Биологические основы разработки новых технологий для диагностики и мониторинга дифтерии

Краева, Людмила Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биологические основы разработки новых технологий для диагностики и мониторинга дифтерии
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Биологические основы разработки новых технологий для диагностики и мониторинга дифтерии"

На правах рукописи

КРАЕВА Людмила Александровна

БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ РАЗРАБОТКИ НОВЫХ ТЕХНОЛОГИЙ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И МОНИТОРИНГА ДИФТЕРИИ

03.02.03 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

2 6 МАЙ 2011

Санкт-Петербург 2011

4848208

Работа выполнена в ФГУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» Роспотребнадзора

Научный консультант:

доктор медицинских наук, Заслуженный деятель науки РФ профессор Галина Яковлевна Ценева

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор Алексей Геннадьевич Бойцов доктор медицинских наук профессор Алевтина Михайловна Савичева доктор медицинских наук профессор Евгений Петрович Сиволодский

Ведущая организация: ГОУ Е!ПО «Санкт-Петербургская государственная педиатрическая медицинская академия» Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию РФ

Защита диссертации состоится 7 июня 2011 года в

Ж.

часов на заседании

диссертационного совета Д 215.002.08 при ФГВОУ ВПО («Военно-медицинская академия имени С.М.Кирова» МО РФ (194044, Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, д. 6).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке ФГВОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С.М.Кирова» МО РФ.

Автореферат разослан__^ 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук профессор Юрий Алексеевич Митин

ОБЩАЯ ХАРАКТРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

инфекции продемонстрирована на примере значительного снижения (почти в 10 раз) заболеваемости после того, как в 1980-х годах дифтерийный анатоксин стал доступен во многих странах. При индексе контагиозности 1520% самым главным условием предотвращения заболевания становится специфическая профилактика (Оа1агка АМ, 1995; Эмироглу Н., 2001).

Однако, несмотря на проводимую вакцинацию, эпидемии дифтерии периодически повторяются. Масштабная эпидемия дифтерии, поразившая в основном страны СНГ в 1990-х годах, помогла вскрыть недостатки специфической профилактики дифтерии и показала большую роль социальных факторов в создании условий, препятствующих распространению заболеваний среди широких слоев населения (Ценева Г .Я., 1995; ЕГзтаюи А., 1996). Поэтому нельзя ожидать решения проблемы ликвидации заболеваемости дифтерией лишь принятием мер по возможно полному охвату населения профилактическими прививками.

Без глубокого понимания механизмов защиты, создаваемого вакцинными препаратами, трудно понять причину заболеваний среди привитых. Поэтому необходимы более глубокие исследования по характеристике специфических антител, вырабатываемых в ответ на вакцинацию против дифтерии. Разработанная ВОЗ оценочная шкала защищенности от дифтерии на основании определения количества антитоксических антител и ее повсеместное внедрение в практику позволили контролировать качество вакцинации (ЕГБи-айои А., 1994). Однако информация о количестве вырабатываемых противодифтерийных антител не дает достоверный ответ на вопрос о степени защищенности от дифтерии. Этот факт был установлен во время последней эпидемии дифтерии в России и после нее, когда у заболевших (до 40% случаев) находили в крови

антитоксические антитела защитных уровней (Васильев К.Г., 2002; Матохина А.Г., 2003; Харченко Г.А., 2003).

В современных условиях развитие биотехнологии позволяет разрабатывать эффективные методы диагностики, в том числе для дифтерийной инфекции, с высокой чувствительностью и специфичностью, и следовательно, получать более достоверные данные об иммунном ответе после вакцинации. Так, использование иммуноферментного анализа при оценке защищенности от многих вакциноуправляемых инфекций позволило перейти на новый уровень диагностики с достоверностью получаемых результатов, не уступающей «золотым» стандартам с использованием животных или культур клеток (Camargo et al, 1987). Таким образом, в основе достоверности результата лежит достоверность самого метода диагностики.

Немаловажное значение в защите от дифтерии имеет также социальный фактор. Согласно данным ВОЗ на здоровье человека в 70% случаев влияют прежде всего условия и его образ жизни, внешняя среда и природные условия (Эмироглу Н., 2001; Харсеева Г.Г., 2009; Volzke H., 2006). Эти факторы лежат в основе формирования и развития неспецифической иммунной защиты. Как известно, на ряд показателей здоровья человека влияют стрессы, болезни, вредные привычки и зависимости (Харсеева Г.Г., 2009; WHO/IVB, 2005, 2006; Neal S.E, 2009).

В развитии любого инфекционного заболевания, в том числе дифтерии, кроме состояния макроорганизма значительную роль играет вирулентность штамма, участвующего в инфекционном процессе. Как известно, главным фактором патогенности C.diphtheriae является его юксигенность. Именно дифтерийный токсин выполняет основную роль в патогенезе заболевания, распространенности инфекционного процесса, развитии осложнений и частоты летальности при дифтерии (Hadfield T.L., 2000; Wellinghausen, N.. 2002; Williams H.U., 2008).

В настоящее время в России для выявления токсигенных штаммов применяют Elek-TecT, регламентированный нормативными документами. Однако он не лишен недостатков: длителен в постановке и недостаточно чувствителен. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) обладает более высокой чувствительностью и меньшим временем постановки (Ценева Г.Я., 2000; Pallen M.J., 1994; Aravena-Roman M., 1995; Mikhailovich V.M., 1995). Однако результат ПЦР свидетельствует о наличии у микроорганизма гена токсигенности, который, как известно, может быть репрессированным и не проявлять себя в фенотипических тестах, таких, как Е1ек-тест. Известно, что при определенных условиях действие гена-супрессора прекращается и

штамм возобновляет способность продуцировать токсин (Ценева Г.Я., 1998; Cianciotto N. Р., 1997).

В этой связи поиск и разработка эффективных средств индикации и идентификации токсинпродуцирующих штаммов особенно важны, поскольку в постэпидемическом периоде чаще циркулируют штаммы C.diphtheriae, несущие «молчащий» ген токсигенности (Щедеркина Е.Е., 2001).

Исследованиями ряда ученых установлено влияние факторов окружающей среды, в том числе физических, не только на здоровье населения, его неспецифический и специфический иммунитет, но и на биологические свойства микроорганизмов. О влиянии некоторых физических факторов на биологические свойства микроорганизмов, однако эти факты малочисленны, особенно в отношении C.diphtheriae (Грабина В.А., 1976; Гофман Е.Л., 1988; Манина Ж.Н., 1997). Из физических факторов наибольший интерес представляют электромагнитные поля, с которыми население контактирует постоянно в течение длительного времени (бытовые приборы, компьютеры, мобильные телефоны и т.д.). Можно полагать, что в этих условиях микроорганизмы способны менять свои биологические свойства (Рыспаева Д.Э., 1998; Бездольная И.С., 2000, 2001; Думанский Ю.Д., 2001; Боярский М.Р., 2001; Меньшикова Л.Н., 2001; Shckorbatov Y.G., 1998). Однако данные о влиянии электромагнитных полей на те или иные свойства C.diphtheriae до настоящего времени отсутствовали.

Из всех биологических свойств C.diphtheriae наиболее важными являются токсинопродукция и адгезия к эпителиальным клеткам слизистых оболочек, являющиеся факторами патогенности штаммов, а также их резистентность к антибиотикам. Особенно актуальны исследования о влиянии электромагнитных факторов на изменение чувствительности C.diphtheriae к антибиотикам.

Показано, что у больных с острыми заболеваниями верхних дыхательных путей в 10-15% случаев находят недифтерийные коринебактерии (Funke G., 1997; lzurieta H.S., 1997). В настоящее время род коринебактерий включает 67 видов и две таксонные группы, 40 из них имеют клиническое значение. Кроме того, существует ряд коринеформных бактерий, морфологически похожих на коринебактерии, способных вызывать инфекционные заболевания, в том числе верхних дыхательных путей. Наличие широкого спектра видов коринебактерий, возможных патогенов, создает значительные трудности в биохимической дифференциации таких культур (Funke G., 1997).

В связи с изложенным представлялось актуальным изучение особенностей биологических свойств штаммов C.diphtheriae,

циркулирующих в постэпидемический период, и на этой основе разработка эффективных методов и средств для лабораторного обеспечения надзора за дифтерией.

Цель исследования

Изучить изменчивость биологических свойств С. diphtheriae и динамику показателей гуморального антитоксического иммунитета у привитых для совершенствования лабораторной диагностики и мониторинга дифтерии.

Задачи работы:

[.Определить роль высокоавидных антитоксических антител в защите от дифтерии. Разработать методику определения индекса авидности антитоксических противодифтерийных антител и критерии невосприимчивости к дифтерии у привитых. Разработать способ дифференциальной диагностики между легкими формами дифтерийной инфекции и бактерионосительством С.diphtheriae.

2. Разработать методику определения вероятности заболевания дифтерией на основе показателей количественного содержания антитоксических антител и индекса их авидности для оценки индивидуального и коллективного противодифтерийного иммунитета. Определить динамику накопления и регрессии антитоксических, в том числе высокоавидных, противодифтерийных антител у привитых.

3. Изучить биологические .свойства и факторы патогенности С. diphtheriae, выделенных в постэпидемический период (2000-2009 гг.) на территории Санкт-Петербурга, Ленинградской и Вологодской областей.

4. Изучить влияние электромагнитных полей на вирулентность и чувствительность к антибиотикам штаммов С. diphtheriae.

5. Разработать экспресс-способ диагностики токсигенных С. diphtheriae с использованием высокоавидных антител in vitro.

Научная новизна и теоретическая значимость работы:

Впервые на основе десятилетнего мониторинга индивидуального и коллективного противодифтерийного антитоксического иммунитета в крупных регионах СЗФО РФ научно обоснована определяющая роль высокоавидных антитоксических антител в защите от дифтерии.

Разработаны новые методические подходы, критерии и способы оценки защищенности от дифтерии. Впервые на основе комплекса данных об уровнях антитоксических, в т.ч., высокоавидных, антител и прививочного статуса разработан способ определения вероятности заболевания дифтерией и сроков последующей ревакцинации обследуемого.

Разработан алгоритм контроля индивидульного и коллективного иммунитета для определения сроков ревакцинации с учетом динамики антитоксических, в т.ч., высокоавидных, антител.

Установлено влияние факторов электромагнитного излучения на биологические свойства возбудителя дифтерии. Доказано стимулирующее влияние НИЛИ на продукцию дифтерийного токсина in vitro штаммами С. diphtheriae, в т.ч., несущими «молчащий» fox-ген.

Доказана эффективность использования высокоавидных антител для выявления продукции дифтерийного токсина у штаммов С. diphtheriae с низким уровнем токсинообразования in vitro. Предложен новый алгоритм определения токсигенности С. diphtheriae, в т.ч., несущих «молчащий» tox-ген.

Практическая значимость исследования:

Предложен комплекс современных методов и приемов для обеспечения микробиологического мониторинга возбудителя дифтерии и оценки поствакцинального иммунитета.

Обоснована целесообразность обследования с профилактической целью контингентов, особенно лиц из закрытых учреждений, на носительство С. diphtheriae в постэпидемический период.

Разработан экспресс-способ диагностики токсигенных штаммов С.diphtheriae, отличающийся высокой чувствительностью, быстротой учета реакции, объективностью считывания информации, портативностью прибора и экономичностью.

Разработан высокочувствительный экспресс-способ обнаружения потенциальной токсинопродукции у штаммов С.diphtheriae, несущих «молчащий» ген токсигенности и слабо продуцирующих токсин, позволяющий повысить эффективность лабораторной диагностики дифтерии.

Предложены методические материалы (схемы, прописи сред, таблицы биохимического типирования, текстовый материал) для дифференцирования С. diphtheriae и недифтерийных коринебактерий.

Разработана и внедрена в практику технология получения контрольных образцов для определения индекса авидности противодифтериных антитоксических антител с помощью иммуноферментной тест-системы для выявления дифтерийных антител.

Полученные данные изложены:

а) в методических рекомендациях для врачей «Фенотипическая идентификация бактерий рода Corynebacterium», утв. МЗ РФ 2010 г.;

б) в Руководстве по клинической лабораторной диагностике, раздел «Коринебактерии», Из-во Москва, 2011 г.

Изученные штаммы С.сИрЫкепае и их характеристики представлены в коллекции лаборатории бактериальных капельных инфекций НИИЭМ имени Пастера, Санкт-Петербург (1 995-2010 гг.).

Разработан простой и экономичный тест для измерения авидности противодифтерийных антитоксических антител на основе ИФА, позволяющий определять истинные протективные антитела. Данные по проведению и использованию ИФА в практических лабораториях изложены в Учебном пособии «Дифтерия (современные методы лабораторной диагностики), Санкт-Петербург, 2009 г.

Предложен алгоритм лабораторного контроля иммунитета, включающий определение количественного показателя степени невостприимчивости обследуемых к дифтерии, сроков сохранения высокоавидных антител, серологического мониторинга и проведения очередных ревакцинирукмцих прививок.

Предложены новые критерии защищенности населения от дифтерии, позволяющие оперативно проводить коррекцию ревакцинации в слабо защищенных группах населения.

На основании данных индекса авидности предложена схема проведения дифференциальной диагностики заболеваний дифтерией и бактерионосительства С.сИрЫИепае.

Для оперативного микробиологического и серологического мониторинга дифтерии созданы базы данных, включающие данные по заболеваемости дифтерией, показатели иммунитета, сведения о выделенных штаммах С. сНрЫкепае, предложена методология создания геоинформационной системы по слежению за дифтерийной инфекцией. Компьютерное картирование эпидемиологических и микробиологических данных на территории наблюдения и банк специфических данных делают получение информации экстренной.

Основные положения диссертации, выносимые па защиту:

1. Невосприимчивость привитых к дифтерии связана с формированием высокоавидных антитоксических антител.

2. Комплексная оценка противодифтерийного поствакцинального иммунитета основана на определении количественного содержания и индекса авидности антитоксических антител.

3. Штаммы С.сИрЫкеНае, выделенные в постэпидемический период, характеризует изменчивость основных биологических свойств (патогенности, чувствительности к антибиотикам).

4. Низкоинтенсивное лазерное излучение и вращающиеся магнитные поля влияют на адгезивность, токсигенность и чувствительность к антибиотикам штаммов С. diphtheriae in vitro.

5. Новые биомикротехнологии повышают эффективность выявления токсинообразования штаммами С. diphtheriae in vitro .

Внедрение результатов работы:

На основе результатов работы подготовлены следующие документы:

Учебное пособие для врачей «Дифтерия» (современные методы лабораторной диагностики) Г.Н. Беспалова, JI.A. Краева, Г.Я. Ценева, O.E. Пученко. СПб, 2009.-42 с. (используется в учебном процессе на кафедре микробиологии и микологии ГОУ ДПО СПб МАПО Росздрава и на кафедре микробиологии Военно-медицинской академии имени С.М. Кирова).

Методические рекомендации для врачей-бактериологов «Фенотипическая идентификация бактерий рода Corynebacterium» Г.Я. Ценева, JI.A. Краева, Ж.Н. Манина и др. СПб-Харьков, 2010. - 76 с.

Патент на изобретение «Способ контроля биологической пробы в реакции латекс-агглютинации и аналитическая система для его осуществления».- № 2298798 от 10.05.2007,- Авторы: Зимина Т.М., Лучинин В.В., Мигунова В.Е., Краева Л.А., Ценева Г.Я., Меньшикова А.Ю., Шабсельс Б.М., Дулатова М.В., Шпилюк Г.Ф.

Патент на изобретение «Способ определения токсигенности бактерий Corynebacterium diphtheriae» № 2370539 от 20.10.2009.- Авторы: Краева Л.А., Ценева Г.Я., Коробов A.M., Грабина В.А.

Разработана технология получения контрольных образцов для определения индекса авидности противодифтериных антитоксических антител с помощью иммуноферментной тест-системы для выявления дифтерийных антител, выпускаемой филиалом ФГУП НПО «Микроген» Минздравсоцразвития России «Пермское НПО «Биомед» (№ 09/600/22116). Авторы: Краева Л.А., Ценева Г.Я., Алексеева Е.А.

Материалы диссертации представлены в «Руководстве по клинической лабораторной диагностике» (Раздел: Коринебактерии) М. 2011.

Апробация работы:

По теме диссертации опубликованы: 40 научных работ, в том числе 12 - в изданиях, рецензируемых ВАК, а также в материалах симпозиумов, научно - практических конференций всероссийского и международного уровней, получены 2 патента.

дифтерии», СПб, НИИЭМ им. Пастера; 8-9 октября 2004 г. Гомель, Беларусь, ОЦГСЭН. Международная-конференция «Применение антибактериальных препаратов при лечении инфекционных заболеваний»; 23-26 мая 2005 г. IX Всероссийский научный форум «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге»; 5-8 октября 2005 г. Ялта, Украина. XXIV Международная научно-практическая конференция «Применение лазеров в медицине и биологии»; 7 февраля 2006 г НИИЭМ им. Пастера, СПб, заседание общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов в Санкт-Петербурге и Ленинградской области; 5-8 октября 2006 г. Луцк. Украина. XXV Международная научно-практическая конференция «Применение лазеров в медицине и биологии»; 15-17 November 2006. Vouliagmeni, Greece. Ninth International Meeting of the European Laboratory Working Group on Diphtheria, ELGWD; 26 мая 2007 г. ГОУ ДПО СПб МАПО Росздрава. Всероссийская научная конференция «Современные проблемы медицинской микробиологии» (Хлопинские чтения); 5-7 декабря 2007 г. Алматы (Казахстан). Республиканский семинар «Диагностика воздушно-капельной группы инфекций»; 26 февраля 2008 г. НИИЭМ им. Пастера, СПб, заседание общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов в Санкт-Петербурге и Ленинградской области; 24 апреля 2008 г. НИИЭМ им. Пастера, СПб, семинар для врачей-бактериологов СПб и Лен. Области; 2-4 июня 2008 г. Четвертая международная конференция, посвященная 85-летию Санкт-Петербургского НИИЭМ имени Пастера и 120-летию Парижского института Пастера; 1-4 июля 2008 г. Второй Санкт-Петербургский международный экологический форум «Окружающая среда и здоровье человека»; 03-07 November 2008. Larnaca.Cyprus. Tenth International Meeting of the European Laboratory Working Group on Diphtheria, ELGWD; 7-9 October 2009. Ryga. Eleventh International Meeting of the European Laboratory Working Group on Diphtheria, ELWGD; 1617 декабря 2009 г. Вологда. Пленум, посвященный 65-летию Российской академии медицинских наук и 130-летию со дня рождения академика АМН СССР А.Н. Сысина; 18-20 mai 2010 г. Saint-Petersburg. Recherches scietifiques et surveillance epidemiologique des maladies infectieuses. Conference internationale Saint-Petersburg; 08 июня 2010 г. НИИЭМ им. Пастера, СПб, заседание общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов в Санкт-Петербурге и Ленинградской области; 15 сентября 2010 г. Вологда. Научно-практическая конференции ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Вологодской области»; 6-8 октября 2010 г. Судак. Украина. XXXIV Международная научно-практическая конференция «Применение лазеров в медицине и биологии».

Личный вклад автора

Основные результаты получены лично автором. Выделение штаммов С. сИрЫИепае, сбор образцов сывороток крови от больных и здоровых лиц проведен в Центрах эпидемиологии и гигиены в Вологодской, Ленинградской областях, г. Санкт- Петербурге, а также лично автором.

Микробиологические, серологические, иммунохимические, экспериментальные исследования, компьютерный и статистический анализ данных были проведены автором в лаборатории бактериальных капельных инфекций ФГУН «Санкт - Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

Работа выполнялась в различных разделах совместно со специалистами следующих учреждений: 1) ЦМИД - центра микроэлектроники и диагностики при Санкт-Петербургском электротехническом университете; 2) ИВС - Санкт-Петербургского института высокомолекулярных соединений; 3) Харьковского института лазерной биологии и лазерной медицины.

Структура и объем диссертации:

Основной текст диссертации изложен на 235 страницах машинописного текста и состоящий из введения, аналитического обзора литературы, характеристически материалов и методов исследования, 6 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, приложений.

Диссертация иллюстрирована 16 таблицами и 43 рисунками. Список литературы содержит 114 источников отечественных авторов и 269 источников зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследований

В соответствии с целью и задачами исследования был использован следующий материал и применены методы, представленные в таблице 1.

Таблица 1.

Объем проведенных исследований различными методами

Методы Объем

1. Бактериологический: 1.1. Изучение характеристик циркулирующих штаммов С.сИрЫИепае. 650 штаммов

1.2. Изучение влияния факторов электромагнитной 132 шт.

природы на основные биологические свойства

С.сИрЫИепае. 304 шт.

1.3. Сравнение методов определения токсигенности у

штаммов С.сИрЫкепае. 116 шт.

1.4. Изучение клинической значимости СогупеЬа^епит

поп сЧрЫИепае, их дифференциация с С.сИркЛепае. 60 шт.

1.5. Изучение чувствительности к антибиотикам

штаммов СогупеЬаМепит поп сИрЫкепае. 80 шт.

1.6. Оценка экспресс-способа выявления потенциальной Всего 1342

токсигенности у штаммов С.сИрЫкепае с помощью штамма

низкоинтенсивного лазерного излучения

2. Иммунологический: 350 образцов

2.1. Выбор достоверного метода определения сыворотки

защищенности от дифтерии. крови (ОСК)

2.2. Оценка уровней АТ-АТ по международным

стандартам. 3 012 ОСК

2.3. Выделение групп «риска» по возрасту. 216 ОСК

2.4. Выделение групп «риска» по основной хронической 189 ОСК.

патологии.

2.5. Выделение групп «риска» по профессиональной 130 ОСК

принадлежности. •

2.6. Разработка теста для определения авидности 185 ОСК

антитоксических антител. 450 ОСК

2.7. Изучение динамики показателей защищенности от

дифтерии 50 ОСК

2.8. Лабораторные приемы для дифференциальной Всего

диагностики малосимптомных форм инфекции и 4 582 ОСК

бактерионосительства.

3. Иммунохимический: 30 штаммов

3.1. Апробация экспресс-способа выявления ( в 3-х

дифтерийного токсина на основе микротехнологий. повторностях)

4. Молекулярно-генетический: ПЦР 304 штамма

5. Экспериментальные модели:

5.1. РН в культуре клеток Vero, 350 ОСК

5.2. Изучение адгезивности на эритроцитах человека

0 (I) группы Rh (+). 9 ОСК

6. Анализ историй болезни 185 историй

Методы культивирования штаммов.

Для выполнения исследований использованы штаммы C.diphtheriae, выделенные автором и полученные из Санкт-Петербурга, Ленинградской и Вологодской областей за период 1995-2009 гг.

Выделение и идентификацию микроорганизмов проводили в соответствии с Методическими указаниями «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции» (МУ 4.2.698-98), «Определителем бактерий Берджи» (1997), учебным пособием «Микробиология» под редакцией В.И.Покровского (1999), руководством по лабораторной диагностике ВОЗ «Дифтерия» (1994 г., 2009 г.), учебным пособием для врачей «Дифтерия. Лабораторная диагностика» (2009 г.), схемами идентификации коринебактерий, предложенные Guido Funke et al. (1997) и Manual of Clinical Microbiology (2 Volume Set), Patrick R. Murray (2007).

В работе использованы референс-штаммы C.diphtheriae № 10356 (tox-), № 10648 (tox+) и № 3984 (tox+/-) из NCTC (National Collection of Type Cultures Diphtheriae Reference Laboratory, Central Health Laboratory (CPHL), London, UK).

Изучение основных патогенных свойств и антибиотикорезистентности коринебактерий.

Степень адгезии микроорганизмов определяли пользуясь средним показателем адгезии (СПА) по методу В.И. Брилис (1986) на эритроцитах человека О (I) группы Rh+.

Для определения токсигенности C.diphtheriae использованы 5 тестов: полимеразная цепня реакция (ПЦР), иммунохроматографический тест (ICS), иммунопреципитация в агаре (Е1ек-тест), реакция непрямой гемагглютинации (РНГА), реакция агглютинации латекса (РАЛ).

Постановку ПЦР со специфическими праймерами проводили в режиме амплификации, описанном в инструкции по применению тест - системы для выявления участка ДНК 360 пар нуклеотидов гена токсина коринебактерии дифтерии производства «АмплиСенс», г. Москва.

Для постановки ICS-теста использовали диагностический набор, полученный из Diphtheriae Reference Laboratory (CPHL), London, UK.

Е1ек-тест проводили по общепринятой методике, согласно МУ 4.2.6989В с использованием среды ОТДМ для определения токсигенности дифтерийных микробов производства НПО «Питательные среды» г. Махачкала, Россия. Для приготовления бумажных дисков применяли «Антитоксин диагностический дифтерийный очищенный ферментолизом и специфической сорбцией, сухой» производства НПО «Биомед», г. Пермь.

Для постановки РНГА использовали диагностический набор с эритроцитарным диагностикумом (производства НИИЭМ им. Пастера, С-Петербург).

Для проведения РАЛ использовали диагностический набор «ID-PaGIA Diphtheria Toxin Test» и оборудование (центрифуга, пластиковые карты, включающие 6 микропробирок с гелем Sephadex) СП Германия - Россия, ГРМИ№ 94/256.

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводили методом серийных разведений и диско-диффузионным методом согласно МУК 4.12.1890-04 (Москва, 2004), "Basic laboratory procedures in clinical bacteriology" (WHO, Geneva, 1991, раздел "Определение чувствительности к антимикробным препаратам") и руководства ВОЗ "Основные методы лабораторных исследований в клинической бактериологии" (1994). В качестве среды для постановки теста использовали бульон и агар Мюллера-Хинтона с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота. Для контроля качества сред использовали референс-штаммы: Staphylococcus aureus (АТСС 25923), Escherichia coli (ATCC 25922), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853). В качестве контрольных штаммов для оценки чувствительности использовали Corynebacterium diphtheriae var. gravis (tox+) (NCTC 10648) и Staphylococcus aureus (ATCC 25923).

Иммунологические методы PH (реакция нейтрализации) в культуре клеток Уего В реакции использовали токсин 0,0002 Lf/мл и антитоксин 0,032 МЕ/мл, полученные из NCTC (National Collection of Type Cultures Diphtheriae Reference Laboratory, Central Health Laboratory (CPHL), London, UK). При постановке реакций применяли культуру клеток Vero, полученную из лаборатории детских вирусных инфекций НИИЭМ им. Пастера, в концентрации 2,5-105 клеток/мл. Содержание антитоксических антител определяли от 0,000125 МЕ/мл и выше.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) В работе использовали эритроцитарный дифтерийный антигенный жидкий диагностикум производства «Биомед» им. И.И.Мечникова (Московская обл., Красногорский район, с. Петрово-Дальнее) активностью 1:6 400.

Иммуноферментный анализ (ИФА) Тест-система для ИФА представляет собой набор, предназначенный для определения суммарных антитоксических антител на основе конъюгата -иммуноглобулинов (Р(аЬ')2-фрагментов) диагностических против IgG человека, аффинноочищенкых, меченных пероксидазой (производства НПО

«Биомед, г. Пермь). Специальная компьютерная программа, прилагаемая к набору, дает возможность производить перерасчет показателей оптической плотности в показатели антитоксических международных единиц.

Для определения авидности антител использовали эту же тест-систему, которую модифицировали путем введения дополнительных 2-х контролен: контрольный положительный образец (К+) - сыворотка крови человека с индексом авидности 95% и контрольный отрицательный образец (К-) -сыворотка крови человека с индексом авидности 5%, а также других ингредиентов и разработанных условий проведения реакции.

Экспресс-способ выявления дифтерийного токсина на основе микротехнологий

Способ разрабатывался с использованием 7 контрольных (положительных и отрицательных) референс-штаммов и токсинов, полученных из NCTC (National Collection of Type Cultures Diphtheriae Reference Laboratory, Central Health Laboratory (CPHL), London, UK), ГИСК им. Л.А.Тарасевича и НИИЭМ имени Пастера (Россия). Оценку способа осуществляли на 30 известных музейных штаммах C.diphtheriae в трех повторностях.

Экспресс-способ выявления потенциальной токсигенности у штаммов

C.diphtheriae

При разработке способа применяли лазерный прибор для микробиологических исследований «Барва ЛПМИ - 01» производства Харьковского НИИ лазерной биологии и лазерной медицины.

В экспериментальной части использованы референс-штаммы C.diphtheriae № 10356 (tox-), № 10648 (tox+) и № 3984 (tox+/-) из NCTC (National Collection of Type Cultures Diphtheriae Reference Laboratory, Central Health Laboratory (CPHL), London, UK). Апробация способа осуществлялась на 80 штаммах музейных культур C.diphtheriae.

Эпидемиологические методы

Эпидемиологические методы использовали при изучении заболеваемости населения Санкт-Петербурга, Ленинградской и Вологодской областей за период с 2000 по 2009 гг. Данные о заболеваемости были предоставлены центрами Государственного санитарно-эпидемиологического надзора на изучаемых территориях. Показатели привитости населения от дифтерии, данные о циркуляции выделенных штаммов C.diphtheriae были получены из бактериологических лабораторий вышеуказанных территорий.

При определении групп «риска» среди населения по восприимчивости к дифтерийной инфекции также были использованы эпидемиологические

методы. Учитывали группы населения по возрасту, профессии, наличию или отсутствию хронического заболевания.

Методы математической обработки данных В работе использованы интенсивные, экстенсивные показатели и показатели наглядности. Математическая обработка включала следующие методы: расчет первичных статистических показателей; выявление отличий между группами по статистическим признакам; установление взаимосвязи между переменными с помощью параметрического и непараметрического корреляционного анализа; установление вида зависимостей (показателей от изучаемых факторов) с помощью регрессионного анализа.

Часть простейшей математической обработки выполняли на калькуляторах. В основном математическую обработку выполняли на ПК с использованием стандартных статистических пакетов Statgraphics, STATISTICA, SPSS. Для первичной подготовки таблиц и промежуточных расчетов использовали пакет Excel.

Метод картографического анализа и компьютерной обработки данных Для выполнения работы использованы материалы отделов медицинской статистики, данные и документы эпидемиологических отделов городского и областного центров Государственного санитарно-эпидемиологического надзора, лаборатории бактериальных капельных инфекций НИИЭМ имени Пастера. Далее были разработаны и заполнены базы данных по разным видам исследования, которые объединяли в одну целостную систему - геоинформационную систему (ГИС). В качестве базовой была использована ГИС Maplnfo.

Результаты исследований и их обсуждение Оценка невосприимчивости привитых к дифтерии По данным центров Госсанэпиднадзора в Северо-Западном регионе РФ в постэпидемические годы до 50% лиц, заболевших дифтерией, содержали в крови защитные уровни антитоксических противодифтерийных антител, выявляемые с помощью регламентированного метода - реакции пассивной гемагглютинации (РИГА).

В связи с этим были проведены параллельные исследования образцов сывороток крови от 350 лиц в трех используемых в нашей стране методах: в реакции нейтрализации (РН) в культуре клеток Vero, в РПГА с помощью стандартного диагностического набора и в иммуноферментном анализе (ИФА).

Полученные результаты показали, что коэффициент корреляции между результатами исследования сывороток в РПГА и классической РН в культуре клеток Vero составил г = 0,5. Между тем, этот показатель для ИФА и РН

(Vero) составил 0,95 с уровнем достоверности р < 0,05. Результаты ИФА выражали в международных единицах, что соответствует международным критериям. Поэтому в дальнейших исследованиях для оценки уровня суммарных антитоксических антител (АТ-АТ) использовали ИФА.

Анализ данных по определению уровней АТ-АТ у населения изучаемых территорий выявил различия в защите от дифтерийной инфекции некоторых социальных и профессиональных групп, а использование знаний о морфофункциональных основах взаимодействия нервной, эндокринной и иммунной систем позволило выделить дополнительные категории «риска» по восприимчивости к дифтерии среди населения:

- по возрасту - лица старше 50 лет (36% из них слабо защищены от дифтерии (р<0,05) в отличие от лиц 20-29 лет, среди которых 10% лиц защищены слабо (Р<0,05));

- по профессиональной принадлежности - медицинские работники (11% восприимчивы к дифтерии (р<0,01)), рабочие промышленных предприятий, особенно занятые на вредном производстве (6% восприимчивы к дифтерии (Р< 0,01));

- лица, страдающие хроническими заболеваниями соматической и инфекционной этиологии (рисЛ).

МЕ/мл

¡Показатель АТ-АТ -й-Доля незащищенных

Рис. 1. Показатели антитоксических антител (МЕ/мл) и доля лиц (%), незащищенных от дифтерии.

Полученные данные аргументируют необходимость дифференцированного подхода к проведению серологического мониторинга и коррекции защищенности от дифтерийной инфекции.

В результате исследования образцов сывороток крови заболевших дифтерией лиц с помощью ИФА было установлено, что 29% из них содержали АТ-АТ в количестве >0,1МЕ/мл', которые по международным и национальным критериям защищенности рассматриваются как обеспечивающие невосприимчивость к дифтерии. Поэтому дальнейшие исследования были посвящены изучению качества антитоксических антител и их роли в защите от дифтерии.

Для разработки условий постановки ИФА с целью выявления высокоавидных антител использовали две панели из 185 образцов сывороток крови, полученных от больных дифтерией (на 3-5 день заболевания, не получавших в этот период лечебной противодифтерийной сыворотки) и контактных лиц, кровь от которых была взята на 1-й - 2-й неделях после контакта с заболевшим дифтерией. Определяли не только уровни суммарных антитоксических антител, но и их авидность.

С целью подбора химического вещества (детергента) для диссоциации комплексов, состоящих из низкоавидных антител и антигена, были использованы следующие химические соединения: мочевина различной концентрации (1М, 2М, ЗМ, 4М, 5М, 6М, 7М, 8М, 9М, ЮМ); тиоцианат (1М, 2М, ЗМ, 4М, 5М, 6М, 7М); калий роданистый (1М, 2М, ЗМ, 4М, 5М, 6М). Все процедуры реакции выполняли по инструкции, прилагаемой к набору, но на первом этапе изучаемые сыворотки раскапывали в двух повторностях.

После инкубации в термостате согласно инструкции лунки освобождали от реакционной смеси и вносили в лунки с I повторностью сывороток буферный промывочный раствор из набора для ИФА, а в лунки со II повторностью сывороток - раствор детергента. После 30 секунд экспозиции лунки снова освобождали от растворов. Эту процедуру повторяли 4 раза, после чего все лунки промывали буферным промывочным раствором, прилагаемым к набору. Далее все процедуры выполняли строго по инструкции к набору. Индекс авидности (ИА) рассчитывали по формуле, используемой при подобных исследованиях:

1 < 0,01 МЕ/мл - обследуемый восприимчив к дифтерии, 0,01 МЕ/мл - минимальная степень защиты, 0,01-0,09 МЕ/мл - некоторая степень защиты, 0,1-0,9 МЕ/мл - защитный уровень антител,

1,0 и > МЕ/мл - стойкая длительная невосприимчивость к дифтерии.

иа = . ] оо%, (1)

ОЩА) '

где ОП (Е) - оптическая плотность в лунке, обработанной детергентом, ОП (А) - оптическая плотность в лунке, обработанной обычным промывочным раствором, используемым в тест-системе.

В результате попарного сравнения индексов авидности, полученных во всех 23-х вариантах опытов, были выбрана оптимальная концентрация детергента, при которой определялась наиболее достоверная разница между двумя выделенными группами сывороток. Таким веществом оказался калий роданистый в концентрации ЗМ (р<0,00!) (рис. 2). При этом среднее значение индекса авидности в группе заболевших дифтерией составило 17,5%, а в труппе не заболевших дифтерией - 64%.

> Индекс авидности АТ-АТу незаболевших дифтерией

(%)

□ Индекс авидности АТ-АТ у заболевших дифтерией (%)

Рис. 2. Результаты определения индексов авидности антитоксических антител в двух группах сывороток.

На основании полученных данных установлено, что индекс авидности более 30% соответствует вероятности защиты от заболевания дифтерией на 95 %, а индекс авидности 10 % является показателем критического уровня, ниже которого вероятность заболевания возрастает до 99% (р<0,001).

Из полученных данных также следует, что определение индекса авидности антител имеет наибольшую достоверность при определении защищенности от дифтерийной инфекции (99%), чем уровень суммарных антитоксических антител (71%), о чем было сказано ранее. Этот факт

объясняет, почему возникали случаи заболевания дифтерией среди лиц, имеющих в крови защитные уровни суммарных антител.

НА (961

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

20-29 ле-60-39 лет»0-49 лет 50 и >

Рис. 3. Индексы авидности (%) антитоксических антител у различных возрастных групп здоровых лиц.

Контрольная Медицинские Рабочие сферы Рабочие

группа работники обслуживания промышленных

предприятий

Рис. 4. Индексы авидности (%) антитоксических противодифтерийных антител в крови лиц различных профессиональных групп. По индексу авидности антитоксических противодифтерийных антител выделены группы риска среди населения: лица старше 50 лет (рис. 3), рабочие промышленных предприятий, особенно занятые на вредном

производстве (рис. 4), лица, страдающие туберкулезом, гепатитом С, СПИД, наркоманией и алкоголизмом (рис. 5).

Рис. 5. Индексы авидности (%) антитоксических противодифтерийных

антител у лиц с различными заболеваниями.

Результаты исследования показали, что в отличие от здорового населения у лиц, имеющих хроническое инфекционное заболевание, наблюдается значительное снижение не только количественного показателя защищенности, но и качественного (авидности). Так, у лиц, страдающих туберкулезом, гепатитом С, СПИД, отмечаются низкие индексы авидности антител (около 30%) наряду с низким содержанием общего количества антител. Очевидно, патогенез развития этих заболеваний, связанный как с возможными генетическими особенностями формирования иммунной системы у заболевших, так и угнетением клеточного и гуморального звеньев иммунитета возбудителем дифтерии, оказывает неблагоприятное влияние на иммунный ответ и тормозит выработку специфических противодифтерийных антител в достаточном количестве и высокого качества в ответ на вакцинные препараты.

Полученные данные об антитоксическом иммунном ответе у лиц, страдающих наркоманией и алкоголизмом, показали, что наряду с низким содержанием антител и высокой долей среди них лиц, восприимчивых к дифтерии по количеству антител, эта группа имеет в крови антитела со средним индексом авидности 31%. Данный факт во многом объясняет

причину высокой заболеваемости дифтерией во время последней эпидемии среди лиц с указанными заболеваниями.

Комплексная оценка противодифтерийного поствакцинального иммунитета

В результате проведенных исследований установлено, что группа лиц, заболевших дифтерией, в среднем содержала в крови 0,27 МЕ/мл антитоксических противодифтерийных антител, а средний индекс авидности составил 17,5%. Каждый из этих отдельно взятых показателей является защитным. Однако регистрация заболеваний в данной группе подтвердила вывод о необходимости использования двух показателей для оценки защищенности от дифтерии: количества антител и индекса их авидности (рис. 6).

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

! ••• .. Л • в »д » «в • в

| • • • "в1* . в 9 * 8 в • №

• о € * • 2 • •

# О й • • I • •

~ ® • 8 - - © ..... т ® • • •

я <0 О- 1Ь

о о о е 0 •

ш • О • •

1оО " Щ>о о о о т щ, о

0,0010,01 п.1 ДТ-АТ (МЕ/мл)

О Индекс авидности АТ-АТ у заболевших дифтерией (%) • Индекс авидности АТ-АТ у незаболевших дифтерией (%)

Рис. 6. Распределение показателей количества и качества противодифтерийных антитоксических антител у лиц из разных групп

обследования.

Комплексный показатель (КП), полученный на основании данных о количестве АТ-АТ и ИА, указывает на вероятность заболевания дифтерией у данного обследуемого в случае его контакта с дифтерийным больным или бактерионосителем. При этом коэффициент Стьюдента (Г) = 16,4; достоверность (р) < 0,001. А коэффициент Фишера (Т7) = 83,7, р < 0,001.

Наиболее достоверные результаты, подтверждающие данный вывод, получены при использовании дискриминантного анализа. При этом степень достоверности выведенных формул была наивысшей (р=5,64Е-26). В результате примененного статистического анализа были выведена формула

расчета вероятности заболевания человека дифтерией по двум известным показателям: АТ-АТ и ИА путем использования их производной - КП. Для этого сначала рассчитываем функцию для лиц, не заболевших дифтерией: у0= -3,805 + 0,49 • КП, (2)

где КП = АТ-АТ'ИА (3)

Затем рассчитываем функцию для лиц, заболевших дифтерией:

у ¡=-0,713 + 0,017'КП (4)

Если значение у/ > у0 , то вероятность заболеть дифтерией выше, чем не заболеть. Для расчета вероятности заболевания дифтерией (ВЗд) получена следующая формула:

ВЗд = 0,82 - 0,05' КП (5)

Показатель вероятности заболевания может варьировать от 0 до 1: чем выше показатель, тем выше вероятность заболевания.

Таким образом, с помощью полученных формул оказалось возможным рассчитать вероятность заболевания дифтерией для любого лица, контактировавшего с источником С.сИрЫкег1ае, после исследования его сыворотки крови с учетом двух показателей: АТ-АТ и ИА.

Поскольку авидность антител имеет определяющее значение при оценке защищенности от дифтерии, необходимо было установить: какова динамика их накопления и утраты. Для этого использовали образцы сывороток крови взрослых здоровых лиц на каждый срок после ревакцинации через определенные промежутки времени: через 1 месяц, через 3 месяца и так далее - до 6 лет, после этого - с интервалом 6 месяцев до 10 лет после очередной ревакцинации. У всех обследованных в сыворотке крови определяли два показателя: АТ-АТ и ИА. В результате были получены данные динамики накопления и созревания высокоавидных антител, а затем-их снижения по количественному и качественному показателям.

Установлено, что созревание высокоавидных антител достигает максимума в среднем через год после ревакцинации, в то время как наибольшее количество суммарных антитоксических антител образуется через 6-9 месяцев. Период регрессии для суммарных антител более длителен, чем для высокоавидных: через 5 лет после очередной ревакцинации индекс авидности антител достигает минимального (критического) уровня (10%), в то время как количественное содержание антитоксических антител остается в пределах защитных уровней (0,1-0,5 МЕ/мл) и снижается до критических значений (0,01 МЕ/мл) к 7-8-му году после ревакцинации (рис. 7).

-----Авидность АТ-АТ (%) -Уровень суммарных АТ-АТ (Щ/т!)

Рис. 7. Динамика формирования и снижения уровней антитоксических антител и индекса их авидносги после ревакцинации.

Поскольку авидность антител, защищающая от заболевания дифтерией, снижается быстрее, чем количественный показатель суммарных антител, то при прогнозе заболеваемости необходимо ориентироваться на индекс авидности антител. Для этого на графике, представляющем собой математическую модель из исходных данных о динамике индексов авидности после ревакцинации, (рис. 8.) находим значение, наиболее приближенное к полученному индексу авидности антител (с учетом прошлой вакцинации, если она была провидена в ближайший год) и определяем по графику: через сколько месяцев индекс авидности снизится до критической отметки (10%). Очередную ревакцинацию (или повторное исследование) рекомендуется пройти до этой даты.

Таким образом, на основании двух показателей антитоксических антител возможно с вероятностью, приближенной к 100%, (при показателе достоверности (р < 1 • 10"5)) определить срок, когда произойдет снижение показателей до критически нижнего значения (10%).

ревакцинации (месяцы). Средняя погрешность модели = 5%.

Рис. 8. Математическая модель динамики индексов авидности после ревакцинации.

Известно, что в клинической практике большую трудность представляет дифференциальная диагностика легких и стертых форм от бактерионосительства С.&рЫкепае. Нами изучены образцы крови носителей С.сИрЫкепае и больных дифтерией, у которых кровь взята на 2-3 день от начала заболевания и исследована по двум показателям: АТ-АТ и ИА (рис.

9).

ОНА у больных дифтерией(%)

• ИА у носителей С.сПрМепае

0,8

Рис. 9. Распределение показателей антитоксических антител (АТ-АТ) и индексов авидности (ИА) у больных дифтерией и носителей С.сИркИепае.

ИА(%)

-эсг 80 70 60 50 40 30 20 10 0

0 0,2 0,4 0,6 Акт (Шил)

При статистической обработке данных, характеризующих уровни АТ-АТ в двух группах, попарно было выявлено, что разница в этих показателях между двумя группами недостоверна (/=1,14; р= 0,25). Поэтому ранее не удавалось с помощью одного показателя (уровня антитоксических антител) дифференцировать случаи заболеваний и бактерионосительства. При сравнении попарно показателей ИА в двух группах, разница между ними оказалась достоверной (/=4; р<0,05). Средний ИА в группе носителей C.diphtheriae составил 57% в то время, как в группе больных дифтерией был равен 13%.

Полученный ранее критический уровень ИА антител, равный 10%, и уровень повышенной вероятности заболевания дифтерией, равный 30%, применим в диагностической практике. Дифференциальная диагностика заболевания и носительства становится возможной благодаря исследованию сывороток в модифицированном варианте ИФА с определением индекса авидности антитоксических противодифтерийных антител.

Характиристика основных биологических свойств штаммов C.diphtheriae, выделенных в постэпидемический период

По данным центров Госсанэпиднадзора среди выделенных в 2000-2009 гг. штаммов С. diphtheriae в Санкт-Петербурге, Ленинградской и Вологодской областях, наблюдается четко выраженная тенденция: снижение общего количества выделенных штаммов, ремиттирующее уменьшение среди них доли варианта- gravis (с 45% в 2000 г. до 10% в 2009 г.) и значительное снижение доли токсигенных штаммов (с 24% в 2000 г. до 2% в 2009 г.).

В последние годы постэпидемического периода (2006-2008 гг.) у 169 изученных штаммов заметно возросла адгезивная активность. С 2003-2004 гг. доля высокоагезивных штаммов увеличилась в 2 раза. Следует отметить, что 66% высокоадгезивных штаммов С. diphtheriae выделены от лиц, обследованных с профилактической целью. Как показали проведенные нами исследования, высокой степенью адгезивной активности обладали штаммы, изолированные от бактерионосителей, которые, надо полагать, поддерживают скрытую циркуляцию эпидемически-значимых штаммов С. diphtheriae. Увеличение среди них доли высокоадгезивных штаммов создает в настоящее время благоприятные условия для более широкой циркуляции их среди населения.

При изучении токсигенных свойств штаммов методами (Е1ек-тест, ICS и РИГА под контролем ПЦР) установлено, что в последние годы произошло изменение степени токсигенности штаммов С. diphtheriae. Так, если в 19941995 гг. слаботоксигенные штаммы (Ti) составляли около 40% от общего

числа изученных токсигенных культур (173), в 2003-2004 гг. их доля составила 30% от 308 штаммов, в 2006-2008 гг. - около 25% от 169 штаммов. В то же время доля средне- и высокотоксигенных штаммов (Т2 и Т3) возросла и к 2006-2008 гг. составила 75%.

Установлено также, что доля штаммов с «молчащим» геном, циркулирующих в Санкт-Петербурге, Ленинградской ' и Вологодской областях, возрастала. Так, в коллекции штаммов, изолированных в 2003-2004 гг. она составила 23%, а к 2006 -2008 гг. возросла до 40%.

В результате проведенных исследований по определению чувствительности штаммов С.сИрМкпае к антибиотикам установлено, что уровни минимальной подавляющей концентрации (МПК) наиболее эффективного в отношении С. сИрЫкепае антибиотика, рифампицина, увеличились на 23% с 1994 до 2009 г. МПК второго по эффективности препарата, эритромицина, за этот же период возросла на 18%, пенициллина -на 20%, кларитромицина - на 21%, азитромицина - на 17%. МШС тетрациклина для штаммов, выделенных в 2008-2009 гг., осталась на уровне чувствительности штаммов, выделенных в 1994 - 1995 гг. (таблица 2).

Таблица 2.

Изменение МПК антибиотиков к штаммам C.diphtheriae в динамике

Годы выделения штамма Значения МПК (мкг/мл) ±_т следующих антибиотиков

Рифам пицин Эригро МИНИН Пеницил ЛИН Тетра ЦИКЛИН Кларитро мицин Азитро мицин

1994-1995 я=22 1,0+0,5 2,0+0,1 0,1+0,01 0,15+0,01 4,0+0,2 4,0+0,5

2003-2004 л=27 2,0+0,1 4,0+0,5 0,25+0,02 0,15+0,01 4,0+0,2 4,0+0,4

2008-2009 я=!8 4,0+0,2 4,0+0,4 0,5+0,025 0,15+0,01 8,0+0,5 8,0+0,4

Следует отметить, что устойчивость штаммов С. diphtheriae var. mitis к рифампицину, эритромицину и пенициллину в среднем на 15% выше, чем у штаммов С. diphtheriae var. gravis за указанный период наблюдения. Учитывая, что в настоящее время среди циркулирующих в Санкт-Петербурге и Ленинградской области большинство штаммов С. diphtheriae составляют микроорганизмы варианта mitis, то представляется актуальным выбор адекватного препарата для антибактериального лечения дифтерии.

Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения и вращающихся магнитных полей на адгезивность, токсигенность и чувствительность к антибиотикам штаммов С. diphiheriae in vitro.

Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) на штаммы С.diphiheriae выражалось в общей тенденции - снижении адгезивной активности у изучаемых штаммов. Время облучения при этом имело определяющее значение: чем продолжительнее микроорганизмы облучались НИЛИ (от 5 до 15 минут), тем больший эффект достигался в конце эксперимента.

После воздейстивя на колонии C.diphthenae вращающихся магнитных полей (ВМП) наблюдали повышение адгезивной активности; при этом на различия показателей оказывали влияние все составляющие эксперимента: направление вращения вектора поляризации, ориентация полюса магнита, экспозиция.

Наибольшее влияние на адгезизную активность С.diphiheriae оказывало левовращающееся магнитное поле южной ориентации. Уже через 5 минут от начала воздействия на штаммы ВМП 40% из них усилили свою адгезивную активность, а через 15 минут воздействия - 60% штаммов (рис. 10).

□ Увеличение адгезии (% штаммов) за 5 мин я Увеличение адгезии (% штаммов) за 15 мин

Рис. 10. Увеличение адгезивной активности штаммов С.diphtheriae под влиянием ВМП (в %).

Установлено также, что НИЛИ влияет на изменение уровней токсинопродукции штаммов С.сИрИЛепае и, что особенно важно, на восстановление токсинопродукции у штаммов, несущих «молчащий» (Юх+) ген. Поэтому этот физический фактор использовали при разработке экспресс-способа выявления токсигенных штаммов САгрЫкепае.

Разработка экспресс-способа для выявлении штаммов С.сИрМИепае с «молчащим» геном и слабой токсинопродукцией.

При разработке экспресс-способа применяли лазерный прибор для микробиологических исследований «Барва ЛГТМИ - 01» производства Харьковского НИИ лазерной биологии и лазерной медицины.

До начала эксперимента все нетоксигенные штаммы С.сИрЫкепае были изучены в ПЦР на наличие (юх+) гена, токсигенные - в РНГА на определение уровня токсинопродукции, а также в Е1ек- тесте, регламентированном нормативными документами. На выросшую в чашке Петри культуру воздействовали НИЛИ. После этого штаммы повторно изучали в Е1ек-тесте и РНГА. Выбор наиболее информативных показателей лазерного излучения, при которых достигался максимальный эффект индукции токсигенности у штаммов определялся опытным путем (рис. 11). Видно, что оптимальными параметрами являются: время воздействия - 5 минут, мощность плотности излучения на поверхности колоний 3 мВт/см , длина волны источника излучения - 660 нм.

Зависимость эффективности воздействия от экспозиции, минуты

Зависимость эффективности воздействия от мощности излучения, мВт/см2

Зависимость эффективности воздействия от длины волны, нм

2 3 4 2,5 3,5 2 3 4 625 635 645 655 665 675 685 695

Рис. 11. Экспериментальный подбор оптимальных условий для получения максимального эффекта.

После воздействия НИЛИ на штаммы С. diphtheriae с «молчащим» геном, у 45% из 80 штаммов наступало восстановление токсинопродукции, регистрируемое в РИГА и Е1ек-тесте. По сравнению с другими методами (in vivo и in vitro), восстанавливающими токсинопродукцию у С. diphtheriae с «молчащим» геном, воздействие НИЛИ позволило получить положительные ответы на 10% больше и в короткий срок (рис. 12).

% ! сутки

40 35 30 25 20 15 10 5 0

Среда 199+Se Пассажи на Воздействие КРС морских НИЛИ

свинках

Рис. 12. Сравнение эффективности методик по частоте и продолжительности восстановления токсинопродукции у штаммов С. diphtheriae, несущих «молчащий» ген.

О1 стимулирующем действии НИЛИ на токсинопродукцию можно было также судить на основании данных, полученных при его воздействии на токсигенные штаммы с различной степенью токсигенности (рис. 13).

Если условно исходную токсигенность принять за 1 (светлые столбики), то в результате воздействия НИЛИ в течение 5 мин на штаммы со слабой токсинопродукцией (Т,) ее уровень возрастал в среднем в 2 раза, у штаммов со средним уровнем токсинопродукции (Т2) - в 1,8 раза, у штаммов с высокой токсинопродукцией (Тз) - в 1,4 раза.

Усл. ед.

2 -1,8 -1,6 "

1,4 -1,2 " 1 -0,8 -0,6 -0,4 -0,2 -0 —-

Слаботоксигенные Среднетоксигенные Высокотоксигенные штаммы (п=20) штаммы (п=20) штаммы (п=20)

Примечания:

0 исходный уровень токсинопродукции, принятый за 1; Щ уровень токсинопродукции после воздействия НИЛИ. Рис. 13. Изменение токсинопродукции у штаммов после воздействия лазером Таким образом, полученные данные указывают на целесообразность использования НИЛИ как дополнительного приема для индукции токсигенности у штаммов с «молчащим» геном, а также при сомнительных результатах, полученных при определении токсигенности стандартными фенотипическими методами, что позволяет повысить диагностическую эффективность определения токсигенности у С. diphtheriae.

Новые биомикротехнологии для повышения эффективности выявления токсинообразования штаммами С. diphtheriae in vitro Аналитическая система для реализации экспресс-способа диагностики токсигенных штаммов состоит из двух составляющих: иммунобиологической (латексный диагностикум) и приборной части (микроридер со сменными чипами).

В основу создания диагностикума положена реакция взаимодействия антигена и антитела, где в качестве антигена представлен дифтерийный токсин (анатоксин), а в качестве антитела - фракция высокоавидных антител, полученных в результате последовательного фракционирования антитоксических сывороток крови. Полученные высокоактивные (не менее 2,5 МЕ/мл) и высокоавидные антитела с индексом авидности не менее 90% сенсибилизировали путем химической сорбции на поверхности полиакриламидных латексных частиц диаметром 0,81 мкм для получения дифтерийного антительного диагностикума.

Таким образом, создание оптимальных характеристик способа достигалось, с одной стороны, созданием наиболее чувствительных компонентов диагностикума (высокоавидная фракция высокоактивных антител), использованием современных технологий получения полиакриламидного латекса и сорбции на них антител, с другой стороны - за счет совершенствования приборной части (рис. 14).

Рис. 14. Ридер с микроплатформами.

Микроридер с подсветкой и микрокамерой имеет рабочие размеры 4x5x6 см, биочипы размером 16x16 мм с различным количеством (от 1 до 96) лунок.

Результаты реакции могут фиксироваться в заданном или произвольном режиме оператором в памяти компьютера в виде фотоизображений или видеоролика. В процессе апробации способа создана база данных визуальных образов положительных и отрицательных контролей, а также проб с известным содержанием токсина. При определении содержания токсина в пробе с помощью базы данных достигается получение достоверного ответа о наличии в пробе дифтерийного токсина. Автоматизация процесса считывания результата позволяет повысить объективность разработанного способа (рис. 15).

а) положительный контроль

б) отрицательный контроль В. 11 пробы

Рис. 15. Фотоизображения результатов реакции в микроаналитической

системе.

Разработанный экспресс-способ обладает высокой диагностической эффективностью. При количественной оценке чувствительность способа составила 0,001 ЬГ/ш1 дифтерийного токсина, что выше показателей любого имеющегося в настоящее время метода детекции дифтерийного токсина.

Из всех фенотипических методов разработанный способ обладает наилучшими показателями по скорости пробоподготовки, проведения реакции, а также возможности одновременной постановки большого

Рис. 16. Сравнение диагностической эффективности различных методов определения токсигенности у штаммов С.сИрМкепае.

Таблица 3

Сравнение экспресс- способа определения дифтерийного токсина с другими фенотипическими методами

Методы Время подготовки теста Время проведения реакции Возможность одновременной постановки проб

Е1ек-тест 18-24 часа 18-48 часов До 16 на одну чашку Петри

РИГА 18-24 часа 2 часа До 9 проб на один планшет

1С8-тест 18-24 + 3 часа 15 мин До 50 за один поход

Биочиповый тест 6 часов 2-3 мин До 94 проб на одном чипе

Таким образом, в условиях ослабления внимания к дифтерийной инфекции, частого применения антибиотиков без установления этиологического фактора, разработка экспресс-способа определения токсигенных штаммов С. ЛрЫИеггае позволяет повысить качество лабораторной диагностики за счет высокой чувствительности способа, специфичности, удобства постановки, мобильности, портативности, быстроты проведения и' учета реакции, возможности одновременной постановки на одном чипе до 94 проб, а значит, возможности применения данного метода не только в единичных лабораторных исследованиях, но и при массовых обследованиях населения. Автоматизация процесса считывания информации делает результаты реакции объективными.

Наличие факторов патогенности не только у С. сИрЫИепае, но и других представителей рода СогупеЬаЫепит, их изменчивость под влиянием внешних факторов предопределили исследования данных микроорганизмов. Для улучшения дифференциальной диагностики при выделении от больного коринеформных палочек были предложены ряд описательных текстов, схем и таблиц биохимического и морфологического типирования, прописи питательных сред в виде методических рекомендаций.

С целью оперативного получения комплексной информации о заболеваемости дифтерией, состоянии защищенности населения от инфекции, циркуляции штаммов С. сИркЛепае, их характеристики созданы соответствующие базы данных, которые включены в геоинформационную систему локального уровня (Санкт-Петербург). Получение пространственно-

временной характеристики любого компонента, представленного в базе данных, является инструментом для мониторинга и позволяет корректно оценивать полученную информацию и составлять план дальнейших действий для предотвращения заболеваний и улучшения лабораторной диагностики.

ВЫВОДЫ

1. Высокоавидные антитоксические антитела играют определяющую роль в формировании иммунитета против дифтерии. Для оценки защищенности привитых разработан количественный показатель -индекс авидности (ИА) антитоксических антител. ИА >30 % свидетельствует о защищенности от заболевания дифтерией (р<0,05); ИА = 10 % является показателем критического уровня, ниже которого вероятность заболевания возрастает до 99% (р<0,001). ИА противодифтерийных антитоксических антител различаются у больных легкими формами дифтерии и здоровых носителей С. diphtheriae (р<0,05) и могут служить дифференциально-диагностическим критерием различий между этими формами.

2. После ревакцинации показатели количественного содержания антитоксических антител и индекс их авидности постепенно снижаются и достигают критических уровней 0,01 МЕ/мл и 10 % через 8-9 и 5 лет, соответственно. Для оценки противодифтерийного индивидуального и коллективного (в группах риска) иммунитета, риска заболевания ревакцинированных и планирования срока очередной ревакцинации целесообразно использовать оба показателя.

3. Выявлено изменение биологических свойств (адгезивность и продукция токсина) С. diphtheriae, выделенных в постэпидемический период (2000-2009 гг.). Адгезивность штаммов С. diphtheriae (особенно выделенных от контингентов закрытых учреждений, обследованных с профилактической целью) возросла в 2 раза. Доля штаммов С. diphtheriae, несущих tax-ген, возросла до 40% среди нетоксигенных в Е1ек-тесте штаммов. В среднем, на 20% снизилась доля штаммов, чувствительных к антибиотикам, используемым для лечения больных дифтерией и санации носителей С. diphtheriae.

4. Воздействие in vitro низкоинтенсивного лазерного излучения с длиной волны 660 нм, плотностью мощности излучения 3,0 мВт/см2 на поверхности колоний бактерий в течение 5 минут повышала продукцию дифтерийного токсина токсигенными штаммами С. diphtheriae в 2 раза и стимулировала выработку токсина у 45 % штаммов, содержащих «молчащий» tox-ген.

5. Воздействие вращающихся магнитных полей повышает адгезивность штаммов С. diphtheHae in vitro. Под влиянием левовращаюздегося магнитного поля южной ориентации в зависимости от экспозиции, 5 и 15 мин, возрастала адгезивность с 40% до 60% штаммов, соответственно.

6. На основе новых биомикротехнологий с использованием противодифтерийных антитоксических высокоавидных антител человеческой иммунной сыворотки разработан автоматизированный экспресс-способ диагностики токсигенных С. diphtheriae in vitro (чувствительность 0,001 Lf/ml дифтерийного токсина).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ На основании всех проведенных расчетов предложен алгоритм контроля иммунитета населения и оценка невосприимчивости к дифтерии как отдельных лиц, так и коллективов:

1. Взятие крови, заполнение анкеты в Е1Д (возраст, прививочный статус, профессия, хроническое заболевание, дата заболевания)

2. Определение АТ-АТ и ИА

3. Определение вероятности заболевания по формулам

4. Определение сроков ревакцинации или повторного контроля иммунитета

Разработка способа усиления токсинопродукции штаммами

СЖрЫИепае и высокочувствительного экспресс-способа выявления

дифтерийного токсина позволили разработать алгоритм

микробиологического исследования клинического материала на поиск С.сИрЫИегше:

I. Выделение из клинического материала коринебактерий. Определение вида и биохимического варианта

2. Определение токсигенногти с помощью Elek-теста. Определение токсигенности в ПЦР

3. В ПЦР (tox-) Е1ек-тест -

3. В ПЦР (tox+), Е1ек-тест -

"ЛИС:

-J L—

4. C.diphtheriae(tox-)

4. - НИЛИ

- Микрочиповый тест

С. diphtheriae(tox+)/ (tox-)

Список работ, опубликованных но теме диссертации

1. Kraeva L.A. Ways of optimization of monitoring and prophylaxis of diphtheria infection. / L.A. Kraeva, S.B. ICrayev, G.Ya. Tseneva. H Eighth International Meeting of ELWG on Diphtheria. - Copenhagen. - 2004. -Abstr. Book A 5.9.-P. 55.

2. Краева Л.А. Качественные показатели антитоксических антител в оценке противодифтерийного иммунитета / Л.А. Краева, Ф.С. Носков, Г.Я. Ценева // Ж. мед. иммунол. - СПб. - 2005. - т. 7. - № 2-3. - С. 274.

3. Ценева Г.Я. Влияние физических факторов (лазерное и радиоволновое воздействие нетепловой интенсивности) на токсинопродукцию Corynebacterium diphtheriae / Г.Я. Ценева [и др.] // Мат-лы XXIII Межд. научно-практ. конф. «Применение лазеров в медицине и биологии». -Николаев. - 2005. - С. 96-97.

4. Ценева Г.Я. Методы определения токсигенности у штаммов С.МрМктае / Г.Я. -Ценева, Л.А. Краева, С.А. Габриеля», Е.Е. Щедеркина // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - Иркутск. - 2005. -№7. - С.182-186.

5. Ценева Г.Я. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на биологические свойства СогупеЬа&епит сИрЫЪепае / Г.Я. Ценева, В.А. Грабина, Л.А. Краева // Мат-лы XXIV Межд. научно-практ. конф. «Применение лазеров в медицине и биологии». - Николаев. - 2005. - С. 145-146.

6. Ценева Г.Я. Экспериментальное изучение специфической активности противодифтерийных препаратов Кодивак и АД-М-анатоксин / Г.Я. Ценева [и др.] // Ж-л «Эпидемиология и вакцинопрофилактика». - 2005. - № 6 (25). - С. 25-27.

7. Краева Л.А. Чувствительность С.сИрЫИепае к антибактериальным препаратам и эффективность их клинического применения / Л.А. Краева [и др.] // Мат-лы научно-практич. конф. «Инфекционные болезни: проблемы здравоохранения и военной медицины» - СПб. -2006.-С. 170.

8. Краева Л.А. Влияние факторов физико-химической природы на чувствительность к антибиотикам микроорганизмов рода С.сИрЫИепае / Л.А. Краева // Мат-лы Всеросс. научно-практич. конф. «Антибиотикорезистентность и антимикробная химиотерапия». -Махачкала. - 2006. - С. 96-98.

9. Ценева Г.Я. Перспективы использования лазерного излучения низкой интенсивности в диагностике и лечении дифтерийной инфекции / Г.Я. Ценева, В.А. Грабина, Л.А. Краева. // Мат-лы XXV Международной научно-практической конференции «Применение лазеров в медицине и биологии». - Луцк. - 2006. - С. 86-87.

Ю.Краева Л.А. Использование геоинформационных систем для мониторинга инфекционных заболеваний / Л. А. Краева, С.Б. Краев, ■ Г.Я. Ценева // Материалы VII Межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ. - Оболенск. -2006.-С. 260-261.

11 .Tseneva G.Ya. Definition high-avidity antidiphtherial anti-bodies and their value in protection against of diphtheria / G.Ja. Tseneva, A.M. Nikolaeva, L.A. Kraeva // Ninth International Meeting of the European Laboratory Working Group on Diphtheria, ELGWD and Diphtheria Surveillance Network (DIPNET). - Vouliagmeni, Greece. - 2006. - P. 56.

12.Kraeva L.A. Some performances of adhesive and toxicogenic properties C. diphtheriae, isolated in Saint Petersburg in the postepidemic period /' L.A. Kraeva // Ninth International Meeting of the European Laboratory Working Group on Diphtheria, ELGWD and Diphtheria Surveillance Network (DIPNET). -Vouliagmeni, Greece. - 2006. - P. 51.

13.Патент на изобретение «Способ контроля биологической пробы в реакции латекс-агглютинации и аналитическая система для его осуществления». - № 2298798 от 10.05.2007. - Авторы: Зимина Т.М., Лучинин В.В., Мигунова В.Е., Краева Л.А., Ценева Г.Я., Меньшикова А.Ю., Шабсельс Б.М., Дулатова М.В., Шпилюк Г.Ф.

14.Ценева Г.Я. Влияние последовательного воздействия вихревых магнитных полей и лазерного излучения низкой интенсивности на биологические свойства коринебактерий дифтерии / Г.Я. Ценева, Л.А. Краева, В,А. Грабина // Материалы XXVII Международной научно-практической конференции «Применение лазеров в биологии и медицине». - Харьков. - 2007. - С. 131-133.

15.Краева Л.А. Определение токсигенности у штаммов С. diphtheriae, циркулирующих в постэпидемический период в Северо-Западном округе РФ / Л.А. Краева [и др.] // Материалы всероссийской научной

конференции «Современные проблемы медицинской микробиологии». -СПб.-2007.-С. 82-87.

lô.Tseneva G. Laboratoire des infections bactériennes respiratories / G.Tseneva [at al.] // Rapport d'actevite des departments de recherché en 2006-2007. -2007. — P.13-15.

17.Краева JI.A. К вопросу об этнологическом значении Corynebacterium non diphtheriae у больных с различной патологией I JI.A. Краева [и др.] // Ж-л микробиол. и эпидемнол. - 2007. - № 5. - С. 3-7.

18.Ценева Г.Я. Использование лазерного излучения низкой интенсивности в диагностике и лечении заболеваний, вызванных коринебактериями / Г.Я. Ценева, JÏ.A. Краева, В.А. Грабина // Материалы XXVIII Международной научно-практической конференции «Применение лазеров в биологии и медицине». - Ялта. - 2007. - С. 113- 116.

19.Пунченко О.Е. Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций / О.Е. Пунченко [и др.] // Учебное пособие / под ред. Бадикова В.Д. - СПб. - 2007. - 70 с.

20.Краева JI.A. К вопросу о протективных противодифтерийных антителах и методика их определения / JI.A. Краева // Материалы всеросс. научно-практич. конф. «Создание и перспективы применения медицинских иммунобиологических препаратов». - Пермь. - 2008. - С. 58-59.

21.Краева JI.A. Новые подходы к оценке защищенности от дифтерийной инфекции I JI.A. Краева [и др.] II Материалы 4-ой международной конференции «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями». — СПб. - 2008. -С. 15.

22.Kraeva L. Way the express diagnostics of toxin -positiv strains C.diphtheriae / L. Kraeva, G. Tseneva, T. Zimina // Tenth International Meeting of the European Laboratory Working Group on Diphtheria, ELWGD. - Larnaca, Cyprus.-2008.-P.26.

23.Tseneva G. Influence of factors of an environment on biological properties Corynebacterium / G. Tseneva, L, Kraeva, V. Grabina // Tenth International

Meeting of the European Laboratory Working Group on Diphtheria, ELWGD. - Larnaca, Cyprus. - 2008. - P.34.

24.Ценева Г.Я. Влияние факторов химической и физической природы на биологические свойства коринебактерий / Г.Я. Ценева, Л.А. Краева,

B.А. Грабина // Второй Санкт-Петербургский международный экологический форум «Окружающая среда и здоровье человека». -СПб.-2008.-С. 13.

25.Патент на изобретение «Способ определения токсигенности бактерий Corynebacterium diphtherial?» № 2370539 от 20.10.2009. - Авторы: Краева Л.А., Ценева Г.Я., Коробов A.M., Грабина В.А.

26.Беспалова Г.И. Дифтерия (современные методы лабораторной диагностики): руководство для врачей / Г.И. Беспалова, Л.А. Краева, Г.Я. Ценева, О.Е. Пунченко - СПб. - 2009. - 44 с.

27.Краева Л.А. Особенности биологических свойств C.diphtheriae, циркулирующих в постэпидемическнй период / Л.А. Краева, Г.Я. Ценева //Ж-л микробиол. и эпидемиол. - 2009. - №3. - С.3-6.

28.Tseneva G.Ya. Way of (he accelerated definition toxin production

C.diphtheriae / G.Ya. Tseneva, L.A. Kraeva, V.A. Grabina // Eleventh International Meeting of the European Laboratory Working Group on Diphtheria, ELWGD. - Riga, Latvia. - 2009. - P.28.

29.Алексеева E.A. Изучение эффективности различных методов диагностики в определении токсигенности у штаммов С. diphtheria / E.A. Алексеева, Л.А. Краева // Мат-лы Пленума Научн. совета, посвящ. 65-летию Росс. акад. мед. наук и 130-летию со дня рождения академика АМН СССР А.Н. Сысина. - 2009. - с. 113-114.

. 30.Tseneva G. Laboratoire des infections bactériennes respiratoires / G. Tseneva [at al.] // Rapport d'activité des departments de recherché EN 2008-2009. -Saint-Petersburg. - 2009. - P. 12-14. 31.Краева Л.А. Влияние факторов физической и химической природы на биологические свойства коринебактерий / Л.А. Краева [и др.] //

Вестник Российской военно-медицинской академии. - 2009 - № 4 (28).-С. 146-147.

32.Ценева Г.Я. Скрининговые исследований иммунитета к дифтерии и коклюшу в Санкт-Петербурге и проблемы контроля невосприимчивости / Г.Я. Ценева, JI.A. Краева, H.H. Курова // Мат-лы междунар. конф. «Развитие научных исследований и надзор за инфекционными заболеваниями». -СПб. -2010. - С. 82.

33.Ценева Г.Я. Фенотипическая идентификация бактерий рода Corynebacterium / Ценева Г.Я. [и др.] // Методические рекомендации. — Москва.-2010.-76 с.

34.Краева JI.A. Способ ускоренного определения токсигениости С. diphtheriae / JI.A. Краева [и др.] // Вестник Российской военно-медицинской академии. - 2010 - № 4 (32).- С. 144-147.

35.Ценева Г.Я. Уровень антитоксического противодифтерийного иммунитета у населения Северо-Западного Округа РФ н пути оптимизации мониторинга инфекции / Г.Я. Ценева, JI.A. Краева, Е.Е. Щедеркнна И Эпидемиология и вакцинопрофилактика. — 2010. -№5(54).-С. 51-54.

36.Краева Л.А. Изменение чувствительности к антибиотикам у микроорганизмов рода Corynebacterium в Санкт-Петербурге и Ленинградской области / Л.А. Краева II Здоровье населения и среда обитания. - 2011. - № 2. - С. 18-22.

37.Краева Л.А. Микротехнологии в экпресс-диагностике токсигенных штаммов C.diphtheriae / Л.А. Краева [и др.] // Ж-л микробиол. и эпидемиол. - 2011. - № 3. - С. 62-66.

38.Афонина И.А. Бактерицидная активность коллоидного серебра в отношении представителей грамположительных и грамотрицательных бактерии / И.А. Афонина, Л.А. Краева, Г.Я. Ценева // Антибиотики и химиотерапия. - 2010. - № 9-10. - С. 11-13.

39.Краева Л.А. Роль высокоавидных антитоксических антител в оценке невосприимчивости к дифтерийной инфекции / Л.А. Краева [и др.] // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2011. - № 4. -20-24.

40.Краева Л.А. Микробиологическая характеристика клинически значимых бактерий рода СогупеЬааепит (обзор) / Л.А. Краева // Сибирский Медицинский Журнал. - 2011. -№ 1.-5-10.

Список сокращений:

АТ-АТ Антитоксические антитела

ВА АТ-АТ Высокоавидные антитоксические антитела

ВМП Вращающиеся магнитные поля

ГИС Геоинформационная система

ИА Индекс авидности

ИФА Иммуноферментный анализ

КП Комплексный показатель

ME Международные единицы

мпк Минимальная подавляющая концентрация

нили Низкоинтенсивное лазерное излучение

ОСК Образцы сыворотки крови

ПЦР Полимеразная цепная реакция

РАЛ Реакция агглютинации латекса

РН Реакция нейтрализации

РИГА Реакция непрямой гемагглютинации

РПГА Реакция пассивной гемагглютинации

СИБ Система индикаторных бумажек

СПА Средний показатель адгезии

D-ВМП Правовращающее магнитное поле

ICS Иммунохроматографический тест

IgG Иммуноглобулины класса в

L-ВМП Левовращающее магнитное поле

N-ориентация Северная ориентация

S- ориентация Южная ориентация

Подписано в печать 03.05.11 Формат 60x84/16

Обьем 1 п.л. Тираж 100 экз. Заказ № 330

Типография ВМА, 194044, СПб., ул. Академика Лебедева, б.

Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Краева, Людмила Александровна

Список использованных сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Характеристика дифтерийной инфекции в постэпидемическом периоде.

1.2. Противодифтерийный иммунитету взрослых.

1.2.1. Методы и средства определения антител.

1.2.2. Роль высокоавидных антител в иммунном процессе.

1.2.3.Современные проблемы обеспечения невосприимчивости к дифтерии.

1.3. Основные патогенные свойства C.diphtheriae, их изменчивость и методы определения.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Штаммы. Методы культивирования.

2.2. Основные патогенные свойства и антибиотикорезистентность коринебактерий.

2.2.1. Адгезивная активность.

2.2.2. Токсигенность C.diphtheriae.

2.2.3. Чувствительности к антибиотикам.

2.3. Иммунологические методы.

2.3.1. РН (реакция нейтрализации) в культуре клеток Vero.

2.3.2. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).

2.3.3. Иммуноферментный анализ (ИФА).

2.4. Экспресс-способ выявления дифтерийного токсина на основе микротехнологий.

2.5. Экспресс-способ выявления токсинообразоавания у штаммов С.сІірМНегіае.

2.6. Эпидемиологические методы.

2.7. Методы математической обработки данных.

2.8. Метод картографического анализа и компьютерной обработки данных.

Глава III. Характеристика антитоксического противодифтерийного иммунитета у населения Санкт-Петербурга, Ленинградской и Вологодской областей в постэпидемическом периоде.

3.1. Выбор и обоснование адекватного метода контроля поствакцинального иммунитета.

3.2. Характеристика иммунитета к дифтерии у населения из групп «риска».

Глава IV. Значение высокоавидных антител в невосприимчивости к дифтерии.

4.1. Разработка теста для определения авидности антитоксических антител и обоснование его достоверности.

4.2. Показатели авидности антитоксических антител в различных группах обследования.

4.3. Оценка защищенности от дифтерии с позиций количественно-качественной характеристики антитоксических противодифтерийных антител.

4.4. Динамика показателей авидности антител у взрослого населения

4.5. Определение авидности антител в ИФА для дифференциальной диагностики дифтерии и бактерионосительства.

Глава V. Характеристика Corynebacterium diphtheriae в постэпидемическом периоде.

5.1. Адгезивность.

5.2. Оценка токсигенности штаммов фенотипическими и молекулярно-генетическим методами.

5.3. Определение чувствительности штаммов С.diphtheriae к антибиотикам.

Глава VI. Влияние факторов электромагнитной природы на основные биологические свойства С. diphtheriae.

6.1. Влияние НИЛИ на биологические свойства C.diphtheriae.

6.1.1. Изменение адгезивности.

6.1.2. Изменение токсинопродукции.

6.1.3. Влияние НИЛИ на чувствительность штаммов C.diphtheriae к антибиотикам.:.

6.2. Влияние вихревых магнитных полей различной поляризации и направления вращения на биологические свойства C.diphtheriae

6.2.1. Изменение адгезивных свойств.

6.2.2. Изменение токсинопродукции.

6.2.3. Изменение чувствительности штаммов C.diphtheriae к антибиотикам.

6.3. Влияние последовательного воздействия НИЛИ и ВМП на штаммы C.diphtheriae.

Глава VII. Разработка новых способов выявления токсигенных штаммов

C.diphtheriae.

7.1. Экспресс-способ выявления дифтерийного токсина на основе микротехнологий.

7.1.1. Разработка диагностикума.

7.1.2. Конструирование микрочипового анализатора.

7.1.3. Апробация микроанализатора на стандартных препаратах токсина и диагностическом материале.

7.1.4. Оценка эффективности применения микрочиповой технологии для диагностики дифтерии.

7.2. Экспресс-способ выявления токсигенности у штаммов

C.diphtheriae с помощью низкоинтенсивного лазерного излучения

7.2.1. Разработка условий реализации экспресс-способа.

7.2.2. Оценка эффективности применения способа в модельных опытах.

Глава VIII. Совершенствование микробиологического мониторинга дифтерийной инфекции.

8.1. Новые методические подходы к контролю за состоянием противодифтерийного иммунитета у населения.

8.2. Микробиологический контроль за циркуляцией C.diphtheriae

8.3. Клиническая значимость недифтерийных коринебактерий и их дифференцирование от C.diphtheriae

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологические основы разработки новых технологий для диагностики и мониторинга дифтерии"

Актуальность проблемы

Эпидемии дифтерии с глубокой древности поражали человечество, перемещаясь по странам и континентам. До получения в 1892 г. Е.Берингом антитоксической сыворотки летальность при дифтерии достигала 50%. Однако защитить от заболевания и стать средством специфической профилактики мог лишь полученный впервые Рамоном анатоксин, нашедший свое применение с 1923 г. Начавшаяся в 40-х годах XX века широкомасштабная иммунизация позволила приостановить развитие эпидемий в странах, вступивших во Вторую мировую войну, и вместе с использованием в лечебных целях антитоксина снизить летальность до 15% (Ку/агйеэ V/., 1984). Возможность глобальной защиты от дифтерийной инфекции продемонстрирована на примере значительного снижения (почти в 10 раз) заболеваемости после того, как в 1980х годах дифтерийный анатоксин стал доступен во многих странах. При индексе * контагиозности 15-20% самым главным условием предотвращения заболевания становится специфическая профилактика (Са1агка АМ, 1995; Эмироглу Н., 2001).

Однако, несмотря на проводимую вакцинацию, эпидемии дифтерии периодически повторяются. Масштабная эпидемия дифтерии, поразившая в основном страны СНГ в 1990-х годах, помогла вскрыть недостатки специфической профилактики дифтерии и показала большую роль социальных факторов в создании условий, препятствующих распространению заболеваний среди широких слоев населения (Ценева Г.Я., 1995; ЕГБйайои А., 1996). Поэтому нельзя ожидать решения проблемы заболеваемости дифтерией лишь принятием мер по возможно полному охвату населения профилактическими прививками.

Без глубокого понимания механизма защиты, создаваемого вакцинными препаратами, трудно понять причину заболеваний среди привитых. Поэтому необходимы более глубокие исследования по характеристике специфических антител, вырабатываемых в ответ на вакцинацию против дифтерии. Разработка ВОЗ и повсеместное внедрение в практику оценочной шкалы защищенности от дифтерии на основании определения количества антитоксических антител позволили контролировать качество вакцинации (Efstratiou А., 1994). Однако информация о количестве вырабатываемых противодифтерийных антител не всегда дает достоверный ответ на вопрос о степени защищенности от дифтерии. Это было продемонстрировано во время последней эпидемии дифтерии в России и после нее, когда у заболевших (до 40% случаев) находили в крови антитоксические антитела защитных уровней (Васильев К.Г., 2002; Матохина А.Г., 2003; Харченко Г.А., 2003).

В современных условиях развитие биотехнологии позволяет разрабатывать эффективные методы диагностики, в том числе при дифтерийной инфекции, с высокой чувствительностью и специфичностью, и следовательно, получать более достоверные данные об иммунном ответе после вакцинации. Так, использование иммуноферментного анализа при оценке защищенности от многих вакциноуправляемых инфекций позволило перейти на новый уровень диагностики с не меньшей достоверностью получаемых результатов, чем при использовании «золотых» стандартов с использованием животных или культур клеток (Camargo et al, 1987). Поэтому в основе достоверности результата лежит достоверность самого метода диагностики.

Немаловажное значение в защите от дифтерии имеет также социальный фактор. Согласно данным ВОЗ на здоровье человека в 70% случаев влияют прежде всего условия и образ жизни человека, внешняя среда и природные условия (Эмироглу Н., 2001; Харсеева Г.Г., 2009; Volzke Н., 2006). Эти факторы лежат в основе формирования и развития неспецифической иммунной защиты.

Рядом исследователей установлена тесная связь между регуляторными процессами врожденного и приобретенного иммунитета. Поэтому ответ на введение одних и тех же вакцинных препаратов не может быть одинаковым у всего населения.

Как известно, на ряд показателей здоровья человека влияют стрессы, болезни, вредные привычки и зависимости (Харсеева Г.Г., 2009; WHO/IVB, 2005, 2006; Neal S.E, 2009). В отношении связи специфической иммунной защиты от дифтерии и перечисленных состояний нет информации, хотя во время последней эпидемии дифтерии в России были отмечены высокая заболеваемость и смертность среди лиц, страдающих алкоголизмом.

В развитии любого инфекционного заболевания, в том числе дифтерии, кроме состояния макроорганизма значительную роль играет вирулентность штамма, участвующего в инфекционном процессе. Как известно, главным фактором патогенности C.diphtheriae является его токсигенность. Именно дифтерийный токсин выполняет основную роль в патогенезе заболевания, распространенности инфекционного процесса, развитии осложнений и частоты летальности при дифтерии (Hadfield T.L., 2000; Wellinghausen, N., 2002; Williams H.U., 2008).

В настоящее время в России наиболее распространенным методом выявления токсигенных штаммов является Е1ек-тест, регламентированный нормативными документами. Однако он не лишен недостатков: длителен в постановке и недостаточно чувствителен. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) обладает более высокой чувствительностью и меньшим временем постановки (Ценева Г.Я., 2000; Pallen M.J., 1994; Aravena-Roman M., 1995; Mikhailovich V.M., 1995). Однако результат ПЦР свидетельствует о наличии у микроорганизма гена токсигенности, который, как известно, может быть репрессированным и не проявлять себя в фенотипических тестах, таких, как Е1ек-тест. Известно, что при определенных условиях действие гена-супрессора прекращается и штамм возобновляет способность продуцировать токсин (Ценева Г.Я., 1998; аапсюПоМ. Р., 1997).

В этой связи поиск и разработка эффективных средств индикации и идентификации токсинпродуцирующих штаммов особенно важны, поскольку в постэпидемическом периоде чаще циркулируют штаммы С./ИрЫкег'ше, несущие «молчащий» ген токсигенности (Щедеркина Е.Е., 2001).

Исследованиями ряда ученых установлено влияние факторов окружающей среды, в том числе физических, на здоровье населения, неспецифический и специфический иммунитет. Известны данные о влиянии некоторых физических факторов на биологические свойства микроорганизмов, однако эти факты малочисленны, особенно в отношении С.сИрЫкепае (Грабина В.А., 1976; Гофман Е.Л., 1988; Манина Ж.Н., 1997). Из физических факторов наибольший интерес представляют те, с которыми население контактирует постоянно в течение длительного времени. Развитие средств коммуникации, резкое увеличение количества используемых в быту приборов - приводит к постоянному нахождению людей в электромагнитных полях, хотя и низкой интенсивности. Можно полагать, что в этих условиях микроорганизмы способны менять свои биологические свойства (Рыспаева Д.Э., 1998; Бездольная И.С., 2000, 2001; Думанский Ю.Д., 2001; Боярский М.Р., 2001; Меньшикова Л.Н., 2001; 8ЬскогЬаШу У.О., 1998). Однако данные о влиянии электромагнитных полей на те или иные свойства С.сИрЫкепае до настоящего времени отсутствовали.

Из всех биологических свойств С.сИрЫкег1ае наибольший интерес представляют токсинопродукция и адгезия к эпителиальным клеткам слизистых оболочек, являющиеся факторами патогенности штаммов, а также их резистентность к антибиотикам. Особенно важны исследования о возможном влиянии электромагнитных факторов на изменение чувствительности C.diphtheriae к тем антибиотикам, к которым, определялась видовая чувствительность.

Показано, что у больных с острыми заболеваниями верхних дыхательных путей в 10-15% случаев находят недифтерийные коринебактерии (Funke G., 1997; Izurieta H.S., 1997). В настоящее время род коринебактерий включает 67 видов и две таксонные группы, 40 из них представляют клиническое значение. Кроме того, существует ряд коринеформных бактерий, морфологически похожих на коринебактерии, способных вызывать инфекционные заболевания, в том числе верхних дыхательных путей. Расширение спектра новых видов коринебактерий, возможных патогенов, создает значительные трудности в биохимической дифференциации таких культур (Funke G., 1997).

В связи с изложенным представляется актуальным изучение особенностей биологических свойств циркулирующих штаммов C.diphtheriae в постэпидемический период и на этой основе разработка эффективных методов и средств для лабораторного обеспечения надзора за дифтерией.

Цель исследования

Задачи работы:

1. Определить роль высокоавидных антитоксических антител в защите от дифтерии. Разработать методику определения индекса авидности антитоксических противодифтерийных антител и критерии невосприимчивости к дифтерии у привитых. Разработать способ дифференциальной диагностики между легкими формами дифтерийной инфекции и бактерионосительством C.diphtheriae.

3. Изучить биологические свойства и факторы патогенности С. diphtheriae, выделенных в постэпидемический период (2000-2009 гг.) на территории Санкт-Петербурга, Ленинградской и Вологодской областей.

5. Разработать экспресс-способ выявления токсигенных С. diphtheriae с использованием высокоавидных антител in vitro.

Научная новизна:

Разработаны новые методические подходы, критерии и способы оценки защищенности от дифтерии. Впервые на основе комплекса данных об уровнях антитоксических, в т.ч., высокоавидных, антител и прививочного статуса разработан способ прогнозирования заболеваемости контактных в очагах инфекции.

Показано влияние некоторых факторов электромагнитного излучения на биологические свойства возбудителя дифтерии. Установлено стимулирующее влияние НИЛИ на продукцию дифтерийного токсина in vitro штаммами С. diphtheriae, в т.ч., несущими «молчащий» /ох-ген.

Доказана эффективность использования высокоавидных антител для выявления продукции дифтерийного токсина у штаммов С. diphtheriae с низким уровнем токсинообразования in vitro. Предложен новый алгоритм определения токсигенности С. diphtheriae, в.т.ч., несущих «молчащий» /ох-ген.

Практическая значимость исследования:

Предложен комплекс современных методов и приемов для обеспечения микробиологического мониторинга возбудителя дифтерии 4 и оценки поствакцинального иммунитета.

Разработан экспресс-способ выявления токсигенных штаммов C.diphtheriae, отличающийся высокой чувствительностью, быстротой учета реакции, объективностью считывания информации, портативностью и экономичностью.

Разработан высокочувствительный экспресс-способ обнаружения потенциальной токсинопродукции у штаммов C.diphtheriae, несущих «молчащий» ген токсигенности и слабо продуцирующих токсин, позволяющий повысить эффективность лабораторной диагностики дифтерии.

Предложены методические материалы (схемы, прописи сред, таблицы биохимического типирования, текстовый материал) для дифференцирования С. сІірМкегіае и недифтерийных коринебактерий.

Полученные данные изложены: а) в методических рекомендациях для врачей «Фенотипическая идентификация бактерий рода СогупеЬасІегіит», утв. МЗ РФ 2010 г.; б) в Руководстве по клинической лабораторной диагностике, раздел «Коринебактерии», Из-во Москва, 2011 г.

Изученные штаммы С. сіірШкегіае и их характеристики представлены в коллекции лаборатории бактериальных капельных инфекций НИИЭМ имени Пастера, Санкт-Петербург (2003-2010 гг.).

На основании данных индекса авидности предложена схема проведения дифференциальной диагностики заболеваний дифтерией и бактерионосительства С. diphtheriae.

Для оперативного микробиологического и серологического мониторинга дифтерии созданы базы данных, включающие данные по заболеваемости дифтерией, показатели иммунитета, сведения о выделенных штаммах С. diphtheriae, предложена методология создания геоинформационной системы по слежению за дифтерийной инфекцией. Компьютерное картирование эпидемиологических и микробиологических данных на территории наблюдения и банк специфических данных делают получение информации экстренной.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Невосприимчивость привитых к дифтерии связана с формированием высокоавидных антитоксических антител.

3. Штаммы C.diphtheriae, выделенные в постэпидемический период, характеризует изменчивость основных биологических свойств (патогенности, чувствительности к антибиотикам).

5. Новые биомикротехнологии повышают эффективность выявления токсинообразования штаммами С. diphtheriae in vitro .

Апробация работы:

По теме диссертации опубликованы: 40 научных работ, в том числе 10 - в изданиях, рецензируемых ВАК, а также в материалах симпозиумов, научно -практических конференций всероссийского и международного уровней.

Основные результаты исследований доложены и обсуждены на российских и международных семинарах, конгрессах и конференциях в 20032010 гг.: 17-19 ноября 2003 г. Семинар ВОЗ «Лабораторная диагностика дифтерии», СПб, НИИЭМ им. Пастера; 8-9 октября 2004 г. Гомель, Беларусь, ОЦГСЭН. Международная конференция «Применение антибактериальных препаратов при лечении инфекционных заболеваний»; 23-26 мая 2005 г. IX Всероссийский научный форум «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге»; 5-8 октября 2005 г. Ялта, Украина. XXIV Международная научно-практическая конференция «Применение лазеров в медицине и биологии»; 7 февраля 2006 г. НИИЭМ им. Пастера, СПб, заседание общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов в Санкт-Петербурге и Ленинградской области; 5-8 октября 2006 г. Луцк. Украина. XXV Международная научно-практическая конференция «Применение лазеров в медицине и биологии»; 15-17 November 2006. Vouliagmeni, Greece. Ninth International Meeting of the European Laboratory Working Group on Diphtheria, ELGWD; 26 мая 2007 г. ГОУ ДПО СПб МАЛО Росздрава. Всероссийская научная конференция «Современные проблемы медицинской микробиологии» (Хлопинские чтения); 5-7 декабря 2007 г. Алматы (Казахстан). Республиканский семинар «Диагностика воздушно-капельной группы инфекций»; 26 февраля 2008 г. НИИЭМ им. Пастера, СПб, заседание общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов в Санкт-Петербурге и Ленинградской области; 24 апреля 2008 г. НИИЭМ им. Пастера, СПб, семинар для врачей-бактериологов СПб и Лен. Области; 2-4 июня 2008 г. Четвертая международная конференция, посвященная 85-летию Санкт

Петербургского НИИЭМ имени Пастера и 120-летию Парижского института Пастера; 1-4 июля 2008 г. Второй Санкт-Петербургский международный экологический форум «Окружающая среда и здоровье человека»; 03-07 November 2008. Larnaca.Cyprus. Tenth International Meeting of the European Laboratory Working Group on Diphtheria, ELGWD; 7-9 October 2009. Ryga. Eleventh International Meeting of the European Laboratory Working Group on Diphtheria, ELWGD; 16-17 декабря 2009 г. Вологда. Пленум, посвященный 65-летию Российской академии медицинских наук и 130-летию со дня рождения академика АМН СССР А.Н. Сысина; 18-20 mai 2010 г. Saint-Petersburg. Recherches scietifiques et surveillance epidemiologique des maladies infectieuses. Conference internationale Saint-Petersburg; 08 июня 2010 г. НИИЭМ им. Пастера, СПб, заседание общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов в Санкт-Петербурге и Ленинградской области; 15 сентября 2010 г. Вологда. Научно-практическая конференции ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Вологодской области»; 6-8 октября 2010 г. Судак. Украина. XXXIV Международная научно-практическая конференция «Применение лазеров в медицине и биологии».

Внедрение результатов исследования в практику:

На основе результатов работы подготовлены следующие документы: 1. Учебные пособия для врачей «Дифтерия» (современные методы лабораторной диагностики) Г.Н. Беспалова, Л.А. Краева, Г.Я. Ценева, O.E. Пученко. СПб, 2009.-42 с. (используется в учебном процессе на кафедре микробиологии и микологии ГОУ ДПО СПб МАПО Росздрава и на кафедре микробиологии Военно-медицинской академии имени С.М. Кирова).

2. Методические рекомендации для врачей-бактериологов «Фенотипическая идентификация бактерий рода Corynebacterium» Г.Я. Ценева, JT.A. Краева, Ж.Н. Манина и др. СПб-Харьков, 2010. - 76 с.

3. Патент на изобретение «Способ контроля биологической пробы в реакции латекс-агглютинации и аналитическая система для его осуществления».- № 2298798 от 10.05.2007.- Авторы: Зимина Т.М., Лучинин В.В., Мигунова В.Е., Краева Л.А., Ценева Г.Я., Меньшикова А.Ю., Шабсельс Б.М., Дулатова М.В., Шпилюк Г.Ф.

4. Патент на изобретение «Способ определения токсигенности бактерий Corynebacterium diphtheriae» № 2370539 от 20.10.2009.- Авторы: Краева Л.А., Ценева Г.Я., Коробов A.M., Грабина В.А.

5. Материалы диссертации представлены в «Руководстве по клинической лабораторной диагностике» (Раздел: Коринебактерии) М. 2011.

Личный вклад автора

Основные результаты получены лично автором. Выделение штаммов С. diphtheriae, сбор сывороток от больных и здоровых лиц проведен в Центрах эпидемиологии и гигиены в Вологодской, Ленинградской областях, г. Санкт-Петербурге, а также лично автором.

Приборы лазерного излучения были предоставлены НИИ Лазерной биологии и лазерной медицины, Харьков, Украина.

Структура и объем диссертации:

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Краева, Людмила Александровна

Выводы

1. Высокоавидные антитоксические антитела играют ведущую роль в формировании иммунитета против дифтерии. Для оценки защищенности привитых разработан количественный показатель -индекс авидности (ИА) антитоксических антител. ИА >30 % свидетельствует о защищенности от заболевания дифтерией {р<0,05); ИА = 10 % является показателем критического уровня, ниже которого вероятность заболевания возрастает до 99% (р<0,001). ИА противодифтерийных антитоксических антител различаются у больных легкими формами дифтерии и здоровых носителей С. diphtheriae (р< 0,05) и могут служить дифференциально-диагностическим признаком различий между этими формами.

3. Выявлено изменение биологических свойств (адгезивность и продукция токсина) С. diphtheriae, выделенных в постэпидемический период (2000-2009 гг.). Адгезивность штаммов С. diphtheriae (особенно выделенных от контингентов закрытых учреждений, обследованных с профилактической целью) возросла в 2 раза. Доля штаммов С. diphtheriae, несущих fox-ген, возросла до 40% среди нетоксигенных в Е1ек-тесте штаммов. В среднем, на 20% снизилась доля штаммов, чувствительных к антибиотикам, используемым для лечения больных дифтерией и санации носителей С. diphtheriae.

4. Воздействие in vitro низкоинтенсивного лазерного излучения с длиной л волны 660 нм, плотностью мощности излучения 3,0 мВт/см на поверхности колоний бактерий в течение 5 минут повышала продукцию дифтерийного токсина токсигенными штаммами С. diphtheriae в 2 раза и стимулировала выработку токсина у 45 % штаммов, содержащих «молчащий» tox-ген.

5. Воздействие вращающихся магнитных полей повышает адгезивность штаммов С. diphtheriae in vitro. Под влиянием левовращающегося магнитного поля южной ориентации в зависимости от экспозиции, 5 и 15 мин, возрастала адгезивность 40% и 60% штаммов, соответственно.

6. На основе новых биомикротехнологий с использованием противодифтерийныех антитоксических высокоавидных антител человеческой иммунной сыворотки (чувствительность 0,001 Lf/ml дифтерийного токсина) разработан автоматизированный экспресс-способ выявления токсигенных С. diphtheriae in vitro.

Практические рекомендации

Алгоритм контроля иммунитета населения и оценка невосприимчивости к дифтерии.

Оценка индивидуальной защищенности от дифтерийной инфекции'.

I этап.

Отбираем кровь у обследуемого и заполняем на него анкету в системе баз данных, в которую вносим данные о возрасте, прививочном статусе, профессии, наличии любого хронического заболевания, дате заболевания (если есть подозрение на дифтерию).

II этап.

Определяем с помощью ИФА тест-системы и ЗМ роданистого калия (см. главу 4) количество противодифтерийных антитоксических антител, выраженное в МЕ/мл, и индекс авидности антител, выраженный в %. Количество антител рассчитываем по данным оптической плотности в лунках планшета с помощью компьютерной программы, входящей в качестве приложения к тест-системе. Индекс авидности (ИА) антител рассчитываем по формуле (4.1): ид= ОЩЕ± 10()% ОЩА) где ОП (Е) — оптическая плотность в лунке, обработанной детергентом, ОП (А) - оптическая плотность в лунке, обработанной обычным промывочным раствором, используемым в тест-системе.

III этап.

Определяем вероятность заболевания на данный момент времени. Для этого рассчитываем комплексный показатель (КП) по формуле (4.3):

КП = АТ-АТ • ИА.

Далее рассчитываем функцию для лиц, не заболевших дифтерией по формуле (4.2):

Уо= -3,805 + 0,49 • КП.

Затем рассчитываем функцию для лиц, заболевших дифтерией по формуле (4.4): у¡=-0,713 + 0,017* КП. Если значение у] > у0 , то вероятность обследуемого заболеть дифтерией выше, чем не заболеть. Для количественного расчета вероятности заболевания дифтерией (ВЗд) используем формулу (4.5):

ВЗд = 0,82-0,05* КП. Чем выше показатель, тем выше вероятность заболевания. Так, если вероятность заболевания равна 0,8, то это значит, что при таких значениях КП 80% лиц заболевают дифтерией. Поэтому надо предпринимать меры для снижения этого риска.

IV этап.

Делаем прогноз защищенности обследуемого на будущее. Поскольку авидность антител, защищающая от заболевания дифтерией, снижается быстрее, чем их количественный показатель суммарных антител, то в прогнозе необходимо ориентироваться на индекс авидности антител. Для этого находим на графике (рис. 1.) значение, наиболее приближенное к полученному индексу авидности антител (с учетом прошлой вакцинации, если она была проведена в ближайший год) и определяем по графику: через сколько месяцев индекс авидности снизится до критической отметки (10%). Очередную ревакцинацию (или повторное исследование) рекомендуется пройти до этой даты.

V этап.

Если обследуемый относится к группе «риска» по заболеванию дифтерией, то нужно учесть, что у таких лиц можно ожидать снижение индекса авидности антител в гораздо более ранние сроки, чем у лиц, не входящих в группу риска. Поэтому очередное исследование на напряженность иммунитета необходимо перенести на более ранний срок.

Модель v4=a•vЗ•exp(-Ь*(vЗ+1)лc) у=(14 5108)*х*ехр(-(,094068)*(х+1)А(,93444»

О 10 20 30 40 50 60 70 80 90

Т(мес)

Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Краева, Людмила Александровна, Санкт-Петербург

1.В. Интеграция иммунной и нервной систем // Новосибирск. Наука. Сиб. Отделение. — 1991. — 168 с.

2. Авдей Г.М. Иммунологические критерии дифференциальной диагностики дисциркуляторной энцефалопатии I стадии и невротических расстройств // Имунопатология, аллергология, инфектология. 2005 г. - № 4. - С. 28-34.

3. Агарков В.И. Радиационно- экологические детерминанты онкологической патологии у населения Донецкой области / В.И. Агарков, C.B. Грищенко, Ю.И. Яковец // Гиг. насел, мест. — Вып. 38. — т.2. К. - 2001г. - С. 204-210.

4. Андриенко Л.Г. Морфологические изменения органов белых крыс при влиянии электромагнитного поля низкой частоты (20-22 кГц) (магнитной и электрической составляющей) // Гигиена населенных мест. Киев. - 2000г. - С.276-278.

5. Антомонов М.Ю. Эволюция математического обеспечения гигиенических исследований // Гиг. насел, мест. Вып. 38. — т.2. — К. - 2001г.-С.498-504.

6. Баширова Д.К. Клиника, диагностика и лечение дифтерии / Д.К. Баширова, А.И. Ширинская // Уч. пособие. Казань. — Медицина. — 1995.-35с.

7. Бездольная И.С. Электрофизиологические критерии функционального состояния мозга при действии и гигиенической регламентации антропогенных электромагнитных излучений // Гиг. насел, мест. -Вып.38. т.2. - К. - 2001г. - С.71-75.

8. Бездольная И.С. Системный подход и биолого-гигиеническая оценка электромагнитных полей декаметровых волн // Гигиена населенных мест. Киев. - 2000г. - С.236-240.

9. Безруков В.M. Полимеразная цепная реакция в диагностике бактериальных инфекций // Журн. микробиол. прилож. 1997. — С. 20-23.

10. Биткин C.B. О санитарно-гигиеническом мониторинге электромагнитной обстановки /C.B. Биткин, В.Ю. Думанский // Гиг. насел, мест. Вып. 38. - т.2. - К. - 2001г. - С.62-63.

11. Бомштейн И.С. Опыты превращения невирулентнаго дифтершнаго бацилла и псевдо-дифтершнаго въ вирулентнаго Löffler'oBCKoro бацилла // Д-ра И.Бомштейна (Изъ Моск. бактерюл. ин-та). — 1902. -13с.

12. Бондаренко В.М. Проблема патогенности клебсиелл / В.М. Бондаренко, В.Г. Петровская, Н.И. Потатуркина-Нестерова // Ульяновск, 1996. 131с.

13. Боярский М.Р. Биологическое действие электрических полей низкочастотного диапазона (10-60 кГц) / М.Р.Боярский и др. // Гиг. насел, мест. Вып. 38. - т.2. - К. - 2001г. - С.97-101.

14. Бухарин О.В. Бактерионосительство / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов // Екатеринбург. — 1996. — 67с.

15. Васильев К.Г. Клинико-эпидемиологические аспекты вакцинации против дифтерии / К.Г. Васильев, А.И. Савчук // Первый конгресс педиатров-инфекционистов России. — М. 4-6 декабря 2002 г. - с.26.

16. Веселов A.B. Азитромицин: современные аспекты клинического применения / A.B. Веселов, P.C. Козлов // Клин, микробиол. антимикроб, химиотер. 2006. - Т.8. - №1. - С. 18-32.

17. Влияние на адгезивную активность C.diphtheriae лазерного низкоинтенсивного излучения / Ж.Н.Манина и др. // Матер, юбилейной конф. «Актуальные вопросы теоретической и прикладной эпидемиологии». Харьков. - 1997. - С. 76-79.

18. Возианова Ж.И. Клинико-эпидемиологические . особенности дифтерии у взрослых / Ж.И. Возианова, П.А. Овчаренко, И.В. Шестакова // Врачебное дело. 1991. - №8. - С. 106-109.

19. Волянский Ю.Л. Перспективность применения декаметоксина в борьбе с носительством коринебактерий дифтерии / Ю.Л. Волянский, Л.Г. Мироненко // Микробиол., эпидемиол. и клиника инфекцион. бол.: Сб. тр. К. - 1992. - Т. 10. - С.25-28.

20. Галазка А. Дифтерия // Серия «Иммунологические основы иммунизации». — ВЩЗ. Женева. - 1993. — Вып. 2. - 26с.

21. Галазка А. Иммунологические основы иммунизации. Вып.1 // Общая иммунология. — Женева. 1993. - 29 с.

22. Гамалея Н.Ф. Дифтерия // Тип. им. К.Маркса. Курск. - 1925. - 7с.

23. Гладин Г.П. К вопросу о частоте и продолжительности сохранения в зеве вирулентных дифтерийных бацилл по выздоровлении отдифтерии // Из лаборатории хирургической патологии и терапии в

24. Университете Святого Владимира. 1895. - 9с.

25. Гнутова Р.В. Введение в иммунохимию // Уч. Пособие, Комсомольск-на -Амуре. 2000. - 68с.

26. Голубев Г.Н. Геоинформационное и картографическое обеспечение экологических программ / Г.Н. Голубев, Н.С. Касимов, B.C. Тикунов // Ж-л Экология. 1995. - № 5. - С.340-346.

27. Гофман Е.Л. Влияние условий культивирования на формирование у возбудителя холеры адгезивных и гемагглютинирующих свойств / Е.Л. Гофман, В.В. Король // Микробиологический журнал. Киев. -Наукова думка. - 1988. - т.50. - №3. - С.58-63.

28. Грабина В.А. Влияние когерентного лазерного излучения надифтерийные бактерии / В.А. Грабина, Н.С. Зикеева, H.A. Педенко //

29. Микробиология, эпидемиология и клиника инфекционных болезней. Сборник научных работ. Т.8. - 1976. — С. 61-63.

30. Грабина В.А. Пути преодоления низкой гемолитической и агглютинирующей способности Е. coli II Применение лазеров в биологии и медицине: тезисы докл. научн.-практ. конф. Николаев. -2005. - С. 75-76.

31. Гукасян JI.A. Изучение патогенеза дифтерийного бактерионосительства в микробиологическом и иммунологическом аспекте: Автореф. дис. . канд. мед. наук- 1975. Москва, 1975. -26 с.

32. Давыдовский И.В. Учение об инфекции // М. 1956. - 260с.

33. Данилевич М.Г. .Дифтерит. 2-е изд. // Изд. Ленингр. правда. 1928. -32 с.

34. Джафаров М.М. Влияние источников азота на рост молочнокислых бактерий рода Lactobacillus И Вестн. Рос. Воен.-мед. акад. 2009. — № 2 (26).-С. 107-110.

35. Дифтерия за рубежом в период массовой иммунизации / М.Н.Ткачева и др. // Журн. микробиол. 1980. - № 2. - С. 3-9.

36. Заболоцкий Д.А. Лечение и предохранение от дифтерита // М. -Тип. И.Чуксина. 1880. - 8с.

37. Зеленский М.С. Дифтерит. Критический этюд // Соч. М.Зеленского для врачей и родителей. СПб. - типо-лит. А.Е.Ландау. - 1881. — 306 с.

38. Иванова В.В. Выявление дифтерийного токсина на эпителтоцитах слизистой ротоглотки / В.В. Иванова, A.C. Кветная, Г.П. Курбатова // Пособие для врачей, СПб. 1999 г. - С. 14-20.

39. Иванова В.В. Дифтерия у детей. / В.В. Иванова, О.В. Родионова, A.A. Аксенов // С-Петербург. 2000. - 255 с.

40. Иммунология. Пер. с англ. // Под ред. Г.М. Перфильевой. М. - 2001. -48 с.

41. Итоги изучения биологических свойств C.diphtheriae, изолированных в Северо-западе России / Г.Я. Ценева, Ф.С. Носков, Ю.П. Рыкушин // Матер, втор. Междунар. конф. "Идеи Пастера в борьбе с инфекциями" С.-Петербург. - 1998. - С.173-174.

42. Кальной С.М. Афинность антител в серологических иммуносуспензионных реакциях // Журн. Микробиол. № 3. — 2004. — С. 83-85.

43. Капустян В.А. Особенности специфического иммунитета у больных дифтерией / В.А. Капустян, А.Г. Матохина, О.В. Перелыгина // Журн. Микробиол.-2010. -№ 1.-С. 40-44.

44. Каральник Б.В. Загрязнение окружающей среды и особенности эпидемического процесса дифтерии / Б.В. Каральник, С.Г. Маркова // Журнал мйкробиол. 1996. - № 4. - С. 79-83.

45. Карась С.Р. Адгезивные свойства дифтерийных бактерий, выделенных от различных источников // Автореф. дис. . канд. биол. наук 1990. - Москва. - 1990. - 22 с.

46. Комбарова С.Ю. Полиморфизм генов tox и dtxR у циркулирующих штаммов Corynebacterium diphtheriae / С.Ю. Комбарова и др. // Журн. Микробиол. 2009. - № 1. - С. 7-11.

47. Корнева Е.А. Электрофизиологические феномены головного мозга при иммунных реакциях / Е.А. Корнева и др. // JI. Наука. 1990. -148 с.

48. Костюкова H.H. Возбудитель дифтерии и условно-патогенные коринебактерии // Ж-л Заочная академия последипломного образования. 2001.-С. 25-31.

49. Костюкова H.H. Значение адгезии C.diphtheriae в эпидемиологии дифтерии // Тез. докл. IV Всерос. съезда микробиол., эпидемиол. и паразитол. Нижний Новгород. - 1991. - Т.1. - С.34-35.

50. Костюкова H.H. Начальный этап инфекционного процесса -колонизация и пути ее предотвращения//Журн. микробиол. 1989. -№ 9. - С.103-110.

51. Костюковская О.Н. Идентификация недифтерийных бактерий рода Corynebacterium и определение их антибиотикочувствительности // ЖМЭИ -1992 №9-10. - С.29-31.

52. Кэтти Д. Антитела. Методы. Книга 1 // Перевод с англ. Москва. -"Мир".-1991.-287 с.

53. Кэтти Д. Антитела. Методы. Книга 2 // Перевод с англ. Москва. "Мир". -1991.-384 с.

54. Ланчини Д. Антибиотики / Д. Ланчини, Ф. Паренти // М. 1985. — 272 с.

55. Лапач С.Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием Excel / С.Н. Лапач, A.B. Чубенко, П.Н. Бабич // К.: МОРИОН. 2000. - 320 с.

56. Леффлер Фридрих. Какие меры следует предпринимать против дифтерита? // Проф. L (F) Löffler'a (Greifswald). СПб. Губ. тип. — 1890.- 11с.

57. Липский A.A. К учению о дифтерите взрослых и детей старшего возраста // (Отчет дифт. отделения Клиники Ю.Т.Чудновского). — Тип. П.И. Шмидта. 1884. - 35с.

58. Лобода Т.В. Дифтерия среди взрослых в Украине // Врачебное дело. 1995.-№9-12.-С. 150-153.

59. Магдзик В. Эпиднадзор за дифтерией в Польше // Совещание по эпидемии дифтерии в Европе. С.-Петербург. - 1993. - С. 93-95.

60. Мазурова И.К. Биологические свойства С. diphtheriae, циркулирующих в настоящее время / И.К. Мазурова, С.Ю. Комбарова, В.Г. Мельников // ЖМЭИ. 1996. - № 6. - С. 59-61.

61. Макарова С.И. Выявление противодифтерийных антибактериальных антител с помощью иммуноферментного анализа // Автореф. дисс. . канд. биол. наук. 2005 г. - М. - 22 с.

62. Малеванный И.Н. Применение ГИС-технологии для определения радоноопасности населенных пунктов Ленинградской области / И.Н. Малеванный и др. // Лен. обл. центр Госсанэпиднадзора, СПб гос. мед. академия им. И.И. Мечникова. 1997г. - 23 с.

63. Мальцева И.В. Пособие по диагностике, клинике, лечению и диспансерному наблюдению // М. — 1993. 35 с.

64. Маркина С.С. Заболевемость дифтерией в России в настоящее время / С.С. Маркина, Н.М. Максимова, Г.Ф. Лазикова // Журн. Микробиол.1.-2003.-С. 31-37.

65. Марков B.B. Дифтерия на территории Верхнего Прикамья / В.В. Марков и др. // ЖМЭИ. 1997. - № 3. - С. 78-79.

66. Матохина А.Г. Исследование специфического иммунитета у больных дифтерией / А.Г. Матохина и др. // VI Росс, съезд врачей-инфекционистов, СПб. 29-31 октября 2003 г. - С. 243.

67. Медицинская микробиология. Гл. ред. В.И. Покровский, O.K. Поздеев -М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА. 1999. - 1200 с.

68. Медицинская микробиология: учебник под ред. В.Б. Сбойчакова — СПб.: BMA. 2006. - 575 с.

69. Меньшикова JI.H. К биологическому действию электрических полей очень низкой частоты на гонады и детородную функцию животных // Гиг. насел, мест. Вып. 38. -т.2. - К. - 2001г. - С. 109-113.

70. Методические указания МЗ РФ «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции» (МУ 4.2.698-98). М. -1998. - 50 с.

71. Мукомолова А.Л. Значение измерения авидности антител класса Jg G к отдельным белкам вируса гепатита С для диагностики различных форм инфекции // Дисс. на соиск. уч. ст. канд. мед. наук. 2000. -СПб. - 189 с.

72. Наязматов Б.И. Эпидемиологическая ситуация по дифтерии в республике Узбекистан / Б.И. Наязматов, С.Н. Бабаходжаев, Б.Д. Маткаримов // ЖМЭИ. 1997. - № 3. - С. 73-74.

73. Орлов И.В. Клинико-эпидемиологические особенности дифтерии у детей крупного промышленного центра / И.В. Орлов, В.В. Краснов, Ю.Г. Кузмичев // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1999. — № 6. — С. 80-82.

74. Основные тенденции эпидемического процесса дифтерии и возможности ее ликвидации в условиях крупного города / Б.А. Залютин, Ф.Е. Кравцов, JI.C. Наумович // Журн. микробиол. 1986. -№ 11. — С.20-24.

75. Патент на изобретение "Спрособ иммунологической экспресс-диагностики токсических форм дифтерийной инфкции" № 2113172 Россия, МПК 6 А 61В10,001 // А.Ю. Меньшикова и др..

76. Приказ МЗ СССР № 450 «О мерах по предупреждению заболеваемости дифтерией». М. - 1986. - 66 с.

77. Рачина С.А. Кларитромицин: есть ли потенциал для клинического использования в XXI веке? // С.А. Рачина, JI.C. Страчунский, P.C. Козлов // Клин, микробиол. антимикроб, химиотер. 2005. - Т.7. - № 4.-С. 369-392.

78. Ройт А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл // Пер. с.англ. М. - «Мир». - 2000. - 582с.83 ' Рыспаева Д.Э. Применение низкоинтенсивного лазерного излучениядля лечения больных дифтерией / Д.Э. Рыспаева и др. // XIII

79. Междунар. научно-практич. конф. "Применение лазеров в медицине и биологии", 5-8 октября 1999. Алупка. - С. 43.

80. Рюо А. Дифтер1я // СПб, B.C. Эттингеръ. Ж-л Практическая медицина. - 1892. - №№ 11, 12 - 107 с.

81. Сапин М.Р. Иммунная система, стресс и иммунодефицит / М.Р. Сапин, Д.Б. Никитюк // М. 2000. - 184 с.

82. Специфическая профилактика дифтерии у взрослых АДС-М анатоксином / И.В. Фельдблюм и др. // Журн. микробиол. 1991. -№ 4. - С.45-47.

83. Страчунский JI.C. Состояние антибиотикорезистентности в России // Антибактериальная терапия: Практическое руководство под ред. JI.C. Страчунского, Ю.Б. Белоусова, С.Н. Козлова 2000. - М. -Фарммединфо. — 190 с.

84. Страчунский JI.C. Современная антимикробная химиотерапия / JI.C. Страчунский, С.Н. Козлов // Руководство для врачей. М. - Боргес. — 2002.-432 с.

85. Строганов В.П. Феномен резистентности // Медицина для всех. 1998. -№5.-45 с.

86. Теплова С.Н. Секреторный иммунитет / С.Н. Теплова, Д.А. Алексеев // УрО РАН, Челябинск. 2002. - 200 с.

87. Тило В. Популяционный иммунитет к дифтерии в Германии // Совещание по эпидемии дифтерии в Европе. — С.-Петербург. — 1993.- С. 68-70.

88. Томашевский Л.И. Дифтерит, лечение его и предохранение отзаболевания // СПб, Слав, печатня И.В. Вернадского. — 1880. 59 с.

89. Трутнева Л.Ю. Иммунологическая эффективность вакцинации взрослых при использовании различных доз и схем дифтерийного анатоксина / Л.Ю. Трутнева и др. // Ж-л Эпидемиология и инфекционные болезни. 1999. - № 1. - С. 17-20.

90. Турьянов М.Х. Дифтерия / М.Х. Турьянов и др. // М.: Медикас. -1996 г.-254 с.

91. Ушаков H.H. О дифтерите и домашних мерах против его развития //Тифлис.- 1885.- 11с.

92. Фаворова Л.А. Дифтерия / Л.А. Фаворова и др. // М., Медицина. -1988.-208 с.

93. Фельдблюм И.В. Иммунологическая структура населения в системе эпидемиологического надзора за дифтерией / И.В. Фельдблюм, H.H. Басова, Н.М. Коза // Журн. микробиол. 1986. - № 7. - С. 89-92.

94. Фурлетова Н.М. Мониторинг антибиотикорезистентности микроорганизмов. Часть 2. Грамположительная микрофлора / Н.М. Фурлетова и др. // МКО-Ю.-2002.-С. 336-345.

95. Характеристика заболеваемости дифтерией в России. / С.С.Маркина, Н.М.Максимова, Э.Я. Богатырева // Здоровье населения и среда обитания. 1998. - №2. — С. 4-8.

96. Харсеева Г.Г. Состояние иммунитета к дифтерии у населения Ростова-на-Дону и Ростовской области в последние годы / Г.Г. Харсеева, А.Р. Квасов, Э.Л. Алутина // Журн. Микробиол. 2009. - № 6. - С. 80-83.

97. Харченко Г.А. Дифтерия у привитых детей / Г.А. Харченко, Л.С. Чанпалова, О.Г. Харченко // VI Росс, съезд врачей-инфекционистов. СПб, 29-31 октября 2003 г. С. 413-414.

98. Хилари Батлер. Дифтерия // Waves. Т. 11. - №2. - С. 21 -27.

99. Ценева Г.Я. Методы определения токсигенности у штаммов C.diphtheriae / Г.Я. Ценева, Л.А. Краева, С.А. Габриелян // Бюллетень

100. ВСНЦ СО РАМН, Иркутск. 2005. - № .7. - С. 182-186.

101. Ценева Г.Я. Дифтерия (эпидемиология, клиника, лабораторная диагностика) / Г.Я. Ценева, Ю.П. Рыку шин, Л.В. Быстрякова // Метод. Пособие, С.-Петербург. 1995. - 58 с.

102. Ценева Г.Я. Применение полимеразной цепной реакции в диагностике дифтерийной инфекции / Г.Я. Ценева, Е.Е. Щедеркина // Ж. микробиол. 2000. - № 5. - С.72-74.

103. Чабан Е.П. Дифтерийное носительство в современных условиях / Е.П. Чабан, В.Н. Панова // Детские инфекции. К., Здоровье 1983. -Вып.13. -26 с.

104. Чен Р. Эпидемия дифтерии в Европе / Р. Чен, Б. Быченко, Н. Чайка // Совещание по эпидемии дифтерии в Европе. С.-Петербург.-1993. — С.141-155.

105. Черешнев В.А. Иммунофизиология / В.А. Черешнев, Б.Г. Юшков, В.Г. Климин // Екатеринбург, УрО РАН. 2002. - 260 с.

106. Шмелева Е.А. Специфические антитела и их роль в формировании противодифтерийного иммунитета / Е.А. Шмелева, С.И. Макарова, И.Г. Батурина // Журн. Микробиол. № 1. - 2005 г. - С. 38-43.

107. Щедеркина Е.Е. Основные патогенные свойства С.сИрЫкепае и усовершенствование лабораторной диагностики дифтерийной инфекции//Дисс. . канд. мед. наук -2001.- СПб.-132 с.

108. Эмироглу Н. Заболеваемость дифтерией в Европейском регионе ВОЗ. Рекомендации ВОЗ по контролю, лечению и профилактике дифтерии // Ж-л клин, микробиология и антимикробная химиотерапия. 2001. -Т.З.-№ З.-С. 274-279.

109. Энглер К.Х. Быстрые фенотипические методы определения дифтерийного токсина у клинических штаммов коринебактерий / К.Х. Энглер и др. // Ж-л клин, микробиология и антимикробная химиотерапия. 2001. -Т.З. -№2. - С. 1-10.

110. Янченко В.В. Низкоафинный рецептор для Ig Е / В.В. Янченко, JI.K. Янченко, Е.И. Осиненко // Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2005. - № 4. - С. 45-58.

111. A Manual Of Bacteriology / Herbert U. Williams // U.S.A. 2008.- 480 p.

112. Aaron L. Pseudomemranous diphtheria caused by Corynebacterium ulcerans. / L. Aaron et al. // Rev. Med. Intern. 2006.- Vol. 27.- № 4.- P. 333-335.

113. Abou-Basha L.M. Specific IgG avidity in acute and chronic human fascioliasis / L.M. Abou-Basha et al. // East. Meditters. Health J. 2000.-Vol. 6.-№5-6.-P. 919-925.

114. Advisory Committee on Epidemiology and the Division of Disease Surveillance. Case definitions for diseases under national surveillance // Can. Commun. Dis. Rep. 2000.- Vol. 26 (suppl. 3).- P. i-iv.

115. Afghani В. Bacterial arthritis caused by Corynebacterium diphtheriae / B. Afghani, H. R. Stutman. // Pediatr. Infect. Dis. J. 1993.- № 12.- P. 881-882.

116. Aguado J. M. Encrusted pyelitis and cystitis by C.urealyticum (CDC group D2): a new and threatening complication following renal transplant / J. M.Aguado et al. // Transplantation .- 1993.- № 56.- P. 617622.

117. Aguado J.M. Bacteriuria with a multiply resistant species of Corynebacterium (Corynebacterium group D2): an unnoticed cause of urinary tract infection / J.M. Aguado, C. Ponte, F. Soriano // J. Infect. Dis. 1987. - № 156.- P. 144-150.

118. Aguado J.M. Encrusted pyelitis and cystitis by C.urealyticum (CDC group D2): a new and threatening complication following renal transplant / J. M. Aguado et al. // Transplantation. 1993. - № 56. - P. 617-622.

119. Aguado. J.M. Bacteriuria with a multiply resistant species of

120. Corynebacterium (Corynebacterium group D2): an unnoticed cause of urinary tract infection / J.M. Aguado, C. Ponte, F. Soriano // J. Infect. Dis. 1987.-№.156.-P. 144-150.

121. Alvarado-Esquivel C. Comparision of two commercially available avidity tests for toxoplasma-specific IgG antibodies / C. Alvarado-Esquivel, S. Sethi, K. Janitschke // Arch. Med. Res. 2002.- Vol. 33.- № 6.- P. 520523.

122. Andersson K. Affinity selection and repertoire shift: paradoxes as a consequence of somatic mutation? / K. Andersson, J. Wrammert, T. Leanderson//Immunol Rev. 1998.-Vol. 162.- P. 173-182.

123. Aravena-Roman M. Polymerase chain reaction for the detection of toxigenic Corynebacterium diphtheriae / M. Aravena-Roman, R. Bowman, G. O'Neill // Pathol. 1995.- № 27.- P.71-73.

124. Austin G. Endocarditis due to Corynebacterium CDC group G2 / G. Austin, E. Hill // J. Infect. Dis. 1983.- № 147.- P. 1106.

125. Baccard-Longere M. Multicenter evaluation of a rapid and convenient method for determination of cytomegalovirus immunoglobulin G avidity / M. Baccard-Longere et al. // Clin. Diagn. Lab. Immunol.- 2001,- Vol.8.-№2.-P. 429-431.

126. Banck G. Tonsillitis associated with C. haemolyticum. II J. Infect. Dis. — 1986 . № 154. - P. 1037-1040.

127. Banck G. Tonsillitis and rash associated with C. haemolyticum. / G. Banck, M. Nyman II J. Infect. Dis. 1986.- № 157.- P. 1337-1340.

128. Barakett V. Septic arthritis due to a nontoxigenic strain of Corynebacterium diphtheriae subspecies mit is. / V. Barakett et al. //

129. Clin. Infect. Dis.- 1993.-№ 17.- P. 520-521.

130. BarllettJ.G. 1DCP guidelines: management of upper respiratory tract infections // Sinusitis. Infect. Dis. Clin. Pract.- 1997,- Vol. 9.- P. 216-219.

131. BartlettJ.G. IDCP guidelines: management of upper respiratory tract infections. Infect. Dis. Clin. Practice.- 1997.- Vol. 6.- p. 212-220.

132. Bator J.M. Measurement of antibody affinity for cell surface antigens using an enzymelinked immunosorbent assay / J.M. Bator, C.L. Reading // J. Immunol. Methods.-1989. Dec.20.- Vol. 125(№ 1-2).- P.167-176.

133. Beckwith D. G. Isolation of C. aquaticum from spinal fluid of an infant with meningitis / D. G. Beckwith, J. A. Jahre, S. Haggerty // J. Clin. Microbiol. 1986.- Vol. 23.-P. 375-376.

134. Beebe J.L. Recovery of uncommon bacteria from blood: association with neoplastic disease / J.L. Beebe, E. W. Koneman // Clin. Microbiol. Rev.- 1995.-Vol. 8.- P.336-356.

135. Belko J. Endocarditis caused by Corynebacterium diphtheriae: case report and review of the literature / J. Belko, D. Wessel, R. Malley // Pediatr. Infect. Dis. J. 2000.- Vol. 19.- P. 159-163.

136. Benoist A.C. Imported cutaneous diphtheria, United Kingdom / A.C. Benoist, J.M. White, A. Efstratiou // Emerg. Infect. Dis. 2004.- Vol. 10.-№3.- P. 511-513.

137. Bernard K. A. Characteristics of rare or recently described Corynebacterium species recjvered from human clinical material in Canada / K. A. Bernard, C. Munro, D. Wiebe // J. Clin. Microbiol. 2002. - Vol. 40.- P. 4375-4381.

138. Bisgard K. Respiratory diphtheria in the United States, 1980-1995 / K. Bisgard, I. Hardy, T. Popovic // Am. J. Public Health.- 1998.- Vol. 88.- P. 787-791.

139. Blondeau J.M. The macrolides / J.M. Blondeau, E. DeCarolis, K.L. Metzler // Expert Opin. Investig. Drugs. 2002.- Vol. 11.- P. 189-215.

140. Bollegraaf E. Diphtheria in Canada, 1977-1987. CDWR.- 1988.-№ 14.-P.73-76.

141. Bonmarin I. Diphtheria: A zoonotic disease in France? / I. Bonmarin, N. Guiso, A.L. Fleche-Mateos // Vaccine. 2009.- Vol. 27.- P. 4196-4200.

142. Bonnet J.M. Control of diphtheria: guidance for consultants in communicable disease control / J.M. Bonnet, N.T. Begg // Commun. Dis. Public Health.- 1999.- Vol. 2.- P. 242-249.

143. Bottiger B. Maturation of rubella Ig G avidity over time after acute rubella infection / B. Bottiger, I.P. Jensen // Clin. Diagn. Virol. 1997,- Vol. 8.' №2.-P. 105-111.

144. Boyd E.F. Common themes among bacteriophage-encoded virulence factors and diversity among the bacteriophages involved / E.F. Boyd, H. Brussow // Trends Microbiol. 2002.- Vol. 10.- P. 521-529.

145. Bradbury F. Comparison of azitromycin versus clarithromycin in the treatment of low respiratory tract infections / F. Bradbury // J. Antimicrob. Chemother. 1993.-№31.-P. 153-162.

146. Braun V. Bacterial iron transport related to virulence // Contrib. Microbiol. -2005.- Vol. 12.- P. 210-233.

147. Brown J. S. Iron acquisition by gram-positive bacterial pathogens / J. S. Brown, D. W. Holden // Microbes Infect. 2002 - Vol. 4.- P. 1149-1156.

148. Bruñe I. The DtxR protein acting as dual transcriptional regulator directs a global regulatory network involved in iron metabolism of Corynebacterium glutamicum /1. Bruñe, H. Werner, A. T. Huser // BMC Genomics.- 2006.-Vol. 7.-P. 21.

149. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Recommended childhood and adolescent immunization schedule. MMWR Morb Mortal Wkly Rep.- 2003.- Vol. 52.- № 4.-P.1-4.

150. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Thoxigenic Corynebacterium diphtheriae Northern Plains Indian Community. August-October 1996.MMWR Morb Mortal Wkly Rep 1997.- Vol.- 46.- № 22.- P. 506-510.

151. Cerdeno-Tarraga A. M. The complete genome sequence and analysis of Corynebacterium diphtheriae NCTC13129. / A. M. Cerdeno-Tarraga, A. Efstratiou, L. G. Dover // Nucleic Acids Res. 2003.- Vol. 31.- P. 65166523.

152. Chan P.K.S. Antibody Avidity Maturation during Severe Acute Respiratory Syndrome-Associated Coronavirus Infection / P.K.S. Chan, P-L. Lim, E.Y.M. Liu // The journal of Infectious Diseases.- 2005. Vol. 192. - № 1. -P. 166-169.

153. Cianciotto N. P. Characterization of bacteriophages from tox-containing, non-toxigenic isolates of Corinebacterium diphtheriae / N. P. Cianciotto, N. B. Groman // Microbial Pathog. 1997.- Vol. 22.- P. 343-351.

154. Clarridge J.E. Corynebacterium and miscellaneous irregular gram-positive rods, Erysipelothrix, and Gardnerella. I J.E. Clarridge, C.A. Spiegel //

155. Manual of clinical microbiology, 6th edition. Washington DC:ASM Press.- 1995.- P.357-378.

156. Collier R. J. Understanding the mode of action of diphtheria toxin: a perspective on progress during the 20th century // Toxicon. 2001.- Vol. 39.-P. 1793-1803.

157. Collins M. D. Corynebacterium sundsvallens sp. Nov., from human clinical specimens / M. D. Collins, K. A. Bernard, T. Hutson // Int. J. Syst. Bacterial.- 1999.- Vol. 9.- P. 361-366.

158. Collins M. D. Corynebacterium capitovis sp. nov., from a sheep / M. D. Collins, L. Hoyles, G. Foster // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2001.- Vol. 51.-P. 857.-860.

159. Collins M. D. Corynebacterium testudinoris sp. nov., from a tortoise, and Corynebacterium felinum sp. nov., from a scottish wild cat. / M. D. Collins, L. Hoyles, T. Hutson // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2001.- Vol. 51.- P. 1349-1352.

160. Collins M. D. Phenotipic and phylogenetic characterization of a new Corynebacterium species from dogs: description of Corynebacterium auriscanis sp. Nov. / M. D. Collins, L. Hoyles, Lawson // J. Clin. Microbiol. 1999.- Vol. 37.- P. 3443-3447.

161. Costelloe C. Effect of antibiotic prescribing in primary care on antimicrobial resistance in individual patients: systematic review and metaanalysis / C. Costelloe et al. // BMJ. 2010. - № 340. - P. 2096.

162. Courtni E.Allen. HtaA is an Iron-Regulated Hemin Binding Protein Involved in the Utilization of Heme Iron in Corynebacterium diphtheriae / Courtni E.Allen and Michael P.Schmitt // Journal of Bacteriology.- 2009.-Vol.191. -№ 8. P. 2638-2648.

163. De Ory F. Application of low-avidity immunoglobulin G studies to diagnosis of Epstein-Barr virus infectious mononucleosis / F. De Ory, J. Antonaya, M.V. Fernandez // J. Clin. Microbiol.- 1993.- Vol. 31.- № 6.-P.1669-1671.

164. De Zoysa A. Characterization of toxigenic Corynebacterium ulcerans strains isolated from humans and domestic cats in the United Kingdom / A. De Zoysa, P.M. Hawkey, K. Engler // J. Clin. Microbiol. 2005.- Vol. 43.-№9.- P. 4377-4381.

165. Dittmann S. Successful control of epidemic diphtheria in the states of the Former Union of Soviet Socialist Republics: lessons learned / S. Dittmann, M. Wharton, C. Vitek // J. Infect. Dis. 2000.- Vol. 181 (suppl. 1).- P. 1022.

166. Dombkowski K.J. The need for surveillance of delay in age-appropriate immunization / K.J. Dombkowski, P.M. Lantz, G.L. Freed // Am. J. Prev. Med. 2002.- Vol. 23.- № 1.- P. 36-42.

167. Dordevic D. Variability of Hydrocarbon Levels in Urban Air / D. Dordevic et al. // Third Intern. Symp. and Exhibition on Environmental Contamination in Central and Eastern Europe: Proceedings Warsaw, Sept. 10-13.- 1996.- Warsaw.-1996.- P.177-178.

168. Dorella F.A. Corynebacterium pseudotuberculosis: microbiology, biochemical properties, pathogenesis and molecular studies of virulence / F.A. Dorella, L.G.C. Pacheco, S.C. Oliveira // Vet. Res. 2006.- Vol. 37.-№2.-P. 201-218.

169. Drazek E. S. Corynebacterium diphtheriae genes required for acquisition of iron from hemin and hemoglobin are homologous to ABC hemin transporters / E.S. Drazek, C.A. Hammack, M.P. Schmitt // Mol. Microbiol.- 2000.- Vol. 36. P. 68-84.

170. Drew R.N. Azitromycin spectrum of activity, pharmacokinetics and clinical application / R.N. Drew, H.A. Gallis // Pharmacother - 1992. -Vol.12.-P. 161-173.

171. Edmunds W. J. The sero-epidemiology of diphtheria in Western Europe. ESEN Project European sero-epidemiology Network / W.J. Edmunds, R. G. Pebody, H. Aggerback // Epidemiol. Infect. 2000.- Vol. 125.- P. 113-125.

172. Efstratiou A. Laboratory guidelines for the diagnosis of infections caused by Corynebacterium diphtheriae and C.ulcerans / A. Efstratiou, R.C. George // Commun. Dis. Public Health.- 1999.- Vol. 2.- P. 250-257.

173. Efstratiou A. Manual for the laboratory diagnosis of diphtheria. Copenhagen / A. Efstratiou, P.A.C. Maple // The Expanded Programme on Immunization in the European Region of WHO.- 1994 (ICP/EPI038).

174. Efstratiou A. Comparision of phenotypic and genotypic methods for the detection of diphtheria toxin amongst isolates of pathogenic corynebacteria / A. Efstratiou, K.H. Engler, C.S. Dawes // J. Clin. Microbiol.- 1998.- 36.-P. 3173-3177.

175. Efstratiou A. Microbiology and epidemiology of diphtheria / A. Efstratiou, R.C. George // Rev. Med. Microbiol.- 1996.- Vol.7.- P. 31-42.

176. Efstratiou A. Non-toxigenic C. diphtheriae in England / A. Efstratiou, R.G. George, N.T. Begg//Lancet 1993.- Vol. 341.- P.1592-1593.

177. Efstratiou A. Laboratory guidelines for the diagnosis of infections caused by Corynebacterium diphtheriae and C.ulcerans / A. Efstratiou, R. C. George // World Health organization Commun. Dis. Public Health.- 1999.-Vol. 2.- P. 250-257.

178. Efstratiou A. Members of the ELWGD. The European Laboratory Working

179. Group on Diphtheria: a global microbiological network / A. Efstratiou et al. 11 J. Infect. Dis. 2000.- Vol. 181. - P. 146-151.

180. Engler R.H. Immunochromatographic Strip Test for Rapid Detection of Diphtheria Toxin / R.H. Engler et al. // Journal of Clinical Microbiology.-Jan. 2002.- P.80-83.

181. Finch R.G. Infections of the upper respiratory tract. In: Antibiotics and Chemotherapy. Ed by F. O'Grady e.a. 7-th ed. N-Y e.a.- 1997.- P. 674-680.

182. Funke G. Clinical Microbiology of Coryneform Bacteria / G. Funke, A. von Graevenitz, J.E. Clarridge // Clinical microbiology reviews. 1997-№ 1.- P.125-159.

183. Funke G. Emergence of related nontoxigenic Corynebacterium diphtheriae biotipe mitis strains in Western Europe / G. Funke, M. Altwegg, L. Frommelt // Emerg. Infect. Dis. 1999.- Vol. 5.- P. 477-480.

184. Funke G. Corynebacterium confusum sp. nov., isolated from human clinical speciemens / G. Funke, C. Osorio, R. Frei // Int. J. Syst. Bacteriol. 1998.-Vol. 48.- P. 1291-1296.

185. Galazka A. Implications of the diphtheria epidemic in the Former Soviet

186. Union for immunization programs // J. Infect. Dis.- 2000.- Vol. 181(Suppl. 1). P. 244-248.

187. Galazka A. The changing epidemiology of diphtheria in the vaccine era // J. Infect. Dis. 2000.- Vol. 181 (suppl.l).- P. 2-9.

188. Galazka A.M. Resurgence of diphtheria / A.M. Galazka, S.E. Robertson, G.P. Oblapenko // Eur. J. Epidemiol.- 1995.- Vol.11.- P. 95-105.

189. Galazka A.M. Immunization against diphtheria with special emphasis on CDC. Update: diphtheria epidemic New Independent States of the former Soviet Union, January 1995-March 1996 / A.M. Galazka, S.E. Robertson // MMWR.- 1996.- Vol. 45.- P.693-697.

190. Galazka A.M. Immunization against diphtheria with special emphasis on immunization of adults / A.M. Galazka, S.E. Robertson // Vaccine.- 1996.-Vol.14.- P. 845-857.

191. Geographical Information systems (GIS). Mapping for epidemiological surveillance. WHO Wkly Epidem. Rec. -1999. -№ 34. -P.281-285.

192. Gergely A. Tetanus, poliomyelitis and diphtheria vaccination coverage in elderly Parisian residents in 2006 / A. Gergely et al. // Bulletin epidemiologique hebdomadaire.- 2008. Vol. 26.- № 9.- P. 61-64.

193. Gidding H. Immuniti to diphtheria and tetanus in Australia: a national serosurvey / H. Gidding, J. Backhouse, M. Burgess // Med. J. Aus. 2005.-Vol. 83.-P. 301-304.

194. Golaz A. Epidemic diphtheria in the Newly Independent States of the Former Soviet Union: implications for diphtheria control in the United States / A. Golaz et al. // J. Infect. Dis.- 2000. Vol. 181. - P. 237-243.

195. Goldblatt D. Antibody antibody as a surrogate markes of successful priming by Haemophilus influenzae type B conjugate vaccine following infant immunization / D. Goldblatt, A.R. Vaz, E. Miller // J. Infect. Dis. -1998.-Vol. 177.-№6.-P. 1112-1115.

196. Goranson-Siekierke J. Anion-coordinating residues at binding site 1 are essential for the biological activity of the diphtheria toxin repressor / J. Goranson-Siekierke et al. // Infect. Immunol. 1999.- Vol. 67.- P. 18061811.

197. Grimprel E. Combined redused-antigen-content diphtheria-tetanus-acellular pertussis and polio vaccine (dTpa-IPV) for booster vaccination of adults / E. Grimprel, F. v. Sonnenburg, R. Saeger // Vaccine.- 2005.- Vol. 23.- P. 3657-3667.

198. Gubler J. An outbreak of nontoxigenic Corynebacterium diphtheria infection: single bacterial clone causing invasive infection among swiss drug users / J. Gubler, C. Huber-Schneider, E. Gruner // Clin. Infect .Dis. -1998.- Vol. 27.- P. 1295-1298.

199. Gupta K. Addressing Antibiotic Resistance // Am. J. Med.- 2002.- Vol. 113 (1A).- P. 29-34.

200. Gupta K. Emerging antibiotic resistance in urinary tract pathogens // Infect. Dis. Clin. North. Am.- 2003.- Vol. 17.- № 2.- P.243-259.

201. Gupta K. Increasing Prevalence of Antimicrobial Resistance Among Uropathogens Causing Acute Uncoplicated Cistitis in Women / K. Gupta, D. Scholes, W.E. Stamm // JAMA.- 1999.- Vol. 281.- P. 736 738.

202. Guthmann J.P. Diphtheria, tetanus and poliomyelitis immunization coverage in Franch adults: results of the Health and social protection survey / J.P. Guthmann et al. // Bulletin epidemiologique hebdomadaire.- 2007.-Vol. 25.- № 51-52.- P. 41-445.

203. Gutierrez J. Reliability of low-avidity IgG and IgA in the diagnosis of primary infection by rubella virus with adaptation of a commercial test / J. Gutierrez, M.J. Rodriguez, De Ory // J. Clin. Lab. Anal. 1999.- Vol. 13.-№ 1.- P. 1-4.

204. Gwaltney J.M. Management of acute sinusitis in adults. Infectious Diseases and Antimicrobial Therapy of the Ears, Nose and Throat / Ed by J.T.

205. Johnson , V.L. Yu // 1st.- 1997.- P. 341-349.

206. Hadfield T.L. The pathology of diphtheria / T.L. Hadfield, P. McEvoy, Y. Polotsky // J. Infect. Dis. 2000.- Vol. 181.- P. 116-120.

207. Hansmeier N. Mapping and comprehensive analisis of the extracellular and cell surface proteome of the human pathogen Corynebacterium diphtheriae / N. Hansmeier, T.-C. Chao, J. Kalinowski // Proteomics. 2006.- Vol. 6.-P. 2465-2476.

208. Hatanaka A. Corynebacterium ulcerans diphtheria in Japan / A. Hatanaka, A. Tsunoda, M. Okamoto // Emerg. Infect. Dis. 2003.- Vol. 9.- № 6.- P. 752-753.

209. Hedman R. Avidity of JgG in serodiagnosis of infectious diseases / R. Hedman, M. Lappalaintn, M. Soderland // Rev. Med. Microbiol.- 1993.-Vol.4.- № l.-P. 123-129.

210. Henricson B. Toxigenic Corynebacterium diphtheriae associated with an equine wound infection / B. Henricson, M. Segarra, J. Garvin // J. Vet. Diagn. Investig.- 2000.- Vol.12.- P. 253-257.

211. Henry H.Lee Bacterial charity work leads to population-wide resistance / Henry H. Lee, Michael N. Molla, Charles R. Cantor // Nature.- 2010.-Vol. 467.- P. 82-85.

212. Hoel T. Combined diphtheria-tetanus-pertussis vaccine for tetanus-prone wound management in adults / T. Hoel, J.M. Wolter, L.M. Schuerman // Eur. J. Emerg. Med.-2006.- Vol. 13.- P. 67-71.

213. Holmes R.K. Biology and molecular epidemiology of diphtheria toxin and the tox gene (Review) / R.K. Holmes. // J. Inf. dis. 181 Suppl. 1. - 2000. -P. 156-167.

214. Hubner J. Diagnosis of the early phase of larval toxocariasis using IgG avidity / J. Hubner, M. Uhlikova, M. Leissova // Epidemiol. Microbiol. Immunol.- 2001. Vol.50.- № 2.- P. 67-70.

215. Hunolstein C. Molecular epidemiology and characteristics of

216. Corynebacterium diphtheriae and Corynebacterium ulcerans strains isolated in Italy during the 1990s / C. Hunolstein et al. // Journal of Medical Micribiology. 2003.- Vol. 52. - P. 181-188.

217. Immunization coverage cluster survey-Reference manual. Geneva, World Health Organization.- 2005.- (WHO/IVB/04.23).

218. Izurieta H.S. Exudative pharyngitis possibly due to C. pseudodiphtheriticum, a new challenge in the differential diagnosis of diphtheria: report of a case and review /H.S. Izurieta, T. Youngblood, P.M. Strebel//Emerg. Infect. Dis.- 1997.-№ 3.-P.65-68.

219. Jaan9alves G.T. Luminescence and Absorption of Hybrid Xerogels Doped with PbS Nanoparticles Prepared by Gas Diffusion Method / G.T. Jaan9alves et al. // Materials Science Forum. 2006. - Vol. 514-516. - P. 1221-1224.

220. Jalgaokar S.V. Coagglutination for rapid testing of toxin producing Corynebacterium diphtheriae / S.V. Jalgaokar, A.M. Saoji // Indian Journal of Medical Reseach. 1993. - Jap.- № 97. - P. 35-36.

221. Janda W.M. Corynebacterium species and the coryneform bacteria: Part I: New and emerging species in the genus Corynebacterium II Clin. Microbiol. Newslett. 1998.- Vol. 20.- P. 1-52.

222. Join-Lambert O.F. Corynebacterium pseudotuberculosis lymphadenitis in a twelve-year-old patient / O.F. Join-Lambert, M. Ouache, D. Canioni //

223. Pediatr. Infect. Dis. J. 2006.- Vol. 25.- № 9.- P. 848-851.

224. Jonson W.D. Serious infections caused by diphtheroids / W.D. Jonson, D. Kaye // Ann. NY Acad. Sci.- 1970.- Vol. 174.- P. 568-576.

225. Jukka Lumio. Studies on the Epidemiology and Clinical Caracteristics of Diphtheria during the Russian Epidemic of the 1990 // Tampere.- 2003. -122 p.

226. Kain K.C. C. hemoliticum infection: confused with scarlet fever and diphtheria / K.C. Kain, M.A. Noble, R.L. Barteluck // J. Emerg. Med. -1991.- №9.- P. 33-35.

227. Kanno A. Immunoglobulin G Antibody Avidity Assay for Seridiagnosis of Hepatitis C Virus Infection / A. Kanno, Y. Kazuyama // J. Med. Virol. -2002.- Vol.58.- P. 229-233.

228. Kelsy F. Smith. Regulation and Activity of a Zinc Uptake Regulator, Zur, in Corynebacterium diphtheriae / Kelsy F. Smith, Lori A. Bibb, Michael P. Schmitt // Journal of Bacteriology. 2009. - Vol. 191.- № 5. - P. 15951603.

229. Khamis A. rpoB gene sequencing for identification of Corynebacterium species / A. Khamis, D. Raoult, La Scola // J. Clin. Microbiol.- 2004.- Vol. 42.- P. 3925-3931.

230. Kikuko M. Micro cell culture method for determination of diphtheria toxin and antitoxin titrus using Vero cells / M. Kikuko, N. Shigeko, A. Ito // Journal of Biological Standartization.- 1974.-Vol. 2.- P. 189-201.

231. Kolodkina V. Molecular epidemiology of C. diphtheriae strains during ■ different phases of the diphtheria epidemic in Belarus / V. Kolodkina, L.

232. Titov, T. Sharapa // BMC Infect Dis. 2006.- Vol. 6.- P. 129.

233. Kunkle C. A. Analysis of a DtxR-regulated iron transport and siderophore biosynthesis gene cluster in Corynebacterium diphtheriae / C.A. Kunkle, M. P. Schmitt // J. Bacteriol.- 2005. Vol. 187.- P. 422-433.

234. Kwantes W. Diphtheriae in Europe // J. Hyg. 1984.- Vol. 93.- №3. - P. 433-437.

235. Lai S. International external quality assurance scheme for the laboratory diagnosis of diphtheria / S. Lai, K. H. Engler, R.S. Kozlov // Clin. Microbiol. Antimicrob. Chemother. 2001- Vol. 3.- P. 40^11.

236. Lanzrein M. Structure-function relationship of the ion channel formed by diphtheria toxin in Vero cell membranes / M. Lanzrein, P.O. Falnes, O. Sand//J. Memb. Biol. 1997.-Vol. 156.-P. 141-148.

237. Lartigue M.F. Corynebacterium ulcerans in an immunocompromissed patient with diphtheria and her dog / M.F. Lartigue, X. Monnet, A. Le Fle'che // J. Clin. Microbiol. 2005.- Vol. 43.- P. 999-1001.

238. Lazzarotto T. Prenatal indicators of congenital cytomegalovirus infection / T. Lazzarotto, S. Varani, B. Guerra // J. Pediatr.- 2000.- Vol.- 137.- № 1.-P. 90-95.

239. LCDC. National goals and objectives for the control of vaccine-preventable diseases of infants and children // CCDR 1995. № 21.-P.49-54.

240. Le Guiloou H. Antibody avidity: use for the diagnosis of HIV early infection / Le Guiloou, A. Meur, S. Bourdon // Ann. Biol. Clin.- 2001.-Vol. 59.-№1.- P. 41-47.

241. Lebrun Stewart J. Development of a sensitive colorometric microarray assay for allergtn-responsive human Ig E / S.J. Lebrun, W.N. Petchpud, A. Hui // Journal of Immunological Methods. -2005.- Vol. 300. -№ 1-2.- P. 2431.

242. Leclerq R. Mechanisms of resistance to macrolides and lincosamides: nature of the resistance elements and their clinical implications // Clin. Infect. Dis. 2002.- Vol. 34.- P. 482-492.

243. Lemichez E. Membrane translocation of diphtheria toxin fragment A exploits early to late endosome trafficking mashinery / E. Lemichez, M. Bomsel, G. Devilliers // Mol. Microbiol. 1997.- Vol. 23.- P. 455-457.

244. Leon P. Detection of low-avidity IgG antibodies in the diagnosis of primary acute infection by hepatitis C virus / P. Leon, J.A. Lopez, F. De Ory // Enferm. Infec. Microbiol. Clin.- 1997.- Vol. 15.- № 1.- P. 14-18.

245. Liu D.T. An infected hydrogel buckle with Corynebacterium pseudotuberculosis / D.T. Liu, W.M. Chan, D.S. Fan // Br. J. Ophthalmol. -2005.- Vol. 89.- № 2.- P. 235-246.

246. Longworth E. Avidity maturation following vaccination with a meningococcal recombinant hexavalent Por A OMV vaccine in UK infants / E. Longworth, R. Borrow, D. Goldblatt // Vaccine. 2002.- Vol. 20.- № 19-20.- P.2592-2596.

247. Lord J.M. Toxin entry: retrograde transport through the secretory pathway / J.M. Lord, L.M. Roberts // J. Cell. Biol. 1998.- Vol. 140.- P. 733-736.

248. Lortolary O. Corynebacterium diphtheriae endocarditis in France / O. Lortolary, A. Buu-Hoe, L. Gutman // Clin. Infect. Dis.- 1995.- Vol. 31.-P.63-65.

249. LundV. Infectious rhinosinusitis in adults: classification, etiology and management / V. Lund, J. Gwaltney, F. Baquero // J. Ear. Nose. Throat. -1997.- Vol. 76.-P. 22.

250. Manopo I. Evaluation of a safe and sensitive spike protein-based immunofluorescence assay for the detection of antibody responses to SARS-CoV / I. Manopo, L. Lu, Q. He // Journal of Immunological Methods. 2005.- Vol. 296. - № 1-2.- P. 37-44.

251. Manual of Clinical Microbiology (2 Volume Set). 9-th edition / P.R. Murray // U.S.A. 2007.- 1350 p.

252. Manz A. Miniaturized total chemical analysis systems: A novel concept for chemical sensing / A. Manz, N. Graber, H. M. Widmer // Sensors and Actuators Bl.- 1990.- P. 244-248.

253. Markina S.A. Diphtheria in the Russian Federation in the 1990s / S.A. Markina, N.M. Maksimova, C.R. Vitec // J. Infect. Dis. 2000.- Vol. 181.-P. 27-34.

254. Mattos-Guaraldi A.L. Cell surface components and adgesion in Corynebacterium diphtheriae / A.L. Mattos-Guaraldi, L.C.D. Formiga, G.A. Pereira// Microbes Infect. 2000.- Vol. 2.- P. 127-132.

255. Mattos-Guaraldi A.L. Corynebacterium diphtheriae in cancer patients / A.L. Mattos-Guaraldi, L.C.D. Formiga, T.C.F. Camello // Revista Argentina de Microbiología. 2001.- Vol. 33.- P. 96-100.

256. Mattos-Guaraldi A.L. Bacteriological properties of a sucrose fermenting Corynebacterium diphtheriae strains isolated from a case of endocarditis / A.L. Mattos-Guaraldi, L.C.D. Formiga // Curr. Microbiol.- 1998.- Vol. 37.-P. 156-158.

257. Mattos-Guaraldi A.L. Diphtheria remains a threat to health in the developing world — an overview / A.L. Mattos-Guaraldi, L.O. Moreira, P.V. Damasco // Mem. Inst. Oswaldo Cruz. 2003.- Vol. 98.- P. 987-993.

258. McQuillan G.M. Serologic immuniti to diphtheria and tetanus in the United States / G.M. McQuillan, D. Kruszon-Moran, A. Deforest // Ann. Intern. Med. 2002.- Vol. 136.- P. 660-666.

259. Melnikov V.G. Corynebacterium diphtheriae nontoxigenic strain carrying the gene of diphtheria toxin / V.G. Melnikov, S.Iu. Kombarova, O.Iu. Borisova // Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol.- 2004.- Vol 1.- P. 3-7.

260. Menshikova A.Yu. Monodisperse carboxylated polystyrene particles — synthesis, electrokinetics and adsorptive properties / A.Yu. Menshikova, T.G. Evseeva, Yu.O. Skurkis et al // Polymer. 2005.- Vol. 46.- № 4.- P. 1417-1425.

261. Menshikova A.Yu. Surface modified latex particles: synthesis and self-assembling into photonic crystals / A.Yu. Menshikova, B.M. Shabsels, N.N. Shevchenko // Colloids & Surfaces. A. 2007.- Vol. 298.- № 1-2.- P. 27-33.

262. Methods for the determination of susceptibility of bacteria to antimicrobial agents. EUCAST Definitive document // Clin Microbiol Infect.- 1998.- Vol. 4.- P.291-296.

263. Michael E. Pichichero. Booster Vaccinations: Can Immunologic Memory Outpace Disease Pathogenesis? // Pediatrics. 2009.- Vol. 124.- P. 16331641.

264. Microbiology Laboratory Manual. 7-th Edition / John Harley, John P Harley // U.S.A. 2007. - 2256 p.

265. Mitamura T. Structure-function analysis of the diphtheria toxin receptor toxin binding site by site-directed mutagenesis / T. Mitamura, T. Umata, F. Nakano // J. Biol. Chem. -1997.- Vol. 272.- P.27084-27090.

266. Modlin Robert L. Current Option in Immunology // Full. A-Z Journal List.-2003.- Vol.15.- № 4.- P. 393-395.

267. Mokrousov I. Corynebacterium diphtheriae: Genome diversity, population structure and genotyping perspectives // Infection, Genetics and Evolution. -2009.- Vol. 9.- P. 1-15.

268. Montoya J.C. VIDAS test for avidity of Toxoplasma-specific immunoglobulin G for confirmatory testing of pregnant women / J.G. Montoya, O. Liesenfeld, S. Kinney // J. Clin. Microbiol.- 2002.- Vol.40.- № 7.-P. 2504-2508.

269. Moreira L.O. Effects of iron limitation on adherence and cell surface carbohydrates of Corynebacterium diphtheriae strains / L.O. Moreira, A.F. Andrade, M.D. Vale // Appl. Environ. Microbiol. 2003.- Vol. 69.- P. 5907-5913.

270. Mostafa N.E. Low avidity IgG antibodies in diagnosis of recent humanschistosomiasis / N.E. Mostafa, A. Awad, M. Shalaby // J. Egipt. Soc. Parasitol.- 2002.- Vol. 32.- № 3.- P. 979-985.

271. Mothershed E. A. Development of a real-time fluorescence PCR assay for rapid detection of the diphtheria toxin gene / E. A. Mothershed, P. K. Cassiday, K. Pierson // J. Clin. Microbiol.- 2002.- Vol. 40.- P. 4713^1719.

272. Muerhoff A.S. Detection of HCV core antigen in humanserum and plasma with a automated chemiluminescent immunoasssay / A.S. Muerhoff, L. Jiang, D.O. Shah // Tranfiision.- 2002.- Vol. 42.- № 3.- P. 349-356.

273. Nakamura J. The genome stability in Corynebacterium diphtheriae species due to lack of the recombinational repair system / J. Nakamura, Y. Nishio, K. Ikeo // Gene. 2003.- Vol. 317,- P. 149-155.

274. Nakao H. Development of a direct PCR assay for detection of the diphtheria toxin gene / H. Nakao, T. Popovic // J. Clin. Microbiol. 1997.-Vol. 35.-P. 1651-1655.

275. Narita M. Analisis of Mumps vaccine failure by means of avidity testing for mumps virus specific immunoglobulin G / M. Narita, Y. Matsuzono, Y. Takekoshi // Clin. Diag. Lab. Immunol.- 1998.- Vol. 5.- № 6.- P. 700-803.

276. NCCLS Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Test for Bacteria That Grow Aerobically; Approved Standart. 6th ed.- 2002.- Vol. 20.-P.1-45.

277. NCCLS. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; ninth informational supplement M100-S9.- 1999.- Vol.19.- №1.

278. Neal S.E. International External Quality Assurance for Laboratory Diagnosis of Diphtheria / S.E. Neal, A. Efstratiou // J. of Clinical. Microbiol. 2009.- Vol. 47.- №12.- P. 4037-4042.

279. Nikula T. A human Immunochip cDNA microarray provides a comprehensive tool to study immune responses / T. Nikula, A. West, M. Katajamaa // Journal of Immunological Methods. 2005. - Vol. 303. - № 12. P.122-134.

280. Niyazmatov B.I. Diphtheria epidemic in the Republic of Uzbekistan, 19931996 / B.I. Niyazmatov, A. Shefer, M. Grabowsky // J. Infect. Dis.- 2000.-Vol. 181 (Suppl 1).-P. 104-109.

281. Nuorimaa T. Avidity and subclasses of Ig G after immunization of infants with an 11-valent pneumococcal conjugate vaccine with or without Aluminium adjuvant / T. Nuorimaa, R. Dagan, M. Vakevainen // J. Infect. Dis. -2001.- Vol.183.- №9.- P.121-1215.

282. Odievre M.N. The assessment of IgG avidity in the evaluation of perinatal herpes simplex virus infection / M.N. Odievre, D. Cointe, B. Thebaud // J. Perinatal.- 2002.- Vol. 22.- № 8.- P. 669-671.

283. Okabe L. On a method of the standardization of anti-diphtheria serum by the use of tissue cultivation // Kitasato Archiev of Experimental Medicine. -1933.-№ 10.-P. 41-56.

284. Omura S. Macrolide Antibiotics. 2-th edition / S. Omura, editor // -Academic press.— 2002. 465 p.

285. Pallen M.J. Rapid screening for toxigenic Corynebacterium diphtheriae by the polymerase chain reaction // J. Clin. Pathol.- 1991.- Vol. 44.- P. 10251026.

286. Pallen M.J. Polymerase chain reaction for screening clinical isolates of corynebacteria for the production of diphtheria toxin / M.J. Pallen, A.J. Hay, L.H. Puckey // J. Clin. Pathol.- 1994.- Vol. 47.- P. 353-356.

287. Pappenheimer Jr A.M. Diphtheria toxin // Annu. Rev. Biochem. 1977.-Vol. 46.- P. 69-94.

288. Paulson D. S. Biostatistics and Microbiology // A Survival Manual. 2008.-780p.

289. Peel M.M. Human lymphadenitis due to Corynebacterium pseudotuberculosis', report of ten cases from Australia and review / M.M. Peel, G.G. Palmer, A.M. Stacpoole // Clin Infect. Dis.- 1997.- Vol. 24.- № 2.-P. 185-191.

290. Placido-Sousa C. The action of diphtheria toxin on tissue cultures and its neutralization by antitoxin / C. Placido-Sousa, D.G. Evans // The British Journal of Experimental Pathology. 1957. - Vol. 38. - P. 644-650.

291. Pohl E. Comparison of high-resolution structures of the diphtheria toxin repressor in complex with cobalt and zinc at the cation-anion binding site / E. Pohl, X. Qui, L.M. Must // Protein Sci. -1997.- Vol. 6.- P. 1114-1118.

292. Pollock A.M. Diphtheria // In: A. Balows, W.J. Hausler, M. Ohashi, eds. Laboratory diagnosis of infectious diseases: principles and practice.- Vol. 1. New York: Springer-Verlag. 1988.- P. 208-216.

293. Popovic T. Molecular Epidemiology of Diphtheria / T. Popovic, I.K. Mazurova, A. Efstratiou // The Journal of Infectious Diseases.- 2000.- Vol. 181.-P. 168-177.

294. Prince H.E. Simplified assay for measuring Toxoplasma gondii immunoglobulin G avidity / H.E. Prince, M. Wilson // Clin. Diagn. Lab. Immunol.- 2001.- Vol. 8.- № 5.- P. 904-908.

295. Prince H.E. Validation Of an in-house assay for cytomegalovirus immunoglobulin G (CMV IgG) avidity and relationship of avidity to CMV IgM levels / H.E. Prince, A.L. Leber // Clin. Diagnos. Lab. Immunol.-2002.- Vol. 9.- № 4.- P. 824-827.

296. Proll G. Monitoring an antibody affinity chromatography with a label -free optical biosensor technique / G. Proll, M. Kumpb, M. Mehlmann // Journalof Immunological Methods. 2004. - Vol. 292. - № 1-2.- P. 35-42.

297. Pullen G.R. Antibody avidity determination by ELISA using thiocyanate elution / G.R. Pullen, M.G. Fitzgerald, C.S. Hosking // J. Immunol. Methods.- 1986.- Vol.106.-№1.- P.l 19-125.

298. Qian Y. Identification of a DtxR-regulated operon that is essential for siderophore-dependent iron uptake in Corynebacterium diphtheriae / Y. Qian, J. H. Lee, R. K. Holmes // J. Bacterid.- 2002.- Vol. 184.- P. 48464856.

299. Randall K.Holmes. Biology and Molecular Epidemiology of Diphtheria Toxin and the tox Gene // The Journal of Infectious Diseases.- 2000. Vol. 181. (Suppl.l). - № 1.- P.156-167.

300. Rangaraj G. Perils of quinolone exposure in cancer patients: breakthrough bacteremia with multidrug-resistant organisms / G. Rangaraj, B.P. Granwehr, Y.Jiang //Cancer. 2010,-Vol.-l 16.-№ 4.-P. 967-973.

301. Ratti G. tRNA{2Arg) gene of Corynebacterium diphtheriae is the chromosomal integration site for toxinogenic bacteriophages / G. Ratti, A. Covacci, R. A. Rappuoli // Mol. Microbiol. 1997.- Vol. 25.- P.l 179-1181.

302. Rauer S. Avidity determination of Borrelia burgdorferi specific IgG antibodies in Lyme disease / S. Rauer, P. Beitlich, U. Neubert // Scand. J. Infect. Dis. - 2001.- Vol. 33.- № 11. . p. 809-811.

303. Reacher M. Nontoxigenic Corynebacterium diphtheriae: An Emerging Pathogen in England and Wales? / M. Reacher, M. Ramsay, J.White // Emerging Infectious Diseases. -2000. Vol. 6. - № 6. - P. 640-645.

304. Renaud F. N. Corynebacterium freneyi sp. nov., a-glucosidase-positive strains related to Corynebacterium xerosis / F.N.R. Renaud, D. Aubel, Riegel // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2001.- Vol. 51.- P. 1723-1728.

305. Robartson P. Measurement of EBV-IgG anti-VCA avidity aids the early and reliable diagnosis of primary EBV infection / P. Robertson, S. Beynon, R. Whybin // J. Med. Virology.- 2003.- Vol.70.- № 4.- P. 617-623.

306. Rogers K.R. Principles of affinity-based biosensors // J. Mol. Biotechnol.-2000.- Vol. 14.-№2.-P. 109-129.

307. Ruault А. Дифтерия // Ежемесячный журнал «Практическая медицина» под ред. проф. патологии и клиники вн. болезней М.И. Афанасьева 1892. - № 11.- 35 с.

308. Rundall К. Н. Biology and Molecular Epidemiology of Diphtheria Toxin and the tox Gene // The Journal of Infectious Diseases.- 2000.- Vol. 181.-№ 1.-P.156-167.

309. Sanz I.M. Amino, chloromethyl and acetal-functionalized latex particles for immunoassays: a comparative study / I.M. Sanz, A. Martin-Molina, J. Ramos // Journal of Immunological Methods.- 2004.- Vol. 287.- № 1-2. -P. 159-167.

310. Schito G.C. The ARESC study: an international survey on the antimicrobial resistance of pathogens involved in uncomplicated urinary tract infections / G.C. Schito, K.G. Naber, H. Botto // Int. J. Antimicrob. Agents. 2009.-Jun 6.

311. Schmitt M. P. Construction and consequences of directed mutations affecting the hemin receptor in pathogenic Corynebacterium species / M. P. Schmitt, E. S. Drazek // J. Bacteriol. 2001.- Vol. 183.- P.1476-1481.

312. Schubert J. Comparative evaluation of the use of immunoblots and of IgG avidity assay as confirmatory test for the diagnosis of acute EBV infections / J. Schubert, W. Zens, B. Weissbrich // J. Clin. Virology.- 1998.- Vol. 11.-№3.- P.161-172.

313. Schuhegger R. Pitfalls with diphtheria-like illness due to toxigenic Corynebacterium ulcerans / R. Schuhegger, R. Kugler, A. Sing // Clin.1.fect. Dis.- 2008.- Vol. 47.- № 2.- P. 288.

314. Schuhegger R. Letters to the Editor. Detection of Toxigenic Corynebacterium diphtheriae and C.ulcerans strains by a novel real-time PCR / R. Schuhegger, M. Lindermayer, R. Kugler // J. of Clin. Microbiol. -2008.- Vol. 46. № 8.- P. 2822-2823.

315. Scott J. Immunizing adults against tetanus and diphtheria / J. Scott, J. Hickey // Can. Fam. Phys. 2003.- Vol. 9.- P. 587-588.

316. Sharma N.C. Bacteriological and epidemiological characteristics of diphtheria cases in and around Delhi—a retrospective study / N.C. Sharma, J.N. Banavaliker, R. Ranjan // Indian J. Med. Res.- 2007.- Vol. 126.- P. 545-552.

317. Shckorbatov Y.G. Microwave Irradiation Influences on the State of Human Cell Nuclei / Y.G. Shckorbatov, N.N. Grigoryeva, V.G. Shakhbarov // Bioelectromagnetics.- 1998,- Vol. 19.- P. 414-419 .

318. Shevchenko N.N. Self-assembly of monodisperse nanoparticles of styrene copolymers with N-vinylformamide into periodic colloidal structures / N.N. Shevchenko, A.Yu. Menshikova, A.G. Bazhenova // High Energy Chemistry.- 2008.- Vol. 42.- № 7. P. 24-26.

319. Shubert J. Comparative evaluation of the use of immunoblots and of Ig G avidity assays as confirmatory test for the diagnosis of acute EBV infections / J. Shubert, W. Zens, B. Weissbrich // J. Clin. Virology.- 1998.-Vol.ll.- №3.- P.161-172.

320. Sing, A. Imported cutaneous diphtheria, Germany, 1997-2003. / A. Sing, J. Heesemann // Emerg. Infect. Dis. 2005.- Vol. 11.- P. 343-344.

321. Soloviev A.G. Investigation of surface plasmon resonance in gold/alumina composite films prepared by rf-sputtering / A.G. Soloviev, D.J. Rolo, M.J. Barber // J. of Nanoscience and Nanotechnology. 2009.- Vol. 9.- P. 72607264.

322. Songul Yelcin S. Prophylactic use of acetaminophen in children vaccinated with diphtheria-tetanus-pertussis / S. Songul Yelcin, A. Gumus, K. Yerdakok // World J. Pediatr. 2008. - Vol. 4. - № 2.- P. 127-129.

323. Souliou E. Serological survey on the immunity to diphtheria of the northern Greek population / E. Souliou, V. Kyriazopoulou, E. Diza // Eur. J. Epidemiol. 1997.- Vol. 13.- № 5.- P. 535-539.

324. Sunil K. Standartization and validation of Vero cell assay for potency estimation of diphtheria antitoxin resum / K. Sunil, S. Kanwar, V. Bansal // 2009. www.elsevier.com/locate/biologicals.p. 1-9.

325. Swarz M.N. Use of antimicrobial agents and drug resistance // N. Engl., J. Med. 1997.- Vol. 337.- P. 491-492.

326. Tharmaphornpilas P. Diphtheria in Thailand in the 1990s / P. Tharmaphornpilas, P. Yoocharoan, P. Prempree // J. Infect. Dis. 2001.-Vol. 184.-P. 1035-1040.

327. Tiley S.M. Infective endocarditis due to non-toxigenic Corynebacterium diphtherial, report of seven cases and review / S.M. Tiley, K.R. Kokiuba, L.G. Heron // Clin. Infect. Dis.- 1993.- Vol. 16.- P.271-275.

328. Titov L. Genotypic and phenotypic characteristics of Corynebacterium diphtheriae strains isolated from patients in Belarus during an epidemic period / L. Titov, V. Kolodkina, A. Dronina // J. Clin. Microbiol.- 2003.-Vol. 41.- P. 1285-1288.

329. Tiwari T.S. Investigations of 2 cases of diphtheria-like illness due to toxigenic Corynebacterium ulcerans /T.S. Tiwari, A. Golaz, D.T. Yu // Clin. Infect. Dis. 2008.- Vol. 46.- № 3.- P. 395-401.

330. Ton-That H. Assembly of pili on the surface of Corynebacterium diphtheriae / H. Ton-That, O. Schneewind // Mol. Microbiol. 2003.- Vol. 50,- P. 1429-1438.

331. Usinger W.R. Avidity as a determinant of the protective efficacy of human antibodies to pneumococcal capsular polysaccharides / W.R. Usinger, A.N. Lucas // Infect. Immun.- 1999.- Vol.67.- №11.- P.2366-2370.

332. Vaccine against diphtheria // Weekly epidemiological record. № 3,- 20 Jenuary 2006.- P. 1-9.

333. Van Damme P. Immunogenicity of a combined diphtheria-tetanus-acelular pertussis vaccine in adults / Van Damme P., M. Burgess // Vaccine.- 2004.-Vol. 22.-P. 305-308.

334. Viana Lde G. Antibody subclass profile and avidity during acute and chronic human schistosoma mansoni infection / Viana Lde G., A. Rabello, N. Katz // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg.- 2001.- Vol. 95.- № 5.- P. 550556.

335. Vitek C.R. Diphtheria surveillance and control in the Former Soviet Union and the Newly Independent States / C.R. Vitek, E.Y. Bogatyreva, M. Wharton // J. Infect. Dis. 2000.- Vol. 181.- P. 23-26.

336. Vitek C.R. Diphtheria in the former Soviet Union: re-emergence of a pandemic disease / C.R. Vitek, M. Wharton // Emerg. Infect. Dis. 1998.-Vol. 4.- P. 539-550.

337. Volzke H. Susceptibility to diphtheria in adults: prevalence and relationship to gender and social variables / H. Volzke, K.M. Kloker, A. Kramer // Clin. Microbiol. Infect. 2006.- Vol. 12.- № 10.- P. 961-967.

338. Wagner K.S. A review of the international issues surrounding the availability and demand for diphtheria antitoxin for therapeutic use /K.S. Wagner, P. Stickings, J.M. White // Vaccine. 2010.- Vol. 28.- P. 14-20.

339. Wagner J. Infection of the skin caused by Corynebacterium ulcerans and mimicking classical cutaneous diphtheria / J. Wagner, R. Ignatius, S. Voss // Clin. Infect. Dis. 2001.- Vol. 33.- P. 1598-1600.

340. Walory J. The prevalence of diphtheria immunity in healthy population in Poland / J. Walory, J. Grzesiowski, W. Hryniewicz // Epidemiol. Infect. 2001.- Vol. 126.- № 2.- P. 225-230.

341. Wang C.C. Corynebacterium jeikeium bacteremia in bone marrow transplant patients with Hickman catheters / C.C. Wang, D. Mattson, A. Wald // Bone Marrow Transplant. 2001.- Vol. 27.- P. 445-449.

342. Ward K.N. Measurement of antibody avidity for hepatitis C virus distinguishes primary antibody responses from passively acquied antibody / K.N. Ward, W. Dhaliwal, K.L. Ashworth // J. Med. Virol. 1994.- Vol. 43.-№ 4.- P. 367-372.

343. Ward K.N. Use of immunoglobulin G antibody avidity for differentiation of primary human herpesvirus 6 and 7 infections / K.N. Ward, D.J. Turner, X. Couto-Parada // J. Clin. Microbiol. 2001.- Vol. 39.- № 3.- P. 959-963.

344. Weilen V.d.M. A randomised controlled trial with a diphtheria-tetanus-acellular pertussis (dTpa) vacine in adults / V.d.M. Weilen, V. Damm, P. Joossent E // Vaccine. 2000.- Vol. 18.- P. 2075-2082.

345. Wellinghausen N. A fatal case of necrotizing sinusitis due to toxigenic Corynebacterium ulcerans I N. Wellinghausen, A. Sing, W.V. Kern // Int. J. Med. Microbiol.- 2002.- Vol. 292. P. 59-63.

346. White A. Structure of the metal-ion-activated diphtheria toxin repressor/tox operator complex / A. White, X. Ding, J.R. Murphy // Nature. 1998.- Vol. 394.- P. 502-506.

347. WHO vaccine-preventable diseases: monitoring system 2010 global summary: // apps.who.int/immunizationmonitoring/en/globalsummary /timeseries/tsincidencedip.htm, 13 Oct. 2010.

348. Wilks A. Expression and characterization of a heme oxygenase (Hmu O) from Corynebacterium diphtheriae. Iron acquisition requires oxidative cleavage of the heme macrocycle / A. Wilks, M.P. Schmitt // J. Biol. Chem. 1998.- Vol. 273.- P. 837-841.

349. Williams H.U. A Manual Of Bacteriology. 2008.- 480 p.

350. Winstanleya T.G. A 10 year survey of the antimicrobial susceptibility of urinary tract isolates in the UK: the Microbe Base project / T.G. Winstanleya, D.I. Limba, R. Eggingtona // J Antimicrob. Chemother.-1997.- Vol. 40.-P. 591-594.

351. World Health Organization. Diphtheria vaccine: WHO position paper. Weekly Epidem. Rec. 2006.- Vol. 3.- P. 24-32.

352. Wuorimaa T. Avidity and subclassis of IgG after immunization of infants with an 11. Valent pneumococcal conjugate vaccine with or without aluminium adjuvant / T. Wuorimaa, R. Dagan, M. Vakevainen // J. Infect. Dis.- 2001.- Vol.184.- № 9.- P.1211-1215.

353. Xiaomei Yan. Microsphere-based duplexed immunoassay for influenza virus typing by flow cytometry / Y. Xiaomei, E.G. Schielke, K.M. Grace // Journal of Immunological Methods.- 2004. Vol. 284.- № 1-2. - P. 27-38.

354. Yuan L. Diphtheria and tetanus immunity among blood donors in Toronto / L. Yuan, W. Lau, J. Thipphawong // Can. Med. Assoc. J. 1997.- Vol. 156.- P. 985-990.

355. Zasada A.A. The first case of septicemia due to nontoxigenic Corynebacterium diphtheriae in Poland: case report. Ann. / A.A. Zasada, M. Zaleska, R.B. Podlasin // Clin. Microbiol. Antimicrob.- 2005.- Vol. 4.-P. 8.

356. Zhmakin A.I. A memory-efficient unstructured grid refinement algorithm for computation of 3-D steady viscous flows // Communications in Numerical Methods in Engineering. 1997.- Vol.13. - № 4.- P. 219-228.

Информация о работе

Краева, Людмила Александровна
доктора медицинских наук
Санкт-Петербург, 2011
ВАК 03.02.03

Диссертация

Биологические основы разработки новых технологий для диагностики и мониторинга дифтерии - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы