Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биоэкологические аспекты изучения и использования биологически активных веществ дереворазрушающего гриба Coriolus Pubescens (Shum.: Fr.) Quel

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Биоэкологические аспекты изучения и использования биологически активных веществ дереворазрушающего гриба Coriolus Pubescens (Shum.: Fr.) Quel"

На правах рукописи

ЧХЕНКЕЛИ р

Вера Алексаццровна

БИОЭКОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ИЗУЧЕНИЯ И ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ДЕРЕВОРАЗРУШАЮЩЕГО ГРИБА CORIOLUS PUBESCENS (SHUM.: FR.) QUEL.

03.00.16 - экология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук

Иркутск- 2006

Работа выполнена в Иркутском филиале ГНУ Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН (г. Иркутск) и Иркутском государственном медицинском университете (г. Иркутск)

Научный консультант: доктор биологических наук,

профессор Огарков Борис Никитович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Саловарова Валентина Петровна

доктор биологических наук,

профессор Теплякова Тамара Владимировна

доктор фармацевтических наук,

профессор Федосеева Галина Михайловна

Ведущая организация:

Институт эпидемиологии и микробиологии ГУ Научный центр медицинской экологии ВСНЦ СО РАМН (г. Иркутск)

Защита состоится 24 мая 2006 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 212.074.07 при ГОУ ВПО «Иркутский государственный университет» по адресу: г. Иркутск, ул. Сухэ - Батора, 5, Байкальский музей им. проф. М.М. Кожова (ауд. 219). Почтовый адрес: 664003 Иркутск, ул. Сухэ - Батора, 5, биолого - почвенный факультет ИГУ, е - mail: dekanat@bio.isu.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Иркутского государственного университета

Автореферат разослан «_

Учёный секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук

Купчинская Е.С.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Высокий уровень техногенной нагрузки в Иркутской области вызвал значительное ухудшение экологической обстановки. Экологически обусловленная часть повышенного риска нарушений здоровья связана с факторами преимущественно следующих видов воздействия: тератогенного, эм-брио-токсического, общетоксического, канцерогенного и генетического. Безусловно, в этих условиях кардинальным вопросом является переход на более совершенные технологии, замкнутые циклы, новое оборудование, современную очистку промышленных выбросов. Немаловажное значение имеет и внедрение методов медико - биологического воздействия на население с целью повышения сопротивляемости организма, снижения заболеваемости, улучшения показателей работоспособности. В этих условиях наряду с медико - экологической реабилитацией населения особую актуальность приобретает отработка адекватных схем медикаментозного лечения с использованием эффективных иммунокорректирующих препаратов, повышающих неспецифическую резистентность к инфекциям, интоксикациям, и новых антимикробных средств, которые могут быть получены, в том числе, и с использованием методов биотехнологии на основе дереворазрушаю-щих базидиальных грибов.

В последние десятилетия дереворазрушающие базидиомицеты стали объектом пристального внимания исследователей. Особый интерес представляет изучение возможности их использования в качестве продуцентов биологически активных веществ и разработки на их основе экологически чистых безотходных технологий получения эффективных лекарственных препаратов различного назначения, технологических ингредиентов, пищевых добавок и стимуляторов роста животных, способов утилизации отходов производства, в том числе, и особо опасных.

С другой стороны, проблема промышленных отходов, например, лигноцел-лю-лозных, приобрела на сегодняшний день не только глобальное значение, но и весьма актуальна для Иркутской области. Если решение проблемы вторичного цел-люлозосодержащего сырья сельского хозяйства нашло отражение в проведении ряда региональных программ и внедрении ряда разработок, то лигноцел-люлозные отходы не используются в должной мере. Особо острыми представляются проблемы утилизации отходов целлюлозно - бумажной промышленности (ЦБП) и биотехнологических производств. На предприятиях целлюлозно-бумажной промышленности, использующих для отбеливания целлюлозы молекулярный хлор, образуются полихлорированные дибензо - п-диоксины (ПХДЦ) и дибензо-фураны (ПХДФ) — высокотоксичные, канцерогенные соединения. В связи с этим актуальной представляется разработка схем безотходного производства антимикробных препаратов и технологических ингредиентов при утилизации биомассы продуцентов, производства полисахаридов и иммуностимулирующих препаратов на их основе, стимуляторов роста животных, и особенно, разработка биологических методов обезвреживания высокотоксичных отходов ЦБП.

Цель работы. Настоящая работа направлена на изучение возможности решения медико - экологических проблем Иркутской области посредством изучения физиологических и биохимических аспектов воздействия биологически активных веществ продуцента Сог/о/иэ риЬеэсепз (5Иит.:Рг.)0ие1. штамм 0663, разработку безопасных биотехнологических способов получения антимикробных, иммуностимулирующих препаратов и технологических ингредиентов на их основе, разра-

ботку способов их использования на бродильных производствах пищевой промышленности, в ветеринарии и медицине, способов утилизации и обезвреживания промышленных отходов.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи: провести скрининг для выявления штамма высших дереворазрушающих грибов, обладающего высокой антимикробной активностью; выделить и идентифицировать антимикробные вещества, изучить механизм их действия in vitro; оптимизировать методы и режимы культивирования продуцента; разработать способы получения антимикробных препаратов и способы их использования в ветеринарии и медицине; разработать способ получения и использования антимикробного технологического ингредиента на бродильных производствах Иркутской области; разработать способы использования биомассы продуцента, получаемой при ферментации, как отхода производства, для выделения других биологически активных веществ, а именно: для получения полисахаридов; разработать метод обезвреживания опасных лигно-целлюлозных отходов производства с использованием твердофазной ферментации продуцента.

Научная новизна работы. Эколого - биотехнологическая концепция диссертационной работы основывается на замене в ряде промышленных производств высокотоксичных веществ, что приводит к оздоровлению окружающей среды, а также на получении биологически активных веществ базидиомицета Coriolus pubescens (Shum.:Fr.)Quel. штамм 0663, улучшающих качество жизни человека.

В результате выполнения работы научно аргументирована и экспериментально доказана перспективность использования вторичных метаболитов продуцента С. pubescens для получения антимикробных препаратов широкого спектра действия и технологических ингредиентов, полисахаридов клеточной стенки продуцента - для получения иммуностимулирующих препаратов по разработанной принципиальной технологической схеме, которые используются для решения существующих медико - экологических проблем Иркутской области.

Исследован спектр антимикробного действия продуцента и препаратов, получаемых на его основе. Установлено, что механизм бактерицидного действия антимикробных препаратов определяется механизмом действия вторичных метаболитов, синтезируемых продуцентом. Показано, что бактерицидное действие препаратов, получаемых на основе продуцента С. pubescens, заключается в ингибировании синтеза клеточной стенки бактерий - возбудителей заболеваний. Установлено, что хи-миотерапевтическими агентами, способными подавлять патогенные бактерии in vitro, являются синтезируемые продуцентом терпеноиды.

Проведено сравнительное изучение антиб иотикорезистентности клинических штаммов, выделенных от больных детей хирургического профиля к современным препаратам, включая Леван - 1. Изучена активность препаратов Леван-1 и Леван - 2 по отношению к возбудителям желудочно • кишечных заболеваний человека и животных семейства Enterobacteriacea. Показано, что препарат Леван - 2 увеличивает интенсивность автолиза клеток штаммов бактерий - возбудителей гнойно — воспалительных заболеваний в более значительной степени, чем антибиотики цефалос-пориновой и пекициллиновой групп.

Установлено, что гриб С. pubescens является малопатогенным для млекопитающих. Согласно гигиенической классификации производственных штаммов микроорганизмов, исследованный штамм относится к третьему классу опасности. Ан-

тибактериальный препарат Леван - 2, получаемый на основе продуцента, малотоксичен, ЛД50 составляет

50 ООО мг/кг н близка к пороговой в остром опыте по общетоксическому и дисбио-тичес кому эффектам действия. Местно - раздражающее и аллергенное действие препарата является слабовыраженным.

Изучена противовоспалительная активность препарата с использованием модели острого воспалительного отёка на лабораторных животных. Показано, что Леван - 2 обладает максимальной противовоспалительной активностью в дозе 1,5 мл/кг массы тела при внутрибрюшинном введении препарата.

При экспериментальном моделировании туберкулёзной инфекции установлено, что препарат Леван - 2 обладает противотуберкулёзной активностью в дозе 2,0 мл/кг массы тела внутримышечно. Монотерапия препаратом приводит к излечению животных и увеличению массы их тела.

Разработаны научные основы применения антимикробного препарата Леван -2 для лечения и профилактики желудочно - кишечных заболеваний новорожденных телят.

Разработаны научные основы снижения бактериальной обсеменённости при производстве и повышения качества основных продуктов - хлебопекарных дрожжей и этилового спирта - при использовании антимикробного технологического ингредиента Леван - 1 на бродильных производствах.

Разработана схема выделения фракций полисахаридов из клеточных стенок С. pubescens и изучен их состав. Исследование влияния глюкановых фракций полисахаридов, выделяемых из биомассы С. pubescens, позволило выявить эффект активации нейтрофилов in vitro, выявить тенденцию к увеличению подвижности Т-хелперов при изучении действия глюкановых фракций полисахаридов на электро-форетическую подвижность лимфоцитов.

Установлено, что при твердофазной ферментации отходов деревообрабатывающей промышленности происходит не только их утилизация, но образование биологически активных веществ. Конечные продукты представляют собой смесь выросших грибов и неутилизированного субстрата - белково - углеводные комплексы (БУК), богатые белками, липидами и витаминами, образующимися при деградации природных полимеров, а также микро - и макроэлементами. Получаемые продукты утилизации (БУК) отвечают, требованиям безопасности для пищевых продуктов по содержанию токсичных элементов, микотоксинов.

Показано, что в качестве биологического метода обезвреживания твёрдых отходов ЦБП, содержащих хлорорганические ароматические соединения, может быть рекомендован метод утилизации шлам - лигнина с использованием штамма . 0663 дереворазрушающего базидиомицета С. pubescens. Метод является экологически безопасным и приводит к изменению состава промышленных отходов и 100% - ному удалению органических веществ, приводящих к образованию диоксинов (фенолов и хлорорганических соединений).

Диссертация являлась источником тем научно-исследовательских работ, выполнявшихся в Центральной научно-исследовательской лаборатории (ЦНИЛ) ИГ-МУ в 1994 - 2001 гг. «Гигиеническая оценка белково - углеводных комплексов как производных вторичного растительного сырья», «Медико-биологические исследования биологически активных соединений и способы их получения с использованием методов биотехнологии» и хоздоговорной темы № 1-97 «Повышение стойкости и выхода продукции в условиях весенне-летнего периода производства хлебопекар-

ных дрожжей», а также темы научно - исследовательской работы «Разработка научных основ практического применения в ветеринарии антибактериального и иммуностимулирующего препаратов, полученных с использованием методов биотехнологии на основе гриба Coriolus pubescens (Fr.:Shum.) Quel.», выполнявшей в Иркутском филиале ГНУ Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (ИФ ГНУ ИЭВСиДВ) СО РАСХН в 2002 - 2005 гг. также под личным руководством автора.

Практическая значимость. Практическое значение работы состоит в развитии нового комплексного направления при использовании жидкофазной и твердофазной ферментации дереворазрушающего гриба С. pubescens, результаты которого могут быть использованы для практического применения в промышленности, сельском хозяйстве и медицине для решения существующих медико — экологических проблем.

В результате научных исследований разработана принципиальная схема получения антимикробных и иммуностимулирующих лекарственных средств ветеринарного и медицинского назначения, технологических ингредиентов для бродильных производств пищевой промышленности. Разработка способов получения антимикробных веществ и их внедрение позволяет расширить спектр эффективных антимикробных лекарственных средств. Оценка чувствительности in vitro антибактериальных препаратов Леван - 1 и Леван -2 показала их большую эффективность по сравнению с применяемыми в медицине антимикробными препаратами. Препарат Леван - 1 прошёл лабораторные испытания в Иркутской областной детской клинической больнице (ИОДКБ). Показано, что микроорганизм - возбудители гнойно - воспалительных заболеваний обладают высокой чувствительностью к препарату. Препарат Леван - 2 прошёл производственные испытания в ОАО «Хомутовское» Иркутской области. Показана его высокая лечебная и профилактическая эффективность для лечения желудочно - кишечных заболеваний новорождённых телят.

Использование технологического ингредиента Леван - 1, получаемого на основе продуцента С. pubescens, на бродильных производствах позволяет не только снизить обсеменение посторонней микрофлорой на всех стадиях технологического процесса, но и сократить время брожения, повысить выход и качество продукции, исключить из технологических процессов вредные и агрессивные вещества.

Разработка технологического ингредиента Леван-1, обладающего антимикробным действием по отношению к гнилостным бактериям, позволило внедрить его на ОАО «Дрожжевой завод» (г. Иркутск). Применение ингредиента при производстве дрожжей хлебопекарных позволяет увеличить стойкость продукции без изменения других показателей качества продукции.

Технологический ингредиент Леван-1 прошёл лабораторные, полупромыш-леннные и промышленные испытания на Тельминском спиртзаводе ОАО «Кедр». При производстве спирта замена таких вредных и агрессивных веществ, как формалин и серная кислота, технологическим ингредиентом Леван-1 приводит к снижению количества несброженных углеводов, повышению выхода этилового спирта, сокращению содержания в нём метанола.

Лабораторные испытания технологического ингредиента Леван - 1 проводились в лаборатории дрожжей Ленинградского филиала ВНИИ хлебопекарной промышленности.

Акты лабораторных, полупромышленных, промышленных испытаний и акты внедрения приложены к диссертации.

Апробация работы. Основные положения диссертации были представлены на следующих конференциях: Международная конференция «Экологически чистые технологические процессы в решении проблем охраны окружающей среды» (Иркутск, 1996); IV - ый Российско - Японский международный симпозиум (Иркутск, 1996); Юбилейная научно - практическая конференция «Итоги, проблемы и перспективы», посвященная 75-летию Государственной санитарно - эпидемиологической службы России (Иркутск, 1997); Международная конференция «Экология и развитие России: медико-экологические аспекты на примере Байкальского региона» (Иркутск, 1998); Международное совещание, посвященное памяти М. Г. Минаевой, «Физиолого-биохимические аспекты изучения лекарственных растений» (Новосибирск, 1998); 1-ый съезд токсикологов России (Москва, 1998); 2-ая межрегиональная научная конференция «Человек и окружающая среда» (Рязань, 1998); VI - й Российско - Японский международный симпозиум (Хабаровск, 1998); 3-я ежегодная научно-практическая конференция «Актуальные вопросы медицинского обеспечения при чрезвычайных ситуациях и катастрофах» (Иркутск, 1999); 5-ая международная научно - практическая конференция «Природные и интеллектуальные ресурсы Сибири» (Томск, 1999); Западно - Сибирский форум «Актуальные вопросы диагностики, лечения, профилактики наиболее распространенных заболеваний внутренних органов» (Тюмень, 2000); Международный экологический конгресс «Новое в экологии и безопасности жизнедеятельности» (Санкт-Петербург, 2000); Международная конференция «Химическое образование и развитие общества» (Москва, 2000); Годичная сессия ИГМУ по итогам НИР - 2000 (Теоретическая секция, Иркутск, 2000); Научно-практическая конференция «Актуальные проблемы ветеринарной медицины Восточной Сибири (Иркутск, 2002); Межрегиональная научно - практическая конференция «Биология микроорганизмов и их научно - практическое использование» (Иркутск, 2004); Научно - практическая конференция, по-свящённая 65- летаю СО РАСХН (Новосибирск, 2005); Заседание регионального отделения МОО «Микробиологическое общество» (Иркутск, 2006).

Основные публикации. По материалам диссертации опубликовано 38 работ, в том числе, 10 статей в научных журналах, рекомендуемых ВАК для публикации материалов докторских диссертаций, монография «Биологически активные вещества Corioluspubescens (Shum.:Fr.) Quel, и их использование в медицине, ветеринарии, экологии и пищевой промышленности» и «Методические рекомендации по применению современных лекарственных средств для профилактики и лечения желу-дочно — кишечных заболеваний новорождённых телят».

Основные положения, выносимые на защиту

1. Результаты изучения антимикробной активности продуцента С. pubescens, еб природы и механизма действия, получения новых антимикробных препаратов как средства снижения заболеваемости.

2. Результаты сравнительного изучения антимикробной активности препарата Леван -1, получаемого на основе гриба С. pubescens, в отношении клинических полирезистентных штаммов бактерий, выделенных в лечебно — профилактических учреждениях г. Иркутска.

3. Результаты изучения твердофазной ферментации продуцента как способа утилизации и обезвреживания лигноцеллюлозных отходов производства.

4. Результаты разработки принципиальной технологической схемы безотходного производства продуктов биотехнологии на основе жидкофазной ферментации гриба С. риЪейсепя.

5. Результаты разработки схемы выделения полисахаридов клеточной стенки гриба - продуцента, изучения их химического состава и тенденций влияния на функциональную активность иммунокомпетентных клеток как средства повышения неспецифической резистентности организма к инфекциям, интоксикациям в условиях экологического неблагополучия.

6. Результаты исследования возможности использования антимикробного технологического ингредиента Леван - 1 на бродильных производствах пищевой промышленности как экологически безопасного способа производства хлебопекарных дрожжей и этилового спирта.

7. Результаты медико - биологических исследований продуцента С. риЬея-сею и антимикробного препарата Леван - 2, получаемого на его основе.

8. Результаты исследования возможности использования антимикробного препарата Леван — 2 для лечения и профилактики желудочно — кишечных заболеваний новорождённых телят как средства, повышающего устойчивость организма к действию неблагоприятных факторов внешней среды.

Объем и структура диссертации. Работа состоит из введения, 9 глав, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, содержащего 584 источников, в том числе, 380 отечественных и 204 зарубежных. Работа изложена на 352 страницах, включая список литературы на 56 страницах, иллюстрирована 81 таблицей и 51 рисунком, содержит 18 приложений.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Экологические особенности базидномицетов - ксилотрофов и приспособленность их популяций к обитанию в экосистеме

В данной главе даётся общая характеристика базидиальных грибов, обсуждается их роль в возникновении и распространении болезней леса. Констатируется, что базидиомицеты представляют собой своеобразную и многочисленную группу грибов, обладающих мощным ферментативным комплексом, благодаря которому они прочно занимают вполне определенную экологическую нишу. Рассматриваются некоторые экологические и биохимические аспекты возникновения, развития белой коррозионной и бурой гнилей древесины. Описываются основные представители базидномицетов, вызывающих корневые, напенные и стволовые гнили различных пород деревьев.

Биологически активные вещества дереворазрушающих высших базидиальных грибов

В главе представлена систематика дереворазрушающих базидномицетов, характеристика порядков АрЬу11оркога1е5 (Афиллофоровые) и Agaricales (Агарико-вые). Наиболее подробно приводится характеристика семейства Ропрогасеае и рода Сопо/т. Подчёркивается, что благодаря широкому спектру биохимических возможностей и большому распространению на Земле базидиомицеты играют важнейшую роль в круговороте углерода на планете, а возможность промышленного культивирования базидномицетов открывает широкие перспективы их использования в биотехнологии. Анализируются некоторые аспекты медико - биологических

исследований белковых кормовых продуктов и продуктов питания на основе бази-диомицетов в современных условиях.

Особое место занимает аналитический обзор исследований, посвящённых изучению биохимических и физиологических аспектов синтеза биологически активных веществ (БAB) базидиальными грибами. Акцентируется внимание на том, что многие базидиомицеты сегодня являются объектами целенаправленных поисков веществ с антибактериальной, антивирусной, противоопухолевой, цитотоксиче-ской, фибринолитической, гиполипидомической, антифунгальной, вазодиляторной, гипогликемической, антиоксидантной, гипотензивной, анальгетической, нейроток-сической активностью.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

При скрининге штаммов, обладающих высокой антимикробной активностью, проводившемся из культур базидиомицегов родов Agrocybe, Ganoderma, Coriolus, Pleurotus, Marasmius, Lentinus, Bjerkandera, Lenzites, Shizophyllum, Lyophillwn, Kuehneromyces из коллекции Ботанического института им. В.Л. Комарова РАН (г. Санкт-Петербург), была отобрана культура Coriolus pubescens (Shum.: Fr.) Quél: штамм 0663. Для проведения сравнительных исследований по твердофазному культивированию использовали культуру Schizophyllum commune Fr. штамм 0459. Куль* турально - морфологические признаки штаммов изучали по J.H. Stalpers (1978) и М. К. Nobles (1965). Тест на наличие экстрацеллюлярных фенолоксидаз проводили по методу Бавендама, определение протеазной активности - методом разжижения желатина, свёртывания и пегггонизации молока (Билай В.И., 1989). Микроморфологические свойства изучали методом световой микроскопии, используя микроскоп Микмед -1 с объективами 10 х, 40 х, 100 х, методом электронной микроскопии на электронном микроскопе PHILLIPS SEM 525М. Для определения активности антимикробных препаратов использовали клинические штаммы микроорганизмов, выделенные и идентифицированные в бак. лаборатории ИОДКБ; штаммы энтеро-бактерий, выделенные в баклаборатории Иркутской городской инфекционной больницы; штаммы, выделенные от больных животных в бак. лаборатории Областной ветеринарной лаборатории (г. Иркутск); штаммы, выделенные от больных птиц в бак. лаборатории Региональной ветеринарной лаборатории (г. Иркутск); штаммы энтеробактерий, выделенные от больных новорождённых телят с молочно — товарной фермы ОАО «Хомутовское».

Для проведения исследований по ТФФ дереворазрушающих грибов использовали пробы шлам — лигнина ОАО «Байкальский целлюлозно — бумажный комбинат» и ОАО «Братсккомппексхолдинг», пробы отходов (опилки) совместного Российско — австрийского предприятия «АвгустСиб» (г. Иркутск). Каждая проба отходов являлась смешанной из 6 частей, отобранных в разных точках в соответствии с ГОСТ 17.4.3.01-83.

В работе использованы микробиологические, микологические, биохимические, токсикологические, гигиенические, химические, физико — химические, иммунологические, цитохимические, морфологические, гематологические, гистологические, математические методы исследования, световая и электронная микроскопия.

Культивирование продуцента. Продуцент поддерживали на сусло - агаре (CA). Посевной материал выращивали на среде Сабуро с добавлением микрокристаллической целлюлозы в течение 7-10 сут. при температуре 26 - 28° С. Далее посевной материал выращивали в колбах на качалке при 220 об./мин. при температуре

26 - 28° С в течение 4 сут. на глюкозо - пептонной среде. Посевной материал вносили в ферментационную среду в количестве 5 - 10 % по объёму. Ферментацию осуществляли при температуре 26 - 28° С в колбах Эрленмейера на круговой качалке при 200 - 220 об./ мин. на глюкозо - пептонной среде в течение 5-7 сут. При культивировании продуцента методом жидкофазной ферментации использовали пивное неохмелённое сусло с производства ЗАО «Иркутскпищепром», глюкозо - аммонийные среды с сахарозой, мелассой, используемые при производстве хлебопекарных дрожжей в ОАО «Дрожжевой завод».

Глубинное культивирование проводили также в ферментаторе Marubishi (Япония) объёмом 30 л на оптимизированной среде глюкозо - пептонной, сахарозо - пептонной средах при регулировании уровня рН, избыточном давлении 0,4 атм, аэрации стерильным воздухом с механической мешалкой с частотой 200 - 250 об. / мин.

Для проведения ТФФ отходов деревообрабатывающей промышленности (опилки) и ЦБП (шлам - лигнин) их увлажняли глюкозо - пептонной средой до 60 -65 % - ной влажности, автоклавировали в течение 40 мин. при 0,8 атм. После охлаждения вносили посевной материал в количестве 10 % по объёму. Посевной материал выращивали на глюкозо - пептонной среде в колбах на качалке при 220 об./мин. в течение 4 сут. при 26 - 28° С. Ферментацию проводили в течение 5-45 сут. при 26 - 28° С без дополнительной аэрации и перемешивания.

При поиске оптимальных условий культивирования продуцента с целью регуляции направленного биосинтеза БАВ использовали метод математического планирования полнофакторного эксперимента (ПФЭ). Выбор экспериментальной области факторного пространства связывали с тщательным анализом имеющейся априорной информации о физиологических и биологических особенностях продуцента.

Методы определения антимикробной активности продуцента. Антимикробное действие гриба изучалась методом диффузии в агар и методом серийных разведений с использованием среды АГВ и агара Мюллера - Хинтона, среды Сабу-ро, среды Чапека, а также бульона Хоттингера и бульона Мюллера - Хинтона производства НИЦФ (г. С. -П.) . В качестве тест - культур использовали референтные штаммы микроорганизмов, полученные из ГНИИ стандартизации и контроля медицинских препаратов им Л.А. Тарасевича (г. Москва), штаммы мицелиальных грибов, дрожжей, актиномицетов из музея кафедры технологии микробиологического синтеза Санкт- Петербургского технологического института, предоставленные д. т. н., профессором В.И. Сухаревич, термотолерантный штамм Aspergillus ter-reus AT - 490, предоставленный директором Института биохимии растений АН Грузии, академиком Г.И. Квеситадзе (г. Тбилиси), промышленных штаммов пекарских дрожжей, используемых на производстве в ОАО «Дрожжевой завод» (г. Иркутск).

Микробная нагрузка составляла 1-2x107 кое/мл. Для приготовления инокулята использовали 18 - 20-ти- часовые агаровые культуры. Суспензию доводили до 0,5 по стандарту мутности Мак - Фарланда и разводили ещё в 10 раз изотоническим раствором хлористого натрия. Посевы инкубировали при 37 0 С в течение 24 ч. При исследовании антифунгального действия продуцента агаровые блочки С. pubescens помещали на поверхность среды Чапека или агара Сабуро, засеянной тест - культурой низших мицелиальных грибов или актиномицетов. Посевы инкубировали при 28-30° С (A. terreus АТ-490 - при 40° С) в течение 5 сут. При исследовании действия

продуцента на дрожжи агаровые блочки помещали на поверхность CA и инкубировали при 28-30° С в течение 2 сут.

Изучали антимикробное действие как мицелия гриба, так и культуральной жидкости. С этой целью пропитывали стерильные стандартные диски фирмы Bio Merieux культуральной жидкостью и водно - спиртовым экстрактами мицелия (этиловым или метиловым), подсушивали их при 40° С в течение 30 мин. и помещали на поверхность среды АГВ или Мюллера — Хинтона, засеянной тест - культурой. Посевы инкубировали при 37° С в течение 24 ч. Спиртовые экстракты получали экстрагированием биомассы продуцента водно - спиртовыми растворами (1:1) на'шей-кере при температуре 40° С в течение 3 сут.

Определение чувствительности / устойчивости микроорганизмов к антимикробным препаратам проводили по методу, описанному JI.3. Скала с соавт. (1997). Определение проводили на микробиологическом анализаторе Labsystems с помощью программного обеспечения В ACT - 110 фирмы Аналитика.

Методы биохимического исследования биомассы продуцента и БУК, получаемых биоконверсией лигноцеллюлозных отходов. Определение химического состава лигноцеллюлозных отходов (древесных опилок) проводили по общепри-' пятым методикам и схемам исследования (Ермаков А.И. с соавт., 1987; Оболенская

A.B. с соавт., 1965; Стахеев И.В. с соавт., 1986; Ермаков А.И., 1987; Олешко B.C. с соавт., 1990). Редуцирующие вещества определяли фенолсернокислым методом, по' методу Сомоджи - Нельсона, динитросалициловым методом (Синицын А.П. с со-; авт., 1995), качественный и количественный состав углеводов и полиолов - методом ГЖХ в виде триметилсилильных производных (Микеш О., 1982; Варфоломеев С.Д., 1993) на хроматографе Chrom - 5 (Чехия). Определение моносахаридов проводили в виде ацетилированных полиолов (Синицын А.П. с соавт., 1995; Микеш О., 1982). Содержание целлюлозы определяли модифицированным методом Кюршнера -Хаффера, лигнина - с 72% - ной серной кислотой в модификации Комарова (Оболенская A.B. с соавт., 1965), хитина - по методике A.M. Костиной с соавт, (1978). Общее количество белка определяли спекгрофотометрическим методом (Bradford, 1976), его фракционный состав - по методикам, разработанным A.M. Костиной,

B.Г. Бабицкой (1981) и B.C. Олешко, В.Г. Бабицкой (1991). Аминокислотный состав определяли на автоматическом аминокислотном анализаторе AAA - 239 (Чехия). Биологическую ценность белков рассчитывали методом химического скора. Содержание сырого протеина, жира, золы определяли по общепринятым методикам (ГОСТ Р 50466 - 93, ГОСТ 12496.15 - 83, ГОСТ 26226- 84), липиды - методом кислотного гидролиза, количественное содержание отдельных фракций — по М. Кейт-су (1975). Жирнокислотный состав липидов определяли методом ГЖХ (Соломко Э.Ф. с соавт., 1984), содержание фосфолшшдов - методом ТСХ, нуклеиновых кислот - по А.И. Ермакову с соавт.(1987). Определение содержания микроэлементов проводилось атомно - абсорбционным (Ермаченко Л.А., 1997; Дорогова В.Б. с соавт., 2002) и полярографическим методами (ГОСТ 2634 - 86; ГОСТ 2632 - 86; ГОСТ 2628 - 86; ГОСТ 2629 - 86; ГОСТ 2631 - 86; ГОСТ 2630 - 86) с использованием полярографа ПУ - 2 и атомно - абсорбционного анализатора GBS - 906 АА (Япония); ртути - атомно - абсорбционным методом (ГОСТ 2627 - 86) на анализаторе ртути Юлия - 2, йода - спекгрофотометрическим методом (Чхенкели В.А., Чхенкели Г.Д., 1999, 2000) на спектрофотометре СФ -46. Обнаружение, идентификацию и количественное определение микотоксинов проводили с использованием двумерной и одномерной ТСХ, ВЭЖХ с УФ - фотометрическим и флуориметриче-

ским детектированием (Скурихин И.М. , Тутельян В.А., 1998). Определение витамина Bi проводилось флуориметрическим методом по ГОСТ 7947 - 55, ГОСТ 25999 -83 с использованием флуориметра ЭФЗМ-4, определение рибофлавина -флуометрическим методом по ГОСТ 7947 - 55, ГОСТ 25999, аскорбиновой кислоты - тихриметрическим методом по ГОСТ 24556 - 89 с реактивом Тильманса, холина -химическим методом, пиридоксина, пантотеновой кислоты, никотиновой кислоты, биотина и витамина В[2 - микробиологическим методом по ГОСТ 18663 - 78.

Все биохимические исследования проводились в отделе биотехнологии и медицинской экологии ЦНИЛ ИГМУ, аккредитованном в системе ГОСТ Р и Госсанэпиднадзора в составе Испытательного Центра Иркутского городского центра Госсанэпиднадзора, Испытательном Центре Иркутского городского центра Госсанэпиднадзора, Областном центре Госсанэпиднадзора.

Для определения химического состава биомассы мицелия продуцента С. ри-bescens, лигноцеллюлозных отходов было исследовано 193 пробы и выполнено 7720 анализов.

Методы исследования химического состава отходов ЦБП и БУК. Подготовку проб твёрдых отходов и проб отходов, подвергнутых твердофазной ферментации с использованием грибов - продуцентов, для определения общего состава углеводородов проводили в соответствии с методикой Агентства по окружающей среде США (ЕРА)

№ 1613 с предварительной экстракцией хлористым метиленом - гексаном (1:1), очисткой экстрактов посредством препаративной колоночной хроматографии. Изо-мерспецифический анализ выполняли с использованием хромато - масс-спектрометра Hewlett Packard модели Hp 5972А и масс - селективного детектора HP MSD 5972 в режиме селективного детектирования молекулярных ионов. Разделение проводили на кварцевой капиллярной колонке HP - 5 с параметрами 25 м х 0,25 мм в температурном режиме программирования от 40 до 310 С со скоростью 10° С в мин. Идентификацию органических веществ осуществляли с помощью библиотечного поиска в библиотеке HP — Pest, Wiley - 138 - компьютера и по времени удерживания. Интегрировали площади пиков, полученных по извлечённым молекулярным или характеристическим ионам соответствующих органических веществ.

Для изучения состава лигноцеллюлозных отходов и возможности их утилизации продуцентами С. pubescens и Sch. commune было исследовано 16 проб и выполнено 392 изомерспецифических анализа на содержание ПХД Д, ПХДФ и 64 анализа на фенолы и хлорфенолы.

Методы выделения и идентификации БАВ. Выделение и идентификацию БАВ, синтезируемых продуцентом, проводили с использованием физико - химических методов анализа: хроматографических (адсорбционная хроматография, ВЭЖХ, ТСХ, ГЖХ), спектрометрических (УФ - и ИК - спектроскопия).

Учитывая особенности биосинтетической активности грибов рода Coriolus, в метанольных и водных экстрактах определяли свободные сахара, алкалоиды, азотсодержащие соединения, гликозиды и фенольные соединения методом ТСХ, ВЭЖХ, а также путём проведения качественных химических реакций. Выделение БАВ и их идентификацию проводили в соответствии с основными принципами химического анализа лекарственных растений (Ладыгина Е.Я. с соавт,, 1983). При выделении, разделении и идентификации терпеноидов руководствовались основными принципами работы с этой группой веществ (Сур C.B., 1990; Сироткина Е.Е., 1987).

Метод определения интенсивности автолиза биомассы тест - культур. Интенсивность автолиза в присутствии антимикробных препаратов определяли по изменению оптической плотности биомассы под действием исследуемых веществ при инкубации на водяной бане в течение 1 ч при 37° С (Кислухина О.В. с соавт., 1979, 1982; Чхенкели В.А., 1986; Сухаревич В.И. с соавт., 1992).

Методы выделения полисахаридов клеточной стенки продуцента и определения их химического состава. Схема выделения полисахаридов соответствовала общим принципам разделения компонентов клеточной стенки С. hirsutus , предложенных Гончаровой Н.В. (1997).

Определение белка проводилось на автоматическом анализаторе ФП-901 фирмы Labsystems (Финляндия) биуретовым методом с использованием тест - системы Olvex Diagnosticum, общее содержание Сахаров - фенолсерным методом (Синицын А.П. с соавт., 1995). Гидролиз полисахаридов проводился по Е.П. Феофиловой (1980). Качественное исследование состава фракций полисахаридов проводилось методом ВЭЖХ (Микеш О., 1982 ) на микроколоночном хроматографе Милихром А - 02. Определение общего содержания восстанавливающих Сахаров в гидролиза-тах проб проводили фенолсерным методом. Качественный и количественный состав углеводов фракций определяли методом ГЖХ в виде триметилсилильных производных.

Методические подходы к исследованию влияния полисахаридов на функциональную активность иммунокомпетентных клеток. Исследования проводились in vitro на венозной крови доноров. Действие полисахаридов оценивали по изменению функциональной активности нейтрофилов и лимфоцитов периферической крови. Фагоцитарный процесс оценивали, проводя подсчет следующих показателей: % фагоцитоза и фагоцитарное число.

Влияние глюкановой фракции полисахаридов на лимфоциты исследовали при помощи электрофоретических методов (Скворцова Р.Г.,1993). Фенотипирование выделенных лимфоцитов проводили в системе аналитического клеточного электрофореза на электрофоретическом измерительном микроскопе Parmoquant -2 (Карл ЦейсЙена VEB, Германия). Выделение лимфоцитов проводили по методике, разработанной в ЦНИЛИГМУ (Скворцова Р.Г., 1995).

Методы токсикологических исследований. Проведение токсикологических исследований осуществляли на основе общепринятых принципов с использованием лабораторных животных - беспородных белых мышей, белых крыс, кроликов и морских свинок (ЛлойтА.О., Савченков М. Ф., 1997).

При изучении патогенных свойств исследуемого штамма проводили патомор-фологические исследования, исследование морфологического состава крови. При оценке вирулентности штамма традиционно определяли ЛДюо и ЛД50.. Для определения вирулентности биомассы гриба - продуцента использовали биомассу, полученную на сусло — агаре (СА) в течение 25 сут. и гомогенизированную в физиологическом растворе. Продуцент вводили в организм животных перорально, внутри-брюшинно и интераназально. Наблюдения за животными проводили в течение 30 сут. При определении токсичности суспензию биомассы гриба С. pubescens в физ. растворе прогревали на кипящей водяной бане в течение 1 ч и после остывания вводили животным. Учёт гибели животных проводили в течение 30 сут. Токсигенность определяли путём введения животным внутрибрюшинно и в желудок культураль-ной жидкости продуцента, инфективность - путём изучения взаимодействия между макроорганизмом и исследуемым продуцентом с учётом возможных естественных

путей поступления последнего в организм. Белым мышам вводили перорально на-тивную 30-суточную культуру гриба, выращенного на CA, в количестве 109 спор/животное. На 1-е, 7-е, 15-е, 20-е и 30-е сутки после введения гриба животных забивали (по 3 животных из каждой серии опыта) и проводили микологическое исследование крови и внутренних органов. Посевы проводили методом мазков - отпечатков на CA. Проводили исследование аутофлоры организма подопытных белых мышей. При изучении патогенных свойств штамма проводили патоморфологиче-ские исследования, исследовали морфологический состав крови.

Изучение острой токсичности препарата Леван-2 проводили на белых мышах и крысах. Препарат вводили внутрибрюшинно и перорально. При внутрибрюшин-ном введении испытаны 4 дозы: препарат вводили по 1 мл и по 0,5 мл внутрибрюшинно мышам и крысам, соответственно, по5млипо8мл - в желудок. Животным контрольных групп вводили соответствующие количества физ. раствора. В каждой группе использовали по 6 животных. .0 токсическом действии судили по общему состоянию и поведению животных, а также летальности в течение срока наблюдений - 14 сут. Расчёт ЛД50 проводили по методу Кербера.

Исследования по действию препарата Леван - 2 в хроническом эксперименте проводили на белых мышах. Выбор доз в хроническом опыте был основан на уже определенные ранее ЛДшо и ЛД50. Препарат вводили в корм с расчётом на количество животных в группе. Для хронического эксперимента было выбрано 3 дозы препарата. В эксперименте проводили наблюдение за внешним видом животных, их поведением, изменением ряда интегральных и специфических показателей, в том числе, за изменением морфологического состава крови (Меньшиков В.В., 1987; Ро-маш A.B., 1987), изменением аутофлоры организма, согласно методических рекомендаций «Микробиологическая диагностика дисбакгериоза» (1987).

Для исследования сенсибилизирующих свойств исследуемого штамма проводили трёхкратное внутрикожное введение суспензии культуры гриба морским свинкам. Проявление сенсибилизирующего эффекта фиксировали на 17 — 21 сут. после последней инъекции с помощью следующих тестов: внутрикожные провокационные пробы с видовым полисахаридным аллергеном, показатель повреждения полинуклеаров РСАЛ (реакция специфической аггломерации лейкоцитов), РССЛ (реакция специфического лизиса лейкоцитов). Эксперименты по определению местно - раздражающего действия гриба и препарата Леван - 2 проводили на морских свинках и кроликах. Животным вводили суспензию спор гриба в трёх концентрациях, а Леван — 2 - в нативном состоянии. Аппликации исследуемых материалов по 0,1 мл проводили в течение одного месяца морским свинкам путём нанесения на освобождённые от волос участки (размером 2x2 см) кожи спины кролика. Проводили комплексное обследование животных. Состояние иммунологической реактивности организма определяли по комплексу тестов: определение показателей состава аутомикрофлоры, активности фагоцитоза по РСАЛ и внутрикожной провокационной пробе с антигеном из изучаемого гриба . Для гистологического исследования препараты изготовляли по обычной методике и окрашивали гематоксилином и эозином (Оноприенко E.H. с соавт, 1991).

Экспериментальные исследования были проведены на 140 неинбредных крысах обоего пола, 70 неинбредных мышах (самцах) половозрелого возраста, 24 морских свинках и 24 кроликах.

Оценку токсичности технологического ингредиента Леван — 1 проводили экспресс - методом in vitro (МУ 1.1.037 - 95) с использованием анализатора токсичности без использования лабораторных животных.

Методы исследования влияния препарата Леван — 2 на рост микобакте-рнй in vitro. В качестве тест - культур в работе использовали культуры Mycobacterium tuberculosis H37RV и М. bovis 8. Минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) препарата определяли стандартным методом двукратных серийных разведений в синтетической среде Сотона в присутствии 10 % нормальной лошадиной сыворотки. Диапазон исследуемых доз препарата составлял 0,02 - 2,0 объёмн. %. Плотность рабочей микробной нагрузки составляла 5 х 107 кл./мл. Результаты регистрировали при наличии хорошего роста тест - культуры на поверхности среды в контрольных пробирках (8-10 сут. наблюдения). , ,

Моделирование воспалительного процесса и туберкулёзной инфекции. Изучение противовоспалительного действия Левана - 2 проводили на модели острого воспалительного отёка на лабораторных животных. Для сравнения исследовали препараты ортофен и анальгин. Противовоспалительное действие препаратов исследовали на модели острого воспалительного отёка, вызванного введением скипидара белым беспородным мышам в дозе 0,05 мл субплантарно.

Противосталительный эффект Левана - 2 при внутрибрюшинном введении испытывали в дозах 1,0; 1,5; 2,0 мл /кг массы тела. Эффект сравнивали с соответствующим противоспалительным действием анальгина и ортофена, которые вводили в дозах 30 и 0,25 мг/кг, соответственно. Убой животных и взвешивание отёчных лапок производили через 4 ч. Препараты вводили животным за 1 ч до модуляции острого воспалительного отёка. Противовоспалительное действие исследуемых препаратов выражали в % снижения острого воспалительного отёка, по массе лапок.

Исследование противотуберкулёзной активности препарата проводили с использованием экспериментальной модели туберкулёзной инфекции (Першин Г.Н., 1971) на белых беспородных мышах. При этом использовали препарат Леван - 2, цефтазидим и изониазид. Цефтазидим был выбран как антимикробный препарат широкого спектра действия, обладающий аналогичным с Леваном - 2 механизмом бактерицидного действия на клетки микроорганизмов, изониазид - как широко используемый туберкулостатик.

Методические подходы к определению возможности использования Левана - 2 для лечения и профилактики желудочно — кишечных заболеваний новорожденных телят. Критерием оценки эффективности лечебного и профилактического действия Левана - 2 в сравнении с контролем служили результаты клинических, гематологических и бактериологических исследований.

Изучение лечебной эффективности применения препарата Леван — 2 проводили на 22 новорожденных телятах черно-пестрой породы, разделённых на 4 группы. Клиническое наблюдение за физиологическим состоянием телят проводили в течение 10 - 14 сут., регистрируя температуру тела, общее состояние, пульс, дыхание, подвижность, наличие диареи, течение и исход заболевания. Опыты по применению Левана — 2 с профилактической целью проводили на 18 новорожденных телятах, также разделённых на 3 группы. Контрольная группа включала 26 животных.

Исследование патологического материала, выделение чистых культур микроорганизмов, изучение их морфологических, культуральных и ферментативных свойств проводили согласно "Методическим указаниям по бактериологической диагностике колибактериоза "(1991).

Статистическую обработку результатов экспериментов и оценку достоверности проводили по критерию Стьюдента для уровня вероятности не менее 95% с использованием пакета программ Microsoft Excel 97.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ, ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Исследование антимикробной активности продуцента Coriolus pubescens (Shum.:Fr.)Quel.

Анализ данных исследований, представленных в литературе, а также скрининг, проведенный в 1990-1995 г.г. из культур высших дереворазрушающих базидиоми-цетов, позволили отобрать культуру С. pubescens штамм 0663 - возбудителя белой гнили древесины, характеризующегося активным ростом в условиях глубинного культивирования, для проведения дальнейших исследований (рис. 1).

Рис. 1. Продуцент Сог1о1ия риЬеясею (8Ьшп.: Рг.) С?иё1: а - микрофотография мицелия в сканирующем электронном микроскопе, 1256 х; б - рост С. риЬе5сет на СА; в- глубинный рост продуцента на глюкозо - пептонной среде

Таблица 1 - Антимикробное действие мицелия С. риЪезсет и культуральной • __' жидкости__

Тест-культуры Диаметр зон подавленна роста на среде АГВ, мм Диаметр зон подавления роста на среде Мюллера - Хинтона, мм

Метиловый экстракт мицелия Этиловый . экстракт мицелия Культуральная жидкость Метил о. вый экстракт мицелия Этиловый экстракт мицелия Культуральная жидкость

Eschrichia coli АТСС 25992 16,0+0,9 14,0+1,4 22,0+1,4 16,0+0,8 14,5+0,9 22,0+1,3

Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853 17,0+1,2 16,0+1,4 18,0+1,3 20,0+1,2 16,3+1,1 18,2+1,1

Staphylococcus aureus АТСС 6538-p 9,0+1,1 8,0+1,5 П.0+1,5 9,0+0,9 8,4+1,5 11,3±0,9

Bacillus pyo-cycmeum 62 V-59 тип 3 15,2+1,0 13,3+1,4 20,5±1,1 15,3+1,4 13,5+1,5 21,0+0,9

Данные, представленные в табл. 1, показывают, что культуральная жидкость обладает более сильным антимикробным действием, чем водно - спиртовые экстракты мицелия гриба. Установлено, что гриб С. pubescens оказывает антимикробное действие на все тест - культуры аэробных и анаэробных бактерий - возбудителей гнойно - воспалительных инфекций. Однако степень его воздействия различна. Продуцент не оказывает фунгицидного действия на микромицеты родов Aspergillus

и Pénicillium, Chephalosporium, дрожжи родов Candida, Trichosporon, Hansenula, Torula, Saccharomyces, Cryptococcus, актиномицеты родов Nocardia. Sporobolomyces.

Цикл развития гриба С. pubescens в условиях глубинной ферментации на глю-козо - пептонной среде составляет 12-13 сут. В процессе ферментации наблюдаются типичные фазы роста (рис. 2).

Продолжительность культявнрованш, сут.

-Концентрация биомассы, г /л (по а.сл) -Концентрация пжжозы^г/л ■ •

4 6 8 10 12 14 Продшваиталькость кулътнвированил, сут.

Рис. 2. Динамика потребления глюкозы, антимикробной активности и накопления биомассы при глубинном культивировании С. pubescens на глюкозо-пептонной среде: а - биомасса гриба; содержание глюкозы в среде, мкг/ мл; б - антимикробная активность, мм зоны задержки роста St. aureus 653 8-р

Учитывая особенности биосинтетической активности грибов рода Coriolus, в метанольных и водных экстрактах мицелия определяли свободные сахара, алкалоиды, азотсодержащие соединения. Свободные сахара не были обнаружены ни в водном, ни в метанольном экстрактах мицелия С. pubescens. Из алкалоидов и азотсодержащих соединений в метанольных экстрактах обнаружен только холин. В мицелии С. pubescens были обнаружены в значительном количестве гликозиды с пяти-членным кольцом (по реакции Легаля), сахарные гликозиды (по реакции Келлера -Килиани) и стеродные гликозиды (по реакции Молиша). В водном экстракте определялись только «сахарные гликозиды». В метанольном экстракте мицелия была обнаружена только 4-гидроксибензойная кислота (ГБК).

Таким образом, из выявленных веществ биологической активностью обладала ГБК, как антисептик, гликозиды различной природы.

Особое внимание было уделено определению терпеновых соединений, в том числе, ароматических, обладающих, как правило, сильными бактерицидными свойствами. При исследовании терпеноидов из мицелия С. pubescens и культуральной жидкости было выделено два вещества: полипореновая кислота С и кориопубес-цин. Полипореновая кислота С имеет Тш. 285 - 290 0 С, [a]D20 = ± 8,19. Вещество плохо растворимо в холодной воде, хорошо растворимо в этаноле, метаноле, ацетоне. УФ — спектроскопия в этаноле показала пики поглощения при 236, 243, 251 нм. Кориопубесцин имеет Тщ,. 198 - 200 0 С, [а]о20 = +64. Вещество растворимо в холодной воде, хорошо растворимо в этаноле, метаноле, ацетоне. УФ — спектроскопия в этаноле показала пики поглощения при 207,260, 310 нм.

Для оценки антимикробной активности выделенных веществ устанавливали их минимальную подавляющую концентрацию (МПК). Кориопубесцин в концентра-

ции 4x10"4 мг/мл и выше полностью подавляет рост всех тест - культур бактерий. МПК полипореновой кислоты С несколько выше и составляет 4x10"2 мг/мл.

Таким образом, культуральная жидкость продуцента, обладающая антимикробным действием, представляет собой сложную смесь, включающую БАВ, в том числе, терпеновые соединения.

Рис. 3. Действие антимикробных веществ культуральной жидкости (КЖ) С. pubescens на клетки Е. coli (светлое поле, 500х): а - контроль; б - концентрация КЖ в растворе составляет 0,001 объём. %; в - концентрация КЖ - 0,01 объём. %; г -концентрация КЖ - 1,0 объём.'%

Представляло особый интерес изучить возможный механизм действия культуральной жидкости (КЖ), что позволило бы целенаправленно использовать её уникальные свойства. Известно, что бактерицидное действие ряда антибиотиков связано с нарушением нормального синтеза клеточной стенки. В ответ на ингибирование синтеза клеточной стенки происходит лизис клетки под действием автолизинов (Захарова И.Я, Павлова И.Н., 1985). Под действием антимикробных веществ, ингиби-рующих синтез клеточной стенки, происходит изменение фиксации витальных красителей. Для изучения действия антимикробных веществ, синтезируемых С. pubescens в суспензии тест - организмов вносили КЖ в концентрациях от 10"' до Ю"10 объём. % и выдерживали в течение 1 ч при температуре 18 - 20° С. Установлено, что в концентрации 10~'° объем. % наблюдается окрашивание гранул 1% - ным водным раствором нейтрального красного у Е. coli и В. cereus. У St. aureus окрашивание гранул происходило при более высокой концентрации КЖ -10'6 объём. %. На рис. 3 представлены микрофотографии бактерий Е. coli, окрашенных раствором нейтрального красного, после воздействия КЖ в различных концентрациях.

Сравнительное исследование действия антибиотиков, ингибирующих синтез клеточной стенки (пенициллина, цефтазидима), и КЖ на интенсивность автолиза тест организмов проводили с использованием различных концентраций антибиотиков и КЖ. Установлено, что пенициллин в концентрациях 0,1 - 10 мг/мл и цефтази-дим в концентрациях 0,2 - 2,0 мг /мл повышают интенсивность автолиза биомассы тест - культур в 1,1- 2,3 раза, а КЖ С. pubescens в более низких концентрациях

в

г

(0,001 - 1,0 объёмы. %) увеличивает интенсивность автолиза более значительно - в 1,2-2,9 раза. .

Данные, полученные при определении общих липидов в растворах после инкубации, свидетельствуют о повышении их содержания под воздействием антибиотиков и КЖ. Более высокое содержание липидов в инкубационной смеси, содержащей биомассу грамотрицательных бактерий (В. cereus, Е. coli), связано с выделением липидов при нарушении клеточной стенки под воздействием антибиотиков и КЖ С. pubescens, поскольку наружный слой этих бактерий содержит липиды, липо-полисахариды, липопротеины.

В динамике определяли антимикробную активность КЖ продуцента методом диффузии в агар и интенсивность автолиза. В качестве тест - культуры использовали St. aureus АТСС 653 8-р. КЖ вносили в инкубационную смесь в количестве 1,0 объём. %. Полученные данные свидетельствуют о существующей зависимости между изменением антимикробной активности КЖ продуцента и её влиянием на интенсивность автолиза клеток бактерий, что является не только фактическим подтверждением механизма действия антимикробных веществ продуцента, но имеет практическое значение.

В арсенале практической медицины появляется все больше высокоактивных антибиотиков широкого спеюра действия. Ежегодно в мире производится 100 000 т антибиотиков на сумму примерно 5 млрд. долларов (Глик Б. Пастернак Дж., 2002). Однако штаммы патогенных микроорганизмов становятся всё более устойчивыми к антибиотикам, что обусловлено рядом изученных и ещё изучаемых факторов - (Скала Л.З. с соавт., 1997; Поляк М.С., 2003). В связи с этим представляло интерес определить чувствительность клинических полирезистентных штаммов к кориопубес-цину по сравнению с современными средствами антибиотикотерапии. В работе исследовали 117 клинических полирезистентных штаммов бактерий родов Psendo-monas, Klebsiella, Staphylococcus, Enterobacter, Salmonella - представителей микрофлоры слизистых оболочек верхних дыхательных путей, ран, экссудатов, транссудатов, мокроты, мочи детей, поступающих в отделение интенсивной терапии ИОДКБ, у которых на фоне основного заболевания развивались тяжёлые инфекци-онно — воспалительные заболевания.

Таким образом, показано, что клинические полирезистентные штаммы бактерий — возбудителей гнойно — воспалительных заболеваний обладают высокой чувствительностью к кориопубесцину, его МПК для исследуемых штаммов микроорганизмов составила 0,4-7,2 мкг/мл. На основании полученных данных можно также заключить, что выделенные клинические штаммы обладают наибольшей чувствительностью к современным комбинированным препаратам (некоторым цефалоспо-ринам III поколения, макролидам, аминогликозидам, хинолонам, гликопептидам, карбапенемам), устойчивостью к линкозамидам, аминогликозидам, беталактамам, некоторым макролидам и цефалоспоринам III поколения.

С 18 января по 15 марта 1999 г. в бак. лаборатории ИОДКБ прошли лабораторные испытания антимикробного препарата Леван -1, что отражено в акте лабораторных испытаний. Необходимость испытаний была обусловлена особой полирезистентностью выделяемых клинических штаммов к антибиотиком, что, в частности, относится к возбудителям гнойно - воспалительных процессов. Штаммы S. tiphi-murium, Ps. aeruginosa, St. aureus, St. epidermis, St. haemolyticus, выделенные от больных детей и из внешней среды стационара, обладают множественной резистентностью к антибактериальным препаратам. Так, до 1995 г. в 80 % - тах случаев

Таблица 2 - Значения величин МПК Левана-1 (объём.%) для клинических _штаммов бактерий семейства Еп1егоЬас1еггасеае__

Спектр исследованных микроорганизмов МПК, объём. %

0,0035 0,0030 0,0025 0,0020 0,0015 0,0010 0,0005 Контроль

Shigella flexneri Зв 05545 - ■ + + ++ #

S. flexnert 2а 05540 - - - • + ++ +++ #

S. sonnei 7J90 . - - ■ - + + ++ #

S. sonnei 7199 - - - - + ++ #

S. sonnei 05402 - - - + ++ #

S. sonnei 7482 - - - + -н- +++ #

S. sonnei 7184 , - ■ - - - - + #

S. sonnei 21 7346 - . - - + ++ + #

S. sonnei 365k - - + ++ +++ #

S. sonnei 05373 - - - + ++ +++ . #

S. sonnei 05510 - - - - - + #

S. sonnei 2905506 - - - - + ++ ft

S. sonnei 7288 - - - + ++ + #

S. sonnei 05337 - - - - + : ++ й

Proteus reftgeri 05538 - ■ - - + ++ #

P. vulgaris 7426 - - - + ++ +++ #

P. vulgaris 05545 - - - - + +-Н- . M

P. mirabilis 7266 - - - + ++ +++ it

Salmonella enteritidis 7606 - - - + ++ +++ M

Enterobacter aerogenes 7478 - - - ■ + ++ ++ tt

Morganella morganii 7523 - . - ■ - . - + +++

M. morganii 7578 - - - - . + . ++

E. coli 0128 7574 OKA - - - - ++ +++ #

Примечание: «-»- отсутствие роста культуры; «+», «++», «+++», «#» - интенсивность роста культуры.

высевались штаммы Ps. aeruginosa от больных детей, из окружающей среды стационара, чувствительные к гентамицину (Агапова Е. Д., 1998), с 1996 г. наблюдали 100% - ную резистентность выделяемых штаммов к этому антибиотику. Установлено, что 52 клинических полирезистентных штамма бактерий родов Pseudomonas, Staphylococcus, Salmonella обладают 100 % - ной чувствительностью к препарату Леван - 1, при этом значения МПК составляют 0,001 - 0,0015 объём. %. Практический интерес представляло провести оценку активности препарата в отношении бактерий семейства Enterobacteriaceae, поскольку из всех клинически значимых бактерий энтеробактерии составляют примерно 50 %, из грамотрицательных - примерно 80 % (Смирнов И.В., 2001). Штаммы были выделены от больных и идентифицированы в бак. лаборатории Городской инфекционной больницы г. Иркутска. Для оценки антибиотикорезистентности возбудителей кишечных инфекций семейства Enterobacteriaceae, наряду с Леваном - 1, использовали рекомендуемый набор антимикробных препаратов: ампициллин, триметоприм, ципрофлоксацин, тетрациклин, цефотаксим, хлорамфеникол. Для контроля качества проведения исследований использовали референтные штаммы микроорганизмов (Ps. aeruginosa АТСС 27853, Е. coli АТСС 25922). Данные по определению МПК Левана - 1 для выделенных штаммов бактерий семейства Enterobacteriaceae представлены в табл. 2.

Установлено, что МПК Левана-1 для бактерий, вызывающих острые кишечные заболевания, составляет 0,001 - 0,002 объём. %. Изложенные факты обосновывают

целесообразность проведения дальнейших исследований в данном направлении, если принять во внимание, что перечень антибиотиков, которые применяются для лечения диарейных инфекций, является ограниченным, особенно при генерализованных инфекциях, вызванных штаммами Salmonella.

Твердофазная ферментация гриба С. pubescens и утилизация отходов деревообрабатывающей, целлюлозно - бумажной промышленности

Некоторые исследователи отмечают, что грибы, вызывающие белую гниль древесины, чаще всего обладают антибиотической активностью. Наличие такой зависимости было подтверждено и в наших исследованиях при культивировании продуцента С. pubescens методом ТФФ.

Подтверждением того, что продуцент С. pubescens является активным деструктором лигнина, явились исследования, направленные на изучение изменения химического состава шлам - лигнина отхода производства ОАО «Байкальский ЦБК» -' под воздействием грибов - продуцентов при культивировании их методом ТФФ. На предприятиях ЦБП, использующих для отбеливания целлюлозы молекулярный' хлор, образуются ПХДЦ и ПХДФ (Корте Ф. с соавт., 1997; Игнатьева Л.П., 1997),. которые являются представителями хлорированных циклических ароматических эфиров. При изучении химического состава шлам - лигнина БЦБК методом хрома-то - масс - спектрометрии было идентифицировано более 60 соединений; среди которых хлорированные углеводороды составили 17,2 %, производные фенолов -5-15 %, фуранов - 9,3 %, бензолов - 2,5 %.

С целью изучения возможности использования методов биотехнологии для утилизации отходов целлюлозно - бумажной промышленности (ЦБП) шлам - лиг-, нин ОАО «Байкальский ЦБК» засевали суспензией продуцентов С. pubescens штамм 0663 и Sek commune штамм 0459 и проводили ТТФ в течение 1,5 - 2 месяцев при 37° С. Результаты изменения состава шлам - лигнина ОАО «Байкальский ЦБК» представлены в табл. 3. .

Показано, что при ТФФ шлам - лигнина хлорорганические компоненты, фенолы, фураны, бензолы не были обнаружены (при данной чувствительности метода - 1 мкг/кг). Кроме того, в результате деструкции лигнина увеличилось количество нециклических соединений, что является подтверждением высокой активности продуцента разрушать ароматические кольца.

После обработки шлама продуцентом Sch. commune в его составе наблюдали наоборот увеличение доли ароматических соединений за счёт циклизации непредельных углеводородов, что можно объяснить особенностями метаболизма продуцента (Элисашвили В.И., 1993).

Расчёты показали, что эффективность разрушения суммы циклических соединений штаммом С. pubescens для отходов ОАО «Байкальский ЦБК» составила 21, 37 %, а для отходов ОАО «Братсккомплекс - холдинг» только 0,46%, эффективность разрушения соединений, способных к образованию диоксинов - 100 % (фенолов, хлорсодержащих соединений). Таким образом, установлено, что в качестве биологического метода обезвреживания твёрдых отходов ЦБП, содержащих хлор-органические ароматические соединения, можно рекомендовать метод утилизации шлам - лигнина с использованием штамма 0663 дереворазрушающего базидиоми-цета С .pubescens. Такой метод является экологически безопасным. Биологический метод, как считают некоторые исследователи (Sierra P.R. 1989; Фёдоров Л.А., 1993), является одним из многообещающих методов обезвреживания хлорорганических - -

Таблиц 3 - Изменение состава шлам - лигнина ОАО « Байкальский ЦБК» по-

Органические соединения Содержание компонентов в % от общей массы отходов

Шлам - лигнин (контроль) Шлам- лигнин после ТТФ С. pubescens Шлам- лигнин после ТТФ Sch. commune

Общее количество идентифицированных органических соединений 53 84 58

Нециклические: 55,?4 65,2 45,42

С9 - С]9 33,31 37,21 30,74,

См - С« 13,06 17,35 12,03

Кислоты 6,54 9,83 •2,65

Спирты 2,83 0,73

Циклические: 44,22 34,8 54,58

Бензолы 1,96 0,001 3,97

Фенолы 13,5 0,001 . 0,001

Фураны 13,51 0,001 0,001

Всего хлорированных соединений ; 20,27 V 0,001 0,001

Лигнин 24 22 22,6

соединений в природных объектах.

При ТФФ субстрата (сосновых опилок) происходит не только утилизация субстрата, но и образование БАВ - белков, липидов, витаминов. При ТФФ конечные продукты представляли собой смесь выросших грибов и неутилизированного субстрата - белково - углеводные комплексы (БУК). Одним из критериев оценки биологической ценности продуктов является содержание в них макро- и микроэлементов. В работе определялось их содержание в сравнительном аспекте: в культураль-ном мицелии (при глубинном культивировании на глюкозо - пептонной среде), в субстрате (сосновые опилки), в БУК. Результаты представлены в табл. 4. Представленные данные свидетельствуют о том, что содержание токсичных элементов не превышает ПДК даже для пищевых продуктов - грибов, изолятов и концентратов белка (СанПиН 2.3.2.560 - 96). Было установлено сравнительно высокое содержание марганца (до 19,5 мг/кг), железа (до 35,5 мг/кг) и цинка (до 8,9 мг/кг), что характерно как для плодовых тел высших базидиальных грибов, произрастающих в

Таблица 4 - Содержание микроэлементов в культуральном мицелии __С. риЬейсет и в белково-углеводном комплексе _

Элемент Содержание микроэлементов, мг/кг Элемент Содержание микроэлементов, мг/кг

Культу-ральный мицелий БУК Сосновые опилки . Культу-ральный мицелий БУК Сосновые опилки

Кадмий 1,281 0,016 0,007 Железо 9,96 35,50 35,300

Свинец н/о 0,173 0,275 Никель н/о н/о н/о

Цинк 8,964 4,367 0,487 Ртуть н/о 0,044 0,016

Медь 1,035 0,536 0,677 Мышьяк н/о н/о н/о

Хром 0,030 0,018 0,008 Йод 0,200 0,352 0,184

Марганец 0,80 14,50 0 19,500

Примечание: н/о - не обнаружено.

естественных условиях, так и для культурального мицелия (Капич А.И., 1990; Бухало A.C., 1988).

Таким образом, что при ТФФ лигноцеллюлозных отходов происходит их утилизация с образованием безопасных белково - углеводных комплексов. При этом под действием окислительных и гидролитических ферментных систем базидиомицета происходит биоконверсия фенольных соединений, входящих в состав лигнина, сложных полисахаридов в ценные продукты. Получаемые продукты утилизации отвечают требованиям безопасности для пищевых продуктов.

Основы технологии получения продуктов биотехнологии методом жидкофазной ферментации гриба С. pubescens

Изучение теоретических проблемна именно: физиологических и биохимических аспектов направленного синтеза БАВ, - даёт возможность как теоретического, так и практического обоснования и разработки способов культивирования продуцента, эффективных методов выделения и очистки вторичных метаболитов. Конечная же цель таких исследований заключается в получении новых лекарственных средств, технологических ингредиентов, стимуляторов роста сельскохозяйственных животных с использованием методов биотехнологии. В связи с этим актуальным является решение вопроса об использовании биомассы продуцента, т.е. утилизации промышленных отходов биотехнологического производства. В этом контексте могут быть рассмотрены схемы безотходного производства антимикробных препаратов и технологических ингредиентов, а также производства полисахаридов и иммуностимулирующих препаратов на их основе, стимуляторов роста животных. Таким образом, разработка основных принципов технологической схемы получения препаратов, характеризующихся выраженным фармакологическим действием, и технологических ингредиентов является неотьемлимой частью данной работы.

В результате оптимизации были выбраны питательные среды для жидкофазно-го культивирования продуцента. В зависимости от конечного продукта используются различные источники углерода (сахароза, глюкоза) в разных концентрациях с добавлением микрокристаллической целлюлозы для поддержания природной целлю-лазной активности продуцента. В табл. 5 представлены оптимальные концентрации источника углерода в среде для получения антимикробных препаратов (Леван - 1, Леван - 2) и технологического ингредиента Леван - 1.

Следует отметить, что состав питательных сред подбирался не только с учётом физиологических потребностей продуцента, но и с учётом того, что культивирование проводится с целью получения лекарственных средств медицинского и ветеринарного назначения, технологического ингредиента для пищевой промышленности, а, следовательно, с учётом жёстких требований по критериям безопасности. На этом моменте делается акцент, поскольку наши исследования показали, что различные партии мелассы, используемой на микробиологических производствах, в частности, на ОАО «Дрожжевой завод», могут быть источником тяжёлых металлов (Чхенкели В.А., Чхенкели Г.Д., 1998). В свою очередь дрожжи, низшие мицелиаль-ные и высшие грибы обладают способностью к сорбции тяжёлых металлов, что показано как в наших исследованиях (Чхенкели В.А., Чхенкели Г.Д., 1996), так и в работах других авторов (Давидова Е.Г., Каспарова С.Г., 1992; Феофилова Е.П. с со-авт., 1994).

На среде, которая была определена как оптимальная для культивирования продуцента при получении технологического ингредиента Леван - 1, процесс осуществлялся в дифференциальном режиме. С целью интенсификации процесса в

Таблица 5 - Содержание источника углерода в среде при получении антимикробных препаратов, технологического ингредиента и экономический _коэффициент использования субстрата (У)__

Препарат, ингредиент Содержание источника углерода в среде, % Выход биомассы, г/л а.с.б. У, %

Сахароза Глюкоза

Антимикробный препарат Леван - 1 10,0 6,0+0,2 60

Антимикробный препарат Леван -1 12,5 - 8,9±0,1 71

Технологический ингредиент Леван -1 20,0 6,8+0,3 68

Примечание: У -экономический коэффициент использования субстрата для образования биомассы; У= ёХМЭ х 100 %, где Х- концентрация биомассы в среде, в - концентрация субстрата в среде.

стадии логарифмического роста продуцента осуществляли регуляцию уровня рН среды, подпитку субстратом. При этом продолжительность культивирования в периодическом режиме при 26 - 28° С составляла 48 — 50 ч, при отьёмно - доливном — 28 - 30 ч. Концентрация биомассы в зависимости от содержания редуцирующих веществ составляла от 10 до 25 г/л а.с.б.

Таблица б - Фракционный состав углеводов мицелия С. риЬезсет {%)

Спирторастворимая фракция Водорастворимая фракция Фракция пектиновых веществ Фракция гемицел-люлоз Лигноподоб-ная фракция Целлюлоза Общее содержание углеводов

Без гидролиза Гидролиз 2% НС1 гидролиз 25% НС1 А Б всего

0,12 0,06 0,38 Следы 0,18 6,30 1,45 7,75 1,45 3,98 13,09

Углеводы грибов можно разделить на несколько групп в зависимости от способа их экстракции растворителями (Рипачек В., 1967) В табл. 6 представлены данные по фракционному составу углеводов мицелия С. риЬезсет.

Химический состав мицелия С. риЬезсею, полученного при культивировании на оптимизированной ппокозо - пептонной среде, представлен в табл. 7. При культивировании продуцента экономический коэффициент, рассчитанный по исходному сахару, составил 44,5 %, содержание протеина - 46,3 %.

Таблищ 7 - Химический состав мицелия С. риЬезсепз, полученного при культивировании на оптимизированной ппокозо - пептонной среде_

Выход биомассы, г/л а.с.б. У,% Протеин,% Истинный белок, % Жир,% Зола, %

8,9 44,5 46,3 34,2 5,3 6,2

Примечание: У- экономический коэффициент.

Отношение суммы незаменимых аминокислот к сумме заменимых (Е/н) характеризует биологическую ценность белков и для биомассы С. риЬеясет составляет 0,65, что ниже этого показателя для казеина молока (0,75). Для оценки белка важным показателем является его перевариваемость, которая зависит от соотношения

легко - и трудногидролизуемых аминокислот, входящих в состав белков. Показателем высокой перевариваемое™ может служить отношение суммы аргинина и лизина к пролину. Так, для белка риса этот показатель составляет 4, для соевой муки -2,1, для зерновых культур - ниже 1. Для белка исследуемого продуцента это соотношение составляет 1,67 и характеризует его как высокоперевариваемый.

Таблица 8 - Жирнокислотный состав липидной фракции,

выделенной из биомассы __ Coriolus pubescens _

Жирная кислота Содержание, % Жирная кислота Содержание, %

Насыщенные кислоты: Ненасыщенные кислоты:

Пальмитиновая (С1&0) 33,9 Олеиновая (Сц-1) 34,1

Стеариновая (Сил) 5,2 Пальмитоолеиновая (С^) 1,3

Всего насыщенных кислот 39,1 Линоленовая (Сиз) 0,1

Линолевая (Сцг) 25,4

Всего ненасыщенных кислот 60,9

Биологическую ценность белков характеризует не только аминокислотный профиль, но и его фракционный состав. Установлено, что водосолерастворимые белки (альбумины и глобулины) преобладают в биомассе гриба и составляют 62,0 и 5,53 %, соответственно.

Анализ липидной фракции продуцента показал, что она включает жирные кислоты, стерины. триглицериды, воска, фосфолипиды и углеводороды. Содержание жирных кислот составляет 52,45 %, триглицеридов - 0, 85 % от фракции неполярных липидов. Фракция жирных кислот отличается высоким содержанием ненасыщенных жирных кислот (более 61 %) - олеиновой и линолевой, эргостерина (табл.8)

Таблица 9 - Содержание микро-, макроэлементов, витаминов в мицелиальной массе __Coriolus pubescens_-__

Микро - и макроэлементы, витамины Содержание, мг / кг а.с.б. Микро - и макроэлементы, витамины Содержание, мг / кг а.с.б

Тиамин (В1) 0,300 Магний 700

Рибофлавин (В2) 0,156 Фосфор 90

Панготеновая кислота (В)) 2,7 Железо 5300

Пиридоксин (Вб) 0,08 Цинк 7,533

Кобаламины (В 12) 0,1 Йод : 25

Фолиевая кислота 40,0 Медь 230

Никотиновая кислота (РР) 225,0 Кадмий 1,145

Биотип 0,9 Свинец • " '

Кальций 1530 Ртуть >

Калий 475 Мышьяк -

Натрий 310

питательной среды, так и от условий культивирования продуцента. Это подтверждает данные экспериментальных работ, полученные другими исследователями (Олешко B.C., Бабицкая В.Г., 1991; Капич А.Н., 1990; Горшина Е.С. с соавт., 2003).

Данные, полученные при исследовании жирнокислотного состава липидной фракции, согласуются с данными, полученными при исследовании биомассы ксило-трофов (Горшина Е.С. с соавт., 2003). Физиологически активные фосфолипиды в основном содержат фосфатидилсерин (60,0 %), а также фосфатидилэтаноламин

(21,9 %) и фосфатидилхолин (18,1%).Биомасса гриба содержит также витамины группы В, значительные количества калия, кальция, фосфора, железа, цинка, меди. По содержанию токсичных элементов биомасса удовлетворяет жёстким требованиям САНПиН 2.3.2.560 - 96. Результаты представлены в табл. 9.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что по питательным свойствам мицелиальная масса С. риЬе$сет близка к питательным свойствам грибов, традиционно употребляемым в пищу (Скурихин И.М., Волгарев М.Н., 1987), а состав мицеяиальной массы в значительной степени зависит как от состава

М

И ■ «•

с'

4 •

. . 2 • ' • -

- о та 4Д во аа ■■■■■

. Пр одолзкшельног яь кулыявирояаиия, сут.

-«— КЯННВНЦММЦЦЙ биомассы, Г /А (ПО 8 с в) —♦—Концентрация глюкозы г/л

Рис . 4. Динамика изменения показателей культивирования С. риЬезсепз в ферментаторе (рабочий объём 20 л, рН 4,2, аэрация 1,2 мин частота вращения мешалки 220 об. / мин. (по оси У расположена безмерная численная шкала для обеих указанных величин)

На рис. 4 показана динамика накопления биомассы продуцента в периодическом режиме без долива на глюкозо - пептонной среде (при РВ=10%) в аппарате Ма-гиЫзЫ при регулировании уровня рН (4,2). Концентрация сухой мицелиальной массы через 72 ч культивирования составила 8,9 г/л. Отделение биомассы проводили фильтрацией.

На производстве эта операция может проводиться на стандартном промышленном фильтрационном оборудовании под давлением или вакуумом (пресс-фильтр, вакуум — фильтр).

Установлено, что для сохранения активности фильтрата оптимальным режимом является его автоклавирование при 0,5 атм в течение 20 мин. При изменении условий стерилизации происходит резкое снижение активности фильтрата. Фильтрат разливали в стерильную тару объёмом Зле целью удобства использования в условиях промышленного производства.

Таким образом, аппаратурно - технологическая схема производства технологического ингредиента Леван - 1 является типовой для микробиологического производства и включает стадию подготовки посевного материала и выращивание продуцента в лаборатории с последовательной цепочкой ферментационных аппаратов от инокулятора до рабочего ферментёра.

Биомасса гриба может быть высушена в градиенте температур от 30 до 110° С для дальнейшего выделения из неё полисахаридов и получения иммуностимули-

£

рующих, противоопухолевых препаратов. Возможен вариант получения биологически активной ценной субстанции - лиофильно высушенной вместе с культуральной жидкостью биомассой, которая может быть использована для получения пищевых добавок, стимуляторов роста животных.

Подготовка пос«вного материала ♦

-Жцзнофаэная ферментация

♦

Отделение биомассы от кулыурмьной жидкости_

(фильтрация, центрифугирование, сепарирование) \

_ + ■ Кулмурага>ная—-

* .

Высушивание в воздушном *

потоке цжЗО-110" С _ Выделоме

| I (экстр аю*м

Выдел«™« I орг. раство-

(экетрмецня оргмммекнмк * ригелями) растворителями, водой, растворам Трнтергкяы

кислот н щелочей) | Атнынкройные,

Вакуумная суписа 1-" Ч»™**«««*

' препараты

Полисахариды-► Лекарств емые средстве

Сгерояы (тшуноепшулирующне,

антимикробные, гротнвоопухолевые)

Тритерпены-Иммуностимулирующие,

нлропвооцухслоаые Фспараш Стерияюацая

(автоклшцроммне) Биологически активная субстанция —^ .

__ Лнофипьная сушка 4

♦ Антнивжробяое препараты

Пищевые добавки Технологические ишрчяишш

Стимуляторы роста яонвотных

Рис. 5. Принципиальная схема продуктов биотехнологии на основе гриба С. риЬеэ-сепз

Таким образом, весь технологический процесс безотходного производства продуктов биотехнологии с использованием дереворазрушающего гриба С. риЬез-сею может быть представлен в виде обобщённой технологической схемы, которая представлена на рис. 5.

Экономическая эффективность производства технологического ингредиента Леван - 1 показана в разработанном В.А. Чхенкели (2001) бизнес - плане предпринимательского проекта «Производство технологического ингредиента для бродильных производств» и защищенного автором в ЗАО «Иркутский бизнес - парк».

Полисахариды гриба С. pubescens как неспецифические стимуляторы иммунологической активности

В настоящее время проблема иммуностимуляции и иммуновосстановления занимает важное место в комплексном лечении. Лекарственные препараты могут усиливать как специфические иммунные реакции (синтез антител, отбор Т-клеток с

участием таких ферментов, как лизоцим, пропердин и другими специфическими рецепторами), так и неспецифические процессы, например, лейкоцитоз (Земсков H.H. 1997; Машковский М.Д., 1997; Прийма О.Б., 1997). Среди неспецифических иммуностимуляторов природного происхождения большую часть составляют полисахариды и полисахаридные комплексы из дрожжей, грибов и высших растений, на основе которых создан ряд медицинских препаратов - продигиозан, зимозан, ро-пермил, маннозим (Терешина В. М., Меморская А. С., 1997). При этом полисахариды являются средством, соответствующим требованиям клинической иммунологии: они малотоксичны, не вызывают иммунизации организма, проявляют эффективность в малых дозах (Бухало A.C. с соавт., 1988).

Выделение полисахаридов из клеточных стенок гриба С. pubescens проводили по схеме,-представленной на рис. 6.

Далее исследования проводили с фракцией I и фракцией III, исходя из того, что иммуностимулирующей активностью обладают глюкановые фракции полисахаридов.

Полисахариды клеточной стенки Клеточные стенки

| 2 N NaOH ' Ьб ч при 20° С центрифугирование

I-:-—"

Осадок

inh2so4

16 ч при 90° С центрифугирование

-Отмытый осадок

Супернатант

Ва(ОН)2 рН7,0

центрифугирование Супернатант

Фракция П

2 N NaOH

30 мин. при 20° С

центрифугирование

Супернатант

2 объёма этанола Преципитат

I переосаждение этанолом, сушка Фракция!

Осадок

диализ 48 ч сушка

Фракция IV

Супернатант

3 объема этанола

Преципитат

диализ 48 ч. переосаждение, сушка Фракция Ш

Рис. б.Схема получения отдельных фракций полисахаридов клеточной стенки Сог1о1ш риЬезсет

Определение белка в выделенных фракциях показало его наличие в клеточных стенках и в выделенных из них полисахаридных фракциях. Углеводный состав

полисахаридов клеточной стенки продуцента представлен в табл. 10.

Таблица 10- Углеводный состав полисахаридов клеточной стенки продуцента ___:_С. риЬезсет_

Фракция Углеводы, %

Глюкоза Галактоза Манноза Ксилоза Арабиноза

I 66,9 1,6 16,7 18,0 Следы

П 74,0 3,1 9,5 13,4 Следы

III 84,2 1,6 12,1 12,1 Следы

Исследование тенденций влияния полисахаридов клеточной стенки С. pubes-cens на функциональную активность иммунокомпетентных клеток проводили не примере фракции 1 in vitro на венозной крови доноров - мужчин, больных хлами-диозом. Полисахаридная фракция добавлялась в оптимальных концентрациях 7,4; 3,7; 1,5 мг/л. Исследования проводили в двух направлениях: влияние растворов полисахаридов на электрофоретическую подвижность и на фагоцитоз нейтрофилов.

Исследование влияния глюкановых фракций полисахаридов, выделяемых из биомассы С. pubescens, позволило выявить эффект активации нейтрофилов in vitro, а также выявить тенденцию к увеличению подвижности Т-хелперов. Полученные результаты являются предпосылкой для разработки нового иммуностимулирующего препарата. Однако проведённые исследования не позволили выявить устойчивой зависимости влияния полисаридов клеточной стенки С. pubescens на функциональную активность иммунокомпетентных клеток, поскольку она имеет более сложный механизм действия, предусматривающий наличие динамики биохимических процессов в клетке. Для более полной картины необходимо проведение исследования влияния полисахаридов in vivo.

Определение возможности использования технологического ингредиента Леван - 1 на бродильных производствах

Инфицирование посторонней микрофлорой на различных этапах технологического процесса — одна из важнейших проблем бродильных производств. Бактериальное обсеменение происходит через сырьё, воздух, воду, технологическое оборудование, канализацию и т.д. В связи с этим на производстве имеет значение не только выявление источников инфицирования, но и применение эффективных способов борьбы с инфицирующей микрофлорой. С этой целью на производстве используют агрессивные вещества — хлорную известь, формалин, серную кислоту.

Актуальным является решение проблемы снижения обсемененности раствора мелассы и бродящей жидкости в процессе производства дрожжей как вегетативными, так и споровыми формами бактерий. Разработано огромное количество средств по снижению количества посторонней микрофлоры, таких как антибиотики, антисептики, различные методы стерилизации (Семихатова Н.М., Малыгина М.Ф., 1970; Семихатова Н.М., 1980). Однако промышленное их использование не всегда эффективно и весьма дорогостояще. Использование других веществ нежелательно вследствие их вредности. Использование же большинства предлагаемых веществ не вышло за рамки лабораторных испытаний.

В связи с этим использование экологически безопасных и эффективных способов борьбы с посторонней микрофлорой позволит не только вытеснить агрессивные вещества из технологических процессов, но и улучшить качество выпускаемой продукции. Особый интерес в этом отношении представляет изучение возможности

использования с этой целью уникальных свойств гриба С. риЬезсет, а именно: его высокой антимикробной активности и способности стимулировать рост дрожжей. Этими свойствами обладает и технологический ингредиент Леван - 1, разработанный на основе продуцента С. риЬезсет.

ЕЯ Ряд 1

■ Ряд2

□ РядЗ

□ Ряд 4

■ Ряд 5 В Ряд б

■ Ряд 7

□ Ряд 8

,5,7- контроль ,4,6,8- опыт

.. Рис. 7. Динамика изменения стойкости дрожжей в зависимости от количества заторов: 1,2,3,4 - ферментации проводились в июне 1997 г.; 5, 6,7,8 - ферментации проводились в августе 1997 г.; опыт - с использованием технологического ингредиента

Несмотря на общие принципы производства, каждое направление, основанное на использовании в качестве промышленных продуцентов дрожжей и процессов брожения, имеет свои особенности, технологические схемы и регламенты. Следовательно, и подходы к внесению изменений в технологии производства с использованием антимикробных технологических ингредиентов также имеют свои особенности и требуют основательной проработки на всех уровнях: лабораторном, полупромышленном и промышленном. Все проведённые испытания технологического ингредиента подтверждены актами лабораторных, полупромышленных и промышленных испытаний.

Промышленные испытания технологического ингредиента Леван - 1 проводили на ОАО « Дрожжевой завод» в апреле - августе 1997 г. (рис. 7). По результатам промышленных испытаний получен акт внедрения на использование технологического ингредиента Леван — 1 для снижения уровня бактериального обсеменения в процессе производства и с целью повышения стойкости дрожжей. При проведении промышленных испытаний использовались различные схемы введения ингредиента в процесс производства дрожжей, различные технологические схемы производства прессованных дрожжей, ферментации осуществляли в различные периоды года, естественное влияние на проведение любых биотехнологических процессов. Про-

мышленные испытания проводили с использованием различных промышленных продуцентов.

Внесение технологического ингредиента осуществляли на различных этапах производства дрожжей, как это обычно проводят при использовании других антимикробных препаратов.

Установлено, что особая эффективность использования технологического ингредиента Левана - 1 достигается при внесении ингредиента сразу после мойки производственного оборудования, что позволяет добиваться не только высокой стойкости прессованных дрожжей, но и стабильности, что чрезвычайно важно на производстве, особенно в весенне - летний период.

На рис. 8 показана зависимость стойкости дрожжей от количества заторов после санитарной обработки оборудования, которую наблюдали на производстве в августе - сентябре 1997 г. Использование ингредиента практически перед мойкой оборудования вызывает «всплеск» повышения стойкости дрожжей (рис. 8).

и

3 С 11 14 17 20 Я К Я М Ж

№ затора

Рис. 8. Динамика изменения стойкости дрожжей в зависимости от санитарной обработки производственного оборудования в августе 1997 г.

За период промышленных испытаний было выпущено 190 т товарных дрожжей. Средняя стойкость при внесении препарата только в рассиропник в мелассовое сусло после осветления составила 134 ч. Средняя стойкость при внесении ингредиента как в рассиропник (3 л), так и на товарной стадии (3 л) составила 114 ч.

Максимальная стойкость составила 187 ч (затор № 28), минимальная - 90 ч (затор № 22). Процесс ферментации во всех случаях протекал нормально, дрожжи прессованные по всем показателям соответствовали ГОСТ 171 — 81. Для сравнения действия Левана - 1 с действием других антимикробных препаратов было исследовано влияние фурациллина на показатели качества дрожжей. С этой целью в мелассовое сусло вносили раствор фурациллина из расчёта 0,01 % к объёму сусла. Показатели качества полученных дрожжей представлены в табл. 13. Данные табл. 11 свидетельствуют о том, что внесение фурациллина приводит к снижению выхода дрожжей на 4,7 % по сравнению с контролем и на 6,0 % по сравнению с выходом дрожжей, получаемом при внесении технологического ин греди-ента Леван - 1, а также к окрашиванию дрожжей в бледно - жёлтый цвет. Исследования по выявлению особенностей при использовании различных промышленных продуцентов - БассИ. сегеу^^ае ЛК и Жассй. сегеу1$1ае ЛВ - 7 при внесении технологического ингредиента показали, что антимикробное действие Левана - 1 проявляется одинаково хорошо при использовании обоих продуцентов.

Было проанализировано колебание среднесуточных температур в г. Иркутске в 1995 - 1997 гг. и установлена зависимость показатель стойкости дрожжей от этого фактора. Показано, что незначительное повышение температуры окружающей

Таблица 11 - Влияние технологического ингредиента Леван - 1 и фурацилли-

на на показатели качества дрожжей

№ п/п Вариант опыта Стойкость, ч Подъёмная сила, мин. Выход, кг Органолептические показатели

1 2 3 Xq, Контроль 125 136 131 . 131 45 47, 45 46 8600 8558 8732 8630 дрожжи имеют равномерный с кремовым оттенком цвет, приятный запах, свойственный дрожжам

3 4 5 ^ср.* Леван - 1 135 . 149 144 143 48 42 45 45 8754 8625 8883 8754 дрожжи имеют равномерный с кремовым оттенком цвет, приятный запах, свойственный дрожжам

7 8' 9 XcD. Фурацил-лин 123 138 142 - 134 45 43 49 . 46 8236 8259 8180 8225 дрожжи имеют равномерный с жёлтым оттенком цвет, приятный запах, свойственный дрожжам

Примечание: ХсР. - среднее значение показателя.

среды приводит к падению стойкости дрожжей. Однако даже при повышении температуры окружающей среды при использовании технологического ингредиента Леван - 1 можно добиться повышения стойкости дрожжей.

Таким образом, использование Левана - 1 особенно эффективно весной, летом и осенью, когда наблюдается естественное повышение температуры окружающей среды.

На дрожжевом производстве было выделено и идентифицировано 26 штаммов микроорганизмов - типичных представителей посторонней микрофлоры производства. На рис. 9 представлены типичные представители посторонней микрофлоры, выделенные с производства ОАО « Дрожжевой завод».

а б в

Рис. 9. Представители посторонней микрофлоры дрожжевого производства: а -Bacillus brevi ; б - Bacillus mesentericus-, в - Leuconostoc paramtsenteroides. Сканирующая электронная микроскопия, 634х

При изучении чувствительности / устойчивости чистых культур микроорганизмов к тезнологическому ингредиенту было установлено, что Леван - 1 подавляет рост ActinobaciUus equuli, Bacillus mesentericus, В. brevis, В. pofymyxa в концентрациях 0,01 - 0,1% объемн. Угнетение роста Leuconostoc mesenteroides и L. ра-ramesenteroides происходит при более значительных концентрациях препарата, что связано с различием в строении клеточной стенки грамположительных и грамотри-цательных бактерий, а также наличием слизевой защитной капсулы, образующейся вокруг клеток лейконостока и состоящей из декстрана.

При проведении лабораторных испытаний Левана - 1 в лаборатории дрожжей ВНИИПБТ (г. С. - П.) было исследовано влияние ингредиента на микрофлору хлебопекарных дрожжей. Леван - 1 в количестве 0,06 % вносили в суспензию дрожжей. Установлено, что при времени экспозиции 2 ч при внесении Левана - 1 содержание гнилостных бактерий в дрожжевом молоке сократилось на 25 %. При внесении Левана — 1 в мелассовое сусло в количестве 0,02 % количество гнилостных бактерий снижалось на 40 %, при нагревании его до 80° С - на 50 %, количество лейконостока при комнатной температуре не снижалось, а при нагревании ме-лассового раствора до 80° С - снижалось на 40 %.

Таким образом, на основании проведенных исследований рекомендовано использовать экологически безопасный технологический ингредиент Леван - 1 для снижения бактериальной обсемененности как в ходе технологического процесса производства прессованных дрожжей, так и в товарных дрожжах для повышения их стойкости, для стабилизации производственного процесса в целом, особенно, в неблагоприятный для дрожжевого производства весенне - летний период.

Для борьбы с инфицированием продуктов брожения на спиртовом производстве также применяют различные антимикробные вещества, подавляющие рост и развитие посторонних микроорганизмов, в основном, молочнокислых бактерий, и не влияющих на жизнедеятельность дрожжей (Яровенко В.Л. с соавт., 1996). Применяемые средства не должны ухудшать качество выпускаемых основного (спирта) и побочных продуктов (барды), не быть токсичными для людей и животных, хорошо растворяться в воде, не вызывать коррозии оборудования, быть устойчивыми при хранении. Поэтому поиск антимикробных веществ, отвечающих жёстким требованиям пищевого производства, представляется весьма актуальной задачей.

Лабораторные, полупромышленные и промышленные испытания технологического ингредиента Леван - 1 проводились на Тельминском спиртовом заводе ОАО «Кедр» и подтверждены актами испытаний.

Анализ результатов лабораторных испытаний, проведённых на Тельминском спиртовом заводе, позволил сделать вывод о целесообразности применения технологического ингредиента в спиртовом производстве для дезинфекции солодового молока. При проведении производственных испытаний установлено, что при дезинфекции солодового молочка замена формалина технологическим ингредиентом Леван-1 в концентрации 0,003 % приводит к сокращению производственного цикла на 10 - 12 ч, при этом содержание несброженных углеводов в среднем составляет 0,18 мг/л (при плановой концентрации 0,25 - 0,45 мг/л). При замене как формалина (в концентрации 0,084 %) в качестве дезинфекганта, так и серной кислоты, на технологический ингредиент при внесении Левана - 1 в количестве 0,003 %, сокращения сроков брожения не происходит. При этом содержание несброженных углеводов уменьшается до 21 мг/мл, выход спирта увеличивается на 6,6 %. Исследование качества получаемого спирта с использованием метода ГЖХ показало, что при использовании препарата происходит сокращение содержания метанола в конечном продукте на 51,2 %.

Таким образом, использование экологически безопасного технологического ингредиента, получаемого на основе природных антимикробных веществ С. риЬел-сеш, на бродильных

производствах позволяет не только снизить обсеменение посторонней микрофлорой на всех стадиях технологического процесса, но и сократить время броже-

ния, повысить выход и качество продукции, исключить из технологических процессов вредные и агрессивные вещества.

Использование биологически активных веществ продуцента С. pubescens

в ветеринарии

Одной из главных причин, тормозящих сохранение молодняка сельскохозяйственных животных, являются массовые желудочно-кишечные заболевания новорожденных животных, особенно телят. Эти заболевания имеют широкое распространение, наносят значительный экономический ущерб и вызывают большой отход телят, который составляет в разных странах мира от 3,1 до 31,0 % (Мосин В.В., 1975; Лудыпов Ц. с соавт., 1999).

" Поэтому внедрение в практику средств, обеспечивающих надежное антимикробное действие и обладающих антивирусной и иммуномодулирующей активностью, остаётся перспективным направлением современного фармацевтического поиска (Ширванян Ю.Л., 1980; Соколов М.Ю., 2004; Воронин Е.С. с соавт., 1990; Коптев В., 2001; Петрянкин Ф.П. с соавт.,1994; Рабинович М.И., Даминов P.P., 2000; Соколов В.Ф. с соавт., 1992; Буянов A.A. с соавт., 2004).

Таблица 12 - Значения величин МПК Левана - 2 (объём. %) для патогенных

штаммов микроорганизмов

Спектр исследованных микроорганизмов - • ■ ■ - ■ МПК, объём.%

0,0005 9,0010 0,0015 9,0020 0,0025 9,0030 9,0035 контроль

Staphylococcus aureus 758 +++ ,-H- + - - - - #

Staphylococcus aureus 741 - 2 . ++ + - - - - - #

Staphylococcus aureus 741- 1 +++ ++ + - - - - #

Staphylococcus aureus 618 +++ ++ + - ■ - - #

Staphylococcus aureus БРЛ + ++ ■ - - ■ - - It

Salmonella pullorum БРЛ +++ , ++ - - - - »

Salmonella enteritidis +++ ++ + - - - - it

Salmonella typhimurium 992 -H- + - - - - #

Escherihia coll 526- 4 ++ + - - - - - # .

Escherihia coli 0117 ++ ' - - - #

Escherihia coli 086 ++ + - - - ■ - - #

Proteus spp. 1041 . ++ + - - . - - #

Proteus spp. 1018 -H-+ . ++ . + - - - - tt-_

Proteus spp, 399 -1 ++ +' - - - - - ft

Proteus spp. 399 -2 +++ ++ + - - - - ft

Streptococcus faecalis 135 + - - - - - - - if

Streptococcus spp. 416 ' + - - - - - it

Listeria spp. +++ ++ . + - - - . - it

Listeria mocytogenes ++ + - - - - a

Citrobacter divercus 796 +++ ++ + - - - - #

Pseudomonas aeruginosa 791 +++ ++ + - - - - #

Enterobacterfaecalis 29212 +++ ++ + - • - - - ' ft

Enterobacter spp. +++ ++ + - • - ft

Примечание: «-»- отсутствие роста культуры; «+», «++», «+++», «#» - интенсив-

ность роста культуры.

Проведённые нами ранее исследования по изучению свойств антимикробного препарата Леван - 1, свойств глюкановых фракций полисахаридов, выделенных из клеточных стенок продуцента, а также по определению антимикробных свойств исследуемого продуцента по отношению к штаммам, выделенным от больных жи-

вотных из хозяйств Иркутской области родов Salmonella, Escherichia, Staphylococcus, Streptococcus, Pseudomonas, Bacillus, Enterobacter, Mycobacterium, позволили предположить, что эффективными лекарственными средствами могут быть как антимикробный и иммуностимулирующий препараты на основе продуцента, так и комплексный препарат.

С использованием основных принципов разработки таких препаратов был разработан антимикробный препарат Леван - 2. Данные по влиянию препарата Леван -2 на патогенные штаммы микроорганизмов представлены в табл. 12.

Установлено, что продуцент С. pubescens не является вирулентным и токсичным для теплокровных животных, не размножается и не диссеминирует в организме теплокровных, не вызывает инфекционный процесс и, следовательно, может быть использован без особых ограничений при производстве антимикробных препаратов, предназначенных для различных целей. Обобщенные результаты по определению острой токсичности препарата представлены в табл. 13.

Таблица 13 - Результаты определения острой токсичности Левана-2 на белых

мышах и крысах

Животные Способ введения препарата Испытанные дозы препарата, мг/кг ЛД50, мг/кг

Белые мыши Внугрибрюшинно 5-5 ООО 2250

Перорально 50-50 ООО >50 000

Крысы Внугрибрюшинно 10-10 000 4500

Перорально 16-16 000 >16 000

Полученные результаты свидетельствуют о том, что токсичность препарата Леван - 2 выражена слабо, следовательно, внедрение его в производство является перспективным.У подопытных животных отмечали тенденцию к повышению в крови эритроцитов и гемоглобина, а также колебания численности моноцитов, эо-зинофилов и других гранулоцитов.

В результате однократной затравки Леваном - 2 в дозе 50 ООО мг/кг у подопытных животных не происходило выраженного изменения состава аутомикрофлоры организма (табл. 15,16).

Эксперименты по определению местно - раздражающего действия гриба и препарата Леван - 2 проводились на морских свинках и кроликах. Полученные данные свидетельствуют о том, что и продуцент, и препарат, не оказывают выраженного местно- раздражающего действия. При повторных аппликациях биомассы гриба на слизистые оболочки глаза развивается слабо выраженный коньюктивит. Продуцент не раздражает кожу, но вызывает незначительное угнетение иммунологической реактивности организма, индуцирует гиперчувствительность замедленного типа.

Данные, представленные в табл. 17 показывают, что у подопытных животных происходило изменение неспецифической резистентности организма: снижалось содержание в периферической крови лейкоцитов, преимущественно, за счёт лимфоцитов и эозинофилов, повышалась защитная функция фагоцитов. Специфическая иммунологическая реактивность не изменялась, о чём свидетельствует отсутствие различий результатов определения у подопытных и контрольных животных показателя повреждения нейтрофилов при контакте с гомологичным антигеном. Следует отметить, что гриб оказывал такое же слабовыраженное влияние на иммунологический гомеостаз подопытных животных, как и Леван - 2.

Таблица 14 - Результаты исследования показателей клеточного состава периферической крови белых мышей, после затравки препаратом Леван - 2 в дозе

50 ООО мг/кг

Показатель, единицы измерения Срок после затравки Контрольная Опытная

п М т п М т 1 р

Гемоглобин, ммоль/л ■ 1 сутки 6 8,20 0,44 6 9,99 0,57 2,47 >0.05

1 неделя 6 10,75 0,58 6 8,97 0,61 2,12 >0,05

2 неделя 6 8,20 0,79 6 8,58 0,57 0,51 >0,5

4 неделя 5 9,48 0,09 6 9,94 0,45 1,01 >0,25

Эритроциты, Т/л 1 сутки 6 7,83 0,41 6 8?35 0,48 0,84 >0,5

1 неделя 6 7,76 0,45 6 7,64 0,76 0,14 >0,5

2 неделя 6 7,81 0,43 6 7,42 0,37 0,68 >0,25

4 неделя 5 8,83 0,54 6 9,22 0,30 0,63 >0,1

Лейкоциты,/л 1 сутки б 13,22 2,53 6 10,32 1,09 1,05 >0.5

1 неделя 6 8,67 1,15 6 10,73 1,69 1,01 >0,5

2 неделя 6 14,31 3,96 6 12,42 1,06 1,06 >0,25

4 неделя 5 10,98 2,21 6 0,00 1,00 0,59 >0,1

Гранулоциты, нейтральные, п/я,% 1 сутки 6 0,17 90,17 6 0,00 0,00 1,00 >0.5

1 неделя 6 0,17 0,17 6 0,00 0,00 1,00 >0,5

2 неделя 6 0,00 0,00 6 0,00 0,00 0,00 >0,25

4 неделя 5 0,00 0,00 6 20,83 0,00 0,00 >0,1

Гранулоциты с/я, % 1 сутки б 29,00 4,37 6 30,00 2,57 1,61 >0.5

1 неделя 6 32,00 3,62 6 24,67 3,33 0,41 >0,5

2 неделя 6 26,00 3,77 6 ' 17,67 4,00 0,24 >0,25

4 неделя 5 16,00 1,64 6 4,33 3,73 0,41 >0,1

Гранулоциты ацидофильные, , % 1 сутки б 2,50 0,50 6 2,17 0,56 2,45 >0.5

1 неделя б 1,67 0,56 6 1,33 0,48 0,68 >0,5

2 неделя 6 3,50 0,72 6 5,00 0,42 2,60 >0,25

4 неделя 5 7,80 0,66 6 0,00 1,13 2,14 >0,1

Гранулоциты базофильные, % 1 сутки 6 0,00 0,00 6 0,00 0,00 0,00 >0,5

1 неделя 6 0,00 0,00 6 0,00 0,00 0,00 >0,5

2 неделя 6 0,00 0,00 б 0,00 0,00 0,00 >0,25

4 неделя 5 0,00 0,00 6 74,83 0,00 0,00 >0,1

. Лимфоциты, % 1 сутки 6 68,00 3,98 6 67,17 2,22 1,50 >0.5

1 неделя 6 65,67 3,31 6 73,50 3,82 0,30 >0,5

2 неделя 6 70,50 4,02 6 77,33 4,20 0,52 >0,25

4 неделя 5 76,00 1,79 6 0,00 3,89 0,31 >0,1

Моноциты, % 1 сутки 6 0,17 0,17 6 0,67 0,00 1,00 >0,5

1 неделя 6 0,50 0,22 6 0,50 0,21 0,54 >0,5

2 неделя 6 0,00 0,00 6 0,00 0,22 2,23 >0,25

4 неделя 5 0,20 0,20 6 0,00 0,00 1,00 >0,1

Условные обозначения: п - количество животных в группе;М -среднее

арифметическое результатов наблюдений в группе; ш - среднеквадратическое отклонение средней; I - критерий Стьюдента; Р - доверительная вероятность.

Таким образом, установлено, что гриб С. риЬе.чсет является малопатогенным для млекопитающих - в массивных дозах не оказывает выраженного инфекционно - токсического действия. Согласно гигиенической классификации производственных штаммов микроорганизмов, исследуемый штамм относится к третьему классу опасности.

Антибактериальный препарат Леван - 2 малотоксичен при введении в желудок и полость брюшины. ЛДзо составляет соответственно 50 ООО мг/кг и близка к поро-

Таблица 15 - Результаты исследования состава микрофлоры на слизистой обо-

лочке ротовой полости мышей препаратом Леван - 2 в дозе 50000 мг/кг

Группа мик- Срок по- Группа животных

роорганиз- сле за- Контрольная Опытная

мов п м т п М т 1 Р

Колиформ- 1 сут. 10 10,06 2,98 10 6,31 2,46 0,97 >0,25

ные бакте- I нед. 10 0,04 0,04 10 0,58 0,49 1,12 >0,25

рии, 102 2 нед. 10 0,07 0,05 10 0,51 0,51 0,86 >0,25

кое/см2 4 нед. 10 0,69 0,63 10 0,48 0,33 0,30 >0,5

Кокковые формы, 102 кое/см 2 1 сут. 10 59,36 9,93 10 38,96 15,58 1,10 >0,25

1 нед. 10 36,31 5,72 10 38,43 6.05 0,25 >0,5

2 нед. 10 3,13 0,95 10 9,06 4,69 1,24 >0,5

4 нед. 10 2,19 0,52 10 5,70 2,50 1,37 >0,1

Гемолити- 1 сут. 10 13,54 1,80 10 16,98 2,27 1,19 >0,25

ческие фор- 1 нед. 10 14,40 2,53 10 12,10 1,95 1,72 >0,25

мы, 103 2 нед. 10 9,18 1,83 10 14,34 1,64 2,10 <0,05

кое/см2 4 нед. 10 8,67 1,18 10 7,87 1,28 0,46 >0,5

Таблица 16 - Результаты исследования состава микрофлоры содержимого

кишечника мышей после затравки Леваном - 2 в дозе 50 000 мг/кг

Группа микроорганизмов Срок после затравки Группа животных

Контрольная Опытная

п м Ш п м ш Т Р

Колиформные 1 сут. 10 11,06 1,11 10 10,88 1,39 0,10 >0,5

бактерии, фермен- 1 нед. 10 6,48 1,44 10 7,95 1,40 0,73 >0,25

тирующие лактозу ,10 кое/г 2 нед. 10 3,16 1,04 10 5,08 1,43 1,08 >0,25

4 нед. 10 3,56 1,07 10 4,26 1,56 0,37 >0,5

Колиформные 1 сут. 10 9,60 3,76 10 4,30 2,44 1,18 >0,25

бактерии, нефер- 1 нед. 10 21,40 15,96 10 6,50 4,60 0,90 >0,25

ментирующне лактозу, 10 кое/г 2 нед. 10 7,50 5,57 10 4,50 2,93 0,48 >0,5

4 нед. 10 0,40 0,40 10 37,80 23,0 1,62 >0,1

Стафилококки, 10' 1 сут. 10 12,55 12,90 10 12,90 1,63 0,18 >0,5

кое/г 1 нед. 10 11,61 16,06 10 15,06 2,48 1,07 <0,25

2 нед. 10 5,14 1,75 10 1,75 0,29 2,10 <0,05

4 нед. 10 6,76 4,23 10 4,23 0,90 1,50 >0,1

Лактобациллы, 1 сут. 10 43,73 11,86 10 27,81 5,05 1,21 >0,1

10' 1 нед. 10 40,14 12,33 10 ¡9,09 6,74 1,55 >0,1

кое/г 2 нед. 10 32,02 4,20 10 20,06 4,01 2,06 >0,05

4 нед. 10 12,99 2,70 10 10,98 1,70 0,63 >0,5

Грибы, 10' кое/г 1 сут. 10 42,86 7,22 10 26,65 3,71 2,00 >0,05

1 нед. 10 82,56 7,51 10 56,72 10,04 2,06 >0,05

2 нед. 10 38,58 11,58 10 45,81 6,39 0,97 >0,25

4 нед. 10 37,82 6,87 10 17,58 2,38 <0,05

Энтерококки, 107 кое /г 1 сут. 1 нед. 2 нед. 4 нед. 10 10 10 10 13,51 11,07 1,33 7,89 1,70 2,66 0,61 1,37 10 10 10 10 9,82 12,10 1,76 3,95 2,28 1,55 0,37 0,74 1,30 0,34 0,10 2,58 >0,1 >0,5 >0,5 <0,05

Условные обозначения: п - количество животных в группе;М -среднее арифметическое результатов наблюдений в группе; ш - среднеквадратическое отклонение средней; I - критерий Стьюдента; Р - доверительная вероятность.

Таблица 17 — Результаты исследования иммунологического гомеостаза морских свинок через две недели после аппликаций на кожу препарата Леван -2

Показатель, единица Стат. величина Сенсибилизирующий агент

измерения Контроль Леван - 2

М 23,47 12,52

Содержание лейкоци- м 2,24 0,38

тов в крови, г/л п 3

1 4,82

р <0,002

М 15,12 10,10

Содержание лимфоци- м 2,15 0,34

тов в крови, г /л п 6 3

1 2,30

р >0,05

М 0,56 0,12

Содержание эозинофи- м 0,15 0,07

: лов в крови, г/л п 6 3

X 2,68

Р <0,05

м 6,44 5,63

Фагоцитарный индекс м 0,23 0,62

п 5 3

•г 1,22

р >0,25

м 0,91 1,00

Итггралейкоцитарный м 0,10 0,13

лизоцим, ед. акт. п 4 3

1 0,54

р > 0,5

М 0,04 0,04

Показатель поврежде- м 0,01 0,02

ния нейтрофилов п 6 3

(ППН) 1 0,32

р >0,5

говой в остром опыте по общетоксическому и дисбиотическому эффектам действия. Местно — раздражающее и аллергенное действие препарата выражено слабо.

Изучение возможности применения Левана - 2 для профилактики и лечения желудочно - кишечных заболеваний с синдромом диареи бактериальной природы у новорожденных телят проводили на МТФ ОАО «Хомутовское» в мае — июле 2005 г. Проведённые производственные испытания подтверждены актом производственных испытаний.

При осмотре новорожденных телят были выявлены животные с нарушением пищеварения, сопровождающимся поносом. При этом животные были угнетены, аппетит понижен, перистальтика кишечника усилена, кал жидкий бежевого цвета, частота дефекаций до 7 раз в сут. У телят наблюдалась вялость, шаткость походки, одышка. Температура тела составляла 39,0-40,1° С, частота пульса - 85 - 95, частота дыхания — 28 - 32.

При лечении препарат Леван - 2 телятам выпаивали с молоком в следующих дозах: 1 группа (опытная) - 30 мл в сут., 2-я группа (опытная) - 60 мл в сут., 3-я группа (опытная) - 90 мл в сут. В результате проведенного лечения в 1-й группе выздоровление наступило на 10 - 14 - е сут. Во второй группе животные поправились на 5 - 7-е сут., в 3-й - на 5-7- е сут. лечения. В контрольной группе (5 телят)

животных лечили фармазином. При этом излечение наступало на 7 - 10 сут., т.е. продолжительность лечения в этом случае была значительно больше. В дальнейшем подопытные животные не заболевали повторно и становились более устойчивыми к другим заболеваниям. При взвешивании животных опытных групп наблюдалось изменение живой массы и увеличение среднесуточного прироста относительно контроля.

При исследовании крови у телят во всех группах отмечались изменения биохимических и морфологических показателей крови, причем в опытных группах эти изменения наиболее ярко выражены (табл. 18,19,20).

Таблица 18 - Морфологические показатели крови телят при их лечении _ препаратом Леван - 2 в дозе 60 мл per os в сут.__

Показатели Группы Показатели Группы

Контрольная Опытная Контрольная Опытная

До применения препарата После применения препарата

Эритроциты, 10'7л 7,78+ 0,24 7,79± 0,9 Эритроциты, 10у/л 8,56+ 0,24 8,77 ±0,16

Лейкоциты, 107л 7,65+ 0,30 7,85± 0,3 Лейкоциты, Ю'/л 8,03 ±0,17 7,95 ± 0,20

Гемоглобин, г % 11,3+ 1,3 11,6 ± 1,7 Гемоглобин, г % 15,8 ± 1,2 15,6± 1,2

Цветной показатель 1,75 ±0,06 1,8б± 0,06 Цветной показатель 1,82+0,05 1,77± 0,07

СОЭ, мм/г 0,9 ±0,20 1,4 ± 0,14 СОЭ, мм/г 1,0± 0,23 1,3 ±0,4

Таблица 19 - Биохимические показатели крови телят при их лечении

препаратом Леван - 2 в дозе 60 мл per os в сутки

Показатели Группа Показатели Группа

Контроль- Опытная ная Контрольная Опытг ная

До применения препарата После применения препарата

Щелочной резерв, мг/100мл 498,0± 7,3 495,0± 7,5 Щелочной резерв, мг/100мл 524,0 ± 4,7 529,0+4,7

Общ белок, г /л 56,4+ 2,3 56,3 ±2,3 Общ белок, г /л 54,9 +1,4 48,5± 1,3

Альбумины, % 39,0+ 1,10 37,7+ 1,19 Альбумины, % 42,02± 0,39 38,96+ 0,38

а -глобулины, % 23,90± 0,14 27,78± 0,15 а -глобулины, % 19,25± 0,2 19,96+ 0,4

Р -глобулины, % 16,90 ± 0,2 19,87+ 0,3 0 -глобулины, % 15,24+ 0,22 15,28+ 0,21

у -глобулины, % 20,87± 0,17 21,45 ± 0,1 у -глобулины, % 24,9+ 0,22 25,3+0,22

При использовании препарата наблюдали не только изменение клинической картины с резкой положительной динамикой, но и улучшение общего состояния животных. Дальнейшее наблюдение за животными, получавшими препарат Леван -2, показало, что они не только догоняли телят из контрольной группы по весу, но и опережали, а также обладали более высокой устойчивостью к другим заболеваниям. При использовании препарата с профилактической целью желудочно - кишечных расстройств не было обнаружено. В контрольной группе у 90 % животных отмечали проявления заболевания.

Опыты по применению Левана - 2 с профилактической целью проводили на 18 новорожденных телятах, также разделённых на 3 группы (по 6 животных).

Контрольная группа включала 26 животных. Телятам 1-й группы препарат добавляли в молоко в дозе 15 мл per os в сут. в течение 5 сут., телятам 2-й группы -30 мл per os в сут. в течение 5 сут., телятам 3 -й группы - 60 мл per os в сут. в течение 5 сут. Животным контрольной группы препарат Леван - 2 не давали. В случае

заболевания их лечили с использованием препаратов, применяемых традиционно в данном хозяйстве (тилозин, фармазин, левоэритронисан, нитокс).

Таблица 20 - Лейкограмма крови телят при их лечении препаратом Леван - 2 в дозе 60 мл per os в сут. _■

Показатели Группы Показатели Группы

Контрольная Опытная Контрольная Опытная

До применения препарата После применения препарата

Нейтрофилы Нейтрофилы

' Юные, % 0,1+0,27 0,3± 0,2 Юные, % • - •

Палочкоядерные, % 3,8 + 0,01 3,9± 0,86 Палочкоядерные, % 3,3± 1,27 2,5± 0,74

Сегментоядерные,% 56,9± 2,85 56,8± 2,83 Сегментоядерные, % 41,1+2,14 36,7± 2,86

Эозинофилы, % 2,1+ 0,77 2,4± 0,64 Эозинофи-лы, % 3,1+ 1,26 2,4± 1,10

Базофилы, % 0,9+ 0,27 0,8+ 0,25 Базофилы, % 0,6+ 0,30 0,6± 0,28

Моноциты, % 1,4 ± 0,65 1,5± 0,57 Моноциты, % 1,4+ 0,64 1,5± 0,67

Лимфоциты, % 35,1 ± 1,84 36,5± 2,84 Лимфоциты, % 48,3± 1,56 57,9+1,99

Было показано, что уровень неспецифической резистентности организма телят при профилактике Леваном - 2 повышается. Максимальное повышение уровня неспецифической резистентности наблюдали у подопытных телят при применении Левана 1 мл на 1кг живой массы per os с кратностью 1 раз в сут. (30 мл препарата на одного телёнка) в течение 5 сут.

Учитывая, что основным путём заражения является алиментарный, нами было проведено исследование влияния препарата Леван - 2 на микробный состав кала. При применении Левана — 2 с профилактической целью в кале телят опытной группы количество Е. coli уменьшилось на 60,7 %, бактерий рода Citrobacter -на 10,5 %, микроорганизмов рода Proteus - на 82,5 %.

• Таким образом, Леван - 2 является эффективным средством для лечения и профилактики желудочно - кишечных заболеваний новорожденных телят, этиологическим фактором которых являются энггеробактерии родов Escherichia, Proteus, Citrobacter.

Медико - биологические исследования антимикробного препарата, получаемого на основе С. pubescens

Действие исследуемого препарата на здоровый и больной организм может различаться, поэтому медико- биологические исследования обычно проводятся на моделях соответствующих заболеваний или патологических состояний (Першин Г.Н.,1971). Таким образом, неотьемлимой частью изучения свойств новых лекарственных средств является проведение экспериментальной работы по моделированию патологических процессов. По современным представлениям, наиболее универсальной защитно - приспособительной реакцией, развивающейся в ответ на повреждение, является воспаление (Майборода А.А. с соавт, 1995). Поскольку оно лежит в основе очень многих заболеваний человека и животных, то моделирование именно воспалительных процессов представляет особый интерес (Семинский И.Ж, 1999). Нами проводилось изучение противовоспалительного действия препарата Леван — 2 на модели острого воспалительного отёка на лабораторных животных (белых мышах). В работе проводили сравнительное изучение информативных фар-

макологических показателей противовоспалительной активности препарата Леван -1, ортофена и анальгина.

Установлено, что противовоспалительное действие Левана - 2 в дозе 1,0 мл/кг было на 16 %; в дозе 1,5 мл/кг - на 9,4 %; в дозе 2,0 мл/кг - на 73,1 % ниже, чем противовоспалительное действие анальгина в дозе 30 мг/кг. Противовоспалительное действие Левана - 2 в дозе 1,0 мл/кг было на 25,3 %; в дозе 1,0 мл/кг - на 29,9 %; в дозе 2,0 мл/кг - на 65,9 % ниже, чем противовоспалительное действие ортофена в дозе 0,25 мг/кг. Установлено, что препарат Леван - 2 обладает максимальной противовоспалительной активностью в дозе 1,5 мл/ кг массы тела.

Результаты исследования действия Левана - 2 и изониазида на течение туберкулезной инфекции свидетельствуют о положительном их влиянии на процесс излечения у животных, а цефтазидима - об утяжелении процесса у мышей. Оценка динамики массы тела мышей в течение опыта (табл. 21) демонстрирует, что в самом начале терапии различия в массе животных были незначительны, после 10 сут. от начала лечения у мышей, получавших цефтазидим, наблюдалось устойчивое снижение массы, более выраженное, чем в группе контроля заражения.

Таблица 21 - Динамика массы тела животных (в % от исходной) при лечении __ цефтазидимом___

№гр. 4-е сут, от начала лечения 11-е сут. от начала лечения 19 -е сут. от начала лечения 28-е сут. от начала лечения

1 +2,9 +1,2 +4 -2,3

2 -3,2 -4,8 -9 -9

3 0 -0,5 -3,8 -2,2

4 -3,7 -9 -10,6 -17

5 -з а +1,1 +9,7 +4,9

6 +ы +8,6 +7 +7,5

Анализ выживаемости животных показывает, что у нелеченных зараженных мышей и у мышей, леченных цефтазидимом, гибель от генерализованного туберкулезного процесса началась с 28 - их сут. после заражения, то есть задержки сроков начала гибели зараженных мышей при использовании цефтазидима не наблюдалось (табл. 22).

Таблица 22 - Динамика гибели животных в ходе опыта (в % к исходному количест-_____ву мышей)__

№ 28-е сут. после заражения 35-е сут. после заражения 39-е сут. после заражения

гр. Погибшие Выжившие Погибшие Выжившие Погибшие Выжившие

1 28,6 71,4 40,4 59,6 40,4 59,6 •

2 29,4 70,6 58,8 41,2 64,7 35,3

3 35,3 64,7 70,6 29,4 70,6 29,4

4 23,5 76,5 47,0 53,0 52,9 47,1

5 0 100 0 100 0 . 100

6 0 100 0 100 0 100

Из данных табл. 22, видно, что во всех группах животных, получавших цефтазидим, практически на всех сроках наблюдения процент павших животных устойчиво выше, чем у зараженных нелеченных мышей. Следует отметить большую смертность мышей в группах, где препарат вводился 2 раза в неделю. Таким образом, использование цефтазидима привело к увеличению смертности мышей от ге-

нерализованной туберкулезной инфекции, напрямую зависящему от частоты введения препарата.

Таблица 23 - Влияние препаратов на тяжесть течения генерализованного туберкулезного процесса у мышей, зараженных Mycobacterium bovis 8_

К» тр. Условия опыта Коэффициент массы лёгких (усл. ед) Индекс поражения лёгких (усл.ед) Коэффициент массы селезёнки (усл. ед) Коэффициент массы печени (усл.ед)

1 Контроль заражения, п=8 4,15+ 0,33 . 4,41+ 0,23 2,49± 0,29 8,26+ 0,38

2 Цефтазидим 200 мг/кг, внутри-. мышечно 2 раза в неделю, п=б 4,30+ 0,75 5,17 +0,27 Pi j ~ 0,05 3,43± 0,32 РЬ2<0,05 8,3± 0,37

3 Цефтазидим 600 мг /кг, внутримышечно 2 раза в неделю, п=6 3,63+ 0,41 5,06 ± 0,28 3,02 ± 0,22 8,91±0,69

4 . Цефтазидим , 600 мг /кг, внутримышечно 1 раз в неделю,п=6 4,81 +0,5 4,67 ±0,22 3,08 ±0,59 8,01 ±0,44

5 Изониазид 10 мг/кг, подкожно, п=17 2,93+0,13 3,43 ±0,12 Р2-5< 0,001 Рз-5< 0,001 Р4.5< 0,001 2,87 ±_ 0,2 7,71 ±0,17

6 Леван-2, 2 мл/кг внутримышечно п=17 2,35 + 0,18 < 0,02 Рэ-«<0,01 Р«< 0,001 2,81 ±0,11 Р2*< 0,001 Р34< 0,001 Рм< 0,001 1,89 ±.0,12 0,001 Р3^< 0,001 5,89 + 0,15 P2ms< 0,001 Р3^< 0,001 Р«< 0,001

У павших мышей проведена биометрическая и макроскопическая оценка внутренних органов (табл. 23). Распространенность специфического поражения внутренних органов мышей, выживших к моменту окончания опыта, свидетельствуют о том, что степень поражения лепшх (по коэффициенту массы и индексу поражения) животных, получавших цефтазидим, более выражена, чем в группе контроля заражения. Наиболее демонстративны при этом были величины индекса поражения легких, которые в группах 3 и 4 имели выраженную тенденцию к повышению (5,06±0,28 усл.ед; и 4,67±0,22 усл.ед. против 4,41±0,22 усл.ед. у зараженных неле-ченных мышей), а в группе 2 различия статистически достоверны (5,17±0,27 усл.ед. против 4,41±0,22 усл.ед., Р=0,05). В группе контроля лечения (изониазид) и лечения Леваном — 2 отмечалось значимое, в 1,3-1,8 раза, снижение коэффициентов массы и индексов поражения легких (Р < 0,001), свидетельствующее о выраженном уменьшении под влиянием туберкулостатика и Левана -2 специфического воспаления в легких. Коэффициент массы селезенки у выживших животных, леченных цефтазидимом, также был выше, чем у мышей контроля заражения (табл. 23). При этом, если в группах 3 и 4 повышение показателя было не достоверным при статистической обработке (3,02±0,22 усл.ед. и 3,08±Ю,59 усл.ед. против 2,49±0,29 усл.ед. у нелеченных мышей), то в группе 2 зарегистрированы достоверно значимые различия (3,43±0,32 усл.ед.; Р < 0,05). На величине коэффициентов массы печени использование цефтазидима практически не отразилось. Лечение изониазидом не-

сколько уменьшило величину показателя (7,71±0,17 усл.ед. против 8,26±0,38 усл.ед. в контроле заражения), а применение Левана - 2 привело к его достоверному снижению (5,89±0,15 усл.ед., Р < 0,001).

Таким образом, монотерапия цефтазидимом в дозах 200 и 600 мг/кг (1 и 2 раза в неделю) привела к утяжелению течения экспериментальной туберкулезной инфекции, что проявилось в увеличении смертности мышей, неблагоприятной динамике массы тела и повышению распространенности специфического поражения легких и селезенки, а монотерапия Леваном - 2 в дозе 2,0 мл/кг в течение 5 сут. в неделю, изониазидом в дозе 10 мг/кг подкожно в течение 5-ти дней в неделю привела к излечению экспериментальной туберкулёзной инфекции, увеличению массы тела животных. Полученные данные свидетельствуют о расширении возможности использования препарата в качестве химиотерапевтического средства.

ВЫВОДЫ

1. Дереворазрушаюгций гриб С. pubescens штамм 0663 обладает высокой антимикробной активностью в отношении грамположительных и грамотрица-тельных бактерий, не оказывает антибиотического действия на микромицеты родов Aspergillus, Pénicillium, Chephalosporium и актиномицеты родов Nocardia , Sporobolomyces, проявляет стимулирующее действие на рост дрожжей родов Candida, Trichosporon, Hansenida, Torula, Saccharomyces, Cryptococcus.

2. Химиотерапевтическими агентами, способными подавлять патогенные бактерии in vitro, являются синтезируемые продуцентом терпеноиды - полипо-реновая кислота С и кориопубецин. Минимальная подавляющая концентрация (МПК) кориопубесцина составляет 4х 10"4 мг/мл, а МПК полипореновой кислоты С - 4х10"2 мг/мл.

3. Механизм бактерицидного действия антимикробных препаратов и технологического ингредиента, получаемых на основе гриба С. pubescens, определяется механизмом действия вторичных метаболитов, синтезируемых продуцентом.

4. Культуральная жидкость, получаемая при культивировании продуцента С. pubescens, увеличивает интенсивность автолиза клеток бактерий - возбудителей гнойно - воспалительных заболеваний - в более значительной степени, чем антибиотики пенициллиновой и цефалоспориновой трупп. Ей бактерицидное действие заключается в ингибировании синтеза клеточной стенки бактерий, в ответ на которое происходит лизис клетки под действием автолизинов.

5. Гриб С. pubescens является малопатогенным для млекопитающих. Согласно гигиенической классификации производственных штаммов микроорганизмов, исследованный штамм относится к третьему классу опасности.

6. ' Антибактериальный препарат Леван - 2, получаемый на основе продуцента, малотоксичен, ЛД50 составляет 50 000 мг/кг и близка к пороговой в остром опыте по общетоксическому и дисбиотическому эффектам действию, местно- раздражающее и аллергенное действие препарата является слабо выраженным.

7. Твердофазная ферментация (ТФФ) лигноцеллюлозных отходов деревообрабатывающей промышленности с использованием гриба С. pubescens приводит к их утилизации с образованием безопасных белково - углеводных комплексов, которые представляют смесь выросших грибов и неутилизированного субстрата, обогащённых протеином, липидами, витаминами. Деструкция отхо-

дов приводит к снижению содержания целлюлозы и лигнина на 17, 51 и 11,64 %, соответственно.

8. Под действием окислительных и гидролитических ферментных систем базидиомицета при ТФФ шлам - лигнина - отхода производства целлюлоз но — бумажной промышленности - происходит увеличение содержания нециклических соединений на 9,5 - 63%, 100% - ная утилизация ароматических соединений (фенолов, бензолов, фуранов) и хлорорганических компонентов ароматического ряда.

9. Внесение технологического ингредиента Леван - 1 при производстве прессованных хлебопекарных дрожжей на разных стадиях производства в концентрациях 0,0001 - 0,02% позволяет существенно снизить содержание посторонней микрофлоры (гнилостных бактерий и лейконостока) на всех стадиях производства, повысить качество готовой продукции, а именно: увеличить показатель стойкости дрожжей на 15,5%, стабилизировать производственный процесс в целом, особенно, в неблагоприятный для дрожжевого производства ве-сенне - летний период. Использование Левана -1 эффективно при производстве по различным технологическим схемам и при использовании различных промышленных продуцентов. Замена формалина и серной кислоты на технологический ингредиент Леван - 1 в концентрации 0,003 % при производстве спирта для дезинфекции солодового молочка приводит к сокращению производственного цикла на 10- 12 ч. При этом выход этилового спирта увеличивается на 6,6 %, а содержание в нём метилового спирта сокращается на 51,2 %.

10. Леван - 2 является новым эффективным средством для лечения и профилактики желудочно - кишечных заболеваний новорождённых телят, этиологическим фактором которых являются энтеробакгерии родов Escherichia, Proteus, Citrobacter."■-.''■

11. Антимикробный препарат Леван — 2 обладает максимальной противовоспалительной активностью в дозе 1,5 мл/кг массы тела при внутрибрюшин-ном введении препарата. Препарат обладает противотуберкулёзной активностью в дозе 2,0 мл/кг массы тела внутримышечно. Монотерапия препаратом приводит к излечению животных и увеличению массы их тела.

12. Эффект активации нейтрофилов in vitro, тенденция к увеличению подвижности Т-хелперов под действием глюкановых фракций полисахаридов клеточной стенки С. pubescens, выявленная при изучении их влияния на электро-форетическую подвижность лимфоцитов, свидетельствуют об уникальности свойств глюканов клеточной стенки продуцента.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Способ обезвреживания промышленных отходов целлюлозно-бумажной промышленности твердофазной ферментацией продуцента С. pubescens позволяет полностью удалять органические соединения, приводящие к образованию диоксинов, опасных для окружающей среды и человека.

2. Разработана принципиальная схема безотходного производства продуктов биотехнологии на основе жидкофазной ферментации продуцента С. pubescens.

3. Использование технологического ингредиента Леван -1 при производстве спирта исключает агрессивные вещества - формалин и серную кислоту - из процесса производства.

4. При производстве прессованных дрожжей технологический ингредиент Леван - 1 рекомендуется вносить на стадии подготовки мелассового сусла. Ингредиент вносится в мелассовый раствор (при плотности 29 - 30 град. Блг.) в концентрации 0,02 % по объему перед его обработкой острым паром. Технологический ингредиент рекомендуется также вносить в дрожжевое молоко в количестве 0,06 % к массе дрожжей.

5. Разработанная схема получения отдельных фракций полисахаридов клеточной стенки продуцента С. pubescens, изучение их химического состава и тенденций влияния на иммунокомпетентные клетки создают предпосылки для разработки нового эффективного иммуностимулирующего препарата.

6. Наиболее эффективной схемой применения препарата Леван - 2 для лечения острых желудочно-кишечных заболеваний является применение препарата в дозе 60 мл per os с интервалом 24 ч. При этом происходит сокращение сроков лечения в 2 раза, повышается уровень естественной резистентности, улучшаются обменные процессы в организме. Применение Левана - 2 с профилактической целью в дозе 30 мл per os в течение 2 -5 сут. позволяет снизить заболеваемость телят как желудочно - кишечными, так и другими заболеваниями, увеличить привесы на 10,5 %. Леван 2 не оказывает отрицательного действия на организм животного, удобен в применении, его можно задавать индивидуально и групповым способом.

7. Наличие противовоспалительной и противотуберкулёзной активности антимикробного препарата Леван — 2 расширяет возможность его применения препарата в качестве химиотерапевтического средства.

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации

1.Чхенкели В.А. Сравнительная оценка антимикробных средств в отношении полирезистентных штаммов - возбудителей инфекционно — воспалительных заболеваний дыхательных путей / В.А.Чхенкели, Е.Д. Агапова, Г.Д. Чхенкели, A.A. Мо-сквитина, Ю.С. Беляева // Тез. докл. Западно - Сибирского терапевтического форума «Актуальные вопросы диагностики, диагностики, лечения, профилактики наиболее распространённых заболеваний внутренних органов».—Тюмень, 2000. - С. 135.

2. Чхенкели В.А. Получение протеиназ фибринолигического действия с использованием базидиомицетов / В.А.Чхенкели, Ю.С. Беляева // Тез докл. 5- ой меж-дунар. научно - практ конф. «Природные и интеллектуальные ресурсы Сибири (Сибресурс - 5 - 99)». - Омск, 1999. - С. 265.

3. Чхенкели В.А. К вопросу о механизме бактерицидного действия базидиаль-ного гриба Coriolus pubescens (Shum.: Fr.) Quel. / В.А.Чхенкели // Мат. межрег. научно - практ. конф. «Биология микроорганизмов и их научно - практическое использование». - Иркутск: Иркут. ун — т, 2004. - С. 96 - 98.

4. Чхенкели В.А. К разработке иммуностимулирующих препаратов с использованием современных методов биотехнологии / В.А.Чхенкели, Т.Н. Малова, Г.Д. Чхенкели, A.B. Знамировская, И. Н. Тихонова // Тез докл. 5-ой междунар. научно -практ. конф. «Природные и интеллектуальные ресурсы Сибири (Сибресурс - 5 -99)». - Омск, 1999. - С. 266.

5. Использование современных методов биотехнологии для разложения высокотоксичных хлорорганических отходов / Л.А.Николаева, В.А, Чхенкели, Б.А. Баженов // Матер. 3 - ей межд. научно - практ. конф. «Окружающая среда». - Тюмень, 2000.-С.110-111.

6. Чхенкели В.А. Современные методы биотехнологии в ветеринарии / В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели // Мат. научн.-пракг.конф. «Актуальные проблемы ветеринарной медицины Восточной Сибири», 2002 г. - 37 — 39 с.

7. Чхенкели В.А. Токсико — биологические свойства продуцента Coriolus pubescens (Shum.: Fr.)Quel. и препарата, полученного на его основе / В.А.Чхенкели // Сиб. медицинский журн.-2004.-№ 6.-С. 60-68.

8-Чхенкели В.А. О механизме действия вторичных метаболитов, синтезируемых Corioluspubescens (Shum.: Fr.)Quel. / B.A. Чхенкели // Аграрная наука Сибири, Монголии. Казахстана и Башкоркостана - сельскому хозяйству: Тр. 6-й Междунар. научно - пракг. конф. - Новосибирск, 2003. - С. 143 - 146.

9. Чхенкели В.А. Утилизация лигноцеллюлозных отходов с использованием высших базидиомицетов / В.А.Чхенкели, Г.Д. Чхенкели // Тез. докл. междунар. научно — практ. конф « Экологически чистые технологические процессы в решении проблем окружающей среды». - Иркутск, 1996. - Т.2., ч.2,- С. 233 - 235.

• 10. Чхенкели В.А. К вопросу снижения бактериальной обсеменённости производства хлебопекарных дрожжей / В.А.Чхенкели, Г.Д. Чхенкели, А.А.Москвитина // Мат. 2-ой межрег. научн. конф. «Человек и окружающая среда»». - Рязань, 1998. -С. 245. -

11.Чхенкели В.А. Перспективы использования нового антимикробного препарата - кориопубесцина в хирургической практике / В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели, Е.Д. Агапова, A.A. Москвитина, Ю.С. Беляева // Сибирь - Восток. - 2001,- № 3. -С. 6- 8.

12.Чхенкели В.А. Экологически безопасные технологии на бродильных производствах / В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели, В.Д. Московский, В.И. Комаров // Мат. междунар. экологического конгресса «Новое в экологии и безопасности жизнедеятельности». - С.-П., 2000. - Кн. 2.-С. 268 - 270.

13.Чхенкели В А.. Антимикробное действие дереворазрушающего гриба Coriolus pubescens (Shum., Fr.) Quel. / В.А.Чхенкели, Т.И. Никифорова, Р.Г. Скворцова // Микол. и фитопатол. -1998.- Т. 32.- Вып. 1 . - С. 69 - 72.

14. Чхенкели В.А. К вопросу о биологически активных веществах деревораз-рушающих грибов / В.А.Чхенкели //Мат. междунар. совещ. «Физиолога - биохимические аспекты изучения лекарственных растений», посвящ. памяти Минаевой В.Г., Новосибирск, 1998. - С. 70 - 71.

15.Чхенкели В.А. Токсикологическая оценка продуктов химической биотехнологии / В.А.Чхенкели // Тез. докл. 1-го съезда токсикологов России, 1998, М. -С. 128.

16.Чхенкели В.А. Современные представления о возможности использования пептидополисахаридных комплексов базидиальных грибов как иммуностимуляторов / В.А. Чхенкели, И.В. Тихонова // Сибирский медицинский журнал. - 2000. - № 1.-С. 11-17.

17.Чхенкели В.А. Некоторые вопросы биотехнологии в экологическом воспитании школьников / В.А. Чхенкели// тез. докл. научно - пракг конф «Экологическое образование», Иркутск, 1995. - 1 с.

18. Чхенкели В.А. Содержание токсичных элементов в продуктах биотехнологической переработки вторичного сырья / В. А. Чхенкели // Тез. докл. 1-го съезда токсикологов России, 1998, М. - С. 127.

19. Чхенкели В.А. Некоторые аспекты медико - биологических исследований высших дереворазрушающих базидиомицетов как источника биологически акгав-

ных веществ / В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели, Е.Д. Агапова, A.A. Москвитина, Ю.С. Беляева // Сибирский медицинский журнал. - 2001 - № 1,- С. - 59 - 61.

20. Чхенкели В.А. Использование современных методов биотехнологии в решении медико - экологических проблем / В.А. Чхенкели, Г.Д Чхенкели //Бюл. ВСНЦ СО РАМН. - 1998,- № 2(8).- С. 171 - 174.

21.Чхенкели В .А. Медико - биологические аспекты исследования кормовых продуктов, полученных на основе биоконверсии лигноцеллюлозных отходов бази-диомицетами /В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели // Сибирский медицинский журнап,-1995.-№3,-С. 8-13.

22.Чхенкели В.А. Использование технологических ингредиентов на основе вторичных метаболитов высших базидиомицетов на бродильных производствах //

B.А. Чхенкели, Г.Д Чхенкели // Тез докл. междунар. конф. «Химическое образование и развитие общества». - М., 2000. - С 234 - 235.

23. Чхенкели В.А. Противотуберкулёзная активность базидиомицета Coriolus' pubescens (Shum.: Fr.) Quel, и препарата, получаемого на его основе / В.А. Чхенкели, H.A. Шкиль // Сибирский медицинский журнал. - 2005. -№ 1. - С. 67 - 71.

24.Чхенкели ВА. Методика выполнения измерений массовой доли йода в пробах напитков и кондитерских изделий спектрофотометрическим методом / В.А. Чхенкели, Г.Д Чхенкели. - Св - во № 04.03.107/2000 - Екатеринбург, 2000 - 25 с.

25. Чхенкели В.А. Методика «Молоко и молочные продукты. Спекпрофото-метрический метод определения массовой доли йода» / В.А. Чхенкели, Г.Д Чхенкели - Св - во № Т45 /99. - Екатеринбург, 1999. - 25 с.

26.Чхенкели В.А. К оценке безопасности использования продуктов биоконверсии лигноцеллюлозных отходов базидиомицетами / В.А. Чхенкели, Г.Д Чхенкели // Тез. докл. IV Российско - Японского междунар. симпозиума, Иркутск, 1996. -

C.347.

27. Чхенкели В.А. Сорбция тяжелых металлов мицелиальными грибами / В.А. Чхенкели, Г.Д Чхенкели // Тез. докл. IV Российско - Японского междунар. симпозиума, Иркутск, 1996. - С.346.

28. Чхенкели В.А. К проблеме снижения бактериальной обсеменённости хлебопекарных дрожжей и продуктов брожения / В.А. Чхенкели, Г.Д.Чхенкели, B.JI. Денисов // Тез. докл. научно - практ конф. «Итоги, проблемы, перспективы», Иркутск, 1997.-С. 104-105.

29. Сухаревич В.И. Влияние синтетических углеводов на биосинтез лизина / В.И. Сухаревич, О.В. Кислухина, В.А. Тутурина, Лисицкая, Н.Г. Медведева //Биотехнология. - 1992. - № 2. - С. 30 - 32.

30. Чхенкели В.А. Сорция тяжёлых металлов продуцентом Saccharomyces сеге-visiae в дрожжевом производстве /В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели // Тез. докл. VI -го Российско - Японского междунар. симпозиума, Хабаровск, 1998. - С. 75 - 76.

31.Чхенкели В.А. Биологически активные вещества Coriolus pubescens (Shum.:Fr.) Quel, и их использование в медицине, ветеринарии, экологии и пищевой промышленности: Монография /В.А. Чхенкели. - Рек. к печати Уч. Советом ГНУ ИЭВСиДВ (прот . № 4 от 23.09.05). - Новосибирск: ООО «Юпитер», 2006. - 259 с.

32.Чхенкели В.А. Противотуберкулёзная активность базидиомицета Coriolus pubescens (Shum.:Fr.)QueI. / В.А. Чхенкели, H.A. Шкиль // Мат. научно - практ. конф., поев. 65 - летию СО РАСХН.- 2005, Новосибирск. - 4 с. •

33. Чхенкели В.А. О механизме бактерицидного действия базидиального гриба Coriolus pubescens (Shum. Fr.)Quel./ В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели // Вестник сибирской сельскохозяйственной науки. — 2005.- № 2. -С. 52-57.

34. Чхенкели В.А. Методические рекомендации по применению современных лекарственных средств для профилактики и лечения желудочно — кишечных заболеваний новорождённых телят / ВА. Чхенкели, H.A. Шкиль, B.JI. Тихонов. - Утв. Уч. Советом ГНУ ИЭВСиДВ (прот № 5 от 25.10.05). - Иркутск, 2006. - 39с.

35. Чхенкели В.А. Изучение антимикробного действия препарата «Леван -1» на полирезистентных штаммах микроорганизмов/ В.А. Чхенкели, Е.Д. Агапова, Г.Д. Чхенкели // Тез. ПГ— ей ежегодной научно - практ. конф. «Актуальные вопросы медицинского обеспечения при чрезвычайных ситуациях и катастрофах». - Иркутск, 1999.-С.41.

Зб.Чхенкели В.А. Пептидо - полисахаридные комплексы Coriolus pubescens (Shum.:Fr.)Quel. как иммуностимуляторы природного происхождения / В.А. Чхенкели, Т.Н. Малова, Г.Д. Чхенкели, A.B. Знамировская, И.Н. Тихонова // Тез. III - ей ежегодной научно - практ. конф. «Актуальные вопросы медицинского обеспечения при чрезвычайных ситуациях и катастрофах». - Иркутск, 1999. — С.40 - 41.

37. Чхенкели ВА. К вопросу снижения бактериальной обсеменённости производства хлебопекарных дрожжей / В.А. Чхенкели, A.A. Москвитина // Мат. 2-ой межрег. научн. конф. «Человек и окружающая среда». - Рязань, 1998. - С.245-246.

38. Чхенкели В.А. Полисахариды высших базидиомицетов в коррекции иммунопатологических состояний / В.А. Чхенкели, A.B. Знамировская, Р.Г. Скворцова, И.Н. Тихонова // Мат. 2 - ой межрег. научн. конф. «Человек и окружающая среда». - Рязань, 1998. -С. 246-247.

Подписано в печать 31.03.2006. Формат 60x84'/, Бумага офсетная. Печать трафаретная. Гарнитура Times. Усл. печ. л. 2 Уч.-изд. л. 2,14 Тираж 150 экз. Заказ №370

Отпечатано в Глаэковской типографии. 664039, г.Иркутск, ул. Гоголя, 53.Тел. 38-78-40.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Чхенкели, Вера Александровна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ БАЗИДИОМИЦЕТОВ - КСИ-ЛОТРОФОВ И ПРИСПОСОБЛЕННОСТЬ ИХ ПОПУЛЯЦИЙ

К ОБИТАНИЮ В ЭКОСИСТЕМЕ

1.1.1. Общая характеристика базидиомицетов

1.1.2. Роль базидиальных грибов в болезнях леса

1.2. БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА ВЫСШИХ 42 ДЕРЕВОРАЗРУШАЮЩИХ БАЗИДИАЛЬНЫХ ГРИБОВ

1.2.1 .Систематика высших дереворазрушающих грибов

1.2.2. Базидиальные грибы как источник питательных веществ

1.2.3. Биологически активные вещества дереворазрушающих 61 базидиомицетов

1.2.3.1. Ферментативная активность

1.2.3.2. Антимикробная и фунгистатическая активность

1.2.3.3. Противоопухолевая активность

1.2.3.4. Токсикогенная и психогенная активность

1.2.3.5. Гиполипидемическая, гипотоническая, гипогликемическая 88 и антиоксидантная активность

1.2.3.6. Биологически активные вещества базидиомицетов как средство ме- 91 дико - биологического воздействия в условиях экологического неблагополучия

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ, ОБЪЁМ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Культивирование продуцента

2.2. Методы определения антимикробной активности 104 продуцента

2.3. Методы биохимического исследования биомассы продуцента и белково

- углеводных комплексов, получаемых биоконверсией лигноцеллюлозных отходов

2.4. Методы исследования химического состава отходов целлюлозно - бу- 111 мажной промышленности и белково - углеводных комплексов

2.5. Методы выделения и идентификации биологически активных веществ, 113 синтезируемых продуцентом

2.6. Метод определения интенсивности автолиза биомассы тест - культур

2.7. Методы выделения полисахаридов клеточной стенки продуцента и on- 118 ределения их химического состава

2.8. Методические подходы к исследованию влияния полисахаридов на 120 функциональную активность иммунокомпетентных клеток человека

2.9. Токсикологические методы токсикологических исследований

2.10. Методы исследованияи влияния препарата Леван - 2 на рост мико- 124 бактерий in vitro

2.11. Моделирование воспалительного процесса и туберкулёзной инфек- 125 ции

2.12. Методические подходы к определению возможности использования 127 Левана - 2 для лечения и профилактики желудочно - кишечных заболеваний новорожденных телят

ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ

ПРОДУЦЕНТА CORIOLUSPUBESCENS (SHUM.: FR.)QUEL

3.1. Изучение антибиотической активности гриба С. pubescens

3.2. Исследование динамики роста продуцента С. pubescens

3.3. Исследование природы антимикробной активности гриба 139 Coriolus pubescens

3.4. Исследование антимикробных веществ, синтезируемых 144 С. pubescens, на интенсивность автолиза клеток бактерий

3.5. Сравнительная оценка активности кориопубесцина в отношении 150 микроорганизмов, выделенных от больных хирургического профиля

3.6. Сравнительная оценка активности препарата, получаемого на основе 155 гриба С. pubescens, в отношении полирезистентных штаммов бактерий

3.7. Сравнительная оценка активности препарата, получаемого на основе 160 гриба С. pubescens, в отношении возбудителей заболеваний семейства Enterobacteriaceae

ГЛАВА 4. ТВЕРДОФАЗНАЯ ФЕРМЕНТАЦИЯ ГРИБА С. PUBESCENS И 164 УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ ДЕРЕВООБРАБАТЫВАЮЩЕЙ, ЦЕЛЛЮ-ЛОЗНО - БУМАЖНОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ

ГЛАВА 5. ОСНОВЫ ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОДУКТОВ

БИОТЕХНОЛОГИИ МЕТОДОМ ЖИДКОФАЗНОЙ ФЕРМЕНТАЦИИ ГРИБА С. PUBESCENS

ГЛАВА 6. ПОЛИСАХАРИДЫ ГРИБА С. PUBESCENS КАК НЕСПЕЦИ- 193 ФИЧЕСКИЕ СТИМУЛЯТОРЫ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

6.1. Выделение полисахаридов клеточных стенок С. pubescens

6.2. Изучение химического состава полисахаридных фракций

6.3. Исследование тенденций влияния полисахаридов клеточной стенки 202 С. pubescens на функциональную активность иммунокомпетентных клеток

ГЛАВА 7. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ 207 ТЕХНОЛОГИЧЕСКОГО ИНГРЕДИЕНТА ЛЕВАН

НА БРОДИЛЬНЫХ ПРОИЗВОДСТВАХ

7.1. Использование технологического ингредиента при производстве хлебопекарных дрожжей

7.1.1 .Особенности производства прессованных хлебопекарных дрожжей и методы борьбы с посторонней микрофлорой

7.1.2. Исследование возможности использования технологического 215 ингредиента Леван - 1 при производстве хлебопекарных дрожжей

7.1.3. Изучение влияния технологического ингредиента Левана - 1 218 на процесс ферментации в полупромышленных условиях

7.1.4. Изучение влияния Левана - 1 на показатели качества дрожжей 222 в промышленных условиях

7.1.5. Определение видового состава физиологических групп 234 микроорганизмов - вредителей дрожжевого производства

7.1.6. Исследование влияния технологического ингредиента на 248 различные виды микроорганизмов - представителей посторонней микрофлоры дрожжевого производства

7.2. Использование технологического ингредиента при производстве спирта

ГЛАВА 8. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ

ВЕЩЕСТВ ПРОДУЦЕНТА С. PUBESCENS В ВЕТЕРИНАРИИ

8.1 .Определение возможности использования антимикробного препарата на основе С. pubescens для лечения и профилактики желудочно - кишечных заболеваний новорождённых телят

8.2. Токсико - биологические свойства продуцента С. pubescens и анти- 256 микробного препарата, получаемого на его основе

8.2.1. Исследование токсико - биологических свойств гриба 257 Coriolus pubescens

8.2.2. Исследование острой токсичности антибактериального 261 препарата Леван

8.2.3. Определение местно - раздражающего и сенсибилизирующего 266 действия гриба С. pubescens и препарата Леван

8.2.4. Гистологическое исследование внутренних органов животных, 270 подвергавшихся воздействию гриба С. pubescens и препарата Леван

8.3. Исследование лечебной эффективности препарата Леван - 2 при желудочно - кишечных заболеваниях новорождённых телят

ГЛАВА 9. МЕДИКО - БИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

АНТИМИКРОБНОГО ПРЕПАРАТА, ПОЛУЧАЕМОГО

НА ОСНОВЕ С. PUBESCENS

9.1. Исследование противовоспалительной активности препарата Леван

9.2. Исследование противотуберкулёзной активности антимикробного 280 препарата

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биоэкологические аспекты изучения и использования биологически активных веществ дереворазрушающего гриба Coriolus Pubescens (Shum.: Fr.) Quel"

Актуальность проблемы. Высокий уровень техногенной нагрузки в Иркутской области, особенно в городах Ангарске, Братске, Шелехове, Усолье -Сибирском, Зиме, Иркутске, Черемхове, вызвал значительное ухудшение экологической обстановки. Экологически обусловленная часть повышенного риска нарушений здоровья связана с факторами преимущественно следующих видов воздействия: тератогенного, эмбриотоксического, общетоксического, канцерогенного и генетического. Безусловно, в этих условиях кардинальным вопросом является переход на более совершенные технологии, замкнутые циклы, новое оборудование, современную очистку промышленных выбросов. Однако, немаловажное значение имеет также внедрение методов медико - биологического воздействия на население с целью повышения сопротивляемости организма, снижения заболеваемости, улучшения показателей работоспособности. В этих условиях наряду с медико - экологической реабилитацией населения особую актуальность приобретает отработка адекватных схем медикаментозного лечения с использованием эффективных иммунокорректирующих препаратов, повышающих неспецифическую резистентность к инфекциям, интоксикациям, и новых антимикробных средств, которые могут быть получены, в том числе, с использованием методов биотехнологии на основе дереворазрушающих грибов.

В последние десятилетия дереворазрушающие высшие базидиальные грибы стали объектом пристального внимания исследователей. Способность к активному росту в условиях глубинного культивирования в отличие от грибов других экологических групп этого класса, привлекают к ним внимание как к перспективным объектам биотехнологических исследований. Особый интерес представляет изучение возможности их использования в качестве продуцентов биологически активных веществ и разработки на их основе экологически чистых безотходных технологий получения эффективных лекарственных препаратов различного назначения, технологических ингредиентов для пищевой промышленности, пищевых добавок и стимуляторов роста животных, способов утилизации отходов производства, в том числе, и особо опасных.

С другой стороны, проблема промышленных отходов, в том числе, и лигноцеллюлозных, приобрела на сегодняшний день не только глобальное значение, но и весьма актуальна для Иркутской области, поскольку вторичные растительные отходы сельского хозяйства и промышленности до сих пор не нашли крупномасштабного использования. Если решение проблемы вторичного целлюлозосодержащего сырья сельского хозяйства нашло отражение в проведении ряда региональных программ и внедрении некоторых разработок, то лигно-целлюлозные отходы не используются в должной мере. Особо острыми представляются проблемы утилизации отходов целлюлозно - бумажной промышленности и биотехнологических производств. Так, на предприятиях целлюлозно-бумажной промышленности, использующих для отбеливания целлюлозы молекулярный хлор, образуются полихлорированные дибензо - п-диоксины (ГГХДД) и дибензофураны (ПХДФ) - высокотоксичные, канцерогенные соединения, являющиеся представителями хлорированных циклических ароматических эфиров. В связи с этим весьма актуальной представляется разработка схем безотходного производства антимикробных препаратов и технологических ингредиентов при утилизации биомассы продуцентов, производства полисахаридов и иммуностимулирующих препаратов на их основе, стимуляторов роста животных, и особенно, разработка биологических методов обезвреживания высокотоксичных отходов целлюлозно - бумажной промышленности.

Цель работы. Настоящая работа направлена на изучение возможности решения медико - экологических проблем Иркутской области посредством изучения физиологических и биохимических аспектов воздействия биологически активных веществ продуцента Coriolus pubescens (Shum.:Fr.)Quel. штамм 0663, разработки безопасных биотехнологических способов получения антимикробных, иммуностимулирующих препаратов и технологических ингредиентов на их основе, разработку способов их использования на бродильных производствах пищевой промышленности, в ветеринарии и медицине, способов утилизации и обезвреживания промышленных отходов.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи: провести скрининг для выявления штамма высших дереворазрушающих грибов, обладающего высокой антимикробной активностью; выделить и идентифицировать антимикробные вещества, изучить механизм их действия in vitro; оптимизировать методы и режимы культивирования продуцента; разработать способы получения антимикробных препаратов и способы их использования в ветеринарии и медицине; разработать способ получения и использования антимикробного технологического ингредиента, включающего вторичные метаболиты, на бродильных производствах Иркутской области; разработать способы использования биомассы продуцента, получаемой при ферментации, как отхода производства, для выделения других биологически активных веществ, а именно: для получения полисахаридов; разработать метод обезвреживания опасных лиг-но - целлюлозных отходов производства с использованием твердофазной ферментации продуцента.

Научная новизна работы. Эколого - биотехнологическая концепция диссертационной работы основывается на замене в ряде промышленных производств высокотоксичных веществ, что приводит к оздоровлению окружающей среды, а также на получении биологически активных веществ базидомицета Coriolus pubescens (Shum.:Fr.)Quel. штамм 0663, улучшающих качество жизни человека.

В результате выполнения работы научно аргументирована и экспериментально доказана перспективность использования вторичных метаболитов продуцента С. pubescens для получения антимикробных препаратов широкого спектра действия и технологических ингредиентов, а полисахаридов клеточной стенки продуцента - для получения иммуностимулирующих препаратов по разработанной принципиальной технологической схеме, которые используются для решения существующих медико - экологических проблем Иркутской области.

Исследован спектр антимикробного действия продуцента и препаратов, получаемых на его основе. Установлено, что механизм бактерицидного действия антимикробных препаратов определяется механизмом действия вторичных метаболитов, синтезируемых продуцентом. Показано, что бактерицидное действие препаратов, получаемых на основе продуцента С. pubescens, заключается в ин-гибировании синтеза клеточной стенки бактерий - возбудителей заболеваний. Установлено, что химиотерапевтическими агентами, способными подавлять патогенные бактерии in vitro, являются синтезируемые продуцентом терпеноиды.

Проведено сравнительное изучение антибиотикорезистентности клинических штаммов, выделенных от больных детей хирургического профиля к современным препаратам, включая Леван - 1. Изучена активность препаратов Леван-1 и Леван - 2 по отношению к возбудителям желудочно - кишечных заболеваний человека и животных семейства Enterobacteriacea. Показано, что препарат Леван - 2 увеличивает интенсивность автолиза клеток штаммов бактерий гнойно -воспалительных заболеваний в более значительной степени, чем антибиотики цефалоспориновой и пенициллиновой групп.

Установлено, что гриб С. pubescens является малопатогенным для млекопитающих. Согласно гигиенической классификации производственных штаммов микроорганизмов, исследованный штамм относится к третьему классу опасности. Антибактериальный препарат Леван - 2, получаемый на основе продуцента, малотоксичен, ЛД50 составляет 50 ОООмг/кг и близка к пороговой в остром опыте по общетоксическому и дисбиотическому эффектам действия. Местно - раздражающее и аллергенное действие препарата является слабовыражен-ным.

Изучена противоспалительная активность препарата с использованием модели острого воспалительного отёка на лабораторных животных - белых беспородных мышах. Показано, что Леван - 2 обладает максимальной противовоспалительной активностью в дозе 1,5 мл/кг массы тела при внутрибрюшин-ном введении препарата.

При экспериментальном моделировании туберкулёзной инфекции установлено, что препарат Леван - 2 обладает противотуберкулёзной активностью в дозе 2,0 мл/кг массы тела внутримышечно. Монотерапия препаратом приводит к излечению животных и увеличению массы их тела. Полученные данные свидетельствуют о расширении возможности использования препарата в качестве химиотерапевтического средства.

Разработаны научные основы применения антимикробного препарата Леван - 2 для лечения и профилактики желудочно - кишечных заболеваний новорожденных телят.

Разработаны научные основы снижения бактериальной обсеменённости при производстве и повышения качества основных продуктов - хлебопекарных дрожжей и этилового спирта - при использовании антимикробного технологического ингредиента Леван -1.

Разработана схема выделения фракций полисахаридов из клеточных стенок С. pubescens и изучен их состав. Исследование влияния глюкановых фракций полисахаридов, выделяемых из биомассы С. pubescens позволило выявить эффект активации нейтрофилов in vitro, а также выявить тенденцию к увеличению подвижности Т-хелперов при изучении действия глюкановых фракций полисахаридов на электрофоретическую подвижность лимфоцитов.

Установлено, что при твердофазной ферментации отходов деревообрабатывающей промышленности происходит не только утилизация субстрата, но образование биологически активных веществ. Конечные продукты представляют собой смесь выросших грибов и неутилизированного субстрата - белково -углеводные комплексы (БУК), богатые белками, липидами и витаминами, образующимися при деградации природных полимеров, а также микро - и макроэлементами. Получаемые продукты утилизации (БУК) отвечают требованиям безопасности для пищевых продуктов по содержанию токсичных элементов, микотоксинов. При утилизации лигноцеллюлозных отходов как в лабораторных условиях, так и «под открытым небом» не происходит обсеменения БУК посторонней микрофлорой вследствие высокой антимикробной активности продуцента.

Исследование процесса твердофазной ферментации высокотоксичных лигноцеллюлозных отходов целлюлозно - бумажного производства (ЦБП) позволило разработать способ их обезвреживания с использованием методов биотехнологии. Установлено, что в качестве биологического метода обезвреживания твёрдых отходов ЦБП, содержащих хлорорганические ароматические соединения, может быть рекомендован метод утилизации шлам - лигнина с использованием штамма 0663 дереворазрушающего базидиомицета С. pubescens. Метод является экологически безопасным и приводит к изменению состава промышленных отходов и 100 % - ному удалению органических веществ, приводящих к образованию диоксинов (фенолов и хлорорганических соединений).

Диссертация являлась источником тем научно-исследовательских работ, выполнявшихся в Центральной научно-исследовательской лаборатории (ЦНИЛ) ИГМУ в 1994 - 2001 гг. «Гигиеническая оценка белково - углеводных комплексов как производных вторичного растительного сырья», «Медико-биологические исследования биологически активных соединений и способы их получения с использованием методов биотехнологии» и хоздоговорной темы № 1-97 «Повышение стойкости и выхода продукции в условиях весенне-летнего периода производства хлебопекарных дрожжей», а также темы научно - исследовательской работы «Разработка научных основ практического применения в ветеринарии антибактериального и иммуностимулирующего препаратов, полученных с использованием методов биотехнологии на основе гриба Coriolus pubescens (Fr.:Shum.) Quel.», выполнявшей в Иркутском филиале Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (ИФ ИЭВСиДВ) СО РАСХН в 2002 - 2005 гг. под личным руководством автора.

Практическая значимость. Практическое значение работы состоит в развитии нового комплексного направления при использовании жидкофазной и твердофазной ферментации дереворазрушающего гриба С. pubescens, результаты которого могут быть использованы для практического применения в промышленности, сельском хозяйстве и медицине для решения существующих медико - экологических проблем.

В результате научных исследований разработана принципиальная схема получения антимикробных и иммуностимулирующих лекарственных средств ветеринарного и медицинского назначения, технологических ингредиентов для бродильных производств пищевой промышленности. Разработка способов получения антимикробных веществ и их внедрение позволяет расширить спектр эффективных антимикробных лекарственных средств. Оценка чувствительности in vitro антибактериальных препаратов Леван - 1 и Леван -2 показала их большую эффективность по сравнению с применяемыми антимикробными препаратами. Препарат Леван - 2 прошёл широкие производственные испытания в ОАО «Хомутовское» Иркутской области Иркутского района. Показана его высокая лечебная и профилактическая эффективность для лечения желудочно - кишечных заболеваний с синдромом диареи новорождённых телят.

Использование технологического ингредиента Леван - 1, получаемого на основе природного антимикробного вещества, на бродильных производствах позволяет не только снизить обсеменение посторонней микрофлорой на всех стадиях технологического процесса, но и сократить время брожения, повысить выход и качество продукции, исключить из технологических процессов вредные и агрессивные вещества.

Разработка технологического ингредиента Леван-1, обладающего антимикробным действием по отношению к гнилостным бактериям, позволило внедрить его на ОАО «Дрожжевой завод» (г. Иркутск). Применение ингредиента при производстве дрожжей пекарских позволяет увеличить стойкость продукции без изменения других показателей качества продукции.

Технологический ингредиент Леван-1 прошёл лабораторные, полупро-мышленнные и промышленные испытания на Тельминском спиртзаводе ОАО «Кедр». При производстве спирта замена таких вредных и агрессивных веществ, как формалин и серная кислота, технологическим ингредиентом Леван-1 приводит к снижению количества несброженных углеводов, повышению выхода основного продукта - этилового спирта, сокращению содержания метанола в конечном продукте.

Лабораторные испытания технологического ингредиента проводились также в лаборатории дрожжей Ленинградского филиала ВНИИ хлебопекарной промышленности.

Акты лабораторных, полупромышленных, промышленных испытаний и акты внедрения приложены к диссертации.

Апробация работы. Основные положения диссертации были представлены на следующих конференциях: Международная конференция «Экологически чистые технологические процессы в решении проблем охраны окружающей среды» (Иркутск, 1996); IV - ый Российско - Японский международный симпозиум (Иркутск, 1996); Юбилейная научно-практическая конференция «Итоги, проблемы и перспективы», посвященная 75-летию Государственной санитарно- v эпидемиологической службы России (Иркутск, 1997); Международная конференция «Экология и развитие России: медико-экологические аспекты на примере Байкальского региона» (Иркутск, 1998); Международное совещание, посвященное памяти М. Г. Минаевой, «Физиолого-биохимические аспекты изучения лекарственных растений» (Новосибирск, 1998); 1-ый съезд токсикологов России (Москва, 1998); 2-ая межрегиональная научная конференция «Человек и окружающая среда» (Рязань, 1998); VI - й Российско - Японский международный симпозиум (Хабаровск, 1998); 3-я ежегодная научно-практическая конференция «Актуальные вопросы медицинского обеспечения при чрезвычайных ситуациях и катастрофах» (Иркутск, 1999); 5-ая международная научно-практическая конференция «Природные и интеллектуальные ресурсы Сибири» (Томск, 1999); Западно-Сибирский форум «Актуальные вопросы диагностики, лечения, профилактики наиболее распространенных заболеваний внутренних органов» (Тюмень, 2000); Международный экологический конгресс «Новое в экологии и безопасности жизнедеятельности» (Санкт-Петербург, 2000); Международная конференция «Химическое образование и развитие общества» (Москва, 2000);

Годичная сессия ИГМУ по итогам НИР - 2000 (Теоретическая секция) (Иркутск, 2000); Научно-практическая конференция «Актуальные проблемы ветеринарной медицины Восточной Сибири (Иркутск, 2002); Межрегиональная научно -практическая конференция «Биология микроорганизмов и их научно — практическое использование» (Иркутск, 2004); Научно - практическая конференция, посвященная 65 - летию СО РАСХН (Новосибирск, 2005); Заседание регионального отделения МОО «Микробиологическое общество» (2006).

Основные публикации. По материалам диссертации опубликовано 38 работ, в том числе, 10 статей в научных журналах, рекомендуемых ВАК для публикации материалов докторских диссертаций, монография «Биологически активные вещества Coriolus pubescens (Shum.:Fr.) Quel, и их использование в медицине, ветеринарии, экологии и пищевой промышленности» и «Методические рекомендации по применению современных лекарственных средств для профилактики и лечения желудочно - кишечных заболеваний новорождённых телят».

Основные положения, выносимые на защиту

1. Результаты изучения антимикробной активности продуцента С. pubescens, её природы и механизма действия, получения новых антимикробных препаратов как средства снижения заболеваемости.

2. Результаты сравнительного изучения антимикробной активности препарата Леван -1, получаемого на основе гриба С. pubescens, в отношении клинических полирезистентных штаммов бактерий, выделенных в лечебно — профилактических учреждениях г. Иркутска.

3. Результаты изучения твердофазной ферментации продуцента как способа утилизации и обезвреживания лигно - целлюлозных отходов производства.

4. Результаты разработки принципиальной технологической схемы безотходного производства продуктов биотехнологии на основе жидкофазной ферментации гриба С. pubescens.

5. Результаты разработки схемы выделения полисахаридов клеточной стенки гриба продуцента, изучения их химического состава и тенденций влияния на функциональную активность иммунокомпетентных клеток как средства для повышения неспецифической резистентности организма к инфекциям, интоксикациям в условиях экологического неблагополучия.

6. Результаты исследования возможности использования антимикробного технологического ингредиента Леван - 1 на бродильных производствах пищевой промышленности как экологически безопасного способа производства хлебопекарных дрожжей и спирта.

7. Результаты медико - биологических исследований продуцента С. pubescens и антимикробного препарата Леван - 2, получаемого на его основе.

8. Результаты исследования возможности использования антимикробного препарата Леван - 2 для лечения и профилактики желудочно - кишечных заболеваний новорождённых телят как средства, повышающего устойчивость организма к действию неблагоприятных факторов внешней среды.

Объем и структура диссертации. Работа состоит из введения, 9 глав, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, содержащего 584 источников, в том числе, 380 отечественных и 204 зарубежных. Работа изложена на 352 страницах, включая список литературы на 56 страницах, иллюстрирована 81 таблицей и 51 рисунком, содержит 18 приложений.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Чхенкели, Вера Александровна

выводы

1. Дереворазрушающий гриб С. pubescens штамм 0663 обладает высокой антимикробной активностью в отношении грамположительных и грамот-рицательных бактерий, не оказывает антибиотического действия на микроми-цеты родов Aspergillus, Penicillium, Chephalosporium и актиномицеты родов Nocardia, Sporobolomyces, проявляет стимулирующее действие на рост дрожжей родов Candida, Trichosporon, Hansenula, Torula, Saccharomyces, Cryptococ-cus.

2. Химиотерапевтическими агентами, способными подавлять патогенные бактерии in vitro, являются синтезируемые продуцентом терпеноиды -полипореновая кислота С и кориопубецин. Минимальная подавляющая концентрация (МПК) кориопубесцина составляет 4х 10"4 мг /мл, МПК полипореновой л кислоты С - 4x10" мг/мл.

3. Механизм бактерицидного действия антимикробных препаратов и технологического ингредиента, получаемых на основе гриба С. pubescens, определяется механизмом действия вторичных метаболитов, синтезируемых продуцентом.

4. Культуральная жидкость, получаемая при культивировании продуцента С. pubescens, увеличивает интенсивность автолиза клеток бактерий - возбудителей гнойно - воспалительных заболеваний - в более значительной степени, чем антибиотики пенициллиновой и цефалоспориновой групп. Её бактерицидное действие заключается в ингибировании синтеза клеточной стенки бактерий, в ответ на которое происходит лизис клетки под действием автолизинов.

5. Гриб С. pubescens является малопатогенным для млекопитающих. Согласно гигиенической классификации производственных штаммов микроорганизмов, исследованный штамм относится к третьему классу опасности.

6. Антибактериальный препарат Леван - 2, получаемый на основе продуцента, малотоксичен, ЛД50 составляет 50 ОООмг/кг и близка к пороговой в остром опыте по общетоксическому и дисбиотическому эффектам действию, местно- раздражающее и аллергенное действие препарата является слабо выраженным.

7. Твердофазная ферментация (ТФФ) лигноцеллюлозных отходов деревообрабатывающей промышленности с использованием гриба С. pubescens приводит к их утилизации с образованием безопасных белково - углеводных комплексов (БУК), которые представляют смесь выросших грибов и неутилизи-рованного субстрата, обогащенных протеином, липидами, витаминами. Деструкция отходов приводит к снижению содержания целлюлозы и лигнина на 17,51 и 11,64 %, соответственно.

8. Под действием окислительных и гидролитических ферментных систем базидиомицета при ТФФ шлам - лигнина - отхода производства целлюлозно -бумажной промышленности - происходит увеличение содержания нециклических соединений на 9,5 - 63 %, 100 % - ная утилизация ароматических соединений (фенолов, бензолов, фуранов) и хлорорганических компонентов ароматического ряда.

9. Внесение технологического ингредиента Леван - 1 при производстве прессованных хлебопекарных дрожжей на разных стадиях производства в концентрациях 0,0001 - 0,02 % позволяет существенно снизить содержание посторонней микрофлоры (гнилостных бактерий и лейконостока) на всех стадиях производства, повысить качество готовой продукции, а именно: увеличить показатель стойкости дрожжей на 15,5 %, стабилизировать производственный процесс в целом, особенно, в неблагоприятный для дрожжевого производства ве-сенне - летний период. Использование Левана -1 эффективно при производстве по различным технологическим схемам и при использовании различных промышленных продуцентов.

Ю.Замена формалина и серной кислоты на технологический ингредиент Леван в концентрации - 0,003% при производстве спирта для дезинфекции солодового молочка приводит к сокращению производственного цикла на 10- 12 ч. При этом выход конечного продукта - этилового спирта - увеличивается на 6,6 %, а содержание в нём метилового спирта сокращается на 51, 2 %.

11. Леван - 2 является новым эффективным средством для лечения и профилактики желудочно - кишечных заболеваний новорождённых телят, этиологическим фактором которых являются энтеробактерии родов Escherichia, Proteus, Citrobacter.

12. Антимикробный препарат Леван - 2 обладает максимальной противовоспалительной активностью в дозе 1,5 мл/кг массы тела при внутрибрю-шинном введении препарата. Препарат обладает противотуберкулёзной активностью в дозе 2,0 мл/кг массы тела внутримышечно. Монотерапия препаратом приводит к излечению животных и увеличению массы их тела.

13. Эффект активации нейтрофилов in vitro, тенденция к увеличению подвижности Т-хелперов под действием глюкановых фракций полисахаридов клеточной стенки С. pubescens, выявленная при изучении их влияния на элек-трофоретическую подвижность лимфоцитов, свидетельствуют об уникальности свойств глюканов клеточной стенки продуцента.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Способ обезвреживания промышленных отходов целлюлозно - бумажной промышленности твердофазной ферментацией продуцента С. pubescens позволяет полностью удалять органические соединения, приводящие к образованию диоксинов, опасных для окружающей среды и человека.

2. Разработана принципиальная схема безотходного производства продуктов биотехнологии на основе жидкофазной ферментации продуцента С. pubescens.

3. Использование технологического ингредиента Леван -1 при производстве спирта исключает агрессивные вещества - формалин и серную кислоту - из процесса производства.

4. При производстве прессованных дрожжей технологический ингредиент Леван - 1 рекомендуется вносить на стадии подготовки мелассового сусла. Ингредиент вносится в мелассовый раствор (при плотности 29-30 град. Блг.) в концентрации 0,02% по объему перед его обработкой острым паром. Технологический ингредиент рекомендуется также вносить в дрожжевое молоко в количестве 0,06% к массе дрожжей.

5. Разработанная схема получения глюкановых фракций полисахаридов клеточной стенки продуцента С. pubescens, изучение их химического состава и тенденций влияния на иммунокомпетентные клетки создают предпосылки для разработки нового эффективного иммуностимулирующего препарата.

6. Наиболее эффективной схемой применения препарата Леван - 2 для лечения острых желудочно-кишечных заболеваний является применение препарата в дозе 60 мл per os с интервалом 24 ч. При этом происходит сокращение сроков лечения в 2 раза, повышается уровень естественной резистентности, улучшаются обменные процессы в организме. Применение Левана - 2 с профилактической целью в дозе 30 мл per os в течение 2 -5 дней позволяет снизить заболеваемость телят как желудочно - кишечными, так и другими заболеваниями, увеличить привесы на 10,5 %. Леван 2 не оказывает отрицательного действия на организм животного, удобен в применении, его можно задавать индивидуально и групповым способом.

7. Наличие противовоспалительной и противотуберкулёзной активности антимикробного препарата Леван - 2 расширяет возможность его применения препарата в качестве химиотерапевтического средства.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Чхенкели, Вера Александровна, Иркутск

1. Абрамов С.С. Профилактика незаразных болезней молодняка / С.С. Абра-мов, И.Г. Арестов, И.М. Карпуть. М, 1990. - С. 24-56.

2. Агапова Е.Д. Гигиенические аспекты гнойно-воспалительных заболеванийу детей после хирургических вмешательств: Автреф. дисс. канд. мед. наук. Иркутск, 1998.-34 с.

3. Алексеева О.Г. Изучение сенсибилизирующих свойств химических веществв эксперименте / О.Г. Алексеева, Н.И. Шумская // Методы определения токсичности и опасности химических веществ (токсикометрия). М., 1970. -С. 275-281.

4. Алистайр Л. Антибиотики: современная точка зрения / Л. Алистайр // Лечащий врач. 1998. - № 1. - С. 1-7.

5. Ананьева Е.П. Полисахариды клеток спороболомицетов / Е.П. Ананьева,

6. Г.А. Витковская , Н. В. Смирнова // Микробиол. 1993. - Т. 62. - Вып. 4. -С. 680-684.

7. Антибактериальная терапия. Практическое руководство / Под ред. Л.С.

8. Страчунского, Ю.Б. Белоусова, С.Н. Козлова. М. - 2000. -191 с.

9. Ковалёв В.К. Антибиотики, сульфаниламиды и нитрофураны в ветеринарии: Справочник / В.К. Ковалев, И.Б. Волков, Б.В. Виолин и др. М.: Аг-ропромиздат, 1988. - 233 с.

10. Аркадьева З.А. Промышленная микробиология / З.А. Аркадьева, A.M. Безбородое, И.А. Блохина др.; Под ред. Н.С. Егорова М.: Высш. шк., 1989. -688 с.

11. Ахмедова З.Р. Биодеградация растительных отходов грибом Pleurotusostreaus II. Образование биологически ценных продуктов / З.Р. Ахмедова // Биотехнология. 1992. - № 5. - С. 65-68.

12. Ахмедова З.Р. Биодеградация растительных отходов грибом Pleurotusostreaus I. Образование ферментов / З.Р. Ахмедова // Биотехнология. -1992. -№ 5.-С. 69-71.

13. Бабицкая В.Г. Изменение состава лигнинов соломы и льняной костры поддействием базидиальных грибов / В.Г. Бабицкая, С.Г. Латышева, В.В. Щерба и др.// Прикл. биохим. и микробиол. 1992. - Т. 28. - Вып. 1. - С. 55-59.

14. Бабицкая В.Г. Вещества феноловой природы некоторых базидиомицетов /

15. B.Г. Бабицкая, В.В. Щерба // Микробиол. 1999. - Т. 68. - Вып. 1. - С. 70-75.

16. Бабицкая В.Г. Деградация природных полимеров мицелиальными грибами- продуцентами биологически активных веществ / В.Г. Бабицкая, В.В. Щерба // Прикл. биохим. и микробиол. 1991. - Т. 27. - Вып. 5. - С. 687 -694.

17. Бабицкая В.Г. Физиологические активные вещества гриба Coriolus hirsutus

18. Fr.) Quel. / В.Г. Бабицкая, В.В. Щерба, B.C. Олешко // Прикл. биохим. и микробиол. 1994. - Т. 30. - Вып. 3-4. - С. 686-693.

19. Бадалян С.М. Химическое и фармакологическое исследование высших гри• бов / С.М. Бадалян, В.А. Мнацакян, Л.С. Арутюнян и др. // Миколог, и фитопатолог. 1998. - Т. 31. - Вып. 3. - С. 61-65.

20. Балицкий К.П. Повышение противоопухолевого эффекта алкилирующихпрепаратов с помощью воздействия на защитные реакции системы соединительной ткани / К.П. Балицкий, И.Г. Векслер. В кн.: Вопросы онкологии и радиологии, Алма - Ата, 1967, т. 3. - С. 291-296.

21. Балицкий К.П. Реактивность организма и химиотерапия опухолей / К.П. Балицкий, И.Г. Векслер. Киев: Наукова думка, 1975. -254 с.

22. Басс-Шадхан Х.Ф. Зимозан / Х.Ф. Басс-Шадхан. Рига: Зинатне, 1970. -314 с.

23. Бейли Дж., Оллис Д. Основы биохимической инженерии / Дж. Бейли, Д. Оллис. Пер с англ. - Т.2. - М.: Мир, 1989. - 590 с.

24. Беккер З.Э. Физиология и биохимия грибов/ З.Э Беккер. М.: Изд-во МГУ,1988.- 230 с.

25. Беклемишев И.Д. Иммунопатология и иммунорегуляция (при инфекциях,инвазиях и аллергиях) / И. Д. Беклемишев. М.: Медицина, 1986,- 256с.

26. Белова Н.В. Грибы белой гнили древесины и возможность их использованидля утилизации отходов / Н.В. Белова, Н.П. Денисова // Биотехнология. -2005.-№4.-С. 55-58.

27. Белова Н.В. Базидиомицеты источники биологически активных веществ /

28. Н.В. Белова // Раст. ресурсы. 1991. - Вып. 2. - С. 8-18.

29. Билай В.И. Методы экспериментальной микологии / В.И. Билай. М: Высшая школа, 1989. 54 с.

30. Билай В.И. Трансформация целлюлозы грибами / В.И. Билай, Т.И. Билай,

31. Е.Г. Мусич. Киев: Наукова думка. - 1982. - 296 с.

32. Биоконверсия целлюлозы: микробиология и биохимия / Под ред. М.Н. Манакова // Итоги науки и техники: Биотехнология. 1988. - Т. 11. - 224 с.

33. Биотестирование продукции из полимерных и других материалов. Методические указания. 1.1.037 95. - М.: Госкомсанэпиднадзор России, 1995. -12 с.

34. Биотехнология ферментативного превращения целлюлозы / Под ред. А.А

35. Клёсова, Л.Г. Виноградовой // Итоги науки и техники: Биотехнология. -1988.-Т.12.-156 с.

36. Бисько Н.А. Биология и культивирование съедобных грибов рода вешенка /

37. Н.А. Бисько, И.А. Дудка,- Киев: Наукова думка. 1987.-148 с.

38. Боблев Г. М., Саторов И. Г., Махмудов К. Иммуностимулирующие препараты при бронхопневмонии телят // Г.М. Боблев, И.Г. Саторов, К. Махмудов // Фармакология и токсикология. 2000. - № 10. - С. 41-45.

39. Бокуняева Н.И. Справочник по клиническим лабораторным методам исследования / Н. И. Бокуняева и др. М.: Медицина, 1975. - 383 с.

40. Болезни телят и меры борьбы с ними // Сб. научн. тр. Новосибирск, 1983.-110 с.

41. Бочарова Н.Н. Микрофлора дрожжевого производства / Н.Н. Бочарова,

42. Ю.П. Кобрина, Н.В. Розманова.- М.: Пищевая промышленность, 1972.-150с.

43. Бранцевич Л.Г. Микробиология: практикум / Л.Г. Бранцевич, Л.Н. Лысенко, В.В. Овод В.В. Киев: Вища шк., 1987. - 200 с.

44. Булдаков А.С. Пищевые добавки: Справочник / А.С. Булдаков. С.-П.:1. Ut», 1996.-240 с.

45. Буркацкая Е.Н. Методические рекомендации по использованию поведенческих реакций животных в токсикологических исследованиях для целей гигиенического нормирования / Е.Н. Буркацкая и др. Киев, 1980. - 47 с.

46. Бурова Л.Г. Экология грибов макромицетов/ Л.Г. Бурова. М.: Наука.-1986.- 222 с.

47. Бухало А.С. Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре / А.С.

48. Бухало. Киев: Наукова думка. - 1988.-250 с.

49. Бухало А.С. Изучение питательной ценности культурального мицелия высших съедобных базидиомицетов // А.С. Бухало, Э.Ф. Соломко, Л.А. За-кордонец и др. / Микробиол. журн. 1985. - Т. 47. - № 4. - С. 30-35.

50. Буянов А.А.Влияние хнтозана на иммунную и эндокринную системы поросят / А.А. Буянов, В.Н. Видении, А.Н. Гречухин, В.Д. Нифантов // Ветеринария. 2004. - № 2. - С. 47 - 51.

51. Бышевский А.Ш., Терсенов О.А. Биохимия врача / А.Ш. Бышевский, О.А.

52. Терсенов. Екатеринбург: Уральский рабочий, 1994. - 383 с.

53. Ванин С.И. Лесная фитопатология / С.И. Ванин. М: Гослесбумиздат.1955.-416с.

54. Векслер И.Г. Биологически активные полисахариды как неспецифическиестимуляторы противоопухолевой резистентности организма / И.Г. Векслер //Эксп. онкология. -1981.- №4. -С. 10-15.

55. Ветеринарная лабораторная практика. Т. 1. - М.: Изд - во с/х лит - ры и плакатов, 1963. - 567 с.

56. Ветеринарная лабораторная практика. Т. 2. - М.: Изд - во с/х лит - ры иплакатов, 1963.-432 с.

57. Ветеринарная микробиология / Под ред. Е.В.Козловского, П.А. Емельяненко. М.: Колос, 1982. - 303 с.

58. Витамины и минеральные вещества / Под ред. Т.П. Емельяновой. СПб.:1. Весь, 2001.-576 с.

59. Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов и физическиесвойства липидного слоя биологических мембран / Ю.А. Владимиров // Биофизика. 1987. - Т. 32. - № 5. - С.830-844.

60. Владимиров Ю.А. Биохимия разложения лигнина микроорганизмами /

61. Ю.А. Владимиров, А.И. Аргаков, Л.А. Головлева и др. // Проблемы биохимии растительного сырья /. М.: Наука. - С. 272-292.

62. Волчатова И.В. Микробиологическая переработка гидролизного лигнина /

63. И.В. Волчатова, С.А. Медведева, С.С. Тимофеева // Мат. междунар. конф. «Экологически чистые технологические процессы в решении проблем охраны окружающей среды. Иркутск, 1996. - Т. 2. - С. 175.

64. Воронин Е.С. Влияние Т-активина на иммунологический статус телят / Е.С. Воронин, В.Н. Денисенко, Г.Н. Печникова // Ветеринария. 1990. - № 5. -С. 54-55.• 56. Воронцов А.И. Лесозащита / А.И. Воронцов, И.Г. Семенкова. М.: Леснаяпром-сть, 1980.- 328 с.

65. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / Под ред.

66. Е.Е. Сироткиной. Томск: Изд-во Томского ун-та, 1987. - 184 с.

67. Гаврилова В.П. Рост и образование окислительных ферментов дереворазрушающими грибами из рода Coriolus Quel. / В.П. Гаврилова, Н.К. Григорьева// Миколог, и фитопатолог. 1983. - Т. 13. - № 2,- С. 127-129.

68. Гаврилова В.П. А.С. 1198022 СССР. Способ очистки сточных вод гидролизно-дрожжевого производства / В.П. Гаврилова, Л.М. Федорова, Н.Н. Гончарова и др. // Б. И. 1985. - № 46. - С. 95.

69. Гаврилова Н.Н. Создание ассоциации из молочнокислых и пропионовокислых бактерий, активной в отношении возбудителей колибактериоза и сальмонеллёза / Н.Н. Гаврилова, И.А. Ретникова, К. Баякшинова и др. // Биотехнология. 2005. - № 2. - С. 26 - 32.

70. Ганбаров Г.Г. Эколого-физиологические особенности дереворазрушающихвысших базидиальных грибов / Г.Г. Ганбаров. Баку: ЭЛМ, 1989. - С. 5168.

71. Гаранина Е.Н. Качество лабораторного анализа. Факторы, критерии, метода• оценки / Е.Н. Гаранина; Под ред. В.В. Меньшикова. М.: Лабинформ, 1997.-192 с.

72. Гарибова, Н.Б. Шалашова // Миколог, и фитопатолог. 1973. - Т. 7. - Вып. 3.- С. 231-232.

73. Гарибова JI.B. Оценка некоторых таксономических признаков видов рода

74. Agaricus Fr./ Л.В. Гарибова, А.И. Сафрай // Миколог, и фитопатолог. -1972. Т. 8. - Вып. 6.- С. 533-536.

75. Гельфанд Б.Р., Гельфанд Е.Б. Проблемы антибактериальной терапии в хирургии и интенсивной медицине / Б.Р. Гельфанд, Е.Б. Гельфанд // Мат. симп. "Проблема инфекции в интенсивной терапии. Использование современных аминогликозидов" М., 1998. С. 2-12.

76. Гигиенические требования к качеству и безопасности сырья и пищевыхпродуктов. Сан П и Н 2.3.2. 560-96. М., 1997. - 269 с.

77. Глик Б. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение / Б. Глик,

78. Дж. Пастернак. Пер с англ. - М.:Мир,2002. - 589 с.

79. Голиков С.Н. Общие механизмы токсического действия / С.Н. Голиков,

80. И.В. Саноцкий, Л.А. Тиунов. Л.: Медицина, 1986. - 280 с.

81. Головлёва Л.А. Разложение лигнина грибными культурами / Л.А. Головлёва, Х.Т. Ганбаров , Г.Н. Скрябин // Микробиол. 1982. - Т. 5.- Вып. 4 - С. 543-547.

82. Головлёва Л.А. Биосинтез лигниназы при твёрдофазной ферментации соломы грибами Panus tigrinus/ Л.А. Головлёва, Г.И. Квеситадзе, В.И. Элиса-швили и др.// ДАН СССР. 1987. - Т. 294.- № 4. - С. 992-995.

83. Головлёва Л.А. Биохимия разложения лигнина микроорганизмами / Л.А.

84. Головлёва, О.В. Мальцева // Проблемы биоконверсии растительного сырья.-М., 1986.

85. Головлёва Л.А. Лигнолитическая активность дереворазрушающих грибов /

86. Л.А. Головлёва, А.А. Леонтьевских // Микробиолог. 1998. - Т. 62. - № 6.- С. 581 - 587.

87. Гончарова Н.В. Полисахариды клеточной стенки базидиомицета Coriolushirsutus / Н.В. Гончарова // Прикл. биохим. и микробиол. 1996. - Т. 32. -Вып. 4. - С. 434-437.

88. Горленко М.В. Государственная премия Украинской ССР за цикл работ поглубинному культивированию высших базидиальных грибов // Миколог, и фитопатолог/ М.В. Горленко. 1991. - Т. 25. - Вып. 5. - С. 462-463.

89. Горшина Е.С. Технология получения биологичеси активной субстанции лекарственного гриба кориола опушённого / Е.С. Горшина, М.М. Скворцо-ва, В.В. Бирюков // Биотехнология. 2003. - № 2. - С. 45 - 53.

90. ГОСТ 18663 78. Витамин В\2 кормовой. Технические условия. - М.: Изд -во стандартов, 1978. - 12 с.

91. ГОСТ 171 81. Дрожжи хлебопекарные прессованные. Технические условия. М.: Изд - во стандартов, 1988. - 14 с.

92. ГОСТ 25999 83. Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения витаминов Bj и В2. -М.: Изд во стандартов, 1984. - 11 с.

93. ГОСТ 25999 83. Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения витамина С. М.: Изд - во стандартов, 1989. - 16 с.

94. ГОСТ 7047 55. Отбор проб, методы определения витаминов и испытаниякачества витаминных препаратов. М.: Изд - во стандартов, 1994. - 48 с.

95. ГОСТ 26927 86 - ГОСТ 26935 - 86. Сырьё и продукты пищевые: Методыопределения токсичных элементов. М.: Изд - во стандартов, 1986. - 86 с.

96. ГОСТ Р 50466 93. Корма, комбикорма, комбикормовое сырьё: Методыопределения содержания азота и сырого протеина. М.: Изд - во стандартов, 1993.-24 с.

97. Государственный доклад. Экологическая обстановка в Иркутской области в 1994 году. Иркутск, 1995. - 198 с.

98. Градусов Ю.Н. Усвояемость аминокислот / Ю.Н Градусов. М.: Колос,1979.-361с.

99. Гринберг А.А. Профилактика аугментином (амоксициллин /клавуланатом)после операционных осложнений у больных с острыми хирургическимизаболеваниями брюшной полости / А.А. Гринберг, С.Н. Гусятин // Антибиотики и химиотерапия. 2000. - Т. 45- № 3. - С. 1-7.

100. Турина JI.B. Динамика содержания белка, его фракционного состава и пула• свободных внутриклеточных аминокислот при выращивании Candida tropicalis ИБФМУ 303/ JI.B. Турина, А.Н. Шкидченко // Микробиол. журн. - 1983,-Т.45.-№1.-С. 28-35.

101. Гусарова JI.A. Очистка сточных вод гидролизно-дрожжевого производстваиммобилизованной полифенол-оксидазой/ JI.A. Гусарова, В.П. Гаврило-ва, Н.И. Шамолина // Биотехнология,- 1989. Т. 5. - № 5. с. 627-629.

102. Давыдкина Т.А. Культурально-морфологические особенности видов

103. Stereum Pers. ex S.F. Gray/ Т.А. Давыдкина // Миколог, и фитопатолог. -1973. Т. 7. - № 2.- С. 217-222.

104. Давыдкина Т.А. Стереумовые грибы Советского Союза/ Т.А. Давыдкина1. Л.: Наука, 1980.- 150 с.

105. Даниляк Н.И. Ферментные системы высших базидиомицетов / Н.И. Даниляк, В.Д. Семичаевский, Л.Г. Дудченко и др. Киев. - 1989. - 280 с.

106. Дворнина А.А. Базидиальные грибы в поверхностной и глубинной культуре/ А.А. Дворнина. Киев: Наукова думка, 1985. - 109 с.

107. Дезинфекционные средства: Справочник / Под ред. А.А. Монисова, М.Г.

108. Шандалы. Вып 1.-М.:Рарогъ, 1996.- 176 с.

109. Демина Н.С. Микроорганизмы, синтезирующие ферменты тромболитиче• ского действия / Н.С. Дёмина, С.В. Лысенко // Биол. науки. 1991. - № 9. -С. 163-182.

110. Денисова Н.П. Природа и биологическая роль протеиназ базидиальных грибов / Н.П. Денисова // Миколог, и фитопатолог. 1984. - Т. 18. - Вып. 2.-С. 116-121.

111. Денисова Н.П. Тромболитические ферменты базидиальных грибов/ Н.П.• Денисова, Н.В. Псурцева, А.А. Чаргоглян и др. // Мицелиальные грибы: физиология, биохимия, биотехнология: Тез. докл. Всесоюзн. конф., Пущи-но, 1983.-С. 137.

112. Денисова Н.П. Биосинтез протеиназ фибринолитического действия высшими базидиомицетами в глубинной культуре / Н.П. Денисова, И.Р. Семёнова, В.И. Сухаревич // Миколог, и фитопатолог. 1989. - Т. 23. - Вып. 4.-С. 378-381.

113. Дмитриева B.C. Микробиологический контроль активности микробиологических препаратов / B.C. Дмитриева, С.М. Семёнов. М.: Медицина, 1965.-364 с.

114. Дорогова В.Б. Атомно абсорбционный анализ микроэлементов в биосредах и метрологические основы контроля аналитических работ: Учебное пособие / В.Б. Дорогова, Л.Г. Лисецкая, О.М. Журба и др. Иркуьсе: Изд - во ГИУВа, 1999.-24 с.

115. Досон Р. Справочник биохимика / Р. Досон, Р. Эллиот, У. Эллиот и др.

116. Пер с англ. -М.: Мир, 1991,- 543 с.

117. Дроздова Т.Н., Белова Н.В. Ферментный спектр некоторых грибов семейства Polyporaceae / Т.Н. Дроздова, Н.В. Белова // Миколог, и фитопатолог,-1982.-Т. 18.-Вып. 1.- С. 33-36.

118. Дроздова Т.Н. Фитотоксическая активность базидиальных грибов.Н. Порядок Aphyllophorales /Т.Н. Дроздова, О.П. Низковская, А.В. Боровков и др.///Миколог, и фитопатолог. -1984. Т. 18. - №3. - С. 215-221.

119. Дудка Л.А. Высшие съедобные базидиомицеты в поверхностной и глубинной культуре / Л.А. Дудка. Киев: Наукова думка, 1983. - 210 с.

120. Духовский А.А. Профилактика факторных инфекционных болезней поросят с использованием иммуномодуляторов : Автореф дисс. канд. вет. наук. Новосибирск, 2001. - 21 с.

121. Дьяков Ю.Т. Использование метода электрофореза белков для исследования по хемотаксии и изменчивости грибов / Ю.Т. Дьяков // Итоги науки и техники: Ботаника. 1980. - Т. 4. - С. 106 -149.

122. Европейское руководство по клинической оценке противоинфекционныхлекарственных средств / Под ред. А.Г. Чухалина, JI.C. Страчунского. -. -Пер. с англ. Евр. об-во клин, микробиологии и инфекц. болезней. - № 19. - С. 12-39.

123. Егоров Н.С. Микробы антагонисты и биологические методы определения антибиотической активности / С.Н. Егоров. - М.: Высш. шк., 1965. - 211 с.

124. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках / С.Н. Егоров. 3-е изд., пе-рераб. и доп. - М.: Высш. шк. 1979. - 455 с.

125. Елинов Н.П. Основы биотехнологии / Н.П. Елинов. Спб.: Наука, 1995. -600 с.

126. Елинов Н.П. Химическая микробиология / Н.П. Елинов. М.: Высш. шк., 1989.-300 с.

127. Ермаков А.И. Методы биохимического исследования растений / А.И. Ермаков, В.А. Архимович, H.JI. Ярош и др. JI.: Агропромиздат. - 1987. -430 с.

128. Ермаченко JI.A. Атомно абсорбционный анализ в санитарно - гигиенических исследованиях (методическое пособие) / JI.A. Ермаченко. - М.: Чувашия, 1997.-207 с.

129. Ефименко О.М. О физиологически активных веществах гриба Poliporus betulinus (Bull.) Karst/ О.М. Ефименко. // Микробиолог. -1960 Т. 29. -Вып. 4. - С. 548-550.

130. Ефименко О.М. К вопросу о полипореновой кислоте А антибиотике изтрутового гриба Poliporus betulinus (Bull.) Karst. / О.М. Ефименко, Т.А. Мельникова, Р.Н. Зозуля и др. // Антибиотики. 1961. - № 3. - С. 215-220.

131. Жолдакова З.И. Место и значение опытов в токсикологических исследованиях / З.И. Жолдакова // Гигиена и санитария. 1985. - № 11. - С. 60-62.

132. Заздравных М.И. Закономерности распространения колибактериоза телят, его рациональная профилактика и терапия с учётом экологических особенностей региона: Автореф. дисс. канд. вет. наук. Новосибирск, 2004. -18 с.

133. Заугольников и др. // Общие вопросы токсикологии. М., 1967. - С. 46-49. 121. Захарова И.Я. Литические ферменты микроорганизмов / И.Я. Захарова,

134. И.Н. Павлова. Киев: Наукова думка, 1985. - 213 с. 122.3емсков Н.Н. Специфическая и неспецифическая иммунокоррекция / Н.Н.

135. Зудова Т. А. Влияние риботана и полифага на неспецифическую резистентность организма поросят / Т.А. Зудова, А.А. Зудов, A.M. Петров и др. // Фармакология и токсикология. 2000 . -№ 3 .- С. 50-54.

136. Иванова Н.Г. Проблема раздражающего действия промышленных химических веществ/ Г.Н. Иванова, В.И. Говорченко // Профилактическая токсикология. -М., 1984. Т. 1. - С. 152-164.

137. Иванов В.Н. Разделение дрожжевых клеток с помощью флотации/ В.Н.

138. Иванов, А.А. Пиндрус, Е.В. Стабникова // Прикл. биохим. и микробиол. -1987, Т. 23, №5.-С. 706-713.

139. Игнатьева JI.П. Гигиеническая оценка и разработка критериев опасности диоксинов в окружающей среде: Автореф. дисс.докт. биол. наук. Иркутск, 1997.-48 с.

140. Иммунологические методы исследований / Под ред. И.Лефковитса, Б. Перниса. Пер. с англ. - М.: Мир, 1988. - 530 с.

141. Имшинецкий Л.А. О фибринолитической активности некоторых штаммов Bacillus mesentericus / Л.А. Имшинецкий, И.Д. Касаткина, Г.В. Черкесова и др. // Микробиол. 1986. - Т. 55. - Вып. 2. - С. 217-221.

142. Кайдашев И.П. Геронтологические аспекты пептидной регуляции функций организма/ И.П. Кайдашев, Н.Н. Грицай, А.В. Катрушев // Мат. междунар. симп. С.-П., 1996. - С. 46-47, 138-139.

143. Какоулин Т.Е. Применение лекарственных растений для предупреждения и лечения заболеваний телят / Т.Е. Какоулин, Ю.А.Колунов: Методические рекомендации для работников животноводства. Иркутск, 1984. - 27 с.

144. Капич А.И. Биосинтетическая активность дереворазрушающих базидиомицетов при глубинном культивировании / А.И. Капич // Миколог, и фитопа-толог. 1990. - Т. 24. - Вып.5. - С. 377-384.

145. Карпуть И.М. Незаразные болезни молодняка / И.М. Карпуть. Минск: Урожай, 1989.-240 с.

146. Каталог культур базидиомицетов коллекции Ботанического института им.

147. В.Л. Комарова РАН / Сост. О.А. Сивочуб. СПб.: Наука, 1992. - 24с.

148. Кашкин П.Н. Определитель патогенных, токсикогенных и вредных для человека грибов / П.Н. Кашкин, М.К. Хохряков, А.П. Кашкин. М.: Медицина, 1975.-269 с.

149. Квасников Е.И. Дрожжи: биология, пути использования/ Е.И. Квасников,

150. И.Ф. Щёлокова. Киев: Наукова думка, 1991. - 522 с. МО.Квеситадзе Г.И. Введение в биотехнологию/ Г.И. Квеситадзе, А.М.Безбородов.- М.: Наука, 2002,- 284с.

151. Кейтс М. Техника липидологии / М. Кейтс. Пер. с англ. - М.:Мир, 1975.1. С. 156- 157.

152. Кислухина О.В. Специфичность препаратов литических ферментов на Bacillus subtilis / О.В. Кислухина, Т.А. Кузнецова, В.Е. Аксёновскаяя // Микробиол. пром-сть. 1979. - № 4. - С.2-5.

153. Кислухина О.В. Влияние регуляторов на автолиз бактерий / О.В. Кислухина, Т.А. Кузнецова, В.Е. Аксёновская // Микробиол. 1982. - Т. 51. - Вып. 1.-С. 85-89.

154. Клесов А.А. Ферментативный гидролиз целлюлозы / А.А. Клесов, M.JL Рабинович, А.П. Синицин и др. // Биоорг. химия. 1980. -Т. 6. - № 8.-С. 1225-1242.

155. Клиническая иммунология: Руководство для врачей / Под. ред. Е.И. Соколова. М.: Медицина, 1998 - 272 с.

156. Клиническое руководство по лабораторным тестам / Под ред. Н. У. Тица.

157. Пер.с англ. М.: Юнимед - пресс, 2003. - 942 с.

158. Клюев Н.А. Применение физико-химических методов в анализе эфирныхмасел / Н.А. Клюев, Н.С. Замучеенко, Евтушенко // Фармация. 1986. - Т. 35.- №2.-С. 76-81.

159. Кобрина Ю.П. Дезинфекция оборудования в дрожжевом производстве/

160. Ю.П. Кобрина, М.А. Козлова. М: ЦНИИТЭИпищепром, 1974. - Вып. 5. -С. 13-20.

161. Коптев В. Экспериментальное изучение эртеросорбента ЭСТ- 1 при терапии и профилактике колибактериоза телят: Автореф. дисс. канд. вет. наук. Новосибирск, 2001. - 20 с.

162. Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология /

163. A.И. Коротяев, С.А. Бабичев. Учебник СПб: Специальная литература, 1998.-592 с.

164. Корте Ф. Экологическая химия / Ф. Корте, М. Бахадир, В. Клайн и др.; Под ред. Ф. Корте. Пер. нем. -М.: Мир, 1997. - С. 358-381.

165. Костенко Т.С. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии / Т.С. Костенко, Е.И. Скаршевская, С.С. Гительсон. М.: Агропромиздат, 1989.-272 с.

166. Костина A.M. Хитин мицелиальных грибов рода Penicillium / A.M. Костина,

167. B.Г. Бабицкая, Л.Г. Лобанок // Прикл. биохим. и микробиол.-1978.- Т. 14. -Вып. 4. С. 586-593.

168. Котов В.Б. Состояние и тенденции развития биотехнологии за рубежом/

169. В.Б. Котов, Т.А. Беляева // Итоги науки и техники: Биотехнология. 1991. -Т. 30.-С. 3-84.

170. Кочеткова Г.А. Способ получения ФГА анти В из высших базидиальных грибов / Г.А. Кочеткова, В.П. Гаврилова, Л.Н. Фёдорова // Тр. 1-го Всерос. съезда гематологов и трансфузиологов. - Л., 1981. - 4.2. - С. 57-58.

171. Красильников А.П. Клиническое значение и методические вопросы определения чувствительности бактерий к антисептикам/ А.П. Красильников, А.А. Адарченко// Антибиотики и химиотерапия. 1992. - Т. 37. - № 9. - С. 39-44.

172. Красильников А.П. Справочник по антисептике / А.П. Красильников. Мн.:1. Выш. шк, 1995.-367 с.

173. Красовский Г.Н. Сравнительная чувствительность человека и лабораторных животных к действию токсических веществ (соотношение смертельных доз токсических веществ для человека и животных) / Г.Н. Красовский //

174. Гигиеническая оценка химических факторов внешней среды. М., 1966. -С. 52-55.

175. Кудинова Г.П. О канцерогенном действии некоторых грибов / Г.П. Кудинова // Миколог, и фитопатолог. 1984. - Т. 18. - Вып. 1. - С. 76-80.

176. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / Меньшиков

177. В.В., Делеторская Л.Н., Золотницкая Р.П. и др. М.: Медицина, 1987. -368 с.

178. Лабораторные исследования в ветеринарии. Бактериальные инфекции:

179. Справочник /Сост. Б.И. Антонов, В.В. Борисова, П.М. Волкова. М.: Аг-ропромиздат, 1986. - 352 с.

180. Ладыгина Е.Я. Химический анализ лекарственных растений: Учебн. пособие для фармацевтических вузов / Е.Я. Ладыгина, Л.Н. Сафронович, В.Э. Отряшенкова и др.; Под ред. Н.И. Гринкевич, Л.Н. Сафронович. М.: Высш школа, 1983. - 176 с.

181. Лактионов О.П. Активация лимфоцитов плазмидной ДНК / О.П. Лактионов

182. Мол. биолог. 1997. - Т. 3. - № 3. - С. 156-157.

183. Лекарственные препараты в России: Справочник VIDAL 1999. М.: АстраФармСервис.- 1520 с.

184. Ленинжер А. Основы биохимии/ А. Ленинжер. Пер. с англ. - Т.1. - М.:1. Мир, 1985 -465 с.

185. Ленинжер А. Основы биохимии/ А. Ленинжер. Пер. с англ. - Т.2. - М.:1. Мир, 1985-731 с.

186. Леонтьевский А.А. Индукция лигнолитических ферментов грибами белойгнили Panus tigrinus 8/18 / А.А. Леонтьевский, Н.М. Мясоедова, Э.И. Ко-ломиец и др. //Биохимия. -19. Т. 56.- Вып. 9. - С. 1665-1675.

187. Лобанок А.Г. Микробный синтез на основе целлюлозы: белок и другие ценные продукты / А.Г. Лобанок, В.Г. Бабицкая, Ж.Н. Богдановская. Минск: Наука и техника, 1988. - 261с.

188. Лойт А.О. Профилактическая токсикология: Руководство для токсикологов- экспериментаторов / А.О. Лойт, М.Ф. Савченков. Иркутск: Изд-во Ир-кут. ун-та, 1996.-288 с.

189. Майборода А.А. Способ моделирования воспаления/А.А. Майборода, И.Ж. Семинский, К.Л. Клейн, А. Гурбадам // Воет Сиб. журн. инф. патол. - № 1.- 1995. -С.20-24.

190. Майструк В.Г. Принципы и методы гигиенической оценки новых белковых продуктов / В.Г. Майструк, Г.И. Соломко, А.Г. Соколова // Вопр. питания.- 1984.-№2.-С. 3-7.

191. Мальцев П.М. Технология бродильных производств / П.М. Мальцев. -2-еизд., перераб и доп. М.: Пищ. пром - сть, 1980. - 560 с.

192. Мамаева Е.М. Медико-биологические проблемы использования в питаниичеловека мицелия грибов / Е.М. Мамаева, Е.М. Высоцкий // Вопр. питания.- 1988.-№2.-С. 8-15.

193. Мамедьяров М.А. Ферментативный гидролиз биолигнифицированных обрезков виноградной лозы / М.А. Мамедьяров, Ж.М. Мамедова, Х.Г. Ганба-ров и др. // Прикл. биохим. и микробиол.-1989.-Т. 25. Вып. З.-С. 385-389.

194. Мартынова Е.Я. Отдаленные результаты лечения осажденным препаратомчаги и их физиологические активные соединения / Е.Я. Мартынова. -Л. 1973, -С. 91-94.

195. Маслова Р.А. О белках рода Pleurotus / Р.А. Маслова // Производство высших съедобных грибов в СССР. Киев: Наукова думка, 1987. - С. 84-86.

196. Маслова Р.А. Свободные и связанные аминокислоты некоторых афиллофоровых грибов / Р.А. Маслова // Миколог, и фитопатолог. 1978. - Т. 12. -Вып. 4. - С. 292-295.

197. Машковский М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. Харьков: Тарсинг, 1997.-С. 354-357.

198. Медико-биологические исследования углеводородных дрожжей (1964-1970г.г.) / Под ред. А.А. Покровского. М.: Наука, 1972. - 468 с.

199. Мелик-Хачатрян Дж.Г. Антагонистическая активность Oudimansiella radicata (Reth. ex. Fr.) Sing, в отношении микофилов / Дж. Г. Мелик-Хачатрян, Б.Г.Вартапетян // Миколог, и фитопатолог. 1977. - Т.П. - Вып. 2.- С. 166-167.

200. Мелик-Хачатрян Дж. Г. Микрофлора Армянской ССР: Агариковые (шляпочные грибы)/ Дж. Г. Мелик-Хачатрян. Ереван: Изд-во Ерев. ун-та. - Т. 5.-543 с.

201. Мелик-Хачатрян Дж. Г. Шляпочные грибы Армянской ССР (гастеромицеты и агариковые грибы)/ Дж. Г. Мелик-Хачатрян: Автореф. дисс. докт. биол. наук. Ереван. - 1971. - 58 с.

202. Методические рекомендации по изучению общетоксического действияфармакологических средств. // Вед. Фарм. Ком та. - 1998. - № 1. - С. 27 -33.

203. Методические рекомендации по доклиническому изучению репродуктивной токсичности фармакологических средств. // Вед. Фарм. Ком та. -1998. -№ 1.-С. 13-20.

204. Методические рекомендации по исследованию канцерогенных и фармакологических средств. // Вед. Фарм. Ком та. - 1998. - № 1. - С. 27 -33.

205. Методические указания. МУ 1.1.037 95. Биотестирование продукции из полимерных и других материалов. - М.,1995: Госсанэпиднадзор России. -12 с.

206. Методы определения токсичности и опасности химических веществ (токсикометрия) / Под ред. проф. И.А. Саноцкого.- М.: Медицина, 1970. 343 с.

207. Методы экспериментальной химиотерапии / Под ред. Г.Н. Першина. М.:1. Медицина, 1971. 539 с.

208. Микробиологическая диагностика дисбактериоза: Методические рекомендации. Киев, 1986. - 28 с.

209. Мир растений. Грибы и слизевики. / Под ред. A.JI. Тахтаджяна. Т.З. - Изде 2-е., перераб.-М.: Просвещение, 1991.- 479 с.

210. Монисов А.А. Проблемы безопасности пищевых продуктов в России/ А.А. Монисов, В.А. Тутельян, С.А. Хотимченко и др. // Вопр. питания. -1994. -№ 3. -С.33-39.

211. Мосин В.В. Новое в лечение незаразных болезней сельскохохяй-ственных животных / В.В. Мосин. М.: Россельхозиздат, 1975. - С. 7-9.

212. Морозова Е.С. Основные достижения и направления селекции продуцентовцеллюлаз в СССР и за рубежом / Е.С. Морозова // Итоги науки и техники ВИНИТИ: Биотехнология. 1988. - Т. 10. - С. 6-71.

213. Мосолов В.В. Протеолитические ферменты / В.В. Мосолов. М.: Наука,1971.

214. Муниципальные и промышленные отходы: способы обезвреживания и вторичной переработки: Аналитический обзор / Под ред. B.C. Кобрина. Новосибирск, 1995.-С. 68-75.

215. Мухин В.А. Роль базидиальных дереворазрушающих грибов в лесных биогеоценозах/ В.А. Мухин // Лесоведение. 1981. - № 1. - С. 46-53.

216. Мюллер В. Микология / В. Мюллер, В. Лёфлер. Пер. с англ.- М.: Мир,1995.-343 с.

217. Набер Г. Оптимальная терапия инфекций мочевыводящих путей / Г. Набер

218. Клин, микробиол. и антимикробная химиотерапия 1999. - Т. 1.- № 1. -С. 23-29.

219. Навашин С.М. Эволюция концепций о механизме взаимодействия антибиотиков с микробной клеткой / С.М. Навашин, Ю.О. Сазыкин // Антибиотики и химиотерапия. 1989. - Т.34. - №5. - С. 323-332.

220. Низковская О.П. Антибиотические свойства высших базидиальных грибов/

221. О.П. Низовская // Биосинтетическая деятельность высших грибов. JL: Наука, 1969.- С. 60-100.

222. Низковская О.П. Противоопухолевые свойства высших базидиомицетов/

223. О.П. Низовская // Миколог, и фитопатолог. 1983. - Т. 17. - Вып. 3. - С. 243-247.

224. Низковская О.П. Антагонистические свойства базидиальных грибов / О.П.

225. Низовская, Н.М. Милова // Микробиол. 1963. - Т. 32. - Вып. 5. - С. 771777.

226. Низковская О.П. Протеолитическая активность базидиомицетов из порядка

227. Aphyllophorales. 1. Молокосвёртывающая активность / О.П. Низовская, JI.H. Федорова // Миколог, и фитопатолог. 1980. - Т. 14. - Вып. 1. - С. 36-39.

228. Никитин В.М. Химия древесины и целлюлозы / В.М. Никитин, А.В. Оболенская, В.П. Шеголев. М.: Лесн. промышленность, 1978. - 368с.

229. Николаева Л.А. Диоксинсодержащие промышленные отходы и пестициды- источники загрязнения окружающей среды / Л.А. Николаева: Автореф. дисс. канд. биол. наук. Иркутск, 2002. - 23 с.

230. Новаковская С.С. Призводство хлебопекурных дрожжей/ С.С. Новаковская,

231. Ю.И. Шишацкий. 2-е изд., перераб. и доп.: Справочник. - М.: Пищ. пром-сть, 1990.-374 с.

232. Олешко B.C. Углеводный состав некоторых мицелиальных грибов/

233. В.С.Олешко, В.Г. Бабицкая, В.В. Щерба // Миколог, и фитопатолог.1994.-Т. 24.-Вып. 5.-С. 430-434.

234. Олиферук Н.С. Оценка фагоцитарной и бактерицидной активности нейтрофилов, макрофагов и незрелыз дендритных клеток / Н.С. Олиферук, А.Н. Ильинская, Б.В. Пинегин// Иммунология. 2005. - № 1. - С. 10 - 12.

235. Оноприенко Е.Н. Характер структурных изменений внутренних органовживотных под влиянием грибного порошка / Е.Н. Оноприенко, М.П. Гу-лич, Н.Я. Яцковская // Вопр. питания. 1991. - № 5. - С. 55 - 60.

236. Определитель бактерий Берджи / Под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита,

237. Дж. Стейнли, С. Уилльямса. В2-хт. -Т.1.- Пер. с англ. - М.: Мир. -1997-432 с.

238. Определитель бактерий Берджи / Под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита,

239. Дж. Стейнли, С. Уилльямса В 2 - х т. - Т.2. - Пер. с англ. - М.:Мир. -1997- 368 с.

240. Ордман Р.А. Апробация энроксила при желудочно-кишечных заболеванияхтелят и поросят./ Р.А. Ордман, Г.Г. Михин, А.Э.Цибарт // Ветеринария,1995.-№3.-С. 9.

241. Осипенко В.И. Диспепсия телят./ В.И. Осипенко // Сб. науч. тр./ Незаразныеболезни телят. Харьков. 1988.-С. 19-25.

242. Палагина Н.К. Технологические расчёты в дрожжевом производстве/ Н.К. Палагина. М.: Пищ. пром -сть, 1978. - 143 с.

243. Пащенков М. Основные свойства дендритных клеток / М. Пащенков, Б.Пинегин //Иммунология. 2001. - № 4. - С.7 - 16.

244. Петрова И.С. Протеолитические ферменты актиномицетов / И.С. Петрова.-М.: Наука.-1974.

245. Петрянкин Ф.П. Использование БАВ при выращивании молодняка/ Ф.П.

246. Петрякина, JI.B. Пыркина, И.М. Крылова // Ветеринария. 1994. - № 4. - С. 13-15.

247. Платонова Е.Г. Высшие грибы как источник провитамина Т>2 / Е.Г. Платонова, А.Н. Шиврина. В сб.: Кормовые белки и физиологически активные вещества для животноводства. М. - JL: Наука, 1965. - С. 73-79.

248. Платонова Е.Г. Характеристика грибов из порядков Aphyllophorales и

249. Agaricalis по содержанию в них стероидных соединений / Е.Г. Платонова. В сб.: Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. - М. -Л.: Наука, 1966.-С. 42-45.

250. Плевако Е.А. Технология дрожжей / Е.А. Плевако. М.: Пищ. пром - сть, 1970.-298 с.

251. Поздняковский В.М. Гигиенические основы питания и экспертизы продовольственных товаров / В.М. Поздняковский. Новосибирск : Изд - во НГУ, 1996.-432 с.

252. Поляк М.С. Основы антибиотикотерапии/ М.С. Поляк. Санкт - Петербург:1. НИЦФ, 2003.-56 с.

253. Поляк М.С. Питательные среды для медицинской микробиологии/ М.С.

254. Поляк, В.И. Сухаревич, М.Э. Сухаревич. Санкт - Петербург: НИЦФ, 2003.- 148 с.

255. Попова В.И. Влияние предварительной обработки кормовых дрожжей навыход щелочной белковой фракции / В.И. Попова, О.И. Игнатьева, А.Н. Тюманок // Биотехнология. 1989. - Т. 5,- № 2. - С. 194-198.

256. Поправко С.А. Сравнительное изучение химического состава и биологической активности прополиса и его источников/ С.А. Поправко, В.И. Тихомирова, Н.С. Вульфсон // Ценный продукт пчеловодства прополис. -Бухарест, 1981.-С. 35-37.

257. Портняная Н.И. Биохимические исследования в токсикологическом эксперименте/ Н.И. Портняная, Б.Г. Осипенко, П.А. Мосдыканова и др.; Подред. М.Ф. Савченкова, В.М. Прусакова. Иркутск: Изд-во ИГУ, 1990. -216 с.

258. Практикум по микробиологии / Под ред. Н.С. Егорова. М.: Изд - во МГУ, 1976.-306 с.

259. Практические работы по химии древесины и целлюлазы/ Под ред. В.М. Никитина. М.: Лесн. пром-сть, 1965 - 411 с.

260. Прийма О.Б. Неферментные катионные белки лейкоцитов периферическойкрови / О.Б. Прийма // Клин, медицина. 1997. - № 2. - С. 4-5.

261. Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. М.: Л.: Наука.1965.- 135 с.

262. Профилактика и лечение желудочно кишечных болезней новорождённыхтелят: Методические рекомендации / Ц. Лудыпов, A.M. Семенченко, Ю.А. Тарнуев и др. Иркутск, 1999. - 45 с.

263. Профилактика и лечение молодняка сельскохозяйственных животных /

264. Под ред. А.А. Полякова. -М.: Колос , 1074. 336 с.

265. Профилактика инфекционных болезней молодняка/М.А. Шесточенко, Л.А.

266. Таранова, В.И. Косенко и др. М.: Колос, 1983. - 207 с.

267. Псурцева Н.В. Биотехнологические возможности использования коллекционных культур базидиомицетов / Н.В. Псурцева, Н.В. Белова, И.А. Алёхина // Биотехнология. 1994. - № 7. - С. 35-39.

268. Пыстина К.А. Особенности строения оомицетов и их таксономия / К.А. Пыстина // Миколог, и фитопатолог. 1988. - Т.22.- Вып.4. - С. 314-319.

269. Рабинович М.И. Фармакологическая характеристика энтеросорбента полисорб ВП / М.И. Рабинович, P.P. Даминов // Ветеринария, 2000. № 3. -С. 53-57.

270. Раптунович Е.С. Искусственное выращивание съедобных грибов/ Е.С. Рап-тунович, Н.И. Федоров. Минск: Высш. шк., 1994. - 206 с.

271. Растительные лекарственные средства / Под ред. Н.П. Максютиной. Киев: Здоровя, 1985.-280 с.

272. Рачинский В.В. Исследование кинетики белковых фракций дрожжей Candida tropicalis в онтогенезе / В.В. Рачинский, Е.Г. Давыдова, О.Б. Кор-чак // Прикл. биохим. и микробиол. -1971. Т. 7.- Вып. 6. - С. 621-624.

273. Решетников С.В. Артроконидиогенез анаморфы агарикального гриба Flammulina velotipes (Fr.) Karst/ С.В. Решетников, И.А. Дудка // Миколог, и фитопатолог. -1983. Т. 17. - Вып. 2. - С. 107-111.

274. Рипачек В. Биология дереворазрушающих грибов / В. Рипачек. М.: Лесн. пром., 1967.-274 с.

275. Роберте Г.Р. Безвредность пищевых продуктов/ Г.Р. Роберте, Э.Х. Март, В.

276. Дж. Сталтс и др.; Под ред. Г.Р. Робертса. Пер. с англ. - М.: Агромпром-издат, 1986.-287 с.

277. Рокицкий М.Р. Хирургический сепсис у детей: клинико-бактериологические аспекты / М.Р. Рокицкий, П.Н. Гребнев, А.А. Ахунзя-нов и др. // Клин, антимикробная химиотерапия. 2000. - Т. 2- № 1. - С.21-24.

278. Ротхаупт М. Пищевые продукты/ М. Ротхаупт. Часть I. Введение и способы анализа. Пер. с нем. - Вальдброни: Хыолетт - Паккард, 1994. - 146 с.

279. Руководство по методике и технике проведения микробиологических работ на дрожжевых заводах. Л.: 1984. - 68 с.

280. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов / Под ред. И.М. Скурихина, В.А. Тутельяна. М.: Браедес, Медицина, 1998.-243 с.

281. Савченков М.Ф. Медико экологические проблемы на территории Сибири/

282. М.Ф. Савченков, Е.П. Лемешевская // Сиб. мед. журн. 1995. - № 2. - С. 34-37.

283. СанПин 2.1.4.559-96. Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества. М.: Информационно - издательский центр Госкомстата России, 1996.

284. Сассон А. Биотехнология: свершения и надежды/ А. Сассон. Пер. с англ.1. М.:Мир,1987.-411 с.

285. Саутин С.Н. Исследование и оптимизация химико технологических процессов с помощью активного эксперимента / С.Н. Саутин, А.Е. Пунин. -Л.: Изд - им. ЛТИ им. Ленсовета, 1982 - 61 с.

286. Семинский И.Ж. Структура и закономерности развития разных форм экспериментального воспаления: Автореф. дисс. докт. мед. наук. -Иркутск, 1999.-44 с.

287. Семихатова Н.М. Микробиология дрожжевого производства / Н.М. Семихатова, М.Ф. Малыгина. М.: Пищ. Пром - сть., 1970. - 150 с.

288. Семихатова Н.М. Хлебопекарные дрожжи / Н.М. Семихатова. М.: Пищ.пром-сть, 1980.- 198 с.

289. Семичаевский В.Д. Высшие грибы продуценты целлюлазных комплексов / В.Д. Семичаевский // Итоги науки и техники: Биотехнология. - 1988. -Т.10.-С. 97-132.

290. Семушкина Т.Н. Микробиологический контроль гидролизно дрожжевогопроизводства / Т.Н. Семушкина, Н.И. Монахова, Л.А.Гусарова М: Экология, 1991.-206 с.

291. Сергеева М.Н. Грибы/ М.Н. Сергеева. М.: Культура и традиции, 2000.264 с.

292. Сивочуб О.А. Дереворазрушающие грибы продуценты кормового белка/

293. О.А. Сивочуб // Мицелиальные грибы (физиология, биохимия, биотехнология): Тез. конф. Пущино, 1983. - С. 165-166.

294. Сепетляев Д. Статистические методы в научных медицинских исследованиях/ Д. Сепетляев. М.: Медицина, 1968. - 275с.

295. Сивочуб О.А. Каталог культур базидиомицетов коллекции Ботанического института им. B.JI. Комарова Российской Академии Наук/ О.А. Сивочуб -СПб.: Наука, 1992.-25 с.

296. Сидоренко С.В. Теоретические и практические аспекты проблемы антибиотикорезистентности / С.В. Сидоренко // Антибиотики и химиотерапия. -1992.-Т. 37-№39.-С. 44.

297. Синицын А.П. Биоконверсия лигноцеллюлозных материалов / А.П. Сини-цын, А.В. Гусаков, В.М. Черноглазов. М.: Изд-во МГУ, 1995. - 220 с.

298. Синицын А.П. Биотехнология ферментативного превращения целлюлозы /

299. А.П. Синицын, А.А. Клесов, А.В. Рабинович и др. // Итоги науки и техники: Биотехнология. 1988. - Т. 12. - 156 с.

300. Синицын А.П. Методы изучения и свойства целлюлолитических ферментов/ А.П. Синицын, В.М. Черноглазов, А.В. Гусаков // Итоги науки и техники: Биотехнология. 1993. - Т. 25. - 152 с.

301. Скала JI.3. Практические аспекты современной клинической микробиологии/ JI.3. Скала, С.В. Сидоренко, А.Г. Нехорошева и др. М., 1997. - 70 с.

302. Соколов В.Д. Иммуностимуляторы в ветеринарии / В.Д. Соколов, Н.А. Андреева, А.В. Соколов // Ветеринария.- 1992.- № 7 8.- С. 58-60.

303. Соколов М.Ю. Эффективность препарата арговит при гастроэнтеритах, вызываемых патогенными энтеробактериями, у новорожденных телят: Авто-реф дисс. .канд вет наук. Новосибирск, 2004. - 21 с.

304. Соломко Э.Ф. Содержание липидов и состав жирных кислот высшего съедобного гриба вешенки обыкновенной Pleurotus ostreatus (Fr.) Kummer. / Э.Ф. Соломко, Л.П. Панченко, Р.К. Сильченкова // Прикл. биохим. и мик-робиол.-1984.-Т. 20. - Вып. 2. - С. 273-279.

305. Сорокин А.В. Пирогены/ А.В. Сорокин. Л.: Медицина, 1965. - 176с.

306. Сорокин А.Г. Современное состояние исследования в области ферментовмедицинского назначения и их производство / А.Г. Сорокин // Иммобилизованные ферменты в медицине и медицинской промышленности. Л., 1982.-С. 5-8.

307. Спирин В.А. Афиллофоровые грибы Нижегородской области:видовой состав и особенности экологии: Дисс. канд. биол. наук. СПб., 2003. - 275 с.

308. Справочник по микробиологии и вирусологическим методам исследования

309. Под ред. М. О. Биргера. М.: Медицина, 1982. - 460 с.

310. Стахеев И.В. Основы биотехнологии получения грибных белков из отходовпереработки растительного сырья: Автореф. дисс. докт. техн. наук. Л., 1988.-38 с.

311. Степанова Н.Т. Основы экологии дереворазрушающих грибов / Н.Т. Степанова, В.А. Мухин. -М.: Наука, 1979. 100 с.

312. Стецюк О.У. Ципрофлоксацин и норфлоксацин определение чувствительности диско диффузионным методом / О.У.Стецюк, Г.К.Решедько, Е.Л.Рябикова: Методические рекомендации // Клин, микробиол. и антимикробная терапия. - 1999. - Т. 1. - № 1. - С. 92 - 100.

313. Страчунский Л.М. Антибактериальная терапия / Л.М. Страчунский, Ю.Б.

314. Белоусова, С.Н. Козлова. Практическое руководство. М., 2000. - 250 с.

315. Страчунский Л.С. Антибактериальная терапия синуситов у детей/ Л.С.

316. Страчунский, М.Р.Богомильский // Детский доктор. 2000. - № 1. - С. 32.

317. Страчунский Л.С., Богомильский М.Р. Антибактериальная терапия острого среднего отита у детей/ Л.С. Страчунский // Детский доктор. 2000. - № 2. -С. 32.

318. Страчунский Л.С. Антибактериальная терапия синуситов у детей/ Л.С.

319. Страчунский, М.Р. Богомильский// Детский доктор. 2000. - № 1. - С. 32.

320. Страчунский Л.С. Вступительное слово / Л.С. Страчунский // Клин, антимикробная химиотерапия. 2000. - Т. 2.- № 1. - С. 3.

321. Суворов П.А. Использование культуральных признаков в диагностике исистематике дереворазрушающих грибов/ П.А. Суворов // Мат. 1-й конф. по споровым растениям. Киев: Наукова думка, 1971. - С. 234-236.

322. Сур С.В. Методы выделения, идентификации и определения терпеновыхсоединений (обзор) / С.В. Сур // Хим.-фарм. журн. 1990. - № 5. - С. 42-47.

323. Сухаревич В.И. Влияние синтетических углеводов на биосинтез лизина/ В.И. Сухаревич, О.В. Кислухина, В.А. Тутурина и др. // Биотехнология. -1992.-№2.-С. 30-32.

324. Татарчук О.П. Тилозин тартрат: рациональная антибиотикотерапия / О.П. Татарчук // Ветеринария. 2004. - № 4. - С. 11-13.

325. Терешина В. М. Получение из мицелиальных грибов полисахаридных комплексов и определение степени их деацетиллирования / В.М. Терешина, А.С. Меморская //Микробиология, 1997.-Т. 67,- № 1.- С. 27-31.

326. Типовой технологический регламент производства хлебопекарных дрожжей. М: Лёгкая и пищ. пром - сть, 1983 - С. 245 - 246.

327. Ткаченко В.В. Фракционный состав дрожжевых белков / В.В. Ткаченко, А.А. Махов, А.В. Ткаченко // Изв. АН СССР: Серия биологическая. 1969. - № 2. - С. 285-290.

328. Токсикометрия химических веществ, загрязнявших окружающую среду /

329. Под ред. А.А. Каспарова, Н.А. Саноцкого. М., 1986. - 426 с.

330. Ткаченко В.В. Влияние условий культивирования на фракционный составбелков микроорганизмов / В.В. Ткаченко, С.С. Рылкин, А.Н. Шкидченко и др.//Микробиол. -1971.-Т.40.-Вып.4,-С. 651-655.

331. Топурия Г.М. Иммунный статус телят в условиях экологического неблагополучия / Г.М. Топурия, Л.Ю. Топурия // Вестн. РАСХН. 2004. - № 4. -С. 33-35.

332. Трахтенберг И. М. Показатели нормы у лабораторных животных в токсикологическом эксперименте (Современные представления и методические подходы. Основные параметры и константы) / И.М. Трахтенберг и др. -М., 1978.- 176 с.

333. Тутельян В.А. Микотоксины (медицинские и микробиологические аспекты) /В.А. Тутельян, Л.В. Кравченко.-М.: Медицина, 1985.-319 с.

334. Тутельян В.А. Новые данные о метаболизме и механизме действия мико-токсинов / В.А. Тутельян, Л.В. Кравченко // Вестн. АМН СССР. 1981. -№1. - С. 88-95.

335. Уайт Д. Технология дрожжей / Д. Уайт. Пер с англ. - М.: Пищепромиздат,1957.-392 с.

336. Уманский Ю.А. Теоретические основы клинической иммунологии опухолей/ Ю.А. Уманский // Вопр. онкологии,- 1975.- Т. 21 № 9. - С. 106-115.

337. Управление качеством лабораторных клинических исследований / Под ред. В.В. Меньшикова. М.: Лабпресс, 2000. - 152 с.

338. Утешев Б.С. Об оценке иммунотоксичности при доклиническом изучениибиологически активных соединений/ Б.С. Утешев, Е.В. Арзамасцев // Эксп. и клин, фармаколог. 1996 - Т. 59. - № 3. - С. 3-8.

339. Фалина Н.Н. Препараты фибринолитического действия из зимнего опёнка

340. Flammulina velotipes / Н.Н. Фалина, Э.Н. Морозова, Н.П. Денисова и др. // Прикл. биохим. и микробиол.-1978,- Вып. 15. С. 699-701.

341. Федеральное руководство для врачей по использованию лекарственныхсредств (формулярная система). Вып.1. Раздел 5. Противомикробные вещества. 2000. - 5 с.

342. Фёдоров JI.A. Диоксины, как химическая опасность: ретроспективы и перспективы / JT.A. Федоров. М.: Наука, 1993. - 266 с.

343. Федорова JI.H. Биосинтез молокосвёртывающего фермента базидиальнымгрибом Russula decolorans 0456 / JI.H. Федорова, П.Н. Дроздова, В.П. Гав-рилова // Миколог, и фитопатолог. -1981. Т. 15. - Вып. 6.- С. 496-500.

344. Федорова JI.H. Протеазы «сычужного» действия в культурах высших грибов / JI.H. Федорова, А.Н. Шиврина // Миколог, и фитопатолог. 1974. - Т. 8.-Вып. 1.-С. 22-25.

345. Феофилова Е.П. Клеточная стенка бактерий / Е.П.Феофилова. М.: Наука,1983.-248 с.

346. Феофилова Е.П. Полиаминосахариды мицелиальных грибов: новые технологии и перспективы практического использования (обзор) / Е.П. Феофилова, Д.В. Немцов, В.М. Терёшина и др. // Прикл. биохим. и микробиол. -1996. Т. 32. - № 5. - С. 483-492.

347. Феофилова Е.П. Современные направления в изучении биологически активных грибов (обзор) / Е.П. Феофилова // Прикл. биохим. и микробиол. -1998. Т. 34. - Вып. 6. - С. 597-608.

348. Феофилова Е.П. Хитин мицелиальных грибов: методы выделения, идентификации и свойства/ Е.П. Феофилова, В.М. Терёшина, А.С. Меморская // Микробиол. 1995. - Т. 64. - № 1. - С.27-31.

349. Филипова Т.В. Питательная ценность биомассы дрожжей и белка по химическим показателям / Т.В. Филипова, Ж.П. Тюрина // Изв. АН МССР: Сер. биол. и хим. наук. 1982. - № 2. - С. 38-39.

350. Фирсова С.П. Медико демографическая ситуация в Иркутской области / С.П. Фирсова, Н.М. Комова // Мат юб. конф. «Современные роблемы экологии, природопользования и ресурсосбережения Прибайкалья». - Иркутск, 1998.-С. 144- 145.

351. Фрадкин В.JI. Диагностика аллергии реакциями нейтрофилов крови/ В.Л.

352. Фрадкин. -М.: Медицина, 1986. 176 с.

353. Химический состав пищевых продуктов: Кн. 1.Справочные таблицы содержания основных пищевых веществ и энергетической ценности пищевых продуктов / Под ред. И.М. Скурихина, В.М. Волгарева.- 2 -е изд., перераб. и доп. М.: Агропромиздат, 1987. - 224 с.

354. Целлюлазы микроорганизмов / Под ред. чл. корр. АН СССР В.Л. Кретови-ча.-М: Наука,-1981.-213 с.

355. Цион Р.А. Болезни молодняка сельскохозяйственных животных / Р.А. Ци-он, В.М. Львов. М., Л., 1963: Изд - во с/х лит - ры и плакатов. - 296 с.

356. Чистовский О. Грибы целители / О. Чистовский. - СПб: Питер Паблишинг, 1997.-256 с.

357. Чубук Н.Ю. Мониторинг загрязнения продовольственного сырья и продуктов питания / Н.Ю. Чубук, В.А. Чхенкели, A.M. Быков // Тез. докл. научно- практ. конф. «Итоги, проблемы, перспективы», Иркутск, 1997. С. 102 -103.

358. Чхенкели В.А. Антимикробное действие дереворазрушающего гриба Coriolus pubescens (Shum., Fr.) Quel. / В.А. Чхенкели, Т.И. Никифорова, Р.Г. Скворцова // Микол. и фитопатол. 1998.- Т. 32 - Вып. 1 . - С. 69 - 72.

359. Чхенкели В.А. Биологически активные вещества Coriolus pubescens

360. Shum.:Fr.) Quel, и их использование в медицине, ветеринарии, экологии и пищевой промышленности: Монография / В.А. Чхенкели. Рек. к печати Уч. Советом ГНУ ИЭВСиДВ (прот . №4 от 23.09.05). - Новосибирск: ООО «Юпитер», 2006. - 259 с.

361. Чхенкели В.А. Использование современных методов биотехнологии в решении медико экологических проблем / В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. - 1998.- № 2(8).- С. 171 - 174.

362. Чхенкели В.А. К вопросу о биологически активных веществах деревораз-рушающих грибов / В.А. Чхенкели // Мат. междунар. совещ. «Физиолого- биохимические аспекты изучения лекарственных растений». Новосибирск, 1998.-С. 70-71.

363. Чхенкели В.А. К вопросу снижения бактериальной обсеменённости производства хлебопекарных дрожжей/ В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели, А.А. Мо-сквитина// Мат. 2-ой межрег. научн. конф. «Человек и окружающая среда»». Рязань, 1998. - С. 245.

364. Чхенкели В.А. К оценке безопасности использования продуктов биоконверсии лигноцеллюлозных отходов базидиомицетами / В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели // Тез. докл. IV Российско Японского междунар. симпозиума, Иркутск, 1996.-С. 347.

365. Чхенкели В.А. К проблеме снижения бактериальной обсеменённости хлебопекарных дрожжей и продуктов брожения / В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели, B.JI. Денисов // Тез. докл. научно практ конф. «Итоги, проблемы, перспективы», Иркутск, 1997. - С. 104 - 105.

366. Чхенкели В.А. Медико биологические аспекты исследования кормовыхпродуктов, полученных на основе биоконверсии лигноцеллюлозных отходов базидиомицетами/ В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели П Сиб. мед. журн.-1995.-№3.- С. 8-13.

367. Чхенкели В.А. Методика выполнения измерений массовой доли йода в пробах напитков и кондитерских изделий спектрофотометрическим методом / В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели Св - во №04.03.107/2000. - Екатеринбург, 2000. - 25 с.

368. Чхенкели В.А. Методика «Молоко и молочные продукты. Спектрофото-метрический метод определения массовой доли йода» / В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели Св - во № Т45 /99. Екатеринбург, 1999. - 25 с.

369. Чхенкели В.А. Методические рекомендации по определению йода в пищевых продуктах и воде (для врачей, студентов, субординаторов, интернов, аспирантов) / В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели, Н.П. Гаськова и др. Утв. ЦКМС ИГМУ от 27.05.99, прот. № 4,- 20 с.

370. Чхенкели В.А. Некоторые аспекты медико биологических исследованийвысших дереворазрушающих базидиомицетов как источника биологически активных веществ / В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели, Е.Д. Агапова и др. // Сиб. мед. журн.- 2001. № 1.- С. - 59 - 61.

371. Чхенкели В.А. О механизме бактерицидного действия базидиального гриба

372. Coriolus pubescens (Shum. Fr.)Quel. / В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели // Вестник сибирской сельскохозяйственной науки. -2005.- № 2. -С. 52-57.

373. Чхенкели В.А. Пептидо полисахаридные комплексы Coriolus pubescens

374. Чхенкели В.А. Перспективы использования нового антимикробного препарата кориопубесцина в хирургической практике / В.А. Чхенкели, Г.Д.

375. Чхенкели, АЛ. Москвитина, Ю.С. Беляева // Сибирь Восток. - 2001. -№3.-С. 6- 8.

376. Чхенкели В.А. Полисахариды высших базидиомицетов в коррекции иммунопатологических состояний / В.А. Чхенкели, А.В. Знамировская, Р.Г. Скворцова, И.Н. Тихонова // Мат. 2-ой межрег. научн. конф. «Человек и окружающая среда». Рязань, 1998. -С. 246-247.

377. Чхенкели В.А. Противотуберкулёзная активность базидиомицета Corioluspubescens (Shum.: Fr.) Quel, и препарата, получаемого на его основе/ В.А. Чхенкели, Н.А. Шкиль // Сиб. мед. журн. 2005. -№ 2. -С. 67 - 71.

378. Чхенкели В.А. Современные методы биотехнологии в ветеринарии/ В.А.

379. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели // Мат. научн.-практ. конф. «Актуальные проблемы ветеринарной медицины Восточной Сибири», 2002. С.37- 39.

380. Чхенкели В.А. Современные представления о возможности использованияпептидополисахаридных комплексов базидиальных грибов как иммуностимуляторов/ В.А. Чхенкели, И.В. Тихонова // Сиб. мед. журн. 2000. - № 1.-С. 11-17.

381. Чхенкели В.А. Содержание токсичных элементов в продуктах биотехнологической переработки вторичного сырья / В.А. Чхенкели// Тез. докл. 1 го съезда токсикологов России, 1998, М. - С. 127.

382. Чхенкели В.А. Сорбция тяжёлых металлов мицелиальными грибами/ В.А.

383. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели // Тез. докл. Российско Японского междунар. симпозиума, Иркутск, 1996. - С. 346.

384. Чхенкели В.А. Сорбция тяжёлых металлов продуцентом Saccharomyces сегevisiae в дрожжевом производстве/ В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели // Тез. докл. VI го Российско - Японского междунар. симпозиума, Хабаровск, 1998.-С. 75-76.

385. Чхенкели В.А. Стимуляция биосинтеза лизина синтетическими углеводами:

386. Дисс. на соиск. уч. ст. канд. тех. наук. J1., 1986. - 137 с.

387. Чхенкели В.А. Токсико биологические свойства продуцента Coriolus pubescens (Shum.: Fr.)Quel. и препарата, полученного на его основе/ В.А. Чхенкели // Сиб. мед. журн. 2004. - № 6. - С. 60 - 62.

388. Чхенкели В.А. Токсикологическая оценка продуктов химической биотехнологии / В.А. Чхенкели // Тез. докл. 1 го съезда токсикологов России, М., 1998.-С. 128.

389. Шагинян К. Протеиназы высшего базидиомицета Coprinus 7N / К. Шагинян,

390. И.А. Алехина, С.Г. Газелян и др. // Докл. АН Арм. ССР. 1989. - Т. 89. -№2.-С. 88-93.

391. Шальнова Г.А. Методика определения количественного и качественного состава микрофлоры верхних дыхательных путей / Г.А. Шальнова // Лаб. дело. 1983.-№3.-С. 15-17.

392. Шаршунова М. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии / М. Шаршунова, В. Шварц, Ч. Михалец Пер. со словацкого. -Т.1 .-М: Мир, 1980.-295 с.

393. Шаршунова М. Тонкослойная хроматография в фармации и клиническойбиохимии / М. Шаршунова, В. Шварц, Ч. Михалец. Пер. со словацкого. -Т.2 . -М.: Мир, 1980.-621 с.

394. Шиврина А.Н. Биологически активные вещества высших грибов / А.Н. Шиврина-М. Л.: Наука, 1965. - 194 с.

395. Шишков В.П. Болезни новорожденных телят /В.П.Шишков// Патологическая диагностика болезней крупного рогатого скота. М.: Агропром-издат, 1989.-С. 118-119.

396. Шлегель Г. Общая микробиология / Г. Шлегель Пер. с нем. - М.: Мир, 1987.-566 с.

397. Шиврина А.Н. Содержание тиамина и рибофлавина в высших грибах/ А.Н. Шиврина, JI.H. Корякина В сб.: Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. - М. - Л.: Наука, 1966. - С. 45-48.

398. Шесточенко М.А. Профилактика инфекционных болезней молодняка / М.А.

399. Шесточенко, Л.А. Таранова, В.П. Косенко М.: Колос, 1983. - 207с.

400. Шиврина А.Н. Биосинтетическая деятельность высших грибов / А.Н. Шиврина, О.П. Низовская, Н.Н. Фалина и др. Л.: Наука, 1969. - 241с.

401. Щерба В.В. Деградация лигнина соломы ржи и костры льна мицелиальными грибами в условиях глубинной ферментации / В.В. Щерба // Прикл. биохим. и микробиол,-1994.-Т. 30. Вып. З.-С. 403-409.

402. Яковлев С.И. Имипинем. Оценка роли препарата при антибактериальной терапии тяжёлых госпитальных инфекций / С.И. Яковлев // Антибиотики и химиотерапия. 1999. - Т. 44. - № 5. - С. 33-39.

403. Яковлев С.И. Клиническая эффективность тикарциллин/клавуланата притяжёлой пневмонии / С.И. Яковлев, Л.И. Дворецкий, Т.В. Шахова // Антибиотики и химиотерапия. 2000. - Т. 45.- № 3. - С. 1-5.

404. Яровенко В.Л. Природа и взаимодействие составляющих закона сохранения стерильности / В.Л. Яровенко // Прикл биохим. и микробиол. 1993. -Т.29 - Вып.З - С. 492-496.

405. Яровенко В.Л. Технология спирта / В.Л. Яровенко, В.А. Маринченко, В.А.

406. Смирнов и др.; Под ред. В.Л Яровенко 2-е изд., перераб и доп. - М.: Колос, 1996.-464 с.

407. Acar J.F. Disk Succeptibity Test / J.F. Acar, F.W. Goldstein; Ed.V. Lorian Antibiotics in Laboratory Medicine. 4 -th ed. -1996. - P. 1-56.

408. Agosin E. Solid-state fermentation of pine sawdust by selected brown-rot fungi /

409. E. Agosin, S. Jarpa, E. Rojas et al.// Enzyme Microbiol. Technol., 1989. Vol. 11. -№ 8. -P, 511-517.

410. Anchel M. Antibiotic substances from basidiomycetes. X. Fomes juniperinus

411. Shrenk / M. Anchel, A. Hervey, W.Robbins // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. -Vol. 38.-№11.-P. 927-928.

412. Anchel M. Antibiotic substances from basidiomycetes. VII. Clitocybe ulludens /

413. M. Anchel, A. Hervey, W. Robbins // Proc. Nat. Acad. Sci. 1950. - Vol. 36. -№ 5. - P. 300-305.

414. Anchel M. Chemical studies with pleuromutilin / M. Anchel // J. Biol. Chem.1952. Vol.199.-№1.-P. 133-139.

415. Anke Т. Antibiotica aus Basidiomyceten / T. Anke // Zeitchr. Mycologic. -1978.-Bd. 44. H.I. - S. 129-139.

416. Anke T. New antibiotics from the basidiomycete Marasmius alliaceus/ T. Anke, W. Watson, B. Giankelbi et al. // Planta med. -1980. Vol. 39. - № 3. - P. 194197.

417. Antkowidk W.Z. Isolation characteristics of toxic components of Cortinariusorellanus / W.Z. Antkowidk, W.P. Gessner // Bull. Acad. Pol. Sci. Ser. Sci. Chim. -1975. Vol. 23. - № 9. - P. 729-733.

418. Antkowidk W.Z. Photodecomposition of orellinine and orrelline, the fungal toxins of Cortinarius orellanus Fries and Cortinarius speciosissimus / W.Z. Antkowidk, W.P. Gessner // Experimentia. -1985. Vol. 41. - № 6. - P. 769-776.

419. Antkowidk W.Z. The structure of orellinine, and orelline/ W.Z. Antkowidk, W.P.

420. Gessner//Tetrahedron. Lett.-1979.-Vol.20. P. 1931-1937.

421. Arigoni D. La structtura un terpene di nuovo genera/ D.Arigoni // Gazz. chim. Ital. -1962. 92. - P. 884-901.

422. Arita I. The mechanism of spontaneous dedikaryotization in hyphae of Pholiota name Ко/1. Arita // Mycologia. -1979. Vol. 71. - № 3. - P. 603-611.

423. Armand D. Sur da production acides-phenols par des mycleliums Hymenomy-cetes lignover en milieu glucose / D. Armand, S. Trivend// Mycol. -1966. Vol. 30.-№4.-P. 215-224.

424. Armerante P.M. Reactor design emploing a white rot for hazardous waste treatment/ P.M. Armerante, G.A. Lewandowski, D. Рак et al. // Biotechnol. Appl. Hazardous Waste Treat: Conf. Sarasota, 1988. P. 351-362.

425. Ayer W.A. Terpenoid metabolites of mushrooms and related basidiomycetes/ W.A. Ayer, L.M. Brown // Tetrahedron. Lett. -1981. Vol. 37. - № 12. - P. 2199-2248.

426. Badalyan S.M. Investigation of fungal metabolites and acute toxity studies fromfruit-bodies of Hypholoma species (Strophariaceae)/ S.M. Badalyan, S.Rapior, L.Doko et al. // Cryptogamie, Mycologie. -1995. Vol. 15. - P. 79-84.

427. Baneree P.C. Hemaglutinating activity in exracts of mycelia from submegered-mushroom culture / P.C. Baneree, A.K. Chosh, S. Sengupta// Appl. Environ. Microbiol. -1982. Vol. 44. - № 4. - P. 1009-1011.

428. Baurle J. Antibiotics from genus Mycene and from Hydropus scabripes / J. Baurle, T. Anke // Planta med. -1980. Vol. 39. - № 3. - P. 195-196.

429. Benedict R.G. Antimicrobial activity of mushroom metabolites / R.G. Benedict,

430. R. Brady // J.pharm. Sci. -1972. Vol. 61. - P. 1820-1822

431. Besl H. New toxic fungi in the genera. Galerina and Lepiota / H. Besl, P. Mack,

432. H. Schmid-Hecked //Z. Mycol. -1984. Bd.50. - H.2. - S. 183-192.

433. Birch A. The diterpenoid nature of pleuromutilin/ A. Birch, D. Cameron, C. Holzapfel et al. // Chem. Ind. 1963. - Vol. 9. - P. 374-375.

434. Bisaria R. Amino acid composition of the mushroom Pleurotus sajor-caju cultivated on different agroresidues / R. Bisaria, M. Madan, V.S. Bisaria et al. // Biol. Wastes. -1987. Vol. 20. - № 3. - P. 251-259.

435. Bose S.R. Antibiotics from higher fungi / S.R. Bose // Arch. Microbiol. -1953. -Vol.18.- №4. -P. 349-355.

436. Bradford M.A. Rapid and Sensitive Method for the Quantitation of MICRO

437. GRAM quantities of Protein Utilizing the Principle of Protein / M.A. Brad-ford//Dye Binding. -Anal. Biochem. 1976. - Vol. 72. - № 1-2.- P. 248-254.

438. Bresinsky A. The genus Pleurotus as an aid for understanding the conception ofspecies in Basidiomycetes / A. Bresinsky, O. Hilber, H.P. Molitoris // The species concept in Hymenomycetes; Ed. by H. Cemencon. Vaduz: Cramer. -1976. - P. 229-258.

439. Brodie H.J. The occurrence and function of oidia in the Hymenomycetes / H.J. Brodie // Amer. J. Bot. -1936. Vol. 23. - № 5. - P. 309-327.

440. Cambie R. Chemistry of higher fungi. XIV. Polyacetylenic metabolites of Poriasinuosa Fr. / R. Cambie, J. Gardner, E. Jones et al. // J. Chem. Soc. -1963. P. 2056-2064.

441. Cambie R. Chemistry of higher fungi. III. Constituents of Coriolus sanguinesis

442. Fr. / R. Cambie R., R. Le Quem I. et al.// J. Chem. Soc. -1963. Vol. С. - № 1. -P. 72-74.

443. Chihara G. Function and purification of the polysaccharide with marked antitumor activity, especially Lentinan from Lentinus edodes (Berk.) / G. Chihara, J. Humuro, Y. Maeda et al. // Cancer. Res. -1987. Vol. 130. -P. 2776-2781.

444. Chung C-H., Go P., Chang K-H. PSK immunotherapy in cancer patients a preliminary report / C-H.Chung, P.Go, K-H. Chang // Chinese J. of Microbiol, and Immunol. -1987. Vol. 20. - P. 210-216.

445. Cochran K.W. Medical effects // The biology and cultivation of edible mushrooms / K.H. Cochran K.W.; Ed. S. T. Chang, W.A. Hayes. N. Y. etc.: Acad. Press, 1978. - P. 168-187.

446. Cole G.T. Pattens of development in conidial fungi / G.T. Cole, R.A. Sampson.1.ndon: Pitman, 1979. 190 p.

447. Conant N.F. Manuel of Clinical Mycology / N.F. Conant, D.T. Smith, R.D. Bakeret al. 3 - rd Ed. - Saunders, Philadelphia, London Toronto. -1977.- 765 p.

448. Crisan E.V. Nutritional value / E.V. Crisan, H.Pands // The biology and cultivation of edible mushrooms. -N.Y.: Acad. Press., 1978. -P. 137-168.

449. Davey P.G., Bax R.P., Reeves D. et al. Growth in the use of antibiotics in the community in England and Scotland in 1980 1993 / P.G. Davey, R.P. Bax, D. Reeves et al. //Br. Med. J. -1996. - Vol.312. - P.6-13.

450. Dehmlow E.V., Schulz H.J. Synthesis of orellanine of tehal poison of a toad stool

451. E.V. Dehmlow, H.J. Schulz // Tetrahedron. Lett. -1985. №26. - P. 49034908.

452. Dennert P. Antitumor polysaccharide Lentinan-a T-cell adjuvant / P. Dennert // J.of National Cancer Institute. -1973. Vol.51. - P.1727.

453. Dong Y. Antitumor effects of refined polysaccharide peptide fraction from

454. Coriolus versicolor in vito and in vivo studies / Y. Dong, C.Y. Kwan, Z.N. Chen et al. // Res. Communication in Molecul Pathology and Pharmacology. -1999. -Vol.92.-P.140-148.

455. Emmons C.W. Medical mycology / C.W. Emmons, C.H. Binford, J.P. Utz et al.3 rd, Ed. - Philadelphia, 1977. - 592p.

456. Ersek T. Mucidin and antibiotic highly effective on Phytophtora infestans / T. Ersek, A.A. Galal, F. Kevei //Acta Phytopath. Logo. 1994. - Vol.29. - №3-4.

457. Falek R. Die kultur der Oidien und ihre Ruckfuhrung in die hohere Frachtform bei den Basidiomyzeten / R. Falek // Cohn's Beitr. Biol. Pflanzen. -1902. №8. -S. 307-346.

458. Faulostich H. Amatoxins in edible mushrooms / H. Faulostich, M. Cochet-Mulhac / FEBS Lett. -1970. Vol.64. - №1. - P. 73.

459. Fries N. Culture studies in the Mycena /N. Fries // Sven. Bot. tidssk. -1949.1. Vol.43. №3. - P. 316-342.

460. Frost J.A. Antibiotic resistance in salmonellas from human in England and

461. Wales: the situation in 1994 / J.A. Frost, E.J. Threfall, B. Rowe // P HLS Miro-biolgy Digest. -1996. Vol.12. - P. 131-133.

462. Fujii T. Prolongation of the survival period with the biological response modifier

463. PSK in rats bearing N-methyl-N-nitrosourea-induced mammary gland tumors / T. Fujii, T.Kano, K. Matsunaga et al.//In Vivo.-1995. Vol.9. - P. 55-57.

464. Fujii Т., Капо Т., Saito К. et al. Effect of PSK on prohibited ummunity of splenectomized mice //Anticancer Res. -1987. Vol.7. - P. 845-848.

465. Galland M.C. Mycotaxon / M.C. Galland, R.F.O. Kemp, T. Fujii, Т. Капо Т., К.

466. Saito et al.-1979. Vol.32. - №3/4. - P. 315-317.

467. Gartz J. Untersuchungen zum Vorkommen des Muskarins in Inocybe aeruginasceus Bados / J.Gartz // Z. Mykol. -1986. Bd.52. - H.2. - S. 359-362.

468. Gedek B. Kompendium der medizinischen Mycologie / B. Gedek Parey, Berlinu. Humburg, 1980. 395 S.

469. Georgin G. Fungal enzymatic processes for detoxification of hazardous waste sitechemicals / G. Georgin // 197 -th ACS Nat. Meet., Dallas, Tex., 1989; Abstr. Pap. Washington D.C., 1989 - P.617-618.

470. Gill M. Pigments of fungi (macromycetes): Progress in the chemistry of organnatural products / M. Gill, W. Steglich. -1987. Vol.51.

471. Gold E.R. Thallobiota (Protista): algae, lichens and fungi // Receptor specificproteins, plant and animal lectins / E.R. Gold, P. Balding. Amsterdam, 1975. -P. 117-150.

472. Goldstein I.J. The lectins: carbohydrate- binding proteins in plants and animals /

473. J. Goldstein, C.E. Hayes // Chem. Biochem. -1978. Vol. 35. - P. 127-340.

474. Guang Di J. Effect of Coriolus versicolor peptides on electtic activity mediobasal hypothalamus and in immune function in rats / J. Guang Di, Y. Qi-Zhang, H.Y. Ming et al. // Actapharmacol. sin. -1996. - Vol. 17. - №3. - P. 271-274.

475. Hall C.L. Overepression of hyaluron receptor RHAMM in transforming and inalso required for H-ras transformation / C.L. Hall, B. Yang, X. Yang et al. // Cell.-1995.-Vol. 82.-P. 19-28.

476. Hatakka A. I. Cultivation of wood-rotting fungi on agriculture lignocellulosis materials for the production of crade protein / A.L. Hatakka, T.L. Pirhonen // Biol. Wastes.-1985.-Vol. 12.-№ 1.-P. 81-97.

477. Hatfield G.M. Toxins of higher fungi / G.M. Hatfield, L.R. Brady // Llodia.1975.-Vol. 38.-№ l.-P. 36-55.

478. Hattori T. Survival time of tumorbearing rats as rerated to operative stress andimmunopotentiators / T. Hattor, Y. Hamai, T. Ikeda et al. // Jap. J. of Surgery. -1982.-Vol. 12.-P. 143-147.

479. Hattula M.L. Adaptability to submerged culture and amino acid contents of certain fleshy fungi common in Finland / M.L. Hattula, H.G. Gyllenberg // Kar-stenia. -1969. Vol. 12. - № 9. - P. 39-45.

480. Hayakawa K. Effect of Krestin (PSK) as adjivant treatment on the prognosis afterradicfl radiotherapy in patients with non-small cell lung cancer / K. Hayakawa,

481. N. Mitsuhanshi, J. Saito et al. // Anticancer Research. -1993. Vol.13. -P.1815-1820.

482. Hayes W. A. Edible mushrooms / W.A. Hayes, S. Wright // Microbiol, biomass.-London etc., 1979. P. 141-176.

483. Henderson M. Fungal metabolism of certain aromatic compounds related to lignin / M. Henderson // Appl. Chem. -1963. Vol. 7. - № 4. - P. 589-602

484. Henderson M. Release of aromatic compounds from birch and spruce sawdust'sduring decompositions by white-rot fungi / M. Henderson // Nature. -1955. -Vol. 175. № 4458. - P. 634-635.

485. Highley T.L. Measurement of cellulose activity and white fungi dyed cellulose /

486. T.L. Highley // Mater, and Organism. -1983. Vol. 18. - № 3. - P. 167-170.

487. Hilber 0. Die Gattung Pleurotus (Fr.) Kummer. / O. Hilber // Bibl. mycol.1982.-Vol. 87.-464 s.

488. Hillis W.E. Wood Extractive and their Significance to the Pulp and Papet Industry / W.E. Hillis.-N. Y.: Academic Press, 1962 P. 331-450.

489. Ishii K. Antitumor effects of PSK and its combined effects with CDDP onovarion serous adenocarcinomabearing nude mice / K. Ishii, T. Kita, J. Hirata et al. //Nippon Sanka Fujinka Gakkai Zasshi. -1993. Vol. 45. - P. 333-339.

490. Ito H. Effects of coriolan, antitumor polysaccharide, produced by Coriolus versicolor Iwade/ H. Ito, H. Hidaka, M. Sugiura //Jap. J. of Pharmacology.-1979. -Vol. 29.-P. 953-957.

491. James P.A. The incidence and epidemiology of Beta-lactam resistance in Haemophilus influenzae / P. A. James, D.A. Lewis, J. Cribb et al. // J. Antimicrobial Chemo. -1996. Vol. 37. - P. 737-746.

492. James P.A. Prevalence of antibiotic resistance and serotypes in pneumococci in

493. England and Wales: results of observational surveys in 1990 and 1995 / P.A.

494. James, D.C.E. Speller, R.C. Geoge et al. // Br. Med. J. -1996. Vol. 312. - P. 1454-1456.

495. Jolly P. Leschampignoris veneneux /Р. Jolly // Rev. mycol.-1976. Vol. 40. - №2.-P. 185-201.

496. Jorgensen J.H. Antimicrobial Susceptibility Testing: General Considerations /• J.H. Jorgensen, D. F. Sahm // Manual of Clinical Microbiology. 6 -th ed. / Ed. P. Murray. -1995. - P.1277-1280.

497. Kadama Y. Combined effect of profilactic lymphadenectomy and long term combination chemotherapy for curatively resected carcinoma of the stomach / Y. Kadama, T. Kano, R. Tamada et al. // Jap. J. of Surgery. -1982. Vol. 12. -P. 244-248.

498. Kano T.Late results of postoperative long-term cancer chemotherapy for the gastric cancer patients subjected to curative resection / T. Kano, R. Kumashiro, R. Masuda et al. // Jap. J. of Surgery. -1983. -Vol.13. P. 112-116.

499. Капо Т., Kumashiro R., Tamada R. et al. Late results of postoperative long termcancer chemotherapy for advanced carcinoma of the stomach / Т. Kano, R. Kumashiro, R. Tamada et al. // Jap. J. of Surgery. -1981. Vol. 11. - P. 291» 296.

500. Капо T. Postoperative long term cancer chemotherapy (PLCC) extends lifespanof noncuratively resected patients with stage IV gastric cancer / T. Kano, R. Tamada, Y. Aeby et al. // Jap. J. of Surgery. -1982. Vol. 12. - P. 201-207.

501. Kanoh Y., Matsunaga K., Saito K. Suppression of in vivo tumor-induced angio genesis by the protein-bound polysaccharide PSK / Y. Kanoh, K. Matsunaga, K. Saito // In Vivo. -1994. Vol. 8. - P. 247-250.

502. Kaplan S.L. Bacteriemia and Septic Shock / S. L. Kaplan // Textbook of Pediatricinfections Disease. Vol. 1. - Philadelphia, 1998.

503. Karaiya Y. Lysis of fresh human tumor cells autologous peripheral blood lymphocytes and tumur-infiltrating lymphocytes activated by PSK / Y. Karaiya, W. Okamoto, I. Fujimoto. et al. // Jpn. J. Cancer. Res. -1991. Vol. 82. - № 9. - P. 1044-1050.

504. Kavagh F. Antibiotic substances from basidiomycetes. IX / F. Kavagh, A.

505. Hervey et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. -1951. Vol. 38. - № 7. - P. 555-560. t 471. Kavagh F.A. Antibiotic substances from basidiomycetes. VIII / F. Kavagh, A.

506. Hervey et al. //Proc. Nat. Acad. Sci. -1951. Vol. 37. - № 9. - P. 570-574.

507. Kawai M. Productivity of proteolytic enzymes and distribution of its milk clotting activity among basidiomycetes / M. Kawai // J. Agr. Chem. Soc. Jap. -1973. -Vol. 43.-№8.-P. 467-472.

508. Kawai M. Studies on milk clotting enzymes produced by basidiomycetes. 9t. II.

509. Some properties basidiomycete milk clotting enzymes / M. Kawai // Agr. Biol. Chem. -1970. Vol. 34. - № 2. - P. 164-169.

510. Kecey S. M. Interaction between Psilocybe semilanceata and fungi of its habitat /

511. S. M.Kecey, A.E. Brown // Mycol. Res. -1989. Vol. 93. - P. 554-556.

512. Kendrick B. Mitospores in Basidiomycetes / B. Kendrick, R. Watling //The Whole Fungus: Kananaskis 2 / Ed. B. Kendrick. Ottawa, 1979. - P. 473-545.

513. Kim B.K. Constituents of higher fungi of Korea. 12. Antineoplastic componentof Coriolus versicolor, Pleurotus ostreatus and Lentinus edodes / В. K. Kim, E. K. Park // J. Nat. Prod. -1979. Vol. 42. - № 6. - P. 684-690.

514. Kobayashi H Purification and characterization of two milk clotting enzymes from1.pex lacteus / H. Kobayashi, I. Kusakabe, K. Murakami //Agr. Biol. Chem. -1983. Vol. 47.-№3.-P. 551-558.

515. Kobayashi H. PSK as chemopreventive agent // Cancer Epidemiology, Biomarkers and Prevention / H. Kobayashi, K. Matsunaga, M. Fujii -1993. Vol. 2.-P. 271-276.

516. Kobayashi H. Antimetastatic effects of PSK (Krestin), a protein -bound polysaccharide obtaned from basidiomycetes an overview / H. Kobayashi, K. Matsunaga, Y. Oguchi // Cancer Epidemiology, Biomarkers and Prevention. -1995. -Vol. 4.-P. 275-281.

517. Komatsu N. Flammulin, a basic protein of Flammulina velutipes with antitumoractivities / N. Komatsu, H. Terekawa, K. Nakanishi // J. Antibiot. A. -1963. -Vol. 16.-№ 3.-P. 139-143.

518. Kuernsteinzer H. Isolation of a lethal toxin from Cortinarius orellanus Fr. / H. Kuernsteinzer, M. Moser // Mycophthologia. -1981. Vol. 74. - № 2. - P. 65-72.

519. Leontievsky A. Blue and yellow laccases of fungi / A. Leontievsky, T. Vares, L. Lankinen et al. // FEBS Microbiol. Lett. -1997. № 156. - P. 9-14.

520. Leontievsky A., Myasoedova N., Pozdnyakova N. Yellow lacase of Panus tigrinus oxidase non phenolic substrate without electron transfer mediators / A. Leontievsky, N. Myasoedova, N. Pozdnyakova // FEBS Lett. -1997. - № 4/3. -P. 446-448.

521. Leontiewsky A.A. Production of lygnolytic enzymes of the white rots fungus Panus tigrinus / A.A. Leontiewsky, N.M. Myasoedova, L. A. Golovleva // J. Biotechnol. -1994. Vol. 32. - P. 299-307.

522. Loquin M.J. Recherches sur 'acide ungulinique (acid poliporenique A), antibiotics product par Ungulina betulina / M J. Loquin, J. Loquin, A. Prevovot // Rev. Mycol. -1948. Vol. 13. - P. 3-9.

523. Mable M.P. Polysaccharide peptide (PSP) restores immunosuppression inducedby cyclophoshmine in rats / M. P. Mable // Am. J. of Chinese Med. -1997. -Vol. 25. № l.-P. 27-35.

524. Maera Y. Postoperative PSK and OK-432 immunotherapy for patients with gastric cancer //Cancer Chemotherapy and Pharmacology / Y. Maera, S. Unutsuka, H.Takeushi et al. -1993. Vol. 33. - P. 171-175.

525. Manual on antimicrobial resistance and susceptibility testing. WHO. Geneva,1997.-97 p.

526. Marcus S. Antibacterial activity of the triterpenoid acid (polyporenic acid C) andof ungulinic acid products of Polyporus benzanus (Wahl.) Fr. / S. Marcus // Biochem. J. -1952. Vol. 50. - № 4. - P. 516-517.

527. Marr C. D. Laccase and tirosinase oxidation of spottiest reagents // Mycotaxon / C.D. Marr // Ibid. -1979. Vol. 9. - № 1. - P. 244-276.

528. Marr C. D. Spot tests for determination tirosinase / C.D. Marr // Ibid. -1984. -Vol. 19. №1. - P. 299-306.

529. Matsumoto Т. Structure of lampterol (illudins S) / T. Matsumoto, H. Shirahoma,

530. A. Ishihara et al. // Tetrahedron Lett. Vol. 21. - № 9. - P. 2671-2676.

531. Mayer A. M. Polyphenol oxidases in plant: Recent progress / A.M. Mayer // Phytochemystry. -1987. Vol. 26. - № 1. - P. 11-20.

532. Mayer A. M. Polyphenol oxidases in plant: Recent progress / A. M. Mayer, E.

533. Harel//Phytochemystry.-1979.-Vol. 18.-№ l.-P. 193-215.

534. McKeen C.G. Studies of Canadian Teleforaceae. 9. A cultural and taxonomic study of three species of Peniophora / C. G. McKeen // Can. J. Bot. -1952. -Vol. 30. № 6. - P. 764-787.

535. Meixner A. Amatoxin-Nachweis in Pilsen / A. Meixner // Z. Mycol. -1979. Bd.49.-H. l.-S. 137-140.

536. Milazzo F. Sterol production by soom wood rotting basidiomycetes / F. Milazzo // Canad. J. Bot. 1965. - Vol. 43. - № 1. - P. 1347-1353.

537. Melvyn G. Constituents of Agaricus xanthodermus the first naturally endogenousazote compound and phenolic metabolites / G. Melvyn, S. Richard // Z. Natur-fontch. -1984. Vol. 39. - P. 1027-1029.

538. Miller O.K. The relationship of cultural characters of the Agarics // Evolution inthe Higer Basidiomycetes: An Inten. Symp. / O.K. Miller; Ed. R. Peterson. -Knoxville, 1971.-P. 197-208.

539. Miller O.K. Description and identification of selected mycorrhizal fungi in pureculture / O.K. Miller, S. L. Miller, J. G. Palmer // Mycotaxon. -1983. Vol. 18. -№2.-P. 457-481.

540. Min H.K. Studies on the constituents of the higher fungi of Korea. 18. Components of Russula pseudodelica and Microporus affinis / H. K. Min, E. Ch. Choi,

541. B. K. Kim B.K. // Korean J. Mycol. -1980. Vol. 8. - № 1. - P. 13-20.

542. Mitomi T. Randomized, conrolled study on adjuvant immunochemoterapy with PSK in curatively resected colorectal cancer / T. Mitomi, S. Tsuchiya, N. Iijima et al. // Diseases of the Colomn and Rectum. -1992. Vol. 32. - P. 123-130.

543. Molitoris H. P. Wood degradation phenoloxidases and chemotaxonomy of higherfungi / H. P. Molitoris // Mushroom Sci. -1978. Vol. 10. - № 21. - P. 243-263.

544. Moyson E., Verachtert H. Growth of higher fungi on wheat straw and their impact on the digestibility of substrate / E. Moyson, H. Verachtert // Appl. Microbiol. Biotechnol. -1991. Vol. 3 - № 4. - P. 421-427.

545. Musilek V. Antifungal antibiotic of the basidiomycete Oudemansiella mucida. 1. Isolation and cultivation of a producing strain / V. Musilek, V. Sasek, J. Cerna et al. // Folia microbiol. -1969. Vol. 14. - № 4. - P. 377-389.

546. Nau G. Human macrophage activation programs induced by bacterial pathogens /

547. G. Nau, J. Richmond, A. Schbesinger et al. // Proc. Natl. acad. sci. USA. -2002.- Vol. 9. -№ 3.- P. 1503 1508.

548. Nagao T. Chemmoimmunotherapy with Krestin and acute leukemia / T. Nagao, M. Komatsuda, K. Yamanchi et al. // Tokai J. of Experimental and Clin. Med. -1981.-Vol. 6.-P. 141-146.

549. Nakanishi K. Isolation of lampterol, an antitumor substance from Lampteromyces japonicus / K. Nakanishi, M. Tada, J. Yamada et al. // Nature. -1963. Vol. 197. - № 4864 - P. 292.

550. National Commitee for Clinical Laboratory Standards: Performance Standardsfor Antimicrobiol Disk Susceptibility Tests. 6 -th ed.- Approved Standard. NCCLS, Document M2- A6. -1997. - Vol. 17. - № 1.

551. National Committee For Clinical Laboratory Standards: Performance Standardsfor Antimicrobial Susceptibility Testing: Ninths Informational Supplement. NCCLS Document M100-S9. -1999. -Vol. 18.-№ 1.

552. Nio Y. Immunomodulation by orally administered protein-bound polysaccharide

553. PSK in patients with gastrointestinal cancer / Y. Nio, M. Tsubono, С. C. Tseng // Biotherapy. -1992. Vol. 4. - P. 117-124.

554. Nobles M.K. Cultural characters as a guide to the taxonomy and phylogeny ofthe Poliporaceae / M. K. Nobles // Can. J. Bot. -1958. Vol. 36. - № 6. - P. 883-926.

555. Nobles M.K. Identification of cultures of wood- inhabiting Hymenomycetes / M.

556. K. Nobles // Ibid. -1965. Vol. 43. - № 9. - P. 1097-1139.

557. North M.J. Comparative biochemistry of the proteinases of eucaryoticmicroorganisms / M. J. North // Microbiol. Rev. -1982. Vol. 46. - № 3. - P.

558. Palmer F. M. The role of peroxidases, radidd cations and oxygen in thedegradation of lignin / F. M. Palmer, P.J. Harvey, H. E. Shoemaker // Phil. Trans. Roy Soc. London. -1987. Vol. A321. - № 156. - P. 495-508.

559. Panotidou M.E. Cultural studies of Boletaceae: Gyrodon meruliodides and four species of Poletinus / M.E. Panotidou // Can. J. Bot. -1961. Vol. 39. - № 5. - P. 1149-1162.

560. Pantidou M.E. Carpophores of Pleurotus bopus sulphurous in culture / M. E. Pantidou // Ibid. -1961. Vol. 39. - № 5. - P. 1163-1167.

561. Parmeter J. R. The taxonomy of sterile fungi / J. R. Parmeter // Phytopathology.1965. Vol. 55. - № 8. - P. 826-828.

562. Pozdnyakova N.N. Oxidase of white rot fungus Panus tigrinus 8/18 / N.N.

563. Pozdnyakova, A.A. Leontievsky, L.A. Golovleva // JEBS Lett. -1994. № 350. -P. 192-194.

564. Reiner R. Zurkenntnis des Muskazons. 24. Mitteilung uber In-halsstoffe von

565. Fliegenpilsen / R. Reiner, C.H. Eugster // Helv. Chim. Acta. -1967. Bd. 50. -№1.-S. 128-136.

566. Riley R.T. Fungal toxins in foods: Recent concerns / R.T. Riley, W.P. Norred,

567. C.W. Bacon //Annu. rev. nutr. -1993. P. 167-189.

568. Rogers H.J. Bacterial growth and all envelope / H.J. Rogers H.J. // Bacteriol.

569. Kew. -1970. Vol. 34. - P. 194-214.

570. Rogers H.J. Killing of Staphylococci by penicillin's / H.J. Rogers // Nature. -1967. Vol. 213. - № 5071. - P. 31-33

571. Rogers H.J. The structure and biosynthesis of the components of cell walls ofgrampositive bacteria / H.J. Rogers // Folia microbiol. -1967. Vol. 12. - № 3. -P. 191-200.

572. Sasek V. Antibiotic activity of mycorrhizal Basidiomycetes and their relation tothe host-plant parasites / V. Sasek, V. Musilek // Ces. mykol. -1968. Vol. 22. -№ l.-P. 50-55.

573. Sasek V. Two antibiotic compounds from mycorrhizal Basidiomycetes / V.

574. Sasek, V. Musilek//Folia microbiol. -1968. Vol. 13. -№ l.-P. 43-45.

575. Sawada M. Studies on chemical components of wild mushroom and toadstools in

576. Japan / M. Sawada // Bull. To Kyo Univ. Forests. 1965. - Vol. 53. - P. 33162.

577. Seeliger H.P.R. Diagnostic pathogener Pilze des Menshen und seiner Umvelt.1.h buch und Atlas / H. P.R. Seeliger, T. Heymer. Thieme, Stuttgart, N.Y., 1981.-326 S.

578. Semerdzieva M. Pestovani a morphologicka pozorovani nekterych nub celeoli

579. Agaricaceae in vitro / M. Semerdzieva // Ces. mykol. -1965. Vol. 19. - № 4. -P. 230-239.

580. Semerdzieva M. Investigation of mycelial growth in some gill fungi underlaboratory conditions / M. Semerdzieva, K. Cejp // Folia microbiol. -1966. -Vol. 11.-№2.-P. 146-154.

581. Semerdzieva M. Lecive houby drive a nyni / M. Semerdzieva, J. Veselsky.1. Praha, 1986.

582. Sevice R.F. Antibiotics that resist resistance / R.F. Sevice // Science. -1995.1. Vol. 270. P. 724-727.

583. Sferra P.R. Biodegradation of Enviromental Pollutants / P.R. Sferra // Standard

584. Sigler L. Taxonomy of Malbranchea and some other Hyphomycetes with arthroconidia / L. Sigler, J. W. Carmichael J.W. // Mycotaxon. -1976. Vol. 4. -№ 2. - P. 349-488.

585. Sigler R, Harris B. Mushrooms and truffles / R. Sigler, B. Harris. Koenigstein,1987.

586. Solomonas G.L. Submerged cultures production of mycelial biomass / G. L.

587. Solomonas // The Filamentous fungi. Industry mycology. London: Edwar Arnold, 1975.-P. 249-263.

588. Stalpers J. A. Identification of wood inhabiting Aphyllophorales in pure culture /

589. J. A.Stalpers // Stud. Mycol. -1978. № 16. -248 p.

590. Steglich W. Biologically active compounds from higher fungi / W. Steglich //

591. Pure Appl. Chem. -1981. Vol. 53. - P. 1233-1240.

592. Steinhaff M. Neonatal sepsis and infections / M. Steinhaff, J. Kinney // Apractical approach to infections diseases / Ed. by R.F. Reese, R.F. Betts. N.Y.: Lippin cott - Raven Pablishers, 1991.

593. Sugimachi K. Dose intensity of uracil and tegafur in postoperative chemotherapyfor patients with poorly differentiated gastric cancer / K. Sugimachi, J. Maehara, M. Ogawa et al. // Cancer Chemotherapy and Pharmacology. -1997. • Vol. 40. P. 233-238.

594. Susuki M. Activity of Lentinan and Interleukin 2 / M. Susuki, S. Higuchi, Y.

595. Takashi S. The structure of coriolin a new sesquiterpene antibiotic / S. Takashi,

596. H. Iinuma, T. Takita et al. // Tetrahedron Lett. -1969. № 53. - P. 4663 - 4666.

597. Takashi S. The structure of coriolin В and С / S. Takashi, H. Iinuma, T. Takita et• al. // Tetrahedron Lett. -1970. № 19. - P. 1637 - 1639.

598. Taylor J.B. Biochemical tests for identification for indetification of mycelial culture of Basidiomycetes / J. B. Taylor // Ann. Appl. Biol. -1974. Vol. 78. - № 2. -P. 113-123.

599. Tebett I.R. Mushroom toxins of the genus Cortinarius / I.R.Tebett, B. Caddy // Experientia. -1984. Vol. 40. - № 5. - P. 441 - 446.

600. Tebett I.R. Toxicity of the Cortinarius species / I.B. Tebett, C.B.M. Kidd, B. Caddy B. et al. // Trans. Brit. Mycol. Soc. -1983. Vol. 81. - № 3. - P. 636-638.

601. Terashita T. Proteinases of Basidiomycetes Pt. 6. Purification and some properties of metal proteinase from Lentinus edodes / T. Terashita, K. Oda, M. Kono et al. // Agr. Biol. Chem. -1985. Vol. 49. - № 8. - P. 2293 - 2300.

602. Terashita T. Purification and some properties of carboxyl proteinase in micelium1.ntinus edodes / T. Terashita, K. Oda, M. Kono et al. // Agr. Biol. Chem. -1981. Vol. 45. - № 9. - P. 1929 - 1935.

603. The HiMedia Manual for microbiology laboratory practice. Mambai: HiMedia1.boratories Pvt. Limited, 1998. 524 p.

604. Tiecco M. Total synthesis of orellanine the lethal toxin Cortinarius orellanus Fries mushroom / M. Tiecco, M. Tingoli, L. Testaferri et al. // Tetrahedron. Lett. -1986. Vol. 42. - № 7. - P. 462 - 463.

605. Tiecco M., Tingoli M., Testaferri L. et al. Total synthesis of orellanine a minortoxic component of the fungus Cortinarius orellanus Fries / M. Tiecco, M. Tingoli, L. Testaferri et al. // Experimentia. -1987. Vol. 43. - № 4. - P. 462

606. Tomasz A. Mechanism of action of penicillin: triggering of the pneumococcalautolytic enzyme by inhibitors of cell wall synthesis / A. Tomasz, S. Waks // Proc. Nat. Acad. Sci. USA 1975. - Vol. 34. - № 10. - P. 4162 - 4166.

607. Toth B. Synthetic and naturally occuring hydrosine as possible cancer causativeagents / B. Toth // Cancer res. -1975. Vol. 35. - № 12. - P. 3693 - 3697.

608. Toth B. Tumor induced in mice by n-methyl-n-formylhydraside of the false more

609. Gyromitra esculenta / B. Toth, D. Nagel // J. of the National cancer in statute. -1978. Vol. 60. - № 1. - P. 201 - 204.

610. Tsukagoshi S. Krestin (PSK) / S. Tsukagoshi, Y. Hashimoto, G. Fudjici et al. //Cancer treatment rewiews. -1984. №11. - P. 131-155.

611. Wald E.R. Management of acute bacterial sinusitis in children / E.R. Wald //1.fections diaseses and antimicrobicel therapy of ears nose and throat / Ed. by. J.T. Johnson, V.L. Yu. -1997. № 1. - P. 337 - 340.

612. Watling R. The morphology, variation and ecological significance of anamorps inthe Agaricales / R. Watling // The Whole Fungus: Kananaskis 2./Ed. B. Kendrick. Ottawa, 1979. - Vol. 2. - P. 473 - 545.

613. Wieland T. 50 years phalloidin: Amanita phalloides, liver damage, F-actinbinding, fluorescence / T. Wieland // Naturwissenschaften. -1987. Bd. 74. - № 8. - S. 367-373.

614. Wieland T. Chemistry and toxiology of the toxine of Amanita phalloides / T.

615. Wieland, O.Wieland // Pharmacol. Rev. -1959. № 11. - P. 87.

616. Wieland Т., Wieland O. The toxic peptides of Amanita species / T. Wieland,

617. O.Wieland // Microbiol. Toxins. -1972. Vol. 8. - P. 249 - 280.

618. Willard T. Reishi Mushroom / T. Willard. Sylvan Press Co, 1992. - P. 34.

619. Woods G.L. Antibacterial Susceptibility Tests: Dilution and Disk Diffusion

620. Microbiology/ G.L. Woods, J.A. Washington- 6-th ed. / Ed. P. Murray. -1995. -P. 1327-1341.

621. Worgan J.T. Culture of higher fungi / J.T. Worgan // Progr. Ind. Microbiol.1968.-№8.-P. 73 139.

622. Yanagi S. A Study on antimumor effects of fungal exracts / S. Yanagi, M. Hamada // Trans. Mycol. Soc. Jap. -1976. Vol. 17. - № 3-4. - P. 506-514.

623. Zadrazil F. Cultivation of Pleurotus / F. Zadrazil // The biology and cultivation of edible mushrooms. -N.Y. etc.: Acad, pres., 1978. -P. 521- 557.

624. Zadrazil F. The ecology and industrial production of Pleurotus ostreatus, Pleurotus florida, Pleurotus cornucopiae, Pleurotus eryngii / F. Zadrazil // Mushrooms Sci. -1974. 9. -Pt. 1 - P. 621 -652.

625. Zadrazil F. The use of plant waster for production of feed and edible fungi / F.

626. Zadrazil // 5-th Intern. Ferment. Symp., 4-th Intern, spec. symp. yeasts, Berlin, 1976: Abstr. pap. Berlin, 1976. - P. 23 - 25.

627. Zang J. Antitumor polysaccharides from Chinese mushroom Pleurotus ci-trinopeilearus / Zang J. et al. // Biotechnol. and Biochem. -1994. № 7. - P. 1195-1201.