Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологические основы разработки средств для лечения и неспецифической профилактики псороптоза кроликов

ВАК РФ 03.02.11, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Биологические основы разработки средств для лечения и неспецифической профилактики псороптоза кроликов"

На правах рукописи

ОЛЕХНОВИЧ Евгений Иванович

БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ РАЗРАБОТКИ СРЕДСТВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ПСОРОПТОЗА КРОЛИКОВ

Специальность: 03.02.11 - паразитология

21 МАЯ 2015

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2015

005569264

005569264

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина», Федеральном бюджетном учреждении науки «Научно-исследовательском институте дезинфектоло-гни» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителя и благополучия человека

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор

Рославцева Светлана Александровна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

Удавлиев Дамир Исмаилович

ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств», профессор кафедры ветеринарно-санитарной экспертизы и биологической безопасности

доктор биологических наук Богданова Елена Николаевна,

ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России, профессор кафедры дезинфектологии

Ведущая организация: ГНУ Прикаспийский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт (ГНУ Прикасп ЗНИВИ Россельхозакадемии)

Защита состоится «24» июня 2015 г. в «14:30» часов на заседании диссертационного совета по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук Д 0006.011.01, созданного на базе ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений имени К.И. Скрябина»

Адрес: 117218, Москва, ул. Б. Черемушкинская, д. 28

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБНУ «ВНИИП им. К.И. Скрябина» и на сайте http://www.vniigis.ru

Автореферат разослан « » ОлСЛ*/ 2015 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук, / Бережко Вера Кузьминична

д.б.н., профессор

Актуальность проблемы.

В реализации программы продовольственной безопасности требуется обеспечение в доле не менее 85% внутреннего рынка собственной мясной продукцией. Это невозможно без развития отечественного Агропромышленного комплекса. Кролиководство - перспективная отрасль животноводства, продукция которой высоко цениться на отечественном рынке. Высокая рентабельность обусловлена физиологическими и биологическими особенностями животных. Для сохранения перспектив развития отрасли требуется здоровое и высокопродуктивное поголовье, однако паразитарные болезни наносят серьезный ущерб. Одним из экономически значимых инвазионных заболеваний является псороптоз, возбудителем которого является облигатный паразит - клещ Psoroptes cuniculi Delafond, 1859.

На отечественном рынке ветеринарных препаратов в настоящее время отсутствуют безопасные средства для лечения псороптоза кроликов, которые были бы просты в применении и действовали на все стадии развития паразита. Наряду с этим, рекомендуемые де-закаризационные мероприятия на кроликофермах для борьбы с псороптозом не носят комплексный характер.

Цель и задачи исследования. Разработать препарат для лечения псороптоза кроликов, действующий на все стадии развития возбудителя, и предложить системный подход для борьбы с переносчиками данного заболевания.

Задачи исследования:

1. Изучить рынок современных акарицидных средств и дать оценку активности наиболее перспективных групп действующих веществ.

2. Разработать рецептуру средства для лечения псороптоза кроликов, обосновать композиционный состав, определить терапевтическую эффективность наиболее оптимальной рецептуры in vitro и in vivo.

3. Показать возможность механического переноса возбудителя псороптоза кроликов синантропными тараканами и разработать инсектицидное средство для их уничтожения.

4. Предложить систему дезинсекционных мероприятий для защиты кроликов от псороптоза.

Область исследования

Работа выполнена в соответствии с п. 9 Паспорта специальности 03.02.11 - Паразитология (биологические науки).

Практическое значение

Разработано акарицидное средство «Псороптоцид» для лечения псороптоза кроликов и пакет документов, необходимых для его государственной регистрации.

3

Совместно с ООО НПО «Экобиовет» изучена и выпущена опытная партия инсектицидного средства «ВЭИС приманки от тараканов». Материалы исследований включены в комплект нормативно-технической документации и получено свидетельство госрегистрации № 1Ш.77.99.88.002.Е.007964.09.14 от 17.09.2014.

Предложена система дезинсекционных мероприятий, предотвращающих формирование резистентных к инсектоакарицидам популяций клещей Р. ситсиИ и их потенциальных переносчиков.

Наиболее существенные результаты, составляющие научную новизну и выносимые на защиту:

1. Диагностические показатели акарицидности пиретроидов и авермектинов для клещей ситсиИ.

2. Рецептура и результаты оценки терапевтической эффективности разработанного средства «Псороптоцид» для лечения псороптоза кроликов.

3. Показатели инсектицидности авермектина В|а гемисукцината и средства для уничтожения потенциальных переносчиков псороптоза кроликов на его основе.

4. Система дезинсекционных мероприятий для предотвращения развития резистентности к инсектоакарицидам в популяциях паразитов и их переносчиков.

Личный вклад аспиранта состоит в общей постановке задачи, выборе методов и направлении исследований, постановке экспериментов, обработке и интерпретации экспериментальных данных. Аспирантом выполнены все исследования в лабораторных и производственных условиях, изготовлены опытные образцы средств, подготовлены публикации по результатам исследования.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на VI Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням (Москва, 2014 г.), на международной конференции «Фундаментальные и прикладные аспекты изучения паразитических членистоногих в XXI веке» памяти чл.-корр. РАН Ю.С. Балашова (Санкт-Петербург, 2013), конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии», МГАВМиБ им, К.И. Скрябина (Москва, 2013), форуме «Агроферма 2014», Ключевые аспекты отечественного кролиководства (Москва, 2014).

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов исследования (глава 2), результатов собственных экспериментов и их обсуждения (3-7 главы), выводов и приложения. Работа иллюстрирована 31 таблицей, 21 ри-

сунком. Библиографический указатель включает 239 источников (45 отечественных и 194 иностранных авторов). Публикации

По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ в рецензируемых журналах из списка ВАК («Агрохимия», «Ветеринария», «Ветеринария и кормление», «Ветеринарная медицина», «Инфекционные болезни», «Пест-Менеджмент»).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Введение. Обоснована актуальность темы, поставлены цель и задачи исследования.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Приведены краткие сведения по биологии возбудителя, а также по эпизоотологии псороптоза кроликов. Представлены литературные данные по средствам химиотерапии псороптоза.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ В экспериментах использовали лабораторную культуру клеща Р. cuniculi, содержащуюся в инсектарии ФБУН НИИДезинфектологии Роспотребнадзора на основном хозяине - домашнем кролике Oryctolagus cuniculus L. породы «Советская шиншилла». Исходный материал для закладки культуры клещей получен с пораженного этими клещами животного, приобретенного у частного лица. Также в лабораторных экспериментах использовали комнатных мух Musca domestica L. чувствительной расы Соорег, самцов чувствительной инсектарной культуры рыжих тараканов Blattella germanica (L.), самцов и самок чувствительных инсектарных культур тараканов Penplaneta americana L., Blatta orientalis L., Shelfordella tartara Walker, самцов и самок природной популяции рыжих тараканов В. germanica.

Работа выполнена в период с 2011 по 2014 гг. в лаборатории научных основ дезинсекции, инсектарии и виварии ФБУН НИИДезинфектологии Роспотребнадзора, на кафедре товароведения и технологии сырья животного происхождения им С.А. Каспарьянца ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии» им. К.И. Скрябина, а также на частной кролиководческой ферме ООО «Кролин-фо» (Московская область, г. Ликино-Дулево).

В экспериментах использовали технические продукты и аналитические стандарты действующих веществ пиретроидов: цифлутрин (92,8%, Китай), флуметрин (92.0%, Китай), эсфенвалерат (100,0%, «Сумитомо Кемикал», Япония), перметрин (96,4%, «Сумито-мо Кемикал», Япония); технические продукты авермектинов и готовые препаративные формы на их основе: абамектин (92,4%, «Сингента», Швейцария), «РЭЙД МАКС приман-

5

ка от тараканов» (0,05% абамектина, S.C. Johnson, США), аверсектин С (20% ДВ, «Фарм-биомедсервис», Россия), авермектина Bia гемисукцинат (93,5%, ООО НПО «Экобиовет», Россия), ивермектин (97,6%, Китай); готовые препаративные формы на основе фенилпи-разолов: «Комбат приманка от тараканов» 0,03% фипронила, («Хенкель Хоум», Корея); технический продукт аналога ювенильного гормона: пирипроксйфен (95,0%, Китай); вещества растительного происхождения: натуральные эфирные масла чайного дерева, гвоздики, аниса (ООО НПФ «Медикомед», Россия) и касторовое масло (Ивановская фармацевтическая фабрика, Россия).

Также использовали экспериментальные образцы акарицидного средства «Псороп-тоцид» в виде ушных капель, изготовленные в лаборатории проблем дезинсекции НИИ-Дезинфектологии (смеси цифлутрина и пирипроксифена в различных соотношениях) и экспериментальные образцы инсектицидного средства «ВЭИС приманки от тараканов» в виде гранул, содержащие в качестве ДВ авермектина Bia гемисукцинат, изготовленные в ООО НПО «Экобиовет».

Согласно методике предложенной Б. Дж. Кюри с соавт. [Currie et al., 2004] готовили ацетоновые растворы в логарифмически снижающихся концентрациях и обрабатывали ими стандартные обеззоленные фильтры при норме расхода 1 мл/ дм2, которые помещали в чашки Петри с d-90 мм. На них подсаживали клещей. Все опыты ставили в 3 повторно-стях, в каждой по 15-30 особей. Чашки Петри с клещами инкубировали в термостате при постоянной температуре 28-30°С (средняя температура эпидермиса кролика) и относительной влажности воздуха 78%. При учете использовали следующие категории состояния клещей: активно двигающиеся, медленно двигающиеся, не двигающиеся/мертвые и потерянные. При полном прекращении двигательной активности констатировали смерть. Учет проводили через 30 мин, 60 мин, 120 мин и далее с интервалом в 1 ч в течение 21ч.

Изучение акарицидности перепаратов in vivo проводили на базе вивария НИИД на кроликах породы «Советская шиншилла». Всего в опытах использовали 23 животных, зараженных псороптозом. Животных из опытных групп обрабатывали экспериментальными растворами акарицидного средства, смазывая ушные раковины с помощью ватного тампона, исходя из нормы расхода 0,5 г средства на одно ухо. Животных контрольной группы обрабатывали изопропиловым спиртом. Осмотр кроликов проводили на 1-ые, 2-ые, 5-ые сутки, далее еженедельно в течение 1,5 месяцев.

Для определения контактного действия инсектицидов использовали метод топи-кального нанесения ацетоновых растворов ДВ на мух и тараканов. Определяли концентрации и дозы, вызывающие поражение 50% и 95% насекомых (СК50(95) и СД5о(95)), а также рассчитывали коэффициенты видовой чувствительности (Квид), представляющие собой

6

отношение величин СД50 (мкг/г) инсектицида для самцов рыжих тараканов к величине СДзо для комнатных мух. Погибших насекомых учитывали через 24 ч [Руководство Р 4.2.2643-10,2011].

Подсадку рыжих тараканов на стеклянные поверхности размером (10x10) см, на которые наносили ацетоновые растворы авермектинов, исходя из нормы расхода 1 мл/дм2, проводили после полного испарения растворителя. Принудительный контакт насекомых для определения инсектицидного действия отложений средства осуществляли в экспозиметрах диаметром 9 см. Продолжительность контакта насекомых с тест-поверхностями составляла 30 мин. Опыты проводили при постоянной температуре воздуха 23±2°С и относительной влажности 60-70%. После контакта насекомых переносили в чистые пластиковые стаканы объемом 200 мл. Учет гибели насекомых проводили через 24 часа после подсадки. Для определения кишечного действия инсектицидов на комнатных мух и рыжих тараканов использовали метод И.В. Ибрагимхалиловой и О.Ю. Ереминой [Ибрагим-халилова, Еремина, 2007]. Для расчёта величин СК50, (95) (смертельная концентрация (%) вещества, вызывающая смертность 50% (95%) насекомых), JIT50 (95) (смертельное время (мин/ч) воздействия вещества, в течение которого погибает 50% (95%) подопытных особей) и доверительных пределов к ним использовали «пробит-анализ» Блисса в модификации П.В. Попова [Попов, 1965]. Также рассчитывали показатели ДК (диагностическая концентрация (%) = СК95Х2), СД50 (95) (смертельная доза (мкг/г) вещества, вызывающая смертность 50% (95%) насекомых). Если смертность контрольных особей в эксперименте составляла 5-22%, использовали формулу Аббота для расчёта поправки на смертность в контрольном варианте [Руководство 4.2.2643-10, 2011]. Статистическую обработку токсикологических показателей осуществляли по методу Стьюдента-Фишера. Также с использованием анализа выживаемости Каплан-Майера [Kaplan, Meier, 1958] в программе STA-TISTICA 10 строили кривые выживаемости и определяли их медиану.

ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ АКАРИЦИДНОЙ АКТИВНОСТИ АВЕРМЕКТИНОВ. ПИРЕТРОИДОВ. АНАЛОГА ЮВЕНИЛЬНОГО ГОРМОНА И ВЕЩЕСТВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

Исследования инсектоакарицидной активности ДВ аверсектина С, абамектина, авермектина Bia гемисукцината, а также ивермектина представлены в табл. 1.

Таблица 1

Акарицидная активность авермектинов в отношении самок клещей P. cuniculi

ДВ Концентрация, Клещей в МКВ, ЛТ5о, лт95>

% опыте мин мин мин

1 2 3 4 5 6

Абамектин 0,100 210 30 35,00 (30,78-39,80) 150,00 (131,93-170,55

Продолжение таблицы 1

1

0,050

0,010

0,005

0,001

178

90

40,00 (34,33-46,60)

201

140

115,00 (100,61-131,45)

205

200

129,00 (113,06-147,19)

186

325

280,00 (242,42-323,40)

132,00 (113,31-153,78

183,00 (160,11-209,17)

173,00 (151,62-197,39)

456,00 (394,81-526,68)

Аверсектин С

0,100

0,050

0,010

0,005

0,001

210

30

10,00 (8,78-11,39)

174

160

100,00 (85,67-116,72)

151

160

143,00 (121,65-168,10)

132

240

202,50 (170,03-241,18)

203

940

640,00 (554,11-739,20)

19,00 (16,68-21,64)

170,00 (145,90-198,42

253,00 (215,23-297,40

318,00 (267,00-378,74

908,00 (786,15-1048,74

Авермектина В|а

гемисукцинат

0,100

0,050

0,010

0,005

0,001

210

180

138,00 (121,27-157,04)

179

180

170,00 (146,05-197,88)

209

180

190,00 (166,81-216,41)

154

300

330,00 (281,33-387,09)

141

480

481,00 (406,59-569,02)

232,00 (203,87-264,02

253,00 (217,17-294,49)

281,00 (246,71-320,06)

543,00 (462,92-636,94

588,00 (497,04-695,61)

Ивермектин

0,100

0,050

0,010

0,005

0,001

210

120

62,00 (54,58-70,43)

210

120

72,00 (63,33-81,86)

207

240

138,00 (120.84-157,60)

197

300

176,00 (152,91-202,58)

195

300

241,00 (209,02-277,87)

103,5 (91,11-117,58

120,00 (105,54-136,44

280,00 (245,18-319,76)

280,00 (243,27-322,28)

335,00 (290,55-386,26)

Примечание: в скобках указаны доверительные пределы при Р<0,05 Согласно полученным данным, в отношении имаго самок клещей Р. ситсиИ авер-мектины обладают выраженной акарицидной активностью. Если их расположить по показателям ЛТ95 в порядке уменьшения активности, то этот ряд выглядит следующим образом: аверсектин О абамектин> ивермектин> авермектина Вга гемисукцинат. При снижении концентрации происходит закономерное снижение акарицидной активности для всех авермектинов, кроме аверсектина С. Возможно, при снижении концентрации проис-

ходит критическое снижение самого активного компонента - авермектина В|а, сочетание которого с другими компонентами комплекса оказывало синергистический эффект.

Нами была исследована инсектоакарицидная активность ДВ перметрина, эсфенвалерата, цифлутрина, флуметрина (табл. 2).

Таблица 2

_Акарицидная активность пиретроидов в отношении самок клещей Р. ситсиИ

ДВ

Концентрация, %

Клещей в опыте

МКВ, мин

ЛТ50, мин

ЛТ95, мин

Перметрин

5,000

2,500

1,000

0,500

0,100

210

150

112,00 (100,58-127,23)

390,00 (343,31-443,01)

198

210

200,00 (174,67-229,00)

450,00 (393,01-515,25)

156

260

308,00 (260,36-364,36)

770,00 (650,89-910,91)

129

260

340,00 (275,75-419,22)

1320,00 (1070,56-1627,56

193

420

712,00 (606,99-835,18)

1630,00 (1389,60-1911,99)

Эсфенвалерат

0,500

0,100

0,050

0,025

0,010

203

320

302,00 (248,97-366,33)

504,00 (415,50-611,35)

201

450

520,00 (415,00-651,56)

1290,00 (1029,53-1616,37)

145

1440

890,00 (716,59-1105,38)

1750,00 (1409,02-2173,50

139

1440

1150,00 (916,33-1443,25)

1920,00 (1529,88-2409,60

190

1440

1320,00 (1106,45-1574,76)

2220,00 (1860,86-2648,46)

Цифлутрин

0,100

0,050

0,025

0,010

0,005

210

160

129,00 (113,46-146,67)

233,00 (204,93-264,92)

203

220

200,00 (174,37-229,40)

412,00 (359,20-472,56)

154

220

221,00 (182,49-267,63)

443,00 (365,81-536,47)

179

220

235,00 (196,65-280,83)

528,00 (441,84-630,96)

201

220

246,00 (213,54-283,39)

670,00 (581,60-771,84)

Флуметрин

0,100

0,050

0,025

0,010

0,005

199

220

180,00 (155.58-208.26)

430,00 (371,65-497,51)

200

280

228,00 (198,73-261,58)

159

280

306,00 (247,77-377,91)

533,00 (464,57-611,51)

717,00 (580,57-885,50)

152

280

308,00 (246,99-384,08)

606,00 (485,97-755,68)

147

1180

400,00 (319,23-501,20)

720,00 (574,62-902,16)

Пиретроиды оказывали менее выраженный акарицидный эффект на имаго самок клещей P. cuniculi. Если расположить изученные пиретроиды по показателям акарицидно-сти в порядке уменьшения активности, то этот ряд выглядит следующим образом: циф-лутрин> флуметрин> эсфенвалерат> перметрин. Прослеживается зависимость акари-цидности пиретроидов в зависимости от их химического строения. Так, пиретроиды, содержащие цианогруппу (CN-) и атомы фтора в своей химической структуре (цифлутрин и флуметрин), оказывали более выраженное акарицидное действие, чем пиретроиды, содержащие только цианогруппу (эсфенвалерат), или не содержащие ни того ни другого (перметрин).

Имеются данные литературы по активности веществ растительного происхождения в отношении чесоточных клещей (P. cuniculi и Sarcoptes scabiei L.). Нами были проведены исследования для изучения действия некоторых растительных масел в отношении клещей P. cuniculi (табл. 3).

Таблица 3

Акарицидная активность растительных масел в отношении самок _клещей Р. ситсиИ_

дв Концентрация, % Клещей в опыте, особей МКВ, мин лт50, мин ЛТ95, мин

Эфирное масло чайного дерева 5,000 197 30 26,00 (21,85-30,94) 43,00 (36,13-51,17)

2,500 201 240 125,00 (105,93-147,50) 408,00 (345,76-481,44

1,000 142 1200 1010,00 (821,14-1242,30) 1620,00 (1317,07-1992,60

Эфирное масло гвоздики 0,100 189 60 27,00 (22,31-32,67) 52,00 (42,98-62,92)

0,010 205 120 122,00 (106,09-140,30) 280,00 (243,48-322,00

0,001 201 1210 1130,00 (965,81-1322,10) 1702,00 (1454,70-1991,34

Эфирное масло аниса 1,000 197 30 29,00 (24,58-34,22) 48,00 (40,68-56,64)

0,100 128 1260 850,00 (648,86-1113,50) 1420,00 (1083,97-1860,20

0,010 156 1260 1410,00 (1110,24-1790,70) 2040,00 (1606,30-2590,80

Касторовое масло 100,000 121 1250 378,00 (254,14-449,54) 625,00 (469,93-831,25

50,000 118 1250 1280,00 (950,26-1724,16) 1730,00 (1284,34-2330,31

20,000 96 - >1700,00 >2500,00

Примечание: в скобках указаны доверительные пределы при Р<0,05

Исследуемые растительные масла обладают акарицидной активностью и могут использоваться в качестве дополнительных компонентов для создания комплексных препаратов с целью улучшения их характеристик.

В связи с отсутствием в доступной нам литературе сведений о действии пирипрок-сифена на клещей Р. ситсиИ, проведены исследования острой акарицидной активности пирипроксифена в отношении имаго самок клещей Р. ситсиI (табл. 4).

Таблица 4

Акарицидная активность пирипроксифена в отношении самок клещей Р.ситсиИ

Концентрация, % Клещей в опыте, особей МКВ, мин ЛТ50, мин ЛТ95, мин

6,00 135 440 401,00 (320,80-501,25) 1340,00 (1072,00-1808,00)

3,00 112 1200 483,00 (380,32-613,41) 1650,00 (1299,21-2095,50)

1,00 97 1200 845,00 (655,04-1090,05) 2150,00 (1670,00-2773,50)

0,50 85 - 1215,00 (923,53-1598,45) -

0,10 117 - 0,35*

0,05 102 - 0,15*

0,01 85 - 0*

К 40 - 0*

Примечание: в скобках указаны доверительные пределы при Р<0,05 * - доля отмерших клещей на 1200-й минуте экспозиции

В наших исследованиях показано наличие у пирипроксифена острой акарицидной активности только в высоких концентрациях (1,0-6,0%). В биологии клещей Р. ситсиИ явление копуляции играет важную роль, так как оно заканчивается травматическим оплодотворением. Для подтверждения целесообразности введения пирипроксифена в рецептуру были поставлены опыта на копулятивных парах клещей Р. ситсиИ (табл. 5).

Таблица 5

Акарицидная активность пирипроксифена в отношении копулятивных пар клещей

Р.ситсиИ

Концентрация, Копулятивных пар в Доля распавшихся Доля погибших пар на 24

% опыте, шт. пар, % час экспозиции,%

6,00 60 65,0 100,0

3,00 60 28,3 95,0

1,00 60 53,3 81,7

0,50 60 46,7 68,3

0,10 60 48,3 51,7

0,05 60 1,0 20,0

0,025 60 5,0 13,3

0,01 60 0 0

Контроль 40 0 0

Рис 1. Действие пирипроксифена на копулятивные пары клещей P. cuniculi: А - контроль, Б - опыт. В отношении копулятивных пар P. cuniculi пирипроксифен оказывает в острое

акарицидное действие и препятствует дальнейшему процессу оплодотворения. Копулятивные пары распадаются, возможно, из-за гибели хризалиды самки, которая не может осуществлять дальнейший процесс метаморфоза.

Известно, что пирипроксифен действует только в определенный период онтогенеза членистоногих. Таким образом, возможно, что разорванные копулятивные пары находились на той стадии развития, когда введение пирипроксифена в их организм и вызывало необратимые изменения.

ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА РЕЦЕПТУРЫ АКАРИЦИДНОГО СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПСОРОПТОЗА КРОЛИКОВ

Изучение акарицидного действия экспериментальных образцов средства «Псороптоцид» in vitro

Разрабатываемое средство получило название «Псороптоцид». Были определены показатели акарицидности in vitro для четырех композиций средства (табл. 6).

Таблица 6

Острое акарицидное действие опытных образцов экспериментального средства для

лечения псороптоза кроликов на имаго самок клещей Р. ситсиИ_

№ Рецептура, % ДВ Количество клещей, особей МКВ, мин ЛТ50, мин лт95, мин

1 цифлутрин - 0,05 пирипроксифен - 0,2 120 10 7,00 (5,69-8,61) 29,00 (23,58-35,67)

2 цифлутрин - 0,025 пирипроксифен - 0,1 117 10 9,00 (7,20-11,25) 26,00 (20,8-32,50)

3 цифлутрин - 0,01 пирипроксифен - 0,1 ИЗ 20 20,50 (16,27-25,83) 50,00 (39,68-63,00)

4 цифлутрин - 0,005 пирипроксифен - 0,1 123 30 25,00 (20,49-30,50) 45,00 (36,89-54,90)

Согласно полученным данным, все экспериментальные образцы средства «Псороп-тоцид» обладали высокой активностью в отношении клещей Р. cuniculi. Однако эффективность образцов под номерами 1 и 2 была выше образцов под номерами 3 и 4.

Изучение акарицидного действия экспериментальных образцов средства «Псороптоцид» itt vivo

Данные по изучению акарицидности in vivo экспериментальных образцов средства «Псороптоцид» схематично представлены в табл. 7.

Таблица 7

Эффективность применения экспериментальных образцов средства «Псороптоцид» при _псороптозе кроликов in vivo_

Сутки после обработки № образца Контроль

1 2 3 4

1 ----- ----+ +++

2 ----- ----+ ----+ +++

5 ----- ----- ----+ ---+ + +++

6 ----- ----- ----+ ---+ + +++

12 ----- ----- ----+ ---+ + +++

21 ----- ----- ----+ -- + + + +++

28 ----- ----- -- + + + -- + + + +++

32 ----- ----- - + + + + + + + + + +++

36 ----- ----- - + + + + + + + + + +++

40 ----- ----- - + + + + + + + + + +++

Примечание: каждый знак «+» или «-» соответствует одному животному — - паразиты в соскобах отсутствовали; + - паразиты в соскобах присутствовали Наиболее высокую эффективность в лечении псороптоза кроликов показали образ-

цы 1 и 2. Рецидивов болезни не наблюдали, тем самым средство оказывало действие не только на имагинальные и преимагинальные формы паразитов, но, возможно, и на их яйца. Животные хорошо переносили лечение, не было замечено снижения активности или каких-либо других негативных изменений в поведении. Животные контрольной группы на протяжении всего эксперимента сохраняли клинические признаки болезни без каких-либо существенных изменений. Испытания образца № 2 средства «Псороптоцид» проведены в кролиководческом хозяйстве «Кролинфо» г. Ликино-Дулево Московской области. Полученные результаты подтверждают высокую терапевтическую эффективность разработанного средства при однократном обработке. Получены акты производственных испытаний.

ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ ИНСЕКТИЦИДНОЙ АКТИВНОСТИ АВЕРМЕКТИНОВ

Обоснование необходимости борьбы с насекомыми - потенциальными переносчиками возбудителя псороптоза кроликов

Синантропные тараканы могут попадать на животноводческие объекты с кормом, а также в ручной клади и одежде персонала и являться причиной порчи продукции. Нами показано, что тараканы могут участвовать в распространении псороптоза по территории

13

кроликоферм. Некоторые ученые отмечают возможность распространения данного заболевания мухами [Адетунджи, 2001; Майоров 1978]. Таким образом, истребительные мероприятия в отношении синантропных насекомых являются неотъемлемой частью системы неспецифической профилактики данного заболевания.

Изучение инсектицидности авермектинов в отношении комнатных мух и рыжих тараканов

Нами исследована сравнительная токсичность природных (абамектин, аверсектин С) и полусинтетических производных (ивермектин, авермектина В\а гемисукцинат) авермектинов для комнатных мух и рыжих тараканов при топикальном нанесении на насекомых (табл. 8).

Таблица 8

Токсичность авермектинов для комнатных мух чувствительной расы Cooper и рыжих тараканов чувствительной расы Бниид при топикальном нанесении ацетоновых рас-

творов инсектицидов (СД50, мкг/г)

ДВ Комнатные мухи Рыжие тараканы Квид*

Абамектин 0,350 (0,270-0,460) 0,380 (0,290-0,480) 1,09

Аверсектин С 0,047 (0,036-0,061) 1,970 (1,510-2,560) 41,92

Авермектина В ь гемисукцинат 0,130 (0,072-0,140) 0,850 (0,650-1,110) 6,54

Ивермектин 0,054 (0,039-0,075) 0,630 (0,490-0,820) 11,67

Примечание: в скобках указаны доверительные пределы при Р<0,05

*Квид (коэффициент видовой чувствительности) = СД50 (рыжий таракан)/ СД50 (комнатная муха)

По Квид абамектин был одинаково инсектициден для комнатных мух и рыжих тараканов, тогда как другие авермектины были более инсектицидны для комнатных мух: авермектина В1а гемисукцинат — в 6,54 раз, ивермектин - в 11,67 раз, аверсектин С — в 41,92 раз. Нами были рассчитаны показатели СК50 для авермектинов при кишечном пути их поступления в организм имаго самцов рыжих тараканов (табл. 9).

Таблица 9

Токсичность авермектинов, введенных в аттрактивную матрицу, для самцов рыжих

ДВ СК50, % СК95, %

Абамектин 0,0061 (0,0047-0,0079) 0,0180 (0,0140-0,0230)

Аверсектин С 0,0041 (0,0032-0,0053) 0,0120 (0,0092-0,0160)

Авермектина Bia гемисукцинат 0,0090 (0,0069-0,0120) 0,0210 (0,0160-0,0270)

Ивермектин 0,0120 (0,0085-0,0150) 0,0300 (0,0230-0,0390)

Авермектины проявляют высокую инсектицидную активность в отношении имаго самцов рыжих тараканов при кишечном пути поступления в организм. Если расположить их по показателям СК50 в порядке уменьшения активности, то этот ряд будет выглядеть следующим образом: аверсектин С> абамектин> авермектина В/а гемисукцинат > иеер-мектин.

Таким образом, авермектины являются высокоперспективными действующих веществ (ДВ) для разработки инсектицидных средств борьбы с комнатными мухами и рыжими тараканами.

ГЛАВА 6. РАЗРАБОТКА РЕЦЕПТУРЫ ИНСЕКТИЦИДНОГО СРЕДСТВА В ВИДЕ ПРИМАНКИ НА ОСНОВЕ АВЕРМЕКТИНА В,д ГЕМИСУКЦИНАТА ДЛЯ УНИЧТОЖЕНИЯ СИНАНТРОПНЫХ ТАРАКАНОВ

Изучение эффективности инсектицидного средства в виде приманки на основе полусинтетических производных авермектинов

Нами изучена эффективность инсектицидного средства «ВЭИС приманки от тараканов» на основе авермектина гсмисукцината в отношении рыжих тараканов чувствительной расы (Эниид) и резистентной к пиретроидам расы (Куц) в сравнении с приманками на основе фипронша (0,03%), абамектина (0,05%) (табл. 10).

Таблица 10

Эффективность приманок на основе действующих веществ из разных химических групп в

отношении чувствительной Эниид и резистентной рас рыжих тараканов

ДВ (%) Насекомых в опыте, особей Раса МКВ, ч лт50, ч лт95, ч ПР*

Абамектин (0,05) 60 Зниид 24 119,00 (104,39-135,66) 202,00 (177,19-230,28) -

60 Км1 120 140,00 (122,91-159,46) 286,00 (251,10-325,75) 1,18

Авермектина В1а гемисукцинат (0,07) 60 Зниид 48 34,50 (30,16-39,47) 91,00 (79,55-104,10) -

60 Км1 96 72,00 (58,49-88,63) 119,00 (96,67-146,49) 2,09

Фипронил (0,03) 60 §ниид 24 3,0 (2,63-3,43) 140,0 (122,59-159,88) -

60 Км1 48 17,0 (14,49-19,94) 221,0 (188,41-259,23) 5,70

Примечание: в скобках указаны доверительные пределы при Р<0,05

ПР (показатель резистентности) = ЛТ501?м|/ЛТ5о 5ниид

При проведении экспериментов выявлено, что тараканы активно прореагировали на «ВЭИС приманки от тараканов». Особи контактировали с приманкой и питались ею.

Средство действовало как инсектицид кишечного действия, симптомы отравления нарастали постепенно.

Нами показано, что резистентная к пиретроидам раса рыжих тараканов Ям1 чувствительна к авермектину В]а гемисукцинату и абамектину, толерантна к фипронилу.

Таким образом, средство «ВЭИС приманки от тараканов» обладает высокой эффективностью и может использоваться как на кроликофермах, так и населением в быту.

ГЛАВА 7. РАЗРАБОТКА ИНТЕГРИРОВАННОЙ СИСТЕМЫ ЗАЩИТЫ КРОЛИКОВ ОТ ПСОРОПТОЗА

Анализ литературных данных и результаты собственных исследований позволили разработать и предложить приведенную ниже схему мероприятий по борьбе с псоропто-зом кроликов (рис. 2).

Рис 2. Схема комплексной борьбы с псороптозом кроликов

Для комплексной борьбы с псороптозом кроликов целесообразно применять терапию с комплексом мер неспецифической профилактики, направленных на уничтожение возбудителя болезни в окружающей среде, а также его возможных механических переносчиков, используя при этом схемы ротации применяемых биоцидов для предотвращения возможного развития резистентности.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

В настоящее время поиск и применение наиболее безопасных, экологичных препаратов для лечения псороптоза является одним из наиболее приоритетных направлений мировой паразитологии. Наибольший интерес для разработки средств лечения псороптоза кроликов представляют такие группы акарицидных веществ, как пиретроиды и авермектины. Выбор в качестве ДВ будущего средства для лечения псороптоза кроликов пирет-роида цифлутрина обусловлен тем, что данное вещество обладает высокой акарицидной активностью в отношении имаго клещей P. cuniculi, а также очень низкими показателями дермапьной токсичности (4 класс опасности ЛД50 >5000 мг/кг) в сравнении с другими веществами данных групп (пиретроидов и авермектинов).

Актуально более детальное изучение акарицидного действия и широкое внедрение в практику веществ из группы РРН (АЮГ и ИСХ) и растительных масел, так как эти вещества могут существенно повысить целевую эффективность конечной рецептуры. Введение пирипроксифена в качестве дополнительного ДВ обусловлено тем, что он препятствует нормальному течению онтогенеза (ингибируя процесс морфогенеза внутри хризалид клещей) и процессу оплодотворения.

В ходе исследований in vitro установлено, что все экспериментальные образцы разрабатываемого средства «Псороптоцид» обладают высокой эффективностью при воздействии на клещей P. cuniculi. В опытах in vivo на животных показано, что наибольшую эффективность в лечении псороптоза кроликов показали композиции 1 и 2. Рецидивов болезни не наблюдали (40 дней).

В наших экспериментах показана возможность механического переноса тараканами клещей Р. cuniculi, что подтверждается и данными литературы [Жужиков, 2005; Аде-тунджи, 2002; Майоров А.И., 1978; Домацкий, Дяченко, 1972]. В связи с тем, что насекомые способствуют распространению возбудителя псороптоза, для неспецифической профилактики данного заболевания необходимо проводить истребительные мероприятия по уничтожению мух и тараканов. Одной из перспективных групп для внедрения в схему борьбы с комнатными мухами и тараканами являются авермектины. Они обладают оригинальным механизмом действия, принципиально отличающимся от большинства ранее использовавшихся инсектицидов [Алексеев, 2009].

В настоящее время приобрел актуальность приманочный метод борьбы с синан-тропными насекомыми. При этом методе борьбы резистентность к инсектицидам развивается значительно медленнее, чем при обработке поверхностей. В экспериментах по определению кишечной активности авермектинов в отношении рыжих тараканов нами было показано, что смертность насекомых на 10-е сутки возрастала с повышением концентра-

17

ции для всех ДВ авермектинов. При этом 100% эффективность наблюдали и при снижении концентрации ДВ до 0,34 мг/г.

Таким образом, авермектины высокоактивны против рыжих тараканов при перо-ральном поступлении в организм в низких концентрациях. Стоит отметить, что кишечная инсектицидная активность авермектина В1а гемисукцината сопоставима с таковой у других действующих веществ из класса авермектинов.

Проведенные исследования позволили совместно с ООО НПО «Экобиовет» разработать инсектицидное средство «ВЭИС приманки для тараканов» на основе нового отечественного полусинтетического производного авермектина В1а - авермектина В1а гемисукцината. В экспериментах показана высокая инсектицидная активность средства «ВИЭС приманка от тараканов» в отношении рыжих тараканов как чувствительной расы, так и расы, резистентной к пиретроидам, а также чувствительных рас других видов тараканов: американских, туркестанских и черных.

Анализ литературных данных и результаты собственных исследований позволили разработать и предложить схемы мероприятий по борьбе с псороптозом кроликов. Данная система может эффективно использоваться во время вспышек псороптоза, а также для проведения профилактических мероприятий.

Таким образом, применение химических веществ совместно с РРН и с веществами растительного происхождения, а также проведение комплексных мероприятий по уничтожению возбудителя и потенциальных переносчиков в местах обитания животных, может существенно увеличить эффективность борьбы с псороптозом кроликов.

ВЫВОДЫ

1. Среди изученных четырех пиретроидов наибольшей активностью в отношении клещей Р. ситсиН обладает цифлутрин, также он наиболее безопасен при накожном применении (КИТ=500000).

2. Эфирные масла гвоздики, аниса и нима высоко акарицидны в отношении клещей Р. ситсиН, однако обладают местно-раздражающим действием, касторовое масло менее акарицидно, но более безопасно и может использоваться в рецептурах акарицидных средств без каких-либо ограничений.

3. Пирипроксифен в высоких концентрациях (1,0-6,0%) оказывет острое акарицид-ное действие на клещей Р. ситсиН, кроме того в более низких концентрациях (0,05-0,2%) ингибирует процесс онтегенеза клещей, и может использоваться совместно с другими акарицидами для повышения эффективности.

4. Разработанное нами средство для лечения псороптоза кроликов «Псороптоцид», содержащее смесь 0,025% цифлутрина и 0,1% пирипроксифена с добавлением касторово-

18

го масла является эффективным и обеспечивает при однократной обработке высокий терапевтический эффект в течение 40 дней.

5. Показано, что синантропные тараканы могут учавствовать в процессе растпрост-ранения клещей Р. cuniculi по территории кроликоферм, что подтверждается данными литературы. Таким образом, уничтожение данных насекомых является неотъемлемой частью системы неспецефической профилактики псороптоза кроликов.

6. Полусинтетические производные авермектинов (авермектина Bia гемисукцинат, ивермектин) проявляют высокую контактную и кишечную инсектицидную активность в отношении рыжих тараканов и комнатных мух, и могут использоваться для разработки средств борьбы с этими насекомыми.

7. Разработанное нами инсектицидное средство «ВЭИС приманки от тараканов» на основе авермектина Bi„ гемисукцината эффективно в отношении синантропных тараканов, как чувствительных, так и резистентных к пиретроидам.

8. Предложенная нами схема борьбы с псороптозом включает: терапию и обработку мест содержания животных инсектоакарицидами для уничтожения возбудителя и его возможных переносчиков, а также соблюдение санитарно-гигиенических норм.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Для эффективной борьбы с псороптозом кроликов следует осуществлять обработку животных средством «Псороптоцид» однократно в дозе 0,5 мл в каждое ухо, осуществлять мероприятия по борьбе с синантропными насекомыми, которые могут выступать в роли механических переносчиков возбудителя болезни, а также соблюдать нормы санитарно-гигиенической безопасности.

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Олехнович, Е.И. Инсектицидная активность нового соединения из класса авермектинов — гемисукцината авермектина Bi„ для некоторых видов насекомых / Е.И. Олехнович, С.А. Рославцева, М.А. Алексеев, K.M. Мирзаева, М.Х. Джафаров, A.B. Колобов, А.И. Сапожникова, И.В. Заварзин, Ю.А. Юсупов // Ветеринарная медицина. - 2013. - № 4. - С. 28-31.

2. Олехнович, Е.И. Сравнительная инсектицидная активность авермектинов в отношении имаго комнатной мухи (Musca domestica, L.) / Е.И. Олехнович, С.А. Рославцева, М.А. Алексеев, М.Н. Мирзаев, А.И. Сапожникова, М.Х. Джафаров, Т.И. Мельницкая, Д.А. Девришов, И.В. Заварзин // Ветеринарная медицина. - 2013. - №4. С. 31-36.

3. Олехнович, Е.И. Потенциальные акарициды контактного действия для борьбы с заболеваниями саркоптоидозной этиологии у животных / Е.И. Олехнович, А.И. Сапожникова, С.А. Рославцева // Пест-Менеджемент. - 2013. - № 2. - С. 25-31.

4. Олехнович, Е.И. Сравнительная акарицидная активность авермектинов в отношении ушного кроличьего чесоточного клеща Psoroptes cutticuli Delafond, 1859 in vitro / Е.И. Олехнович, С.А. Рославцева, А.И. Сапожникова, М.А. Алексеев, М.Н. Мирзаев, И.В. Заварзин // Пест-Менеджемент. - 2014. - №2. - С. 47-53.

5. Олехнович, Е.И. Сравнение акарицидного действия in vitro некоторых пи-ретроидов в отношении ушного чесоточного кроличьего клеща Psoroptes cuniculi Delafond, 1859 / Е.И. Олехнович, С.А. Рославцева, Ф.И. Василевич, А.И. Сапожникова // Ветеринария и кормление. - 2014. - № 4. - 40-41.

6. Олехнович, Е.И. Сравнительная эффективность акарицидов при псороптозе кроликов / Е.И. Олехнович, С.А. Рославцева, Ф.И. Василевич, А.И. Сапожникова // Ветеринария. - 2014. - № 11. - С. 35-39.

7. Олехнович, Е.И. Авермектины в медицинской дезинсекции / Е.И. Олехнович, С.А. Рославцева // Инфекционные болезни. - 2014. - Т. 12, Приложение № 1. - С. 231.

8. Олехнович, Е.И. Акарициды для применения в растениеводстве и ветеринарии / С.А. Рославцева, Е.И. Олехнович // Агрохимия. - 2013. - № 12. — С. 56-63.

9. Олехнович, Е.И. Аналоги ювенильного гормона и их применение в медицинской дезинсекции и ветеринарии / О.Ю. Еремина, Е.И. Олехнович, С.А. Рославцева // Пест-менеджмент. — 2014. — № 3. — С. 20-30.