Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологические свойства сальмонелл и их взаимодействие с факторами внешней среды

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Биологические свойства сальмонелл и их взаимодействие с факторами внешней среды"

Р Г Б ОД

2 2 МАЙ 1СГ~

На правах рукописи

ПАР3ПЕВ Дзавозшр Убайдуллаовпч

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА САЛЬМОНЕЛЛ И ИХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С ФАКТОРАМИ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ

03.00.07 - Микробиология

дассортацпп па сопспаппо учапой с*впопп кандидата модпцяпсшгя паук

Сапкт-Поторбург 1995

Ва правах рукоааса

НЛРЗНЕВ Дяавохнр Убайдуплаовпч

..БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА САЛЬМОНЕЛЛ И ИХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С ФАКТОРАМИ & ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ

03.00.07 - Никробпологая

, Автореферата диссэргапип па сояокавпо учапой етопапп капдядага.иедпцштсета науп

СаИкт-Паторбург 1995

Работа выполнена в Саикт-Потербургсгсоы Государсозданном медицинском уцпворсцтото пмани академика И.П.Павлова.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор, член - корреспондент РАЕН В.б.гоц,-

Официальные оппоненты: д.м.н. профессор К.о.Грешстрам.

д.М.Н. профессор Г.Е.Афиногенов.

Ведущая организация: -

Научпо-иссподоватопйсквй институт эпидемиологии и микробиологии инани Л. Пастора.

Защита состоится .1995 Г. б. п .часов

на заседании диссертационного совета К.084.21 .01 при Санкт-Петербургской Государственной медицинской академии (195067, Санкт-Петербург, Пискаревскнй пр., 47).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургской Государственной медицинской академии.

Автореферат разослан " " 19 9 5 г.

Ученый секретарь специализированного сойота доктор медицинских наук, профессор

Л.Г. Бойцов

овщлп характеристика, работы.

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Заболевания, вызываемые бактериями рода Salmonella, широко распространены во всех странах мира среди людей и сельскохозяйственных ответных и гам -амым наносят серьезный ущерб здоровья населения п экономика. Практически постоянно происходит рост заболеваемости этими инфекциями и все возрастающее распространение сальмонелл . во внешней среда (L.Le- • Minor "1988, 1989, 1990; Покровский В.И. 1935; Кафгирова П.А. 1994. ) . Одной, из главных задач здравоохра-пёнения считается своевременная диагностика и профилактика «ras«» икфокций, как бршкой тиф, паратифа и

сал&моиетшозц. В последнйо годы помногих странах мира отмечаются' существенные изменения в этнологической структура и характере проявления зпндекпчоского процесса сальмонеллезов. Яабладаотся снопа ведущего серовара и тенденция к антропоЗгО— нозкону проявление . явфакций (ЗСаэенсон Я.В., Кафтырева Я.Л.,1991; Рояиова С.И. 1993; Алпмбекова Б.И. 1993; Каф-1 ^ .i 1"r< 1. ) . Для реаенил задач практического здра-с~ ' *" о оабопапагшяш!, вызванными саль-с •"оброненная сценка биологических циркулирующих зз данной местности ' " '. 1 п*1 ei С.Л. 1990; Раюшхнн В.В. 1992;

- " )

о-1 '' у 'с '/"i соо^нго'лпя, исп'ользуемие в промышлен-•—>с с тс - постоянно появляются во

знзаиэн сродо- и, как следствие,: в организма лэдой' • и кивот-iiw.t. ' Объектом г:х ' зсгздайствня становятся различимо микроорганизм:«., в том число 'зозбудитэпа болезней человека. В регионах с развитый сельсап:-! ~ хозяйств огх, • для uro интенсивного развития •• широко приценяются . различные' ядохимикаты (пестициды) • - ::ш5пческпе средства защита•растения, дефолианты и угпо.- Эти псстициды, .попадая' во внеинюи среду, иап-апяк; '«этея -з воде', почве,. парастениях,з организме otboíí-ниЧ " человека.. (Новожилов К.В..: 1990; Коппсоз A.A. 1994). В йт-íií' связи практически ."{затяни ..является' оценка' действия ' на микробы ХШЗИЧйСГ.их "'• '.. ..соединений, .; ...' оказывающих наибольшее ,

влияние на экологическую обстановку в данной местности. Для государств Средней Азии в последние годы очень актуалыщ пестициды, относящиеся к группе пиретрондов и хлорорганиче-скик соединений. Результаты. воздействия этих веществ иа биологические свойства возбудителей острых кишечных инфекций остаются, практически но изученными. СоВременние представления об изменении некоторых свойств микробов, .находящихся в естественных условиях в составе колоний и биопленок, значительно расширяют круг нерешенных проблем, связанных с изменчивостью бактерий и их чувствительностью к "различным антимикробным препаратам.

ЦЕПЬ РАБОТЫ: состояла в комплексной сравнительной оценке биологических свойств •сальмонелл, циркулировавших в 1992 - 1034 гг. в•'• Узбекистане, Таджикистане и России, а также в нзучошы .влияния - синтетических пестицидов на медицински -значимые свойства сальмонелл, находящихся-в различных микробная ес&бщестэах.

основные задачи: Изучать бнологические свойства сальмонелл, -выделенных в Узбекистане, Таджикистане и России.

Определить биологические особенности: птаимов .'.сальмонелл, циркулировавших в разных регионах. ;

Оценить эффекты воздействия современных хлорорганнча-с;ких и пиретрондных пестицидов на -биологические- свойства сальмонелл.

Оценить особенности влияния пестицидов на диффузно растущие сальмонеллы и микроорганизмы, находящиеся в составе колоний..

НАУЧНАЯ'НОВИЗНА! Впервые дана комплексная сравнительная характеристика биологических свойств сальмонелл, выделенных в разных регионах в период 1992-1994 гг.

Установлены особенности распределения устойчивости к антимикробным препаратам среди сальмонелл различных серова-ров. Впервые показано существование множественной, устойчивости к антимикробным препаратам у штаммов S.kinangani циркулирующих в Узбекистане. Прослежена связь признака множественной устойчивости сальмонелл данного соровара с наличием плазмид. Показано повышение устойчивости к антибиотикам у S.typhi, выделенных в Таджикистане.

Предложен набор субстратов для тонкой днффвренциров-ки штаммов s.typhi.

BnepBEJG изучено влияния. современных хлорорганичоского и пиретроиднш: пестицидов на биологические свойства сальмонелл. Установлено, что исследованные пестициды обладают бактерицидным действием. Впервиа продемонстрировано, что бактерии, находящиеся в составе колоний,. менее чувствительно к пестицидам, чем клетки, растущие диффузно. Установлен неизвестннн ранее эффект влияния пестицидов на чувствительность к антимикробным препаратам сальмонелл, растущих диффузно и находящихся в составе колоний. Установлены ипдтищуалышо особенности изменения чувствительности сальмонелл применительно к различным антибиотика!:.

ягйктичвскля цктгос!И>{ На основании • получениях д^н-

".....'— ■ г'-гч;,'-.-],^!!!" чг^ойпчоехда подходы к бактериолог:!-

^ ' II 1 ^рюшном тифе. Предложен нозкЛ ачюг " I II -» i бповарк, использование к-owonoro

ьость эпидемиологиЧПСКОГО КОП'А'РОЯЯ особенности. зпрагкипостп раз л чч-саяь-монелл, цпрхуппруяцюс п разданное ■ об особокиосгях чув-ттимо» атгг-пшпсробиин прапарп-'!'..;.п, позволяющие о наибольшей оффо.кяпвнсстьм проводить про-у.-гшалч'кпу и лачйпио заболеваний, вызвашшх данными бактериями, '

V(0"0;;i/i;i!Ui ВШЮСШНiV; Я.Г. ПППКТУг '

.!. , V.:?. пьиапаипи - циркулирующие п различны;; региона:- Срод-iiiiii Кзш. отличаются но ряду биологических признаков, которые пооОходтаю учитплать для поватешш эффективности диагностических процедур. Для дополнительно;': дифференциальной диагностики возбудителя бркиного спфа целесообразно использовать побор субстратов, вклйчаюций ксилозу,. арабпнозу, пульпит п тсст па образованна сероводород .

¿.Среди сальионолл, вкзкюающпх заболевания в Узбекистан') л Тадкшшстале, наблюдаются шщивядуалыш© -вариации чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам, лпояз-ляяппосл в повнпенаи устойчивости S.typhi к антибиотика?; в Тадянкистано п • нвркулядии штаммоь • S-cyphiauriu/r я S.kisangani, сбпадапних пнй'даствешюй устойчивостью.

3.Хлорорганический пестицид, кельтан и пиретроидвыа-талстар, децис оказывают бактерицидное действие да сальмонеллы. Микробы, находящиеся в состава колонии,' выливают в присутствии повышенных концентраций пестицидов. Пасянцпдн в суб-ьингабирующих концентрациях влияют ыа-;чувствптепънссть сальмонелл к антимикробным препаратам, при ¡атон увеличивается чувствительность г; пешчцпллпну, карбенпцпллпну, лезомаца-тину, эритромицину.и скитается к стрептомицину.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ: Материалы диссертации доложены а обсуждены на совместном заседании кафедр микробиологиивирусологии и иммунологии и пнфекццонныз: болезней СПбГМУ км. . акад.И.П.Павлова.

Основные материалы диссертации долохенк на - Юбилейной научно-практической конференции/ посвященной 70-летию Института им. Пастера (Санкт-Петербург, 25-27 мая 1993 г»), научной конференции СПбСГИИ ' "Актуальные. вопросы 'профилактической и клинической медицины" ' {Санкт-Петербург,. "26-20 апреля 1.994г.), научной конференции, посвященной 600-летию М.Улугбека "Проблемы медицины" (Самарканд. 135:4 г.),

ВЗЕДРЕЩЕ'РЕЗУЛЬТАТОВ. РДВОТН»' ' Основные результата исследований внедрены в учебную (практические закятля п.лекционный курс общей, частной и■клинической микробиологии для студентов 2, 3, С курсов и врачей) и экспериментальную работу кафедры микробиологии, вирусологии н .-иммунологииСПбГМУ им. ак. И.П.Павлова я практику лабораторных исследований ,' бактериологической -лаборатории: клиник.. СПбГМУ им.акад. И.П.Павлова. . '

ПУБЛИКАЦИИ

По материала}', диссертации опубликовано 4 работы.

СТРУКТУРА в СЕК21 ДИССЕРТАЦИИI Диссертация состоит из введения, обзора литература,глав -собственная исследований, заключения, выводов ,. списка использованных -. источников ■ литературы ( З^&^нсяочипка, из них отечественных и

\1) Оннострашшх). Материалы диссертации излонеаы на / страницахмашинописного текста.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ II МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ; Материалом для исследования служили 354 культуры сальмонелл, принадлежащие к 8 различным сароварам. Культуры были выделены в 1992-1994 гг., от больные сальмонеллезом и тнфо-паратифозными заболеваниями, бактериологическими лабораториями, на различных территориях Узбекистана, Таджикистана и России.

: Исследование морфологических н культурально-фермента-тивных свойств бактерий проводили, по общепринятой методике (Методические ' указания по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями. 1984 г. Методические указания . по лабораторной диагностике сальмонеллозов человека н животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды.'1990 г.). Идентификации бактерий осуществляли согласно данным, представленным в "Bergey's manual of systematic bacteriology" (1984).

Антигенную характеристику культур оценивали методом агглютинации на стекле с соответствующими сыворотками к Vi,0 и H антигенам.

Фаготипировани© изученных штаммов проводили по Международным схемам (A.Feli'x, В .Callow. 1943 ; . J.Craigie, С.Yen.1938)н :схемам, \ разработанным в Тбилисском ' НИИВС (И.Г.Чиракадзе,1974н Венгерском институте Гигиены (V.G.Lanzlo at al.,1935).

Чувствительность : бактерий к антибиотикам , определяли в соответствии с . приложением N 1 К приказу ИЗ СССР M 250 "Об унификации методов определения чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтяческим Препаратам.'1 от 13 марта 1975 г. Использовала два метод? :.. метод разведения з твердой питательной среде и метод диффузии в агар о. применением бу-макных дисков. Оценивали чувствительность к 13-тн антимикробным препаратам: пенициллину, ампициллину, карбоинцал-лпну, тетрациклину, левомицетину сукцинату, хлораифоияколу, стрептомицину, канамицииу, мономицину, гентаиишшу, поли-миксину, налидиксовой кислоте, цефамизину.

Определение и идентификацию плазиид проводили согласно методу, описанному Kado и Lui (1981).

Выживаемость в присутствии пестицидов культур

S. typhimurium, выделенных от больного сальмоцеллезом, оценивали методом серийных разведений в НПБ. .

Изученные пестициды децис (2,5 %)фло, талстар (Ю Ь к.э.) и кельтан (18,5 % к.э.) предоставлены отделом государственных испытаний средств защиты растений . Всероссийского института защити растений.

Выживаемость s¿typhimurium, находящихся в составе колоний, в присутствии антибиотиков и .пестицидов оценивали по методике разработанной на кафедра микробиологии,1 вирусологии и иммунологии им. Д.К.Заболотного СПбГМУ им.ак.Н.Д.Павлова.

Статистическую обработку полученных данных в ходе иссле--дований проводили общепринятыми методами статистики (И.П.Ашмарин 1962; ' Е.В.Монцевичюте-Эрингоио 1S64? H.A.Плохннский 1970).

Электронно-микроскопическое изучение морфологии бактериальных клеток и колоний выполнено р помощью метода негативного окрашивания 0,1 % водным раствором урандлацотата (Brenner S.1S59). При изучении ультраструктурной организации бактерий препарата готовили по методу A.Ryter,

E.Kellenberger (1953), Структуру колоний изучали с помочью сканирующего электронного микроскопа JÖI1-35C (Black J.Т. 1974). Электронно-цитохимическое изучение мукополиса-харидиых капсул выполняла с помощью метода T.Kobayasi п G.Saboo-Hansen (1971).

Автор приносит благодарность О.В.Рыбальченко за помощь в выполнении электронно-микроскопических исследований.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ П В2: ОБСУНДЕДДЕ: По своим морфологическим свойствам, характеру роста на питательных средах, ферментативной активности в аитигавиой структура изученные штаммы бактерий рода Salmonella идентифицированы как серотипы' S.typhi, S.paratyphi А и. В, S.typhimurium, S.kiel, S.kieangani,S.infant1в, S.enteritidic.

Все испот&ованные втаммы сальмонелл имопп полный, набор антигенов, за исключением S.typhi, у которых из 193 исследованных нтакмов, 36 имели .

Специальное сравнительное исследование штампов S.typhi, выделенных в Узбекистане, Таджикистане п России,

было выполнено в связи с широким распространением брюшного тифа в государствах Средней Азии и явным недостатком данных о свойствах возбудителей, циркулирующих в настоящее' время. Для сравнения были выбраны такие важнейшие свойства возбудителя, как биохимическая активиость, чувствительность к бактериофагам п антимикробным препаратам.

Для внутривидового типированпя сальмонелл принято использовать • определение ферментативной активности по отношению к отдельным углеводам, органическим кислотам или многотомным спиртам, по отношению к которым показана вариабельность биохимической активности у штаммов данного серовара. В случае s.typhi чаща всего используют определение ферментативной активности по отношению к арабинозе и ксилозе (Покровский B.IJ.1985; Кольпаков С*ГЛ> 1990).

Для : более детальной внутривидовой дифферёнцировки S.typhi мы- усовершенствовали существующий метод, основанный на оценке вариабельных признаков ферментативной активности. Результаты сравнительного Изучения ферментативной активности S.typhi по отношению к различным наборам углеводов и образования сероводорода (использовались следующие комбинации: ксилоза, арабиноза? ксилоза,- арабиноза, дульцнт; ксилоза, арабиноза, дульцит и сероводородообразованне) свидетельствуют, что с помощью этих наборов можно подразделить возбудителей на ряд фермептоваров. Использование набора, включающего 3 углевода п учат сороводородообразования, позволили подразделить птагеш, ;■ выделенные в различных регионах, г на 23 формептовара, среди которых преобладали« 1-й -27,5 %,. 14-й - 20,7 7-ой - 7,3 S, 18-й. - 6,2 %. При этой дифференциация штампов по ферментации ксилозы, араби-нозы, дульцита п пробе на образование сероводорода позволяет выделить фериентовари, характерные для данного региона лучпе, чем при оценке ферментативной активности культур только по отношению к ксилозе и арабинозе.

Изучение чувствительности к бактериофагам штаммов S.typhi выявило 14 фаговароа {Й, В, Д, Е, F, G, Н, Т> 27, 40, 43, 46,) п W п 1ш формы, среди которых преобладали ф&го-вары А, Е п W-форкы {27 V, 23,7 % и 19*4 % соответственно).

Сравнительный анализ чувствительности к бактериофага« показал, что изученные птаюда S.typhi, выделенные в Узбекистане, относились в основном к фаговару А л Vi-форкам

(35,8% и 29,4% штаммов соответственно). Бактерии, изолированные в Таджикистане, относились к фаговарам Е -36,5%, А - 17% и W - формам 14,6%, культуры,. выделенные в России, -к фаговарам А и Е (32% и 44% штаммов соответственно).

Исследованные культуры S .paratyphi В относились г. фаговарам 1 var 2 и Taunton в равных соотношениях.

Фаготипированиа культур S. typhimurium показало, что они относятся к двум фаговарам 20 и 29 также в равных соотношениях.

Культуры S.enteritidis лизировались всеми типовыми, фагами и по картине лизиса представляли единую группу, соответствующую фаговару 1. Этот фаговар, по данным .. литературы [Рохснова С.Ш. 1993; Кафтырева;Л.А. 1994 г. ] широко рас-, пространен у людей на различных территориях России с 1986 Г. по настоящее время.

При.изучений чувствительности сальмонелл к антимикробным препаратам показано., что разные виды и серовары рода Salmonella имеют различную чувствительность к изученным, антибиотикам. Наибольшее число устойчивых клонов, в том числе обладающих множественной. устойчивостью, найдено среди S.typhimurium и S.kisangani. .

Сравнительный анализ антибиотикочувствительности показал, что изученные штаммы S.typhi,. выделенные в Узбекистана и России, в основном имеют большую чувствительность к исследованным антибиотикам .(1-8 мкг/мл) по сравнению со штаммами, изолированными в Таджикистане. (32 мкг/мл).

В результате анализа плазмид исследованных штаммов сальмонелл, принадлежащих к различным сероварам, установлено, что изученные итаммы несут плазмиды. с различной молекулярной массой. Плазмида с молекулярной Массой .96 Md была обнаружена у S.typhimuriura, изолированных у больных. Эти штаммы характеризовались мнокественной устойчивостью к антимикробным ¡препаратам (Cn, Mm, Km, Тс, СЬ, Ар). .'Как: по-хазано в работах Кафтыревой п соавт. (1S81), аналогичные по молекулярной .массе плазмиды, выделенные у ' итамыов S.typhimurium,■изолированных в Ленинграде, содержали гене-гичесжую информацию об устойчивости к аналогичным антиник-. ро&ным препаратам. Исходя из этих данных мокно предполокить, что плазмиды с молекулярной массой 96 Md, обнаруженные нами у штаммов S.tvphiir.uriua, изолированных в Узбекистане,

такие относятся к классу Д-ппазмид. Аналогичные} плаз-ю:ды были обнаружены нами п у изучении;. штаммов S.'cisangani. Рано® наличие подобных плазмид у штаммов S.kiaangani выделенных а Узбекистане но описано. Данные птамнп такке обладали множественной устоГгчивостыэ к антимикробным препаратам. Однако а:; спектр включал также Gm. Иы kg яиэом экспериментальных данных о локализации генетической якфорияцпп ' об устойчивости к данному антибиотику. Можно предположить ее как хромосомную так л плазмидную локализацию. Вместе с там, 'наличие генов устойчивости у штаммов, ви-делешшх в различных'местах Узбекистана, в .большей степени • свидетельствуют о•плазмидпой-природа этих генов, поскольку мутанты антнбиотикоустойчивостп гбраздо хука сохраняются в микробннк популяциях'(Тэц 3.3. 1.SS7}.

У штаммов 3.enteritidis, по 'обладающих множественной устойчивостью к апсгакплробиЕ» препаратам, такке- обнаружена довольно крупная плазмзда, яновадая молекулярную кассу 30 Кб. известно, что сальконеллк данного серовара имеют плаз-ккду с такой- кслэкупя-риой массой, контролирующую некоторые факторы' вирулентности данного микроорганизма. Аналогичные плазмпда были ранеа ид ештвфпцкроэ аны и у штаммов S. enter itidis, изолированных э, Ленинграде . (Кафтырева Л .А. 1993.. х*.}; "■• . ,".' .'.'■./.

Особый -интерес продстаз'ляяо изучение. состава ппазмид •у »„typhi,, У нсспадованных наша итаммов данного вида ппаз-мида, с ксторыиа" можно было бы связать устойчивость к антимикробным препаратам»' обнаружены ив бала, это свидетельству от,. что устойчивость Нехоторы:: -штаммов . к. •: определенным антами кробкш-s - '"препаратам контролируется скорое всего хро-

мойомяымя • ганаш-. " •

Причины-распространенности ' ппазмид, кодирующих множе-стванауя ■'• устойчивостьк" -йнтигткробдш« . препаратам, среда-определенных зпдоэ сальмонелл до конца не лени. Очевидно, что это связано па .только-с эхологией, по и- с биохимическими особенностями микроорганизмов. Вероятно, что распространенно R-плазмид нонет бить ограничено . присутствием и других лпзпенно зааяыя ллазинд в к.т. зтхах определенного бноэара плн различиями в -системах кодификации и рестрикция

днк. .,■■-..-. ■ -..-'■.. .

В целом полученные нами данные указывают, что устойчивость к антимикробным препаратам у сальмонелл, циркулирующих в настоящее время в азиатском регионе, контролируется как хромосомными, так и. пп'азмидными генами. .

Таким образом, сравнительный анализ.возбудителей'брюшного тифа по их ферментативной активности, 'чувствительности; к антибактериальн м препаратам и бактериофагам 'позвонил выделить признаки, характерные для данного микроорганизма в зависимости от региона, где он циркулирует, .эти данные указывают, во-первых, на высокую изменчивость ферментативной, активности S.typhi, и, во-вторых, • на '..индивидуальиыЛ характер изменчивости возбудителя в различных регионах, 'несмотря.ж их географическую ' близость и возможность переноса иезду населением данных государств. Эти дапнне также указывают на то, что "эпидемические" штамин формируются в цпииои регионе и позволяют веста направленную диагностику, по определенным признакам, характерным, • в первую очередь; для даиного региона.

Данные о чувствительности изученных сальмонелл к антимикробным препаратам могут быть использованы для »«бори оптимальных схем .лечения к профилактики. "!ак, данные- о повышенной устойчивости S. typhi к атвтпмакробным препарата:-; свидетельствуют о .необходимости использовать большие до-.-,:; препаратов.

В результате изучения влияния хлорорганического н - пв-ретроидных пестицидов Н' сальмонеллы- серотипа S.typhirourium показано, что использованные препараты s •децпи, .талстар, кельтав обладают бактерицидным действием. Ншшшимюя .'инги-бнрующая концентрация для всех использовании;-. цестицидйя оказалась практически• одинаковой- к составляли 1.0 кг/мл.- \

Влияние пестицидов па ультраструктуру отдельны:: бактериальных клеток и бактериальных колоний как 'целостных .¡ию-гоклеточных образований изучали с помощью илектрошюй дшкро-скоипи. Вактерии, выращенные в присутствии пестипидов практически ие_. отличались по ультраструктуре как нелышх колоний, так и составляющих.их микробных клеток, от микроорганизмов, выращенных в обычных условиях.

Изучение ферментативной активности п антигенной -структуры ©ахтерий, выращенных в присутствии постицпдов показало,, что 'при использовакнкх экспозициях {20 кик, 3, С, 2', час) г.

концентрациях пестицидов (0,01 и 0,005 мг\мл) но происходят изменения ферментативной активности исследуемого штамма бактерий, п они сохраняют способность агглютинироваться О и !Г агглзтпипруищиия стандартными снворотхами.

При определении чувствительности S.typhimurium к изу-чотшн .антимикробным препаратам в присутствии субингиби-русцпх концентрации пестицидов методом бумажных дисков отмечен индивидуальный характер действия различных концентраций пейтацидов по отноаению к различным антимикробным препаратам.

Полученные санные свидетельствует, что эффективность действия певоипцотина. снижается в' присутствии пестицидов в среда. В большей стопеня уменьшение активности зарегистрировано при .концентрации пестицида' • в агаре 0.005 ггг/uii. Для тетрациклина показано усиление действия препарата при концентрации пестицида в агаре 0.01 и 0.05 иг/im. ' Действие эритромицина такг::о усиливается з присутствии пестицида 0.05 и 0.01 т:г/г:л. Понидплянн п карбонп-{щялпи эффоктпэпео действуют на тест-микробы в присутствии 0,005 п 0,01 «г/мл пестицида и xy:se, если количество пестицида разно 0,05 . мг/мл. Эффект действия стрептомицина снижается поп концентрации пестицида. 0,005 и 0,01 мг/мл. Скодийо результаты били получены и при изучение влияния пестицидов■ на чувствительность к антибиотикам бактерий, рлстудях тз -шдхой среде (табл. М 1) .

Таблица N . 1.

НИК антибиотиков для Э.1урЫтиг1иш, выращенных в бульоне, в присутствии субивгибирукэдей концентрации пестицида (0.01 мг/ыл).

1 I ' ; АНТИБИОТИКИ |

I . I . (МИК б 1.1кг-/ыл)- I

I ' , ■—__--—:-—

| Пестицид 1 / Ст ! тс ! | Ег | сь 1 'Ре | Зга | аа |

| децис 1 2, 1 -4 1 | 75 | 32 1 юо 1 40 | . 3 1

| кельтан | | 2 . Г * 1 ; 75 . | 32 | 100 | 40 | ■8 1

| талстар 1 1 2 г 4 I 75 | 32 1 100 | 40 [ 8 1

| Контроль | ¡без пестицида 1 1 8 ! 1 1 1 1 150 ! 1. | 64 1 ! | 300 1 1 32 | . |. 16 1

Выживаемость в-typhi.rauri.uffl, находящихся в составе, колоний изучали в присутствии пестицидов в концентрациях, ин-гибнрующих размножение бактерии.при -диффузном росте с бульоне - 1 мг/мл и 5 мг/ыл - пятикратная, ангибируадая концентрация (Табл.К 2).

Таблица N 2.

Выживаемость Б.typhimurium в колониях в присутствии

пестицидов,;*)

| Пестицид | | Концентра-1 1 Выживаемость бактерий. |

1 |ция (мг/мл). КОЕ | % (**) |

|Децис | | 1 мг/мп 1 <2, 01+0,17)х1С? I 92,2 |

1 | 5 мг/Мл (Ь б 1 + 0,12)х10^ < | 73,8 |

(Талстар | | 1 мг/мл (2, 03+0,15)х10Х . 1 93,1 |

1 | 5 мг/мл бб+0,12)х10& | 76,1 |

| Кельтаг: | | 1 мг/ил (2, 00+0,13)х10& 1 91-7 1

1 | 5 мг/мл 1(1- 65+0,12)х! 1 75,7 |

(Контроль 1 без |пестицида 1 1 | ------- (2, 18+0,14)х1С$ ; 1 1 1 1 | 100 |

'{ ") -Минимальная ингибируюцая концентрация для диффузно растуаих бактерий составляла 1 мг/мл.

(**) -Процент определен по отношению к контролю.

Представленные данные свидетельствуют» что Выживаемость З.ЪурЬ1тиг1иш в составе колонии в присутствии пестицидов значительно выше, чем у бактерий, растущих диффузно. Изучение выясиваемсти бактерий в составе колоний в присутствии пестицида и антимикробных препаратов показало, что. в этих условиях двцис, талстар и кельтан повышают эффективность действия эритромицина и левомицетина.

выводи

X. Изученные штаммы S.typhi, выделенные в Узбекистане, Таджикистане и России, различаются по ферментативной активности. Наиболее полная дифференцировка штаммов достигается при анализе ферментативной активности по отношению к набору углеводов, •включающему. ксилозу, арабинозу, дульцит и учет сероводородообразования.

2. Устойчивость к антимикробным препаратам по-разному распространена среди представителей различных видов и серо-варов изученных штаммов сальмонелл. Реке всего устойчивость к антимикробным препаратам встречается у S.typhi. Наибольшее число устойчивых штаммов, в том числе, обладающих множественной устойчивостью, обнаружено у S.typhimuriura и S.kieangani.

3. Изученные штаммы S.typhi, выделенные в Узбекистане, Тадаййистане и России; различаются по чувствительности к антимикробным препаратам. Итаммы, изолированные в Тадап-кистане имеют повышенные значения минимальной ингибпрувщсп концентрации для большинства использованных антимикробных препаратов.

4. : Пестициды талстар, децис и кольтан обладают бактерицидным действием на сальмонеллы.

В субышгибирующих концентрациях эти препараты на вызывают изменений ультрасгуктуры бактерий и их колоний, антигенной специфичности и ферментативной активности изученных микроорганизмов.

5. Пестициды в субингибируюапх концентрациях влияют на чувствительность сальмонелл к антимикробным препаратам. Субингибирующие концентрации исследованных пестицидов (децис, талстар, кепьтан) усиливают действие антибиотиков (тетрациклина, эритромицина; пенициллина, карбоннциллина, левоыицетпна) при диффузном росте и в составе колоний н сникают в этих условиях эффект действия стрептомицина.

СПИСОК PAEQT, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕИН ДИССЕРТАЦИИ

1. Антибиотикорезистентность сальмонелл, циркулирующих в Узбекистана. Нарзиев. Д.У., Искандеров Е.И., Андриянов В.А., Алиева С.К., Салаяиддинов М.С., Ходяае» Н.И. Актуальные проблемы инфекционной патологии. Тезисы докладов научной конференции посвященной 70 летня ННИЭИ им. Пастера. 4.1. Санкт-Петербург. 1993. С.49.

2. Действие пестицидов на сальмонеллы. Нарзиев Д.У. Актуальные вопросы профилактической .и клинической медицины. Тезисы докладов научной конференции 26-28 05 1994 г. Санкт-петербург. 1994. С. 36-3- 7VV ,

3. Сатторов С., Нарзиев Д.У., Ахтамов М.А., Тец В.В. Сравнительная характеристика Salmonella typhi изолиорванных в Таджикистане, Узбекистане и России. //"Проблеют медицины". Тезисы докладов научной конференции посвященной 600-летию Инрзо Улугбека. Самарканд. 1994. С.57-5В.

4. Способ биотипированяя штатов Salmonella typhi. Нарзиев' Д.У., Тец В.В. //"Идеи Пастора в борьба с инфекциями". Международная конференция, посвященная Году Луи Пастера,6-10 июня 1995 года, Санкт-Петербург, Россия. Принято в печать.

Подписано * огчэт» 14X4.35 Уел. п*ч. л. U Фврчю №841/16 Ппт офтва» Твр-чк 109 Mi. ЗшзДО IJ7C81. Cum • Пемубург, Ниатсяитм СПЭГМУ^х JLTonmm в/Ь