Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биохимическая характеристика циклических изменений состава влагалищной жидкости у здоровых небеременных женщин

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биохимическая характеристика циклических изменений состава влагалищной жидкости у здоровых небеременных женщин"

□03052Т32

На правах рукописи

ЗУЛЬБАЛАЕВА ДИЛЯРА ФАЙЗРАХМАНОВНА

БИОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЦИКЛИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЙ СОСТАВА ВЛАГАЛИЩНОЙ ЖИДКОСТИ У ЗДОРОВЫХ НЕБЕРЕМЕННЫХ ЖЕНЩИН

03.00.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва-2007

003052732

Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Николаев Александр Аркадьевич Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Ивков Николай Николаевич доктор медицинских наук, профессор Хватов Валерий Борисович

Ведущая организация:

ФГУ «НИИ физико-химической медицины Росздрава»

Защита диссертации состоится «_»_7007 г. в_:_часов

на заседании диссертационного совета Д 208.072.01. в Российском государственном медицинском университете по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке при Российском государственном медицинском университете по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, 1.

Автореферат разослан «_»_2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета: доктор медицинских наук, профессор

П.Х.Джанашия

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Исследование биологических жидкостей человека традиционно играет важную роль в развитии представлений о нормальном функционировании и дисфункциях соответствующих органов и систем. Данные о биохимическом составе биологических жидкостей человека дают для практической медицины новые инструменты, позволяющие проводить клиническую лабораторную диагностику на качественно новом уровне [Луцкий Д. JL, 2000, Дмитриев Г. А., 2003, Молчанов О. JI. и др., 2004].

Из всех биологических жидкостей организма человека и животных (кровь, моча, слюна, молоко, ликвор и др.) одной из самых малоизученных остается влагалищная жидкость [Кудрявцева В. Л. и др., 2001, Rutilant J. et al., 2001]. В отечественной и зарубежной литературе встречаются лишь отдельные работы, посвященные биохимическому изучению состава влагалищной жидкости в норме и при различных патологических состояниях [Марцишевская Р. Л. и др., 1990, Молчанов О. Л., 2000, Rafïï R. О., Nussbaum A. A. et al., 2003].

Изучение биохимического состава влагалищной жидкости имеет как фундаментальное, так и прикладное значение. Являясь, по сути, интегральной средой, состав влагалищной жидкости может косвенно отражать состояние всей женской репродуктивной системы. Изучение биохимических показателей влагалищной жидкости и их динамики способно пролить свет на закономерности формирования патологических процессов, развивающихся в репродуктивной системе женщины и, следовательно, наметить новые подходы, как в диагностике, так и в лечении заболеваний у женщин [Elitsur Y. et al., 1998, Levin R. J. et al., 2004].

Цель исследования

Комплексная биохимическая и иммунохимическая оценка состава влагалищной жидкости здоровых, небеременных женщин.

Основные задачи исследования

1. Исследовать динамику уровня неорганических веществ (кальций, магний) влагалищной жидкости на протяжении менструального цикла у здоровых женщин.

2. Исследовать динамику уровня низкомолекулярных азотистых веществ (мочевина, креатинин, мочевая кислота), пигментов (билирубин общий, билирубин пря-

мой), углеводов (глюкоза), липидов (триглицериды) на протяжении менструального цикла у здоровых женщин.

3. Исследовать динамику активности ферментов (а-амилазы, аспартатаминотранс-феразы, аланинаминотрансферазы, у-глутамилтрансферазы, креатинкиназы, кислой фосфатазы, щелочной фосфатазы, лактатдегидрогеназы) на протяжении менструального цикла у здоровых женщин.

4. Изучить динамику уровня лактоферрина влагалищной жидкости здоровых женщин.

5. Оценить возможность определения фаз менструального цикла и периода овуляции на основе исследования биохимического состава влагалищной жидкости.

Научная новизна

Впервые исследована динамика уровня неорганических веществ (кальций, магний), низкомолекулярных азотистых веществ (мочевина, креатинин, мочевая кислота), пигментов (билирубин общий, билирубин прямой), углеводов (глюкоза), липидов (триглицериды) влагалищной жидкости на протяжении менструального цикла здоровых женщин.

Впервые исследована динамика активности ферментов (а-амилазы, аспарта-таминотрансферазы, кислой фосфатазы, щелочной фосфатазы, креатинкиназы, аланинаминотрансферазы, у-глутамилтрансферазы, лактатдегидрогеназы) на протяжении менструального цикла у здоровых женщин.

Впервые с учетом выявленных динамических изменений биохимического состава влагалищной жидкости проанализированы регуляторные механизмы синтеза и секреции биохимических компонентов на протяжении менструального цикла здоровых женщин.

Практическое значение работы

Предложены новые методы определения фаз менструального цикла и периода овуляции на основе исследования биохимического состава влагалищной жидкости. Описано качественное и количественное изменение биохимического состава влагалищной жидкости у здоровых женщин во время менструального цикла. Приведены нормальные значения концентрации неорганических веществ (кальций, магний), низ-

Как видно из представленной схемы, подавляющее большинство биохимических компонентов влагалищной жидкости (84,2%) периодически изменяют концентрацию или активность на протяжении менструального цикла здоровых женщин. Из них в 56,2% случаев удалось выделить гормоны, оказывающие основное регулирующее действие на рассматриваемые биохимические компоненты. Причем, по полученным нами данным, наиболее часто регулирующее действие (положительное или отрицательное) оказывает прогестерон и его метаболиты (67% случаев), реже эстрогены (22% случаев) и еще реже другие гормоны, такие как фолликулостимулирующий гормон.

Полученные данные имеют, на наш взгляд, не только теоретическое, но и большое практическое значение, так как позволяют избегать ошибочных заключений при интерпретации клинико-лабораторных данных биохимического исследования влагалищной жидкости. Например, в ряде исследований [Кира Е. Ф., Молчанов О. Л. 1996-2004], авторами делаются выводы о диагностической значимости при бактериальном вагинозе ряда биохимических компонентов влагалищной жидкости (мочевина, глюкоза, магний, кальций, аспартатаминотрансфераза, аланинаминотрансфераза, креатинкиназа, лактатдегидрогеназа, а-амилаза, щелочная фосфатаза и др.). Действительно, по данным этих авторов [Кира Е. Ф., Молчанов О. Л. 1996-2004], во влагалищной жидкости при бактериальном вагинозе по сравнению со здоровыми женщинами происходят изменения биохимического состава,(например, уровень кальция изменяется в 1,34 раза по сравнению со здоровыми женщинами, а активность аспарта-тамино-трансферазы в 4,31 раза) авторы проводят на основание этого диагностику, дают рекомендации по тактике лечения, осуществляют контроль над качеством проводимой терапии.

Однако если учесть полученные нами данные о физиологических изменениях концентрации только этих двух показателей влагалищной жидкости на протяжении менструального цикла (изменения в 2,98 раза и 27,05 раза соответственно), то становится ясно, что авторами [Кира Е. Ф., Молчанов О. Л. 1996-2004] непроизвольно допущена ошибка из-за игнорирования физиологических циклических изменений биохимического состава влагалищной жидкости. Все это ставит под сильное сомнение выводы авторов о диагностической значимости указанных биохимических парамет-

Апробация результатов

Результаты работы представлены и доложены на:

- I Всероссийском конгрессе «Актуальные вопросы оперативной гинекологии и репродукции человека» (Краснодар, 2001 г.)

- V Международной конференции «Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия» (Астрахань, 2002 г.);

- VI и VIII Международных конференциях «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря» (Астрахань, 2003 г., 2005 г.);

- Итоговых научных конференциях ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» (Астрахань, 2002-2005 г.г.);

- IX International Scientific Conference «Family Health In The XXI Century» (China, Dalyan, 2005).

Публикации и изобретения

По теме диссертации опубликованы 8 печатных работ.

Внедрение результатов исследования в практику

Полученные результаты используются в практической работе Центра планирования семьи и репродукции человека г. Астрахани при лабораторной диагностике женской репродуктивной функции, при формировании групп риска развития субфер-тильности, в практической работе диагностической лаборатории ООО МФВФ «Тех-номед», в практической работе исследовательской лаборатории ООО НПЛ «Новые технологии».

Результаты диссертационной работы используются в качестве учебного материала для студентов, интернов и ординаторов ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия».

Объём и структура диссертации

Диссертация изложена на 110 страницах, содержит 15 таблиц и 18 рисунков. Она состоит из введения; четырёх глав, включающих обзор литературы, описание методов исследования, изложения фактического материала и обсуждения полученных

результатов; заключения; выводов, практических рекомендаций; указателя использованной литературы. Библиографический указатель содержит 168 источников, из них 124 на иностранных языках.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Объектами нашего исследования были влагалищная жидкость человека и ее компоненты.

Донорами влагалищной жидкости стали здоровые, нерожавшие, небеременные, не принимающие гормональные контрацептивы женщины (п = 23) репродуктивного возраста (от 20 до 24 лет, средний возраст 21,7±1,4 года). Женщины имели достаточно стабильный менструальный цикл (средняя продолжительность 27,4±0,8 дней).

Материалом исследования служила влагалищная жидкость. Отбор проб влагалищной жидкости проводился по стандартной методике с применением автоматического микродозатора. Для предотвращения контаминации влагалищной жидкости, цервикальный секрет под визуальным контролем удаляли с использованием ватно-марлевого тампона в соответствие с рекомендациями [Молчанов О. Л., 2000]. Материал исследования (влагалищная жидкость) разрабатывался поэтапно. На первом этапе проводили исследования физико-химических свойств. На втором этапе начинали исследование иммунохимического и биохимического состава. При необходимости образцы до исследования хранили в морозильной камере при постоянной температуре -18°С. Сбор образцов влагалищной жидкости осуществляли с 2000 по 2005 годы в НПМК «Экологическая медицина» ООО «Астраханьгазпром», Центре планирования семьи и репродукции г. Астрахани и лаборатории ООО МФВФ «Техномед».

Было исследовано 583 образца влагалищной жидкости. Физико-химические методы исследования включали в себя определение pH влагалищной жидкости рН-метром «Hanna Piccolo Plus» с разрешающей способностью 1,00-13,00±0,01. Наблюдения за «феноменом кристаллизации цервикального секрета» (тест арборизации) проводили с использованием микроскопа «Микмед-2 вар.2» фирмы «ЛОМО». Для измерения удельной активности ферментов влагалищной жидкости использовали Условные Единицы (УЕ), которые были равны отношению активности фермента выраженной в Международных Единицах - ME (то есть мкмоль/(мин-л)) к количеству

общего белка в исследуемых образцах влагалищной жидкости в граммах. Определение концентрации общего белка в исследуемых образцах влагалищной жидкости проводили на автоматическом биохимическом анализаторе «Alcyon Analyzer - 300».

Определение активности а-амилазы (ЕС 3 2.1.1.) во влагалищной жидкости проводили унифицированным амилокластическим методом (по W. Т. Caraway). Измерение активности аспартатаминотрансферазы (ЕС 2.6.1.1) и аланинаминотрансферазы (ЕС 2.6.1.2) проводили на автоматическом биохимическом анализаторе фирмы «Nittek» модель «Super Z-818». Унифицированный метод основан на определении суммарной экстинкции динитрофенилгидразонов пировиноградной кислоты, являющейся продуктом реакции, и а-кетоглутаровой кислоты, служащей исходным веществом при реакции переаминирования. у-Глутамиптрансфераза (ЕС 2.3.2.2) определялась по расщеплению L-у-глутамил-п-нитроанилида. Для определения активности креатинкиназы (ЕС2.7.3.2.) был использован метод с использованием креатинфосфа-та в качестве субстрата. Измерение активности щелочной фосфатазы (ЕС 3.1.3.1.) проводили на автоматическом биохимическом анализаторе фирмы «Nittek» модель «Super Z-818». В основе лежит метод Бессея-Лоури-Брока с п-нитрофенилфосфатом натрия в качестве субстрата. Измерение активности кислой фосфатазы (ЕС 3.1.3.2.) также проводили на автоматическом биохимическом анализаторе фирмы «Nittek» модель «Super Z-818». В основе лежит метод Бессея-Лоури-Брока с п-нитрофенилфосфатом натрия в качестве субстрата, но в отличие от метода определения щелочной фосфатазы в субстратно-буферной смеси используется цитратный, а не глициновый буфер. Активность лактатдегидрогеназы (ЕС 1.1.1.27.) определяли унифицированным методом по реакции с 2,4-динитрофенилгидразином (Севела-Товарека).

Методом иммуноферментного анализа в образцах влагалищной жидкости проводили определение лактоферрина. В работе были использованы коммерческие иммуноферментные тест-системы «Лактоферрин-стрип» (ЗАО «Вектор-Бест»). Определение проводили на спектрофотометре «Униплан». Для калибровки и внутренних стандартов был использован препарат человеческого лактоферрина выделенный и очищенный по методу А. А. Николаева.

Определение концентрации всех низкомолекулярных органических веществ

(мочевины, мочевой кислоты, креатинина, билирубина, глюкозы, триглицеридов) в исследуемых образцах влагалищной жидкости проводили при стандартных условиях на автоматическом биохимическом анализаторе «Alcyon Analyzer - 300».

Определение концентрации ионов кальция и магния во влагалищной жидкости проводили на автоматическом биохимическом анализаторе фирмы «Nittek» модель «Super Z-818».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Всего перечисленными выше методами было исследовано 583 образца влагалищной жидкости. Данные, полученные при определении рН влагалищной жидкости на протяжении менструального цикла, приведены в таблице 1.

рН влагалищной жидкости имеет тенденцию к увеличению в период овуляции и непосредственно перед менструацией, однако полученные различия не были статистически достоверными. Уровень ионов кальция в среднем выше, чем уровень ионов магния (таблица 1). На основании анализа полученных нами данных и их сопоставления с литературными данными об изменении гормонального профиля на протяжении нормального менструального цикла, удалось выявить некоторые закономерности динамики исследуемых биохимических компонентов и активности ферментов во влагалищной жидкости здоровых женщин.

Таблица 1

Изменения содержания ионов водорода, Са2+ и Mg2+ во влагалищной жидкости

Концентрация ионов во влагалищной жидкости, ммоль/г общего белка За 8-9 дней до овуляции За 3-4 дня до овуляции Овуляция Через 3-4 дней после овуляции Через 7-8 дней после овуляции

рн* 4,00 ±0,292 4,00 ±0,219 4,15 ±0,216 3,97 ±0,268 4,14 ±0,269

Кальций (р<0,01) 4,11 ±0,35 1,79 ±0,18 4,75 ±0,37 4,92 ±0,38 5,35 ±0,41

Магний (р<0,01) 0,967 ±0,078 5,091 ±0,104 0,881 ±0,075 0,195 ±0,019 0,134 ±0,016

Примечание: * - изменения были статистически не достоверными.

При анализе нами учитывались циклические изменения уровня следующих гормонов: лютеинезирующий гормон, фолликулостимулирующий гормон, эстрадиол, эстрон, прогестерон, 17-гидроксипрогестерон, тестостерон, андростендион.

Бесспорно, регуляция гомеостаза влагалищной жидкости происходит с участием большого количества биологических, биохимических и физико-химических факторов, поэтому нами сознательно были выбраны для анализа только статистически значимые корреляции и взаимосвязи, определяющие наиболее выраженные изменения анализируемых факторов на протяжении менструального цикла здоровой женщины.

Уровень кальция во влагалищной жидкости был связан с прогестероном и его метаболитом 17-гадроксипрогестероном (рис. 1).

Уровень магния во влагалищной жидкости, напротив, отрицательно коррелировал с уровнем прогестерона и его метаболита 17-гидроксипрогестероном (рис. 2).

Интересно отметить, что уровни ионов кальция и магния имели между собой выраженную отрицательную корреляцию.

Даже при столь небольшой выборке коэффициент линейной корреляции между уровнем кальция и магния во влагалищной жидкости рассчитанный по формуле Пирсона имеет весьма высокую достоверность (г = -0,981, при р < 0,0005).

ммоль/г ОБ 6

5

4

3

2

1

0

СМ СО о •ч- со см

I

IHZZZZZ3] Кальций, ммоль/г ОБ Прогестерон, нг/мл - - - • 17-ОП, нТмл

Рис. 1. Изменения уровня кальция на фоне циклических изменений уровня прогестерона и 17-гидроксипрогестерона (17-ОП)

ммольд- ОБ

у- .ч иягмда ципт.)г пк Прогестерон. н'/мп - - - ■ 17-ОП, нгЛ/т

Рис. 2. Изменения уровня магния на фоне циклических изменений уровня прогестерона и 17-гидроксипрогестерона

Если на протяжении всего менструального цикла соотношение «кальций/магний» колебалось от 4,5 до 40, то за 3-4 дня до овуляции соотношение составляло 0,35.

Наблюдающийся резкий рост концентрации магния и снижения концентрации кальция во влагалищной жидкости непосредственно перед овуляцией, вероятно, связан с регуляторными процессами, необходимыми для подготовки к овуляции, так как и кальций и магний известные регуляторы активности большого количества ферментов. Кроме того, известно, что магний может регулировать ассоциацию и диссоциацию рецептора эстрогенов с фактором, связывающим рецептор эстрогенов (Тика! Р. е1 а1., 1984].

Нами было исследовано на протяжении менструального цикла (по описанной выше схеме) содержание во влагалищной жидкости здоровых женщин (п = 23) следующих низкомолекулярных органических веществ: мочевина, креатинин, мочевая кислота, билирубин, глюкоза, триглицериды. Результаты проведенного исследования были сгруппированы в таблице 2. Рассматривать динамику мочевины во влагалищной жидкости не представляется целесообразным, так как её уровень на протяжении менструального цикла изменялся статистически не достоверно. Уровень креати-

нина статистически достоверных корреляций с уровнями гормонов не имел, однако претерпевал достоверные циклические изменения, повышаясь через семь-восемь дней после овуляции в 2,5-3,0 раза.

Таблица 2

Изменения содержания низкомолекулярных органических веществ во влагалищной жидкости на протяжении менструального цикла у здоровых женщин

Концентрация о § « § и Э 15 V 5 я а ч э

низкомолекулярных >5 § 5 I Й § 2 §

органических компонентов влагалищной жидкости, ммоль/г общего белка Э 1 § >ч § >ч т а* СП О <г> о 8.5 00 ^ « и г- о ел о &§ я — о ет а &§

п о го о О ¡г1 в ¡г а нГ1 и

Мочевина* 5,06 ±0,94 4,58 ±1,15 3,67 ±0,98 4,95 ±1,21 5,21 ±1,29 5,13 ±1,07

Креатинин (р<0,01) 91,93 ±8,53 184,1 ±14,65 77,71 ±8,01 90,05 ±8,33 238,99 ±19,5 87,72 ±8,33

Мочевая кислота (р<0,01) 47,71 ±2,76 23,96 ±1,39 2,08 ±0,42 2,92 ±0,74 2,29 ±0,58 2,18 ±0,36

Билирубин общий (р<0,01) 3,44 ±0,34 4,34 ±0,45 5,17 ±0,51 11,64 ±0,89 17,39 ±1,12 6,57 ±0,43

Билирубин прямой* 1,084 ±0,195 1,338 ±0,318 0,858 ±0,288 1,246 ±0,307 0,919 ±0,261 1,113 ±0,243

Глюкоза (р<0,01) 12,73 ±0,94 19,46 ±1,13 9,59 ±0,87 11,02 ±0,92 18,71 ±1,03 11,45 ±0,94

Триглицериды* 1,032 ±0,296 0,969 ±0,265 0,903 ±0,301 1,469 ±0,332 1,333 ±0,203 1,142 ±0,292

Примечание: * - изменения уровня биохимического компонента во влагалищной жидкости здоровых женщин не были статистически достоверными.

Изменения уровня мочевой кислоты наиболее тесно были связаны с изменением уровня эстрогенов (рис. 3). Причем эстрогены отрицательно взаимосвязаны с уровнем мочевой кислоты и, вероятно, способны напрямую или опосредовано инги-бировать её секрецию во влагалищную жидкость.

ммоль/г ОБ

ГМ 00 тГ о и- со СМ

ЕЕ^ЗИЗ Мочевая кислота, ммоль/г ОБ Эстрад иол. пг/Мл - - - -Эстрон, гт/мл

Рис. 3. Изменения уровня мочевой кислоты на фоне циклических изменений уровня эстрона и эстрадиола

Уровень общего билирубина во влагалищной жидкости был выраженно связан с прогестероном и, в значительно меньшей степени, с его метаболитом 17-гидроксипрогестероном (рис. 4).

ммольЛ* ОБ

к * 1 ■ а . ' •ч г к

-........ - 11 1 11 1 1 11 А | | А 1 Тр1| 1 1 р 1111 II 1"1 1

см со -ч- о 1- со см

т- I ■

ЭБипфубин общий, ммоль/г ОБ Прогестерон. н7мл - - - "17-ОП, №/мл

Рис. 4. Изменения уровня общего билирубина на фоне циклических изменений уровня прогестерона и 17-гидроксипрогестерона

УЕ 6000

5500

5000

4500

4000

3500

3000

2500

2000

сч со та- о •ч- оо см

т— 1 > г—

I

г «1 альфа-Амипэта, УЕ Эстрадиоп. пг/ыл - - - ■ Эстрон, гг/мл

Рис. 5. Изменение активности а-амилазы на фоне

циклических изменений уровня эстрогенов

Взаимосвязь уровня общего билирубина с уровнем прогестерона оказалась близка к функциональной, что подтверждается близким к единице положительным коэффициентом линейной корреляции между уровнем общего билирубина и уровнем прогестерона, который был рассчитан по формуле Пирсона (г = 0,9775, при р < 0,001). Несомненно, что прогестерон играет ключевую роль в регуляции уровня общего билирубина в составе влагалищной жидкости.

Уровень глюкозы во влагалищной жидкости, вероятно, отчасти регулируется фолликулостимулирующим гормоном, причем имеет место отрицательная регуляция, однако, несомненно, это не единственный фактор, определяющий изменение уровня глюкозы на протяжении менструального цикла здоровой женщины.

Изменение уровня триглицеридов во влагалищной жидкости на протяжении менструального цикла не были статистически достоверными, поэтому обсуждать наблюдавшуюся тенденцию к повышению их уровня после овуляции, представляется не корректным.

Активность а-амилазы наиболее тесно была взаимосвязана с уровнем эстрогенов (рис. 5).

При расчете по формуле Пирсона коэффициента линейной корреляции между уровнем эстрогенов и активностью а-амилазы оказалось что наибольшая связь наблюдается с эстроном (г = 0,9611, при р < 0,005), чем с эстрадиолом (г = 0,8528, при р < 0,05). Вероятно, во влагалищной жидкости активность а-амилазы находится под регулирующим влияние эстрогенов и в большей степени эстрона, чем эстрадиола.

Активность аспартатаминотрансферазы имела наибольшую взаимосвязь с уровнем прогестерона (рис. 6), коэффициент линейной корреляции по формуле Пирсона оказался высоким (г = 0,9268, при р < 0,005), что позволяет говорить о регулирующем влиянии этого гормона на ферментативную активность аспартатаминотрансферазы.

УЕ

200 у-

175 --

СМ СО Tf о 00 см

СГ^ЭАспартзтаминот'рансфвраза, УЕ Прогестерон, нг/мл

Рис. 6. Изменение активности аспартатаминотрансферазы на фоне циклических изменений уровня прогестерона

В то же время ферментативная активность аланинаминотрансферазы, хотя и достоверно изменялась на протяжении менструального цикла, не коррелировала ни с одним из рассматриваемых гормонов. Возможно, регуляция активности этого фермента носит более сложный характер с участием нескольких гормонов.

Активность у-глутамилтрансферазы также достоверно изменялась на протя-

жении менструального цикла, но и её не удалось сопоставить с циклическими гормональными изменениями, происходящими в организме здоровой женщины.

Обращает на себя внимание похожий характер изменения активности этих ферментов, что может свидетельствовать о сходных механизмах регуляции. Рассчитанный нами коэффициент линейной корреляции показал связь между активностью во влагалищной жидкости аланинатаминотрансферазы и у-глутамилтрансферазы. близкую к функциональной (г = 0,8509, при р < 0,01).

Иной характер носит изменение активности креатинкиназы. Активность креатинкиназы не удалось сопоставить с циклическими гормональными изменениями. Вероятно, регуляция активности этого фермента находится под действием нескольких факторов.

Изменение ферментативной активности кислой фосфатазы достоверно отрицательно коррелировало с уровнем прогестерона и 17-гидроксипрогестерона (рис. 7).

УЕ 600 500 400 300 200 100 0

Рис. 7. Изменения активности кислой фосфатазы на фоне циклических изменений уровня прогестерона и его метаболита 17-гидроксипрогестерона

3 Кислая фосфзтзза, УЕ Прогестерон, иг/мл - - - •17-ОП,нг/мл

При расчете по формуле Пирсона коэффициента линейной корреляции между активностью кислой фосфатазы и уровнем гестагенов оказалось, что 17-гидроксипрогестерона имеет более высокий коэффициент линейной корреляции (г = -0,8682, при р < 0,05), по сравнению со своим предшественником прогестероном (г = -0,7391, прир< 0,05).

Все это позволяет предполагать, что регуляция ферментативной активности кислой фосфатазы во влагалищной жидкости происходит под влиянием прогестерона и его метаболитов.

Изменение ферментативной активности щелочной фосфатазы, напротив, достоверно положительно коррелировало с уровнем прогестерона и отрицательно с уровнем тестостерона ( коэффициент линейной корреляции между активностью щелочной фосфатазы и уровнем прогестерона г = 0,7786, при р < 0,05, а тестостерона г = -0,7330, при р < 0,05). Вероятно, что регуляция ферментативной активности щелочной фосфатазы во влагалищной жидкости происходит под положительным влиянием прогестерона и, возможно, под отрицательной регуляцией тестостерона, хотя последнее предположение, на наш взгляд, требует дальнейшей экспериментальной проверки.

Изменение активности лактатдегидрогеназы общей и её изофермента лак-татдегидрогеназы-1 во влагалищной жидкости не было напрямую связано с изменением уровня гормонов на протяжении менструального цикла, однако имело циклический характер.

Изофермент лактатдегидрогеназа-1 показал динамику изменения ферментативной активности сходную с лактатдегидрогеназой общей (г = 0,9952, при р < 0,00005), что свидетельствует об однотипных механизмах регуляции общей активности лактатдегидрогеназы и её изофермента лактатдегидрогеназы-1.

Лактоферрин во влагалищной жидкости на протяжении менструального цикла не имел прямых корреляций с изменением уровня гормонов, но достоверно изменял свою концентрацию (рис. 8).

Лактоферрин является фактором неспецифической защиты организма от различных патогенов [Луцкий Д. Л., 2003, Николаев А. А. и др., 2004, Jones Е. М. et al., 2005], проявляя бактерицидные и бактериостатические свойства, в том числе в

отношении ряда возбудителей заболеваний, передающихся половым путем [Полунин А. К, 2002, Gray К. et al., 2006].

мг/г ОБ

ПЛактоферрин, иг/г ОБ

Рис. 8. Изменение концентрации лакгоферрина на протяжении менструального цикла.

Известно также участие лакгоферрина в регуляции функционирования системы цитокинов, в частности IL-ip, IL-2, IL-6, TNF-a [Adamik В. et al., 1999, Slater К. J., 2002], в регуляции системы полиморфноядерных лейкоцитов и системы мононук-

леарных фагоцитов [Rein М. F. et al., 1996].

Учитывая биологические свойства лакгоферрина, физиологическое снижение его уровня перед началом менструаций может приводить к снижению барьерных свойств влагалищной жидкости и, как следствие, к повышенной уязвимости органов женской репродуктивной системы перед различными инфекционными агентами накануне менструации.

Полученные нами данные позволяют провести классификацию биохимических компонентов влагалищной жидкости на основе их зависимости от изменения уровня гормонов на протяжении менструального цикла. Для облегчения восприятия мы провели визуализацию разработанной нами классификации (рисунок 9).

Биохимические компонекты влагалищной жидкости

кшшШ.

Не изменяют уровень или активность на протяжении менструального цикла

¿рШ-

Изменяют уровень или активность на протяжении менструального цикла

- мочевина

- триглицериды

- билирубин прямой

X

Изменение уровня или активности не коррелирует с изменением уровня гормонов

Й

й

Изменение уровня или активности коррелирует с изменением уровня гормонов

-креатинин

- аланинаминотрансфераза

- гамма-глутамилтрансфераза -креатинкиназа

- лактатдегидрогеназа общая

- лактатдегидрогеназа-1

- лактоферрин

прогестерон 17-гидрокси прогестерон

•кальций

- общий билирубин I - аспартатаминотрансфераза роз _ щелочная фосфатаза

н

эстрад иол эстрон

pos

н

под

- магнии

- кислая фосфатаза

- альфа-амилаза

- мочевая кислота

фолликулостимулирующий гормон

—пвд— - глюкоза

Рис. 9. Классификация биохимических компонентов влагалищной жидкости по механизму регуляции их концентрации или активности на протяжении менструального цикла. pos - положительное влияние neg- отрицательное влияние

комолёкулярных азотистых веществ (мочевина, креатинин, мочевая кислота), пигментов (билирубин общий, билирубин прямой), углеводов (глюкоза), липидов (триглице-риды) влагалищной жидкости для различных периодов менструального цикла здоровых женщин. Приведены нормальные значения активности ряда ферментов влагалищной жидкости (а-амилазы, аспартатаминотрансферазы, кислой фосфатазы, щелочной фосфатазы, креатинкиназы, аланинаминотрансферазы, лактатдегидрогеназы, у-глутамилтрансферазы) для различных периодов менструального цикла здоровых женщин. Приведены нормальные значения концентрации лакгоферрина влагалищной жидкости для различных периодов менструального цикла здоровых женщин.

Основные положения, выносимые на защиту

1. На протяжении менструального цикла во влагалищной жидкости соотношение «Са2+ : М^2+» составляет 4:1, но за 3-4 дня до овуляции соотношение изменяется до 1:3. Также за 3-4 дня до овуляции соотношение «ЛДГ-1 : ЛДГ общ.» возрастает с 1:4 до 1:13.

2. В период овуляции активность креатинкиназы снижается до уровня менее 100 УЕ.

3. Концентрация общего билирубина во влагалищной жидкости на протяжении менструального цикла положительно коррелирует с уровнем прогестерона (г = 0,9775, при р < 0,001). Активность альфа-амилазы - положительно коррелирует с уровнями эстрона (г = 0,9611, при р < 0,005) и эстрадиола (г = 0,8528, при р < 0,05). Активность аспартатаминотрансферазы - положительно коррелирует с уровнем прогестерона (г = 0,9268, при р < 0,005).

4. Концентрации креатинина и глюкозы, а также активность аланинаминотрансферазы и гамма-глутамилтрансферазы во влагалищной жидкости на протяжении менструального цикла имеют два максимума: за 3-4 дня до овуляции и через 7-8 дней после овуляции.

5. Наиболее низкий уровень лакгоферрина во влагалищной жидкости наблюдается перед началом менструации, что снижает барьерные свойства влагалищной жидкости в этот период.

ров влагалищной жидкости при бактериальном вагинозе.

Таким образом, при конструировании лабораторно-диагностических тест-систем необходимо учитывать динамику физиологических изменений состава влагалищной жидкости на протяжении менструального цикла.

Кроме того, анализ полученных данных позволяет выделить некоторые биохимические компоненты влагалищной жидкости, являющиеся маркерами периодов менструального цикла.

Так как ключевым событием менструального цикла можно считать овуляцию, то наибольший интерес представляют биохимические показатели, изменяющиеся непосредственно перед овуляцией или во время овуляции.

За 3-4 дня до овуляции происходит изменение соотношения «кальций/магний» до 1:3, в то время как в другие периоды оно составляет 4:1, в этот же период снижается относительная активность изофермента лактатдегидрогеназа-1 относительно общей активности лактатдегидрогеназы.

Непосредственно в период овуляции снижается в 2 раза ферментативная активность креатинкиназы и изменяется соотношение «кислая фосфатаза/щелочная фосфатаза». В период овуляции оно составляет 1:4 , а до и после 8:1.

Таким образом, существует возможность предсказания периода овуляции на основании сравнительно недорогих альтернативных биохимических исследований влагалищной жидкости без определения гормонов сыворотки крови или с их ограниченным определением.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

При использовании влагалищной жидкости в качестве объекта клинико-лабораторных исследований необходимо учитывать выявленные закономерности циклических изменений её биохимического состава.

В качестве маркера предовуляторного периода можно использовать изменение соотношения концентрации «Са2+ : с 4:1, до 1:3, а также изменение соотношения ферментативной активности «ЛДГ-1: ЛДГ общ.» с 1:4 до 1:13.

Маркером наступления овуляции может служить снижение активности креатинкиназы до 100 УЕ и менее.

Необходимо учитывать, что риск инфицирования женской репродуктивной системы выше перед менструацией, за счет снижения защитных свойств влагалищной жидкости в этот период.

ВЫВОДЫ

1. На протяжении менструального цикла во влагалищной жидкости соотношение «Са2+ : составляет 4:1, но за 3-4 дня до овуляции соотношение изменяется до 1:3. Так же за 3-4 дня до овуляции соотношение «ЛДГ-1 : ЛДГ общ.» возрастаете 1:4 до 1:13.

2. В период овуляции активность креатинкиназы снижается до уровня менее 100 УЕ.

3. Концентрация общего билирубина во влагалищной жидкости на протяжении менструального цикла положительно коррелирует с уровнем прогестерона (г = 0,9775, при р < 0,001). Активность альфа-амилазы - положительно коррелирует с уровнями эстрона (г = 0,9611, при р < 0,005) и эстрадиола (г 0,8528, при р < 0,05). Активность аспартатаминотрансферазы - положительно коррелирует с уровнем прогестерона (г = 0,9268, прир < 0,005).

4. Концентрации креатинина и глюкозы, а также активность аланинами-нотрансферазы и гамма-глутамилтрансферазы во влагалищной жидкости на протяжении менструального цикла имеют два максимума: за 3-4 дня до овуляции и через 7-8 дней после овуляции.

5. Наиболее низкий уровень лактоферрина во влагалищной жидкости наблюдается перед началом менструации, что может снижать барьерные свойства влагалищной жидкости в этот период.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Зульбалаева Д. Ф., Николаев А. А., Гайнуллина Л. X., Луцкий Д. Л. Уровни спермоплазменной кислой фосфатазы (КФ 3.1.3.2.) в биологических жидкостях мужчин и женщин // Мат. V междунар. конф. «Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия». - Астрахань, 2002. -С.91-93.

2. Зульбалаева Д. Ф., Николаев А. А., Луцкий Д. Л. Спектр неспецифических эс-тераз цервикального секрета здоровых женщин // Труды АГ'МА Том 24(XLVIII). - Астрахань, 2002. - С.59-61.

3. Зульбалаева Д. Ф., Николаев А. А., Луцкий Д. Л. Циклические изменения уровня лактоферрина во влагалищной жидкости // Труды АГМА Том 28(LII). -Астрахань, 2003. - С.152-156.

4. Зульбалаева Д. Ф., Николаев А. А., Луцкий Д. Л., Гайнуллина Л. X. Активность ферментов влагалищной жидкости у женщин, проживающих в неблагоприятных экологических условиях // Мат. VI междунар. конф. «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря» - Астрахань, 2003. -С.97-99.

5. Зульбалаева Д. Ф., Луцкий Д. Л., Выборное С. В., Николаев А. А., Махмудова А. М. Нарушение гликозилирования лактоферрина при урогенитальных мико-плазмозах // Фундаментальные исследования. - 2004. - №2. - С.173-174.

6. Зульбалаева Д. Ф., Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Выборное С. В., Луцкая А. М. Применение низкоинтенсивного микроволнового излучения в репродуктивных технологиях // Materials IX International Scientific Conference «Family Health In The XXI Century». - China, Dalyan, 2005. - C.201-202.

7. Зульбалаева Д. Ф., Николаев А. А., Луцкий Д. Л. Биохимический профиль влагалищной жидкости при гипотиреозе с нарушениями менструального цикла по типу олигоменореи // Мат. VIII междунар. конф. «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря». - Астрахань, 2005. - С. 188-189.

8. Зульбалаева Д. Ф., Николаев А. А., Комаров О. С., Терентьев А. А., Луцкий Д. Л. Циклические изменения уровня ферментов влагалищной жидкости у здоровых небеременных женщин // Вестник РГМУ. - 2007. - №1. - С.54-57.

Тираж 100 экз. Подписано в печать 14.02.2007. Заказ № 2169.

Издательство Астраханской государственной медицинской академии, 414000. г. Астрахань, ул. Бакинская, 121