Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Бактериофаги морганелл и провиденций

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Бактериофаги морганелл и провиденций"

С’-}

ЙПИЧЯШЯВО ЗДРЛІїООХРЛШ^П ГСССЙ^СКСП -уііДЕРЛЦІ'і!

- РОСТСЄСВіЯ .ГГО'ДЛРС'ГРідаїй ІДЯ'ДНЮКИЙ ИІСППУТ

ол

^ ії^іі 'и'с^

правах руг.опчсй

гдромБіщв лташз бллчшщовігі

ЕШОДОйДПІ МСРГ/і!іШЛ И ПРС9ЯДШПЯ. . 03.00.07"" Уихро&юлогж» '

’ • ■ Автореферат' ■ ’ ■ .. •

диссертации ііл ео;іс::зние учоноЯ степени кандидата недицийсхпх наук • . ; .

Ростов-іій-Доігу

1993

Робота шіодгска в КаЗарюшо-Балкарском госуларстшвюи университета. .

Научный руководитель - чл~,н-коррєспондент Академии

естестьешшх наук РФ, доктор биологических наук,

. • профессор ГАОгаЛСВИЧ И.М. ■

Официальные оппоненты: доктор неямцинских иауи тЕРншаш л.н. •

' кандидат кздпцшіскто? наук

КУДОЯКША Т.А.

Ведущая организация - Ростовский’научно-исследяттельскнй ; противпчухниЯ институт.

Защита состоится /7 " ешж. 1993

г.

а / О часов на оаседалжі сп е н; і а я їй: гр о га ни о г о совета Д Ос-4.5 Л. 01 при Ростовской г о суда р с т г; с .чиры медицинском институтов 3-І4700. г.РсстоЕ-иа-^ону, пер.Нахичеванскмй,29).

Автореферат разослан

С диссертацией іюзоіо ознакомиться е библиотеке Ростовского государственного медицинского шетитута.

Учений секретарь слециаяизирог-ашого совета, доцент

Н.Я.Корганог

ОЕШ ХАРАКТЕРИСТИК РАБОТА .

Актуальность теми» ОднсЯ из первоочередных проблем современной и'елшшни и здравоохранения стала проблема внутрибольничных инфекций. 3 княго " Внутрибольничные инфекции" Л.Лосонци пиает:",..госпитальной инфекция нет только в тех отделениях, где не кглавт принимать ее зо внимание". Проблема ЕНутрибоЛЬНК'ШНХ инфекций отнесена ВОЗ г. одноя из актуальных и находит зпзчите/ыюе осво-иение как в отечественной литературе, тпя я за рубежи? (В.Д.Болякой к со:;:-?., 1976; 7.Ь>гпДг-з . д соавт.,1576; В.Й.Стручкси к соав?., 198'|; ,1.££г2сс-!; , ^.КХо'Ь'-аа,

Х935| В.В.Вдодавец,19895 НД.Сечкиа п соав?.. 19395 Р.Х.Йфаев, Ji.il. Зуева, 1989; н др.).

• Гоеяиталькно ин$окцни.чрезвнч&Шго опасна для здоровья больного, а тагжз представляют опасность.для округавцих, тап ;:зк ой.:п5?.вт способноегь'в :с'эпидеинческсму. распространенно. Значение госглтадышх ки£е;;цяа заключается такие в том, что они обусловливав? белее длительное пребывание пациентов в стационаре, уаеднчлвап? трудовик . потери и приводят к повыпенным издержкам по уходу за болышми. Еознашозекие таких заболевания наносит.' заметный экономический уцерб, увеличивая в 2-3 раза средний койко-день (Л.П.Зуеиа и ссазт.,1985),

В Англии, Овеют..Пользе, Венгрии госпитальные инфекции обнаруэтиззися в ерэднем у 6-1% госпитализированных болышх СВ.ВоЯМек,19е^). Частота послеоперационных осложнений гисГлю-зоспалйтехьйого. характера в различных стационарах стран СНГ колеблемся в вирожих пределах.-от 2 до 305 (З.И.Стручхоз и ссавт.,1933). . ' :

Распространенна гзюЯйо-септнческих инфекций среди • урологических больннх составляет 2Ь-3'1,к% (Л.П.Зуева, 1933), а у послссп?радионннх болькнх-акуперских стационаров и гляскологкчесяях клиник - до 6,2£ (В,В,Влодазец, 1939). ' . . ' '

С^(;Дии,1 ЮКВЗЬТеДЬ НООлси^.О; ■’Ч-ЮЬЧих ры«1.5Х С«.Ц*Г.

состььдлс* олсло 6*1 на 1000 выписазгихсл богытх (З.П.Еенцоя,Т?50), ^0—60 па 1000 роди»акхся детей ь учреждениях родовспсыояения (А.А.Сохши, и соавт, ,1980), ГигЗко-ссстическхе ослоъдаиия отиачазтея, в сроднен, у больных, ГОСПИУеД£<Э.1р^ВаИйЫХ в отделения сбссЯ ' хирурги» ( Д.г.агМлог и соаст,,' 1990), Частота гиоЯно-йоспадаг^льннх забодс'заыл с последнее десятилетие гоарос.чь в 2-? раз:., длительность госпат&яьэйцга! бсяыгах и--за шолиых сслехиекиа - ъ 3 раза, яетпльность-и б раз» ’«гашюсть яр» септицемиях т раавйтвх страши прабдк- ' зйлаоь к показателям в доаитибяотичоскиЯ период а составляв? а США, Англии, Фронкки, Канаде, Японии больсо, че.ч с? 7 кваболее. распространении* ш;.$екциоЙ1;их заболевания - бранного ти|а, дизентерии, сальноиедлеэов, скар-датиии, дифтерии,, хокяьга и г,о?,ио1шевкт'а- (Е.Н,Левина,1985), Возбудительна гяолкс-госпалягсльш.’х габатанн!? яв-йй«*сй прежде всего уеяевно-патогшы* иикраоргьтта;.

Пра качестсеннок и ,чо,-ш'-;естсо1шси ын» дсикз бактеряа в стационарах установлено, чтг 1- 1962-15/70 гг, дскш:яров&я коагудаэсподогительний стафилококк (до 66!»), ь к концу 70-д годеэ преобладали различило продстввятези оеясЯ-стьа сктсробйкгзриП СК«Грая1?осп»-А.ДакЬЕа,1979; В.С.Ле-сасеь и сонат., 1933), На т^рркаории КЕР частота’выделе-. кйя усяовио-пзтогенкых оятеробаягер;:Я только за 2 года (1983-1905 гг.) возросла на 11$ (М.Т.Таухеиов и соавт., ^ 1985). ' . ' ' ’

К остростояаей проблеме внутрибольничных инфекций, наряду с прочини представителями эктеробактериа, причастны к бактерии иг трвбы prote-.it' . Удельная вес отдельных возбудителей разная видов триби 2го;с'-в варьирует в . зависимости от характера забодевыш. Наиболее часто, микроорганязив отой групои выделяется при инфекциях моче-выводяядах Л}гея, раневых иагноителъных лроаессех, гнке-кодэгкческих воспалительных заболеваниях ( о.нюь-.га и соовт. ,197*1; ^ег£о^ и о1;г^ , 1985).

Значительная роль в развитии перечислениях заболевания принадлежит'представителям родов ІІОГ^'ПОІІ-: . и £-Г07І “ аспоій , при этом каблодается рост числа случаев внутрибельничігая инфекций, обусловленных данными Сакте-риган! (а.БД2лоДйЕвц,1974; З.ь.'.слз в сог»вт.,158б).

\ Одїтако» недостаточная изученность атих ішсроорга-

• пкзк<>э» трумю-гтя пр;і их па«итк.£зтецки п дифференциации от др;,тггт рогоз, п. ?а::хе кгутрч роде:» и сядсу созд?сї серьезно прбдсмм. В целях рапрггог^а упросыших схем сб’лдртг'гпія «оугапглл д проБПдскцпЛ к «эучепчр путей их ргспростріиопвл в ипстоясео грлтя прегазгачтея традгда-ошпга (соро- г С:50т::гщрс;;т.н::с, с-п;тдс.шмс аиткбистяко-грз!!н, *-*рс грктсльяссги к Сгсторно г.тгьч и <5апт?риоцйизн) я но"раг;^И"С:!::пе (опрсдзлсіглв ш»с.-;йдиого пря{:ілл, геме-. логячп'с?:; /і?", про7С$гесгі.і:-:и :г пго^яля карних кислої)

. ‘ .кетоки ( •ї.Гоііагй'ї \IC73; ;?.2\птгг . .ІЬ'ОЗ;

. £;М.Пто-гух, К,П.Со!Со.чог-п,1?03; а содвг.,І?2;і;

Л.СЛпсрук, С.З.Ерйтосі, І?57; В... »Го’я::огі я соав?,,1!>?С

З.Г.ГаСхьузяга, Р.З,Су£йлрсйа,І5?І>. . . ....

.. . ' " Сл!г:~! нз персп^кгашк^ і: спсхфічних является мо' тод ^агогііЛкроЬЬііая, который с успехом йспользуотсл при . -Д'ЙВГКОСТЗЕО 0Тг*:ГЛ'СК0К5С2!1Х, СаЛШО!ІСЛЛЄЗ!і:іХ к некоторах других'заболвЕакл-Т. Несмотря на аневсдаеся а литературе, ‘пубдишт о выделения бактериофагов иоргаиелл'и прова. „лекция и поизткшг их тивароваиия ( ■Г.Соеїгое Д9С6;

•1?«£біаіН»й <3»0ГеГ£гіо~ 197^1^ 'Б.Н.ДаккЗ, 1974; і.лі' - . ;Л^аі11 , ,1375; ї«.і:гЗйиаа»а. я еоавт», 1563; "С.Н.Золо-

• фат. 1950) до•настояаего.вргмзпл цо продложека схека фаготяпярогзайл коргапелд’.и провидсщий, отсутствует дай

' ■• нне о 'перекрестном испытании Іаг'св на штаммах бактерий .'-трибы ї“тс-і;-.с д других'знтеробактсриях.,

. Іімь ’л задачи работы, іієльв работы било изучение -. • свойств бактерій родов. а •?гоуі’с.ігсіа >

д также-выделение, изучение и сравнений своЯсте фзгоп, активних б отксаекии прейстаг:;«теде!| стих родов,разработка схеми их $аготипирояанид, . .

для осуществления поставленной цели било несбх<шаю ‘ревить следующие задачи:

I» Изучать осноснио свойства щтамнов морганелл и провиденциЯ. . .

2. Изучить распространенна лизогении среди нор- .

ганелл и провидёнциа. '

3. Выделить фаги мсрганелл и провиденций и изучать их свойства. .

4. Исследовать способность выделенных фагов к лизису бактерий различных родов и видов трибу -хойсае

5. Исследовать возможность фаготипированая нор-

ганелл и провиденций. •

Работа проводилась в соответствии со сводный те-матцчссхш планом научно-исследовательских работ, курируешь Научный Советом по микробиологии РАМН-направление II.01.Об. Тема: "Бактериофаги уеловно-патогспных микроорганизмов", зарегистрирована ей ВНГИЦ, номер государственной регистрации 01.83.008256!?.

Научная иоаизио. В результате изучения отаммов родов гэт„агх11а. и угсп?1.йсьс1а виделено по 7 новых фагов, активных в отнесении морганелл и провиденций и дана их сравнительная характеристика. Показана возхоз-ность разграничения культур морганелл и провиденций с помощью фагов.

Практическая ценность. Разработаны предварительные схемы фагогипирования культур морганелл и прозиден-ция. Выявленная видовая специфичность фагов морганелл н провидецция может быть использована в практических бактериологических лабораториях в качестве дополнительного объективного теста для дифференциации бактерия рода ^оз^’цпаЦа от бактерий рода ^-_'оу£с1спе1- , а .

также для виутриродоаоЯ идентификации провиденциЯ.

Кроме того, фаготипирование'культур иорганелл и проаи-денцл*1может быть использовано для.определения фаговаров . с цель* выявлений источников инфекции и путей передачи гнойно-септических заболеваний. •

Апробация работы. Материалы диссертации опубликованы в 7 работах.Полученные данние доложены на 2-оЯ . Всесоюзной конференции " Бактериальные токсины" (г.Юрмала, 1939), на объединенной научной конференции молодых уче--них, специалистов и студентов " Медицинская наука -практическому здравоохранении" (г.Махачкала,1990), на обилейноа•конференции, посвяшениоЯ 25-летию медицинского факультета (г.Нпльч’.н:,!-^).

Положения выносимые на за питу.

1. Срглп культур иорганелл и пролидеица.! распространены лнзогетше втагош* 1!з лнзогеяных культур выделено по

7 фагов, вктшишх в отиогениа морганелл и провиденциЗ.

2. Фаги морганелл н ирсвидеаци!» отлнчагтея нехху соСой

к могут евть классафициреглик по морфология, антнге-н-ним сяозстзо*!, чувствительном!! к температурному еоз-ае.’сгзн", параметра!: азз.кчодсЯстьия с чувствительной клотко;!.

3. Различая фагов по спектру гействия погзолили играть

твг.олнс Фап: я разработать’ предварительные схемы фаго-типиросания коргаиелл и прозиленцил. ' '

Структура и объем диссертации.' Диссертация положена на 156 страницах машинописного текста, иллюстрирована 15 рисунками и 35 таблицами, состоит из введения, обзора литератур!.', описания материалов и методов исследования, трех глав результатов собственных исследований,обсуждения полученных результатов, екзодов, указателя литературы (219 источников/ из которых 26 отечественных и 133 зарубопшх) и приложения. , ,

ОСНОВПСЕ СОЛЕР£АНИЕ РАБОТЫ. • .

I. Материал и методика. . -

3 работе использовано 39 атаммов, идентифицированных кпк :'ог^оНа , и‘ 34 штамма,отке-

секчы'х х роду р.-с-,., в т.ч. 25 итак;*га ^г.го-с- • ■'4-^5. , 5 гатаккоч Л', и 4 стамма .

+? ^ » V-- -.2."*^ 1.:. • ' '

Ь'елььайство иааимсв (5»)). видел с-иы из клинического материала и цштрализовакноа бактериологи-юбкой дабо^ ратории Нальчикского центра госсэнвпидкадзора, часть ' штаммов (20) подучена из бактериологической лаборатории Республиканской клинической больший, 2 втамяа получо- . т из муэеакоЯ коллекция санигарно-эгшдсмиодогнчеекоЯ станции г.С.-Петербурга. Бес клинические вташа'«пасло-ни из материала от больных е острой и хронической патологией гнойно-вослолательного характера. Наиболее часто морганеллы к провидеиции остругивались в иочв, реповом отделяемом, ЙСГфЗМЮИИЯХ. 1 ятапн видел011 КОМИ кз'тщо-ього прсдукть при санитарно-бактериологических исолодо-. ■ линиях. Кроне того„ при проведении исследований нсподь- . зовами 22г( шгамма эатеробактбриЯ, мдоло.шшх иыи при \ проведениибактериологических исследования клинического материала, в т.ч, представители родов Е&оЬоПсЫа . Kiiiontj.il;; , 1йта1ааа , С^гоЬао-уг , К.-д£пАа . '

ЗЯъгэЪасЬсз.», Рхск? сш . . ■ - -

. В работе использовано 14 бактериофагов, видеден-, н:<х кэ лиэогеиних культур морганелл л прсвпденциН, в т.ч. ■ .фагов Х.пог,;=а11 • -7, фагов гх.гсбгзог! - 7; Помимо зтого, использованы также фага 1'сп;1п1а- (5) и ал его -

Ьав-йег (3) из коллекции кафедры микробиологии КабардиноБалкарского госуниеерситета* -

Бактерии к фаги культивировались на простых н слокных пктагеяьких средах, приготовленных из концентратов Дагестанского НПО " Питательные среди* (г.Махачкала). Инкубаций посевов осуществлялась при температуре 3?°С в течение 16-2^ часов, , .

Идентификация выделенких культур я изучение их биохимических свойств проводилось с пемоиью систем индикаторных бумажных (СЙБ). Параллельно использовались знте-ротестсистемы производства " Ь-с^саа " (Чехословахня). Чувствительность бактерия к антибиотикам определялась методом диффузии в агар о помоцьв набора стандаргных дисков. • ' - ' .

Лизоцкмная активность определялась по методике • "отсроченного антагонизма" (О,В.Бухарин и соавт.,11*85).

Л л-і ггсслол>и;?ч 21{тилйэк«?-»нса «ктияиос?? иеполмо-»г>*'зсь мотолн.та О.В,Е/гл»г«таа и йсзот, (190'0. ,5ля овспкя !?’?го?-;-акоП еяссиСпостд норгспим; и граііИїенці:;-отаї:;лп реплик ї'сяагґлиїкг.чцтік с 7S ззпссій apirrpo:;--*.-rm tbpsm. Сцоссбаооть алсорСироЕ-ать грясктсд’. коигэ г!"СП:іП изучии н.г п:ггг,тсльнс-; :;г^ро, сглірпЛіці-и G,02,« к?г^ііі!,сп!іх плолл? н 0,01;' чс!;го кращого. Наличко , П'МОЛИЗІЙЮ* ОіІрйДЄДЯЛ!! !I,t 1,5% 1»1’В|чг» CO’i.'f/. I’V'H 3-5'. '

кро.«чк.ч. Лпя onp.-nwimtf унодзаііИсі>з»х г-”'-г-.ґУі'ЛЮ'і n и ;<р гсСлгляял 0,002/ 1, -иисгс;!):^. .

Про;-;л!. ;;лагг':!г.,на.1 Ліі’. от?, -.л ел я л с;: к.."'::! глс^::о--

срлз’;; Гі С,7л :\г--рэзе но нп?оі::;.ц V з (1973).

/ля пог.нгс-кйя '•с:ь"і:'і!осї»і срлслггигч Ґа'гстерітс-ф5г<«і ъп л;;^ог;.’:!г;х культур r-.^'^v.si'nc.b об^уч-:и;п иг. уг;-Г(.-'-!';;гчї-?і>:• і-т•f: .'.уігс: іК'-пл-.ій л;:;*г:.м ij.a-v0.

' ■ спорту псогоцилп оогл°.гио ‘

іїї:;і!іТ.;х "сголо, ofjrt-VK&wje pyr.cnc;: етилу. ^'.і'дшгсл (livi), Лрсппрг-.т:» 2Л-у,:т-

роїлглі в>!вроо'ссч;:ш гстог.тат путе: неготигясго контрас-

ТЕНПВЯЇШЛ І'О Й.ІЇ-С.'г.І-.Г і; Л.;;огл. (19^У) fl ПОСЛГ'уії-

р.сії С-^кс'.ци-гл по метоллке С.І’.Сіи.мег.а (Г-ТО). І’лгктрсн-И2Я никроогспил Пр0ЙПД5!ЛГ:СЬ X! 'РОСТОВСКОМ Н5УЧІК>-ИССХ?- ■

?,сза'і.сльсксг; гіротизочуг.исм институте с поиопь» зяектрси-иого к:и:роскогга j;i: -ХС03.. Определение дятического Jep-цептц пр»гоп«-і:: па негоду В.Л.Зусва (IS65). • ■

Получению результат пояаерг&дксь статистической odpsCotxo Оі.П.Дкчарин, Л.Л.Воро^ьеа, IS62; П.й-.?ок«ц-r.r.k,ІЙ73} Г.§.!ткшД990). • '

^« Рсзудьтпта ис«ле-іовк.ниа я.их обсуглісте.

’ • Г-полонтскал характеристика культур «їоргеиєдл .

к пеэьй^екцай. , • ' . •

■ Морфологически все йзучвнине DTCiSMi; норганелл й проенцснива•вредстагляяя собой гракотрицетєльдею сла-богіояяижяяо пзлрчки,'хорошо растущие на простих пита- • теяыгах срезах. . ' • ’ •• .

По сяохиаичоокой вхтпанос^и £се паучоккий ктаы-ми (,срг^«йял били одксродеми. Она диььди пс-лоактоль-ну» ройкцгт на феаидалйьдклезащниз}, кидол.уреазу, рае%епл.яли гдзп»;ос.у. Все иссдедох-атше г:ультури к« ути-якскроаали цитрат н&трр.ч, не оЙрГ1Эо^иь!..-Ч>: сероводород, не раэктгалн гед$тину и оказались инертиими в отношении лактоза, налътози, са:<ироак,1Шшита,?,ульцат.1,иногита,' в;онкха, цел.чсб;гозу, рс-мцезы,сорбита, эсхулина а трега-лоз«« Баохйи:*ческис сгоЯотгэ проваленциЛ,определенные по ?.Э тестам, Сили более гетерогенным::. Все майки про-видгнцйЗ ^ориентировали глякозу до хислоты, обраговивала иядод и ЗЕнадаланиидезаккнаэу. Ни огин из итаммоа ив образоьнзал лазкцдекар^олсихазу, орнитиндбкгрбошшазу, аргшитдагидродазу, сероаодород, не фср«ентнро»ил сорбит к дулымт. На поногачкя ферментации маанига, адоиита, рамнози,сахарозы,якозита, трегалоза.утилизации цитрата натрия а уреагноа актязности асе агамии провидоициЯ разделена на'З вида: 3№.гий^оя. - 25 .станков, .ег.и^сз-11;зззсзг - 5 атсм;'ОВ, ^г.1-;ах?551 - ц втамма.

Кроме того, на основании сиоообностк к расшеовгш» глюкозу до гьза, ферментации адонита и инозита йта«лы £г. ;1га11?и81«г.г.в 1-г, -:11 разделены ка баовари.

Выделено 1< Саоаара среди штампов рг.г-.г! иа основании способности их к ферментации рамнозы п салицина.

’ Изучение чувствительности штанмоЕ морганелл и провиденций к 14 актибиотак&ч позволило выявить кайбо- . лее ^активные препараты в отноаемии морганелл:генга-мицин, канамацин и аоьокицетин, которые действуй губительно на 20,5-39,5,2 втамиов. Ни один из испытвнншс атам-ыов морганелл и провиденций ке был чувствительным к че-тициллину, стрептомицину, ампициллину, бензилпеницилли-ну, рифакаицнну. ристамииику, неомицину, эритрсяицкну. Процент устойчивых ко всея испытанным антибиотикам штам-нов среди провиденциЯ (85,2^) достоверно вцяе (р < 0,05), чем срода морганелл {№,1%). Множественной устойчивостью г антибиотикам (не менее чей к 12) обладает 69,2£ станков морганелл н все штакми провиденций. ' '

- 11 -

Среди провидении! более часто распространены штати, обладсоанб генагглагл.нирувяеЯ способностью {19,4%), чем среди морганелл. Однако, итеичи морганелл содержат чаше канноаореэистентные гсмагглогининп, чем ианнозочувствигельние (соответственна в С'3,2/5 а случаев), в то время как у проннденцнЯ частота обнаружения канкозорезиетек'пшх и наннозочувстштельких гем-аггявткниноь примерно одинакова. Манноз очуьстритвльнио гемаггдютишшы обнярулони у 55, б£ гс-маггхотикинпродуяи-рувцих атаыноз прозинепций, р. ма'кезорезкегентныо - у 44,4% нтєї'слв.

• Адсорбций конго кроеного внявлоне-у 51,2$ атак- • мое корггпелл, среда проакдегтиЯ только 3 птемма пе адсорбировали кенгорот.

При сопоставлял;! гсчагглотиниругяеЛ способности культур со способное?»: адсорбировать сснго крастдай or.ii-зелось, чго сочетание эгпх свойств отнечяется у ?ОДї атамнов нс-ргане-яд и у 73,5? цтг.гмоь прзгидеад:::!.

Аигадкзошшая актйгностг, гпгглепа у 24 отпчме-з морганелл (61,5?) и у 17 ятекиоа дрогядсшяЯ ч53,0;<0,. Количественное исследование актйлчзоі'іМі’.оЛ а пні: і; о с ти показало, что, в аелем, птамнч «оргянедд и прозидсш'Кй ' характеризуются ангзлаэсцикноЯ активность» в диапазоне от І до 4 мхг/ал, прячем стамки моргакелл, как правило, имеет более пысскнЯ показатель актллизоцияноЯ активности Лизоцимкув активность проявляет лишь оди; птакк корга-пвлл, остальное птаимы морганелл а эсе втакну прошдс-п-циЯ такоЯ способностью' не обладали.

53,3% ытаммоя морганелл сбладаот способность» • продуцировать гемолизины, причоч'у всех пгаму.св обнаруживаются о!/ - гемолизины. Кулі,тури прогндешдкй гексли-тическоЯ актиавооУь? ко обладают. Полученное раглкччя результатов геиолкгичєскся активності! атаки ев поргаиелл л провиденциЯ статистически досточернн (р < 0,С>5).

При электрофоретическом изучении профиля плагмид-ной ДНК'культур бнявлсны статистически достоверный различия (р < 0,05) в частоте обньруяенйя ядазмиз. среди морганелл (15,3л) й проеиденция (58-,8*). ■ .

Г:се nv-iriu морганелл, у коуорих били о&шрукслш ил::з-сідадг.ли множественной устсЯчиЕостьв к антибко-тяьаи, к&е-и птамяи провидончий. У 50% пдвзмадсеодар-ks:;;jx ьтгамяой моргакедл -л у 15% втаммсв провадехдаЗ выявлено по однсЛ пліізивдо, у остгхышх птг.агюв - по 2 гдазчиди. Бес сбиаруже.чше глазмидн относилась г. крушим и вмела колекулягішй насси от *0 до КО ;!Д.

. ' Иігаг'ка кергвнеля к прознденшй ииа:;«№,<ру»?8Я nos йоздс.істбші температур?.* 55°С і тєчєіюс 10-20 икнут.

ІС04 лвакгйгация культур морганелл и лроыислций отие-чієісгі тпкхе при ЗО-нинуїиоЗ зкспозшті их в хлороформе в соотіїсаеи;;;! 1:10, ■ ■

В'.ілезЕийь ^«гов иовгаиеял/.? провкдйпааЗ к их свойства.

“кпзліггь sjara корга нал л к проп;глзмг/П проб подо <стзчиоЗ я повераностнмх ьедоенов) не укадось. Сд;:и фаг :<арг&ньгд при исследовании проба пкаьззге продукта (сяопнсЛ салат) і: обозначая xa;t ф-лг 21>Ъ~п, Ярлі кесдодо-еші;і:і ш хизогеизд в обнчквх умоок,їх признак: лазогеи-ііосїі! г-бкаружеия у б из '39 атакыов иорганеля (І5Д2) и у аз вгаммсв прозидеицаЯ С И,Б;?)» прачем д;:сого:шы-йа оказалась культуры только одного вида провадкшиЯ -vtj-.ri , йз р. с ex лигогелнах. культур были шае-яека Jen?. После предварительного обзуче-цая исвп?уеиух культур уль-трё^иодетовнгш лучачн вризкакк днзогоний Casa o6impyasuu сыо у трех различная атвммов провидения?, кз историк также Сид» виделени фага. Таким образов,удалось выделить 7 фагоэ, активних в йтноаениа морганелл, н 7 фагов,, актпіншх » отноиснии провиденций. Зсе Саэто-рйо^ага ащелени из "местных" птамков, т.е. 'из лазоген-них культур, выделенных-в IS33-1991 гг, на территория г.Наль'іііка. '

Бактериофага норг&ивлл образует нолкна, порой точечные, колонии, не превыааощие в диаметре 0,8 ш. Негативные колонии, образуемые бактериофагами провиденний, насколько крупнее,до 1,2 им в диьаетре, прозрачнио, с неровными крапли. : '

Зидышнше фаги «ил я подвергнуты олоктронно-маьроскопкчесг.о.чу иссдсмозаниа, Исс 7 .*!.чгов иоргаиелч -;:і сходк/з мер ■■олсгда :і представляли собоЯ Еириоші, сос'іол::;ііс ;;з тскеягоік-лїноа голоъкя длинного отростка йє:і сокрацчяцсгсс:! чохла, в 3,0 - 3,5 раза провисав-Бвгл «шетр голочки. Зол ач яка диздвтра головки их равна ?3--';3 іім, дяг.ла грани і-озоока •- 20-28 їм, длина ст-росгка хслебаетвл от. *0 5.» 133 ям* а вдрана отростка -

0.5 -0,7 ;и. Всо яорімьвдл с?н»еены к морфологическому ?’ипу 3 по 2„2гг'Д.1'.у (1265) яла к норЬологіїческоЛ

грі-іто ІУ ко А.С, (Г963). По систематико

І!,-"’, \сі:сі-.а-.и'лл і. 1-: (197*0. О.Ксаіпоу :!

ц.-м'.;.с*-г:гісг.'{ 153?) эти Ф'іги привадлежат к группе М.

Фага проведе» ция ^азносбразш то мор$ологни. Н нор/ч.." групло ЗІ г.стут б-т пткосени ляаь 2 *п 7

іагои - 30/36 :і 5І/Ю, которые иное? сходну) с ; '.і'зд’і исргьиагм •.-ij.ilо.;;ог;п<і. ОтлкчйО* этих фагсо прояи-дишМ ааклі-чаоуси л.:иь а рлзмзрах ах кврюноэ. Тап.дао- ' каїл гоа'рї>;:іі ::х ссстагїзй? 56-65 ц<, длина грани - сиве-ЗО і і:!, длика отрои'?;'і - 109-£20 ;»<. Отросток .втах ^агоь чао.-о нзогьу?. Осг.^п-пчо :> ,‘:*гпв крокідешшя значительно ОІД:ІЧ;іИі*СЯ ат ОППСЗ'ЛПгХ Л ІДО .^ІГО-З иорганелл и прОІ'ИДЕИ- . и:Ш и могут бить о-хмлсени н морфологической группе С З

ПоІітл.ДекоіТіОЕП :і Д.2ісоП2і;аг> (1970#П.Косепо^

цн.--?.Ас’лс-гаїх-’ХКЗс!) иди х 3 группе по А.С, Тяхонснко (І9с3), Эти фагч предетаачаки крупинки удлиненными головками (до 72 нм з диа:«втрз) а корогкаци. отростками дла- '

:;оЛ до 12-14 ви. .'

'Гитри изучениях .?-агоз вашзроваля в довольно зна-'. читслммх пределах - от 1,3 - 10 до 3,7 • ГО у иорга-иелл я 8,3 • ІО4’- 7,0 • 10 - у провадснцнй. .

С цельп изучения 'антигенних свойств фагов путем' иммунизации крояикоз бнли полученн сиворотки к 5 бактериофагам. З опитах нейтрализаций фагов получеинішн саво-ротками установлена самостоятельность фага морганелл 203/210 ь антигенном отиопааии. С целью, изучения родства бактериофагов прозадеігцмй внутри вида и с Представителями других'близкородствейних родов была изучена способ-

- I't -

ность ft сывороток к фагам pr.rttt^cri нейтрализовать все кмеициеся фаги бактерий родов г-Го^слзИс. , Pro -vidcncia , XotsxoXa .и Еа-сгоо;:о1тсг . Получешше результата подтверждают видовую специфичность изученных фагов прошкенций в антигенном отношении * *агк про-виаеиций разделены на сероткпа (таблица I). Разграничение фагов провиденций на серотипн совпадает с разграничением ИХ ПО морфологии ЕирИОНОБ.

Все изученные фаги обладают различной степенью чувствительности к температурному БОЗДеЙСТВИР.ПрИ температуре 45°С ни один из выделенных фагов керганелл.и про-виденцнЯ не инактивировался/ При температуре 50°С стмс-чаьтск незначительная инактивация яивь одного {ага мор-гьиелл. Различия в чувствительности фагов к температуре отвечается при 55°С и 60°С. 4агк прогидекций, и целен, тл-js «ерност&бияыш, чем .фаги иорганелд. Пра температуре 55°С она практически не шагтзирогахись к дашь после. ЗО-кяиутноЙ экспозиции титр НОКОТОрКХ из них С ИНЫХ Ся на 13-20,1', Процент выживзнх фагов морганелл после 30-мц-иуткой экспозиции при температуре 55°С герьировая от 1,8 .до £0,1. На основании температурной чувствительности фага разделена на группы. Степень тсрмсстабильностн фагов провиденций находится в зависимости от их антигенного ' строения н морфологии багсвих частиц.

Фаге иоргвйелл и лровиденшгя устеЯчкьы к воздействию хлороформа в соотпопении 1:10 пр« ЗЭ-минутной экспо-ЗНЦШ1. ' ■ ' ' .

- .. . ' • • Таблица I,

' Нейтрализация фагов проззиденцнЯ антикаговимк ' сыворотками (в %). .

' • - ! i Антифагозая екзоротка_________

. 4аг ГСеротип I^5/10 ! 50/36 ! 51/18

Исследование сохранности фагов показало, чїс его фаги норганелл и нровиденциД обладают невысокой ста-Лиькостьэ. При хршегш в течение 3 месяцев падение т-итроз фагов составляв?, ъ среднем, 2-3 порядка. Разница б титрах важивавх •*эгоа еоотагляет при температуро 2С°С а 5®С не болео 3-5#, . _

Фази взавюдийстрйя фагоз с чувствительными клет-j'./.rt?.! изучал;? при температуре 37°С. Фага норганелл и про-ъзденций не отличается значительно друг от друга по коп-ссаяте скорости адсорбция, ВЕЛИЧИНО которой колеблется а пределах 0,53-3,2 • № ял/как. Длительность латект-ЛОГО периода при ;<V,i!MG?,e>tCTBV.H фагов норганелл с чувствительная» клетками Сслызе, чек при вэакнодействян фагоо просидепи'/Л и ссотягляст, большей частью, 40-45 мин.

На длитедьаоотк лптен гнего периода фаги провиденций относили к J группам. В перами группу зхлвчек» фаг», длительность латентного пг-рисда у которых била 5 пределах 15-20 uy.njf (Ь фага), 2 фаг.п зо или во вторую группу, длительность латенінсго периода г которой составляет 25-30 минут. Одни £аг ечделен я самозтоятельнув группу, длительность латентного периода его составила 50-55 минут. Фагй яор-гііієлл давали отйос:їтрль:іо Hsjsucovatft средний урожай на одну клетку - 3,6-9,6 инфекционных центров. Величина урожая большинства фагов прзгиденциа значительно вызё - до •’>7,0 инфекционная центров,'Различия з параметрах циклов развития фагов норганелл я прозиденций позволили разделить их на группа, /становлено также, что фаги провн-деициЯ ио адсорбируется иа бактериальных клетках рода . морганелла а, наоборот, фаги норганелл не адсорбируются на клетках провиденций»

Выявить у изученных-фагов наличие литического фермента не удалось. . ^ '

Таким образом, фаги норганелл а провиденций оказались достаточно гетерогенными по своим свойствам и отличными друг or друга как а пределах рода, так и между бактериофагами обоих роаоз, что говорят о саиостоятелъ-иости фагоз моргаколл и провиденций.

Основішки отличителыгош сеойстгачк и таксонскичостш критериями могут служить: морфология ;'агот;пх частиц, аитигбіпшо СВ0ЙСТ83 , ЧуЗЕСТВИТОЛЬНОСТТ. К ТСМГ-ерТУрЗК!^.)' .

Бездействию, а такяв иекоторис пор-чс-тр^ г.за}п-'сде-Лот~;:я фегов с чувствительной клетеоп, Сс;гу.к;!с ссогстщ ленпых фагсв представлены е тпб'(я:е ?,

- Спектр деДстпик Фагов и {аг<ігв;йц>ош{ид г.уль;уі; .

■ «органолл и ііусі.ядь:іч::Л.

С недьв установления спсцирячиостк доділс-лоас !|агог. моь-ганолл и провидшщна использовакс 2? чташоп 25 ктакмов їг.гєііЄзсгі, , 5 ет.іжкіи Гг.иІсгЛіі’исіеь;: .

4 штцмма рг, сікихШ. . а также 2ск и-:а:та оигероракге-рай.других родов, бтвшга імзер кк«.1, смлшоксал, иитробак-гера, иерсішиії, га^іпіЛ, зшеробз^гера, »рог.<!»' іигихр иорі'акеял и провидении.’! де «>ишрэзд*ис&« Вздслідоша і неп обладает вийойоЯ спшіі'-.тосгіґ., так к«д ;.і;з;>рувї гель;:-птемми олиоішєшіого вида, Чувсїі'їітсльмии :: £аган иорга-иелл оказались 18 ці 39 шамиоа рода ' С•’«С»-<■•>)

а к фагам • проваде!Шй-52іе втамыов. рг.гсїг^егі . 4вга норганелл характеризуется бедуо жтж кидексмі спс;ир>?, дойстбкя- — от 0,47 до 0,60 и.дизарущ' разное количество бактериалышх кульгу р. Фага провадекций иисат более ккй кндекс спектра. деЛствая - 0,23-0,69» При перскрс-сгнои испитании усюйчевих. к определенному фигу. атанмов уешюв лоно, что фагоустсйчивнс вташш лг-.зирувтск всека.сстсдь-начи фагами одноименного вкда,' что тпкггс иодтьерздаиу . самостоятельность каждого «щоденного батраифага. .

На оенооааш изучении своЯегв £агс«і, а пераур очередь антигенных и спектра действвя, сгобрьис'5 гссоьих . ’ фагов проввденцаЯ, с псмосыз котерн.х .удалось гапирелап 12 .(48,0*) атамиов прсвидегкгиа» В йагжсгасли; о.» -сочетания фагов, лизируваих Спкгерии, водш: провійеиций |>ае-прзделеин ка В фаготипоа» которое' соезгашші:продвар-• .: тедьнув схеиу-фаготиплроваїшя втих бактерий (таблица 3),

Фаг

Таблица 2.

Оская биологическая харагаергетакь фаРО!? 1» Ор1^&Н О^Л И Пр&ЬХ'тЁИЦ^Л в

!Морй)сло-!Серогип!Нидеис !гичеехая! 1

группа

Iспект-|ра

■'ЦбЗОТ-!ьил

_МЭ£Ь'Й°£Й-£2Е1,С 0 кдоглой группаТЗЗГ5хёль:Тсрёднкл"уро-по зо-!ность ла^кьЯ не одну дачинз!гейтнего!бзктерааль-скорос-1 периода, !н7» лпо’гг.у та ед-1 !

сср£- ! !

циа ! !

Чуь- сгдатогьНозхь Фагов к температу-

груп-:# выжиэае -па по,мости при чу Г: от-,- температуре зитэ-' бОиС з те-ЛЬНОС'ГИ ЧОН1Ш 10 ';агоз! ккяу?

ЧуЕСТЬМ-

ТеЯЬВОСТй

гдорофоркз

! 1 I »» ТЗй* 1

! < ( 1-52£12г. »

Цох^слаЦа-

203/2X0 ВХ '• о„5а 3 • 40-45 4,6 - 4,7 2 23,5 * 0,71 '• -

210/210 В1 - - ■ . 0,53 3 А 0—*13 ■ 3,6 - 3,8 . 2 10,6 7 0,41 -

226/209 ■ 31 ' - ' 0.47 г 40-45 5,3 - 5,4 ■2 5,2 + 0,9 -

244-п 51 - 0,82 г ■50-55 6,4 - 6,8 Г 15,2 * 0,13 . -

230/210 В1 . - , 0,7 2 ■ 40-45 6,2 - 6,5 т 10,0 ♦ 0,18 -

231/213 В1 - . о,ез I 40-45 9Д - 9,6 £ <Ф,2 * 0,28 -

213/210 В1 .. - 0,76 ' 3 ■ 35-ад 6,3 - 6,6 3 0,06 2 0,02 -

г»этг14сшс’1е.‘

36/15 (2 I 0,69 г 15-20 6,4 - 6,6 т 66,4 + 0,41 -

37/16 " С2. I 0,23 ■ м '25-30 9,6 -.9,7 т 90,2 + 0,18 -

45/18 С2 п • 0,31 3 ГО 1 ы о 16,4 -.13,3 I 89,9 7 0,11 -

*6/18 С2 п 0,23 . -I 50-55 1,3 - 2,2 т £ 87,7 +0.17 -

47/15 02 I 0,69 . г 15-20 32,2 - 33,4 т X 65,6 £ 0,04 -

50/36 БХ и .0,38 3 ■ 15-20 23,1 - 24,6 9 99,5 + 0,21 _

51/18 В1 I ■ 0.33' .■3 15-20 46,6 - 47,8 '> 100,0 ~ ■ -

-о

*

Таблица 3.

Предварительная схема фагстипироагния культур Рго-^іаелсіа

С’еготкп Штайны бактерий! Чувствительность к типовым

! -■ !_________ФйГйМ______________

__________і_______________!36ДІТІ5/І8І^6/18Н77Ї5ІЮ736

I 218 1* +

п . 215*257 ■ + - - ♦ 4

111 . . 237 . - _ - +• +

ІУ . 217,253 ■+ - - -

Ї 221,259 + - - * -

п 223,247 + + — + -

п ’ 236 - - +■ - -

УШ _ 246 . - - 4 • - - ' -

Все культури провиденцня» воиедзие в вышеуказанные фаготипы, выделены из клинического материала. Во втсь рой фаготип вошли культуры, вид олешке из испракаешм больных дисбактериозом кцвечниха. В остальные фаготнім вошли птаыиы, выдслеинне из раневого отделяемого и мочн от лиц с раневой.инфекцией и патологией мочеполовой системы, . . •

. , Предпринята такзке попытка разработки предварительной схемы типироаания моргакелл. На основании антигенних свойств и спектра действия отобраны 4 типовых фага. Все типовые фаги выделена из лизогеннмх культур.'В зависимости от сочетания фагов, лизируюиих бактерии, исследованные штаммы морганедл распределены в .7. фагсгипов, которые составили предварительную схему фаготширезания отих бактерий (таблица 4). ;

' Іаготипн и.іг.ог^с^іі включают от I до 6 штаммов . .

и лизируются І-Ч типовыми фагами. Исклсчение составляет УЛ фаготип, в который входят штаммы ;...~сі^гліі 203 и-214, не лизиоущкесА ни одним из предложенных типових фагов, ко чувствительных к вспомогательному фагу 2*й-п.

- - .

Наиболее распространенным оказался фаготип I, в которий входит 8 зтаммо», выделенных из различного клинического материала. Не отмечается также кйкоД либо связи с источником ^иделенил !1 у ИТ8НИОЙ других фаготипов.

, Гайяица 4.

Предварительная схеиа фаготипярования культур 1£ог^апо11а

Фаготип! Число ! Е1тзнна ! Чувствительность к типовым

!итакыоа '.бактерия 2_________________1агам_____________

__________________•____________

I

ХУ

У

и

У л

8

2

1

2

2

1

2

207,209, 210 225 229 263

267.275

213.276 268

226,230

234,273

269

203,214

+

+

+

4*

т

выводи ..

■ I. При исследовании 39 штанмов по'ргакслл и Э'| стмов провиденциЯ ЕЫЯЕЛеИа ИХ НССДПОТ-ОД’ЮСТЬ ПО ряду биологических СВОЙСТВ, В «гои числе ПО НаЛИЧИВ факторов патогенности. Устанрвлекс, что циркуЕярусаке па террпто-рта г. Нальчика втвими .иоргшкял к. проведении;! характер»!-•зуятся ярко .вирахенинми адгсзиЕшш: свбЯ8Твь,5к к мпогсстссц-иой резнстеитностыо к .патибаоттса^'Еиог.гапческая гетерогенность штаммов провкдепциЯ'по способности феркенткро- •

: вать £<}вкозу, ад опит, инозит, ’раннозу п с&шкт позволяет выделать внутри видов рода ?го?1с1с5зе1а биовари, п то ■ вреяя как выделение биоваров сроки корганеял не приставляется возможным. ■ ■ • • .

. 2. При перекрестной' испашт установлено .паровое

распространение лизогеиии среди ’культур «органе.™ и про-ЕИДСШКВ. Из лизогеншос ВГ8КК0В ЕВДСЯСаО фСГО» - по ■

• 7 фагов, активных против бактерий {«доз ц.пог^глз.-! '

1!Рг.гй«зезЛ . . ’ . •• : ’ ;

.3, ’Изученные фаги’морганеля’н прсвадвнцай, различается внутри кагдо.Я группы по рсноашк биологически: "свойствам. .

Беду нее таксономическое.значение для разграничения фагов' .

крргачелд и провйдеиций и»езт онтигедаие свойства, пор- • •

фологая фагоанх частиц, териочувствительность, ' .

4,. Фаги моргенелл обладаэт сходной морфологией ц '!

относятся к морфологической группе ,В1. Фвги пррэидекцчя относятся, преимущественно' к кор^сЛогкческоГ! группе С2. ’’ Однако, 2 из 7 выделенных фагов провкенцкй отнесены, к' группе В1, НО шест ' ГОЛОВГ.у бОЯЬПНХ резмеров, ’’ ’

5. Установлена высокая видовая.’специфичность фагов морганёлл и проввденций, Они лкзирувт ,’лиль штамнк :

одноименного вида к не проявляют актынюсти против культур других родов семейства -Йй;вгоЬио1:огЛ&слае- ’, что позволяет использовать их при идентификации етих бактерий..

6. 5-йга рк-»дцч!»'-гс:' (иг лу собоЗ по спсг.тру

доДстаая. 1аги лцзидоат 46,:$ таймов

ц^о^глИ , и 1&ги ?1'о’/1'1едо1а - Й,0# ататюд

Г'г.-сЬ'С^аг!.

7. Среди изученных .|аг«з о-гобраии 5 ?ипоьих ^агов

• прсишишцаЯ и й -ютогих '1ага аоргаиелл, с поиоам» кагорах прозз4е:т типпровашм 48,С* таимо®-Рг,гог1:^авг1 и ;:5Д? ита.чков Ц„."ог-й ;о11 , Культура моргаиелл и

празадеицца цогут бд-хь |-азЯ8«еад на фагоЗари^гги на осно-и&а.ш чуеотеитолиюст к итоги* }зг<з;/4 чго могго* бигь »гсй'.’лг>гсза«{» дзя .'Зкутраг.язоззго гяянрвзягнм.

■ - 22 -

» Список работ, опубликованных по тшо диссертации.

1. Тиоязависпмие гемолизины у условно-патогенных энтеробактерий /Габрилович И.М., Еозков В.Б., Гайрабекоэ Р.Х.» Лотиэъ К.Ю., йкуиекко О.С./, - // 2-я Всессазная конференция "■ Бактериальные токсины". - риала,Латвия,

1989. - С,24. .

2. 0 некоторых свойствах иорганелд и провнденцкй // Теэи-сы объединенной научной КОНферОНЦІ!!! молодых у чеках, специалистов и студентов " -Медицинская наука - практическом; здравоохранению". - Махачкала,І9ІО,- C.3SS.

3. Виделєниэ и некоторые свойства бактериофагов иорганелд

. // Бактериофаги услсвно-патогешшх «якроорганизмов. - '

Нальчик, IS90. - С.82-84.

4. Исследование факторов патогонности некоторых представителей эигеробактернй /Габрилович 1U5., Еозисв d.B., Гапрабеков Р.Х., Жугова Т.Ч., Лотшза КНагоов Б.С., Хакеаева Т.А., Якузенко О .С./. - // Актуальний вопросы .

' профилактики инфекционных заболевціай а охрена шевнеа средн. - Душанбе, 1991. - -кн. I. - С.56-58. .

5. Биологические свойства норганелл и провидевдий // Актуальнее вопроси инфекционной патологии, - Нальчик,

1993. - С.36-42. . :

6. Фактори патогенности зкгеробактеряй я их виявление . .

/Габрилович Й.Н., Еугова Т.Ч., Хакевева Т.А., Якуиеико О.С..Гойрабсков Р.Х., Лотиев K.L., Еозкеа В.Б./. - .

// Материалы сбилейной конференции, посвясенноЯ 25-де-тис медицинского факультета, - Нальчик, 1993. - С,3<?.

7„ Плазиігдннй состав ДНК норганелл н провиденцкй /Накола

' Л.В./, - // Материалы юбилейной конференции, посвящен-' ной 25-летш-медицинского факультета. - Нальчик,

: IS93, - С. 4бт47^ . V . ■ ' . .