Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биоконверсия ксантофиллов у птицы при скармливании биологически активной добавки на основе растительного сырья
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биоконверсия ксантофиллов у птицы при скармливании биологически активной добавки на основе растительного сырья"

На правах рукописи

4ваиэ£э

Вострикова Светлана Михайловна

БИОКОНВЕРСИЯ КСАНТОФИЛЛОВ У ПТИЦЫ ПРИ СКАРМЛИВАНИИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ НА ОСНОВЕ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ

03.01.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

1 6 июн 2011

Белгород - 2011

4850525

Работа выполнена в ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Шапошников Андрей Александрович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Бусловская Людмила Константиновна

кандидат биологических наук, доцент Яковлева Инесса Николаевна

Ведущая организация: Государственное научное учреждение «Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства Российской академии сельскохозяйственных наук»

Защита состоится «У б » ИЮИЛ 2011 года в часов на заседании диссертационного совета Д 212.015.12 при ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» по адресу: 308015, г. Белгород, ул. Победы, 85, e-mail: D212.015.12@bsu.edu.ru.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет».

Автореферат разослан «/5 » „1ШЛ_2011 г. и размещён на сайте

http://www.bsu.edu.ru

Учёный секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук Н.Г. Габрук

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Промышленное птицеводство - одна из интенсивных и динамичных отраслей сельского хозяйства. Развитие этой отрасли обусловлено высокой рентабельностью, ценными питательными и диетическими свойствами получаемой продукции. В питании человека большое значение имеют куриные яйца (а в последнее время и перепелиные яйца), являющиеся прекрасными источниками белков, липидов и других питательных веществ.

Наиболее важную роль для ведения интенсивного птицеводства в условиях промышленной технологии содержания птицы играет её полноценное, сбалансированное по питательным, минеральным и биологически активным веществам кормление (В.И. Георгиевский, 1970; В.И. Фисинин, 1998; B.C. Романов, 1999; И. Егоров, 2003; Т.С. Кузнецова, 2004; Т.Н. Хамидуллин, 2005; E.H. Андрианова, 2007).

Так как в мире постоянно растёт спрос на продукты птицеводства, целенаправленно обогащенные важными для человека соединениями, то основной тенденцией совершенствования технологии кормления и ветеринарно-профилактических мероприятий современного птицеводства является разработка и внедрение в производство функциональных кормовых добавок, для получения функциональных продуктов питания, которые благодаря повышенному накоплению физиологически активных пищевых ингредиентов при систематическом употреблении снижают риск развития заболеваний (ГОСТ 52349-2005) и поэтому могут быть рекомендованы в профилактических целях. Это относительно новое направление в животноводстве получило название - пищевой дизайн (food design), который ставит главной целью производство продуктов питания с заданными свойствами путём целенаправленного изменения рациона кормления животных (В. Фисинин, 2007; В.И. Фисинин, A.JI. Штеле, 2008; Я.О. Хорбаньчук и др. 2009).

В такие функциональные кормовые добавки вводят йод, селен, полиненасыщенные жирные кислоты, витамины и натуральные каротиноиды. Обогащая ими комбикорма для птицы можно получать яйца с прогнозированным химическим составом и новыми функциональными свойствами (А. Османян и др., 2003; М. Сурухи, 2004; А. Штеле и др., 2004; А.Г. Кощаев, 2008; В.И. Фисинин, A.JI. Штеле, 2008а).

Основные компоненты каротиноидного комплекса желтка - ксантофиллы: лютеин и зеаксантин, источником которых могут быть вегетативная масса растений или зерно кукурузы, добавляемые в кормовые смеси.

Особенно важно, что эти же ксантофиллы в соотношении примерно 4:1 входят в состав жёлтого пятна (macula lutea) сетчатки глаза человека (G.J. Handelman et al., 1999; W. Schalch, 2000).

Поэтому актуально создавать такие добавки, которые бы обеспечивали необходимое соотношение между индивидуальными каротиноидами и учитывали физиологические особенности человека. В частности, для

решения проблем связанных с дистрофией макулы необходимо создание таких добавок, которые бы обеспечивали накопление лютеина и зеаксантина в продуктах питания в соотношении 4:1, поскольку совместное действие этих двух пигментов при именно таком соотношении наиболее эффективно.

Кроме того, доказано, что нехватка ксантофиллов приводит к ухудшению воспроизводительных функций птицы, снижению выводимости и сохранности цыплят (Ж.В. Карасёва, 1984; Т.М. Околелова, A.M. Сергеева, 1988). А поскольку каротиноиды не синтезируются в ее организме, то они должны поступать с кормом.

Поэтому научный и практический интерес представляет разработанная нами новая биологически активная добавка, содержащая ксантофиллы растительного происхождения и сбалансированная по соотношению лютеин: зеаксантин.

Для внедрения в практику любой новой добавки необходимо экспериментальное подтверждение её безопасности для организма и метаболической активности.

Решение комплекса перечисленных вопросов определяет актуальность выбранного направления исследований.

Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы - исследование биоконверсии растительных ксантофиллов у кур-несушек, перепёлок и другой птицы при скармливании биологически активной добавки.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработать биологически активную добавку, содержащую диэфиры лютеина и диэфиры зеаксантина в отношении 4:1, для получения функционального продукта питания;

2. Оценить биоконверсию различных доз ксантофиллов в организме кур-несушек и перепелок;

3. Изучить морфологические и биохимические показатели тканей и органов кур-несушек при скармливании различных доз биологически активной добавки;

4. Изучить влияние различных типов ксантофиллов на их накопление в желтках яиц перепелок;

5. Оценить сохранность разработанной биологически активной добавки.

Научная новизна работы. Впервые изучены биопревращения

ксантофиллов у птицы при использовании разных доз биологически активной добавки на основе растительного сырья и влияние на морфологические и биохимические параметры тканей и органов и депонирование ксантофиллов в желтках яиц. Установлено влияние разных типов ксантофиллов на их накопление в желтках яиц перепелов. Экспериментально доказана возможность обогащения яиц каротиноидами до количеств, позволяющих обеспечить человеку половину суточной потребности человека в ксантофиллах с использованием кормовой биологически активной добавки на основе местного растительного сырья. Научная новизна исследований подтверждена патентом РФ №2328137 от 9 апреля 2007 г.

Практическая значимость работы. Получен функциональный продукт питания с увеличенной концентрацией ксантофиллов в желтках куриных и перепелиных яиц за счет введения в рацион разработанной биологически активной добавки, на основе местного растительного сырья.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Для изготовления биологически активной добавки с повышенным содержанием ксантофиллов в качестве источника диэфиров лютеина эффективно использование лепестков цветков бархатцев, диэфиров зеаксантина - чашечек физалиса;

2. Хранить и использовать биологически активную добавку можно в течение года без доступа солнечного света при температуре 20-22°С;

3. Скармливание курам биологически активной добавки, изготовленной на основе растительного сырья, повышает содержание ксантофиллов в крови и печени;

4. Повышение концентрации растительных ксантофиллов в корме способствует накоплению каротиноидов в желтках яиц птицы. Использование добавки способствует накоплению лютеина и зеаксантина в желтках яиц в соотношении 4:1;

5. Тип ксантофиллов растительного сырья влияет на их накопление в желтках яиц перепёлок.

Апробация результатов исследования. Материалы диссертации были представлены и получили положительную оценку на Международной научно-практической конференции «Достижения супрамолекулярной химии и биохимии в ветеринарии и зоотехнии» (Москва, 2008); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы химической науки, практики и образования» (Курск, 2009); на Всероссийской школе-семинаре «Современные наукоёмкие лечебные и фармацевтические технологии для офтальмологии» для молодых учёных (Белгород, 2009); на совместном заседании кафедры биохимии и фармакологии, кафедры биотехнологии, морфологии и физиологии живых систем БелГУ и кафедры физиологии и фармакологии БелГСХА (Белгород, 2009). За разработку кормовой биологически активной добавки в 2008 г. получена серебряная медаль VIII Московского Международного салона инноваций и инвестиций (приложение 4) и диплом XIII Московского Международного салона «Архимед-2009» (приложение 5).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 8 статей, в том числе 5 в изданиях перечня ВАК РФ, три тезиса докладов международных конференций, один патент на изобретение РФ №2328137, 2007 г.

Структура и объём диссертации. Диссертация представляет собой рукопись компьютерного набора объемом 137 страниц и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практического предложения, списка литературы и приложений. Текст включает 16 таблиц и 24 рисунка. Всего использовано 343 источника литературы, в том числе 193 публикации зарубежных авторов.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Для достижения цели и решения поставленных задач была разработана общая схема исследований (рис. 1), в соответствии с которой на курах-несушках и перепёлках-несушках в период с 2007 по 2009 гг. были выполнены два опыта.

Рис. 1. Общая схема исследований

Согласно схеме исследований было проведено два физиологических опыта. Первый - на курах-несушках, второй - на перепёлках-несушках.

Первый опыт был проведён в условиях вивария Белгородской государственной сельскохозяйственной академии. В опыте выясняли влияние трёх доз разработанной БАД растительных ксантофиллов на общее состояние птицы, особенности метаболизма, физические качества яиц, накопление ксантофиллов и холестерола в желтках яиц.

Группы кур-несушек кросса «Hubbard F-15» в возрасте 295 суток были сформированы по принципу аналогов по живой массе, клиническому состоянию и уровню продуктивности. Опыт длился с 27 июня по 9 августа 2007 года. Адаптационный период составил 12, а основной - 32 суток. Схема опыта представлена в таблице 1.

Таблица 1 - Схема физиологического опыта на курах-несушках

Группа Количество птиц Схема кормления Доза ксантофиллов, мг/гол*сут Длительность периода, сут.

1-контрольная 10 ОР - 32

Н-опытная 10 ОР + добавка ксантофиллов 2.37 32

Ш-опытная 10 ОР + добавка ксантофиллов 7.11 32

IV-опытная 10 ОР + добавка ксантофиллов 14.22 32

БАД растительных ксантофиллов, разработанная на базе Белгородского государственного университета, содержит диэфиры лютеина, находящиеся в лепестках цветков бархатцев (Tagetes sp.), и диэфиры зеаксантина, находящиеся в пузыревидновздутых чашечках физалиса декоративного (P. alkekengi), в соотношении 4:1.

Бархатцы сортов Сиера оранжевый, Родос и Оранжевый снег (Т. erecta L.) и физалис декоративный были выращены в Ботаничеком саду БелГУ и в ГУ ВИЛАР. Лепестки цветков бархатцев и чашечки физалиса были отделены от остальных частей растений и раздельно высушены без доступа прямого солнечного света до воздушно-сухого состояния. Затем они были измельчены (отдельно друг от друга) на мельнице типа МПР-31 со скоростью 6000 об/мин в течение минуты. В измельчённом растительном материале спектрофотометрическим методом было определено суммарное содержание диэфиров лютеина и диэфиров зеаксантина. В качестве растворителя использовали ацетон. На момент проведения опыта на курах-несушках содержание диэфиров лютеина в 1 г высушенных лепестков цветков бархатцев в 2007 г. составило 16.77, а диэфиров зеаксантина в чашечках физалиса декоративного - 10.96 мг. Поэтому для обеспечения соотношения ксантофиллов 4:1 смешали измельченные лепестки бархатцев в количестве 500 г с измельченными чашечками физалиса в количестве 191г. Полученную добавку хранили в тёмном месте.

Основной рацион (ОР) был представлен стандартным комбикормом для кур-несушек ПК-1 сбалансированный по питательным и биологически активным веществам. В течение адаптационного периода все птицы получали только ОР. Курам давали комбикорм дважды в сутки в общем количестве 140 граммов на птицу. Потребление воды не ограничивалось.

По завершении адаптационного периода определили содержание ксантофиллов в желтках яиц всех групп.

В основной период контрольная группа получала только ОР. Птицы со второй по четвёртую опытную группу наряду с ОР получали новую БАД растительных ксантофиллов в количестве 0.150, 0.450, 0.900 г на птицу в сутки соответственно (что соответствует 2.37, 7.11, 14.22 мг/гол*сут диэфиров ксантофиллов).

На протяжении всего периода опыта ежедневно наблюдали за общим состоянием птиц. Также определяли массу яиц путём индивидуального взвешивания с точностью до 1 г и индекс формы. Визуально с помощь овоскопа определяли качество скорлупы, оценивая «мраморность»; упругую деформацию измеряли с помощью индикаторной головки часового типа - с точностью до 1 мкм (П.П. Царенко, 1988). Яйца кур на исследования физических качеств отбирали еженедельно в течение всего опыта.

По окончании первого физиологического опыта произвели убой птицы путём декапитации, отобрали образцы тканей и органов для лабораторных анализов.

С целью проверки возможности перехода лютеина в организме животных в зеаксантин был проведён второй физиологический опыт на 105 перепёлках-несушках породы фараон в возрасте 165 суток в условиях вивария в частном фермерском хозяйстве Белгородской области с. Нижний

Олыпанец Шебекинского района. Из перепёлок сформировали пять групп (1-контрольная, П-У - опытные) по 21 птице в каждой.

Опыт длился с 3 августа по 14 сентября 2009 года. Адаптационный период составил 14 суток, основной - 29 суток. Схема опыта представлена в таблице 2.

Таблица 2 - Схема физиологического опыта на перепёлках-несушках

Группа Количество птиц Схема кормления Доза ксантофиллов, мг/гол*сут Длительность периода, сут.

1-контрольная 21 ОР - 29

Ii-опытная 21 ОР + бархатцы 0.1 29

Ш-опытная 21 ОР + физалис 0.1 29

IV-опытная 21 ОР + подсолнечник 0.1 29

V-опытная 21 ОР + «ОРО ГЛО» 0.1 29

Для опыта были приготовлены индивидуализированные БАД:

- лепестки цветков бархатцев, содержавшие по спектрофото-метрическим данным 12.5 ± 1.5 мг ксантофиллов на 1 г добавки (в пересчете на неэтерифицированный лютеин);

- чашечки физалиса, по спектрофотометрическим данным содержавшие 9.0 ± 0.3 мг ксантофиллов на 1 г добавки (в пересчете на неэтерифицированный зеаксантин);

- лепестки подсолнечника, по спектрофотометрическим и хроматогра-фическим данным содержавшие 2.1 ± 0.3 мг эпоксиксантофиллов на 1 г добавки (в пересчете на лютеин);

- препарат «ОРО ГЛО», по спектрофотометрическим и хроматогра-фическим данным содержавший 20 мг/г ксантофиллов (в основном неэтерифицированный полностью транс-лютеин).

Содержание ксантофиллов в добавках определяли спектрофотометрическим и хроматографическим методами.

Для приготовления индивидуализированных добавок были использованы лепестки цветков бархатцев, лепестки подсолнечника, чашечки физалиса декоративного собранные в 2009 году и высушенные при комнатной температуре в течение 7 дней без доступа света. Полученный материал измельчали в кофемолке (BOSCH МКМ 6003).

В течение опыта все перепёлки в качестве ОР получали комбикорм, используемый в частном фермерском хозяйстве. Контрольная группа получала только ОР, птицы со второй по пятую опытную группу - ОР с добавлением индивидуализированных БАД согласно схеме. Все добавки вводили в количестве, обеспечивавшем поступление 0.1 мг/гол*сут ксантофиллов. Потребление воды не ограничивалось.

По завершении адаптационного периода определяли содержание ксантофиллов в желтках яиц всех опытных групп. Яйца на анализы в лабораторию отбирали еженедельно на протяжении всего опыта.

Гематологические и биохимические анализы тканей и органов кур-несушек (крови и печени) проведены в лаборатории биологических исследований БелГСХА.

В пробах крови кур-несушек определяли количество эритроцитов и лейкоцитов методом подсчёта в камере Горяева; концентрацию гемоглобина -гемоглобинцианидным методом; витамин А - спектрофотометрически;

витамин Е - по модифицированному методу Биери; кальций - титриметрически по де Ваарду; фосфор - колориметрически по реакции с ванадат-молибденовым реактивом (Лабораторные исследования в ветеринарии, 1991).

В печени кур-несушек определяли витамины А и Е, каротиноиды -спектрофотометрически; кальций - трилонометрическим методом; фосфор -колориметрически по реакции с ванадат-молибденовым реактивом.

В желтках яиц кур и перепёлок определяли ксантофиллы и холестерол. Для определения суммарного содержания каротиноидов использовали спектрофотометрический метод (спектрофотометр КФК-3-01), а для определения соотношения лютеин : зеаксантин и количества холестерола -метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Полученный цифровой материал был обработан статистически (Г.Ф. Лакин, 1980). При определении достоверной разницы между контрольной и опытными группами был использован аргумент Стъюдента. Результаты рассматривали как достоверные, начиная со значения <0,05.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Содержание ксантофиллов и их сохранность в сырье

В качестве источника лютеина в БАД были выбраны лепестки цветков бархатцев, так как в них в основном накапливаются диэфиры лютеина (J.D. Rivas, 1989), которые усваиваются в организме птицы так же как и сам лютеин, - в организме происходит омыление эфиров. В качестве зеаксантин-содержащего компонента на основе местного сырья были выбраны пузыревидновздутые чашечки физалиса декоративного.

Из этих растительных материалов и была создана в Белгородском государственном университете первая отечественная БАД для птиц, содержащая диэфиры лютеина и диэфиры зеаксантина в соотношении 4:1. В этой добавке используются раздельно высушенные и измельчённые лепестки цветков бархатцев и чашечки физалиса декоративного. Разработанная добавка отличается от импортных сбалансированностью по содержанию ксантофиллов (в плане соотношения 4:1) и позволяет увеличивать накопление ксантофиллов в желтках яиц птицы.

Суммарное содержание ксантофиллов в растительном сырье определяли спектрофотометрическим методом. Спектры ацетоновых экстрактов лепестков цветков бархатцев и чашечек физалиса соответствовали литературным данным для лютеина и зеаксантина по положению максимумов абсорбции (D.B. Rodrigues-Amaya, 2001).

Качественное определение ксантофиллов проводили методом обращенно-фазовой ВЭЖХ. В лепестках бархатцев основными ксантофиллами являлись диэфиры полностью транс-лютенна, в чашечках физалиса декоративного -диэфиры зеаксантина и пальмитат р-криптоксантина.

Контроль состава готовой добавки может быть выполнен тем же методом, поскольку пики эфиров зеаксантина по времени удерживания не совпадают с пиками производных лютеина.

Наши исследования показали, что уровень накопления ксантофиллов в цветках бархатцев одних и тех же сортов и чашечках физалиса декоративного зависит от многих факторов и может изменяться от года к году (табл. 3).

Таблица 3 - Содержание ксантофиллов в высушенном растительном сырье в разные годы, мг/г

Содержание ксантофиллов 2006 2007 2008 2009

Диэфиры лютеина (Т. erecta) 22.13±0.56 20.77±0.81 17.81±0.80 12.37±0.98

Диэфиры зеаксантина (Р. alkekengi) 15.02±0.12 14.91±0.12 13.89±0.36 12.91±0.55

На момент проведения опыта на курах-несушках содержание диэфиров лютеина в 1 г высушенных лепестков цветков бархатцев в 2007 г составило 16.77 мг, а диэфиров зеаксантина в чашечках физалиса - 10.96 мг.

При хранении высушенного и грубо измельченного растительного материала без доступа прямого солнечного света содержание ксантофиллов в течение первого года хранения монотонно уменьшалось в 1.47 раза (с 22.13 до 15.05 мг/г) для диэфиров лютеина, а для диэфиров зеаксантина - в 1.64 раза (с 15.02 до 9.16 мг/г). Это позволяет использовать БАД в течение длительного времени без особых условий хранения.

Высокая сохранность ксантофиллов в БАД объясняется тем, что при высушивании мембраны хромопластов становятся плотными и непроницаемыми для кислорода воздуха. При грубом измельчении растительного сырья степень разрушения этих оболочек невелика.

Собранное и высушенное растительное сырье лучше хранить либо не измельченным, а процесс измельчения производить непосредственно перед употреблением БАД либо грубо измельчённым.

3.2. Биохимические параметры тканей и органов кур-несушек при скармливании биологически активной добавки

3.2.1. Морфологические показатели и биохимический состав крови

БАД вызвала определённые изменения в гематологическом составе крови. Во второй опытной группе наблюдается увеличение количества эритроцитов на 28.14, в третьей - на 27.74, а в четвёртой - на 37.72 % (р<0.05) (табл. 4). Во всех группах этот параметр находился в пределах границ физиологической нормы.

Таблица 4 - Морфологические показатели крови

Группа Эритроциты, М012-л'' Лейкоциты, hoV1 Гемоглобин, г-л1

1-контрольная 2.51 ±0.21 19.24 ±2.24 87.65 ±7.14

И-опытная 3.21 ±0.51 23.67 ±2.77 96.33 ±4.17

Ш-опытная 3.20 ±0.21 22.08 ± 0.48 100.44 ±7.62

IV-опытная 3.45 ± 0.06* 24.25 ±3.34 93.76 ±5.37

* - р<0.05

Концентрация лейкоцитов во всех группах не превышала физиологическую норму (В.М. Митюшников, 1985; А.И. Голиков и др., 1991). Во второй, третьей и четвёртой опытных группах прослеживается тенденция увеличения количества лейкоцитов на 23.02, 14.76 и 26.04 % соответственно. Статистически достоверных изменений количества лейкоцитов у птиц опытных групп, в сравнении с контролем, выявлено не

было. Это отражает отсутствие отрицательного влияния БАД на организм кур.

Во второй, третьей и четвёртой опытных группах наблюдается увеличение концентрации гемоглобина в единице объема крови кур по сравнению с контролем на 9.90, 14.59 и 6.97 % соответственно. Во всех опытных группах количество гемоглобина находится в пределах нормы (И.П. Кондрахин, 1985).

Полученные данные морфологического состава крови свидетельствуют об отсутствии негативного влиянии БАД на здоровье кур-несушек. Повышение в крови концентрации гемоглобина и тенденции увеличения количества форменных элементов крови говорит о повышении уровня гемопоэтических процессов и об отсутствии кардинальных вмешательств в механизм гомеостаза.

Результаты анализа крови на содержание кальция и фосфора представлены в таблице 5.

Таблица 5 - Концентрация кальция и фосфора в сыворотке к зови кур, г*л~'

Группа Кальций Фосфор

1-контрольная 0.194 ±0.009 0.059 ± 0.001

И-опытная 0.237 ±0.018** 0.063 ±0.0003**

Ш-опытная 0.190 ±0.012 0.068 ±0.0008**

IV-опытная 0.209 ±0.013* 0.072 ± 0.004*

* - р<0.05; **-р<0.01

Исследования показали, что скармливание БАД не оказало отрицательного действия на содержание кальция и фосфора в крови. Следует отметить тенденцию к снижению концентрации кальция в третьей опытной группе на 2.26 %.

Во второй и четвёртой опытных группах содержание кальция по сравнению с контролем повысилось на 22.07 (р<0.01) и на 7.36 % (р<0.05), а количество фосфора в сыворотке крови всех опытных групп превосходит контроль на 5.39 (р<0.01), 13.80 (р<0.01) и 20.87 % (р<0.05) соответственно.

Результаты проведенных исследований показывают, что в опытных группах не происходит достоверного изменения в содержании витаминов А и Е (табл. 6).

Таблица 6 - Содержание витаминов и каротиноидов в сыворотке крови кур-несушек, мг*л~'

Группа Витамин А Витамин Е Каротиноиды

1-контрольная 1.55 ±0.07 7.70 ±4.88 0.51 ±0.05

П-опытная 1.51 ±0.13 13.63 ±3.58 0.87 ± 0.11 *

Ш-опытная 1.64 ± 0.16 13.40 ± 1.10 1.77 ±0.22**

IV-опытная 1.28 ±0.08 10.30 ±0.81 1.28 ±0.04***

* -р<0.05; **-р<0.01;***-р<0.001

Во всех опытных группах по сравнению с контролем происходит достоверное повышение содержания каротиноидов в сыворотке крови. Во второй опытной группе, получавшей 2.37 мг/гол*сут диэфиров ксантофиллов, содержание ксантофиллов в 1.71 раза (р<0.05) больше, чем в контроле. В третьей и четвёртой опытных группах, получавших соответственно 7.11 и 14.22 мг/гол*сут диэфиров ксантофиллов, содержание ксантофиллов больше контрольного в 3.47 (р<0.01) и в 2.51 раза (pO.OOl).

Более высокое содержание каротиноидов в сыворотке крови кур третьей опытной группы, возможно, объясняется тем, что ксантофиллы, поступившие в кровь из корма, не успели транспортироваться в желток яйца. Перенос обычно происходит в течение 4-8 ч после скармливания рациона, обогащённого ксантофиллами (Т.М. Околелова, A.M. Сергеева, 1988).

3.2.2. Биохимические превращения в печени

Приведённые в таблице 7 данные говорят о том, что существует некоторая тенденция увеличения концентрации сухого вещества в печени третьей и четвёртой опытных групп. Концентрация сухого вещества в печени второй группы на 30.49 % (р<0.05) выше контроля. Содержание золы в печени не претерпевает достоверных изменений.

Таблица 7 - Концентрация сухого вещества и золы в печени кур-несушек, г'кг"1

Группа Сухое вещество Зола

1-контрольная 297.23 ±13.81 12.87 ± 1.90

Н-опытная 387.87 ± 17.94* 15.13 ±3.14

Ш-опытная 315.47 ±4.93 13.70 ± 1.17

1У-опытная 376.50 ±28.00 12.60 ± 1.02

* - р<0.05

Полученные данные свидетельствует о том, что в печени под действием добавки не происходит накопления каких либо минеральных веществ.

Анализ печени на содержания кальция и фосфора (табл. 8) показал, что при введении различных доз добавки в рацион кур-несушек достоверных различий концентраций этих макроэлементов с контрольной группой нет.

Таблица 8 - Концентрация кальция и фосфора в печени кур-несушек, г кг"1

Группа Кальций, г*кг~' Фосфор, г*кг~'

1-контрольная 0.38 ± 0.029 2.80 ±0.410

П-опытная 0.49 ±0.035 3.29 ±0.808

Ш-опытная 0.39 ±0.026 3.57 ±0.215

1У-опытная 0.48 ± 0.028 3.23 ±0.286

Содержание витамина А в печени кур опытных групп не имеет достоверных различий с контролем, кроме второй опытной группы, где витамина А меньше на 34.73 % (р<0.05) (табл. 9). Таблица 9 - Концентрация витаминов и каротиноидов в печени, мг'кг"1

Группа Витамин А Витамин Е Каротиноиды

1-контрольная 1167.00 ±87.01 262.67 ± 27.76 1.91 ±0.09

П-опытная 761.67 ±53.72* 217.33 ±6.84 5.04 ±0.09***

Ш-опытная 1203.33 ± 114.81 278.33 ± 13.32 6.60 ±0.42***

1У-опытная 984.67 ±61.80 252.67 ± 12.99 13.51 ±0.66***

* -р<0.05; ***-р<0.001

Концентрация витамина Е в печени опытных групп не имеет достоверных различий с контрольной группой.

Из таблицы 9 видно, что во второй опытной группе уровень каротиноидов в печени достоверно превышает контроль в 2.64 раза (р<0.001), а в третьей группе - в 3.46 раза (р<0.001), что соответствует 2.37 и 7.11 мг/гол*сут. Наиболее высокий уровень каротиноидов, а именно 13.51 мг кг"1, наблюдается в четвёртой опытной группе, получавшей максимальное количество ксантофиллов (14.22 мг/гол*сут). Здесь содержание каротиноидов достоверно выше контроля в 7.07 раза (р<0.001).

В целом можно сказать, что введение в рацион натуральных природных ксантофиллов в дозах: 2.37, 7.11, 14.22 мг/гол*сут не оказало отрицательного

влияния на обеспеченность организма кур витаминами и оказало положительное влияние на обеспеченность каротиноидами.

3.3. Биоконверсия ксантофиллов у кур-несушек при скармливании биологически активной добавки

5.5.7. Накопление ксантофиллов в яичном желтке

Биохимический анализ яиц важен при исследовании эффективности использования добавок для обогащения яиц биологически активными веществами.

Данные по определению суммарного количества каротиноидов в желтках яиц (в пересчёте на лютеин) представлены в таблице 10.

Содержание каротиноидов во всех группах до скармливания БАД было примерно одинаково, достоверно не различалось.

При анализе полученных данных установлено, что через 15 суток кормления БАД в контрольной группе содержание ксантофиллов уменьшилось, по сравнению с исходным, в 1.44 раза, а к концу опыта (через 32 суток) - в 1.74 раза. Во всех же опытных группах содержание ксантофиллов, по сравнению с исходным, увеличивалось. Через 15 суток скармливания добавки количество ксантофиллов в желтке увеличилось в 1.43 (р<0.001), в 2.62 (р<0.001) и в 4.08 раза (р<0.001) для второй, третьей и четвёртой опытных групп соответственно.

Таблица 10 - Содержание ксантофиллов (в пересчёте на лютеин) в желтках яиц, мг/кг

Группа до скармливания добавки ч-з 15 суток скармливания добавки в конце скармливания добавки (ч-з 32 суток)

1-конгрольная 10.86 ±2.08 7.52 ± 0.45 6.23 ±0.82

Н-опытная 10.99 ± 1.00 15.73 ±0.77*** 23.51 ±2.33*

Ш-опытная 11.37 ±0.86 29.83 ±4.37*** 39.48 ±3.81**

ГУ-опытная 11.03 ±1.22 45.01 ±5.13*** 103.77 ± 1.51***

*-р<0.05; **-р<0.01; ***-р<0.001

В конце опыта (через 32 суток) исследование количества ксантофиллов показало увеличение в 2.14 (р<0.05), 3.47 (р<0.01) и в 9.41 раза (р<0.001) для второй, третьей и четвёртой опытных групп соответственно. Интенсивность окраски желтков яиц всех опытных групп возрастала с увеличением дозы ксантофиллов. В конце опыта содержание каротиноидов превысило установленную для инкубационных яиц норму во всех опытных группах. Эти данные говорят о положительном влиянии БАД на накопление ксантофиллов в желтках куриных яиц. К тому же в желтках яиц всех опытных групп отношение лютеина к зеаксантину было близко к 4:1.

БАД в дозе 14.22 мг/гол*сут диэфиров ксантофиллов оказалась более эффективной по сравнению с другими дозами, позволяя добиться повышения содержания ксантофиллов в желтке в 9.4 раза по сравнению с исходным.

Разделение и количественное определение лютеина и зеаксантина осуществляли с использование нормально-фазовой ВЭЖХ.

Как следует из полученных данных с течением времени общее накопление ксантофиллов в желтках яиц возрастает. При этом использованная добавка обеспечивает необходимое соотношение между лютеином и зеаксантином, которое остаётся практически неизменным для

всех опытных групп и попадает в интервал 3.6 4.1 : 1 (рис. 2).

Рис. 2. Хроматограмма ксантофиллов желтков яиц кур-несушек в конце эксперимента

Это можно расценивать как примерно одинаковую бидоступность лютеина и зеаксантина из использованной БАД.

3.3.2. Динамика холестерола в желтках яиц

Экстракт желтка яиц, который использовался для определения каротиноидов, может быть использован и для определения холестерола на той же хроматографической обращенно-фазовой колонке, но с рефрактометрическим детектированием. Однако для достижения полноты экстракции холестерола соотношение желток : ацетон не должно превышать 0.1 г/мл.

Содержание холестерола в желтке достаточно велико - его пик на хроматограмме сопоставим по величине с пиками экстрагируемых вместе с ним триацилглицеролов, что исключает необходимость какой-либо дополнительной обработки пробы перед определением даже при использовании не отличающегося высокой чувствительностью рефрактометрического метода детектирования (рис. 3).

желтка; Б - стандартный раствор холестерола. I - холестерол; II - триацилглицеролы

Результаты определения холестерола в желтках яиц кур-несушек представлены в таблице 11.

Группа В начале опыта В конце опыта

1-контрольная 13.8 ± 0.15 14.2 ±0.52

Н-опытная 14.5 ±0.65 14.1 ±0.21

Ш-опытная 13.9 ±0.94 14.1 ±0.34

1У-опытная 14.0 ±0.82 14.4 ±0.44

В эксперименте, выполненном для получения продукции, обогащенной ксантофиллами, при 2-х - 3-х кратном росте концентрации суммы лютеина и зеаксантина заметных различий по накоплению холестерола не было обнаружено (среднее содержание 14.1 мг-г"1 желтка).

3.3.3. Морфологические и физические характеристики яиц

Важными характеристиками морфологического и физического состояния яиц являются: форма, масса, толщина скорлупы, отсутствие на ней кальциевых отложений или трещин и др.

Из таблицы 12 видно, что средняя масса яиц в начале опыта в третьей и четвёртой опытных группах достоверно меньше, чем в контрольной группе.

Таблица 12 - Масса яиц, г

Группа В начале опыта В конце опыта

1-контрольная 74.8 ±1.5 71.0 ±0.9*

П-опытная 74.5 ±1.2 76.5 ±0.8

Ш-опытная 69.6 ± 1.6* 69.3 ± 0.9

1У-опытная 64.1 ±2.9** 74.7 ± 1.4**

* - р<0.05; **-р<0.01

К концу опыта масса яиц в контрольной группе достоверно уменьшилась на 5.09 % (р<0.05), а в четвёртой опытной группе достоверно увеличилась на 16.50 % (р<0.01). Во второй и третьей группах масса яиц осталась на том же уровне, впрочем, полученные данные не являются статистически достоверными.

Было, также выявлено, что скармливание БАД не оказало отрицательного влияния на форму яиц, «мраморность» скорлупы и упругую деформацию.

3.4. Влияние структуры каротиноидов на их конверсию у перепёлок-несушек

Появление в печати сведений о том, что зеаксантин в организме животных и человека может быть получен изомеризацией лютеина (Я.А. Воле й а1., 2007), поставило под сомнение необходимость создания БАД, сбалансированной по отношению лютеин : зеаксантин (4:1). В ходе выполнения работы у нас возник ряд вопросов, связанных с накоплением других ксантофиллов в желтках яиц при введении их в рацион птицы.

Для того чтобы найти ответы на эти вопросы был проведён дополнительный опыт на перепёлках-несушках. Для проверки усвояемости ксантофиллов из растительных материалов нами были подготовлены индивидуализированные БАД, содержащие: диэфиры лютеина (бархатцы), диэфиры зеаксантина (физалис), эпоксиксантофиллы (подсолнечник) и неэтерифицированный лютеин («ОРО ГЛО»).

Количественное определение ксантофиллов в желтках яиц перепелок для оценки суммарного уровня накопления проводили в пересчете на лютеин. В целом накопление ксантофиллов, как и при кормлении кур (В.Л. Владимиров и др. 2005; Л.А. Дейнека и др., 2007), увеличивается при использовании добавок бархатцев, физалиса и «ОРО ГЛО» (рис. 4).

Рис. 4. Изменение накопления ксантофиллов в желтках перепелиных яиц при использовании индивидуализированных добавок

Полученные спектрофотометрические данные свидетельствуют о том, что в желтках перепелиных яиц в случаях с добавками бархатцев и «ОРО ГЛО» основной компонент - лютеин.

Поскольку при использовании добавки, содержащей эпоксиксантофиллы (подсолнечник), не обнаружено увеличения накопления ксантофиллов в желтке, то можно предположить, что в организме ферментов, отвечающих за деэпоксидирование, нет. Поэтому растения, накапливающие эпоксикаротиноиды, не эффективны в кормлении птицы для увеличения накопления ксантофиллов.

Добавки диэфиров и неэтерифицированных ксантофиллов примерно одинаково эффективны, т.е. этерификация не сказывается на биодоступности ксантофиллов, что соответствует литературным данным (Ь. е1 а1., 2009).

Дополнительная информация по качественному составу ксантофиллов была получена при хроматографическом исследовании (нормально-фазовая хроматография) тех же образцов желтка (рис. 5). Анализ хроматограмм показал, что использование добавок, содержащих диэфиры лютеина (бархатцы) или неэтерифицированный лютеин («ОРО ГЛО»), как и в выше рассмотренном эксперименте по кормлению кур, приводит к примерно одинаковому соотношению между лютеином и зеаксантином (в диапазоне 1 : 5+7) с логичным недостатком зеаксантина. Но уже ко второй неделе наблюдалось очень большое различие для образцов, полученных с использованием добавки на основе физалиса (накапливающего в основном диэфиры зеаксантина): доля зеаксантина в желтках таких яиц даже превысила долю лютеина (46 против 36 %, соответственно). Практически весь рост накопления ксантофиллов в этом случае (по сравнению с контрольной группой) был связан с ростом накопления именно зеаксантина.

зеаксантин

Рис. 5. Разделение ксантофиллов желтка яиц перепелок: А - с добавкой бархатцев;

Б - с добавкой физалиса

Результаты проведенных исследований показали, что в группе перепёлок получавшей добавку с диэфирами зеаксантина (физалис) в желтках накапливается преимущественно зеаксантин. Это говорит о том, что если превращение лютеина в зеаксантин и происходит, то очень медленно и в незначительных количествах. Поэтому создание сбалансированной по содержанию лютеина и зеаксантина БАД является оправданным направлением пищевого дизайна.

Кроме того тот факт, что в группах, получавших добавку с этерифицированным и неэтерифицированным лютеином (бархатцы и препарат «ОРО ГЛО»), накопление ксантофиллов примерно одинаково, подтверждает целесообразность использования природных (нативных) диэфиров ксантофиллов без дополнительных стадий омыления, что упрощает технологию получения БАД и увеличивает ее стабильность при хранении.

ВЫВОДЫ

1. В сырье для изготовления биологически активной добавки концентрация диэфиров лютеина в лепестках цветков бархатцев составила 18.27, а диэфиров зеаксантина в чашечках физалиса декоративного - 14.26 мг в расчёте на один грамм воздушно-сухого сырья.

2. В процессе хранения биологически активной добавки в течение года без доступа прямого солнечного света при температуре 20-22° С концентрация диэфиров лютеина снизилась в 1.47 раза, концентрация диэфиров зеаксантина - в 1.64 раза, что позволяет хранить и использовать добавку в течение года.

3. Использование биологически активной добавки в рационе кур-несушек способствует:

- повышению уровня каротиноидов в сыворотке крови максимально до 1.77 мг*л"' (при дозе диэфиров ксантофиллов 7.11 мг/гол*сут); в печени до 13.51 мг*кг-1 (при дозе диэфиров ксантофиллов 14.22 мг/гол*сут);

- повышению концентрации кальция в сыворотке крови максимально до 0.237 г*л"' и фосфора - максимально до 0.072 г*л~'.

4. Скармливание биологически активной добавки курам-несушкам в течение двух недель ведёт к увеличению концентрации ксантофиллов в желтках яиц от 15.73 до 45.01, в течение четырёх с половиной недель - от 23.51 до 103.77 мг/кг. При этом, чем больше доза ксантофиллов, тем выше их концентрация в желтках яиц.

5. Структура каротиноидов растительного сырья влияет на их конверсию у птицы:

- эпоксиксантофиллы не накапливаются в желтках яиц;

- этерифидированные ксантофиллы конвертируются в желток в виде неэтерифицированных ксантофиллов.

6. В биологически активной добавке, изготовленной на основе растительного сырья, соотношение диэфиров лютеина и зеаксантина составило 4:1, после скармливания его птице такое же соотношение ксантофиллов оказалось и в желтках яиц.

Практические предложения

Для получения функционального продукта питания (яичной продукции) рекомендуется использовать биологически активную добавку, содержащую диэфиры лютеина (полученные из лепестков цветков бархатцев) и диэфиры зеаксантина (полученные из чашечек физалиса) в соотношении 4:1. Для покрытия суточной нормы (5 мг ксантофиллов) человеку достаточно употребления двух яиц.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

* - работы, опубликованные в рекомендованных ВАК РФ изданиях

1. * Владимиров, B.JI. Исследование каротиноидного состава желтка куриных яиц / B.JI. Владимиров, A.A. Шапошников, Д.В. Дейнека, С.И. [т.е. М.] Вострикова,

B.И. Дейнека // Доклады РАСХН. - 2005. - №6. - С.46-48.

2. * Шапошников, A.A. Биологическая ценность добавления каротиноидов в корм кур-несушек / A.A. Шапошников, С.М. Вострикова, Т.С. Гусева // Ветеринария и кормление. - 2007. - №6. - С. 11.

3. Дейнека, JI.A. Пищевой дизайн: исследование накопления ксантофиллов в желтке куриных яиц / Л.А. Дейнека, A.A. Шапошников, С.М. Вострикова, В.И. Дейнека // Научные ведомости БелГУ. Серия: Естественные науки. - 2007. -№5. - С.133-138.

4. Дейнека, В.И. Определение холестерола в желтке куриных яиц / В.И. Дейнека, A.A. Шапошников, Л.А. Дейнека, С.М. Вострикова, И.А. Гостищев, Т.С. Гусева // Научные ведомости БелГУ. Серия: Естественные науки. - 2008. -№3. - С. 164-171.

5. Дейнека, В.И. Каротиноиды: строение, биологические функции и перспективы применения / В.И. Дейнека, A.A. Шапошников, Л.А. Дейнека, Т.С. Гусева,

C.М. Вострикова, Е.А. Шенцева, Л.Р. Закирова // Научные ведомости БелГУ. Серия: Медицина. Фармация. - 2008. - №6. - С. 19-24.

6. Вострикова, С.М. Изучение накопления ксантофиллов в желтке куриных яиц при введении в диету специальных биологически активных добавок / С.М. Вострикова, A.A. Шапошников, Л.А. Дейнека // Тезисы международной конференции «Достижения супрамолекулярной химии и биохимии в ветеринарии и зоотехнии». - М., 2008. - С. 159.

7. * Гостищев, И.А. Хроматографический контроль качества яичной продукции: определение холестерола в желтке / И.А. Гостищев, С.М. Вострикова, A.A. Шапошников, Л.А. Дейнека, В.И. Дейнека // Сорбционные и хроматографические процессы. Воронеж. -2009. - Т.9, вып. 4. - С. 566-573.

8. Вострикова, С.М. Каротиноиды желтка куриных яиц: возможности пищевого дизайна / С.М. Вострикова, A.A. Шапошников, В.И. Дейнека, JI.A. Дейнека // Актуальные проблемы химической науки, практики и образования: Сборник статей Международной научно-практической конференции, 19-21 мая 2009 г., ч. 2. - Курск, 2009. - С. 96-99.

9. * Шапошников, А. Источники биологически активных ксантофиллов для яичной продукции / А. Шапошников, В. Дейнека, Г. Симонов, С. Вострикова, М. Третьяков // Птицеводство. - 2009. - №4. - С. 41.

10. Вострикова, С.М. Пищевой дизайн и профилактика офтальмологических заболеваний / С.М. Вострикова, Т.Н. Сёмкина, JI.A. Дейнека, A.A. Шапошников,

B.И. Дейнека // Сборник материалов Всероссийской школы-семинара «Современные наукоёмкие лечебные и фармацевтические технологии для офтальмологии» для молодых учёных, г. Белгород, 28 сентября - 1 октября 2009 г. - Белгород: ИПЦ «ПОЛИТЕРРА», 2009. - С. 20-29.

11. * Дейнека, В.И. Спектральный и хроматографический анализ ксантофиллов в различных растительных добавках и их влияние на накопление лютеина и зеаксантина в желтке перепелиных яиц / В.И. Дейнека, A.A. Шапошников, Л.А. Дейнека,

C.М. Вострикова, Л.Р. Закирова, И.Е. Олейникова // Научные ведомости БелГУ. Серия: Естественные науки. - 2010. - №21. - С. 143-149.

12. Патент 2328137 Российская Федерация, МПК А 23 К 1/00, А 23 К 1/16. Биологически активная добавка для кур и способ её получения / Дейнека Л.А., Дейнека В.И., Шапошников A.A., Гусева Т.С., Третьяков М.Ю., Вострикова С.М., Шаркунова H.A.; заявитель и патентообладатель Белгородский государственный университет. -№ 2007113094/13; заявл. 09.04.2007; опубл. 10.07.2008, Бюл. №19; приоритет 09.04.2007. -5 с.: ил.

Подписано в печать 06.05.2011. Формат 60x84/16. Гарнитура Times. Усл. п. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ 72. Оригинал-макет подготовлен в ИПК НИУ «БелГУ» 308015, г. Белгород, ул. Победы, 85

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Вострикова, Светлана Михайловна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Структура, свойства и распространение каротинов и ксантофиллов в природе.

1.2. Роль каротиноидов в питании животных и человека.

1.2.1. Биологическая роль каротиноидов в организме человека.

1.2.2. Основные функции каротиноидов в организме кур.

1.2.3. Накопление каротиноидов в организме кур.

1.3. Источники каротиноидов для птицеводства.

1.4. Методы контроля содержания каротиноидов в организме кур и в продукции птицеводства.

1.5. Резюме по обзору литературы.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ

ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Содержание ксантофиллов и их сохранность в сырье.

3.2. Биохимические параметры тканей и органов кур-несушек при скармливании биологически активной добавки.

3.2.1. Морфологические показатели и биохимический состав крови.

3.2.2. Биохимические превращения в печени.

3.3. Биоконверсия ксантофиллов у кур-несушек при скармливании биологически активной добавки.

3.3.1. Накопление ксантофиллов в яичном желтке.

3.3.2. Динамика холестерола в желтках яиц.

3.3.3. Морфологические и физические характеристики яиц.

3.4. Влияние структуры каротиноидов на их конверсию у перепёлок-несушек.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биоконверсия ксантофиллов у птицы при скармливании биологически активной добавки на основе растительного сырья"

Актуальность темы. Промышленное птицеводство — одна из интенсивных и динамичных отраслей сельского хозяйства. Развитие этой отрасли обусловлено высокой рентабельностью, ценными питательными и диетическими свойствами получаемой продукции. В питании человека большое значение имеют куриные яйца (а в последнее время и перепелиные яйца), являющиеся прекрасными источниками белков, липидов и других питательных веществ.

Наиболее важную роль для' ведения интенсивного птицеводства в условиях промышленной технологии содержания птицы играет её полноценное, сбалансированное по питательным, минеральным и биологически активным веществам кормление (В.И. Георгиевский, 1970; В.И. Фисинин, 1998; B.C. Романов, 1999; И. Егоров, 2003; Т.С. Кузнецова, 2004; Т.Н. Хамидуллин, 2005; E.H. Андрианова, 2007).

Так как в мире постоянно растёт спрос на продукты птицеводства, целенаправленно обогащенные важными для человека соединениями, то основной тенденцией совершенствования технологии кормления и ветеринарно-профилактических мероприятий современного птицеводства является разработка и внедрение в производство функциональных кормовых добавок, для получения функциональных продуктов питания, которые благодаря повышенному накоплению физиологически активных пищевых ингредиентов • при систематическом употреблении снижают риск развития заболеваний (ГОСТ 52349-2005) и поэтому могут быть рекомендованы в профилактических целях. Это относительно новое направление в животноводстве получило название - пищевой дизайн (food design), который ставит главной целью производство продуктов питания с заданными свойствами путём целенаправленного изменения рациона кормления животных (Н.Б. Красина, JI.B. Мушта, A.B. Лозовой, 2005; В. Фисинин, 2007;

В.И. Фисинин, А.Л. Штеле, 2008; В.И. Фисинин, A.JL Штеле, 2008а; Я.О. Хорбаньчук и др. 2009).

В такие функциональные кормовые добавки вводят йод, селен, полиненасыщенные жирные кислоты, витамины и натуральные каротиноиды. Обогащая ими комбикорма для птицы можно получать яйца с прогнозированным химическим составом и новыми функциональными свойствами (А. Османян, А. Иванов, Е. Козлобаева, 2003; М. Сурухи, 2004;

A. Штеле, Е. Борисова, Н. Колобашкина, 2004; А.Г. Кощаев, 2008;

B.И. Фисинин, А.Л. Штеле, 2008а).

Основные компоненты каротиноидного комплекса желтка -ксантофиллы: лютеин и зеаксантин, источником которых могут быть вегетативная масса растений или зерно кукурузы, добавляемые в кормовые смеси.

Особенно важно, что эти же ксантофиллы в соотношении примерно 4:1 входят в состав жёлтого пятна (macula lutea) сетчатки глаза человека (G.J. Handelman, Z.D. Nightingale, А.Н. Lichtenstein, E.J. Schaefer, J.B.Blumberg, 1999; W. Schalch, 2000).

Поэтому актуально создавать такие добавки, которые бы обеспечивали необходимое соотношение между индивидуальными каротиноидами и учитывали физиологические особенности человека. В частности, для решения проблем связанных с дистрофией макулы необходимо создание таких добавок, которые бы обеспечивали накопление лютеина и зеаксантина в продуктах питания в соотношении 4:1, поскольку совместное действие этих двух пигментов при именно таком соотношении наиболее эффективно.

Кроме того, доказано, что нехватка ксантофиллов приводит к ухудшению воспроизводительных функций птицы, снижению выводимости и сохранности цыплят (Ж.В. Карасёва, 1984; Т.М. Околелова, A.M. Сергеева, 1988). А поскольку каротиноиды не синтезируются в ее организме, то они должны поступать с кормом.

Поэтому научный и практический интерес представляет разработанная нами новая биологически активная добавка, содержащая ксантофиллы растительного происхождения и сбалансированная по соотношению лютеин : зеаксантин.

Для внедрения в практику любой новой добавки необходимо экспериментальное подтверждение её безопасности для организма и метаболической активности.

Решение комплекса перечисленных вопросов определяет актуальность выбранного направления исследований.

Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы — исследование биоконверсии растительных ксантофиллов у кур-несушек, перепёлок и другой птицы при скармливании биологически активной добавки.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработать биологически активную добавку, содержащую диэфиры лютеина и диэфиры зеаксантина в отношении 4:1, для получения функционального продукта питания;

2. Оценить биоконверсию различных доз ксантофиллов в организме кур-несушек и перепелок;

3. Изучить морфологические и биохимические показатели тканей и органов кур-несушек при скармливании различных доз биологически активной добавки;

4. Изучить влияние различных типов ксантофиллов на их накопление в желтках яиц перепелок;

5. Оценить сохранность разработанной биологически активной добавки.

Научная новизна работы. Впервые изучены биопревращения ксантофиллов у птицы при использовании разных доз биологически активной добавки на основе растительного сырья и влияние на морфологические и биохимические параметры тканей и органов и депонирование ксантофиллов в желтках яиц. Установлено влияние разных типов ксантофиллов на их накопление в желтках яиц перепелов. Экспериментально доказана возможность обогащения яиц каротиноидами до количеств, позволяющих обеспечить человеку половину суточной потребности человека в ксантофиллах с использованием кормовой биологически активной добавки на основе местного растительного сырья. Научная новизна исследований подтверждена патентом РФ №2328137 от 9 апреля 2007 г.

Практическая значимость работы. Получен функциональный продукт питания с увеличенной концентрацией ксантофиллов в желтках куриных и перепелиных яиц за счет введения в рацион разработанной биологически активной добавки, на основе местного растительного сырья.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Для изготовления биологически активной добавки с повышенным содержанием ксантофиллов в качестве источника диэфиров лютеина эффективно использование лепестков цветков бархатцев, диэфиров зеаксантина — чашечек физалиса;

2. Хранить и использовать биологически активную добавку можно в течение года без доступа солнечного света при температуре 20-22°С;

3. Скармливание курам биологически активной добавки, изготовленной на основе растительного сырья, повышает содержание ксантофиллов в крови и печени;

4. Повышение концентрации растительных ксантофиллов в корме способствует накоплению каротиноидов в желтках яиц птицы. Использование добавки способствует накоплению лютеина и зеаксантина в желтках яиц в соотношении 4:1;

5. Тип ксантофиллов растительного сырья влияет на их накопление в желтках яиц перепёлок.

Апробация результатов исследования. Материалы диссертации были представлены и получили положительную оценку на Международной научно-практической конференции «Достижения супрамолекулярной химии и биохимии в ветеринарии и зоотехнии» (Москва, 2008); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы химической науки, практики и образования» (Курск, 2009); на Всероссийской школе-семинаре «Современные наукоёмкие лечебные и фармацевтические технологии для офтальмологии» для молодых учёных (Белгород, 2009); на совместном заседании кафедры биохимии и фармакологии, кафедры биотехнологии, морфологии и физиологии живых систем БелГУ и кафедры физиологии и фармакологии БелГСХА (Белгород, 2009). За разработку кормовой биологически активной добавки в 2008 г. получена серебряная медаль VIII Московского Международного салона инноваций и инвестиций (приложение 4) и диплом XIII Московского Международного салона «Архимед-2009» (приложение 5).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 8 статей, в том числе 5 в изданиях перечня ВАК РФ, три тезиса докладов международных конференций, один патент на изобретение РФ №2328137, 2007 г.

Структура и объём диссертации. Диссертация представляет собой рукопись компьютерного набора объемом 137 страниц и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практического предложения, списка литературы и приложений. Текст включает 16 таблиц и 24 рисунка. Всего использовано 343 источника литературы, в том числе 193 публикации зарубежных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Вострикова, Светлана Михайловна

ВЫВОДЫ

1. В сырье для изготовления биологически активной добавки концентрация диэфиров лютеина в лепестках цветков бархатцев составила 18.27, а диэфиров зеаксантина в чашечках физалиса декоративного - 14.26 мг в расчёте на один грамм воздушно-сухого сырья.

2. В процессе хранения биологически активной добавки в течение года без доступа прямого солнечного света при температуре 20-22° С концентрация диэфиров лютеина снизилась в 1.47 раза, концентрация диэфиров зеаксантина - в 1.64 раза, что позволяет хранить и использовать добавку в течение года.

3. Использование биологически активной добавки в рационе кур-несушек способствует: повышению уровня каротиноидов в сыворотке крови максимально до 1.77 мг*л-1 (при дозе диэфиров ксантофиллов 7.11 мг/гол*сут); в печени до 13.51 мг*кг"' (при дозе диэфиров ксантофиллов 14.22 мг/гол*сут); повышению концентрации кальция в сыворотке крови максимально до 0.237 г*л-1 и фосфора - максимально до 0.072 г*л-1.

4. Скармливание биологически активной добавки курам-несушкам в течение двух недель ведёт к увеличению концентрации ксантофиллов в желтках яиц от 15.73 до 45.01, в течение четырёх с половиной недель - от 23.51 до 103.77 мг/кг. При этом, чем больше доза ксантофиллов, тем выше их концентрация в желтках яиц.

5. Структура каротиноидов растительного сырья влияет на их конверсию у птицы: эпоксиксантофиллы не накапливаются в желтках яиц; этерифицированные ксантофиллы конвертируются в желток в виде неэтерифицированных ксантофиллов.

6. В биологически активной добавке, изготовленной на основе растительного сырья, соотношение диэфиров лютеина и зеаксантина составило 4:1, после скармливания его птице такое же соотношение ксантофиллов оказалось и в желтках яиц.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для получения функционального продукта питания (яичной продукции) рекомендуется использовать биологически активную добавку, содержащую диэфиры лютеина (полученные из лепестков цветков бархатцев) и диэфиры зеаксантина (полученные из чашечек физалиса) в соотношении 4:1. Для покрытия суточной нормы (5 мг ксантофиллов) человеку достаточно употребления двух яиц.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В ряде зарубежных стран каротиноиды (в том числе и ксантофиллы) используются для получения продуктов питания с заданными свойствами. Такое направленное действие на организм заключается в биотрансформации химических соединений корма в организме животных и получило название «Food Design» («Пищевой дизайн»). Полученные по нему продукты пользуются повышенным спросом у населения, ведь необходимые человеку биологически активные вещества, находясь в, составе мясных и молочных продуктов; яиц птицы, имеют неоспоримые преимущества перед препаратами химического и биотехнологического синтеза.

Термин «Пищевой дизайн» означает- не только цвет, запах и привлекательность продукта, но, самое главное, — позитивное влияние на метаболизм у птицы и получение продуктов, питания, благоприятных для здоровья человека.

Так как современное птицеводство России направлено на производство диетического мяса и яйца и основано на широком использовании промышленных интенсивных технологий выращивания и эксплуатации птицы, то определённую перспективу представляет использование добавок, изготовленных из природного растительного сырья, с целью увеличения уровня поступления в организм птиц биологически активных веществ. А применение каротиноидов в кормлении сельскохозяйственных животных и птицы придаёт кормам высокую биологическую активность.

Мировой рынок производителей растительного сырья и препаратов каротиноидов в настоящее, время составляет несколько сотен миллионов долларов, при полном отсутствии в нем России, как производителя.

Поэтому нами на основе сырья местной флоры из отобранных сортов бархатцев (Сиера оранжевый, Родос и Оранжевый снег), при среднем содержании (в одном грамме воздушно сухого сырья) диэфиров лютеина 16.77, и физалиса декоративного, при среднем содержании диэфиров зеаксантина 10.96 мг, была изготовлена биологически активная добавка для птицеводства. Методом спектрофотометрии подтверждён качественный состав добавки, методом ВЭЖХ установлено соотношение диэфиров лютеина к диэфирам зеаксантина, равное 4:1. Отличие полученной биологически активной добавки (патент на изобретение РФ № 2328137, 2007 г.), в том, что она содержит на порядок меньше тиофенов, чем самая распространённая на рынке России бельгийская добавка «ОРО ГЛО». Если «ОРО ГЛО» может храниться* только в атмосфере азота при низких температурах, то разработанная биологически активная добавка имеет более длительные сроки хранения (до одного года) при комнатной температуре за счёт особенностей строения клеток растительного материала и грубого помола. При хранении без доступа прямого солнечного света при температуре 20-22°С концентрация активных компенентов в течение года изменяется примерно в полтора раза, что делает возможным использование добавки в птицеводстве в течение года (до следующего урожая).

Разработанная добавка является прототипом бельгийского препарата «ОРО ГЛО», который изначально использовался в птицеводстве с целью решения проблем воспроизводства и сохранности молодняка птицы. «ОРО ГЛО» содержит в основном неэтерифицированный лютеин и небольшое количество неэтерифицированного зеаксантина в соотношении примерно 10:1. В отличие от «ОРО ГЛО» разработанная нами добавка проста в изготовлении и содержит более устойчивые диэфиры лютеина и зеаксантина в благоприятном для здоровья человека соотношении — 4:1. Для создания новой добавки использовался не побочный продукт (как при создании препарата «ОРО ГЛО»), а нативный растительный материал.

Для оценки биоконверсии ксантофиллов изучали морфологический состав крови кур-несушек. Установили, что доза добавки 14.22 мг/гол*сут ведёт к повышению содержания эритроцитов, что может рассматриваться как стимуляция эритропоэза. Концентрация кальция и фосфора в сыворотке крови достоверно повышается.

При кормлении кур-несушек добавкой было установлено, что биоконверсия ксантофиллов не влияет на обеспеченность организма птицы витаминами А и Е, и оказывает положительное влияние на обеспеченность организма каротиноидами. Количество каротиноидов в сыворотке крови достоверно повышается во всех опытных группах и достигает максимального значения 1.77 мг*л-1 при дозе ксантофиллов 7.11 мг/гол*сут.

Также изучали биохимические изменения в печени. Установили, что биологически активная добавка существенно не изменяет содержания кальция и фосфора, а также витаминов А и Е в этом органе, но достоверно увеличивает содержание каротиноидов во всех опытных группах. Максимальная концентрация каротиноидов (13.51 мгкг"1) наблюдается при введении в рацион кур-несушек 14.22 мг/гол*сут ксантофиллов.

При исследовании биоконверсии ксантофиллов у кур-несушек выяснили, что чем выше доза биологически активной добавки, тем больше суммарное содержание ксантофиллов в желтках яиц, к тому же использование добавки позволяет добиться оптимального для здоровья человека соотношения лютеина к зеаксантину — 4:1. Также было установлено, что максимальное содержание ксантофиллов в желтке яиц составило 103.77 мг/кг, при дозе ксантофиллов 14.22 мг в сутки на голову, что даёт нам возможность рассматривать полученные яйца как функциональный продукт питания.

Концентрация ксантофиллов 103.77 мг/кг в желтках куриных яиц не является предельной. По-видимому, в желтках возможно дальнейшее увеличение концентрации ксантофиллов при повышении в рационе птицы дозы биологически активной добавки.

Биоконверся ксантофиллов не оказывает влияния на концентрацию в желтках яиц холестерола, во всех опытных группах содержание холестерола осталось на уровне контроля.

Анализ скармливания добавки показал, что эпоксиксантофиллы, содержащиеся в лепестках цветков подсолнечника, не эффективны в кормлении птицы с целью увеличения содержания в желтках яиц каротиноидов. Добавки в корм и диэфиров и неэтерифицированных ксантофиллов обладают примерно одинаковой эффективностью, т.е. этерификация не сказывается на биодоступности ксантофиллов. При этом оказалось, что если превращение лютеина в зеаксантин в организме птицы если и происходит, то очень медленно и в незначительных количествах.

Таким образом, проведённые исследования подтвердили создание сбалансированной по содержанию лютеина и зеаксантина (4:1) биологически активной добавки, изготовленной из растительного сырья (лепестков цветков бархатцев и чашечек физалиса декоративного). Также исследования подтвердили и возможность использования добавки для получения функциональных продуктов питания.

Оригинальность подхода к созданию и использованию добавки подтверждена патентом РФ и широким резонансом специалистов птицеводства России, Украины и Беларуси.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Вострикова, Светлана Михайловна, Белгород

1. Абронина, И. Ф. Стимуляция ß-каротином растений клеточного иммунитета у мышей Текст. / И. Ф. Абронина, Р. Ю. Романаускайте, Т. Н. Аидрейчук и др. // Бюллетень экспер. биол. и мед. 1993. - № 9. - С. 295-298. - ISSN 0365-9615.

2. Айдарханов, Б. Б. Молекулярные аспекты механизма антиоксидантной активности витамина Е, особенности действия а- и у-токоферолов Текст. / Б. Б. Айдарханов, Э. А. Лашкина, Е. Г. Ленская // Вопр. мед. химии. -1989. Т. 35, - № 3. - С. 2-9.

3. Андрианова, Е. Н. Качество премикса в зависимости от наполнителя: автореф. дис. . канд. с.-х. наук / E.H. Андрианова. Сергиев Посад, 2007. - 15 с.

4. Антипов, В. А. Использование препаратов ß-каротина в животноводстве и ветеринарии Текст. / В. А. Антипов, Д. Н. Уразаев, Е. В. Кузьминова. -Краснодар : Кубанс. агроуниверситет, 2001. 118 с.

5. Байковская, Е. Новые источники каротиноидов Текст. / Е. Байковская // Птицеводство. 1993. -№ 8. - С. 16-19. - ISSN 0033-3239.

6. Барабой, В. А. Перекисное окисление и стресс Текст. / В. А. Барабой, И. И. Брехмен, Ю. Б. Голотин. СПб. : Наука, 1992. - 148 с.

7. Белоголовская, Е. Г. Изучение антимутагенной активности комбинаций аспартама и бета-каротина в эксперименте Текст. : дис. . канд. биол. наук : 14.00.25, 03.00.14 / Белоголовская Елена Геннадьевна. — М., 2002. — 121 с.

8. Билев, С. Кукуруза как компонент комбикормов Текст. / С. Билев // Комбикорма. 1997. - № 2. - С.28-29.

9. Билич, Г. Л. Биология полный курс Текст. В 3 т. Т. 2. Ботаника / Г. Л. Билич, В. А. Крыжановский. М. : ООО Изд-во Оникс, 2005. - 199 с.

10. Ю.Бирман, Б. Я. Иммунодефициты у птиц Текст. / Б. Я. Бирман, И. Н. Громов. Минск : Бизнесофсет, 2001. - 140 с.

11. И.Болотов, В. М. Модифицированные пищевые красители растительного сырья: получение, состав, свойства и области применения Текст. : дис. . докт. техн. наук : 03.00.23 / Болотов В М. Воронеж, 2000. - 380 с.

12. Бриттон, Г. Биохимия природных пигментов Текст. : [пер. с англ.] / Г. Бриттон. М.: Мир, 1986. - 442 е., ил.

13. Букин, Ю. В. Бета-каротин — фактор здоровья Текст. / Ю. В. Букин. М., 1995.-27 с.

14. Вальдман, А. Р. Витамины в питании животных Текст. / А. Р. Вальдман, П. Ф. Сурай, И. А. Ионов, И. И. Сахатский. Харьков : РИП Оригинал, 1993.-423 с.

15. Ветеринарно-санитарная экспертиза и технология переработки птицы Текст. / под ред. П. В. Житенко, И. Г. Серегина, В. Е. Никитенко. М. : Аквариум ЛТД, 2001. - 352 с.

16. Владимиров, В. Л. Исследование каротиноидного состава желтка куриных яиц Текст. / В. Л. Владимиров, А. А. Шапошников, Д. В. Дейнека, С. И. [т.е. М.] Вострикова, В. И. Дейнека // Доклады РАСХН. 2005. - № 6. - С. 46-48.-ЮЗЫ 0869-6128.

17. Воскресенский О. Н. Биоантиоксиданты облигатный фактор питания Текст. / О. Н. Воскресенский, В. Н. Бобырев // Вопр. мед. химии. - 1992. -Т. 38, №4.-С. 21-26.

18. Гейсс, Ф. Основы тонкослойной хроматографии Текст. : в 2 т. : пер. с англ. / Ф. Гейсс. М., 1999. - Т. 1-2. - 404 с.

19. Георгиевский, В. И. Минеральное питание сельскохозяйственной птицы Текст. / В. И. Георгиевский. М. : Колос, 1970. — 327 с.

20. Георгиевский, В. И. Минеральное питание животных Текст. / В. И. Георгиевский, Б. Н. Анненков, В. Т. Самохин. М.: Колос, 1979. - 471 с.: ил.

21. Гильмутринов, Р. Я. Физиология крови Текст. / Р. Я. Гильмутринов, Р. 3. Курбанов. Казань : ТГГИ, 1999. - 184 с.

22. Головачёв, Д. Е. Использование кормовых каротиноидов в комбикормах для цыплят-бройлеров Текст. / Д. Е. Головачёв // Мат-лы науч.-пр. конф.- Сергиев Посад Иваново, 2002. - С. 120-123.

23. Головачёв, Д. Е. Об эффективности использования синтетических каротиноидов Текст. / Д. Е. Головачёв // Сельскохозяйственная биология.- 2003. № 4. - С. 47-51. - ISSN 0131-6397.

24. Головачёв, Д. Е. Пигменты в комбикормах для цыплят-бройлеров Текст. : дис. . канд. с.-х. наук : 06.02.02 / Головачёв Дмитрий Евгеньевич. -Сергиев Посад, 2003. 123 с.

25. Гольденберг, В. Водорастворимые антиоксиданты Текст. / В. Гольденберг // Птицеводство. 1997. - № 1. - С. 18-19. - ISSN 0033-3239.

26. Гомбоева, С. Б. Механизмы окисления ß-каротина и полиеновых жирных кислот Текст. / С. Б. Гомбоева, К. Б. Шумаев, Н. И. Гесслер, В. В. Панкин // Доклады РАН. 2001. - Т. 377, № 3. - С. 402-405.

27. Гомеостаз Текст. / под ред. П. Д. Горизонтова. М. : Медицина, 1981. -576 с.

28. ГОСТ Р 52121—2003. Яйца куриные пищевые. Технические условия Текст. -Введ. 2005-01-01. -М. : Изд-во стандартов, 2003. 8 с.

29. ГОСТ Р 52349-2005. Продукты пищевые. Продукты пищевые функциональные. Термины и определения Текст. Введ. 2006-07-01. -М. : Стандартинформ, 2006. - 4 с.

30. Гостищев, И. А. Хроматографический контроль качества яичной продукции: определение холестерола в желтке Текст. / И. А. Гостищев,

31. С. М. Вострикова, А. А. Шапошников, JI. А. Дейнека, В. И. Дейнека // Сорбционные и хроматографические процессы. Воронеж, 2009. - Т. 9, вып. 4. - С. 566-573.

32. Гудвин, Т. Сравнительная биохимия каротиноидов Текст. : Т. Гудвин. -М., 1964.-396 с. : ил.

33. Гудвин, Т. Введение в биохимию растений Текст. : в 2 т. : пер. с англ. : Т. 2. / Т. Гудвин, Э. Мерсер. М., 1986. - 312 с.

34. Давтян, А. Влияние травяной муки на воспроизводительные качества кур. Текст. / А. Давтян, В. Манукян // Птицеводство. 1987. - № 6. - С. 28-29.

35. Дадали, В. А. Процессы перекисного окисления в организме и природные антиоксиданты Текст. / В. А. Дадали // Введение в микронутриентологию. — Новосибирск, 1999. С. 240-263.

36. Дейнека, В. И. Карта хроматографического разделения и инкрементные зависимости в методе относительного анализа удерживания в ВЭЖХ Текст. / В. И. Дейнека // Журн. физ. химии. 2006. - Т. 80, № 3. - С. 511-516.-ISSN 0044-4537.

37. Дейнека, JI. А. Пищевой дизайн: целенаправленное изменение накопления ксантофиллов в желтке куриных яиц Текст. / JI. А. Дейнека, А. А. Шапошников, Н. А. Шаркунова, Т. С. Гусева, В. И. Дейнека // Белгородский агромир. 2006. - № 6. - С. 18-19.

38. Джапаридзе, Г. Путь к улучшению качества Карофилл Текст. / Г. Джапаридзе // Птицеводство. - 1998. - № 5. - С. 25-26. - ISSN 0033-3239.

39. Душейко, А. А. Витамин А: Обмен и функция Текст. / А. А. Душейко. -Киев : Наукова думка, 1989. 288 с.

40. Дюкарев, В. В. Кормовые добавки в рационах животных Текст. / В. В. Дюкарев, А. Г. Ключковский, И. В. Дюкар. М., 1985. - 280 с.

41. Дюмаев, К. М. Антиоксиданты в профилактике и терапии и патологий ЦНС Текст. / К. М. Дюмаев, Т. А. Воронина, Л. Д. Смирнов. М. : Инст-т биомед. химии РАМН, 1995. - 272 с.

42. Егоров, И. Научные аспекты питания птицы Текст. / И. Егоров // Птицеводство. 2002. - № 1. - С. 18-21. - ISSN 0033-3239.

43. Егоров, И. Современные подходы к кормлению птицы Текст. / И. Егоров // Животноводство России. 2003. -№ 12. - С.10-12.

44. Епимахов, Н. Качество яиц повышается Текст. / Н. Епимахов. // Птицеводство. 1988. - № 4. - С.22-23. - ISSN 0033-3239.

45. Еремеев, Г. Н. О взаимодействии между витамином А и ксантофиллами в организме птицы Текст. / Г. Н. Еремеев // Науч. тр. Омского с-х. ин-та. -Омск, 1973.-Т. 109.-С. 98-102.

46. Ильичев, В. Д. Общая орнитология Текст. / В. Д. Ильичев, Н. Н. Карташев, И. А. Шилов. М., 1982. - 464 с.

47. Индустриальная технология производства яиц. — М. : Россельхозиздат, 1984.-252 с.

48. Использование промышленных препаратов каротиноидов фирмы BASF в кормлении птицы: Методические рекомендации Текст. / под общ. ред. В. И. Фисинина, Ш. А. Имангулова ; Всерос. н.-и. и* технол. ин-т птицеводства; Сергиев Посад, 2002. 13 с.

49. Капитанов, А. Б. Каротиноиды как антиоксидантные модуляторы клеточного метаболизма Текст. / А. Б. Капитанов, А. М. Пименов // Успехи совр. биологии. 1996. - Т. 116, № 1-2. - С. 176-193. - ISSN 00421324.

50. Карасёва, Ж. В. Совершенствование методов контроля качества яиц в промышленных птицеводческих хозяйствах Текст. : дис. . канд. с.-х. наук : 06.02.04 / Карасёва Жанна Владимировна. Ленинград-Пушкин, 1984.-180 с.

51. Карнаухов, В. Н. Биологические функции каротиноидов Текст. / В. Н. Карнаухов. М. : Наука, 1988. - 240 с. - ISBN 5-02-003935-7

52. Карнаухов, В. Н. Функции каротиноидов в клетках животных Текст. / В. Н. Карнаухов. М. : Наука, 1973.- 104 с.

53. Колесниченко, Е. Ю. Обмен веществ, резистентность и продуктивные качества кур кросса «Иза Браун» при скармливании сухого кукурузного глютена Текст. : дис. . канд. биол. наук : 03.00.13 / Колесниченко Еленал

54. Юрьевна. Белгород, 2005. - 111 с.

55. Кондрахин, И. П. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: i

56. Справочное издание Текст. / И. П. Кондрахин, Н. В. Кудрянов, А. Г.

57. Малахов и др. М. : Агропромиздат, 1985. - 287 с.

58. Кочиш, И. И. Птицеводство Текст. / И. И. Кочиш, М. Г. Петраш, С. Б. Смирнов. М.: Колос С, 2004. - 407 с. : ил.

59. Кощаев, А. Г. Биотехнология производства и применениефункциональных кормовых добавок для птицы Текст. : автореф. дис. . докт. биол. наук : защищена 26.12.2008 / А. Г. Кощаев. Краснодар, 2008. -45 с.f

60. Красина, Н. Б. Новые продукты для функционального питания Текст. / Н. Б. Красина, Л. В. Мушта, А. В. Лозовой // Успехи современного естествознания.-2005.-№5.-С. 53-55.-ISSN 1681-7494.

61. Кретович, В. Л. Биохимия растений Текст. / В. Л. Кретович. 2-е изд. -М., 1986.

62. Кретович, В. Л. Основы биохимии растений Текст. / В. Л. Кретович. 5-е изд. — М., 1971.-464 с.

63. Крюков, В. Нормирование жирорастворимых витаминов Текст. / В.

64. Крюков, П. Сурай, И. Ионов // Птицеводство. 1981. - № 2. - С. 23-25. -ISSN 0033-3239.

65. Крюков, В. Нормирование витамина А Текст. / В. Крюков, Т. Околелова, И. Егоров // Птицеводство. 1981. - № 2. - С. 23-25. - ISSN 0033-3239.

66. Кудрицкая, С. Е. Каротиноиды плодов и ягод Текст. / С. Е. Кудрицкая. -Киев : Выща школа, 1990. 211 с. - ISBN 5-11-002032-9.

67. Кузнецов, А. Равнение на синтетику: кормовые добавки (синтетические ксантофиллы) для птицефабрик Текст.' / А. Кузнецов // Агробизнес. -2005. -№ 10. -С. 44 -46.

68. Кузнецова, Т. С. Продуктивные и физиолого-биохимические показатели-яичных кур при использовании ячменно-пшеничных кормов Текст. : автореф. дис. . канд. с.-х. наук / Т. С. Кузнецова. Гродно, 2004.

69. Кузьминова, Е. В. Фармакология и применение каротиноидов в ветеринарии и животноводстве Текст. : автореф. . докт. вет. наук / Е. В. Кузьминова. Краснодар, 2007. - 46 с.

70. Ладыгин, В. Г. Биосинтез каротиноидов в пластидах растений Текст. / В. Г. Ладыгин // Биохимия. 2000. - Т. 65, № 10. - С. 1317-1333. - ISSN 0320-9725.

71. Ладыгин, В. Г. Биосинтез каротиноидов в хлоропластах водорослей и высших растений Текст. / В. Г. Ладыгин // Физиология растений. 2000. -Т. 47. С. 904-923. - ISSN 0015-3303.

72. Ладыгин, В. Г. Современные представления о функциональной роли каротиноидов в хлоропластах эукариот Текст. / В. Г. Ладыгин, Г. Н.

73. Ширшикова // Журнал общей биологи. 2006. - Т. 67, № 3. - С. 163-189.- ISSN 0044-4596.

74. Лакин, Г. Ф. Биометрия Текст. / Г. Ф. Лакин. М. : Высш. шк., 1990. -352 с. : ил. - ISBN 5-06-000471-6.

75. Лозовой, В. И. Влияние каротинсодержащих препаратов на яичную продуктивность и обменные процессы у кур-несушек Текст. : дис: . канд. с.-х. наук : 06.02.02 / Лозовой Виктор Иванович. — Ставрополь, 2005.- 127 с.

76. Манукян, В. Травяная мука в рационе кур-несушек Текст. / В. Манукян // Птицеводство. 1986. - № 5. - С. 31. - ISSN 0033-3239.

77. Меерсон, Ф. 3. Адаптация, стресс и профилактика Текст. / Ф. 3. Меерсон //Вестник АМН СССР. 1984. -№ 4. С. 45-51.

78. Меньшикова, Е. Б. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов Текст. / Е. Б. Меньшикова, Н. К. Зенков // Успехи современной биологии. 1993. - Т. 113, № 4. - С. 442-455. - ISSN 0042-1324.

79. Мерзленко, Р. Каротинсодержащие препараты для птицы Текст. / Р. Мерзленко, Л. Резниченко, А. Мерзленко // Птицеводство. — 2004. — № 2. -С. 26.-ISSN 0033-3239.

80. Метревели, Т. В. Биохимия животных Текст. / Т. В. Метревели ; под ред. Н. С. Шевелева. СПб. : Изд-во Лань, 2005. - 296 с. : ил. - ISBN 5-81140579-0.

81. Митюшников, В. М. Естественная резистентность сельскохозяйственной птицы Текст. / В. М. Митюшников. Калуга : Россельхоиздат, 1985. - 160 с.

82. Надиров Н.К. Токоферолы (витамины группы Е) биологически активные вещества Текст. / Надиров Н.К. // Новое в жизни, науке и технике. Сер. Химия. - М. : Знание, 1981. - № 3. - 59 с.

83. Немцова, Е. Р. Принципы и методологические аспекты разработки и изучения антиоксидантных средств для онкологической клиники Текст. : дис. . докт. биол. наук : 14.00.14 / Немцова Елена Романовна. М., 2006.- 200 с.

84. Нечаев, А. П. Пищевые добавки Текст. / А. П. Нечаев, А. А. Кочеткова,

85. A. Н. Зайцев. М. : Колос, Колос-Пресс, 2002. - 256 с.

86. Никитюк, В. Г. Каротиноиды и их значение в живой природе и для человека Текст. / В. Г. Никитюк. — Харьков. : Гос. науч. центр лек-х ср-в.- 1974.- 150 с.

87. Овчинников, Ю. А. Биоорганическая химия Текст. / Ю. А. Овчинников.

88. М. : Просвещение, 1987. 815 с. : ил. 97.Околелова, Т. М. Актуальные проблемы применения биологически активных веществ и * производства премиксов Текст. / Т. М. Околелова, А.

89. Османян, А. Повышение уровня йода в яйцах кур Текст. / А. Османян, А. Иванов, Е. Козлобаева // Птицеводство. 2003. - № 2. - С. 23. - ISSN 0033-3239.

90. Островский, М. А. Клиническая физиология зрения Текст. / М. А. Островский. Москва, 2002. - С. 38-39.

91. Племенков, В. В. Введение в химию природных соединений Текст. / В. В. Племенков. Казань, 2001. - 376 с.

92. Полтавская, Т. В. Влияние обеспеченности каротиноидами организма кур-несушек на перекисное окисление липидов Текст. / Т. В. Полтавская, П. Ф. Сурай // Птахівництво : Борки. 2001. - Вып. 50. - С. 130-136.

93. Промышленное птицеводство Текст. : сост.: Ф. И. Фисинин, Г. А. Тардатьян. -М. : Колос, 1978. 399 с.

94. Розен В. Б. Половая дифференцировка функций печени Текст. / В. Б. Розен, Г. Д. Матарадзе, О. В. Смирнова и др. -М.: Медицина, 1991. 336 с.

95. Романов, А. Л. Птичье яйцо Текст. / А. Л. Романов, А. И. Романова. -М. : Птицепромиздат, 1959. 156 с.

96. Романов, В. С. Полноценное кормление кур-несушек Текст. / В. С. Романов. Омск, 1999. - 165 с.

97. Рудаков, О. Б. Хроматографический способ идентификации натуральных и искусственных каротиноидов в пищевых продуктах Текст. / О. Б. Рудаков, В. М. Болотов // Хранение и перераб. сельхозсырья. -1998. № 5. - С.26—27. - ISSN 2072-9669.

98. Рудаков, О. Б. Хроматографическое определение натуральных и искусственных каротиноидов в пищевых продуктах Текст. / О. Б. Рудаков, Л. И. Перикова, В. М. Болотов, Г. А. Сташина // Вестник ВГУ. -2004. № 1. - С. 78-84. - ISSN 1609-0675.

99. Садомов, И. Препарат каротина Текст. / И. С ад омов, И. Хохлова // Птицеводство. 1993. - № 5. - С.19-21. - ISSN 0033-3239.

100. Саксонова, Е. О. Лютеин и зеаксантин основные компоненты антиоксидантной системы защиты глаза Текст. / Е. О. Саксонова // РМЖ. - 2005. - Т. 13, № 2. - С. 124-129. - ISSN 1382-4368.

101. Сегал, И. Н. Практическая эмбриология сельскохозяйственных птиц Текст. / И. Н. Сегал. Белгород : БГСХА, 2004. - 95 с.

102. Сергеев, А. В. Медико-биологические аспекты каротиноидов Текст. / А. В. Сергеев, Л. А. Вакулова, М. Я. Шашкина, Т. А. Жидкова // Вопросы медицинской химии. 1992. - Т. 38, № 6. - С. 25-27.

103. Сергеева, А. Качество скорлупы и выводимость яиц- Текст.; / А. Сергеева // Птицеводство. 1986. - № 3. - С. 24-25. - ISSN 0033-3239.

104. Сергеева; Т. М. Контроль качества яиц Текст. / Т. М. Сергеева М. : Россельхозиздат, 1984.-72 с.

105. Середа, Т. И. Перспективные направления научных исследований молодых ученых и специалистов Урала и Сибири Текст. / Т. И. Середа, Л. М. Разумовская, Д. А. Прохоров // М-лы VI научно-практич. конф. Троицк. 2002. С.48-40.

106. Соболь, Н. Новая генетика требует современных подходов к птице Текст. / Н. Соболь // Животноводство России; 2007. - С. 22-26.

107. Спиричев, В. Б. Биологическая роль жирорастворимых витаминов Текст. / В. Б. Спиричев, И. Я. Конь // Итоги науки и техники. Сер. Физиология человека и животных, 1989. — № 37. С. 1-225.

108. Степаненко К.В. Рост, развитие ремонтного молодняка и яичная продуктивность уток-несушек при использовании минерально-белковой муки из дрейсены Текст. : автореф. дис. . канд. с.-х. наук. / К.В. Степаненко. п. Персиановский, 2007. - 21 с.

109. Сурухи, М. Обогащённое яйцо как источник йода и селена Текст. / М. Сурухи // Комбикорма. 2004. - № 3. - С. 57. - ISSN 0235-2605.

110. Сурай, П. A-витаминная обеспеченность птицы и её контроль Текст. / П. Сурай, И. Ионов // Птицеводство. 1988. - № 1. - С. 26-28. - ISSN 0033-3239.

111. Сухарев, Ю. Пути снижения боя на птицефабриках Текст. / Ю. Сухарев, А. Кива // Птицеводство. 1980. - № 2. - С. 39-40. - ISSN 0033-3239.

112. Терентьев, А. Ю. Продуктивность и качество яиц кур-несушек при использовании в их рационах комплекса водорастворимых витаминов и янтарной кислоты Текст. : дис. . канд. с.-х. наук : 06.02.02 / Терентьев Алексей Юрьевич. Чебоксары, 2004. - 113 с. •

113. Трофимова, Н. Н. Каротиноиды. Функциональная роль каротиноидов жёлтого пятна сетчатки глаза Текст. / Н. Н. Трофимова, П. П. Зак, М. А. Островский // Сенсорные системы. 2003. - Т. 17, №3. - С. 198-208. -ISSN 0235-0092.

114. Тутельян, В. А. Стратегия разработки, применения и оценки эффективности биологически активных добавок к пище Текст. / В. А. Тутельян // Вопросы питания. 1996. - № 6. - С. 3-11. - ISSN 0042-8833.

115. Феофилова, Е. П. Каротиноиды грибов: биологические функции и практическое использование Текст. / Е. П. Феофилова // ПБМ: 1994. -Вып. 30, № 2. - С.181—195. - ISSN 0555-1099.

116. Феофилова, Е. П. Пигменты микроорганизмов Текст. / Е. П. Феофилова. М. : Наука, 1974. - 218 с.

117. Фисинин, В. Птицеводство дало мяса больше, чем две отрасли вместе взятые Текст. / В. Фисинин // Животноводство России. 2007. - С. 2-4.

118. Фисинин, В. И. Тенденции в кормлении сельскохозяйственной птицы. Комбикормовая промышленность Текст. / В. И. Фисинин. М., 1998. - С. 62-64.

119. Фисинин, В. И. Каротиноиды в пищевых яйцах: проблемы и решения Текст. / В. И. Фисинин, А. J1. Штеле // Птица и птицепродукты. 2008. -№ 5. - С. 58-60. - ISSN 2073-4999.

120. Фисинин, В. И. Каротиноиды в пищевых яйцах: проблемы и решения Текст. / В. И. Фисинин, А. Л. Штеле // Птица и птицепродукты. 2008а. -№ 6. - С. 50-52. - ISSN 2073-4999.

121. Фисинин, В. И. Кормление сельскохозяйственной птицы Текст. / В. И. Фисинин, И. А. Егоров, Т. М. Околелова, Ш. А. Имангулов. Сергиев Посад : ВНИТИП, 2000. - 375 с.

122. Хамидуллин, Т. Н. Научные основы повышения продуктивности, птицы и качества продукции птицеводства Текст. : дис. . докт. с.-х. наук : 06.02.04 / Хамидуллин Талгат Насибуллович. Сергиев Посад, 2005. - 268 с.

123. Харламова, О. А. Натуральные пищевые красители Текст. / О. А. Харламова, Б. В. Кафка. М.: Пищевая промышленность, 1979. — 19Г с.

124. Хеннинг, А. Минеральные вещества, витамины, биостимуляторы в кормлении сельскохозяйственных животных Текст. / А. Хеннинг ; пер. с нем. И.С. Гельман ; под ред. А. JI. Падучевой, Ю. И. Раецкой. М : Колос, 1976.-560 с.

125. Хернандез, Х.-М. Яичная продукция: что думают о ней потребители Текст. / Х.-М. Хернандез, М. Унал, А. Горнеев // Комбикорма. 2008. -№ 4. - С.73-74. - ISSN 0235-2605.

126. Холодова, Ю. Д. Липопротеины крови Текст. / Ю. Д. Холодова, П. П. Чаяло. Киев : Наукова думка, 1990. - 208 с.

127. Хорбаньчук, Я. О. Функциональные продукты питания животного происхождения и их значение для здоровья людей Текст.' / Я. О. Хорбаньчук, А. Юзвик, Ц. Томасик, К. Хорбаньчук, Е. Шиманская, Д. Сивец // Птица и птицепродукты. 2009. - № 3. - С. 15-17.

128. Царенко, П. Качество яиц сегодня: хранение, инкубация Текст. / П. Царенко, Л. Васильева, Н. Рыбалова // Птицеводство. 1997. - № 3. - С. 9-11.-ISSN 0033-3239.

129. Царенко, П. П. Повышение качества продукции птицеводства: пищевые и инкубационные яйца Текст. / П. П. Царенко. JI. : Агропромиздат., Ленингр. отд-ние, - 1988. - 240 с.

130. Чернышёв, Н. И. Компоненты премиксов Текст. / Н. И. Чернышёв, И. Г. Панин. Воронеж, 2003. - 104 с.

131. Шалыгин, В. В. Каротиноиды возбудимых мембран при генерировании потенциалов действия и в состоянии покоя Текст. / В. В. Шалыгин, Г. В. Максимов, Т. А. Чохарадзе // Биофизика. 1994. - Т. 39, № 1. - С. 63-67. -ISSN 0006-3029.

132. Шапошников, А. А. Биологическая ценность добавления каротиноидов в корм кур-несушек Текст. / А. А. Шапошников, С. М. Вострикова, Т. С. Гусева // Ветеринария и кормление. 2007. - № 6. - С. 11. - ISSN 1814-9588.

133. Шашкина, М. Я. Биодоступность каротиноидов Текст. / М. Я. Шашкина, П. Н. Шашкин, А. В. Сергеев // Вопросы медицинской химии. -1999.- №2.-С. 119-126.

134. Шаршунов, В. А. Комбикорма и кормовые добавки : справочное пособие Текст. / В. А. Шаршунов, И. А. Понков, Ю. А. Пономаренко и др. — Минск: Экоперспектива, 2002. 440 с.

135. Шилина, Н. М. Роль пищевых веществ в функционировании системы, . антиоксидантной защиты организма Текст. / Н. М. Шилина, И. Я. Конь // Вопросы детской диетологии. 2003. - Т. 1, № 4. - С. 53-57. - ISSN 17275784.

136. Штеле, А. Препараты поставщики витаминов А и Е в пищевые яйца Текст. / А. Штеле, Е. Борисова, Н. Колобашкина // Птицеводство. - 2004. -№ 3. - С. 42-43. - ISSN 0033-3239.

137. Эйдригевич, Е. В. Интерьер сельскохозяйственных животных Текст. / Е. В. Эйдригевич, В. В. Раевская. М., 1978. - 255 с.

138. Adams, С. Natural pigments for chickens Text. / С. Adams // World Poultry, 1985. Vol. 5, № 7. - P. 36-37.

139. Afzal, A. Photoprotective Carotenoids Lutein and Zeaxantin: Their Role in AMD Text. / A. Afzal, M. Afzal // Current Nutrition & Food Science. 2008. -Vol. 4, №2.-P. 127-134.

140. Ahman, B. The stability of |3-carotene in leaf concentrate and in products containing Text. / B. Ahman // Proc. of Fight Inter. Congr. on leaf Protein Research "Leaf Pro96". In 4 vol. Ed. N. 1. Proydak, Rostov-on-Don, 1996. -Vol. 2.-P. 113-118.

141. Alaluf, S. Dietary Carotenoids contribute to normal human skin color and UV photosensitivity Text. / S. Alaluf, U. Heinrich, W. Stahl, H. Tronnier, S. Wiseman // J. of Nutrition. 2002. - Vol. 132. - P. 399-403.

142. Alam, A. U. Petals of Aztec Marigold, Tagetes erecta, as a Source of Pigment for Avian Species Text. / A. U. Alam, C. R. Creger, J. R. Couch // J. Food Sci. 1968. - Vol. 33. - P. 635-636.

143. Alpers, J. R. Serum carotenoids and age-related maculardegeneration Text. / J. R. Alpers, M. S. R. Gorla, L. J. Singerman // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. -1995. Vol. 36 (Suppl.). - S. 9.

144. Awad, A. C. Composition and Functional Properties of Cholesterol Reduced Egg Yolk Text. / A. C. Awad, M. R. Bennink, D. M. Smith // Poultry Sci. -1997. Vol. 76. - P. 649-653.

145. Azuine, M. A. Antimutagenic and anticarcinogenic effects of carotenoids and dietary palm oil Text. / M. A. Azuine, U. C. Goswam, J. S. Kagal, S. V. Bhile /Nutr. Cancer. 1992. - Vol. 173. - P. 287-295.

146. Barnett, J. A. Yeasts: Characteristics and Identification Text. / J. A. Barnett, R. W. Payne, D. Varrow // Cambridge Univ. Press. 1983. - P. 509.

147. Barton, I. Studies of Egg Yolk Pigment. 2 Effect of Ethoxyquin on Xanthophylls Text. / I. Barton, S. Bornstein // Poultry Sci. 1966. - Vol. 45, N2.-P. 297-305.

148. Belyavin, C. The value of natural products for yolk pigmentation Text. / C. Belyavin, T. Maraugos // Poultry. 1988. - Vol. 4. - P. 11-13.

149. Bendich, A. Carotenoids and the immune response Text. / A. Bendich // J. Nutr.- 1989. -Vol. 119.-P. 112-115.

150. Bernstein, P. S. Retinal tubulin binds macular carotenoids. Text. / P. S. Bernstein, N. A. Balashov, E. D. Tsong, R. R. Rando // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1997. -N 38. - P. 167-175.

151. Beyer, P. Dehydrogenation and cyclization reactionsin carotene biosynthesis Text. / P. Beyer, H. Kleining // Biol. Role Plant Lipids: Proc. 8th Int. Symp., Budapesht, July 25-28, 1988. Budapesht, 1989. - P. 287-292.

152. Blanch, A. Getting the colour of yolk and skin right Text. / A. Blanch //

153. Misset World Poultry. 1999. - Vol. 15, № 9. - P. 32-33.

154. Bone, R. A. Analysis of the macular pigment by HPLC: retinal distribution and age study. Text. / R. A. Bone, J. T. Landrum, L. Fernandez, S. L. Tarsis // Invest. Ophthalmol: Vis. Sei. 1988. - Vol. 29. - P. 843-849.

155. Bone, R. A. Distribution of Lutein and Zeaxanthin Stereoisomers in the Human Retina Text. / R. A. Bone, J. T. Landrum, L. M. Friedes, C. M. Gomez, M. D. Kilburn, E. Menedez, I. Vidal, W. Wang // Exper. Eye Res. -1997.-Vol. 64.-P. 211-218.

156. Bone, R. A. Macular pigment in donor eyes with and without AMD: A case-control study Text. / R. A. Bone, J. T. Landrum, S. T." Mayne, C. M. Gomez, S. E. Tibor, E. E. Twaroska // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 2001. - Vol. 42. -P. 235-240.

157. Bone, R. A. Macular pigment response to a supplement containing meso-zeaxanthin, lutein and zeaxanthin Text. / R. A. Bone, J. T. Landrum, Y. Cao, A. N. Howard, F. Alvarez-Calderon // Nutr. Metabol. 2007. - Vol. 4. - P. 12-19.

158. Breithaupt, D. E. Modern application of xanthophylls in animal feeding a review Text. / D. E. Breithaupt // Trends in Food Science & Technology. -2007.-Vol. 18, Issue 10.-P. 501-506.

159. Breithaupt, D.E. Xanthophylls in Poultry Feeding Text. / In Carotenoids. Vol. 4: Natural Functions Ch. 13. Birkhauser Verlag : Basel, 2008. P. 255-264.

160. Britton, G. Carotenoids Chemistry and Biology Text. / G. Britton ; Eds. N. I. Krisky, M. M. Mathews-Roth, Taylor R.F.N.Y. : Plenum Press, 1990. P. 167-184.

161. Britton, G. Structure and properties of carotenoids in relation to function Text. / G. Britton // FASEB J. 1995. - № 9. - P. 1551-1558.

162. Brody, S. S. Distribution of chlorophylls, carotenoids and their isomers in the complexes of photosystem II Text. / S. S. Brody, Y. Lemoin // Physiol, plants.- 1989.-Vol. 79, N3.-P. 104.

163. Brown, L. A prospeetive study carotenoid intake and risk of cataract extraction in US men. Text. / L. Brown, E. B. Rimm, J. M. Seddon, E. L. Giovannucci, L. Chasen-Taber, O. Spiegelman et al. // Am. J. Clin. Nutr. -1999. Vol. 70, № 4. - P. 517-524.

164. Burton, G. W.,ß-carotene: An unusual type of lipid antioxidant Text. / G. W. Burton, K. U. Ingold // Science. 1984. - Vol. 224. - P. 569-573.

165. Canizares-Villanueva, R. O. Fuentes microbars de pigments Text. / R. O. Canizares-Villanueva, E. Rios-Leal, R. R. Olvera, N. T. Panse // Re. latinoameric. Microbial. 1998. - Vol. 40, № 1-2. - P. 87-107.

166. Carotenoids Text. / ed. by O. Isler [u. a.], Basel Stuttg, 1971.

167. Carroll, R. M. Evaluation of a high-performance liquid chromatography method for isolation and of cholesterol and quantitation of cholesterol and cholesteryl esters Text. / R. M. Carroll, L. L. Rudel // J. Lipid Res. 1981. -Vol. 22.-P. 359-363.

168. Cerda-Olmedo E.F. Biotechnology of Vitamins, Pigments and Growth factors Text. / Chap. 3. Ed. E. J. Vandamme L. : Elsevier Appl. Sei., 1989. P. 27-42.

169. Chamovitz, D. Molecular analysis of carotenoid biosynthesis Pap:. Keystone Symp. Mol. and Cell Biol., Apr. 3-9, 1992/ [Text] / D. Chamovitz, I. Pecker, G. Sandmann, I. Hirchberg // J. Cell Biochem. 1992. - Suppl. 16 F. -P. 230.

170. Chen, Z.-Y. Cholesterol-lowering nutraceuticals and functional foods Text. / Z.-Y. Chen, R. Jiao, K. Y. Ma // J. Agric. Food Chem. 2008. - Vol. 56. - P. 8761-8773.

171. Chrong, E.-W.-I. Dietary antioxidants and primary prevention of age related macular degeneration: Systemic review and meta-analysis Text. / E.-W.-I.

172. Chrong, T.-Y. Wong, A.-J. Kreis, J.-A. Simpson, R.-H. Guymer, // Br. Med. J. 2007. - Vol. 335. - P. 755-759.

173. Ciulla, T. A. Determinants of macular pigment density in adult volunteers in the Indianapolis area Text. / T. A. Ciulla, J. Curran-Celentano, D. Cooper, et al. //Invest Ophthalmol. Vis. Sei. 2001. -N 108. - P. 730-737.

174. Ciulla, T. A. Macular pigment density and aging, assessed in the normal elderly and those with cataracts and age-related macular degeneration Text. / T. A. Ciulla, B. R. Hammond Jr. // Am. J. Ophthalmol. 2004. - Vol. 138. - P. 582-587.

175. Clinton, S. K. Diet, Nutrition and Prostate Cancer Text. / S. K. Clinton, E. Giovannucci. Ann. Rev. Nutr. - 1998. - Vol. 18. - P. 412-440.

176. Clinton, S. K. The dietary antioxidant network and prostate carcinoma Text. / S. K. Clinton // Cancer. 1999. - Vol. 86. - P. 1629-1792.

177. Cuca, G. M. Preliminary studies on triticale in diets for laying hens Text. / G. M. Cuca, G. E. Avila // Poultry Sc. 1973. - Vol. 1. - P. 52.

178. Culton, T. J. Effect on certain protein supplements in inhibiting pigment deposition in growing chicks Text. / T. J. Culton, H. R. Bird // Poultry Sc. -1991.-Vol. 20.-P. 432.

179. Damm, I. Multiple Function of ß-carotene in photosistem I Text. / I. Damm, D. Steinmetz, L. Grimme, B. Host // Physiol, plant. 1989. - Vol. 76, N 3, Pt. 2.-P. 85.

180. Davies, B. H. Carotenoid metabolism in animals: a biochemist's view Text. / B. H. Davies // Pure & Appi. Chem. 1985. - Vol. 57, № 5. - P. 679-684.

181. Davies, B. H. Carotenoids. In: Chemistry and biochemistry of plant pigments Text. / B. H. Davies ; ed. T.W. Goodwin. London : New York and San Francisco : Academic Press, 1976 - 2nd edition, Vol. 2. - P. 38.

182. Davison, A. Putative anticarcinogenic action of carotenoids: nutritional implication Text. / A. Davison, E. Ronssean, B. Dunn // Can. J. Phisiol. Pharmacol. 1993. - Vol. 71. - P. 732-745.

183. Delgado-Vargas, F. Effects of Sunlight Illumination of Marigold Flower Meals on Egg Yolk Pigmentation Text. / F. Delgado-Vargas, O. Paredes-López, E. Avila-González // J. Agrie. Food Chem. 1998. - Vol. 46. - P. 698-706.

184. Demming-Adams, B. Carotenoids and photoprotection in plants: A role for the xanthiphill zeaxantin Text. / B. Demming-Adams // Biochem et Biophys. Acta Bioenergy. 1990. - Vol. 1020, N 4754. - P. 1106.

185. Downham, A. Colouring our foods in the last and next millennium Text. / A. Downham, P. Collins // Int. J. of Food Sei. & Technol: 2001. - Vol. 35, Issue l.-P. 5-22.

186. Edge, R. The carotenoids as antioxidants a review. Text. / R. Edge; D. J. McGarvey, T. G. Truscott // J. Photochem. Photobiol. B: Biology. - 1997. -Vol. 41.-P. 189-200.

187. Ef-Tinay, A. U. Oxidation of ß-carotene Text. / A. U. Ef-Tinay, C. O. Chiehester // J. Org. Chem. 1989. - Vol. 35. - P. 2290-2293.

188. Elkin, R. G. Reduction of the cholesterol content of eggs by the oral administration of lovastatin to laying henst Text. / R. G. Elkin, J. C. Rogler // J. Agrie. Food Chem. 1990. - Vol. 38. - P. 1635-1641.

189. Fry, J. L. Yolk color, candled egg grade and xantophylt availability from dietary natural pigmenting ingredients Text. / J. L. Fry, R. H. Harms // Poultry Sc. 1985.-Vol. 54, №4.-P. 1094-1101.

190. Gerster, H. Anticarcinogenic effect of common carotenoids Text. / H. Gerster // Int. J. Vitam. Nutr. Res. 1993. - Vol. 63. - P. 93-121.

191. Goodman, D. S. Tissue distribution and metabolism of newly absorbed vitamin A in the rat Text. / D. S. Goodman, H. S. Huang, T. Shiratori // J. Lipid Res. 1965. - Vol. 6. - S. 390-395.

192. Goodwin, T. W. Chemistry and Biochemistry of plant pigments Text. / T. W. Goodwin ; Ed. by T.W. Goodwin. N. 4 Acad. Press, 1976. - Vol. 1. - P. 230-240.

193. Goodwin, T. W. The Biochemistry of carotenoids Text. / T.W. Goodwin. -Chapman and Hall, 1980. Vol. 1. - P. 377.

194. Goodwin, T.W. The Biochemistry of carotenoids Text. / T.W. Goodwin. -Chapman and Hall, 1980. Vol. 2. - P. 224.

195. Goodwin, T.W. The Biochemistry of the carotenoids Text. / Vol. 1. Plants. L. London : Acad. Press, 1980. P. 75-79.

196. Goodwin, T.W. The Biochemistyry of the carotenoids Text. / Vol. II Animals. Chapman and Hall ; London-New York, 1984. P. 64-96.

197. Guenthner, E. Pigmentation of egg yolk by xanthophylls from corn, marigold, alfalfa and synthetic sources Text. / E. Guenthner // Poultry Sc. -1983. Vol. 52, № 5. - P. 1787-1798.

198. Halliwel, B. The characterization* of antioxidants Text. / B. Halliwel, R. Aeschbach, O. I. Auroma // Fd. Chem. Toxic. 1995. - Vol. 33; № 7. - P. 601617.

199. Halliwel, B. Free radicals in biology and medicine Text. / B. Halliwel, T. M. C. Guttendge. Oxford Clarendon Press, 1985. - P. 1-332.

200. Hammond B. R. Jr. CFF thresholds: relation to macular pigment optical density Text. / B. R. Hammond Jr., B. R. Wooten // Ophthalmic and Physiological Optics. 2005. - Vol. 25, Issue 4. - P. 315-319.

201. Hammond, B. R. Dietary modification of human macular pigment density.

202. Text. / B. R. Hammond, E. J. Johnson, R. M. Russell, et al. // Invest Ophthalmol. Vis. Sei. 1997. - Vol. 38. - P. 1795-1801.

203. Handelman, G. J. High-resolution analysis of carotenoids in human plasma by high-performance liquid chromatography Text. / G. J. Handelman, B. Shen, N. I. Krinsky//Methods Enzymol. 1991. - Vol. 213. - P. 336-346.

204. Hankinson, S. E. Nutrient intake and cataract extraction in women: a prospective study Text. / S. E. Hankinson, M. J. Stampfer, J. M. Seddon, et al. // B.M.J. 1992. - Vol.305. - P. 335-339.

205. Hargitai, R. Antioxidants in the egg yolk of a wild passerine: differences between breeding seasons Text. / R. Hargitai, Z. Matus, G. Hegyi, G. Michl, G. Töth, J. Török // Comp. Biochem. Physioli B Biochem Mol. Biol., 2006. -Vol. 143, №2.-P. 145-152.

206. Harrison, D. M. The biosynthesis of triterpenoids, steroids and carotenoids Text. / D. M. Harrison // Natur. Prod. Rept. 1988. - Vol. 5, N 4. - P. 387-415.

207. Härtel, H. Evaluation of the dietary interaction of calcium and phosphorus in the high producing laying hen Text. / H. Härtel //Brit. Poultry Sc. 1990. -Vol. 31, №3.-P. 473-494.

208. Hartmaan, M. Untersuchungen über die Refruchtungsstoffe der Regenbogenforelle Text. / M. Hartmaan, F. Meden, R. Kuhn, H. Bielig // Z. Naturforstch. 1947. - Bd. 2, H 9/10. - P. 330-343.

209. Hartmann, C. One generation divergent selection on large and small yolk proportions in a White Leghorn line Text. / C. Hartmann, K. Johnsson, E. Strandberg // British Poultry Sc. 2000. - Vol. 41. - P. 280-286.

210. Hartmann, C. The hen's egg yolk: a source of biologically active substances Text. / C. Hartmann, M. Wilhelmson // Poultry Sc. 2001. - Vol. 57, № 1. -P. 13-28.

211. Hencken, H. Chemical and physiological behavior of feed carotenoids and their effects on pigmentation Text. / H. Hencken // Poultry Sei. 1992. - Vol. 71.-P. 711-717.

212. Hinton, C. F. Influence of xanthophyll-free pullet grower diet on subsequent egg yolk pigmentation Text. / C. F. Hinton, J. L. Fry, R. H. Harms // Poultry Sei. 1974. - Vol. 53. - P. 223-226.

213. Jacques, P. F. Micronutrients and age-related cataracts Text. / P. F. Jacques, A. Taylor ; eds. A. Bendich, C. E. Butterworth Jr. New York : Marcel Dekker, - 1991.-P. 359-379.

214. Johnson, E. J. A biological role of lutein Text. / E. J. Johnson // Food Rev. Int. 2004. - Vol. 20. - P. 1-16.

215. Johnson, E. J. The Role of Lutein in Disease Prevention Text. / E. J. Johnson, PhD J. Mayer // Nutrition in Clinical Care. 2008. - Vol. 3, Issue 5. -P. 289-296.

216. Johnson, E. J. The role of carotenoids in human health Text. / E. J. Johnson // Nutr. Clin. Care. 2002. - Vol. 5. - P. 56-65.

217. Jyonouchi, H. Effects of carotenoids on in vitro immunoglobulin production by peripheral blood monocular cells: Astaxantin, a carotenoid without vitamin

218. A activity, enhances in vitro immunoglobulin production to response to a dependent stimulant and antigen Text. / H. Jyonouchi, S. Sun, M. Gross // Nutr. Cancer. 1995. - Vol. 23. - P. 171-183.

219. Karrer, P. Carotenoids Text. / P. Karrer, E. Jucker. Elsevier publishing company : Inc. New York : Amsterdam : London : Brussels, 1950. - 384 p.

220. Karunajeewa, H. A review of factors influencing pigmentation of egg yolks Text. / H. Karunajeewa, R. J. Hughes, M. W. McDonald, F. S. Shenstone // World's poultry science. 1984 - Vol. 140, № 1. - P. 52-65.

221. Ketelacre, B. Non-destructive measurements of the egg quality Text. / B. Ketelacre, F. Bamelis, B. Kemps // Poultry Sc. 2004. - Vol. 60, № 3. - P. 289-302.

222. Khachik, F. Separation and quantification of carotenoids in foods Text. / F. Khachik, G. R. Beecher, M. B. Goli, W. R. Lusby // Methods in Enzymology. -1992. Vol. 213. - P. 347-359.

223. Khachik, F. Chemistry, distribution, and metabolism of tomato carotenoids and their impact on health Text. / F. Khachik, L. Carvalho, P. S. Bernstein, G. J. Muir, D.-Y. Zhao, N. B. Katz // Exp. Biol. Med. 2002. - Vol. 227. - P. 845-851.

224. Krinsky, N. I. Antioxidant functions of carotene Text. / N. I. Krinsky // Free radicals. Biol. Med. 1989. -N 7. - P. 617-635.

225. Krinsky, N. I. Biology and photobiology of singlet oxygen // oxygen radicals in chemistry and biology Text. / Ed. W. Bors, M. Saran, D. Tait. Berlin : N.Y. : Gruyter, 1984. - P. 453-464.

226. Lai, S.-M. Deposition of carotenoids in eggs from hens fed diets containing saponified and unsaponified oleorein paprika Text. / S.-M. Lai, J. I. Gray, C. J. Flegal // J. Sei. Food Agric. 1996. - Vol. 72. - P. 166-170.

227. Lamb, F. W. Quantitative determination of ergosterol, cholesterol, and 7-dehydrocholesterol Text. / F. W. Lamb, A. Mueller, G. W. Beach // Ind. Eng. Chem.- 1946. -Vol. 18, №3.-P. 187-190.

228. Landrum, J. T. A one-year study of the macular pigment: The effect of 140 days of a lutein supplement Text. / J. T. Landrum, R. A. Bone, H. Joa, M. D. Kilburn, L. L. Moore, K. E. Sprague // Experimental Eye Research. — 1997. -Vol. 65.-P. 57-62.

229. Landrum, J. T. The macular pigment: a possible role in protection from age-related macular degeneration Text. / J. T. Landrum, R. A. Bone, M. D. Kilburn // Adv Pharmacol. 1997. - Vol. 38. - P. 537-556.

230. Li, X. Effects of and yolk weights on yolk antibody (IgY) production in laying chickens Text. / X. Li, T. Nakano, J. Sim // Poultry Sc. 1998. - Vol. 77, № l.-P. 266-270.

231. Lipsten, B. Meat quality in broilers with particular reference to pigmentation Text. / B. Lipsten // Recent Develop. Nutr. 1991. - Vol. 21. - P. 145-169.

232. Loane, E. Transport and Retinal Capture of Lutein and Zeaxantin with Reference to Age-Related Macular Degeneration Text. / E. Loane, J. M.

233. Nolan, O. O'Donovan, P. Bhosale, P. S. Bernstein, S. Beatty // Survey of Ophthalmology. -2008. Vol. 53, Issue 1. - P. 68-81.

234. Lyle, B. J. Antioxidant intake and risk of incident age related nuclear cataracts in the US Text. / B. J. Lyle, J. A. Mares-Perlman, B. E. K. Klein, R. Klein, J. L. Greger // Am. J. Clin. Nutr. 1999. - Vol. 70, N 4. - P. 517-524.

235. Majchzak, D. Carotinoid- und Retinolgehalt in Hühnereiern Text. / D. Majchzak, I. Elmadfa // Fett/Lipid 99. 1997. - N 10. - S. 365-368.

236. Majun, G. K. Autoclaved rice brain in layers diets Text. / G. K. Majun, C. G. Payne // British Poultry Sc. 1977. - Vol. 18. - P. 201.

237. Marusicch, W. L. Oxicarotinoids ins poultry feeds Text. / W. L. Marusicch, J. C. Bauernfiend ; ed. J. C Bauernfiend. Academic Press : New York., 1981. -P.320-462.

238. Mayne, S. T. Beta-carotene, carotenoids, and disease prevention in humans Text. / S. T. Mayne // FASEB J. 1996. - Vol. 10. - P. 690-701.

239. Mlodkowski, M. Using carotenoid pigments from tomato pulp to improve egg yolk colour in laying hens Text. / M. Mlodkowski, M. Kuchta // Roczniki Naukowe Zootechniki. 1998. -N 2. - P. 133-144.

240. Moore, T. Vitamin A Text. / T. Moore. Amsterdam : Elsevier. - 1957. -436 p.

241. Moore, T. A. Photodriven charge in a carotenoporphyrin-quinone triad Text. / T. A. Moore, D. Gust, P. Mathis et. al. // Nature. 1984. - Vol. 307. -N5952.-P. 630-632.

242. Mortensen, A. The interaction of dietary carotenoids with radical species Text. / A. Mortensen, L. H. Skibsted, T. G. Truscott // Arch. Biochem. Biophys. 2001. - Vol. 385. - P. 13-19.

243. Mukundan, U. Growth and thiophene accumulation by hairy root cultures of Tagetes patula in media of varying initial pH Text. / U. Mukundan, M. A. Hjorso // Plant Cell Rep. 1991. - Vol. 9. - P. 627-630.

244. Na, J. Effect of polarity on absorption and accumulation of carotenoids by laying hens Text. / J. Na, J. Song, B. Lee, S. Lee, C. Lee, G. An // Animal Feed Science and Technology. 2010. - Vol. 117, № 3. - P. 305-315.

245. Nishino, H. Cancer prevention by carotenoids Text. / H. Nishino // Mutat. Res.-1998.-Vol. 402.-P. 159-163.

246. Olmedilla, B. Lutein in patients with cataracts and age-related macular degeneration: a longterm supplementation study Text. / B. Olmedilla, F. Granado, I. Blanco, M. Vaquero, C. Cajigal // J. Sei. Food Agric. 2001. - Vol. 81.-P. 904-909.

247. Olson, J. A. Benefits and liabilities of vitamin A and carotenoids Text. / J. A. Olson // J. Nutr. 1996. - Vol. 126. - P. 1208-1212.

248. Olson, J. B. Lycopene Incorporation into Egg Yolk and Effects on Laying Hen Immune Function Text. / J. B. Olson, N. E. Ward, E. A. Koutsos // Poultry Science. 2008. - Vol. 87. - P. 2573-2580.

249. Osman, H. Comparative sensitivities of cholesterol analysis using CG, HPLS and spectrophotometric metods Text. / Osman H., Yap Kwee Chin // Malay. J. Anal. Sei. -2006. Vol. 10, № 2. P. 205-210.

250. Carotenoids. Chemistry, Separation, Quantitation, and Antioxidation Text. / ed. L. Packer. Academic Press Inc. New York, 1992. - Vol. 213. - P. 1-538.

251. Carotenoids. Metabolism, Genetics and Biosynthesis Text. / ed. L. Packer. Academic Press Inc. New York, 1993. - Vol. 214. - P. 1-468.

252. Paiva, S. A. Beta-carotene and other carotenoids as antioxidants Text. / S. A. Paiva, R. M. Russell // J. Am. Coll. Nutr. 1999. - Vol. 18. - P. 426-433.

253. Palmer, L. S. The influence of specific feeds and certain pigments on the color of the egg yolk and body fat of fowls Text. / L. S. Palmer, H. L. Kempster // J. Biol. Chem. 1919. - Vol. 39. - P. 331-337.

254. Palozza, P. Prooxidant activity of beta-carotene under 100% oxygen pressure in rat liver microsomes Text. / P. Palozza, G. Galviello, G. M. Bartoli //Free Radic Biol Med. 1995. - Vol. 19. - P. 887-892.

255. Pauleikhoff, D. Makulapigment und altersabhängige Makuladegeneration Text. / D. Pauleikhoff, F. J. van Kuijk, A. C. Bird //Ophthalmologe. 2001. -Vol. 98.-P. 511-519.

256. Querishi, M. Immunomodulatory effects of Spirulina pi. supplementation in chickens Text. / M. Querishi, R. Ali, R. Hunter // Proc. 44-th Western Poultry Disease Conference, Sacramento, California. 1995. - P. 117-121.

257. Radjalakshmi, D. Food Antioxidants: Sources and Methods of Evaluation Text. / D. Radjalakshmi, S. Narasimhan ; ed. D. L. Madhavi, S. S. Deshpande, D. K. Salunkhe. Marcel Dekker : Inc. New York : Basel : Hong Kong, 1996. -P. 3-149.

258. Rao, A. V. Role of antioxidant lycopene in cancer and heart disease Text. / A. V. Rao, S. Agarwal // J. Am. Coll. Nutr. 2000. - Vol. 19. - P. 563-569.

259. Rezanka, T. The Use of APCI-MS with HPLC and Other Separation Techniques for Identification of Carotenoids and Related Compounds Text. / T. Rezanka, J. Olsovskä, M. Sobotka, K. Sigler // Current' Analytical Chemistry. 2009. - Vol. 5. - P. 1-25.

260. Ribaya-Mercado, J.-D. Lutein and zeaxanthin and their potential roles in disease prevention Text. / J.-D. Ribaya-Mercado, J.-B. Blumberg, // J. Am. Coll. Nutr. 2004. - Vol. 23. - S. 567-587.

261. Ribaya-Mercado, J. D. The potential health benefits of lutein and zeaxanthin Text. / J. D. Ribaya-Mercado, J. B. Blumberg // The World of Food Ingredients: The J. of the Practicing Food Technol. July/August, 2004. P. 44^6.

262. Rivas, J. D. Reversed-phase high-performance liquid chromatographic separation of lutein and lutein fatty acid esters from marigold flower petal powder Text. / J. D. Rivas // J. Chromatogr. 1989. - Vol. 464. - P. 442-447.

263. Rodrigues-Amaya, D. B. A Guide to Carotenoid Analysis in* Foods Text. / D. B. Rodrigues-Amaya. ILSI Press : Washington, D.C., 2001. - 64 p. -ISBN 1-57881-072-8.

264. Roels, O. A. Biochemical systems the vitamins Text. / O. A. Roels ; ed. W. H. Scbrell, B. S. Harris. New-York, 1967. - Vol. 1. - P. 167-244.

265. Ross, E. The nutritional value of dehydrated blue-green Spirulina pi. for poultry Text. / E. Ross, W. Dominy // Poultry Sc. 1990. - Vol. 69. - P. 794-800.

266. Rowghani, E. Effecy of dietary fish meal on production performance and cholesterol content of laying hens Text. / E. Rowghani, A. D. Boostani, H. R. Mahmoodian Fard, R. Frouzani // Рак. J. Biol. Sci. 2007. - Vol. 10. - P. 1747-1750.

267. Royle, N. J. Parental investment and egg yolk lipid composition in gulls Text. / N. J. Royle, P. F. Surai, R. J. McCartney, В. K. Speake // Funct. Ecol. -1999.-Vol. 13.-P. 298-306.

268. Rubaj, J. Determination of canthaxanthin in premixture and compound feed by the liquid chromatography method Text. / J. Rubaj, G. Bielecka, W. Korol, K. Kwiateki // Bull. Vet. Inst. Pulawy. 2009. - Vol. 53. - P. 707-712.

269. Ruffini, C. C. Alimentazione e pigmentazione in aviculture Text. / C. C. Ruffini, A. M. De Giovani // Poultry di Zootechnika e veterinaria. 1995. - № 3.-P. 143-154.

270. Salma, U. Effect of Dietary Rhodobacter capsulatus on Egg-Yolk Cholesterol and Laying Hen Performance Text. / U. Salma, A. G. Miah, K. M. A. Tareq, T. Макі, H. Tsujii //Poultry Science. 2007. - Vol. 86. - P. 714-719.

271. Salvadori, D. M. Anticlastogenic effects of beta-carotene in mammals Text. / D. M. Salvadori // Rev. Bras. Genet. 1991. - Vol. 14. - P. 1095-1096.

272. Sandman, G. Carotenoid biosynthesis and biotechnological application Text. / G. Sandman // Arch. Biochem. and Biophys. 2001. - Vol. 385, № 1. - P. 4-12.

273. Sandu, D. K. Development of apple pomace based medium optimizing pigment production by Rhodotorula and its characterization Text. / D. K. Sandu, V. K. Loshi // Adv.Food.Sci. 1997. - № 1-2. - P. 19-20.

274. Sayler, W. Evaluation of mixed natural carotenoid products as xantophylls sources for broiler pigmentation Text. / W. Sayler // Poultry Sc. 1986. - Vol. 65, №6.-P. 1112-1119.

275. Schalch, W. Possible contribution of lutein and zeaxanthin, carotenoids of the macula lutea, to reducing the risk for age-related macular degeneration: a review

276. Text. / W. Schalch // HKJOphtalmol. 2000. - Vol. 4. -№ 1. - P. 31-42.

277. Seddon, J. M. The epidemiology of age-related macular degeneration Text. / J. M. Seddon, C. A. Chen // Int. Ophthalmol. Clin. 2004. - Vol. 44. - P. 17-39.

278. Shin, Y. S. Rapid spectrophotometric determination of total cholesterol in small amounts of blood and cerebrospinal fluid Text. / Y. S. Shin, J. C. Lee // Anal. Chem. 1961. - Vol. 33, № 9. - P. 1220-1222.

279. Sies, H. Antioxidant functions of vitamins: Vitamin E and C, P-carotene and other carotenoids Text. / H. Sies, W. Stahl, A. R. Sundquist // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1992. - Vol. 669. - P. 7-20.

280. Slattery, M. L. Diet and colon cancer assessment of risk by fiber type and food source Text. / M. L. Slattery, A. W. Sorenson, A. W. Mahoney, T. K. French, D. Kritchevsky, J. C. Street//J. Nutr. Cancer. I. - 1988. - Vol. 80. - P. 1474-1480.

281. Smidt, C. R. The effects of a nutritionally complete dietary supplement (LifePak®) on antioxidant status and LDL-oxidation in healthy non-smokers Text. / C. R. Smidt, R. J. Seidehamel, S. Devaraj, I. Jialal // FASEB J. 1999. -Vol. 13.-P. 546.

282. Smith, I. D. Isolation and tentative identification of the carotinoids present in chicken skin and egg yolks Text. / I. D. Smith, H. S. Perdue // Poultry Sciences. 1966. - Vol. 45. - P. 577.

283. Snodderly, D.-M., Evidence for protection against age-related macular degeneration by carotenoids and antioxidant vitamins Text. / D.-M. Snodderly, //Am. J. Clin. Nutr. 1995. - Vol. 62. - S. 1448-1461.

284. Snodderly, O. M. The macula pigment Text. / O. M. Snodderly, J. D. Aran, F. C. Delori // Invest. Opthal. Vis. Sc. 1984. - Vol. 25. - P. 674-685.

285. Sommerburg, O. Fruet and vegetables that are sources for lutein and zeaxanthin: the macular pigment in human eyes Text. / O. Sommerburg, J. E. Keunen, A. C. Bird et al. // B.J. Optalmolol. 1998. - Vol. 82. - P. 907-910.

286. Sowbhaya, H. B. Natural colorants from marigold chemistry and technology Text. / H. B. Sowbhaya, S. R. Sampathu, N. Krishnamurthy // Food Rev. Internat. 2004. - Vol. 20, № 1. - P. 33-50.

287. Stahl, W. Dietary tomato paste protects against ultraviolet light-induced erythema in humans Text. / W. Stahl, U. Heinrich, S. Wiseman, O. Eichler, H. Sies, H. Tronnier //Journal of Nutrition. 2001. - Vol. 131. - P. 1449-51.

288. Sunde, M. L. The effect of different level of vitamin A, ß-apo-8'-carotenal on yolk color Text. / M. L. Sunde // Poultry Sc. 1962. - Vol. 41. - P. 532.

289. Surai, P. F. Carotenoids in Avian Nutrition and Embryonic Development. 2. Antioxidant Properties and Discrimination in Embryonic Tissues Text. / P. F. Surai, B. K. Speake, N. H. C. Sparks // Journal of Poultry Science. 2001. -Vol. 38.-P. 117-145.

290. Takashi, S. Carotenoid sulphates from the aerobic photosynthetic bacterium Erythrobacteria logus Text. / S. Takashi, K. Furihata, J. Ishidsu, K. Shimada // Phytochemistry. 1991.- Vol. 30, N 10.-P. 3411-3415.

291. Takatsuka, N. Effects of passive smoking on serum levels of carotenoids and alpha-tocopherol Text. / N. Takatsuka, N. Kawakami, Y. Ito et al. // J. Epidemiol. 1998. - Vol. 8, № 3. -P. 146-151.

292. Tamä§, V. Pigmenti carotenoidici si metabolite Text. / V. Tamä§, G. Neamtu // Bucuresti: Cere§, 1986. - Vol. 1. - P. 269-295.

293. Taylor, A. A role of nutrients in delaying cataracts Text. / A. Taylor // Ann N Y Aced Sei. 1992. - N 669. - P. 111-123.

294. Teixeira, M. A new method for analysis of plasma carotenoids in poultry Text. / M. Teixeira, C. H. A. Meleiro // Arq. Bras. Med. Vet. Zootec. 2008. -Vol. 60.-P. 1399-1402.

295. Thumham, D. L. Optimal nutrition: vitamin A and carotenoids Text. / D. L. Thumham, C. A. Northrop-Clewes // Proceedings of the Nutrition Socierty. -1999. Vol. 58. - P. 449-457.

296. Tsuchiya, M. Retinoids and carotenoids are peroxyl radical scavengers. In Retinoids Text. / M. Tsuchiya; G: Scita, D. F. T. Thompson, V. E. Kagan, M. A. Livrea, L. Packer // Progress in Research and Clinical Applications, 1993. -P. 526-536.

297. Tsuda, H. Cancer prevention by natural compounds Text. / H. Tsuda, Y. Ohshima, H. Nomoto, et al. // Drug Metab Pharmacokin. 2004. - Vol. 19, N 4.-P. 245-263.

298. US Patent 7033622 Tagetes erecta marigolds with altered carotenoid compositions and ratios

299. Volker, L. Comparative trial on the influence of different carotenoids on the pigmentation of broilers Text. / L. Volker, K. Streiff, U. Manz // XVIL World's Poultry Congr.-Helsinki. 1984. - P. 418-421.

300. Vorlovä, L. Cholesterol content in eggs during the laying period Text. / L. Vorlovä, E. Sieglovä, R. Kapriskovä, V. Kopriva // Acta Vet. Brno. 2001. -Vol. 70.-P. 387-390.

301. Waldroup, P. W. Risk of repeatability among persons using the Roche color fan to assess the shank color of broilers Text. / P. W. Waldroup, Z. B. Johnson // Poultry Sc. 1984. - Vol. 53, № 1. - P. 431-439.

302. Williams, W. D. Origin and impact of colour on consumer preference for food Text. / W. D. Williams // Poultry Sei. 1992. - Vol. 71. - P. 744-746.

303. Woodall, A. A. Oxidation of carotenoids by free radicals: relationship between structure and reactivity Text. / A. A. Woodall, S. W.-M. Lee, R. J. Weesie, M. J. Jacson, G. Britton // Biochim. Biophys Acta. 1997. - Vol. 1336.-P. 33-42.

304. Wright, G. S. Early detection and prevention of lung cancer Text. / G. S. Wright, M. E. Cruidl // Curr. Opin. in Oncol. 2000. Vol. 12, № 2. - P. 143-148.

305. Wu, L. Bioavailability Comparison of Free and Esterified Lutein for Layer Hens Text. / L. Wu, X. Huang, K. Shi, R. Tan // Brazillian Journal of Poultry Science. 2009. - Vol. 11, № 2. - P. 95-98.

306. Yeum, K-J. Measurement of carotenoids, retinoids, and tocopherols in human lenses Text. / K-J. Yeum, A. Taylor, G. Tang, R. M. Russell // Invest Ophthalmol Vis. Sci. 1995. - Vol. 36. - P. 2756-2761.

307. Yoshikazu, T. Biosynthesis of plant pigments: anthocyanins, betalains and carotenoids Text. / T. Yoshikazu, S. Nobuhiro, O. Akemi // The Plant Journal. 2008. - Vol. 54, № 4. - P. 733-749.

308. Yue, X. Improving Extraction of Lutein from Egg Yolk Using an Ultrasound Assisted Solvent Method Text. / X. Yue, Z. Xu, W. Prinyawiwatkul, J.M. King // Journal of Food Science. 2006. - Vol. 71, Issue 4. - P. 239-241.

309. Zamora, R. Comparative antioxidant effectiveness of dietary p-carotene, vitamin E, selenium and coenzyme Q-10 in rat erythrocytes and plasma Text. / R. Zamora, F. Y. Hidalgo, A. L. Tappel // J. Nutr. 1991. - Vol. 121. - N 1. -P. 50-56.

310. Zhang, W. W. The use of gene-specific IgY antibodies for drug target discovery Text. / W. W. Zhang // Drug. Dusc. Today. 2003. - Vol. 8, № 8. -P. 364-371.

311. В 1 ООг комбикорма содержится, %

312. Добавки витаминов и микроэлементов в комбикорме, на 1 т

313. В 100г комбикорма содержится, %

314. Обменная энергия, ккал 2761. Сырой протеин 17,01. Сырая клетчатка 5,11. Кальций 1,121. Фосфор 0,871. Натрий 0,41. Метионин 0,371. Метионин+Цистеин 0,621. Лизин 0,861. Триптофан 0,161. Треонин 0,61. Продолжение приложения 2

315. Добавки витаминов и микроэлементов в комбикорме, на 1 т