Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Бета-глюкозидазы гриба ASPERGILLUS TERREUS: характеристика множественных форм, их биосинтез и секреция

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Стайкова, Диана Дратнева

ВВВДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Распространение и физиологическая роль целлкшолити-ческих ферментов

2. Механизм ферментативного расщепления целлюлозы

3. Целлюлазный комплекс.

3.1. Множественность молекулярных форм целлюлолитических ферментов.

3.2. Характерные особенности и физико-химические свойства эндоглюканаз

3.3. Характерные особенности и физико-химические свойства экзоглюканаз

3.4. ^-Глюкозидазы: физико-химические и каталитические характеристики, субстратная специфичность, транс-гликозилазная активность

4. Биосинтез и секреция целлюлолитических ферментов

5. Механизм регуляции синтеза, секреции и активности ферментов целлюлазного комплекса

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

I. Материалы и методы.

1.1. Условия культивирования гриба Aspergillus terreus и индукции уЗ-глюкозидаз и целлюлаз.

1.2. Получение препаратов клеточных стенок, протопластов и различных ферментных фракций.

1.3. Исследование отдельных форм у2-глюкозидаз в процессе роста гриба A.terreus и при индукции в неростовых условиях.

1.4. Исследование локализации уЗкглюкозидаз и целлкшаз иммунохимическим и цитохимическим методами.

1.5. Очистка ^-глюкозидаз.

1.6. Изучение свойств и специфичности уз-глюкозидаз . 73 2. Результаты и их обсуждение.

2.1. Выделение и очистка множественных форм уЗ-глюкозидаз гриба A.terreus

2.2. Природные ингибиторы у^-глюкозидаз гриба A.terreus

2.3. Сравнительная характеристика множественных форм ^-глюкозидаз гриба A.terreus

2.3.1. Физико-химические свойства и оптимальные условия гидролиза субстратов ^-глюкозидазами A.terreus

2.3.2. Субстратная специфичность уЭ-глюкозидаз

2.3.3. Частичная структурная характеристика ферментов.

2.4. Изучение индукции уЗ-глюкозидаз и целлкшаз A.terreus

2.4.1. Индукция ферментов в неростовых условиях.

2.4.2. Индукция ферментов при росте гриба на различных субстратах

2.5. Локализация ^-глюкозидаз и целлкшаз.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Бета-глюкозидазы гриба ASPERGILLUS TERREUS: характеристика множественных форм, их биосинтез и секреция"

В течение трех последних десятилетий в центре внимания ученых находится проблема оптимизации состава и функционирования многокомпонентных целлкшолитических комплексов, важных с точки зрения их возможного применения в различных областях народного хозяйства, в частности, для ферментативного превращения целлю-лозосодержащих растительных материалов в глюкозу.

В настоящее время очевидно, что решение проблемы зависит от понимания механизмов регуляции образования и функционирования отдельных компонентов целлкшолитического комплекса - сложной полиферментной системы. Следовательно, на примере целлкшаз из отдельных продуцентов должна быть накоплена достаточная для обобщения информация по следующим вопросам:

1) полная характеристика состава комплекса, включающая свойства и специфичность индивидуальных ферментов;

2) изучение механизма образования множественных форм целлкшолитических ферментов посредством их структурной сравнительной характеристики и моделирования процесса;

3) определение специфики и способов регуляции биосинтеза и секреции отдельных компонентов комплекса.

Решение поставленных вопросов требует получения достаточного для исследования количества отдельных компонентов комплекса, то есть разработки простых и эффективных способов разделения множественных форм целлкшолитических ферментов.

Вследствие многокомпонентное™ целлкшолитических комплексов и отсутствия простых методов разделения множественных форм целлкшаз относительно полная информация о качественном составе комплексов и свойствах их индивидуальных компонентов представлена в литературе для ограниченного числа продуцентов ( Umerzurike, 1971; Berghem, Pettersson, 1974; Gong, 1977; Shoemaker, Brown, 1978; Deshpande et al., 1978; Inglin et al., 1980).

Еще более фрагментарны и недостаточны для обобщения литературные сведения относительно регуляции биосинтеза и секреции отдельных форм целлншолитических ферментов (Dekker, 1981; Stemberg, Mandels, 1982; Woodward, Wiseman, 1982).

В связи с вышесказанным, в задачу данного исследования входило изучение функциональной значимости и механизма образования ft-глюкозидаз из целлюлолитического комплекса гриба Aspergillus terreus 3? 2200Д.

Поставленная задача решалась посредством сравнительного исследования физико-химических, каталитических и иммунохимических свойств вне- и внутриклеточных /-глюкозидаз в зависимости от стадий развития культуры и условий культивирования. В работе были использованы следующие экспериментальные подходы:

1. Выделение, изучение физико-химических, иммунохимических и каталитических свойств внутри- и внеклеточных форм уэ-глюкозидаз гриба.

2. Исследование изменения активности и спектра -глюкозидаз в процессе роста гриба на целлюлозосодержащих и низкомолекулярных субстратах.

3. Изучение биосинтеза и локализации множественных форм ^-глюкозидаз в начальной индукционной фазе.

Выбор объекта исследования был предопределен рядом причин:

- во-первых, гриб A.terreus F 2200Д оценивается как перспективный продуцент уЭ-глюкозидаз (Свистова, 1984);

- во-вторых, внутриклеточные и внеклеточные уз-глюкозидазы этого штамма ранее не изучались и полученная информация о свойствах, субстратной специфичности, аминокислотном составе и составе углеводного фрагмента этих ферментов представляется ценной в аспекте сравнения с />-глюкозидазами из других продуцентов и выявления общих, характерных только для этих ферментов,черт строения.

Научная новизна. Разработана единая схема очистки внутриклеточных, связанной с клеточной стенкой и внеклеточных ^-глю-козвдаз A.terreus. Проведен сравнительный анализ спектра f>-глюкозидаз, а также свойств и локализации отдельных ферментов при конститутивном и индуцированном различными индукторами синтезе. Показано, что качественный спектр у>-глюкозидаз независимо от условий культивирования включает внутриклеточные и^ связанный с клеточной стенкой и внеклеточные I и Пе ферменты. уЗ-Глюкозидаза ii, вероятно, является предшественником всех остальных ферментов. уЗ-Глюкозидазы II образуются, по-видимому, из ферментов I посредством протеолитического расщепления их молекул. Соотношение множественных форм у9-глюкозидаз регулируется концентрацией целлобиозы и глюкозы в среде. Выявлены отличающиеся механизмы секреции у?-глюкозидаз и целлкшаз во внеклеточное пространство.

Практическая ценность.

1. Определены условия относительно направленного биосинтеза отдельных форм уЗ-глюкозидаз A.terreus.

2. Разработанная схема очистки может быть использована для крупномасштабного выделения уЗ-глюкозидаз A.terreus, а полученные ферменты могут найти применение в качестве объектов научного исследования и в народном хозяйстве.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

I. Распространение и физиологическая роль целлюлолитических ферментов

Целлюлоза является самым распространенным, постоянно обновляющимся и практически неисчерпаемым природным ресурсом углерода. 40% земной биомассы - целлюлоза. В естественных условиях конверсия этого биополимера осуществляется, главным образом, микроорганизмами (грибами, бактериями, актиномицетами).

В настоящее время молено выделить несколько направлений исследования деградации целлюлозы:

1. Изучение субмикроскопической, молекулярной структуры целлюлозы и процессов ее метаболизма.

2. Изучение целлюлозоразрушащих микроорганизмов. Выделение высокопродуктивных штаммов.

3. Изучение отдельных ферментов целлкшазных комплексов, их физико-химических свойств, процессов регуляции их синтеза и секреции, механизма ферментативного гидролиза целлюлозы.

4. Исследование разных аспектов применения целлюлолитических ферментов; в сельском хозяйстве (использование сельскохозяйственных отходов, повышение качества корма и его перевариваемос-ти); в пищевой промышленности (повышение выхода белков, жиров, крахмала, фруктовых соков, в тех случаях, когда это связано с разрушением клеточной стенки растительного сырья; получение глюкозы, фруктозы, этанола и др.); в медицине и фармацевтической промышленности (экстракция лекарственных веществ из клеток растений); в препаративной цитологии, цитохимии, молекулярной биохимии, при изучении процессов генезиса и деструкции клеточной оболочки растений, грибов и других вопросов (Билай и др.,1982).

Перечисленные области применения целлншаз свидетельствуют об их большом народнохозяйственном значении.

Целлкшолитические ферменты образуют многие мшфоорганизмы, некоторые беспозвоночные животные, растения.

Основная физиологическая роль целлюлолитических ферментов у микроорганизмов и беспозвоночных животных состоит в расщеплении целлюлозы и ее производных до глюкозы, которая используется как источник углерода и энергии, а у микроорганизмов-фитопато-генов - в разрушении растительной клеточной стенки для проникновения в цитоплазму (Hultberg et al., 1976; Родионова, 1981).

У растений ферменты, расщепляющие целлюлозу, играют важную регуляторную роль в процессах роста растительной клетки и дифференциации, например, при росте клетки путем растяжения, опадении листьев, удалении пыльцевой трубки, созревании плодов, дифференциации сосудов. Появление такой местной целлюлазной активности в отдельных органах, по-видимому, тонко регулируется и, возможно, находится под гормональным контролем (Hultberg et al., 1976; Родионова, 1981).

Наибольшее количество ферментов, расщепляющих целлюлозу, образуют микроорганизмы. В настоящее время трудно перечислить все целлкшолитические микроорганизмы, которые были изучены за последние 25-30 лет, однако удельный вес культур, выделенных из природной среды и способных удовлетворить запросы производства, крайне невысок. Как правило, это определяется либо низкой общей целлюлолитической активностью природных штаммов, либо их низкой активностью по отношению к нативной целлюлозе. Кроме поисков новых продуцентов, в результате селекции уже известных культур получено множество новых штаммов гиперпродуцентов.

Из-за большого количества целлюлозы в природе, разлагающие ее микроорганизмы (грибы, бактерии, актиномицеты) играют очень важную роль в процессе минерализации и круговороте углерода (Билай и др., 1982).

В аэробных условиях значительная роль в разложении целлюлозы принадлежит грибам. Они превосходят в этом отношении бактерии, особенно в кислых почвах и при разложении древесины (Eriksson, 1982).

Из дереворазрушающих грибов можно упомянуть некоторые аско-мицеты, вызывающие "мягкую гниль" древесины, такие как Chaetomi-um globosum, Coniothyrium fuckelii, Thielavia, Stachybotrys , базидиомицеты, вызывающие "бурую гниль" - Fomitopsis officinalis, и "белую ГНИЛЬ" - Trametes squaveoleus, Corollus versicolor (Билай и др., 1982).

Важными представителями грибной флоры почвы являются грибы родов Trichoderma, Aspergillus, Penicillium, Geotrichum.

Большинство исследований посвящены различным аспектам лизиса целлюлозы, осуществленного разными видами грибов рода Tricho-derma (Mandels, Reese, 1964; Wood, 1968; Chang, Usami, 1969; Halliwell, Griffin, 1973; Кожемякина и др., 1974; Wood, McCrae, 1975; Sternberg, 1976; Herr et al., 1978; Билай и др., 1982).

Грибы рода Aspergillus уступают по суммарной целлкшазной активности грибам рода Trichoderma, но их преимущество проявляется в том, что в составе их целлкшазных комплексов обнаруживается значительно большая f>-глюкозидазная активность, чем у остальных продуцентов (Ташпулатов, 1967; Legler, 1968; Цы:перович, Сургова, 1972; Хохлова, Исмаилова, 1973; Rudick, Elbein, 1973; Olutiola, 1976; Olutiola, 1977; Sternberg et al., 1977;

Логинова и др., 1978; Логинова, Ташпулатов , 1978; Megam Matsushi-ma, 1974; Workman, Day, 1982; Свистова, 1984).

Большое внимание в исследованиях целлкшолитических комплексов было уделено и представителям рода Penicillium (Selby et al., 1970; Boretti et al., 1972; Калеснева, 1972).

Из термофильных грибов наиболее активно разрушают целлюлозу Chaetomium thermophile, Torula thermophile, в меньшей степени Humicola insolens и Sporotrichum thermophile (Romanelli et al., 1975; Eriksson, Pettersson, 1975; Eriksson, 4 977; Билай и др., 1982).

Нужно подчеркнуть, что для почвенной целлкшозоразрушающей микрофлоры характерна синтрофия. Почвенные грибы разных видов существуют совместно, дополняя друг друга в процессах деградации сложного субстрата.

У ВОДНЫХ грибов Achlya ambisexualis, Saprolegnia parasitica, Dictynchus monosporus обнаружена корреляция между синтезом целлкшаз и ветвлением гиф. Эти процессы находятся под гормональным контролем ( Thomas, 1970; Mullins, 1973).

В большинстве случаев синтез целлкшолитических ферментов грибами фитопатогенами родов Fusarium и Verticillium связан с проникновением возбудителя и развитием патогенеза определенных заболеваний (Cooper, Wood, 1975; Wood, МсСгае,1977; Би-лай и др., 1982).

Целлкшолитические ферменты выделяются рядом бактерий: Ceiiu-lomonas - (Begin, Aisen, 1978); Cytophaga, Rhimnococcus - (Leatherwood, 1973); Pseudomonas fluorescens (Jamane et al., 1970);

Bacteroides succinogenes - (Grolean, Farsberg, 1981); Clostridium thermocellum - (Lee, Blackburn, 1975) И др. У некоторых бактерий таких как с.thermocellum, обнаружено наличие целлобиозофосфо-рилазы, которая пирофосфоролитически расщепляет целлобиозу до глюкозы и глюкозо-1-фосфата, сохраняя энергию глюкозидной связи ( Heale, 1971; Ait et al., 1979).

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Стайкова, Диана Дратнева

выводы

1. Разработана схема очистки J5 -глюкозидаз из гриба A.terreus. Получены гомогенные препараты ферментов, изучены их фи-зшсо-химические и энзиматические свойства.

2. Спектр ji -глюкозидаз гриба A.terreus при конститутивном и индуцированном биосинтезе включает внутриклеточные, связанный с клеточной стенкой и внеклеточные ферменты. Внутриклеточные и аналогично внеклеточные ферменты представлены двумя J> -глюкозидазами с молекулярной массой 142 и 67 кд. Связанная с клеточной стенкой f> -глюкозидаза имеет молекулярную массу 142 кд.

3. Ферменты с молекулярной массой 142 вд идентичны независимо от их локализации и условий культивирования 1риба. Внутриклеточная высокомолекулярная -глюкозидаза является, вероятно, предшественником аналогичных связанного с клеточной стенкой и внеклеточного ферментов.

4. Главной функцией связанной с клеточной стенкойJ3 -глюкозидазы является, по-видимому, образование индуктора ферментов -продукта трансгликозилирования целлобиозы.

5. Согласно аминокислотному составу и содержанию углевода молекулы низкомолекулярных f> -глюкозидаз составляют часть молекул высокомолекулярных ^-глюкозидаз. Вероятно, низкомолекулярные -глюкозидазы образуются из высокомолекулярных ферментов посредством протеолитического расщепления.

6. Образование всех форму9-глюкозидаз гриба A.terreus функционально обусловлено и регулируется концентрацией целлобиозы и глюкозы в среде культивирования.

7. Электронномикроскопическими исследованиями выявлены отличающиеся пути секрецииJb-глюкозидаз и целлкшаз во внеклеточное пространство.

В заключение хотелось бы выразить благодарность

- моим научным руководителям Ивановой Галине Степановне и Кулаеву Игорю Степановичу за постоянное внимание, руководство и помощь во всех вопросах,

- Петрикевич Светлане Борисовне - за постоянное внимание к моей работе, руководство и выполнение электронномикроскошнес-ких исследований,

- Зубрицкой Людмиле Григорьевне и Аданину Владимиру Матвеевичу за постоянное внимание, сердечное отношение и помощь во всех вопросах,

- Белецкой Ольге Петровне - за помощь в работе и оформлении диссертации

- Винокуровой Наталье Григорьевне и Ильченко Валентине Яковлевне за синтез олигосахаридов и определение аминокислотного состава.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Целлюлолитический комплекс гриба Aspergillus terreus состоит из -глюкозидаз (целлобиаз) и эндоглюканаз (целлюлаз). Цел-люлазы из данного продуцента как при слабом конститутивном, так и при индуцированном полимерными и низкомолекулярными соединениями биосинтезе являются, в основном, внеклеточными ферментами, то есть их биосинтез и секреция сопряжены. Уровень индукции биосинтеза, а соответственно и секреции, целлюлаз возрастает при переходе от целлобиозы к полимерным твердым субстратам.

С другой стороны,^-глюкозидазы гриба A.terreus выявляются как внутри клеток (в цитоплазме и периплазме), так и на их поверхности и во внеклеточном пространстве. Соотношение различно локализованных ферментов зависит от структуры индуктора.

В настоящее время не ясно, совпадает ли "истинный" индуктор целлюлаз и р -глюкозидаз A.terreus и насколько отличаются механизмы регуляции биосинтеза ферментов, но уже очевидно, что механизм секреции целлюлаз и р-глюкозидаз A.terreus различен. Судя по цитохимическим данным, целлюлазы A.terreus транспортируются в везикулах через периплазму и клеточную стенку во внеклеточное пространство, а р -глюкозидазы имеют в клеточной стенке локальные места выхода в окружающую среду.

Остановимся подробно наJb -глюкозидазах гриба A.terreus. Анализ изложенных в работе экспериментальных данных свидетельствует, что как при слабом конститутивном, так и индуцированном синтезе качественный спектр р -глюкозидаз не изменяется и включает ферменты 1-^, Is, 1е, П^ и Пе (табл.30). По-видимому, все формы I представляют собой незначительно измененные, а скорее всего идентичные, варианты одного белка. Аналогичным образом сходны

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Стайкова, Диана Дратнева, Пущино

1. Агабекян ЭЛ., Дмитриев В.В., Ратнер Е.Н., Горкина Н.Б. 1982. Ультраструктурные перестройки поверхности гриба Aspergillus terreus при росте на целлюлозосодержащих субстратах. Микробиология, 51, 3, 472-475*

2. Безбородов A.M., Астапович Н.И., 1984. Секреция ферментов у микроорганизмов. М.: Наука.

3. Билай В.И., Билай Т.И., Мусич Е.Р. 1982. Трансформация целлюлозы грибами. Изд-во "Наукова думка".

4. Гайер Т. Электронная микроскопия. Изд-во "Мир", 1979.

5. Грачева И.М., Саловарова В.И., Дуда В.И., Вагабова М.С. 1981. Биосинтез целлкшолитических ферментов культурой Trichoderma longibrachiatum. В кн.: Целлкшазы микроорганизмов. Наука, I30-I4I.

6. Дэвени Т., Гергей Я. 1976. В кн.: Аминокислоты, пептиды и белки. М.: Мир, 116.

7. Дубинин Н.П. 1979. Проблема гена в свете молекулярной организации ээукариотов и прокариотов. Успехи соврем.биол., 87, 331-344.

8. Егоров Н.С. 1976. Практикум по микробиологии. МГУ, 99.

9. Жданов ю.А., Кесслер P.M., Якубова Н.Р., Шерстнев К.В., 1977. Субстратная специфичность J5-глюкозидаз сладкого миндаля. Биохимия, 42, I, 26-33.

10. Иванова Г.С. 1981. Диссертация: Сравнительное исследование внутриклеточных и внеклеточных рибонуклеаз грибов Aspergillus clavatus и Penicillium claviforme.

11. Иванова Г.С., Белецкая О.П., Окунев О.Н., Головлев Е.Л., Кулаев И.С. 1983. Фракционирование целлкшазного комплекса гриба Aspergillus terreus. Прикл.биохим.и микробиол. ДП,3,362-368.

12. Иванова Г.С., Петрикевич С.Б. 1983. Локализация рибонукле-аз В мицелии дтриба Aspergillus clavatus. Микробиология 52, 4, 573-578.

13. Исмаилова Д.Ю., Бирюзова В.И., Логинова Л.Г. 1976. Локализация целлюлазы в клетках мицелия Aspergillus terreus. Микробиология, 45, 5, 777-780.

14. Исмаилова Д.Ю., 1983. Влияние некоторых веществ на биосинтез целлюлазы термолатентного гриба Aspergillus terreus 17Р. Приют, биохим. имикробиол., XI, 5, 676-681.

15. Каверзнева 1971. Стандартный метод определения протео-литической активности для комплексных препаратов протеаз. Прикл. биохим. и микробиол. 12, 2, 225-229.

16. Каткевич Ю.Ю., Каткевич Р.Г. 1979. Целлюлолитические ферменты и их действие на древесную целлюлозу. Химия древесины 5, 9-22.

17. Клесов А.А., Рабинович М.Л., 1978. Ферментативный гидролиз целлюлозы. В кн.: Инженерная энзимология и биоорганический катализ. Итоги науки и техники. сер.Биол.хим., т.12, М.: ВИНИТИ, 49-91.

18. Клесов А.А., Рабинович М.Л., Чурилова И.В., Григораш С.Ю. 1980. Ферментативный гидролиз целлюлозы. I. Активность и компонентный состав целлюлазных комплексов из разных источников. Биоорган, химия, 6, 8, 1225-1242.

19. Клесов А.А., Рабинович М.Л. 1980. Свойства компонентов целлюлазных комплексов из различных источников. Биоорган, химия, 6, 8, 1377-1395.

20. Клесов А.А., Григораш С.Ю. 1982. Ферментативный гидролиз целлюлозы. Регуляторное влияние нерастворимого субстрата наэффективность ферментативной реакции. Биохимия, 47, 3, 409-419.

21. Клесов А.А., Черноглазов В.М., Рабинович М.Л., Синицын А.Р. 1982. Роль адсорбционной способности эндоглюканазы в деградации кристаллической и аморфной целлюлозы. Биоорган.химия, 8, 643-651.

22. Кожемякин 0.11., Лосякова Л.С., Фениксова Р.В. 1974. Биосинтез целлкшазы при культивировании гриба Trichoderma lignorum 60 на твердых средах. Фермент, и спирт, пром-сть, 6, 13-17.

23. Козловская Л.Н. 1980. Автореферат: -Глюкозидазы гриба Geotrichum candidum 30.

24. Колеснева Г.В. 1972. Целлюлоэолитические свойства грибов рода Penicillium Link. Автореф.дис. . канд.биол.наук. Киев.

25. Лобанок А.Р., Бабицкая В.Р. 1976. Мшфобиологический синтез белка на целлюлозе. Минск: Наука и техника.

26. Лобанок А.Г., Зинченко О.Н., Романов С.А. и др. 1976. О биогенезе целлкшолитических ферментов Trichoderma lignorum на средах с "индуктором". Микробиология, 45, 5, 620-624.

27. Лобанок А.Г., Романов С.Л., Зинченко О.Н., Нестеренко В.Н. I976S Характеристика свойств целлюлазных комплексов, продуцируемых грибом Trichoderma lignorum QM 534 на средах с целлюлозой и лактозой. Прикл. биохим. и микробиол., 12, 2, 227-232.

28. Лобанок А.Г., Павловская Н.И. 1977. О конститутивном синтезе целлкшазы у Trichoderma lignorum. Микробиология, 46, 428-434.

29. Логинова Л.Г., Зелтинь Р.П., Калмыкова Г.Я. и др. 1970. Целлюлолитические ферменты термолатентного гриба Aspergillus terreus 17Р. Микробиол. пром-сть, I, 22-23.

30. Логинова Л.Г., Гу Ва Е.П., Исмаилова Д.Ю., Бурденко Л.Р. 1978. Биосинтез целлкшолитических ферментов и ксиланаз во вреш роста гриба Aspergillus terreus 17Р. Прикл. биохим. и микро-биол., 14, 4, 485-493.

31. Логинова Л.Г., Ташпулатов Ж. 1978. Целлкшолитическая активность термолатентного гриба Aspergillus terreus 17Р. при поверхностном культивировании. Прикл. биохим. и микробиол., Х1У, 3, 361-365.

32. Максимов В.М. 1981. Обнаружение реакции трансглшсозшшрова-ния при действии препаратов целлюлаз Trichoderma koningii и Trichoderma viride. Прикл. биохим. и МШфОбиап., 17, 563-568.

33. ОкуневО.Н., Свистова И.Д., Жеребцов Н.А. 1983. Биосинтез целлюлазного комплекса у некоторых микромицетов. Микология и фитопатология, 17, 493-499.

34. Окунев О.Н., Свистова И.Д., Жеребцов Н.А., Головлев Е.Л. 1983. Индукция эндо-1,4-^-глюканазы, экзо-1,4-^-глюкозидазы и целлобиазы у Aspergillus terreus. Микробиология, 52, 202208.

35. Панин А.Л., Белецкая О.П., Иванова Г.С. 1983. Изменение состава 1,4-у^-эндоглюканаз в процессе роста гриба Aspergillus terreus. ФЕМО: Регуляция микробного метаболизма факторами внешней среды. Тезисы докладов и сообщений. Пущино, 193-134.

36. Практикум по биохимии. Изд-во МГУ. 1979. с.90. под ред. Мешковой Н.П., Северина С.Е.

37. Рабинович М.Л., Клесов А.А., Черноглазов М.В., Нгуен Ван Вьет., Березин И.В. 1981. Эффективность адсорбции целлкшолитических ферментов фактор, определяющий реакционную способность нерастворимой кристаллической целлюлозы. ДАН СССР,260,6,1481-1485.

38. Рабинович М.Л., Клесов А.А., Григораш С.Ю., Калтша И.А., Черноглазов В.М. 1982. Ферментативный гидролиз целлюлозы. У1. Адсорбция целлобиазы целлкшазного комплекса на целлюлозе. Биоорган. химия, 8, I, 84-95.

39. Рабинович М.Л,, Нгуен Ван Вьет, Клесов А.А, 1982. Адсорбция целлюлолитических ферментов. Два типа взаимодействия ферментов с нерастворимым субстратом. Биохимия, 47, 3, 465-477,

40. Родионова Н.А., Румянцева Г.Н., Тиунова Н.А., Мартинович Л.И., Бахтадзе Л.Н. 1977. j> -Глюкозидазы из гриба Geotrichum candidum ЗС. Биохимия, 42, I, 43-49.

41. Родионова Н.А. 1981, Ферментативное расщепление целлюлозы В кн.: Целлкшазы микроорганизмов. 4-40. Изд-во Наука.

42. Румянцева Г.Н., Родионова Н.А. 1982. Свойства J> -глюкозидазы из целлюлолитического гриба Geotrichum candidum 30. Биохимия, 47, I, I08-114.

43. Свистова И.Д., Шульга А.В., Окунев О.Н., 1983. Синтез и секреция компонентов целлкшазного комплекса у Aspergillus terreus Микробиология, 52, 414-421.

44. Свистова И.Д., 1984. Автореферат Биосинтез целлюлаз Aspergillus terreus.

45. Ташпулатов Ж. 1967. Целлюлолитические ферменты термотолерантного и мезофильного грибов, близких к Aspergillus fumigatus. В кн.: Ферментативное расщепление целлюлозы. М.: Наука, 92-102.

46. Феофилова Е.П. 1983. Клеточная стенка грибов. Изд-во Наука, Москва.

47. Хохлова Ю.М., Исмаилова Д.Ю. 1973. Выделение целлкшозолити-ческих ферментов и ксиланазы из фильтрата культуральной жидкости термотолерантного гриба Aspergillus terreus 17Р. Прикл. биохим. имикробиол., 9 , 2, 203-208.

48. ЩПЕРОВИЧ О.С., СУРГОВА Т.М. 1972. Выделение целлкшозолити-ческого комплекса из гриба Aspergillus awamori, его ферментный состав и некоторые свойства. Укр.биохим.журн., 44, 6, 792-797.

49. Юркевич В.В. 1979. Пути рефляции биосинтеза ферментов у микроорганизмов. В кн.: Биосинтез ферментов микроорганизмами; очистка, свойства, иммобилизация ферментов. М.: Наука, 5-20.

50. Abe М., Higaslii S. 1982. р -Glucosidase and ft -galactosidase from the periplasmic space of Rizobium trifolii. J. Gen. Appl.Mikrob28.6,551-562

51. Ait IT., Grenzet IT., Oattaneo J. 1979. Characterization and purification of thermostable Ji -glucosidase from Clostridium ther-mocellum. Biochem.Biophys.Res.Commun., 90, 2, 537-546.

52. Ait IT., Grenzet IT., Cattaneo J. 1982. Properties ofJS> -glucosidase purified from Clostridium thermocellum. J.Gen.Microbiol., 128, 3, 569-577.

53. Allen A.L., Sternberg D. 1980. J5 -Glucosidase production by Aspergillus phoenicis in stirred-tank fermentors. Biotechnol.Bio-eng.Symp., 10, 189-197.

54. Allen A.L., Mortensen R.E. 1981. Production of cellulase from Tri-choderma reesei in fed batch fermentation from soluble carbon sources. Biotechnol. Bioeng., 23, 11, 2641-2645.

55. Andrews P. 1964. Estimation of molecular weights of proteins by sephadex gelfiltration. Biochem.J., 91, 222-226.

56. Ayers A.R., Ayers S.B., Erriksson K.E. 1978. Cellobiose oxidase, purification and partial characterization of a hemoprotein from Sporotrichum pulverulentum. Eur.J.Biochem., 90, 171-181.

57. Bacon J.S.D. 1979. Factors limiting the action of polysaccharide degrading enzymes in microbial polysaccharides and polysaccha-rases /Berkeley R.C.W., Gooday G.W., Ellwood D.C. eds. p.269-284.

58. Bal A.K. Cellulase in: Electron microscopy of enzymes /Hayat M.A. ed. Van Nostrand Reinhold, LT.Y., Cininnati, Toronto, London, Melbourne, 3, 68, 1974

59. Bause E., Legler G. 1980. Isolation and structure of a tryp-tic glucopeptide from the active site of J) -glucosidase A^ from Aspergillus wentii. Biochem.Biophys.Acta, 626, 2, 459-465»

60. Begnin P., Eisen H. 1978. Purification and partial characterization of three extracellular cellulases from Cellulomonas sp. Eur.J.Biochem., 87, 525-531.

61. Бегу B. 1975. Cellulase location in Cellvibriofulvus. Canad. J.Microbiol., 21, 51-57.

62. Berg В., Hofsten A.V. 1976. The ultrastructure of the fungus Trichoderma viride and investigation of its growth on cellulose. J.Appl.Bacteriol., 41, 2, 395-399.

63. Berg В., Pettersson L.G. 1977. Location and formation of cellulase in Trichoderma viride. J.Appl.Bacteriol., 42, 1, 65-67.

64. Berghem L.E.R., Pettersson L.G., Axio-Fredriksson M.B. 1973. The mechanism os enzymatic cellulose degradation. Purification, and some properties of two different 1,-glucan glucohydrolases. Eur.J.Biochem., 37, 1, 21-30.

65. Berghem L.E.R., Pettersson L.G. 1974. The mechanism of enzymatic cellulose degradation. Isolation and some properties of a j?)-glucosidase from Trichoderma viride. Eur.J.Bichem.,46,295-305.

66. Berghem L.E.R., Pettersson L.G., Axio-Fredriksson U.В.,1975. The mechanism of enzymatic cellulose degradation. Characterization and enzymatic properties of a j> -1,4-glucan-cellobiohydro-lase from Trichoderma viride. Eur.J.Biochem., 53, 55-62.

67. Berghem L.E.R., Pettersson L.G., Prederiksson V.B.A. 1976. The mechanism of enzymatic cellulose degradation. Purification and some properties of two different 1,4-^-glucan-glucanohydrolases from Trichoderma viride. Eur.J.Biochem., 61, 621-630.

68. Bisaria V.S., Ghose Т.К. 1981. Biodegradation of cellulosic materials: substrates, microorganisms, enzymes and products. Enzyme Microbial Technol., 3, 2, 90-104.

69. Boretti G., Teruzzi M.L., Spalla C. 1972. Cellulase from Penicillium iriensis. Ger.offen., 2, 133, 544.

70. Boretti G., Gorofano L., Montecuchi P., Spalla C. 1973. Cellulase production with Penicillium iriense. Arch. Microbiol., 92, 3, 189-200.

71. Borgia P., Sypherd P.S. 1977. Control of J> -glucosidase synthesis in Mucor racemosum. J.Bacterid., 130, 812-817.

72. Borgia P.Т., Mehnert D.W. 1981. Purification and propertiesrobiol., 8110, 112.

73. Borgia P., Mehnert D.W. 1982. Purification of a soluble and a wall bound y^1-glucosidase from Mucor racemosus. J.Bacteriol., 149, 2, 515-522.

74. Brandford M.M. 1976. A rapid and sension method for the quantitatives of protein utilizing the principle of protein dye-binding. Ann.Biochem., 72, 1, 248-254.from Mucor racemosus. Abstr.annu.mut.am.soc.mic

75. Brovm D.E., Halstead D., Howard P. 1975. Studies on the biosynthesis of cellulase by Trichoderma viride QM9123. In: Symp. on the Enzr.Hydrol.of Cellulose, Aulanno, Finland, 137-153.

76. Bruyne C.K.K., Berts G.M., Gussen R.L. 1979. Hydrolysis of aryl-^5-D-glucopyranosides and J) -D-xylopyranosides by a induced J) -D-glucosidase from Stachyleotrys arta. Eur.J.Biochem., 102, 257-267.

77. Bucht В., Eriksson K.E. 1969. Extracellulase enzyme system utilized by the rot. fungus Stereum senguinolentum for the brecdovm of cellulose. 4. Separation of cellubiose and aryl-y0-glucosidase activity. Arch.Biochem.Biophys., 129, 2, 416-420.

78. Canevascini G., Condray M.R., Rey J.R., Southgate R.J.G., Meier H. 1979. Induction and catabolite repression of cellulase synthesis in the thermophile fungus Sporotrichum thermophile. J. Gen.Microbiol., 110, 291-303.

79. Canevascini G., Meyer H.P. 1979. J?> -Glucosidase in the cel-lulolytic fungus Sporotrichum thermophile Apins. Experimental Mycology 3, 203-214.

80. Canevascini G., Condray M.R., Rey J.R., Southgate R.J.G., 1980. Induction and catabolite repression of cellulase synthesis in the thermophilic fungus Sporotrichum thermophile. J.Gen.Mic-robiol., 110, 291-303.

81. Canevascini G., Franchebond D., Meier H. 1983. Fructionation and identification of cellulases and other extracellular enzymes produced by Sporotrichum (Chrysosporium) thermophile during growth on cellulose or cellobiose. Can.J.Microbiol., 29, 1071-1080.

82. Capon В., Thomson I,VI, 1979. Studies on cellulolytio enzymes. 1. The use of 3,4 dinitrophenyl glycosides as substrates. Bioorg.Chem., 8, 147-174.

83. Chang P.Z.J., Trivithich J.R. 1974. How important is secretion of exoenzymes through apical cell of fungi. Arch.Microbiol., 101, 281-293.

84. Chapman C.M., Loewenberg J.R. 1976. Ultracytochemistry of cellulase synthesis in the fungus Trichoderma. Ann.Mtg.Suppl. Plant.Physiol., 57, 70.

85. Chapman C.M., Loewenberg J.R., Schaller M.J., Piechura J.E. 1983. Ultrastructural localization of cellulase in Trichoderma reesei using iimmmocytochemistry and enzyme cytochemistry. J. histochem. and cytochem. 31, 12, 1303-1366.

86. Chang W.S., Usam S. 1969. Production and utilization of Trichoderma cellulase by submerged culture. J.Ferment.Technol., 47, 447-455.

87. Coleman G., Brown S., Stormoth D.A. 1975. A. model for the regulation of bacterial extracellular enzyme and toxin biosynthesis. J.Theor.Biol., 52, 143-148.

88. Cooney C.L., Wang D.L.C., Wang S.D., Gordon J., Jimines M. 1978. Somultaneous cellulose hydrolysis and ethanol production by a cellulolytic bacterium. Biotechnol.Bioeng.Symp. 8, 103-114.

89. Cooper R.M., Wood R.K.S. 1975. Regulation of synthesis of cell wall degrading enzymes of Verticillium albo-atrum and Fusa-rium oxysporum f-sphycopersici. Physiol.Plant Pathol., 5, 1, 135156.

90. Cowling E.B., Brown W. 1969. Structural features of cellulo-sic materials in relation to enzymatic hydrolysis in Cellulases and their application, p.152-187.

91. Davis B.J. 1964. Disc electrophoresis. II. Method and application to human serum proteins. Annals of the N Y Acad.of Sci., 124, 404-427.

92. Dekker R.F.H. 1981. Induction, localization and characterization of p -D-glucosidases produced by a species of Monilia, J. Gen.Microbiol., 127, 177-184.

93. Demain A.L. 1972. Theoretical and applied aspects of enzyme regulation and biosynthesis in microbial cells. Biotechnol. and Bioeng. Symp., 3, 21-32.

94. Desai J.D., Desai A.J., Patel IT.P. 1982. Production of cel-lulases and ^-glucosidase by Shake culture of Scytalidium ligni-cola CD48. J.Ferm.Technol., 60, 2, 117-124.

95. Desai D., Ray R.M., Patel N.P. 1983. Purification and properties of extracellular J> -glucosidase from Scytalidium lignicola. Biotechnol.Bioeng., VXXV, 1, 307-313.

96. Desphande V., Eriksson K.E., Pettersson В., 1978. Production purification and partial characterization of 1,4-^ -glucosidase enzyme from Sporotrichum pulverulentum. Eur.J.Biochem., 90, 1, 191-198.

97. Desrochers M., Jurasek L., Paice M.G. 1981. High production of J> -glucosidase commune isolation of the enzyme and effect of the culture filtrate on cellulose hydrolysis. Appl.Env.Microbiol. 41, 1, 222-228.

98. Dickerson A.G., Baker R.C.F. 1979. The binding of enzyme to fungal j) -glucans. J.Gen.Microbiol., 112, 67-75.

99. Dimond R.L., Loomis W.F. 1976. Structure and function glucosidases in Dictyostelium discoideum. J.Biol.Chem., 251, 10, 2680-2687.

100. Dubois M., Gilles K.A., Hamilton J.K., Roberts P.A. Smith P. 1956. Colorimetric method for determination of sugar and related substanc s. Anal.Chem., 28, 3, 350-356.

101. Duerksen J.D., Halvorson H. 1958. Purification and properties of a inducible ^-glucosidase of yeast. J.Biol.Chem., 233, 11131120.

102. Eberhart B.M., Beck R.S. 1970. Localization of the J} -gluco-sidases in Neurospora crassa. J.Bacterid., 101 , 408-417.

103. Eberhart B.M., Beck R.S. 1973. Induction ofy^-glucosidases in Neurospora crassa. J.Bacterid., 116, 1, 295-303.

104. Eberhart B.M., Beck R.S., Goolsby K.M. 1977. Cellulase of ITeurospora crassa, J.Bacteriol., 130, 181-186.

105. Enary T.M., ITiki-Paavola M.L., Lappalainew A., ITimmi M. 1981. Purification of Trichoderma reesei and Aspergillus niger J> -glucosidases. J.Appl.Biochem., 3, 157-163.

106. Enzyme Nomenclature Recommendation. 1978. of the nomenclature Committee of the JUB. Academic Press, N.Y. 1979.

107. Emert G.H., Gum E.K., Lang J.A., Lin Т.К. Brown R.D. 1974. Cellulases. In: Pood related enzymes. Wash.: Amer.Chem.Soc., 79100. Adv.Chem., Ser. 136.

108. Emert G.H., Brown R.D. 1977. Purification and characterization of cellubiase. In: Proceedings of a Symp. on Bioconv. of Cellulosic Substances into Energy, Chemicals and Microbial Protein. Delhi.Aroon Paril et Thomson Press, 153-154.

109. Eriksen J., Goksfur J. 1977. Cellulase from Chaetomium ther-mophile var.dissitum. Eur.J.Biochem., 77, 445-450.

110. Eriksson K.E., Holimarlc B.H. 1969. Kinetic studies of the action of cellulase upon sodium carboxymethyl cellulose. Arch. Biochem. and Biophys., 133, 22, 233-237.

111. Eriksson K.E., Goodell E.W. 1974. Pleiotropic mutants of the wood-rotfing fungus polyporus adustus packing cellulase,mannanase and xylanase. Can.J.Microbiol,, 20, 3, 371-378.

112. Eriksson K.E., Pettersson G., Westermark U. 1974. Oxidation: An important enzymes reaction in fungal degradation of cellulose FEBS Lett., 49, 2, 282-295.

113. Eriksson K.E. 1978. Enzyme mechanisms involved in cellulose, hydrolysis by the rot fungus Sporotrichum pulverulentum. Bio-technol.Bioeng., 20, 317-332.

114. Eriksson K.E., Hamp S. 1978. The regulation of endo-1,4-^ glucanase production in Sporotrichum pulverulentum. 90, 183-190.

115. Eriksson E.K. 1982. Degradation of cellulose. Experientia, 38, 2, 156-159.

116. Parkas V., Labudova I., Bauer S., Ferenczy L., 1981. Preparation of mutant of Trichoderma viride with increased production of cellulase. Fmlia microbiologica, XXVI, 129-132.

117. Fevre M. 1977. Subcellular localization of glucanase and cellulase in Saprolegnia monoica. J.Gen.Microbiol., 103, 287295.

118. Francis G.L., Gawthorne S.C. 1978. Factors affecting the activity of cellulase isolated from the rumen digests of sheep. Appl.Anv.Microb., 36, 643-649.

119. Freeman A., Blank Т., Aharonovitz У. 1982. Protein determination of cells immobilized in cress-linked synthetic gels. Eur.J.Appl.Microbiol., Biotechnol., 14, 1, 13-17.

120. Hagerdal B.G.R., Ferchak J.D., Rye E.K. 1978. Cellulolytic enzyme system of Thermoactinomyces sp. grown on microcrystalline cellulose. Appl.Env.Microbiol., 36, 606-612.

121. Hakansson U., Fagerstam L., Pettersson G.L., Andersson L. 1978. Purification and characterization of a lowmolecular weight 1,4-y5-glucan-glucanohydrolase from the cellulolytic fungus Trichoderma viride QM9414. Biochim. Biophys.Acta, 524, 2, 385392.

122. Halliwell G., Griffin M. 1974. The nature and mode of action of the cellulolytic component G1 of Trichoderma kQningii on native cellulose. Biochem.J., 135, 587-594.

123. Halliwell G., Griffin M. 1978. Affinity chromatography of the cellulase system of Trichoderma koningii. Biochem.J., 169, 713-715.

124. Halliwell G. 1979. Microbial -glucanases. Progr. ind. Microbiol., 15, 1-60.

125. Han Y.W., Srinivasan V.R. 1969. Purification and characterization of J -glucosidase of Alcaligenes faecalis. J.Bact., 100, 1355-1363.

126. Hayashida S., Yoshioka H. 1980. The role of carbohydrate moiety on thermostability of cellulases from Humicola insolens YH-8. Agric.Biol.Ghem., 44, 8, 1721-1728.

127. Herr D., Baumer P., Dellweg H. 1978. Purification and properties an extracellular J> -glucosidase from Lenzites trabea. Eur.J.Appl.Microbiol, and Biotechnol., 5, 29-36.

128. Herr D., Luck G., Dellwey H. 1978. Formation of cellulases and degradation of cellulose by several fungi. J.Ferment.Теch-nol., 56, 4, 273-278.

129. Hill T.W., Mullius J.Т. 1980. Hyphal tip growth in Achlya ambisexualis. II. Subcellular localization of cellulase and associated enzymes. Can.J.Microbiol., 26, 9, 1141-1146.

130. Hirayama Т., Harie S., ITagayama H., Matsuda K. 1978. Studies an cellulases of a phyto pathogenic fungus, Pyricularia oryzae. II. Purification and properties of a J> -glucosidase. J.Biochem., 84, 27-37.

131. Hirayama Т., ITagayama H., Matsuda K. 1979. Studies on cellulases of a phytopathogenic fungus Pyricularia oryzae cavara. III. Multiplicity of ft-glucosidase and purification and properties of second component. J.Biochem., 85, 2, 591-599.

132. Hirayama Т.Н., Matsuda K. 1980. Studies on cellulases of a phytopathogenic fungus Pyricularia oryzae cavara. IY. Kinetic studies of J> -glucosidases. J.Biochem., 87, 4, 1203-1208.

133. Hofsten B. 1975. Topological effects in enzymatic and microbial degradation of highly odered polysaccharides. In: Symp.on enzymatic hydrolysis of cellulose. Helsinki, 281-295.

134. Holbein B.E., Kidby D.K. Trypsin-ancoupled synthesis and secretion of yeast invertase: implications for the mechanism of secretion. Can.J.Microbiol., 1979, 25, 528-534.

135. Hough L. 1954. Analysis of mixtures of sugar by paper and cellulose column chromatography. In: Methods of Biomedical, Analysis Glick (ed.) In derscience Publishers Inc. New York, 1, 205-242.

136. Hultberg В., Lindsten I., Sjoblad S. 1976. Molecular forms and activities of glycosidases in cultures of Amniotic fluid cells. Biochem.J., 155, 3, 599-605.

137. Hulme M.A., Stranks D.W. 1970. Induction and the regulation of production of cellulase by fungi. Nature 226, 469-470.

138. Hulme M.A., Stranks D.W. 1971. Regulation of cellulase production by Mycothecium verrucaria grown on non cellulosic substrates. J.Gen.Microbiol., 69, 145-155»

139. Hurst P.L., ITielsen J., Sullvan P.A., Shepherd M.G. 1977. Purification and properties of cellulase from Aspergillus niger. Biochem.J., 165, 1, 33-41.

140. Gander J.E. 1974. Fungal cell wall glycoproteins and pepti-do-polysacharides. Ann.Rev.Microbiol., 28, 103-119.

141. Garibaldi A., Gibbins L.1T. 1975. Partial purification and properties of a J -glucosidase from Erwinia herbicola. 146. Can. J.Microbiol., 21, 513-517.

142. Ghose I.K., Kostick J.A. 1970. A model for continuous enzymatic saccharification of cellulose with simultaneous removal of glucose syrop. Biotechnol. and Bioeng., 12, 6, 921-946.

143. Ghose Т.К., Pathak A.U., Bisaria V.S. 1975. Kinetic and dynamic studies of Trichoderma viride cellulase production. In: Symposium on Enzymatic Hydrolysis of Cellulose (ed. by Bailey M., Enari T.M., Linko M.) 111-136, Helsinki, Finland.

144. Ghose Т.К., Bisaria V.S, 1979. Studies on the mechanism of enzymatic hydrolysis of cellulosic substances. Biotechnol.Bioeng., 21, 1, 131-146.

145. Ghosh A., Al-Raiai S., Ghosh B.K. 1982. Increased endoplasmic reticulum content of a mutant of Trichoderma reesei (RUT-C30) in relation to cellulase synthesis. Enzyme Microb. Technol. 4, 110.

146. Goksfyr J., Eriksen J. 1980, Cellulases. Econ.Microbiol., 5, 283-340. Acad.Press, London.

147. Gong C.S., Ladish M.R., Tsao G.T. 1977. Cellobiase from Trichoderma viride: purification, properties, kinetics and mechanism. Biotechnol.Bioeng., 19, 959-981.

148. Gong C.S., Chen L.P., Tsao G.T. 1979. Affinity chromatography of endoglucanase of Trichoderma viride by concanavalin agarose. Biotechnol. and Bioeng., 21, 2, 167-172.

149. Gong C.S., Tsao T.G. 1979. Cellulase and biosynthesis regulation. Ann.Report Perm. Process, 3, 111-140.

150. Glenn D. 1976. Production of extracellular proteins by bacteria. Ann.Rev.Microbiol. 30, 41-61.

151. Gritzali M., Brown D. 1979. The cellulase system of Trichoderma. Relationships between purified extracellular enzymes from induced or cellulose grown cells. Adv.Chem.Ser., 181, 237-260.

152. Grolean D., Parsberg C.W. 1981. Cellulolytic activity of the rumen bacterium bacteroides succinogens. Can.J.Microbiol., 27, 517-530.

153. Grover A.K., Mac Murchial D., Cushley R.J. 1977. Studies on almond emulsin ji -D-glucosidase. I. Isolation and characterization of a bifunctional isozyme. Biochem.Biophys.Acta, 482, 98-108.

154. Grover A.K., Cushley R.J. 1977. Studies on almond emulsin ^-D-glucosidase. II. Kinetic evidence for independent glucosidase and galactosidase sites. Biochim. et Biophys.Acta, 482, Ш9-124.

155. Gum E.K., Brown R.D. 1977. Comparison of four purifiedextracellular 1,4-y3-D-glucan-cellobiohydrolase enzymes from Trichoderma viride. Biochim.Biophys.Acta, 492, 225-231.

156. Gupta D.P., Heale J.B. 1971. Induction of cellulase (Cx) in Verticillium albo-atrum. J.Gen.Microbiol., 63, 163-173.

157. Karnovsky M.J. 1965. A formaldehydeglutaraldehyde fixation of high osmolaryty for use in electron misroscopy. J.Cell.Biol. 27, 137A.

158. Jiuseppe Hsu K.S., Seegal B.C. 1967. Immunoferritin

159. Kenney W.C. 1974» Molecular nature of isozymes. Horisons Biochem.Biophys., 1, 38-61.

160. Kim B.H., Wimpenny Y.W.T. 1981. Growth and cellulolytic activity of Cellulomonas flavigena. Can.J.Microbiol., 27, 12, 1260-1266.

161. Kiss L., Berki L.K., Uanasi P. 1981. Evidence for a single catalytic and two binding sites in the almond emulsin j!> -D-glu-cosidase molecule. Biochem.Biophys.Res.Commun., 98, 3, 792-799.

162. Klyosov A.A., Rabinowitch M.L. 1980. Enzymatic conversion of cellulose to glucose: present state of the art and potential In: Enzyme Engineering Future Directions /Wingard L.B., Berezin I.Y., Klyosov A.A., eds. 83-165. Plenum Press, Hew York.

163. Kubicek G.P. 1981. Release of carboxymethyl-cellulase and J) -glucosidase from cell walls of Trichoderma reesei. Eur.J. Appl.Microbiol.Biotechnol., 13, 226-231.

164. Kubicek C.P. 1982. J> -glucosidase excretion by Trichoderma pseudokoningii. Correlation with cell wall bound J> -1,3-gluca-nase activities. Arch.Microbiol., 132, 349-354.

165. Kubicek C.P. 1983• J3 -glucosidase excretion in Trichoderma strains with different cell wall bound Jb -1,3-glucanase activities. Can.J.Microbiol., 29, 2, 163-169.

166. Mac Kenzie C.R., Bilous D. 1982. Location and kinetic properties of the cellulase system of Acetovibrio cellulolyticum. Can.J.Microbiol., 28, 1158-1164.

167. Maclachlan G.A. 1976, A potential role for endocellulase in cellulose biosynthesis. Appl.Polym.Symp., 28, 645-658.

168. Maguire R.J. 1977. Kinetics of hydrolysis of cellobiose and p-nitrophenyl-^ -D-glucoside by cellobiase of Trichoderma viride. Can.J.Biochem., 55, 19-26.

169. Mahadevan P.R., Mahadkar U.R. 1970. Role of enzyme in growth and morphology of Ueurospora crassa: cell wall bound enzyme and their possible role in branching . J.Bacteriol., 101, 941-947.

170. Mandels M., Reese E,T., 1964. Fungial cellulases and the microbial decomposition of cellulosic fabric. In: Developments in industrial microbiology. 5, 5-20.

171. Mandels M., Weber J. 1969. The production of cellulases. Adv.Chem. Ser., 85, 3, 391-414.

172. Mandels M., Kostic J.A., Parizek R. 1971. The use of adsorbed cellulase in the continuous conversion of cellulose to glucose. J.Polym.Sci., 36, 2, 445-459.

173. Mandels M«, Sternberg D., Andreotti R. 1975. Growth and cellulase production by Trichoderma. Symp.Enz.hydrolysis of cellulose. Finland, p.81.

174. Mantasala P., Zalkin H. 1980. Extracellular and membrane-bound proteases from Bacillus subtilis. J.Bacteriol. 141, 2, 493-501.

175. Margaritis A., Merchant R. 1983. Xylanase CM-cellulase and avicelase production by the thermophilic fungus Sporotrichum thermophili. Biotechnol.Lett., 5, 4, 265-270.

176. Markert C.L. 1975. Biology of isozymes. In: Isozymes molecular structure /Markert C.L. ed. p.1-19. Acad.Press, New York.

177. May B.K., Elliott W.H. 1968. Selective inhibition of extracellular enzymes synthesis by removal of cell wall from Bacillus subtilis. BBA, 166, 532-537.

178. Mayer H.P., Canevascini G. 1981. Separation and some properties of two intracellular -glucosidases of Sporotrichum (Chrysosporum) thermophile. Appl.Env.Microbiol., 41, 924-931.

179. McHale A., Coughlan M.P. 1981. The cellulolytic system of Talaromyces emersonii. Identification of the various compo produced during growth on cellulosic media. Biochim.Biophys. Acta, 662, 145-151.

180. McHale A., Coughlan M.P. 1981. The cellulolytic system of Talaromyces egiersonii. Purification and characterization of the extracellular and intracellular -glucosidases. BBA, 662, 152159.

181. McHale A., Coughlan M.P. 1982. Properties of the -gluco-sidases Talaromyces emersonii. J.Gen.Microbiol., 128, 10, 23272331 .

182. Mega Т., Matsushima J. 1979. Comparative studies of 3 exo-p -glucosidases of Aspergillus oryzae. J.Biochem., 85, 335-342.

183. Miller G.L., Dean J., Blum R. 1960. A study of methods for preparing oligosaccharides from cellulose. Arch.Biochem. and Biophys., 91, 21-26.

184. Mishra Ch., Vaidya M., Rao U. Deshpande V. 1983. Purification and properties of two exo-cellubiohydrolases from celloly-tic culture of Fusanium lini. Enz.Microb.Technol., 5, 6, 430-434.

185. Montenecourt B.S., Eveleigh D.E. 1977. Preparation of mutants of Trichoderma reesei with enhanced cellulase production. Appl.Environ.Microbiol., 34, 777-782.

186. Montenecourt B.S., Eveleigh D.E. 1979. Production and characterization of high yielding cellulase of Trichoderma reesei. TAPPI Annu.Meet.Proc., 101-108.

187. Moreira A.R., Phillips J.A., Humphrey A.E. 1981. Production of cellulases by 3?hermomonospora sp. Biotechnol.Bioeng., 23, 6, 1339-1347.

188. Mulins J.T. 1973. Lateral branch formation and cellulase production in the water molds. Mycologia, 65, 1007-1014. Murao S., Kanamoto J., Arai M. 1979

189. J.Ferment. Technol., 57, 151

190. Nakayama M., Tomita Y., Suzuki H., ITisizawa K. Partial proteolysis of substrate cellulase components from Trichoderma viride and the substrate specificity on the modified products. J.Biochem., 79, 955-966.

191. Ng Т.К., Zeilcus I.G. 1981. Purification and characterization of an endoglucanase (1,4-y® -D-glucan-glucohydrola3e) from Clostridium thermocellum. Biochem.J. 199, 341-350.

192. Nisizawa Т., Suzuki H., Nakayama M., Nisizawa К. 1970. Induction formation of cellulase by sophorose in Trichoderma viride. J.Biochem., 70, 375-393.

193. Nisizawa K., Tomita Y., Kanda Т., Suzuki A., Wakabayashi K. 1972. Substrate specificity of C^ and Cx cellulase components from fungi. Perm.Technol.Today, 719-725.

194. Nisizawa K. et al. 1974. Biogenesis of multiple cellulase components of Pseudomonas fluorescens var.cellulosa. J.Biochem, 75, 531-540.

195. Nisizawa K. et al. 1976. Partial proteolysis of some cellulase components from Trichoderma viride and the substrate specificity of the modified products. J.Biochem., 79, 955-956.

196. Nolan R.A., Bal A.K. 1974. Cellulase localization in hyphae of Achlya ambisexualis. J.Bacterid. 117, 840.

197. Nummi M., Nilcu-Paavola M.L., Lappalainen A., Enari T.M., Raunio D. 1983. Cellobiohydrodase E.C.3.2.1.91. from Trichoderma reesei. Biochem.J., 215, 3, 677-684.

198. O'Day D.H., Paterno G.D. 1979. Intracellular and extracellular CM-cellulase and J -glucosidase activity during germination of Polysphondylium pollidum microcystis. Arch.of Microbiol., 121, 231-234.

199. Okada G. 1975. Enzymatic studies on a cellulase system of Trichoderma viride. II. Purification and properties of two cellulase. J.Biochem. 77, 33-42.

200. Okada G., Nasizawa K. 1979. Enzymatic studies on a cellulase system of Trichoderma viride. III. Transglucosilation properties of two cellulase components of random type. J.Biochem., 79, 2, 297-306.

201. Olutiola P.O. 1976. Cellulase enzymes in culture filtrates of Aspergillus flavus. Trans.Brit.Mycol.Soc. 67, 2, 265-268.

202. Olutiola P.O. 1977. Cellulolytic enzymes in culture filtrates of Aspergillus clavatus. J.Gen.Microbiol., 102, 27-31.

203. Palade G. 1975. Intracellular aspects of the process of synthesis. Science, 189, 347-358.

204. Parr S.R. 1983. Some kinetic properties of the Jb -D-gluco-sidase (cellobiase) in a commercial cellulase product from Penicillium funiculosum and its relevance in the hydrolysis of cellulose. Enz.Microb.Technol., 5, 6, 457-462.

205. Parry J.В., Stewart J.C., Heptinstall J. 1983. Purification of the major endoglucanase from Aspergillus fumigatus. Eur.Bio-chem.J., 231, 2, 437-444.

206. Peitersen IT., Medeiros J., Mandels M. 1977. Adsorption of Trichoderma cellulase on cellulose. Biotechnol. Bioeng., 19, 7, 1091-1094.

207. Peiterson N., Ross E.V/. 1977. Mathematical model for enzymatic hydrolysis and fermentation of cellulase by Trichoderma. Biotechnol. Bioeng., 21, 6, 997-1017.

208. Petre I., Longin R., Millet I. 1981. Purification and properties of an endo-1,4,^-glucanases from Clostridium thermocel-lum. Biochim.Son.Trans, 9, 2, 167.

209. Pettersson L.G. 1975. The mechanism of enzymatic hydrolysis of cellulose by Trichoderma viride. Symp. on Enz.hydrolysis of cellulose. Finland,225-230.

210. Reese E.T., Sin R.G.H., Levinson H.S. 1950. The biological degradation of soluble cellulose derivatives and its relationship to the mechanism of cellulose hydrolysis. J.Bacterid., 59, 4, 485-497.

211. Reese Б.Т. 1977. A degradation of polymeric carbohydrates by microbial enzymes. In: Recent advances in phytоchemistry, 11, 311-365.

212. Reyes P., Lahoz R., Val Moreno A. 1981. Synthesis of ft-1,3-glucanase and -H-acetylglucosaminidase during autolysis of Neurospora crassa. J.Gen.Microbiol., 126, 347-353.

213. Rho D., Desrochers M., Jurasek L., Dignez H., Defaye J. 1982. Induction of cellulase in Schizophillum commune thiocel-lobiose as a new inducer. J.Bacteriol., 149, 1, 47-53.

214. Rodionova N.A. 1977. Cellulolytic enzymes from Geotrichum candidum. Abstr. of Int. Symp. on Biocon.of cell.substrat• into energ.chemic. and microb.protein /Ed. Т.К.Ghose, Delhi, Pebr. 21-23.

215. Romanelli R.A., Houstan C.W., Barnett S.M. 1975. Studies on thermophilic cellulolytic fungi. Appl.Microbiol., 30, 2, 276-281.

216. Roth W.W., Srinivasan V.R. 1978. Affinity chromatographic purification of Jb -glucosidase of Candida guilliermondii. Prep. Biochem., 8, 57-71.

217. Rudick M.J., Elbein A.D. 1973. Glycoprotein enzyme Aspergillus fumigatus: purification and properties of -glucosidase. J.Biol.Chem., 248, 18, 6506-6513.

218. Rudick M.J#, Allan D#E. 1975. Glycoprotein enzymes secreted by Aspergillus fumigatus. Purification and properties of a second ft -glucosidase. J.Bacteriol., 124, 1, 534-541.

219. Rudick M.J., Pitzgerald L.E., Rudick V.L. 1979. Intra- and extracellular founs of J> -glucosidase from Aspergillus niger. Arch.Biochem.Biophys. 193, 2, 509-520.

220. Ryn D.D.J., Mandels M. 1980. Cellulases: biosynthesis and application. Enz.Microbiol.Technol., 2, 91-102.

221. Sadana J.C., Schewale J.G., Deshpande M.V. 1980. High cello' biase and xylanase production by Sclerotium rolfsii UV-8 mutant in submerged culture. Appl.Env.Microbiol., 39, 935-936.

222. Saddler J .IT., Khan A.W., Martin S.M. 1980. Regulation of cellulase synthesis in Acetovibrio cellulolyticus. Microbios. 28, 97-106.

223. Saddler J.IT. 1981. Cellulolytic enzymes system of Acetovibrio cellulolyticus. Can.J.Microbiol., 27, 288-292.

224. Saha S., Sandal A., Kundu R., Dube S., Dube D. 1981. Purification and characteristique of two forms of extracellular -glucosidase from jute pathogenic fungus Macrophomina phaseolina. BBA, 662, 1, 22-29.

225. Selley K., Maitland C.C. 1967. The cellulases of Trichoderma viride. Separation of the components involved in solubilization of cotton. Biochem.J., 104, 716-724.

226. Selby K. 1968. Mechanism of biodegradation of cellulose. In; Biodeterioration of materials. Proc.Int.Biodeterioration Symp., 62-78.

227. SelbyK. 1969. The purification and properties of the C^ component of the cellulase complex. Adv.Chem.Ser., 95, 34-52.

228. Selby K., Martland C.C., Thompson K.V.A. 1970. Preparation of a thermostable cellulase complex by Penicillium funiculosum fermentation. Ger.Offen 1, 945, 147.

229. Shepherd M.G., Tong C.C., Cole A.L. 1981. Substrate specificity and mode of action of the cellulases from the thermophilic fungus Thermoascus aurantiacus. Biochem.J., 193, 67-74.

230. Shewale J.G., Sadana J.С. 1978. Cellulase and j!> -glucosi-dase production by a Basidiomycete species. Can.J.Microbiol., 24, 1204-1216.

231. Shewale J.G., Sadana J. 1981. Purification, characterization and properties of J} -glucosidase from Sclerotium rolfsii. Arch.Biochem.Biophys., 207, 1, 185-196.

232. Shewale J.G. 1982. J3 -glucosidase: its role in cellulase synthesis and hydrolysis of cellulose. Int.J.Biochem., 14, 6, 435-443.

233. Shikata S., Nisizawa K. 1975. Purification and properties of an exo-cellulase component of novel type from Trichoderma viride. J.Biochem., 78, 499-512.

234. Shoemaker S.P., Brown R.D. 1978. Purification and characterization of endo-1,4-y^-glucanases from Trichoderma viride. BBA, 253, 113-146.

235. Shoemaker S.P., Brown J. 1978. Characterization of endo-1,4--D-glucanases purified from Trichoderma viride. BBA, 523, 147161.

236. Sin R.G.H. 1963» Microbial decomposition of cellulose. In: Adv. in enzymhydrolysis of cellulose and related materials. Pergamon Press, 105-110.

237. Sinha S.N., Ghose B.L., Ghose S.N. 1981. Detection of cellulase inhibitor in the wheat brane culture of Aspergillus terreus. Can.J.Microbiol., 27, 1334-1340.

238. Somogyi M. 1952. Notes on sugar determination. J.Biol.Chem. 195, 1, 19-23.

239. Souza J.D., Yolfova 0. 1982. Influence of pH on the formation and location of J) -glucosidase in Aspergillus terreus grown on cellulase. Polia Microbiol., 27, 319-322.

240. Smith M.H., Gould M.A. 1979. Phanerochaetae chrysosporium -glucosidase: induction, cellular localization and physical characterization. Appl.Env.Microbiol., 37, 939-942.

241. Spurr A.R. 1969. A low viscosity epoxyresin embedding medium for electron microscopy. J.Ultrastruct.Res. 26, 31*

242. Sternberg D. 1976. Jb -glucosidase of Trichoderma: its biosynthesis and role in saccharification of cellulose. Appl. Env.Microbiol., 31, 5, 648-654.

243. Sternberg D., Vijayakumar D., Reese E.T. 1977. ^-Glucosidase: microbial production and effect on enzymatic hydrolysis of cellulose. Can.J.Microbiol., 23, 139-147.

244. Sternberg D,, Mandels G.R. 1979. Induction of cellulolytic enzymes in Trichoderma reesei by sophorose. J.Bacteriol., 139, 761-769.

245. Sternberg D., Mandels G.R. 1980. Regulation of the cellulolytic system in Trichoderma reesei by sephorose induction of cellulase and repression of J2> -glucosidase. J.Bacteriol., 144, 3, 1197-1199.

246. Sternberg D, Mandels G.R. 1982.y3 -Glucosidase induction and repression in the cellulolytic fungus Trichoderma viride. Exp.Mycology, 6, 115-124.

247. Stewart J.O., Parny S.B. 1981. Factors influencing the production of cellulase by Aspergillus fumigatus (Frensis). J.Gen.Microbiol., 125, 33-39.

248. Suzuki H. 1975» Cellulase formation in Pseudomonas fluoresces var.cellulosae. In: Symp. on enzymatic hydrolysis of cellulose. Finland, 155-169.

249. Svensson B. 1978. Purification of fungal endo-y0 -glucanase with high activity on barley beta-glucan. Calsberg.Res.Commun. 43, 2, 103-116.

250. Terni G. 1972. Application of molecular biology and physiology to the process kinetics of enzyme production. Bot.Bioeng. Symp., 3, 33-35.

251. Theodore A.D., Gupta M. 1981. A protein inhibitor of cellu-lases in Dictyostelium discoideum. Biochem.Biophys.Res.Commun. 102, 4, 13Ю-1316.

252. Tomas D.D. 1970. Effects of water stress on induction and secretion of cellulase and on branching in the water mold Achlya ambisexualis. Can.J.Bot., 48, 6, 977-979.

253. Tong C.C., Cole A.Z., Shepherd M. 1980. Purification and properties of the cellulases from the thermophilic fungus Ther-moascus aurentiacus. Biochem.J., 191, 83-94.

254. Trivedi L.S., Rao K.K. 1980. Cellulase induction in Aspergillus fumigatms M216. Indian J.Exp.Biol. 18, 240-242.

255. Trivedi L.S., Rao K.K. 1980. Factors influencing cellulase induction in Fusarium sp. Current Microbiol., 3, 4, 219-224.

256. Vaheri M., Leisova M., Kauppinen V.S. 1978. Enzymatic degradation products from cellulose. 1st.Eur.Congr.Biotech. Inter-laken, prepr.part II. Frankfent M.G.

257. Vaheri M., LeisolaM., Kaupinen V. 1979. Transglycosylation products of cellulase system of Trichoderma viride. Biotechnol. Lett., 1, 41-46.

258. Volfova 0., Syslikova E. 1981. Kinetics of cellulase production in Trichoderma viride, Folia Microbiol., XXVI, 309-313.

259. Weber K., Osborn M. 1969. The reliability of molecular weight determination by dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. J.Biol.Chem., 244, 4406-4414.

260. Whitaker D.R. 1971. Cellulases. In: The Enzymes. 5 ed. P.D. Boyer.

261. Wilke Ch.R., Mitra G. 1975. Process development studies on the enzymatic hydrolysis of cellulose. In: Cellulose as a chemical and energetic resource. Ed. Wilke Ch.R. Biotech.Bioeng.Symp. 5, 252-274.

262. Wilson R.W., Niederpruem 1967. -Glucosidases of Schizophyllum commune. Can.J.Microbiol., 13, 1009-1020.

263. Wiseman J. F. 1975. Enzyme induction in microbial organism. In: Enz. Induct ion. (Ed. by D.V.Parke) London, Nev/ York, Plenum Press, 1-26.

264. Wood T.M. 1968. Cellulolytic enzyme system of Trichoderma koningii. Separation of components attacing native cotton. Biochem.J., 109, 2, 217-227.

265. Wood T.M., 1969. The cellulose of Fusarium solani. Resolution of the enzyme complex. Biochem.J., 115, 3, 457-465.

266. Wood T.M. 1971. The cellulase of Fusarium solani. Purification and specificity of the y^-(1,4)-glucanase and J5-&Lmsq-sidase components. J.Biochem., 121, 2, 353-362.

267. V/ood T.M., McCrae S.I. 1972. The purification of the C^ components of Trichoderma koningii cellulase. Biochem.J. 128, 5, 1183-1192.

268. Wood Т.Н. 1975. Properties and mode of action of cellulases. Biotechn.Bioeng.Symp. 5, 111-137.

269. Wood T.M., McCrae S.I. 1975. The cellulase complex of Trichoderma koningii. Proc.Symp.Enz.Hydrol. of Cellulose. Aulanko, Finland, March, 231-257.

270. Wood T.M., McCrae J. 1977. The mechanism of cellulase action with particular reference to the C^ component. In: Bioconv.of cellulase substances into energy chem. and microb. prot. (ed. Ghose Т.К.- 111-142.

271. Wood T.M., McCrae S.I. 1977. Cellulase from Fusarium solani. Purification and properties of the C1 component. Carbohydr. Res. 57, 117-133.

272. Wood T.M. 1978. The cellulase of Trichoderma koningii. Biochem.J., 171, 61-72.

273. Wood T.M. 1979. Enzymes and mechanisms involved in solubilization of native cellulose. Cienc. biol. 5, 1, 27-33.

274. Wood T.M., McCrae S.I. 1979. Sinergism between enzymes involved in the solubilization of native cellulose. Adv.Chem.Ser. 181, 181-216.

275. Wood M., McCrae I.S.J. 1982. Purification and properties of the extracellular p -D-glucosidase of the cellulolytic fungus Trichoderma koningii. J.Gen.Microbiol., 128, 12, 2973-2982.

276. Wood T.M., Sheila I.M. 1982. Purification and some properties of a (1^-4)^-D-glucan glucohydrolase associated with the cellulase from the fungus Penicillium funiculosum. Carbohydrate Research. 110, 291-303.

277. Woodward J., Arnold S.L. 1981. The inhibition of y3-glucosidase activity in Trichoderma reesei C30 cellulase by derivative and isomers of glucose. Biotechn.Bioeng., 23, 1553-1562.

278. Woodward J., Wiseman J.F. 1982. Fungae and other y3-glucosi-dases, their properties and application. Enz.Microb.Tech., 4, 2, 73-79.

279. Workman W.E., Day D.F. 1982. Purification and properties of J> -glucosidase from Aspergillus terreus. Appl.Env.Microbiol., 44, 6, 1289-1295.

280. Umerzurike G.M. 1970. Cellulase and J$ -glucosidase components in culture filtrates from Botrydiplodia theobromae Pat. J. Exp.Bot., 21, 68, 639-650.

281. Umerzurike G.M. 1971. The purification and properties of extracellular Jb -glucosidase from Botrydioplodia theobromae Pat. BBA, 227, 413-418.

282. Umerzurike E.M. 1975. The subunit structure of J3 -glucosidase from Botrydioplodia theobromae. Pat. Biochem.J., 145, 361368.

283. Umerzurike G. 1975. Kinetic analysis of the mechanism of action of -glucosidase from Botrydioplodia theobromae Pat. BBA, 397, 164-178.

284. Umerzurike G.M. 1979. The cellulolytic enzymes of Botrydioplo dia theobromae Pat. Separation and characterization of cellulases and В -glucosidases. Biochem.J., 177, 9-19.

285. Yabuki M., Fukui S• 1970. Presence of binding site for amylase and of masking protein for this site on mycelial cell wall of Aspergillus oryzae. J.Bacterid., 104, 1, 138-144.

286. Yamane K., Suzuki H., Nisizawa K. 1970. Purification and properties of extracellular and cell-bound cellulase components of Pseudomonas fluorescens var.cellulose. J.Biochem., 67, 1, 1935.

287. Yamane K., Suzuki H., Hirotani M., Ozawa H., Nisizawa K. 1970. Effect of nature and supply of carbon sources on cellulose formation in Pseudomonas fluorescens var. cellulosa. J.Biochem., 67, 9-18.

288. Yamane K., Yoshikawa Т., Suzuki H., Nisizawa K. 1931. Localization of cellulase components in Pseudomonas fluorescens var. cellulosae. J.Biochem., 69, 471-480.

289. Yoshikawa Т., Suzuki H., Nisizawa K. 1974. Biogenesis of multiple cellulase components of Pseudomonas fluorescens var. cellulosa. J.Biochem., 75, 531-540.

290. Yoshioka H., Hayashida S. ^ЭО. Production and purification of thermostable J -glucosidase from Mucor xnichei YH10. Agric. Biol.Chem., 12, 44, 2817-2824.

291. Yoshioka H., Hayashida S. 1981. Relation between carbohydrate moiety and thermostability of ^-glucosidase from Mucor michei YH10. Agric.Biol.Ohem., 45, 13, 571-578.

292. Zhu Y.S., Wu Y.Q., Chen W., Tan 0., Gao J.H., Pei Y.X., Shin G.N. 1982. Induction and regulation of cellulase synthesis in Trichoderma pseudokoningii mutant EA^-867 and N2~78. Enz. Microb.Technol., 4, 1, 3-12.