Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Белковые молекулы в состоянии "расплавленной глобулы"

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Содержание диссертации, кандидата физико-математических наук, Долгих, Дмитрий Александрович

1. ВВВДЕНИЕ.

2. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР. Равновесные и кинетические исследования денатурации и ренатурации белков.

2.1. Основные определенна.

2.2. Равновесные состояния белков в различных денатурирующих условиях.

2.2.1. Денатурация гуанидинхдорвдом.

2.2.2. Денатурация другими солями гуакидина.

2.2.3. Денатурация мочевиной.

2.2.4. Тешературно-денатурированное состояние.

2.2.5. Денатурация изменением рН.

2.2.6. Денатурация неорганическими солями.

2.2.7. Другие типы денатурации.

2.3. Промежуточные состояния на пути денатурации и ренатурации белков.

2.3.1. Равновесные исследования.

2.3.2. Кинетические исследования.

2.4. Объекты исследования.

2.4.1. Коровий оС-лактальбумин.

2.4.2. Человеческий об-лактальбумин.

2.4.3. Карбоангидраза В.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.VI

3.1. Выделение и очистка препаратов.

3.1.1. Коровий оГ-^иктальбушн.

3.1.2. Человеческий 0(-лактальбумин.

3.1.3. Карбоангидраза В.

3.2. Приготовление растворов.

3.3. Методы исследования.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. Промежуточные формы коровьего об-лактальбумина.

4.1.1. Кислая форма.

4.1.2. Температурно-денатурированная форма.

4.2. Промежуточные формы человеческого об-лактальбумина

4.3. Роль кальция в структуре оС-лактальбуминов.

4.4. Промежуточные формы карбоанщцразы В.

4.4.1. Кислая форма.

4.4.2. Промежуточная по гуанидинхлориду форма.

4.5. Состояние расплавленной глобулы как особое физическое состояние белковой молекулы.

4.5.1. Физическая црирода состояния расплавленной глобулы

4.5.2. Фазовые переходы между нативным состоянием и состоянием расплавленной глобулы.

4.5.3. Физические критерии нативности глобулярного белка

4.6. Кинетические исследования карбоанщцразы В. Роль состояния расплавленной глобулы в самоорганизации белка.

4.6.1. Кинетика ренатурации карбоангидразы В из развернутого состояния.

4.6.2. Кинетика ренатурации карбоангидразы В из состояния расплавленной глобулы

4.6.3. Лежит ли состояние расплавленной глобулы на прямом пути сворачивания?

5. ЗАКШЕНИЕ.

6. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Белковые молекулы в состоянии "расплавленной глобулы""

Как известно, структура белка формируется под действием нескольких основных сил: водородных связей, гидрофобных, ван-дер--ваальсовых и электростатических взаимодействий. Они имеют разную физическую природу и отвечают различным уровням структурной организации белка: водородные связи формируют вторичную структуру, гидрофобные взаимодействия определяют компактность белковой глобулы, ван-дер-ваальсовы и электростатические взаимодействия задают тонкие детали третичной структуры. Эти силы по-разному зависят от условий, в которых находится молекула белка, поэтому в определенных условиях возможно существование особых состояний белковой молекулы, соответствующих ослаблению или даже полному выключению одних внутримолекулярных взаимодействий, в то время как другие взаимодействия остались неизменными или даже усилились. Исследование таких состояний, цромежуточных по своим свойствам между на-тивным и полностью развернутым состояниями, важно для понимания структурной организации белков и, в конечном счете, для выяснения механизмов функционирования этих важнейших биологических макромолекул. С другой стороны, интерес к подобным "промежуточным" состояниям связан с проблемой самоорганизации белка. В начале 60-х годов Анфинсен показал (см. /8/), что рибонуклеаза, денатурированная 8 М мочевиной с разорванными дисульфидными связями, способна восстанавливать нативную структуру и нативные б-б -связи после устранения воздействия денатуранта. Это означает, что вся информация, необходимая для процесса сборки белка, заложена в его первичной структуре - последовательности ковалентно сшитых аминокислотных остатков. Но как белок реализует эту информацию, есть ли на пути сворачивания промежуточные "частично-свернутые" состояния, отличные как от нативного, так и от полностью развернутого белка? Получение таких состояний в условиях термодинамической стабильности и их детальное изучение необходимо для понимания пути самоорганизации белка и, в конечном счете, для предсказания пространственной структуры белков на основе известной первичной структуры.

Изучение денатурации белков и различных денатурационных состояний ведется уже давно, однако первое систематическое детальное исследование связано с именем Тэнфорда и его школы. В результате целого ряда экспериментальных работ, выполненных в 60-е годы, Тэнфорд и его сотрудники показали, что различные денатурирующие воздействия приводят, вообще говоря, к различным результатам. Было показано, что при денатурации белков большими концентрациями сильно денатурирующих агентов, таких как гуанидинхлорид или мочевина, белковые молекулы переходят в состояние полностью развернутого (или сшитого дисульфидными связями, если они сохранены) статистического клубка, лишенного какшмшбо существенных элементов вторичной или третичной структуры. В то хе время воздействие высоких температур, кислых или щелочных значений рН приводит к состояниям с сохраненными элементами структуры, отличным от полностью развернутого клубка. Однако ни в одном случае эти состояния не были охарактеризованы подробно. Дальнейшее развитие исследований денатурации белков связано с использованием прецезионной микрокалориметрической техники, в первую очередь с работами П.Л.Привалова и его сотрудников. В этих работах было показано, что тепловая денатурация глобулярных однодоменных белков происходит по принцицу"все или ничего", без термодинамически стабильных промежуточных состояний, т.е. является фазовым переходом первого рода. Кроме того, выяснилось, что термодинамические характеристики белков, денатурированных высокими температурами или экстремальными значениями рН, близки к соответствующим характеристикам белков, денатурированных большими концентрациями гуанидин-хлорида или мочевины, и, таким образом, различные виды денатурации приводят к термодинамически подобным денатурированным состояниям. Отсюда был сделан кажущийся естественным вывод и об их структурной эквивалентности, т.е. о соответствии структуры состояний, денатурированных теплом или рН, статистическому клубку. А так как переход в температурыо-денатурированное состояние происходит по принципу "все или ничего", то этот же принцип можно было отнести и к другим денатурационным переходам, не оставляя, таким образом, надежды на получение термодинамически стабильных состояний, промежуточных между нативным и полностью развернутым белком. Однако дальнейшее изучение процессов денатурации белков показало, что это не так. Было показано, что денатурация некоторых белков (карбоанпщразы В /9/, гормона роста /10/, ^-лакто-глобулина /II/, коровьего /12/ и человеческого /13/ о(-лакталь-буминов) гуанддинхлоридш происходит в два этапа: вначале, при меньшей концентрации денатуранта, исчезает спектр кругового дихроизма в ближней ультрафиолетовой области и только потом падает спектр 1фугового дихроизма в дальней ультрафиолетовой области. Это означает существование термодинамически стабильных промежуточных состояний таких белков с разрушенным уникальным пространственным окружением ароматических боковых групп, но с сохранившейся вторичной структурой. Для коровьего оС-лактальбумина также было показано /12/, что его промежуточное состояние по своим спектральным свойствам близко к кислой форме этого белка, наблюдаемой при рН 2. Кинетические исследования денатурадионных переходов в коровьем об^лактальбумине /14/ и карбоангидразе В /15/ позволяли предположить, что термодинамически стабильные промежуточные состояния этих белков могут являться также кинетическими промежуточными состояниями (интермедиатами) на пути их самоорганизации. Промежуточные состояния коровьего о£-лактальбу-мина (особенно его кислая форма) и других белков исследовались в последние годы в разных лабораториях, однако полученные до сих пор данные были неполными и не позволяли построить детальную непротиворечивую модель этого состояния.

Исходя из вышеизложенного, мы предприняли комплексное исследование кислой и других промежуточных форм коровьего и человеческого оС-лактальбуминав и карбоангидразы В рядом физических методов с целью детально охарактеризовать их структуру. В результате этого исследования мы показали, что все эти формы относятся к одному и тому же термодинамическому состоянию, называемому сейчас "состоянием расплавленной глобулы", отвечающему разрушению ван--дер-ваальсовых и других специфических внутримолекулярных взаимодействий в белке, в то время как водородные связи в главной цепи и гидрофобные взаимодействия, в основном, сохранились. Мы предложили модель этого состояния в виде компактной глобулы с близкой к натнвной вторичной структурой, но со значительными флукту-ациями пространственной структуры, прежде всего с фпуктуациями конформаций и взаимного расположения боковых групп. Нами цроведено также исследование кинетики ренатурации карбоангицразы В, показавшее, что состояние расплавленной глобулы накапливается в процессе ренатурации карбоангидразы и, таким образом, может служить кинетическим интермедиатом на пути сворачивания этого белка.

Диссертация состоит из введения, литературного обзора, разделов "Материалы и методы" и "Результаты и обсуждение", заключения, выводов и списка литературы. Во введении кратко обоснованы и сформулированы задачи исследования. Литературный обзор посвящен анализу литературных данных, касавдихся денатурации и ренатурации белков, а также промежуточных состояний на пути денатурации и ренатурации. В разделе "Материалы и методы" кратко описаны использованные материалы и методы, а также методика и техника измерений. Полученные результаты исследований и их анализ приведены в разделе "Результаты и обсуздение". В конце диссертации даны заключение и выводы. Диссертация написана на основании материалов, излаженных в работах /1-7/.

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Долгих, Дмитрий Александрович

6. В ы в о д ы

I. На примерах об-лактальбуминов человека и коровы и коровьей карбоангидразы В описано новое физическое состояние молекулы белка, сочетающее в себе характеристики нативного и полностью развернутого белка - состояние расплавленной глобулы, об-лактальбумины и карбоангидраза переходят в это состояние под влиянием изменения рН среды, нагрева, умеренных концентраций гуанидинхлорида и других воздействий. Молекула белка в этом состоянии компактна и обладает близкой к нативной вторичной структурой, однако имеет симметризованное окружение ароматических и других боковых групп, быстрый дейтерообмен и не плавится кооперативно при нагревании.

2. Предложена модель состояния расплавленной глобулы, согласно которой молекула белка в этом состоянии отличается от нативной прежде всего небольшим (в пределах 30%) набуханием, приводящим к резкому ослаблению ван-дер-ваальсовых и других специфических внутримолекулярных взаимодействий, определяющих уникальную третичную структуру белка, и к значительному увеличению флуктуации белковой структуры, в первую очередь, мелкомасштабных колебаний боковых групп и главной цепи. При этом водородные связи главной цепи и гидрофобные взаимодействия в молекуле белка в основном сохранены.

3. Показано, что состояние расплавленной глобулы накапливается в процессе сворачивания карбоангидразы В из полностью развернутого состояния в нативное и поэтому может являться кинетическим интермедиатом на пути сворачивания белковой молекулы.

Я приношу глубокую и искреннюю благодарность моему научному руководителю Олегу Борисовичу Птицыну за доброжелательное и вместе с тем критичное руководство моей работой, постоянное внимание и поддержку.

Я глубоко признателен всем сотрудникам лаборатории физики белка Института белка за доброе отношение ко мне и помощь в выполнении данной работы, особенно В.Е.Йгзковой, Р.И.Гильманшину, А.П.Коломиец и Г.В.Семисотнову, совместно с которыми была выполнена существенная часть работы.

Искренне благодарю сотрудников Институтов бежа, молекулярной биологии и биофизики АН СССР, принимавших участие в различных этапах этой работы и обсуждении результатов: Л.В.Абатурова, И.А.Болотину, Е.В.Бражникова, В.Н.^ушуева, С.Ю.Веньяминова, Ю.О.Лебедева, И.Г.Птицыну, Л.В.Татунашвили, Е.И.Тиктопуло, А.Н. Туркина, А.В.Финкельштейна, Т.Н.Цалкову, Ю.Н.Чиргадзе, Е.И.Шах-новича.

Я признателен сотрудникам отдела информации Института белка за помощь в оформлении статей и настоящей диссертации, а также всем сотрудникам Института, помогавшим мне в моей работе.

5. Заключение

Мы показали, что молекулы коровьего и человеческого сС-лакт-альбуминов и коровьей карбоангидразы В под влиянием различных воздействий могут переходить в сходные между собой формы, соединяющие в себе свойства нативных и полностью развернутых белков. Эти формы имеют ярко выраженные общие особенности, позволяющие отнести их к особому новому состоянию белковой молекулы - состоянию расплавленной глобулы. Состояние расплавленной глобулы отличается от нативного состояния белка прежде всего отсутствием плотной упаковки и значительным увеличением фруктуаций белковой структуры, в первую очередь, большой подвижностью боковых групп. В этом состоянии разрушены или значительно ослаблены ван-дер--ваальсовы и другие специфические внутримолекулярные взаимодействия, в то время как вторичная структура и гидрофобные взаимодействия в основном сохранились. Состояние расплавленной глобулы было обнаружено и детально исследовано наш для коровьего и человеческого оС-лактальбуминов и коровьей карбоангидразы В ; впоследствие оно было описано также в рибонуклеазе А /98/ и ци-тохроме с /ИЗ, 222/. Существование подобного состояния в столь разных белках, как оС-лактальбумины, карбоангидраза, рибонукле-аза и цитохром с, показывает, что это состояние не является редким исключением, а может иметь общее значение для физики белка.

Дальнейшее исследование состояния расплавленной глобулы и переходов между ним и другими состояниями белка может существенно расширить наши знания о структуре белка и стабилизируадих ее силах. При этом в настоящее время представляется особенно интересным изучение процесса перехода медцу состоянием расплавленной глобулы и развернутым состоянием белка, а также выяснение топологии белковых молекул (т.е. внутримолекулярной укладки элементов вторичной структуры) в состоянии расплавленной глобулы.

Как мы показали, в случае человеческого оС-лактальбумина переход белка из нативного состояния в расплавленную глобулу происходит при удалении иона кальция цри комнатной температуре, т.е., по крайней мере, в некоторых бежах это состояние достигается просто в результате удаления лиганда. Не исключена возможность, что такие белки могут использовать подобные переходы в своем функционировании. Как известно, некоторые белки, например, связывающие нуклеиновые кислоты, должны соединяться со своими лигандами очень специфично, но не очень сильно /223/. В связи с этим было выдвинуто предположение /223/, что эти белки сами по себе имеют частично гибкую структуру, так что она полностью фиксируется лишь при связывании с нуклеиновой кислотой. Состояние расплавленной глобулы, описанное нами, может быть одним из возможных механизмов подвижности таких белков в отсутствие их лигандов.

Состояние расплавленной глобулы может играть важную роль и в процессе самоорганизации белка, являясь одной из промежуточных стадий этого процесса. В 1973 г. О.Б.Птицыным была сформулирована /133/ гипотеза о стадийном характере самоорганизации глобулярных белков, согласно которой в процессе самоорганизации можно выделить три стадии: образование флуктуирующих зародышей вторичной структуры (обусловленное, в первую очередь, водородными связями в главной цепи), образование из этих зародышей промежуточной компактной структуры (обусловленное, в основном, неспецифическими гидрофобными взаимодействиями) и, наконец, образование уникальной нативной структуры путем подстройки промежуточной компактной структуры (обусловленное, в основном, специфическими взаимодействиями, включая стерическую комплементарность, водородные и солевые связи в боковых группах и т.д.). Нетрудно видеть, что свойства состояния расплавленной глобулы соответствуют второй стадии такого механизма самоорганизации. Кинетические исследования сворачивания карбоангидразы В, проведенные нами, хорошо согласуются с этим, показывая накопление состояния расплавленной глобулы в процессе сворачивания карбоангидразы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата физико-математических наук, Долгих, Дмитрий Александрович, Пущино

1. Dolgikh D.A., Gilmanshin R.I., Brazhnikov E.V., Bychko-va V.E., Semisotnov G.V., Venyaminov S.Yu., Ptitsyn O.B. oC-Lactalbumin: compact state with fluctuating tertiary structure? FEBS Lett., 1981, v.136, Ho 2, p.311-315.

2. Веньяминов С.Ю., Долгих Д.A. Какова структура глобулярного белка в денатурированном теплом состоянии? 1У Всесоюзная конференция по спектроскопии биополимеров. Тезисы докладов. Харьков, 1981, с.34-35.

3. Гильманшин Р.И., Долгих Д.А., Птшдан О.Б., Финкельштейн А.В., Шахнович Е.И. Белковые глобулы без уникальной пространственной структуры: экспериментальные данные для оС-лактальбуминов и общая модель. Биофизика, 1982, т.27, № 6, с.1005-1016.

4. Долгих Д.А., Гильманшин Р.И. Частично денатурированное состояние белковых молекул. I Всесоюзный биофизический съезд. Тезисы докладов. Москва, 1982, с.13.

5. Птицын О.Б., Долгих Д.А., Гильманшин Р.И., Шахнович Е.И., Финкелыптейн А.В. Флуктуирующее состояние белковой глобулы. -Молекулярная биология, 1983, т.17, JÊ 3, с.569-575.

6. Долгих Д.А., Абатуров Л.В., Е^ажников Е.В., Лебедев Ю.О., Чиргадзе Ю.Н., Птицын О.Б. Кислая форма карбоанщцразы: "расплавленная глобула" с вторичной структурой. ДАН СССР, 1983, т.272, № 6, с. 1481-1484.б) Цитируемая литература:

7. Anfincen С.В., Haber Е., Sela М., White F.H. Kinetics of formation of native ribonuclease during oxidation of the reduced polypeptide chain. Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1961, v.47, No 6, p.1309-1314.

8. Wong K.-P., Tanford C. Denaturation of bovine carbonic anhydrase В by guanidine hydrochloride. A process involving separable sequental conformational transitions. J.Biol.Chem.,1973, v.248, No 24, p.8518-8523.

9. Holladay L.A., Hammonds R.G., Puett D, Growth hormone conformation and conformational equilibria. Biochemistry,1974, v.13, No 8, p.1653-1661 .

10. Ananthanarayanan V.S., Ahmad P. Evidence from rotatory measurements for an intermediate state in the guanidine hydrochloride denaturation of -lactoglobulin. Can.J.Biochem., 1977, v.55, No 3, p.239-243.

11. Kuwajima K., Nitta K., Yoneyama M., Sugai S. Three-state denaturation of O^-lactalbumin by guanidine hydrochloride, J.Mol.Biol., 1976, V.106, No 2, p.359-373.

12. Nozaka M., Kuwajima K., Nitta K., Sugai S. Detection and characterization of the intermediate on the folding pathway of human oC-1actalbumin. Biochemistry, 1978, v.17, No 18,p.3753-3758.

13. Kuwajima К. A folding model of oC-1actalbumin deduced from the three-state denaturation mechanism, J.Mol.Biol., 1977, v.114, По 2, p.241-258.

14. McCoy L.F., Rowe E.S., Wong K.-P. Multiparameter kinetic study on the unfolding and refolding of bovine carbonic anhy-drase B. Biochemistry, 1980, v.19, No 21, p.4738-4743.

15. Жоли M. Физическая химия денатурации белков. Москва: Мир , 1968.

16. Кушнер В.П. Конформационная изменчивость и денатурация биополимеров. Ленинград: "Наука", 1977.

17. Tanford С., Kawahara К., Lapanje S. Proteins as random coils. I. Intrinsic viscosities and sedimentation coefficients in concentrated guanidine hydrochloride. J.Amer.Chem. Soc., 1967, v.89, По 4, p.729-736.

18. Flory P.J., Pox T.G. Treatment of intrinsic viscosities. J.Amer.Chem.Soc., 1951, v.73, Ho 5, p.1904-1908.

19. Olander J., Emerson M.F., Holtzer A. On the dissociation and reassociation of the polypeptide chains of tropomyosin and paramyosin. J.Amer.Chem.Soc., 1967, v.89, Ho 12, p.3058-3059.

20. Castellino F.J., Barker R. Examination of the dissociation of multichain proteins in guanidine hydrochloride by membrane osmometry. Biochemistry, 1968, v.7, Ho 6, p.2207-2217.

21. Flory P.J. Principles of polymer chemistry. Hew York: Cornell University Press, 1953.

22. Tanford C., Kawahara K., Lapanje S., Hooker T.M., Zar-lengo M.H., Salahuddin A., Aune К.С., Takagi T. Proteins as random coils. III. Optical rotatory dispersion in 6 M guanidinehydrochloride. J.Amer.Chem.Soc., 1967, v.89, No 19, p.5023-5029.

23. Imahori K., Nicola N.A. Optical rotatory dispersion and the main chain conformation of proteins. In: Physical principles and techniques of protein chemistry, part C (Leach S.J., ed.), New York and London: Academic Press, 1973, p.357-444.

24. Yang J.T. On the phenomenological treatments of optical rotatory dispersion of polypeptides and proteins. Proc. Natl.Acad.Sci.USA, 1965, v.53, No 2, p.438-445.

25. Tanford G. Protein denaturation. Advan.Protein Ghem., 1968, v.23, p.121-282.

26. Cortijo M., Panijpan B., Gratzer W.B. Guanidine hydrochloride and the circular dichroism of random coil polypeptides. Int.J.Peptide Protein Res., 1973, v.5, No 4, p.179-186.

27. Nozaki Y., Reynolds J.A., Tanford G. The interaction of a cationic detergent with bovine serum albumin and other proteins. J.Biol.Ghem., 1974, v.249, No 14, p.4452-4459.

28. Leach S.J., Minasian E., Reichert L.E. Bovine luteinizing hormone. Circular dichroism and thermal difference spectra. Biochim. Biophys. Acta, 1975, v.386, No 1, p.144-154.

29. Allen S.H., Wong K.-P. Conformation of ribosomal proteins free in solution and bound to ribosomal RNA. Biochemistry, 1978, v.17, No 19, p.3971-3978.

30. Bradbury J.H., King N.L.R. Nuclear magnetic resonance spectroscopy of denatured proteins. Aust.J.Ghem., 1969, v.22, No 5, p.1083-1089.

31. McDonald C.C., Phillips W.D. Proton magnetic resonance spectra of proteins in random-coil configurations. J.Amer. Chem.Soc., 1969, v.91, No 6, p.1513-1521.

32. Bradbury J.H., Norton R.S., Carbon-13 NMR spectra of tryptophan, tryptophan peptides and native and denatured proteins. Biochim.Biophys.Acta, 1973, v.328, No 1, p.10-19.

33. Edelhoch H. Spectroscopic determination of tryptophan and tyrosine in proteins. Biochemistry, 1967, v.6, No 7,p.1948-1954.

34. Masson A., Wuthrich K. Proton magnetic resonance investigation of the conformational properties of the basic pancreatic trypsin inhibitor. FEBS Lett., 1973, v.31, No 1, p.114-118.

35. Branch W.T., Robbins J., Edelhoch H. Thyroxine-binding prealbumin. Conformation in urea and guanidine. Arch.Biochem. Biophys., 1972, v.152, No 1, p.144-151.

36. Stauffer C.E., Sullivan J.P. Effect of urea and qua-nidinium chloride on activity of subtilisin Garlsberg. Biochim.Biophys.Acta, 1971, v.251, No 3, p.407-412.t

37. Pont M.J., Woods E.P. Denaturation of tropomyosin by guanidine hydrochloride. Int.J.Protein Res., 1971, v.3, No 4, p.177-183.

38. Oastellino P.J., Barker R. The denaturing effectiveness of guanidinium, carbamoylguemidinium and guanylguanidinium salts. -Biochemistry, 1968, v.7, No 11, p.4135-4138.

39. Mitchinson G., Pain R.H., Vinson J.R., Walker T. -The relative effectiveness of guanidinium and some biguanide salts as dénaturants. Assessment against penicillinase. Biochim.Biophys.Acta, 1983, v.743, No 1, p.31-36.

40. Lapanje S. Random coil behavior of proteins in concentrated urea solutions. Groat.Chem.Acta, 1969, v.41, No 3»p.115-124.

41. Kugimiya M., Bigelow G.G. The denatured states of ly-sozyme. Can.J.Biochem., 1973, v.51, No 5, p.581-585.

42. Edelhoch H., Steiner R.F. Structural transitions of soybean trypsin inhibitor. II. The denatured state in urea. -J.Biol.Chem., 1963, v.238, Ho 3, p.931-938.

43. Buckley C.E., Whitney P.L., Tanford C. The unfolding and renaturation of a specific univalent antibody fragment. -Proc.Hatl.Acad.Sci.USA, 1963, v.50, Ho 5, p.827-834.

44. Warren J.R., Gordon J.A. Denaturation of globular proteins. II. Interaction of urea v/ith lysozyme. J.Biol .Chem., 1970, v.245, No 16, p.4097-4104.

45. Azuma T., Hamaguchi K., Migita S. Urea denaturationof Bence Jones proteins. J.Biochem., 1973, v.73, No 6, p.1259-1268.53« Lapanje S. Physicochemical aspects of protein denaturation. Hew York: John Wiley & Sons, 1978.

46. Ahmad P., Salahuddin A. Influence of temperature on the intrinsic viscosities of proteins in random coil conformation. Biochemistry, 1974, v.13, Ho 2, p.245-249.

47. Holcomb D.H., Van Holde K.E. Ultracentrifugal and visco-metric studies of the reversible thermal denaturation of ribo-nuclease. J.Phys.Chem., 1962, v.66, Ho 10, p.1999-2006.

48. Bigelow C.C. The denatured states of ribonuclease. -J.Mol.Biol., 1964, v.8, Ho 5, p.696-701.

49. Ginsburg A., Carrol Y/.R. Some specific ion effects on the conformation and thermal stability of ribonuclease. -Biochemistry, 1965, v.4, Ho 10, p.2159-2174.

50. Brandts J., Lumry R. The reversible thermal denaturation of chymotrypsinogen. I. Experimental characterization. -J.Phys.Chem., 1963, v.67, Ho 7, p.1484-1494.

51. Acampora G., Hermans J. Reversible denaturation of sperm whale myoglobin. I. Dependence on temperature, pH and composition. J.Amer.Chem.Soc., 1967, v.89, No 7, p.1543-1547.

52. Aune K.C., Salahuddin A., Zarlengo M.H., Tanford C. Evidence for residual structure in acid- and heat-denatured proteins. J.Biol.Chem., 1967, v.242, Ho 19, p.4486-4489.61• Tanford C. Protein denaturation. Advan.Protein Chem., 1970, v.24, p.1-95.

53. Privalov P.L., Plotnicov V.V., Filimonov V.V. Precision scanning calorimeter for the study of liquids. J.Chem. Thermodynamics, 1975, v.7, No 1, p.41-47.

54. Монаселидзе Д.Р., Бакарадзе Н.Г. Адиабатный дифференциальный мшфокалориметр. В сб.: Конформационные изменения биополимеров в растворах (Андроникашвшш Э.Л., ред.), Москва: Наука, 1973.

55. Privalov P.L., Khechinashvili N.N. A thermodynamic approach to the problem of stabilization of globular protein structure: a calorimetric study. J.Mol.Biol., 1974, v.86, No 3, p.665-684.

56. Pfeil W., Privalov P.L. Thermodynamic investigations of proteins. II. Calorimetric study of lysozyme denaturation by guanidine hydrochloride. Biophys.Chem., 1976, v.4, No 1, p.33-40.

57. Privalov P.L. Stability of proteins. Small globular proteins. Advan.Protein Chem., 1979, v.33, p.167-241.

58. Privalov P.L., Pfeil W. Thermodynamics of protein folding. In: Protein: structure, function and industrial applications (Hofmann et al., eds.), Oxford and New York: Perga-mon Press, 1979, p.159-172.

59. Chen M.C., Lord R.C., Mendelsohn R. Laser-exited Raman spectroscopy of biomolecules. V. Conformational changes associated with the chemical denaturation of lysozyme. J. Amer.Chem.Soc., 1974, v.96, No 10, p.3038-3042.

60. Федоров O.B., Хечинашвили H.H. Денатурированное состояние лизоцима. Анализ по и.-к. полосе Амид I. ДАН СССР, 1976, т.226, № 5, с.1207-1209.

61. McDonald С.С., Phillips W.D., Glickson J.D. Nuclear magnetic resonance study of the mechanism of reversible denaturation of lysozyme. J.Amer.Chem.Soc., 1971, v.93, No 1, p.235-246.

62. Pfeil W. The problem of the stability of globular proteins. Mol.Cell Biochem., 1981, v.40, No 1, p.3-28.

63. Badley R.A., Carruthers L., Phillips M.C. Hydrophobic free energy and the denaturation of proteins. Biochim.Biophys. Acta, 1977, v.495, No 1, p.110-118.

64. Птицын О.Б., Эйзнер Ю.Е. Теория переходов глобула-клубок в ма1фомолекулах. Биофизика, 1965, т. 10, JS I,с.3-10. '

65. Лифшиц И.М., Гросберг А.Ю., Хохлов А.Р. Объемные взаимодействия в статистической физике полимерной макромолекулы. Успехи физ.наук, 1979, т.127, № 3,с. 353-389.

66. Nicoli D.F., Benedek G.B. Study of thermal denaturation of lysozyme and other globular proteins by light-scattering spectroscopy. Biopolymers, 1976, v.15, No 12, p.2421-2437.

67. Dubin S.В., Feher G., Benedek G.В. Study of the chemical denaturation of lysozyme by optical mixing spectroscopy. -Biochemistry, 1973, v.12, No 4, p.714-720.

68. Чистякова Л.А., Кравченко H.A., Никитин С.Я., Юфит С.G. Клабуновский Е.И., Павлов В.А. О ступенчатом характере тепловой денатурации лизоцима. Биофизика, 1976, т.21, 16 6, с. 975979.

69. Chen M.С., Lord R.C., Mendelsohn R. Laser-exited Raman spectroscopy of biomolecules. IV. Thermal denaturation of aqueous lysozyme. Biochim.Biophys.Acta, 1973, v.328, По 2, p.252-260.

70. Chen M.C., Lord R.C. Laser Raman spectroscopic studies of the thermal unfolding of ribonuclease A. Biochemistry, 1976, v.15, Ho 9, p.1889-1897.

71. Labhardt A.M. Secondary structure in ribonuclease. I. Equilibrium folding transitions seen by amide circular dichro-ism. J.Mol.Biol., 1982, v.157, No 2, p.331-355.

72. Matthews C.R., Westmoreland D.G. Nuclear magnetic resonance studies of residual structure in thermally unfolded ribonuclease A. Biochemistry, 1975, v.14, No 20, p.4532-4538.

73. Bradbury J.H., Norton R.S. Denaturation of proteins. V. N.M.R. study of the arginine residues of lysozyme. Int. J.Peptide Protein Res., 1974, v.6, No 5, p.295-302.

74. Howarth O.W. The thermal unfolding of ribonuclease A. A 13C NMR study. Biochim.Biophys.Acta, 1979, v.576, No 1,p.163-175.

75. Howarth O.W,, Lian L.Y. Structuring of denatured ribo-nuclease-A. J.Chem.Soc. (Chem.Commun.), 1981, v.6, p.258-259.

76. Matheson R.R., Sheraga H.A. Steps in the pathway of the thermal unfolding of ribonuclease А. Л nonspecific photochemical surface-labeling study. Biochemistry, 1979, v. 18, Ho 12, p.2437-2445.

77. Wuthrich K., Roder H., Wagner G. Internal mobility and unfolding of globular proteins. In: Protein folding (Jaenicke R., ed.), Amsterdam: Elsevier/North Holland, 1980, p.549-562.

78. Shibata Y., Kronman M.J. Inactivation of glyceraldehy-de-3-phosphate dehydrogenase. Arch.Biochem.Biophys., 1967, v.118, No 2, p.410-419.

79. Steinhardt J., Polet H., Moezie F. Acid denaturation of horse carbonylhemoglobin in the absence of oxygen. J.Biol. Chem., 1966, v.241, No 17, p.3988-3996.

80. Stellwagen E., Babul J. Stabilization of the globular structure of ferricytochrome с by chloride in acidic solvents.- Biochemistry, 1975, v.14, No 23, p.5135-5140.

81. Wooten J.В., Cohen J.S., Vig I., Schejter A. pH-indu-ced conformational transitions of ferricytochrome c: a carbon-13 and deuterium nuclear magnetic resonance study. Biochemistry, 1981, v.20, No 19, p.5394-5402.

82. Epstein H.P., Schechter A.N., Cohen J.S. Folding of staphylococcal nuclease: magnetic resonance and fluorescence studies of individual residues. Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1971, v.68, No 9, p.2042-2046.

83. Doi E., Jirgensons B. Circular dichroism studies on the acid denaturation of у-immunoglobulin G and its fragment's.- Biochemistry, 1970, v.9, No 5, p.1066-1073.

84. Kincaid H.L., Jirgensons В. Circular dichroism of K-and X-type Bence-Jones proteins at various pH values and temperatures. Biochim.Biophys.Acta, 1972, v.271, Ho 1, p.23-33.

85. Ahmad P., Salahuddin A. The pH dependence of the reversible unfolding of ovalbumin A^ by guanidine hydrochloride. Biochim.Biophys.Acta, 1979, v.576, Ho 2, p.333-33S.

86. Харакоз Д.П., Кърпшков А. Исследование структурных перестроек миоглобина при кислотной денатурации с помощью акустических измерений. I Всесоюзный биофизический съезд. Москва, 3-8 августа, 1982, Тезисы докл.стендовых сообщений, т.1,с.29-30.

87. Sharma R.H., Bigelow С.С. A comparison of the denatured states of 0^-1 act albumin and lysozyme. J.Mol.Biol., 1974, v.88, Ho 1, p.247-257.

88. Ahmad P., Bigelow C.C. The denaturation of ribonucle-ase A by combination of urea and salt dénaturants. J.Mol.Biol., 1979, v.131, Ho 3, p.607-617.

89. Denton J.В., Konishi Y., Scheraga H.A. Folding of ri-bonuclease A from a partially disordered conformation. Kinetic study under folding conditions. Biochemistry, 1982, v.21,Ho 21, p.5155-5163.

90. Jirgensons B. Reconstructive denaturation of immunoglobulins by sodium dodecyl sulfate. Circular dichroism studies. -Biochim.Biophys.Acta, 1973, v.317, Ho 1, p. 131-138.

91. Brandts J.P., Oliveira R.J., Westort C. Thermodynamics of protein denaturation. Effect of pressure on the denaturation of ribonuclease A. Biochemistry, 1970, v.9, Ho 4, p.1038-1047.

92. Zipp A., Kauzmann W. Pressure denaturation of metmyo-globin. Biochemistry, 1973, v.12, No 21, p.4217-4228.

93. Dietrich. P.M. Inactivation of egg-white lysozyme by ultrasonic waves and protective effect of single amino-acids. -Nature, 1962, v.195, No 4837, p.146-148.

94. Мревлишвшш Г.M. Низкотемпературная калориметрия биологических макромолекул. Успехи физ.наук, 1979, т.128, $ 2, с.273-312.

95. McDonald С.С., Phillips W.D., Glickson J.D. Nuclear magnetic resonance study of the mechanism of reversible denaturation of lysozyme. J.Amer.Chem.Soc., 1971, v.93, No 1, p.235-246.

96. Bradbury J.H., King N.L.R. Denaturation of proteins. IV. NMR studies of ribonuclease-A. Aust.J.Chem., 1972, v.25, No 1, p.209-220.

97. Benz F.W., Roberts G.O.K. Nuclear magnetic resonance studies of the unfolding of pancreatic ribonuclease. II. Unfolding by urea and guanidine hydrochloride. J.Mol.Biol., 1975, v.91, No 3, p.367-387.

98. Epstein H.F., Schechter A.N., Chen R.F., Anfinsen C.B. Folding of staphylococcal nuclease. Kinetic studies of two processes in acid renaturation. J.Mol.Biol., 1971, v.60, No 3,p.499-508.

99. Westmoreland D.G., Matthews C.R. Nuclear magnetic resonance study of the thermal denaturation of ribonuclease A, Implications for multistate behavior at low pH. Proc.Natl. Acad.Sci.USA, 1973, v.70, No 3, p.914-918.

100. Wemmer D., Ribeiro A.A., Bray R.P., Wade-Jardetzky N.G., Jardetzky 0. High resolution nuclear magnetic resonance studies of the lac repressor. 3« Unfolding of the lac repressor headpiece. Biochemistry, 1981, v.20, No 4, p.829-833.

101. Ikai A., Tanaka S., Ifoda H. Reactivation kinetics of guanidine denatured bovine carbonic anhydrase B. Arch.Biochem. Biophys., 1978, v.190, ITo 1, p.39-45.

102. Carrey E.A., Pain R.H. Conformation of a stable intermediate on the folding pathway of staphylococcus aureus penicillinase. Biochim.Biophys.Acta, 1978, v.533, Ho 1, p.12-22.

103. Goto Y«, Hamaguchi K. Unfolding and refolding of the constant fragment of the immunoglobulin light chain. J.Mol. Biol., 1982, v.156, No 4, p.891-910.

104. McEhie P. The origin of the intermediates detectedin the folding of swine pepsinogen. J.Biol.Chem., 1982, v.257, No 2, p.689-693.

105. Schmid P.2., Baldwin R.L. Acid catalysis of the formation of the slow-folding species of RNase A: evidence that the reaction is proline isomerization. Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 1978, v.75, No 10, p.4764-4768.

106. Nail B.T., Garel J.-R., Baldwin R.L. Test of the extended two-state model for the kinetic intermediates observed in the folding transition of ribonuclease A. J.Mol.Biol., 1978, v.118, No 3, p.317-330.

107. Kim P.S., Baldwin R.L. Structural intermediates trapped during the folding of ribonuclease A by amide proton exchange. Biochemistry, 1980, v.19, No 26, p.6124-6129.

108. Lin L.-N., Brandts J.P., Mechanism for the unfolding and refolding of ribonuclease A. Simulations using a simple model with no structural intermediates. Biochemistry, 1983, v.22, No 3, p.573-580.

109. Ridge J.A., Baldwin R.L., Labhardt A.M. Nature of the fast and slow refolding reactions of iron (III) cytochrome c. -Biochemistry, 1981, v.20, No 6, p.6122-6130.

110. Leutzinger Y., Beychok S. Kinetics and mechanism of heme-induced refolding of human ()£-globin. Proc.Natl.Acad. Sci.USA, 1981, v.78, No 2, p.780-784.

111. Kato S., Okamura M., Shimamoto N., Utiyama H. Spectral evidence for a rapidly formed structural intermediate in the refolding kinetics of hen egg-white lysozyme. Biochemistry, 1981, v.20, No 5, p.1080-1085.

112. Price N.C., Stevens E. The refolding of denatured rabbit muscle pyruvate kinase. Biochem.J., 1983, v.209, No 3, p.763-770.

113. McPhie P. Swine pepsinogen folding intermediates are highly structured, motile molecules. Biochemistry, 1982, v.21, No 22, p.5509-5515.

114. Baldwin R.L., Greighton T.E. Recent experimental work on the pathway and mechanism of protein folding. In: Protein folding (Jaenicke R., ed.), Amsterdam: Elsevier/North Holland, 1980, p.217-260.

115. Greighton T.E. Experimental elucidation of pathways of protein unfolding and regolding. In: Protein folding (Jaenicke R., ed.), Amsterdam: Elsevier/North Holland, 1980, p.427-441.

116. Птицын О.Б. Стадийный механизм самоорганизации белковых солекул. ДАН СССР, 1973, т.210, JS 5,с.I2I3-I2I5.

117. Brew К., Vanaman Т.О., Hill R.L. Comparison of amino acid sequence of bovine o£-lactalbumin and hen egg white lysozyme. J.Biol.Chem., 1967, v.242, No 16, p.3747-3749.

118. Fitzgerald D.K., Brodbeck U., Kiyosawa I., Mawal R., Colvin В., Ebner K.E. 0^-1actalbumin and the lactose synthetase reaction. J.Biol.Chem., 1970, v.245, No 8, p.2103-2108.

119. Browne W.J., North A.C.T., Phillips D.C., Brew K., Vanaman Т.О., Hill R.L. A possible three dimentional structure of bovine oC-lactalbumin based on that of hen's egg-white lyso-zyme. J.Mol.Biol., 1969, v.42, No 1, p.65-86.

120. Hopper K.E., McKenzie H.A. Comparative studies of 0^-1actalbumin and lysozyme: echidna lysozyme. Mol.Cell Bio-chem., 1974, v.3, No 2, p.93-108.

121. Fenna R.E. Cristallization of cow oC-lactalbumin. -J.Mol.Biol., 1982, v.161, No 1, p.203-210.

122. Fenna R.E. Cristallization of human 0^-1actalbumin. -J.Mol.Biol., 1982, v.161, No 1, p.211-215.

123. Kronman M.J., Andreotty R.E. Inter- and intramolecular interactions of od-lactalbumin. I. The apparent heterogeneity at acid pH. Biochemistry, 1964, v.3, No 8, p.1145-1151.

124. Kronman M.J., Andreotty R., Vitols R. Inter- and intramolecular interactions of -lactalbumin. II. Aggregation reactions at acid pH. Biochemistry, 1964, v.3, No 8, p.11521160.

125. Kronman M.J., Blum R., Holmes L.G. Inter- and intramolecular interactions of o6-lactalbumin. VI. Optical rotation dispersion properties. Biochemistry, 1966, v.5, Ho 6, p. 19701978.

126. Kronman M.J., Holmes L.G., Robbins P.M. Inter- and intramolecular interactions of 0(-lactalbumin. X. Effect of acylation of tyrosyl and lysyl side chains on molecular conformations. J.Biol.Chem., 1971, v.246, No 6, p.1909-1921.

127. Barman T.E. Purification and properties of bovine milk glyco-06-lactalbumin. Bioch.im.Biophys.Acta, 1970, v.214, Ho 1, p.242-244.

128. Robbins P.M., Holmes L.G. Circular dichroism spectra of od-lactalbumin. Biochim.Biophys.Acta, 1970, v.221, No 2, p.234-240.

129. Greenfield H., Fasman G.D. Computed circular dichroism spectra for the evaluation of protein conformation. Biochemistry, 1969, v.8, Ho 10, p.4108-4116.

130. Kita H., Kuwajima K., Hitta K., Sugai S. Equilibrium and kinetics of the unfolding of o(.-lactalbumin by guanidine hydrochloride (II). Biochim.Biophys.Acta, 1976, v.427, Ho 1, p.350-358.

131. Kuwajima K., Hitta K., Sugai S. Electrophoretic investigations of the acid conformational change of 0^-lactalbumin. -J.Biochem., 1975, v.78, Ho 1, p.205-211.

132. Takesada H., Hakanishi M., Tsuboi M. Structure of 06-lactalbumin and its fluctuation. J.Mol.Biol., 1973, v.77, Ho 4, p.605-614.

133. Kuwajima К., Sugai S. Equilibrium and. kinetics of the thermal unfolding of oC-lactalbumin. The relation to its folding mechanism. Biophys.Chem., 1978, v.8, Ho 3, p.247-254.

134. Pfeil W. Thermodynamics of o£-lactalbumin unfolding. Biophys.Chem., 1981, v.13, No 2, p.181-186.

135. Hiraoka Y., Segawa Т., Kuwajima K., Sugai S., Murai N. O^-lactalbumin: a calcium metalloprotein. Biochem.Biophys.Res. Commun., 1980, v.95, No 3, p.1098-1104.

136. Kronman M.J., Siriha S.K., Brew K. Characteristics of2+the binding of Ca T and other divalent metal ions to bovine C<-lactalbumin. J.Biol.Chem., 1981, v.256, No 16, p.8582-8587.

137. Пермяков E.A., Ярмоленко В.В., Калиниченко Л.П., Морозова Л.А., ^урштейн Э.А. Связывание ионов Са^+ оС-лактальбумином из коровьего молока. Исследование по изменениям собственной флуоресценции. Биофизика, 1982, т.27, $ 3, с.380-385.

138. Segawa T>, Sugai S. Interactions of divalent metal ions with bovine, human, and goat oC -lactalbumins* J.Biochem., 1983, v.93, No 5, p.1321-1328.

139. Findlay J.B.C., Brev; K. The complete amino-acid sequence of human oC-1actalbumin. Eur.J.Biochem., 1972, v.27,1. No 1, p.65-86.

140. Nozaka M., Kuwajima K., Nitta K., Sugai S. Detection and characterization of the intermediate on the folding pathway of human o6-lact albumin. Biochemistry, 1978, v.17, No 18,p.3753-3758.

141. Barman T.E., Perry R.A. On the reactivities of the tryptophan residues of human oC-1actalbumin to 2-hydroxy-5-nitrobenzyl bromide. Biochim.Biophys.Acta, 1977, v.494, No 2, p.314-318.

142. Lindskog S., Henderson L.E., Kannan K.K., Liljas A., Nyman P.O., Strandberg B. Carbonic ahhydrase. In: The Enzymes (Boyer P.D., ed.),3rd ed., vol.5, New York: Academic Press, 1971, p.587-665.

143. Thorslund A., Lindskog S. Studies of the esterase activity and the anion inhibition of bovine zinc and cobalt carbonic anhydrases. Eur.J.Biochem., 1967, v.3, No 1, p.117-123.

144. Andersson B., Nyman P.O., Strid L. Amino acid sequence of human erythrocyte carbonic anhydrase B. Biochem.Biophys. Res.Commun., v.48, No 3, p.670-677.

145. Kannan K.K., Notstrand B., Pridborg K., Lovgren S., Ohlsson A., Petef M. Crystal structure of human erythrocyte carbonic anhydrase B. Three-dimensional structure at a nominal2.2-1 resolution. Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1975, v.72, ITo 1, p.51-55.

146. Beychok S., Armstrong J.McD., Lindblow 0., Edsall J.T. Optical rotatory dispersion and circular dichroism of human carbonic anhydrases В and C. J.Biol.Chem., 1966, v.241, Ho 21,p. 5150-5160.

147. Липпмаа Э.Т., Оливсон А.И., Ярвет Ю.И.-Х., Агурайуя Р.К. Исследование карбоангидразы В крупного рогатого скота методом ^С-ЯМР-спектроскопии. Молекулярная биология, 1983, т. 17, В 3, с.484-492.

148. McCoy L.F., Wong K.-P. Renaturation of bovine erythrocyte carbonic anhydrase В denatured by acid, heat and detergent. -Biochemistry, 1981, v.20, Ho 11, p.3062-3067.

149. Handel E.D., Graf G. Macromolecular conformation in solution. Study of carbonic anhydrase by the positron annihilation technique. Biophys.J., 1980, v.32, No 2, p.697-704.

150. Yazgan A., Henkens R.W. Role of zinc (II) in the refolding of guanidine hydrochloride denatured bovine carbonic anhydrase. -Biochemistry, 1972, v.11, No 7, p.1314-1318.

151. Wong K.-P., Hamlin L.M. The role of Zn (II) on the folding of bovine carbonic anhydrase B. Arch.Biochem.Biophys., 1975, v.170, No 1, p.12-22.

152. Ko B.P.N., Yazgan A., Yeagle P.L., Lottich S.C., Henkens R.W. Kinetics and mechanism of refolding of bovine carbonic anhydrase. A probe study of the formation of the active site. Biochemistry, 1977, v.16, No 8, p.1720-1725.

153. Stein P.J., Henkens R.W. Detection of intermediates in protein folding of carbonic anhydrase with fluorescence emission and polarization. J.Biol.Chem., 1978, c.253, No 22, p.8016-8018.

154. Brewer J.M., Spencer T.E., Ashworth R.B. Zinc effect on physical properties of "bovine carbonic anhydrase. Biochim. Biophys.Acta, 1968, v.168, No 2, p.359-361.

155. Armstrong J.McD., Hopper K.E., McKenzie H.A., Murphy W.H. On the column chromatography of bovine whey proteins. -Biochim.Biophys.Acta, 1970, v.214, No 3, p.419-426.

156. Montgomery R. Determination of glycogen. Arch.Biochem.Biophys., 1957, v.67, No 2, p.378-386.

157. Chang J.Y., Brauer D., Wittmann-Liebold B. Micro-sequence analysis of peptides and proteins using 4-NN-dimethylamino-azobenzene 4'-isothiocyanate/phenylisothiocyanate double coupling method. FEBS Lett., 1978, v.93, No 2, p.205-214.

158. Phillips H.I., Jenness R. Isolation and properties of human oC-lactalbumin. Biochim.Biophys.Acta, 1971, v.229, Ho 2, p.407-4Ю.

159. Armstrong J.McD., Myers D.V., Verpoorte J.A., Edsall J.T. Purification and properties of human erythrocyte carbonic anhydrases. J.Biol.Ghem., 1966, v.241, Ho 21, p.5137-5149.

160. Hozaki Y. The preparation of guanidine hydrochloride. In: Methods in Enzymology (Hirs C.H., Timasheff S.H., eds.), Hew York and London: Academic Press, 1972, v.26, p.43-50.

161. Wetlaufer D.B. Osmometry and general characterization of оС-lactoglobulin. Сотр.Rend.Trav.Lab.Carlsberg., 1961, v.32, Ho 1, p.125-138.

162. Jaenicke L. A rapid micromethod for the determination of nitrogen and phosphate in biological material. Anal.Bio-chem., 1974, v.61, Ho 2, p.623-627.

163. Maypep Г. Диск-электрофорез. Теория и практика электрофореза в полиа1филашщном геле. Москва: Мир, 1971.

164. Kratky 0., Pilz I. Recent advances and applications of diffuse X-ray small-angle scattering on biopolymers in dilute solutions. Quart.Rev.Biophys., 1972, v.5, Ho 4, p.481-537.

165. Тимченко А. А. Изучение конформационных изменений белков методом болыпеуглового диффузного рассеяния рентгеновских лучей. Дисс.на соискание ученой степени канд.физ.-мат.наук, Мети, Москва, 1978.

166. Щедрин Б.М., Фейгин Л.А. Учет коллимационной поправки при рассеянии рентгеновых лучей под малыми углами. Случай конечных размеров щелей. Кристаллография, 1966, т.II, .№ 2, с.159-163.

167. Guinier A., Fournet G. Small-angle scattering of X-rays. New York and London: Wiley & Sons, 1955.

168. Semisotnov G.V., Zikherman K.Kh., Kasatkin S.B., Ptitsyn O.B., Anufrieva E.V. Polarized luminescence and mobility of tryptophan residues in polypeptide chains. Biopolymers, 1981, v.20, No 11, p.2287-2309.

169. Weber G., Shinitsky M., Failure of energy transfer between identical aromatic molecules on exitation at the long wave edge of the absorption spectrum. Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1970, v.65, No 4, p.823-836.

170. Weber G. Polarization of the fluorescence of macromo-lecules. Biochem.J., 1952, v.51, No 2, p.145-155.

171. Борисов АЛО., Тумерман Л.А. Новый тип флуориметра. -Изв. АН СССР, сер.физ., 1959, т.23, & I, с.97-101.

172. Ануфриева Е.В., Готлиб Ю.Я., Краковяк М.Г., Паутов В.Д., Шелехов Н.С. Изучение подвижности основной и боковых цепей макромолекул в растворе методом поляризованной люминесценции. Высокомолек.соед., 1977, т.19(A), J6 II, с.2488-2493.

173. Болотина И.А., Чехов В.О., Лутаускас В.Ю., Птицын О.Б. Определение вторичной структуры белков из спектров кругового дихроизма. П. Учет вклада jâ -изгибов. Молекулярная биология, 1980, т. 14, JS 4, с.902-909.

174. Chirgadze Yu.N., Shestopalov Б.Y., Venyaminov S.Yu. Intensities and other spectral parameters of infrared amide bands of polypeptides in the JJ- and random forms. Biopolymers, 1973, v.12, No 6, p.1337-1351.

175. Chirgadze Yu.IT., Brazhnikov E.V. Intensities and other spectral parameters of infrared amide bands of polypeptides in the o(-helical form. Biopolymers, 1974, v.13, Ho 9,p.1701-1712.

176. Chirgadze Yu.IT., Fedorov O.V., Trushina N.P. Estimation of amino acid residue side-chain absorption in the infrared spectra of protein solutions in heavy water. Biopolymers, 1975, v.14, No 4, p.679-694.

177. Чиргадзе Ю.Н. Количественный анализ вторичной структуры белков в растворе на уровне высокого разрешения. Дисс. на соискание ученой степени докт.биол.наук, Институт бежа АН СССР, Пущино, 1976.

178. Ч1фгадзе Ю.Н., Сафрошкин I0.B., Бирюков С.В, Аналоговое устройство дня разделения сложных спектральных кривых на отдельные компоненты. Приборы и техника эксперимента, 1975,4, с ,131-133.

179. Zavodszky P., Johansen J.Т., Hvidt A. Hydrogen-exchange study of the conformational stability of human carbonic-an-hydrase В and its metallocomplexes. Eur.J.Biochem., 1975, v.56, Ho 1, p.67-72.

180. Lebedev Y.O., Abaturov L.V., Pirtskhalava M.K., Varshavsky Y.M. Hydrogen-exchange study in ribonuclease A. Stu-dia biophisica, 1976, v.60, Ho 2, p.143-148.

181. Вайнштейн Б.К., Фейгин Л.А. Об упорядоченном расположении молекул "растворимой" рибонуклеиновой кислоты в водных растворах. ДАН СССР, 1965, т.161, J* 6, с.1444-1447.

182. Krigbaum W.R., Kiigler F.R. Molecular conformation of egg-white lysozyme and bovine oC-lactalbumin in solution. -Biochemistry, 1970, v.9, Ho 5, p.1216-1223«

183. Тимченко A.A., Птицын О.Б., Сердюк И.Н., Федоров Б.А., Кравченко H.A. Структура лизоцима и его комплекса с ингибитором в растворе, сравнение со структурами в кристалле. ДАН'СССР, 1976, т.230, £ 2, с.458-461.

184. Sears D.W., Beychok S. Circular dichroism. In: Physical principles and techniques of protein chemistry, part С (Leach S.J., ed.), ITew York and London: Academic Press, 1973, p.445-593.

185. Englander S.W., Downer H.W., Teitelbaum H. Hydrogen exchange. Ann.Rev.Biochem., 1972, v.41, p.903-924.

186. Woodward C.K., Rosenberg A. Oxidized RHase as a protein model having no contribution to the hydrogen exchange rate from conformational restrictions. Proc.Hat1.Acad.Sei.USA, 1970, v.66, Ho 4, p. 1067-Ю74.

187. Шахнович Е.И., Финкелыптейн A.B. К теории кооперативных переходов в белковых глобулах. ДАН СССР, 1982, т.267,1. В 5, с.1247-1250.