Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологическая характеристика производственных штаммов лактобактерий

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Эйсфельд, Дарья Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

ЧАСТЬ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА 1. КОЛОНИЗАЦИОННАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ

ПИЩЕВАРИТЕЛЬНОГО ТРАКТА И ВЛАГАЛИЩА. ЕЕ МЕХАНИЗМЫ.

1.1. Механизмы колонизационной резистентности.

1.2. Нарушение колонизационной резистентности кишечника и влагалища.

ГЛАВА 2. ВОССТАНОВЛЕНИЕ МИКРОЭКОЛОГИЧЕСКИХ НАРУШЕНИЙ В

КИШЕЧНИКЕ И ВЛАГАЛИЩЕ С ПОМОЩЬЮ ЭУБИОТИКОВ.

ЧАСТЬ II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА 1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1. Материалы.

1.1. Микроорганизмы.

1.1.1. Биологические свойства производственного штамма Lactobacillus acidophilus К3Ш24.

1.1.2. Биологические свойства производственного штамма штамма Lactobacillus fermenti 90Т-С4.

1.1.3. Биологические свойства производственного штамма Lactobacillus plantarum 8Р-АЗ.

1.2. Препараты.

1.3. Питательные среды.

1.4. Эпителиальные клетки влагалища практически здоровых женщин.

1.5. Эритроциты человека для испытания адгезивной активности.

1.6. Набор дисков антибиотиков.

2. Методы.

2.1. Культивирование лактобактерий.

2.2. Исследование культурально-биохимических свойств производственных штаммов лактобактерий.

2.3. Изучение адгезивной активности.

2.3.1. Определение адгезии микроорганизмов на эритроцитах.

2.3.2. Определение адгезии микроорганизмов на эпителиальным клетках влагалища.

2.4. Определение антагонистической активности лактобактерий.

2.4.1. Определение антагонистических свойств производственных штаммов лактобактерий по отношению к тест-штаммам условно-патогенных и патогенных микроорганизмов.

2.4.2. Определение антагонистической активности лактобактерий методом отсроченного антагонизма.

2.4.3. Определение антагонистической активности продуктов метаболизма лактобактерий.

2.5. Определение антибиотикорезистентности лактобактерий.

2.5.1. Определение антибиотикорезистентности методом стандартных дисков.

2.5.2. Определение антибиотикорезистентности лактобактерий в анаэробных условиях.

2.6. Статистические методы.

ГЛАВА 2. ИЗУЧЕНИЕ АДГЕЗИВНОЙ АКТИВНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ ШТАММОВ ЛАКТОБАКТЕРИЙ.

2.1. Изучение адгезивной активности лактобактерий на модели эритроцитов.

2.2. Изучение адгезивной активности лактобактерий на модели эпителиальных клеток влагалища здоровых женщин.

ГЛАВА 3. МИКРОБНЫЙ АНТАГОНИЗМ.

3.1. Антагонистическая активность производственных штаммов лактобактерий в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

3.2. Антагонистическая активность между производственными штаммами лактобактерий и штаммами лактобактерий, выделенных от здоровых женщин.

ГЛАВА 4. АНТИБИОТИКОРЕЗИСТЕНТНОСТЬ ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ ШТАММОВ ЛАКТОБАКТЕРИЙ.

4.1. Определение антибиотикорезистентности лактобактерий дискодиффузионным методом в условиях повышенного содержания углекислоты.

4.2. Изучение чувствительности лактобактерий к антибиотикам в анаэробных условиях.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологическая характеристика производственных штаммов лактобактерий"

Актуальность проблемы. В последние десятилетия сформировалось самостоятельное направление - медицинская микроэкология, объектом исследования которой является микробиоценоз организма человека (88, 201). В рамках этого направлении проводятся фундаментальные и прикладные исследования микрофлоры здорового человека, различных биотопов открытых полостей, изучается ее значение для организма хозяина, качественные и количественные изменения (дисбиозы), возникающие по тем или иным причинам (30, 88, 112). Разрабатываются методы лабораторной диагностики дисбиотических состояний (28, 58, 122) и создаются препараты, устраняющие дисбаланс взаимоотношений в экологической системе «макроорганизм и нормальная микрофлора» (92). Для коррекции дисбиотических состояний чаще всего используются пробиотики (45, 54, 89, 138). Среди них лактобактерин является одним из наиболее эффективных. Лактобактерии, составляющие основу этого препарата, относятся к облигатным представителям микрофлоры человека, они в большей или меньшей степени присутствуют во всех открытых полостях организма и обладают полезными качествами, присущими нормальной микрофлоре (74).

Видовой состав лактобактерий весьма разнообразен (76). К настоящему времени общие биологические свойства отдельных видов, обитающих в организме человека, детально изучены, что дает возможность выбора кандидатов в производственные штаммы.

Несмотря на то, что лактобактерин выпускается уже свыше 25 лет, изучение свойств производственных штаммов нельзя считать завершенным. Во всех случаях совершенствования лактобактерина, в частности, создания комплексных препаратов начальным этапом, повидимому, всегда будет определение свойств исходных штаммов (92). Это объясняется целым рядом причин. Во-первых, весьма вероятно изменение свойств лактобактерий, длительно существующих в качестве производственных культур. Во-вторых, в последние годы все чаще наблюдается физиологическая изменчивость возбудителей заболеваний человека, в первую очередь условно-патогенных микроорганизмов. В многочисленных наблюдениях показано возрастающая вирулентность условно-патогенных штаммов, именуемых «госпитальными». В связи с этим эффект антагонистического воздействия лактобактерий, вполне вероятно, также будет меняться и требовать уточнений (125, 54).

Изменчивость бактерий проявляется и в увеличении резистентности к антибиотикам (125, 116). Вырабатываемая резистентность, дополненная плазмидным способом передачи чувствительным штаммам, происходит у бактерий быстрее, чем ожидалось. Эта тенденция, безусловно, затрагивает и лактобактерии. Лактобактерии в большей или меньшей степени природно устойчивы к целому ряду антибиотических веществ, что позволяет использовать их в качестве профилактического средства в процессе антибиотикотерапии. Вместе с тем, необходимо постоянное изучение антибиотикорезистентности лактобактерий, поскольку непрерывно совершенствуются уже имеющиеся и создаются новые препараты (136).

При оценке преимуществ тех или иных производственных штаммов и возможности применения их различных ассоциаций необходимо изучить влияние разнообразных факторов технологического процесса производства лактобактерина, в частности, лиофилизации, на биологические свойства лактобактерий. Так как при приеме лактобактерина бактерии поступают в организм человека в состоянии анабиоза, это, несомненно, отражается на их свойствах.

Цель настоящего исследования - сравнительный анализ биологических свойств перспективных производственных штаммов лактобактерий Lactobacillus acidophilus К3Ш24, L. fermenti 90Т-С4 и L. plantarum 8Р-АЗ для прогнозирования биологических параметров комплексного препарата.

Задачи исследования

1. Оценить адгезивную активность производственных штаммов на различных экспериментальных моделях.

2. Изучить антагонистические свойства лактобактерий в отношении патогенных и условно-патогенных тест-культур микроорганизмов.

3. Изучить характер взаимоотношений между производственными и штаммами лактобактерий - представителями нормальной микрофлоры организма человека

4. Дать сравнительную оценку антибиотикорезистентности производственных штаммов к различным антибиотическим препаратам.

Научная новизна исследования. Дана комплексная сравнительная оценка основных «полезных» свойств лиофилизированных и восстановленных на питательных средах производственных штаммов лактобактерий L. acidophilus К3 Ш24, L. fermenti 90Т-С4 и L. plantarum 8Р-АЗ. Установлена более выраженная биологическая активность культур лактобактерий, адаптированных к питательным средам. Выявлено отсутствие антагонистического эффекта между производственными культурами и штаммами лактобактерий - представителями нормальной микрофлоры организма человека. Изучена антибиотикорезистентность производственных штаммов лактобактерий при различных условиях их культивирования. Показано, что культивирование в анаэробных условиях существенно повышает устойчивость лактобактерий к различным антибиотикам. Установлено, что адгезивные свойства L. acidophilus, L. fermenti и L. plantarum в отношении эпителиальных клеток влагалища более выражены в сравнении с эритроцитами О (I) группы. Предложено использование эпителиальных клеток влагалища здоровых женщин для оценки специфической адгезивной активности «диких» штаммов, изолированных от лиц с дисбиотическими состояниями.

Теоретическая и практическая значимость. Полученные данные расширяют представления о биологических особенностях лиофилизированных и восстановленных на питательных средах производственных штаммов лактобактерий при различных режимах культивирования; их взаимоотношении с «дикими» штаммами лактобактерий, а также условно-патогенными бактериями, входящими в состав нормальной микрофлоры организма человека. Подтверждена целесообразность использования производственных штаммов лактобактерий L. acidophilus К3 Ш245 L. fermenti 90Т-С4, L. plantarum 8Р-АЗ при разработке комплексного препарата. Полученные данные могут служить предпосылкой к рекомендации использовать с лечебно-профилактической целью для коррекции дисбиотических состояний не только сам препарат «Лактобактерин», но и приготовленные на его основе кисломолочные продукты. При применении лактобактерина в такой аранжировке можно рассчитывать на выраженный эффект. Устойчивость лактобактерий к ряду антибиотиков подтверждает реальность применения препаратов на их основе не только для коррекции дисбиоза, развившегося после антибиотикотерапии, но и, что более важно, с профилактической целью во время курса лечения для предотвращения изменения качественного и количественного состава нормальной микрофлоры. Для оценки «полноценности» лактобактерий, выделенных от пациентов с явлениями дисбиоза, рекомендуется изучение их адгезивных свойств на модели эпителиальных клеток влагалища или эритроцитов.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Производственные штаммы лактобактерий обладают высокой антагонистической активностью в отношении условно-патогенных и патогенных грамположительных, грамотрицательных микроорганизмов. При этом лактобактерии не препятствуют развитию соименных «диких» штаммов - представителей нормофлоры организма человека.

2. Антибиотикорезистентность производственных штаммов лактобактерий L. acidophilus К3 U124,L. fermenti 90Т-С4 и L. plantarum 8Р-АЗ значительно возрастает при их культивировании в анаэробных условиях.

3. Производственные штаммы лактобактерий обладают выраженной адгезивной активностью как в отношении эритроцитов О (I), так и эпителиальных клеток влагалища.

Внедрение результатов исследований в практику. Материалы диссертационной работы переданы в отделение «Препаратов для бактериотерапии» НПО «Биомед» г. Перми для практического использования при разработке комплексного препарата на основе лактобактерий, а также используются в учебном процессе на кафедрах микробиологии, эпидемиологоии, инфекционных болезней Пермской государственной медицинской академии и лекционном курсе и практических занятиях со студентами факультета усовершенствования врачей на этих кафедрах.

Апробация работы и публикации. Основные положения работы доложены и обсуждены на научной сессии Пермской государственной медицинской академии, Пермь, 1999; Всероссийском симпозиуме

Стоматология XXI века: новейшие технологии и материалы», Пермь, 2000; Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов», Уфа, 2000.

По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ. Оформлено три рационализаторских предложения:

Модифицированный способ исследования антагонистических свойств лактобактерий» (16.04.2002), «Способ определения антибиотикорезистентности производственных штаммов лактобацилл» (16.04.2002), «Объективизация методики изучения свойств производственных штаммов лактобацилл» (16.04.2002), принятых к внедрению Пермской государственной медицинской академией. Диссертационная работа апробирована 18.04.2002 г. на заседании научной проблемной комиссии № 8 «Актуальные вопросы клиники, диагностики, лечения и профилактики инфекционных болезней», Пермской государственной медицинской академии.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 129 стр. машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3-х глав собственных экспериментальных исследований, заключения, выводов. Список литературы включает 227 источников, в том числе 148 отечественных и 79 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 5 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Эйсфельд, Дарья Александровна

ВЫВОДЫ

1. Сравнительный анализ адгезивных свойств производственных штаммов лактобактерий показал, что независимо от экспериментальной модели (эритроциты или эпителиальные клетки) все они обладают достаточно выраженной адгезивной активностью. При этом штамм L. fermenti 90Т-С4 характеризуется наибольшей адгезивностью, L. acidophilus К3Ш24 -наименьшей.

2. Установлена высокая антагонистическая активность производственных штаммов лактобактерий и их фильтратов в отношении условно-патогенных, патогенных грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов. Штаммы L. fermenti 90Т-С4 и L. plantarum 8Р-АЗ обладают более выраженными антагонистическими свойствами.

3. Испытанные производственные штаммы лактобактерий при совместном культивировании практически не оказывают ингибирующего действия на "дикие" Lactobacillus spp., изолированные от здоровых людей, следовательно они не «опасны» для естественной лактофлоры человека.

4. Производственные штаммы лактобактерий резистентны к ряду антибиотиков, в частности, к аминогликозидам, цефалоспоринам. В анаэробных условиях антибиотикорезистентность лактобактерий возрастает. Адаптированные на элективных питательным средах культуры более устойчивы к антибиотикам в сравнении с лиофилизированными. L. fermenti 90Т-С4 и L. plantarum 8Р-АЗ наиболее резистентны к антибактериальным препаратам.

105

5. Выявленные и изученные биологические свойства штаммов L. acidophilus К3Ш24, L. fermenti 90Т-С4, L. plantarum 8Р-АЗ позволяют рассматривать их в качестве перспективных компонентов для создания комплексного препарата.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Исследования последних трех десятилетий в области микробной экологии человека в норме и при патологии являются фундаментом для разработки новых методических подходов к диагностике и коррекции дисбиозов, а также созданию новых препаратов для целенаправленной нормализации состава и функций микрофлоры организма хозяина.

Цель этих разработок - улучшение качественного и количественного состава микрофлоры хозяина, что выражается в депрессии условно-патогенной и восстановлении облигатной нормальной микрофлоры, оптимизации соотношения анаэробной и аэробной ее ветвей. В результате восстановления нарушенного баланса микрофлоры повышается сопротивляемость организма, прежде всего за счет колонизационной резистентности слизистых оболочек открытых полостей.

Существует несколько способов борьбы с дисбиозами: применение достаточно сильных ферментов, способных взять на себя утраченную или сниженную функцию, использование сорбентов, связывающих патогенных и условно-патогенных возбудителей и их токсины («Кофлор»), и, наконец, применение активных микробов-антагонистов как из родственных, так и не родственных бактерий.

Это в свою очередь требует проведения изысканий по расширению спектра установленных облигатных представителей нормальной микрофлоры и определения возможности их использования в качестве исходных штаммов в производстве пробиотиков, а также создания новых типов препаратов, в том числе комплексных, с различной композицией производственных штаммов.

Лактобактерии в течение нескольких десятков лет успешно используются в качестве основы для конструирования лечебно-профилактических препаратов, используемых для коррекции дисбиотических состояний человека. Причиной того, что лактобактерии «не сходят со сцены» является то, что представители этого рода обладают привлекательными свойствами, необходимыми как для получения бакпре-парата, так и для эффективного его использования:

- лактобактерии - постоянные составляющие биоценозов почти всех отдельно взятых биотопов организма человека и, следовательно, могут быть использованы как при локальных (кишечном, вагинальном), так и общем дисбиозе организма;

- лактобактерии относятся к облигатным представителям нормальной микрофлоры, их присутствие само по себе естественно, и введение как бактериологического препарата с лечебно-профилактической целью не отличается от поступления лактобактерий из внешней среды с пищевыми продуктами;

- лактобактерии сравнительно доступны для получения бактериальной массы при производстве препаратов - они не столь строго (по сравнению с бифидобактериями) требуют анаэробных условий культивирования, у них конкретная потребность в питательной основе и т. п.;

- лактобактерии обладают высоко выраженной активностью, спектр направленности которой весьма разносторонен. Здесь в первую очередь следует отметить адгезивную способность лактобактерий, которая сама по себе не обладает терапевтическим эффектом, тем не менее имеет большое значение, так как выступает как обязательный инициальный этап формирования колонизационной резистентности макроорганизма в отношении поступающей в организм чужеродной микрофлоры, в том числе патогенной и условно-патогенной. Это дополняется прямым антагонистическим действием за счет продукции ли-зоцима, бактериоцинов и т. п. Далее, при ферментации лактобакте-риями Сахаров, гликогена образуется большое количество углекислоты, существенно снижается рН до уровня, непереносимого другими видами бактерий;

- препараты лактобактерий - лактобактерины действуют на организм человека «мягко», не давая побочных эффектов; по существу нет противопоказаний для их использования;

- высокая адгезивная способность и следующая за ней столь же выраженная у лактобактерий колонизационная сокращают курс приема препарата: состоявшееся приживление бактерий не требует непрерывного поступления в последующем;

- трудно переоценить и такое свойство лактобактерий, как выраженная в большей или меньшей степени устойчивость к антибиотикам, т. к. при заболеваниях микробной этиологии это позволяет сочетать лечение некоторыми антибиотиками с профилактикой дисбиоза с помощью бакпрепарата.

Приживление препарата лактобактерий - это одновременно и восстановление резидентной микрофлоры биотопа, которое естественным путем совершается медленнее.

При создании новых препаратов исходные производственные штаммы должны быть проверены на наличие вышеприведенных «полезных» свойств вначале индивидуально, а затем в ассоциации.

В нашей работе были испытаны три производственных штамма лактобацилл: L. acidophilus К? Ш24, L. fermenti 90Т-С4, L. plantarum 8Р-АЗ. Именно эти штаммы предполагается использовать в создании нового композиционного препарата.

При их изучении мы сделали основной акцент на анализ трех наиболее значимых свойств лактобактерий - адгезивности, антагонистической активности и антибиотикорезистентности.

Известно, что адгезия, в основе которой лежат сложные процессы узнавания и взаимодействия между поверхностными структурами микроорганизмов и клеток макроорганизма, характеризуется неодинаковой степенью выраженности у штаммов одного и того же вида. Она может быть узкоспециализированной в отношении тканей человека и почти универсальной.

Определение адгезивной способности проводили in vitro на изолированных клетках различного происхождения - на модели эритроцитов и на клетках влагалищного эпителия.

Двухсуточные культуры лактобацилл, отмытые и взвешенные в буферном растворе смешивали с суспензиями клеток - в первой серии опытов с эритроцитами О (I) группы человека, во второй - с эпителиальными клетками и инкубировали в течение 30 мин., после чего изучали в окрашенных по Граму препаратах. Для оценки адгезивности использовали показатель СПА (среднее количество микробов, прикрепившееся к одной клетке).

В результате изучения адгезивной активности были получены данные, свидетельствующие о том, что все три изучаемых штамма обладают достаточно выраженной адгезивной активностью, наиболее высоко адгезивный штамм - L. plantarum 8Р-АЗ, наименее - L. acidophilus К3 Ш24. Те же закономерности в отношении активности различных штаммов выявлены при использовании клеток влагалищного эпителия, хотя цифровые значения СПА несколько выше, чем на модели эритроцитов. Этот факт подтверждает специфичность выявленной адгезивной активности штаммов, так как известно, что эритроциты помимо адгезии живых бактериальных клеток могут адсорбировать на своей поверхности различные компоненты.

Казалось бы, адгезивная способность производственных штаммов лактобактерий не так важна при использовании лактобактерина в лечебных целях. Здесь более значима антагонистическая функция вводимых живых микробов в отношении возбудителей, их ферментативная активность. Однако достаточная адгезивная активность и последующая колонизация обеспечивают фиксацию вводимых микроорганизмов, что позволяет сокращать дозу и сроки вводимого препарата. Более того, если учесть, что L. plantarum и L. fermenti являются представителями нормальной микрофлоры, их приживление на слизистой следует рассматривать как восстановление утраченной флоры.

Имеющиеся данные по изучению адгезивных свойств лактобактерий на клетках влагалищного эпителия позволяют судить о целесообразности применения методики не только для характеристики микроорганизмов, но и для определения адсорбционной способности клетки-хозяина, ибо адгезия - явление, зависящее и от адгезивной активности микроба и от адгезирующей способности клеток макроорганизма, и причина формирования дисбиоза может быть в ослаблении и того и другого.

Изучение антагонистической функции производственных штаммов L. acidophilus К3Ш24, L. fermenti 90Т-С4, L. plantarum 8Р-АЗ проводили в нескольких направлениях. Во-первых, определяли сравнительный уровень антагонистической активности. Во-вторых - возможность инги-биции роста тест-микробов, относящихся как к патогенным, так и к условно-патогенным представителям различных видов бактерий. И, наконец, в опытах совместного культивирования соединяли производственные штаммы лактобацилл и «дикие» штаммы того же семейства, выделенные из кишечника и влагалища здоровых женщин.

Определение антагонистической активности проводили непосредственно несколькими методами:

1) по эффекту увеличения (снижения) колониеобразующих единиц (КОЕ) после предшествующего совместного культивирования на жидких средах по сравнению с контрольным выращиванием монокультур;

2) методом отсроченного антагонизма непосредственно на плотной среде MP С;

3) методом, когда при культивировании бактерий к среде добавлялся фильтрат жидкой среды, на которой предварительно выращивали предполагаемый антагонист.

Во всех этих опытах, наблюдая выраженную антагонистическую активность трех штаммов лактобактерий в отношении патогенных и условно-патогенных тест-культур, тем не менее выявили некоторые межвидовые отличия. Так, L. acidophilus задерживает размножение тест-микробов в меньшей степени, нежели L. fermenti и L. plantarum. Различия в активности двух последних несущественны (р > 0,05).

Интересен факт усиления ингибирующих свойств смешанных фильтратов производственных штаммов. Полагая, что препарат может быть использован при частично сохраненной собственной нормальной микрофлоре, следует отметить, что производственные штаммы не подавляют жизнедеятельность "диких" штаммов в опытах in vitro.

Лечение инфекционных заболеваний антибиотиками постепенно становилось малоэффективным и даже неэффективным при целом ряде нозологических форм.

Даже рациональное применение антибиотиков с соблюдением инструктивных данных использования препарата создает чрезвычайно важную проблему - под действием прессинга антибиотиков у пациента меняется качественный и количественный состав нормальной микрофлоры. Особенно существенные изменения нормального биоценоза происходят при длительном применении антибиотиков и при комбинированном лечении с использованием нескольких препаратов. В тех же случаях, когда антибиотики назначаются необоснованно, применяются бесконтрольно, нарушения в составе микрофлоры еще более выражены.

Дисбиозы такого происхождения наиболее тяжелые, стойкие, редко проходят без медицинского вмешательства. Даже обоснованное правильное лечение препаратами такого рода в какой-то мере может изменить качественный и количественный состав нормальной микрофлоры тела человека. Однако мы часто сталкиваемся с продолжительным массированным курсом лечения, более того, нередко антибиотикотерапия не обоснована, бесконтрольна - в этих случаях возникают серьезные нарушения в микробном биоценозе хозяина и ликвидировать такого рода последствия чрезвычайно трудно.

Ценность лактобактерина как препарата для коррекции нарушенной гармонии в составе биоценоза состоит в том, что его можно применять параллельно с антибиотиком в ходе лечения микробных заболеваний, но при условии, что штаммы, лежащие в основе препарата, резистентны в отношении выбранного антибиотика.

В связи с этим в нашей работе проводилось изучение антибиотико-чувствительности лактобактерий к ряду лекарственных средств.

Использовали дискодиффузионный метод определения, причем лактобактерии вводились в опыт в предшествующей серии экспериментов непосредственно из герметичных флаконов, то есть в состоянии анабиоза после лиофильной сушки и после предварительной адаптации на питательных средах в последующей серии.

Контакт с антибиотиком проводили как в условиях микроаэрации (в эксикаторе со свечой), так и в анаэробных условиях с использованием оригинальной методики постановки опыта, что выражалось в необычной технике введения дисков с антибиотиком под питательную среду и засева штаммов не по поверхности, а равномерно в расплавленную среду, после чего она помещалась в чашку Петри.

В аэробных условиях штаммы в состоянии анабиоза чувствительны к амоксициллину, бензилпенициллину, доксициллину. У L. acidophilus чувствительность более выражена, она наблюдается еще к тетрациклину, цефтриаксону, цефалотину, оксициллину и олеандомицину.

В опытах, где лиофилизированные штаммы были «восстановлены» после пассажей на искусственных средах, их резистентность возрастает, и чувствительны они лишь к амоксициллину. Штамм L. acidophilus по- прежнему менее резистентен и подавляется рифампицином. К тем антибиотикам, к которым в предыдущем опыте отмечалась выраженная чувствительность, «восстановленные» лактобациллы дают лишь слабую ее степень.

В анаэробных условиях выраженная чувствительность вообще не наблюдается. Средняя чувствительность отмечается к группе тетрацик-линов, пенициллину, макролидам. Стойкой резистентностью все изученные штаммы лактобацилл обладают в отношении группы аминогли-козидов - гентамицину, амикацину, неомицину и мономицину. Это согласуется с данными ряда исследователей (76, 77, 125). По-видимому резистентность к этой группе следует считать природной и сочетанный курс антибиотик + бакпрепарат будет возможен прежде всего при использовании вышеприведенных антибиотиков. Так как в организме лактобактерии существуют в условиях с низким содержанием кислорода, их резистентность в анаэробной среде наиболее важна. Таким образом наши исследования подтверждают возможность создания комплексного препарата с использованием L. acidophilus К3Ш24, L. fermenti 90Т-С4 и L. plantarum 8Р-АЗ.

Они практически одинаковы по адгезивной активности и даже усиливают антагонистические свойства друг друга, не угнетают собственную лактофлору макроорганизма; при этом штаммы эффективно противостоят ряду патогенных и условно-патогенных бактерий, угнетая их рост в условиях питательной среды in vitro.

Лактобактерий, находящиеся в состоянии анабиоза, какими они представлены в коммерческих препаратах, биологически менее активны, что касается также их адгезивных и антагонистических свойств, кроме того, они более чувствительны к антибиотикам. По-видимому при употреблении целесообразно принимать не только суспензию лиофильно высушенных микроорганизмов, но и готовить с их помощью кисломолочный пищевой продукт, что вполне доступно даже в домашних условиях при соответствующем инструктаже пациента.

Применение лактобактерина в ходе лечения антибиотиками, особенно группы аминогликозидов, может служить средством профилактики дисбиоза.

Сведения о природной и приобретенной резистентности лактобактерий к антибиотикам должны быть известны практической медицине. Так как формирование приобретенной резистентности лактобактерий к антибиотикам у лактобактерий неизбежно будет продолжаться, на наш взгляд, необходим мониторинг за резистентностью лактобактерий, циркулирующих в организмах людей.

И, наконец, комплексный препарат по своим свойствам вероятно будет превосходить монопрепараты из тех же штаммов. Наблюдается усиление антагонистической активности смешанных фильтратов штаммов, они обладают различной биологической активностью (широко известна повышенная кислотообразующая активность при культивировании L. acidophilus). Имеются некоторые отличия в антибиотикоре-зистентности штаммов, что также подчеркивает преимущества комплексного препарата.

В современной клинической фармакологии используется ставший международным термин «комплайнс» (compliance), выражающий понятие «соблюдение режима лекарственной терапии». Комплайнс следует рассматривать как степень совпадения персонального отношения пациента к приему лекарств, диете и образу жизни с теми рекомендациями, которые были даны врачом. Сюда относится намеренное несоблюдение или неудача в получении лекарства, пропуски времени приема, ошибки в дозе, преждевременное окончание приема. Последствия комплайнса различные, но одно из них - формирование дисбиоза. При продолжительном усиленном лечении антибиотиками режим терапии по-видимому должен включать профилактику развивающегося дисбиоза. Таким препаратом в ряде случаев может оказаться комплексный препарат лактобактерина. Схема выбора в таком случае будет следующей:

- выделение возбудителя;

- определение чувствительности к антибиотикам;

- сопоставление чувствительности возбудителя и чувствительности лактобацилл, входящих в препарат (их природная резистентность может быть указана в аннотации), и, если это возможно, в оптимальном варианте - выбор антибиотика, к которому чувствителен возбудитель и резистентны лактобациллы, составляющие лактобактерин.

Сведения о природе резистентности рода лактобацилл помогут лечащему врачу ожидать дисбиотические последствия при лечении антибиотиками.

Так как кроме природной выявляется приобретенная резистентность, на наш взгляд, необходим мониторинг за резистентностью лактобацилл, циркулирующих в организмах людей.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Эйсфельд, Дарья Александровна, Пермь

1. Акимкин В.Г. Дисбактериоз кишечника как фактор риска заболевания нозокомиальным сальмонеллезом //Журн. микробиол. 1997. - № 3. - С.105 - 106.

2. Акимкин В.Г., Заболотнова Г.И., Антонова Г.К. и др. Микроэкологические нарушения флоры толстого кишечника у больных гастроэнтерологического профиля: Тез. докл./Научно-практич. конф. Дисбакте-риозы и эубиотики. М. - 1996.

3. Алмагамбетов К.Х., Горская Е.М., Бондаренко В.М. Транслокация кишечной микрофлоры и ее механизмы//Журн. микробиол. 1991. - № 10.-С. 74- 79.

4. Аманов Н. Нарушение микробиоценозов пищеварительного тракта при иммуносупрессии и их коррекция: Автореф. дис. канд. мед. наук. -М., 1991.-21 с.

5. Ануфриева Р.Г. Влияние рифампицина на генеративную функцию и микробную экологию кишечника (экспериментальное исследование): Дис. канд. биол. наук. М., 1990.

6. Атабеков Н.С., Абидов А.А., Бахадырова У.А., Жура С. Дисбактерио-зы кишечника//Микробиол., иммунол., эпидемиол, профилак. ин-фекц. Заболев/Ташк. НИИ вакцин и сывороток НПО «Вакцина». -Ташкент. 1991.-С. 55 - 65.

7. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л., 1962. - 180 с.

8. Бабин В.Н., Домарадский И.В., Дубинин А.В., Кондракова О.А. Биохимические и молекулярные аспекты симбиоза человека и его мик-рофлоры//РХЖ (ЖРХО). 1994. - Т. 38. - №6. - С.66 - 78.

9. Байбеков И.М., Мавлян-Ходжаев Р.Ш., Ирсалиев Х.И. Взаимодействие индигенных пристеночных микроорганизмов с клетками слизистой оболочки пищеварительного тракта//Арх. патол. 1992. - 54. - № 5.-С. 18-24.

10. Беляев Е.И. Пути усовершенствования препаратов, нормализующих микрофлоры кишечника//Аутофлора человека в норме и патологии и пути ее коррекции. Горький, 1988. - С. 74 - 79.

11. П.Беюл Е.А., Горбунова Н.Н. Значение пищевых волокон в пита-нии//Клиническая медицина. 1987. - № 2. - С. 123 - 127.

12. Беюл Е.А., Куваева И.Б. Дисбактериозы кишечника и их клиническое значение//Клиническая медицина. 1986. - № 11. - С. 37 - 44.

13. Беюл Е.А., Шаховская А.К., Лукаш Л.К. Дискенезия толстой кишки с синдромом запора и их лечение/УКлиническая медицина. 1983. - № 7.- С. 89 94.

14. Билибин А.Ф. Дисбактериоз, аутофлора и ее значение в патологии и клинике//Клиническая медицина. 1970. - Т. 48, № 2. - С, 7 - 12.

15. Блохина И.Н., Дорофейчук В.Г. Дисбактериозы. Л., Медицина. -1979. - 175 с.

16. Бобров В.А., Карпов П.Ф. Микроэкологические нарушения в кишечнике у больных с ХПН и синдромом артериальной гипертензии//Тер. архив. 1993. - Т. 65. - № 6. - С. 41 - 43.

17. Бокова А.Г., Козлова Т.Г., Макавеева Л.Ф. Диагностика, клиника и лечение дисбактериоза кишечника у детей: Метод, рекомендации. -М., 1990.-43 с.

18. Бондаренко В.М. Общий анализ представлений о патогенных и условно-патогенных бактериях//Журн. микробиол. 1997. - №4. - С. 20 -26.

19. Бондаренко В.М., Горская Е.М. Новые подходы к моделированию, диагностике и лечению дисбактериозов кишечника. М., 1992. - Вып. 6. - С. 23 - 25.

20. Бондаренко В.М., Петровская В.Г. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофло-ры//Вестн. РАМН, 1997, № 3, С. 7 9.

21. Бондаренко В.М., Учайкин В.Ф., Мурашова О.А. Дисбиоз. Современные возможности профилактики и лечения. М., 1995. - 20 с.

22. Борелло С.П. Микрофлора, секреторная и моторная деятельность желудочно-кишечного тракта. М.: Медицина. 1989. - С. 482 - 492.

23. Брилис В.И., Брилене Т.А., Ленцнер Х.П. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов//Лабораторное дело. 1986. - № 4. С.210-212.

24. Брилис В.И., Брилене Т.А., Ленцнер А.А., Ленцнер Х.П. А. С. 1076441 (СССР). Изобретения. 1984. - № 4.

25. Бурмистрова А.Л. Имунный гомеостаз и микробиоценоз. Метаморфозы и пути развития воспалительных заболеваний кишечника. Челябинск, 1997. -216 с.

26. Верткин А.Л., Венгеров Ю.А., Машарова А.А. и др. Дисбактериоз кишечника: Метод, рекомендации. М., 1998. - 32 с.

27. Волосникова И.В. Холестиринмодифицирующая активность лактобацилл in vitro/ЛПроблемы медицинской биотехнологии и иммунологии: Сб. науч. тр./ МНИИЭМ им. Габричевского. М., 1996.-С. 119123.

28. Высоцкий В.В. Биологическое значение и структурные основы адгезивных свойств микроорганизмов (обзор)//Медицинские аспекты микробной экологии. Вып. 7 / 8 - 1993 / 1994. - М. - Ч. I. - С. 42-52.

29. Вьюницкая В.А., Бойко Н.В., Спивак Н.Я., Ганова JI.A. Некоторые механизмы действия новых антибиотиков//Микробиологические и биотехнологические основы интенсификации растениеводства и кормопроизводства. Алма-Ата, 1990. - С. 17.

30. Гарип Ф.Ю., Адылов Ш.К., Соколова И.Э. Развитие дисбактериоза у половозрелых крыс после тимэктомии//Ж. микробиол., 1991, № 9, С. 16-19.

31. Гончарова Г.И., Дорофейчук В.Г., Смолянская А.З., Соколова К.Я. Микробная экология кишечника в норме и патологии//Антибиотики и химиотерапия. 1989. - № 6. - С. 462 - 466.

32. Гончарова Г.И., Семенова А.П., Лянная A.M. с соавт. Количественный уровень бифидофлоры в кишечнике и его коррелятивная связь с состоянием здоровья человека//Антибиотики и микроэкология человека и животных. М. - 1988. - С. 118 - 123.

33. Горская Е.М. Адгезия микробов к эпителиальным клеткам кишечни-ка//Антибиотики и микроэкология человека и животных. М. - 1988. -С. 79 - 82.

34. Горская Е.М. Гнотобиологические исследования в определении колонизационной резистентности кишечника//Антибиотики и химотер. -1989. Т.34. - № 8. - С. 601 - 606.

35. Горская Е.М. Механизм развития микроэкологических нарушений в кишечнике и новые подходы к их коррекции: Автореф. дис. докт. мед. наук/Моск. мед. акад. им. И.М. Сеченова. М., 1994. - 48 с.

36. Горская Е.М. Теоретические и прикладные аспекты изучения адгезии у слизистой оболочки пищеварительного тракта//Медицинские аспекты микробной экологии. М., 1991. - С. 41 - 47.

37. Горская Е.М., Ленцнер Х.П., Ленцнер А.А. и др. Адгезивные свойства бактерий кишечного происхождения//Ж. микробиол. 1991. - № 10. -С. 5 - 8.

38. Горская Е.М., Манохина И.М. Горелов А.В., Поспелова В.В., Рахимова Н.Г. Методические рекомендации по определению адгезии бактерий кишечного происхождения к эпителиальным клеткам тонкого и толстого кишечника//М. 1989. - 7 с.

39. Грачева Н.М., Партии О.С., Леонтьева Н.И., Щербаков И.Т. Применение препаратов из метаболитов нормальной микрофлоры в лечении больных острыми кишечными инфекциями//Эпидемиология и инфекционные болезни. 1996. - № 3. - С. 30 - 32.

40. Гусаров А.И. Клинико-иммунологические сопоставления при кишечном дисбактериозе различного происхождения: Автореф. дис. канд. мед. наук/Омский гос. мед. ин-т. Омск, 1980. - 19 с.

41. Гуськова Т.А., Пушкина Т.В. Дисбактериозы и эубиотики//Тез. докл./ Всеросс. научно-практич. конф. М., 1996. - С. 58 - 60.

42. Далин М.В., Фиш Н.Г. Адгезины микроорганизмов//Итоги науки и техники. ВИНИТИ. - Микроэкология. - 1985. - Т. 16. - 107 с.

43. Дизентерия (шигеллезы)/Под ред. В.И. Покровского, А.Ф. Флюгера и др. Рига: Зинатне, 1979. - 346 с.

44. Дисбактериозы у детей: Учебное пособие для врачей и студентов/Под ред. Воробьева А.А., Пака С.Г. М.: КМК Лтд., 1998. - 64 с.

45. Добрынин В.М., Каргальцева Н.М., Добрынина И.А. Микробиологическая диагностика гнойно-септических инфекций/УРекомендации для врачей. С.-Петербург. - 1996. - 53 с.

46. Долгушин И.И., Колесников О.Л., Вельский М.С., Колесникова А.А. Препараты для специфической профилактики и лечения инфекционных заболеваний. Челябинск, 1999. - 50 с.

47. Дронова О.М. Дисбактериозы у онкологических боль-ных//Антибиотики и микроэкология человека и животных. М., 1988. . с. 40-44.

48. Дронова О.М., Пономарева Т.Р. Современные методы определения чувствительности к антибактериальным препаратам анаэробных микроорганизмов//Антибиотики и мед. биотехнология. 1985. - № 11. -С. 847 - 849.

49. Евлашкина В.Ф., Чуприна Р.П., Абрикосова Н.Ю. К вопросу об антагонистической активности штаммов лактобацилл ацидофилюс, входящих в состав аципола и ацилакта//Тез. докл./Конф. Современная вакцинология, Пермь, 1998, С. 143 144.

50. Знаменский В.А., Дегтяр Н.В. Микробиологическая диагностика кишечного и кожного дисбактериозов. М., 1989. - 28 с.

51. Иммунология инфекционного процесса/Под ред. В.И. Покровского, С.П. Гардиенко, В.И. Литвинова М., 1993. - 308 с.

52. Кардашева Е.В., Горская Е.М., Абрамова С.В. Ингибиторы протеоли-тических ферментов, продуцируемых лактобациллами//Сб. Проблемы медицинской биотехнологии и иммунологии. МНИИЭМ им. Габричевского. - М., 1996. - С. 113 - 118.

53. Коваленко Н.К., Касумова С.А., Головач Т.Н. Адгезия молочнокислых бактерий к эпителию кишечника сельскохозяйственных живот-ных//Ж. микробиол. 1990. - № 3. - С. 76 - 79.

54. Коршунов В.М., Иконников Т.Б., Кассина Е.В. с соавт. Изучение микрофлоры полости и слизистой оболочки кишечника в норме и после гамма-облучения//Ж. микробиол. 1980. - № 9. - С. 65 - 67.

55. Коршунов В.М., Смеянов В.В., Ефимов Б.А. Рациональные подходы к проблемам коррекции микрофлоры кишечника//Вестн. РАМН. -1996. -№2. С. 60-65.

56. Красноголовец В.Н. Дисбактериоз кишечника. 2-е изд. - М.: Медицина. - 1989. -267 с.

57. Куваева И.Б., Ладодо К.С. Микроэкологические и иммунологические нарушения у детей. М.: Медицина, 1991. - 240 с.

58. Курепина Н.Е., Хмель И.А. Микроцины: природа и генетическое де-терминирование//Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1986.-№4.-С. 3 - 10.

59. Лапчинская А.В., Заславская П.Л., Шендеров Б.А., Навашин С.М. Влияние цефалексина на колонизационную резистентность толстой кишки экспериментальных животных//Антибиотики и химиотерапия. 1989.-№2.- С. 116-199.

60. Лапчинская А.В., Шендеров Б.А. Коррекция дисбактериозов, вызванных цефалексином, некоторыми иммуномодуляторами//Медицинские аспекты микробной экологии. М.- 1991. - С. 70 - 78.

61. Лапчинская А.В., Шендеров Б.А., Чахава О.В. и др. Изменение микрофлоры толстой кишки крыс при оральном введении цефалексина и эритромицина//Антибиотики и мед. биотехнология. 1987. - № 3. - С. 186 - 190.

62. Лахтин В.М. Специфичность лектинов микроорганизмов//Прикл. биохимия и микробиология. 1992. - 28. - № 4. - С. 483 - 501.

63. Ленцнер А.А. Лактобациллы микрофлоры человека: Автореферат дис. докт. мед. н. /Тартусский гос. ун-т. Тарту, - 1973. - 69 с.

64. Ленцнер А.А., Ленцнер Х.Т., Микельсаар М.Э. Биология лактобацилл микрофлоры человека//Актуальные проблемы теоретической медицины. Ученые записки Тартусского государственного университета. -1982.- С. 52 63.

65. Ленцнер А.А., Ленцнер Х.Т., Микельсаар М.Э. с соавт. Исследование лактофлоры пищеварительного тракта экипажей «Союз-13» и «Салют-4»//Космическая биология и авиакосмическая медицина. 1981. -№ 4. - С.39 - 43.

66. Ленцнер А.А., Ленцнер Х.Т., Микельсаар М.Э. с соавт. Лактофлора и колонизационная резистентность//Антибиотики и мед. биотехнология. 1987. - 32. - № 3. - С. 173 - 179.

67. Ленцнер А.А., Тюри М.Э., Ленцнер Х.П. с соав. Исследование чувствительности к антибиотикам лактобацилл из пищеварительного тракта экипажей «Союз-13» и «Салют-4»//Космическая биология и авиакосмическая медицина. 1981. - № 4. - С.36 - 39.

68. Лопатина Т.К., Бляхер М.С., Николаенко В.Н., Ниловский М.Н. Им-муномодулирующее действие препаратов-эубиотиков//Вестн. РАМН, 1997.-№3.-с. 30 33.

69. Лызлова Л.В., Грабовская К.Б., Тотлян А.А. Растворимый фибронек-тин: биологические функции и роль в системе паразит-система//Ж. микробиол. 1990. - № 9. - С. 112 - 120.

70. Макарова З.С., Доскин В.А., Щербакова Э.Г., Острицова Т.П. и др. Клиническая эффективность биологически активных добавок у часто болеющих детей раннего и дошкольного возраста/УПедиатрия. 1994. -№2.-С. 2-4.

71. Мальцева Н.Н. Стимуляция местного иммунитета с помощью микробов представителей нормальной микрофлоры кишечника и их компонентов: Автореф. дисс. канд. мед. наук. - М., 1988. - 23 с.

72. Мартынов А.И., Пинегин Б.В., Коршунов В.М. Принципы деконта-минации тонкого кишечника бактериальными препаратами при антибиотиковом дисбактериозе в эксперименте//Журн. микробиол., эпи-демиол. и иммунол. 1982. - № 4. - С. 50 - 53.

73. Машилов В.П., Чекалина К.И. Лечение больных с кишечными инфекциями в поликлинике//Тер. архив. 1996. - № 11. - С. 30 - 32.

74. Микельсаар М.Э. Формирование и сохранение резидентной микрофлоры желудочно-кишечного тракта//Лабораторное дело. 1988. - № 3. - С. 3 - 9.

75. Минушкин О.И. Диагностика, лечение и профилактика дисбактерио-за и хронических заболеваний кишечника: метод, рекомендации. М., 1991. - 35 с.

76. Минушкин О.И., Ардацкая М.Д., Бабин В.Н. и др. Дисбактриоз ки-шечника//Росс. мед. журн. 1999. - № 3. - С. 40 - 44.

77. Михайлова Т.Л., Калинская Т.Ю., Румянцева В.Г. Биопрепараты и пищевые факторы в коррекции дисбиоза/УРосс. ж. гастроэнтерологии, гептологии, колопроктологии. 1999. - т. 8. - № 3. - С. 67 - 70.

78. Морозов И.А., Лысиков Ю.А., Питран В.В. Всасывание и секреция в тонкой кишке. М.: Медицина, 1988. - 221 с.

79. Несчисляев В.А. ГТробиотики: ретроспектива, проблемы и достижения научно-производственной практики НПО «Биомед»//Ж. микробиол. 1998. -№ 2. - С. 100 - 102.

80. Несчисляев В.А., Арчакова Е.Г., Рагузина С.В. К вопросу определения антагонистической активности эубиотиков//Современная вакци-нология. Пермь, 1998. - С. 142 - 143.

81. Николаев В.Л., Дусмагаметов М.У., Дыхно М.М. Связывание микроорганизмов, выделенных от больных с осложненными формами острого холецистита, с иммобилизированными белками в реакции бак-териосорбции//Ж. микробиол. 1990. - № 10. - С. 45 - 48.

82. Новоселов В.Г. Нетрадиционные растительные продукты как фактор оптимизации питания//Сб. материалов VII Всероссийского съезда гигиенистов и санитарных врачей. М., 1991. - С. 312.

83. Новоселов В.Г., Гапаненко Е.В. Гигиеническое изучение новых продуктов из дикорастущего пищевого сырья//Материалы 1-го международного конгресса Традиционная медицина и питание: теор. и практ. аспекты. М., 1994. - С. 288.

84. Ногаллер A.M. Пищевая аллергия. М.: Медицина, 1983. - 35 с.

85. Нормальная микрофлора кишечника. Дисбактериозы и их лечение: Методические рекомендации. М.: Изд. РГМУ. 1994. 12 с.

86. Одишария М.С. Фибронектин крови при острой диизенте-рии//Автореф. дис. канд. мед. н. М. - 1989. - 13 с.

87. Пак С.Г., Турьянов М.Х., Пальцев М.А. Сальмонеллез. М.: Медицина, 1988. - 304 с.

88. Перетц Л.Г. Значение нормальной микрофлоры для организма человека. -М.: Медицина, 1965. 280 с.

89. Петровская В.Г., Марко О.П. Микрофлора человека в норме и патологии. М.: Медицина, 1976. - 217 с.

90. Печеркина С.А., Малеева Л.П., Щукина И.В. О влиянии интерферона на стафилококки//Ж. микробиол. 1992. - № 2. - С. 54 - 56.

91. Пинегин Б.В., Мальцев В.Н., Коршунов В.М. Дисбактериозы кишечника. М.: Медицина. - 1984. - 144 с.

92. Подопригора Г.И. Иммунные и неспецифические механизмы колонизационной резистентности//Антибиотики и колонизационная резистентность. М., 1990. - Вып. 19. - С. 16 - 25.

93. Половой A.M. Коэффициент чувствительности микроорганизмов к антибиотикам, определяемый методом диффузии в агар с использованием дисков//Антибиотики и мед. биотехнологии. 1985. - № 11. - С. 843 - 845.

94. Поспелова В.В., Рахимова Н.Г., Халенева М.П., Морозова Л.В. с со-авт. Новые сферы применения микробных биопрепаратов для коррекции бактериоценоза организма человека// Иммунобиол. препараты. М. - 1989. - С. 142- 152.

95. Применение бактерийных биологическиз препаратов в практике и лечении больных кишечными инфекциями. Диагностика и лечение дисбактериоза кишечника/Методич. рекомендации. М., 1986. 23 с.

96. Рожкова И.Ю., Кравцов Э.Г. Предпосылки к использованию лак-тобактерина на основе штамма Lactobacillus fermentum 90-TS-4 в гинекологической практике/ЛБюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1990. - Т. 27. - № 2. - С. 234 - 236.

97. Румянцев В.Г. Дисбактериоз кишечника: клиническое значение и принципы лечения//Росс. ж. гастроэнтерологии, гепатологии, коло-проктологии. 1999. - Т. 8. - № 3. - С. 61 - 63.

98. Саппо С.Г., Урбанович Я.Я., Колесник B.C. Способ определения адгезивной способности холерных вибрионов//А.с. 1306107. СССР. -МКИ. № 1 / 10. - Q 1 / 02. - Бюл. № 24. - 1990. - С. 12.

99. Сеппи И.В. Дизентерия. Некоторые вопросы специфической профилактики и клиники. Воронеж, 1970. - 105 с.

100. Сеппи И.В., Синельников М.П. Основные факторы патогенеза некоторых острых кишечных инфекций//Материалы конф. по клин, биохимии и клин, морфологии инфекционных болезней. Рига, 1973. -С. 71 -72.

101. Серов Г.Д., Сизов А.А. Исследование чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агаровых сло-ях//Клиническая лабораторная диагностика. 1998. - № 3. - С.38 - 40.

102. Смолянская А.З. Дисбактериозы инфекционные процессы смешанной этиологии//Антибиотики и микроэкологии человека и животных. - М., 1988. - С. 32 - 35.

103. Сокуренко Е.В. Видовые и рецепторные особенности фибронек-тинсвязываюгцей способности золотистых стафилококков: Автореф. дис. канд. мед. н. М., 1989. - 20 с.

104. Сокуренко Е.В., Кахновская H.JL, Богин И.Б., Огарков В.И. Применение пассивной гемагглютинации для определения фибронектин-связываюгцей способности микроорганизмов//Лабораторное дело. -1989.-№ 4.-С. 65 67.

105. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования/Под ред. Биргера М.О. М.: Медицина, 1982. - С. 170172.

106. Степанчук Ю.Б. Кишечная микрофлора и метаболизм оксалатов: Автореф. дис. канд. мед. наук М., 1994. - 21 с.

107. Суздальцев А.А., Якимаха Г.Л. Диагностика и лечение дисбакте-риоза кишечника. Самара, 1998. - 94 с.

108. Татаринцев А.В., Вржиц П.В., Ершов Д.Э, Варфоломеев С.Д. Молекулярные механизмы межклеточных взаимодействий, опосредованные адгезивными белками и их рецепторами // Вестник академ. мед. наук СССР. 1991. - № 2. - С. 29 - 36.

109. Трапезов Е.В., Леонтьева Н.И., Бондаренко В.М. с соавт. Микробная экология пищеварительного тракта у больных острыми кишечными инфекциями//Ж. микробиол. 1992. - № 3. - С. 25 - 28.

110. Тюрин М.В. Устойчивость к антибиотикам лактобацилл, выделенных из кишечника здоровых людей//Антибиотики и химиотерапия. 1989. - Т. 34. - № 9. - С. 716 - 718.

111. Тюрин М.В., Шендеров Б.А. Влияние химиопрепаратов на биологические свойства кишечных лактобацилл экспериментальных жи-вотных//Журн. микробиол., эпидемиолог, и иммунол. 1991. - № 6. - С. 6-9.

112. Тюрин М.В., Шендеров Б.А., Рахимова Н.Г. и др. К механизму антагонистической активности лактобацилл//Журн. микробиол. 1989. -2,- С. 3 - 8.

113. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских целях. М.: Медицина, 1975. - 235 с.

114. Федоров Н.А. Фибронектин как полифункциональный регулятор клеток крови и тканей//Вестник Академ, мед. наук СССР. 1991. - № 2,- С. 26 - 28.

115. Федотов А.В., Дьяков Л.П., Федотова А.В., Строкина Г.М. Сравнительная характеристика фибронектина животных. Физико-химические и биологические свойства//Там же. С. 42 - 44.

116. Фролов В.М., Ющук Н.Д., Гайдаш И.С., Пересадин Н.А. Антигены HLA у больных дисбактериозами, сопутствующими различным заболеваниям желудочно-кишечного тракта//Иммунология. 1991. - № 4. -С. 63 - 64.

117. ФС 42 3946 - 00 ацилакт сухой.

118. ФС 42 0054 - 00 на лактобактерии сухой.

119. Чахава О.В., Горская Е.М., Рубан С.З. Микробиологические и иммунологические основы гнотобиологии. М.: Медицина, 1982. - 152 с.

120. Чуприна Р.П., Конькова Н.К., Евлашкина В.Ф., Рыбачок А.В. Перспективы повышения качества препаратов -эубиотиков. // Тез. докл./ Конф. Современная вакцинология. Пермь, 1998. - С. 142.

121. Шахмарданов М.З., Бондаренко В.М., Лучшев В.И. и др. Дисбакте-риозы у больных острыми кишечными инфекциями и пути их коррекции: Метод, рекомендации. М.: РГМУ. - 1997. - 20 с.

122. Шевелева С.А. Пробиотики, пребиотики и пробиотические продукты. Современное состояние вопроса//Вопр. питания. 1999. - № 2. -С. 32-40.

123. Шендеров. Б.А. Колонизационная резистентность и антимикробные препараты//Антибиотики и колонизационная резистентность. -1990. Т. 19. - С. 5 - 16.

124. Шендеров. Б.А. Микроэкологическая токсикология: реальность, проблемы и перспективы/УАнтибиотики и микроэкология человека и животных. М., 1988. - С. 3 - 7.

125. Шендеров Б.А. Формирование различных уровней устойчивости к антибиотикаму кишечных бактерий одним и тем же R факто-ром//Цитология и генетика. - 1972. - № 1. - С. 13-21.

126. Шендеров Б.А. Элиминация R фактора и ингибирование эписом-ной лекарственной устойчивости у кишечных бактерий антигиста-минными препаратами//Бюл. экспер. биол. и медицины. - 1972. - № 6. -С. 55 - 58.

127. Шендеров Б.А. Трансмиссивная лекарственная устойчивость бактерий: Дисс. докт. мед. наук, 1975.

128. Шендеров. Б.А., Манвелова М.А. Микроэкологические аспекты функционального питания//Медицинские аспекты микробной экологии. Выпуск 7 / 8. - 1993 / 1994. - Ч. I. - С. 10 - 19.

129. Щербаков П.Л., Кудрявцева Л.В., Зайцева С.В., Петрова Н.Н. и др. Микробиоценоз кишечника: его нарушения и коррекция с использованием бактисубтила//Педиатрия. 1998. - № 5. - С. 99 - 103.

130. Ющук А.Д., Кареткина Г.Ю., Фролов А.Г. и др. Роль биологически активных веществ в патогенезе острых кишечных инфек-ций//Патогенетические основы лечения острых кишечных заболеваний.: Сб. науч. тр. 3-го мед. ин-та. М., 1989. - С. 9 - 24.

131. Ямамото Тацуо. Инфекционные интериты и адгезия микроорганизмов к слизистой кишечника//Мазан мэдиа = Mod. Media. 1989. -35. -№ 1,-С. 25 - 37.

132. Ямамото Тацуо, Йокота Такэси и др. Прилипание холерных вибрионов и энтеропатогенных кишечных палочек к слизистой тонкого кишечника человека//Нихон сайкингаку дзасси = Jnt. J. Bacteriol. -1989.-44.-№ 1. С. 152.

133. Abrams G.D. Microbial effects on mucosal structure and function//Amer. J. Med. Sci. Biol., 1982, vol. 35, № 3.

134. Anderson R. The Significance and Potential Molecular Mechanisms of Gsstrointestinal Barrier Homeostasis//Scand. J. Gastroenterol. 1997. - Vol. 32, № l. - p. Ю73 - 1083.

135. Andre C., Andre E.L. Immunite intestinale/Lyon med. 1978. - Vol. 236, № 18. - P. 585 - 592.

136. Andre P., Capo C., Bongrand P. Quantifiation of leukocyte adhesion: Results and problems//Bull. Inst. Pasteur. 1990. - 88. - № 4. - p. 335 - 361.

137. Andrieux C., Pacheso E.D., Bouchet B. Et al. Contribution of the digestive tract microflora to amylomaize starch degradation in the ratWBr. J. Nutr., 1992, vol. 67.

138. Bengmark S. Econutrition and health maintenance a new concept to prevent G1 inflammation, ulceration and sepsis//Clin. Nutrition. - 1996. - Vol. 15. -P. 1 - 10.

139. Benno Y., Endo K., Takeo M. Et al. Comparision of fecal microflora of elderly persons in rural and urban areas of Japan//Apl. Environ. Microbiol. 1989. 55 № 5. - p. 1100 - 1105.

140. Berg R.D. Bacterial translocation The gastrointestinal endocrine stress. In.: IX Int. Symp. On Intestinal Microecology. Herborn-Dill. Germany. Sept. 17 -18, 1984.-p. 253 255.

141. Berg R.D., Iton K. Bacterial translocation from the gastrointestinal tract -immunologic aspects//Microecol. And Therapy. 1986. - Vol. 14. - P. 117 -120.

142. Bernasconi P. La flore microbienne intestinale une barriere contre 1, infection. Med. Chir. Dig. - 1985. - Vol. 14, № 1. - P. 39 - 40.

143. Beuth J. Ко H. L., Roszkowski W., Roszkowski K., Ohshima J. Lectins mediators and for tumor cells in metastasis//Zbl. Bacteriol. 1990. - 274. - № 3. -p. 350 - 358.

144. Bimboim H.C., Doly J. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA//Nucleic Acids Res. 1979. - 7. - 1513

145. Briedigkeit H. Obstipaton und darmflora//Z. Arztl. Fortbild. 1992. - Feb. 86.-№3.-p. 117- 119.

146. Christl S.U., Murgstroyd P.R., Gibson G.R., Cummings J.H. Production, metabolism and extretion of hidrogen in the large intestin//Gastroenterology, 1992, vol. 102., № 2, p. 498 503.

147. Conway P.L., Kjielleberg S. Protein-mediated adhesion of Lactobacilus fer-mentum trein 737 to mouse stomach squamous epithelium//J. Gen Microbiol. -1989. 135. -№ 5. - p. 1175 - 1186.

148. Corazza G.R., Sorge M., Strocchi A., et al. Non-absorbable antibiotics and small bowel bacterial overgrowth//Ital. J. Gastroenterol. 1992 Nov-Dec. - 24 (9 Suppl. 2). - p. 4 - 9.

149. Corpet D.E. Residus antibiotiques et micro flore digestive//Ann. Gastroenterol. Hepatol. Paris. 1992 Oct. - 28 № 5. p. 235 - 238.

150. Fauchere J. L., Zhiheng P., Blaser M.J. Adherence of superficial components of Campylobacter pylori to epithelial call membranes//Klin. Wochehschr. 1989. - 67, Suppl. № 18. - p. 19 - 20.

151. Finegold S.M., Sutter V.L., Mathisen G.E. Normal indigenous intestinal micro flora//In.: Human Intestinal Microflora in Health and Disease., D.J. Hentges (ed.), Academic Press, New York (USA). 1983. - p. 3 - 32.

152. Freter R. Interdependence of mechanisms that control bacteria colonisation of the large intestinale//Microbiol and Therapy. 1984. - Vol. 14. - p. 89 - 96.

153. Fuller R. Probiotics in man and animals//J. Appl. Bacter. 1989. - 66 № 5. -p. 365 - 378.

154. Fuller R. Probiotics in human medicine//Gut. 1991. 32 № 4. - p. 439 - 442.

155. Fuller R., Gibson G.R. Modification of the Intestinal Microflora Using Probiotics and Prebiotics//Scand. J. Gastroenterol. 1997. - Vol. 32, suppl. 222. - p. 28 - 32.

156. Geurina N.G., Neutra M.R. Mechanism of bacterial adher-ence//Microecology and Therapy. 1984. - 14. - p. 183 - 199.

157. Gorbach S.L. Function of the normal human microflora//Scand. J. Infect. Dis. 1986. - 49 suppl. - p.17 - 30.

158. Mc. Cormick B.A., Laux D.C., Cohenn P.S. Neither motility nir chemotaxis plays a role in the ability of Escherichia coli F-18 to colonize the streptomicin-treated mouse large mtestine//Infect. Immun. 1990 Sep. - № 9. - p. 2957 -2961.

159. Guerina G.N., Neutra M.R. Mechanism of bacterial adherence//In.: IX Int. Symp. On Intestinal Microecology. Herborn-Dill. Germany. Sept. 17 -18, 1984. -p. 183 185.

160. Hartemink R., Mertens A.K.C., Rombouts F.M. Degradation of xyloglucan by the intestinal microflora//Abstr. World Congress Anaer. Bacteria and Infection. San Juan, Puerto Rico, November 5 8, 1995.

161. Maura-Makinen A., Manninen M., Gyllenberg H. The adherence of lactic acid bacteria to the columner epithelial cells of pigs and calves//J. Appl. Bacteriol. 1983. - 55. - № 2. - p. 241 - 245.

162. Menge H. Sind Bakterien im Dunndarm pathogen und behandlungsbedurftig//Leber, Magen, Darm, 1986, 16, № 2, p. 82 92.

163. Millar M.R., Mackay P., Levene M. Et al. Enterobacteriaceae and neonatal necrotising enterocolitis//Arch. Dis. Child. 1992 Jan. - 67 № 1. - p. 53 - 56.

164. Mitsuolca T. Bacterial flora of the large intestine//Nippon Rinsho. 1988 Mar. -46 №3. -p.725 - 734.

165. Mosher D.F. Fibronectm//Progress in Hematology and Thrombosis. 1980. -5. -p. Ill - 151.

166. Normark S., Hultgren S., Marklund В. I. Et al. Bacterial adherence in pathogenicity//Perspect. Antiinfec. Therapy: Bayer A G Centen Symp. Washington., D.C., Aug. 31 - sept. 3, 1988. - Braunschweig, Wiesbaden. -1989. - p. 89 - 94.

167. Perdigon G., de Macias M.E., Alvares S. et al. Systemic augmentation of the immune response in mice by feeding fermentation milks with Lactobacillus ca-sei and Lactobacillus acidophilus//Immunology, 1988. vol. 63. - № 1. - p. 46 -49.

168. Perevalov A., Gapanenko E., Isaeva N., et al. Use of balsam «Beriozka» for rehabilitation of children with chronic viral hepatitis B//Internat. J. immunore-habilitation. 1994. - No. 1. - p. 130.

169. Peterson W.L., Mackrowiak Ph. A., Barnett C.C. et al. The human gastric bactericidal barrier: Mechanisms of action, relative antibacterial activity, and dietary influences//!. Biochem. 1987. - 31: 5 - 6. - p.978 - 983.

170. Rambaud J.С. Ecologie bacterienne du tube digestif et defense de rorganisme//Ann. Gastroenterol. Hepatol. Paris. 1992 Nov-Dec. — 28. - № 6 -7. - p. 263 - 266.

171. Reid G., Mc Coarty J.A., Andott R., Cook R.L. Lactobacillus inhibitor production against Escherichia coli and coaggregation ability with uropatho-gens//Can. J. Microb. 1988. - 34. p. 344 - 351.

172. Rolfe R. Interactions among microorganisms of the indigenous intestinal flora and their influence on the host//Rev. Infect. Dis. 1984. - 6 № 1. - p. 273 -279.

173. Roszlcowski W., Roszlcowski К., Ко H.L. et al. Immunomodulation by Pro-pionibacteria//Zbl. Bact. 1990. - vol. 274.

174. Salminen S., Deighton M. Lactis acid Bacteria in the Gut in Normal and Disorderd States//Dig. Dis. 1992. - Vol. 10. - p. 227 - 238.

175. Samonis G., Gikas A., Anaissie E. J. Et al. Prospective evaluation of effects of broad-spectrum antibiotics on gastrointestinal yeast colonization of hu-mans//Antimicrob. Agents chemother. 1993. - № 1. - p. 51 - 53.

176. Savage D.C. Assotiations of indigenous microorganisms with gastrointestinal epithelial surfaces//In.: Human Intestinal Microflora in Health and Disease., D. J. Hentges (ed.). Academic Press, Nev York (USA). 1983. - p. 55 - 78.

177. Savage D.C. Microorganisms associated with epithelial surfaces and stability of the indigenous gastrointestinal microflora//Nahrung. 1987. - 31 № 5 - 6. -p. 383 - 395

178. Savage D.C. Overview of the assotiation of microbes with epithelial sur-faces//Microbiol. Therapy. 1984 - Vol. 14. - p. 169 - 182.

179. Schneeweiss В., Muller В., Kaden K., Christ-Thilo Ch. Die Darmschleimhaut als ort biologischer Integration//Radiat. Und Grenzgeb. -1987,-№4. -p. 287 293.

180. Speziale P., Hook M., Switalski L., WaDstrom T. Fibronectin binding to a Streptococcus pyogenes strain//J. Of Bacteriology. 1984. - 157. - p. 420 - 427.

181. Stem N. Host influencing colonization control of human enteropathogens//J. Food Technd. 1987. - № 7. - 102 - 106.

182. Tancrede C. Role of human microflora in health and disease//Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1992. - № 11. - p. 1012 - 1015.

183. Tannock G.W. The normal microflora: new concepts in health promo-tion//Microbiol. Sci. 1988. - № 1. - p. 663 - 673

184. Thihole F. Fizioloski pomen bacteriemije L, jejundno microfloro//U. Zdravstv. Vesth. 1982. - 51 № 1. - p. 3 - 5.

185. Uhlenbruck G. Bacterial Lectins: Mediators of adhesion//Zbl. Bact. Hyg. A. 263/4,- 1987.-p. 497 508.

186. Van der Waaij D. Colonisation resistanse of the digestive tract: mechanism and clinical consequences//Nahrung. 1987. - 31 № 5 - 6. - p. 507 - 517.

187. Van Saene H.K., Percival A. Bowel microorganisms a target for selective antimicrobial control//J. Hosp. Infect. - 1991 Sep. - 19 Suppl. - p. 19-41.

188. Wirth J.J. & Kierszenbaum F. Fibronectin enhances assotiation with invasive forms of Trypanosoma cruzi//J. Of Immunology. 1984. - 133. - p. 460 -464.

189. De Witte P., van Hoestenberghe A., Eyssen H. In vitro reduction of rhein anthraquinone to rhein anthrone by rat cecal microflora and some intestinal bacterial strains//Biopharm. Drug Disposition. 1992. - 13 № 4/ - p. 243 - 253.129

190. Van Saene H.R., Percival A. Bowel microorganisms a target for selective antimicrobial control//! Hosp. Infect. - 1991 Sep. - 19 Suppl. - p. 19-41.

191. Vinogradov V., Slabospitska A., Reznik S. The new biopreparation for prophylactics and treatment of the disbacteriosis snd acute defects of digestion in-tre in ewborns//IV th Congr. World Feb. Ukrainian Med. Assoc. Charkive. -1992. - p. 212-213.

192. Pat. 5601 M France, 1С4 A 61 K. Nouveau medicament biologique pour le tuberdigestif//M. Nouvel. Publ. 15. 01. 68.

193. Pat. 3790919 Tl. Bundesrepublik Deutschland, 1С A 61 К 39/07. Arzneheimittel zur Prophylaxe and Behandlung von Gastrointestinalen Erkrankunge des Landwirtschaftsviehs/V.V. Smirnov, S.R. Reznik, S.N. Charchenko et al. Publ. 23.03.89