Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологические свойства лактобацилл биотопов человека в норме и при дисбиозах

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Забирова, Татьяна Маратовна

Страница

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ХАРАКТЕРИСТИКА ЛАКТОФЛОРЫ ТЕЛА ЧЕЛОВЕКА: БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И РОЛЬ В ОРГАНИЗМЕ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Общая характеристика рода Lactobacillus.

1.2. Факторы, определяющие способность лактобацилл к переживанию в биотопах тела человека.

1.3. Роль лактобацилл в организме человека и обеспечение колонизационной резистентности биотопов.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Общая характеристика, методы выделения и идентификации штаммов, использованных в работе.

2.2. Методы изучения биологических свойств лактобацилл.

2.2.1. Метод изучения антилизоцимной активности лактобацилл.

2.2.2. Метод определения лизоцимной активности лактобацилл.

2.2.3. Метод определения чувствительности лактобацилл к антибиотикам.

2.2.4. Метод определения адгезивной способности лактобацилл.

2.2.5. Метод определения бактериоциноген-ности и бактериоциночувствительности лактобацилл.

2.3. Методы статистической обработки полученных результатов.

ГЛАВА 3. БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛАКТОБАЦИЛЛ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ РОТОВОЙ ПОЛОСТИ.

ГЛАВА 4. БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛАКТОБАЦИЛЛ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ КИШЕЧНИКА.

ГЛАВА 5. БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛАКТОБАЦИЛЛ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ВЛАГАЛИЩА.

ГЛАВА 6. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ЛАКТОБАЦИЛЛ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ РАЗНЫХ БИОТОПОВ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологические свойства лактобацилл биотопов человека в норме и при дисбиозах"

Лактобациллы - один из доминирующих компонентов микрофлоры тела человека (Шендеров Б.А.,1998), чаще всего встречаются в ротовой полости, кишечнике и женском репродуктивном тракте.

Как представители нормофлоры, лактобациллы играют важную роль в поддержании нормального состояния биотопов тела человека, выполняя многообразные функции (Шендеров Б.А, 1998). Известна роль лактофлоры кишечника и женского репродуктивного трактов в обеспечении устойчивости этих биотопов к колонизации патогенными и условно- патогенными микроорганизмами (Ленцнер А.А. с соавт.,1987). Значимо участие лактобацилл в метаболических процессах в тонком и толстом кишечнике (Gustafsson В. Е., 1982; Simon G.L., Gorbach S.L.,1986). Видовой и количественный состав лактофлоры биотопов различен и может изменяться в зависимости от состояния организма (Rosenstein I. J. et al.,1996; Черкасов C.B.,1998).

Изменение содержания лактофлоры является одной из форм дисбиотических нарушений в нормобиоценозах биотопов человека, что позволяет использовать количественную характеристику лактобацилл в качестве одного из основных диагностических критериев при оценке состояния кишечника и женского репродуктивного тракта (Соколова К.Я. с соавт.,1988). Кроме количественных сдвигов наблюдается изменение видового состава, которое выражается как в появлении или исчезновении видов лактобацилл, так и в повышении или снижении их удельного веса в микробиоценозе. В то же время качественные характеристики лактофлоры при дисбиотических состояниях различных экониш до сих пор не изучены.

С другой стороны, в мировой литературе имеются данные, свидетельствующие о возможности развития микроэкологических нарушений и на фоне нормального содержания лактофлоры (Pahlson С., Larsson P.G.,1991). К сожалению, отсутствует комплексный подход в изучении биологических свойств лактобацилл, что не позволяет практически оценить состояние лактофлоры различных биотопов тела человека. Поэтому важным представляется изучение свойств лактобацилл, которые могли бы служить дополнительными диагностическими критериями при дисбиотических состояниях.

Не выяснены механизмы выживания лактобацилл в биотопах тела человека в условиях постоянного воздействия большого количества клеточных и гуморальных факторов защиты организма (Seow W.K. et al., 1992; Narhi T.O.et al.,1994).

В последние годы появились данные, свидетельствующие, что ряд представителей аутохтонной микрофлоры тела человека обладает факторами персистенции (Валышев А.В., 1996; Елагина Н.Н., 2000), способствующими длительному переживанию этих микроорганизмов в организме хозяина, хотя у лактобацилл эти свойства не описаны.

Открытым остаётся вопрос о роли видового состава и биологических характеристик лактобацилл в формировании эу - и дисбиотических состояний экониш человека. В этой связи интерес представляют особенности видового состава и комплекса биологических характеристик лактобацилл различных биотопов человека в норме и в условиях сниженной колонизационной резистентности. Решение этого вопроса позволило бы разработать дополнительные критерии определения состояния биотопов, а также расширить представления о роли лактобацилл в формировании нормо - и патобиоценозов.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью настоящего исследования явилось сравнительное изучение видового состава и биологических свойств лактобацилл, выделенных из ротовой полости, кишечника и женского репродуктивного тракта в норме и при дисбиотических состояниях, и разработка критериев определения состояния биотопов.

Задачи исследования:

1. Определить видовой состав оральной, фекальной и вагинальной лактофлоры людей и сравнить его качественные и количественные характеристики в норме и при дисбиозах.

2. Оценить комплекс биологических характеристик (антилизоцимную активность, лизоцимную активность, адгезивную способность, антибиотикорезистентность, бактериоциногенность, бактериоциночувствительность, рН) лактобацилл, выделенных из разных биотопов человека.

3. Разработать метод определения колонизационной резистентности биотопов человека.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые на основе использования единых методических подходов прозедено комплексное изучение биологических характеристик лактобацилл, изолированных из разных биотопов человека в норме и при дисбиозах.

Представлена сравнительная оценка колонизирующей способности лактобацилл в зависимости от состояния микробиоценоза и источника их выделения.

Установлено, что колонизирующая способность лактобацилл связана с выраженностью их адгезии и антилизоцимной активности.

Показатель микробной обсеменённости (ПМО) прямо коррелировал со значениями указанных признаков. Микроорганизмы, выделенные в норме, характеризовались не только выраженным колонизирующим потенциалом, но и высокой лизоцимной активностью и низкой антибиотикорезистентностью по сравнению со штаммами, выделенными при дисбиозе. Высокие значения биологических свойств лактобацилл, определяющие их колонизирующую способность, были характерны для всех штаммов выделенных у лиц с высоким ПМО.

Отмечено, что адгезивная способность и антилизоцимная активность лактобацилл наиболее выражены у вагинальных штаммов изолированных от здоровых и характеризуют их как основную микрофлору в биотопе.

Оценено значение бактериоциногении и бактериоциночувствительности в формировании видовой структуры лактофлоры. Наиболее часто встречающиеся виды лактобацилл характеризовались высокой бактериоциногенией и низкой бактериоциночувствительностью.

Представлена характеристика микроэкологического статуса в зависимости от видового состава лактофлоры. Установлено, что вид L. fermentum наиболее характерен для нормомикробиоценозов, а вид L. rhamnosus чаще выделяется при дисбиозах.

Для оценки стабильности состояния микробиоценозов предложен «Способ определения колонизационной резистентности экологической ниши тела человека» (Патент на изобретение № 2175673 от 10.11.2001), основанный на выявлении антагонистического действия аутохтонных микроорганизмов по отношению к тест - штаммам (S.aureus и E.coli).

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ

Полученные результаты расширяют знания в области микроэкологии, способствуя пониманию механизмов формирования лактофлоры тела человека.

Практическая ценность работы характеризуется возможностью использования биологических характеристик лактофлоры для дифференциации штаммов по их колонизирующей способности и изучения состояния микробиоценозов.

Для повышения эффективности ранней диагностики дисбиотических состояний в клинической и лабораторной практике рекомендован разработанный «Способ определения колонизационной резистентности экологической ниши тела человека», для определения уровня колонизационной резистентности биотопов человека.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Лактофлора различных биотопов человека в норме и при дисбиозах характеризуется особенностями видового состава лактобацилл и свойств внутриродового антагонизма.

2. Колонизирующий потенциал лактобацилл зависит от выраженности адгезивной способности и их антилизоцимной активности и определяет формирование микробиоценозов.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Результаты проведенных исследований доложены на II Российской конференции "Персистенция микроорганизмов" (Оренбург, 1997), областной научно-практической конференции врачейбактериологов (Оренбург, 1999), конференции «Репродуктивное здоровье населения, микробиологические и иммунологические аспекты» (Оренбург, 1999), региональной конференции молодых учёных и специалистов (Оренбург, 1999), III Российской конференции "Персистенция микроорганизмов" (Оренбург, 2000).

ПУБЛИКАЦИИ

По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, получен патент на изобретение № 2175673 от 10.11.2001 "Способ определения колонизационной резистентности экологической ниши тела человека".

ОБЪЁМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Забирова, Татьяна Маратовна

ВЫВОДЫ

1. В видовом составе лактофлоры, выделенной от лиц с высоким показателем микробной обсеменённости, преобладают виды L. acidophilus и L.fermentum, тогда как видовой состав лактобацилл у лиц с низким показателем микробной обсеменённости характеризовался преобладанием наряду с L. acidophilus в ротовой полости L.rhamnosus и L.plantarum, в кишечнике L.plantarum,а в вагинальном микробиоценозе L.rhamnosus.

2. При анализе состояния лактофлоры человека выделено три фактора. Наибольший процент выборки описывал фактор "колонизации" ( от 19% до 33% в разных биотопах). Меньший процент выборки объясняли фактор "внутриродового антагонизма" (от 10% до 15%) и фактор "защиты биотопа" (от 6% до 10%).

3. Фактор "колонизации" включает показатель микробной обсеменённости, антилизоцимную активность и адгезивную способность лактобацилл и описывает колонизирующий потенциал лактофлоры. Лактобациллы, выделенные из различных биотопов у лиц с высоким показателем микробной обсеменённости, обладали наиболее выраженными антилизоцимной активностью и адгезивной способностью.

4. Фактор "внутриродового антагонизма" характеризует особенности распределения видов в структуре лактофлоры и включает виды лактобацилл, их бактериоциногенность и бактериоциночувствительность. Штаммы L. acidophilus, преобладающие во всех биоценозах, характеризовались наиболее высокими значениями маркёра бактериоциногенности и низкими значениями маркёра бактериоциночувствительности.

5. Охарактеризованы различия биопрофилей лактобацилл в зависимости от занимаемого биотопа. Вагинальные лактобациллы характеризуются наиболее выраженными значениями антилизоцимной активности и индекса адгезии по сравнению со штаммами, выделенными из других биотопов.

6. Установлено наличие высокого уровня антибиотикорезистентности вагинальных лактобацилл, выделенных от лиц с дисбиозом. Антибиоткорезистентность вагинальных штаммов коррелировала с устойчивостью к цефалексину и гентамицину, оральных штаммов с устойчивостью к доксициклину, клиндамицину и гентамицину, фекальных штаммов с устойчивостью к цефалексину, гентамицину, доксициклину, клиндамицину. Отмечена резистентность выделенных лактобацилл к полимиксину, тобрамицину и ципрофлоксацину.

7. Фактор "защиты биотопа", объясняющий механизмы антагонистического действия лактобацилл включает кислотность культуральной среды, лизоцимную активность, и бактериоциногению. Разработан способ определения колонизационной резистентности экониши человека, основанный на выявлении суммарного антагонизма лактобацилл по отношению к тест - штаммам.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Лактобациллы являются одним из доминирующих компонентов микрофлоры тела человека (Шендеров Б.А.,1998). Функции лактофлоры разнообразны и играют роль в поддержании нормального микроэкологического статуса занимаемого биотопа (Ленцнер А.А. с соавт., 1987).

При дисбиотических нарушениях в нормобиоценозах биотопов тела человека происходит изменение содержания количества лактобацилл, а также изменение видового состава, что имеет диагностическое значение.

С другой стороны, в мировой литературе имеются данные, свидетельствующие о возможности развития микроэкологических нарушений и на фоне нормального содержания лактофлоры (Pahlson С., Larsson P.G.,1991). Поэтому важным представляется изучение свойств, которые могли бы явиться дополнительными диагностическими критериями при дисбиотических состояниях.

Открытым остаётся вопрос о роли видового состава и биологических характеристик лактобацилл в формировании эу - и дисбиотических состояний экониш тела человека. В этой связи важно изучить особенности видового состава и комплекса биологических характеристик лактобацилл, выделенных из различных биотопов тела человека в норме и в условиях сниженной колонизационной резистентности. Решение данного вопроса позволило бы расширить представления о роли лактобацилл в формировании нормо - и патобиоценозов различных биотопов, а также разработать дополнительные критерии определения состояния экониши, что определило цель и задачи нашего исследования.

Целью настоящего исследования явилось определение видового состава и биологических свойств лактобацилл, выделенных из биотопов тела человека в норме и при дисбиотических состояниях. Для достижения данной цели были поставлены и решены следующие задачи: определён видовой состав оральной, фекальной и вагинальной лактофлоры людей, охарактеризованы его качественные и количественные характеристики в норме и при дисбиозах; изучены частота встречаемости и степень выраженности биологических свойств лактобацилл, выделенных из разных биотопов тела человека. На основе выявления антагонизма лактобацилл разработан способ определения колонизационной резистентности экониш тела человека.

При проведении исследования было выделено 176 штаммов из ротовой полости 68 здоровых людей и 52 больных хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом (96 штаммов от здоровых и 80-от больных), и 169 штаммов - из фекалий 105 человек с дисбактериозом кишечника. Из женского репродуктивного тракта было изолировано 256 штаммов, из которых 116 штаммов от 73 здоровых, а 140 - от 93 женщин, страдающих дисбактериозом влагалища.

Выделение и идентификацию микроорганизмов осуществляли общепринятыми методами на основании морфологических, тинкториальных, культуральных и биохимических свойств. Изучение биологических свойств проводили по стандартным методикам. Полученные результаты обработаны с помощью статистических методов.

При изучении биологических характеристик лактофлоры трёх исследуемых экониш были получены следующие результаты.

Изучение лактофлоры полости рта позволило выявить различия по видовому составу и биологическим свойствам у здоровых и больных людей. Видовой состав здоровых людей характеризовался доминированием L.acidophilus, L.fermentum и L.casei, тогда как у больных афтозным стоматитом наряду с L.acidophilus преобладающими видами являлись L.rhamnosus и L.plantarum.

При корреляционном анализе была выявлена прямая корреляция между ПМО и состоянием здоровья, что может свидетельствовать о том, что лактофлора является нормальной составляющей микробиоценоза полости рта. Её количество зависит от наличия АЛА, ЛА и адгезивной способности, причём эти свойства наиболее выражены у штаммов от здоровых и в меньшей степени проявляются у штаммов от больных.

Биопрофили лактобацилл, выделенных от здоровых людей, обладали высокой колонизирующей способностью и характеризовались наличием выраженных значений индекса адгезии, антилизоцимной и лизоцимной активностей. Лактофлора больных хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом имела более низкие значения указанных свойств и обладала выраженной резистентностью к антибиотикам и высокой чувствительностью к бактериоцинам. На наш взгляд отличия биологических характеристик лактофлоры в норме и при дисбиозе могут явиться дополнительным критерием для дифференциации лактобацилл при различных микроэкологических состояниях. L.acidophilus и L.plantarum, являющиеся доминирующими в структуре лактофлоры в микробиоценозе у больных, вносят больший вклад в фактор внутриродового антагонизма, что может объяснить их доминирование в структуре микробиоценоза ротовой полости у здоровых и больных.

Выделенные штаммы обладали набором характеристик (низкие значения рН, лизоцимная активность, бактериоциногения), определяющих антагонистическую активность, что, по мнению Поспеловой В.В. с соавт. (1992), свидетельствует об участии лактобацилл в обеспечении колонизационной резистентности ротовой полости.

Таким образом, прямая связь ПМО лактобацилл с состоянием здоровья, их высокая колонизирующая способность и выраженный антагонистический потенциал могут служить дополнительным аргументом в пользу того, что лактофлора является нормальной составляющей микробиоценоза ротовой полости. Эти данные согласуются с результатами Madinier I. (1991) и Colloca М.Е. et al.(2000), которые выделяли лактобациллы из ротовой полости в норме и относили их к индигенной микрофлоре.

При изучении лактофлоры кишечника установлены особенности видового состава и биологических свойств в двух сравниваемых группах. Видовой состав фекальной лактофлоры людей, объединённых в группу с низким ПМО лактобацилл по сравнению с группой с высоким ПМО кроме видов L. acidophilus, L.fermentum, L. casei и L.brevis был представлен L.rhamnosus и L.plantarum. При этом удельный вес L. acidophilus, L. casei и L.brevis не изменялся, а процент L.fermentum значительно снизился.

Несмотря на то, что все штаммы лактобацилл выделены от людей с дисбиозом кишечника, нам удалось выявить особенности выраженности их биологических свойств в группах с высоким и с низким ПМО лактофлоры.

Для лактобацилл с высоким ПМО было характерно наличие более выраженных значений AJIA, JIA и ИА и более низких значений рН. Указанная взаимосвязь ПМО штаммов лактобацилл с их биологическими свойствами была подтверждена корреляционным анализом, а адгезивная способность и AJIA явились основными компонентами фактора «колонизации».

При изучении бактериоциногении было выявлено, что вид L.acidophilus обладает наиболее высокими значениями индекса бактериоциногенности, что может объяснять их доминирование в структуре лактофлоры.

Анализ свойств, образующих фактор «защиты биотопа», выявил, что они отличаются у микроорганизмов с высокими и низкими значениями ПМО. Лактобациллы из первой группы имеют более низкие значения рН и более выраженные значения МБГ и ЛА. Причём наиболее низкие значения лизоцимной активности наблюдаются у штаммов L.acidophilus, L.rhamnosus и L.plantarum, преобладающих во второй группе.

При этом процент видов, имеющих наиболее выраженную отрицательную связь с лизоцимной активностью, намного выше в группе лактобацилл с низким ПМО по сравнению с группой штаммов высоким ПМО.

Изучение лактофлоры кишечника выявило, что лактобациллы с высоким ПМО обладали выраженной колонизирующей способностью, которая зависела не только от их адгезивной, но и от их антилизоцимной активности.

Наряду с этим определены свойства, описывающие антагонистическую активность кишечных лактобацилл. Указанный параметр связан с комплексом биологических характеристик - рН, бактериоциногения, продукция лизоцима, причём лизоцимная активность микроорганизмов с высоким ПМО достоверно превышает данный показатель у лактобацилл с низким ПМО.

Таким образом, комплекс биологических свойств, описывающих состояние фекальной лактофлоры, определяет её колонизирующую способность и антагонистический потенциал. По данным ряда авторов (Ленцнер А.А. с соавт., 1987; Drago L. et al.,1997), эти два обстоятельства чрезвычайно важны для описания состояния микробиоценоза кишечника и характеризуют нормальную микрофлору биотопа. Наряду с этим названные параметры микроорганизмов используются для отбора пробиотических штаммов, применяемых для коррекции состояния кишечного микробиоценоза (Salminen S.,1992).

Проведенные исследования по изучению видового состава и биологических характеристик вагинальной лактофлоры выявили, что видовой состав в норме и при дисбиозе характеризуется преобладанием L. acidophilus, тогда как доля L.fermentum, часто встречающихся в норме, снижается при дисбиозе и наоборот, L. rhamnosus с низким удельным весом в норме гораздо чаще выделяются при дисбиозе. Несмотря на то, что доля L. plantarum и L. casei при дисбиозе возрастает почти в два раза, тем не менее она остаётся незначительной.

Корреляционный анализ позволил выявить положительную связь ПМО с AJ1A и индексом адгезии и отрицательную с антибиотикорезистентностью. Т.е. штаммы с высоким ПМО обладают высокими значениями АЛА и адгезии, что позволяет отнести эти характеристики к свойствам колонизации микроорганизмов, тем более что эти биологические характеристики явились составляющими фактора колонизации, который был выделен при проведении факторного анализа. Тот факт, что адгезия по нашим данным входит в фактор «колонизации», подтверждается данными Ленцнера А.А. (1987) о важном значении адгезивности лактобацилл в колонизации биотопов.

Штаммы с низким ПМО демонстрировали увеличение их антибиотикорезистентности. По всей видимости, высокий маркёр антибиотикорезистентности штаммов лактобацилл, выделенных при дисбиозе, является результатом антибиотикотерапии, которая проводится при дисбиотических нарушениях и воспалительных заболеваниях репродуктивного тракта. Вместе с тем, вагинальный дисбиоз может являться следствием антибиотикотерапии, что сопровождается селекцией устойчивых к антибиотикам штаммов.

Анализ бактериоциногенности и бактериоциночувствительности показал, что наибольший вклад в формирование фактора внутриродового антагонизма вносит вид L. acidophilus, имеющий высокий удельный вес в норме и при дисбиозах. Широкая распространённость этого вида в структуре вагинальной лактофлоры может быть объяснена тем фактом, что по данным Е. Parente и A.Ricciardi (1999) L. acidophilus продуцируют наибольшее количество бактериоцинов, определяющих внутриродовой антагонизм лактобацилл.

Таким образом, штаммы лактобацилл, выделенные в норме, обладают высокой колонизирующей способностью и характеризуются наличием выраженных значений антилизоцимной активности и высокой адгезивной способностью. Лактобациллы, изолированные при дисбиозе, имели более низкие значения указанных свойств и, вместе с тем, демонстрировали высокую антибиотикорезистентность.

При дисбиотических состояниях в вагинальном микробиоценозе наблюдается снижение колонизационной резистентности, которое сопровождается не только уменьшением количества лактобацилл, но и увеличением рН их культуральной среды и снижением лизоцимной активности.

Для выявления общих биологических закономерностей, определяющих состояние лактофлоры тела человека, был проведен сравнительный анализ описываемых характеристик лактобацилл трёх изученных биотопов.

Видовая структура лактофлоры биотопов тела человека отличалась как в норме, так и при дисбиозе, сохраняя определённую общность в доминировании отдельных видов. Наибольший удельный вес в видовой структуре лактофлоры занимал L.acidophiius. Менее часто удавалось выделить виды L. fermentum, L. plantarum, L. rhamnosus, L. casei, a L. brevis встречались в только в структуре фекальной лактофлоры.

Была выявлена зависимость частоты выделения видов лактобацилл с микроэкологическим статусом биотопа. Так, вид L. fermentum наиболее характерен для нормомикробиоценозов, а вид L. rhamnosus чаще выделялся при дисбиозе. Подтверждением этому служат данные Klein G. (1998), выделявшего L. rhamnosus при дисбиотических состояниях. Процент штаммов L.acidophilus и L. casei, выделенных в норме и при дисбиозе зависел не от вида микроорганизма, а от источника выделения. Полученные результаты были подтверждены корреляционным анализом. Вид L. rhamnosus положительно коррелировал с состоянием дисбиоза (г= 0,18; Р<0,05), а вид L. fermentum положительно коррелировал с нормальным микроэкологическим состоянием экониши (г= 0,27; Р<0,05).

Кроме того, исследование видового состава биотопов обнаружило доминирование одних видов и низкий удельный вес в видовой структуре лактофлоры других. Так, была выявлена высокая положительная корреляционная связь L.acidophilus с бактериоциногенией и отрицательная корреляционная связь с чувствительностью к бактериоцинам. Другие виды лактобацилл имели низкую или отрицательную связь с бактериоциногенией и, напротив, высокую положительную связь с чувствительностью к подавляющему большинству бактериоцинов микроорганизмов этого же рода. Т.е. распространённость определённых видов в структуре лактофлоры связана с двумя факторами. Во - первых, с их бактериоциногенией -свойством, определяющим внутриродовой антагонизм, а во- вторых, с бактериоциночувствительностью, характеризующей способность лактобацилл выживать в условиях антагонизма.

При анализе ПМО с другими биологическими характеристиками микроорганизмов изученных биотопов были выявлены корреляционные связи, общие для трёх биотопов, что, вероятно, отражает общебиологические закономерности состояния лактофлоры тела человека. Была выявлена прямая корреляция показателя микробной обсеменённости с индексом адгезии, антилизоцимной активностью и лизоцимной активностью и обратная корреляционная связь с маркёром резистентности.

Проведенный факторный анализ позволил выделить три фактора, одним из которых явился фактор «колонизации», характеризующий наибольший процент выборки и включающий ПМО, ИА, AJIA, JIA.

Однако не были выявлены значения указанных биологических характеристик, которые позволили бы достаточно точно описать штаммы с высокой и низкой колонизирующей способностью. Было установлено, что наибольшие отличия в биологических характеристиках, описывающих штаммы с высокой и низкой способностью колонизировать биотоп, определяются по адгезивной способности и антилизоцимной активности. Вместе с тем были отмечены некоторые различия выраженности биологических характеристик лактобацилл, выделенных из разных экониш. Так, наибольшие различия по ПМО были отмечены для штаммов, выделенных из женского репродуктивного тракта. Тогда как штаммы, выделенные из ротовой полости и кишечника по ПМО заметно не различались.

Изучение антагонистических свойств лактобацилл (рН, бактериоциногении, JIA) позволило выделить фактор антагонизма, объединяющий указанные характеристики. Однако различия выраженности свойств и их сочетаний у разных штаммов создавали трудности в оценке антагонистического потенциала лактофлоры.

Поэтому для решения задачи по определению антагонизма лактобацилл нами был предложен методический подход, основанный не на определении биологических свойств лактобацилл, а на выявлении антагонизма по отношению к тест - штаммам. Это позволило разработать способ определения колонизационной резистентности экониш тела человека.

Таким образом, различия биологических свойств в норме и при дисбиозе, а так же их различия у разлых видов в пределах одного биотопа свидетельствует не только о видовой гетерогенности лактофлоры тела человека, но и о широком разнообразии биовариантов в пределах одного вида.

Суммируя данные, полученные в ходе исследования, необходимо выделить два основных момента.

Во-первых, лактофлора различных биотопов тела человека в норме и при дисбиозах характеризуется особенностями видовой структуры и свойствами внутриродового антагонизма.

Во-вторых, колонизирующий потенциал лактобацилл определяющий формирование микробиоценозов, зависит от выраженности адгезивной способности и антилизоцимной активности микроорганизмов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Забирова, Татьяна Маратовна, Оренбург

1. Акопян Т.Э. Бактериальный вагиноз и беременность.// Акушерство и гинекология.-1996.-№6.- С.3-5.

2. Анкирская А.С. Бактериальный вагиноз.// Акуш. и гинекол. 1995.-№6.- С. 13-16.

3. Ануфриева Р.Г. Влияние рифампицина на генеративную функцию и микробную экологию кишечника (экспериментальное исследование).//Дис. канд. биол. наук. М., 1990.

4. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях.- Л.:Медицина, 1962.- 160 с.

5. Блохина И.Н., Леванова Г.Ф., Антонов А.С. Систематика бактерий (с основами геносистематики).- Нижний Новгород, 1992.

6. Блохина И.Н., Леванова Г.Ф. Состояние таксономии рода Lactobacillus с точки зрения геносистематики// ЖМЭИ.- 1995, №2.-С.113-115.

7. Блохина И.Н., Леванова Г.Ф., Бондаренко В.М., Лихачева А.Ю. Традиционная классификация и геносистематика бактерий рода Lactobacillus. //Журн. микробиол.- 1995.- №4.- С.19-23.

8. Богданов И.Г., Величков В.Т., Гуревич А.И., Далев П.Г., Колосов М.Н. Противоопухолевое действие гликопептидов клеточной стенки L.bulgaricus.// Бюлл. Эксп. Биол. Мед.-1977.-№ 84.- С. 709- 712.

9. Бондаренко В.И., Ференц А.И. и др. Вирулентность и антибиотикорезистентность эшерихий, выделенных от человека// Микробиол. журн.- 1990.-Т.52.- №3.- С.66-69.

10. Ю.Боровиков В.П., Боровиков И.П. STATISTICA Статистический анализ и обработка данных в среде Windows.- М.: Информационно-издательский дом «Филинъ», 1998.-608с.

11. Брилис В.И., Брилене Т.А., Ленцнер Х.П., Ленцнер А.А. Адгезивные и гемагглютинирующие свойства лактобацилл// ЖМЭИ.- 1982, №9.-С.75-78.

12. Брилис В.И., Брилене Т.А., Ленцнер Х.П., Ленцнер А.А. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов// Лаб. дело.- 1986.-№4.- С.210.-212.

13. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий.- М.: Медицина. 1999.-365с.

14. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я. Бактерионосительство (медико-экологический аспект).- Екатеринбург: УрО РАН, 1996.-207с.

15. Валышев А.В. Факторы персистенции энтеробактерий и влияние на них пробиотиков при дисбиозе кишечника: Автореф. . дисс. канд. мед. наук.- Оренбург, 1997.- 22 с.

16. Гаврилова Н.Н., Ратникова И.А., Росляков А.А., Сагинова С.К. Электронно- микроскопические исследования характера ингибирования сальмонелл лактобактериями.// Биотехнология.-1999.-№1.- С.48-54.

17. Горская Е.М. Механизмы развития микроэкологических нарушений в кишечнике и новые подходы к их коррекции. // Дис. докт. мед. наук. М., 1994.

18. Горская Е.М., Лихачёва А.Ю., Горелов А.В., Бондаренко В.М., Касумова С.А., Связывание лактобацилл с некоторыми растворимыми белками и лектинами.// ЖМЭИ.- 1994, №1.- С. 11-14.

19. Егоров Н.С., Баранова И.П.Бактериоцины. Образование, свойства, применение.//Антибиотики и химиотерапия.-1999.-№44.-С. 33-40.

20. Елагина Н.Н. : Автореф. . дисс. канд. мед. наук.- Оренбург, 2000.22 с.

21. Ефимов Б.А, Кафарская Л.И, Тарабрина Н.П. Микрофлора кишечника у населения различных стран. // Тез. докладов конф. "Дисбактериозы и эубиотики", М, 26-28 марта 1996.

22. Зайцева Л.Г, Горская Е.М., Ленцнер А.А, Шустрова Н.М. Усиление фагоцитарной активности клеток мононуклеарной фагоцитирующей системы при пероральном введении лактобацилл.// Антибиот. Мед. Биотехнолю-1986.- № 31.- С. 691- 694.

23. Карки Т.В, Ленцнер Х.П., Ленцнер А.А. Количественный состав лактофлоры и методика его определения.// ЖМЭИ.- 1994.- №2.- С. 1618.

24. Коршунов В.М, Поташник Л.В, Ефимов Б.А, Володин Н.Н., Коршунова О.В, Gyr К, Frei R., Reber Н., Иэрэндорж Д. Микрофлора кишечника у детей Монголии, России и Швейцарии.//ЖМЭИ.- 2001.-№2.- С.61-64.

25. Коршунов В.М., Поташник Л.В., Ефимов Б.А., Коршунова О.В., Смеянов В.В., Gyr К., Frei R. Качественный состав нормальнй микрофлоры кишечника у лиц различных возрастных групп.//ЖМЭИ.- 2001.- №2.- С.57-61.

26. Краткий определитель бактерий Берги.-М., 1980.

27. Лапчинская А.В., Шендеров Б.А.,Чахава О.В. Изменение микрофлоры толстой кишки крыс при оральном введении цефалексина и эритромицина. // Антибиотики и мед. Биотехнология.-1987.-№3.

28. Лапчинская А.В., Заславская П.Л., Шендеров Б.А., Навашин С.М. Влияние цефалексина на колонизационную резистентность толстой кишки экспериментальных животных. // Антибиотики и химиотерапия.- 1989.-№2.

29. Ленцнер А.А., Левков Л.А., Ленцнер Х.П., Бондаренко В.М. Реципрокное действие Klebsiella pneumoniae и Lactobacillus на их цитадгезию.//Антибиот.Химиотер.- 1989.- №34(6).- С.430-432.

30. Ленцнер А.А., Ленцнер Х.П., Микельсаар М.Е., Тюри М.Э., Брилене Т.А., Брилис В.И., Левков Л.А. Лактофлора и колонизационная резистентность. //Антибиотики.-1987.-№3.-С. 173-179.

31. Ленцнер А.А., Ленцнер Х.П., Микельсаар М.Е., Шилов В.М., Лизько И.Н. Исследование лактофлоры пищеварительного тракта у экипажей "Союз- 13" и "Салют- 4".// Косм. Биол. Авиакосм. Мед.- 1981.- № 15.-С. 39-43.

32. Ленцнер А.А., Тиури М.Е., Ленцнер Х.П., Микельсаар М.Е., Шилов

33. B.М. Исследование чувствительности к антибиотикам лактобацилл из пищеварительного тракта экипажей "Союз- 13" и "Салют- 4".// Косм. Биол. Авиакосм. Мед.- 1981.- № 15.- С. 36-39.

34. Ленцнер А.А., Ленцнер Х.П., Тоом М.А. О способности лактобацилл микрофлоры человека продуцировать лизоцим.// ЖМЭИ.- 1975.- №8.1. C.77-81.

35. Лизько Н.Н. Дисбактериозы экстремальных состояний. // Антибиотики и медицинская биотехнология.- 1987.- т.32, № 3.

36. Лихачёва А.Ю., Бондаренко В.М., Соколова К.Я. Современное состояние вопроса таксономии бактерий рода Lactobacillus.// Журн. микробиол.- 1992, №9-10.- С. 74-78.

37. Лихачёва А.Ю., Горская Е.М., Соколова К.Я. Адгезия лактобацилл к различным типам эпителиальных клеток слизистой оболочки кишечника.// Медицинские аспекты микробной экологии.- М., 1991.-С. 47-51.

38. Лихачёва А.Ю., Леванова Г.Ф., Бондаренко В.М., Блохина И.Н. Классификация и методы идентификации бифидобактерий и лактобацилл.// ЖМЭИ.- 1997, №5.- С.114-117.

39. Лихачёва А.Ю., Соколова К.Я., Леванова Г.Ф. Совершенствование видовой идентификации лактобацилл с использованием микрокультуральных тест- систем и данных о строении генома.// ЖМЭИ.- 1995, №5.- С. 45-48.

40. Микельсаар М.Э., Сийгур У.Х., Ленцнер А.А. Оценка количественного состава микрофлоры фекалий.//Лабораторное дело.-1990, №3.- С.62-66.

41. Окунь Я. Факторный анализ.- М., 1974.- 356с.

42. Поспелова В.В., Шабанская М.А., Морозова Л.В. Биологическая характеристика некоторых производственных и свежевыделенных штаммов лактобацилл.// Медицинские аспекты микробной экологии.-М., 1992.- С. 54-57.

43. Прокопьев А.А., Калинина Н.М., Андреев С.В., Ищенко A.M., Кетлинский С.А. Пептидогликан, выделенный из L.bulgaricus: влияние, опосредуемое через систему комплемента, на созревание пре- Т- клеток. // Бюлл. Эксп. Биол. Мед.-1987.-№ 104.- С. 492- 494.

44. Репродуктивное здоровье/ Под ред. Л.Г.Кейта, Г.С.Бергера, Д.А.Эдельмана: в 2-х т.: Пер с англ.- М.: Медицина, 1988.

45. Соколова К.Я., Совельева И.В., Попова И.В. и др // Аутофлора человека в норме и патологии и ее коррекция: Сб. науч. трудов / Под ред. И.Н. Блохиной. Горький, 1988. С. 144-148.

46. Тарабрина Н.П. Взаимодействие лактобацилл со слизистой оболочкой кишечника.// ЖМЭИ.- 1980.- №2.- С. 89-93.

47. Тюрин М.В. Влияние химиопрепаратов на видовой состав лактобацилл кишечника экспериментальных животных. // Медицинские аспекты микробной экологии.- М., 1991.- С. 62-69.

48. Тюрин М.В., Шендеров Б.А. Фаги и плазмиды лактобацилл.// Антибиотики и химиотерапия.- Т. XXXIII.,№ 6.- С.463- 468.

49. Фельдман Ю.М., Маханева Л.Г., Шапиро А.В., Кузьменко В.Д. Количественное определение бактерий в клинических материалах// Лаб. дело.- 1984.- №10.- С.616-619.

50. Филиппов В.А. Роль бактериоциногении в регуляции динамики полости рта//Антибиотики.- 1981.-№1.-С. 33-37.

51. Филиппов В.А., Рубаненко О.Б. Бактериоциногения Lactobacillus acidophilus//MHKpo6mwi. Ж.- 1975.-№1.-С.55-57.

52. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том I: Микрофлора человека и животных и её функции.- М.: Грантъ, 1998.- 288 стр.

53. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том И- Социально-экологические и клинические последствия дисбаланса микробной экологии человека и животных.- М.: Грантъ, 1998.- 416 стр.

54. Шлегель Г. Общая микробиология /Пер. с нем.- М.: Мир, 1987.560 с.

55. Aasen IM, Moretro Т, Katla Т, Axelsson L, Storro I. Influence of complex nutrients, temperature and pH on bacteriocin production by Lactobacillus sakei CCUG 42687.// Appl. Microbiol. Biotechnol.-2000.-№53(2).- P. 159-166.

56. Adachi S. Lactic acid bacteria and the control of tumours.// In The Lactic acid bacteria. Vol.1: The Lactic acid bacteria in health and desease. B.J.B. Woods (ed.).P. 233-261.Elsevier Science Publishers, London.

57. Adlerberth I., Ahrne S., Johansson M.L., Molin G., Hanson L.A., Wold A.E. A mannose- specific adherence mechanism in Lactobacillus plantarum conferring binding to the human colonic cell line HT- 29.// Environ. Microbiol.- 1996.-№ 62.-P. 2244-2251.

58. Agnew K.J., Hillier S.L. The effect of treatment regimens for vaginitis and cervicitis on vaginal colonization by lactobacilli.// Sex Transm. Dis.- 1995.-№ 22.- P.269-273.

59. Anderson J.W., Gilliland S. E. Effect of fermented milk (yogurt) containing Lactobacillus acidophilus LI on serum cholesterol in hypercholesterolemic humans.//J.Am.Coll.Nutr.-1999.-№ 18( 1 )P. 43-50.

60. Antonio M.A., Hawes S.E., Hillier S.L. The identification of vaginal Lactobacillus species and the demographic and microbiologic characteristics of women colonized by these species.// J. Infect. Dis.-1999.-№180.-P. 1950-1956.

61. Arihara K., Ota H., Itoh M., Kondo Y., Sameshima Т., Yamanaka H., Akimoto M., Kanai S., Miki T. Lactobacillus acidophilus group lactic acid bacteria applied to meat fermentation.// Journal of food science.-1998.-Vol.63,№3.-P.544-547.

62. Bagg J., Kinane D.F. Report of the Fourth European Oral Microbiology Workshop.// Microbial ecology in health and disease.-1994.-№10.-P. 119-124.

63. Bartlett J.G., Moon N.E., Goldstein P.R. Cervical and vaginal bacterial flora: ecologic niches in the lower female genital tract. // Amer. J. Obstet. Gynecol.- 1978.- № 130.- P.658-661.

64. Bartlett J.G., Onderdonk A.B., Drude E., Goldstein C. Anderka M., Alpert S., McCormack W.M. Quantitative bacteriology of the vaginal flora.//J. Infect. Dis.- 1977.-№ 136(2).- P.271-277.

65. Bartlett J.G., Polk B.F. Bacterial flora of the vagina: quantitative study.// Rev. Infect .Dis.-1984.- №6 (Suppl.).-S67-72.

66. Basson N.J., van Wyk C.W. The establishment of a community of oral bacteria that controls the growth of Candida albicans in a chemostat.// Oral Microbiol. Immunol.-1996.-№11.-P.199-202.

67. Basta M., Budak A., Bulanda M., Hecrko P.B. In vitro interactions ofvaginal isolates of lactobacilli with other members of vaginal flora. :th

68. Abstr. 11 Int. Congr. Microbial. Ecol. Health and Disease, Rome, 18-21 Sept. , 1994. // Microbial. Ecol. Health and Disease.- 1995.- Vol. 8, № 1.-P. XXXI.

69. Bernet M.F., Brassart D., Neeser J.R., Servin A.L. Adhesion of human lactobacilli to cultured human intestinal epithelial cells and inhibition of enteropathogen- cell interactions.// Appl. Environ. Microbiol.- 1993.-№ 59.-P. 4121-4128.

70. Bhatia S.J., Kochar N., Abraham P., Nair N.G., Mehta A.P. Lactobacillus acidophilus inhibits growth of Campylobacter pylori in vitro.//J Clin Microbiol.- 1989.-№ 27.-P. 2328-2330.

71. Bogdanov I.G., Dalev P.G., Gurevich L.A., Kolosov M.N., Malkova V.P. Plemyannikova L.A., Sorokina I.B. Antitumor glycopeptides from Lactobacillus bulgaricus cell wall.// FEBS Lett.-1975.- № 57.- P.259-261.

72. Bogovic-Matijasic В., Rogelj I., Nes I.F., Holo H. Isolation and characterization of two bacteriocins of Lactobacillus acidophilus LF221.// Appl.Microbiol.Biotechnol.- 1998.- №49(5).- P.606-612.

73. Boris S., Suarez J.E., Vazquez F., Barbes C. Adherence of human vaginal lactobacilli to vaginal epithelial cells and interaction with uropathogens.//Infect. Immun.- 1998.-№66(5).-P. 1985-1989.

74. Botha S.J. Oral lactobacilli isolated from teenage orthodontic patients.// J. Dent .Assoc. S.Afr.-l993.-№48.-P. 177-181.

75. Botha S.J., Boy S.C., Botha F.S., Senekal R. Lactobacillus species associated with active caries lesions.// J. Dent .Assoc. S.Afr.-l998.-№53.-P.3-6.

76. Bradshaw D.J., Marsh P.D. Analysis of pH-driven disruption of oral microbial communities in vitro.// Caries. Res.- 1998.-№32(6).- P.456-462.

77. Brassart D., Neeser J-R., Michetti P., Servin A.L. The selection of dairy bacterial strains with probiotic properties based on their adhesion to human intestinal epithelial cells.// In: Proc. Lactic 94', 7-9 September 1994, Caen, France.- P. 201- 212.

78. Bunte C., Hertel C., Hammes W.P. Monitoring and survival of Lactobacillus paracasei LTH 2579 in food and the human intestinal tract.// System.Appl. Microbiol.-2000.-№23.-P.260-266.

79. Carolissen-Mackay V., Arendse G., Hastings J.W. Purification of bacteriocins of lactic acid bacteria: problems and pointers.// Int. J. Food .Microbiol.- 1997.-№34(1).-P. 1-16.

80. Chauviere G., Cocconier M.-H., Kerneis S., Fourniat S., Servin A.L. Adhesion of Lactobacillus acidophilus strain LB to human enterocyte-like Caco- 2 cells.// J. Gen. Microbiol.- 1992.- № 138.- P. 1689- 1696.

81. Colloca M.E., Ahumada M.C.,. Lopez M.E.,Nader-Macias M.E. Surface properties of lactobacilli isolated from healthy subjects.//Oral. Dis., 2000.-№ 6(4).-P.227-233

82. Corzo G., Gilliland S.E. Measurement of bile salt hydrolase activity from Lactobacillus acidophilus based on disappearance of conjugated bile salts.//J. Daiiy. Sci .-1999.-№82(3) .-P.466-471.

83. Corzo G., Gilliland S.E. Bile salt hydrolase activity of three strains of Lactobacillus acidophilus.//!. Dairy. Sci .-1999.-№82(3) .-P.472-480.

84. De Boever P., Wouters R., Verschaeve L., Berckmans P., Schoeters G., Verstraete W. Protective effect of the bile salt hydrolase-active Lactobacillus reuteri against bile salt cytotoxicity.// Appl. Microbiol Biotechnol.- 2000 .-№ 53 (6) .-P.709-714.

85. De Man J.C., Rogosa M.,Sharpe M.E. A medium for the cultivation of lactobacilli.//J.Appl. Bacteriol.-1960.-№ 23.-P.130-135.

86. De Simone C.,Famularo G.,Harp J.A. Effect of lactobacilli on Cryptosporidium parvum infection in man animals.// Microecol. Therapy.- 1995.- Vol.25.- P.654-658.

87. De Smet I., De Boever P., Verstraete W. Cholesterol lowering in pigs through enhanced bacterial bile salt hydrolase activity.// Br. J Nutr .1998.- №79(2).- P.185-194.

88. Dembele Т., Obdrzalek V., Votava M. Inhibition of bacterial pathogens by lactobacilli// Zentralbl. Bakteriol.-1998.- №288(3).- P.395-401.

89. Dembele Т., Votava M., Obdrzalek V. Antibacterial activity of lactobacilli.// Epidemiol. Mikrobiol. Imunol.- 1998.- №47(2).- P.43-46.

90. Diep D.B., Axelsson L., Grefsli C., Nes I.F. The synthesis of the bacteriocin sakacin A is a temperature-sensitive process regulated by a pheromone peptide through a three-component regulatory system. //Microbiology.- 2000.-№146 (9).- P.2155-2160.

91. Drago L, Gismondo MR, Lombardi A, de Haen C, Gozzini L. Inhibition of in vitro growth of enteropathogens by new Lactobacillus isolates of human intestinal origin.//FEMS Microbiol. Lett.- 1997.-№15.- P.455-463.

92. Famularo G., Moretti S., Marcellini S., De Simone C. Stimulation of immunity by probiotics.// In R. Fuller, Probiotics.2. Applications and practical aspects (pp. 133- 161). London: Chapman & Hall.

93. Featherstone J.D. The science and practice of caries prevention.// J. Am.Dent. Assoc.- 2000.- №131(7).-P.887-899.

94. Feresu S.B., Jones D. Taxonomic studies on Brochothrix, Erysipelothrix, Listeria and atypical lactobacilli.// J. Gen. Microbiol.-1988.-№134 ( 5).- P.l 165-1183.

95. Finegold S.P., Mathisen C.E., George W.L. // In: Human intestinal microflora in health and disease (ed. D.S. Hentges), Acad. Press. NY, 1983.

96. Fitzsimmons N., Berry D.R. Inhibition of Candida albicans by Lactobacillus acidophilus: evidence for the involvement of a peroxidase system.// Microbios.- 1994.- №80(323).- P. 125-133.

97. Fuller R Probiotics in man and animals.// J. Appl. Bacteriol.- 1989.-№ 66.-P. 365- 378.

98. Gancheva A, Pot B, Vanhonacker K, Hoste B, Kersters K. A polyphasic approach towards the identification of strains belonging to Lactobacillus acidophilus and related species.// System.Appl. Microbiol., 1999.-№22.-P.573-585.

99. Gilliland S.E. Acidophilus milk products: a review of potential benefits to consumer.// J. Dairy. Sci.- 1989.-№ 72.- P. 2483- 2494.

100. Gilliland S.E., Nelson C.R., Maxwell C. Assimilation of cholesterol by Lactobacillus acidophilus.// Appl. Environ. Microbiol-1985.- № 49.-P. 377-381.

101. Gilliland S.E., Walker D.K. Factors to consider when selecting a culture of Lactobacillus acidophilus as a diary adjunct to produce hypocholesterolemic effect in humans.// J. Dairy Sci.-1990.-№ 73.-P. 905-911.

102. Grahn E., Tenovuo J., Lehtonen O.P., Eerola E., Vilja P. Antimicrobial systems of human whole saliva in relation to dental caries, cariogenic bacteria, and gingival inflammation in young adults.// Acta Odontol. Scand.- 1988 .-№46(2).-P.67-74

103. Green J.R., Klaenhammer T.R. Factors involved in adherence of lactobacilli to human Caco-2 cells.// Appl. Environ. Microbiol.-1994.- № 60.- P. 4487- 4494.

104. Grill J.P., Cayuela C., Antoine J.M., Schneider F. Effects of lactobacillus amylovorus and bifidobacterium breve on cholesterol.// Lett .Appl. Microbiol.- 2000.- №31(2).- P. 154-156.

105. Grunewald K.K Serum cholesterol levels in rats fed skim milk fermented by Lactobacillus acidophilus .// J. Food .Sci.-1982.-№ 47.-P. 2078-2079.

106. Gustafsson B.E. The physiological importance of the colonic microflora.//Scand. J. Gastroenterol. Suppl.- 1982.- № 77.- P.l 17-131.

107. Hammann R. Newly recovered and delineated microbial species of the human genital tract.// Infection.- 1989.- №17(3).- P. 188-193.

108. Hastings JW, Holzapfel WH. Conventional taxonomy of lactobacilli surviving radurization of meat. //J. Appl. Bacteriol.- 1987.- №62(3).-P.209-216.

109. Havenaar R., ten Brink В., Huis In't Veld J.H.H. Selection of strains for probiotic use.// In: Fuller R. Probiotics. The scientific basis. London, Chapman^ Hall.-P. 209- 224.

110. Hessle C., Hanson L.A., Wold A.E. Lactobacillus from human gastrointestinal mucosa are strong stimulators of IL-12 production.//Clin.Exp.Immunol.-l 999.-№ 116.-P.276-282.

111. Hillier S.L. The role of naturally occurring and exogenously supplied lactobacilli in human vagina.// Microbial ecology in health and disease.-1998.-№ 10.-P. 158-204.

112. Hillier S.L., Krohn M.A., Klebanoff S.J., Eschenbach D.A. The relationship of hydrogen peroxide- producing lactobacilli to bacterial vaginosis and genital microflora in pregnant women // Obstet. Gynecol.-1992.-Vol.79.-№3.-P.369-373.

113. Hillier SL, Krohn MA, Rabe LK, Klebanoff SJ, Eschenbach DA. The normal vaginal flora, H202-producing lactobacilli, and bacterial vaginosis in pregnant women.// Clin. Infect. Dis.- 1993 .-№16 (Suppl.4) P. S273-281.

114. Hosono A., Kashina Т., Kada T. Antimutagenic properties of lactic acid-cultured milk on chemical and fecal mutagens.// J.Dairy. Sci.-1986.-№ 69.- P. 2237- 2242.

115. Jin L.Z.; Ho Y.W., Abdullah N., Ali M.A., Jalaludin S. Antagonistic effects of intestinal Lactobacillus isolates on pathogens of chicken.// Lett. Appl. Microbiol.- 1996.-№ 23.-P.67-71.

116. Jin L.Z., Ho Y.W., Abdullah N., Jalaludin S. Growth performance, intestinal microbial populations, and serum cholesterol of broilers fed diets containing Lactobacillus cultures.// Poult. Sci.-1998.- №77(9).-P.1259-1265.

117. Johnson J.L., Phelps C.F., Cummins C.S., London J., Gasser F. Taxonomy of the Lactobacillus acidophilus group.// Int. J. Syst. Bacterid., 1980.-№ 30.-P.53-68.

118. Kaila M., Isolauri E., Soppi E., Virtanen E., Laine S., Arvilommi H. Enhancement of the circulating antibody secreting ell response in human diarrhea by a human strain.// Pediatr. Res.-1992.-№ 32.-P. 141-144.

119. Randier O., Weiss N.// Bergey's Manual of Systematic Bacteriology.-Baltimor, 1986.- Vol.8.-P. 1208-1234.

120. Kapczynski D.R., Meinersmann R.J., Lee M.D. Adherence of Lactobacillus to intestinal 407 cells in culture correlates with fibronectin binding. //Curr. Microbiol. 2000.-№41.-P.l36-141.

121. Karvonen A.V., Vesikari Т., Casas I.A. Lactobacillus and Lactobacillus reuteri: mother- child vinculum in birth and during early age of infants. //Microbial ecology in health and disease.-1998.-№10.-P.158-204.

122. Kirjavainen P.V., Ouwehand A.C., Isolaury E., Salminen S.The ability of probiotic bacteria to bind to human intestinal mucus.// FEMS Microbiol. Lett.- 1998.-№ 167.-P. 185- 189.

123. Kitazawa H., Matsumura K., Itoh Т., Yamaguchi T. Interferon Induction in murine peritoneal macrophage by stimulation with Lactobacillus acidophilus.//Microbiol. Immunol.- 1992.-Vol.36, №3.- P. 311-315.

124. Klaver F.A., van der Meer R. The assumed assimilation of cholesterol by Lactobacilli and Bifidobacterium bifidum is due to their bile salt-deconjugating activity.// Appl. Environ. Microbiol.- 1993.-№59(4).-P.l 120-1124.

125. Klebanoff S.J., Hillier S.L., Eschenbach D.A., Waltersdorph A.M. Control of the microbial flora of the vagina by H202-generating lactobacilli.// J. Infect .Dis.-1991.- № 164( 1).- P.94-100.

126. Klein U., Kanellis M.J.,Drake D. Effects of four anticaries agents on lesion depth progression in an in vitro caries model.// Pediatr.Dent.-1999.-JV°21 (3).-P. 176-80.

127. Knox K.W., Hewett M.J., Wicken A.J. Studies on the group F antigen of lactobacilli: antigenicity and serological specificity of teichoic acid preparations.//J. Gen .Microbiol.- 1970.- №60(3).-P.303-313.

128. Koga Т., Mizobe Т., Takumi K. Antibacterial activity of Lactobacillus species against Vibrio species.// Microbiol. Res.- 1998.-№153.-P.271-275.

129. Kunz J. Causes and consequences of an unbalanced vaginal ecosystem.// Schweiz. Rundsch. Med. Prax.- 1995.- № 84(48).-P.1405-1415.

130. Kurowski K., Ghosh R., Singh S.K., Beaman K.D. Clarithromycin-induced alterations in vaginal flora.// Am. J. Ther.-2000.- №7.- P.291-295.

131. Kwon S., Lee P.C., Lee E.G., Keun Chang Y., Chang N. Production of lactic acid by Lactobacillus rhamnosus with vitamin-supplemented soybean hydrolysate.// Enzyme Microb. Technol.- 2000.-№ l-P.209-215.

132. Lee Y.K., Salminen S. The coming age of probiotics.// Trends Food Sci. Technol.- 1995.- № 6.- P. 241-245.

133. Lencner A, Lencner H, Brilis V, Brilene T, Mikelsaar M, Turi M. The defense function of the digestive tract lactoflora.// Nahrung 1987.-№ 31(5-6):405-l 1

134. Levison M.E., Corman L.C., Carrington E.R., Kaye D. Quantitative microflora of the vagina.// Am. J. Obstet. Gynecol.- 1977,- №127(1).-P.80-85.

135. Lick S., Brockmann E., Heller K.J. Identification of Lactobacillus delbrueckii and subspecies by hybridization probes and PCR.// System.Appl. Microbiol.-2000.-№23 .-P.251-259.

136. Lidbeck A., Nord C.E. Lactobacilli and the normal human anaerobic microflora.//Clin. Infect. Dis.-1993.- №16 (4).- P.: SI81-187.

137. Link- Amster H., Rochat F., Saudan K.Y., Mignot O., Aeschlimann J.M. Modulation of a specific humoral immunoresponse and changes in intestinal flora mediated through fermented milk intake.// FEMS Immunol. Med.Microbiol.-1994.-№ 10.- P.55-64.

138. Linke H.A., Doyle G.A. Effect of saccharin on growth and acid production of glucose-grown pathogenic and oral bacteria.// Microbios.-1985 .-№42( 169-170).-P. 163-73.

139. Llena-Puy M.C., Montanana-Llorens C., Forner-Navarro L. Cariogenic oral flora and its relation to dental caries.// ASDC J. Dent. Child.- 2000.-№67(1).- P.42-46.

140. London J. The ecology and taxonomic status of the lactobacilli.// Annu. Rev. Microbiol.- 1976.- №30.- P.279-301.

141. Madara J.L. The chameleon within: improving antigen delivery .//Science.-1997.-№ 277.- P. 910-911.

142. Madinier I. Oral bacterial flora and its pathogenic potential.// J. Biol. Buccale.- 1991.-№19(1).- P.3-15.

143. Malin M., Suomalainen H., Isolaury E. A human lactobacillus strain enhances gut immune response in Crohn's disease.// Microbial ecology in health and disease.-1994.-№7.-P.35-55.

144. Matsuzaki Т., Yamazaki R., Hashimoto S. The effect of oral feeding of Lactobacillus casei strain Shirota on immunoglobulin E production in mice.// J. Dairy. Sci.-1998.-№ 81.-P. 48- 53.

145. McGrady J.A., Butcher W.G., Beighton D., Svvitalski L.M. Specific and charge interactions mediate collagen recognition by oral lactobacilli.// J.Dent.Res.-1995 .-№74(2).-P.649-657.

146. McKee A.S., McDermid A.S., Ellwood D.C., Marsh P.D. The establishment of reproducible, complex communities of oral bacteria in the chemostat using defined inocula. // J.Appl. Bacteriol., 1985.-№ 59.-P.263-274.

147. McLean N.W., McGroarty J.A. Growth inhibition of metronidazole-susceptible and metronidazole-resistant strains of Gardnerella vaginalis by Lactobacilli in vitro. // Appl. Environ. Microbiol.- 1996.- №62.-P. 1089-1092.

148. Mehta A., Talwalkar J., Shetty C.V., Motashaw N.D. Microbial flora of the vagina.//Microbial ecology in health and disease.-1994.-№ 7.-P.35-55.

149. Melis G.B., Ibba M.T., Steri В., Kotsonis P., Matta V., Paoletti A.M. Role of pH as a regulator of vaginal physiological environment.// Minerva Ginecol.- 2000.-№52.- P. 111 -121.

150. Metchnikoff, E. 1907. The prolongation of life: Optimistic studies. G.P. Putnam's Sons.

151. Michalek S.M., Hirasawa M, Kiyono H., Ochiai K, McGhee J.R. Oral ecology and virulence of Lactobacillus casei and Streptococcus mutans in gnotobiotic rats.// Infect .Immun.-1981 .-№;33(3).-P.690-696.

152. Mikelsaar M., Turi M., Lencner H., Kolts K., Kirch R., Lencner A. Interrelations between mucosal and luminal microflora of gastrointestine.//Nahrung.- 1987.-№31(5-6).-P.449-456, 637-638.

153. Mikelsaar M., Tury M., Naaber P., Mandar R., Sepp E., Kullisaar Т., Zilmer M., Tussens R., Bjorksten B. Intestinal lactoflora species in children.// Microbial ecology in health and disease.-1998.-№10.-P. 158204.

154. Mitsuoka Т., Hayakawa K., Kimura N. The fecal flora of man. III. Communication: The composition of Lactobacillus flora of different age groups.// Zentralbl. Bakteriol.- 1975.-№232(4).- P.499-511.

155. Mitsuoka Т., Ono K. Fecal flora of man. V. communication: The fluctuation of the fecal flora of the healthy adult.// Zentralbl. Bakteriol.-1977.-№238(2).- P.228-236.

156. Moretro Т., Aasen I.M., Storro I., Axelsson L. Production of sakacin P by Lactobacillus sakei in a completely defined medium.// J. Appl. Microbiol.- 2000.-№88(3).- P.536-545.

157. Morishita Т., Fukada Т., Shirota M., Yura T. Genetic basis of nutritional requirements in Lactobacillus casei.// J. Bacterid.- 1974.- №120(3).-P.1078-1084.

158. Morotomi M., Mutai M.In vitro binding of potent mutagenic pyrolyzates to intestinal bacteria.//J .Natl. Cancer Inst.-1986.-№ 77.-P. 195-201.

159. Nair C.P., Noronha J.M. An indirect role of vitamin B12 in regulation of thymidylate synthase in Lactobacillus leichmannii.// Indian. J. Exp. Biol. -1991.-Vol.l9,№12.-P.l 112-1115.

160. Narhi Т.О., Tenovuo J., Ainamo A., Vilja P. Antimicrobial factors, sialic acid, and protein concentration in whole saliva of the elderly.// Scand. J. Dent. Res.- 1994.-№ 102(2).- P.120-125.

161. Nishioka К., Miyamoto T.,Kataoka К., Nakae Т. Preliminary studies on antimutagenic activities of lactic acid bacteria.//Jpn J.Zootech.Sci.-1989.-№60.-P.491-494.

162. Ocana V.S., Pesce De Ruiz Holgado A.A., Nader-Macias M.E. Characterization of a bacteriocin-like substance produced by a vaginal Lactobacillus salivarius strain.// Appl. Environ. Microbiol.- 1999.-№65(12).-P. 5631-5635.

163. Ocana V.S., Pesce de Ruiz Holgado A.A., Nader-Macias M.E. Selection of vaginal H202-generating Lactobacillus species for probiotic use.// Curr. Microbiol.- 1999 .-№ 38.-P.:279-284.

164. Ouwehand A.C., Tolkko S., Kulmala J., Salminen S., Salminen E. Adhesion of inactivated probiotic strains to intestinal mucus.// Lett. Appl. Microbiol .-2000.- №31.-P. 82-86.

165. Pahlson C., Larsson P.G. The ecologically wrong vaginal lactobacilli.// Med. Hypotheses.-1991.-Vol.36.- P.126-130.

166. Parente E, Ricciardi A Production, recovery and purification of bacteriocins from lactic acid bacteria.// Appl.Microbiol. Biotechnol.-1999 .-№ 52(5).-P.628-638.

167. Perdigon G., de Macias M.E., Alvares S. Systematic augmentation of the immune response in mice by feeding fermentation milks with Lactobacillus casei and Lactobacillus acidophilus.// Immunology.-1988.-Vol.63.-№1.-P. 17- 23.

168. Pybus V., Onderdonk A.B. Microbial interactions in the vaginal ecosystem, with emphasis on the pathogenesis of bacterial vaginosis. // Microbes Infect. 1999. - №1 (4).-P.285-292.

169. Radford J.R., Ballantyne H.M., Nugent Z., Beighton D., Robertson M., Longbottom C., Pitts N.B. Caries-associated micro-organisms in infants from different socio-economic backgrounds in Scotland. // J. Dent. -2000. -№28(5).- P.307-312.

170. Redondo-Lopez V., Cook R.L., Sobel J.D. Emerging role of lactobacilli in the control and maintenance of the vaginal bacterial microflora. // Rev. Infect. Dis.- 1990. №12 (5). - P.856-872.

171. Reid G., Bruce A.W., McGroarty J.A., Cheng K.J., Costerton J.W. Is there a role for lactobacilli in prevention of urogenital and intestinal infections? // Clin. Microbiol. Rev.- 1990. №3 (4). - P.335-344.

172. Reid G., McGroarty J.A., Tomeczek L.,Bruce A.Vv. Identification and plasmid profiles of Lactobacillus species from the vagina of 100 healthy women.// FEMS Immunol. Med.Microbiol.-1996.-№15(l).- P.23-26.

173. Rosebury, T. Microorganisms Indigenous to Man.- McGraw-Hill.- New York, 1962.

174. Rosenstein I.J., Morgan D.J., Sheehan M., Lamont R.F., Taylor-Robinson. Bacterial vaginosis in pregnancy: distribution of bacterial species in different gram- stain categories of the vaginal flora.// J. Med. Microbiol.-1996.- №45(2).-P. 120-126.

175. Pfau A., Sacks T. The bacterial flora of the vaginal vestibule, urethra and vagina in the normal premenopausal woman. //J. Urol.- 1977 .-№118(2).-P.292-295.

176. Piard, J.C., Desmazeaud, M. 1992. Inhibiting factors produced by lactic acid bacteria. 2. Bacteriocin and other antibacterial substances. Lait, 72.- P. 113-142.

177. Rinkinen M., Matto J., Salminen S., Westermarck E., Ouwehand A.C. In vitro adhesion of lactic acid bacteria to canine small intestinal mucus.// J. Anim. Physiol, a. Anim. Nutr.-2000.- № 84.- P.43-47.

178. Roberfroid M.B. Prebiotics and probiotics: are they functional foods?// Am. J. Clin. Nutr.- 2000.-№ 71 (suppl.).- P. 1682S-1687S.

179. Roussel Y., Colmin C., Simonet J.M., Decaris B. Strain characterization, genome size and plazmid content in Lactobacillus acidophilus group (Hansen and Mosquot).// J. Appl. Bacterid.- 1993.-№ 74.- P.549-556.

180. Roy D.,Ward P.,Vincent D., Mondou F. Molecular Identification of Potentially Probiotic Lactobacilli.// Curr .Microbiol.-2000.-№40.-P.40-46.

181. Salminen S., Deighton M. Lactic acid bacteria in the gut in normal and disordered state.// Dig. Dis.- 1992.-№ 10.- P. 227-238.

182. Sanders M.E. Effect of consumption of lactic cultures on human health.// Advances in food nutrition research. J.E. Kinsella (ed.).-P.67-130.

183. Sandine W.E. Role of Lactobacillus in the intestinal tract.// J. Food. Prot.- 1979.- № 42.- P. 259-262.

184. Schiffrin E.J., Rochat F., Link- Amster H., Aeschlimann J.M., Donnet-Hughes A. Immunomodulation of human blood cell following the ingestion of lactic acid bacteria.// Journal of dairy science.-1994.- № 78.-P.491-497.

185. Seow W.K., Whitman L.M., Bird P.S., Thong Y.H. Modulation of human neutrophil adherence by oral bacteria.// Aust. Dent J.- 1992.- № 37(2).- P.121-125.

186. Sghir A., Gramet G., Suau A., Rochet V., Pochart P., Dore J. Quantification of bacterial groups within human fecal flora by oligonucleotide probe hybridization.// Appl.Environ. Microbiol.- 2000.-№66(5).- P.2263-2266.

187. Shane В., Stokstad E.L. Rate-limiting steps in folate metabolism by Lactobacillus casei.// J. Gen. Microbiol.- 1977.- Vol.103,№2.-P.261-270.

188. Sharpe M.E., Brock J.H., Knox K.W., Wicken A.J. Glycerol teichoic acid as a common antigenic factor in lactobacilli and some other gram-positive organisms.// J. Gen. Microbiol.- 1973.-№74(1).- P.l 19-126.

189. Shu M., Wong L., Miller J.H., Sissons C.H. Development of multi-species consortia biofilms of oral bacteria as an enamel and root caries model system.// Arch. Oral .Biol .-2000.-№45(l).-P.27-40.

190. Silva Mendez L.S., Allaker R.P., Hardie J.M., Benjamin N. Antimicrobial effect of acidified nitrite on cariogenic bacteria.// Oral Microbiol. Immunol.- 1999.-№14(6).-P.391-392.

191. Simon G.L., Gorbach S.L. The human intestinal microflora.// Dig. Dis. Sci.- 1986.-№31(9 Suppl.).-P. 147S-162S.

192. Snell E E. Nutrition research with lactic acid bacteria: a retrospective view.// Annu. Rev. Nutr.- 1989.-№9.-P.l-19.

193. Sobel JD. Bacterial vaginosis. // Br. J. Clin. Pract. Suppl.- 1990.-№71.-P. 65-69.

194. Sookkhee S., Chulasiri M., Prachyabrued W. Lactic acid bacteria from healthy oral cavity of Thai volunteers: inhibition of oral pathogens.// J. Appl. Microbiol.- 2001.-№90(2).-P.172-179.

195. Spanhaak S., Havenaar R., Schaafsma G. The effect of consumptiom of milk fermented by Lactobacillus casei strain Shirota on the intestinal microflora and immune parameters in humans.// Eur.J.Clin. Nutr.- 1998.-№ 52.- P. 899-907.

196. Spitzbart H. Vaginal wall glycogen and the formation of lactic acid.// Z. Geburtshilfe Perinatol.- 1966.- №165(3).- P.297-300.

197. Stjernquist-Desatnik A., Warfving H., Johansson M.L. Persistence of Lactobacillus plantarum DSM 9843 on human tonsillar surface after oral administration in fermented oatmeal gruel. A pilot study.// Acta Otolaryngol. Suppl.- 2000.-№ 543.-P.215-219.

198. Strober W., Kelsall В., Marth T. Oral tolerance.// Journal of clinical immunology.-1998.-№ 18.- P. 1-30.

199. Sutter V.L. Anaerobes as normal oral flora.// Rev. Infect. Dis.- 1984.-№6 (Suppl. 1).- P.S62-S66.

200. Taranto M.P., Medici M., Perdigon G., Ruiz Holgado A.P., Valdez G.F. Evidence for hypocholesterolemic effect of Lactobacillus reuteri in hypercholesterolemic mice.// J. Dairy Sci.- 1998 .-№ 81(9).-P.2336-2340.

201. Tuomola E.M., Ouwehand A.C., Salminen S.J. Chemical, physical and enzymatic pre- treatments of probiotic lactobacilli alter their adhesion to human intestinal mucus glycoproteins.// Int. J. Food Microbiol.- 2000.-№ 60.- P. 75-81.

202. Twetman S., Dahllof G., Wikner S. Lysozyme activity and L(+)-lactic acid production in saliva in schoolchildren with high Lactobacillus counts.// Scand. J. Dent. Res.- 1987.- №95(2).- P. 128-131.

203. Uchida K. Bile acid metabolism and intestinal bacteria.// J. Germfree Life gnotobiol.-1992.- Vol.22, №1.

204. Usman., Hosono A. Effect of administration of Lactobacillus gasseri on serum lipids and fecal steroids in hypercholesterolemic rats.// J. Dairy. Sci. 2000.-№83(8): 1705-1711.

205. Vanderbergh, P. A. 1993. Lactic acid bacteria, their metabolic products and interference with microbial growth.// FEMS Microbiol. Rev.-1993.- №12. P. 221-238.

206. Van Houte J. Role of micro-organisms in caries etiology. // J. Dent. Res.-1994.-№73(3).- P.672-681.

207. Wharton B.A., Balmer S.E., Scott P.H. Faecal flora in the newborn. Effect of lactoferrin and related nutrients.// Adv. Exp. Med. Biol.-1994,-№.357.-P.91-98.

208. Wicken A.J., Knox K.W. Studies on the group F antigen of lactobacilli: isolation of a teichoic acid-lipid complex from Lactobacillus fermenti NCTC 6991. // J. Gen. Microbiol.- 1970.- №60(3).- P.293-301.

209. Willcox M.D., Patrikakis M„ Harty D.W., Loo C.Y., Knox K.W. Coaggregation of oral lactobacilli with streptococci from the oral cavity.//Oral Microbiol. Immunol., 1993.-№8(5).-P.319-321.

210. Yamada M., Kitazawa H., Uemura J., Saito Т., Itoh T. Mitogenic activity of cell wall components from Lactobacillus acidophilus.// Anim. Sci. Technol.- 1993.-№ 64.- P.505-511.

211. Zhong W., Millsap K., Bialkowska-Hobrzanska H., Reid G. Differentiation of Lactobacillus Species by Molecular Typing.// Appl. Environ. Microbiol .-1998.-Vol.64,№ 1.-P.2418-2423.

212. Zhu W.M., Liu W., Wu D.Q. Isolation and characterization of a new bacteriocin from Lactobacillus gasseri KT7.// J.Appl.Microbiol.-2000.-№88(5).-P.877-886.