Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологическое обоснование использования энтомопатогенных гифомицетов для подавления численности вредных саранчовых

ВАК РФ 03.00.09, Энтомология

Автореферат диссертации по теме "Биологическое обоснование использования энтомопатогенных гифомицетов для подавления численности вредных саранчовых"

На правах рукописи

ЛЕВЧЕНКО Максим Владимирович

БИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ЭНТОМО-ПАТОГЕННЫХ ГИФОМИЦЕТОВ ДЛЯ ПОДАВЛЕНИЯ ЧИСЛЕННОСТИ ВРЕДНЫХ САРАНЧОВЫХ

Специальность: 03.00.09 - энтомология

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург — Пушкин 2007

003163384

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте защиты растений Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВИЗР РАСХН)

Научные руководители

Официальные оппоненты

Ведущее учреждение

академик РАСХН, доктор биологических наук, профессор,

Павлюшин Владимир Алексеевич

доктор биологических наук, Смирнов Олег Всеволодович кандидат биологических наук Белякова Наталья Александровна Всероссийский НИИ биологической защиты растений РАСХН

Защита диссертации состоится 20 декабря 2007 г в /£) часов на заседании диссертационного совета Д 006 015 01 при Всероссийском научно-исследовательском институте защиты растений по адресу 196608, Санкт-Петербург, Пушкин, шоссе Подбельского, д 3 факс (812)4705110, e-mail vizrspb@mail333 com

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института защиты растений РАСХН

Автореферат разослан

№ 2007

Ученый секретарь Диссертационного совета кандидат биологических наук х

ГА Наседкина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Разработка биологических средств подавления численности вредных саранчовых является одним из наиболее приоритетных и динамично развивающихся в настоящее время направлений в области защиты растений Подобные исследования активно проводятся в ряде стан мира - США, Аргентине, Бразилии, Южно-Африканской Республике, Франции, Германии, Испании и др (Lomer et all, 2001)

Из всех известных групп энтомопатогенных микроорганизмов, поражающих саранчовых наибольшее внимание исследователей привлекают мюскардиновые грибы (Deuteromycetes, Hyphomycetes)

В результате проведенных за рубежом работ было создано и успешно внедрено два препарата на основе гриба Metarhizium anisopliae var acndum - Green Muscle® (Африка), Green Guard® (Австралия), обладающих высокой биологической эффективностью (85-95%) против перелетной, пустынной, мороккской саранчи и кобылок (Langewald et all, 1997, Lomer et al, 2001) Ha основе Beauvena bassmna в США созданы два экспериментальных противо-саранчовых препарата - Mycocide GH® и Mycotrol®

На территории СНГ исследования, посвященные использованию энтомопатогенных микроорганизмов в борьбе с вредными саранчовыми - немногочисленны и носят эпизодический характер В отечественной практике в настоящее время нет ни одного биологического препарата для контроля численности саранчовых

В связи с этим поиск перспективных штаммов, их изучение, а также создание отечественных противосаранчовых микоинсектицидов является приоритетным

Цель работы - отбор видов и штаммов энтомопатогенных гифомицетов -как продуцентов биопрепаратов для борьбы с вредными саранчовыми (перелетная саранча, итальянский прус и др) и оценка возможности их использования

В задачи работы входило

Поиск и выделение природных изолятов гифомицетов, паразитирующих на саранчовых, в том числе и в резервациях

Скрининг культур грибов (новых и коллекционных) по признаку вирулентности в отношении различных видов, возрастов и фаз саранчовых,

Определение продуктивности отобранных штаммов при поверхностном и глубинном культивировании,

Оценка биологической активности отобранных штаммов в полевых условиях

Изучение возможностей совместного использования разных видов патогенов и смешанных инфекций

Научная новизна. Отобраны новые отечественные высоковирулентные штаммы гифомицетов Показано, что наибольшей патогенностью к саранчовым обладают штаммы, выделенные из насекомых целевой группы, обитающих в ксерофитных стациях (биологическая активность до 100%) Впер-

вые показано, что виды саранчовых, обитающие в гигрофитных стациях существенно устойчивее к микозам, в сравнении с ксерофилами Выявлена большая чувствительность к грибам стадной формы азиатской саранчи по сравнению с одиночной Установлена зависимость смертности саранчовых от титра конидий гриба рабочей суспензии и стадии развития насекомых-хозяев Впервые изучены особенности развития смешанной микроспориди-ально-грибной и бактериально-грибной инфекции на перелетной саранче

Практическая ценность. Отобраны два высокоэффективных штамма эн-томопатогенных гифомицетов Metarhizvum amsophae (Sorok) -МАК-1, Beau-vena bassmna (Bals) Vuill - ББК-1, перспективных для создания на их основе биопрепаратов доя контроля численности саранчовых Проведена первичная оценка методов их наработки в поверхностной и глубинной культуре Подобраны оптимальные титры рабочей суспензии для проведения испытаний в полевых условиях. Показана перспективность использования смешанных инфекций (микроспоридиально-грибных и бактериально-грибных) для подавления численности вредных саранчовых

Апробация работы. Результаты работы доложены на XII и XIII съездах Русского энтомологического общества (С Петербург, сентябрь, 2002 г, Краснодар , 2007 г), совещании международного общества Патологии беспозвоночных (SIP) (Упсала, Швеция, июнь, 2004 г), на отчетно-плановой сессии ВИЗР (С Петербург — Пушкин, март, 2004 г), на втором Всероссийском съезде по защите растений (С Петербург - Пушкин, декабрь, 2005 г), на международной конференции «Грибы и водоросли в биоценозах», посвященной 75-летию Биологического факультета МГУ им M В Ломоносова (Москва, февраль, 2006 г), на международной конференции «Актуальные проблемы развития сельского хозяйства Казахстана, Сибири и Монголии» (Алмалыбак, Казахстан, июль, 2006 г), на VII межрегиональном совещании энтомологов Сибири и Дальнего Востока «Энтомологические исследования в северной Азии», (Новосибирск, октябрь, 2006 г), на 1-ой Международной конференции молодых ученых и аспирантов, посвященной 15-летию Независимости Республики Казахстан. (Алматы, Казахстан, 2006 г), на XV конгрессе Европейских микологов (С -Петербург, сентябрь 2007 г )

Публикации. По теме диссертации опубликовано 18 работ, из них две входят в Перечень научных журналов и изданий, рекомендованный ВАК

РФ п.

Объем и структура диссертации изложена на страницах машинописного текста, состоит из введения, 6 глав, вьюодов и практических рекомендаций Работа иллюстрирована 38 таблицами и 22 рисунками Список цитированной литературы включает 185 источников, из них 120 на иностранных языках

Работа выполнялась при финансовой поддержке гранта «Ориентированные фундаментальные исследования Российского фонда фундаментальных исследований РФФИ» № 06-04-08174-офи

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ ГЛАВА 1. ЭНТОМОПАТОГЕННЫЕ ГИФОМИЦЕТЫ

- ВОЗБУДИТЕЛИ МИКОЗОВ САРАНЧОВЫХ (Обзор литературы)

В главе приводится анализ данных литературы, посвященных видовому составу, симптоматике, жизненным циклам энтомопатогенных гифомицетов, паразитирующих на саранчовых Дана характеристика основных факторов патогенности Приведены сведения о методах культивирования и препаративных формах микоинсектицидов Дан обзор грибных препаратов, предназначенных для контроля численности саранчовых

ГЛАВА 2. МЕСТО, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводились в течение семи лет (2000-2006 гг) в лаборатории микробиологической защиты растения ВИЗР Полевые работы по поиску новых природных изолятов микромицетов, поражающих саранчовых и оценке вирулентности штаммов грибов на природных популяциях вредителей осуществляли на базе СХП «Александровский» Карасукского р-на Новосибирской обл (2000г), Астраханского государственного биосферного заповедника (Астраханская обл 2002-2004г) и Казахстанского НИИ защиты растений (Алматинская обл 2005-2006 г)

В работе изучалась вирулентность в отношении саранчовых 9 штаммов трех видов энтомопатогенных гифомицетов (Metarhizium amsopliae (Sorok), Beauvena bassmna (Bals) VuilL, Beauvena brongmartu (Sacc) Petch) Из них для дальнейшей работы были отобраны три наиболее перспективных штамма МАК-1, ББК-1, БТ-86

В опытах по изучению смешанных инфекций использовали микроспоридию Paranosema locustae и бактерию Pseudomonas sp

Вирулентность энтомопатогенных гифомицетов оценивали на 7 видах представителей семейства Acrididae Основные эксперименты проводились на лабораторных популяциях перелетной и пустынной саранчи В Астраханской области опыты проводились на местных популяциях перелетной саранчи и двух видов кобылок _ зеленой болотной и Вагнера В Алматинской области в экспериментах использовали местные популяции перелетной саранчи, итальянского и пустынного пруса, а также комплекс видов трибы Dociostaunm.

Культивирование грибов и изучение их продуктивности проводили по стандартным методикам В экспериментах для поверхностного культивирования использовали следующие среды модифицированная среда Сабуро, среда Борисова, а также зерновые субстраты (пшено, рис, горох и перловая крупа) В глубинной культуре гифомицеты выращивали на модифицированной среде Сабуро

Лабораторная оценка вирулентности грибов проводилась по стандартным методикам в садках в климакамерах В полевых условиях оценивалась эффективность патогенов на делянках под изоляторами из газовой ткани площадью 0,09 м2 Обработка данных проводилась методом дисперсионного анализа с использованием компьютерных программ Excel и «SigmaStat 3 1»

ГЛАВА 3 ВЛИЯНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ЭНТОМОПАТОГЕННЫХ ГИФОМИЦЕТОВ НА ИХ ВИРУЛЕНТНОСТЬ В ОТНОШЕНИИ САРАНЧОВЫХ

3 1 Изоляция и первичный скрининг штаммов микромицетов по признаку вирулентности к саранчовым

Из саранчовых нами было выделено три новых изолята гифомицетов В Ьаввгапа (ББК-1, ВБЛ-03) и М апшоркае (МАК-1)

Первичный анализ вирулентности этих культур выявил существенные различия в их биологической активности в отношении личинок 3 - 4-го возрастов перелетной саранчи (табл 1) Так микромицеты (штаммы ББК-1 и МАК-1), изолированные из энзоотического очага итальянского пруса в ксе-рофитных условиях (ГТК < 0,75) Новосибирской области обладают высокой биологической активностью (90 — 100%) Напротив, штамм ББЛ-03, изолированный из эпизоотийного очага нестадных саранчовых на юге Приморского края (ГТК > 2), показал низкую активность (40 - 60%)

Таблица 1 Характеристика основных штаммов, испсотьзовакных в скрининге по признаку виру-

лентности в отношении саранчовых

Вид гриб i № штамма Насекомое-хозяин Место и год изоляции Характеристика очага Гидротермические условия (июнь - август) Биологическая активность на личинках перелетной саранчи, на 17-е сутки после заражения, %

t"C Осадки ММ ГТК

Beauv enа bassiaaa ББЧ-99 Нестадные саранчовые Чамальский р-н Республики Алтай 1999 Единичные особи. 18 400 24 40-60

ББК-1 Итальянский прус Карасукский р-н Новосибирская обл. 2000 Локальная энзоотия (15%) 19 130 0 74 90-100

ББЛ-03 Нестадные саранчовые Acnchdae spp Лазовский зап-к Приморский край, 2003 Локальная эпизоотия <>80_<^) 17 380 242 40-60

САР-ЗГ Кубышки саранчовых Новосибирской обл. 1974 Единичные экземпляры. 19 130 0 74 60-100

ББКЖ~ Колорадский жук Краснодарский край, 199а Единичные особи 22 160 0,8 30-50

Beauvena brongruartu БТ-86" Мароккская саранча Узбекистан Кашкадарьин-ская обл. 1986 Локальная энзоотия (<10%) 33 30 01 60-100

Metarhi- zium amsopliae МАК-1 Итальянский прус Карасукский р-н Новосибирской обл., 2000 Локальная энзоотия (<5%) 19 130 074 90-100

R-72y~ Почва Новосибирской обл., 1972 - 19 130 0,74 60-100

МАЛИ" Листоед AgeJastica aim Краснодарский край, 2000 Единичные особи 22 160 08 30-50

- коллекция ВИЗР; - коллекция ИСиЭЖ (Институт систематики и экологии животных, г Новосибирск) ^-коллекция ЗАО «Росагро-сервис» (г Москва)

Вероятно, столь значительные различия по уровню вирулентности между данными штаммами обусловлены в первую очередь особенностями их гидротермического преферендума

Эта же закономерность была выявлена и в ходе скрининга штаммов, выделенных из саранчовых из коллекции ВИЗР и ИСиЭЖ

Анализ вирулентности на саранчовых ксерофитных штаммов, выделенных из насекомых других систематических групп, показал их низкую биологическую активность (30-60%)

Таким образом, уже первичный анализ показал, что на вирулентность гифомицетов в отношении саранчовых оказывают влияние не только гидротермические условия района их выделения, но и вид (группа) первичного

насекомого-хозяина

В результате проведенных работ в качестве наиболее перспективных были отобраны три штамма ББК-1, МАК-1 и БТ-86

3 2 Морфо-культуралъные свойства изучаемых штаммов мюскар-

диновых грибов

Опыты по определению особенностей морфологии колоний, скорости их роста и спороношения, для изучаемых штаммов грибов, на двух видах твердых искусственных питательных сред (ИПС) модифицированной среде Са-буро и среде Борисова показали, что при поверхностном культивировании на обеих ИПС наибольшая энергия роста наблюдалась у штамма МАК-1 При этом на среде Сабуро развитие изучаемых штаммов проходило существенно интенсивнее по сравнению с более богатой по составу средой Борисова

Продуктивность штаммов в поверхностной культуре изучали также на четырех видах сыпучих субстратов пшене, рисе, перловой крупе и горохе (табл 2)

Таблица 2 Продуктивность штаммов М агторЪае (МАК-1), В Ьсмят-па (ББК-1) и В ЬгапдпшПп _ (БТ-86) при поверхностном культивировании на сыпучих субстратах_

Штамм Субстрат Титр п х 108/г (сутки)

5 10 15 20

ББК-1 Пшено у 0,96±0,28 9,65+0,78 17,32+0,63 38,72+8,13

Рис 0,67±0,08 3,77±0,39 6,85+0,37 13,81±0,83

Перловая крупа 0,37+0,08 9,07+0,73 30,54+2,76 31,39+4,77

Горох 0,067+0,014 1,71±0,33 5,91+0,68 11,03±2,85

НСР06 0,461 1,769* 4,405 14,263

БТ-86 Пшено 0,41±0,04 4,0±0,43 6,38±0,58 18,3^3,0

Рис 0,64±0Д8 5,55±0,74 11,38+1,2 12,05±1,42

Перловая крупа 0,51±0,09 6,14±0,67 11,54±0,91 21,14±2,93

Горох 0,187+0,029 1,91+0,21 5,03+0,42 9,74+1,12

НСР05 0,307 1,651 2,503 6,847

МАК-1 Пшено 0,029+0,011 1,63±0,13 5,7+0,72 9,39±1,14

Рис 0,009+0,002 2,17+0,3 3,68±0,21 6,64+0,68

Перловая крупа 0,008±0,001 1,43±0,17 3,25±0,38 4,51±0,29

Горох - 0,067+0,006 0,96+0,18 2,12+0,35

НСР05 0,016* 0,541 1,067 1,722

£ НСР 05 0,318 1,358 2,835 8,715

* жирным выделены НСР для выборок имеющих существенные различия

Исследования показали, что наибольшая продуктивность конидий на всех испытуемых субстратах наблюдалась у штамма ББК-1 Причем самая большая продуктивность гриба наблюдалась при его культивировании на пшене и перловой крупе На рисе и горохе выход конидий был существенно ниже На втором месте по продуктивности находится штамм БТ-86 Максимальная продукция конидий здесь также наблюдается при культивировании на пшене и перловой крупе Минимальный выход конидий наблюдался у штамма МАК-1

Таким образом, для наработки конидий наиболее продуктивным штаммом является ББК-1. А среди испытанных субстратов более предпочтительны пшено и перловая крупа. Данные результаты подтверждают и работы Тарасова Л.Г. при селекции штаммов В. Ьавэгапа активных на вредной черепашке и яблонной плодожорке.

Сравнительное изучение продуктивности микромицетов в глубинной культуре проводили на среде Сабуро (табл. 3).

Таблица 3. Продуктивность штаммов М. апгзарИае (МАК-1), В. Ьаяэтатю (ББК-1) и В. ЬгспдшаПп _(БТ-86) при глубинном культивировании на модифицированной среде Сабуро_

Сутки Титры бластоспор, п х 107шт./ мл НСР05

МАК-1 ББК- 1 БТ-86

3 0,48+0,04 0,46±0,06 0,47±0,05 0,56

6 8,48+0,39 5,85+0,41 5,6±0,48 2,14

9 14,88±1,01 10,16+0,68 9,95+0,37 2,46

НСР 05 2,0* 2,13 | 1,12 -

' жирным выделены НСР для выборок имеющих существенные различия

Проведенные исследования показали, что продуктивность штамма МАК-1 при глубинном культивировании существенно выше по сравнению со штаммами ББК-1 и БТ-86, с учетом размеров конидий и бластоспор.

3.3. Влияние пассирования на биологическую активность гриба М. апжорИае

Важным элементов в поддержании вирулентности штаммов-продуцентов является периодическое их пассирование через организм целевого насекомого-хозяина.

В этой связи нами был проведен опыт по определению влияния реизо-ляции на вирулентность штамма МАК-1 (рис. 1).

Анализ полученных данных показал существенные различия в динамике гибели личинок. Так, если при использовании исходного штамма первые трупы насекомых были обнаружены только на пятые сутки, то в случае с однократнопропассированным реизолятом первые погибшие насекомые наблюдались уже в первый день после обработки. Обнаруженные существенные различия на уровне 15-30% в смертности сохранялись вплоть до пятых суток, а затем нивелировались.

Рис:. 1. Динамика смертности личинок 4-го воз-МАК-1 раста перелетной са-

Р1 ранчи под действием

Контроль штамма МАК-1 и его

реизолята (титр 5x107)

3 4 Оценка инсектицидной активности экзотоксинов гриба

М.апгэорЬае

Активность токсических метаболитов является одним из основных признаков вирулентности энтомопатогенных гифомицетов

В связи с этим была осуществлена оценка инсектицидной активности культуральной жидкости двух штаммов гриба М апгворЬае (МАК-1 и МАЛИ) и реизолята штамма МАК-1

Анализ полученных данных показал, что высокой токсигенной активностью в отношении тест-насекомых обладает только фильтрат штамма МАК-1 и его реизолята после культивирования в течение шести суток (табл4) К пятым суткам после инъекции смертность составила 93-100% Смертность в других вариантах опыта существенно не отличалась от контроля (до 20%)

Таким образом, штамм МАК-1 выделяет в среду токсины обладающие высокой инсектицидной активностью и синтез данных метаболитов наблюдается на шестые сутки культивирования гриба

Таблица 4 Активность токсических метаболитов экзогенного происхождения гриба М атяорЪае на __личинках 4-го возраста перелетной саранчи_

Штамм Срок культиви- Смертность % сут

рования, сут 1 2 3 4 5

МАК-1 3 6,7±6,7 13,3±6,8 13,3±6,8 13,3±6,8 13,3±6,8

6 53,3±17,6 86,7±6,7 100 100 100

МАК-1 (Ш) 6 60,0±11,6 80,0±11,6 86,7±6,7 86,7±6,7 93,3±6,7

МАЛИ 6 0,0 6,7+6,7 6,7±6,7 6,7±6,7 20,0±0,5

Контроль - 6,7±6,7 6,7±6,7 6,7=6,7 6,7±6,7 6,7±6,7

НСР06 32,54* 24,86 18,79 18,79 16,27

* жирным вьщелены НСР для выборок имеющих существенные различия

В дальнейшем был проведен опыт по оценке влияния термической обработки (кипячение в течение 10 мин) на активность экзотоксина штамма МАК-1

Существенных различий в инсектицидной активности на личинках пятого возраста перелетной саранчи нативного и прокипяченного фильтрата не было выявлено В обоих случаях, на четвертые сутки после инъекции, смертность тест-насекомых составила 75%.

Полученные данные свидетельствуют о том, что токсигенный комплекс штамма МАК-1 является термостабильным

3 5 Зависимость смертности личинок перелетной саранчи от концентрации инокулюма

Важнейшим элементом при разработке технологии применения биопрепаратов является определение оптимальных доз патогена

В этой связи определена зависимость «доза - смертность» для трех изучаемых штаммов (МАК-1, ББК-1 и БТ-86) на личинках второго возраста лабораторной популяции перелетной саранчи (рис 2)

Уровень смертности личинок во всех вариантах был существенно выше в сравнении с контролем и к 17-м суткам после обработки составлял 65-100% При этом четко прослеживается зависимость восприимчивости личинок

к микозу от титра споровой суспензии гриба. Так если при заражении личинок штаммом МАК-1 с титрами 1х107 и 5x107 уже на 5-е сутки после инокуляции уровень смертности достиг 95 - 100%, то при уменьшении концентрации до 5х105 - 5х106 значения этого показателя не превышали 40 - 65%. Максимальная гибель личинок при пониженных титрах наблюдалась только на 13-е сутки и составила 65% (5х105); 85% (1х106) и 90% (5х106). Аналогичная закономерность была выявлена и для двух других штаммов.

А Б В

Рис. 2. Биологическая активность энтомопатогенных грибов В. ba.ssia.na (ББК-1), В.

Ьгопдта-Пп (БТ-86) и М. атиорИае (МАК-1) в отношении личинок 2-го возраста перелетной саранчи при разных титрах рабочей суспензии (А - штамм ББК-1 на 11 сутки, Б - штамм БТ-86 на 15 сутки, В — штамм МАК-1 - на 7 сутки)

Таким образом, для всех изучаемых штаммов в качестве рабочих для подавления численности личинок младших возрастов перелетной саранчи можно предложить титры 1х107и 5х107.

50тыс. 100 ты с. 500 тыс. 1 млн. 5млн. Титр

ГЛАВА 4. ВЛИЯНИЕ ПОПУЛЯЦИИ НАСЕКОМОГО-ХОЗЯИНА НА БИОЛОГИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ЭНТОМОПАТОГЕННЫХ ГРИБОВ

4.1. Чувствительность различных видов саранчовых к гифомицетам

Важным элементом при разработке биопрепаратов является определение круга целевых насекомых - вредителей.

В связи с этим была определена восприимчивость различных видов насекомых из семейства Acrididae (как стадных, так и нестадных) к энтомопа-тогенным гифомицетам.

В ходе лабораторных опытов оценивали чувствительность двух видов лабораторных популяций стадных саранчовых: перелетной (L. migratoria migratorides L.) и пустынной саранчи (Schistocerca gregaria Forsk.) к трем штаммам грибов (МАК-1; ББК-1; БТ-86).

Проведенные наблюдения показали высокую активность изучаемых штаммов в отношении личинок 1-го и 3-го возрастов обоих видов саранчовых. При этом были выявлены существенные различия в динамике смертности личинок в зависимости от вида хозяина. Так, к четвертым суткам после обработки, смертность личинок 1-го возраста пустынной саранчи, в зависимости от штамма гриба, и титра конидий превышала значение этого пока-

зателя для одновозрастных личинок перелетной саранчи на 30-55% (25-60 и 55-90% соответственно) (рис. 3). К 7-м суткам указанные различия нивелировались. Для личинок 3-го возраста указанная тенденция полностью сохранялась.

É

□

Титр 5x10® Перелетная саранча

Титр 1х107 Пустынная саранча

Рис. 3. Смертность 1-го возраста личинок перелетной и пустынной саранчи после заражения эн-

томопатогенными гифомицетами.

Таким образом, проведенные исследования показали, что пустынная саранча обладает повышенной восприимчивостью к микозам по сравнению с перелетной саранчой.

На наш взгляд, причина данного явления может заключаться в различиях гидротермических преферендумов и, соответственно, мест обитания указанных видов саранчовых. Так, L. migratoria в местах резервации занимает стации близкие к гигрофитным (плавни рек). Такие условия вполне благоприятны для развития энтомопатогенных грибов и, следовательно, высока вероятность контакта между патогеном и хозяином. В связи с этим можно предположить наличие у таких насекомых дополнительных защитных реакций к патогенным микромицетам.

Напротив, пустынная саранча занимает типично ксерофитные стации (пустыни и полупустыни). Подобный гидротермический режим явно неблагоприятен для возбудителей микозов и ,как следствие этого, является причиной отсутствия определенных защитных реакций саранчи к энтомопато-генным грибам.

□ кобылка Вагнера

El зеленая болотная кобылка

Рис. 4. Биологическая активность мюскардиновых грибов М. аттарИае (МАК-1), В. Ьаетшга (ББК-1) и В. ЪтпдпшгШ (БТ-86) на 11-е сутки после обработки на имаго двух видов кобылок (с поправкой на контроль) в условиях Астраханского заповедника (титр 1х107)

Параллельные эксперименты на имаго кобылки Вагнера (Mioscirtus wagnen Ev ) и зеленой болотной кобылке (Parapleurus alhaceus Germ ) (Астраханская обл) показали, что первый вид, обитающий в ксерофитных стациях, обладает высокой чувствительностью к микромицетам (100% - на 10-е сутки), в то время как второй (типичный гигрофил) показал значительную устойчивость к микозам (на 10-е сутки смертность не превышала 65%) (рис 4) В конечном итоге биологическая активность с поправкой на контроль для M wagnen превышает значения этого показателя для Р alhaceus (99 и 34-62% соответственно)

В ходе исследований на личинках старших возрастов природных популяциях пустынного пруса (Calhptamus barbarus Costa ) и перелетной саранчи (L mtgratoria mtgratoria L ) (Алматинская обл) была выявлена такая же закономерность Если для пустынного пруса (типичный ксерофил) 100-й уровень смертности в зависимости от штамма гриба и его титра наблюдался уже на 5 - 8-е сутки после заражения, то для перелетной саранчи (относительный гигрофил) значение этого показателя варьирует в пределах от 8 до 17-и дней (табл 5) Наиболее отчетливые различия в уровне смертности указанных видов наблюдаются на 5-е сутки после заражения Для первого вида гибель хозяина составляла 85-100%, для второго же не превышала 40%

Таблица 5 Срок наступления 100%-ой смертности личинок 5-го возраста пустынного пруса и перелетной саранчи под действием эятомопатогенных грибов М апгзорЫае _ (МАК-1) и В Ьаввгапа (ББК-1)_

Штамм Титр ... . ....... I-T;,,;-,. CVT

С ЬагЪагиь L тщгсйогш

МАК-1 1x10' 8 17

5x10' 5 17

ББК-1 1x10' 0 И

5x10' 5 7

Подобная закономерность была выявлена и для других видов, различающихся по гидротермическому преферендуму

Резюмируя представленные данные, следует еще раз подчеркнуть, что ксерофильные виды саранчовых обладают более высокой учувствительно-стью к возбудителям микозов по сравнении с гигрофильными формами

4 2 Восприимчивость стадной и одиночной фаз перелетной саранчи к энтомопатогенным грибам

Исследования влияния фазовой изменчивости природной популяции перелетной саранчи Ь тлдгаЬогш гтдгаЬота (окрестности озера Балхаш, Казахстан) на ее восприимчивость к мюскардинозам показали, что скорость гибели стадной фазы вредителя существенно выше в сравнении с одиночной

Так, если при заражении штаммом МАК-1 для стадной фазы уровень смертности личинок уже к 9-м суткам после обработки составлял 64-92%, в зависимости от титра рабочей суспензии, то значение этого показателя для одиночной фазы в этот же период не превышало 28-72% (табл 6) Различия в гибели личинок между стадной и одиночной фазами на уровне 20-30% сохранялись в течение первых девяти суток после инокуляции Для других изучаемых штаммов выявленная закономерность полностью сохранялась

Таблица 6 Влияние фазовой структуры популяции личинок 5-го возраста азиатской саранчи на __ биологическую активность гриба М апшурЬаг (МАК-1)__

Вариант Фаза хозяина Смертность, % (сутки)

3 5 7 9 11 13 15 17

1x10' стадная 28,0±10,2 36,0+13,3 44,0±13,3 64,0±7,5 80,0±10,9 88,0±8,0 100 100

одиночная 8,0+8,0 16,0+16,0 16,0+16 28,0+13,6 68,0±10,2 88,0±4,9 92,0+4,9 96,0±4,0

5x107 стадная 16,0+7,5 28,0+8,0 52,0±13,6 92,0+4,8 100 100 100 100

одиночная 8,0±4,9 16,0±9,8 36,0+7,5 72,0±12,0 96,0+4,0 100 100 100

Контроль стадная 0 8,0±4,9 20,0±8,9 20,0±8,9 20,0±8,9 20,0±8,9 32,0113,6 32,0±13,6

одиночная 0 4,0±4,0 8,0±8,0 8,0+8,0 12,0+8 16,0±7,5 20,0±8,9 20,0±8,9

НСР05 18,8* ззд 32,6 28,0 23,4 17,8 20,2 19,9

* жирным вьщелены НСР для выборок имеющих существенные различия

На наш взгляд, обнаруженные различия могут быть обусловлены особенностями жизненных стратегий указанных выше форм вредителя. Одиночная фаза - типичный К-стратег, обладающий по сравнению со стадной фазой меньшей плодовитостью, большей продолжительностью развития и повышенной устойчивостью к различным стрессовым факторам, в частности и к патогенам Напротив, стадная фаза саранчи по своим биологическим свойствам ближе к г-стратегам и имеет более высокую плодовитость, сокращенный период развития, и очевидно менее устойчива к различным поражающим факторам

4 3. Возрастная чувствительность личинок перелетной саранчи к микозам

В ходе ряда опытов были выявлены существенные различия в скорости гибели от микозов личинок перелетной саранчи в зависимости от их возраста

Так, если для личинок 1-го и 2-го возрастов при титрах рабочей суспензии 1х107и 5х107 100%-ая гибель насекомых наблюдается на 7-е и 5-е сутки соответственно, то для личинок 3-го и 4-го возрастов значения этого показателя на 4-8 дней больше в сравнении с младшими возрастами (табл 7)

Таблица 7 Срок наступления 100 %-ой смертности личинок младших и старших возрас-_тов перелетной саранчи под действием гриба М anisopliae (МАК-1)_

Возраст LT] nn, сутки/титр спор

1x10' 5х107

I 7 5

II 7 5

III 13 9

IV 15 11

Наиболее отчетливые различия в уровне смертности личинок саранчи в зависимости от их возраста проявляются на 7 - 9-е сутки после заражения Если при всех трех испытуемых титрах смертность личинок 1-го и 2-го возрастов на 7-е сутки составляла 90 - 100%, то для 4-го возраста она не превышала 10% При этом существенных различий по этому показателю между первыми тремя возрастами личинок вредителя обнаружено не было

Таким образом, из всех протестированных возрастов саранчи наиболее устойчивыми к микозу являются личинки 4-го возраста

ГЛАВА 5 ВЛИЯНИЕ СМЕШАННЫХ ИНФЕКЦИЙ НА ЛИЧИНОК ПЕРЕЛЕТНОЙ САРАНЧИ 5 I Микроспоридиалъно-грибная инфекция

Успех микробиологического контроля стадных саранчовых очевидно будет определяться созданием постоянно действующего инфекционного фона в местах их резерваций В связи с этим важно выявить особенности проявления смешанных инфекций на саранчовых

В ходе экспериментов проводили оценку влияния перорального заражения микроспоридиями Р ЪсшЬае на эффективность гриба М апгзорЬш (МАК-1) Инфицирование грибом (титр 1х107) осуществляли через три, шесть и девять дней после заражения микроспоридиозом (титр 1х106) В качестве эталонов использовали вариант с заражением только Р 1осшЬае и для каждого варианта со смешенной инфекцией отдельное инфицирование грибом (табл 8)

Таблица 8 Биологическая активность микроспоридии Р ЬсиМае и гриба М агшорЬае (МАК-1) при отдельном и совместном заражении в отношении личинок 3-4-го возрастов перелетной саранчи

Вариант Смертность (%), сут

5 7 9 11 13 15 17

МАК-1 1x106 0 0 12,5±7,2 31,3±12 37,5±16,1 37,5*16,3 43,8±12

1x107 0 0 56,3±6,3 62,5±7,2 68,75±6,д 75+10,2 81,3±6,3

Р íocustae 1х106 0 0 0 0 0 6,3±6,3 6,3±6,3

Р \ocustae (106) + МАК-1 (106)* 0 6,3±6,3 31,3±12 62,5±16 81,3±12 87,5±7,2 100

Р ¡осг«4ае (106) + МАК-1 (107)* 18,8±12 62,5±12,5 81,25±6,3 87,5±7,2 100 100 100

Контроль 0 0 6,3±6,3 6,3±6,3 6,3±6,3 12,5±7,2 12,5±7,2

НСР(|5 19,1 64,1 21,44** 25,86 27,32 30,00 20,53

* для смешенной инфекции отсчет уровня смертности ведется от момента заражения грибом жирным выделены НСР дош выборок имеющих существенные различия

Заражение грибом личинок, инфицированных микроспоридиями за три и за шесть дней до этого, не приводит к существенному повышению активности микоза, как по суммарному уровню смертности, так и по скорости гибели При заражении микозом насекомых инфицированных микроспоридией за девять дней до этого, обнаружено существенное повышение скорости нарастания смертности, как в случае заражения только грибом, так и микроспоридией В первом случае уже на 5-е сутки гибель хозяина составляла 55 %, а к 9-11-м достигла 85-90 %. В тоже время в варианте с чистым грибом смертность на 9-е сутки не превышала 40 %. К 17-м суткам указанные различия нивелировались, и смертность во всех вариантах опыта составляла 80-100 %

В ходе следующего эксперимента личинок саранчи, предварительно ин-вазированных Р ¿осг^ае (1х106 спор/особь), через девять дней после инокуляции заражали грибом М атво^ше при титрах 1х106 и 1х107 конидий/мл

При заражении инвазированных Р к>сг«4ае личинок грибом с титром 1х106 наблюдаются существенные различия по сравнению с отдельным использованием М атворкае в той же концентрации, как по суммарному уровню смертности, так и по динамике гибели личинок При этом, существенные различия по указанному критерию наблюдались практически в течение всего периода наблюдений При инфицировании М апгзор1гае с титром

1x107 личинок зараженных микросгюридией по суммарному уровню смертности не было обнаружено существенных различий. Особенностями патогенеза при смешанных инфекциях является преобладание симптомов микоз-ного поражения (прекращение питания, потеря координации движения, паралич, покраснение покровов погибших насекомых).

Таким образом, проведенные опыты по смешанной микроспоридиально-грибной инфекции показали, что наибольшую перспективу с практической точки зрения имеет заражение личинок грибом через девять дней после инвазирования микроспоридией, при этом целесообразно использовать сублетальную дозу микромицета.

5.2. Бактериально-грибная инфекция

Были проведены эксперименты, направленные на изучение биологической активности энтомопатогенных грибов и бактерии Pseudomonas sp., при синхронном совместном заражении личинок азиатской саранчи. В ходе опытов было выявлено, что их сочетание вызывает высокую гибель насекомого в относительно короткий промежуток времени.

Анализ данных по синхронному заражению грибами и бактерией показал, что в этих вариантах скорость гибели и конечный уровень смертности насекомых значительно выше в сравнении с монозаражениями (рис.5). Так, при заражении М. anisopliae и Pseudomonas уже на 5-7-е сутки смертность достигает 40-50%, а на 15-е сутки - 100%.

А Б

—М. wHsiiphue —.— М.пнЫорЧас - Pseudomm

— * Контроль(иола)

—— В. btUMOIIa

—•— В has\t(mu ■ Pseiulotmmiit - -*■ . I'stnihtmoiiu* —» -Конфли. (Bi>:uo

Рис. 5. Динамика габели перелетной саранчи при совместном заражении бактерией Pseudomonas sp. (титр - 4х107) и грибами А - IVf. anisopliae: Б - B.bassiana (титр - 1х107).

При инфицировании суспензией, содержащей В. bassiana и Pseudomonas наблюдается резкий скачок смертности (70%) в первые 5 суток эксперимента, при этом LT5o составляет всего 3 суток.

В случае смешанной инфекции бактериальный компонент реизолирует-ся из насекомых, погибших на 2-13 сутки опыта, а обрастание грибом отмечено на 8-е и последующие сутки гибели. В вариантах с монозаражением

ББК-1, мицелием обрастают трупы насекомых 4-х и последующих суток эксперимента. С повышением титра Pseudomonas снижается доля особей обрастающих мицелием. Доля трупов, из которых были выделены как бактерия, так и гриб составила 10-15%.

Таким образом, совместное инфицирование насекомых энтомопатоген-ными гифомицетами и Pseudomonas sp. приводит к уменьшению показателя LT и наибольшей биологической эффективности. Данное сочетание является перспективным для создания комплексного препарата для снижения численности вредных саранчовых.

ГЛАВА 6 ОЦЕНКА БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЭНТО-МОПАТОГЕННЫХ ГРИБОВ В ОТНОШЕНИИ ПЕРЕЛЕТНОЙ САРАНЧИ

В ПОЛЕВЫХ УСЛОВИЯХ

Кроме лабораторной популяции перелетной саранчи оценку биологической активности отобранных штаммов микромицетов в течение трех сезонов проводили в ходе мелкоделяночных полевых опытов на природных популяциях данного вида вредителя (Астраханская область, 2002-2003 годы; Алма-тинская область, Казахстан, 2005 год).

(А - 1х107

(Б - 5х107

2002

2005

Рис, 6. Биологическая активность энтомопатогенных гифомицетов М. апгэорИае (МАК-1), В. (хиет-атх (ББК-1) и В. ЬгопдпгаПи (БТ-86) на личинках старших возрастов Астраханской (2002-2003 гг.)

и Прибалхашской (2005 г.) популяций перелетной саранчи на 17-е сутки после обработки

В условиях Астраханской области оценка биологической активности отобранных штаммов проводилась на личинках 4 - 5-го возраста.

В 2002 году результаты наблюдений показали, что максимальный уровень смертности саранчи наблюдался при обработке штаммом БТ-86, с титром 1х108 (94,1 % - на 11-е сутки) (рис. 6). Среди других вариантов наиболее высокая смертность хозяина к 17-м суткам на уровне 94% отмечена при обработке МАК-1 с титром 1х108. При использовании этого штамма с титрами 1-х 107 и 5хЮ7 гибель вредителя в этот же период была несколько ниже и составила 82,2 и 76,4 % соответственно. На 22-е сутки по всем вариантам опыта гибель саранчи прекратилась, и различия по уровню ее смертности нивелировались.

В 2003 году наиболее высокая смертность личинок саранчи на 17-е сутки после обработки наблюдалась при использовании штаммов БТ-86 и

ББК-1с титром конидий 5х107 - 77,9 и 75,2% соответственно (рис 6) При обработке штаммом МАК-1 в обеих концентрациях к 17-м суткам смертность вредителя составила 41,7 и 44,5 % соответственно, что существенно ниже по сравнению с другими вариантами

В целом, биологическая активность испытуемых агентов биоконтроля в отношении перелетной саранчи была существенно ниже по сравнению с 2002 годом

В 2005 году аналогичный эксперимент в отношении личинок 5-го возраста перелетной саранчи был заложен в Алматинской обл Наибольшую активность в данном эксперименте проявил штамм ББК-1 - уже к 9-м суткам смертность насекомых составляла 77,4 и 90% при концентрациях 1х107 и 5х107 соответственно, а к 17-у дню - 88,3 и 100% (рис 6)

Таким образом, полученные в ходе полевых опытов результаты показывают, что отселектированные штаммы, являются высоковирулентными в отношении перелетной саранчи, при концентрациях рекомендуемых для практического использования (1х107 и 5х107)

ВЫВОДЫ

1 При анализе биологической активности девяти штаммов энтомопатоген-ных гифомицетов в отношении личинок перелетной саранчи были выявлены две группы культур резко различающиеся по признаку вирулентности низко- , средне- (до 50%) и высоковирулентные (до 100%) К последней группе относятся и два М апгзорЬае (МАК-1) и В Ьаввгапа (ББК-1) из трех новых изолятов, выделенных из саранчовых в резервациях Различия в уровне вирулентности штаммов обусловлены их биологическими особенностями, гидротермическими условиями районов выделения, видовой принадлежностью насекомых-хозяев и стадиями их развития

2 Определены основные параметры твердофазного и глубинного культивирования отобранных штаммов При поверхностном культивировании на зерновых субстратах (пшене, рисе, перловой крупе и горохе) наибольшая продуктивность конидий наблюдается у штамма ББК-1 (до 3,8х109 кони-дий/гр) Из четырех испытанных субстратов наибольшая продуктивность всех испытуемых штаммов проявляется на перловой крупе и пшене При глубинном культивировании штаммов наибольший выход бластоспор отмечен у МАК-1 (до 1,5x108 бластоспор/мл)

3 Наибольшую чувствительность к отобранным штаммам проявляют виды саранчовых, занимающие ксерофитные стации (пустынная саранча, пустынный прус, кобылка Вагнера) Выявлена повышенная чувствительность к микозам стадной фазы перелетной саранчи по сравнению с одиночной фазой Различия показателей вирулентности достигали 32%.

4 В условиях экспериментального заражения на хозяиино-паразитной системе «перелетная саранча-гриб» разработан метод пассирования перспективных штаммов в целях повышения их вирулентности и проведения стабилизирующего отбора Однократный пассаж увеличивает вирулентность на 30%

5 Обнаружено токсическое действие культуральной жидкости гриба М аигворТгае (МАК-1) Токсин продуцируются на шестые сутки культивирова-

ния и является термостобильным К основным симптомам токсикоза отнесена потеря координации движения, необратимый паралич тест-насекомого (перелетная саранча) Покраснение покровов токсицированных насекомых при этом не происходит

6 Выявлена зависимость смертности личинок саранчовых от инфекционной нагрузки возбудителей Определены летальные рабочие концентрации изучаемых штаммов для личинок перелетной саранчи (1х107 и 5х107 конидий/мл) Минимальная инфекционная нагрузка для развития микоза достигается при титре рабочей суспензии 1х104

7 Обнаружено, что при смешанном инфицировании саранчовых изучаемыми штаммами гифомицетов и микроспоридией Р bxustae или бактерией Pseudomonas sp существенно повышается скорость гибели хозяина

8 В ходе полевых исследований в условиях Астраханского заповедника (РФ) и Алматинской области (республика Казахстан) с 2002 по 2005 годы, отобранные штаммы гифомицетов M amsophae (МАК-1), В bassiana (ББК-1) и В brongniartii (БТ-86) показали высокую вирулентность в отношении перелетной саранчи В зависимости от места и времени проведения экспериментов биологическая активность микромицетов варьировала от 40 до 100%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Для разработки противосаранчовых микоинсектицидов предлагается использовать два новых штамма гифомицетов ББК-1 (В bassiana) и МАК-1 (М amsophae) Штаммы задепонированы в государственной коллекции ВИЗР

2 Разработаны лабораторные регламенты поверхностного и глубинного культивирования отобранных штаммов

3 В качестве оптимальных титров рабочей суспензии штаммов МАК-1 и ББК-1 предлагается использовать 1x107и 5x107 конидий/мл

4 Усовершенствованы методы проведения полевых испытаний энтомопа-тогенных микроорганизмов на различных видах вредных саранчовых

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Леднев ГР Проблемы биологической регуляции численности саранчовых (Orthoptera, Acndidae) / Леднев ГР, Исси ИВ, Левченко MJB. //ХП съезд Русского энтомологического общества Тез докл - С-Пб, 2002 - С 201-202

2 Леднев ГР Мюскардинозы итальянского пруса в Новосибирской области / Леднев ГР, Левченко MJB. //Защита растений от вредителей и болезней. Тр СПбГАУ, 2004 - С 57-62

3 Tokarev YS Virulens of new hyphomicetes to orthopteran insects / Tokarev YS, Levchenko M.V, Naumov AM Lednev Gil //Abstracts of SIP work shop - 2004 - P32

4 Леднев ГР Перспективы использования энтомопатогенных гифомицетов для подавления численности вредных саранчовых / Леднев ГР Левченко MJB, Токарев ЮС, Крюков ВЮ, Пав-люшин В А, Глупов ВВ, Горбунов АК., Сагитгов АО // Второй всероссийский съезд по защите растений фиггосанитарное оздоровление экосистем - СПб, ВМЗР, 2005 - Т 2 - С 75-77

5 Левченко MB Восприимчивость стадной и нестадной фаз перелетной саранчи к энтомопа-тогенным грибам / Левченко М.В., Леднев ГР, Крюков ВЮ // Второй всероссийский съезд по защите растений фитосанитарное оздоровление экосистем - СПб, ВИЗР, 2005 - Т 2 - С 73-75

6 Tokarev YS Biological efficacy of new strains of hyphomicetes against locusts and factors enhancing their activity / Tokarev YS, Levchenko M.V, Naumov A.M. Lednev GJR // Современные проблемы защиты и карантина растений материалы международной научно-практической конф, посвященной 90-летию со дня рождения Жаскена Тайчиковича Джиембаева - Алматы,

2005 - С 67-70

7 Левченко MB Отбор штаммов энтомопатогенных гифомицетов дня подавления численности вредных саранчовых (Qrthoptera, Acndidae) / Левченко MB, Ледкев ГР, Токарев ЮС, Наумов A M // Грибы и водоросли в биоценозах 2006 материалы международной конф, посвященной 75-летию Биологического факультета МТУ им. М.В Ломоносова - М, 2006 - С 197-198

8 Крюков ВЮ Синхронное заражение азиатской саранчи энтомопатогенными грибами (Metarhizium amsophae, Beauvena bassiana) и бактерией (Pseudamonas sp) / Крюков ВЮ, Ледаев ГР, Ходырев ВЛ, Левченко MB, Дуйсембеков Б А, Сагитов А.О, Глупов ВВ // Актуальные проблемы развития сельского хозяйства Казахстана, Сибири и Монголии. - Алмалыбак, 2006 - С 58-60

9 Крюков ВЮ Влияние энтомопатогенных грибов (Metarhizium anisopliae, Beauvena bassuma) и бактерии (Pseudónimas sp) на перелетную саранчу / Крюков ВЮ, Леднев ГР, Ходырев ВЛ, Левченко IVLR, Дуйсембеков БА, Глупов ВВ., Сагитов АО // Энтомологические исследования в северной Азии, Материалы VII межрегионального совещания энтомологов Сибири и Дальнего Востока - Новосибирск, 2006 - С 353-354

10 Лукина АВ Поиск и выделение новых штаммов энтомопатогенных грибов в Юго-Восточном Казахстане / Лукина А.В, Леднев ГР, Дуйсембеков Б А., Левченко М.В, Слямова БД, Смагулова ШБ// Актуальные проблемы защиты и карантина растений 1-ая Международная конференция молодых ученых и аспирантов, посвященная 15-летию Независимости Республики Казахстан Тез докл. - Алматы, 2006 - С 99-101

11 Дубовский И.М Активность и спекггр неспецифических эстераз в гомогенатах целого тела личинок пустынного пруса (Calliptamus barbarus) и азиатской саранчи (Locusta migratoria) при развитии грибных инфекций Metarhizium ariisopliae и Beauvena bassiana / Дубовский ИМ Слямова НД, Темирханова АБ, Адилханкызы А, Крюков ВЮ, Левченко МБ, Дуйсембеков Б А // Актуальные проблемы защиты и карантина растений Х-ая Международная конференция молодых ученых и аспирантов, посвященная 15-летию Независимости Республики Казахстан - Тез докл. Алматы, 2006 - С 93-96

12 Крюков ВЮ Перспективы применения энтомопатогенных гифомицетов (Deuteromycota, Hyphomycetes) для регуляции численности насекомых / Крюков ВЮ, Леднбв ГР, Дубовский ИМ., Серебров ВВ, Левченко MJ8, Ходырев ВЛ, Сагитов АО, Глупов ВВ // Евроазиатский энтомологический журнал, 2007 т 6 №2 - С 195-204

13 Леднев ГР Динамика гибели азиатской саранчи при синхронном заражении энтомопатогенными грибами (Metarhxzium anisoplae, Beauvena bassmna) и бактерией Pseudomonas sp / Леднев ГР, Крюков ВЮ, Ходырев ВП, Левченко IMR, Сагитов АО, Глупов ВВ //Сибирский экологический журнал, 2007 № 4 - С 527-531

14 Крюков ВЮ Экспериментальные бактериально-грибные инфекции колорадского жука (Leptinotarsa decemlinaeta (Say)) и массовых саранчовых (Acndidae) / Крюков ВЮ, Ходырев ВЛ, Ярославцева ОН, Левченко MUS, Леднев ГР //Достижения энтомологии на службе агропромышленного комплекса, лесного хозяйства и медицины Тез доклХШ съезда Русского энтомологического общества Краснодар, 2007 - С 114-115

15 Леднев ГР Видовая и популяционная восприимчивость саранчовых (Orthoptera, Acndidae) к энтмопатогенным шфомицетам (Deuteromycota, Hyphomicetes) / Леднев ГР, Левченко М.В., Токарев ЮС, Крюков ВЮ // Достижения энтомологии на службе агропромьшшенного комплекса, лесного хозяйства и медицины Тез доклХШ съезда Русского энтомологического общества Краснодар, 2007 - С 119-120

16 Lednev GH. Screerung of new strarns of entomopathogenic hyphomycetes to control locusts and grasshoppers (Orthoptera, Acndidae) / Lednev GR, Levehenko M.V, Tokarev Y S, Krykov VY, Pavlyushm VA, Glupov VV // Abstracts of XV Congress of European Mycologist, 2007 - P 85-86

17 Левченко MB Влияние фазовой изменчивости хозяина на перелетной саранчи чувствительность к энтомопатогенным гифомицетам / Левченко М.В., Крюков ВЮ, Леднев ГР //Информационный бюллетень ВПРС МОББ, 38, 2007 С156-158

18 Krykov V Influence of entomoathogemc hyphomycetes and bacteria (Pseudomonas sp) on locust / Krykov V, Khodyrev V, Glupov V, Levehenko M. Lednev G // Best practice in disease, pest and weeds management Symposium proceedmgs №82, Berlin, 2007 - P 90-91

Научное издание Ш20~печать ООО ИННОВАЦИОННЫЙ ЦЕНТР ЗАЩИТЫ РАСПШИЙ Лицензия ПЛД № 69-253 Подписано к печати 6 ноября 2007 г тир 100 экз

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Левченко, Максим Владимирович

Введение.

1. Энтомопатогенные гифомицеты - возбудители микозов саранчовых (Обзор литературы).

1.1. Видовой состав возбудителей и распространенность.

1.2. Жизненный цикл.

4 1.3. Факторы патогенности микромицетов.

1.3.1. Ферментативная активность.

1.3.2. Токсины.

1.4. Культивирование.

1.5. Препаративные формы.

1.6. Применение энтомопатогенных гифомицетов для подавления численности саранчовых.

2. Место, материалы и методы исследований.

2.1. Место проведения исследований.

2.2. Объекты исследований.

2.2.1. Патогены.

2.2.2. Тест-насекомые.

2.3. Методика исследований.

2.3.1. Культивирование грибов, микроспоридий и бактерий.

2.3.2. Изучение продуктивности при поверхностном и глубинном культивировании.

2.3.3. Определение скорости прорастания конидий в капле воды.

2.3.4. Определение жизнеспособности конидий.

2.3.5. Определение токсигенности энтомопатогенных грибов.

2.3.6. Разведение и сбор тест-насекомых.

2.3.7. Лабораторная оценка биологической активности.

2.3.8. Оценка биологической активности в полевых условиях.

2.3.9. Обработка полученных данных.

3. Влияние биологических свойств энтомопатогенных гифомицетов на их вирулентность в отношении саранчовых.

3.1. Изоляция и первичный скрининг штаммов микромицетов по признаку вирулентности к саранчовым.

3.2. Оценка биологической активности изучаемых штаммов на насекомых из других систематических групп.

3.3. Морфо-культуральные свойства изучаемых штаммов мюскардиновых грибов.

3.3.1. Продуктивность грибов при поверхностном и глубинном культивировании.

3.3.2. Динамика прорастания конидий.

3.4. Влияние пассирования на биологическую активность гриба M.anisopliae.

3.5. Влияние сублетальных доз гриба М. anisopliae на его активность.

3.6. Оценка инсектицидной активности экзотоксинов гриба М. anisopliae.

3.7. Зависимость смертности личинок перелетной саранчи от концентрации инокулюма.

4. Влияние популяции хозяина на биологическую активность энтомопа-тогенных грибов. 4.1. Чувствительность различных видов саранчовых к гифомицетам.

4.2. Восприимчивость стадной и нестадной фаз перелетной саранчи к эн-томопатогенным грибам.

4.3. Влияние пола хозяина на биологическую активность мюскардиновых грибов.

4.4. Возрастная чувствительность личинок перелетной саранчи к микозу.

5. Активность смешенных инфекций в отношении личинок перелетной саранчи.

5.1. Микроспоридиально-грибная инфекция.

5.2. Бактериально-грибная инфекция.

6. Оценка биологической эффективности энтомопатогенных грибов в отношении перелетной саранчи в полевых условиях.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологическое обоснование использования энтомопатогенных гифомицетов для подавления численности вредных саранчовых"

Разработка биологических средств подавления численности вредных саранчовых (стадных и нестадных) является одним из наиболее приоритетных и динамично развивающихся в настоящее время направлений в области борьбы с представителями данной группы вредителей. Подобные исследования активно проводятся во в ряде стран мира - США, Аргентина, Бразилия, Южно-Африканская Республика, Франция, Германия, Испании и др. (Lomer et all, 2001).

Из всех известных групп энтомопатогенных микроорганизмов поражающих саранчовых наибольшее внимание исследователей привлекают мюскардиновые грибы (Deuteromycetes, Hyphomycetes).

Не смотря на то, что в природных условиях естественная зараженность большинством из этих микромицетов обычно не превышает 20%, они обладают высокой агрессивностью в отношении многих видов насекомых, в частности саранчовых, легко выделяются и растут на искусственных питательных средах (как в поверхностной, так и в глубинной культуре), достаточно экономичны в производстве и удобны в применении.

В настоящее время наиболее интенсивные работы ведутся с представителями двух родов мюскардиновых грибов - Metarhizium и Beauveria.

За рубежом в последние два десятилетия проведен целый комплекс исследований, направленных на разработку препаративных форм на основе этих микромицетов для контроля численности саранчовых (Lomer et al., 2001).

В результате проведенных работ было создано и успешно внедрено в интегрированные программы защиты растений от представителей данной группы вредителей два препарата на основе гриба Metarhizium anisopliae var. acridum (Sorok,) Green Muscle® (Африка) Green Guard® (Австралия) (Lange-wald et all, 1997; Lomer et al., 2001).

Указанные препараты обладают высокой биологической эффективностью на уровне - 85-95%в отношении разных видов саранчовых - перелетная, пустынная, мороккская саранча и кобылки.

Интенсивные исследования проводятся и в отношении возможности использования для контроля саранчовых гриба Beauveria bassiana (Bals.).

На основе этого гифомицета в США созданы два экспериментальных противосаранчовых препарата - Mycocide GH® и Mycotrol® (http://www.epa.gov/pesticides/foia/reviews/128924.htm).

В 2004 году на заседании Консультационного комитета по пестицидам при ФАО было рекомендовано широкомасштабное введение в интегрированные системы контроля численности саранчовых биопрепаратов на основе эн-томопатогенных гифомицетов (Сергеев, Лачининский, 2006).

На территории бывшего СССР исследования, посвященные использованию энтомопатогенных микроорганизмов в борьбе с вредными саранчовыми - немногочисленны и носят отрывочный характер. Имеется ряд сообщений о высокой эффективности (до 100%) отдельных штаммов грибов Beauveria bassiana и В. brongneartii (Sacc.) Petch. на стадных и нестадных видах (Евлахова, Ракитин, 1968; Нуржанов, 1989 , Огарков, Огаркова Г.Р., 2000, Штерншис, Цветкова, 2002).

Анализ представленных материалов показывает, что использование биопрепаратов на основе мюскардиновых грибов является одним из наиболее перспективных и экологически безопасных направлений в подавлении численности вредных саранчовых. Это вызывает необходимость проведения комплексных работ по созданию, биологической оценке и внедрению в производство отечественных высокоэффективных микоинсектицидов для регуляции численности представителей данной группы вредителей (прежде всего стадных).

Цель работы - отбор видов и штаммов энтомопатогенных гифомицетов -как продуцентов биопрепаратов для борьбы с вредными саранчовыми (перелетная саранча, итальянский прус и др.) и оценка возможности их использования.

В задачи работы входило:

1. Поиск и выделение природных изолятов гифомицетов, паразитирующих на саранчовых, в том числе и в резервациях.

2. Скрининг культур грибов (новых и коллекционных) по признаку вирулентности в отношении различных видов, возрастов и фаз саранчовых;

3. Определение продуктивности отобранных штаммов при поверхностном и глубинном культивировании;

4. Оценка биологической активности отобранных штаммов в полевых условиях.

5. Изучение возможностей совместного использования разных видов патогенов и смешанных инфекций.

Автор выражает искреннюю благодарность сотрудникам ВИЗР И.В. Исси, Ю.С. Токареву, А.О. Берестецкому, С.Г. Удалову, Ф.Б. Ганнибалу, A.M. Наумову; директору ИСиЭЖ СО РАН (Новосибирск) В.В. Глупову и сотрудникам лаборатории патологии насекомых этого института В.Ю. Крюкову и И.М. Дубовскому за всестороннюю помощь в проведении исследований, А.К. Горбунова, зам. директора Астраханского государственного биосферного заповедника (Астрахань), сотрудникам Казахстанского НИИ защиты растений (пос. Рахат, Казахстан) во главе с академиком Сагитовым А.О. за помощь в организации исследований; куратору коллекции микроорганизмов ЗАО «Росагросервис» Б.А. Борисову за предоставленные культуры грибов; заведующему инсектарием Московского зоопарка М.В. Березину за любезно предоставленные культуры насекомых.

Особую благодарность выражаю руководителю группы по энтомопато-генным грибам лаборатории микробиологической защиты растений ВИЗР к.б.н, доценту Г.Р. Ледневу за всестороннюю помощь и консультации на всех этапах выполнении данной работы.

Заключение Диссертация по теме "Энтомология", Левченко, Максим Владимирович

ВЫВОДЫ

1. При анализе биологической активности девяти штаммов энтомопатогенных гифомицетов в отношении личинок перелетной саранчи были выявлены две группы культур резко различающиеся по признаку вирулентности: низко - и средневирулентные (до 50%) и высоковирулентные (до 100%). К последней группе относятся и два из трех новых изолятов, выделенных из саранчовых в резервациях: М. anisopliae (МАК-1) и В. bassiana (ББК-1). Различия в уровне вирулентности штаммов обусловлены их биологическими особенностями, гидротермическими условиями районов выделения, видовой принадлежностью насекомых-хозяев и стадиями их развития.

2. Определены основные параметры твердофазного и глубинного культивирования отобранных штаммов. При поверхностном культивировании на зерновых субстратах (пшене, рисе, перловой крупе и горохе) наибольшая продуктивность конидий наблюдается у штамма ББК-1 (до 3,8x109 кони-дий/гр.). Из четырех испытанных субстратов наибольшая продуктивность всех испытуемых штаммов проявляется на перловой крупе и пшене. При глубинном культивировании штаммов наибольший выход бластоспор отмео ченуМАК-1 (до 1,5x10 бластоспор/мл).

3. Наибольшую чувствительность к отобранным штаммам проявляют виды саранчовых, занимающие ксерофитные стации (пустынная саранча, пустынный прус, кобылка Вагнера). Выявлена повышенная чувствительность к микозам стадной фазы перелетной саранчи по сравнению с одиночной фазой. Различия показателей вирулентности достигали 32%.

4. В условиях экспериментального заражения на хозяинно-паразитной системе «перелетная саранча-гриб» разработан метод пассирования перспективных штаммов в целях повышения их вирулентности и проведения стабилизирующего отбора. Однократный пассаж увеличивает вирулентность на 30%.

5. Обнаружено токсическое действие культуральной жидкости гриба М. anisopliae (МАК-1). Токсин продуцируются на шестые сутки культивирования и является термостобильным. К основным симптомам токсикоза отнесена потеря координации движения, необратимый паралич тест-насекомого (перелетная саранча). Покраснение покровов токсицированных насекомых при этом не происходит.

6. Выявлена зависимость смертности личинок саранчовых от инфекционной нагрузки возбудителей. Определены летальные рабочие концентрации изучаемых штаммов для личинок перелетной саранчи (1x107 и 5x107 конидий/мл). Минимальная инфекционная нагрузка для развития микоза достигается при титре рабочей суспензии 1x104.

7. Обнаружено, что при смешанном инфицировании саранчовых изучаемыми штаммами гифомицетов и микроспоридией P. locustae или бактерией Pseudomonas sp. существенно повышается скорость гибели хозяина.

8. В ходе полевых исследований в условиях Астраханского заповедника (РФ) и Алматинской области (республика Казахстан) с 2002 по 2005 годы, отобранные штаммы гифомицетов М. anisopliae (МАК-1), В. bassiana (ББК-1) и В. brongniartii (БТ-86) показали высокую вирулентность в отношении перелетной саранчи. В зависимости от места и времени проведения экспериментов биологическая активность микромицетов варьировала от 40 до 100%.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

I. Руководствуясь литературными данными (Нуржанов, 1989, Lomer et al., 2001) и результатами собственных оригинальных исследований, со значительной степенью вероятности, можно считать, что из всех известных групп эномопатогенных микроорганизмов ведущее место с точки зрения контроля численности саранчовых занимают возбудители грибной этиологии (энто-мофторовые и мюскардиновые грибы). При этом энтомофторовые грибы как типичные облигатные паразиты способные вызывать регулярные массовые эпизоотии в популяциях многих видов данной группы вредителей являются мощным естественным механизмом регуляции их численности. Возбудители же мюскардинозов, являясь факультативными сапротрофами, выступают в качестве наиболее перспективной группы как продуценты новых биологических препаратов.

II. Проведенные многолетние исследования показали, что наибольшей вирулентностью к саранчовым обладают штаммы гифомицетов {В. bassiana (ББК-1) и М. anisopliae (МАК-1)), выделенные из целевой группы насекомых-хозяев в районах с пониженной относительной влажностью воздуха, где ГТК ниже 1. При этом повышенную чувствительность к микозам проявляют виды саранчовых занимающие ксерофитные стации (сухие степи и полупустыни).

III. Исходя из полученных данных по активности как моно грибных, так и смешанных инфекций можно предположить два основных способа биологического контроля численности саранчовых:

1) Интродукция комплекса эномопатогенных микроорганизмов в местах резерваций вредителей. Данный метод предполагает создание мощного постоянного инфекционного фона грибной и микроспоридиальной этиологии, в первую очередь в пределах гнездилищ перелетной саранчи (плавни рек и озер).

2) обработка микоинсектицидами на основе отобранных высоковирулентных штаммов кулиг саранчовых на фазе личинок младших возрастов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Левченко, Максим Владимирович, Санкт-Петербург-Пушкин

1. Андросов Г. К. Энтомопатогенные грибы таежных биогеоценозов как агенты биологической борьбы с вредными насекомыми. Автореф. дис. докт.лбиол. наук. М., 1986. 45 с.

2. Бегляров Г. А., Шумилов В. А., Девяткина Г. А., Пономарева И. А., Мелехин С. С. Механизированное получение вертициллиума // Защита растений. 1986. № 5. С. 37 39.

3. Беленикина 3. В., Ищенко В. Л., Луговская Е. В., Чигалейчик А, Г. Хитинолитическая активность энтомопатогенных грибов // Проблемы создания и применения микробиологических средств защиты растений. Тез. докл. Велегож, 1989. С. 212.

4. Борисов Б. А. Проблемы создания и использования микоинсектицидных препаратов. // Изучение энтомопатогенных микроорганизмов и разработка технологий производства и применения. Научн. раб. симп. СЭВ. Бухарест, 1990. С. 8 23.

5. Борисов Б.А., Серебров В.В., Новикова И.И., Бойкова И.В. Энтомопатогенные аскомицеты и дейтеромицеты. // Патогены насекомых: структуральные и функциональные аспекты. М., 2001. С. 352-427.

6. Варли К. Д., Хассел М. П., Градуэлл Д. Р. Экология популяций насекомых. М., 1978. 220 с.

7. Вейзер Я. Микробиологический метод борьбы с вредными насекомыми. М.: Колос, 1972. 639с.

8. Велицкая И. С. Изучение токсического компонента энтомопатогенного гриба Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. // Микология и фитопатология. 1973. Т.63. № 7. С. 229 230.

9. Воронина Э. Г. Биологические основы использования энтомофторовых грибов в защите растений против тлей. Автореф. дис. докт. биол. наук. Л., 1989.45 с.

10. Гештовт Н. Ю., Сулейменова Ж. Б., Баймагамбетов Е. Ж. Критерии селекционного отбора высоковирулентных штаммов энтомопатогенных грибов. // Актуальные проблемы защиты растений в Казахстане. Алма-Бастау. Кн. 1. 2002. С. 316 340.

11. Гештовт Н.Ю. Энтомопатогенные грибы. Биотехнологические аспекты. Алматы, 2002. 288 с.

12. Глупов В.В. Механизмы резистентности насекомых. // Патогены насекомых: структуральные и функциональные аспекты. М., 2001. С. 475-557

13. Гораль В. М. Биологические особенности энтомопатогенного гриба Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. в условиях глубинно поверхностного культивирования. Автореф. дис. канд. биол. наук. Киев, 1970. 24 с.

14. Гораль В.М. Энтомоцидная активность мускардинных грибов как функция условий культивирования. // VI съезд Украинского микробиол. о-ва. Киев, 1984. ч.1.С. 186-187.

15. Гораль В. М., JIanna Н. В. Технология производства энтомопатогенного препарата метаризина. // Теоретические и прикладные аспекты биотехнологии. Украинской акад. аграр. наук. Киев, 1991. С. 29 30.

16. Гоголев А.Н. Возможность использования энтомопатогенных грибов рода Beauveria в борьбе с нестадныии саранчовыми в Центральной Якутии. Экологические проблемы защиты растений. Тез. докл. Л., 1990. С 220.

17. Гулий В. В, Иванов Г. М., Штерншис М. В. Микробиологическая борьба с вредными организмами. М.: Колос, 1982. 272 с.

18. Долженко В.И. Вредные саранчовые: биология, средства и технология борьбы. С-Пб, 2003. 216 с.

19. Евлахова А.А., Швецова О.И. Болезни вредных насекомых. М.: Колос, 1965. 52с.

20. Евлахова А.А. Микозы вредных насекомых. Автореф. дис. докт. биол. наук. Пушкин, 1969. 36с.

21. Евлахова А.А. Энтомопатогенные грибы. Систематика, биология, практическое значение. Л.: Наука, 1974. 260с.

22. Евлахова А.А., Ракитин А.А. Электрическая активность нервной цепочки восточной саранчи Locusta migratoria manilensis Меу. в условиях экспериментального микоза. // Докл. АН СССР. 1968. Т. 178. № 2. С. 485-488.

23. Коваль Э.З. Определитель эномофильных грибов СССР. Киев: Наукова Думка, 1974. 260 с.

24. Курдюков В.В., Наумович О.Н. Видовая и межвидовая изменчивость чувствительности саранчовых к инсектицидам. // Бюлл. ВНИИ защиты растений. Л., 1984. №58. С. 7-12.

25. Лаппа Н. В., Гораль В. М. Изучение и использование мускардиновых грибов в защите растений. // Микробиологические методы борьбы с вредителями сельскохозяйственных растений. Тр. ВИЗР. Л., 1976. Т. 47. С. 53 -67.

26. Лаппа Н. В., Гораль В. М., Анохина В. П., Круть М. В. Сравнительное действие энтомопатогенных грибов на тепличную белокрылку. // Инф. Бюл, ВПС МОББ. 1988. № 23. С. 43 47.

27. Лачининский А.В., Сергеев М.Г., Чильдебаев М.К., Черняховский М.Е., Локвуд Дж.А., Камбулин В.Е., Гаппаров Ф.А. Саранчовые Казахстана, Средней Азии и сопредельных территорий. Ларами, 2002. 387с.

28. Леднев Г.Р., Борисов Б.А., Митина Г.В. Возбудители микозов насекомых. Пособие по диагностике. С-Пб., 2003. 79с.

29. Логинов Е.В., Павлюшин В. А. Биологическая оценка инфекционности некоторых изолятов Bacillus для персиковой и гороховой тлей. // Бюл. ВИЗР. 1987. №67. С. 5-11.

30. Лозинская Я.Л. Изменение активности детоксицирующих ферментов и антиоксидантного статуса личинок Galleria mellonella L. При микроспоридиозе. Автореф. дис. канд. биол. наук. Новосибирск, 2002. 19с.

31. Митина Г. В. Энтомоцидные токсины гриба Verticillium lecanii (Zimm.) Vieg. продуцента биопрепарата вертициллин М. Автореф. дис. канд. биол. наук. С-Пб., 1992. 19 с.

32. Митина Г. В., Сокорнова С.В., Павлюшин В.А. Выделение и изучение спектра действия фосфолипидов с инсектицидной активностью энтомопатогенного гриба Lecanicillium lecanii. // Микология и фитопатология. 2002. Т. 36. Вып. 6. С. 53-59.

33. Нуржанов А. А. Микозы саранчовых в Каракалпакии. // Защита культур от основных вредителей и сорняков в Каракалпакской АСС. Нукус, 1988. С. 130-134.

34. Нуржанов А. А. Энтомопатогенные микроорганизмы стадных саранчовых Узбекистана и перспективы их использования в биологической защите растений. Автореф. канд. дис. биол. наук. Л., 1989. 18 с.

35. Нуржанов А. А., Лачининский А.В. Энтомопатогенные микроорганизмы стадных саранчовых в Узбекистане. // Саранчовые. Экология и меры борьбы. Л., 1987. С. 62-69.

36. Нуржанов А.А., Павлюшин В.А. Вирулентность энтомопатогенных грибов для личинок итальянского пруса. // Экологические проблемы защиты растений. Тез. докл. Л., 1990. С. 246.

37. Одум Ю. Основы экологии. М.: Мир. 1975. 740 с.

38. Огарков Б. Н. Биологическое обоснование способов создания и использования грибных препаратов для борьбы с насекомыми: Автореф. дис. докт. биол. наук. Л., 1990. 44 с.

39. Огарков Б. Н. Методы выделения и оценки высоковирулентных штаммов мускардиновых грибов. // Вопросы методологии и методики научных исследований по сельскому хозяйству. Вып. 1. Новосибирск. 1972. С. 93-94.

40. Огарков Б.Н., Огаркова Г.Р. Энтомопатогенные грибы Восточной Сибири. Иркутск, 2000.134 с.

41. Огаркова Г.Р., Огарков Б.Н., Полегуева Е.П. Перспективность использования энтомопатогенных грибов для микробиологической защиты растений от вредных насекомых. // Биологический метод защиты растений. Минск, 1990. С. 158-159.

42. Павлюшин В. А. Факторы вирулентности гриба Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. и патогенез мускардиноза насекомых. Дис. канд. биол. наук. Д., 1979.205 с.

43. Павлюшин В.А. Научные основы использования энтомопатогенов и микробов. Дис. докт. биол. наук. СПб, 1998. 68с.

44. Работнова И. JI. Физиология микроорганизмов и управляемое культивирование // Успехи микробиологии. 1990. № 24, С. 88 99.

45. Сергеев М.Г., Лачининский А.В. Стадные саранчовые: начало грядущего века. // Энтомологические исследования в Северной Азии. Новосибирск, 2006. С. 284-286.

46. Серебров В.В., Алексеев А.А., Глупов В.В. // Известия РАН. Сер. биол. 2000. (в печати).

47. Тарасов JI. Г. Разработка одноэтапной технологии производства боверина и испытание его инсектицидной активности. Автореф. дис. канд. биол. наук. JI., 1970. 22 с.

48. Токарев Ю.С. Иммунные реакции гемолимфы прямокрылых насекомых при микроспоридиозе. Автореф. дис. канд. биол. наук. СПб., 2003. 22 с.

49. Тюльпанова В. А., Тюльпанов В. Г., Козлова Т. JI., Малиновский А, и др. Метаболические особенности гриба Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. при поверхностном и глубинном культивировании. // Микология фитопатология. 1987. Т.21. №3. С. 259 265.

50. Тюльпанова В. А., Козлова Т. Д., Малиновский A. JL, Нечаев А Факторы, лимитирующие рост и спорообразование энтомопатогенного гриба Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. // Лимитирование и ингибирование роста микроорганизмов. Пущино, 1989. С. 4 7.

51. Увалиева К. К., Бондарчук Т. И., Гештовт Н. Ю. Перспективы использования микробиологических средств в качестве регуляторов численности слизней вредителей сельскохозяйственных культур. // Вестник с/х науки Казахстана. 1991. № 12. С. 38 - 40.

52. Федоринчик Н. С. Микробиологический метод борьбы с вредителями с болезнями сельскохозяйственных растений. // Биологические средства защиты растений. М.: Колос, 1974. С. 263 280.

53. Федорова С. Ж. Энтомопатогенные бактерии и грибы регуляторы численности клещей Argas persicus Oken. Фрунзе: Илим, 1988. С. 148.

54. Хлопцева Р. И. В ожидании большого скачка // Защита растений. 1992. №7. С. 17-19.

55. Цыпленков Е.П. Методические указания по борьбе с вредными саранчовыми. М.: Колос, 1979. 31с.

56. Чумакова А. Я. Естественная изменчивость гриба Entomophthora thaxteriana Petch. и пути отбора высоковирулентных форм. Автореф. дис канд. биол. наук. JL, 1983. 18 с.

57. Штерншис М.В., Цветкова В.П. Микробиологический метод контроля саранчовых. // Защита и карантин растений. 2002. № 6. С. 26-27.

58. Штейнхауз Э. Микробиология насекомых. М.: Изд-во иностранной литературы, 1950. 778 с.

59. Цыпленков Е.П. Вредные саранчовые насекомые СССР. JL: Колос, 1970. 272 с.

60. Al-Aidroos К., Seifert А. М. Polisaccharide and protein degradation, germination and virulence against mosguitous in the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae. // Canad. J. Gen. 1980. V. 36. P. 29 34.

61. Alves S. В., Pereira R. M, Production of Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok. and Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. in plastic trays. // Ecosistema. 1989. V. 14. P. 188 192.

62. Arthurs S. P., Thomas M. B, Factors affecting horizontal transmission of entomopathogenic fungi in locusts and grasshoppers. // Aspects Appl. Biol. 1999. V. 53.-P. 89-98.

63. Balfour-Browne F.L. The green muscardine disease of insect, with special reference out an epidemic in swarm of locusts in Eritrea. // Proc. Roy. Entomol. Soc. London. 1960. V. 35. P. 65-74.

64. Bateman R. P. Methods of Appl. of microbial pesticide formulations for the control of locusts and grasshoppers. // Memoirs Entomol. Canad. Soc. 1997. V. 171. P. 69-8.

65. Bateman R. P. The development of a mycoinsecticide for the control of locusts and grasshoppers. // Outlook on Agriculture. 1997. V. 26. P. 13 -18.

66. Bello V. A., Paccola-Meirelles L. D. Localization of auxotrophic and benomyl resistance markers through the parasexual cycle in the Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. entomopathogen. // J. Invert. Pathol. 1998. V. 72. N 2. P. 97 103.

67. Bidochka M. J., Khachatourians G. G. Identification of Beauveria bassiana extracellular protease as a virulence factor in pathogenicity toward the migratory grasshopper, Melanoplus sanguinipes. // J. Invert. Pathol. 1990. V. 56. P. 362 -370.

68. Bidochka M. L, Khachatourians G. G, Protein hydrolysis In Grasshopper cuticulars by Entomopathogenic fungal extracellular proteases. // J. Invert. Pathol. 1994. V. 63. P. 7- 14

69. Binnington K., Retnakaran A. Epidermis a biologically active target for metabolic inhibitors. // Physiology of insect epidermis. East Melbourne: Inkata Press Pty Ltd., 1991. P. 307 334.

70. Brey P. Т., Ohayon H., Lesourd M., Roucache., Latge J. P. Ultrastructure and chemical composition of the outer layers of the cuticle of the pea aphid s Acyrthosiphon pisum (Harris). // Сотр. Biocem. Physiol. 1985. V. 82. P. 401— 411.

71. Burge M. N. The scope of fungi in biological control. // Fungi in biological control systems. Manchester New York: Manchester University Press, 1988. P. 1 -18.

72. Butt Т. M., Ibrahim L., Clare S.J., Beckett A. The germination behaviour of Metarhizium anisopliae on the surface of aphid and flea beetle cuticules. // Mycol. Res. 1995. V. 99. P. 945 950.

73. Champlin F. R., Cheung P. Y. K., Pekrul S., Smith R. J., et al. Virulence of Beauveria bassiana mutants for the pecan weevil. // J. Econom. Entomol. 1981. V. 74. P. 617-621.

74. Charnley A. K. Entomopathogenic fungi and their role in pest control. // The Mycota IV. Environmental and microbial relationships. - D. Wicklow and M. Soderstrom, Eds. - Springer - Verlag, Heidelberg, Germany. 1997. P. 185 -201.

75. Charnley A. K. Physiological aspects of destructive pathogenesis in insects by fungi: A speculative review. // Brit. Mycol. Soc. Symp. 1984. V. 6. P. 132-141.

76. Claydon N. Insecticidial secondary metabolites from the entomopathogenic fungus Entomophthora virulenta. // J. Invert. Pathol. 1978. V. 32. N. 3. P. 319 324.

77. Claydon N., Grove P. D. Insecticidal secondary metabolic products from the entomopatogenous fungus Verticillium lecanii. // J. Invert. Pathol. 1982. V. 40. N. 3. P. 413 -418.

78. Cliquet S., Jackson M. A. Comparison of air drying methods for evaluating the desiccation tolerance of liquid culture - produced blastospores of Paecilomyces fiimosoroseus. // World J. Microbiol. Biotech. 1997. V. 13. P. 299 -303.

79. Cortat M., Turian G. Conidiation of Neurospora crassa in submerged culture without mycelial phase. // Arch. Microbiol. 1974. V. 95. P. 305 309.

80. Dahlberg K. R., Van Etten J. L. Physiology and biochemistry of fungal sporulation. // Ann. Rev. Phytopathol. 1982. V. 20. P. 281 301.

81. Delgado F.X., Brittonl J.H, Lobo-Lima M.L., Razafindratiana2 E., Swearingen W. Small-scale field trials with entomopathogenic fungi against Locusta migratoria capito in Madagascar and Oedaleus senegalensis in Cape Verde. In preparation.

82. Fargues J. Luz C. Effects of fluctuating moisture and temperature regimes on the infection potential of Beauveria bassiana for Rhodnius prolixus. // J. Invert Pathol. 2000. V. 75. N. 3. P. 202 211.

83. Fargues J., Goettel M. S., Smits N., Ouedraogo A., et al. Variability in susceptibility to simulated sunlight of conidia among isolates of entomopathogenic hyphomycetes. //Mycopathologia. 1996. V. 35. P. 171 181.

84. Fenice M., Selbmann L., Di Giambattista R., Federici F., Chitinolytic activity at low temperature of an Antarctic strain (A3) of Verticillium lecanii. // Res. Microbiol. 1998. V. 149. N. 4. P. 289 300.

85. Ferron P. Biological control of insect pests by entomogenous fungi. // Ann. Rev. Entomol. 1978. V. 3. P. 409 442.

86. Galani G., Andrei A. M. Effect of some formulation substances on germination and virulence of Beauveria bassiana and Verticillium lecanii conidia. // Insect pathogenes and insect parasitic nematodes. Bull. IOBC // WPRS. 1996. V. 19. N. 9. P. 218-220.

87. Gelernter W. D., Lomer C. J. Success in biological control of above -ground insects by pathogens. // Measures of Success in Biological Control. G. Gurr and S. Wratten, Eds. 2000. P. 127 139.

88. Griffiths J., Bateman R, Evaluation of the Francome Mkll exhaust nozzle sprayer to apply oil based formulations of Metarhizium flavoviride for locust control. // Pesticide Sci. 1997. V. 51. P. 176 - 184.

89. Gupta S. C., Leathers T. D., El-Sayed G. N. Insect cuticle degrading enzymes from the entomogenous fungus Beauveria bassiana. // Exp. Mycol. 1992. V. 16. P. 132- 137.

90. Gupta S. C., Leathers T. D., El-Sayed G. N., Ignoffo С. M. Relationships among enzyme activities and virulence parametres in Beauveria bassiana infection of Galleria mellonella and Trichoplusia. // J. Invert. Pathol. 1994. V. 64. P. 13 17.

91. Hall F. R. Biorational pest control agents: formulation and delivery // ACS Symposium. 1995. V. 595. P. 306.

92. Hernandez-Velazquez V. M., Hunter D. M., Barrientos-Lozano L., Lezama-Gutierrez R., Reyes-Villanueva F. Susceptibility of (Orthoptera: Acrididae) to Metarhizium anisoplia var. acridum (Deuteromycotina:

93. Hyphomycetes): laboratory and field trials.// J. Orthoptera Res. 2003. V 12. N 1. P. 89-92.

94. Huber J. Untersuchungen zur Physiologic insektentotenden Pilze. // Arch. Mikrobiol. 1958. V. 29. P. 257 276.

95. Inglis G. D., Johnson D. L., Goettel M. S. Effect of bait substrate and formulation on infection of grasshopper nymphs by Beauveria bassiana. // Biocontrol Sci. Technol. 1996. V. 6. P. 35 50.

96. Jackson A. M., Whipps J. M., Lynch J. M. Effects of temperature, pH and water potential on growth of four fungi with disease biocontrol potential. // J. Microbiol. Biotechnol. 1991. V. 7. P. 494 501.

97. Jackson C. W., Heale J. В., Hall R. A. Traits associated with virulence to the aphid Mcicrosiphoniella sanborni in eighteen isolates of Verticillium lecanii //Ann Appl. Biol. 1985. V. 106. P. 39 48.

98. Jackson M. A., McGuire M. R. Lacey LA., Wraight S. P. Liquid culture production of dedication tolerant blastospores of the bioinsecticidal fungus Paecilomyces fumosoroseus. // Mycol. Res. 1997. V. 101. P. 35 41.

99. James R. R, Effect of exogenous nutrients on conidial germination and virulence against the silverleaf whitefly for two Hyphomycetes. // J. Invert. Pathol. 2001. V. 77. N.2. P. 99-107

100. Jenkins N. E., Goettel M. S. Methods for mass production of microbial control agents of grasshoppers and locusts. //Memoirs Entomol. Canad. Soc. 1997. V. 171. P. 37-48.

101. Jenkins N. E., Heviefo G., Langewald J., Cherry A. J., Lomer C. J. Development of mass production technology for aerial conidia for use as mycopesticides. // Biocontrol News Info. 1998. V. 19. P. 21 31.

102. Jenkins N. E., Thomas M. B. Effects of formulation and Appl. method on the efficacy of aerial and submerged conidia of Metarhizium flavoviride for locust and grasshopper control. // Pesticide Sci. 1996. V. 46. P. 299 306.

103. Kmitowa K. The effect of different amounts of nitrogenous compounds in the culture medium on the growth and pathogenicity of entomopathogenic fungi. // Bull. Acad. Pol. Sci. 1979. V. 2. N. 27. P. 949 952.

104. Kooyman C., Bateman R. P., Langewald J., Lomer, C. J., et al. Operational scale Appl. of entomopathogenic fungi for control of Sahelian grasshoppers. // Proc. Royal Society. 1997. V. 264. P. 541 546.

105. Kosir J. M., MacPherson J. M., Khachatourians G. G. Genomic analysis of a virulent and a less virulent strain of the entomopathogenic fungus. // Can. J. Microbiol. 1991. V. 37. N 7. P. 534 541.

106. Krasnoff S.B., Gupta S., Leger R.J. St, Renwick J. A.A., Roberts D.W. // J. Invertebr. Pathol. 1991. - 58. - P. 180-188.

107. Kreuger S. R, Villani M. G., Martins A. S., Roberts D. W. Efficacy of soil Appl.s of Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin conidia, and standard and lyophilized mycelial particles against Scarab grubs. // J. Invert. Pathol. 1992. V. 59. P. 54 60.

108. Lane В. S., Trinci A. P. J., Gillespie A. T. Influence of cultural conditions on the virulence of conidia and blastospores of Beauveria bassiana to the green leafhopper, Neaphotettix virescens. // Mycol. Res. 1991. V. 95. N 7. P. 829 833.

109. Langewald J., Cherry A. Prospects for microbial control in West Africa. // Biocontrol News Info. 2000. V. 21. P. 51 56.

110. Latchininsky A.V., Launois-Luong M.H. Le Criquet marocain, Dociostaurus marrocanus (Thuberg, 1815), dans la distribution. // Etude monographique relative a lex -USSR et aux pays proches. 1992. 289 p.

111. Leger R. J., Charnley A. K., Cooper R. M. Cuticle degrading enzymes of entomopathogenic fungi: synthesis in culture on cuticle. // J. Invert. Patrol. 1986. V. 48. N. l.P. 85 -89.

112. Leger R. J., Charnley A. K. Kinetics of the digestion of insect cuticle by a protease from Metarhizium anisopliae. // J. Invert. Pathol. 1991. V. 57. P. 146 -147.

113. Leger R. J., Durrands P. K., Charnley A. K., Cooper R. M. Role of extracellular chymoelastase in the virulence of Metarhizium anisopliae for Manduca sexta // J, Invert. Pathol. 1988. V. 52. N. 2. P. 285 293.

114. Leger R. J., Staples R. C. Entomopatogenic isolates of Metarhizium anisopliae, Beauveria bassiana and Aspergillus flavus product multiple extracellular chitinase isoensymes. // J. Invert. Pathol. 1993. V 61. P. 81 84.

115. Lockey К. H. Lipids of the insect cuticle origin, composition and function. // Сотр. Biochem. Physiol. 1988. P. 595 602.

116. Lomer C. J. Metarhizium flavoviride recent results in the control of locusts and grasshoppers. // New Strategies in Locust Control. 1997. P. 159 169.

117. Lomer C. J., Bateman R. P., Dent D., DeGroote H. Development of strategics for the incorporation of microbial pesticides into the integrated management of migratory pests. // Agricultural and Forest Entomology. 1999. V. 1. P. 71 -88.

118. Lomer C. J., Bateman R. P., Godonou 1., Kpindou D. Field infection of Zonocerus variegatus following Appl. of an oil based formulation of Metarhizium flavoviride conidia. // Biocontrol Sci. Technol. 1993. V. 3. P. 337 346.

119. Lomer C. J., Bateman R. P., Johnson D. L., Langewald J., Thomas M. B. Biological control of locusts and grasshoppers. // Ann. Review Entomol. 2001. V. 46. P. 667-702.

120. Maiga I. H., Douro Kpindou О. K., Lomer C. J., Langewald J. Pratiques paysannes et utilisation potentielle de Metarhizium flavoviride Gams and Rozsypal en lutte antiacridienne au Niger. // Insect Sci. and its Appl. 2000. V. 19. P. 163 -171.

121. Maiga I. H., Douro Kpindou О. K., Lomer C. J., Langewald J. Utilisation de Metarhizium flavoviride Cams and Rozsypal centre les sauteriaux dans des essais participatifs en milieu paysan au Niger. // Insect Sci. and its Appl. 1999. V. 18 P. 279-284.

122. Manocha M. S., Begum A. Properties of chitin synthetase from mucoraceous hosts of a mycoparasite. // Can. J. Microbiol. 1985. V. 31. P. 6 12.

123. Milner R., Wright Т., Welton M., Budau C., Gringorten L, Tyrell D. Identification and partial purification of a cell lytic factor from Entomophaga aulicae. // J. Invert. Pathol. 1994. V. 64. - P. 253 - 259.

124. Mollier P., Lagnel J., Foumet В., Aioun A., Riba G. A glycoprotein highly toxic for Galleria mellonella larvae secreted by the Entomopathogenic fungus Beauveria sulfyrescens. // J. Invert. Pathol. 1994. V. 64. P. 200 207.

125. Mollier P., Lagnel J., Quiot J. M., Aioun A., Riba O. Cytotoxic activity in culture filtrates from the Entomopathogenic fungus Beauveria sulfyrescens. // J. Invert. Pathol. 1994. V. 64. P. 208 213.

126. Moore D., Douro Kpindou О. K., Jenkins N. E., Lomer C. J. Effects of moisture content and temperature on storage of Metarhizium flavoviride conidia. // Biocontrol Sci. Technol. 1996. V. 6. P. 51 - 61.

127. Moore D., Higgins P. M., Lomer C. J. Effects of simulated and natural sunlight on the germination of conidia of Metarhizium flavoviride Gams and Rozsypal and interactions with temperature. // Biocontrol Sci. Technol. 1996. V. 6. P. 63 76.

128. Moore D., Langewald J., Obognon F. Effects of rehydration on the conidial viability of Metarhizium flavoviride mycopesticide formulations. // Biocontrol Sci. Technol. 1997. V. 7. P. 87 94.

129. Napolitano R., Juarez M. P. Entomopathogenous fungi degrade epicuticular hydrocarbons of Triatoma infestans. // Arch. Biochem. Biophys. 1997. V. 311.N. LP. 208 -216.

130. Ouedraogo A., Fargues J., Goettel M., Lomer C. Effects of temperature on vegetative growth among isolates of Metarhizium anisopliae and M. flavoviride. // Mycopathol. 1997. V. 137. P. 37-43.

131. Paterson I. E., Charnley A. K., Cooper R. M., Clarkson J. M, Specific induction of a cuticle degrading protease of the insect pathogenic fungus Metarhizium anisopliae. //Microbiology. 1994. V. 140. P. 185 - 189.

132. Peczynska Czoch W., Wieczorek J., Urbanczyk M. J. Gemagglutinins of Beauveria bassiana strains: the effect of growth conditions on their production. // Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz). 1992. V.40. N. 5 - 6. P. 313 - 320.

133. Peczynska Czoch W., Zal Т., Czerwinski M., Szulc M. Purification and some properties of hemagglutinin from Beauveria bassiana. // Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz). 1992. V. 40. N 5 - 6. P. 320 - 324.

134. Pereira R. M., Roberts D. W. Alginate and cornstarch mycelial formulations of entomopathogenic fungi, Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae . //J. Econ. Entomol. 1991. V. 84. P. 1657 1661.

135. Pereira R. M., Roberts D. W. Dry mycelium preparations of entomopathogenic fungi, Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana. // J. Inver. Pathol. 1990. V. 56. P. 39 46.

136. Prior C., Jollands P., Patourel G. Infectivity of oil and water formulations of Beauveria bassiana (Deyteromicotina: Hyphomycetes) to the cocoa weevil pest Pantorhytes plutus (Coleoptera: Curculionidae). // J. Invert. Pathol. 1988. V. 52. P. 66 72.

137. Quimby P. C., Zidack N. K., Boyette C. D., Grey W. E. A simple method for stabilizing and granulating fungi. // Biocontrol Sci. Technol. 1999. V 9. P. 5 -8.

138. Quintela E. D., McCoy C. W. Conidial attachment of Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana to the larval cuticle of Diaprepes abbreviatus

139. Coteoptera: Curculionidae) treated with imidacloprid. // J. Invert. Pathol. 1998. V. 72. N 3. P. 220 230.

140. Rhodes D. J. Formulation of biological control agents. // Exploitation of microorganisms. D. G. Jones, Ed. London. 1993. P. 411 - 439.

141. Rhodes D. J. Formulation requirements for biological control agents. // Aspects Appl. Biol. 1990. V. 24. P. 145 153.

142. Robert A., Messing-Al-Aidroos K. Acid production by Metarhizium anisopliae: effect on virulence against mosquites and detection of in vitro amylase, protease and lipase activity. // J. Invert. Pathol. 1985. V. 45. P. 9 15.

143. Rombach M. C. Production of Beauveria bassiana (Deuteromycotina Hyphomycetes) sympoduloconidia in submerged culture. // Entomophaga. 1989. V. 34. N 1. P. 45 -52.

144. Rosato Y. В., Messias C. J., Azevedo J. L. Production of extracellular enzymes by isolated of Metarhizium anisopliae. // L. Invert. Pathol. 1981. V. 38. P. 1-3.

145. Samsinakova A., Misikova S. Enzyme activities in certain entomophagous representatives of Deuteromycetes (Moniliales) in relationship to their virulence. // Ceska mycologie. 1973. V. 27. N. 1. P. 55 60.

146. Santharam G., Easwaramoorthy S., Regupathy A., Jayaraj S. I. Possibility of increasing the pathogenicity of the white halo fungus Cephalosporium lecanii on coffee green bug Coccus viridis during summer. // J. Plantation Crops. 1997. V. 5. P. 121 122.

147. Shah P.A., Kooyman C., Paraiso A., Surveys for fungal pathogens of locusts and grasshoppers in Africa and the Near East. // Memoirs Entomol. Soc. Canada. 1997. V. 171. P. 27-35.

148. Shimizu S., Tshuchitani Y., Matsumoto T. Serology and substrate specificity of extracellular proteases from four species of Entomopathogenic Hyphomycetes. // J. Invert. Pathol. 1993. V. 61. P. 192 195.

149. Sosa-Gomez D. R., Boucias D. G., Nation J. L. Attachment of Metarhizium anisopliae to the southern green stink bug Nezara viridula cuticle andfungistatic effect of cuticular lipids and aldehydes. // J. Invert. Pathol. 1997. V 69. P. 31 -39.

150. Steenberg Т., Humber R. A. Entomopathogenic potential of Verticillium and Acremonium species (Deuteromycotina: Hyphomycetes). // J. Invert. Pathol. 1999. V. 73. N. 3. P. 309 314.

151. Stephan D., Welling M., Zimmerman G. Locust control with Metarhizium flavoviride; formulation and Application of blastospores. / Insect pathogenes and insect parasitic nematodes. //Bull, IOBC/WPRS. 1996. V. 19. N. 9. P. 232 235.

152. Swanson D. Economic feasibility of two technologies for production of mycopesticides in Madagascar. // Memoirs Entomol. Canad. Soc. 1997. V. 171. P. 101-113.

153. Takahashi S., Kakinuma N., Uchida K., Hashimoto R., Pyridovericin and pyridomacrolidin: novel metabolites from entomopathogenic fungi Beauveria, bassiana. // J. Antibiot. Tokyo, 1998. V. 51. N. 6. P. 596 604.

154. Thomas К. C., Khachatourians G. G., Ingledew W. M, Production and properties of Beauveria bassiana conidia cultivated in submerged culture. // J. Can. Microbiol. 1986. V. 33. P. 12 20.

155. Thomas M. В., Blanford S. Current and future strategies for locust and grasshopper control. // Pesticide Outlook. 1998. V. 9. P. 13-16.

156. Thomas M. В., Blanford S., Gbongboui C., Lomer C. J, Experimental studies to evaluate spray Apples of a mycoinsecticide against the rice grasshopper, Hieroglyphus daganensis, in Northern Benin. // Entomol. Exper. App. 1998. V. 87. P. 93 102.

157. Thomas M. В., Blanford S., Lomer C. J, Reduction of feeding by the variegated grasshopper, Zonocerus variegalus, following infection by the fungal pathogen. Metarhizium flavoviride. // Biocontrol Sci. Technol. 1997. V 7. P. 327 -334.

158. Vey A., Quiot J. M., Vago C., Fargues J. Effect immunodepresseur de toxines fongiques: Inhibition de la reaction d'encapsulement multicellulaire par les destruxines. // C. R. Acad. Sci. 1985. V. 300. N. 3. P. 647 651.

159. Vey A., Riba G. Toxines insecticides issues de champignons entomopathogenes. Etat actuel des conaissances dutilsation de leurs activites. // C. R. Acad. Agr. Fr. 1989. V.75. N. 6. P. 143 149.

160. West E.J., Briggs J.D. In vitro toxin production by the fungus Beauveria bassiana and bioassay in greater wax moth larvae. // J. Econom. Entomol.1968. V. 61. N. 3. P. 684-689.

161. Wood S. N., Thomas M. B. Space, time and persistence of virulent pathogens. // Proceed. Royal Soc. London, 1996. V. 263. P. 673 680.

162. Yeuniaux C. Chitinous structures. //Comprehensive Biochemistry. 1971. V. 26. P. 595 632.

163. Zacharuk R. Y. Fine structure of the fungus Metarhizium anisopliae infecting three species of larvae Elateridae (Coleoptera). Conidial germ tubes and appressoria. // J. Invert. Pathol. 1970. V. 15. N. 3. P. 81 91.

164. Zimmermann G. The entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae and its potential as a biocontrol agent. // Pesticide Sci. 1993. V. 37. P. 375 379.