путем мобилизации труднодоступных соединении фосфора в пахотном слое дерново-подзолистой почвы изучали в модельном опыте. При внесении бацизулина суммарное содержание подвижных форм фосфора через 1 и 3 месяца инкубации превысило контрольный уровень на 24 и 37 мг/кг почвы.

Солюбилизация соединений фосфора сопровождается уменьшением рН (Табл. 2, 3), что, по нашему мнению и мнению других исследователей (Prassanna et al., 2011; Mohammadi, 2012), указывает на возможную зависимость солюбилизации фосфатов штаммом B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 от образования кислот. Известно, что снижение рН играет ведущую роль в процессе растворения Са3(Р04)2, в то время как при растворении А1Р04 и FeP04 ключевыми являются процессы хелатообразования (Pérez-García et al., 2011). Таким образом, можно предполагать наличие у штамма трех механизмов солюбилизации фосфора: изменение рН почвенного раствора за счет выделения кислот и хелатирование катионов, входящих в состав соединений фосфора, с последующим освобождением фосфат-аниона под действием фосфатазы.

Оценка эффективности использования биопрепарата бацнзулнн в качестве протравителя семян зерновых культур Использование препаратов в качестве протравителей предусматривает необходимость оценки их эффективности с учетом исходного инфекционного фона посевного материала (Торопова и др., 2011). Фитопатологический анализ

семян различных сортов яровой пшеницы и ярового ячменя, используемых в качестве посевного материала в РФ в 2004 году, показал, что зараженность семян исследуемых культур возбудителем черни (род Alternaria) варьировала в зависимости от сорта ярового ячменя в пределах от 24.0 до 83.5% и пшеницы от 29.5 до 100.0%. Наиболее пораженными возбудителем корневой гнили (B.sorokiniana) были семена пшеницы сортов Омская 32 (79.5%) и Казанский Юбилейный (87.5%), ячменя сортов Раушан (77.0%), Омский голозерный 1 (90.0%) и Рахат (96.5%); наименее - сорт Казахстанская 10 (3.5%). По результатам фитоэкспертизы, зараженность семян сортов Люба, Лада, Казанский Юбилейный, Рахат фузариозом составила 56.0, 65.0, 67.5 и 62.5%.

Доминирующее положение среди микромицетов, вызывающих плесневение семян, занимали представители рода Pénicillium ti Мисог racemosus. К особенно зараженным следует отнести сорта Казахстанская 10 к Челябинский 99, пораженность которых пенициллезом достигала 87.0 и 89.5%, мукоральной плесенью - 34.0 и 35.0% соответственно. Содержание на семенах пшеницы грибов из рода Aspergillus составляло от 2.5 до 24.0%. Зараженность сортов ячменя в отдельных случаях (Зазерский-85) достигала 39.0%. Пораженность зерна пшеницы исследуемых сортов, а также ячменя сортов Омский голозерный 1, Челябинский 99 и Вереск возбудителем оливковой плесени (C.herbarum) находилась в пределах от 2.5 до 16.5%. Доля возбудителя сухой гнили (p.Nigrospora) в комплексе микромицетов, населяющих семена пшеницы, составляла от 7.5 до 28.0% в зависимости от сорта. На семенах были обнаружены возбудители пятнистости листьев (Curwlaria spp.), розовой плесени (Trichotecium roseum), серой гнили (Botiytis spp.) и др.

На зернах пшеницы сортов Казахстанская 10 и Омская 32 доля семян, инфицированных возбудителем черной пятнистости (Xanthomonas translucens), составляла 23.0 и 53.0% соответственно, других сортов - от 3.0 до 18.0%.

Протравливание биопрепаратом бацизулин семян сортов Казанский Юбилейный. Казахстанская 10, Рахат и Вереск привело к их полному обеззараживанию. Пораженность семян пшеницы сортов Омская 32, Люба, Лада и ячменя сортов Раушан, Омский голозерный 1, Челябинский 99, Московский-2, Зазерский-85, Нутанс-778 возбудителем обыкновенной корневой гнили (Bipolaris) снизилась по сравнению с контролем в зависимости от сорта на 93.5-100.0%; фузариозом (Fusarium) - на 96.2-100.0%; альтернариозом (Alternaria) - на 96.1-100.0%. Применение бацизулина способствовало обеззараживанию семян от возбудителя аспергиллеза (Aspergillus), септориоза (Septoria) и оливковой плесени (Cladosporium).

Обработка зерен различных культур фунгицидом максим вызвала снижение их пораженности отдельными фитопатогенными и плесневыми

грибами на 73.3-100.0% по сравнению с контролем, фитоспорином-М - на 50.078.8% колфуго супер колор - на 33.3-63.6%, планризом - на 16.7-52.6%.

Совместное применение биопрепарата с пестицидами

В настоящее время многие исследователи придерживаются мнения о необходимости совместного использования биопрепаратов и химические пестицидов (Захаренко, 2011а; Чулкина и др., 2012; Zihlmann et al., 2010). В связи с этим нами было изучено влияние пестицидов на жизнеспособность клеток B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008.

Согласно полученным результатам, фунгициды феразим, ридомил голд МЦ и фундазол, инсектициды актара, банкол, базудин, моспилан, гербициды раундап и лонтрел-300 не оказывгши негативного воздействия на жизнеспособность клеток B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008. При использовании премиса тотал и максима в производственной и половинной дозах показатель жизнеспособности снижался на 1 сут зависимости от фунгицида и дозы на 7-12%, в дозе 0.25 производственной негативного воздействия на B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 не отмечено. Среди пестицидов только ТМТД, Колорадо и регент на 1 и 4 сут угнетал рост B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 с нивелированием токсического действия на 7 сут. Показатель жизнеспособности бактерий под действием хлорокиси меди увеличивался на 1 и 4 сут (на 25-55% по сравнению с контролем в зависимости от дозы) со снижением количества клеток до уровня контроля на 7 сут.

При протравливании зерен бацизулином в комплексе с фунгицидами, взятыми в производственной и половинной от нее дозах, пораженность фитопатогенными грибами и микромицетами, вызывающих плесневение семян, была достоверно ниже, чем при протравливании зерен только ТМТД, феразимом, фундазолом и премисом тотал, взятыми в производственных (в среднем на 28.6-86.4%) и половинных от них (в среднем на 62.5-94.2%) дозах. ТМТД, феразим и фундазол в исследуемых дозах оказывали достоверное фитотоксическое действие на растение. При их использовании в комбинации с бацизулином фитотоксический эффект нивелировался.

Эффективность бацизулина в защите яровой пшеницы от болезней

Производственные испытания биопрепарата в качестве протравителя семян яровой пшеницы (сорт Люба) проводили в 2005 году в Республике Башкортостан. До обработки зараженность семян B.sorokiniana составила 19%, фузариозной инфекцией — 49%, альтер л ариозной — 43%. Среди плесневых грибов лидирующее положение занимали виды из родов Pénicillium и Мисог.

Применение бацизулина, дивиденда стар, фитоспорина-М, колфуго дуплет и премиса двести уменьшило индекс развития корневой гнилью болезни в фазе кущения в 4.5, 4.7, 3.5, 2.8 и 2.4 раза соответственно по сравнению с

контролем (Табл. 4). К концу вегетации эффективность химических фунгицидов, в отличие от биопрепаратов, снизилась.

Таблица 4.

Эффективность протравителей в защите яровой пшеницы от корневой гнили

Вариант Биологическая эффективность по фазам вегетации, %

Кущение Колошение Восковая спелость

R БЭ R БЭ R БЭ

Контроль 14.0 - 27.3 - 34.0 -

Бацизулин 3.1* 77.9 5.3* 80.6 6.0* 82.4

Фитоспорин-М 4.0* 71.4 8.7* 68.1 10.0* 70.6

Дивиденд стар 3.0* 78.6 8.4* 69.2 11.0* 67.7

Колфуго дуплет 5.1* 63.6 11.5* 57.9 14.0* 58.8

Прем и с двести 5.9* 60.0 14.4* 47.3 21.4* 37.7

НСР05 3.2 - 4.6 - 5.0 -

Примечание: * - разница между опытом и контролем достоверна при р<0.05. Я -развитие болезни, %; БЭ - биологическая эффективность, %.

Биологическая эффективность препарата против стеблевой ржавчины пшеницы составляла 74.6%, против септориозной и гельминтоспориозной пятнистостей - 65.0 и 78.8% соответственно.

Протравливание семян пшеницы бацизулнном снизила развитие черни и фузариоза колоса в фазу полной спелости на 56.2 и 64.6%, дивидендом стар -на 57.8 и 51.0%, фитоспорином-М - на 51.9 и 56.5%, колфуго дуплет - на 57.8 и 49.7%, премисом двести - на 43.2 и 36.9%. Структурный анализ урожая пшеницы показал, что предпосевная обработка семян бацизулнном достоверно увеличивает массу 1000 зерен (на 12.0% по сравнению с контролем), озерненность колосьев (на 6.8%), число продуктивных стеблей (на 8.0%) и повышает урожайность яровой пшеницы на 11.1%.

ВЫВОДЫ

1 Показано, что штамм B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 обладает антагонистической активностью к широкому спектру возбудителей заболеваний растений, ростстимулирующим действием, хитиназной, фосфатазной и нитрогеназной активностями и относится к пестицидам IV класса опасности.

2. Разработана технология получения биопрепарата с использованием пшеничных отрубей в качестве сырья для глубинного культивирования B.amiloliquefaciens ВКПМ В-11008 и гуминовых соединений, обеспечивающих сохранение жизнеспособности штамма и его активностей в процессе хранения.

3. Показано положительное влняшш внесения бацизулина в почву на активность почвенных ферментов (уреазы, протеазы, целлюлазы), уровень нитрогеназной активности и содержание подвижных форм фосфора.

4. Установлено, что превалирующей инфекцией для семян различных

сортов ярового ячменя являются возбудители из родов Bipolaris и Alternaría и в меньшей степени - Ftisarium; для яровой пшеницы - Alternaría, реже -Fusarium и Bipolaris. Протравливание зерен биопрепаратом способствует снижению уровня их пораженное™ в среднем на 92.5-100.0% в зависимости от сорта, культуры зерновых и возбудителя заболевания.

5. Биопрепарат совместим с фунгицидами на основе манкоцеба, мефеноксама, карбендазима, беномила, хлорокиси меди, флудиоксонила, тирама, тритиконазола, инсектицидами на основе тиаметоксама, бенсултапа, ацетамиприда, фипронила, гербицидами на основе глифосата, клопиралида. Протравливание семян баковыми смесями бацизулина с фунгицидами сопровождается устранением их ретардантного действия.

6. В производственных испытаниях показано, что биологическая эффективность биопрепарата, используемого в качестве протравителя семян при норме расхода 1.5 л/т зерна, против основных болезней яровой пшеницы составляет в среднем 56.2-82.4%.

Основные публикации по теме диссертации:

1. Сираева З.Ю. Использование бактерий из рода Bacillus / З.Ю. Сираева, Н.Г. Захарова, С.Ю. Егоров // Вестник Российской Академии сельскохозяйственных наук. - 2004. - №5. - С.71-75. (перечень ВАК), автора -0,3 пл.

2. Сираева З.Ю. Использование бацизулина в качестве протравителя семян зерновых культур / З.Ю. Сираева, Н.Г. Захарова, С.Ю. Егоров // Вестник Российской Академии сельскохозяйственных наук. - 2005. - №5. - С.55-57. (перечень ВАК), автора - 0,18 пл.

3. Сираева З.Ю. Токсикологическая оценка нового протравителя семян зерновых культур биофунгицида бацизулин / З.Ю. Сираева, Н.Г. Захарова, О.Н. Ильинская, А.В. Гарусов // Токсикологический вестник. - 2006. - №1. - С.30-35. (перечень ВАК), автора - 0,37 пл.

4. Сираева З.Ю. Совместное применение бацизулина с пестицидами / З.Ю. Сираева, Н.Г. Захарова, С.Ю. Егоров // Вестник Российской Академии сельскохозяйственных наук. - 2006. - №4. - С.43-45. (перечень ВАК), автора -0,18 пл.

5. Захарова Н.Г. Эффективность биопрепарата бацизулин в защите яровой пшеницы от болезней / Н.Г. Захарова, З.Ю. Сираева, И.П. Демидова, А.В. Гарусов, С.Ю. Егоров, О.Н. Ильинская // Ученые Записки Казанского университета, серия «Естественные науки». - 2006. - Т. 148, кн. 3. - С.89-98. (перечень ВАК), автора - 0,62 пл.

6. Сираева З.Ю. Технология получения и оценка стабильности при хранении жидкой препаративной формы биофунгицида бацизулин / З.Ю. Сираева, Н.Г. Захарова, О.Н. Ильинская // Ученые Записки Казанского

университета, серия «Естественные науки». - 2010. - Т. 152, кн. 4. - С.169—178. (перечень ВАК), автора - 0,62 пл.

7. Сираева З.Ю. Пути повышения плодородия почвы и урожайности сельскохозяйственных культур в Республике Татарстан / З.Ю. Сираева, Н.Г. Захарова, С.Ю. Егоров, A.B. Чсремных // Труды Международной конференции «Роль почвы в формировании естественных и антропогенных ландшафтов». — Казань, 2003. - С.434-436.

8. Сираева З.Ю. Хитиназная активность природных штаммов Bacillus sp., перспективных для создания биопрепаратов / З.Ю. Сираева, Н.Г. Захарова, В.И. Вершинина, Д.В. Юсупова, С.Ю. Егоров / II съезд Хитинового общества, VII Международная конференция «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана». - Санкт-Петербург—Репино, 2003. - С.411-413.

9. Егоров С.Ю. Биологическая наука — сельскому хозяйству / С.Ю. Егоров, Н.Г. Захарова, Ф.К. Алимова, Ф.Г. Куприянова-Ашина, З.Ю. Сираева, A.B. Черемных // Научно-практическая конференция «Биотехнологии - на поля Татарстана». - Казань, 2004. - С.9-13.

10. Сираева З.Ю. Эффективность инокуляции семян зерновых культур бактериями рода Bacillus, перспективными для создания биопрепаратов / З.Ю. Сираева, Н.Г. Захарова, С.Ю. Егоров // Международная научная конференция «Экология и биология почв». - Ростов-на-Дону, 2004. - С.261-266.

11. Сираева З.Ю. Эффективность инокуляции семян зерновых культур бактериями рода Bacillus, перспективными для создания биопрепаратов / З.Ю. Сираева, Н.Г. Захарова, С.Ю. Егоров // II Международная научная конференция «Биотехнология - охране окружающей среды» и III школа-конференция молодых ученых и студентов «Сохранение биоразнообразия и рациональное использование биологических ресурсов». - Москва, 2004. — С. 205.

12. Сираева З.Ю. Влияние биопрепаратов на основе бактерий рода Bacillus на биологическую активность почвы / З.Ю. Сираева, Н.Г. Захарова, С.Ю. Егоров // II Международная научная конференция «Биотехнология — охране окружающей среды» и III школа-конференция молодых ученых и студентов «Сохранение биоразнообразия и рациональное использование биологических ресурсов». - Москва, 2004. - С. 174—177.

13. Сираева З.Ю. Бацизулин - новый биофунгицид для защиты сельскохозяйственных культур от возбудителей заболеваний растений / З.Ю. Сираева, Н.Г. Захарова, С.Ю. Егоров, A.B. Черемных, М.Т. Асхадуллина, A.B. Дружинина // IX Международная конференция «Окружающая среда для нас и будущих поколений». - Самара, 2004. - С.77-78.

14. Сираева З.Ю. Совместимость биопрепарата бацизулин с химическими пестицидами / З.Ю. Сираева, Н.Г. Захарова, С.Ю. Егоров, М.Т. Асхадуллина, И.П. Демидова, Е.А. Максимова, O.A. Петрова // Всероссийская научная

конференция «Современные аспекты экологии и экологического образования». -Казань, 2005. - С.480^181.

15. Ильинская О.Н. Дефосфорилирующая активность Bacillus sp ./ О.Н. Ильинская, Н.Г. Захарова, З.Ю. Сираева, И.П. Демидова // Международная научная конференция «Проблемы устойчивого функционирования водных и наземных экосистем». - Ростов-на-Дону, 2006. - С. 153-154.

Список сокращений РАСХН - Российская академия сельскохозяйственных наук; ВКМ - Всесоюзная коллекция микроорганизмов;

ВНИИЗР - Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений;

усл.ед. — условная единица;

КОЕ - колониеобразующая единица;

МПА - мясо-пептонный агар;

ПВС - поливиниловый спирт;

Na-КМЦ - Ыа-карбоксиметилцеллюлоза;

СГК - соли гуминовых кислот;

об.% - объемное содержание компонента в смеси;

ПЦР - полимеразная цепная реакция.

Автор выражает глубокую признательность профессору, д.б.н., академику АН РТ О.Н. Ильинской за предоставление возможности выполнения научных исследований на кафедре микробиологии КФУ; научному руководителю доценту Н.Г.Захаровой за внимательное отношение к работе и плодотворную помощь в обсуждении результатов; доц. В.И. Вершининой и Д.В. Юсуповой за консультацию по определению активностей ферментов; д.м.н., проф. Ю.А. Челышеву (БГОУВПО КГМУ) за предоставление возможности проведения токсикологической оценки безопасности применения биопрепарата на лабораторных животных на базе кафедры цитологии, гистологии и эмбриологии; глав.науч.сотр. М.Я. Менлнкиеву (БашНИИСХ) за консультацию и содействие в проведении производственных испытаний; всем сотрудникам кафедры микробиологии КФУ за всестороннюю помощь.

Особую благодарность автор выражает маме

и отцу

Сираеву Юнысу Локмановичу

Сираевой Зое Семеновне

за поддержку, любовь и понимание.

Просьба высылать отзывы на автореферат по адресу:

420008, Казань, ул. Кремлевская 18, главное здание КФУ, к. 104, отдел аттестации, ученому секретарю диссертационного совета Д 212.081.08 проф. Абрамовой З.И., факс: (843)238-76-01. E-mail: zsiгаеva@yandex.m

Подписано в печать 01.10.2012 г. Бумага офсетная. Печать ризографическая. Формат 60x84 1/16. Гарнитура «Times New Roman». Усл.печ.л. 1, Уч-изд.л. 1,4. Тираж 120 экз. Заказ 1/10

Отпечатано с готс вого оригинала-макета в типографии Издательства Казанского университета

420008, г. Казань, ул. Профессора Нужина, 1/37 тел. (843) 233-73-59, 292-65-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Сираева, Зульфия Юнысовна

Список сокращений.

Введение.:.

Обзор литературы.

1.1 Фитосанитарное состояние посевного материала в мировом сельском хозяйстве.

1.1.1 Фитосанитарное состояние семян зерновых культур за рубежом.

1.1.2 Фитосанитарное состояние посевного материала в Российской Федерации.

1.1.3 Поражение посевного материала токсинообразующими грибами.

1.2 Биологический метод защиты растений.

1.2.1 Перспективные биопрепараты на основе бактерий из рода Bacillus в мировой сельскохозяйственной практике.

1.2.2 Факторы, определяющие антагонистическую активность Bacillus.

1.2.3 Совместное применение биопрепаратов на основе Bacillus с пестицидами в рамках концепции интегрированной защиты растений.

1.3 Проблема оптимизации фосфатного и азотного режимов почв.

1.4 Использование фосфатмобилизующих микроорганизмов для усиления фосфорного питания растений и повышения урожайности сельскохозяйственных культур.

1.5 Специфические аспекты применения биопрепаратов.

Экспериментальная часть.

Материалы и методы.

2.1 Объекты исследования.

2.1.1 Микроорганизмы.

2.1.1.1 Бактериальные штаммы.

2.1.1.2 Фитопатогенные микромицеты.

2.1.2 Семенной материал.

2.1.3 Лабораторные животные, условия содержания.

2.1.4 Специальные компоненты биопрепарата.

2.1.5 Пестициды.

2.1.6 Почвенные образцы.

2.1.7 Производственные испытания биопрепарата.

2.1.7.1 Место проведения.

2.1.7.2 Агроклиматические условия вегетационного периода.

2.1.7.3 Характеристика почвы производственных площадей.

2.2 Определение уровня антагонистической активности бактерий.

2.3 Определение ферментативной активности бактерий.

2.3.1 Оценка интенсивности роста.

2.3.2 Хитиназная активность.

2.3.3 Фосфомоноэстеразная активность.

2.3.4 Нитрогеназная активность.

2.4 Определение фитотоксической активности штаммов Bacillus.

2.4.1 Метод замачивания семян растений.

2.4.2 Метод Берестецкого.

2.5 Определение цитогенотоксической активности штаммов Bacillus.

2.6 Изучение токсичности штаммов Bacillus для теплокровных животных.

2.6.1 Определение параметров токсичности штаммов Bacillus. Критерии формирования экспериментальных групп лабораторных животных.

2.6.2 Определение острой и хронической токсичности при внутрижелудочном введении.

2.6.3 Определение острой дермальной токсичности.

2.6.4 Определение дисбиотического действия.

2.6.5 Определение диссеминационного эффекта.

2.6.6 Общие показатели, используемые при оценке токсического действия штаммов Bacillus на лабораторных животных.

2.7 Определение таксономической принадлежности штамма-продуцента биопрепарата.

2.7.1 Характеристика штамма-продуцента биопрепарата на основе фенотипических признаков.

2.7.2 ПЦР-идентификация штамма-продуцента биопрепарата.

2.7.2.1 ПЦР-амплификация фрагментов генов 16S рРНК и gyrA.

2.7.2.2 Анализ и выделение фрагментов генов 16S рРНК и gyrA.

2.7.2.3 Секвенирование.

2.8 Разработка препаративной формы.

2.8.1 Условия хранения и культивирования штамма бактерий.

2.8.2 Подбор оптимальной для культивирования штамма-продуцента питательной среды.

2.8.3 Подбор специальных компонентов биопрепарата.

2.9 Влияние биопрепарата на ферментативную активность почвы.

2.9.1 Обработка почвенных образцов.

2.9.2 Определение ферментативной активности почвы.

2.9.2.1 Определение уреазной активности почвы.

2.9.2.2 Определение протеолитической активности почвы.

2.9.2.3 Определение целлюлазной активности почвы.

2.9.3 Определение активности азотфиксации почвы.

2.10 Оценка дефосфорилирующей активности штамма-продуцента.

2.10.1 Определение фосфатмобилизующей активности штамма-продуцента в жидких питательных средах.

2.10.2 Определение дефосфорилирующей способности штамма-продуцента в модельном эксперименте.

2.11 Изучение эффективности применения биопрепарата в качестве протравителя семян зерновых культур.

2.11.1 Технология протравливания семян.

2.11.2 Методы фитопатологической экспертизы.

2.12 Оценка эффективности совместного применения биопрепарата с пестицидами.

2.12.1 Влияние пестицидов на жизнеспособность клеток бактерий.

2.12.2 Эффективность протравливания семян биопрепаратом при совместном применении с химическими фунгицидами.

2.13 Оценка эффективности применения биопрепарата в защите яровой пшеницы от болезней.

2.13.1 Эталоны сравнения.

2.13.2 Методы учета болезней растений.

2.13.3 Оценка хозяйственных и экономических показателей эффективности применения биопрепарата.

2.14 Статистическая обработка результатов экспериментов.

Результаты исследований.

3.1 Оценка антагонистической активности штаммов Bacillus.

3.2 Оценка ферментативной активности штаммов Bacillus.

3.2.1 Хитиназная активность штаммов Bacillus.

3.2.2 Фосфомоноэстеразная активность штаммов Bacillus.

3.2.3 Нитрогеназная активность штаммов Bacillus.

3.3 Токсикологическая оценка штаммов Bacillus.

3.3.1 Фитотоксическая активность штаммов Bacillus.

3.3.2 Генотоксическая активность штаммов Bacillus.

3.3.3 Оценка токсичности штаммов Bacillus sp.S и Bacillus sp. для теплокровных животных.

3.3.3.1 Острая пероральная токсичность.

3.3.3.2 Острая дермальная токсичность штамма Bacillus sp.3.

3.3.3.3 Кумулятивное действие штамма Bacillus sp.S.

3.3.3.4 Хроническая токсичность.

3.3.3.5 Результаты исследования бактериоценоза кишечника.

3.3.3.6 Оценка диссеминационного эффекта штамма Bacillus sp.

3.4 Фенотипическая характеристика пггамма-продуцента биопрепарата

3.5 Видовая идентификация штамма-продуцента биопрепарата с помощью ПЦР.

3.5.1 Анализ результатов ПЦР-амплификации.

3.5.2 Секвенирование фрагментов генов 16S-pPHK и gyrA.

3.6 Технология получения и оценка стабильности при хранении > жидкой препаративной формы биопрепарата.

3.6.1 Подбор компонентов питательной среды.

3.6.2 Влияние температуры культивирования и pH питательной среды на антагонистическую активность B.amyloliquefaciens ВКПМ

В-11008 при выращивании на пшенично-кукурузной среде.

3.6.3 Разработка жидкой препаративной формы биопрепарата.

3.6.4 Оценка жизнеспособности вегетативных клеток и эндоспор, антигрибной и фитотоксической активности биопрепарата при хранении в различных температурных режимах.

3.7 Влияние бацизулина на биологическую активность почвы.

3.7.1 Действие бацизулина на ферментативную активность почвы.

3.7.1.1 Изменение уреазной активности почвы при внесении бацизулина.

3.7.1.2 Реакция почвенной протеазы на внесение бацизулина.

3.7.1.3 Влияние бацизулина на целлюлозолитическую активность почвы.

3.7.2 Влияние бацизулина на нитрогеназную активность почвы.

3.8 Солюбилизация штаммом B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 труднорастворимых органических и неорганических соединений фосфора.

3.8.1 Рост и накопление Р205 при инкубации B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 в жидких средах с труднорастворимыми органическими соединениями.

3.8.2 Рост и накопление Р2О5при инкубации B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 в средах с труднорастворимыми неорганическими соединениями фосфора.

3.8.3 Влияние бацизулина на содержание подвижного фосфора в пахотном слое дерново-подзолистой почвы в модельном эксперименте.

3.9 Оценка эффективности использования биопрепарата бацизулин в качестве протравителя семян зерновых культур.

3.9.1 Анализ степени пораженности семенного фонда.

3.9.2 Сравнительная оценка эффективности протравливания семян биологическими и химическими фунгицидами.

3.10 Совместное применение биопрепарата с пестицидами.

3.10.1 Влияние пестицидов на жизнеспособность клеток штамма-продуцента.

3.10.2 Эффективность протравливания семян бацизулином при совместном применении биопрепарата с химическими фунгицидами.

3.11 Эффективность бацизулина в защите яровой пшеницы от болезней.

Обсуждение результатов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "БИОПРЕПАРАТ ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ РОСТА И ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ ОТ БОЛЕЗНЕЙ НА ОСНОВЕ BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS ВКПМ В-11008"

Актуальность. Ведущий вклад в мировой экологический кризис по загрязненности почв и сельскохозяйственных продуктов питания вносит массовое применение пестицидов и минеральных удобрений (Соколов и др., 2010; Mikanova & Simon, 2009; Pitann et al., 2009; Frossard et al., 2009). Вместе с тем, в условиях сложной фитосанитарной ситуации на посевах сельскохозяйственных культур, значительной пораженности посевного и посадочного материала и инфицированности пахотных земель фитопатогенными микроорганизмами полный отказ от использования средств защиты растений и агрохимикатов невозможен (Павлюшин, 2010; Санин, 2010; Захаренко, 2012; Andermatt, 2010; Backhaus, 2010; Bigler, 2010; Gessler et al., 2010; Heimbach, 2010; Hajihasani et al., 2012). Распространение таких опасных болезней, как корневые гнили, мучнистая роса, ржавчина, фузариоз, пятнистости различной этиологии, фитофтороз, бактериозы, часто носит эпифитотийный характер и приводит к чрезвычайно высоким потерям урожая, а заселение почвы патокомплексами токсинообразующих грибов сопровождается порчей продукции (Гагкаева и др., 2011; Говоров и др., 2011а; Торопова и др., 2011; Семынина, 2012; Miller et al., 2009; Petter & McMullen, 2010; Hajihasani et al., 2012).

В сложившихся условиях мировое сельскохозяйственное производство ориентировано на экологизацию (Bigler, 2010; Heimbach, 2010; Gessler et al., 2010; Pérez-García et al., 2011; Yin et al., 2011; Mohammadi, 2012). Достигнутый к настоящему времени уровень биологизации растениеводства варьирует в отдельных странах от 1.5-2.0 (США) до 9.0-10.0% (Швеция) (Kabaluk et al., 2010). В ряде стран Западной Европы на значительных площадях сельхозугодий реализуется программа полного отказа от применения средств химической защиты или предоставления биометоду значительных преимуществ (Stille, 2009; Pawlowska-Tyszko, 2009; Pinelli, 2009; Josling, 2009; Andermatt, 2010; Heimbach, 2010; Gessler et al., 2010).

Отставание России в области биологической защиты растений от развитых и даже развивающихся стран, по мнению исследователей, велико (Говоров и др., 20116; Захаренко, 2011а; Josling, 2009; Dzun, 2009). В «Концепции развития аграрной науки и научного обеспечения агропромышленного комплекса Российской Федерации на период до 2025 года», принятой РАСХН, важное значение отводится созданию инновационных биопрепаратов по защите растений, которые позволят снизить пестицидную нагрузку на единицу площади и содержание остаточных количеств пестицидов в продукции растениеводства, сохранить биоразнообразие, стабилизировать фитосанитарную обстановку, сократить уровень потерь урожая и увеличить уровень рентабельности сельскохозяйственного производства (Гончаров, 2011; Завалин, 2011; Говоров и др., 20116; Санин и др., 2012).

Одним из наиболее перспективных направлений в борьбе с возбудителями заболеваний растений является использование биопрепаратов на основе бактерий из рода Bacillus. В настоящее время известен ряд препаратов на основе бацилл (фитоспорин-М, бактофит, гамаир, интеграл и другие), однако в некоторых случаях их применение характеризуется недостаточной фунгицидной активностью против корневых и прикорневых гнилей (Зазимко и Найденов, 2009; Зимоглядова и др., 2009; Саранцева и др., 2011; Курылева и Фатыхов, 2012), листостеблевых болезней (Зазимко и Долженко, 2011), неспецифической плесневой микрофлоры (Злотников и др., 2007; Саранцева и др., 2011), а также сдвигом равновесия в сообществе микроорганизмов в сторону увеличения возбудителей заболевания растений, сокращению численности сапрофитной почвенной микробиоты и числа грибов, участвующих в гумусообразовании, что негативно воздействует на фитосанитарное состояние почвы и резко снижает урожайность культур (Симонов и Андросов, 2008; Кравец и др., 2010; Зазимко и Долженко, 2011).

В связи со сказанным, целью работы было создание и обоснование эффективности применения в сельскохозяйственном производстве биопрепарата комплексного действия на основе бактерий из рода Bacillus.

Исходя из цели, в работе поставлены следующие задачи:

1. Выделить из различных экологических ниш региональные штаммы бактерий из рода Bacillus и отобрать штамм, обладающий антагонистической активностью по отношению к фитопатогенным микромицетам, способностью синтезировать ферменты (хитиназу, фосфатазу, нитрогеназу), не проявляющий токсического действия по отношению к растительным и животным объектам.

3. Определить влияние биопрепарата на показатели биологической активности почвы и ее плодородие (активность почвенных ферментов, способность к мобилизации фосфатов из труднорастворимых соединений фосфора и нитрогеназную активность почвы).

4. Установить уровень пораженности семян различных сортов яровых зерновых культур фитопатогенными микроорганизмами до и после обработки зерен биопрепаратом.

Впервые разработан биопрепарат, способствующий при протравливании семян яровых культур пшеницы и ячменя снижению уровня их пораженности на 96.5-100.0% и обеззараживанию зерен от возбудителя оливковой плесени (Cladosporium herbarum), черной (Xanthomonas sp.) и базальной пятнистости {Pseudomonas sp.) зерновых культур, плесневых грибов из родов Pénicillium и Мисог. Показано, что одним из механизмов реализации антагонистического действия B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 является синтез хитиназы.

Научно-практическая значимость. Результаты работы способствуют решению проблемы стабилизации фитосанитарного состояния семенного фонда и посевов зерновых культур, повышения уровня почвенного плодородия и урожайности растений. Штамм-продуцент биопрепарата депонирован в ВКПМ при ФГУП ГосНИИгенетика (Москва) под коллекционным номером ВКПМ В-11008. На основе B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 обоснована технология производства биопрепарата в жидкой форме с использованием в качестве сырья для культивирования бактерий отхода зерноперерабатывающего производства (пшеничные отруби) и в качестве стабилизатора биомассы, консерватора и прилипателя гуматов, обеспечивающих продление срока хранения биопрепарата.

Положения, выносимые на защиту:

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на II съезде Хитинового общества и VII Международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана» (Санкт-Петербург-Репино, 2003); Международной конференции «Роль почвы в формировании естественных и антропогенных ландшафтов» (Казань, 2003); научно-практической конференции «Биотехнологии - на поля Татарстана» (Казань, 2004); Международной научной конференции «Экология и биология почв» (Ростов-на-Дону, 2004); II Международной научной конференции «Биотехнология - охране окружающей среды» и III школе-конференции молодых ученых «Сохранение биоразнообразия и рациональное использование биологических ресурсов» (Москва, 2004); IX Международной конференции «Окружающая среда для нас и будущих поколений» (Самара, 2004); Всероссийской научной конференции «Современные аспекты экологии и экологического образования» (Казань, 2005); Международной научной конференции «Проблемы устойчивого функционирования водных и наземных экосистем» (Ростов-на-Дону, 2006).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 15 научных работ, из них 6 статей в центральных отечественных рецензируемых журналах.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Сираева, Зульфия Юнысовна

выводы

1. Показано, что штамм B.amyloliquefaciens ВКПМ В-11008 обладает антагонистической активностью к широкому спектру возбудителей заболеваний растений, ростстимупирующим действием, хитиназной, фосфатазной и нитрогеназной активностями и относится к пестицидам IV класса опасности.

3. Показано положительное влияние внесения бацизулина в почву на активность почвенных ферментов (уреазы, протеазы, целлюлазы), уровень нитрогеназной активности и содержание подвижных форм фосфора.

4. Установлено, что превалирующей инфекцией для семян различных сортов ярового ячменя являются возбудители из родов Bipolaris и Alternaría и в меньшей степени — Fusarium\ для яровой пшеницы — Alternaría, реже — Fusarium и Bipolaris. Протравливание зерен биопрепаратом способствует снижению уровня их пораженности в среднем на 92.5-100.0% в зависимости от сорта, культуры зерновых и возбудителя заболевания.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Сираева, Зульфия Юнысовна, Казань

1. Абеленцев, В.И. Прогрессирующие бактериозы хлебных злаков / В.И. Абеленцев // Защита и карантин растений. 2009. - №10. - С. 32 - 33.

2. Абеленцев, В.И. Возможности современных протравителей семян зерновых колосовых культур / В.И. Абеленцев // Защита и карантин растений. 2011. - №2. - С. 19 - 21.

3. Абрамов, Н.В. Проблемы получения максимально возможной урожайности яровой пшеницы в условиях Северного Зауралья / Н.В. Абрамов, Д.И. Еремин // Аграрный вестник Урала. 2009. - №1 (55). -С. 31-34.

4. Агрохимические методы исследования почв / М.: Наука, 1975. 656 с.

5. Айдиев, А.Ю. Динамика содержания тяжелых металлов в почве различных агроэкосистем / А.Ю. Айдиев, И.А. Золотарева, JI.B. Левшаков // Вестник РАСХН. 2009. - №4. - С. 25 - 27.

6. Актуганов, Г.Э. Свойства хитиназы Bacillus sp.739 антагониста фитопатогенных грибов: Автореф. дисс.к.б.н. / Г.Э. Актуганов; Башкирский университет. - Уфа, 2000. - 21 с.

7. Алехин, В.Т. Применение пестицидов. Год 2009-й / В.Т. Алехин, Д.Н. Говоров, A.B. Живых, В.М. Слободянюк, Н.С. Стребова // Защита и карантин растений. 2010. - №10. - С. 9

8. Алметов, Н.С. Влияние биопрепаратов и минеральных удобрений на урожайность и качество многолетних трав / Н.С. Алметов, Н.В. Горячкин, Х.З. Назмиев, Л.С. Чернова, A.A. Завалин // Достижения науки и техники АПК.-2011.-№8.-С. 21 -25.

9. Аминев, И.Н. Влияние биопрепаратов на поражаемость, урожайность и качество картофеля / И.Н. Аминев, М.М. Хайбуллин // Достижения науки и техникик АПК. 2011. - №3. - С. 30 - 32.

10. Ю.Астарханова, Т.С. Биометод в защите винограда / Т.С. Астарханова, И.Р. Астарханов, Э.А. Савзиева, А.К. Балаханов // Защита и карантин растений. 2010. - №7. - С. 31 - 32.

11. З.Баталова, Г.А. Формирование урожая и качества зерна овса / Г.А.

12. Баталова// Достижения науки и техники АПК-2010. — №11.-С. 10-13. Н.Берджи, М. Определитель бактерий / М.Берджи.—М.: Мир, 1997. Т.1,2.

13. Билай, В.И. Микроорганизмы возбудители заболеваний растений / В.И. Билай, Р.И. Гвоздяк, И.Г. Скрипаль. - Киев: Наукова думка, 1998. - 552 с.

14. Блиев, С.Г. Защита сельскохозяйственных растений в агроландшафтах Кабардино-Балкарии / С.Г. Блиев // Защита и карантин растений. — 2010. №5. - С.20 - 21.

15. Бозина, Т.В. Деградация пестицидов на основе катализа / Т.В. Бозина, Е.И. Муравьев, C.B. Горбатко, И.А. Ячкула, A.B. Давыдов // Агрохимия. 2007. - №3. - С. 78 - 84.

16. Боровая, В.П. Биопрепараты в защите озимого ячменя и бахчевых культур от болезней / В.П. Боровая // Защита и карантин растений. -2009.-№11.-С. 34-35.

17. Буга, С.Ф. Нельзя недооценивать протравливание семян / С.Ф. Буга // Защита и карантин растений. 2007. - №3. - С. 30 - 31.

18. Ваккеров-Коузова, Н.Д. Влияние ксенобиотиков на микробиологические и агрохимические показатели дерново-подзолистой почвы / Н.Д. Ваккеров-Коузова // Почвоведение. 2010. -№8.-С. 979-983.

19. Валеев, М.Х. Быть полезным сельхозтоваропроизводителям / М.Х. Валеев // Защита и карантин растений. 2010. - №7. — С. 10-11.

20. Валиуллин, А.Р. Эффективность протравливания семян ярового ячменя / А.Р. Валиуллин, A.A. Зиганшин // Агрохимический вестник. 2009. -№5.-С. 23-24.

21. Вихрева, В.А. Сортовая устойчивость мягкой яровой пшеницы к токсическому действию ионов водорода / В.А. Вихрева, Т.Б. Лебедева, Т.В.Клейменова // Агрохимия. 2009. - №5. - С. 69 - 74.

22. Власенко, Н.Г. Эффективность применения регуляторов роста растений при выращивании ярового ячменя в Якутии / Н.Г. Власенко, С.С. Сленцов, М.С. Самсонова // Агрохимия. 2009. - №9. - С. 38 - 42.

23. Воронкова, Л.А. Урожай под защитой / Л.А. Воронкова // Защита и карантин растений. 2011. - №5. - С. 5 - 6.

24. Габдуллин, В.Р. Наращиваем объемы производства / В.Р. Габдуллин // Защита и карантин растений. 2003. - №6. - С. 19-20.

25. Гаврилов, A.A. Высокая культура земледелия лучшее «лекарство» от болезней / A.A. Гаврилов, А.П. Шутко, С.Ю. Гребенник // Защита и карантин растений. - 2006. - №11. - С. 25 - 26.

26. Гаврилова, О.П. Фузариоз зерна на севере Нечерноземья и в Калининградской области в 2007-2008 г.г. / О.П. Гаврилова, Т.Ю. Гагкаева // Защита и карантин растений. 2010. - №2. - С. 23 - 25.

27. Гапсаева, Т.Ю. Фузариоз зерновых культур. Аналитический обзор / Т.Ю.

28. Гагкаева, О.П. Гаврилова, М.М. Левитин, К.В. Новожилов // Приложениек журналу «Защита и карантин растений». 2011. - №5. - 52 с.

29. Ганнибал, Ф.Б. Альтернариозы сельскохозяйственных культур на территории России / Ф.Б. Ганнибал, A.C. Орина, М.М. Левитин // Защита и карантин растений. 2010. - №5. - С. 30 - 32.

30. Говоров, Д.Н. Биометод в России. Как стимулировать его развитие? / Д.Н. Говоров, A.B. Живых, А.Ю. Мирский, Н.В. Платова // Защита и карантин растений. 20116. - №5. - С. 3 - 4.

31. Говоров, Д.Н. Применение пестицидов. Год 2011-й / Д.Н. Говоров, A.B. Живых, С.Н. Четвертин // Защита и карантин растений. — 2012. №4. -С. 42-53.

32. Гончаров, Н.Р. Курс на инновации / Н.Р. Гончаров // Защита и карантин растений. - 2011. - №4. - С. 3 - 6.

33. Горбачев, И.Н. Развитие экспортного потенциала зернового хозяйства России / И.Н. Горбачев // Вестник РАСХН. 2010. - №2 - С. 17 - 18.

34. Горина, И.Н. Качество протравливания надо контролировать / И.Н. Горина // Защита и карантин растений. 2009. - №2. - С. 22.

35. Громовик, А.И. Физико-химические свойства и динамика содержания гумуса в черноземе выщелоченном при длительном применении удобрений / А.И.Громовик // Доклады РАСХН. 2010. - №4. - С. 31 - 33.

36. ГОСТ 12044-93 Семена сельскохозяйственных культур. Методы определения зараженности болезнями / М.: Госстандарт России. 1993. -55 с.

37. Давлетшин, Ф.М. Использование биопрепарата фитоспорин при возделывании яровой пшеницы в южной лесостепи Республики Башкортостан / Ф.М. Давлетшин, Х.М. Сафин, Д.С. Аюпов // Достижения науки и техники АПК. 2010. - №10. - С. 12-14.

38. Данилова, A.A. Фитотоксичность грибного комплекса в выщелоченном черноземе Приобья при различных способах основной обработки почвы / A.A. Данилова // Сельскохозяйственная биология. — 2010. -№3.-С. 108-111.

39. Девятова, Т.А. Ферментативная активность чернозема выщелоченного при длительном систематическом применении удобрений / Т.А. Девятова // Агрохимия. 2006. — №1. - С. 12 — 15.

40. Державин, JI.M. Роль химизации и биологизации земледелия в отечественном производстве сельскохозяйственной продукции и обеспечение продовольственной безопасности Российской Федерации / JI.M. Державин // Агрохимия. 2010. - №9. - С. 3 - 18.

41. Долгинова, В.А. Российский рынок минеральных удобрений и средств защиты растений / В.А. Долгинова // Использование и охрана природных ресурсов в России. — 2009. №4 - С. 19-23.

42. Долженко, В.И. Для ускорения научно-технического прогресса / В.И. Долженко, В.А. Захаренко // Защита и карантин растений. 2010. - №2. -С. 64-67.

43. Донских, И.Н. Влияние длительного применения разных систем удобрения на групповой состав фосфатов выщелоченного чернозема (в условиях Центрально-Черноземного района) / И.Н. Донских, А.М. Джумах, Н.Г. Мязин // Агрохимия. 2008. - №5. - С. 5 - 10.

44. Доронин, В.Г. Как повысить урожайность яровой пшеницы / В.Г. Доронин, C.B. Кривошеева // Защита и карантин растений. 2007. -№10. -С. 22-23.

45. Доспехов, Б.А. Методика полевого опыта / Б.А. Доспехов. М.: Агропромиздат, 1985.-351 с.

46. Дубинина, Л.Г. Структурные мутации в опытах с Crépis capillaris / Л.Г. Дубинина. M.: 1978. - 187 с.

47. Дугин, П.И. Экономическая эффективность зернопроизводства в лучших сельскохозяйственных организациях России / П.И. Дугин, Л.Р. Барахоева // Аграрный вестник Урала. 2009. - №7 (61). - С. 16-21.

48. Егоров, Н.С. Основы учения об антибиотиках / Н.С. Егоров. М.: МГУ, 1994.

49. Егоров, С.Ю. Выделение фосфатмобилизующих микроорганизмов и определение эффективности их действия: Методич. разработка / С.Ю. Егоров, Н.Г. Захарова, C.B. Улахович. Казань: КГУ, 2002. - 14 с.

50. Егорова, Е.В. Россия в ВТО / Е.В. Егорова, Е.В. Агзамова, Р.Ш. Агеев. Казань: Идея-Пресс, 2012. - 84 с.

51. Егорычева, М.Т. Эффективность предпосевного протравливания семян / М.Т. Егорычева, C.B. Бурлакова // Защита и карантин растений. -2009.-№8.-С. 43-44.

52. Жариков, М.Г. Изучение влияния глифосатсодержащих гербицидов на агроценоз / М.Г. Жариков, Ю.Я. Спиридонов // Агрохимия. 2008. -№8.-С. 81-89.

53. Ибрагимов, К.Х. Аспекты правового регулирования охраны и использования земель сельскохозяйственного назначения / К.Х. Ибрагимов, А.К. Ибрагимов //Вестник РАСХН -2010. -№2. С. 21 - 23.

54. Ишкова, Т.И. Диагностика основных грибных болезней хлебных злаков / Т.И. Ишкова, Л.И. Берестецкая, Е.Л. Гасич, М.М. Левитин, Д.Ю. Власов. СПб.: «Инновац. центр защиты растений ВИЗР», 2002. - 76 с.

55. Калининская, Т.А. Применение ацетиленового метода для количественного учета разных групп азотфиксаторов методом предельных разведений / Т.А. Калининская, Т.В. Редькина, Ю.М.

56. Кирсанова, Е.В. Биопрепараты Альбит и Альбит-3 на яровом ячмене / Е.В. Кирсанова, И.Н. Гагарина, Л.А. Тиняков, З.Р. Цуканова, А.К. Злотников, K.M. Злотников, М.Л. Казакова, Ю.И. Хабаров // Вестник РАСХН. 2007. - №2. - С. 60 - 62.

57. Коваленков, В.Г. На ключевом направлении / В.Г. Коваленков // Защита и карантин растений. 2012. - №5. - С. 3 - 7.

58. Койшибаев, М. Протравливание семян — важное профилактическое мероприятие / М. Койшибаев // Защита и карантин растений. 2008. -№2.-С. 33-35.

59. Коломбет, Л.В. Экспресс-оценка антигрибного, ростстимулирующего и фитотоксического действия протравителей семян / Л.В. Коломбет, М.С. Соколов // Агрохимия. 2006. - №8. - С. 52 - 56.

60. Комков, Н.Д. Новый фунгицид «Байер КропСайенс» залог получения качественного урожая / Н.Д. Комков // Защита и карантин растений. -2010.-№5. -С. 36-37.

61. Кононенко, Г.П. Контаминация фузариотоксинами зерна кукурузы и риса на основных территориях возделывания культур в Российской Федерации / Г.П. Кононенко, A.A. Буркин // Сельскохозяйственная биология.-2008.-№5.-С. 88-91.

62. Коренман, И.М. Фотометрический анализ. Методы определения органических соединений / И.М. Коренман. М.: Химия. 1975. - 360 с.

63. Коробов, В.А. Применение бактофита в качестве антидепрессанта / В.А. Коробов, Л.Н. Коробова // Защита и карантин растений. 2007. -№3.-С. 41-42.

64. Коробова, Л.И. Запас возбудителя корневой гнили злаков в почве / Л.И. Коробова // Защита и карантин растений. 2006. - №11. - С. 20 - 21.

65. Кравец, A.B. Гуминовый стимулятор из торфа полифункционального действия / A.B. Кравец, Н.Н! Терещенко, Л.Д. Проскурина // Достижения науки и техники АПК. 2010. - №12. - С. 40 - 42.

66. Кравченко, A.B. Бактериальные удобрения важный фактор повышения продуктивности и качества картофеля / A.B. Кравченко, Л.С. Федотова, А.Н. Гаврилов // Картофель и овощи. - 2011. - №4. - С. 6-7.

67. Курылева, А.Г. Эффективность предпосевной обработки семян ячменя / А.Г. Курылева, И.Ш. Фатыхов // Защита и карантин растений. 2012. -№1. —С. 21 -22.

68. Кутузова, P.C. Структура микробного комплекса ризосферы пшеницы в условиях гербицидного стресса / P.C. Кутузова, Н.И. Воробьев, Ю.В. Круглов // Почвоведение. 2006. - №2. - С. 220 - 227.

69. Лавринова, В.А. Защита семян и растений залог хорошего урожая ячменя / В.А. Лавринова // Защита и карантин растений. - 2011. — №1. -С. 24-25.

70. Ларионова, O.A. Продуктивность яровой пшеницы при комплексном применении биопрепаратов и гербицидов в лесостепи Зауралья: Автореф. дисс. .к.с.-х.н. / O.A. Ларионова. Тюмень: Тюм. гос. с.-х. акад, 2008.-17 с.

71. Левитин, М.М. Фитопатогенные грибы и болезни человека / М.М. Левитин // Защита и карантин растений. 2009. - №9. - С. 24 - 25.

72. Лещинская, И.Б. Экология микроорганизмов. Методические указания / И.Б. Лещинская. Казань: КГУ, 1993. - 41 с.

73. Личко, Н.М. Стандартизация и сертификация продукции растениеводства / Н.М. Личко. М.: Юрайт-Издат, 2004. - 596 с.

74. Лукашина, С.Г. Химические фунгициды оказались эффективнее / С.Г. Лукашина, H.H. Остапенко // Защита и карантин растений. 2007. -№10.-С. 46.

75. Лукманов, A.A. Применение удобрений в Республике Татарстан / A.A. Лукманов, С.Ш. Нуриев, В.З. Шакиров // Агрохимический вестник. -2009.-№5.-С. 30-31.

76. Лукманов, A.A. Агрохимическая служба Республики Татарстан на страже плодородия почв / A.A. Лукманов, С.Ш. Нуриев, М.И. Маметов // Агрохимический вестник. 2010. - №6. - С. 19 - 21.

77. Луста, К.А. Методы определения общей жизнеспособности микроорганизмов / К.А. Луста, Б.А. Фихте. Пущино, 1990. - 186 с.

78. Лухменев, В.П. Регуляторы роста и иммуностимуляторы неспецифического антистрессового действия на яровой пшенице / В.П. Лухменев // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. -2004.-№4.-С. 18-20.

79. Лысов, А.К. Европейский Союз проявляет заботу о дальнейшем ограничении использования пестицидов / А.К. Лысов // Защита и карантин растений. 2010. - №4. - С. 16. ,

80. Мальцева, А.Н. Эффективность ростстимулирующих ризосферных бактерий рода Pseudomonas при выращивании ячменя в условиях загрязнения свинцом серой лесной почвы / А.Н. Мальцева, В.П. Шабаев // Агрохимия. 2010. - №8. - С. 58 - 65.

81. Маслова, В. Путь к успеху широкое использование современной технологии / В. Маслова // Защита и карантин растений. -2009.-№9.-С. 10-11.

82. Марданова, A.M. Выделение и идентификация бактерий семейства Enterobacteriaceae: Учебно-методическое пособие / A.M. Марданова, В.И. Вершинина. Казань: КГУ, 2002. - 34 с.

83. Мелентьев, А.И. Роль хитиназы в проявлении антигрибной активности штаммом Bacillus sp. 739 / А.И. Мелентьев, Г.Э. Актуганов, Н.Ф. Галимзянова // Микробиология. 2001. - Т.70, №5. - С. 636 - 641.

84. Меньшиков, В.В. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / В.В. Меньшиков. М.: Медицина, 1987. — 368 с.

85. Методы фитоэкспертизы семян и апробации посевов // Защита растений. 1999. - №2. - С. 1 - 7.

86. Методические указания по Государственным испытаниям фунгицидов, антибиотиков и протравителей семян сельскохозяйственных культур. М., 1985. - 130 с.

87. Методические указания по экспериментальному обоснованию ПДК микроорганизмов-продуцентов и содержащих их готовых форм препаратов в объектах производственной и окружающей среды. №5789/1-91 от 11.06.1991. М.: МЗ СССР, 1991.-22 с.

88. Миронова, Э.М. Биопрепараты при возделывании томатов / Э.В. Миронова, Г.С. Марьин // Защита и карантин растений. 2008. - №2. -С. 47.

89. Монастырский, O.A. Влияние биопрепаратов на развитии и токсинообразование полевых штаммов Fusarium graminearum / O.A.

90. Монастырский, В.А. Ярошенко // Доклады РАСХН. 2002. - №3. - С. 22 - 23.

91. Мулюкин, A.JI. Образование покоящихся форм Bacillus cereus и Micrococcus luteus / A.JI. Мулюкин, K.A. Луста, М.Н. Грязнова, А.Н. Козлова, М.В. Дужа, В.И. Дуда, Г.И. Эль-Регистан // Микробиология. -1996.-№6.-С. 782-789.

92. Мухина, М.Ю. Дифференцированный подход к протравливанию семян зерновых культур / М.Ю. Мухина // Защита и карантин растений. -2005.- №8. -С. 19-20.

93. Мясников, Е.А. Эффективность бактериальных препаратов на яровой пшенице / Е.А. Мясников, А.С. Башков // Земледелие. 2007. -№6.-С. 29.

94. Надежкина, Е.В. Известкование черноземов лесостепи Среднего Поволжья / Е.В. Надежкина, Т.Б. Лебедева, С.Ю. Шаркова, С.М. Надежкин // Доклады РАСХН. 2008. - №6. - С. 31 - 33.

95. Надыкта, В.Д. «Биологическая защита растений — основа фитосанитарной стабилизации агроэкосистем и экологического земледелия» / В.Д. Надыкта, Г.В. Волкова, В.И. Долженко // Защита и карантин растений. 2010. - №11. - С. 9 - 11.

96. Назарова, Л.Н. Бактофит на зерновых культурах / Л.Н. Назарова, Н.П. Неклеса, Т.М. Полякова, Т.П. Жохова // Защита растений. — 2005. — №3. —С. 45.

97. Назарова, Л.Н. Прогрессивные болезни озимой и яровой пшеницы / Л.Н. Назарова, А.А. Мотовилин, Л.Г. Корнева, С.С. Санин // Защита растений. 2006. - №7. - С. 12-14.

98. Назарова, Л.Н. Эпидемиологическая ситуация по септориозу на пшенице в 2001-2009 годах / Л.Н. Назарова, Л.Г. Корнева, Т.П. Жохова, Т.М. Полякова, С.С. Санин // Защита и карантин растений. 2010. -№10.-С. 18-19.

99. Недорезков, В.Д. Биологическое обоснование применения эндофитных бактерий на Южном Урале: Автореф. дисс.докт.с.-х.н. / В.Д. Недорезков. СПб-Пушкин: ВНИИ защиты растений, 2003. - 41 с.

100. Нечаев, В. Ситуация на рынке зерна / В. Нечаев // Экономика сельского хозяйства России. 2011. - №8. - С. 80 - 88.

101. Овчаренко, М.М. Изменение агрохимического состояния почв Российской Федерации / М.М. Овчаренко, В.Н. Темников // Агрохимический вестник. 2008. - №6. — С. 10 - 13.

102. Омельянец, Г.Г. Микробные пестициды: оценка безопасности и гигиенические аспекты применения / Г.Г. Омельянец // Защита растений. 1992. - №2. - С. 22.

103. Орлова, JI.B. Сельское хозяйство основа развития России / JI.B. Орлова // Достижения науки и техники АПК. - 2009. - №10. - С. 54.

104. Павлов, Е.И. Влияние протравителей и регуляторов роста на качество высеваемых и получаемых семян / Е.И. Павлов, A.A. Янышина // Защита и карантин растений. 2009. - №2. - С. 26.

105. Павлюшин, В.А. Научное обеспечение защиты растений и продовольственная безопасность России / A.B. Павлюшин // Защита и карантин растений. 2010. - №2. - С. 11-15.

106. Пашкевич, Е.Б. Биологическое обоснование создания и особенности применения биопрепаратов, содержащих Bacillus subtilis, для защиты растений / Е.Б. Пашкевич // Проблемы агрохимии и экологии 2009. - №2. - С. 41 - 47.

107. Петров, В.Б. Микробиологические препараты — базовый элемент современных интенсивных агротехнологий растениеводства / В.Б. Петров, В.К. Чеботарь // Достижения науки и техники АПК. 2011. — №8. - С. 11-15.

108. Попов, Ю.В. Полевой опыт основа принятия решений о необходимости защитных обработок / Ю.В. Попов // Защита и карантин растений. - 2007. - №5. - С. 46 - 47.

109. Попович, В.В. Повысить эффективность контроля за оборотом пестицидов и агрохимикатов / В.В. Попович // Защита и карантин растений. 2010. - №5. - С. 4 - 7.

110. Проект Государственной программы «Развитие сельского хозяйства и регулирование рынков сельскохозяйственной продукции,сырья и продовольствия на 2013-2020 годы» // Экономика сельского хозяйства России. 2011. - №11. — С. 51 - 61.

111. Привалов, Ф.И. Микроудобрения в составе защитно-стимулирующих смесей / Ф.И. Привалов, А.Р. Цыганов // Достижения науки и техники АПК. 2009. - №5. - С. 31 - 33.

112. Пусенкова, Л.И. Эффективность природных регуляторов роста в активации продукционного процесса и устойчивости к болезням растений картофеля / Л.И. Пусенкова, И.В. Максимов, И.С. Марданшин // Достижения науки и техники АПК. 2011. - №8. - С. 31 -33.

113. Ревенский, В.А. Влияние гуминовых препаратов из низинного торфа дельты реки Селенги на урожай пшеницы / В.А. Ревенский, Д.Б. Андреева, Ю.Б. Цыбенов, Ц.Д.-Ц. Корсунова, Г.Д. Чимитдоржиева // Агрохимия. 2006. - №4. - С. 33 - 35.

114. Рой, A.A. Биологические свойства фосфатмобилизующего штамма Bacillus subtilis UMB В-7023 / A.A. Рой, О.Н. Рева, И.К. Курдиш // Прикладная биохимия и микробиология. 2004. - Т.40, №5. -С. 551 -557.I

115. Романенко, Г.А. Устойчивость земледелия и риски в условия изменения климата: резюме коллективной монографии / Г.А. Романенко, А.Л. Иванов, A.A. Завалин. С.-Пб.: АФИ, 2009. - 95 е.

116. Ромейс Б. Микроскопическая техника / Б. Ромейс. М.: Изд-во иностранной литературы, 1953. — 718 с.

117. Садохина, Т.Л. Химическая защита ярового ячменя / Т.Л. Садохина // Защита и карантин растений. 2011. - №4. - С. 30 - 32.

118. Сайманова, P.A. Выделение чистых культур бактерий и их идентификация: Учебное пособие / P.A. Сайманова, Н.Г. Захарова / Казань: Изд-во КГУ, 1980. 24 с.

119. Санин, С.С. Фитосанитарные проблемы семеноводства зерновых культур / С.С. Санин // Защита и карантин растений. 2010. - №5. - С. 22-24.

120. Санин, С.С. Химическая защита пшеницы от болезней при интенсивном зернопроизводстве / С.С. Санин, A.A. Мотовилин, Л.Г. Корнева, Т.П. Жохова, Т.М. Полякова, Е.А. Акимова // Защита и карантин растений. — 2011. №8. - С. 3 - 10.

121. Санин, С.С. Эффективность биопестицидов и регуляторов роста растений в защите пшеницы от болезней / С.С. Санин, Л.Н. Назарова, Н.П. Неклеса, Т.М. Полякова, С. Гудвин // Защита и карантин растений. — 2012. — №3. С. 16-18.

122. Саранцева, H.A. Полифункциональные препараты на яровом ячмене / H.A. Саранцева, Т.А. Рябчинская, Г.Л. Харченко, И.Ю Бобрешова // Защита и карантин растений. 2011. - №11. - С. 25 - 26.

123. Саттон, Д. Определитель патогенных и условно патогенных грибов / Д. Саттон, А. Фотергилл, М. Ринальди. М.: Мир, 2001. - 468 с.

124. Сахибгареев, A.A. Эндофитные бактерии / A.A. Сахибгареев, M .Я. Менликиев // Вестник РАСХН. 2008. - №3. - С. 60 - 62.

125. Семенов, С.М. Лабораторные среды для актиномицетов и грибов: Справочник / С.М. Семенов. М.: Агропромиздат, 1990. - 240 с.

126. Семенов, В.В. Оценка антимутагенной активности веществ на семенах Crépis capillaris в скрининговых исследованиях / В.В. Семенов, Е.С. Кошпаева, A.B. Семенов. Казань: КГМУ, 2000. — 30 с.

127. Семынина, Т.В. Высевать только протравленные семена! / Т.В. Семынина // Защита и карантин растений. 2008а. - №8. - С. 43.

128. Семынина, Т.В. Влияние агротехнических приемов на численность конидий Bipolaris sorokiniana в почве / Т.В. Семынина // Защита и карантин растений. 20086. - №9. - С. 24 - 25.

129. Семынина, Т.В. Особенности инфицирования семян зерновых культур патогенами / Т.В. Семынина // Защита и карантин растений. -2012.-№2.-С. 20-23.

130. Сергиенко, В.Г. Использование биопрепаратов для защиты овощных культур от болезней / В.Г. Сергиенко, А.Н. Ткаленко, Л.В. Титова // Защита и карантин растений. 2010. - №7. - С. 28 - 30.

131. Симонов, В.Ю. Влияние фунгицидов различных химических групп на микробную популяцию и биохимическую активность почвы /

132. B.Ю. Симонов, Г.К. Андросов // Агрохимия. 2008. - №11. - С. 72 -75.

133. Скрынник, Е. Курсом устойчивого развития сельского хозяйства / Е. Скрынник // Экономика сельского хозяйства России. 2011. - №8.1. C. 28-38.

134. Слободянюк, В.М. Применение пестицидов. Год 2008-й / В.М. Слободянюк, В.И. Крыцына // Защита и карантин растений. 2010. -№3.-С. 83.

135. Смелик, В.А. Предпосевная подготовка семян нанесением искусственных оболочек / Смелик В.А., Кубеев Е.И., Дринча В.М. -СПбГАУ, 2011.-272 с.

136. Смирнова, И.Э. Целлюзололитические бактерии в защите сельскохозяйственных растений от фитопатогенных грибов / Э.И. Смирнова // Микология и фитопатология. 2004. - Т.38, Вып. 2. - С. 89 -93.

137. Смолин, Н.В. Развитие корневой гнили на ячмене при использовании биопрепаратов / Н.В. Смолин, В.В. Лапина, A.C. Савельев, А.П. Овчинников, H.A. Перов // Достижения науки и техники АПК. 2008. - №10. - С. 54 - 55.

138. Соколов, М.С. Здоровая почва как необходимое условие жизни человека / М.С. Соколов, Ю.Л. Дородных, А.И. Марченко // Почвоведение. 2010. - № 7. - С. 858 - 866.

139. Соколова, Г.Д. Оценка влияния гербицидов на токсиногенез фитопатогенного гриба Fusarium graminearum SCHW / Г.Д. Соколова, Г.А. Девяткина // Доклады РАСХН. 2003. - №3. - С. 13 - 16.

140. Соколова, М.Г. Эффективность применения биопрепаратов ассоциативных бактерий на различных овощных культурах / М.Г. Соколова, Г.П. Акимова, Ш.К. Хуснидинов // Агрохимия. 2009. - №7. -С. 54-59.

141. Список пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации. 2012 год: Справочное издание, приложение к журналу "Защита и карантин растений" №4,2012. М., 2012. - 580 с.

142. Споры вокруг органического земледелия / Экономика сельского хозяйства России. 2009. - №11. - С. 80 - 84.

143. Сушеница, Б.А. Фосфатный уровень почв и его регулирование / Б.А. Сушеница. М.: Колос, 2007. - 376 с.

144. Сычев, В.Г. Методические указания по проведению регистрационных испытаний новых форм удобрений, биопрепаратов и регуляторов роста растений / В.Г. Сычев, O.A. Шаповал, И.П. Можарова, В.В. Вакуленко, Н.П. Карсункина М.: ВНИИА, 2009. - 104 с.

145. Теплякова, О.И. Локальный мониторинг болезней листьев яровой пшеницы в Сибири / О.И. Теплякова, В.И. Тепляков // Защита и карантин растений. 2011. -№6. - С. 39 - 41.

146. Терехов, М.Б. Формирование урожайности яровой пшеницы при обработке биопрепаратом экстрасол в условиях серых лесных почв Нечерноземья / М.Б. Терехов, К.А. Чулков // Зерновое хозяйство. -2007.-№6.-С. 24-25.

147. Томилова, О.Г. Биопрепараты против возбудителей болезней растений в условиях Западной Сибири / О.Г. Томилова, Т.В. Шпатова, М.В. Штерншис, Л.В. Маслиенко // Агрохимия. 2009. - №1. - С. 50 - 54.

148. Торопова, Е.Ю. Эффективность применения минеральных удобрений в зависимости от фитосанитарного состояния почвы и посевов яровой пшеницы / Е.Ю. Торопова, В.А. Чулкина, А.Н. Мармулев // Агрохимия. 2010. - №3. - С. 40 - 43.

149. Торопова, Е.Ю. Эпифитотиология / Е.Ю. Торопова, В.А. Чулкина, Г.Я. Стецов. Новосибирск, 2011. - 711 с.

150. Турусов, В.И. Структура почвенных микромицетов показатель состояния чернозема обыкновенного при интенсивном антропогенном использовании / В.И. Турусов, A.JI. Качалин, H.A. Нужная, Е.В. Винокурова // Вестник РАСХН. - 2010. - №6. - С. 25 - 27.

151. Тютерев, C.JI. Механизмы действия фунгицидов на фитопатогенные грибы / C.JI. Тютерев. СПб.: ИПК «Нива», 2010. -172 с.

152. Усова, О.Н. Влияние биопрепарата фитоп 8.67 на возбудителя корневой гнили газонной травы / О.Н. Усова, М.В. Штерншис, A.A. Леляк // Достижения науки и техники АПК. 2011. - №10. - С. 10-12.

153. Ушачев, И.Г. Выбор инновационного пути развития АПК -объективная необходимость / И.Г. Ушачев // Экономика сельского хозяйства России. 2011. - №9. - С. 10-16.

154. Федотова, Л.С. Значение бактериальных удобрений в биологизированном картофелеводстве / Л.С. Федотова, A.B. Кравченко, А.Н. Гаврилов // Достижения науки и техники АПК. 2009. -№3.-С. 28-30.

155. Франк, Р.И Биопрепараты в современном земледелии / Р.И. Франк, В.И. Кищенко // Защита и карантин растений. 2008. - №4. - С. 30-32.

156. Фокин, A.B. Биологизация защиты растений процесс циклический? / A.B. Фокин // Защита и карантин растений. - 2010. - № З.-С. 25.

157. Хазиев, Ф.Х. Методы почвенной энзимологии / Ф.Х. Хазиев. -М.: Наука, 2005. 252 с.

158. Хайбуллин, А.И. Физико-химическая совместимость агрохимикатов в баковых смесях / А.И. Хайбуллин // Агрохимия. — 2000. -№1. С. 86-91.

159. Хилько, T.B. Оптимизация питательных сред для роста и спорообразования бактерий Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis / T.B. Хилько II Микробиологический журнал. 2004. - Т.66, №1. — С. 36-41.

160. Хохряков, М.К. Определитель болезней растений / K.M. Хохряков, Т.Л. Доброзракова, K.M. Степанов, М.Ф. Летова. СПб: Лань, 2003. - 592 с.

161. Хузина, Э.Р. Оптимизация применения бактериальных удобрений на яровой пшенице / Э.Р. Хузина, И.Х. Габдрахманова // Агрохимический вестник. 2009. - №5. - С. 16-17.

162. Церковняк, Л.С. Фосфатмобилизующие бактерии Bacillus subtilis- продуценты соединений фенольной природы / Л.С. Церковняк, И.К. Курдиш // Прикладная биохимия и микробиология. 2009. - Т. 45, №3.- С. 311 -317.

163. Чекмарев, П.А. Фосфатный режим черноземов / П.А. Чекмарев, C.B. Лукин, Н.П. Юмашев // Вестник РАСХН. 2010. - №6. - С. 28 - 30.

164. Чекмарев, П. А. Мониторинг кислотности пахотных почв Центрально-Черноземного района / П.А. Чекмарев, C.B. Лукин, Ю.И. Сискевич, Н.П. Юмашев, В.И. Корчагин, А.Н. Хижняков // Достижения науки и техники АПК. 2011. - №7. - С. 6 - 8.

165. Чекмарев, В.В. Изменение видового состава грибов р. Fusarium под действием протравителей / В.В. Чекмарев // // Защита и карантин растений. 2012. - №2. - С. 27 - 28.

166. Черпак, В.Ф. Оценка некоторых агротехнических приемов повышения урожайности и качества семян зерновых культур в Приамурье / В.Ф. Черпак, В.Н. Макаров, И.М. Шиндин // Достижения науки и техники АПК. 2010. - №6. - С. 25 - 26.

167. Чулкина, В.А. Интегрированная защита растений: фитосанитарные системы и технологии / В.А. Чулкина, Е.Ю. Торопова, Г.Я. Стецов. М.: Колос, 2009. - 669 с.

168. Чулкина, В.А. Значение экологических ниш вредных организмов в агроэкосистемах / В.А. Чулкина, Е.Ю. Торопова, И.Г. Воробьева, H.A. Ховалыг // Защита и карантин растений. 2012. - №1. - С. 14-17.

169. Чулков, К.А. Продуктивность яровой пшеницы в зависимости от видовых особенностей и обработки биопрепаратом Экстрасол-55: автореф.дис.на соиск.учен.степ.канд.с.-х.наук, Йошкар-Ола, 2009. 20 с.

170. Шамин, Д.В. Влияние почвенных биопрепаратов на продуктивность пивоваренного ячменя / Д.В. Шамин // Достижения науки и техники АПК. 2008. - №11. - С.26 - 28.

171. Шешегова, Т.К. Развитие гельминтоспориозных пятнистостей на посевах ячменя в зависимости от агротехнических факторов / Т.К. Шешегова, Е.А. Багаева // Достижения науки и техники АПК. 2009. -№2.-С. 40-42.

172. Широков, А.И. Фитосанитарный мониторинг в Пермском крае / А.И. Широков // Защита и карантин растений. 2010. - №3. - С. 19 - 22.

173. Шпедт, A.A. Агрохимические свойства чернозема и продуктивность зерновых культур в условиях микрорельефа / A.A. Шпедт, В.И. Никитина // Аграрный вестник Урала. 2008. - №7. - С. 36-38.

174. Штерншис, М.В. Штаммы бактерий рода Bacillus как потенциальная основа биопрепаратов для контроля болезней ягодных культур / М.В. Штерншис, A.A. Беляев, Т.В. Шпатова, В.И. Лутов, A.A. Леляк // Достижения науки и техники АПК. 2011. - №10. - С. 8 - 10.

175. Щербаков, П.А. Ламадор: отличный старт и успешный финиш сельскохозяйственного сезона / П.А. Щербаков // Защита и карантин растений. 2010. - №3. - С. 76 - 77.

176. Щукин, В.Б. Влияние микроэлементов, физиологически активных веществ и биопрепаратов на продуктивность и качество зерна озимой пшеницы / В.Б. Щукин, A.A. Громов // Зерновое хозяйство. 2004. -№5.-С. 16-18.

177. Abdullah, М.Т. Biological control of Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Вагу with Trichoderma harzianum and Bacillus amyloliquefaciens / M.T. Abdullah, N.Y. Ali, P. Suleman // Crop Prot. 2008. - V.27, №10. - P. 1354-1359.

178. Aguilera, J.M. Agro-industries for development / J.M. Aguilera, D. Baker, R. Christy // Rome, FAO Information division, Electronic publishing policy and support branch, 2009. XII, 278 c.

179. Alakonya, A.E. Fumonisin Bi and aflatoxin Bi levels in Kenia maize / A.E. Alakonya, E.O. Monda, S. Ajanda // J. Plant Pathol. 2009. - V.91, №2.-P. 459-464.

180. Alvindia, D.G. Biological activities of Bacillus amyloliquefaciens DGA14 isolated from banana fruit surface against banana crown rot-causing pathogens / D.G. Alvindia, K.T. Natsuaki // Crop Prot. 2009. - V.28, №3. -P. 236-242.

181. Andermatt, A. Entwicklung und Vermarktung biologischer Pflanzenschutzmittel aus der Sicht eines Unternehmers / A. Andermatt // J. fur Kulturpflanzen. 2010. - V.62, №3. - P. 121 - 122.

182. Backhaus, G.F. Implementierung biologischer pflanzenschutzverfahren probleme und losungen / G.F. Backhaus // J. fiir Kulturpflanzen. - 2010. - V.62, №3. - P. 61 - 62.

183. Balhara, M. Bioactive compounds hold up- Bacillus amyloliquefaciens as a potent biocontrol agent / M. Balhara, S. Ruhil, S. Drankhar, A. Chhillar // The Nat. Prod. J. 2011. - V. 1, № 1. - P. 20 - 28.

184. Battisti, D.S. Historical warning of future food insecurity with unprecedented seasonal heat / D.S. Battisti, R.L. Naylor // Science. 2009. -V. 323, №5911. - P. 240 - 244.

185. Baysel, O. An inhibitory effect of a new Bacillus subtilis strain (EU07) against Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici / O. Baysel, M. Calfican, O. Yesilova // Physiol, and Mol. Plant Pathol. 2008. - V.73, №1-3. -P. 25-32.

186. Bennicelli, R.P. Influence of pesticide (glyphosate) on dehydrogenase activity, pH, Eh and gases production in soil (laboratory conditions) / R.P. Bennicelli, A. Szafranec-Nakonieczna, A. Wolinska // Intern. Agrophysics.2009. V.23, №2. - P. 117-122.

187. Benitez, L.B. Isolation and characterization of antifungal peptides produced by Bacillus amyloliquefaciens LBM5006 / L. Benitez, R. Velho, M. Lisboa, L.F. Medina // J. Microbiol. 2010. - V.48, №6. - P. 791 -797.

188. Bensassi, F. First report of Altemaria species associated with black point of wheat in Tunisia / F. Bensassi, M. Zid, A. Rhouma, H. Bacha, M.R. Hajlaoui // Ann. Microbiol. 2009. - V.59, №3. - P. 465 - 467.

189. Berg, G. Plant-microbe interactions promoting plant growth and health: perspectives for controlled use of microorganisms in agriculture / G. Berg // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2009. - V.84. - P. 1118.

190. Bewick, L.S. Agronomics end economics of no-till facultative wheat in the Pacific Northwest, USA / L.S. Bewick, F.L. Young, J.R. Aldredge, D.L. Young // Crop Prot. 2008. - V. 27, №6. - P. 932 - 942.

191. Bigler, F. The role of IOBC for research and implementation of biological and integrated crop protection / F. Bigler // J. fur Kulturpflanzen.- 2010. V. 62, №3. - P. 107 - 111.

192. Blandino, M. Influence of nitrogen fertilization on mycotoxin contamination of maize kernels / M. Blandino, A. Reyneri, F. Vanara // Crop Prot. 2008. - V. 27, №2. - P. 222 - 230.

193. Becker, B. Fan, R. Pukall, C. Sproer, H. Junge, J. Vater, A. Piihler, H. Klenk // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2011. - V. 61, №8. - P. 1786 - 1801.

194. Bouwman, A.F. Global and reginal surface nitrogen balances in intensive agricultural production systems for the period 1970-2030 / A.F. Bouwman, G.V. Drecht, K.W. Van der Hoek // Pedosphere. 2005. - V. 15, №2.-P. 137-155.

195. Dencic, S. Wheat production, yields and demands in the world and in our country / S. Dencic, B. Kobiljski, N. Mladenov // Zbornic radova. Institut za ratarstvo I povrtarstvo. -Novi sad, 2009. P. 367-377.

196. Dorn, B. Fusariose du mai's en Suisse. Inventaire des expeces de Fusarium et mycotoxines / B. Born, H.-R. Forrer, S. Vogelgsang, S Schiirch // Res. Suisse Agr. 2009. - V.41, №4. - P. 203 - 208.

197. Dzun, W. Condition and perspectives for development of Russian agriculture / W. Dzun // Zagadn. Econ. Roln. 2009. - №2. - P. 10 - 32.

198. Gaurilcikiene, I. The impact of the biological agent biojodis on the incidence of pathogenic fungi in the winter wheat and spring barley / I.v

199. Gaurilcikiene, S. Suproniene, A. Ronis // Zemdirbyste. 2008. - V.95, №3. -P. 406-414.

200. Gessler, C. Biologische bekampfiing von schadpilzen: problem bei der umsetzung der forsschung in die praxis / C. Gessler, M. Maurhofer, I. Pertot // J. fur Kulturpflanzen. 2010. - V. 62, №3. - P. 112 - 115.

201. Gupta, U. Xylanase production by a thermotolerant Bacillus species under solid-state and submerged fermentation / U. Gupta, R. Kar // Braz. Arch. Biol, and Technol. 2009. - V.52, №6. - P. 1363 - 1371.

202. Guijar, G. Identification of Indian pathogenic races of Fusarium oxysporum f.sp. ciceris with gene specific, ITS and random markers / G. Guqar, M. Barve, A. Giri, V. Gupta // Mycologia. 2009. - V. 101, №4. - P. 484 - 495.

203. Hajihasani, M. Incidence and distribution of seed-borne fiingi associated with wheat in Markazi Province, Iran / M. Hajihasani, A. Hajihasani, S. Khaghani // Afric. J. of Biotechnol. 2012. - V.l 1, №23. - P. 6290-6295.

204. Heimbach, U. Erfahrungen mit dem biologischen Pflanzenschutz im Ankerbau in Deutschland / U. Heimbach // J. fur Kulturpflanzen. 2010. -V. 62, №3.-P. 89-92.

205. Huber, S. Boden eine Ressource unter Druck / S. Huber, A. Freudenschuss, G. Zethner // Agrarische Rundschau. - 2009. - №3. - P. 22 - 25.

206. Josling, T. Looking ahead to 2050: Evolution of agricultural trade policies / T. Josling // The evolving structure of world agricultural trade. -Rome, 2009.-P. 289-311.

207. Kabaluk, J.T. The use and regulation of microbial pesticides in representative jurisdictions worldwide / J.T. Kabaluk, A.M. Svircev, M.S. Goettel, S.G. Woo, 2010: http://www.iobcglobal.org/downlaod/Microbi20al.pdf.

208. Kannan, V. Synergistic effect of beneficial rhizosphere microflora in biocontrol and plant growth promotion / V. Kannan, R. Sureendar // J. Basic Microbiol. 2009. - V.49, №2. - P. 158 - 164.

209. Kosova, K. Cereal resistance to Fusarium head blight and possibilities of its improvement through breeding / K. Kosova, J. Chrpova, V. Zip // Czech J. Genet. Plant Breedg. 2009. - V.45, №3. - P. 87 - 105.

210. Krupinsky, J.M. Nitrogen and tillage effects on wheat leaf spot diseases in the northern Great plains / J.M. Krupinsky, A.D. Halvorson, D.L. Tanaka, S.D. Merrill // Agronomy J. 2007. - V.99, №2. - P. 562 - 569.

211. Lafond, G.P. Reducing the risk of in-crop nitrogen fertilizer applications in spring wheat and canola / G.P. Lafond, S.A. Brandt, B. Ilvine // Canad. J. Plant Sc. 2008. - V.88, №5. - P. 907 - 919.

212. Lee, H. Organic farming in Europe: A potential major contribution to food security in a scenario of climate change and fossil fuel depletion / H. Lee, R. Walker, S. Hanenklaus // Landbauforschung. 2008. - V.58, №3. - P. 145-151.

213. Lee, H. The prospective free trade agreement with Korea: background, analysis, and perspectives for California agriculture / H. Lee, D.A. Summer. Berkeley (Calif.), 2009. - 60 c.

214. Leroux, P. Modes d'action des produits phitosanitaires sur les organismes pathogenes / P. Leroux // Acad. Sci. — 2003. №1. - P. 203.

215. Levy, L. Influence de la fumure azotte sur la qualite des bles biscuitiers / L. Levy, R. Schwaerzel, G. Kleijer, N. Crozet // Rev. Suisse Agr. 2009. - V. 41, №5. - P. 277 - 282.

216. MacLeod, A. The EPPO pest risk analysis scheme: comments on using risk scales / A. MacLeod // Bull. OEPP. 2010. - V.40, №1. - P. 131 -138.

217. Maiorano, A. A dynamic risk assessment model (FUMAgrain) of fumonisin synthesis by Fusarium verticillioides in maize grain in Italy / A. Maiorano, A. Reineri, D. Sacco, A. Magni, C. Ramponi // Crop Prot. — 2009. V.28, №3. - P. 243-256.

218. Mansfield, M.A. Contamination of fresh and ensiled maize by multiple Penicillium mycotoxins / M.A. Mansfield, A.D. Jones, G.A. Kuldau // Phytopathology. 2008. - V.98, №3. - P. 330 - 336.

219. Maosen, W. Real-time PCR quantification and deoxynivalenol production of Fusarium culmorum in inoculated head tissues of wheat / W. Maosen, H. Chenyang // Acta phytophyl. sinica. 2008. - V.35, №1. - P. 33 - 36.

220. Marci, A.M. Mycological and mycotoxicological investigations on maize samples coming from Cluj and Alba counties / A.M. Marci, Z. Dancea, M.V. Morar // Bui Univ. Agr. Sci. and. Vet. Med., Cluj-Napoca. Vet. Med. 2008. - V.65, №1. - P. 320 - 323.

221. Mikanova, O. The influence of fertilization and crop rotation on soil microbial characteristics in the long-term field experiment / O. Mikanova, T. Simon // Plant, Soil and Environ. 2009. - V.55, №55. - P. 11 - 16.

222. Miller, S.A. Plant disease diagnostic capabilities and networks / S.A. Miller, F.D. Beed, C.L. Harmon // Annual Rev.of Phytopathology / Ed. Van Alfen, ed. Palo Alto (Calif.), 2009. - V.47. - P. 15 - 38.

223. Mishra, V.K. Plant growth promoting and phytostimulatory potential of Bacillus subtilis and Bacillus amyloliquefaciens / V.K. Mishra, A. Kumar // J. of Agric. and Biol. Sci. 2012. - V.7, №7. - P. 509 - 519.

224. Mohammadi, K. Phosphorus solubilization bacteria: occurrence, mechanisms and their role in crop production / K. Mohammadi // Resources and Environment. 2012. - V.2, №1. - P. 80 - 85.

225. Munkvold, G.P. Seed pathology progress in academia and industry / G.P. Munkvold // Ann. Rev. of Phytopathol., ed. N.K. Van Alfen, ed. Palo Alto (Calif.), 2009. - V. 47. - P. 285 - 311.

226. Muthomi, J.W. The occurrence of Fusarium species and mycotoxins in Kenyan wheat / J.W. Muthomi, J.K. Ndung'u, J.K. Gathumbi, E.W. Mutitu, J.M. Wagacha // Crop prot. 2008. - V. 27, №8. - P. 1215 - 1219.

227. Nakano, H. Effect of seeding rate and nitrogen application rate on grain yield and protein content of the bread wheat cultivar minaminokaori in Southwestern Japan / H. Nakano, S. Morita // Plant Product. Sc. — 2009. -V.12, №1.-P. 109-115.

228. Pacanoski, Z. The myth of organic agriculture / Z. Pacanoski // Plant Prot. Sc. 2009. - V.45, №2. - P. 39 - 48.

229. Pawlowska-Tyszko, J. Common agricultural Policy in the face of issues related to risk management / J. Pawlowska-Tyszko // Zagadn. Econ. roln. 2009. - №3. - P. 79 - 90.

230. Pérez-García, A. Plant protection and growth stimulation by microorganism: biotechnological application of Bacillus in agriculture / A. Pérez-García, D. Romero, A. de Vicente // Curr.Opin. Biotechnol. — 2011. — V. 22.-P. 1-7.

231. Petter, F. Introduction to the EPPO conference on diagnostics and associated workshops / F. Petter, M. McMullen // Bull. OEPP. 2010. -V.40, №1.-P. 23.

232. Pinelli, D. Nachhaltige Entwicklung in der Schweiz Rechi und Realitat / D. Pinelli // Agrariche Rundschau. - 2009. - №3. - P. 35 - 38.

233. Pitann, B. Beeinträchtigung der Weiternahrung durch Bodenversalzung / B. Pitann, C. Zorb, K.H. Muchling // Schriftenreihe der Agrar- und Ernahrungswissenschaftlichen Facultat der Universität Kiel. -Hamburg, 2009. V.l 14. - P. 69 - 78.

234. Popp, J. Global responsibility of food, energy and environmental security / J. Popp // Stadies in agr.economics. 2009. - №110. - P. 5 - 22.

235. Qu, B. Geographic distribution and genetic diversity of Fusarium graminearum and F. asaiticum on wheat spikes throughout China / B. Qu, H.P. Li, J.B. Zhang // Plant Pathol. 2008. - V.57, №1. - P. 15 - 24.

236. Reverberi, M. Natural functions of mycotoxins and control of their biosyntesis in fungi / M. Reverberi, A. Riceiii, S. Zjalic, A. Fabbri, C. Fanelli // Appl. Microbiol, and Biotechnol. 2010. - V.87, № 3. - P. 899 - 911.

237. Rhouma, A. Potential effect of rhizobacteria in the management of crown gall disease caused by Agrobacterium tumerfaciens biovar 1 / A. Rhouma, M. Bouri, A. Boubaker, X. Nesme // J. Plant Pathol. 2008. -V.90,№3.-P. 517-526.

238. Sambrook, J. Molecular cloning: A laboratory manual. 2nd ed. / J. Sambrook, E.F. Fritsch, T. Maniatis. Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001. - 1626 p.

239. Samuels, G.J. Hypocreales of the Southeastern United States: An Identification Guide / G.J. Samuels, A.Y. Rossman, P. Chaverri, B.E. Overton, K. Poldmaa. Netherlands: Centraalbureau voor Schimmelcultures, 2006. - 146 p.iss

240. Schroetter, K.L. Effect of inokulum and soil tillage on the development and severity of Rhizoctonia root rot / K.L. Schroeder, T.C. Paulits // Phytopathology. 2008. - V.98, №3. - P. 304 - 314.

241. Schollenberger, M. Natural occurrence of 16 Fusarium toxins in grains and feedstaffs of plant origin from Germany / M. Schollenberger, H.M. Muller, M. Refle, S. Suchy, S. Plank, W. Drochner // Mycopathologia. 2006. - V.161, №1. - P. 43 - 52.

242. Schönberger, H. Intensität im Getreidebau / H. Schönberger // Getreide Mag. 2009. - V.15, №1. - P. 50 - 53.

243. Sobiczewski, P. Bacterial diseases of plants: Epidemiology,vdiagnostics and control / P. Sobiczewski // Zemdirbyste. 2008. - V.95, №3. - P. 151-153.

244. Stenglein, S.A. Fusarium poae: A pathogen that needs more attention / S.A. Stenglein // J. Plant Pathol. 2009. - V.91, №1. - P. 25 - 36.

245. Stille, P. Stiftung bielet Freiraum fiir landliche Entwicklung im regionalen Kontext/P. Stille//Landlicher Raum.-2009.-V.60, №2.-P. 30-31.

246. Sverchkova, N.V. Phytoprotective and disinfective properties of biopreparation enatin / N.V. Sverchkova, T.V. Romanovskaya, E.I. Kolomiets, V.l. Bezzubov // Phytopathol. 2007. - V.45. - P. 17 - 27.

247. Tamburic-Ilincic, L. The prevalence of Fusarium spp. colonizing seed corn stalks in southwestern Ontario, Canada / L. Tamburic-Ilincic, A.W. Schaafsma // Can. J. Plant Sei. 2009. - V.89, №1. - P. 103 - 106.

248. Thara, K. Biological control of rice sheath blight in India: Lack of correlation between chitinase production by bacterial antagonists and sheathblight suppression / K. Thara, S. Gnanamanickam // Plant and Soil. 1994. - V. 160, №2. - P. 277. - 280.

249. Todd, K.J. The use and regulation of microbial pesticides in representative jurisdictions worldwide / K.J. Todd., A.M. Svircev, M.S. Goettel, S.G. Woo // IOBC Global. 2010. - 99 p.

250. Treitler, R. Ressourceneffizienz am Beispiel Wasser ein Beitrag zur Krisenbewaltigung / R. Treitler // Agrarische Rundschau. - 2009. - №3. - P. 16-18.

251. Velbo, R.V. Production of lipopeptides among Bacillus strains showing inhibition of phytopathogenic fungi / R.V. Velbo, L.F. Medina, J. Segalin, A. Brandelli // Folia Microbiol. 2011. - V.56, №4. - P. 297 - 303.

252. Verreet, J. Bedeutung des Pflanzentchutzes fur die Weiternahrung / J. Verreet, H. Klink // Schriftenr. Agrar-und Ernährungswissenschaftlichen Facultat der Universität Kiel. 2009. - №114. - P. 79 - 86.

253. Wang, X. Sporulation, competence development and biopesticide activity of a Bacillus subtilis mutant / X. Wang, C. Luo, Y. Liu // Acta microbial, sinica. 2009. - V.49, №10. - P. 1295 - 1300.

254. Weisburg, W.G. 16S ribosomal DNA amplification for phylogenetic study / W.G. Weisburg, S.M. Barns, D.A. Pelletier, D.J. Lane // Bacteriol. -1991.-V.173.-P. 697-703.

255. Wiewiora, B. Health of cereals seed originated from ecological seed production / B. Wiewiora, D. Mankowski, Z. Bulinska-Radomska // Buil. Inst. Hodowli Aklimat. Rosl. Warszawa, 2009. - №251. - P. 29 - 39.

256. Yuan, J. Production of bacillomycin-type antibiotics by Bacillus amyloliquefaciens NJN-6 for suppressing soilborne plant pathogens / J. Yuan, B. Li, N. Zhang, R. Waseen, Q. Shen, Q. Huang // J. Agric. Food Chem. -2012. V.60, №3. - P. 2976 - 2981.

257. Zihlmann, U. Integrierter und biologischer Anbau im Vergleich: Resultate aus dem Anbausystemversuch burgrain 1991 bis 2008 / U. Zihlmann, W. Jossi, C. Scherrer // Schweiz. Eidgenossenschaft Eidgenossisches Volkswirtschaftsdep, 2010. -№722. -16 p.

Информация о работе

Сираева, Зульфия Юнысовна
кандидата биологических наук
Казань, 2012
ВАК 03.02.03

Диссертация

БИОПРЕПАРАТ ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ РОСТА И ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ ОТ БОЛЕЗНЕЙ НА ОСНОВЕ BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS ВКПМ В-11008 - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы