Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Аутоантитела к фактору роста нервов в крови детей, больных шизофренией

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Аутоантитела к фактору роста нервов в крови детей, больных шизофренией"



ч£> На правах рукописи

ТУРКОВА Ирина Львовна

АУТОАНТИТЕЛА К ФАКТОРУ РОСТА НЕРВОВ В КРОВИ ДЕТЕЙ, БОЛЬНЫХ ШИЗОФРЕНИЕЙ.

03.00.04 - Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 1998

Работа выполнена в лаборатории молекулярной биохимии Научного центра психического здоровья РАМН

Научные руководители:

доктор медицинских наук доктор медицинских наук

Т.П. Клюшник, И.А. Козлова.

Официальные оппоненты: Член-корр. РАМН, доктор биологических наук доктор медицинских наук

В.Б. Спиричев, М.Г. Узбеков.

Ведущая организация:

Российский Государственный Медицинский Университет им. Н.И. Пирогова

Защита диссертации состоится " ¿Р^Р '1998 г. в ^часов на заседании Диссертационного совета Д 001. 02. 01 при Институте Питания РАМН по адресу:

г. Москва, 109240, Устьинский проезд, д. 2 / 14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института Питания РАМН.

Автореферат разослан " ¿^¿Р " а 1998 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета

кандидат медицинских наук В.М. Жмкпченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы.

До настоящего времени шизофрения остается заболеванием с неясной этиологией и патогенезом. В последние годы все больше исследователей, работающих в этой области, рассматривают шизофрению как болезнь развития мозга [Waddington J.L., 1993; Weinberger D.R., 1995]. Накоплены данные, которые свидетельствуют о том, что мозг больного шизофренией имеет целый ряд не только функциональных, но и структурных аномалий, многие из которых, как полагают, формируются на ранних стадиях нейроонтогенеза [Орловская Д.Д. и Уранова H.A., 1990; BogertsB., 1993].

Установлено, что процессы нейроонтогенеза, в свою очередь, находятся под контролем нейротрофинов (НТ) - полифункциональных регуляторов белковой природы, играющих существенную роль на всех этапах нейронального развития (особенно на стадиях миграции, созревания и дифференцировки нейронов) [Крыжановский Г.Н. и Луценко В. К., 1995; Korsching S., 1993; Snider W.D., 1994]. Одним из наиболее изученных представителей семейства нейротрофинов является фактор роста нервов (ФРН). ФРН оказывает воздействие на нейроны, поддерживая и регулируя интенсивность и направление роста аксонов и дендритов, контролируя выживание нейронов и образование нейрональных контактов [Levi-Montalchini R., 1987; Hamburger V., 1993]. Представляется вероятным, что наблюдаемые при шизофрении признаки нарушения нейронального развития (изменение формы, размеров и ориентации нейронов, их элиминация без заместительного глиоза), в определенной степени, могут быть обусловлены изменениями в системе нейротрофинов, в частности, ФРН.

Эчи нарушения могут быть связаны с уменьшением количества или снижением функциональной активности ФРН, что, в свою очередь, может быть следствием увеличения количества аутоантител к нему. Действительно, в ряде экспериментов было показано, что введение антител к ФРН в организм экспериментальных животных на ранних этапах нейроонтогенеза приводит к возникновению различных аномалий развития нервной системы [Johnson Е.М. et al., 1980; Aloe L. and Cozzari С., 1981].

С другой стороны, многочисленными исследователями были отмечены изменения в системе аутоиммунитета при шизофрении. Так, в периферической крови больных шизофренией обнаружены антитела к некоторым нейроспецифическим антигенам, таким как астроцитарный белок S-100, мембранные белки нервной ткани и др. [Вартанян М.Е. и Коляскинн Г.П., 1974; Коляекина Г.И. и Ьурбаева Г.Ш., 1979; Sirota Р., 1990; Henneberg А.Е. et al., 1994]. Однако, мы не встретили данных, касающихся изучения аутоантител к ФРН (ААТ к ФРН) при шизофрении.

При рассмотрении шизофрении как болезни развития мозга, особый интерес представляют исследования шизофрении детского возраста. До настоящего времени вопросы патогенеза детской шизофрении относятся к наименее изученым в психиатрии. Клинически выраженные формы детской шизофрении приводят к значительным нарушениям как психического, так и физического развития в наиболее восприимчивом периоде постнатального онтогенеза, что находит свое отражение в специфичности и уникальности основных шизофренических расстройств, особенностях течения шизофренического процесса и тесно связанного с этими факторами прогноза [Снежневский A.B., 1983].

Все вышесказанное определяет актуальность исследования природы и уровня ААТ к ФРН в крови детей, больных шизофренией.

Цель исследования:

Изучить возможное участие ААТ к ФРН в патогенезе шизофрении.

Задачи исследования:

1. Разработать вариант твердофазного иммуноферментного анализа, позволяющий количественно определять уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови обследуемых.

2. Провести препаративное выделение ААТ к ФРН для выяснения их иммунохимической природы.

3. Определить уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови у здоровых детей.

4. Определить уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови детей, больных шизофренией, в двух возрастных группах:

а) в возрасте от 5 до 10 лет (детская группа)

б) в возрасте от 11 до 15 лет (препубертатная и пубертатная группа).

5. Сопоставить уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови детей, больных шизофренией, с особенностями их клинического состояния.

6. Определить иммунореактивность (ИР) сыворотки крови детей, больных шизофренией, к другим нейроспецифическим антигенам (астроцитарному белку 8-100, глиальному фибриллярному кислому протеину (ГФКП) и мембранному белку нервных клеток из семейства интегринов МП-65) и сопоставить с уровнем ААТ к ФРН.

Научная новнзна результатов исследования.

Разработан авторский (в соавторстве с д.м.н. Т.П. Клюшник и к.м.н. Е.В. Даниловской) вариант твердофазного иммуноферментного анализа

для количественного определения уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови человека.

Впервые проведено определение количественного содержания ААТ к ФРН в сыворотке крови детей и отмечено достоверное возрастание (р<0.01) данного показателя у детей, больных шизофренией, по сравнению со здоровыми детьми.

Впервые выявлена взаимосвязь уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови детей, больных шизофренией, с особенностями их клинического состояния (формой течения заболевания и остротой патологического процесса).

Впервые проведено комплексное изучение иммунореактивности к ФРН и трем другим нейроспецифическим антигенам (Б-100, ГФКП и МП-65) сыворотки крови детей, больных шизофренией и выявлено наиболее выраженное (по сравнению с другими антигенами) повышение уровня ААТ к ФРН.

Результаты проведенного исследования расширяют и дополняют существующие представления о шизофрении как о болезни, возникающей на ранних этапах развития и имеющей в своем патогенезе аутоиммунный компонент. Показано, что этот компонент выражен в виде повышения уровня ААТ к ФРН (по сравнению с другими нейроспецифическими антигенами).

Научно-практическая значимость работы.

Выявленная в работе взаимосвязь между уровнем ААТ к ФРН в сыворотке крови детей, больных шизофренией, и особенностями их клинического состояния является основой для использования показателя уровня ААТ к ФРН в качестве объективного биологического критерия

для уючнения формы течения шизофрении, степени прогредиентности и осI роты патологического процесса.

Полученные результаты могут служить основой также для разработки новых подходов к поискам средств лечения и предотвращения развития болезни.

Апробация работы и публикации.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на международном симпозиуме "Физиологические и биохимические основы активности мозга" (Санкт-Петербург, 1994), XII Российской конференции "Гуморальные и клеточные факторы иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" (Челябинск, 1995), X конгрессе по психиатрии (Мадрид, Испания, 1996), межлабораторной конференции НЦПЗ РАМН (Москва, 1997). По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ.

Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов и списка литературы (233 источника). Работа изложена на 133 страницах машинописного текста, содержит 11 рисунков и 7 таблиц.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Определение уровня ААТ к ФРН проводили в сыворотках крови обследуемых детей.

Характеристика обследованных. В исследование включены нацисты с верифицированным диагнозом шизофрения, госшпализированные или выявленные амбулаторно в отделении детской психиатрии НЦПЗ РАМН в период с 1992 по 1997 год (Руководитель отделения - д.м.н. Козлова H.A.).

Всею обследовано 161 больной не старше 15 лет (106 мальчиков и 55 девочек). Возраст больных к моменту первичного обследования варьировал от 5 до 15 лет.

Наряду с общими закономерностями течения шизофрении у детей отмечают влияние возраста на клинику и течение заболевания, так называемый "возрастной патоморфоз" [Снежневский A.B., 1983]. В результате клинического анализа были выделены две группы детей, больных шизофренией, в зависимости от возраста на момент обследования: и возрасте от 5 до 10 лег и в возрасте от 11 до 15 лет. Первую группу составили 65 детей (54 мальчика и 11 девочек), вторую -96 (52 мальчика и 44 девочки).

Каждую из возрастных групп изучали с позиций дебюта заболевания, степени прогредиентности, длительности заболевания. Основное внимание уделялось формам течения шизофрении и остроте процесса. Выделены три формы детской шизофрении, различающиеся по степени прогредиентности: со злокачественным течением, прогредиентным и малопрогредиентным. В каждой из возрастных групп обследованных больных рассматривали именно эти формы шизофрении.

В первую возрастную группу включены: 13 больных со злокачественным течением шизофрении, 34 больных с прогредиентным течением и 8 больных с малопрогредиентным течением шизофрении.

Во вторую возрасшую группу включены: 10 больных со злокачественным течением шизофрении, 20 больных с прогредиентным течением и 66 больных с малопрогредиентным течением шизофрении.

Контрольные группы были отобраны по возрастному принципу соответственно группам обследованных больных. Первую контрольную группу составили 139 здоровых детей в возрасте от 5 до 10 лет (73 мальчика и 66 девочек), вторую - 117 здоровых детей в возрасте от 11 до 15 лет (62 мальчика и 55 девочек). Взятие крови осуществляли при диспансерном обследовании, проводимом в детской поликлинике № 103. Критерием для отбора здоровых обследуемых служило отсутствие признаков психической и неврологической симптоматики, а также инфекционных заболеваний в течение 2-х месяцев, предшествующих обследованию.

Метод иммуноферментного анализа. Для определения уровня ААТ к ФРН в сыворотках крови разработан вариант твердофазного иммуноферментного анализа, для постановки которого в качестве антигена использован ФРН, выделенный из семенной плазмы быка [Нагрег G.P., et al., 1982]. Детекцию связавшихся с ФРН компонентов сыворотки крови проводили с использованием антител к гамма-фракции, позволяющих суммарно определять IgG и IgM человека. Уровень ААТ к ФРН определяли в единицах оптической плотности (О.Д.).

Для определения уровня ААТ к нейроспецифическим антигенам: S-100, ГФКП и МП-65 был использован вариант твердофазного иммуноферментного анализа, разработанный в Центре "Чернобыль-Тест" [Poletaev А.В., et al., 1996]. Тест-антигены были любезно предоставлены д.м.н. А.Б. Полетаевым - руководителем фонда "Чернобыль-Тест".

Метод иммуноаффинной хроматографии. Препаративное выделение ААТ к ФРН из сыворотки крови осуществляли методом иммуноаффинной

хроматографии. Иммуносорбент был приготовлен на основе BrCN-сефарозы ("Pharmacia", Швеция), конъюгированной с ФРН, выделенным из семенной плазмы быка. Конъюгирование ФРН с BrCN-сефарозой осуществляли по методике фирмы-производителя.

Электрофорез в полиакриламидном геле. Для анализа степени чистоты выделенных ААТ использовали метод электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия по Леммли [L.aemmli U.K., 1970].

Метод иммуноэлектроблоттинга. Специфичность выделенных ААТ к ФРН определяли методом иммуноэлектроблоттинга [Towbin Н., et al., 1979|.

Метод перекрестного иммуноэлектрофореза. Для определения класса выделенных на иммуноаффинной колонке ААТ, связывающих ФРН, использовали метод перекрестного иммуноэлектрофореза в агарозиом геле [Clarke Y., and Freeman Т., 1968].

Статистическая_обработка_данных. Для обработки

экспериментальных данных была использована программа Statgraf. В обследуемых группах здоровых и больных детей вычисляли значения среднего уровня ААТ к ФРН (М) и среднего квадратичного отклонения (ст). Достоверность отличия средних величин в обследованных группах определяли с использованием t-критерия Стыодента [Митропольский А.К., 1971]. Достоверность изменения исследуемых параметров в динамике определяли с помощью V-критерия Вилкоксона [Гублер Е.В. и Генкин A.A., 1973]. Закон распределения параметров устанавливали, используя ^.-критерий Колмогорова-Смирнова [Митропольский А.К., 1971].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Иммунохимическая характеристика ААТ к ФРН, определяемых в сыворотке крови обследованных детей.

С помощью предложенного в настоящей работе варианта твердофазного иммуноферментного анализа, было выявлено присутствие ААТ к ФРН в сыворотке крови всех обследованных детей.

Для изучения иммунохимической природы выявленных ААТ, с помощью иммуноаффинной хроматографии была выделена белковая фракция сыворотки крови, которая связывается с ФРН, и проведен ее электрофоретический и иммунохимический анализ.

Электрофореграмма фракции сыворотки крови, связавшейся с ФРН на иммуноаффинной колонке, приведена на рис.1.

Рис. 1. ЗОБ - электрофорез аффинных ААТ к ФРН, выделенных из сыворотки крови человека.

+

й- н- вела 1$М Н- цепь

Ь-цепь

1- стандарты молекулярной массы от "-" к "+": 94, 67, 43, 30, 20 кД

2- фракция, специфически связавшаяся с ВгСЫ - сефарозой, конъюгированной с ФРН.

('вязавшаяся с ФРН фракция представлена тремя белковыми зонами с молекулярным весом 70 кД, 56 кД и 23 кД, соответствующими по молекулярной массе тяжелой цепи ^М, тяжелой цепи и легкой цепи, одинаковой для иммуноглобулинов обоих классов.

11ммупо_)лекф(>форез связавшихся с ФРН белков, и последующая их преципитация в геле антителами к и ^М человека, приведенные на рис.2, показали, что связавшиеся с ФРН белки представляют собой иммуноглобулины класса ^С и 1цМ.

Рис. 2. Иммуноэлектрофорез аутоантител к ФРН, выделенных из сыворотки крови человека.

.....

1 2

1- преципитация с кроличьими антителами к человека.

2- преципитация с кроличьими антителами к ^М человека.

С помощью иммуноэлектроблоттинга показано, также, что эти иммуноглобулины не связываются с другими белками семенной плазмы. Анализ электрофореграммы, приведенный на рис.3, свидетельствует, что выделенные аффинные антитела окрашивают только зону, соответствующую фактору роста нервов.

Рис. 3. БОБ - электрофорез семенной плазмы быка и иммуноблоттинг с использованием аффинных ААТ к ФРН, выделенных из сыворотки крови человека.

1 2

1- БОЬ - электрофорез семенной плазмы быка.

2- иммуноблоттинг семенной плазмы быка с использованием аффинных ААТ к ФРН из сыворотки крови человека.

Таким образом, иммунохимический и электрофоретический анализ выявленных в крови ААТ показал, что они представляют собой иммуноглобулины класса и 1§М и не связываются с другими белками семенной плазмы, которые могут присутствовать в используемых препаратах ФРН в качестве примесей.

Уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови здоровых детей и детей, больных шизофренией.

ААТ к ФРН обнаружены в крови всех обследованных детей, как здоровых, так и больных шизофренией (таблица I).

Таблица 1. Уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови обследованных детей. _ _

Обследованные группы Контроль Шизофрения

5-10 лет 0.8010.19 п= 139 1.1010.28 п = 65

11-15 лет 0.7810.21 п= 117 1.0710.25 п = 96

Из представленных данных видно, что у здоровых детей от 5 до 15 лет в крови присутствует определенное количество ААТ к ФРН, и этот показатель не зависит от возраста. У больных шизофренией, по сравнению со здоровыми детьми, наблюдается достоверное повышение (р<0.01) уровня ААТ к ФРН.

Достоверных огличий между показателями уровня ААТ к ФРН при сравнении первой и второй возрастных групп детей, больных шизофренией, не выявлено. Таким образом, наблюдаемое влияние возраста на клинические особенности шизофрении у детей, так наэывамый "возрастной патоморфоз", не отражается на величине такого аутоиммунного показателя, как уровень ААТ к ФРН.

На следующем этапе работы изучали наличие взаимосвязи уровня ААТ к ФРН с формой течения и стадией заболевания.

Взаимосвязь уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови детей, больных шизофренией, с особенностями их клинического состояния.

При изучении взаимосвязи между уровнем ААТ к ФРН в сыворотке крови детей, больных шизофренией, и особенностями их клинического состояния основное внимание уделялось формам течения шизофрении и стадии заболевания на момент обследования.

Область значений показателя уровня ААТ к ФРН для удобства сопоставления была подразделена на интервалы. Поскольку параметры распределения уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови здоровых детей не противоречат гипотезе о нормальном законе распределения, то можно ожидать, что в интервале М)д ± 51Л находится большая часть значений этого показателя («68%) [Митропольский А.К., 1971]. Поэтому уровень ААТ к ФРН, значения которого попадают в данный интервал (Мэд ± 81д) и расположены между величинами 0.6 и 1.0, условно был назван "нормальным". Такой уровень ААТ к ФРН был выявлен у 70% детей в контрольных группах и лишь у 41% детей, больных шизофренией. У 17% здоровых детей содержание ААТ к ФРН в сыворотке крови было ниже 0.6, поэтому эти значения уровня ААТ к ФРН оказались вне рамок данного интервала. Больных шизофренией со столь низким содержанием ААТ к ФРН в сыворотке крови выявлено не было.

Уровень ААТ к ФРН, значения которого попадают в интервал от Мм+51Л до М,д+25зл, расположенные между величинами 1.0 и 1.2, мы назвали "повышенным". В обследованных нами группах, в этот поддиапазон входят лишь 13% здоровых детей (что совпадает с теоретическими ожиданиями), в то время как среди детей, больных шизофренией, 34% имеют такой показатель.

И, наконец, в третьем интервале, превышающем М,д+25зд, теоретически лежит меньше 3% значений показателя нормального

распределения. В обследованных нами группах ни у одного из здоровых дек-й не было столь высокого уровня ААТ к ФРН, тогда как значения данного показателя в сыворотках крови детей, больных шизофренией, оказывались в третьем интервале в 25% случаев. Поэтому уровень ААТ к ФРН, величины в котором больше чем 1.2, мы назвали "высоким", а сыворотки крови с таким содержанием ААТ к ФРН - "гиперактивными".

При изучении взаимосвязи уровня АА'Г к ФРН в сыворотке крови детей, больных шизофренией, с формами течения заболевания, выделяли злокачественную, прогредиенгную и малопрогредиентную шизофрению. Час го га встречаемости сывороток (%), с "высоким" и "нормальным" уровнем ААТ к ФРН при злокачественной, прогредиентной и малопрогредиентной формах течения шизофрении по сравнению с контрольной группой, представлена на рис. 4.

Рис. 4. Уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови детей при разных формах течения шизофрении.

I Высокий уровень ААТк ФРН □ Нормальный уровень ААТ к ФРН

^нжачссгвениая Прогредиенгная Малопрогредиептная Контроль

Лиа.'пи представленных данных покачал, что частота встречаемости сытшроюк с "высоким" уровнем ААТ к ФРН максимальна при злокачественной форме течения шизофрении и снижается при переходе к малопрогредиентной форме. И наоборот, частота встречаемости сывороток с "нормальным" уровнем ААТ к ФРН, минимальна при злокачественной форме течения шизофрении и возрастает при переходе к малопрогредиентной форме. Таким образом, можно отметить, что уровень ЛАГ к ФРН связан со степенью прогредиентности патологического процесса, которая нарастает по мере продвижения от малопрогредиентной формы шизофрении к злокачественной ее форме.

Мри тучепии вшпмосвязи уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови детей, больных шизофренией, со стадией патологического процесса, рассматривали активное состояние болезни и ремиссию. Средние значения неследуемого показателя на данных стадиях заболевания, по сравнению с контролем, представлены на рис. 5.

Рис. 5. Уровень ААТ к ФРН в крови детей, больных шизофренией, в острой фазе заболевания и в ремиссии (М±о).

X

1.5

с о

1.25

Koiiipo.ii, ремиссии

острая фаза >аболевания

- отмечено достоверное отличие (р<0.01).

Средний уровень ААТ к ФРН в [руине больных, находящихся в остром состоянии, достоверно выше данного показателя в группе больных, находящихся в ремиссии (р<0.()1).

Выявленная взаимосвязь между уровнем ААТ к ФРН, с одной стороны, и оадпей заболевания - с другой, была подтверждена динамическими исследованиями ряда пациентов в период обострения и ремиссии (рис. 6).

Рис. 6. Уровень ААТ к ФРН в крови больных шизофренией в период обострения и ремиссии.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

И Острая стад« табопряашя □ Ремиссии

1-16 - обследованные больные

Данные, приведенные на рис. 6, свидетельствуют, что уровень ААТ к ФРН в крови больных детей не является постоянным: он достоверно (р<0.02) повышается при обострении заболевания и снижается при выходе процесса в стадию ремиссии.

Поскольку известно, что при шизофрении выявляется целый спектр ЛАТ к различным ЛГ" мозга, было важно сопоставить уровни этих ААТ с соответствующим уровнем для ФРН у детей (в литературе мы не обнаружили данных, касающихся определения уровня ААТ к нейросиецифическим белкам при детской шизофрении).

Мы проанализировали частоту встречаемости сывороток с высоким показателем титра ААТ, т.н. "гиперактивных" сывороток у здоровых и больных шизофренией детей по отношению к четырем исследуемым антигенам: ФРН, астроцитарному белку Б-ЮО, глиальному фибриллярному кислому протеину (ГФКП) и мембранному белку нервных клеток из семейства интегринов МП-65 (таблица 2).

Таблица 2. Частота встречаемости "гиперактивных" сывороток крови у здоровых и больных шизофренией детей по отношению к четырем нейроспецифическим антигенам.

Ашиген Кол-во обследованных, сыворотки крови которых "гиперактивны" (%).

контрольная группа дети, больные шизофренией

ФР11 1.5 32.0

Б-100 1.6 12.0

ГФКП 2.0 7.0

МП-65 1.6 14.0

Выявлено увеличенное количество гиперактивных сывороток у детей, больных шизофренией, по отношению к каждому тест-антигену.

Час К)1 а встречаемости "гиперактивных" сывороток различна для исследуемых антигенов, но наиболее она высока для ФРН.

Таким образом, 1) достоверное повышение уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови детей, больных шизофренией; 2) взаимосвязь уровня этих ААТ с формой течения и стадией заболевания; 3) наиболее выраженное повышение титра ААТ к ФРН по сравнению с тремя другими нейроспецифическими антигенами, дают основание полагать, что ААТ к ФРН оказываются вовлеченными в патологический процесс при шизофрении.

Несмотря на то, что вопрос о механизмах повышения уровня ААТ к ФРН в крови больных шизофренией детей остается пока открытым, мы полагаем, что повышенный уровень ААТ к ФРН на ранних этапах развития мозга может приводить к дефициту ФРН, вследствие избыточного связывания его антителами. В свою очередь, снижение физиологической концентрации нейротрофина на ранних этапах развития мозга, может послужить причиной гибели нейронов и/или возникновению аномалий в организации нейронных сетей.

С другой стороны, учитывая данные о модулирующем влиянии ФРН на иммунокомпетентные клетки, можно предположить, что снижение уровня ФРН (вследствие связывания его антителами), может привести к каким-либо аномалиям в иммунной системе, что может также оказать влияние на развивающийся организм. Значительно более высокий уровень ААТ к ФРН, по сравнению с рядом других нейроспецифических АГ, у детей, больных шизофренией, подкрепляют это предположение.

выводы.

1. Ршрабоган вариант твердофазного иммуноферментного анализа для количественного определения уровня аутоантител к фактору роста нервов. Предложенный вариант позволил провести репрезентативные исследования содержания аутоантител к фактору роста нервов в сыворотке крови здоровых и больных шизофренией детей.

2. Проведено препаративное выделение аутоантител к фактору роста нервов. Показано, чю они представляют собой связывающиеся с фактором роста нервов иммуноглобулины класса и 1цМ.

3. Выявлено, чю в сыворотке крови здоровых детей присутствуют аутоангитела к фактору роста нервов, уровень которых составляет 0.8 ± 0.2 единиц оптической плотности. Установлено, что в изученном возрастном интервале от 5 до 15 лет уровень аутоантител к фактору роста нервов не зависит от пола и возраста ребенка.

4. Установлено достоверное повышение (р<0.01) уровня аутоантител к фамору роста нервов в сыворотке крови детей, больных шизофренией, независимо от возрас та ребенка.

5. Выявлена взаимосвязь уровня аутоантител к фактору роста нервов в сыворотке крови детей, больных шизофренией, с особенностями их клинического состояния. Степень повышения уровня аутоантител к фактору роста нервов зависит как от степени прогредиентности (которая нарастает по мере продвижения от малопрогредиентной формы течения шизофрении к злокачественной ее форме), так и от стадии заболевания.

6. Выявлено изменение иммунореакгивности, характеризуемое повышением частоты встречаемости "гиперактивных" сывороток крови у детей, больных шизофренией по сравнению со здоровыми детьми, для всех изученных нейроспецифических антигенов (фактору роста нервов,

ас трчцигарному белку S-100, глиальному фибриллярному кислому iipo'icniiy и мембранному белку ш семейства интегринов МП-65). Усыновлено наиболее выраженное повышение титра аутоантител к факюру роста нервов но сравнению с тремя другими антигенами.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. "The autoantibody levels to nerve growth factor in blood serum and liquor of patients with neurodegenerative disease". Turkova I.L.. Zacharova M.H., Danilovakaya E.V., Voloshchuk S.G., Zavalishin I.A., Klushnik T.P. The Intern, symposium "Physiological and Biochemical Basis of Brain Activity", St. Peterburg, Russia, p.96, 1994.

2. "Boipacnn.ie различия уровня аутоантител к фактору роста нервов в крови здоровых детей". Клюшник Т.П., Башина В.М., Горбачевская I I.JI., Даниловская П.В., Туркова ПЛ., Симашкова H.JI., Козлова И.А. Материалы XII Российской научной конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях", Челябинск, Россия, р.55, 1995.

3. "Аутоантитела к фактору роста нервов в крови детей с первазивными расстройствами", Клюшник Т.П., Козлова И.А., Даниловская 1-.В., Башина В.М., Симашкова Н.В., Туркоиа ИЛ. Материалы XII Российской научной конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях", Челябинск, Россия, р.56, 1995.

4. "Критические периоды онтогенеза и их связь с психическими расстройствами". Башина В.М., Горбачевская ПЛ., Клюшник Т.П.,

Симашкова 11.В., Якупова Л.П., Даниловская Е.В., Туркова И.Л.. 13 кн.: "Экопатология детского возраста", под ред. В.Н. Ярыгина и др., N1., с.283-287, 1995.

5. "Возрастной фактор в патогенезе инфантильного аутистического психоза (Биологичские маркеры критических периодов и их связь с психическими расстройствами)". Башина В.М., Горбачевская Н.Л., Клюшник Т.Н., Симашкова Н.В., Якупова Л.П., Даниловская Е.В., Туркова И.Л. В сб.: "Исцеление" под ред. И.А. Скворцова, вып. 2, М., с.440-444, 1995.

6. "Anti-NGF antibodies in children's sera with pervasive disorders". Kozlova I., Bashina V., Kluscnik T., Simashkova N., Danilovskaya E., Turkova I. X World Congress of Psychiatry, Madrid, August 23-28, V.2, p. 31-32, 1996.

7. "Повышение уровня аутоантител к фактору роста нервов в сыворотке крови детей, больных шизофренией". Башина В.М., Козлова И.А.. Клюшник Т.П., Симашкова Н.В., Даниловская Е.В., Горбачевская Н.Л., Туркова И.Л., Якупова Л.П., Грачев В.В. Ж. неврол. и псих. им. С.С. Корсакова, т.97, N1, 47-51, 1997.

8. "Изменение уровня аутоантител к фактору роста нервов в сыворотке крови больных шизофренией". Клюшник Т.П., Даниловская Е.В., Ватолкина O.E., Туркова И.Л., Цуцульковская М.Я., Орлова В.А., Каледа В.Г. Ж. неврол. и псих. им. С.С. Корсакова, т.98, N3, 32-34, 1998.