Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биохимическая характеристика опухолевого роста в толстой кишке

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биохимическая характеристика опухолевого роста в толстой кишке"

АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ АРМЕНИЯ ИНСТИТУТ БИОХИМИИ им.БУНЯТЯНА Г.Х.

На правах рукописи

АГАЕАЛЯН Артур Степанович

БИОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОПУХОЛЕВОГО РОСТА В ТОЛСТОЙ КИШКЕ

03.00.04 - Биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Ереван- 1992

Работа выполнена-в Научно-исследовательском институте проктологии Министерства здравоохранения РА

Научные консультанты: д.м.н., профессор НАЗАРОВ Л.У

член-корр.АН РА КАЕАГЕЗЯН К.Г,

Официальные оппоненты: д.б.н., профессор ХАЧАТРЯН Г.С.

д.б.н.,профессор ГАРВДЩАНЕН Б.Т. д.б.н., доцент ГЕВОРКЯН Э.С.

Ведущая организация - Онкологический научный центр им.Фанарджяна В.А.

Защита состоится "<?/" зи 1993г. на заседании специализированного совета Д.005.15.01 в Институте биохимии им. Бунятяна Г.Х. АН РА по адресу: 375044, г. Ереван, ул.11а-руйра Севака, 5/1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института биохимии им. Бунятяка Г.Х.

Автореферат разослан " №" угкм&^Ц 1992 г.

Ученый секрета^ специализированного д.б.н., профессор

СИМОНЯН А.А

8гл

^лгу : -н • ■ ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА. РАБОШ

ГОСУЛАР' - г .И

Г» 11 Г.;;туадьность проблемы. Изучение особенностей этиологии, изыскание новых путей профилактики, ранней диагностики опухо-. левого роста и эндогенной интоксикации, равно как применение современных методов иммуннокоррекции опухолевых заболеваний являются важнейшими задачами современной медико-биологической науки и практики.

Изучение роста злокачественных новообразований в настоящее время не представляется возиоешш без учета достижений экспериментальной онкологии, например в сфере моделирования опухолей, индуцированных различными физико-химическими и вирусными канцерогенами.

Успехи, достигнутые в области молекулярной биологии биополимеров выполняющих фундаментальные функции в клетке, определяются особенностями их молекулярного строения. Установлены конкретные механизмы патологии многих заболеваний, в частности является очевидным, что нарушения функций, определящих природу развития патологического процесса зависимы от уровня организации, подвергшейся повреждению. С отмеченной точки зрения опухолевые заболевания выступают в виде обособленной группы патологий, для которой расстройства генетической системы отдельных соматических клеток организма приводят к срывам процессов их дифференцировки и размножения.

Вышеизложенное позволяет характеризовать опухолевый рост как заболевание целостного организма с генерализованным поражением всех ключевых систем, как-то генетической, метаболической, иммунологической. С отмеченных позиций отмечается крайняя затрудненность ранней диагностики опухолевых заболеваний, в том числе в толстой кишки, и их дифференциальная диагностика. Поэтому прогресс в этой области знания возможен лишь с помощью поиска новых, нетрадиционных методов биохимических и молекуляр-но-биологических исследований, способных сообщать максимально адекватную и раннюю информацию о нарушениях процессов, протекающих на метаболическом уровне клетки. Представляется очевидным, что изучение нарушений одного из важнейших регуляторов реакций тканевого метаболизма - ферментных систем, состояние активности которых в ряде опухолевых поражений может быть признано спе-

цифическим и прольет свет на изыскание современных подходов по распознавании злокачественных новообразований в толстой кишке и позволит проследить за процессом малигнизации в этом органе. Так, например, перераспределение активности изофермент-ного состава некоторых энзимов, в частности креатинкиназы (КК), на наш взгляд, может иметь важное значение в дифференциальной диагностике аденом и аденокарцином толстой кишки, повышение активности гексокиназы (ПО, обнаруживающееся в крови только при наличии опухолевого повреждения клеток, а развивающаяся на этом фоне высокая активность щелочной фосфатазы (1ДФ) и гамма-глюта-милтранспептидазы (ГГТП) является объективным критерием развития метастазов в печени.

Нередко опухолевый рост отягощается развитием такого грозного осложнения, как эндотоксикоз, что особенно часто прослеживается в послеоперационном периоде. Однако, используемые на сегодня рутинные методы лабораторных исследований практически оказываются мало эффективными в распознавании этого осложнения до развития его клинических проявлений. Поэтому изучение биохимических характеристик плазмы крови онкологических бальных представляет значительный интерес, как для их ранней диагностики, так и для обеспечения должного контроля за результатами лечения и стимулирования усилий по разработке новых экспресс^ле-тодов диагностики развивающегося синдрома эндогенной интоксикации.

В последнее время в арсенале компонентов плазмы крови большого внимания заслуживают вещества, объединяемые под общим названием молекул средней массы (МСМ). Предполагается, что с увеличением концентрации последних сопряжено развитие таких патологических состояний как нейропатия, дистрофия, анорексия, им-муннодепрессия и другие, многие из которых являются характерными и для новообразовательного процесса. Следовательно,изучение состояния МСМ у онкопроктологических больных, с целью раннего выявления послеоперационной эндогенной интоксикации представляется крайне важным и актуальным (Владыка A.C., Беляков H.A. и др., 1986; Габриелян Н.И., Дмитриев A.A. и др., 1985).

Проблемы противоопухолевого иммунитета связаны с оптимизацией методов диагностики и терапии онкологических заболеваний.

В настоящее время без сомнения иммунносистемам отводится решающая роль в борьбе со злокачественными новообразованиями, хотя и вопросы иммуннотерапии опухолевых заболеваний, несмотря на значительный успех в экспериментальных условиях до сих пор решаются эмпирически. Многообещающим направлением в повышении неспецифической резистентности организма, стимуляции иммунной системы является направленное использование иммунностимулято-ров биологического происхождения, среди которых наиболее перспективными представляются препараты низкомолекулярных РНК,обладающие широким спектром биологического действия (Зеысков A.M., 1988; Земсков А.М., Передерий В.Г. и др., 1982; Захарян P.A., Месропян Н.П. и др., 1985).

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы заключается в разработке и совершенствовании методов ранней диагностики опухолевых заболеваний толстой кишки, изучении особенностей возникновения и развития метастазов и рецвдивов заболевания, эндогенной интоксикации в до- и послеоперационном периоде, иммуннокоррекции и повышении неспецифической резистентности больных, оперированных по поводу аденокарциномы толстой кишки.

Задачи настоящего исследования состоят в изучении при новообразованиях толстой кишки:

1) изменений активности ферментных реакций тканевого метаболизма в диагностике опухолей толстой кишки и ранного выявления процесса метастазирования в печени;

2) глубины и тяжести поражения толстой кишки на основании изменений внутриклеточного содержания циклических нуклеотидов;

3) баланса молекул средней массы для определения истинной степени тяжести патологического процесса на фоне развития до

и послеоперационных осложнений;

4) общепринятых и нетрадиционных параметров эндогенной интоксикации с целью прогнозирования и установления возможных биохимических критериев адекватности проводимой детоксикацион-ной терапии;

5) трансформирующей активности человеческой опухолевой ДНК при введении ее экспериментальным животным. С помощью ДНК из опухоли человека разработать экспериментальную модель опухоли толстой кишки в животных;

6) биостимуляторов типа низкомолекулярных РНК (дсРНК и нуклеина? натрия) в форме кальциевых преципитатов, введенных эцдо-лимфатическим путем. Провести иммуннокоррекцию и повысить неспецифическую противоопухолевую резистентность больных, оперированных по поводу аденокарциномы толстой кишки.

Научная новизна проблемы. Внедрение в клиническую практику последних достижений биохимии и молекулярной биологии, основанных на изучении взаимодействия биологических макромолекул и нарушений звеньев единого механизма регулирования биохимических процессов жизнедеятельности организма является новым этапом в диагностике, профилактике и лечении различных патологических состояний. Опухолевый процесс в организме характеризуется коренным извращением реакций тканевого метаболизма, глубиной изменений систем клеточно-гуморального иммунитета. С отмеченной точки зрения изучение активности ферментов и их изоформ является исключительно важным и требующим неустанного совершенствования в направлении изыскания путей по отбору некоторых из них в качестве так называемых биологических маркеров опухолевого роста ( Lange Р. , Winfield Н. ,1987; Schwartz М. ,1987;

Silverman ь. . Dermer et ai. ,1979). Особенности ферментативных реакций, характерных для злокачественных опухолей, широко используются в целях выявления первичных опухолей, метастазов и рецидивов заболевания. Одним из существенных диагностических показателей опухолевой прогрессии в толстой кишке является фактор перерасцределения активности изоферментного состава ряда ферментов, участвующих, в частности, в процессах энергоснабжения и гликолиза, они могут оказаться эффективными в целях дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных опухолей, что к сожалению практически не используется в лечении и профилактике опухолевых поражений толстой кишки.

Известно, что развитие новообразований сопровоадается выраженным повышением тканевых катаболических реакций, в частности, глубокими сдвигами в углеводном обмене, что зачастую приводит к накоплению в крови токсинов (Владыка A.C.., Левицкий Э.Р. и др., 1987), являющихся причиной развития в организме явлений эндогенной интоксикации, вызываемой, как было установлено в последние года группой неядентифицированных токсических веществ

белковой природа, именуемых МШ (Глинский Г.В., Николаев В.Г. и др., 1980; Короткий В.Н., Василинчук В.В. и др., 1988).

В настоящее время четко определена роль этих соединений, выступающих в качестве критерия эндогенной интоксикации при различных патологических состояниях и факторов прогнозирования возникновения и развития эндотоксикозов. К сожалению до сих пор мы не располагаем убедительной информацией о состоянии вопроса касающегося эндотоксикозов при опухолевых заболеваниях толстой кишки, в особенности в послеоперационном периоде.

Нет сомнений, что дальнейший прогресс в клинической онкологии возможен лишь при серьезном развитии исследований в направлении изучения процессов опухолевого роста, при обстоятельной разработке новых подходов к ранней диагностике опухолей и совершенствовании существующих методов лечения. Следовательно, совершенно очевидна необходимость в воспроизведении соответствующих экспериментальных моделей опухолевого роста на уровне организма. Имеющиеся на сегодняшний день способы моделирования рака толстой кишки, достигаемые с помощью различных физико-химических канцерогенов (СоЪЪ R. , Yartell p. et al. .1987; Sshioka т. ,1985), имеют к существенные недостатки. Так, например, экспериментально воспроизведенные опухоли часто оказываются мультвдентричннш, вызывая развитие опухолевого роста в других органах. Поэтому следует считать ценным вкладом в экспериментальную онкологию создание модели опухоли толстой кишки животных без сопутствующего его развития в других органах.

Учитывая вышесказанное, нам представлялось целесообразным для разработки методов ранней диагностики опухолевого роста и процесса метастазирований, а также иммуннокоррекции и усиления неспецифической противоопухолевой резистентности организма изучить биохимические, молекулярно-бисдогические и иммунологические параметры у больных о опухолевой патологией толстой кишки.

Практическая ценность. Метода определения активности КК, ЩФ и КФ, ГК, ГГГП отличаются высокой степенью чувствительности и воспроизводимости для ранней диагностики опухолевых заболеваний толстой кишки и развития процесса метастазирования в печени, что в процентном отношении максимально совпадает о данными ультразвукового исследования, как это например почти в 85$? слу-

чаев при выявлении метастазов прослеживается., в отношении щелочной фосфатазы и гамма-глютамилтранспептидазы. Согласно.имеющимся указаниям MCLI являются более чувствительными и могут служить . в качестве объективных критериев развития эндотоксикозов по сравнению с признанными в клинической практике. '

Разработка экспериментальных моделей опухолей толстой кишки служит эффективному проведению наблюдений над отклонениями биохимического молекулярно-биологического, иммунологического профиля в процессе развития и генерализации новообразований

in vivo , а также изучению особенностей влияния терапевтических средств на процесс роста опухали в толстой кишке на организ-менном уровне.

Применение иммуннокоррегирующих методов лечения больных с опухолевой патологией толстой кишки при помощи эндслимфатичес-кого введения природных биостимуляторов способствует повышению неспецифической резистентности организма, положительно влияющему на отдаленные результаты лечения.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на: научно-практических конференциях и ученых советах НИИ проктологии МЗ РА, НИИ молекулярной биологии АН Армении (Ереван, 1986-1992), научной конференции по результатам НИР мевдуведом-ственной программы 1ЛЗ и АН РА (Ереван, 1985), 2-ой республиканской конференции по проблемам физико-химической биологии (Ереван, 1986), юбилейной научной конференции Ереванского зооветеринарного института (Ереван, 1987), Всесоюзном симпозиуме "Анаэробная не клос тридиаль ная инфекция в гнойной хирургии" (Терно-поль, 1989), Всероссийском съезде хирургов "Актуальные вопросы абдоминальной хирургии" (Ленинград, 1989), научно-практической конференции "Актуальные вопросы проктологии" (Алма-Ата - Талды-Курган, 1989). European Council of Coloproctology, (Berlin, DDR, 1990).

Работа апробирована на совместном заседании ученого совета НИИ проктологии МЗ РА и молекулярной биологии АН РА 31 июля 1992 г.

Публикации. По теме диссертации опубликованы 42 работы, получено I авторское свидетельство СССР на изобретение и 10 удостоверений на рационализаторское предложение.

Объем и.структура диссертации. Диссертация изложена на

страницах машинописи, состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, практических рекомендаций, выводов и библиографического указателя, включающего /УЗ отечественных и /¿3 иностранных авторов: содержит таблиц и /8 рисунков.

Основные положения, выносимые на защиту :

- на основе определения активности креатинкиназы, гексоки-назы, кислой фосфатазы, изоферментов креатинкиназы в плазме крови и тканях можно судить о состоянии опухолевого роста в толстой кишке и разработать методические подхода по проведению дифференциальной диагностики злокачественных и доброкачественных новообразований толстой кишки;

- с помощью определения активности щелочной фосфатазы и гаммаглютамилтранспептидазн можно диагностировать развитие процессов метастазирования опухоли в печени больных о злокачественными новообразованиями толстой кишки;

- характеристика количественных изменений ЫСМ может служить важным диагностическим и прогностическим критерием развивающегося синдрома эндогенной интоксикации;

- разработка экспериментальной модели опухоли толстой кишки человека у животных 1п раскрывает новые перспективы к расширению и совершенствованию исследований по биохимии, молекулярной биологии и иммунологии опухолевого роста, а также повышению уровня исследований в направлении изучения механизмов действия различных препаратов на развитие опухолевого процесса на организменном уровне;

- использование иммунномодуляторов типа низкомолекулярных РНК, введенных эндсшшфатическш путем в форме кальциевых преципитатов будет способствовать повышению уровня не специфической противоопухолевой резистентности организма и оптимизации отдаленных результатов лечения больных после предпринятого хирургического вмешательства.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Для решения поставленных задач исследовали: I) сыворотку и плазму крови 1237 больных,

мужчин и женщин в возрасте от 20 до 80 лет, из коих 1074 со злокачественными новообразованиями толстой кшки различной локализации, 163 с аденомами толстой кшки; 2) опухолевую ткань с участками визуально неизмененной слизистой резицированной толстой кишки на возможно отдаленном от пораженной слизистой расстоянии. В качестве контрольной группы исследовали кровь 55 практически здоровых лвдей.

Диагнозы заболеваний подтверждены рентгенологическими,эндоскопическими исследованиями и верифицированы морфологически.

Активности КК, и Кф, Ж, ГГТП в сыворотке крови и гомо-генатах опухолевой ткани определяли с помощью наборов фирм "Лабсистемс" (Финляндия) и "Ла-Хема" (Чехословакия) в биохимическом анализаторе ФП-901. Единицы измерения в сыворотке крови для всех ферментов (за исключением ГК) выражали в Е/л и мккат/г ткани - в тканях, активность ГК определяли в ME в сыворотке крови и МЕ/г ткани.

Концентрацию циклических нуклеотвдов (цАМФ и ц1МФ) в плазме крови и ткани определяли методом конкуретного изотопного связывания при помощи реагентов фирмы " Amershsm " (Англия): 3H-Cycli с AMP-Kit ; 3H-Cycli с j MP IA - Kit . Концентрацию цАМФ и цШФ выражали в пмоль/мл или пмоль/г ткани.

Количество МСМ в плазме крови определяли методом скрининга, описанным Габриелян Н.И. и соавт. (1985) и основанным на осаждении белков плазмы крови 10$? трихлоруксуской кислотой с последующим центрифугированием и спектрофотометрированием при длине волны 280 нм. Уровень МШ выражали в условных единицах оптической плотности - У.Е.

ЛИИ - лейкоцитарный индекс интоксикации и ЯИ - ядерный индекс интоксикации определяли по формулам, предложенным Рейс Б.А. с соавт. (1986) и Даштаянц Г.А. (1978).

Определение концентрации креатинина, мочевины, в сыворотке крови проводили при помощи наборов фирм "Лабсистемс" и "Ла-Хема" в биохимическом анализаторе ФП-901, согласно методическим ука-_ заниям.

Эндолимфатическое введение иммунноетимуляторов типа низкомолекулярных РНК осуществляли по описанному ранее методу (Пан-ченков Р.Т., Выренков D.B., 1984).

Концентрацию иммунноглобулинов в крови определяли по методу Фримель Г.И., 1987. Количество иммунноглобулинов выражали в мг/мл.

Экспериментальная часть. Для изучения биологической активности ДНК, выделенной из опухоли толстой кишки человека использовали 200 беспородных белых крыс. Для исключения токсического действия фенола на организм животных производили очистку препаратов ДНК хлороформом, уровень которой определяли по соотношению е260/Е280 Р333110^ 330 всех случаях 2,0. В качестве контроля использовали коммерческую ДНК из селезенки крупного рогатого скота, предварительно подвергнутую дополнительной очистке хлороформом, и ДНК, вцделенную из лейкоцитов донорской крови.

Двуспиральную РНК (дсРНК) и яуклеияат натрия вводили животным в виде кальциевых преципитатов (Са - дсРНК), полученных по методу ¿гасЬет е. , Уеп<3ег бъ. . Кальциевый преципитат дсРНК - Са - дсРНК - вводили внутрибрюшинно в дозе 50 мкг/ на крысу ', кальциевый преципитат нуклеината натрия - Са -РНК - вводили в дозе 50 мг/ на крысу.

Статистическая обработка результатов проводилась методом вариационной статистики с использованием критерия Стьодента (Рокяцкий Л.Ф., 1961).

Результаты исследований и их обсуждение. Происходящая при опухолевых поражениях значительная перестройка клеточных метаболических процессов зачастую используется при выборе .маркеров предопухолевых и опухолевых клеток, а также в качестве специфичных и неспецифичных тестов дога проведения диагностики и прогнозирования опухолевых заболеваний.

Одним из важнейших катализаторов реакций тканевого метаболизма, ответственным за нормальное функционирование организма в целом является ферментная система, малейшие отклонения в различных звеньях которой сопровождаются возникновением, развитием и генерализацией патологического процесса. Для выяснения роли ферментов в диагностике опухолевых заболеваний толстой кишки нами бала изучена активность КК, Щ и КФ, ПТП, 1К в сыворотке крови и тканях больных с новообразованиями толстой кишки.

При изучении активности тотальной КК обнаружено значите^ ное повышение ее активности в крови больных п атопгмшг"'—

и аденомами толсто! кишки различной локализации. Примечательна полная корреляция изменений активности КК с клиническим течением заболевания. Так, например, если после полипэктомии активность КК восстанавливается полностью до нормальных значений,то этого не наблюдается после резекции толстой кишки по поводу аденокарциномы, когда активность этого фермента продолжает оставаться высокой в течение всего периода наблюдения, вплоть до выписки из стационара. Специфичность описанных расховдений ферментативной активности при отмеченных патологиях по всей вероятности заключается как в обширности поражения, так и выраженности метаболических нарушений энергетического обмена, наиболее интенсивно расстраивающегося при раковых поражениях организма.

В последнее время утвердилось мнение о важности изменений' не столько общей активности какого-то определенного фермента, сколько перераспределения активности его изоферментного состава, что, по-видимому, имеет существенное значение в современном понимании и объяснении ньюансов клинического течения изученной патологии. Изменения активности ряда ферментов и их изо-форм в крови и тканях во многих случаях оказываются чрезвычайно выраженными, указывая тем самым на возможность включения этих тестов в перечень конкретных показателей по диагностике опухс&евых заболеваний. На рис.1 и 2 представлены результаты исследований по изучению активности тотальной КК и ее изоформ в тканях толстой кишки, пораженных аденокарциномой и аденомами.

Как видно из представленного демонстрационного материала наиболее высокая степень активности тотальной КК определяется в аденомах с тяжелой дисплазией и в опухолях с низкой степенью дифференциации. Высокая активность РЖ определялась также в аденомах с умеренной степенью дисплазии и в незначительной степени при слабой выраженности процесса (легкая степень дисплазии) на фоне едва заметных морфологических изменений. В то же время в клетках аденокарциномы как при умеренной ,так и при высокой дифференциации наблюдается повышенная активность КК, что указывает на существование прямой зависимости между нею и генерализацией характерных для опухоли морфологических нарушений, определяющие характер оперативного вмешательства, методику послеоперационного ведения больных и особенности отдаленных резуль-

*ВЫСОКАЯ ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ

500- -

400 --

<

м 300 +

аоо -•

100"

УНЕРЕННЛЯ ДН?-ФЕРЕНЦИАЦИЯ

Я

1 |

ш

ш

ш

щ

ГУЛУ

НИЗКАЯ ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ

ф НЕИЗМЕНЕННАЯ СЛИЗИСТАЯ

В ТОТАЛЬНАЯ КК

ш кк-мв

кк-мм кк-вв

-Рис. I. Активность изоферментов креатинкиназы в опухолях толстой кишки.

400 --

£ эоо--

200 --

юо--

ЛЕГКАЯ ДИСПЛАЭИЯ

УМЕРЕННАЯ ДИСПЛАЗИЯ

Ш ТОТАЛЬНАЯ КК ЕЯ кк-мв

ТЯЖЕЛАЯ ДИСПЛАЗИЯ

Ш

I

1

^ НЕИЗМЕНЕННАЯ СЛИЗИСТАЯ

я кк-мм ^ кк-вв

ы

м

Рис.2. Активность изоферментов креатинкяназы в аденомах толстой кишки.

тате; лгчзи;^;.

lipü аиалязг агаазноогя изсформеитногс спектра КК в адено-ыях с рззной с то пот. зо дасгоюзш; установлены Физиологические ярйделп активности язофермента ММ, незначительнее увеличение ак-тазассл. ;:зо{.?>:.:?гггп MB, пе зависящее от степени выраженности днеau.Vviiчьсклх npcaccccB. В то ж вре;,:л во всех морфологических типах аденом обнаруживается резкое поышонпа уровня актив-«"«•»ч ^«»Vin.üMcöj.« ID 2 полис" лллфиятптвии прогрессированию патологического ириЦооей. ТЬрсрселргд®ленче внг«-иьной^2 ментного спектра КК с акцентированием в сторону изоформы ВВ наблюдалось и в тканях аденокарциномн особенно с низкой степенью клеточной дифференциации.

Полученнке нами данные перекликаются с данными литературы, сообщающими о высокой активности изофермента ВВ КК при опухолевых поражениях других органоз ( Barst is ъ. et ei. ,1981; <WUt . , vmsar T-. f-л гЛ. ,1979; Formaa D. ,1979).

Tü.tiC! oipsne«, саазсмкся очевадаш яарушеике соотношений vr.ioj..jüä;:; .у?-"гмонтами КГ"., характеризующееся пссерас-ачигвиостей при выраженном повшешш активности jracgcpwsiww ВБ, что пс-вцдшому, является универсальным признаком 3viOKC'iccTiJ'-'s;!.c.'iV перерождения тканей и следовательно способного служить в качгстле биологического маркера процесса ма-лигнизации.

Для выяснения роли ГК в ранней диагностике опухолевых заболеваний толстой кишки были обследозанв кровь и ткани больных с остроккшечной (ОКИ) и чэстичнокишечной (ЧКН) непроходимостью на фоне аденокарциномы и аденомы толстой кишки. Весьма существенно отсутствие активности ГК в сыворотке крови практически здорсвих лиц (Монахов Н.К., Нейфах O.A. и др., 1973; Монахов Н.К., Нейитадт Э.Л. и др., 1978), в то время как в случаях опухолевых поражений толстой кшики она в ярко выраженной форме обнаруживается у больных с ОКН и ЧКН уже с первого дня госпитализации до оперативного вмешательства. Примечательно резкое падение активности фермента в сыворотке крови сразу же после удаления опухоли, а в последующем и полное исчезновение (табл. I). Описанная динамика обратного развития активности фермента коррелировала с клиническим течением заболевания как в доопера-

ционном, так и в послеоперационном периоде его развития.

Таблица I

Активность гексокиназы в крови больных со злокачественными опухолями толстой кишки в динамике заболевания

Сроки наблвде- Заболевание и активность гексокиназы

ния (недели) 1в МЕ)

ОКН (п = 18) ЧКН (п = 25) Опухоль без непроходимости

I 14,5+0,17 10,2+1,07 9,1+1,1

2 3,4+0,09 1,3+0,091 1,1+0,02

3 1,8+0,01 не определя- не определя-

ется ется

При изучении активности ГК в сыворотке крови больных с аденомами толстой кишки определены ее крайне низкие значения (1,0+0,05) в дооперационном периоде, не определяющиеся тут же после полипэктомии, указывая тем самым на слабую выраженность изменений со стороны клеточных структур и относительно благоприятное течение заболевания.

На рис.3 отражены результаты изучения активности ПС в ма-лигнизированных тканях толстой кишки в соответствии с их гисто-морфологической характеристикой. Полученные данные свидетельствуют о нарастании активности фермента по мере усугубления опухолевого роста, как при аденокарциномах, так и аденомах толстой кишки.

Полученные рззультаты позволяют заключить о важном диагнос-тическо-прогностическом значении ГК как ценного теста, позволяющего судить о выраженной интенсивности опухолевого роста. В связи с повышением при опухолевой патологии различных органов активности ГК этот тест не может считаться специфичным для новообразований толстой кишки, хотя в купе' с другими методами обследования он может быть информативным в раннем выявлении злокачественной прогрессии и выделении так называемой "группы риска".

зод. Опухоль

Аденома

•г

ш

1<Ч С!

ШШ высокая дифференциация Ш§ легкая дисплаэия 777/ умеренная дифференциация КЗ умеренная циспЛаэия ШЗ низкая дифференциация тяжелая дисплаэия

КЗ нормальная слизистая

Рис. 3. Активность гсксокинази при. спухолеъкх заболеваниях толстой кишки.

Известно, что в опухолевых клетках активность большинства мембраносвязэнных ферментов, осуществляющих транспорт веществ и определяющих состав клеточной поверхности и межклеточных взаимодействий, претерпевают существенные отклонения, хотя,как уже отмечалось выше лишь немногие из них могут быть показателями имеющих место особенностей злокачественного дерсровденкя. Значение некоторых из этих при опухолевой патологии толстой кшки очевидно, хотя и до сих пор не предпринимаются решительные шаги по определению, например, ЩФ и КФ в клинике онкопроктоло-гических заболеваний.

В наших исследованиях активность указанных ферментов в сыворотке крови больных изучали в сочетании с динамикой развития изученной патологии у больных с ОКН и ЧКН. Полученные результаты свидетельствуют о значительном повышении активности КФ у больных с ОКН, сохраняющемся в течение всего срока наблюдения. Нормальные значения ЩФ у этой группы больных являются . показателей вовлеченности печени в патологический процесс. В то ее время у больных с ЧКН отмечающееся повышение активности КФ оказывается незначительным с тенденцией к нормализации к концу срока наблюдения. Значения же ЩФ, как и при ОКН, оставались в пределах нормальных величин на протяжении всего срока наблюдения, что и позволяет однозначно оценить роль КФ как биологического маркера при опухолях толстой кишки. Изучение сдвигов активности КФ и ЩФ в самой опухолевой ткани привело нас к интересным выводам. Так, например, установлена коррелятивная связь ыезду частотой, уровнем повышения активности КФ и степенью дифференцирован опухолевой клетки. Далее показано,что повышение активности фермента сугубо специфично только для самой опухолевой ткани, о чем свидетельствует нормальный уровень ферментной активности слизистой изолированной на расстоянии 1015 см от края опухоли. Примечательно, что ни в опухолевой ткани, ей в рядом лежащей слизистой активность Щ не претерпевает сколько-нибудь заметных отклонений и не находится в зависимости от распространенности процесса . Таким образом, повышение активностей КФ вместе с КК и ГК может служить с одной стороны, маркером опухолевого роста и рецидива заболевания, с другой - определение колебаний в активности КФ может явиться объективный! кри—

терием в оценке проводимых лечебных мероприятий.

Несмотря на установленное нами отсутствие видимых изменений в активности II® как в сыворотке крови, так и в опухолевой ткани, ее определение оказалось крайне важным для раннего диагностирования метастазов в печени, ибо известно, что увеличение активности ЩФ в основном происходит при метастазировании в печени и развитии в ней первичных опухолей даже при наличии микрометастазов.

Имеются указания относительно существующей связи между ПТП и развитием метастазов в-печени (Горленко В.А., Филиппович Ю.В., 1979; Титов В.Н., Творогова М.Г., 1991), нашедшие свое подтверждение в результатах проведенных нами исследований. Согласно последним у всех больных с ОКН MTS ~ и ЧКН Mis ~ значения активности ЩЗ? и ГГШ определялись в пределе нормальных величин, в то время как у больных с онкопатологией толстой кишки,осложненной метастазами они оказались, согласно данным таблицы 2 достаточно высокими, при наличии в 85$ случаев полной корреляции между ними и данными ультразвукового обследования. Наблюдавшиеся при этом небольшие расхождения обусловлены наличием сопутствующих заболеваний печени и детектирующей способностью соногрэфа.

Таблица 2

Сравнительная характеристика методов биохимической

и инструментальной индикации метастазов в печени

Заболевание

Активность ферментов (Е/л) УЗЙ

ШФ

ггтп

1. Аденокашинома толстой кишки MTs - (п = 24)

2. Аденокарцинома толстой "■ = 21)

кишки MTS + (п 3. Д о н о р ы

236,8+1,80 Р «с оТо5

430,1+4,81 Р ^ 0,01

224,2+2,38

32,4+9,03 Р > 0,05 95,1+9,5 Р 0,05

25,2+9,3

MTS

MTS

MTS

Таким образом, определение активности Пф и ИГЛ может служить объективным критерием в раннем выявлении метастатического поражения печени, а определение уровней активностей всех

изученных биологических маркеров является ценным подспорьем,а в ряде случаев первостепенным и решающим фактором в ранней и дифференциальной диагностике, контролировании эффективности лечения, прогнозировании заболевания, выявлении рецидивов и метастазов у больных с опухолевой патологией толстой кишки.

Изменения активности ферментов и их изоферментного состава в малигнизированных тканях могут рассматриваться как одно из ранних проявлений начинающего неопластического роста при заболеваниях толстой кишки и как объективный показатель в проведении сравнительной оценки состояния ферментной активности при изученной патологии, как это отражено в табл.3.

Известна регуляторная роль циклических нуклеотвдов (Щ) в реакциях клеточного метаболизма их значение в качестве уникальных и универсальных стимуляторов клеточной активности. Изменение систем ЦН сопряжено с многочисленными системами регуляции процессов пролиферации и нормальной дифференциации клетки, а также нарушениями этих процессов в трансформированной клетке.

Внутриклеточное содержание ЦН изменчиво в зависимости от характера патологического процесса и наиболее уязвимо при злокачественных новообразованиях. В связи с отсутствием более или менее совершенной информации относительно природы количественных изменений ЦН в крови и тканях больных с опухолевыми заболеваниями толстой кишки, а также разноречивостью имеющихся сведений представлялось целесообразным изучить изменения внутриклеточного содержания ЦН у больных с аденомами и аденокарциномами толстой кишки.

Как явствует из данных таблицы 4, на ранних стадиях обследования в крови больных с опухолями толстой кишки отмечается снижение количества цАМФ и повышение уровня цГМФ с уменьшением коэффициента количественного соотношения ЦН у больных почтя в 3,5 раза, что по мнению ряда исследователей (Бернштейн Л.М., 1982; Бернштейн 1.М., Ковалева И.Г. и др., 1985) является более информативным в выяснении степени тяжести заболевания, обеспечении четкости диагностики, по сравнению с данными по каждому нуклеотиду в отдельности.

Согласно нашим давдым, аналогичные сдвиги по изучению динамики нарушения содержания ЦН прослеживались и в плазме крови

Tai л г да Г

Сравнительная оценка активностей ферментов при новообразованиях толстой гля.ки.

Заболевание

Биохимические показатели

1. Аденокарцинома

2. Аденома

3. Доноры

КФ К(Е/л)

КФ (Е/л)

244,6+6,1 214,8+8,2 119,0+24,2

11,6+0,9 8,50+1,03 г; ,63+1,3

га (е/л)

ГКТП (Е/л) ГК (ME)

193,3+8,6 188,0+4,2 197,7+9,0

32,7+1,22 22,4+1,07 25,2+0,3

12,3+0,89 2,6+0,12 не

определяется

I

Таблица 4

Содержание ЦН в плазме крови больных с опухолями толстой кишки ,

Показатели (пмоль/шс) Норма (п = 45) J \денока£Ци^ома Аденома 4 Тп = 26)

цАМФ 25,3+1,24 15,5±1,24 К,2±1,46

цШФ 3,07+0,46 * ' 5,86*0,53 7,11+0,83

цАМФ/цГМФ 8,24+2,6 2,80+2,34 2,30+1,75

Р < 0,001

больных с опухолевой патологией толстой кишки, сохраняясь в течение трех недель и в послеоперационном периоде, проявляя затем тенденцию к нормализации»

Изучение концентрации Щ у больных с аденомами толстой кишки в динамике наблюдения показало полное восстановление содержания цн сразу же после полипэктоыии. Полученные данные подтверждают; предположение о том, что изменение количественного баланса циклических нуклеотвдов и их соотношения в крови больных, характеризует глубину нарушения реакций тканевого метаболизма при опухолевых заболеваниях и могут служить индикатором эффективности проводимой терапии.

Значение изменений содержания циклических нуклеотвдов при развитии злокачественных процессов в толстой кишке остается до конца не изученной. С' целью определения возможной диагностической роли изменений содержания ЦН при развитии злокачественных новообразований в опухолевой- ткани толстой кишки было определено содержание цАМФ и цШФ, оказавшееся наиболее демонстративными в отношении цАМФ в опухолях с низкой степенью дифференциации, в остальных случаях концентрация того же нуклеотида колебалась в пределах нормальных величин. Изучение содержания ВД I в клетках контрольной слизистой, выявило снижение концентрации; цАМФ при неизмененных значениях цШФ (рис.4). Такая же картина, наблвдается и при анализе коэффициента соотношений циклических нуклеотвдов; чем выраженнее морфологические признаки озлока-чествления, тем ниже показатель отношения нуклеотидов, следова-

ей С!

-1 и

•з X

lar:-

i

Ы

£н

к

---------,<

4----

tWW

ei

M

E-,

■■6 Л

•3

0

M

01

' ЧЧ, ^

il anJi'iitiiffiini-i

i ■ i í .,. i 11 í í 11 ; i и i í г ■ ; ■ ' f g -г

ta «

« Я

VM .it«

о » и я

>4 ? Од г-ч

о о

^^ГТГТТН

!'<.{{,hühJH'

н|||ф1||||н11нПН|]|||1м1нМП||Пн|Ь11111Н"Н|1Ь|Н1>1,||,||и1,,|,ц

t.jiH'' «|t»tjiijitt» ••>»»};< '-»i ' ■ m iff *>4f 1 í«4'l'4*4 'ЯМ'Ч ММЖЦ

о

еа

+— Л . ---U

о о о

40 «г (Ч

л

Г4

U

Я <

Я

К «

»

а ä

о

X

с о

о

6 3 А.

HHVHI'J/HVOwIi

тельно прослеживается существование прямой зависимости между степенью развития процесса новообразования и изменениями концентрации цАШ и величиной цАМФ и цАМФ/цШФ.

Одной из актуальных задач клинической медицины является разработка методов ранней диагностики синдрома эндогенной интоксикации, развитие которого, независимо от состояния основного процесса, определяется различными органными и системными поражениями, связанными с интенсификацией реакций катаболизма и блокадой детоксикационных систем организма.

Сегодня стало очевидным, что изменения общепринятых пока-' зателей эндогенной интоксикации, хотя и отражают особенности метаболических нарушений, однако не всегда находятся в соответствии с выраженностью клинического проявления эндотоксикоза. С этих позиций определенный интерес представляло исследование диагностической значимости ";1СМ дм больных с толстокишечной непроходимостью, обусловленной наличием опухоли.

Анализ данных клинического и клинико-биохимического обследования, полученных у онкопроктологяческих больных обнаружил повышенный уровень ЫШ у группы больных с ЧКН на фоне неизмененных значений показателей интоксикации (мочевина, креатинин, ЛИИ, ЯИ). Этот сдвиг свидетельствует о наступлении выраженных изменений обменных процессов вне зависимости от типа непроходимости и о более высокой степени чувствительности теста МС1.1 по сравнению с традиционными, при выявлении процесса развивающейся эндогенной интоксикации. Изучение этого показателя представляло особый интерес в послеоперационном периоде, когда уже в первые сутки отмечалось резкое увеличение количества МСГЛ, достигавшее своего максимума на 3-4 сутки с последующим некоторым его снижением к 7-8 суткам. Из таблицы 5 видно, что уровень МОД в отличие от концентрации мочевины и креатинина,возрастает уже до развитии клинических синдромов интоксикации, продолжая, оставаться в пределах значительно высоких величин даже после проведения детоксикационной терапии. Положительный же ответ традиционных показателей выявляется одновременно с развитием клинических симптомов эндогенной интоксикации.

Таким образом, определение уровня МШ является объективным критерием в оценке степени эндотоксикоза как в дооперацирн-ном, так и в раннем послеоперационном периоде. 4

"аблзда 5

Динамика биохимических показателен эндогенной интоксикации у больных о осложненные течением послеоперационного периода

Показатели Контроль До развития кли- Развитие кли- Поеле проведения

нических симпто- наческих догоксикационной

мов симптомов терапии

МШ (У.Е.) 0,246+0,018 0,433+0,32 0,549+0,32 0,384+0,021

МочевинаN 7,38+0,11 7,ЗЭ ИЗ,09х 13,8+0,93 8,1+0,08

(ммоль/л) "" - -

Креатинин 123,2+2,95 122+2,2х Г57,0+11,4 1:32, J+10,9х г

(мкмоль/л) ~~ ~

со

Р< 0,01

Биохимическая активность человеческой опухолевой ДНК была изучена в экспериментах по введению ее беспородным ла бора торны:.! крысам. Она была выделена из опухоли толстой кижи резецированной по поводу аденокарциномы толстой кишки человека.

Начиная с 4-5 недели после введения препарата опухолевой ДНК животным выявлено некоторое уплотнение стенки толстой кишки, увеличение и уплотнение лимфоузлов в брыжейке, прилегающей к толстой кишке. Слизистая оболочка толстой кишки имела серо-розовый цвет, гладкую поверхность и участки уплотнения на веек протяжении толстой кишки в ввде образований, выступавших над поверхностью слизистой, округлой формы. Стенки толстой кишки демонстрировали картину выраженного воспаления, охватывавшее все ее слои с вовлечением в состав инфильтрации лимфоцитов, плазмоцитов и сегментоядерных лейкоцитов. В собственно слизистой оболочке обнаруживалось нарушение архитектоники желез, удлинение крипт, криптальный эпителий в состоянии пролиферации. При гистологическом исследовании уплотненных участков слизистой оболочки выявлена картина аденоматоза с выраженной пролиферацией эпителия, признаки легкой и умеренной атипии эпителиоцитов некоторых железистых структур, увеличение количества близко расположенных друг к другу желез, соединительнотканная строма которых выглядит в виде узких прослоек.

Гистологическая картина слизистой оболочки толстой кшки животных контрольной группы, получивших ДНК из селезенки крупного рогатого скота и донорской крови человека сохраняла свое нормальное строение.

При изучении динамики процессов пролиферации исследовали состояние слизистой оболочки толстой кишки (СОТК) в сроки 8-10 недель. У крыс опытной группы мевду петлями тонкой и толстой кишки утолщенные фиброзные тяжи. При макроскопическом изучении во всех отделах слизистой толстой кишки выявлены выступающие полиповидные образования с гладкой поверхностью, представляющие собой аденомы тубулярного строения. В-очагах уплотнения обнаруживаются аденомы плоского типа с признаками легкой дисшгазпи.

Макроскопически изменения, обнаруживаемые в течение 10-12 недель после введения опухолевой ДНК оказались. идентичней тем, что развиваются в интервале 8-10 недель. В то же время изучение

морфологических нарушений выявило факт вирагенной атипии в полипах и особенно в некоторых случаях тубулярной аденомы, с четко проявляющимся расстройством железистой архитектоники, дефор-мированностыо структур и состояние интенсивной пролиферации эпителия, интенсификацией процессов митоза в том числе патологических.

Как известно, транспорт гена в клеткь млекопитающих путем введения чужеродной ДЕК сопровождается его интеграцией в геном хозяина, экспрессией, стабильно наследуемым изменением в фенотипе реципиентных клеток, известным как процесс ДНК-опосредованной трансформации клеток.

В настоящем исследовании перенос гена был осуществлен в составе ДНК-Са-микропрегцптитата. Активность ДНК, выделенной из аденокарциномы толстой кишки человека, проявлялась индукцией неопластических изменений в СОТК яквотных. Можно предположить, что в данном случае, введенная аявлтным з/бр человеческая опухолевая ДНК могла попасть и в клетки других органов брюшной полости, но проявить свою трансформирующую активность была способна только в гомологичных гистологических структурах.

В этом варианте в клетках толстой кишки крысы могла произойти интеграция и экспрессия онкогенов человека, способных активировать онкоген толстой кишки крысы. Ответ на этот вопрос был получен после гибридизационного анализа по Саузерну ( Southern j. 1975 ). Была использована ДНК

из трансформированных клеток слизистой оболочки толстой кишки крыс. В качестве зонда гибридизации применял^ Alu -фрагмент ДНК. Alu -повторы - это последовательности человеческой ДНК.

Анализ гибридизационных данных показал,; что ДНК, выделенная из слизистой оболочки крысы с индуцированными неопластическими измене ниши, в отличие от контрольной, .содержат в своем составе нуклеотвдные последовательности, гибридазувдиеся с Alu -последовательностями человека, что предполагает возможную интеграцию фрагментов ДНК человека в геном трансформированных клеток животного. ,

Проведенные исследования и анализ полученных результатов позволяют заключить о возможности создания модели опухоли толс-гой кишки человека in vivo при помощи введения ДНК из адено-

карциномы толстой кишки человека беспородным лабораторным кры- • сам.

Созданная модель позволила изучить влияние иммунномодуля-торов типа низкомолекулярных РНК на развитие опухолевого процесса в толстой кишке. С этой целью препараты двуспиральной РЖ (дсРНК) и нуклеината натрия (РНК в виде кальциевых преципитатов вводили животным через 6 недель после инъекции опухолевой ДНК, т.е. к моменту развития морфологических изменений в толстой кишке крыс. Результаты гистологического изучения слизистой оболочки толстой кишки крыс, приведенные в табл.6, свидетельствует об отсутствии в СОТК крыс, получивших однократно Са-дсРНК, особых морфологических сдвигов по сравнению с контрольными "нелечеиными" животными. В отличие от этого в слизистой оболочке крыс»получивших двукратные инъекции Са-дсРНК, совершаются определенные регрессивные -изменения процессов неоплазии. В эти же сроки у контрольных животных определялись признаки клеточной и тканевой атипии. У животных получивших Са-НН двукратно, морфологически определялась аденома с признаками тяжелой дисплазии. Морфологическое изучение слизистой толстой кишки крыс, получивших Са-дсРНК трехкратно выявило пролиферацию эпителия, сужение межкрип-тальных перегородок, тогда как в слизистой оболочке животных, получивших Са-НН и контрольных "нелеченннх" выявлялась тубуляр-г ная аденома с признаками тяжелой дисплазии (табл.6)»

Полученные данные позволяют судить о выраженном положительном противоопухолевом действии препарата Са-дсШК.

Проблемы противоопухолевого иммунитета связаны с оптимиза-?. цией методов диагностики и терапии онкологических заболеваний, а также разработкой мер иммуннопрофилактики. Вопросы иммунноте-рапии опухолевых заболеваний, несмотря на значительный прогресс в экспериментальных исследованиях, решаются эмпирически.

С целью выяснения влияния иммунномодуляторов на иммунную систему бальных со злокачественными новообразованиями толстой кишки, последним эндолимфатически вводили кальциевые преципитаты дсРНК и СаРНК однократно в Дооперационном и трехкратно в послеоперационном периоде. Результаты этих исследований суммированы в таблице 7, из которой следует, что у бальных леченных в до- и послеоперационном периоде традиционными методами отмечается вы-

Таблица 6

Влияние кальциевых преципитатов дсРНК и нуклеината натрия на развитие неопластических изменений в слизистой оболочке толстой кишки крыс

Кратность введения Воздействие Гистологическое заключение

1-кратное дсРНК Светлоклеточйая аденома

НН Тубулярная аденома с углублением процессов анаплазии

П-кратное дсРНК Очаговая гиперплазия эпителия с повышенной функцией бокаловидных клеток

Ш Тубулярная аденома с признаками тяжелой дисплазии

Ш-кратное дсРНК Пролиферация эпителия, в криптах сужение межкрип-тальных перегородок

НН Тубулярная аденома с тяжелой дисплазией и ослизне-нием

Контроль без препаратов Т до начала лечения) Тубулярная аденома с признаками тяжелой дисплазии

Таблица 7

Влияние кальциевых преципитатов РНК на коррекцию иммунного ответа больных с опухолевой патологией толстой кишки

Показатели Группы больных и сроки наблюдения

1-ая груша (п = Г7) 2-ая группа (п = 10) я_я группа (п = 14)

(контроль) (Са РНК) (Са - дсРНК)

до операции после операции до операции после one- до операции после опера-

рации ции

Т-лимфоциты 45,6+1,2 52,4^,97 43,5+2,3 51,6+1,07 57,8+2,03 58,3+1,74

{%) Р^ 0,01 Р<г 0,001 Р< 0,01 Р< 0,02 Р < 0,05 Р< 0,01

ИгА мг/мл 1,07+0,12 1,82+0,09 1,46+0,12 1,70+1,02 1,99+0,13 2,12+1,03

Р < 0,01 Р< 0,01 Р< 0,05 Р< 0,001 Р< 0,02 Р> 0,05

ИгМ мг/мл 0,59+0,04 0,79+0,04 0,71±0,1 0,83^0,22 0,75+0,19 1,1+0,02

Р ->0,02 Р< 0,01 Р ^0,01 Р> 0,05 ?< 0,01 Р <"*0,02

ИгГ мг/мл 5,81+0,19 8,81*0,27 6,65+0,21. 8,21+0,33 9,15+1,24 10,2^1,5

Р^ 0,05 Р< 0,01 Р<с 0,001 Р<; 0,01 Р< 0,01 Р<. 0,05

Нормальные значения: Т-лимфоциты - 50-60$ ИгМ - 0,8-1,0

ИгА - 2,0-2,2 ИгГ - 9 - II

рзпзгпсо ксдавяеяие иммунной системы, подавлена в 1,5-2,0 раза ...-пг,,показателей иммунного ответа, восстановление которой в послеоперационном периоде протечет медленно, не дсочконтрольных значений. В то же зрг.ма у больных получивших эндолимфатическим путем кальциевые пр^-илаты ИК, отасча-стоь ¿--.-.ггрсо восстановление показателей ¡кэнного ответа,более у больных, получивших Са-дсРШ'..

Таким обрччом,. прс^едгпн^з люслед«'»-^»»» показал: БСо^ожниотъ ¿¿¿жжиючия негаезтелей ¿ктяенооти ряда ферментов для ранней диагностики опухолевого роста в толстой кишке, прогнозирования развития метастазов в печени и эндогенной интоксикации, совершенствования методов дифференциальной диагностики злокачественных и доброкачественных новообразований толстой кишки и проведения возможности иммуннокоррекции по улучшению отдаленных результатов лечения иммуномодуляторами типа кальциевых преципитатов низкомолекулярных РНК.

1. Повышение активности креотЕНКИназв, гекссштьезы и :а:слой •Тосфатазхг позволяет в подавлякадсм большинстие случаев рассматривать кх в качестве дившостических ааркеров развдтш. опухолей в толстой кишке.

2. Перераспределение изоферментного состава креаткнкппазы с повышением активности ее взофорны служит прогностическом признаком процесса озлокачествления аденом толстой кишки.

3. Высокая активность щелочной фосфатазы и гамма-глютамял-транспептидазы в сыворотке крови больных со злокачественными новообразованиями толстой кишки в более чем Ъ0% случаев является объективным критерием раннего распознавания метастазов з печени.

4. Уровень молекул средней массы в плазме крови служит .маркером в ранней диагностике развития синдрома эндогенной интоксикации у больных раком толстой кишки, осложненным частичной и острой кишечной непроходимостью.

5. ДНК из аденокарциномы толстой кишки человека обладает выраженной биологической активностью in vivo , вызывая развитие неопластических изменений в слизистой оболочке толстой кишки

экспериментальных животных.

6. При введении экспериментальным животным иммунномодулято-ров типа кальциевых преципитатов низкомолекулярных РНК отмечается регрессия индуцированных неопластических изменений.

7. 'Эндолимфатические введения Са-дсРНК и Са-РНК в до- и послеоперационном периоде способствует восстановлению иммунного статуса, повышению неспецифической противоопухолевой резистентности организма у больных, оперированных по поводу аденокарцино-мы толстой кишки.

8. Полученные результаты служат объективным стимулом для рекомендации к неотлагательному включению в комплекс диагности-ческо-прогностических маркеров онкологической практики определение динамики активности креатинкиназы, гексокиназы, кислой и щелочной фосфатазы, гамма-глютамялтранспептадазы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При помощи определения активности КК, ГК, КФ, Щи ГГТП можно проводить раннюю диагностику опухолевого роста в толстой кишке, а также выявление метастазов и рецидивов заболевания в ранних сроках до специального инструментального обследования.

2. Путем определения уровня молекул средней массы диагностировать развитие эндогенной интоксикации в послеоперационном периоде, опережая клинические проявления симптомов интоксикации.

3. Модель опухоли толстой кишки человека в экспериментальных животных, полученная при помощи ДНК из аденокарциномы толстой кишки человека, позволяет проводить многосторонние эксперименты по изучению особенностей опухолевого роста в толстой кишке, влиянию различных препаратов на его течение, лечение и профилактику.

4. Использование иммунномодуляторов типа низкомолекулярных РНК в форме кальциевых преципитатов приводит к восстановлению подавленных реакций иммунитета, повышению неспецифической противоопухолевой резистентности организма больных с опухолевой патологией толстой кишки.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Циркулярные ДНК из iure ток опухоли саркомы-45 крыс //Бологический журнал Армении, 1979, 4, 320-325 (соавторы Заха-рян P.A., Дашинян O.A., Исраелян Ю.А.).

2. ДНК из субклеточных фракций трансплантированной саркомы 45 крыс //Вопросы онкологии, 1980, I, 97-S3 (соавторы Захарян P.A., Степанян Г.1Л., Исраелян Ю.А.).

3. Биологическая активность препаратов экзогенных ДНК //Биолог.ж.Армении, 1981, 10, 1032-1036 (соавторы Захарян P.A., Бахчиева Г.С., Гаспарян Э.Т.).

4. Характеристика двуспиральных РНК, выделенных из препарата нуклеината натрия //Докл.АН АрмССР, 1983, 5, 228-231 (соавторы Казанчян А.Ф,, Сафарян A.C., Гапустян 1.1.Г., Татьян М.В., Казарян К.А., Захарян P.A.).

5. Влияние плацентарных нуклелюшх кислот на состояние агрегации тромбоцитов //Докл.АН АрмССР, 1984 , 3, 140-144 (соавторы Канецян М.Г., Амроян Э.А., Захарян P.A., Чарчоглян A.A., Акопян Ж.И., Габриелян Э.С.).

6. дцРНК, как стимулятор пейсмекерной активности метки //Докл.АН СССР, 1985, 6, 1499-1503 (соавторы Айрапетян С.Н., Захарян P.A., Рычков Г.Е., Дадалян С.С.. Вакунц И=Сс),

7. Противоопухолевая активность Са-двуспиральной РНК из препарата нуклеината натрия //Экспериментальная онкология,1985, 3,54-56 (соавторы Захарян P.A., Несропян Н.П., Мовсесян A.B., Акопян Е.П.).

8. Действие двухцепочечной РНК на мембранные процессы пейс-мекерного нейрона //Нейрохимия, 1986, 5, 239-247 (соавторы Захарян P.A., Рычков P.E., Дадалян С.С., Бакунц И.О., Рухкян I.A., Айрапетян С.Н.).

9. О влиянии экзогенной ДНК на судорожную активность //Биологические науки, 1986, 12, 50-53 (соавторы Ханбабян М.В., Захарян P.A., Айрапетян СЛ., Саркисян Р.Ш., Сулейманян М.А.).

10. Противосудорожное действие пула нуклеиновых кислот плаценты человека //Вопр.мед.химии, 1986 , 3 , 217 (Пароникян Р.Г., Захарян P.A., Галстян Г.Г., Акопян Н.Е., Акопян Ж.И.).

11. Изучение активности креатинкиназы при некоторых прок-

гологических заболеваниях //Докл.АН АрмССР, 1986 , 5 , 2II-2I3 (соавторы Макарян А.П., Акопян A.A., Элоян Д.В., Агавелян A.M., Назаров Л.У.).

12. Биологическая активность ДНК из опухолей человека //Докл.АН АрмССР, 1987, 4, 179-183 (соавторы Давтян О.Я., Баг-дасарянА.А., ЗахарянР.А., Рухкян Л.А.).

13. Биохимическая индикация воспалительных и'опухолевых процессов //Докл.АН АрмССР, 1987, 5, 226-230 (Макарян А.П.,Ару-тюнян М.В., Акопян A.A., Агавелян A.M., Даниелян Л.А., Назаров Л.У.).

14. Влияние постоянного магнитного поля и дсРНК на рост и размножение молочнокислых бактерий //Докл.АН АрмССР, 1987, I, 39-42 (соавторы Захарян P.A., Бегларян P.A., Григорян Л.Е.).

15. Изучение микрофлоры кишечного содержимого и отделяемого из ран при некоторых проктологических заболеваниях //Журнал эксперим.и клин.медицины, 1987, 6, 577-580 (соавторы Саркисян Б.Г., Давтян О.Я., Даниелян Л.А., Назаров Л.У.).

16. Подавление Са-дсРНК опухолевого роста //Юбилейная конференция Ереванского зооветеринарного института, 1987, 57-58, Ереван (соавторы Давтян О.Я., Рухкян Л.А., Манукян Э.В.).

17. Влияние кальциевых форм РНК на развитие опухолевого процесса //Докл.АН АрмССР, 1989, I, 31-35 (соавторы Давтян О.Я., Багдасарян A.A., Манукян Э.В.,-Мартиросян B.C., Рухкян Л.А., Захарян P.A.).

IB. Подавление размножения ретровируса Uulv препаратами Са-днРНК и Ca-низкомолекулярной РНК из дрожжей /Докл.АН АрмССР, 1989 , 2 , 93-96' (соавторы Рухкян Л.А., Захарян P.A.).

19. Влияние лазерного излучения на staphylococcus aureus клинического происховдения /Дурн.микроб.эпадемисл.иммунол., 1989 , 4, 108-109 (соавторы Саркисян Б.Г., Багдасарян Л.К., Эн-фенджян А.К., Агамалян С.С.).

20. Сравнительная оценка молекул средней массы у больных с некоторыми проктологическими заболеваниями //Врачеб,дело, 1989, 9, 69-71 (соавторы Давтян О.Я., Саакян А.Б., Акопян A.A., Агавелян А.М.).

21. Уровень циклических нуклеотвдов и серотонина у больных с функциональными и воспалительными заболеваниями толстой кишки

//Лабор .дело, IS89, 10, 53—56 (соавторы.Макарян Л.П., Арутюнян 1.1 .Б., ЛкопянА.А., Саркисян К. А.).

22. Содержание циклических нуклеотвдов it серотонина в крови больных с новообразованиями толстой кишки //"урнал экспериментальной и клинической медицины, 1989, 6, ¿44-549 (соавторы Арутюнян М.В., Макарян А.П., Акопян A.A.. Лгавелян A.M.).

23. Объективные критерии эндогенной i 1тсксикации при анаэробной инфекции мягких тканей промежности и параректальной клетчатки //Есесоюз.симпозиум "Анаэробная пег-лостридиэльная инфекция в гнойной хирургии". Тернополь, ГЭС?, 17-18, тезисы докладов (соавторы Давтян О.Я., Энфенджян А.К,, Саакян U.A., Макарян А.П., Саакян А.Б.).

24. Трансформирующая способность дНК из опухоли толстой кишки человека in vivo //Актуальные вопросы проктологии,тезисы докладов научно-практической конференции, 1989 , 93, Алма-Ата -Талды-Курган (соавторы Давтян О.Я.\

25. Молекулы средней массы в плазме крови у больных с опухолевым поражением толстой кишки и послеоперационными осложнениями //Всероссийский съезд хирургов, 1989, 38. Ленинград (соавторы Давтян О.Я., Акопян A.A., Саакян U.A., Симонян С.Ю., Лгавелян A.M., Гарибджанян Л.Л.).

26. Морфологические изменения слизистой оболочки толстой кишки крыс, индуцированные опухолевой ДНК //Журнал экспериментальной и клинической медицины, 1989, 4, 372-376 (соавторы давтян О.Я., Багдасарян A.A., Манукян М.В., Рухкян Л.Л., Захарян P.A.).

27. Биохимическая характеристика эндогенной интоксикации у больных с острым парапроктитом //Проблемы проктологии, 1990, вып.П, 34-39, Москва (соавторы Назаров Л.У., Саакян А.Б., Энфенджян А.К., Давтян О.Я., Макарян А.П., Акопян A.A., Саакян U.A.).

28. Средние молекулы как маркер эндогенной интоксикации

у больных с опухолями толстой кишки /Дурнал экспериментальной и клинической медицины, 1990, I, ТОО (соавторы Саакян М.А., Назаров Л.У., Давтян О.Я., Геворкян А.Г., Акопян A.A., Лгавелян A.M.).

29. СМСМ как фактор эндогенной интоксикации при воспали-

тельных заболеваниях толстой кишки //Журнал экспериментальной и клинической медицины, 1990, I, 99 (соавторы Саакян М.А., Давтян О.Я., Экимян Н.Л., Акопян A.A., Саркисян К.А.).

30. Биологический статус кишечной микрофлоры при опухолевом поражении толстой кишки //Биолог.ж.Армении, 1990, 2,100104 (соавторы Назаров Л.У., Мугнецян Э.Г., Агавелян A.M., Саркисян Б.Г., Нерсесян A.A.).

31. Влияние низкомолекулярных форм РНК на размножение микроорганизмов //Биолог.ж.Армении, 1990, 2,145-148 (соавторы Давтян О.Я., Агамалян С.С., Амбарцумян К.Ф.).

32. The influence of ds-RNA calcium precipitate on the neoplastic changes of rat colon tumour, which have been induced with DNA from human tomour //European Council of Coloproc-tology, 1990, Berlin, JDR (Dsvtien 0., Zackarian Я.-

33. Изменение содержания биогенных аминов у больных с функциональными и воспалительными заболеваниями толстой кишки //Врачебное дело, 1990, 12, 66-68 (соавторы Арутюнян М.В..Акопян A.A., Макарян А.П., Саркисян К.А.).

34. Изоферментный спектр креатинфоефокиназы в гомогенатах аденом и опухолей толстой кишки //Еурнал экспериментальной и клинической медицины, 1991, I, 14-17 (соавторы Макарян А.П., Акопян A.A., Багдасарян A.A., Агавелян А.М.).

35. Активность кислой и щелочной фосфатаз в крови и тканях больных со злокачественными заболеваниями толстой кишки //Журнал экспериментальной и клинической медицины, 1991, 4 , 308-302 (соавторы Макарян А.П., Арутюнян М.В., Агавелян Ар. ,М., Акопян A.A., Агавелян А.М.).

36. Циклические нуклеотиды при злокачественных новообразованиях толстой кишки //Лабор.дело, 1991, 8 , 31-33 (соавторы Макарян А.П., Арутюнян М.В., Акопян A.A., Багдасарян A.A., Агавелян А.М.).

37. Применение полимерных материалов в комплексном лечении экспериментального перитонита //Клиническая хирургия, 1991,4, 19-21 (соавторы Назаров Л.У., Агавелян А.М., Чухаджян Г.А., Агамалян С.С.).

38. Активность регуляторных и нерегуляторных гликолитичес-ких ферментов при опухолевых заболеваниях толстой кишки //Жур-

• 'с:1 ¿«шпйчесйой метгиттит» тппт; - 'с--..

.с.::'."т :срлгсрлав эндогенной иия у оолънит о :v. •.:о:сая uß^s,-

'■-'С \ С С С; li'L --РЫ '-'аагслн , ..^Oliüri A.A. , ЗЛО—

.. о ^¿и идами A.K - , л^ттл Л,"-"./.

- . .. „ .^шшл хроническими неопухолевыми заболеваниям» щшоЗ кишки //Шлэнял и "r^ncwiv^l «нет;1:,

12С-70Г; i'-™"":;: А^игд ;).£., - зшзн А.Р. ,Саакян ¡.¡.А., ;,:анукян Э.Е., Геворкян Г.А.).

41. Биохимическая оценка спухолок--. заболеваний толстой Г.П2КИ, осложненных перитонитом //Лабе;, лаю, IS92, 4 (соавторы Саакян .'.i.A., Ширинян М.В., Акопян A.A., Агавелян A.M.).

42. дсРНК, как фактор, стимути; /,ащай регенеративные и ре-паративные процессы //Докл.АН АрмССР, 1932 (соавтору 17лзят.0н Л.У., О-Б.. "азаг*" Д .г.. "-.••.«Vf.» ""„г.-,-.

г