Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологические свойства Yersinia pseudotuberculosis и совершенствование лабораторной диагностики псевдотуберкулеза

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Биологические свойства Yersinia pseudotuberculosis и совершенствование лабораторной диагностики псевдотуберкулеза"

РГО од

я

МИН ИСР С J В О^ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ САНИТАРНО-ГИГИЕНИЧЕСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи УДК:579.842.1/.2 616.9-078

МЕССОРОШ Виктор Георгиевич

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS

И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗА

03.00.07 — микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург 1993

' Работа выполнена в Санкт-Петербургском научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии имени Пастера и СевероЗападной противочумной станции.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Ценева Г. Я.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Граистрем К. О.

доктор медицинских наук, лауреат гос. премии, проф. Королюк А. М.

Ведущее учреждение — Институт эпидемиологии, микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи А. М. Н. Российской Федерации.

Защита состоится_ 1994 г. в _ часов

на заседании специализированного Совета (шифр К.084,21.01) по присуждению ученой степени кандидата медицинских наук при Санкт-Петербургском Государственном санитарно-гигиеническом медицинском институте по адресу: 195067, С.-Петербург, Пискаревский проспект, 47.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке СПб ГСГМИ.

Автореферат разослан__ 1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета доктор медицинских наук,

профессор , А. Г, Бойцов

АКТУАЛЬНОСТЬ Т&Ш ИССЛЬ&ОВАВ'Я

В настоящее время псевдотуберкулёз янляется серьёзной зпиде-шологической проблемой. Остаётся высоким уровень заболеваемости 1Той нозологической <?ор„юй, нередки групповое заболеьания, особен-ю в ор: авизованных детских коллективах.

Иэвествно, что псевдотуберкулёз имеет п:зсе;.;естное распространив. X. рввис1о1иЬвгси1о818 широко иипкулируют среди сельскохо-шйственных животных, диких и синантропных грызунов, птиц и их жтопаразитов /Вадёнок В.С. и др..1912 ; Кузнецов В.Г. ,1Уа7 ; Грьж-[анов и др. ,1989/. .

У.ежду тем, до сих пор существуют противоречивые мнения об ос-ювнь'х источниках возбудителя псздо1^оеркулёза, не решены вопросы ¡актериологическоЛ диагностики ; отсутствуют элективные ди]';ерен-шально-диагностические питательные среды, а применение существующих ред для индикации и идентификации иерсиний не уни!шаровано. Крое того, использование недостаточно чувствительных сред для выде-ения культур, а так*е приемов обработки первичного материала ще-очью снижает частоту обнаружения иерсиний и неоедко поиводит к ги-одиагносткке нсеадотуберкулёза, особенно его легких, стёртых и типичных ор.л /Королюк А.И. и др. ; ¿уланьков К.II. ,1992 ; Ко-енко М.;.;., 1991 ; Склонов И.В. ,1992/.

Известно, что в развитии инфекционного п; тесса важное значено принадлежит вирулентности возбудителя. 3 эток связи определе-ие на экспериментальных моделях вирулентности иерсини;:, циркули-укщих у людей и животных, обсе.\. .'Няющих продукты питания, воду и спользование этой информации и комплекса данных вдемиологичес-ого и эпизоотологического характера гачено с профилактическими пе-п:.;и для решения вопроса о роли тех или иных источников и (¡ан.оров сохранении ¡! распространении псердотуберкулёза в очагах.

Изложенное пределило необходимость комплексного изучения рзе\к1о1;иЪегси1оз18 различного происхождения, особенно углублённо исследования вирулентности культур от грызунов с учетом их эиуроченности к песта:., обитания в хозяйственных очагах с цельл становления их с:.;язи с заболеваниями ладей.

Отсутствие элективных питательных сред и унифицированных-эиёмов подготовки и первичной обработки материала для исследовали, обусловили неооход;;:,'.ость совершенствования методов и средств жтеркологической диагностики псевютуберкулёза.

Цель исследования - характеристика биологических свойств

различного происхождения и совершенствование методов и средств их выделения.

ЗАДАЧИ КССЛВДОВлШЯ

1. Разработать новые питательные среды и оптимизировать условия щелочной обработки исследуемого материала в целях совершенст-

• вования диагностики псевдотуберкулёза.

2. Изучить распространённость*. pseudotuberculosis в популяциях грызунов, обитающих на различных объектах большого города,

3. Охарактеризовать .вирулентность 1С. peoudotuberouloaj.^ выделенных от грызунов, лодей и объектов внешней среда с использованием экспериментальных моделей In Vivo и in vitro .

4. Дать сравнительную опенку вирулентности Т. pseudotuberculosis

выделенных из различных источников.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОШИЛ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ ДОССЕРТАЩИ.

1. Новые питательные среда: жидкая буЗерно-казеиново-дрожжевая и плотная дайеренциально-диагностическая с бромтиыоловым спим существенно повышают э£;ективность бактериологического исследования за счет более полного и раннего выявления возбудителей псевдотуберкулёза и иерсиииоза.

2. Оригинальный вариант щелочной обработки исследуемого ыатериш целесообразно применять при массовом поступлении проб. Он позволяет наиболее рационально и экономично проводить бактериологическую диагностику псевдотубьркулёза.

3. Установленные различия вирулентности культур peeudotuben culoais 'разного происхождения определяют особенности распр странения возбудителя псевдотуберкулёза. Иаксиишльной варуле ностью характеризовались иерсинии, изолированные от доминиру щих видов грызунов /серая крыса, полевая шшь, обыкновенная лёвка/, больных с аппендикулярным синдромом и из смывов с ol щей.

4. Полученные материалы по характеристике вирулентности культур Y. pseudotuberculosis людей, грызунов, объектов внешней с[ да в сочетании с данными зпизоотологических и эпидемиологиче ких исследований вносят дополнения и уточнения в зпидемиоло] псевдотуберкулёзной инфекции. Они позиоляют аргументировать роль грызунов как носителе? и резервуаров*, pseudotuberouioi

- Б -

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Разработана оригпиальная диффереицпально-даагаостическая плотная среда с бромтимоловым синим, превосходящая по эффективности общепринятые в России и широко распространенные за рубежом среды. Показано, что сочетанное применение жидкой питательной среды /ЕКД/ и плотной /СБТС/ существенно сокращает врегл бактериологического исследования и удешевляет его.

Предложен оригинальный вариант щелочной обработки сследуо-шго материала, предназначенный для массовых исследовшшй с профилактические целят-д, применение которого повышает эффективность бактериологического исследования.

Впервые предложена униф.;щ!роваш-1я схема бактерш логичеci.jro исследования с опт.изашей этапов подготовки ?.атеризла, щелочной обработки, накопления иерсиний в жидкой питательной среде /£КД/, выращивания ни плотной даффереидпально-диагиостичомсой среде/СЕГС/, |"':юхи1ятческого тестирования с глиниг.лльниг.1 na6opo;j гестов и субстратов.

Показало, что определение маркеров вирулентности in vitro WW т.pseudotuberculosis не характерно, наиболее инфорглативиш и быстры» 1.:атодо.'/. оценки вирулентности является коратоконъишти-вальлая биопроба на морских свинках.

Сопоставление вирулентности у.pseudotuberculosis , изо-

лированшпс от грызунов, людей и из объектов внешней среди, выявило ее вариабилыюсть: среда источников иерсиний и факторов их распространения в пределах одного вида гризунов, среди различных се-роваров /и внутри отдельных сероваров/ в период э-таоотий и в ¡.:еж-эппзоотическМ поркод. йолучетшв данные г.згкробиолого-эпизоотоли-го-эпндеиюлогического характера позволили обосновать роль о'. -делышх видов грызунов /серая крыса, полевая ишь/ в 1сачестве носителей п резервуаров високовирулеитннх штш.;.:ов Y.p8eudotuberculosi в условиях изученной территории и исключить реальное значение людей в качестве источшнсов инфекции.

прштисш дашисть РАБОТЫ

Разработана и внедрена в практику диффере1щиально-днаг1юстичес>'* кая срода с бро:..ти..яловы.-.: сани:.; /СБТС/. Показана эффективность использования СБтг. в широ-.мй практике. 11а состав среда получено ав--торскос сввдотольог.ю 12 4°). 5234. Обосновано преимущество нвдкий питательной сред.; БКД перед другим; гзв^сшпл! кидкн;.л средаш.

БКД внедрена в практические лаборатории' диагностической службы России ц стран СНГ,

Бактериологическим лабораториям Санк'х-Петербурга предложен оптимизированный вариант щелочной обработка исследуемых проб, которш и используется при ь&ссовоь; поступлении материала.

Усовершенствованная схеиа бактериологического исследования с описанием сред ЕКД п СБТС опубликована в Пособии дня врачей "Иерсиниоз и псевдотуберкулез". С,- Петербург, 1992 /32/,

ьшсробиолого-эшзоотолого-эпвдеыиологическн обоснована рол грызунов и исключено значение лвдей в качестве источников х.р8е ^ЪиЪегси1оа18 . Полученные данные вносят .коррективы I

эпидегдюлоиш и эпизоотологию псевдотуберкулезной инфекции на современно:., этапе и обосновывают необходимость совершенствован! систеш эшц^шдзора за инфекцией,

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

..¡атериалы диссертации долокены на ХП Всесоюзной хюнференщ по природной очаговости болезней /Новосибирск, 1С89г./., Всероссийском съезде микробиологов /Горький, 1991г./, заседании С,- I тербургского отдаления Всероссийского научного общества гликро-биологов и эп11де;.шологов /г.Санкт-Петербург, 1992г./.

Основная час. работы выполнена лично автором на Северо-Э, падкой противочумной станции и в ШИЭЫ ш, Пастера, Исследован по разработке питательных сред проведены совместно с канд.мед. наук Ф.Г.Дятдовыа.

ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 110 страница* г/ашшюнисного текст включает введение п 7 глав, обсуждение, выводы, практические I коаецдацпп, список использованной литературы. В работе лредстг лено 28 таблиц и 3 рисунка. Указатель литературы включает 108 работ отечественных и 46 - зарубежных авторов.

МШИМЫ И МЕТОДУ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе использованы 'мташиУ. рзощ1о&(Легси1о818 1, П 1У, У серологических вариантов, выделенных от грызунов, из об' ектов внешней среди, а такае из материала от больных псевдоту кулезом лвдей.'Использовали тавде контролыше штамгл) иерсиний

пяти сороваров из международной коллекции /Йаршк/, полученные из Ростовского-на-Дону лротивочумюго института. В работе пршм-IIяли как свекоЕщелешшо куяьтурн, таге п храшщиеся в r/узсо Северо-Западной протпвочуяюй станции п точение 1-10 лот.

Видовую принадлежность выделенных куль ур установили на ос-новшши комплекса тшичиых корфолоппосшвс, культуральннх, бн химических, серологических и других свойств. Инкубирование посевов биохимического рада проводили по общепринятой методике.

Серологическое тонирование культур иерсиний осуществляли с пошщыо реакции агглютинации на стекло с использованном адсорбированных диагностических' сшороток к Т. peeudotuberculonio 1 - У сороваров и к í.enterocolitlca 21 серовара, вшхускаемлс ШИШ им. Пастера.

Для идентификации типичных культур псевдотуберкулезного :¿n-кроба щжмошшп таете реакцию коагтштшшдпп /РКА/ на стекле с эксперш.:ентальло-производствешйгл1 и про1шщшзнниг.ш сернлг.31 соответствующего дпатностикут.л 1. - 1У сороваров /разработка ЛНИ1Ш игл. Пастера и ШШ je.:. Гагалои л;,Л РФ/»

Кро;.-о определешм серовара культур юэагглйтлнпрувзстй дпапгос-тпкуи использовал:! в РКА для первичного скршйшга специфического антигена в [.атериале от людей, экспер :и.ш?альншс жтопш, синан-трошшх и диких гризунов. РКА ставили по методике, описанной ^ наставлении по применению.

Реакцию нещж.он го;.агглзотинации ставши о оритроцитарнш iil:— :.уноглобули1ШВ1с.', псевдотуборкулезни;.: диагиостицуиои /разработка ЛНШЮ.М ш.:. Пастера/. Постановку ?ПГА осуществляли ыакроизтодок по общепринято;! методике в полдс'героловцх пластинах i объело °00 ролитров.

1£лгунифср...о1шшй анализ проводили с использование;.: полуъро-изводствешшх и производство шок серий тсст-сиотеи для диагности-ioj псевдотуберкуоза.

объектов исследования служили грнзуны /го:.ыготтьг органов экспотпиеиталыпя хиьитннх, (,*дср:з!:.гао кишечников/, с:.:нвы с объектов окружающей сред-;, г.узейнпе и свековццелешш культуры иер-сшип.

Вирулентность у. pseudotuberculosia определяли на белих г.и-иах при пидконюгл и эптсрашю:.: заражении п :.юрсшяс свинках /кератоконыошегивалыия проба/. Адгезию, инвазию и цитотоксич-пость иерсшшИ изучали на хлспсах НЕр-2.

При шзюлнепни данной работ» использовано 108 морекпх свинок.

1480 бел их мшеИ, исслодошно 15-153 проСи штерлада от грызунов, 1410 » ст йолы&х людей» 1433 cmjbob с объектео окрутэд: i5 среди; вшюлло-ü 350? даагиоетй^есклх реатгй, изучено VU культур ИОрСШЬС:«,

Кол11чгстветшо »¿шфоеподотаческио посоьи .при штер&илк'', заракеш:ц проводили zu ыс годило, разработанной Т.Л.Авдеов_1>» 196ÍI».

DupyacHTiiocïb при годокяшои эарааенаа определят ж й

Рида и ¡¿eu «и

Дшииша зайояеваемосш дсеакопубвркулазоа и варашдшоо-г» гризунов представлена в в».;э поршровашик рад»» /'¿Елдэр 1967Р./.

резудьт/ТЦ сошвшая 'шпаомшй

£ результата проиедзкгл .г псслодовап dî усггоаовло-ю. энротк.е распространение возбудига/чя всездэтуберхуяеза в популяш::^ с 1ШН1рошв.х гризуио^»

Покаашю, на торрпъэршз йанкт-iisïepoypra и oí о окре«-;^---uocsali ооатайг 21 вдк иелюк ¡."лекотитаюцлх гркаун«-з, сро;яи которых по чнсаенносги преооладата серпе кридо« зашага мши, обыш<л> есниь'о полевки. Друглв dum - ¿алочдело;:::^

игстшгк taccoEoro засоиснзя грвзунов явяяогся паэостоиолрео-кие п дивдвне обз>з».пь овошетеанилига,.

йшаезлыше чаа;ю кульгур pasudo tucercolocts изолиро» но га аиЕотиовояческг-зс объзктаж /к&,6/\ яа 1/Ъ кеггасп - на овоые хранилищах. На друг,« o6bssï£s Еоказат&ль хифпцярогаиностя cep-rs крыо 4,9, полевхгс кнзе*! - 5,3, что в средней; составо в 3,5 иа 10Q0 цссдедоБашшх зворы*„1. _

Получетше данниэ свидетельствует о ррайрвной фэт&'лик зунов в сохранена: у. pösudotu^cr-iulosis а о таг?,;: :шфсгаря.

УчихиЕ&я ведущее значение osuasil и распространена Y. paouiotuboríuloo^. * значительную кн&шпрсванюсть амд гри-зунов, отловлэшиэс иа объектам сосредоточения орадуктпв наво?к> го и растительного происховдешш, била изучена обсе.;>енешюсг*-вврешишгл овощей длительного хранений. Ъ 1453 восяодоваюш? щк.0 вндеде?ю 122 атак Гг /оноьо ?.■••/ зеох вшрв цероетг'}; при э» вовйуднтель исавдотуоерктло'л а oCiiapi'sOíi'ii цро-ч

Приншкя во вншяшг.е факт водзлен-'л иорошшй "»т грызунов все сезоны гола о ¡шеехшашгл,: количествам веси г"', ковзю пред/» дожить, что овода li'orai бить кввташншрозааы е '¿ечвнле всего uí

Р'-'ода 11ЭОЛВДОИШ1 /г- ючгоа октября no ícssaoro года/.

Сезонная керродвзпа 1»:ф1гш1р0Е>а1»10«;а ш.оцоЛ и грызунов под-tí1 тощает» что :.:o;;:iry зта-л! сочлена-,::; ¡«»заЯслениого очага суцост-яует d'»an:..oodt.-on возбудителя:.» тевготудеркулеза a исрсшшоэо, в \:-.'3«льтато чого олова iron олгродедадикх уояоб.ик »»гут явиться рьальнп;. епкторог передачи и сгать врп'шной зарашнвя ладей.

Сказанное подтверждает бзг.г вирааелной ¡серрожшш ;.:ззду дзл-шш г.хглк.'ашюй и ьакснмальной ияфвдировашшсти лизунов в от-Л"льные г-'-да и зяоолсазе;.;оетк нсооцотуоеркулезо:.; нг\сслс1..;я г,Саикг-«П«тербурга /со дашии сцишюльнэй регистрации ГЦГСЭН/,

&кспшлы!ая зсратшость ь^збуз'^алв:.) псовдотуберкулеза раз-лптаих водов гг-изунов, подтворшншая п.'делешш:.: культур, сказалась в IS88 году. t'KU составила 138 п., 1СС0 огаовдшиих згвры^в. В 1989 ггду саскто существенная с::И)*,ошю частот зараженности ••'•ooTHtJX, и а-.алпзпрстзошшй показатель оиэзалсл jumiu:.: 13. £ по-слслувэдо гогтч г:-лючач 1?Э2 г"-г. 1.?ч1«цкрошнность г;,торгов ос-•4,.шатасз i." i:!.3icia :г-ачош;ях„

рмтио .распределения зябегетикй ладей в С-.э икт-Нетероурге в то во о':разгают гнаяоплиув тенденции группой и сворадкчос-кой зпболвзаоаоотп псовтотуйеркрмло:.: /с,и.р«с.1/. Так а 1383 году откечоп !.-.!:ск:.гш»Я1я! уровень, а к tsSO гуду он залягтно снизился ц состовкл 30 па 102000. свтшяяск иг. В'гсоко:.: уровне в послсх^ю-щтте годи а П;:п ото:;, по цгит»:.: последних 5 лег, з 1521 году от;.с~ ■:уп :лпш;.а:п»:лл1 уровень s.'.-do.ncnaer.Duíii До,7 на ICO ?i;c./. Следует отмзигсъ. чги a 1031 - 19S2rr. нзблпяался toiskq cavuit шагай показатель шкишгоашнноста гр.г/нов /а,2 ка К.'СО отловленных гризунив/.

laicii;.: ейразок. ирооодокпш исследования ар<гудо:тпрус? рель гриэув^в в качество резервуаров "í» у ¿eudotuburcuiosis и подчцли-гза? ¿¡¿ль •ол-.шдооиг:! ^оголетни: йм?тертлоптокпх исследований.

1г.:овсд ч-па кс crciiuaainui шказачи, чъо ечеаевичо-.!\u:t:c е!¡-аил; визоудягшя аршдояхи потогетшо

-"■'uiic.cEs: i'iiKwrroivr:», способность к разложению

тдатлиз.'-о идегок к wpoTOitciraiocib* Однако, ото-

!•*' л^гтелшо глю^аровала /таблица Я 1/. По-

:""•> бч.гьня'лпчх о «-еттювааних ai^aivwoa

i. pt-cuáotuberculosis . изолщхшгйшл' -J-: гц;з>исв, хфоязляли

лаксшлальную вирулентность, равно как в все штаммы от больных с аппендикулярным синдромом. /А/

76, /й/

щу» шГ 1^'" ша* 1951* 1552'

Рис. 1. Дшшшх заболеваемости псевдотуберетлезоы /А/ и зараженности грызунов /Б/ а Сшкттйегербурго А - показатель заболеваемости на 100 тыс. населения Б - показатель шфацироБааности грызунов на 1000 отловленных зверьков - " • • *

Таблица » 1

Характеристика г. р8еис1оЬ\1Ьегси1оо1а1 серовара, НЗОЛПрОраШНХ ПЗ раЗЛИЧНЫХ ИСТОЧНШОВ ПО тп кп на белах ышшх и

Источник Кол-во Влрулентност! культур, выраженная в 1 чпсла мпктюбннх клеток

ввделешш ¡¿аксшлаяьная шникальная средня)

Исправления человека 18 6,7±0,8 8.0ьР,7

Аппендикулярный отросток 6 - 1,5±0,5 3.4^0,3 2,ад).:

Крыса серая 8 1,0^0,5 7,8±0,5

„ьшь полевая 7 1.СЩЭ.5 5,2+0,6

.¿ышь до;,'.овая 5 2,8±0,6. 7,^0,8 5,8*0,;

Обыкновенная полевка 7 2,0±0,5 7,0±0,9 4,7±р,

Риная полевка 5 1,6±Р,5 4,0-0,9 2,4±Р,

Бурозубка 7 5,0^0,7 6,7^,7 б.ОаЛ,

Отдельные культуры с высокой Г'Грулен^иостью бит изолировали также от большее скарлатшоподобпоН и сыошашюй фэрг.а1Л1 и из овощей. Она соответствовала показателя:.: 1,5+0,5 3,4+0,3 1 числа кробшгх плеток и била блптга х xapaiwspr."'лжаг.; вирулентности штам-1..0В, изолированных от грызунов /серая кр::са, половая t-.шь, ршкая полевка/ - основных резервуаров y. pseudct^berculosie и рагиялась в среднем 1,7; 2,1; 2,4 соответственно.

Напротив, г. poaudotubcrsulooio . вццелешше из испрайнеииЦ большее характеризовались слайой вирулентностью в пределах 6,7+6,8 - 8,0£Р,7. Эта даншэ существош:о шше таковых у ппгаьзлов, выделенных от других представителей' млекопптащих /до;,«вал шпь, бурозубки/, значение которых в качества резервуаров не велико.

Установлено тшелэ, что чаце других грызунов носителям высоко вирулентных ггга?".:ов является с орел зсргса; от нее культуры были изолированы с одинаковой частотой как из паренхиматозных органов, так п из кишечника. Ванная роль в цнркул*таи вксоко вирулентных итаилов пр:иадле:&1Т такко патовей ш. Но она заметно miso, если принять во вникание, что 'такие штамш обнаруашали преиыуществен-íio в период отшзостш и, как правило, изолировали га нарисск.п-тознхпе органов.

Следует подчеркнуть, что вьчхжо вирулентные шяиыы, выделению от грызунов, принадлежала к 1, П, 7 сероварам. Если учесть, что охегодно*. pasudo truterculG-is других ссроваров, кроке первого, изолирротся в 8 - \А% случаев, то очевидно, возбудителями псевдогуберкулеза г.;огут бита, передали разгдах сероваров, что подтверждает галность серологгчос:сого тйпзровашш всех изолированных культур у. pseudotubcrculoais .

Вала ответить, что вариации степсии вирулентности культур установлени но только среда разлитых оероваров, по часто и в пределах одного, преимущественно 1 серовара - наиболее распространенного возбудителя псевдотуберкуяеза.

Полученные различия в выраженности вирулентных свойств у лтамаов различного происхождения оказались информативными в результате использования комплекса адекватных экспериментальных шделей, разработанных наш ранее. Эти дшшые позволив тагам охарактеризовать реальную це;шость отдельных г.аделей при использовании их на практике.

Наиболее объективным методом оценка вирулентностиY pCeudo-tubercuiosis является кератоколъитстявальная биопроба на

.юрских свшшах. Однако, учитывая дороговизну- исследования переищи на этой модели п корреляцию полученных на ней показателей о

- u -

Г",je

) . Ii *\J* •<*.'' ' Д J» p V i.

'"•Ve. ^^ i a vitas

-ïXiï Ó.^íh "û '

:„-Koiui«oöii mIaTi ayts-anemui E¿;" усгсал; 1гиодог;:ий1к

гг«»апвд«скш£ к^^ь^уо:' ;£улгс ьатоду. ¿ пастос/мп, доздг JD¿

j-'jíbsv.iíua^üir^x.vii". pus:;. ï„ yso-aivtub^^vulo^ií; " &ф)2г/а~

j^bTiïû n;. прелтоля'ч иуаютпсс апд-

к. ¿ д. L ¡^IÙ^SXKEÎ обд-чгап^о высокой хуагнос-afec-

tó: г,-обсоаргатно о Ьътеи, с,?>гшах

c¿ Т у р ^ifpnr»Tpaii3:tîUîC оз рубс-гс:.'..

rsùs шуче?:гл защких п-^оплоган

/сЗкыгплштс:: ç.V0BG/ предюгешА дчг Яг'одтыиш ... подотградона дгогностотоская д«ш-

•^сл- о?.г- В'Л* '-м: Е'к: et; ар1глне::ця а :.С',мш>нау c.-su-

„ д> щ-и пгслед/яхии'л :..u?ov::û.ïa ov бг*дышх, экшюрпгкйлчиьнкг к -догнгх кглтэднжз результат!.* озвдетш&етоуот OÍ1 СО OV« r/.C-¿u2iÜi4Z а zi: ¿v3J AaÄavja £ 2/.

; Я 2

л.^гж« ¿"е-г^тш шлолааЛ us шэдку&гого ûx&ixzm с ящклх

и-слсдо»

«гс с~одп

.-•ir.u;

ггруа

"йзоаа- ÍS wac в срогл п>оэо

Ида-

XV-.* .>»

С « 'ejC

ЕСД

rftlîKlC-iltilDr. Л,. Л!.:пл:

cpviv.i; V тц'ла

соз äf> е,з

i- .'J

96 а 75,5

2--.5 -

пеплл больше

sT'Vaiw 1>. ДШ1Ш

3 3,8 5 й H

¿o: .■!•,• 49 29 59,2

4.,-, О

s - от х-л'Д'ллсиажс

Л^аигоссггоокув р^лхг.гакюта срсды. ЕЦ о^огизкалг в коде пс-слсдовошс пологого »дчгугша« ¥ак, из npuü ¿avopuaín о? большое с ео использованием BJ«tJ¿s:io на 27 культур иорсиши: большо,

i

чек с поиояыэ СГП. Ifcmo отсгт,'.;ь, х, «oeedotuborculoeiti

D полагаязига бога зинстве нпогт-эваип п «лты/* етч>

il ана^огичн'" ош.таз: из ".ui обраацчв срглшв п зканой ¿и?эч-

г.ш„ зглаявшигт разш.я дооойл иорсшш, пун 7 рш.чшон и gû >.■>*•;

визелоно культтлр яочзи в Й раза ¡'алкп, о ¿ïv»«*i> орел a

ûoicisaiio î ita, что нсва" среда cca^.tc-i ^saJu'/ibiioovA ша

лтйяизапп». 2 течение двух :•<:'■• /срск î

соотгетс.^огдла, исходной.

:'л под,г ¡:спнт£й:.%нх аарлг-игов л г/•.orcv-.•. :

ярагессг :дж:г ООТЬ 1Й зевгой*^ ¿¿с^и

/Silii/. с 'л ссстсат v? (1о«/атмо^уферг.члу р-агЕо^а ;•!! ?',8 ?

$ершн-.дгнгзт;о ясптогл. Орлвгдтелььч с л

л ФБС сводсзальстаут о пр&и^ушсство роко;.шдоьа;пг х ср«д над

SEC,.

Дозтеикш 1'озулыатн сувдотольрсВ;' >t о и^жПУХАИ^Ы «есзво енот ù'ï иад vSC и ука:.и зают i л ap^isi-ru"..^

НОГО ПТ'ЭПЗВГПГ ТБПс

ii3ncjc7i:a„ '¡"о сдши us прис:.х>в, шчч^^чх dîjoî chhii:î, ^злястоя ¡доли шая счраоо-пса исс^'-'лус up^u. Оэта^о,, v.i ucao3î.3i"2ai'3Q осцсии."ШТ< шгеочики, гуоы u-v.,ирадгл культур дру~ п2 : ■;iTCTOO£-Xrop]!ii ПрЫНХЦДО!' ЗШЧП7С7Ш*(.-0 ùio йссл«д">0.' ; «■

70 uasi ;.'saxa» и;-;; вкзсй.х/д больп- л -зь/^зусг.с ¿о

риала в село'длсй раствор» и лего иьг-лки ли слог:.;ц

Kuei/c супсокдамюе /но i -siioe, п.-л ? I^-j vi^aawiiuo

севши дозу. г. шдохьпии од-дггов ûn-tii 50дс-»>ра.аг txyavo

вчя леяочиои copxcvv-:: 0,0/, ¡xiCTsop ¿vu, ^•^.-.••.товлчаы»

0,СЙ растворе ïaiCi. л обшгз 200 ьасл ра^льа^ а аишсгородо!^; •

дласгсзш, до&шдлчл но 200 шксубщюьаии^^ пвтйтояы^й cpsx"

гота cycnouc j яжлв^уакаго материала, «;••.:.• -т> -и - В

иут, ло Doses :iu :."яиут, пуп ко!<иатаии ".ых-^ратуро и l^q =

шил» /¿00 :2Ui/ перзн.'Ьиаи ^ пробирки с. ■■:• ($5.•.(„-.

эаа рЛ Пробирки с досезагл при

гостзрат?. о з течешш 18 - 24 часов, аоггэ '-о/о жоега'Л чз зз^г-»

¡ют среди, 0рав:тптелышв данние эс^фекгигиос^и ибработ.оз

делочыз no .veTojjEi.-!, npiiuffruii в прш«и»-о к пр1»згдеиии'1

внлв'.'ли npwujsiuec? о последнгк»

ïa:>., кз 165 и.х:3 настшюсо ьатераш1 /д> четь о .з 1шсоклон'';; в usa ;:oçciani\V удалось г.,пделнгь 11 культу о, черга 3 - 4 часа кп-;юилош:л при ;«)t;iu.?i!-'i ïetaepcirype - ал aoassTOii'.« - чор-.-з 3-5 щю'Л и а 7 - iù сутки ввдершкилч з уодокизс йсзодвяк^-м

3D п -С- ссотеотсп'огшо. Ддгапя ьвтодака ооуа^отгл аодючьэ, к 1-е— зтльтато олнокра?но.\'о во пришпопия, позволяет z 1,5 рааа ува^; -

чить тесло положительных результатов, по сравнении с высевом материала из питательной среди йоз его отработки.

В итоге проведешшх исз&сдований разработана и внедрен- в практику плотная диффереишюямю-дишюстическая среда с броати-шлови?,, синим /СЕГС/, защищенная авторским свидетельство;/.. ¿1о-дельнь'е и полевые испытания доказали ряд положительных характеристик СБ1С перед используемы«! в настоящее время в отечественной и зарубешой практике.

СЕГС состоит из глюкозы 9,0, ¡/.очевины 4,5, медицинской аел-чи'19,0, 1,б£-го спиртового раствора' бро-.яж.олового сшшго 7,5, сухого питательного агара 33,0, водопроводной воды - до 1 литра. Данную среду отличают от других ва?лше свойс^ча - рост и осваивание в голубой цвет колоний иерсиний на фоне ярко-голубого /синего/ фона среди; однотипность колоний по фор:..е и консистенции. При это;.: колонии других оптеробактерий /не разлагающих шчевину/ вырастает желтого цвета на пенах. ешгще;/.сл цвете среда. Ее использование ускоряет процесс идентификации культур и повышает частоту их выделения. Так, при параллельное бактериологическом исследовании /таблица £ 3/ материала от больннх с острю.в ккзечнн: заболевании, грызунов на СБГС было поделено на 11 культур больяк че;л на среде Серова.

Таблица й 3

Срав1штелыше данные чувствительности питательных сред

Среда Объект Кол-во Вгделеко отльтто норсишта

исследования ксслед. всего абс. % эвтеро-колитшш псевдотубср кулеза

Среда Серова исправления людей кшечшаш ГПИЗУНОВ 807 348 31 28 3,8 8,0 31 10 12

Среда с брогли- %'ОЛОВ1ЛЛ синиг/ испракнс-ния людей кишечники ГШЗУНОВ 807 348 39 31 4.8 8.9 со со см .-1 11 13

В результате исследования полевого материала /¡сшечники 4Б0 грызунов/ подтверждено преимущество СБТС не только перед средой Серова, но и перед други...и,широко ¡¡сшлъзуо...ы:..и в напей стране . и зарубекоь;.

В параллельных исследованиях с использование,.: сред: Серова, Эндо, дезоксихолатного «ак-ШЖИ и СЕГС выделено культур нерсинш: 15, 4, 11, 12 и 26 соответствен!к».

Существенным достоинством СБГС является доступность отечественных инградиентов, простота ее изготовления и дешевизна /она в 8 раз дешевле среда СероваД

Среда, и ¡нетодлка выделения иерсиний регламентированы мето-дичесга:;,.!! рекомендацият-ш л учобны;.си г;осэбия".31 в качестве оптимальной для использования в бактериологических лабораториях практических и научных учреждении.

выводи

1. Разработанная дафференциальио-д;,'.агностическая плотная среда с бро:.".тпг.:оловы!.- сипи:.' /СЕГС/, не и;..екцая аналогов в г.гше-робнологической практике, позволяет повысить эффективность бактериологического исследован:.!:! в 1,7 раза по сравнению со средой Серова.

2. Оптимизированный метод щелочной обработки исследуешго Материала повышает частоту выделения культур иерсиний /в 1,5

и более раз/ и удешевляет в 3 раза проведение исследования. ;.'етод перспективно использовать при кассовог/. поступлении проб,

3. Сопоставление результатов применения жидких сред накопления - буфврно-казешюво-дро'шзБой /ЕКД/ и фосфатно-<5уферной /ФБС/ внявило преиг.удество среда ЕСД по информативности и эконо-глпшости перед ФЕС.

Сочетанкое применение среди ЕСД и CHIC повитает частоту выделения культур не ;.;енее, чек на ЗС$, сокращает длительность бактериологического исследования на 5 дней. Результаты широкого применения новых сред в практике позволяют рассматривать их icaic эффективные средства диагностики псевдотуберкулеза.

4. В качестве резервуаров высоковирулентнцх штагя«гов

г. рзбшюtuberculosis Устаповлепи кассовые виды грызунов - серая крыса, полевая ишь и обыкновенная полевка, обитавщие на объектах животноводства и в овощехранилищах.

5. На основе результатов количественной . цепки вирулентных свойств n pseuio$vberculosi^TyPa ШЗр-2. кератоконъ-юктивальная бнопрооа на г.: рехшх свишсах, энтеральное заражение шреких свинок и др./ изученные пта-дти дифференцировали по степени вирулентности.

Показано, что оптт.чльшл.: уетодок интегральной оценки виру- • лен.лости Y- pseudotuberculosigrBJuieTCH кератоконъюктивальная биопроба на мрских свинках.

Qßimn. -, шйщдвзшцд-. „ -pato

1. Псевдотуберкулез в Леншатраде./Богоявленский f.В, Ващенок Г.И., Лютов Ю.Г., Poro3ima r/ull., Потачев А.Ф., Мэссорош В.Г.// Эпидемиология и профилактика природноочаговых инфетсций. Тр. и-та игл. Пастора, Т.55, Л.1980.С.54-58

2. Разработка и испытание шя.^гцоглобуллнового эритроцитарного дааг ностикума для выявления возбудителей псевдотуберкулеза и антител к ним./Ценева Г.Я., Баяр Г.А., Даитер А.Б., Носков Ф.С., Иессорош В.Г.// Реакция непрямой гепагглютинации. Тр.ин-та т.:.

► Пастера, Т.56, 1.1981, С.71-74

3. Ишуноглобузшновнй препарат для лабораторного подтвервдения пс< дотуберкулеза./Ценева Г.Я., Баяр Г.А., Ддйтер А.Б., Носков Ф.С, ¡.'ессорош В.Г.// Актуальные вопросы шм.ун слоган. Тезисы дом. Всесоюзной копф. "Ал1.а-Ата,1981, С.140-141

4. Распространение псовдотуборкуяезиой. инфекции среда мелких uie-копитагацшс Ленинграда и его окрестностей./Ващенок B.C., Лютов Ю.Г., Шибалов В.А., ¿¡ессорош В.Г.// Эпизоотология и профклакти пр1фодноочаговнх шфекцши Тр. противочумных учрехщ. СССР, Саратов,1982, С.72-76

5. Особенности эпизоотологии псевдотуберкулеза у диких и синан-тропннх колких г.-лекопитащих Ленинграда ц его окрестностей. /Ващенок B.C., Лютов Ю.Г., Шибалов В.А., i,/ессорош В.Г.//

Кн. Инфекционные болезни отвотшяс и вопросы природной очаговое ти. Акад.наук Юфгизской ССР, Фрунзе,1982, С.70-82

6. Цепева Г.Я., .."ессорош В.Г. К иетодико получешш г.шорецедтор-ных псевдотуберкулезных сывороток.// Лабораторное дело, 1983, й 10, С.54-55

7. i.teccoponi В.Г., Бакуллра Л.И. Характерлсгиг-а некоторых свойств Y. pseudotuberculosis , вндслештх в Ленинграде.// Тезисы докл. копф. Иерсшшозы. Леи .В. ....А., 1.1983, С. 21-22

8. Сапрнкша Н.В., ..ессорош В.Г. Распространение различных видов иерешшй среди диких и с^нантропных гелких т/декопитавдих в Ло' vmtграде.// Сб. Вопросы региональной гигиены, санитарии и эпи де.лшл., Якутск,1990, С.189-190

Цепева Г.Я,, икрикова, Л.A., „оссирош В.Г. Сравнительные данные выделения иорсипии на различных питатель; и и средах.// Все росс.Съезд ¿гХкробиол. .Горький,1991, С.20

10. Ценева Г.Я., Куляшова Л.Б., Дайтер А.Б., ¿1ессорош В.Г. Характеристика вирулентных иерсиний, изолированных в очагах.// Всес.конф.по природа.очаговости болезней. Тез.докл.,Ловосси-бпрск,198Э, С.128

11. Способ получения псевдотуберкулезных диагностику,-ов для реакции коагтлгатипации./Белая ¡O.A., Быстрякова С..Vi., Белая О.Ф., Легрухин В.Г., Ценева Г.Я., /.1ессорош В.Г. и др.// В кн. Медицинская наука практике. Новосибирск,19Э1, С,112-113

12. Экспери.ментально-производствеш1ый регламент и временная фарш-копейная статья па сыворотки диагностические псевдотуберкулез— ные поли- и моновалепите адсорбированные кроличьи, сухие для РА./Дайтер А.Б., Ценева Г.Я., Месссрош В.Г. и др.// В кн. мед. наука практике. Новосибнрск,1991, С.113

13. Ценева Г.Я., ¡йессорош В.Г. Штахлм т. pseudotuberculosis

Кь, 9/2160 1 серовара, используемый в качество эталона для определения вирулентности.// В кн.¡.'ед.наука практике, Новосибирск,1991, С.113-114

14. Свободные и связанные антитела и антигены при псевдотуберкулезной и иерсшшозной шфекцгш./Куляшова Л.Б., Барашгова Л.Н., Бургасова O.A., Буйневот Б., ;.1ессорош В.Г.// Актуальные проблемы инфекционной патологии. ч.2, С. -Пе т србург,1993, С.37

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ

1. Иерсиниоз и псевдотуберкулез./Аленушшна Т.В., Быстрякова Л.В., Дог£шгенко О.Н., ;.1ессорош В.Г. и др.// Под редакц. Ценевой Г.Я. ..¿етодические рекомендации для практических врачей. С.-Петербург,1992, С.58

2. Инструкция "Эпидемиология, организация и проведение противоэпидемических (мероприятий и лабораторная диагностика иерсиниоза", утверздена М.З.Р.Ф, в 1991г.

3. Ценева Г.Я., Мессорош В.Г. Шташ r> p8eudotuberoulosi8

К.'.! 9/2160 1 серовара, нслользуеглый в качестве эталонного для • определения вирулентности.// Авторское свидетельство й 1332815 от 23 апреля 1987г.

4. Способ получения псег-отуберкулезншс диагностикумов для реакции коагглютинашш./Белая Ю.А., Ценева Г.Я., Бисгрова С.М., Белая О.Ф., i.'eссорой В.Г., Дайтер A.B.// Авторское свидетельство ß 154091 от 10 октября 1989г.

5. Ценева Г.Я., Дятлов О.Г., ifeccopom В.Г. Днфферещиально-дааг-иосткчесгал питательная среда для вндслошш иерсший.// Авторское свидетельство JS 4905234 от 31 каля 1991г.

6. ¡to.; ^ pseudotuberculosis 8/1921 1 c0P0BaPa с вирулеитны-...и свайспза.л./Делеш Т.П.., Дглтриева Г.М., .'.¡зссорош В.Г., Лисицына З.Н.// Спр^шхса :.узоя гаазьос культур противочупюго пп-та "..дифоб", 24 октября 1984г.

7. Ценева Г.Я., Jeccopaii В.Г. Шта™ pceudotuberculoaia

К.,; 9/2160 1 ссровара с внракешш..з1 свойства»-!! вирулентности.// Справка г.узел -/ото. культур противочумного ш-та "¡.акроб", . 24 октября 1984г.

8. Цонева Г.П., »ессорош В.Г. lfoavM r# pseudotuberculoai8

KJ 10/1173 1 серовара с вираишшой ииуноген¡¡oii активностью.// Справка г..узея saroinc культур противочумного нн-та "¡.шсроб", 24 октября 1984г.

9. Цекова Г.Я.. ..сссорош В.Г. Ита,:,; r> peeudotuberculocis

K.U 11/550 111 серовара с виргшениой и...мунотшои активностью.// Справка :..узея живых куяыур противочумного ш-та "..шсроб", 24 октября 1984г.

За«.