Бактериоцины в типировании серраций

Аталикова, Жанета Борисовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Бактериоцины в типировании серраций
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Бактериоцины в типировании серраций"

На правах рукописи

Р Г Б ОД

АТАЛИКОВАЖАНЕТА БОРИСОВНА - 5 Щр 200С

БАКТЕРИОЦИНЫ В ТИНИРОВАНИИ СЕРРАЦИЙ

03.00.07 - МИКРОБИОЛОГИЯ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Нальчик - 2000

Работа выполнена в Кабардино-Балкарском государственном университете

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор И.М.Габрилович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, старший

научный сотрудник Плотников О.П.;

кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник Адамова Г.В.

Ведущая организация: Саратовский государственный медицинский университет

Защита диссертации состоится ООО г. в /{? часов

на заседании диссертационного совета Д 074.52.01 при Российском научно-исследовательском противочумном институте "Микроб" (410005.Г. Саратов, ул.Университет-ская,46).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РНИПЧИ "Микроб".

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор биологических наук, профессор Г.А.Корнеев

рАбу. 91 ъ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Бактерии рода Serratia достаточно широко распространены в природе - их обнаруживают в воде, почве, пищевых продуктах, а в последние десятилетия они все чаще обнаруживаются в различном клиническом материале от больных и здоровых людей, домашних и диких млекопитающих, рыб, рептилий, птиц. В 1996 г. отмечено 2-кратное возрастание выделения S.marcescens по сравнению с 1995 r.(Naumiuk и соавт., 1999).

С серрациями связывают возникновение у людей инфекционных процессов различной локализации и формы - сепсис и бактериемия (Н.Ю.Абрикосова и соавт., 1985; Gorts и соавт., 1987; Chmel, 1988; Watanakunakorn,1989; и др.), менингит (Gates и McCall, 1982; Landgab и соавт., 1987), инфекции мочевыводящих путей (Goto и Rawahara,1984; Serruses-Schontens, 1984), легких (Gill и соавт., 1980), желудочно-кишечного тракта (Cipoletta и соавт., 1983), послеродовой инфекции (Handrick и соавт., 1981) и др., при которых высевались различные представители рода Serratia, но чаще всего S.marcescens. Имеются указания на роль серраций в возникновении вспышек внутрибольничных инфекций (Halle и соавт., 1989; С.С. Белокрысенко и соавт., 1992), причем чаще всего в отделениях интенсивной терапии.

Этиологическая значимость при внутрибольничных инфекциях и возрастающая частота выделения серраций объясняют интерес к поискам надежных методов их типирования (эпидемиологического маркирования), которые дали бы возможность сравнительно быстро и точно разграничивать штаммы серрации от представителей других родов, а также внутри рода и внутри видов, выявлять госпитальные штаммы этих бактерий.

Методы эпидемиологического маркирования бактерий достаточно разнообразны и разграничиваются на традиционные (классические) и молекулярные. К традиционным относятся биотипирова-ние, серотипирование, фаготипирование, бактериоцинотипирование, резистенстипирование; к молекулярным - плазмидный анализ, рест-рикционный анализ, полимеразная цепная реакция, иммуноблотинг и др. (В.М. Бондаренко и соавт., 1982; JI.M. Пинчук и К.Я. Соколова,1983; В.Д. Беляков и соавт., 1990; Darini, 1994).

Среди традиционных методов типирования бактерий сравнительно мало внимания уделялось бактериоцинотипированию, представление о котором с каждым годом углубляется. Явление бакте-риоциногении привлекает внимание исследователей в связи с тем, что является стабильным и характерным признаком большинства микроорганизмов.

Многочисленные данные свидетельствуют о способности микроорганизмов, принадлежащих к различным семействам, выделять бактериоцины. Наиболее обширные исследования проведены с представителями семейства Enterobacteriaceae.

Бактериоцины находят использование при типировании некоторых бактерий: клебсиелл, менингококков, псевдомонад и др. Способность серраций к образованию бактериоцинов и чувствительность их к действию бактериоцинов исследовались в отдельных работах (Eichenlaub и Winkler, 1974; Acker, 1976; Traub, 1991; Enfedaque и соавт., 1996).

Цели и задачи работы. Целью настоящего исследования было изучение возможности использования бактериоциногении при типировании серраций для совершенствования методов эпидемиологического маркирования этих бактерий. Для выполнения этой цели следовало решить следующие задачи:

1. Изучить распространение бактериоцинов среди серраций различного происхождения.

2. Установить возможности типирования серраций по их бак-териоциночувствительности и бактериоциногенности.

3. Выяснить связи между различными методами типирования серраций, включая метод бактериоцинотипирования.

Работа проводилась в соответствии с основными направлениями НИР Кабардино-Балкарского госуниверситета. Тема: "Разработка способов выявления и эпидемиологического маркирования условно-патогенных представителей энтеробактерий", зарегистрирована во ВНТИЦентре, N гос. регистрации 01.91.0044705.

Научная новизна. Показано, что у серраций бактериоциноге-ния встречается у 62,9% штаммов. Бактериоцины серраций являются специфичными и характеризуются различным спектром действия. Отношение к бактериоцинам может рассматриваться как эпидемиологический маркер серраций. Выявлена корреляционная связь между различными эпидемиологическими маркерами у S.marcescens.

Практическая ценность. Разработаны схемы типирования серраций по их чувствительности к бактериоцинам, эффективные в отношении 68,5-79,6% исследованных культур, а также схема, основанная на образовании бактериоцинов, по которой тонированы 50% штаммов серраций. Полученные результаты находят использование в практической работе учреждений системы санэпиднадзора Кабардино-Балкарской Республики и Карачаево-Черкесской Республики. Материалы диссертации внедрены в учебный процесс в Кабардино-Балкарском государственном университете.

Апробация работы. Материалы диссертации опубликованы в 5 работах.

Полученные данные доложены:

1. На межвузовской научно-практической конференции, посвященной 40-летию КБГУ "Актуальные проблемы биологии, медицины и сельского хозяйства в исследованиях молодых ученых КБР" (Нальчик, 1997).

2. На Северо-Кавказской региональной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Перспектива-99" (Нальчик, 1999).

3. На научной конференции "Актуальные вопросы биологии и медицины", посвященной 30-летию кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Кабардино-Балкарского госуниверситета (Нальчик, 1999).

Положения, выносимые на защиту.

1. У серраций достаточно часто выявляется образование бактериоцинов, характеризующихся специфичностью и различным спектром действия.

2. Серраций могут быть типированы на основании чувствительности к бактериоцинам и по продуцируемым бактериоцинам.

3. Между различными эпидемиологическими маркерами серраций (патовары, фаготипы, бактериоцинотипы) имеется четкая корреляционная связь.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 124 страницах машинописи, иллюстрирована 29 таблицами и 10 рисунками, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов и указателя литературы, включающего 200 источников, из которых 48 отечественных и 152 зарубежных.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования.

При проведении исследований использованы 54 штамма бактерий, отнесенных к роду Serratia, из которых 50 штаммов принадлежали к виду S.marcescens, а 4 - к S.liquefaciens.

Штаммы были получены из различных лабораторий и находились в музее кафедры микробиологии Кабардино-Балкарского госуниверситета. 24 штамма, полученные из лаборатории менингокок-ковых инфекций НИИЭМ им.Н.Ф.Гамалеи РАМН, выделены при вспышке внутрибольничной инфекции среди новорожденных. 4 штамма получены из кафедры эпидемиологии Российской академии последипломного образования, 10 штаммов - из Музея патогенных культур ГНИИСК им.Л.А.Тарасевича, 3 штамма - из НИИ антибиотиков РАМН. 10 штаммов поступили от д-ра T.Pitt из Лаборатории госпитальных инфекций Центральной лаборатории общественного здоровья (Лондон). Наконец, 3 штамма были выделены из гнойного отделяемого и из смывов в Черкесске.

Из исследованных штаммов 30 выделены из различного патологического материала от больных (но 10 штаммов из кала и гнойного отделяемого, 6 - из мочи и 4 - из мокроты), 14 штаммов изолированы из объектов внешней среды. Источник выделения 10 штаммов, полученных из Лаборатории госпитальных инфекций Центральной лаборатории общественного здоровья в Лондоне, не известен.

В работе также использованы штаммы бактерий других родов: 10 штаммов E.coli, из которых 5 штаммов из коллекции Fredericq (Са-38, Са42, Са-53, К12, В), а 5 - свежевыделенные из клинического материала; 8 штаммов Klebsiella и 10 штаммов Enterobacter, которые также были выделены из клинического материала (все эти культуры находятся в музее кафедры микробиологии).

В работе использованы типовые бактериофаги S.marcescens: Ф4, Ф11, 30/5, 32/5, которые пассировались на штамме S.marcescens №5. Фаги Ф4 и Ф11 получены от д-ра T.Pitt (Лаборатория госпитальных инфекций Центральной лаборатории общественного здоровья в Лондоне). Фаги 30/5 и 32/5 выделены на кафедре микробиологии Кабардино-Балкарского госуниверситета Р.Х.Гайрабековым (1992).

В работе использовались питательные среды, приготовленные из концентратов производства Дагестанского научно-

производственного объединения "Питательные среды" (Махачкала): 1,5% и 0,7% питательный агар, а также питательный бульон.

Посевы культивировались в течение 18-48 часов при температуре 37°С.

Исследования бактерий проводились согласно общепринятых критериев.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам осуществляли с использованием стандартных дисков методом диффузии в агаре. Учет результатов проводился в соответствии с Инструкцией.

Профиль плазмидной ДНК бактерий исследовали методом вертикального электрофореза в 0,7% агарозе (Eckardt,1978). Для установления молекулярной массы выявляемых плазмид использовались реперные плазмиды: PR-4 (38 МД), Rmsl48 (95 МД), pBR 322 (2,8 МД), RSF1010 (5,5 МД).

Исследование адгезивности бактерий проводили по методике В.И.Брилиса и соавт.(1986) с использованием эритроцитов человека группы 0(I)Rh+. Устанавливали средний процент адгезии, коэффициент участия эритроцитов и индекс адгезивности микроорганизмов (ИАМ). Показатели ИАМ использовались для разграничения бактерий на неадгезивные (ИАМ < 1,75), низкоадгезивные (ИАМ = 1,76-2,5), среднеадгезивные (ИАМ = 2,51-4,0) и высокоадгезивные (ИАМ > 4,0). Подсчет вели на 50 эритроцитах.

Гемагглютинацию бактерий изучали в реакции с 3% взвесью свежих эритроцитов человека группы 0(I)Rh+ и барана, которую проводили на плексигласовых панелях. Для выявления D-маннозорезистентной гемагглютинации во взвесь эритроцитов добавляли 1,5% D-маннозы.

Адсорбцию бактериями красителя конго красного определяли на 1,5% питательном агаре с добавлением 0,02% казаминовых кислот и 0,01% конго красного (Chambers и соавт., 1985).

Для выявления антилизоцимной активности использовали методику О.В.Бухарина и соавт. (1984). Исследования проводили в диапазоне концентраций от 1 до 6 мкг/мл. Тест-культурой служил штамм Micrococcus luteus var. lysodeikticus N2665.

Гемолитическую способность бактерий исследовали на питательном агаре с 3-5% отмытых в растворе Хенкса эритроцитов кролика. Тиолзависимые гемолизины определялись на питательном

агаре с 0,002% Ь-цистеина. Культуры засевались уколом, гемолиз учитывался через 24-48 часов.

Патотипирование бактерий осуществлялось согласно разработанной на кафедре микробиологии Кабардино-Балкарского государственного университета схемы (И.М.Габрилович, 1996, 1997).

Адгезивность оценивали на основании комплексного изучения показателей этого процесса. Адгезивными считались культуры, обладавшие сочетанием по крайней мере 2 показателей адгезивных свойств, из которых один - ИАМ > 2,5, а второй - гемагтлютинаци-онная способность либо адсорбция конго красного. Кроме того, к адгезивным относили культуры только по величине ИАМ, если она превышала 4,0.

Показателем персистенции бактерий служила антилизоцимная активность, уровень которой был не ниже 3 мкг/мл.

Токсичность оценивали по гемолитической способности бактерий - образованию ими а- гемолизинов и тиолзависимых гемолизинов. При обнаружении тиолзависимых гемолизинов патовар обозначался индексом Ч". Схема учитывает также множественную устойчивость бактерий к антибиотикам (г или б).

Фаги пассировали на индикаторном штамме в бульонной среде. Титрование фагов осуществлялось двухслойным методом. Фаго-типирование проводили на питательном агаре путем нанесения фага петлей на приготовленный двухслойным методом газон исследуемого штамма. Концентрация типовых фагов составляла 106 -107 и.ц. в 1 мл. Чашки оставлялись на горизонтальной поверхности на 30-40 минут для лучшего впитывания фага. Учет результатов проводился после 18-24 часов инкубации посевов при температуре 37°С. При этом фиксировали все виды литических реакций - от единичных негативных колоний до сливного лизиса бактери-альной культуры.

Выявление бактериоцинов проводили по методике "отсроченного антагонизма" (Ргес1епся,1957) на питательном агаре. Штаммы, исследуемые в качестве бактериоциногенных, засевались "медальонами" на поверхность агара, инкубировались в течение 48 часов при температуре 37°С, обрабатывались парами хлороформа в течение 20-30 минут, после чего на чашки наслаивалась суточная бульонная культура индикаторного штамма, внесенная в 0,7% питательный агар (0,3 мл культуры на 2,5 мл расплавленного и охлажденного агара). Результаты учитывались после 24 часов инкубации. Для дифференциации бактериоцинов от бактериофагов из зоны по-

давления роста бактерий производили отсев материала в питательный бульон с индикаторной культурой. После инкубации посевы центрифугировались и надосадочная жидкость испытывалась на наличие фага.

Полученные результаты подвергались статистической обработке согласно общепринятым методам. Определяли среднюю арифметическую, ошибку средней арифметической. При обработке по альтернативной изменчивости также вычисляли среднюю ошибку. Сравнение показателей проводилось с использованием t-критерия Стьюдента.

Корреляционный анализ проводили согласно общепринятым критериям с использованием специальной программы "Полный корреляционный анализ" (В.Б.Бозиев, А.А.Бозиев, 1995), позволяющей определить все основные показатели линейной и нелинейной корреляционной связи между двумя наблюдаемыми величинами: показатель прямолинейной связи, величину корреляционного отношения, коэффициент линейной регрессии, а также ошибки репрезентативности и критерий достоверности полученных показателей. Вычисления проводились на компьютере IBM PS-AT Pentium-100 в системе FOXPRO.

Результаты и их обсуждение.

Распространение бактериоциногении у серраций. Для выявления бактериоцинов у культур серраций проведено перекрестное испытание всех 54 штаммов на бактериоциногенность и бактериоци-ночувствительность. Подавление роста бактерий отмечено у 36 исследованных штаммов. При проведении пассажей материала из зоны подавления роста у 2 штаммов (№№6 и 29) обнаружены фаги. У остальных 34 культур субстанция, подавляющая рост бактерий, не пассировалась и эти штаммы признаны бактериоциногенными. Результаты исследований представлены в таблице 1.

Способность продуцировать бактериоцины выявлена у 34 исследованных штаммов (62,9%). Все выявленные бактериоциноген-ные штаммы принадлежали к виду S.marcescens. Среди этих бактерий бактериоциногенные штаммы составили, таким образом, 68%. Ни один из 4 исследованных штаммов S.liquefaciens не проявлял признаков бактериоциногенности ни на штаммах S.marcescens, ни на культурах того же вида.

Таблица 1

Результаты перекрестных испытаний серраций на бактериоциногенность

Вид бактерий Число штаммов Бактериоциногенные штаммы Бактериоциночув-ствительные штаммы

число в %% число в %%

З-тагсеБсепБ 50 34 68,0 42 84,0

З.^иеГааепэ 4 0 0 1 25,0

Всего: 54 34 62,9 43 79,6

Бактериоциногенные штаммы серраций были выделены в разных регионах. К ним принадлежали 18 из 24 культур, выделенных в Москве при внутрибольничной вспышке; 4 из 10 Лондонских штаммов; все 3 штамма, выделенные в Черкесске; 4 из 5 штаммов, изолированных в Минске; 5 из 12 штаммов, выделенных в разные годы в Москве.

Бактериоциногенные штаммы чаще обнаруживались среди культур, изолированных из гнойного отделяемого (8 из 10 штаммов), из мокроты (3 из 4 штаммов), из мочи (4 из б штаммов) и из внешней среды (11 из 14 штаммов). Реже они обнаруживались среди штаммов, выделенных из кала (4 из 10 культур).

Чувствительность к продуцируемым бактериоцинам проявили 43 штамма (79,6%), причем бактериоциночувствительными были 42 штамма Б.тагсезсепБ (84% культур этого вида) и 1 штамм Б.^иеГаЫепБ (25% штаммов данного вида). Последний был чувствительным к бактериоцинам, продуцируемым 3 штаммами Б.шагсеБсепз (№№15,17,21).

Чувствительность к бактериоцинам серраций проявляли 20 из 24 штаммов, изолированных в Москве при внутрибольничной инфекции; 8 из 10 культур, полученных из Лондона; 8 из 12 штаммов, выделенных в Москве в разные годы; 4 из 5 Минских штаммов и все 3 культуры из Черкесска.

Бактериоциночувствительными были 12 из 14 культур серраций из внешней среды, 9 из 10 штаммов из гнойного отделяемого, все 4 штамма из мокроты, 5 из 6 культур из мочи и 5 из 10 штаммов, выделенных из кала.

Для изучения специфичности выявленных бактериоцинов проведены испытания на чувствительность к продуцируемым бактериоцинам представителей бактерий других родов семейства

Enterobacteriaceae. Исследованы 7 культур E.coli (в том числе индикаторные штаммы В и К12 из коллекции Fredericq), 8 штаммов Klebsiella и 10 штаммов Enterobacter. Ни один из этих 25 штаммов не проявлял чувствительности ни к одному из 34 выявленных бакте-риоциногекных штаммов серраций.

Исследование в качестве бактериоциногенных 3 колициноген-ных штаммов из коллекции Fredericq (Са-38, Са-42, Са-53) не дало положительных результатов ни на одном штамме серраций.

Таким образом, бактериоцины серраций проявляют высокую специфичность.

Бактериоцины, продуцируемые выявленными штаммами, характеризовались различным спектром действия. Для удобства сопоставления их между собой по этому критерию определялся индекс спектра действия бактериоцина (ИСД), который представлял собой отношение числа бактериоциночувствительных культур к числу испытанных.

Выявленные бактериоциногенные штаммы по этому критерию были распределены в 3 группы. Первую группу составили 22 штамма, продуцирующие бактериоцины с узким спектром действия — ИСД < 0,1. К этим бактериоцинам были чувствительными 1-5 штаммов.

Во вторую группу включены штаммы со средним уровнем спектра действия бактериоцинов (ИСД = 0,1-0,2). К продуцируемым этими штаммами бактериоцинам были чувствительными по 6-10 испытанных штаммов. Таких культур было 10.

В третью группу вошли 2 штамма, продуцирующие бактериоцины широкого спектра действия и имеющие ИСД > 0,2. Эти бактериоцины действовали на 11 и более испытанных штаммов.

Спектр чувствительности серраций к бактериоциногенным штаммам также был различным. Для сравнения культур между собой по чувствительности к бактериоцинам мы определили для каждого бактериоциночувствительного штамма индекс спектра чувствительности (ИСЧ), который рассчитывался путем определения отношения числа бактериоциногенных штаммов, к которым чувствительна данная культура, к общему числу выявленных бактериоциногенных штаммов.

По величине этого показателя исследованные бактерии условно разделены на 3 группы: чувствительные к 1-3 бактериоциногенным штаммам, имеющие ИСЧ <0,1; чувствительные к 4-6 бакте-

риоциногенным штаммам (ИСЧ = 0,1-0,2) и чувствительные более чем к 6 бактериоциногенным штаммам (ИСЧ >0,1).

Большая часть исследованных культур характеризовалась узким спектром чувствительности к бактериоцинам - таких штаммов было 24 (55,8% чувствительных к бактериоцинам культур). У 7 штаммов отмечен широкий спектр чувствительности к бактериоцинам - они имели ИСЧ в диапазоне 0,21-0,38 и были чувствительными к 7-13 бактериоциногенным штаммам серраций.

Таким образом, у серраций достаточно часто выявляются бак-териоциногенные штаммы, чувствительность к которым проявляется у 79,6% культур.

Проведено изучение некоторых свойств выявленных бакте-рноцнногснных штаммов в сравнении с небактериоциногенными культурами.

По основным биохимическим свойствам рассмотренные группы культур серраций практически не различались между собой и соответствовали характеристике рода.

При исследовании плазмидного профиля ДНК этих штаммов у 12 из 34 культур выявлены плазмиды (35,3±8,2%), причем у 10 штаммов обнаружено по одной плазмиде, ау2 — по2.У8 плазми-досодержащих штаммов найдены плазмиды молекулярной массы 50-60 МД, у 4 - 80-90 МД. Из 20 штаммов, не обладавших бакте-риоциногенной активностью, плазмиды содержали 7 штаммов (35,0±10,6%), причем у 3 штаммов обнаружено по 2 плазмиды. У 3 штаммов найдены плазмиды молекулярной массы 70-90 МД, у 3 -50-60 МД и у 1 штамма - 30 МД.

Таким образом, бактериоциногенные штаммы практически не отличались от культур, не обладавших такой способностью, по плазмидному профилю ДНК.

Проведено сравнительное исследование чувствительности к антибиотикам бактериоциногенных и небактериоциногенных штаммов серраций. Определяли чувствительность всех имевшихся в нашем распоряжении штаммов серраций к 18 антибиотикам, которые представляли 10 различных групп по химической структуре: 1 - бе-талактамные антибиотики группы пенициллина, 2 - беталактамные антибиотики группы цефалоспорина, 3 - антибиотики группы тетрациклина, 4 - аминогликозиды, 5 - макролиды, 6 - рифамицины, 7 -гликопептиды (группа ристомицина), 8 - нитробензолы (группа ле-

вомицетина), 9 - полипептиды (группа полимиксина) и 10 - линко-мицин.

Изученные культуры еерраций проявляли различную степень устойчивости к использованным антибиотикам. Все штаммы были устойчивыми к оксациллину и линкомицину, практически все - к пенициллину, эритромицину, олеандомицину (94,4 - 98,1%). Наибольшую чувствительность исследованные штаммы проявляли к ампициллину, гентамицину, стрептомицину и доксициклину (35,2 -48,1% устойчивых культур). К остальным испытанным препаратам устойчивыми были от 51,8% до 79,6% исследованных штаммов.

При сравнении бактериоциногенных штаммов с культурами, не проявляющими такой способности, каких-либо существенных различий не обнаружено.

Среди исследованных культур были определены множественно устойчивые штаммы. К ним мы относили культуры, устойчивые не менее чем к 6 из 10 групп использованных антибиотиков. Множественно устойчивыми, исходя из указанных критериев, среди бактериоциногенных оказались 19 штаммов (55,9±8,5%), тогда как среди небактериоциногенных таких культур было 6 (30,0±10,2%), что недостоверно ниже (Р>0,05).

У исследованных штаммов проведено определение факторов вирулентности. Изучались факторы вирулентности с тремя разными механизмами действия: факторы адгезивности, персистенции, токсичности.

Адгезивные свойства еерраций устанавливались на основании комплекса свойств, характеризующих адгезивную способность бактерий. Это делалось ввиду отсутствия единых критериев установления адгезивной способности бактерий.

Определяли адгезивность на эритроцитах человека группы 0(1)Ш1+, наличие гемагглютинирующей способности в отношении эритроцитов человека и барана, а также способности бактерий адсорбировать краситель конго красный.

К адгезивноактивным штаммам отнесены 64,7% бактериоциногенных культур и 80% небактериоциногенных. Эти культуры характеризовались величиной индекса адгезивности микроорганизмов (ИАМ) > 2,5, т.е. являлись среднеадгезивными и высокоадгезивными. Среди адгезивноактивных бактериоциногенных штаммов высокоадгезивные составляли почти половину (10 штаммов из 22), тогда как среди небактериоциногенных - около 20%. Средний уровень

ИАМ для бактериоциногенных штаммов составил 3,18±0,2, т.е. был в пределах среднеадгезивных штаммов согласно В.И.Брилиса и со-авт. (1986). Для небактериоциногенных штаммов величина ИАМ была близкой - 3,28±0,36.

Гемагглютинирукмцая способность изученных культур была хорошо выражена в отношении эритроцитов барана - у 61,8% бактериоциногенных штаммов и у 75% - небактериоциногенных, причем практически у всех штаммов выявлены маннозорезистентные гемагглютинины в отношении эритроцитов барана. Эритроциты человека агглютинировали лишь 17,6% бактериоциногенных культур и 20% - небактериоциногенных, причем преобладали маннозо-чувствительные гемагглютинины. Краситель конго красный адсорбировали 76,5% бактериоциногенных и 80% небактериоциногенных штаммов.

На основании комплекса исследованных свойств 21 бактерио-циногенный штамм (61,8±8,3%) признан обладающим адгезивными свойствами. Среди небактериоциногенных штаммов таких культур было 16 (80,0±8,9%).

Таким образом, адгезивные свойства у бактериоциногенных и небактериоциногенных штаммов серраций практически не различались.

В качестве фактора персистенции исследовали антилизоцим-ную активность бактерий. Такая способность установлена у 28 бактериоциногенных штаммов (82,3±6,5%) и у 18 небактериоциногенных (90,0±6,7%). Уровень антилизоцимной активности у исследованных культур был в основном низким и составлял 1-2 мкг/мл у 17 бактериоциногенных штаммов (50%) и у 8 небактериоциногенных (40%). Средний уровень антилизоцимной активности у бактериоциногенных культур был 2,06+0,3 мкг/мл, а у антилизоцимактивных штаммов - 2,5±0,3 мкг/мл. В то же время у небактериоциногенных культур антилизоцимная активность была недостоверно выше -2,95±0,39 мкг/мл, а среди антилизоцимактивных штаммов -3,2810,36 мкг/мл (Р>0,05).

По распространению гемолитической активности между рассмотренными группами культур серраций отмечены существенные различия. Из 34 бактериоциногенных штаммов гемолизины выявлены у 14 (41,1 ±8,4%), тогда как из 20 небактериоциногенных - лишь у 3 штаммов (15,0±7,9%), что достоверно ниже (Р<0,05). Из 14 штаммов, обладавших гемолитическими свойствами, 12 продуциро-

вали а-гемолизины (35,3%) и 2 штамма - тиолзависимые гемолизины (5,8%).

На основании результатов определения факторов вирулентности у изученных бактерий с учетом множественной резистентности к антибиотикам проведено патотипирование бактериоциногенных и небактериоциногенных штаммов серраций.

Бактериоциногенные штаммы отнесены к 16 патоварам, содержавшим от 1 до 6 штаммов, небактериоциногенные - к 9 патоварам, в которые входили от 1 до 5 штаммов.

Среди бактериоциногенных штаммов чаще всего встречались культуры патоваров 4г и 4б, которые составили 23,5% бактериоциногенных культур, среди небактериоциногенных штаммов культур патовара 4б было 5%. 20,6% бактериоциногенных культур отнесены к патоварам 8г и 8з. У этих культур факторы вирулентности не обнаруживались. В то же время у небактериоциногенных культур лишь 1 штамм отнесен к патовару 8б (5,0% таких штаммов). Среди небактериоциногенных штаммов культуры патоваров 2г и 2э составляли 45% (у бактериоциногенных — 14,7%).

Фаготипирование серраций проводили согласно рабочей схемы, разработанной для Б.тагсезсет.

Фаготипируемыми оказались 28 из 34 бактериоциногенных штаммов (82,3±6,5%) и 17 из 20 небактериоциногенных (85,0±7,9%), т.е. по фагочувствительности различий между рассмотренными группами серраций не обнаружено.

Бактериоциногенные штаммы принадлежали к 11 фаготипам, в которые входили от 1 до 7 штаммов; небактериоциногенные - к 7 фаготипам, включавшим от 1 до 4 штаммов. Среди небактериоциногенных штаммов культуры фаготипов 1,11,12 встречались чаще, чем среди бактериоциногенных. В то же время среди бактериоциногенных штаммов чаще встречались культуры фаготипов 8 и 14.

Таким образом, между бактериоциногенными и небактериоци-ногенными штаммами серраций имеются определенные различия в распределении патоваров и фаготипов.

Проведено сопоставление свойств 43 бактериоциночувстви-тельных штаммов серраций и 11 нечувствительных к бактериоци-нам штаммов.

Биохимические свойства чувствительных и нечувствительных к бактериоцинам штаммов серраций были близкими.

Плазмиды обнаружены у чувствительных к бактериоцинам штаммов в 14 случаях (32,5±7,1%), у нечувствительных - в 5 (45,4±15,0%), причем в обеих группах преобладали плазмиды молекулярной массы 50-60 МД, которые найдены у 57-60% плазмидосо-держащих штаммов. Следовательно, каких-либо различий в плаз-мидном профиле ДНК у чувствительных к бактериоцинам и нечувствительных к ним культур не выявлено.

Сравнение антибиотикоустойчивости чувствительных и нечувствительных к бактериоцинам штаммов показало, что серрации, нечувствительные к бактериоцинам, были несколько более устойчивыми к антибиотикам по сравнению с чувствительными к бактериоцинам штаммами. Так, по отношению к полимиксину, левомицети-ну, канамицину, доксициклину количество устойчивых к антибиотикам штаммов было достоверно ниже у бактериоциночувствительных культур (Р<0,05). В отношении остальных изученных препаратов различий между рассмотренными группами серраций не отмечено.

Частота обнаружения множественно устойчивых штаммов в рассмотренных группах серраций была близкой - 63,6±14,5% у нечувствительных к бактериоцинам культур и 41,8+7,5% у чувствительных к бактериоцинам штаммов (Р>0,05).

При сравнении адгезивных свойств чувствительных и нечувствительных к бактериоцинам штаммов заметных различий не выявлено.

Антилизоцимной активностью обладали 37 чувствительных к бактериоцинам штаммов (86,0+5,3%), причем у большинства из них уровень антилизоцимной активности был низким и составлял 1-2 мкг/мл — таких культур было 43,2+8,1% антилизоцимактивных штаммов.

Среди нечувствительных к бактериоцинам штаммов антилизо-цимная активность встречалась с близкой частотой (81,8±11,6%), однако штаммы с низким уровнем такой активности встречались реже (22,2±12,5%), чем у чувствительных к бактериоцинам штаммов.

Средний уровень антилизоцимной активности у чувствительных к бактериоцинам штаммов составлял 2,3±0,28 мкг/мл (среди антилизоцимактивных штаммов - 2,68±0,28 мкг/мл), а у нечувствительных культур - соответственно 2,73±0,5 мкг/мл и 3,33±0,38 мкг/мл. Различия были недостоверными.

Гемолитические свойства были несколько лучше выражены у чувствительных к бактериоцинам штаммов - у 32,5%, причем ос-гемолизины выявлены у 12 штаммов (27,9±6,8%), тиолзависимые гемолизины - у 2 штаммов (4,6±3,2%). У нечувствительных к бактериоцинам штаммов а-гемолизины обнаружены у 3 штаммов (27,3+13,4%), а тиолзависимые гемолизины выявлены не были.

Результаты патотипирования выявили определенные различия между чувствительными и нечувствительными к бактериоцинам штаммами серраций.

Среди культур, нечувствительных к бактериоцинам, отмечено преобладание патоваров 2г и 2Э, которые составляли 45,4% штаммов этой группы. У бактериоциночувствительных штаммов чаще встречались патовары 5г и 5б (25,5%), отсутствующие среди нечувствительных к бактериоцинам штаммов. Следом за ними идут патовары 2г и 2б, составившие 20,9% культур этой группы, и патовары 4т и 4э (18,6%).

Чувствительность к типовым фагам серраций проявляли 37 бактериоциночувствительных штаммов (86,0±5,3%), а у нечувствительных к бактериоцинам - 72,7+13,4%, т.е. между этими группами культур различий практически не было. Однако, распределение фа-готипов несколько различалось. Среди нечувствительных к бактериоцинам штаммов были культуры 4 фаготипов (3,4,8 и 11). Фаго-типы 8 и 11 составляли по 37,5% фаготипируемых культур. Среди бактериоциночувствительных штаммов выявлены представители 13 фаготипов. Чаще всего встречались фаготипы 1 и 3 - по 7 штаммов (по 18,9% типируемых культур), 8 (6 штаммов, 16,2%). Следовательно, по распределению патоваров и фаготипов между чувствительными к бактериоцинам и нечувствительными к ним культурами серраций имеются определенные различия.

Бактериоцинотипирование серраций. Спектр действия бакте-риоцинов, продуцируемых изученными штаммами серраций, существенно различался. Также отмечены значительные различия в спектре чувствительности этих бактерий к продуцируемым бактериоцинам. Исходя из этого представляется возможным осуществить разграничение серраций с применением бактериоцинов.

Как известно, бактериоцины могут использоваться при типи-ровании бактерий в двух вариантах: 1) типируемые бактерии могут разграничиваться по чувствительности к бактериоцинам, продуцируемым типовыми бактериоциногенными штаммами; 2) типируе-

мые бактерии могут разграничиваться по продуцируемым ими бак-териоцинам, выявляемым на типовых индикаторных культурах.

Нами предприняты попытки разработки схем типирования серраций на основе явления бактериоциногении с использованием обоих приведенных принципов.

Для осуществления типирования по чувствительности к бакь-териоцинам необходимо иметь типовые бактериоциногенные культуры. При отборе таких культур мы исходили из необходимости использования штаммов, продуцирующих бактериоцины широкого спектра действия. Для применения в качестве типовых были отобраны 10 бактериоциногенных штаммов, обладавших достаточно широким спектром действия. В число этих штаммов включены обе культуры с широким спектром действия бактериоцинов (штаммы №№21, Рб4), 7 штаммов со средним спектром действия (№№ 1, 15, 16, 17, 24, 43, 51) и один штамм (№45) с узким спектром действия бактериоцинов. С использованием этих штаммов разработана рабочая схема типирования серраций. На основании спектров чувствительности исследованных культур проведено разграничение бактерий на бактериоцинотипы.

Согласно этой схемы (условно обозначаемой "Схема 1") типи-рованы 43 штамма (79,6±5,5% испытанных). Среди 43 бактериоци-ночувствительных штаммов серраций выявлен 21 образец чувствительности. Эти образцы можно рассматривать как бактериоцинотипы. Чаще других встречались бактериоцинотипы с условным обозначением 5 и 10, в которые включены по 5 штаммов. Остальные бактериоцинотипы включали по 1-3 культуры, причем 7 бактерио-цинотипов были представлены 1 штаммом, 10-2 культурами, 2-3 штаммами.

Единственный типируемый штамм БЛщиеГааепз №56 принадлежал к бактериоцинотипу 3. Остальные 42 типируемых штамма относились к виду Б.тагсезсепБ (84% этих культур).

При анализе распределения бактериоцинотипов видно, что 20 из 24 штаммов серраций, выделенных при вспышке внутрибольнич-ной инфекции, отнесены к 10 бактериоцинотипам, причем к типу 10 принадлежали 5 штаммов, к типу 5 - 4, а к типу 11-3 культуры. В остальные типы вошли по 1-2 штамма.

Типируемые по данной схеме 3 культуры, выделенные в Минске из внешней среды, отнесены к 3 разным бактериоцинотипам (9,18,20).

Согласно приведенной схемы 7 бактериоцинотипов состояли из 1 штамма, а 10 - из 2 культур. Это обстоятельство снижает значение данной схемы. С целью упрощения схемы бактериоцинотипиро-вания серраций мы рассмотрели возможность сокращения числа типовых бактериоциногенных культур.

В качестве типовых в упрощенной схеме бактериоцинотипи-рования (условно обозначенной "Схема 2") были отобраны 6 бактериоциногенных штаммов из 10 входивших в указанную схему. Это были штаммы №№1,17,21,24,43,Рб4. Штаммы №№21 и Рв4 имели широкий спектр действия бактериоцинов, остальные - средний спектр действия. Согласно этой схемы бактериоцинотипирования серраций выделены 18 бактериоцинотипов, каждый из которых состоял из 1-5 штаммов (таблица 2).

По этой упрощенной схеме удалось типировать 36 штаммов серраций (66,7±6,4%). В бактериоцинотип 18 включены 5 штаммов, в типы 15 и 17 - по 4, в типы 14 и 16 - по 3 штамма. 4 бактериоци-нотипа состояли из 2 культур, а 9 - из 1 штамма.

Таблица 2

Упрощенная схема бактериоцинотипирования серраций _(Схема 2)_

Бактериоцинотип Типовые штаммы Число штаммов №№ штаммов

1 17 21 24 43 Рэ4

1 2 3 4 5 6 7 8 9

1 + - + + + + 1 21

2 + + + + - - 1 14

3 + + + - - - 2 5,12

4 - + + - - + 1 20

5 + - + - - - 1 19

6 + - - + - - 2 45,51

7 - + + - - - 2 38,56

8 - + - + - - 1 186

9 - - + + - - 1 22

10 - - + - - + 2 25,30

11 - - - + - + 1 16

12 + - - - + - 1 18

13 + - - - - - 1 47

Продолжение таблицы 2

1 2 3 4 5 6 7 8 9

14 - + - - - - 3 23,50,55

15 - - + - - - 4 6,28,Рз1,Р эб

16 - - - + - - 3 26,?&Ъ, РБЮ

17 - - - - + - 4 41,44, 248,Рв8

18 - - - - - + 5 15,24,29,3 02,Рз2

Штаммы, выделенные при вспышке внутриболышчной инфекции, вошли в 13 бактериоцинотипов, причем лишь в одном типе (18) было 3 штамма этой группы, во всех остальных - по 1-2 штамма. Штаммы, полученные из Лондона, включены в 4 бактериоцинотипа (в 2 из них вошли по 2 таких штамма).

Исходя из достаточно широкого распространения у серраций бактериоциногенных штаммов представляется возможным разграничение этих бактерий по вырабатываемым ими бактериоцинам. Для проведения такого типирования необходимы типовые индикаторные культуры. Среди бактериоциночувствительных штаммов отобраны в качестве типовых 12 штаммов, с помощью которых выявляется бактериоциногенность всех 34 выявленных бактериоциногенных штаммов. Эти 12 штаммов могут служить индикаторными при типировании серраций. При таком способе типирования выделяется 31 вариант бактериоциногенности. Лишь в 3 случаях варианты включали по 2 штамма, остальные 28 вариантов - по 1 штамму.

Исходя из этого, число индикаторных штаммов было сокращено до пяти. При использовании этих 5 индикаторных культур (схема 3) удалось типировать 27 культур, т.е. половину испытанных штаммов, или 74,4% бактериоциногенных штаммов.

Установлено 18 бактериоцинотипов у исследованных культур серраций. В один вариант (16) вошло 3 штамма, в 7 - по 2 штамма и в 10 - по одной культуре. Штаммы, выделенные при внутриболь-ничной вспышке, вошли в 10 типов, причем в 2 типа включены по 2 штамма этой группы.

Сравнение схем бактериоцинотипирования серраций (таблица 3) показало, что схемы 1 и 2 имеют преимущество перед схемой 3, но практически не отличаются друг от друга.

Таблица 3

Сравнительная оценка схем типирования серраций с использованием бактериоцинов

Число Число Число типи- % типирован-

Схема типовых вариантов рованных ных штаммов,

штаммов штаммов М±ш

1 10 21 43 79,6±5б5

2 6 18 36 68,5±6,3

3 5 18 27 50,0+6,8

При использовании схем типирования, основанных на выявлении чувствительности бактерий к бактериоцинам, выделяемым типовыми штаммами, результаты были выше, и этот метод типирования является более простым в практическом отношении.

Связи между эпидемиологическими маркерами серраций. При рассмотрении свойств бактериоциногенных и бактериоциночувстви-тельных штаммов серраций отмечалось, что разграничение бактерий может проводиться по множественной устойчивости их к антибиотикам, по наличию и сочетанию факторов вирулентности, по плаз-мидному профилю ДНК и по фаготипу. Эти характеристики могут рассматриваться как эпидемиологические маркеры бактерий рода Serratia. К таким же маркерам относится и бактериоцинотип, устанавливаемый по бактериоциногенности и бактериоциночувстви-тельности этих бактерий.

Чаще всего серрации могут быть разграничены по их фаготипу (83,3%). Факторы вирулентности выявлены у 31,5-68,5% штаммов. Однако, при сочетании этих факторов все изученные культуры были разграничены на патовары. Представляло интерес выяснить наличие связей между этими свойствами бактерий.

Для установления таких связей был проведен корреляционный анализ с помощью специальной программы "Полный корреляционный анализ".

При рассмотрении корреляционных связей мы исходили из следующего допущения: высокая корреляционная связь между рассматриваемыми маркерами считалась при коэффициенте корреля-

ции >0,7, умеренная - в пределах 0,4-0,7, слабая - при г=0,2-0,4 и при более низких значениях этого показателя корреляция отсутствует.

Прежде всего, были проанализированы связи между тестами, на основании которых устанавливались адгезивные свойства бактерий: адгезивность в отношении эритроцитов человека, агглютинация эритроцитов человека и барана, в том числе маннозорезистентная гемагглютинация, адсорбция красителя конго красного. Проводилось определение коэффициентов линейной корреляции и корреляционные отношения.

Корреляционные отношения показали высокую корреляцию между адгезивностью в отношении эритроцитов человека по результатам НАМ и остальными исследованными свойствами (г= 0,97-1,00).

Также высокая корреляционная связь отмечена между гемагг-лютинацией эритроцитов человека и барана в целом и маннозорези-стентной гемагглютинацией этих эритроцитов. Между гемагглюти-нацией эритроцитов человека в целом и маннозорезистентной ге-магглютинациейи этих эритроцитов и другими показателями имелась слабая корреляционная связь (г = 0,23-0,34). В то же время между гемагглютинацией эритроцитов барана (в том числе и маннозорезистентной) слабая связь существовала только с адгезивностью по результатам ИАМ (г=0,22-0,24). У способности бактерий к адсорбции конго красного также отмечена только слабая связь с адгезивностью бактерий.

Проведенный анализ свидетельствует, что наиболее информативным показателем адгезивных свойств серраций является индекс адгезивности микроорганизмов, определенный по методике В.И.Брилиса и соавт. (1986). Исходя из этого, при рутинных определениях адгезивных свойств бактерий достаточно использовать этот тест.

Проведен корреляционный анализ выявленных эпидемиологических маркеров серраций. Также определялись коэффициенты линейной корреляции и корреляционные отношения.

При рассмотрении корреляционных отношений между маркерами выявлен высокий уровень корреляционной связи между величиной ИАМ и всеми изученными характеристиками (г=0,98-1,00).

Антилизоцимная активность высоко коррелировала с образованием тиолзависимых гемолизинов и с патоваром бактерий

(г=0,74-0,83). Это свойство серраций находилось в умеренной корреляционной связи с фаготиипом и бактериоцинотипом, установленным по всем 3 рассмотренным схемам (г=0,47-0,51). Антилизо-цимная активность серраций находилась в слабой корреляционной зависимости от адгезивных свойств бактерий, способности продуцировать а-гемолизины, множественной устойчивости к антибиотикам и наличия плазмид.

Наиболее слабая корреляционная связь наблюдалась между образованием а-гемолизинов и другими маркерами - практически такие связи отсутствовали. В то же время образование тиолзависи-мых гемолизинов коррелировало с рядом маркеров. Так, с фаготи-пом серраций отмечена высокая корреляционная связь (г=1,00), с адгезивными свойствами, антилизоцимной активностью, множественной устойчивостью, наличием плазмид, патоваром, бактериоцинотипом по схемам 2 и 3 (г= 0,4-0,63).

Множественная устойчивость к антибиотикам характеризовалась слабой корреляцией с антилизоцимной активностью, образованием а-гемолизинов, фаготипом и патоваром (г=0,27-0,36) и умеренной связью с остальными маркерами.

Наличие плазмид не коррелировало с остальными маркерами. Патовар бактерий обладал высокой корреляционной связью со всеми рассмотренными маркерами. Лишь с фаготипом, бактериоцино-типами и множественной устойчивостью к антибиотикам связь была умеренно выраженной (г=0,59-0,69).

Фаготип серраций умеренно коррелировал со всеми маркерами (г=0,42-0,69) и лишь с образованием тиолзависимых гемолизинов отмечена высокая степень корреляции.

Бактериоцинотипы, установленные на основании трех схем бактериоцинотипирования, характеризовались умеренной и высокой корреляционной связью со всеми остальными маркерами (г=0,47-0,87).

Бактериоцинотипы, установленные по схеме 1 находились в высокой степени корреляции с бактериоцинотипами, выделенными по схемам 2 и 3 (г=0,77-0,82).

Корреляционный анализ показал, что между различными эпидемиологическими маркерами серраций существует корреляционная связь. Установленные бактериоцинотипы этих бактерий являются эпидемиологическими маркерами их.

выводы

1. При исследовании 54 штаммов серраций выявлены 34 бак-териоциногенных штамма S. marcescens (68% штаммов этого вида). Продуцируемые ими бактериоцины характеризовались специфичностью и различным спектром действия. Чувствительность к продуцируемым серрациями бактериоцинам проявляли 79,6% изученных культур серраций.

2. Разработаны схемы бактериоцинотипирования серраций по чувствительности к бактериоцинам и по бактериоциногенности. На основании бактериоциночувствительности типированы 68-79% серраций, по бактериоциногенности - 50%.

3. Проведено патотипирование серраций на основании комплекса факторов вирулентности с учетом множественной устойчивости к антибиотикам. Отмечены различия в распределении патова-ров у бактериоциногенных и небактериоциногенных штаммов, а также у чувствительных и нечувствительных к бактериоцинам культур.

4. С помощью 4 типовых фагов типированы 80% культур сер-рраций. Выявлены различия в распределении фаготипов у бактериоциногенных и небактериоциногенных, чувствительных к бактериоцинам и не чувствительных к ним штаммов.

5. Установлена корреляционная связь между тестами, характеризующими адгезивные свойства серраций и между различными эпидемиологическими маркерами этих бактерий.

Список опубликованных работ

1. Факторы вирулентности бактериоциногенных штаммов серраций / Аталикова Ж.Б., Блиева JI.3. // Гомеостаз и инфекционный процесс. Материалы Второй Всероссийской конференции. - Саратов, 1998. -с.7.

2. Рабочая схема фаготипирования Serratia marcescens / Блиева J1.3., Аталикова Ж.Б., Габрилович И.М. // Вестник Каб.-Балк. госуниверситета, сер. Медицинские науки. - 1998. - в.4. - С. 10-11.

3. Бактериоциногенные штаммы Serratia marcescens // Тезисы докладов Северо-Кавказской региональной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Перспектива-99", Нальчик, 1999, с.236-237.

4. Типирование серраций на основании их бактериоциногенности // Сб. Актуальные вопросы биологии и медицины. - Нальчик, 1999. -С. 11-12.

5. Чувствительность серраций к бактериоцинам // Актуальные вопросы биологии и медицины. - Нальчик, 1999. - С. 12-13.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Аталикова, Жанета Борисовна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Распространение и значение серраций.

2. Методы типирования бактерий.

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ.

ГЛАВА III. РАСПРОСТРАНЕНИЕ БАКТЕРИОЦИНОГЕНИИ У СЕРРАЦИЙ.

1. Выявление бактериоцинов серраций.

2. Специфичность бактериоцинов серраций.

3. Спектр действия бактериоцинов серраций.

4. Свойства бактериоциногенных штаммов серраций.

5. Свойства бактериоциночувствительных штаммов серраций.

ГЛАВА IV. БАКТЕРИОЦИНОТИПИРОВАНИЕ СЕРРАЦИЙ.

1. Типирование серраций по чувствительности к бактериоцинам.

2. Типирование серраций по продуцируемым ими бактериоцинам.

3. Сравнительная эффективность схем бактериоцинотипирования серраций.

ГЛАВА V. СВЯЗИ МЕЖДУ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИМИ МАРКЕРАМИ СЕРРАЦИЙ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Бактериоцины в типировании серраций"

С серрациями связывают возникновение у людей инфекционных процессов различной локализации и формы - сепсиса и бактериемии [1,78,89,109,123,128,159,172,195], менингита [103,133,152], инфекций моче-выводящих путей [110,174,179], легких [107,165], желудочно-кишечного тракта [80], послеродовой инфекции [122], поражений щитовидной железы [170], глаз [98, 167], костей [199], осложнений при опухолевых процессах [197]. Во всех этих случаях высевались различные представиели рода Serratia, но чаще всего S.marcescens. Имеются указания на роль серраций в возникновении вспышек внутрибольничных инфекций [6,120], причем чаще всего в отделениях интенсивной терапии.

Методы эпидемиологического маркирования бактерий достаточно разнообразны и разграничиваются на традиционные (классические) и 4 молекулярные. К традиционным относятся биотипирование, серотипирование, фаготипирование, бактериоцинотипирование, резистенстипирование; к молекулярным - плазмидный анализ, рестрикционный анализ, полимеразная цепная реакция, иммуноблотинг и др. [7,12,40,85].

Среди традиционных методов типирования бактерий сравнительно мало внимания уделялось бактериоцинотипированию, представление о котором с каждым годом углубляется. Явление бактериоциногении привлекает внимание исследователей в связи с тем, что является стабильным и характерным признаком большинства микроорганизмов.

Многочисленные данные свидетельствуют о способности микроорганизмов, принадлежащих к разным семействам, выделять различные бактериоцины. Наиболее обширные исследования проведены с представителями семейства ЕгйегоЬас1епасеае.

Бактериоцины находят использование при типировании некоторых бактерий: клебсиелл [71], менингококков [166], псевдомонад [107] и др.

Способность серраций к образованию бактериоцинов и чувствительность их к действию бактериоцинов исследовались в отдельных работах [51,93,95,189].

Цели и задачи работы.

Целью настоящего исследования было изучение возможности использования бактериоциногении при типировании серраций для совершенствования методов эпидемиологического маркирования этих бактерий. Для выполнения этой цели следовало решить следующие задачи:

1. Изучить распространение бактериоцинов среди серраций различного происхождения. 5

2. Установить возможности типирования серраций по их бактерио-циночувствительности и бактериоциногенности.

3. Выяснить связи между различными методами типирования серраций, включая метод бактериоцинотипирования.

Научная новизна. Показано, что у серраций бактериоциногения встречается у 62,9% штаммов. Бактериоцины серраций являются специфичными и характеризуются различным спектром действия. Отношение к бакте-риоцинам может рассматриваться как эпидемиологический маркер серраций. Выявлена корреляционная связь между различными эпидемиологическими маркерами у Б.тагсезсеш.

Практическая значимость. Разработаны схемы типирования серраций по их чувствительности к бактериоцинам, эффективные в отношении 68,5-79,6% исследованных культур, а также схема, основанная на образовании бактериоцинов, по которой типированы 50% штаммов серраций. Полученные результаты находят использование в практической работе учреждений системы санэпиднадзора Кабардино-Балкарской Республики и Карачаево-Черкесской Республики. Материалы диссертации внедрены в учебный процесс в Кабардино-Балкарском государственном университете.

Апробация работы. Материалы диссертации опубликованы в 5 работах. 6

Полученные данные доложены:

Положения, выносимые на защиту.

3. Между различными эпидемиологическими маркерами серраций (па-товары, фаготипы, бактериоцинотипы) имеется четкая корреляционная связь.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Аталикова, Жанета Борисовна

выводы

1. При исследовании 54 штаммов серраций выявлены 34 бактериоциногенных штамма Б. тагсеэсепз (68% штаммов этого вида). Продуцируемые ими бактериоцины характеризовались специфичностью и различным спектром действия. Чувствительность к продуцируемым серрациями бактериоцинам проявляли 79,6% изученных культур серраций.

3. Проведено патотипирование серраций на основании комплекса факторов вирулентности с учетом множественной устойчивости к антибиотикам. Отмечены различия в распределении патоваров у бактериоциногенных и небактериоциногенных штаммов, а также у чувствительных и нечувствительных к бактериоцинам культур.

4. С помощью 4 типовых фагов типированы 80% культур серрраций. Выявлены различия в распределении фаготипов у бактериоциногенных и небактериоциногенных, чувствительных к бактериоцинам и не чувствительных к ним штаммов.

104

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Настоящая работа была предпринята с целью исследования возможности использования бактериоциногении при типировании серраций для совершенствования методов эпидемиологического маркирования этих бактерий. Для выполнения этой цели следовало решить следующие задачи:

1. Изучить распространение бактериоцинов среди серраций различного происхождения.

2. Установить возможности типирования серраций по бактериоцино-чувствительности и бактериоциногенности.

3. Выяснить связи между различными методами типирования серраций, включая метод бактериоцинотипирования.

В работе использованы 54 штамма бактерий, отнесенных к роду Serratia, из которых 50 штаммов принадлежали к виду S.marcescens, а 4 - к S.liquefaciens. Штаммы были получены из различных лабораторий и находились в музее кафедры микробиологии Кабардино-Балкарского госуниверситета.

Для установления степени распространения явления бактериоциногении у серраций исследуемые штаммы были подвергнуты перекрестному испытанию на бактериоциногенность, в результате которого установлены признаки бактериоциногенности у 36 штаммов. В последующем у двух культур выявлены умеренные фаги и эти штаммы были исключены из дальнейшего исследования. Следует отметить, что в литературе имеется описание бактериоцина S.marcescens, морфологически идентичного отросткам бактериофага [112].

Таким образом, нами обнаружены 34 бактериоциногенных штамма серраций. Все эти штаммы принадлежали к виду S.marcescens. Бактерио-циногенные штаммы серраций имели различное происхождение: они бы

94 ли представлены среди культур, выделенных в Москве, Лондоне, Черкесске, Нальчике в разные годы. Такие штаммы обнаруживались с близкой частотой среди культур, выделенных из разного клинического материала и из внешней среды. Лишь среди штаммов, изолированных из кала, частота обнаружения бактериоциногенных штаммов была несколько ниже (40%), тогда как у культур, изолированных из другого клинического материала и из внешней среды, она составляла 66,7-80%. Данное обстоятельство свидетельствует о достаточно широком распространении бактерио-циногении у серраций и, в первую очередь, S.marcescens.

Бактериоцины, продуцируемые выявленными штаммами, проявили специфичность в отношении культур рода Serratia. Использование культур эшерихий, клебсиелл и энтеробактеров в качестве индикаторных в опытах с выявленными бактериоциногенными штаммами не дало положительных результатов, в том числе и с индикаторными штаммами из коллекции Fredericq - E.coli В и К12. Также не было получено положительных результатов при использовании бактериоциногенных штаммов из той же коллекции. Ни один из исследованных штаммов серраций не проявлял чувствительности к колицинам, продуцируемыми штаммами E.coli Са-38, Са-42 и Са-53. Это позволяет нам говорить о специфичности бак-териоцинов серраций, хотя в литературе имеются сведения, что бактериоцины серраций способны действовать на культуры представителей других родов энтеробактерий (E.coli, Salmonella typhimurium, Shigella sonnei) [93,112].

При исследовании спектра действия выявленных бактериоцинов на 54 штаммах серраций установлены различия в этой характеристике. Большинство обнаруженных бактериоцинов обладало узким спектром действия, проявляя активность в отношении 1-5 изученных штаммов. Лишь 2 штамма серраций продуцировали бактериоцины, активные в отношении более 10 испытанных культур этих бактерий.

Для выявления особенностей бактериоциногенных штаммов серра-ций они были подвергнуты микробному типированию. У этих культур определяли плазмидный профиль ДНК, чувствительность к антибиотикам и наличие множественной устойчивости к антибиотикам, распространение факторов вирулентности, а также проведено их патотипирование и фаго-типирование.

По плазмидному профилю ДНК, чувствительности к антибиотикам, распространению множественной устойчивости к антибиотикам, по адгезивным свойствам, антилизоцимной активности различий между бакте-риоциногенными и небактериоциногенными штаммами серраций не выявлено. Однако, по распространению у бактериоциногенных штаммов гемолитических свойств они существенно отличались от культур, не продуцирующих бактериоцины - бактериоциногенные штаммы обладали гемолитическими свойствами достоверно чаще.

Установлены различия между бактериоциногенными и небактериоциногенными штамамми серраций по распределению у них патоваров, которые выявлялись на основании комплекса факторов вирулентности с учетом множественной устойчивости к антибиотикам. У бактериоциногенных культур преобладали одни патовары, у небактериоциногенных -другие. Особенно четко видна разница по распространению патоваров 2г и 2б (рис.1). У небактериоциногенных штаммов культуры этих патоваров составили почти половину (45%), тогда как у бактериоциногенных - лишь 15%. Культуры этих патоваров характеризуются адгезивными свойствами и антилизоцимной активностью.

Близкая картина отмечена и при фаготипировании. Бактериоциногенные штаммы чаще относились к фаготипам 8 и 14, а небактериоцино-генные - к фаготипам 1,11,12.

Эти данные в совокупности свидетельствуют об определенной тенденции. Представляется целесообразным выяснение связей между бакте

96 риоциногенностью серраций и другими характеристиками этих бактерий на более обширном материале. Такая мысль подкрепляется результатами рассмотрения свойств чувствительных к бактериоцинам штаммов серраций.

Сопоставление тех же свойств у чувствительных к бактериоцинам штаммов и нечувствительных к ним показало близкие результаты. По распространению плазмид у бактерий, множественно устойчивых к антибиотикам штаммов, адгезивным свойствам, антилизоцимной активности, гемолитическим свойствам различий между этими группами культур не выявлено. Однако, отмечено, что нечувствительные к бактериоцинам сер-рации были более устойчивыми к антибиотикам (полимиксин, левомице-тин, канамицин, доксициклин), чем чувствительные к бактериоцинам штаммы. Кроме того, чувствительные к бактериоцинам культуры имели более высокий уровень антилизоцимной активности.

Сравнение распределения патоваров среди чувствительных и нечувствительных к бактериоцинам штаммов показало определенные различия. Эти различия были аналогичными различиям между бактериоциногенны-ми и небактериоциногенными штаммами. У нечувствительных к бактериоцинам культур также резко преобладали штаммы патоваров 2г и тогда как у чувствительных к бактериоцинам культур - патоваров 5г и 5з.

Отмечены и различия в преобладании отдельных фаготипов у рассмотренных культур.

Таким образом, чувствительные к бактериоцинам штаммы серраций имеют определенные различия с нечувствительными к бактериоцинам культурами.

Учитывая различия в спектрах действия бактериоцинов и в спектрах чувствительности к ним у изученных культур серраций, предпринята попытка бактериоцинотипирования этих бактерий.

Нами рассмотрены два принципа типирования бактерий с использованием бактериоцинов: по чувствительности культур к бактериоцинам и по спектрам действия продуцируемых серрациями бактериоцинов.

Рассмотрены 3 схемы типирования серраций, основанные на явлении бактериоциногении. Две схемы включали определение чувствительности культур серраций к бактериоцинам, продуцируемым отобранными типовыми бактериоциногенными штаммами.

Схема 1 предусматривает использование 10 типовых штаммов, с помощью которых выделен 21 бактериоцинотип. Каждый бактериоцинотип включал от 1 до 5 штаммов. По этой схеме удалось типировать 79,6% исследованных культур.

Схема 2 была использована из-за того, что в первой схеме должны быть большое число типовых штаммов, что естественно затрудняет проведение типирования. При этом типировании выявляется большое число бак-териоцинотипов, состоящих всего лишь из одного штамма. Это снижает эффективность схемы. Поэтому была рассмотрена схема 2, в которой использованы 6 типовых бактериоциногенных культур. По данной схеме выявлены 18 бактериоцинотипов, в которые входили также от 1 до 5 штаммов. По схеме 2 удалось типировать несколько меньшее число штаммов, чем по схеме 1, хотя различия были недостоверными. Схема 2 отличается большей простотой из-за меньшего числа используемых бактериоциногенных типовых штаммов.

В целом между двумя указанными схемами существенных различий не отмечено. Среди типированных по этим схемам штаммов 46,5-55,5% принадлежали к одинаковым бактериоцинотипам, установленным по обеим схемам.

Типирование серраций на основании бактериоциногенности типовых культур оказалось мало эффективным.

При сравнении свойств бактериоциногенных и бактериоциночувст-вительных штаммов серраций было установлено, что разграничение этих бактерий может проводиться по ряду характеристик: множественной устойчивости к антибиотикам, наличию и сочетанию факторов вирулентности, плазмидному профилюДНК, фаготипу. Эти свойства можно рассматривать как эпидемиологические маркеры бактерий рода Serratia. К таким же маркерам можно отнести и бактериоцинотип, устанавливаемый по бактериоциногенности и бактериоциночувствительности этих бактерий.

Фаготипирование было эффективным в отношении 83,3% исследованных культур, бактериоцинотипирование по схеме 1 - в отношении 79,6%, бактериоцинотипирование по схеме 2 - 66,7%, бактериоцинотипирование по схеме 3 - 50% штаммов. В то же время адгезивная способность отмечена у 68,5% культур, множественная устойчивость к антибиотикам - у 46,3%, антилизоцимная активность - у 42,6%, наличие плазмид - у 35,2%, гемолитические свойства -у 31,5%. Патотипирование, проведенное на основании комплекса факторов вирулентности с учетом множественной устойчивости к антибиотикам, позволило разграничить на пато-вары все исследованные штаммы.

Учитывая достаточно широкое распространение эпидемиологических маркеров среди серраций, представляло интерес выяснение возможных связей между этими свойствами бактерий.

Для того, чтобы провести сравнение рассмотренных показателей, мы условно разграничили уровень корреляционных связей на четыре степени. При величине коэффициента корреляции более 0,7 корреляция считалась высокой, при коэффициентах корреляции от 0,4 до 0,7 корреляция рассматривалась как умеренная, при коэффициентах корреляции от 0,2 до

0,4 - слабая корреляция, а при коэффициентах ниже 0,2 считалось, что корреляция отсутствует.

Учитывая, что адгезивные свойства бактерий мы устанавливали на основании комплексного определения ряда характеристик бактерий, было целесообразным, прежде всего, проанализировать связи между этими тестами: адгезивность в отношении эритроцитов человека, агглютинация эритроцитов человека и барана, в том числе маннозорезистентная гемагг-лютинация, адсорбция красителя конго красного.

В результате определения величины корреляционных отношений между парами признаков установлено наличие высокой корреляционной связи между адгезивностью в отношении эритроцитов человека по результатам определения индекса адгезивности микроорганизмов и остальными исследованными свойствами - коэффициенты корреляции составляли 0,97-1,00. Также высокая корреляционная связь отмечена между ге-магглютинацией эритроцитов человека и барана и маннозорезистентной гемагглютинацией этих эритроцитов, что является естественным.

Остальные исследованные показатели адгезивного процесса проявляли слабую корреляционную связь с исследованными параметрами - коэффициенты корреляции находились в пределах 0,2-0,38. Между гемагглютинацией эритроцитов человека в целом и маннозорезистентной гемагглютинацией этих эритроцитов и другими показателями имелась слабая корреляционная связь (г = 0,23 - 0,38) либо она отсутствовала.

Исходя из полученных данных, можно утверждать, что наиболее информативным показателем адгезивных свойств серраций является индекс адгезивности микроорганизмов, определенный в опытах с использованием эритроцитов человека группы 0(I)Rh+ [15]. Таким образом, при определении адгезивных свойств бактерий рода Serratia целесообразно ограничиться этим исследованием.

100

Корреляционному анализу были подвергнуты 11 различных характеристик серраций, которые являются эпидемиологическими маркерами этих бактерий. Этими свойствами являлись: адгезивность бактерий по результатам определения индекса адгезивности микроорганизмов, антили-зоцимная активность, образование а-гемолизинов, образование тиолзави-симых гемолизинов, множественная устойчивость к антибиотикам, наличие плазмид, патовар, фаготип, бактериоцинотип по схемам 1, 2, 3.

Проведенный анализ показал наличие корреляционных связей между рассмотренными маркерами серраций. Наиболее высокий уровень этих связей отмечен между адгезивными свойствами бактерий и остальными изученными параметрами.

У остальных исследованных факторов вирулентности корреляционные связи с изученными маркерами были в основном умеренными. Так, антилизоцимная активность проявляла высокую корреляцию с обраовани-ем тиолзависимых гемолизинов и с патоваром бактерий, умеренную - с фаготипом и бактериоцинотипом, установленным по всем 3 рассмотренным схемам. С остальными свойствами отмечена слабая корреляционная связь.

Между способностью серраций образовывать а-гемолизины и другими маркерами корреляционные связи практически отсутствовали, а образование тиолзависимых гемолизинов коррелировало с некоторыми изученными маркерами: с фаготипом серраций отмечена высокая корреляционная связь, с адгезивными свойствами, антилизоцимной активностью, множественной устойчивостью, наличием плазмид, патоваром, бактериоцинотипом по схемам 2 и 3 - умеренная связь.

У множественной устойчивости к антибиотикам отмечена умеренная корреляционная связь с адгезивными свойствами, образованием тиолзависимых гемолизинов, наличием плазмид, патоваром и бактериоцино

101 типом по сехемам 2 и 3. С остальными параметрами имелась слабая корреляционная связь.

Наличие плазмид у серраций не коррелировало ни с одним из рассмотренных маркеров.

У патовара серраций выявлена высокая корреляционная связь со всеми рассмотренными маркерами. Такая связь с факторами вирулентности вполне естественная, так как патотипирование проводилось на основе этих свойств. Обращает на себя внимание наличие умеренной корреляционной связи с фаготипом и бактериоцинотипами бактерий.

У фаготипа серраций установлена умеренная корреляция со всеми рассмотренными маркерами - лишь с образованием тиолзависимых гемолизинов отмечена высокая степень корреляции.

Бактериоцинотипы, установленные на основании трех схем бакте-риоцинотипирования, характеризовались умеренной и высокой корреляционной связью со всеми остальными маркерами.

У бактериоцинотипов, установленных по схеме 1, имелась высокая корреляционная связь с бактериоцинотипами, установленными по схемам 2 и 3, а также с образованием ос-гемолизинов.

Бактериоцинотипы по схеме 2 проявляли высокую корреляцию с бактериоцинами по схеме 3 и с образованием тиолзависимых гемолизинов, а с остальными параметрами наблюдалась умеренная корреляционная связь.

У бактериоцинотипов по схеме 3 высокая корреляция отмечена только с образованием ос-гемолизинов, а с остальными маркерами отмечена умеренная корреляция.

Таким образом, несмотря на сравнительно небольшую выборку исследованных культур серраций (54 штамма) показана четкая корреляционная связь между различными свойствами этих бактерий, которые могут рассматриваться как эпидемиологические маркеры.

102

Установленные на основании бактериоцинотипирования бактерио-цинотипы серраций связаны с другими свойствами этих бактерий и также могут рассматриваться как эпидемиологические маркеры.

103

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Аталикова, Жанета Борисовна, Нальчик

1. Абрикосова Н.Ю., Костюкова H.H., Рагинская В.П., Терехов A.A. Свойства штаммов Serratia marcescens, выделенных при септических заболеваниях новорожденных // Ж.микробиол. - 1985. - N10. - С. 19-22.

2. Арутюнян Н.М., Мнацаканов С.Т. Плазмидные факторы патогенности у Klebsiella pneumoniae, выделенных в Армянской ССР // Биол. ж. Армении. 1986. - Т.39, №10. - С.903-905.

3. Байрамова A.C., Батуро А.П., Мурадова Э.К. и др. К изучению бактерий рода Serratia, выделенных в акушерском стационаре // Ж. микробиол. 1991. - N12. - С.80.

4. Барсуков A.A., Земсков В.М., Соболев В.Р. Повышение неспецифической резистентности макроорганизма к условно-патогенным и патогенным микроорганизмам нуклеинатом натрия // Антибиотики. 1978. -№6. - С.520-526.

5. Беляков В.Д., Ряпис Л.А., Каминский Г.Д. Типирование возбудителей инфекционных болезней на современном этапе // Ж.микробиол. 1990,- N 3.- С.98-103.105

6. Биберман Я.М., Стародубцев B.C., Литовкнна Т.М. Изменения состава и свойств микрофлоры при абсцессах и флегмонах челюстно-лицевой области // Стоматология. 1991. - №1. - С.34-35.

7. Блиева JI.3., Гайрабеков Р.Х., Габрилович И.М. Сравнительное исследование фагов Serratia // Гомеостаз и инфекционный процесс. Саратов, 1996. - 4.1.-С.46.

8. Блинкова Л.П. Перспективы использования бактериоцинов для профилактики и терапии инфекции // Ж. микробиол. 1984. - N 5. - С.10-14.

9. Бозиев В.Б., Бозиев А.Б. К методике выявления корреляционной связи между факторами патогенности условно-патогенных энтеробактерий // Достижения медицинской науки практическому здравоохранению. -Нальчик, 1995. - С.17-19.

10. Бондаренко В.М., Афанасьева С.М., Васюренко З.П. Гетерогенность жирнокислотного состава бактерий родов Klebsiella, Enterobacter, Hafnia, Serratia //Ж.микробиол.- 1982.- N 12.- C.54-60.

11. Бондаренко B.M., Марченко В.Г., Лопушанская O.B. и др. Плазмиды вирулентности и колонизирующая способность клебсиелл, выделенных из крови септицемических больных // Эпидемиол. и микробиол. раневых инфекций. М., 1986 - С.31-33.

12. Бондаренко В.М., Прохоров В.Я. Критерии этиологической значимости условно-патогенных бактерий // Проблемы клинической микробиологии в неинфекционной клинике.- М.,1983.- С.297.

13. Брилис В.И., Брилене Т.А., Ленцнер Х.П., Ленцнер A.A. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов // Лаб.дело.-1986.- N 4.- С.210-212.

14. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Малышкин А.П., Немцева Н.В. Метод определения антилизоцимной активности микроорганизмов // Ж. микробиол. 1984.- N 2. - С.27-28.106

15. Габрилович И.М. Некоторые принципы фаготипирования условно патогенных микроорганизмов // Теоретические проблемы эпидемиологии и инфекционной иммунологии на современном этапе. Нальчик, 1986. - С.53-54.

16. Габрилович И.М. Рабочая схема патотипирования энтеробак-терий // Вестник Кабардино-Балкарского государственного университета. Серия «Медицинские науки». -1996. вып.2. - С. 16-17.

17. Габрилович И.М. (Gabrilovich I.M.) Pathotyping of opportunistic bacteria // IMBEM IV. Fourth International Meeting on Bacterial Epidemiological Markers. Elsinore, Denmark 10-13 September, 1997. - P. 147.

18. Габрилович И.М., Гайрабеков P.X. Биологические свойства бактериофагов Serratia marcescens //Ж. микробиол. -1992. №2. - С. 10-12.

19. Гайрабеков Р.Х. Схема фаготипирования Serratia marcescens // Вопросы теоретической и клинической медицины. Материалы юбилейной конференции, посвященной 25-летию медицинского факультета. Нальчик, 1993. - С.34-35.

20. Гайрабеков Р.Х., Габрилович И.М. Фаготипирование Serratia marcescens // Актуальные вопросы инфекционной патологии.- Нальчик, 1993. С.12-14.

21. Гайрабеков Р.Х., Лотиев К.Ю., Похил С.И., Лисняк Ю.В.

22. Структура бактериофагов Serratia и Enterobacter //Всес. конфер."Микробиологические и биотехнологические основы интенсификации растениеводства и кормопроизводства". Секция П.-Алма-Ата.-1990.-С.15.

23. Гурии Н.А. Эффективность продигиозана в терапии больных с хроническими неспецифическими заболеваниями легких // Антибиотики. -1975. -№2.-С.161-164.107

24. Дауров Б.И., Полетаев С.Д., Стефани Д.В. Продигиозан в комплексном лечении саркоидоза органов дыхания // Клин. мед. 1982. - №9. - С.90-93.

25. Дяченко Ю.В. Аутоштаммы стафилококков назального происхождения как потенциальные возбудители воспалительных процессов в челюстно-лицевой области // Стоматология. 1994. - №1. - С. 19-22.

26. Ерова Т.Е., Анисимова JI.A., Смолянская А.З. и др. Плазмиды и генетические детерминанты резистентности к антибиотикам грамотрицательных бактерий, изолированных от онкологических больных //Бактериальные плазмиды.-Нальчик, 1990.-С.109.

27. Инструкция по применению дисков для определения чувствительности к антибиотикам.- М., 1966.

28. Корнилова З.Х., Свитаева A.C. Продигиозан в терапии деструктивного туберкулеза легких // Пробл. туб. 1980. - №1. - С.30-32.

29. Крылова М.Д. Фаготипирование бактерий. М., 1963.

30. Кудлай Д.Г., Лиходед В.Г. Бактериоциногения. М., 1966.

31. Лакин Г.Ф. Биометрия.- М., 1990.

32. Лиелпетере А.Я., Якобсон Ю.О. Бактериоцины, их классификация и условия образования // Изв. АН Латвийской ССР. 1983, N3. -С.69-82.

33. Методические рекомендации по определению грамотрицательных потенциально-патогенных бактерий возбудителей внутриболь-ничных инфекций. - М., 1986.

34. Методические указания по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями.-М., 1984.

35. Наставление по применению систем бумажных индикаторных (СИБ) для идентификации микроорганизмов семейства Enterobacteriaciae.-Горький, 1988.108

36. Нижарадзе Г.И., Гладкова К.К., Павленишвили И.В. и др.

37. Этиологическая структура сепсиса у детей раннего возраста и резистентность выделенных микроорганизмов к антибактериальным препаратам // Тез. XVIII съезда Всес. общества микробиологов, эпидемиологов и паразитологов. Алма-Ата, 1989. - С. 162-163.

38. Петровская В.Г. Генетические основы вирулентности патогенных и условно-патогенных бактерий // Ж.микробиол.-1984.-К2. С.77-87.

39. Петровская В.Г., Бондаренко В.М. Общие принципы генетического контроля патогенности бактерий // Ж. микробиол.-1994.- N 3.-С.106-110.

40. Пинчук JLM., Соколова К.Я. О значении профилей жирных кислот в таксономии энтеробактерий // Биохимия и биофизика микроорганизмов. Горький, 1983. -Nil.- С.53-56.

41. Плохинский Н.А. Биометрия. М., 1989.

42. Порфирьева О.В., Юсупова Д.В., Зоткина Н.Л. и др. Хити-нолитический комплекс Serratia marcescens и особенности его биосинтеза // Микробиология. 1997. - Т.66. - -С.347-353.

43. Похил С.И., Кособуцкий JI.A., Лысенко А.И., Лисняк Ю.В. Бактериоциногения и фагоплазмиды у типовых культур клебсиелл // Бактериальные плазмиды. Нальчик, 1990. - С.51-52.

44. Похил С.И., Кособуцкий Л.А., Овчаренко Б.М. и др. Бактерио-цинотипирование штаммов Klebsiella pneumoniae // Микробиол. ж. 1991. - №6. - С.88-93.

45. Рязанцева И.Н., Андреева И.Н., Огородникова Т.И. Биосинтез продигиозина Serratia marcescens в условиях освещения // Конф. "Автотрофные микроорганизмы". М., 1996. - С.51.109

46. Филлипов В.А., Рубаненко Е.Б. Дифференциация некоторых видов лактобацилл подрода Thermobacterium по спектрам чувствительности к бактериоцинам // Ж. микробиол. 1977. - N4. - С.46-50.

47. Чернявская E.H., Васюренко З.П. Жирнокислотный состав липополисахаридов бактерий родов Klebsiella и Enterobacter // Ж.микробиол.- 1984.- N 2. С.39-43.

48. Якушенко О.С., Габрилович И.М., Бондаренко В.М., Руднев И.А. Питательная среда для выявления тиолзависимых гемолизинов энтеробактерий. A.c. 1693062 Al СССР.Заявл.25.09.89. N475979/13, опубл.в Б.И., 1991,N43.MKH С 12 Q 1/04.

49. Aber R.C., Mackel D.C. Epidemiologie typing of nosocomial microorganisms // Ann. J. Med. -1981.- V.70. P.899-905.

50. Acar J.F. Serratia marcescens infections // Infect. Contr. 1986. -V.7. - P.273-278.

51. Acker G. Intracellular organisation phagenshwanzahnlicher Bacte-riocine der Gruppe A in Serratia marcescens // Arch. Mikrobiol. 1976. - Bd.3. -P.175-183.

52. Ahearn D.G., May L.L., Gabrill M.M. Adherence of organisms to silvercoated surfaces // J. Ind. Microbiol. 1995. - V.15. - P.372-376.

53. Alford R.H., Hall A. Epidemiology of infections caused by gentami-cin-resistant Enterobacteriaceae and Pseudomonas aeruginosa over 15 years at time Nashvill Veterans Administration Medical Center // Rev. Inf. Diseases. -1987. V.9. - P.1079-1086.

54. Alonso R., Pitt T.L., Pezez-Diar I.C.et al. Nuevd aproximación molecular para el mareaje epidemiológico de Serratia marcescens. Comparación con los marcadores en uso en la actualidad // Enferm. infecc. y microbiol clin.-1992.-V.10, supl. N2.- P.52.110

55. Alvarez J.S., Regueiro B., Garrido M.Y. Antimicrobial susceptibility of clinical isolates of Serratia marcescens // Antimicrob. Agents and Chemother. 1979. - V.16. - P.523-524.

56. Amin A.A. The prevalence bacterial intestinal pathogens in healthy people in a rural area // J. Egypt. Med. Assoc. 1988. - V.7. - P.279-289.

57. Anderhub B., Pitt T.L., Erdman I.G. A comparison of typing methods for Serratia marcescens // J. Hyg.- 1977.- V.79.-P.89.

58. Armstrong P.J. Systemic Serratia marcescens infections in a dog and a cat // J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1984. - V.184. - P. 1154-1158.

59. Auchen H.M., Pitt T.L. New lypopolysaccharide serotypes of Serratia marcescens // J.Med. Microbiol.- 1995.-V.42.-P. 143.

60. Bar-Ness R., Avrahamy N., Masuyama T., Rosenberg M. Increased cell surface hydrophobicity of a Serratia marcescens NS438 mutant lacking wetting activity // J. Bacteriol. 1988. - V.170. - P.4361-4364.

61. Belkum A.H. van. Standardization of molecular epidemiologic microbial typing in gram-positive pathogens // Clin. Microbiol. Infec. 1999.-V.4, suppl.3.-P.4.

62. Bhattacharyya P., Whitney, Wendt L., Silver S. Colicin tolerant mutants of Escherichia coli: resistance of membranes to colicin El // Sei. 1970. -V.168.-P.998-1000.

63. Bidwell J.L., Reeves D.S., Bullock D.W. Diversity of R-plasmids in epidemic Serratia marcescens from the South West of England // New Trends Antibiot. Res. and Therapy. Proc. Int. Symp., Milan, Oct.29-31, 1980. Amsterdam, 1981.- P.268-270.

64. Bingen E.H., Mariani-Kurkdjian P., Lambert-Zechovsky N.Y. et al. Ribotyping provides efficient differentiation of nosocomial Serratia marcescens isolated in a pediatric hospital // J. Clin. Microbiol.- 1992.-V.30.- P.2088-2091.1.l

65. Blair J.B., Williams R.E.C. Phage typing of Staphylococci // Bull WHO.- 1961.-N24.-P.771-784.

66. Bollet C., Gainnier M., Sainty J.-M. et al. Serratia fonticola isolated from a leg abscess // J. Clin. Microbiol. 1991. - 29. - C.834-835.

67. Bradley D.E. The morphology and of some bacteriophages'specific to Serratia marcescens // J. Roy. Microscop. Soc. 1965. - V.84. - P.257-316.

68. Brandis H. Die Natur der Bacteriocine // Naturwis. 1975. - V.62. -P.22-28.

69. Brubaker R.R. Mechanisms of bacterial virulence // Ann. Rev. Microbiol. 1985.-V.39.-P.21-50. 171.

70. Brurberg M.B., Nes I.P., Eijsink V.G. Comparative studies of chitinases A and B from Serratia marcescens // Microbiology. 1996. - V.142. -P.1581-1589.

71. Buffenmyer L.C., Rycheck R., Yee R. Bacteriocin (Klebocin) sensitivity typing of Klebsiella // J. Clin. Microbiol. 1976. - V.4. - P.239-244.

72. Bulloek D.W., Bidwell J.L., Reeves D.S. et al. Outbreaks of hospital infection in south-west England caused by gentamicin-resistant Serratia marcescens // J. Hosp. Infect. 1982. - V.3. -P.263-273.

73. Callow B.R. A new phage-typing scheme for Salmonella typhimu-rium // J. Hyg.-1959. V.57. - P.346-359.

74. Carton J.A., Gomez M.B., Gonzales L.B. et al. Infección gel trasto urinario de adquisición nosocomial // Enferm. infecc. y microbiol. clin. 1989. -V.7. - P.408-414.

75. Cenci G., Caldini G., Villarini M., Beccari T. Presumptive discrimination of Serratia marcescens and related organisms by fluoroenzymatic assay '// Microbios Leff.- 1990.- 44, N175-176.- P.l 19-125.

76. Chambers C.E., Stockman S.L., Niesel D.W. Thermoregulated expression of a cloned congo red binding activity gene of Shigella flexneri // FFMS Microbiol. Lett. 1985. - V.28. - P.281-286.

77. Chetoui H., Delhalle E., Osterrieth P., Rousseaux D. Combination of biotyping and electrophoretic patterns of esterases for differentiation of nosocomial Serratia marcescens strains // Res. Microbiol. 1995. - V.146. - P.579-586.

78. Chmel H. Serratia odorifera biogroup I causing an invasive human infections//J. Clin. Microbiol. 1988. - V.26. - P. 1244-1245.

79. Christensen G.D., Korones S.B., Redd L. et al. Epidemic Serratia marcescens in neonatal intensive care unit: importance of the gastrointestinal tract as reservoir // Infec. Contr. 1982. - V.3. - P.127-133.

80. Cipoletta M., Capone P., De Felipo P. Piccola epidemia di enterite da Serratia in una comunita ospidalieza // Aggiorn. pediat. 1983. - V.34. -P.927-930.

81. Coria-Jimenez R., Ortiz-Torres C. Aminoglycoside resistance patterns of Serratia marcescens strains of clinical origin // Epidemiol, and Infec.-1994.- 112.-P.125-131.

82. Cornells G. Approche genetique de la virulence des bacteries // Ann. Biol. Clin.-1983.-V.41.-P.411-418. 171.

83. Crameri R., Zatchy J., Hintermann G. et al. Chromosomal inheritance of glaucescin, a bacteriocin-like substance from Streptomyces glaucescens // FEMS Microbiol. Letters. 1981. - V.ll. - P.243-247.

84. Dag A.M., Paranjape V.L., Pitt T.L. Serratia marcescens infection associated with early abortion in cows and buffaloes // Epidemiol, and Infec. -1988.- V.101.-P.143-149.

85. Darini A.L.S. Epidemiologic typing methods for bacteria // Rev. bras, patol. clin.-1994.-V.30.-P. 14-18.

86. Daw M.A., Falkiner F.R. Bacteriocins: nature, function and structure // Micron. 1996. - V.27. - P.467-479.113

87. Ding M.-J., Williams R.P. Biosynthesis of prodigiosin by white strains of Serratia marcescens isolated from patients // J. Clin. Microbiol. -1983. V. 17. - P.476-480.

88. Donowits L.G., Marsik F.J., Hoyt J.W., Richard P. Serratia marcescens bacteremia from contaminated pressure transducers // J.A.M. A. 1979. -V.242. - P.1749-1751.

89. Drucker D.B., Mc Killop C.M. Bacteriocin production by Streptococcus milleri // Canad. J. Microbiol. 1982. - V.28. - P.278-283.

90. Duval I., Soussy C.J., Koumare B. et al. Evolution des bacteries hospitalieres // Pathol.-Biol. 1982. -C.30. - P.405-414.

91. Eckhardt T. A rapid method for the identification of plasmid desoxyribonucleic acid in bacteria //Plasmid. 1978. - V.l. - P.584-588.

92. Eichenlaub R., Winkler U. Purification and mode of action of two bacteriocins produced by Serratia marcescens HY. // J. Gen. Microbiol. 1974.-V.83.-P.83-94.

93. Enders G.L. Blanken R.M., Iones B. Application of pyocins as a confirmatory test for Neisseria gonorrhoeae // Abstrs. 79th Ann. Meet. Amer. Soc. Microbiol. 1979. - P.347.

94. Enfedaque J., Ferrer S., Francese G.S. et al. Bacteriocin 28b from Serratia marcescens N28b: Identification of Escherichia coli surface components involved in bacteriocin binding and translocation // Can. J. Microbiol. 1996. - C.42. - P. 19-26.

95. Fredericq P. Colicins //Annu.Rev.Microbiol. 1957. - V.ll. -P.7-22.114

96. French G.L., Homi J. Insignificance of colonic bacteria in the sputum of patients in a new ICU // Crit. Care Med. 1979. - V.7. - P.487-491.

97. Gammon J.A., Schwab J., Joseph P. Gentamicin resistant Serratia marcescens endophthalmitis // Arch. Ophthamol. - 1980. - V.98. -P.1221-1223.

98. Gargallo-Viola D. Enzyme polymorphism prodigiosin production, and plasmid fingerprints in clinical and naturally occurring isolates of Serratia marcescens // J. Clin. Microbiol. 1989. - V.27. - P.860-868.

99. Gargallo-Viola D., Lopez D. Numerical analysis of electropho-retic periplasmic protein patterns, a possible marker system for epidemiologic studies //J. Clin. Microbiol. 1990. - V.28. - P.136-139.

100. Garrison R.N., Fray D.E., Berberich S., Polk H.C. Entero-coccal bacteremia. Clinical implications and determinants of death // Ann. Surg. 1982. - V. 196. -P.43-47.

101. Gaston M.A., Ayling-Smith B.A., Pitt T.L. New bacteriophage typing scheme for subdivision of the frequent capsular serotypes of Klebsiella spp. // J. Clin. Microbiol. 1987. - V.25. - P.1228-1232.

102. Gates R.H., McCall C.E. Gram-negative bacillary meningitis // JAMA. 1982. - V.248. - P.1217-1218.

103. Gavini F., Ferragut C., Isard D. et al. Serratia fonticola, a new species from water // Int. J. Syst. Bacteriol. 1979. - V.29. - P.92-101.

104. Geiseler P.J., Harris B., Andersen B.R. Nosocomial outbreak of nitrate-negative Serratia marcescens infections // J. Clin. Microbiol. -1982.-V.15.-P.728-730.

105. Germani Y. Sondes nucleiqus donees et oligonucleotides synthetiques pour l'identification des "pathotypes" de Escherichia coli, agents d'enterites // Bull.Inst.Past.-1990.-V.88. P.363-397.115

106. Gill V.J., Farmer J.J., Grimont P.A.D. et al. Serratia ficaria isolated from a human clinical specimen // J. Clin. Microbiol. 1981. -V.14. - P.234-236.

107. Gillies R.R., Govan J.R.W. Typing of Pseudomonas pyocya-neae by pyocine production // J. Pathol. Bacteriol. 1966. - V.91. - P.339-345.

108. Goto T., Rawahara M. Antibiotic susceptibility of Serratia marcescens isolated from the patients with infections urinary // Chemotherapy. 1984. - V.32. - P.709-717.

109. Gratia A. Des relations numeriques enter bacteries lysogenes et particules de bacteriophage // C. R. Soc. Biol. 1936. - T.122. - P. 812.

110. Gratia J.P. Products of defective lysogeny in Serratia marcescens SMG38 and their active against Escherichia coli and other Enterobac-teria // J. Gen. Microbiol. 1989. - V.135. - P.23-35.

111. Graves S.R., Kennelly-Merrit S.A., Tidemann C.R. et al. Antibiotic-resistance patterns of enteric bacteria of wild mammals on the Krakatau, Islands and West Java, Indonesia // Brit. Phil. Trans. Roy. Soc. London B. 1988. - V.322.-P.339-353.

112. Green M., Wald E.R., Fricker F. et al. Infections in pediatric orthotopic heart transplant recipients // Pediat. Infec. Diseases. 1989. -V.8. - P.87-93.

113. Grimont P. Interet des sondes nucléiques en bactériologie // Assoc. anciens, elev Inst. Pasteur.-1990.-V.32, N124.- P.32-33.116

114. Grimont P.A.D., Grimont F. Genus VIII. Serratia // Bergey's Manual of Systematis Bacteriology.-Baltimore/London, 1984.-V.1.-P.477-484.

115. Guasch J.F., Pique N., Climent N. et al. Cloning and characterization of two Serratia marcescens genes involved in core lipopolysac-charide biosynthesis // J.Bacteriol. 1996. - V.178. - P.5741-5747.

116. Gubina M., Kumely R., Dragas A.Z. et al. Signifacance of Serratia marcescens typing for hospital infection detection // Alpe Adria Microbiol. J.- 1993.-V.2,N1.- P.45.

117. Halle E., Grand E.L., Klare I. et al. Nosokomiale Infektionen durch multiresistente Serratia marcescens in emem Universitatsklinikum -Aspekte der Klinik und Chemotherapeutikaresistenz // Padiat. und Grenzgeb. 1989. - Bd.28. - S.299-309.

118. Hamon Y. Les bacteriocines // Ann. Inst. Pasteur. 1964. -V.107.- P. 190-225.

119. Handrick W., Bergmann L., Spencker F.-B. Perinatale infec-tionen durch seltene Erreger. 2. Serratia marcescens // Padiat. und Grenzgeb. 1981. - Bd.20. - S.87-93.

120. Harden W.B., Fisher J.F., Loebl D.H., Bailey J.P. Septic arthritis-due to Serratia liquefaciens // Arthritis and Reum. 1980. - V.23. -P.946-947.

121. Hartemann P., Bleck M.F., Job C. L'alimentation a l'hopital: problemes poses par le controle microbiologique de personnel des cuesines et des aliments // Ann. Med. Nancy et Est. 1989. - V.28. - P.65-70.117

122. Highsmith A.K., Jarvis W.R. Klebsiella pneumoniae: selected virulence factors that contribute to pathogenicity // Infec. Contr.- 1985.-V.6.-P.75-77.

123. Hoff G.L. Serratia // Diseases Amphibians and Reptiles. -1984.-P.59.-65.

124. Hoone M., Rasul Z., Ausan C.R., Hoo M. Bacterial flora in the alimentary tract of live fresh water diseased fish and their response to different antibiotics // Bangladesh J. Zool. 1992. - V.20. - P.341-346.

125. Horwitz H.W., Nadelman R.B., Van Horn K.G. et al. Serratia phymuthica sepsis associated with infection of central venous catheter // J. Clin. Microbiol. 1987. - V.25. - P.1562-1563.

126. Ibiebele D.D., Sokari T.G. Occurrence of drug-resistant bacteria in communal well water around Port Harcourt, Nigeria // Epidemiol, and Infec. 1989. - V.103. - P.193-202.

127. Jamieson A.F., Bieleski R.L., Mitchell R.E. Plasmids and phaseolotoxin production in Pseudomonas syringae p.v. phaseolicola // J. Gen. Microbiol. 1981. - V.122. - P.161-165.

128. Katoh-Kanno R., Kimura M., Mitsuda O., Tanaka Y. Survey of modifying enzymes and plasmids in amikacin-resistant Serratia marces-cens // Microbiol, and Immunol. 1986. - V.30. -P.509-519.

129. Kim M.K., Kim J.K., Rhee S.S. Isolation of a phospholipase Al- producing microorgsnism // J. Ind. Microbiol. 1996. - V.16. - P.171-174.

130. Landgab J.M., Ibelii Vaz T.M., Irino K. et al. Enterobacterias dos generös Klebsiella, Enterobacter e Serratia isolados de liguido cefalor-raguidiano // Rev. Inst. A. Lutz. 1987. - V.47. - P. 103-107.

131. Lemoine V.R., Guzman M.G. Inducible tellurium resistance and the Pac B character as traits for the identification of plasmids IncH12 in Serratia marcescens // Biomed. Lett. 1992. - V.47. - P.71-77.118

132. Lewis D.A., Hawkey P.M., Watts J.A. et al. Infection with netilmicin resistant Serratia marcescens in a special care baby unit // Brit. Med. J. 1983. - V.287. - P.1701-1705.

133. Lium E.R. Serratia marcescens ved mastitt hosku // Nord, vet-erinarmed. 1977. - V.29. - P.529-532.

134. Lussaro F., Pagani L., Porta F., Romero E. Extended-spectrum ß -lactamases conferring resistance to monobactams and oxyimi-nocephalosporins in clinical isolates of Serratia marcescens // J. Chemo-ther.- 1995.-V.7- P.175-178.

135. Lyerly D., Gray L., Kreger A. Characterization of rabbit corneal damage produced by Serratia keratitis and by a Serratia protease // In-fec. and Immun. 1981. - V.33. - P.927-932.

136. Lyerly D.M., Kreger A.S. Importance of Serratia protease in the pathogenesis of experimental Serratia marcescens pneumonia // Infec. and Immun. 1983. - V.40. - P. 113-119.

137. Mahony D.E. Bacteriocin susceptibility of Clostridium perfrin-gens: a provisional typing schema // Appl. Microbiol. 1974. - V.28. -P. 172-176.

138. Manfredi R., Nanetti K., Ferri M., Chiodo F. A survey of Serratia marcescens infection in patients hospitalized for HIV disease // Clin. Microbiol. Infec. 1999.-V.4, suppl.3.-P.162.

139. Maresz-Babczyszyn J., Mroz-Kurpiela E., Slopek S. Typing of Klebsiella rhinoscleromatis by means of pneumocins // Arch. Immunol. Ther. Exp. -1967. - V.16. - P.406-409.

140. Matthews M., Bradley D. Preliminary observations on two bacteriophages from Pseudomonas and Serratia // Proc. 3rd European Reg. Confer, on Electron Microscopy. Prague, 1969. - V.2. - P.543.119

141. McGeer A., Low D.E., Penner J. et al. Use of molecular typing to study the epidemiology of Serratia marcescens // J. Clin. Microbiol.-1990.-V.28.- P.55-58.

142. Mei H.C.V., Cowan M.M., Genet M.J.et al. Structural and physicochemical surface properties of Serratia marcescens strains // Can. J. Microbiol.-1992.-V.38.-P.1033-1041.

143. Mendez F.J., Mendoza M.C., Llanneza J.J., Hardisson C. Transfer of drug-resistance plasmids by conjugation from nosocomial strains of Serratia marcescens to Escherichia coli in biological fluids of human origin//J. Hosp. Infect.- 1982.-V.3.-P.285-292.

144. Mendoza M.C., Mendez F.J., Laneza J. et al. R-plasmid diversity in clinical isolates of Serratia marcescens // Microbiol. Lett. 1983. -V.22.-P.7-17.

145. Mermal L.A., Spiegel C.A. Nosocomial sepsis due to Serratia odorífera biovar I // Clin. Infec. Diseases. 1992. - 14. - C.208-210.

146. Merrikin D., Terry C. Use of pyocin 78-C2 in the treatment of Pseudomonas aeruginosa infection in mice // Appl. Micr. 1972. - V.23. -P.164-165.

147. Miller J.M., Rhoden D.L. Preliminary evaluation of biolog, a carbon source utilization method for bacterial identification // J. Clin. Microbiol.-1991.-V.29.-C. 1143-1147.

148. Mizon F., Marcolin M., Leclerc H. Etude comparative de l'activité antibacterienne de cinq aminoglicosides sur des bacilles gram négatif isoles et milieu hospitalier // Med. et malad. infec. 1980. - T. 10. -P .24-27.

149. Montilla R., Williams R.P., Loren J.G., Vinas M. Lipopoly-saccharide is the receptor for kappa phage in Serratia marcescens // Antonie van Leeuwenhoek.- 1991.-V.59.- P.15-18.

150. Morrison S., AI nisi A., McCray E. et al. Serratia marcescens (SM) outbreak in an intensive care nursery (ICN) // Abstr. Annu. Meet. Amer. Soc. Microbiol. 1986, 86th Annu. Meet., Washington, D.C., 1986. -Washington, 1986.-P.418.

151. Muller H.E., Steigerwalt A.G., Gill L., Smith R. Isolation of Serratia fonticola from birds // Zbl. Bacterid., Microbiol, und Hyg. 1986 -Bd. A261. - S.212-218.

152. Naumiuk L., Samet A., Bronk M., Nalewajska J. Serratia marcescens in a tertiary care hospital study over 2 years // Clin. Microbiol. Infec.-1999.-V.4, suppl.3.-P. 109.

153. Newport M.T., John J.F. Endemic Serratia marcescens infection in a neointensive care nursery associated with gastrointestinal colonization // Pediat. Infec. Disease. 1985. - V.4. - P. 160-167.

154. Palomar J., Guasch J.F., Regue M., Vinas M. The effect of nuclease on transformation efficiency in Serratia marcescens // FEMS Microbiol. Lett. 1990. - V.69.- C.255-258.

155. Palomar S., Leranoz A.M., Vinas M. The effect of O-antigen presence//Microbios. 1995.-V.81.-P.107-113.

156. Parker F.B., Greiner-Hayes C., Tomar R.H. et al. Bacteremia following prosthetic valve replacement // Ann. Surg. 1983. - V.197. -P.147-151.

157. Perstelo F., Falcon M.A., Carnicero A. et al. Limited degradation of industrial, synthetic and natural lignins by Serratia marcescens // Biotechnol.Lett. -1994. V.16. - P.299-302.

158. Pitt T.L., Erdman I.J., Bucher C. The epidemiological type identification of Serratia marcescens from outbreaks of infection in hospitals // J. Hyg.- 1980.- V.84.- P.269-283.121

159. Przondo-Hessek A., Byczynska B., Pulverer G. Phage typing of Klebsiella bacilli // First European Congress of Clinical Microbiology. Abstract. Bologna, 1983. - P. 138.

160. Przondo-Hessek A., Slopek S., Miodonska J. Phage typing of Klebsiella rhinoscleromatis // Arch. Immunol. Ther. Exp. -1967. - V.16. -P.402-405.

161. Puig M., Fuste C., Vinas M. Outer membrane proteins from Serratia marcescens // Can. J. Microbiol. 1993. - 39. - C.108-111.

162. Quan A., Sippel J. Evoluation of bactericidal assay in serotyping Neisseria meningitidis group A // Can. J. Microbiol. 1979. - V.25. -P.929-931.

163. Radda T.M. Metastatic Serratia marcescens endophtalmitis // Ophtalmologica. 1982. - V.185. - P.65-68.

164. Raimondi A., Pessina A„ Cocuzza G. Outer membrane permeability of Serratia marcescens to meropenem and imipenem // Chemother. -1994. V.6. - P.225-228.

165. Richard C., Monteil V. Nouveaux marqueurs epidemio-logiques de souches de Klebsiella oxytoca isolees d'infections nosocomiales //Ann. Biol. clin.-1987.-V.45.-P.397-401.

166. Riechling I.J., Rose D.N., Mendelson M.H., Hirshman S.L. Acute suppurative thyroiditis caused by Serratia marcescens // J. Inf. Diseases.-1984. V. 149. - P.281.

167. Rische H. Phage typing of Shigella sonnei according to Ham-marstrom current experiences and completion of the method by temperate phages // Arch. Immunol. Ther. Exp. -1967. - V.16. - P.392-401.122

168. Roselle G.A., Watanakunakorn C. Polymicrobial bacteremia // J.A.M.A. 1979. - V.242. - P.2411-2413.

169. Rubin S.J. Klebsiella marker systems// Infec. Contr.- 1985.-V.6.-P.59-63.

170. Sakai S., Nishio A., Kumomoto Y. Study on the infection urinary caused Serratia marcescens // Chemotherapy. 1980. - V.28. - P.723-729.

171. Sansonetti P., David M., Toucas M. Correlation entre la perte d'ADN plasmidique et le passage de la phase I virulente a la phase II avirulente chez Shigella sonnei // C. R. Acad. Sei. 1980. - V.290. - P.879-882.

172. Scheidt A., Drusin L.M., Krauss A.N. et al. Nosocomial outbreak of resistant Serratia in a neonatal intensive care unit // N.Y. State J. Med. 1982. - V.82. - P.l 188-1191.

173. Schwarzkopf A. Mikrobielle Virulenzfaktoren als diagnostische Marker // MTA. 1996. - II, № 12. - P. 969-972,974.

174. Seifert-Gertchman M., Lippert W. Electronenmikroskopische Untersuchung zweier temperieter Phagen von Serratia marcescens // Z. aalg. Microbiol. 1960. -Bd.l. - S.87.

175. Serruses-Schontens E., Rost F., Depre Y. A nosocomial epidemic of Serratia liguefacients urinary tract infection after cystometry // Eur. J. Clin. Microbiol. 1984. - V.3. - P.316-317.

176. Shannon R., Hedges A.J. Reversibility of the specific ad-sorbtion of colicin E2-P9 to cells of colicin-sensitive strains of Escherichia coli // J. Bact. 1973. - V.116. - P.l 136-1144.

177. Shlaes D.M., Medeiros A.A., Krön M.A. et al. Novel plasmid-mediated ß-lactamase in members of the family Enterobacteriaceae from Ohio // Antimicrob. Agents and Chemother. 1986. - V.30. - P.220-224.

178. Slopek S., Krukowska A., Mulczyk M. Phage typing of Shigella sonnei // Arch. Immunol. Ther. Exp. -1967. - V. 16. - P.519-532.123

179. Slopek S., Mulczyk M., Krukowska A. Phage typing of Shigella flexneri // Arch. Immunol. Ther. Exp. -1967. - V.16. - P.512-518.

180. Slopek S., Przondo-Hessek A., Milch H., Deak S. A working scheme for bacteriophage typing of Klebsiella bacilli // Arch. Immunol. Ther. Exp. --1967.-V.15.-P.589-599.

181. Smarda J. Novel approaches to the mode of action of colicins // Folia Microbiol. 1975. - Vol.20. - P.264-271.

182. Tan R.J.S., Lim E., Ishak B. Intestinal bacterial flora of the househad lizard, Gecko gecko //Res. vet. Sei. 1978. - V.24. - P.262-263.

183. Todhunter D.A., Smith K.L., Hogan J.S., Schoenberger P.S. Gram-negative bacterial infections of the mammary gland in cows // Amer. J. Vet. Res. 1991.-V.52. - P.184-188.

184. Topley and Wilson's principles of bacteriology and immunology / Wilson G.S., Miles A.A., ed. London, 1957. - V. 1. - P.731.

185. Traub W.H. Comparative biotyping, bacteriocin typing, and se-rogrouping (O-antigen) of Serratia liquefaciens // Zbl. Bakteriol.- 1991.-Bd.275 C.200-210.

186. Traub W.H. Serotyping of Serratia liquefaciens: H-antigens // Zbi.- Bakteriol.- I991.-Bd. 275.- P.211-215.

187. Valainis G.T., Foster M.T. Botryomycosis caused by Serratia marcescens // South. Med. J. 1984. - V.77. - P. 1475.

188. Van Norman Gail, Groman Neal. Method for quantitating sensitivity to a staphylococcalbacteriocin // Infec. and Immun. 1979. -V.26. - P.787-789.

189. Vandenbroucke-Grauls C.M.J.E., Baars A.C.M., Visser M.R. et al. A bronchoscope as source of an epidemic with Serratia marcescens // 5 th. Eur. Congr. Clin. Microbiol, and Infect. Diseases, Oslo Sept. 911, 1991: Abstr.-Oslo., [1991J.-P.148.124

190. ViUarino M.E., Jarvis W.R., O'Hara C. et al. Epidemic of Serratia marcescens bacteremia in a cardiac intensive care unit // J. Clin. Microbiol.- 1989.-V.27.- P.2433-2436.

191. Watanakunakorn C. Serratia bacteremia: a review of 44 episodes // Scand. J. Infec. Diseases. 1989. - V.21. - C.477-483.

192. Young D.R., Divers T.J., Benson C.E. With difusion of an amino acid solution in to horses 7/ J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1989. -V.195. - P.340-342.

193. Young V.M., Moody M.R., Morris M.J. Distribution Serratia marcescens serotypes in cancer patients // J. Med. Microbiol. 1980. -V.13. - P.333-339.

194. Zahradnick J. Typizace Pseudomonas aeruginosa pomoci pyo-cini (pyocinogenotypie) // Gs. epidemiol., microbiol., immunol. 1979. -V.28. - P.276-283.

195. Zbiden R., Blass R. Serratia plymuthica osteomyelitis following a motocycle accident // J. Clin. Microbiol. 1988. - V.26. - P. 14091410.

196. Zhao N., Cheng K., Zhao Sh.et al. Девять штаммов Serratia marcescens, изолированных из клинических образцов // Weishengurixue tongbao microbiology.- 1993.-V.20.-Р.283-286.

197. О ВНЕДРЕНИИ РЕЗУЛЬТАТОВ НИР

198. Зав.бактериологической лабораториейу Н.И.Архиповаото здравоохранения РФ1. ГОСУДАРСТВЕННОГО САЯВТДО*

199. МЙ0Л8ГЕЧЕСЕ@Г® ДЗ®РА в ЕБР3317, г. М&яьчик, лтагоса, &3, тел. 6-51-83 кйк 257015 Тоноаь№от мло,1. АКТо внедрении результатов НИР

Информация о работе

Аталикова, Жанета Борисовна
кандидата биологических наук
Нальчик, 1999
ВАК 03.00.07

Диссертация

Бактериоцины в типировании серраций - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Бактериоцины в типировании серраций ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Бактериоцины в типировании серраций"

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Аталикова, Жанета Борисовна

Введение Диссертация по биологии, на тему "Бактериоцины в типировании серраций"

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Аталикова, Жанета Борисовна

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Аталикова, Жанета Борисовна, Нальчик

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Бактериоцины в типировании серраций
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология