Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Белки трофобласта человека: иммунохимический анализ и их иммуногенность при нормальной и осложненной беременности

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Белки трофобласта человека: иммунохимический анализ и их иммуногенность при нормальной и осложненной беременности"

РГЗ ОД

ПЩПРОПЕТГ ОЗСЬКИЯ ДЕРЖЛВНИЯ «111ВЕРСИТЕГ

на «трлоях рукопису

Wttf UTEI «(СЕД Тетяна В1ктог>1пмэ

П1Л:<!1 ТГГКСБЛЯСТУ JCTHIM: 1М9Н0Х1М1ЧНИа ЛМДЯ13 TA IX 1МУ!;СГЕ1!И1СТЬ ПРИ МОРИДЯЬЩИ ТА ЫСКЛДДНЕН1П ВПГ1ТНССТ1

03. СО. 01 - tíioxiHl*

диерртдиИ ni 34of>yття наукоя^о ст комд^датв rí 1 nлпгЬ"n tyк

- - rimo tí 5

Дисертацхеи •£ рукопис

Робота виконана' на кафедрэх акушерства i А иеколог-i i та 6ioxiMÜ Дк1пропвтроосьног0 медичного институту»

WóyKOBi KepiEHMKm

1. Доктор медичних наук, професор BapDHiН Корнг?л1й Валентинович

2. Кандидат 6ia/iori4mix наук Шевцова Ала 1впн1внэ

0ф1ц1ймг опонвнти«

1. Доктор слогiчнш наук, ст» мауковий cniepaSiTHMK Стяродуб ¡1и> .зла Федорович

2. Доктор в1олог1чмиг наук профвеор Иудзевич Борис Олександрович

Про:,хдна оргвн1зац1я« Наукевсг--доспгднииьккР| Амститут пгд1атрИ,

аиуаерства та г!нвкалог11 МОЗ Укра5|ни,

На КИЮ.

' *

Захмст niдбудеться ЖОУГНЯ 1995 року о 13-Tifi годин1 на

зас-'даннЛ crvauiалЛэопамо*. вченаЬ ради К„053.24,06 у Дм!пропет-роаському деряаенезму ун4верейтет! зп адресок»! 320&23s м» Дн1п-ропетровеык,, ГСП-Д.О, пр. Гагар1ма, 72, ун!верситет, бхолого-еколог±чний факультет, корп.17, ауд. 407.

3 дисертацжг.!« мо»на ознаяомитися у 61ЙлЮтец1 Днхпропетровсь-кого державного ун!верситету. *

Авт< теферат poaj сланиП " " 0Q 1993 року.

Вченпй секретар Морна B.I.

cnenia-niзов ~Moi B4BHOÍ ради '—J

ЗйГА-RbHft ХАРАКТЕРИСТИКА РОБСЛГМ

йктуаяьн! еть, ропати. ИегЦ«н® ви»иванн» за доогого часу пах.у-аллогекого голоду в орган!зм» матер*. ткэ ией час ротрабуе поасмеи-на. Оскалькю i>yHKuiонал«нов меже» Mini м«т!р'с® та плодок азляттьсо плазматичме мамбрамг трофобласту, .логжчна припуститиг да сама тут зосередквн! факторис ею регулюмть 1мунолог!чний баланс KfiTepi та плоду. Клатини тро^облшсту позбавявн! антиген!о головного комплексу ri стасум1 смаст! е ■ a/so маять txmmnQiчм! антигрни у склад! хнтогральних свое! мембоани If-r.ulk Ы.Р., 1989). Прмлуска-

ють, >ио саке иим £>! лкем належит*» вежлив» значения в деяких хе-хатзма^, що зейазпечукт., нвв1дторгненна плоду гид час вагхтнаст!g «к маскуванмв лаяврхвюих аллс>антиген!е на кл!тинах тро^ойласту, продуюЦя орган!змом/waтерi та плоду j чунорегулягорних факторов, л тахах розвнток гггоииф!чнт Хмуинаг в1дпое!дх (Го— валло В.I., 1987j LabarrerE Pofi„s 3909).

Проведен! достдження) еиагили лначну тлькхсть молекулярних компонентов, a cuui йав анмх з плаз матичною мембраною трофооласту (плаиентарна лужнг фосфатаза, рецептор трансферту та iншг), da-нак значна чаетмна tii лк!в в препаратах мембран трофобласту зали-шаетьс» не!д«>чти<!аковг.но». До того ж5 neeiдомими, або частково вивчемими щ, 4>1эико-х1м!чн1 влас.ивост! мих лк1в, оскгльки дослгдмення проводились в основному в амунолог!чному напрямку (Vclnture J.F., 1488j Kim N.C., 19В7). Mi» тим, визнане нчя специфачнях Ciiiicie плазматичних мембран тро^рбласту, ix 4'!зико-эс1м!чнс характеристика та эдначасне вивчення 61олог1чно1 рол! та Их iiWicry в рлзноман!тних структурах i 6iологдчних р!динах ноже внести вагамий вклад в практику pauiональнох iMynorepanii при деаких формах акушерсько! патолог!i (тонсикози, недоношуоаннв ваг!тносг!, !мунолаггчне везпл1дд51). В остант роки з*явились докази поави окреиих б!лк1!в трофобласту в сироватиг кров! при онкозахворюваннах» що сегдчить про cxo<xiсть npouscy малд r-Hi3anii з б! олог!е» розвиткч/ Tpo{-oS пасту, якии синтезуе Siлии з ¿нвазмвмимм, властивостэми 'Gabius Y.J. et.al., 1489). Тому троч-орласт те синтэтооанг «им балки шкавг не пише з б!оло1"ачно1 то'.ии зору, аж й э нл!Hiчно*.

Каfd дано! роботи - i денти^о Kaui я, характеристика та доел)iмуногPHHOcrri меибпаноЭЕ ' уз^^них плазийтичног

MtM6pSHtt Tpci (i-5-Ласгу PI-jauh'I*

В i i'i-; j j ;.;г1 :^ < ¡.-лс i yf it i; : - :>■!'-! •

— Ciiifiri:'!1 cne-u " ■ ■'.■;>/ ■ i . K/v . ■ ■ '. ' 'r t ■ <' i-1 A>- i .' IT^dJi.'n . t- »ЧПХ ' pLl'S'Ob /1-лС ' V ' '

- 1 l\i • ! И ■* I (TR'i!i(;s<,|i till.. i >'.,"■. I • -< ," -(H."1 • M - > . . ' | ¡У(С'"

- з -

бласта -лшдини за допомого» 1 муноа!мх чниг метода б аналхзу та доел!днти хх ткйне— та видоспеци'НчЛсть;

— вивчити езаемодхю сп»цифхчниг бхлкхв плазматичних мембран трофобласту лчдини з лектинами рхзмо! вуглеводно! £гпеци1}>1 чностх ;

- провести порхвняльний анаг.хз кхлькостх та специфхчност! аитит!л до хнтегральних бх.лк!в плазматичнйх мембран грофо-бласгга при корма-льнхй ваг!тнсстх га при ускладненхй гАпо-трофхеи плоду 1 ОПГтгестозом.

Наукова новизна та практична значимость роботи. Використо-вуючи л^унохам! чн! мгтоди доел! дкень ¡> визначено ксэ! ткане— га в^доспеиифхчнх актигеми серад .^нтегральни.: €1лк1в гм. л^*»ап. ниу г-.е»ёран трофоеласту л я.'мн! , доказано г" гл!копроте1ниау природу та хмуносеннхсть. Плацентарн? лужка фосфатаза хдентиф!ков2"а як оснсзиий компонент серед специф!чних ба"К1в трофобласта зрхлоз плвценти. Показано пряму залвжнхсть кхлькост! пацентарнох лужно'х фос^атззи вхд ступени зрхлостх плаценти. Встановлечо. «о в п1сляпол!з' о»!й плацент! р!эк.о зменшуетьс» кхлък! стъ тврм1нал«>ниэс залишк1в схалооих кислот у склад! вуглеводного компоненту плацентарнох лужмох фосф^атази. Доведено я!рог!дне зниженнп и1лькост1 антитАл до бхлкхв плаэматичних мембран троз-областу в плазм! кров! вагхтнизс з ОПГ—гестозом» обумовлене зниженнвм хмуннох вхдпов! дх. на спеии^ачнх антиг-ени плазматичнйх мембран трофобласту.

Дан!, одержан! в робот!, можуть бути використанх в клхнхчнхи практиих при дослхджвмнх ступени зохлостх фето—плаивнтапного комплексу та «аг-ногтиих ОПТ—гесгтозу.

Апробацхя роботи. Матерхали .аисертаих! представлялися на 20—м конферемцх! ФЕБС (Будапешт, 1990), 4—му мхжнародному з'хзд! "1мунолог1в репродукцх!" (Кихв, 1990),1&-му Мхжнароднсму б!ох!мхчному конг-ррс! (1ерусалхм, 1991) , 7-му Свропейському конг-ресх ПО хмунологх'х репродукцх'х (Рим. 1992), 6-ну украхнському бхох!м!чному з'хзд! 1Ки!в, 1992>.

На захист виносятьсв:

— виэвлення нових органо— та видоспеци<р!чних антигенхв у склад! хнтегралъних 61лкхв плазматичних мембран трофоблас-ту;

— доказ гл!копроте'хноЕох приводи та девка характеристик* вуглеводних компонентхв спеиифхчних бхлкхв плазматичних мембран трофобласту людини;

— хмуногенн! сть хнтегральниэс бхлкхв плазматичних' мембран трофобласта по вхдношению до органхзма матерх;

— з вколот рт сть змхни к! лькост! ант ит!л до спеиифх чнш актигенгБ троФобласту при вагхтностх, ускладненхй 0ПГ-гестазом.

Структура та обсяг дисертацхйнох роботи. Дисертсихя еикладе-

— м —

нб иа 101 сторанках машинописного тексту 1 мастить вступ, три рпзди^и (огляд лператури, матераали 1 методи досладиемь, результат« 1 ах обговорення>, заключиу частицу та висновкн. Дис^-ртацха 1люстрован« 3 таблицами та 1В мал*ок.:ами. Список латератури на^хчуе 142 наименування на рссхйськ1й та аноземкай мое! .

МАТЕРГАЛИ ТА МЕТОД И

Ь дасладзк викормстовували плаценту людини, »"ища, криси, ко-роаи. свин±; мозок, м' ззи, нирчи, сери_, леген1, селезенку» гчечанку доросло! лидинн (э^топсайний матераал) та плоду, одержана в результата штучного пгрериьення Е«-гатнаста; плазну кровЛ людими.

Хнтег-ральн! балки ?лазматичних мемьран тр-£о6ласту (ПМТ) виллгли э плацекти.згадно схеь- >, пр кзеаеноа ма ма.о.1,

Збагйчанна мембранами иакровал одерганоа фракиаа гизначали за зростамням антиЕНОстл иар^ермог-'- ензиму — луяноа 4юс$атази. Як суестрат вшгсрмстовували $> — гл1иврвдосфат Ма. Питоме активность лухнйа фосв'атази зростала в 7,8 рази.

Енстректи тканин одержувзли шляхим гомогена-заиах в л* яти об рмах 0,02ЕМ трис-НС1 буферу, рН 7,4- 3 0,005 М ФМСФ, центршругуеалм 60 хвиль- . при 35 ОО1"" е, осад р«"сусг»ендували в 2-х п5' смак того - буферу га повтор шва ли «центрифугу ^аннз„ Осад, о^роеляли одним ов' ь-мам 2%-ного Тритону X—100 в пэгередньсму еу^ера. витримували 18 годин при 4е С та центрифуг ували за тизс же Умое. Супернатант -эадб'ирали а з€ер1галы при -20 С. Загальну кхлькаСть балка в ».¿начали з» Методом Бредфо^д. С

•нитисироватку до аитегра. ьних Ёалкав ПМТ одержали амуназаиасю кро-пхв сум! шопе балка (2 мг на одного кроля) 3 повним юг анток '-»-рей: ¿.а. Одержану антисироватку зиСнаджу»алк на еритроуитах лодини та не сорбентах з . амобхлазованими балками сироватки кровз та гк?чанки людими- Спамнфачнасть адс-ржвгла «нтисирозат*-»; оцамювали метод дамп ахуноелектрофореэу, амумобяоту та хмунофлуоресцениИ- • ^ *

Елвктрофорез в пластинах града ентного (5-17,57.) пола акра л-анадного геля у присутноста додецилсульфдту натраи СОЗ-ШО здайечкзали за системою Леммлх- 1мумоблотхнг проводили пасла електрофорезу в ПААГ за допомогою електрофоретичног-о парвиесвмнв молекул балка на натроиелмлозну мембрану в буфер! такого складу! 0,025М трис, 0,192М глхиин, 20 X етилового спирту. Доеладженнэ пола пептидного складу та аденткк^кеиа» пваичфа чннх полИжтиив ПМТ здайенввали за доломэгои методу амуноблоту з вихористанням одержано^, нами антнсироватки, £ також ряду комери!йних антисироааток. Паверхню мембрани Клокували 1*4—ним (зозчином БСА в з&буференому фосфатами саль>оеому разчмт, рН 7,2, э 0,05/. тван

Гомогемаг плаиемти в рН 7,4, 0,1м11 ФИСФ,

2мМ ЭДТЙ (сп1вв1лчош5»мн» 1:2,5)

Г

800й * 10 хв .

I I

Р1 Б!

I-1

Р2 \ 10 ООО2 х 30 хв.

52

90 000а х 60 1в.

БЗ

оз +

50 мл ЗФР, рН 7,4» «ИС®, 2мП ЭДТД

I

,-} 90 ОООз х 60 хв.

Р4

+

15 ля 0,025« трис-НСХ, рН 7,4, 2% Тритона,0,3 мМ ОМС© , 2"М ЭЛТЙ

имку6ац1я при С 16-1В гадин

[

-----1 90 ОООй X бО хв.

Р5 1

iыrvrpaJlЬ^^i балки ПМТ

Рис. 1. Схеиа а&еряання антргральних бьлкгв ПМТ.

-fi-

zo, -ra хнкубуваяи з кролачо» антисироватко», а дал! з антителами проти амуноглобуланав кролика, кон'югованими э прероксидазом. При визначенн! антитхл до антигенав ПМТ а плазма крова першу 1нку6ош.1« проводили з разведено» в 10 разаи плазмою, другу — з гнтитгдаии до Ig люйиии, пом1ченими пероксидазою.

Кон'«гати лектинхв з пероксидазою хрону синтезували за мв-тодикок Луиика ¡4.Д. та ан.(19В9).

РепМки елоктрофореграм о&робляли лектинами за методом, зап— ропонованим.Луииком М-Д. ж Кусенем С. I. '.19G7\,

Кхлькхсть ангит1л до бхлкав ПМТ е- плазма. крое i з Ai й енкш а ли методом »'"■к-эмкурвмтногг» Амунофермент toro аналиу. I мобалх: auiю антигену <1,4 миг/мл) проводили buisxom nao jmoí адгэрбш.' при 4° С nporst-oM ni ели цьог-о бяокуеали вальна mí сия эв' кзуезннй

IV.—ним БСА, вадмиеалм планшет та вносили в лунки доела джувана пла^ми ».'рссх, розведен! в "Г; раз» Як контроль виксристозували сумаш плаэми крова нееагатних- Шслз íhkvCcuü протогом бО хаилин при 37' С планшети змову проминали та амкубували з антителами проти амуноглобул1нАв людини, помачених пероксидазою. Репстрували реакцаю эв допомогом хромогенного субстрату пероксидази — л— фенилен- да »mí ну. !<ритер»ем ка лькосг! ентитхл виступав Андекс эв' кзувймнэ — вадносма величин», aso визиачасться за формулою:

£ досладиуванаа плаэми — Е фону

1нде?кс зе'язування = - -------— ,

Е контрольно! плазми — Е фону ль-- £ . — поглощение при 405 нм; контрольна плазма — плазме неаагатних, фон — в лунки вносили звмасть пазми робочии C-vt'BO (ЗСР—TQ1H).

г

0CH0BHI РЕЗУЛЬТАТЫ ДОСЛ1ДЖЕНЬ

1 1. ООЕРЖЙННЯ ТА АНАЛ13 СЛЕЦИ-НSH0CTI АНТИСИРОВДТКЫ ДО ШГЕГРпЛЬИИХ Б1ЛК1В ПМТ ЯШДИКИ 3 oKKDpncTEHHSN тритоноэого екетракту ПМТ як антигену одер— «¿но кролачу антисироватку. Аналаз i'i спэиифлчнастг методом ракетного 1куноелектро4орезу з промАжним /■, гелем, ыо mí стить тритановий еистракт ПМТ, риявив значку кАлькАсть

перекрестно—реагуючих антигенав, tao поисутн1 в тритонов их с-кстсоктаз аншмх dorshib людини, При utому, найбальш €-лиэькими эй антигенним спектрби були трофобласт, печхика та мирки. Екстракти мозку, серия та м'зав мастили значно менше пгрехрестно-рвагуючих антиген! ь. ПодАбне сгиввАдношення мало мАсие i для органхв ембраону. Лхсля . сисмадженмя одержано! антисироватки на еритрсцитгх ладими та на сорбента» з 1моб1лазооаними балками сироватки кроод та nesiнки лкдини виявлено один п1к преиипатаца! для тритонового екстрэкту ПМТ. Реекца» антиген—антитало дла iwae органае с амуноелектрофорезА не вияолена. В лерехрестному

i муноэлектро^ор зз1 солюбхтзовано! тритоном фракихх ПМТ э використанням одержано! моноспеиифхчнох '^нтисироватки до б1лк!в ТИТ визначавса трьохгорбий пхк лрсииттацИ в областх булхнхо, «о свхдчить про електрофоретичну гетерогенность даного 'з.. ч.

Спеиифхчнхсть одержано! антисироватки до £1лк!е ПМТ пхлтверджено хмунагхctoxImxhhq. На зр!заж ллаиенти при непрямому !мунофлуоресиентному окрашуваннх спо стер! га лось яскраве свхчення поверхнх трофобласту.

2.1ДЕНТИФ1КАЦ1Я СПЕГЦИ'ИЧНИХ АНТИГЕНIВ ПМТ ЛЯДИНМ.

За jtonoMQro» не-од:, хмуноблот^ э використаннам ьиснаджено! антисироватки до хнтргрлль /к. бх лн! е ПМТ в тритоновому еу -трактх

ПЯТ люд11ни виявлено декхлька по-"хпептид! ~>: широкий з М.м. 68-6®?

ь

кД та мхнорнх полхпептиди 3 М.м- 31, 36, 47, 5В, 64, 76, 79-80, В7-9С. 110 та 130 кД (рис.2). Bei их полхпептиди визначались в "планет, рхзних строкхв вагхтност!, при иьому не виявлено значних змхн в забарвленнх вхдпоехдних зон. Виняток скЛадае полхпептид 68-69 кД, ймявдрний у фраки! i ПМТ зрхло! . плаиенти у виглядз основного хнтенсивно забарвлёного компоненту 'i слабо зябареено! дифузнз! зони у плаиентх ранн!х строк!в ваг!тностх. Цей полхпептид був хденткфхкований нами' як плацентарна jivms фосфатаза (ПЛФ) за допомого» специФ!иного субстрату до лужних фоефат&з С>— нл!иерофосфату Na.'ГИзнхше справедлйехсть цього бу лс тадтсерджено э використаннам cneunii! чно! антисироватки до ПЛ'К люб'язно предоставлено! нам доктором Bohn. На основх метод1ь хмуноблоту та ракетного хмуноелектррфорезу нами естановлено, «о к!лькхсть ПЛФ в препарат! ПМТ зростас по Mipi збхльшення строку оагхтностх, пои иьому,* в раннай плаиентх ПЛФ визначалась в лише слхдовхй лькост!- Тобто, ПЛФ ноже виступатм як маркер зохлостх плаценти, а отже х ступеню зр!лост! фето-плацёнтарйого комплексу.

Аналхз тканеспеииф!чностх виявлених полхпептидхв ПМТ методом хмуноблоту (рис. 3) показав, то пол!пептидw 68-6=?, 76, 79-S0, 97; 110 ! 130 кД но визначались в жодному !э дослхджених opranie людини та плоду, зв винятком ПМТ, не проявляли перекрестно! резких! з л!мфоцитами. Очевидно, можна стверджувати. що данй г-рупа полхпептидхв звлясться. тканесгтеычФхчно» для трофобласту. В!дсутнх сть роакцхх них антигенхв з антитхлами до альбумхну та 6i^Kie сироватки кров! людини також евхдчмть- про спеииф!чн!сть "ix для ПМТ. Жоден з цих полхпептидхв не вхдноситься до таких oiдомих б!лк!в вагхтностх , як хорхогонадотропхн, трофобластичний бетаглобулхн, альфа—фетогтроте! н, альфа—2-м!кроглобулхн

фертильнсст! х не реагус з спеинфхнними антит1.чами до трансферхну, альфа—2—макроглобул!ну, ф!бриногену, ф!бронектину, а також рецептора трансферину (такий наб!р 61 лк!в"'дл«« хд(?нтифхка1_и"!

i г з

гт, * IB

ri

Рис. 2. iMyHOÖJK»! SpiCçmoBIIX 0KCTP3HTÍB ПМТ пюдини з використаиням спе-циф1чно! йнгиоироватки до 61л-К.1В ПМТ, Emm ПМТ одержано на piaHHX строках вагшюст! t I - 3940 под., г - го-Zh нед. > 3 - 6-12 иод. .»■

fîlrxtO~3

ез _

«5 ... ÍS

i г з « s s те г з < s б ?

i

О» . !

Рис. 3. 1муноблот мембрвнних б «нет органов дорооло! людини ( В ) га плоду (0)8 використанпяы виснаднэши на эритроцитах та ¿муносорбентах а ,б1лками пвчики та ьйроЕатки кров!.людини автисироЕвтки до б!лк!в ПМТ» I - нзднкрка, 2 - нирка, 3 - мозок, 4 - оол881КК8, 5 - м*яг<;!, б - легет , ? » серце* В - пбчтка»

- э -

було вибрано, ocKijibKH eiдомо, из ui ^ßi-лки вхсдать до Складу плаэматичних тембрам трофобласту людини), (Faulk W.P, 1983; Johnson, 19S7)

Методом iмуноб.лоту показано, tao тканеспециф1чт антигени ГТМТ е с-чь; "эово i видаспеци^чнини: вони не визначались при вэаемодИ одержано! нами антисироватки до SijiKiB ПМТ людини з мембранними б!лхами плаценти мина, криси, короэи, свинх.

3. АНАЯ13 ВЫГЛЕВОДНИХ ДЕТЕРМIНДНТ ШТЕГРАЛЬНИХ Б1ЛК1В ПМТ.

Для детального досл1дженн«я вуг.г«»водчих компонент'в in-rer— ральних б1лк!в ПМТ була вивчена взасмодгя з ичми б!лками сл1дуючих лектмнхв! манозосгецие^чнк : - кон*анав ал1 ну А (Сол А) та лектину з Lena culinaris CLCL i, галактозоспецшНчних — лектину з Ricinus communis (RCA) та Arachis hypogaea (PNA); Н-ацЕТилгл»коз-aMiHcnBuwfiMHoro - лектину з Triticum vulgaris СWGA): фукозо-creuMitriчнагп - лектину э Laburnum anatjyroides (LAL) .

Результати дослхджень наведен! в таблиц! 1. Як видно, лекти— ни ecix виСраних труп cneunidmhocti виявляли спорхднення до епецифхчиих полхпвптид1в ПМТ. Слх д заэначити. що спектр *-лх копал! пептид! в 'ПГ1Т значно ширший визвленого з допомсгою специфх4Hoi антисироватки до 6i лк!е ПМТ.

Анал!з результатов зв'ззування специфхчних поМпептидхв ПМТ з СопА, що мае cnopiдненхсть до термхнальних зализкхв манози, а також г л1скозн i до деяко1 мхри до N— аиетняглю коз ам1 ну {Хомутовський, 1986), сехдчить про наавнхсть у склада вуглевэдних кокпонентй в бхлкхв ПМТ саме цих цукрхв.

Рис. 4«а демонструс результати взасмодхх з eiлками ПМТ лектину сочевиш • По вуглевсднгй специй чностх и ей лектин под!бний до СопА. О Oilльки лектин сочевицх здатен езасмодхати з деохантенними х трьохантенними глхканамн комплексного типу. те-виявлет LCL електрофС'ретичн.! компонента ПМТ, очевидно, мзчть лодхбн! вуглеводн1 структур».

Найбхльш активно эе'азувався з! cbdimh вуглеводними детерм! мантами WGA (рмс.4,Ь). Цей лектин нас спсрхднен!сть до мономер!», а в eiübUJii* Mipi до ал!гомерie М-ацетялглкксзычзну. KpiMToro, суттЕвий вплив на зв'яэування WBA з гл1каппотехкачи иають залишки схаловнх кислот. £?заемод1я бхлкхв ПМТ з WGA в нашиг експериментах уггоджуеться з данями Johnson (19S9) шо WBA активно зе'азуетьс» з кл1тинами с1нцит1отрофобласта на эр1зех плаи»нти.

Мал»нок 4 ( d-e ) i таблица 1 демочструють взасмодис ГЭТТ з двома галактозоспецифхчними лектинамиг лектином apaxicy та аггтиггин! мом клешовини. Лектин клещовини мае cnopiдненхсть до Ssl^l— 3(4)GlcMAc i специфично зв'язуеться з N—г-л!канрми. На ei д мх ну si л RCA. лектин apaxica - селективный реагент дез С-глАкзн1е — мае високу а<Нанн!сть до д1сахариду Sal ß 3— ЗЕа1МДс

12 3 121 12 3 113 12 3

игА73 - -1 (Г <•! И . • щи - ■ -

££ -

О _ % « ¿й . - «в

И _ *:• «л

а Ь с ^ с

Рис. Спектр инкопротешхв плазызхичних иеыбрз| трофоблзсту люди ни, ¡¡¡о ззаеиодшгь г леяга-наыи сочевицх ( а ), ( в ), бобовнике ( с ) та араэису ц сля обробки ( о ) га без обробки ( е ) 0,05н сирчанаю кислот-ов. Бшш пйозиатичних мембран ярофобласту одержано на рАзншс строках заптвосм ; I - 39-40 кед,, 2 - 20-24 нед., 3 - 6-12 нед.

(Луцик М.Д. , А 999) - До того ж, на вхдмхну вхд RCA, .лектин apaxicy зв'язуеться з тими термхнальними золмюками галактсзи, но не екранован! схаловога кислотою. Наведем! в таблиц! результата дозволяить лрипустити haabhictb у склад! доел!джуваних б!лkíb М-г - sao hi стать $ 1- 3(4)С1сИЯс, л такок D-глхканхв з

Gal J> 1- 3GalNAc. За'язувэння лркгину apaxicy э глхкопротехнами. ГИТ лише теля слабкого кислотного гхдрол1зу в 0,05н !42504 свАдчкть, мо терк±иальн1 залип»» галактози у склад! слеиифхчних полхпептидхе ГПТГ, за нинвтком ПЛ», екраноэан! с! а лов ими кислотами.

При акал!.*х вуглезодних компоненте по л1п«тгидх»5 . ЛКГ на рхзних строкчх BeriTHOcTi не виявлеко значних !»!лм1нностей в 3R' азувяних л«ктин1в j глхкопротвхн. «и ПМТ, за виняткои Ш!Ф. Як зазначаяося, в зрхлхй гглаи^нтх не . вияэлено эаливгкхв схалоеих кислот у склад! олхпзсахариднюс яаншвгхв . 1ЛФ, в плаиеитд ж ранних строк!в вони присутмх. Напевно, 0 npoueci розвитку плаиемти «хдбуваеться вхдшеплення тормжнальниг залияжхв с!алових кислот, IÜO приэиадить до змхни заряду та, як на с л i,сок, кон<ьормаи1 i ПЗ!Ф у складх ПИТ.

Таблиц« 1

Спектр rviiKcrssoreie-tiis ГШ, омяэл«?нкг э днгкгмогтяо гл4ксжом'«raiTiB

Г .......т I ! t 1 1 í 1 ! I' на j Pí?A I ' ' 1 -1 i 1

! н-в- 1 йнта-j та 1 Con AJ JjCL АО . 1 niCJSJI RCA | LAL¡

| С«Д) | i ) ГСТТ ¡ I 1 1 1 i о^ювкн 1 H2SD4 1 ! i

i . i |39-40 | I i + 1 1 Г + 1 + 1 - 1 - 1 1 + !

|47-49 j 4- 1 + f + 1 + 1 + + 1 + i

i S5 ¡ i + 1 + 1 + j - + ! + j

i 68 1 1 -»- i + I 4- 1 - - 1 4- i j

¡G3-69 | 1 4- i + 1 4- 4- | t + * i + ! 1

Í 7S 1 4- j 4- i + ! 4- | 4- * i * i

| 79-00 | + 1 4- I i 4- 1 4- + 1 + ¡

|89—SO ¡ + i 4- 1 + 1 + j + + i 4- |

1 97 1 4- I 4- f + I 4- ! + i + !

i 110 1 + I + 1 - t + j + 4 1 + í

! 123 | 4- I * 1 4- } - 1 ¡

i -«O | + | 4- i - J 4- ¡ + i i

¡ 138 | 1 4- } + J 4- ¡ ' - ¡ 1

| 148 | 1 + I J i ! f

1 1 i .,_ ., .„.i 4- i 1 ........i 1 i < ! t

- 12 -

•*. 1»ЮН0ГЕНН1СТЬ. BIJSiJB ПМГ ПРН HOPHAJbHIti ВЯГ1ТН0СТ1, 0ПГ-ГЕСТО31 ТА РЕТАРДАШ1 ПЛОДЫ

Одним is механазьйв, що забезпечують толер aHTHiсть матер! до плоду 1 нормальный nepeSir BariTHocTi, ввакаить розпазнавання ¿¡ллогн-гигенАЕ* тронов ласту, що супроводжуегться продукиавю блокукчих антитрофобластичних-антитАл. Проте. дан! лхтератури не данп-ь достатньо r.iosHoi iH(J>opMaui'i про cntiun^xчн!сть виявленнх антипл до пеаних антигенних детермхнант. Mile тим, таког-о роду доеладженна представлають iHTepec не лише в план! pouyMiнна MexanisMiE амунологАчнюс siiHOO ♦ мак матар'ю та плодом, але й MexaHioMi , щг .ргэ: г--у\ ту 'сладмоння п po6iry ваг!тностх.

За допомзгою метода в i муно^ерментнагс амаггзу (IФ А) та амуноблгту ЗД1йснили аналаэ антит!л до Антегральмих балк!в ПИТ (анти-ПМТ) е плазма невагатниэс (контрольна група - 1), .»санок з мормальнок.- EariTHicT« (2 група) та ускладненою ОПТ—геетоэом (3 група! а гапотро$!ек> плоду (4 група).

Покаэники piBHB анти-ПМТ в плазм! крова наведен! в Таблица 2. При Я.нал131 КХЛЬКОСТ! амти-ГИТ в 2-riP, та 4-Tin групаж не гневлено вхрогаднох статистично! pi3Hnui «аж поравнюваемими груп?ми. Эиачнс снижения анти-ПК7 { бхлыгг на ж у два рази} хасактсрнЕ дл? —рупи э ОПГ-геСтозом. Слад эазначити, ц>о при "оксикоjйх третьего ступени» анти—ПГСТ методом 1ФА ме еизшлялись- ,

Специфачн1 сть вияеле»; ^ анти-ЛПТ дослхджували методов муноблотч. Результати наведена с таблица 3. Як видна, анти-ГПТГ t.i^trneflnct, «и у KOHTPDflbniH - так i в 2-г!й та 3—гаи групаэ:.

. Таблица 2. ..

Т

Хндскс зв'«зування антмтрофобяастмчких антитхл в плазма кроз! при иприйли»сin i уск&днсгм1й езг¿тнаста

1........ 1 група 1 i t Плазма матер! 1 i i 1 Плазма плоду j

i I f * ! ! И + ta j I n ] i M + m |

{ Нормальная 1 GcariTHicTfa < s i i 1 59 i 1 1 1,5S + C.20 j I ......! I 23 | 1 1.57 + О.ЗО j

1 j Гхпотро$1я j плоду 1 i 1 i ! 13 ! i j 1 1,40 -I 0,27 | ( I I 11 ( I 1.3S + О.ЗБ }

I j ОПГ-г-естоэ t 1 17 1 i i 1 0,61 +- 0.13» J « 1 I > i

Прим1ткаг ~ — разнит» у пор!вм»мна 3 нормальною earirHicTB oiporieHa при р<0,0Ь_

Таблиц® 3

Cn^KY, ч 1ммуногенниг 6i лк!в тро^сбласта лчдини в норм! i при ОПТ~r-ecT03i

1 1 м.М- f 1 j HsaerJ Tvrl I 1 Ноэнальма I ¡ ОПТ -гестоз j

1 1 1 B«rÍTHÍCTfc I

1 I J W=18 f i n=51 j p =37 ¡

i f i 1 i 1 1 ! i i i 2 f i 1 1 i ! 2 1 i i 1 1 ! 1 2 'j

1 ¡2? 500 1 1 ! ! 1 9 i i ) 17,6 1 4 1 10,8 j

¡23 500 8 J 15,7 J 3 ! B » 1

j 27 800 . i ; ! 20 1 39 ; 10 I 27 J

¡31 500 1 2 i il i 17 j 33 ¡ M i 37 ¡

¡33 000 i 9 ! 50 J 16 ! 31 1 9 1 24 J

135 000 ! 9 ! 50 } 34 1 es I IB i 43 ¡

¡39 000 ! 1 1 9 ! 17 i 3 1 8 j

J 42 000 1 i ! ¡ 1 3 i 6 !

\AB 000 ! 9 1 50 J 15 1 29 ¡ 9 1 24 j

147 000 ! 1 I 15 ! 29 ¡ 2 1 5,4 J

¡58 000 ! 1 1 9 1 17,6 1 1

184 500 I 4 1 22 1 S 1 I5-7 1 3 1 8 j

¡ез ooo ¡ 4 i 22 J 22 ! «3 1 20 ! 54 ¡

¡69 000 1 ! 1 8 ¡12 1 1 1 2,7 j

¡76 000 i 1 ! 9 f 17 1 1 1 2,7 1

¡90 000 1 1 6 ! i2 1 I

¡110000 i 1 i 1 i • - i 12 1 23,5 j 5 1 17,2 ¡

¡123000 i r 1 ! ьэ s j._______;.......1 1 1 « 2,7 J f

1 - чсстлтд ви«вяеммя анти-ПКТ до вхазамзг-о гюлипепт»еяу;

2 - частота ей«:««« (в Ж) анти-ЛЯТ па »иигяжнм» до

зет-альма! Ki/s»Kocri посл1вж««их: о двнЩ r-pyni.

причому в останнах'спектр амунвгенннл Еалкхв значно ширший за рахукок вивалекнз ентитхл до пол1пептид!в л М.м. 21-27» 39, 47 та виквлгнш за лопамогою сдержано! нами амтисизсротки споииф!чних длв Грсфобласту полапептид!в э М.м. в мемах 69-123 кД. Слад гаэначити, то частота виявленн» антитал до иих палапептид!в в 2-й груш виаа у пордвнянна з о—№ тгрупою.

Таким чином, гад. час вагатноста в плазм! ихнок присутм! антит!лч, направлен! як до специяхчних, так ! до меспсииЗачких антигенмга детерманант !нтегральммх б!лк!е ПМТ. При ОПТ—гестоз! зникеиа к1_пьк! пть анти— ПИТ за рахунск зниження продукц!'! антит!л до споциф!" ч'*х йгтигеи1в ПМТ. Можна пропустит«, ша V патогек™31 ОЛГ—гестоэу 1мунна вадповаль на антипени грофобласту с од>.им !** механизм!ч, ио эапусканггь патологи чний проиес. Це може Сути' обумоолено як гиникненнам цирнулаюмих амуннмх комплексов при токсикозах, так 1 сорби!с» антит!л на плацент!.

ВИСНОВКИ

1. У склад! !нтегральних 6 а лк!в плазматичних мембран трофобласта

лшдини 1денти:иксв«иа паиентарна лужыл «росфатаза та виявлено

нова ткане- та видоспецифдчнд ангигеми з молвкулврмими «асами

у межах 7"ь — 130 Л-

'2. С-пеиифзчн1 антигени плазнатичних мембран трофобласта людини е

гл1кспроте1нами, до складу вуглеводних ланиюгхв аких входять

заливки манози чи глнжози, галактози, фукози, М—ацетил-

гллкозам1ну. ыаяозш кислот. На основа анал!зу зв*язуванна

т

лектимав разно! спс?ииф1 чноста !з г!копротеанами плазматвт.них мембран трофоб.паста людини встановлено наявнасть 0-гл!кг*:,ав та Ь-гткам!в разного типу в структур! виявлених спеиифачних балкт.

Плаионтарне лужна т^сфатаза проявляе гетерогенн!сть в онтогенеза,обумовлену зниженмям терм!нальнш залишкхв с!алогих .'ислр- у прсцеса стара низ плаценти!

4. Встановлено пряну залежн!сть вм!сту плацэнтарноа лужиоа йссфгтаэи с плацент! вад ступе?ню зрхлост! плгценти.

. 1нтег-ральна балки плазматичних мембран тро^об ласта людини проявляють виражену амуногенн!сть до аргвназму матера: в плазм! кров! ваг!тних виявлено антитала як до слеци^чних, так ! до неспеци<$'!чних антигенхв плазматичних мемёран трофобласта людини.

¿з. Встановлено в!рог!дне зниження в плазм! кров! матер! равня антит!л до !ктегральних 6!лк1в плазматичних мембран трофобласта людини при ОПГ—гестоз!, зобумовлене зниженням !мумо! вхдповхд! на сп£?ци$>ачн! ачтигени.

7. Гапотрофая плоду не суправодкуеться варогадною зианою рхвня

антит|.я АО бллк!в плазматичниэс мембран трофобласта люднни s^ с-

WW

плазм! матвр!, так I в пазм! плоду.

СЛИСОК Р0Б1Т, 0ПУБЛ1КОВАНЫХ ЗА ТЕМОЙ AHCSHTAU.il

1. А,И.Шеацсва, Т.В.Лапа, К.В.Воронин. Характеристика

антигенов трофобласта и их использование в иммунологносг икс-акушер скал патологии// Тез.докл. 1 Бсевоюз. иммун. съезда. •Сочи, 1909.— Т.2.- С.146.

2. Шевцова А.П., Лапа Т.В., Воронин К.В., Крячкова Н.В.

Использование иммуноферментнрго анализа анти-трофоблдс щ-ческих антител в прогнозе ОПГ-гестозое// Тез.докл.Всеггию. съезда "Реабилитация иммунной системы",- Цхалтубо, 1990,-С.35.

3. А.И.Ulesuoea, Т.В.Лапа^ К.В.Воронин. Иммунохимическое

исследование антигенов гро^областа человека// Тез,докл. 1Y Всесоюзн. съезда Нммунол. репрод,- Киев, 1990.- С.205.

4. Shevtsova A.I., Lapa T.V. Isolation and partial

'characterization o-f human trophohla^t antigens// 20th СП-.; Meetihg, 14-24 August 1990, Budapest. Abstracts Р~11о 0У7, P.37

5. T.V.Lapa- Я. I. Sevtsova, K.V.Voronin. Use of lectin's гг. th«-

study of difference betwc-кп the human adult and i;iibru?nc tissue rnt-inbr г\пе a 1 у сорго teins// 13th Inlt?rr,jt ional ItLtm Meeting, August 11-17, 1991. Deri in.- P.:0, 6 . ■ fli. / . Sf?v tsovfi. T.V.Lapi-.. Antigenic anal isis of ti'j«ia;>

synci tiotropbobl a^t membrane: detect д.сг< з f cp^cifir

igens// t\ty:tr . 1 5th [nt^rn. Conqr . of Kiu~ ^t-ni. lerusslem, 19^1, - rtufju--t 4-Й. 7. Л. I ,She>'t',rv;-,, T.V.L«pa, K.V.Voronio, k . ft. Pc. Lapov .

Autoan Ubm i'^ ■ v; ■iicnbr anc n'-ii^i: v ■ f tfriiiiobUi^t л i гиг.ч>1 «»rtU яЬ|»г,гг,л I preqiiency// At,- -< «М- "p - nr. km inol . i;f F'ii( i-'.io . F'o.ne . i t .=> 1 > „ l'i'-"... -Virj. Г.'Р-'М. у