Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

BACILLUS SUBTILIS штам 945 как основа биопрепарата антиклебсiэльозноi дii

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "BACILLUS SUBTILIS штам 945 как основа биопрепарата антиклебсiэльозноi дii"

MiHÍCTCpCTSO охорони здороа'й УкраГкя КйТвський наукопо-досл1'дний ¡нститут ешдемюлопТ i шфекцшних хвороб ím. Л. В. Громашевського

'г Б од

На правах рукопису

БОЙКО Над1я Володимир1Вна

УДК 579.852.11:615.33

BACILLUS SUBTILIS ШТАМ 945 ЯК ОСНОВА БЮ ПРЕПАРАТУ АНТИКЛЕБС1€ЛЬОЗНО! ДП

03.00.07 — мшробюлопя

Автореферат дисертаци на здобуття вченого ступени кандидата бюлоп'чних наук

КиТв 1994

Робота виконана в Ужгородському державному ушверситет! та 1нститут{ мшробюлогН { в{русологп АН УкраГни ¡м. Д. К. Заболотного.

Науковий кер1вник: кандидат медичних наук, доцент ТУРЯНИЦЯ А. I.

/

Науковий консультант: доктор медичних наук, пров1дннй науковий сшвроб1тник Р€ЗН1К С. Р.

Офщ1йн1 опоненти: доктор медичних наук, старший

науковий сшвроб1тник ЛУКАЧ I. Г.,

Провщна оргашзащя: Терношльський медичний 1нститут 1м. академжа I. Я. Горбачевського.

на засщанш спещал1зовано1 ради Д 088.04.01 при Кшвському НД1 епщемюлоги та шфекцшних хвороб за адресою:

252038 КиТв 38, Узв|"з Протаав Яр. 4.

3 дисертащею можна ознайомитнся в б1блютещ шституту.

кандидат медичних наук, доцент ВСШЦЕХОВСЬКИЙ В. Г.

Г0ДИН1

Автереферат розкланий «■

, 199 ^

Р-

Вченпй секретар спешал1зовано! ради, кандидат медичних наук

Л. С. КРАСЮК

Актуальн10ть теми. Проблема клебохельознох пфекцхх в актуально» як для медичнох М1кроб1одогп, так i для охльсысого гооподаротва. У модицинх клабохели вхдомх як збудники рхзнях захворювань, що ви-клшсаюгь ураження BepxHix дихалъних шляххв, цугунково-кишкового тракту людей та in. Осташпм часом зроола кхлькхсть публ1кац1й, що овхд-чать про значну роль цих мхкроорганхзмхз у naTcmoriï людей, при за-хворюваннлх рхзнюс, у тому чиол1 i схльоькогг \чодароьких тварин, в етхологх1 хвороб комах, якл часто мають вэдлмве гооподароькэ значения ( С'ельникова О.П. ,1993; Полищуя Е.И., 1985; Еондаренко В.М., Яблочков А.Л., 1987; Авдеева Л.В., 1991; Бовтун Г.Ф., 1936; Кориков П.Н., 1990; Gillian :.:Urtha, '.'orton liov-aixi L., 1974). Особлива оприйнятлквхсть до клебсхельозхв вхдм1чена у новонароджених (Бернасовокая В.П. и др., 198?). Ваклив1сть yieï проблема для ветеринар! ï обумовлена вхдомостями про надто високий процент падеду поголхв'я молодняка велико'1 рогато'1 худоби вхд гоотрих ентеритхв, викликаких умовно патогенною шкрофлорою, в тому чиолх i клебохелами.

Засоби захиоту В1д збудникхв клебохельознох 1нфекцгх, що е у розпорядженнх медицини i ветеринары, недостатньо ефективнх (Йойриш А.Н. я др., 1987; v.'cßenvooyt j., 19C9: Авдеева Л.В., 1991).

У зв'язку з цим теоретично i практично актуальною е розробка препарат is антиклебохельознох ди. Все б1льше визнання в практицх одержус напрямок podiT по створенню вколот1чно чистих бхопрепаратхв Ï3 живих м1щюбних культур з метою профилактики i л1кування р1эних хвороб лвдини, тварин i рослин (Гончарова Г.И. и др.-, 1982,1938,196W, Смирнов В.В. и др., 1985,1988; Резник и др., 1984,1987,1988; Калхяшч O.G. и др., 1988). Особливо широкий Д1апазон практичного викориотання проб1отикхв з бактерхй роду Beciilua (Корх В.О., 1985; Вьюнихдеая В.А., 1988; Никитенко В.И. и др., 1991; Резник O.P. и др., 1992; iîrairnov V.V., Reznik 3.R., 1938; Reznlk S.R., 1990). 3 yonixoM застосовуються препарати з. ixieï групи Mii<poopraHi3MiB для Л1кування дисбактерхозу у людей (Никитенко В.И., 1991); для профх-лактики i Tepaniï при гострих шлунково-юшкових захворюваннях молодняка о1льськогосподарськ11Х ТЕарин (Топчий М.К., 1979; Смирнов В.В. и др., -1985; Сивере B.C. и др., 1989); для боротьби з пл1снявш1ям корм1в (Харчанко С.П. и др., 1980); для п1дввдення охоронностх ово-4ÏB i фруктхв (Резник С.Р., Лапа A.M., 1990; ?uaey i., wilaon 1984)-; для полхпшення якост1 xop.'.iia (Хохрин C.Ii., 1981); для захиоту рослин вхд хвороб (Калекич О.С. и др., 1988; Вьюняхс^ая В.А., 1991). Водночао не запропонозапо годного препарату для профхлактикп

- г -

I лхкування клебслельозхв.

Таким чином, назапаречна важлив1оть роз ройки виоокоефектишшх оио(! ,бхв боротьби 1з збудниками клебохельозхв, що характеризуются зда.,!татю вшишкати захворювання у людини, тварин I комах, а такох дооыд уопхишого створення б1опрвпарат1Б хз спороутворюючих аароб-;шх бактар!й робить пзрснектлвними вквчення можливоотей викориотан-кя бактер1й роду ваоШив як основи б1опрапарату антиклебо1ельозно1 ДН.

Мета 1 задач! доол1дд8ння.

Мета ц1ех роботи - -визначзння можливост! використання бактер!й роду Василии як засобу боротьби 13 збудниками клебо1ельозно1 1н~ • $екцп у людей, охльськогосподарсышх тварин I комах.

Для доаягвення нам1чено1 мети були поставлен! так1 завдання:

1. Здхйонити окринхнг активних антагонхотхв патогенних клабохел оервд бактвр1й роду ваеШио.

2. Вивчитн б1олог1Ч}и властивост1 вшбраного штаму - найбыып перспективного для створення препарату антиклебспельознох дН.

!3. З'яоувати особливост! перебхгу модально! клабо1ельознох хнфекци у лабораторних тварин I коыах.

4. Вазначити ефективвхоть превентивно"! I тврапевтично! ди досл1джу-ваного биопрепарату на оонов1 ввдбраного штаму на тваринах з екопериыентальшш клебсхельозом.

Ь. Вказати ооновн! моэвдвд механ!зми проф1лактично1 1 л1кувально5! д1х розробленого препарату -з бактерхй роду ВаеШио.

Нздкова новизна робота. Датальиий с крин хнг бактер1й роду щ.оН1ив, хзольованих з органхзад здорових схльоькогооподарських тварин дозволив вид1лити культуру в.ииъ Ш1н 945, що характеризуемся виооким отупенем виб1рковох хвг1буючох дп отооовно до музайних I вицпюних штш.ав патогенних клебо1ел. Вивчення б10Л0Г1чних влаоти-воитой штаму в-виМШо 945 дозволило доваоти його неишдлив1оть № ['1зш1х видхв тварин I комах та здхйонити депонування у Воаооюз-Н1й колени: промислових мхкроорган1змхв ВВД1 Генетика (колакц1йний нтир В--5225), що дав можливхоть запропонувати названий штам як оо-|(ону бЬпренарату анмклебс1ельозно1 дп.

Виерша иродемонстрована ефантивнхоть профилактики иксперимен-тпЧ'Н киебохельоянох хнфокцп шляхом понореднього перорального або шф<:.итврального введения биопрепарату з в.виЪШАв 945 (автор-

оькв ов1доцтво № 1779692 про винаххд Смирнова В.В., Туряницх A.I., Бойко Н.В., Вьюницькох В.О. "Штамм бактерий Hacillua ouhtllis -антагониот возбудителей клебсиеллезэв" вхд 8.08.1992 р.).

З'яоопано, що антиклебс1ельозна дхя B.suMiiie 945 визначаетьол noMipHOB адгез1ею бацил у слизових оболонках кишечника, продукцхвю антиохотичних рачовин, посиленням фагоцитарно! активноот1 нейтрофх-лхв i моноцитiB кровi тварин, наявнхотю антитонсичних влаотивоотей,

Улерше показано, що профйактичний ефект досягаетьоя введениям не тхльки життездатпих, ала й 1нактцвованих УФ випромхшованням нлх-тин культури Ii.öubtilla 945.

3 результатi доол1джень уперше виявлано, що патоген^ для лю-дини i тварин види клеб01ел (Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oaaenae, K-rhinoocleromatla) здатнх виюшкати патолохччний процео з pi3HHX, В тому числх i корионих, комах (Moraeatra braosicao, Leptinotarsa decemlincata, Epheatia küecimiella, LyraaBtria dispar, Antiieraea pemyi). Визначвно, що патогенез эахворювань представни-kib клаоу inseota обумовлений антилхзоцимними i ххтинол£тичними властивоотями культур, що вивчалиоя.

Влврше вотановлено деякх законом1рностх nepeöiry експеримзн-тальнох нлебохельознох хифекцы у тварин та комах. Превентивна i терапевгична Д1я B.eubtllia945 выявлена при вивченнх клебохельезно? 1Нфекц1х у комах на приклад1 дубового тонкопряду. Ввдпчено наяв-Hioib стимулюючого впливу в.cub til is штам 945 на роз-виток даного виду комах, що використовуетьоя в гослодарстзх для одержання nimjoi продукцхх - шонково! нитки.

Виявлено, що доелвдэдванх штшли B.suotilis е активними продуцентами лхзоцкму.

Практична значимость та еллхи реалхзацхх роботи. На ооновх воебхчного вивчення бгологхчних властивоотай B.subtilia штаму 945 доведено принципову ыожливхоть отворення б1опрапарату, призначеноги для боротьби з клвбохельозшш у людей, оьяь-оькогосподарськях тварин i корионих комах (авгорське свхдоцтво № 1779692 про винах хд Омирнова В.В., Турянивд A.I., Бойко Н.В., Выоницьког В.О. "Штамм . бактерий Bacillus subtilis - антагонист возбудителей клебсиеллезон" вхд 8.08.1992 р.).

Матерхали дослхдкень можуть бути викориотан1 в окладеннх проекту методики деркавних випробувань, техи1чних умов та наотанови по застосуваннюпрепарату та для оформления i предотавлення документа^* в ДВДК1 ветеринарних препарат iB i кормових добавок та Фармаколохич-riiitt Комитет МОЗ Украхнп.

Продемонотроваио перспективы ierb доолхджшшя та эаотооувшшя B.BubtlliQ 945 як заообу стимуляц11 росту i ладвищення продуктивном! шовкоутворення у дубового шовкопряду.

Апробацхя роботи. Матерхали диоертаци докладеих i обговорен! я a JE з'хздх 4m<po6ioJoriB в Чернхвцях (Чернхвцх-Кигв, 1989), з'хздх ¡нхомологхв yj<paimi у Канеьх (Кихв, 1987), Воесоазнхй конфоронцх! "Микробиологические и биотохнологические основы интенсификации ■ раогеиизводства и кормопроизводства" (Алма-Ата, 1990), науково-тех-лi4iJiй обласн1й ковференцН "Наука - производству" (Ужгород, 1988); пред сдавленi на мхкнародному 3'13Д1 фггопатологхв (Будапешт, 1989).

Публхкацхя результатхв досдхддвнь. За матерхалами дисертацхг опублнювано 12 друкованих poöiT:- 4 статт! республ1каноького видав-нидава та 8 тез доповхдей. Отримано авторське сввдоцтво В 1779692 про виыаххд "Штамм бактерий Bacillua oubtiiia - антагонист возбудителей клебсиеллезов?

Структура i об'ем робота. Дисертидхя складаеться 31 вотупу, огляду лиератури (2 глази), матер1ал1в i матодхв дослхджень (I глава), екопериментально! частшш, то вкяючае 5 глав результат1в доолдаень та ix обговороння, висновкхв i списку Л1тератури з 150 вхтчизияних та 95 закордонних джерал. Об'еы дцсертацЛ з таблицами, малинками, вказ1вником лхтератури стаиовить 156 сторхнок мааинопио-иого тексту. РоЬота хлюстрована 33 таблицяш i 20 малинками.

ЗАГАЛЪНА ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ

У вотуп! обгрунтоваио иеобххднхоть пошуку антиклебс1ельозного .препарату оеред бактор1й роду Eaoiiiuo.

В оглядх л Герату ри приведенi даиг щодо втхологхчпох рол1 клебохсл в патологхх лзодини, тварин i комах та вказано на иеефектив-нхать хонуючих методхв профилактики та лхкування клебсхельоз1в. В систематичному порядку дана характеристика dionpenapaxiB з бактерхй роду Baoillua _ aiiTaroiiicTiB збудншив бактерхалышх хнфекцхй.

Глава 3, Матерхали i метода. ■ ■ ■

БактерШ повод 500 ыузеШшх i клтчних культур к.pneumoniae, к.о*аеп*е, к. xfainoecUromatio (типов! штами - Державина НД1 отан-дартпзацН i контролю медичних i бхологхчних препаратib, клШчш -музей Укгородоького державного унхварситету i Шноького ыедичного хнотмуту); ноперадньо вхдхбрши високоактивпi отооовно клебо1оя

штата ÖaKTspiü рода Baoillua (колекия 1нотитуту ííiKpoJianorii i 31р;/солог1х АН Украпш, бмыне I00Q культур).

Об'екти досл!джень:

Тваршш: безпородо та imui лхнхй СМ, сзк х кролi,

щурх ... ...

Комахи рсдхв Lepiolopthera» bymeniria dlapar, M«s*ntr» ЪгаявДсйв, Antheraea penayi; Homoptheras "phestia küech^iell a¡ Coleopthera'. Leptinoteíraa decenlijiBata.

Визначали амЪюлтгап i покголхтичнх (Рухлядава А.П., ¡.960, 1968), протеол¿тичиi (Логинова Л.Г., 1965>, цалнлозол1тичн1 (Родионова.H.A., 1966,1967), лшолхтячнх (ota Y., 1966) влаотивоотх окра-МИХ ШТШЛХВ бактер1й роду Bacillus.'

AíiTaroHicTirmi влаотивоотх спорових'культур до клей о ¿ел визначали за М.С.бгоровим (1986), методом оумхсного культивування в рхд-кому поживному оередовищх Гаузе JS 2 ("Мегодячеокно рекомендации...", Х983) i rpyHTi (Омельянац Т.Г., Процешсо A.A., 1906). Л1зоцимну ак~ тивнхоть культур в. subtuis доолхджували за О.В.Бухарпшм (1981), гемолиичну - по наявноот1 зон гемолхэу на хфов'яному arapi з вико-риотанням еритроцитхв людини, ы.wai, барана, кроля. Диаоцхащю культурна •eubtiliв 945 встановлювали, пор1БКюэчи морфолог1чвх влаоти-bootí BapiaHTÍB на рхзних пожшших середовищах. Вивчали формувалня отхйкоотi до культури д. 0ubtillo 945, у итадйв K.pneuaoniae (Вьюницкая В.А., 1988). Вхрулантнхоть, токончнхоть i токсигенн1сть B.eubtilis 945 дослхдаували за методом M.O.Biprep (1992). Введения бактер1альких культур гваринам здхйонювали перорально, парентерально, внутр1вэшю (Дабинская A.C., 1978) та хнтрацаребрально (Сороку-лоза И.Б.,• 1984). Отриманх дан i аналхэувала вхдповхдко до 1нструк-тявних матерхалхв по ouíhuí патогенное?i мхкробнах культур, викла-дених у "Методических указаниях по гигиеничвокой оценке микробных оредств" (1982). Вкдхлення антибхо.тзтао! речовхши здхйснювали за ■ модифлкованощ В.В.Смирновым, В.М.Васильсзим методикою (1987).

Ентокопатоганнх влаотивоотх клзбохел оцхнювали величиною тех-HÍ4HOX ефективноотх ix дхх з ^опр^вкою -на смерти хоть комах у копт-роях за формулою: M-I00« (-1 - к4) да ?1 i р2 - к1лькхоть оообин до i- пхеля обробки cycneHsisK) (?актвр1ально1 кудьтури у доолхдх, X-¡ i Кг - KMbKioib комах у конгродх.- ■ ■

• Еуоениць рхэного BÍKy хнфхкували клебохеламя шляхом згодовуваа ня хм лиотя кормсвох рослини, хнодульованого оуопвнзхею бактвр1Й з титром I млрд.м!1ф.кл./1 мл; Визначали хтшолиичну -(Чигалейчик А. Г,.

1976) та ангаизоцимну (Byxapiii О.В., 1974) активность культур

К»; "íeu3¡o»ioe, к.огаепао, K.iMnoocloroKütia. АдгвЗИВНХ ВЛаоТНВООГХ

КЗ Л: ур в. culi tille 945 i K.pncuaonlao 3785 встановлювали по

В.I.¿pimío (1966), а тахож з допомогою вивчання заозленосг1 bítomíb

к "¡шового тракту милей. ....

Профхлактичну (за 24 годшш до введения К.pncumaniво 3785) i лхкувальну (через 24 годшш ихсля хнф1кувания шкпей) дш в. eubtUie 945 вивчали в уковах експериАШталвного кясб'Лелъознога оапоиоу. Доза 1Н$екту при паронтер&щлюму cuocodí i ведения дор1внювала LDjq, LD50. IDao. LD100. 1ДО становшю вхдповадно j.,67-I06; 2,78.10®; 4.44.I05; 5,56-10^клхтин на I кг ваги. Заяеннхоть ефоктивиоот1 превентивно! i терапевтично! дН препарату В1д Кого дози вотановлювали, викориотозуючи вздаовхдно концвнтраци суспеызхй культури В.cubtiiio 945 - 10°; 5-Ю6; 1,0-5,0.-Ю7; 1,0-5,0.Ю8кл./кг ваги. 3 метою максимально! сталдаргизацхх в доолвдах використовували íio$i-л1зоваих культури s.wWills 945 та x.pncuaoniae 3785.

Антитоксичну дха препарату з Б.виЫИХв 945 вивчали in viro 110 ввдношенню до ендо- s.typMi сС-окзотоксину З.шгсигз, порхвнвача XÍ з ефзктивнктю ком i золу та вхлозену, що вхдомх як 1Ндуктора хит ^рфврону, яким влаотива токсикейтралхзуюча ефоктивнхоть (•Ершусь Е.В., 1991).

Ьлвчали вплив B.eubtuis 945 на показники периферхШюх кровi, функцхю нирок (Козловская Л.В., ¡.Мартынова М,А., 1375) та лечишьна стан нормофлори мишой (Петровская В.Г., Марко О.П., 1976). Наявнхсть B-cubtiiie 945 у зразках кровх при внутривенному введший культура вотанокшовали за Краонопевцавоа ("Методичаокие рекомендация...", 1983). йагоцитарну актншисть лейкоццтхв кровх тваран, цо одердуваяи b.auUliiu 945 визначали згвдно bíaomhx методик (Братусь Е.В., 1991). 1нактивован1 юпткни в-cubtiilo 945 отринувших шляхом опромхнення, використовуючи джерело Уй-промен1в "f.redicor-Q-1^5". Екояозицхя сга-новила 60 хв.

Доя одержання протиклебс1ельознсго óionpenapaxy на oohobí в»Bubtiiis 945 заотооовували panime розроблену технологхю (Вьюниц-коя В.А., 1986).

Статиотичну обробку результатíb експериментíb проводили хз заотооуванням вхдомих у Teopii малих вабipoK формул (Бейли.Н.,- 1962; Овпвтлиов Д., 1973; Ра4алее-Ланарка Э.Э.,- Николаев В.Г., 1974).

Глава 4. Скринхнг штамхв бактерп! роду Baclllun - активних антагон1огхв_гумовно патогетшх кл1нгюта i иузейвих штамм клеботдд^.

ГГочатковий зтап наших доелхдженъ заключазся в Biflöopi шташв аеробних спороутворшчих бактер1й, що характерязувались иаявнхотю виооковиражвлох протинлебсхельозно1 активности Максимальна кхль-KioTb aBTaroHicTiB клебохел вносилась до видув.subtiliя . Окремх штамп бацил, так г як 924,- 945, 1106, виявлял." високий cTyniHb антагонистично? Д11 на вох дослхдауваих вида бактер1й роду Klebsiella (Табл. I). B-aubtiliamra/.i S45 володхв високою хнтхбуючо» активнхстю отооовно клвбохел шгевмонХ1, затримуючя picT 83 зхдсотеи yoix еэя-тих тест-культур. Пригахчення роотук.рпеиссгДао спостерхгали як у" дослхдах, провадених методом вадсроченого антагонхзму, так i при оушсному культивуваш! i з в» sub tills 945 в pi#roiiy поживному оере-довищх. Антагмпстична дхя B.eubtilis 945 на к.pneumoniae 9785 була найбхльш результативною при вюйдних концентрацхях мхкроба-антаго-И1ота 5 i 50 млн.мЬф.кл.Д мл., тобто в умовах,- де його кхлыйсть була в десять раз is меншою, his концентрадхя тест-штаму, що дослхд-жувався. B-oubtllla 945 виявляв чхткий 1нг1буючий ефект щодо К.ршэшюп1ао3785 також при суьисноглу культивуванн1 в грунтх, що наближено вхдповхдае умовам природнього оередовища.

Констатуичи виявлену ст1йку антагон;гстичну протиклеб о iельозну дхю в>eubtiiis 945 noTpiöao вхдзначити, що вона перевищув гаку на тхяьки порхвняно 31 итаиами, дослхдаенши нами у продзох первинного окринхнгу, але й з культурами, що входять у склад вхдомих бхопрепа-paTiB - npoöioTHKiB медичного i ветеринарного призначення, таких як бактисубтил, бактерии - СЛ, БПС-44, слоробактерин, лактобактерин, колхбактерив, öiocnopiiH.

Встанозлена нами антиклебс¿ельозна Д1я штаму B.subtllia 945, що отабЪгьно проявляешься в рхзних умовах -експерименту була надставок» дальних досладжень, спрямованих на визначення можяивос?1 вико-

риотанвя даного штаму як оснози бхопрепарату.

Глава 5. Бхологхчн! влястявостх в. subtilis 945.

приведено дан1 про бхолопчнх властивоотх B.subtllia

945, з приворненням особливо х уваги до-його н^ахидливостх для мшфо-

орган13му. Показано, во даний штам характеризуемся тшовящ фхз1о-

логонЗхоххмгчнами ознаками, влаотивима для цього виду шкроорган1з-

!.'i,B. Необидно вхдзначити наявнхсть слабко1 дисовдацП вищавхсазанох

культури на ША та те.що ця ii риса не впливаз на р1вань пригнхчення

росту рхзних тест-культур. Деякх з вархантхв -sin в.subtilis 945

володхли гйыолхтичною активнхстю по вхдношенню до еритроцит1в барана

Тайлкця I

Антагонистична актиыпсть B.Eubtnia 945 до бактерхй роду Х1»ьв1«11в.

(зона гаяьмуваняя, ча)

21т а'-' 2p.cillus sub tills .......... Зояи . затрамка росту, y.H

К.pneumoniae - 150 ЩТаша [ R.rhinoscleromatis i - 80 ETajjibj К. ozaen

cjxado TsTo1' | чутливi,¡ВЙСОКО i . ¡чутлавх, i 21-25 |2ь i ввде ! слабо ! чутливх, j 15-20 . j чутяявх, j 21-25 1 ■ ! {BZCOKO 1 TOTJIHBi, J ¡2D i SRHej слабо ЧУТЛЕВХ, X5-20 . ¡чутдав1,j | 21-25' | ВИСОКО чттлнвх, 26 i виде

924 20,8+1,2 31120,6?) 24,9=1,8 30,I±2.9 42(20£) 50(33,3i) Г5,Г±Г,4 22(27,52) 23,7^0,6 3S(45£) 26,7tl,8 12(2 2%) I5,2±2,2 30(2255) 2Х,8±Г,6 48(3$,3£) 26.Oil.2 8(5',ЗД

945 20,2=1,9 хгсевк) 25,Oil,9 31,3=1,9 60(53,3%) 33(22£) 20,8il,2 12(1555) 24,4±I,8 32,3=2,7 33(48,§5) 25(31,3;?) 20,0=1.8 22.0^1,8 31(22,?;?) 63(46,3;?) 30,2±I,2 30(22,$)

1106 17,8*1,6 60(402) 23,Til.6 28,8^3.2 43(29,6Й17(11,32) 20,4±2,6 23,9^3,3 30,2±0,9 21(26,2%) 38(47,5%) 16(202) 18,1^2,2 23,6±2,5 28(20,5^) 63(46,3^) 28,5±I,5 24(I7,6JS)

IP-5832 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Псш-ит'са: 7 чиселышку - зова затримни росту бактерхй роду Klebsiella у цм; у зкаменнлку - абсолютна чиоло пгашв дослхдзуванкх клебсхел.

х кроля. Прота 1нтрацеребральне введения оуопензхй вар1аитхв в.виМШз 945 в дозах 5-10-20 шшлакр.кл./мищу не виклшсало сш.што-мхв захворювань тварин.

Встановлена стабхлыисть антагонхстичнох' дхх даного штаму при вивченн1 формування ст1йкост1 до нього клабохсл.- Так, при 12-15 па-оажах тест-культур к.рпешяоШао в присутностх в.пиМШа 945 практично не спостерхгалось оелеюдонування резистентних форм мпфо-оргашзшв.

Дооладження впливу в.оиъино 945 на орган 1зм р1эних видхв теплокровних показало, що внутрхвенна 1Нокуляц1я крояям суопензи бактер1й у кхлькоот1 2-10^ никробних клхтин кожному на выявила у них ознак патологхх протягом 30-ти денного спостервження за твари-нами. Короткочасна ненапружена бактергемхя рееструваяаоъ у двох хз ;о"'ирьох крол1в зразу п!сля 1нокуляцП мхкроорганхзм1в;через 12 год. здхйонювалась повна 'И елхмпгацхя: бактерхх не були виявленх 111 у пробах кров1 тварин, нх в гомогенатах орган1В. Багатократно (протягом 15 дн1в) пероральне введения суспензП культури доолхдауваного и!"?аму кролям 1 щурам титром 5 млрд.мхнр.кл.Д мл. та мишаы титром 10^ мЬф.кл./1 ли. не виявило Уютного впливу на покаэинки пери-фврхйнох кров1 крол1в, функцшвальний стан печ1нки 1 нирок вдрхв та отан нормальноI (.икрсфюри мишей.

Парентеральне I пероральне введения живо!, вбитох в.ецМШа 945 та II культуралыюх рхдини не викликало видимих змхн внутршпх орган!в мишей. Згвдю методичних вказ1вок МОЗ СРСР, Головного сан.-еп1д. управления "Постановка исследований..." (1983) доолвдяу-ваний штач вхднесено до 4 класу, тобто, до .\икрооргашзм1в, що практично не виявляють в1рулевт1п, токсичнх г токсиганн1 влаотн-вость Вказахи вище характеристики даного штаму разом з його висо-ков антиклебсхельозною активнхстю дозволили депонувати в.аиМШа 945 у Всесоюзнхй колекци прошолових мхкроорганхзмхв ВНД1 Генетика та присвой йому колекхцйняй номер В-5225.

Виявлено стимулюкгай вплив в.ваЬШ1а 945 на розвиток промисло-во важливого виду комах - дубового шовкопряду .(лд-июгаеа регпу!).

Глава 6. Оооблизоотх модельнох клебохельознох хкфекцП у дшшакрявних I комах;.

Зберхгання культури к.рпеииоп1ае 3785 у лхофтзовансму ствш оупроводкувалооь пхдвищенням хх патогенноотх. У дослхдпх викориото-вувалп стабыып щодо бхологхчвох активное?! л^офхлЬглуо'х эразки 1нфекту. Вотановлена залежнхоть клпично! картшш ьа:."-! >»№«>.;

ВХД доз и K-pueuraoniae 3785.

При введеши ldjq i Lc^o хнфакту iuiini4>ii прояви аахБорювашщ роеструвалксь лхсля дооить тривалох тщйедП,- прцчому окмптоматоло-гхя патологхчнох'о процесу в цъому вшадвд була бхльш р1зноманшшх> (збудження, единам1я, дхарая), a nepe6ir захворювання - пролонгова-ним. Заотооування LDeo х-ьв100 к.pneumoniae 3785 приводило до ювэдко-го розвитку сепсису. Бактер1олог1чш дослдаення гомогепатхв органхв мтпей, Ь1$1кованюс рхзниыи дозами клебохел, показали, що р!знкця у кяЪичному перебхгу септкчного процвсу певною MipoB пояонюеться iHrsHGHBHioTio flHCHMinaaii збудаика. Так, виявлено, що через 1-2 до-би пхсля парентерального 1нф1кування к.рпеикоШае 3785 виохвалаоь в кхлькостях I05-I07 КУО is паренкаыатозних органхв: легень, оеле-змки, печ1нки при bDao j ы>100.

Таким •чином, дози к.pneumoniae ldjq i Lb50 були найб1льш при-датн i для вивчення профхлактичнох i терапввтичнох Д1 i дослш;уьано1 опорово! культури.

^шчаюх^актф дхх клебо!ел на представникхв клаоу Inoaeta. Виявлено ентомопатогеннх властивостх у К.pneumoniae, К.оваеаае, K.tfaiEoocleromatls по В1ДН0Ш9НШ) до каххустянох оовки (Kameotra br&aolcao), непарного шовкопряду (Lyaantiia dlepar), мельнично! В0ГНХВКИ (Epheotia kUechnlella), колорадського яука (Leptlnotarsa deoeallneata), дубового ШОВКОПряДУ < Antheraea pemyl) .

Вотановлена загальна закономхрнхсть хноектшхддно1 дй' хлебохсл на вех використши в досладах вида комах: -найбхлыа чутливими до • впливу хнфекту виявилися особини ыолодшого вхку. У Boix випадках захворювання nepediiuro по типу бактер1ального оепсиоу, цо прояв-лявоя в оимптомах ушкодження шлунково-кишкового тракту комах. Окр in прямо! дхх бактерх! роду Klebsiella спричиняли тератогенний офект -дорушеаня в будовг комах при пареходх 'ix з однхсх отадхх метаморфозу в шоу.

• В залеяшоотх вхд В1ку комах та виду бактархй величина технхчнох ефективноотх коливалась В1д 50 до 100 вадсоткхв.- Мехаихзм ептоао-патогеннох дхх бактерхй роду Klebsiella очевидно обумовлений наяв-нхстю х1Тинол1тичнох та антилхзоцш.шох активности Значка кхлькхоть штамхв клзбсхея 1нактивувала фермент при його виооких концентрациях в оередовищх - до 30 мкг /мл. включаю.

Показана здатнхсть окремих штам1в цього роду продуктам ххтя-назу в радкому та агаризовааому середови^ах з нагившш тр колохдш«:

ХГГИНОЫ. ■

Таким чином, в доаидах на комахах продемонстрована ентомопато-геваа дхя досдхяжува¡их г.икроорганхзмхв, що доводить нпявнхсть полх-бхотрофнюс власгтивоотей бактерхй роду "1 еЬэ1.е11с.

Глава 7. Профдладтшша I лхкувальна дхя з.ЕцьгЩд 945 в анопд-риментах на тваркнех з клебс1ельозно!о ¿нфекшею.

Вараквна спецкф1чна аэтивнхсть х полна нежхдллшеть культура В.сиМШв 945 для теплокровных 1 ко:,:ах послужили пхдставою для проведения детального влвчення профхлактично! 1 лхкузачьнох дП иоделх клебсхйльознох хнфенцхь Одержано перекокливх свхдчення безперочно высокого ирофхлактичиого ефекту препарату (91-100^) х Ц1лкс.м задовхльного лхкувальиого (близько 70$). Вкявлеко эаденнхог'ъ частота захвораванкя г загкбелх дослвдннх тварин вхд доза 1Нфеоту х 'оосбу Ьюкуляхш миией оуспеизхею бактерий з.гиМШв 9^5.

Вхдшчено, що профыактнчна дхя препарату була бхльа вяоокою арл парентеральному способ! введения, тод1 як максимальный доотов1р~ няй лхкувальний ефакт споотерхгати при заотооуиаши а.зиЬ-Щ-Хе 9^5 пороралызо.

Попередня хнокуляцхя хнактивоваиих гайтин в.лиЬЩ1а эабез-лечувала дещо менший, але суттевий стугйнь захисту вхд клебсхельозпого сепсису до того, що досжгався впливбм яивих кйтин цього штаму.

Встановлена у числвнних екслераментах профхлактдчна I л1куваль-на дхя оуопонз1х жнвих та мактивованих юйтин з.виЪШЛв 9^5 стооов-но збудника нлвбохвльсзнох -хнфекцй' доводила можлив1оть отворення б1опрепарату опрямовано! дхг.

З'яоовано д1апазон оптимальних доз в.виъш1о 9^5 №1 профилактики х лхкувшшя клебохельоэнох 1нфакцх1. Показано, що зменшашш доза препарату з 5-Ю8 до 1-10^ юн тин/кг ваги супроводжувалаоь липа незнаниям понижениям його дховостх, тобто на споогери'али прямопропорц1йно1 залеяшоотх уопхху профилактики И!фекц11 зхд титру суслзнзхх опоровох бактерхальноИ культура. Так, я'ятикратна -знижен-ня дози в.зиЬШ1а 945 при парентеральному х пероральному способ х введения препарату вихликало змешення схоронноот1 особин до 5 вхд-со'тв.

Отае, ефективнх дози культури в.subtllia 945 рхвнх 5-10 -2,5>10 КУО/кг ваги тварин.

Суттевим доповненням антиюшбохельозяо: Д11 в.аимша 945 вважали валив данох культури на перебхг клебо1еяьозного сепсису у дубового шовкопряду. Вадсоток охоронноот1 оообин в результат! засто-оувшшя в-еиЪгша 94-5 ■ дор1внював 80-100.

Глава 8. Мехашзми ггросялактичнох та лхкувалыюЁ jii.

Результата проведених дослхджень давали гидставу вважати, що аптиклебсхельозна дхя B.eubtilis 945 в досладах на тваринах визка-чалась рядом факторхв та носила неодцозначний характер. Так, в експе-римоктах на мишах показано, що пхсля однократного перорального введения B.eubtiiis 945 кл1тини Biei куль тури в значних кхлысостях (ТО3-10й КУО/г) знаходили в pisirnx ввдхлах кишечника до 7 дня вхшь чно. Б1лъше того, виявлена вомхрна адгез1я бацпл, показшгк ях:ох скла-дав 1,8+ 0,3.

Оскхльки киттездана клхтини в. subtilio 945 характеризува-лись виключно високою ант:чгон1стичною активнхстю щодо клсбсхел, можна припустити, що однхснз з пров1даих ланок механхзму хх дхг е прямай хк-гхбуючий вплив на к.pneumoniae. яка лише частково пояснюеться вродук-цтею антибхотичних субстанцхй. Так, встановлено, що саецифхчна активность антибхотика-сирця в. aubtiiis 945 вхдносно невеляка - fioro ш-нхмальна пригзичуюча доза складала 150 мг. Розрахунковг дата показали, шо дл; створення в opraniawi тварини ефективног концентрацхг препарату потр1бно використання такох. його К1лькост1, яка обчислветься досяти-ми долями грама, тобто значно перевицуе ХЯ)^0 . Отже, вхдсутихсть у ви-д1леного антиб1отика-сирцю необххдного штервалу mis терапэвтичшат i токспчниш дозами робить номожливим його використання язе см.гастхй-ного эасобу профилактики i лхкувакня клвбсхельозно! хнф&кци.

Неабияке значешш в сумарнощу л1кувально-дроф1лз1;тачноку ефектх, що вгаслккався введениям Б> subtiiis945 мае властивхсть вдлх культура р1зко посилювати захкеш peaMiii макрооргашзму. Дослхдаеши, проведен! на кролях у дошащщ, показали icTorae збхльшешм фагоцятарво5с активное« форменних елементхв кровх. НСТ-тест моноцктхв, вкзначений через три дай пхеля п'ятиденного курсу перорального введения суепен-3ii клхтин aubtiiis 945 у дозах 2'Кг°.КУ0, BHpie на 2-3%, иейт-рсф1Л1в - на 19$. Фагоцитарна число монохцшв i вейтрофШв у зазначэ-Hi строки становило 1,42 i 1,21 вадзовадно.

Нарештх, важлиьим елементом промислебс1ельозного ефекту е вста-повлена антитоксична дхя в»' eubtilia 945 п^и парентерально^ х павхть иероральному введешй суспензи з титром 10" китш/шпу. Так, при in-торвалх введения в.aubtiiis дл5 j ендотоксину s.typhi в 6 годан за-хист вхд дхх токсину, виражений вхдеоткем схорокноск тваркн, через добу складав бхля 50, через 7 дхб - блвзько 30. При штервалх 24 годи-Ю1 ачтитоксичтш ефект був б!льш чхтким (мал. I J За ступеней ефоктив-hocti K.Bubtiiia 945 виявляв б1льш штенсизну антитоисичву дхю, нхк рхлозоц, i май же такого сшлого рхБ1их,як камхзол.

Ви сновки.

1. У процеох 01финхнгу серед б1пьш як 1000 культур бацил, хзо-льоваиих 1з р1зних джерел, 1идхбрано штам В.виъиив 9^5:

- що характеризуется виооким ступеней мгхбування музейних X юи-¡ПЧЛНХ ШТаМХВ К.риеисоШае як В умовах В1ДОТРОЧ8!ЮГО шп'агоихзму, так 1 при сушеному культивуванн1 з тест-об'ектом;

.- що прихчичуе р1сг деяких умовно патогенних та патогенних м11фо-органхзмхв;

- що характбризуетьоя повною нешкддлив1стю для теплокровпкх (мшей, щур1в, кролхв) I комах

2. Вотановлен1 оообливоатх клпичного паребхгу ифешцйного иооцасу у лабораторних твари;, в залежноатх вгд 1нф1куючо:£ дози

К .1»еияоп1ае. ....

3. Вил алан I ентомопаг огвнн I влаотивоотх Оакторхй роду К1вЪе1еХ1 л.

4. Показано, що парентеральне х пероральне введения препарату в в.аиытв 94-5 эабеэпечуе виоокий профхлактичний (91,6-100^) га хстотний лхкувальний (30,6-71,2^) протиклебо1ельозний ефвкт у лабораторних тварин.

5. Встановлено, що пров1дними ланками механизму профхлактичнох х л1кувально1 Д11 препарату з в.виьгшв 9^5 в:

- виоока антагонистична дхя клхтин в. еиМШе 945 иодо патогенних клебсхел;

~ значив пхдвищення р1вия фагоцитарно! активноотх лейкоцхтхв кровI макроорганхзму; ...

- помхрна адгезхя шптин в.еиъгшв 9^5 «а олязовюс оболонках рхзних ввдхлхв травного тракту;

- продукц1Я антибштичних речовин в. виЪЪШв 9^5!

- антитокоичнх властивостх культури в.виЪЫНо 945.

6. Вотановлано профмактичну I терапевтичну дхю в.виМШв 9^5 в умовах клебохельоэнох «зфвкцН у комах.

7. Доведено перопективнхоть викориотання вхдхбраиого штаму

в. виЬШЛв 9'»5 (в. аиЫШв шш-5£25) як оонови протиклебохельозно-го Ошлрепарату.

Основа! результата диоартаци опубл1кован1 в таких роботах:

1. Изучение взаимоотношений между бактериями рода Klebuieiia и вредными насекомыми/Туряниця A.I., Бойко Н.В., Леготай Ы.В.// Ш съезд Укр. знтомологичеокох'о о-ва. Тез. докл. - Киев, 1987. - С.203.

2. Полибиотрофия бактерий рода Klebsiella /Туряниця A.I., Бойко Н.В./.' Микробиологический журнал, 1987. - Т.49. - # 4. - С.21-24.

3. Исследование дейотвия бактерий рода Klebsiella на некоторых вредных насекомых/Туряниця A.I., Бойко Н.В., Леготай М.В./Айикробио-логический дурнал, 1987. - Т.49. -№5. - С. 58-62.

4. Знтомопаторвнное дейотвие Klebsiella аегодеаеа на непарного шелкопряда/Туряниця A.I., Бойко Н.В., Боганич Ы.1.//Наука - производству: Тез. докл. - Ужгород, 1988. - С.170.

5. Применение препарата лейкоцитарного интерфе рона для оптимизации производства трихограммы/БоЙко Н.В., Туряииця A.I., Леготай Ы.В,// Там же. - С.171.

6. Антагонистическое действие культур Bacilluo aubtilis на бактерии рода Klebsiella /Бойко Н.В., Туряниця A.I., Попович О.В., Вьюницька В.0.//Микробиологический журнал, 1989. - Т.51. -

» I. - С.87-91.

7. Некоторые аспекты энтомопатогенного дейотвия бактерий рода Klebsiella /Туряниця A.I., Бойко Н.В.//УД съезд Укр. микробиологического о-ва: Тез. докл. - Черновцы, 1989. - С.32-33.

8. Антагонистическое действие Bacillus eubtiiis на различные виды клебсиелл/Бойко Н.В., Красногороька Н.6.//Там же. - С.39.

9. Антилизоцимная активность бактерий рода ia ebulclia /Туряниця А. 1., Бойко Н.В.//Микробиологический журнал. - 1990. - № I. ~ С.20-22.

10. Лечебно-профилактическое действие аэробных бацилл на клебоиел-лезную инфекцию у сельскохозяйственных животних/Туряниця А Л., Бойко Н.В., Выоницька В.0./Л1икробиологические а биотехнологи-чеокие основы интенсификации растениеводства и кормопроизводствц; Тез. докл. - Алма-Ата, 1990. - С.88.

11. Некоторые механизмы дейотвия новых микробиотиков/йивак М.Н., Ганова Л.Н. , Вьюницька В.О., Бойко Н.В.//Гам же. - 0.17.

12. Штамм бактерий Bacillus aubtilis - антагонист Bcrjo.vinn. v.;a к ted саеллезов/Омирнов В.В., Туряниця A.I., Бойко Н.В., Ь Н!К!п,гя ().■!. //Автороьке овхдоцтво № 1779692 в1д 08.08.1992 р.