Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологическая характеристика стафилококков при стафилококковой инфекции птиц и борьба с ней в Грузии

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Биологическая характеристика стафилококков при стафилококковой инфекции птиц и борьба с ней в Грузии"

ТБИЛИССКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ им. И.ДйАВАХШШЛИ

На правах рукописи

СИХАРУЛВДЗЕ НАТЕЛА НШЛАЕВНА

УДК 616:981.25-636.5

БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТАФИЛОКОККОВ ПРИ СТАФИЛОКОККОВОЙ ШФЕКЦИИ ПТЩ И БОРЬБА С НЕЙ В ГРУЗИИ

03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Тбилиси - 1990

Работа выполнена в Грузинском ордена "Знак Почета" зоо-технкческо-ветеринарном учебно-исследовательском институте.

Научные руководители: доктор ветеринарных наук, заслуженный деятель науки ГССР, профессор

ШАМАТАВА В~гГ доктор медицинских наук, член-корреспондент АН ГССР, заслуженный деятель науки ГССР, профессор ЧШШВИЛИ Т.Г.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук ЧИРАКАДЗЕ И.Г.

кандидат биологических наук ТВДИАШВИЛИ М.И.

Ведущая организация - Институт микробиологии АН Армянской ССР

Защита состоится "_"_19_г. в_часов

на заседании специализированного совета К 057.03.17 в Тбилисском Государственном университете им. И.Дяавахишвили /380043, Тбилиси, ул. Университетская, 5/.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ТГУ.

Автореферат разослан "_"_ 19_г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических

наук, доцент ¡¿¿{и*—. Н.М.Цинцадэв

_ 2 -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИК РАБОТЫ

Актуальность темы, Для успешного решения Продовольственной программы перед специалистами промьшленного птицеводства стоят проблемы решения основных социальных, общебиологических и экономических задач. Задачи социального характера сводятся к охране лодей от зоонозных инфекций и обеспечения населения полноценными, чистыми в санитарном отношении продуктами птицеводства.

На пороге XXI века охрана.окружающей среды превратилась в глобальную проблему. Научно-технический прогресс увеличил опасность загрязнения биосферы.

Современное производство птицы представляет собой высокоспециализированную индустриальную отрасль. Автоматизация 'и интенсификация дают возможность воспроизводства птицы, выращивания молодняка, производства яиц и мяса при содержании большого поголовья. Однако такие птицефабрики создают благоприятные условия для активизации различных биологических агентов - бактерий, вирусов и др.

Эффективное использование таких преобразований требует совершенства наших знаний в^ области этиологии и эпизоотологии заболеваний птиц и экономически эффективных способов борьбы с ними.

Необходимо подчеркнуть значение микробиологии в разработке основных принципов в охране природы. Лечебно-профилактическая работа тесно связана с разработкой и внедрением мероприятий по ограничению инфекционной заболеваемости, предотвращению и распространению патогенного начала на другие восприимчивые к нему популяции. Этих принципов строго придерживались и продолжают првдержи-

о

ваться в отношение инфекции, общих для человека, животных и птиц, в результате чего максимально исключены возможности возникновения многих антропозоонозов.

Сельскохозяйственные животные и птицы, являющиеся звеньями

пищевой экологической цепи, могут накапливать в своем организме ряд опасных для здоровья человека химических веществ различного происхождения.

Деятельность ветеринарных врачей животноводческих и птицеводческих комплексов целиком подчинена принципу охраны биосферы. Их деятельность предохраняет природную среду от заражения различными, опасными для здоровья человека микроорганизмами.

Анализ отчетности птицефабрик в СССР показывает, что удельный вес заразных болезней э общем падеже невелик, составляет за последние годы 6-8$, однако велика их потенциальная опасность /Л.Л.Погребняк, Р.Н.Коровин, С.В.Николаев, 1987/.

Вопрос надежной защиты птицы от различных инфекционных заболеваний, в том числе и от стафилококкоза, является чрезвычайно актуальным. В некоторых случаях, по образному выражению Л.А. Фаворовой, Н.Б.Мордвиновой /1974/, стафилококковые заболевания принимают размеры "стафилококковой чумы" или "стафилококкового бедствия".

Несмотря на то, что в последние годы изучению стафилококковых инфекций и в частности, стафилококкоза птиц, уделяется большое внимание /Г.В.Выгодчиков, 1963-1973; М.В.Капитанаки, 1971; А.К.Лгсатов, Т.М.Самсонова, М.Е.Хоненевер, 1976-1982; Тегап1а1 Н. 1987; А.И.Борисенкова, 1983-1988 и др./, все яе вопросы, касающиеся эпидемиологии и эпизоотологии стафилококковых инфекций, свойств возбудителей, а также мер борьбы - остаются нерешенными.

Причины увеличения числа заболеваний стафилококоовой этиологии объясняются исследователями по-разному. Некоторые исследователи связывают с распространением эпидемических фаготипов патогенных стафилококков, другие объясняют формированием полирезистентности к антибиотикам у стафилококков. При этом проблема приобретенной устойчивости микроорганизмов х антибиотикам до настоящего

времени остается весьма актуальной ввиду повсеместного распространения резистентных форм бактерий и снижения эффективности применлеуых хкг/ико-терапевтических препаратов. Вышеизложенное и послужило поводом избрания настоящей темы для диссертационной работы.

Цель и задачи исследования. Учитывая запросы экологии, микробиологии, ветеринарной практики, эпизоотологии и эпидемиологии, был изучен стафилококков птиц в Грузии с учетом природно-климатических условий. В соответствии с этой целью послащены следующие задачи:

1. Выделить штаммы стафилококков различного происхождения от больных, павших, вынужденно прирезанных птиц, из птичников и внешней среды, изучить их б^отиповые свойства, фаго- и антибио-тикочувствительность, усовершенствовать методы диагностики и меры борьбы.

2. Провести массовые исследования птицефабрик Грузии по выделению штаммов стафилококков из различных источников и определить их видовую .принадлежность.

3. Изучить экологическое состояние птицефабрик и внешней среды с установлением природно-климатических условий, способствующих развитию стафилококкоза птиц.

4. Определить сопровоясдагщую микрофлору при данной инфекции птиц. '

5. Изучить патологоанатомические изменения с целью диагностики заболевания.

6. Разработать методы экспресс-диагностики.

7. Приготовить специфический стафилококковый антиген для ранней массовой диагностики инфекции и установления эпизоотической ситуации птицефабрик.

8. Разработать комплексный метод борьбы с инфекцией для пти-

цефэбрик Грузии.

Научная новизна, В условиях ГССР впервые нами были идентифицированы штаммы стафилококков птиц и дана их биологическая характеристика. Определен ведовой состав стафилококков. Изучена фото-, антибиотикочувствительность и резистентность. Показано, что при остром течении болезни часто ввделяется s.aureus а из павшей и вынужденно прирезанной птицы кроме этого выделяется и s.in-ternedius, S. epidermidia ИЗ внешней среды S.hyicue.

Нами были изысканы препараты, которые характеризуются высокой активностью, как в отношении грамлоложительной, так и грам-отрицательной микрофлоры, так как исследования показали, что стафилококков часто протекает вместе с грамотрицательной микрофлорой / Pastereil u Eeherichia coli/.

Антибиотики при сочетании с сульфаниламидными препаратами проявляют синергидиое, пролонгированное антимикробное действие по отношению к микробным тест-культурам, стафилококкам и сопро-воядающей микрофлоре, а такяе повышенную терапевтическую активность при экспериментальном стафилококкозо.

Для массовой и ранней диагностики птиц применена сывороточ-ио-капельнпя реакция агглютинации (CICPA), которая по наш им данным характеризуется достаточной специфичностью, что позволяет с помощью этой реакции на стекле (СКРЛ) диагностировать забслева-пне на ранних стадиях развития, контролировать эпизоотический процесс и вовремя проводить необходимые профилактические мероприятия.

Для экспресс-диагностики рекомендуется испольговатъ несколько измененный нами нопскаинОЕО-кропяноЯ агар и вместо плазмокоагу-ляции реакция ллазмоагглютинации на предметном стекле. Все это дает возможность, особенно для практических работников и с лабораториях, ускорить диагностирований апологического фактора и ус-

тановление его патогенности.

Проанализировав общую ситуацию по данной инфекции,' считаем целесообразным вместе с сочетанием антибиотиков и сульфаниламидов применять на птицефабриках авиглобулин, который оказывает общестимулирующее действие на организм птиц, повьшяет его естественную устойчивость против инфекционных заболеваний и, в том числе против стафилококкоза. Мы считаем, что положительные результаты могут быть получены только при проведении комплексных мероприятий борьбы со стафилококкоэом.

Практическая ценность. В комплексе с общими.профилактическими мероприятиями борьбы со стафилококкоэом птиц предлагается провести серологическую диагностику с помощью СКРА и экспресс-диагностику с помощью новокаиново-кровяного агара, применить со-четанный лекарственный препарат - притромицин с сульфапиридази-ном, оксацкллин с сульфадиметоксином и в отдельности эритромицин, оксациллкн, олететрин, перорально с кормом для профилактики 5 дней подряд; для лечения б дней.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на конферелциях: микробиологов Закавказских республик "Современные достижения микробиологии и биотехнологии", 8 декабря 1988 г. Тбилиси; Из 1У республиканской научной конференции молодых ученых и специалистов в области животноводства, ветеринарии и экономики сельского хозяйства, 28 сентября 1989 г.; Всесоюзной конференции молодых ученых и аспирантов по птицеводству, 31 мая 19а9 г.; на заседании ученого совета Грузинского зоотехни-ческо-ветеринарного учебно-исследовательского института, 21 июня 1989 г.; на совместном заседании кафедр микробиологии и вирусологии, опизоотологии, отдела антибиотиков и ;"Икологни и по изучению болезней птиц при ГЗВУШ; на научно-техническом совете НПО "Грузинского птицепрома" 7 декабря 1989 г.

Публикация, По теме диссертации опубликовано 5 печатных ра-

бот.

Внедрение. Основные материалы наших исследований внедрены на птицефабриках Грузии /Гамард^вебской и Сачхерской/, а также используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий на кафедрах микробиологии и вирусологии, эпизоотологии и на курсах повышения квалификации ветеринарных врачей.

Структура и объем работы. Общий объем работы составляет 97 страниц машинописного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, материал и методы исследования, I ^ст-венные исследования, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы и приложение. Текст содеркит 8 фотоснимков из собственных макро- и микропрепаратов, 15 таблиц, I график и I диаграмму. Список литературы включает 122 наименований, из них 85 на русском и 37 иностранных языках.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в период 1986-1989 гг. на кафедре эпизоотологии, в отделе по изучению болезней птиц при ГЗВУИИ, Тбилисском НПО "Бактериофаг", а также на птицефабриках Грузии /Норий-ской, Гамарджвебской, Очамчирской и Сачхерской/.

Эталонные птаммы были доставлены из Всесоюзного института экспериментальной ветеринарии.

Так как пока не существует международного набора фагов птиц для типирования стафилококков, мы применяли международный набор фагов как человека, так и крупного рогатого скота, зылуска» емый институтом эпидемиологии и микробиологии км.Гамалеи. ®аго-типирование проводилось по общепринятым методам.

Было исследовано 1520 больных, павпкх и Еынулденно прирезанных птиц различного возраста /30,60,90-дневного и взрослые до 300-дневного/. Для постановки биологической пробы били мегюльзо-

ваны: кролики 4, белые мыши 60, цыплята односуточные 20, молодняк 60-дневные 50.

Производственные штаммы 3.аигеи8,3.1иЛегтесЛи8,8.ер1 -йегт1<11в,з.Ьу1сиэ были выделены в Гамарджвебской, Норийс-кой, Очамчирской и Сачхерской птицефабриках от птиц, а также из птичников и внешней среды.

В работе использовали среды: мясо-пептонный булюн и агар с глюкозой /О, молочно-яелточно-солевой агар, среды Чепмана и Гисса, новокаиново-кровяной агар.

Наличие коагулаэы и способность ферментировать маннит в анаэробных условиях определяли методом, предложенным международным подкомитетом по таксономии стафилококков и микрококков. Определение лизоцима проводили по методу Каи1£вг .1. /1968/. .

Чувствительность к антибиотикам изучали методом серийных разведений и методом диффузии в агар с использованием бумажных дисков.

Биотипирование стафилококковых штаммов проводили по общепринятым методам.

Притеняли следующие антибиотики: эритромицин, оксациллин, олететрин; и сульфаниламиды: сульфадиметоксин, сул1фяпирнцазин,

Для ранней массовой диагностики - специфический стафилококковый антиген, приготовленный нами из диких штаммов з.еигеив •

Результаты собственных исследований обрабатывали с помощь» вариационной статистики по методике, изложенной в работе И.А. Ойвина /1960/.

Биотипкрование штаммов стафилококков различного происхождения

Стафилококки являются одним из наиболее часто встречающихся микробов. У птиц стафилококки вызывают локальные воспалительные процессы /дерматит/ и генерализованные заболевания /септице-

мию, остеомиелит, синовит, артрит/. В связи с этим большое значение имеет выявление источников этиологического фактора инфекции.

Выделенные нами из разных источников культуры стафилококков были подвергнуты биотипированию для более глубокого изучения штаммов разного происхождения.

Биотипирование стафилококков вкличает биохимические тесты: ДНК-азную, гемолитическую активность, плазмокоагуляцию, расщепление маннита в анаэробных условиях, фаго и антибиотикочувствитель-ность и др.

Целью нашей работы являлось выявдтъ методом биотил 'рования внутривидовое разделение выделенных из разных источников штаммов стафилококков.

Для межвидовой дифференциации штаммов из общего количества более детальному изучению были подвергнуты 132 штамма стафилококков, выделенных из различных птицефабрик ГССР, птичников и внешней среды в различное время.

От больных птиц, из 22 штаммов выявлено 21 /95,4*/ плазмо-коагулирующих, 18 /81,8^/ гемолитически активных, 22 /100$/ ферментировали маннит, 18 /81,8$/ ДНК-аза активны, 18 /81,8^/ пигмен-тообразующие.

От павших из 42 штаммов соответственно предыдущему 30 /71,4;?/, 30 /71,4$/, 41 /97,6;?/, 38 /90,4%/, 36 /85,?%/; от вынужденно прирезанных - из 38 штаммов 35 /92,К/, 36 /94,7£/, 37 /97,3?о/, 32 /84,2&/, 32 /84,2%/; 18 штаммов, выделенных из воздуха птичников 4 /22,2%/, 3 /15,6%/, 6 /33,355/, 5 /27,?$/, 3 /16,6%/i внешней среды 18 штаммов - 2 /16,6%/, плазмокоагулирующие и ДНК-вза активный.

При помощи схемы, рекомендованной А.К.Акатовым, Devri.ee« L.A.. /1980/, можно прийти к следующим результатам: из. 22 штаммов /от больных/ все принадлежат к виду s. aureus из 42 штаммов /от пал-пих/ 30 принадлежат к виду з. aureus 2 штамма - S.lntormediuo

10 -s.epidermidie из 36 штаммов /от вынувденно прирезанных/ 37 принадлежат К ВИДУ a. aureus , I - S. IntermediuB кз IB штаммов воздуха птичника 6 относятся к вццу s. aureus, 2 - s.epldenaidlo j ДО не удалось дифференцировать, из 12 штаммов внешней среды 2 принадлежат S.hyicus , 2 - S. epidenaldia остальные не смогли дифференцировать.

По характерны;.; свойствам штаммов стафилококков было заметно, что наиболыаей токсичностью отличались культуры, выделенные из Гамардавебской, Очамчирской и ¿ачхерской птицефабрик. Наймемьиий процент патогенности выявился у штаммов, ввделенных из Норийской птицефабрики, птичников и внешней среды.

Стафилококковый антиген для массовой ранней диагностики стафилококковой инфекции птиц

С целью установления злизоотологической ситуации птицефабрик по стафилококковой инфекции использовали специфический стафилококковый антиген, приготовленный нами из диких штаммов по методике Бо-ццена /1951/.

Стафилококков сопровождается выраженной ответной иммунологической реакцией, что позволяет с помощь» реакции агглютинации на стекле (СКРА) диагностировать заболевание на ранних стадиях развития, контролировать .-эпизоотический процесс и своевременно проводить необходимые профилактические мероприятия.

Для массовой ранней диагностики инфекции в птицефабриках мясного направления /Гамарджвебская и Очамчирская/ объектом исследования служила кровь забитых птиц. С целью прижизненной диагностики стафилококкоза на птицефабриках яичного направления /Норийская и Сач-херская/ исследования проводили по возрастным группам птиц, первый раз в 30-дневном возрасте, повторно в 60- и 90-дневном возрасте. Антиген содержал в I мл 2 млрд микробных тел.

- II -

Птицам перед проведением серологических исследования за 7 дней прокрасили дачу антибиотиков и химио-терапевткческих препаратов. Взятие крови не проводили раньше, чем через б часов после приема пищи. В противном случае отмечали неспецифичность сывороточной капельной реакции агглютинации (СКРА).

Технику проведения сывороточно-капельной реакции агглютинации проводили по общепринятой методике.

Для большей наглядности агглютинации к антигену добавляли генцианвиолет.

Для положительной реакции агглютинации характерна прозрачность смсси антигена в капле сыворотки крови и образование синеватых хлопьев /зерен/, которые появляются в результате склеивания агглютинина и агглгатиногена. При отрицательной реакции смесь антигена но прозрачна, хлопья не появляется.

Исследования проводили как в естественных, так и экспериментальных условиях. На птицефабрике мясного направления положительно реагировали 22% птиц, яичного направления - 30-дневного возраста 10%, 60-дневного - 28$, 90-дневного - 18%.

При исследовании крови переболевших птиц после соответствующего лечения положительно реагировали 78^, что говорит о специфичности данной реакции и пригодности изготовленного нами антигена для изучения эпизоотологической ситуации в птицефабриках по стафилококковой инфекции.

Ускоренная реакция специфична, по своей чувствительности не уступает реакции агглютинации, поставленной классическим /пробирочным/ способом, и пригодна для массовой ранней диагностики стафи-лококкоза птиц на птицефабриках.

Методы экспресс-диагностики

В процессе исследования был разработан метод ускоренной диагностики стафилококкоза птиц. Для отого несколько изменили новокаино-

во-кровяной агар, предложенный В.Ы.Карташовым и Н.К.Оксамитным /1988/, а вместо плазмокоагуляции использовали реакции плазмо-агглитинации.

Из первичного материала делали высевы на МПБ с 0,4л глюкозой, 22-часовуп бульонную культуру пересевали на новокаиново-кровяной агар с 5(£-ной дифмбринированной кровью от нетелей или барана. Для сравнения гемолиза пересевы делали на МПБ с 5^-ной кровью нетелей, крупного рогатого скота, барана, кролика и петуха. В основное выявляли налийие я ив сочетании л и а гемолизинов»

Новокаиново-кровяной агар подавляет рост других микроорганизмов и не оказывает отрицательного влияния на рост и свойства золотистого стафилококка. После этого использовали метод плазмо-агглатинации на предметном стекле, который позволяет через 2-3 минуты выяснить коагуляэопозитивность или коагулязонегативность данного штаммя стафилококка. По данным Г.Выгодчикова /1973/ положительная реакция плазмокоагуляции более чем на 90& совпадает с латогенностью..

Так™ образом, в течение 48 часов после культивирования из первичного материала можно установить вид стафилококка, его гемолитическую активность и определить является ли стафилококк плазмокоагулязопозитивным или негативным.

Лизоцимная активность стафилококков различного происхождения

Выявлено, что способность продуцировать лиэоцимоподобный фермент (ЛПФ) совпадает у стафилококков со способностью образовывать рад других ферментов и токсинов, признанных факторами патогенности. Эту закономерность наблюдали многие исследователи; Jeu J. /1966/, fcevlger J. /1968/, О.В.Бухарин, Б.Я.Ус-

- 13 -

вящов, Б.А.Фролова и др. /1972/, А.К.Акатов, М.Л.Хотеневер /1976/.

Целью нашей работы явилось определение лизоцимной активности штаммов стафилококков, выделенных из различных источников /от больных, павших, вынужденно прирезанных птиц, птичников и внешней среды/, а также установление связи между лизоцимной активностью и некоторыми другими биологическими признаками.

Среди изучаемых 132 штаммов стафилококков лизоцимная активность выявлена у 98 А4,3&/. Наибольшее количество лизоцимоактив-ных культур было выявлено от павшей птицы - 38 /90,4^/, птичников - 6 /33,ЗХ/, внешней среды - 2 /16,3/1/, лизоцимообразующие стафилококки в 3 раза чаще ввделялись от больных, павших и вынужденно прирезанных птиц, чем из птичников и внешней среды.

Как показали исследования штаммов стафилококков различного происхождения, все коагулязопозитивные продуцировали и лизоцим, среди коагулязонегативных штаммов лишь небольшая часть - 9,5& -обладала этим свойством. Аналогичные результаты получены другими авторами: оаюг1 а.вг »1* /1960/,1»в1воЬ и. /1960/, А.К.Акатов, М.Л.Хотеневер, Г.В.Выгодчиков /1966/,

Полученные нами данные с учетом результатов других авторов /О.В.Бухарин, Б.Я.Усведов, Л.И.Фролов и др., 1972; И.А.Журавлев, 1974/ позволяют установить прямую связь между лизоцимной активностью и патогенностью стафилококков, ввделенн!« от птиц.

Саготипирование и чувствительность к антибиотикам стафилококков, выделенных из различных источников

Фаготипирование штаммов стафилококков применяется с целью эпидемиологического маркирования и изучения путей распространения стафилококков. По данным А.С.Лабинской /1972/ фагом типйру-ются только плазмокоагулирующив штаммы, относящиеся к числу по-

тенциально патогенных. По данным Г.В.Вцгодчикова /1973/ процент типируемых фагами стафилококков составляет более 70%.

Целью нашей работы явилось определение фагогруппооой принадлежности штаммов стафилококков, ввделенных из различных источников, а также определение чувствительности к антибиотикам.

Весьма актуален вопрос зависимости между чувствительностью стафилококков к антибиотикам и принадлежностью к фаготипу.

Некоторые специалисты, в том числе Г.Н.Чистович /1963/ считают, что не существует связи мевду чувствительностью к антибиотикам стафилококков и принадлежностью к фагогруппам.

То, что определенный процент штаммов не типируется бактериофагами, может быть объяснен существованием фагоустойчивых культур, или тем, что еще не выделены все фаги, пригодные для этой цели /А.Ф.Морозов, 1963; И.М.Бунпатов, 1965/.

Проводили сравнительное исследование чувствительности стафилококков к фагам международной коллекции человека и крупного рогатого скота.

Как было определено исследованиями наборов фагов крупного рогатого скота фаготип установлен у 82,5$ штаммов, не дифференцированы из-за нечувствительности к фагам - 17,5$. Большинство типированных штаммов относились к 1У фагогруппе. Исследования, проводимые набором фагов человека показали, что фаготип установлен у 69,7% штаммов, не дифференцированы 30,ЗХ. Большинство типиро ванных штаммов относились к I фагогруппе.

Патогенные стафилококки 1У фагогруппы /из набора крупного рогатого скота/ /107,78,119/, по сравнению со стафилококками П и смешанной групп, оказались более чувствительными к эритромицину, оксациллину, линкомицину, карбенициллину, а патогенные стафилококки I фагогруппы из набора фагов человека /29,80,52,52А/ более чувствительны к эритромицину, «етациллину, чем П и Ш фаго-

группы.

Большинство культур лизировались фагами 117, 116, 78, 119 /фагом крупного рогатого скота/, а при фагах человека лизировались фагами ВО, 52, 52А. Некоторые наши данные совпадают с данными А.А.Артемова, А.Н.Коломийцева /1970/.

Наиболее распространенными фагогруппами являлись 1У и П группы 107/П6, 102/116 и 1У и смешанной группы 119/107, 119/107/70 , 70/109, 107/78/119 из набора "фагов крупного рогатого скота, а при <£аготипировании набора фагов человека болызой удельный вес приходится на I группу - 80/52/52А/, 52/80, 2У/80, 29/52/80 , 52АДЮ, 52/52А/В0.

Нами изучены 132 штамма стафилококков от больных, вынужденно прирезанных, павших птиц, птичников и внешней среды, у которых определены некоторые таксономические признаки: пляэмокоагу-ляция, гемолитическая, ДНК-азная активность и др. При помощи стандартных бумажных дисков определяли чувствительность к эритромицину, оксациллину, метациллину, тетрациклину, ампициллину, пенициллину, линкомицину, стрептомицину, карбенициллину, левомицети-ну, неомицину /всего II/.

Метод бумажных дисков по данным зарубежных авторов имгъаг к.е., Н'Иче т. /1966/ считается весьма достоверным для изучения чувствительности штаммов стафилококков к антибиотикам.

Штаммы стафилококков, выделенные в птицефабриках от птиц, фаготипированные набором крупного рогатого скота 1У фагогруппы и I фагогруппы /набором человека/ имели более высокую чувствительность к эритромицину, оксациллину, линкомицину, карбенициллину, метациллину, чем птаммы П, Ш и смешанной фагогрупп.

Зависимость устойчивости стафилококков к внешним факторам от происхождения птаммов, устойчивости к антибиотикам н фаго-групповой принадлежности выявлена з нескольких случаях.

-16 -

Результаты исследования при экспериментальной стафилококковой инфекции

На белых мылах нами были проведены опыты с использованием внутрибршинного метода заражения, предложенного А.К.Акатовым /1963,1966/. Опыты проводились на 60 белых мышах, весом 17-18 г. Брали 20-часовую бульонную культуру /2 млрд м.т, в I мл/ вводили 0,25 мл.

Белые мыли были чувствительны к стафилококкам. Штаммы 60(Г. и 7/б(С) оказались более вирулентными, чем 53(0) и 5/7(С). Из 40 зараженных мышей пало 36, что соответствует 90%.

Опыты проводились на молодняке 60-дневного возраста - вводили /4 млрд м.т. в I мл/ 0,2 мл в/венно и 0,3 мл в/кожно, для выявления этиологической роли вццеленного стафилококка при стафилококковой инфекции. Из 25 птиц пало 19, что составило 76%.

Большинство испытанных штаммов стафилококков оказали патогенное действие на организм птиц, но особенно патогенным оказался дикий штамм 62, который ддл 100$ гибель птиц.

Установлена зависимость мевду степенью токсичности стафилококков и летальным эффектом. Летальный эффект был обусловлен действием токсинов, продуцируемых микробами, что объясняет быструю гибель птиц после заражения.

При изучении вирулентных свойств использовали модель инт-раорбитального заражения суточных цыплят. Для заражения брали 18-20-часовуо бульонную культуру стафилококков /2 млрд м.т. в I мл/ 0,1 мл вводили интраорбитально, 100%-ную гибель наблюдали на 3-5 сутки. В качестве критериев оценки вирулентных свойств стафилококков использовали па тана тонические признаки, сроки гибели цыплят и бактериальную обсеыененность внутренних органов и костного мозга.

- 17 -

От всех павших мышей и птиц была выделена чистая культура стафилококка, а патологоанатомическая картина оказалась характерной для этой инфекции.

Дермонекротическая проба поставлена на 4 кроликах. Учет реакции проводили через 24-72 часа. Пробы в 3-х случаях дали положительные реакции, через 72 часа наблюдали развитие некроза.

Лечебно-профилактическая эффективность лекарственных препаратов при стафилококковой инфекции птиц

С целью выявления профилактического действия и терапевтической эффективности при стафилококковой инфекции птиц, испытывали различные лекарственные препараты как in vitro так и in vivo /на экспериментально зараженных птицах/.

При их выборе учитывали не только уровень чувствительности к ним стафилококка, но и длительность циркуляции их в организме /что известно по литературным данным/.

Перед тем как приступить к применению лекарственных средств in vivó , нами было проведено определение чувствительности культур стафилококков к ним, применением стандартных бумажных дисков и серийного разведения.

Для выявления терапевтической эффективности н профилактического действия лекарственных средств мы применяли следующие лекарственные препараты /дозы расчитывали на I кг иивого веса/: эритромицин, оксациллш, олететрин, сульфапиридазин, сульфади-метоксвд, на цыплятах 60-дневного возраста при экспериментальной стафилококковой инфекции птиц. Цыплят зарэд'лли штаммом S.curaua иS.intermedium в дозе 0,3 мл 4 млрд 24-часовой культурой подксшю. Препараты давали до заражения /для профилактической цели/ и после заражения чарса 24 часа /для лечебной цели/ перо-

рально вместе с кормом.

Особое внимание надо уделить применения антимикробных средств для профилактической цели, чтобы предупредить и не допустить заболевание среди птицепоголовья, что наносит значительный экономический ущерб птицеводству.

Для профилактики антибиотики и сульфаниламидные препараты как в отдельности, так и в сочетании давали птицам 5 дней подряд, с лечебной целью 6 дней. В период лечения прибавляли в рацион витамины, особенно "В" группы. Наблюдение за подопытными цыплятами вели в течение 30 дней, об эффективности препаратов судили по состоянию птицы, клиническому проявлению болезни, выживаемости цыплят, результатам патологоанатомического вскрытия и бактериологических исследований.

Наиболее эффективным антибиотиком широкого спектра действия являлся эритромицин, как в отдельности, так и в сочетании с сульфапнредазином в дозах: для профилактики 2 раза в день -эритромицин 25 мг/кг, эритромицин с сульфапирццазином 20 мг/кг+ 50 мг/кг, а для лечения соответственно 2-3 раза в день - 30 мг/кг и 25 мг/кг + 75 мг/кг. Также хороший лечебно-профилактический эффект получили такими ае дозами при применении оксациллина 2 раза в день и олатетрина I раз. Сравнительно с этим низкий лечебно-профилактический эффект оказался у сульфадиметоксина и сочетания олететрин + сульфадиметоксин. Коэффициент профилактической эффективности равен 80-100%, а коэффициент терапевтической эффективности от 7052 до' 9ОД.

Шестидневный курс лечения дает хорошие результаты, заболевание прекрадзется и ввдолигь культуру стафилококков из органов птиц невозможно на 15, 20, 30 день после прекращения лечения .

- 19 -

Птиц из контрольной группы не лечили. После заражения их состояние определяли по внешним признакам, а также путем ежедневной термометрии. Через 10 часов после введения вирулентной культуры стафилококка температура тела повышалась до 42°С, а через сутки проявлялась клиника, характерная для этой болезни: угнетение, отказ от корма. Все павшие куры подвергнуты вскрытии с последующим бактериологическим исследованием. Во всех случаях были ввделены исходные культуры стафилококков.

Так как стафилококковые инфекции часто протекают при смешанной микрофлоре как с грамположительными /стрептококки/, так и грамотрицательними /эшерихиа коли, пастереллы/, мы специально выбирали такие препараты, которые окажут хороший лечебно-профилактический эффект против смешанной микрофлоры. Особенно хорошие результаты дают комбинированные лечения антибиотиками и сульфаниламидными препаратами. Соединенные вместе, они взаимно дополняют и усиливают действие друг друга, особенно при смешанной микрофлоре.

ВЫВОДЫ

1. Нами было выделено 542 штамма стафилококков от птиц в различных птицефабриках Грузии. При последующем детальном изучении 132 штаммов установлена их этиологическая роль при стафилококковых инфекциях. На основании комплексного изучения культу-рально-морфологических, биохимических, серологических, антигенных, вирулентных свойств, антибиотико- и фагочувствительности установлено, что большинство S.aureus и S. intermodlue оказались вирулентными для цыплят, молодняка, белых мьией и кроликов.

2. Стафилококковая инфекция имеет сезонный характер и наиболее выражена п летний и осенний периоды года.

3. Устойчивость штаммов б. аигеив 'И 3.1х^егще<11и8

к антибиотикам можно использовать при эпидемиологической индикации вместе с фаго- и биотипированием.

4. Нами предложен метод экспресс-диагностики при помощи новокаиново-кровяного агара и плазмоагглытинации, что дает возможность за короткий период времени выделить з.аигеие и установить его патогенность.

5. При изучении фаголрииадлежности установили, что фаги основного набора крупного рогатого скота лизировали 82,5$ штаммов, вцделснных от птиц, птичников и внешней среди. Наибольшую литкческую активность шелк фаги 1У фагогруппы, а набор фагов человеке лизировал 69,7% штаммов, болывую литическую активность имели фаги I фагогруппы. Наиболее распространенными фагогруппа-м;; являлись 107, 116, 119, 78 при типировании набором для крупного рогатого скота; 80 , 52 , 52А., 29 - набором для человека.

6. Штамма стафилококков 1У фагогруппы и I фагогруппы имоги более высокую чувствительность к эритромицину, оксациллину, лии-кемкщгц', ¡сарбешщиляину, ыетацкллину, чем штаммы П, Ш и смешки-ной групп. *

7. Изучение лизоцимнкх и других биологических свойств штаммов стафилококков позволяет установить прямую связь между лизо-цимией ьктиеностьи к патогеккостьз стафилококков.

8. Для массовой и ранне!'! дг-агностшш при стафилококковой кнфокцик птиц на птицефабриках объектом исследования служит сы-всротка забитых птиц, с помощьэ сывороточно-капелшой реакции егглвтниацим (СКРА). С целью прггсиз.чашоЕ диагностики на птицефабриках личного направления исследования должны проводиться по возрастным группам птиц, персыП раз в 30-дневном, повторно в 60-и 9Э-ДНОИЮМ Еозрдсте. Данная реакция специфична и высокочувствительна.

- 21 -

9. Результаты лечебно-профилактического действия антибиотиков /эритромицина, оксациллика, олететркна/ и сульфаниламидов /сульфадиметоксии, сульфапиридазин/, как в отдельности, так и в сочетании, при экспериментальном стафилококкозе показали, что при 6-дневном курсе лечения наблюдается клиническое выздоровление, и в группе леченых птиц прекращается выделение исходных культур /вскрытие на 15-20-30 дни/; в первую очередь рекомендуем эритромицин, а в резервах остальные антибиотики и сульфаниламидные препараты; для эффективной профилактики необходимо проведение 5-дневного курса.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1.'С.целью повышения эффективности лечения стафилококковой инфекции и оздоровления эпидемиологической среды рекомендуется комплекс мероприятий с применением сочетанного препарата /эритромицин + сульфапиридазин/, с организационными, технологическими и санитарно-гигиеническими мероприятиями, что способствует прекращению появления случаев заболевания, но не препятствует образоЕанию активного иммунитета к стафилококкам.

2. Методические рекомендации по диагностике, профилактика и лечению стафилококкоза птиц /Научно-технический совет ПНО "Грузинский Птицепром", декабрь 1987 г./. Результаты внедрены на Сачхерской и Г'амарджвебской птицефабриках.

3. Результаты исследования рекомендуем для использования при написании соответствующих разделов учебных пособий и справочных руководств по кокковым инфекциям птиц, а также в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практи-ческих занятий по микробиологии и эпизоотологии ветеринарных и биологических факультетов высших учебных заведений.

- 22 - .

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ;

1. Сихарулидзе H.H., Шаматава В.П. Стафилококкоэ птиц и борьба с ним//Сакартвелос соплис меурнеоба. - Тбилиси: Изд-во ЦК Грузии. - 1988. - » 7. - С.ЗО.

2. Сихарулидзе H.H. Вопросы идентификации золотистого стафи-лококка//Научные труды конференции микробиологов Закавказских республик/Современные достижения микробиологии и биотехнологии. - Тбилиси: Мецниереба, 1989. - С.101.

3. Сихаруладзе H.H. Эпизоотологические особенности стафилокок-коза у кур в ГССР//Материалы 1У республиканской научной конференции молодых ученых и специалистов в области животноводства, ветеринарии и экономики. - Тбилиси: Изд. ГЗВУИИ, 1989,-С.136-137.

4. Сихарулидзе H.H. Стафилококковый антиген в массовой диагностике стафилококкоза кур//Всесоюзная конференция молодых ученых и аспирантов по птицеводству. - Загорск: Изд.ВНИГИП, 1989. - С.81.

5. Сихаруладзе H.H. Ваделение чистых культур стафилококка у кур и изучение их биологических свойств//Инфекционные болезни с.х. животных, методы их диагностики, лечения и профилактики. - Тбилиси: Изд-во ГЗВУИИ, 1989. - С.55-56.