Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Аутоантитела к фактору роста нервов при нервно-психических заболеваниях и нарушениях развития нервной системы

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Аутоантитела к фактору роста нервов при нервно-психических заболеваниях и нарушениях развития нервной системы"

•* • о п ( и >.' Л

На правах рукописи

1 •"( * ! ' <1 (Г.т-п

• 0 8-иЧ,! \:-1у1!

клюшник

Татьяна Павловна

АУТОАНТИТЕЛА К ФАКТОРУ РОСТА НЕРВОВ ПРИ НЕРВНО-ПСИХИЧЕСКИХ

ЗАБОЛЕВАНИЯХ И НАРУШЕНИЯХ РАЗВИТИЯ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ

03.00.04 - биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва 1997

Работа выполнена в НИИ клинической психиатрии Научного центра психического здоровья РАМН (директор - член-корр. РАМН А.С.Тиганов).

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор

Р.Р. Лидеман

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор | доктор медицинских наук доктор медицинских наук

А. А. Тереитьев ДД. Петрунин Г.С. Маринчева

Ведущая организация - Университет дружбы народов им. ПЛумумбы.

Защита состоится "_"_ 1997 г. в_часов

на заседании диссертационного Ученого совета Д 084.14.03 при Российском государственном медицинском университете (Москва, ул.Островитянова, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан "_"_1997г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор П.Х.Джанашия

введение.

В многочисленных работах отечественных и

зарубежных исследователей убедительно показано, что аутоиммунные реакции, проявляющиеся в выработке аутоантител (ААТ) к разнообразным антигенам нервной ткани, сопровождают или являются участниками патологического процесса при многих нервно-психических заболеваниях. К числу типичных аутоиммунных заболеваний относится, например, рассеянный склероз, при котором образующиеся ААТ к компонентам миелина непосредственно участвуют в процессах демиелинизации (Raine, 1994; Чекнев, 1994; Härtung, 1995). В ряде других заболеваний, таких как шизофрения, болезнь Альцгеймера, роль выявленных в крови больных ААТ к компонентам ткани мозга остается невыясненной (Waltrip, 1990; Kirch, 1992; Cacabelos, 1995).

В последние годы, однако, появились объективные предпосылки для дальнейшей разработки этой проблемы, в особенности, в связи с открытием так называемых нейротрофических факторов белковой природы, необходимых для нормального развития и созревания элементов нервной системы (как центральной, так и периферической), а также для поддержания жизнедеятельности зрелых нейронов (а возможно, и глиальных клеток). Каждый из нейротрофических факторов тропен в отношении ограниченных групп нейронов ЦНС и ПНС. Перечень нейротрофических факторов постоянно пополняется; наиболее изученным среди них является фактор роста нервов (ФРН), открытый Ритой Леви-Монтальчини в середине 50-х годов (Levi-Montalcini and Hamburger, 1951, 1953).

Однако, вопрос о наличии ААТ к нейротрофическим факторам при нервно-психических заболеваниях, в том числе с выраженным аутоиммунным компонентом, не изучался.

Принимая во внимание исключительную роль, которую играют нейротрофические факторы в процессах становления и функционирования нервной системы, допустимо предположить, что аутоиммунные реакции в виде выработки ААТ, в частности к ФРН, могут вносить определенный вклад в развитие патологических процессов при этих заболеваниях. 1

Действительно, в ряде экспериментов показано, что введение ААТ к ФРН в организм животных в эмбриональном или раннем постнатальном периодах приводит к возникновению различных аномалий развития нервной системы (Johnson, 1980; Otten, 1984).

В связи с этим, в настоящей работе проведено изучение уровня ААТ к ФРН при ряде заболеваний нервной системы на основе использования клинико-иммунологического подхода. В отборе заболеваний, служащих объектом исследования, мы руководствовались следующими соображениями:

В первую очередь, в связи с определяющей ролью ФРН в процессах созревания, дифференцировки и образования нейронных сетей в эмбриональном и раннем постнатальном периодах были отобраны заболевания, при которых отмечаются нарушения развития функциональных систем различной степени сложности и изученности. В качестве таких заболеваний была рассмотрена ранняя детская шизофрения, а также состояния, связанные с нарушением регуляции сердечного ритма у детей (синдром слабости синусового узла и синдром Романо-Уорда).

Поскольку нейротрофические факторы необходимы не только

для созревания и дифференцировки нейронов, но и для поддержания их жизнедеятельности и нормального функционирования во взрослом состоянии, в перечень исследованных в настоящей работе заболеваний были включены нейродегенеративные заболевания различной природы (рассеянный склероз, болезнь Альцгеймера и сенильная деменция).

Важным разделом настоящей работы явилось изучение уровня ААТ к ФРН в крови здоровых людей.

Известно, что ААТ к различным компонентам собственного организма в небольших концентрациях постоянно циркулируют в крови здорового человека (Cohen, 1986; Yaron, 1988; Avrameas, 1991; Полетаев, 1995) и, в связи с этим, группы здоровых людей различного возраста служили в настоящей работе в качестве контроля.

Имелись, однако, и более серьезные основания для выполнения этого раздела исследований. Поскольку в настоящее время остается неизвестной биологическая роль ААТ, циркулирующих в крови здорового человека, тщательное изучение их содержания в период раннего развития могло привести к получению дополнительной информации для анализа этой проблемы. Изучение уровня ААТ к ФРН в раннем деггском возрасте было дополнено электрофизиологическими исследованиями, что позволило проанализировать корреляцию между уровнем ААТ и динамикой изменения биоэлектрической активности мозга, отражающей функциональные перестройки развивающегося мозга.

Для определения уровня ААТ, связывающих ФРН, был использован оригинальный вариант твердофазного иммуно-ферментного анализа, разработанный автором настоящей работы на основе использования фактора роста нервов из семенной плазмы быка. При разработке этого варианта анализа было проведено

препаративное выделение ААТ к ФРН из крови пациентов, что позволило определить их иммуноглобулиновый состав и специфичность.

Цель исследования: Установление наличия аутоантител к фактору роста нервов в крови больных с заболеваниями, в генезе которых предполагается участие нарушений развития и функционирования нейрональной составляющей различных функциональных систем, и определение характера взаимосвязи уровня этих аутоантител с особенностью клинического статуса больных.

Задачи исследования:

1. Разработка метода, позволяющего количественно определить уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови обследуемых.

2. Формирование контрольной выборки здоровых обследуемых разных возрастных групп, определение у них уровня ААТ к ФРН и установление индивидуальной стабильности этого показателя и его конституциональной детерминированности.

3. Выделение группы здоровых детей раннего возраста и детальное сопоставление уровня и динамики ААТ к ФРН в их крови с данными нейроэлектрофизиологического обследования этих детей.

4. Определение уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови больных шизофренией разных возрастных групп и характера взаимосвязи уровня этих ААТ со степенью прогредиентности заболевания и его этапом.

5. Определение уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови детей с тяжелыми нарушениями сердечного ритма и характера взаимосвязи уровня ААТ с клиническими вариантами этой патологии и динамикой состояния больных.

6. Определение уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови больных рассеянным склерозом и деменцией Альцгеймеровского типа и установление возможных корреляций этого уровня с соответствующими разновидностями заболевания и его динамикой.

Научная новизна результатов исследования.

Полученные в настоящей работе результаты целесообразно подразделить на две группы:

1.Результаты, вытекающие из анализа уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови здоровых людей различных возрастных групп;

2.Результаты клинико-иммунологического обследования больных.

Впервые выявлены ААТ к ФРН в сыворотке крови здорового человека и проведено определение их содержания в различных возрастных группах, начиная с новорожденных и грудных детей и заканчивая людьми преклонного возраста. При выполнении этих исследований выявлена значительная межиндивидуальная вариабельность исследуемого показателя при относительном постоянстве этого показателя у каждого из обследованных.

Изучение уровня ААТ к ФРН в крови детей на ранних этапах развития выявило достоверное возрастание этого показателя на возрастном интервале 1-3 года, коррелирующее с изменением некоторых ЭЭГ-параметров, отражающих функциональные перестройки развивающегося мозга, что может служить предпосылкой и, вместе с тем, основой для изучения возможной регуляторной роли ААТ к ФРН в процессе развития нервной системы.

Впервые выявлено достоверное возрастание уровня ААТ к ФРН в крови больных при заболеваниях, в генезе которых

предполагается нарушение развития нейронапьной составляющей тех или иных функциональных систем (шизофрения, синдром слабости синусового узла и синдром Романа-Уорда), коррелирующее с рядом особенностей клинического состояния больных. Эти наблюдения расширяют существующие представления о характере биологических процессов, вовлеченных в развитие этих патологических состояний, посредством включения в рассмотрение аутоиммунного

компонента. Выявленные корреляции свидетельствуют о возможности вовлечения ААТ к ФРН в развитие этих заболеваний.

Практическая ценность результатов исследования.

Выявленная в настоящем исследовании корреляция между транзиторным повышением уровня ААТ к ФРН в крови детей после первого года жизни и изменением ЭЭГ-параметров, отражающих физиологические перестройки в развивающемся мозге (Лпах а- и ц ■ сенсомоторных ритмов), позволяют использовать этот показатель для выявления индивидуальных "критических периодов" развития мозга ребенка.

Выявленная в работе взаимосвязь между уровнем ААТ к ФРН в крови и клиническими показателями больных шизофренией позволяет использовать уровень этих ААТ в качестве объективного биологического критерия, отражающего особенности клинического состояния больных.

Присутствие аутоиммунного компонента в виде повышенного уровня ААТ к ФРН в патогенезе таких заболеваний как шизофрения, синдром слабости синусового узла и синдром Романо-Уорда может служить предпосылкой для разработки новых подходов к изучению патологии этих заболеваниях и, в перспективе, к их лечению.

Положения, вынесенные на защиту.

1.Разработанный вариант твердофазного иммуноферментного анализа для количественного определения уровня и ^М к ФРН в сыворотке крови человека.

2.Результаты определения уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови больных шизофренией, жизнеугрожающими аритмиями, рассеянным склерозом и деменциями Альцгеймеровского типа по сравнению с аналогичным показателем обследованных соответствующих контрольных групп.

3.Результаты определения взаимосвязи между уровнем ААТ к ФРН и особенностями клинического состояния обследованных больных перечисленными выше заболеваниями.

4.Сопоставление динамики уровня ААТ к ФРН в крови и электрофизиологических показателей у детей раннего возраста.

5.Гипотеза о возможном участии ААТ к ФРН в развитии нейрональной составляющей различных функциональных систем в условиях нормального и патологического развития.

Апробация работы и публикации.

Основные результаты работы доложены и обсуждены на международном симпозиуме "Структура и функции регуляторных пептидов" (Москва, 1992), 9-м всемирном конгрессе психиатров (Рио-де-Жанейро, Бразилия, 1993), международном симпозиуме "Физиологические и биохимические основы активности мозга" (Санкт-Петербург, 1994), XII Российской конференции "Гуморальные и клеточные факторы иммунитета при различных физиологических и

патологических состояниях" (Челябинск, 1995), 2-ом международном конгрессе по электростимуляции и клинической электрофизиологии сердца (Санкт-Петербург, 1995), X конгрессе по психиатрии (Мадрид, Испания, 1996), 3-ем международном форуме по репродуктивной иммунологии (Магдебург, Германия, 1996), ученом совете НЦПЗ РАМН (Москва, 1997).

По теме диссертации опубликовано 20 печатных работ в российских и международных журналах, сборниках, материалах конференций, съездов и симпозиумов.

Структура и объем диссертации.

Работа изложена на ¡и страницах машинописного текста, включает в себя 9 таблиц и 19 рисунков.

Работа состоит из Введения, глав "Обзор литературы", "Материалы и методы", "Результаты и обсуждение", Заключения, Выводов, Списка литературы ( ^ источников, из них - на

русском языке). Глава "Результаты и обсуждение" состоит из 8 подглав, каждая из которых содержит краткий обзор соответствующих аспектов рассматриваемой проблемы, экспериментальные данные и их обсуждение.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Уровень ААТ к ФРН определяли в сыворотке периферической крови обследуемых людей. Были обследованы следующие группы людей:

A. Здоровые доноры в возрасте от нескольких недель до 75 лет

жизни.

Общее количество обследованных - 488 человек. Критерием отбора служило отсутствие психопатологической или неврологической симптоматики, а также инфекционных заболеваний в течение 2-х месяцев, предшествующих обследованию.

Б. Больные шизофренией.

Всего изучено 119 больных, из них 65 детей в возрасте от 3-х до 10 лет и 54 пациента зрелого возраста - от 25 до 50 лет. Отбор больных для обследования и их диагностическая оценка были проведены сотрудниками НИИ клинической психиатрии НЦПЗ РАМН- д.м.н. Башиной В.М., канд.м.н. Симашковой Н.В. и Каледой В.Г.

Больные дети по степени прогредиентности шизофрении распределялись следующим образом (отечественная классификация; Вроно, 1983): 13 больных со злокачественной детской шизофренией, 34 человека с ранним началом прогредиентной шизофрении и 18 больных с малопрогредиентной (вялотекущей) шизофренией.

Больные зрелого возраста по формам течения шизофрении распределялись следующим образом (отечественная классификация, Смулевич, 1983): 8 человек с прогредиентной (параноидной) шизофренией, 30 человек с приступообразно-прогредиентной шизофренией и 16 - с малопрогредиентной (вялотекущей) шизофренией.

B. Больные с жизнеугрожающими аритмиями.

Всего обследовано 29 больных детей в возрасте от 3 до 15 лет, из них 10 больных с синдромом Романо-Уорда (синдром удлиненного

интервала QT) и 19 - с синдромом слабости синусового узла.

Отбор больных для обследования и их диагностическая оценка были проведены д.м.н. Школьниковой М.А. - руководителем Федерального детского научно-практического центра диагностики и лечения нарушений ритма сердца на базе московского НИИ педиатрии и детской хирургии.

C. Больные рассеянным склерозом.

Было обследовано 62 человека в возрасте от 16 до 57 лет.

Отбор больных для обследования и их диагностическая оценка проведены канд. м.н. Захаровой М.Н. - ведущим научным сотрудником НИИ неврологии РАМН .

По формам течения заболевания больные распределялись следующим образом: 37 больных с ремиттирующим течением и 25 больных с неуклонно-прогрессирующим течением.

D. Больные деменцией Альцгеймеровского типа.

Было обследовано 42 больных деменцией Альцгеймеровского типа, из них 20 человек с болезнью Альцгеймера в возрасте от 48 до 70 лет и 22 человека с сенильной деменцией в возрасте от 67до 82 лет.

Отбор больных для обследования и их диагностическая оценка проведена канд.м.н. Селезневой Н.Д. -ведущим научным сотрудником научно-методического Центра по изучению болезни Альцгеймера и ассоциированных с ней расстройств.

По степени тяжести заболевания больные были разделены на три группы на основании критериев шкалы CDR (Hughes et al., 1982): 13 больных с начальной стадией деменции ("мягкая" деменция), 21 больной с умеренно выраженной деменцией, 8 больных с тяжелой деменцией.

Уровень ААТ к ФРН (суммарное содержание IgG и IgM) в

сыворотке крови обследованных определяли с помощью твердофазного иммуноферментного анализа, для постановки которого в качестве антигена использован ФРН, выделенный из семенной плазмы быка (Harper et al.,1991). Уровень ААТ к ФРН оценивали в единицах оптической плотности (D).

Уровень сывороточных ААТ (IgG) к нейроспецифическим антигенам S-100, ГФКП и МП-65 определяли твердофазным иммуноферментным анализом. Тест-антигены были любезно предоставлены д.м.н. Полетаевым А.Б. - руководителем фонда "Чернобыль - Тест". Иммунореактивность (уровень ААТ) по отношению к каждому тест-антигену оценивали в % от иммунореактивности сыворотки-стандарта, которая была принята за 100%.

Результаты экспериментов обработаны статистически с вычислением значений средней арифметической (М) и среднего квадратичного отклонения (о). Достоверность отличий между обследованными группами определяли с использованием t-критерия Стьюдента или метода %2 (Гублер, 1973).

Препаративное выделение ААТ к ФРН из сыворотки крови осуществляли методом иммуноаффинной хроматографии на основе BrCN-сефарозы (Pharmacia, Швеция), конъюгированной с ФРН.

Для оценки степени чистоты тест-антигенов и выделенных ААТ использовали метод электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДС-Na) по Леммли (Laemmli etal., 1970).

Специфичность выделенных ААТ к ФРН определяли методом иммуноэлектроблоттинга (Towbin et al, 1979); класс выделенных ААТ

- методом перекрестного иммуноэлектрофореза в агарозном геле (Clarke and Freeman , 1968).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

1. ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММАРНОГО СОДЕРЖАНИЯ IgG и IgM АУТОАНТИТЕЛ К ФАКТОРУ РОСТА НЕРВОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА.

В настоящей работе для определения уровня IgG и IgM аутоантител к ФРН в сыворотке крови человека предложен оригинальный вариант твердофазного иммуноферментного анализа, который имеет следующие особенности:

1. В качестве антигена используется ФРН из семенной плазмы быка, в то время как традиционным источником ФРН для экспериментальных исследований являются подчелюстные слюнные железы мышей-самцов (Longo, 1989). Использование ФРН из семенной плазмы быка обосновано, во-первых, большим структурным сходством бычьего и человеческого ФРН, во-вторых, высоким содержанием ФРН в семенной плазме (Нагрет et al., 1982) и, в-третьих, значительно меньшей стоимостью конечного продукта.

2. Детекция связавшихся компонентов сыворотки крови проводится с использованием козьих антител к гамма-фракции, позволяющих суммарно определять IgG и IgM человека.

Вышеперечисленные особенности предложенного варианта иммуноферментного анализа позволили значительно удешевить метод, тем самым сделав его пригодным для определения суммарной иммунореактивности сыворотки крови к ФРН при массовом

обследовании.

При разработке метода был проведен биохимический и иммунохимический анализ компонентов сыворотки крови человека, связывающихся с ФРН из семенной плазмы быка. Результаты этого анализа свидетельствуют о принадлежности связывающихся сывороточных белков к иммуноглобулинам класса ^О и 1§М. Показано также, что эти иммуноглобулины не связываются с другими белками семенной плазмы, которые могут присутствовать в используемых препаратах ФРН в качестве примесей.

2. ААТ к ФРН в СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ.

Для решения вопроса о присутствии ААТ к ФРН в крови здоровых людей были обследованы различные возрастные группы детей от нескольких дней жизни до 14 лет, а также взрослые - от 15 до 80 лет.

2.1. ААТ к ФРН в сыворотке крови детей.

Уровень ААТ к ФРН был определен в крови 350 детей в возрасте от нескольких дней жизни до 14 лет. Обследуемые были подразделены на 14 возрастных групп (с интервалом в 1год).

В крови всех обследованных детей обнаружено присутствие ААТ к ФРН. Статистически обработанные результаты этих определений приведены в таблице 1.

Можно видеть, что возрастные группы " 1-2 года" и "2-3 года" характеризуются достоверным возрастанием уровня ААТ к ФРН сравнительно с детьми всех иных возрастов (р < 0,01 - по сравнению с группой "0-1 года" и р < 0,05 - для остальных групп). Для детей этих групп характерно также относительное возрастание величины ст

Таблица 1. Уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови здоровых детей разных возрастных групп.

Возраст, годы. ААТ (М±ст); ед. опт.плотности, Р. Закон распределения показателей

0-1 0.55Ю.13 N

1-2 0.88Ю.40* N

2-3 0.96Ю.45* N

3-4 0.84Ю.26 N

4-5 0.74±0.18 N

5-6 0.76±0.21 N

6-7 0.8110.26 N

7-8 0.6310.16 N

8-9 0.7310.20 N

9-10 0.60Ю.19 N

10-11 0.6910.30 N

11-12 0.61Ю.23 N

12-13 0.8110.21 N

13-14 0.75Ю.18 N

14-15 0.73Ю.32 N

Обозначения:

* - возрастные группы, характеризующиеся повышенным уровнем ААТ к ФРН в сыворотке крови по сравнению с другими группами (Р<0.01 - по сравнению с группой 0-1 и Р<0.05 - по сравнению с остальными группами); N - нормальный закон распределения; N - закон распределения, отличный от нормального.

исследуемого показателя: 0,88± 0.40 и 0,96± 0,45 Б соответственно.

Выявленное увеличение титра ААТ к ФРН во временном интервале "1-3 года" можно связать с перестройками различного характера, протекающими в нервной системе в постнатальном

периоде. Одним из таких показателей, характеризующих динамику развития мозга в онтогенезе, является частота а- и ц-ритмов бодрствования в электроэнцефалограмме (Галкина и Боравова, 1994). В связи с этим было проведено сопоставление данных ЭЭГ-обследования и уровня ААТ к ФРН в крови детей первых лет жизни.

2.2. Взаимосвязь изменения уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови и некоторых электрофизиологических параметров в электроэнцефалограмме детей первых лет жизни.

При анализе данных ЭЭГ и уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови обследованные дети были разбиты на четыре возрастные группы: 12-14 месяцев, 15-25 месяцев, 26-37 месяцев и 38-50 месяцев жизни, соответственно, и для каждой группы определено максимальное значение ((тах) частоты а- и ц-ритмов, а также оценена функция когерентности.

Средняя частота а-ритма меняется от 6.410.2 Гц в первой возрастной группе до 8,1 ±0,3 Гц в четвертой возрастной группе, а ц-ритма - от 7,3±0,2 до 8.6±0.2 Гц. При этом отчетливо выявляется скачкообразное возрастание этих нейрофизиологических параметров после 14-15 месяцев. В этот период происходит существенное и достоверное увеличение частоты как а-, так и ц-ритма почти на 1 Гц. В дальнейшем подобных скачкообразных изменений частоты как а-, так и ц-ритмов не наблюдается.

Кроме того, при обработке ЭЭГ было выявлено, что одновременно со скачкообразным изменением частотных характеристик ритмических компонентов в 14-15 месяцев происходит усиление внутри- и межполушарного взаимодействия проекционных и ассоциативных зон коры и расширение полосы когерентных частот.

Скачкообразное увеличение среднего по группе уровня ААТ к ФРН наблюдается после 12 месяцев жизни (от 0,55 до 0,88 Б), т.е. примерно на два месяца опережает соответствующие изменения нейрофизиологических показателей. Коэффициент корреляции между увеличением уровня ААТ к ФРН и изменением частоты спектра для а-и ц-ритмов на временном интервале 12-14 месяцев составил соответственно 0,62 и 0,66 (Р< 0,05).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о временной согласованности изменения изученных параметров и позволяют предположить участие ААТ к ФРН в механизмах формирования тех или иных функциональных систем. Другим возможным предположением является представление о том, что ААТ к ФРН лишь индуцируются и благодаря этому отражают физиологические перестройки, происходящие в организме при созревании нервной системы (ААТ как свидетель процессов, протекающих при развитии нервной системы).

23. ААТ к ФРН в сыворотке крови взрослых здоровых людей.

Уровень ААТ к ФРН был определен в крови 138 взрослых здоровых людей в возрасте от 15 до 80 лет.

Все обследуемые были подразделены на 3 возрастные группы: младшая (от 15 до 25 лет), средняя (от 25 до 60 лет) и старшая (более 60 лет).

В крови всех обследованных людей обнаружено присутствие ААТ к ФРН. Средние показатели титра этих ААТ в соответствующих возрастных группах составили: 0.71 ±0.16, 0.83±0.23 и 1.18±0.16 О. Таким образом, можно видеть, что уровень ААТ к ФРН зависит от возраста, возрастая по мере его увеличения. При этом старшая возрастная группа по исследуемому показателю достоверно

отличается от младшей и средней возрастных групп (Р < 0.01).

Была оценена стабильность изучаемого показателя, т.е. его постоянство во времени применительно к конкретному обследуемому. С этой целью у ряда людей средней группы было проведено определение титра ААТ к ФРН каждые 3-4 месяца на протяжении 2-х лет.

Полученные результаты свидетельствуют о временной стабильности исследуемого показателя: среднее квадратичное отклонение титра ААТ к ФРН у каждого обследуемого не превышала 10% от средних величин и лежала в пределах ошибки метода.

В связи с тем, что величина среднего квадратичного отклонения уровня ААТ к ФРН, измеренная многократно у каждого из обследуемых, составила не более 10% от его среднего значения, что значительно меньше величины этого показателя, измеренного для группы обследованных (28% от среднего значения для этой возрастной группы), можно заключить, что этот показатель является конституционально обусловленным признаком и, вместе с тем, имеют место значительные межиндивидуальные различия.

2.4. Наследуемость уровня сывороточной иммунореактивности к ФРН.

Для решения этого вопроса были определены коэффициенты корреляции между родственниками по уровню ААТ к ФРН в сыворотке крови.

Были обследованы следующие группы родственников: 3 пары однояйцевых близнецов, 7 пар сибсов и 23 пары родителей с детьми.

На основе компонентного разложения общей фенотипической дисперсии данного признака были определены аддитивная

генетическая и средовая составляющие, равные 92% и 8%, соответственно. Отметим, что такой высокий вклад генетической составляющей для ААТ к ФРН (92%) превышает аналогичный показатель для других иммуноглобулинов, лежащий в пределах 4070% для разных классов иммуноглобулинов (СтгшиНЬасЬег, 1974).

Таким образом, приведенные данные подтверждают предположение о том, что уровень ААТ к ФРН в крови -конституционально обусловленный признак с высоким коэффициентом наследуемости.

3. ААТ к ФРН В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ ШИЗОФРЕНИЕЙ.

3.1. ААТ к ФРН в сыворотке крови больных детей.

Уровень ААТ к ФРН был определен в сыворотке крови 65 детей в возрасте от 3-х до 10 лет с диагнозом ранняя детская шизофрения (по отечественной классификации). Контрольную группу составили 98 детей того же возраста.

При статистической обработке результатов было показано, что группа больных детей характеризуется достоверным увеличением содержания в сыворотке крови ААТ к ФРН (Р < 0,01, ^критерий Стыодента): среднее содержание ААТ к ФРН в сыворотке крови детей контрольной группы (М±ст) составило 0.75±0,27 О, а в группе больных шизофренией детей - 1,1 ±0,32 О.

В связи с полученными данными представлялось целесообразным проанализировать, в какой мере уровень ААТ к ФРН связан с формой течения заболевания и клиническим статусом

больных на момент обследования.

С этой целью вся область значений исследуемого показателя, выявленного у больных детей, была разделена на 3 поддиапазона:

1-й поддиапазон - "нормальный" уровень ААТ к ФРН. Границами этого поддиапазона являются величины Мзд-сгзд и Мзд+сьд (или 0.48 и 1.01 О). Такой уровень ААТ к ФРН был выявлен у 73% детей контрольной группы и у 42% детей, больных шизофренией. У 16% здоровых детей уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови был менее 0.48 Б, и они оказались вне рамок данного поддиапазона. У больных столь низкое содержание ААТ к ФРН не наблюдалось.

2-й поддиапазон- "повышенный" уровень ААТ к ФРН. Границами этого поддиапазона являются величины Мщ+стзд и Мзд+2сэд (или 1.02 и 1.29 О). На этот поддиапазон приходится лишь 11% здоровых детей и 38% детей, больных шизофренией.

3-й поддиапазон- "высокий" уровень ААТ к ФРН. Нижней границей этого поддиапазона является величина Мзд+2стзд (1.29 О). В этот поддиапазон вошли все обследуемые, в сыворотке крови которых содержание ААТ к ФРН превосходило указанное выше значение. Эти значения не были выявлены ни у одного из обследованных здоровых детей, в то время как в группе детей, больных шизофренией, такое высокое содержание ААТ к ФРН было выявлено у 20% детей.

Результаты изучения взаимосвязи форм заболевания, клинического статуса больных детей и уровня ААТ к ФРН в сыворотке их крови приведены в таблице 2.

Приведенные в таблице данные свидетельствуют о том, что

Таблица 2. Особенности клинического статуса и уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови больных детей.

Группа больных (п) Уровень ААТ к ФРН

нормальный повышенный высокий

обострение п (%) устойчивая ремиссия обострение п(%) обострение п (%) становление ремиссии п(%) обострение п (%) становление ремиссии п (%)

Злокачественная шизофрения (13) 0(0) 0(0) 3(23) 3(23) 7(54) 0(0)

Прогредиентная шизофрения (34) 7(20) 15(44) 3(9) 4(12) 5(15) 0(0)

Малопрогредиентная шизофрения (18) 1(6) 4(22) 8(44) 4(22) 1(6) 0(0)

уровень ААТ к ФРН тесно связан с тяжестью заболевания, которая нарастает по мере продвижения от малопрогредиентной формы шизофрении к злокачественной ее форме и зависит, вместе с тем, от остроты состояния. Так, высокий уровень ААТ к ФРН у больных, находящихся в состоянии обострения, наблюдался при злокачественной шизофрении - у 54% обследованных, при прогредиентной шизофрении - у 15%, а при малопрогредиентной -только у 6% обследованных. Наряду с этим, высокий уровень ААТ к ФРН никогда не выявлялся (вне зависимости от формы течения болезни) при становлении ремиссии.

Выявленная взаимосвязь между уровнем ААТ к ФРН и стадией заболевания была подтверждена посредством проведения дополнительных исследований ряда пациентов (п=5) в период обострения и устойчивой ремиссии заболевания. Показано, что уровень ААТ к ФРН в крови больных детей не является постоянным: он значительно повышается при обострении заболевания по сравнению с состоянием ремиссии.

3.2. ААТ к ФРН в сыворотке крови больных шизофренией зрелого возраста.

Уровень ААТ к ФРН был определен в сыворотке крови 54 больных шизофренией в возрасте от 25 до 50 лет. Контрольную группу составили 70 психически здоровых людей того же возраста.

Показано, что среднее содержание ААТ к ФРН в группе больных шизофренией (М±о), составляющее 1,29±0,21 О, достоверно отличается от соответствующего значения контрольной группы, равного 0,85+0,31 Б (Р<0,01 критерий Сгьюдента).

Всю область значений исследуемого показателя разделили, как

и ранее, на 3 поддиапазона: "нормальный" (границами его являются значения Мзд-сгзд и Мзд+стзд или 0,54 Эй 1.16 Б); "повышенный" (его границы: Мзд+стзд и Мзд+2стад или 1.17 и 1.48 О) и "высокий" (в этот поддиапазон вошли все обследуемые, уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови которых превышал значение Мзд+2озд или 1,48 Б).

"Нормальный" уровень ААТ к ФРН был выявлен в крови 73% здоровых, а также 20% обследованных больных шизофренией; 15% обследованных контрольной группы имели уровень ААТ менее 0,54 О и оказались вне рамок "нормального" поддиапазона. "Повышенный" уровень -12% здоровых и 35% больных шизофренией; "высокий" - 45% больных шизофренией. "Высокий"уровень ААТ к ФРН не был отмечен при обследовании лиц контрольной группы.

При изучении взаимосвязи между уровнем ААТ к ФРН и формой течения заболевания было показано, что обследованные группы больных с различными формами течения заболевания (непрерывной или параноидной, приступообразно-прогредиентной и вялотекущей шизофренией) не отличаются между собой по среднему содержанию в сыворотке их крови ААТ к ФРН. Величины М±<т в соответствующих группах составили: 1,23±0,17; 1,43±0,23; 1,22±0,21

а

В то же время, больные, находящиеся в острой фазе течения заболевания, характеризуются достоверным повышением (Р < 0,01) в сыворотке их крови уровня ААТ к ФРН (1,38±0,26 Б) по сравнению с больными, находящимися в состоянии ремиссии (0,92±0,25 О) и с обследованными контрольной группы (0,85±0,27 О).

Таким образом, приведенные результаты свидетельствуют, что для больных шизофренией (вне зависимости от возраста) характерно

достоверное увеличение уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови по сравнению с контрольной группой, а также зависимость этого уровня от стадии заболевания; в группе больных шизофренией детского возраста также наблюдается взаимосвязь между уровнем ААТ к ФРН и формой течения заболевания.

Выявленные клинико-биологические корреляции, а также детерминирующая роль ФРН в процессах созревания и развития элементов нервной системы позволяют высказать предположение о возможном участии аутоантител к ФРН в патологических процессах при шизофрении. Это участие может быть реализовано посредством связывания ФРН проникающими в мозг аутоантителами. Возникающий вследствие этого дефицит физиологически активного пептида может послужить либо причиной гибели нейронов, либо) приводить к возникновению каких-либо аномалий в организации нейронных сетей. ААТ, связывающие ФРН или другие нейротрофины этого семейства, в этом случае, предположительно, могут служить в качестве одного из факторов, вносящих определенный вклад в формирование структурных нарушений, характерных для мозга больных (изменение формы, размеров и ориентации нейронов, их элиминация), значительная часть которых возникает, как известно, еще в процессе пре- и перинатального развития (Weinberger, 1987; 1995; Lyen, 1989).

Повышение уровня ААТ к мозговым антигенам и, в частности, к ФРН, при шизофрении может возникать также в качестве "ответа" организма больного на нарушение работы его мозга, обуславливающее клинические проявления заболевания. Например, оно может быть обусловлено увеличением скорости синтеза этого антигена в ткани мозга, высвобождением его из соответствующих "резервных запасов", а также повышенной проницаемостью

гематоэнцефалического барьера.

Повышение уровня ААТ к ФРН может быть, предположительно, обусловлено инфекционным процессом, либо

определяться какими-либо аномалиями иммунной системы больных шизофренией.

4. КОМПЛЕКСНОЕ ИССЛЕДбЙАНИЕ ИММУНО-

РЕАКТИВНОСТИ СЫВОРОТКИ КРОВИ БОЛЬНЫХ

»

ШИЗОФРЕНИЕЙ К ЧЕТЫРЕМ АНТИГЕНАМ НЕРВНОЙ ТКАНИ.

Проведено сравнение иммунореактивности (ИР) сыворотки крови 67 детей, больных шизофренией, в возрасте от 5 до 14 лет, к ФРН, а также трем другим антигенам нервной ткани (водорастворимому астроцитарному белку 8-100, глиальному фибриллярному кислому протеину ГФКП и мембранному белку 1 нервных клеток из суперсемейства интегринов МП-65). Антигены Б-100, ГФКП и МП-65 относятся к классу нейроспецифических белков, принимающих участие в осуществлении специфических функций мозга (Беляев и др., 1981; Штарк, 1985). Контрольную группу составили 158 человек того же возраста.

На основе анализа ИР (уровня ААТ) сыворотки крови обследованных контрольной группы была определена "норма реакции" - интервал, ограниченный значениями Мзд.±2озд для каждого тест-антигена. Затем была определена доля обследованных, ИР сывороток крови которых выходит за пределы "нормы реакции" в контрольной группе и в группе больных шизофренией детей. Результаты этих определений приведены в таблице 3.

Таблица 3. Доля обследованных, иммунореактивность (ИР) сывороток крови которых выходит за пределы нормы реакции (НР)-

Антиген НР (М±2ст) в % от сыворотки-стандарта Доля обследованных, ИР сывороток крови которых выходит за пределы НР (%)

контрольная группа дети, больные шизофренией

ФРН 71*147 3.0 46.0 (30; 70)*

Б-100 70-ь146 3.2 19.0(36; 64)

ГФКП 78-5-142 4.3 14.0(50; 50)

МП-65 70-5-132 3.2 19.1 (25; 75)

* - в скобках приведена доля гипо- и гипериммунных сывороток (в % от количества больных, сыворотки которых выходят за пределы "нормы реакции").

Можно видеть, что в контрольной группе за пределы "нормы реакции" выходит не более 5% обследованных. Группа больных шизофренией характеризуется значительным (4-12-кратным для различных тест-антигенов) увеличением доли сывороток, выходящих за пределы "нормы реакции" (преимущественно в сторону гиперактивности). Изменение ИР к использованным в работе тест-антигенам выражено в различной степени и наиболее значительно - в отношении ФРН.

5. ААТ к ФРН В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ДЕТЕЙ С ЖИЗНЕУГРОЖА-, ЮЩИМИ АРИТМИЯМИ.

Уровень ААТ к ФРН был определен в сыворотке крови 19 больных детей с различными вариантами синдрома слабости синусового узла (СССУ) и 10 детей с синдромом Романо - Уорда (синдром удлиненного интервала (^Т) в возрасте от 3-х до 15 лет.

Контрольную группу составили 80 здоровых детей того же возраста.

Среднее содержание ААТ к ФРН в сыворотке крови детей с СССУ и синдромом Романо-Уорда составило 1.00+0.19 и 0.9710.10 О. Эти величины достоверно отличаются от величины среднего содержания ААТ к ФРН в крови детей контрольной группы, равного 0,75±0.27 О (Р<0.01, ^критерий Сгыодента). Поскольку рассмотренные группы больных не отличаются между собой по среднему уровню изучаемого показателя, а также вследствие их малочисленности, для анализа частотного распределения они были объединены в одну группу (группа больных с жизнеугрожающими аритмиями).

Для анализа приведенных данных весь диапазон изучаемого показателя был разделен на 4 поддиапазона, границами которых являются следующие величины: Мад-2стзд и Мм-Стзд ("пониженный" уровень), М3д±озд ("нормальный" уровень), Мзд+Озд и Мзд +2<гзд ("повышенный" уровень), более Мад+2стзд ("высокий" уровень).

Среди больных детей не были выявлены пациенты с пониженным уровнем ААТ к ФРН, в то время как в контрольной группе доля детей, входящих в этот поддиапазон, составляет 17%.

Вместе с тем, 34% больных детей характеризуются повышенным уровнем ААТ к ФРН, в то время как в контрольной группе эта величина составляет 12%. Высокий уровень ААТ к ФРН отмечен у 7% обследованных больных детей и не наблюдался в контрольной группе.

В связи с полученными данными представлялось целесообразным проанализировать, в какой мере уровень ААТ к ФРН связан с особенностями клинического статуса больных детей.

С этой целью при проведении клинико-электрофизиологических исследований больные дети были разделены на 4 подгруппы в зависимости от выраженности нарушения проводящей функции сердца и затем для каждой подгруппы было определено среднее содержание ААТ к ФРН.

Средний уровень ААТ к ФРН (М±о) в сыворотке крови детей соответствующих подгрупп составил : 0.87+0.05 , 0.97±0.04, 0.9710.16, 1.1 ±0.17 D, т.е. наблюдалось увеличение уровня ААТ к ФРН от 1-й к 4-й подгруппе по мере нарастания нарушений проводящей системы сердца. Коэффициент корреляции между уровнем ААТ к ФРН и выраженностью клинико-электрокардиографических проявлений составил 0.65 (Р < 0.05). Отметим также, что самый высокий уровень ААТ в обследованной группе больных (1.26 D и 1.47 D) наблюдался в крови двух детей, перенесших клиническую смерть.

Таким образом, приведенные в настоящем разделе работы результаты свидетельствуют о достоверном повышении уровня ААТ к ФРН в крови детей с жизнеугрожающими аритмиями (по сравнению с контрольной группой), коррелирующем с тяжестью клинического состояния больных.

Выявленные корреляции дают основание предполагать

вовлеченность данного аутоиммунного компонента в

формирование нарушений проводящей системы сердца. ' Поскольку, как было показано выше, аутоиммунный

компонент, присутствующий в патогенезе тех или иных заболеваний (не только аутоиммунных), включает в себя появление спектра ААТ к различным аутоантигенам, можно ожидать, что при жизнеугрожающих аритмиях в крови больных также присутствуют ААТ, в частности, к другим белкам мозга. В связи с этим, с целью более полного изучения данного вопроса, в рамках настоящего исследования было проведено комплексное изучение иммунореактивности сыворотки крови больных с жизнеугрожающими аритмиями к другим антигенам нервной ткани.

6. КОМПЛЕКСНОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ААТ КЛАССА ДО к ФРН и | ДРУГИМ АНТИГЕНАМ НЕРВНОЙ ТКАНИ В КРОВИ БОЛЬНЫХ С ЖИЗНЕУГРОЖАЮЩИМИ АРИТМИЯМИ.

ИР сыворотки крови к четырем тест-антигенам (фактору роста нервов ФРН, водорастворимому астроцитарному белку Б-100, глиальному фибриллярному кислому протеину ГФКП и мембранному белку нервных клеток из суперсемейства интегринов МП-65) определена у 29 детей с жизнеугрожающими аритмиями (19 пациентов с СССУ и 10 пациентов с синдромом ' Романо-Уорда), после чего оценено количество больных, ИР сыворотки крови которых выходит за пределы "нормы реакции" для каждого из использованных антигенов (как описано в разделе 4).

В таблице 4 приведены соответствующие "нормы реакции" для вышеуказанных тест-антигенов, а также доля обследованных

контрольной группы и группы больных с жизнеугрожающими аритмиями, ИР сыворотки крови которых выходит за пределы "нормы реакции".

Таблица 4. Доля обследованных, иммунореактивность (ИР) сывороток крови которых выходит за пределы "нормы реакции" (НР).

антиген НР (М±2сг контр, группы), в % от сыворотки стандарта Доля обследованных, ИР крови которых выходит за пределы НР

контрольная группа дети с жизнеугрожающими аритмиями

ФРН 71 ч-147 3.0 17.2 (40;б0)*

Б-100 70 ч- 144 3.2 13.8 (50;50)

ГФКП 78 ч-142 4.3 17.2 (20;80)

МП-65 70 ч-132 3.2 27.4(12;88)

* - в скобках приведена доля больных, сыворотки крови которых гипо- и гиперреактивны (в % от общего числа больных, сыворотки

I

крови которых выходят за пределы "нормы реакции").

I

I .

Анализ результатов, приведенных в этой таблице, свидетельствует о 4-9 кратном (для различных антигенов) возрастании в группе детей с жизнеугрожающими аритмиями доли обследованных, ИР сывороток которых выходит за пределы нормы реакции. Наиболее

ярко это возрастание проявляется в отношении мембранного антигена МП-65. Однако, в настоящее время конкретная роль этого белка, как и многих других нейроспецифических антигенов, в процессах развития и функционирования нервной системы остается неизвестной, в связи с чем не представляется возможным теоретически проанализировать функциональные последствия, к которым может приводить связывание этих белков соответствующими антителами.

Хотя настоящие исследования не позволяют объяснить механизм, приводящий к изменению ИР сыворотки крови больных с жизнеугрожающими аритмиями, равно как и их роль в патологических процессах при этих заболеваниях, проведенные исследования существенно расширяют существующие представления о характере биологических процессов и формировании нарушений проводящей системы сердца при этих патологических состояниях.

7. ААТ к ФРН в СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ РАССЕЯННЫМ рКЛЕРОЗОМ.

Уровень ААТ к ФРН был определен в крови 62 больных рассеянным склерозом (РС) в возрасте от 16 до 57 лет. Контрольную группу составили 53 здоровых донора того же возраста без психопатологической и неврологической симптоматики.

В крови всех обследованных больных РС были выявлены ААТ

к ФРН.

Среднее их содержание в сыворотке крови больных составило 1.20±0.27 О. Эта величина достоверно отличается от среднего содержания ААТ к ФРН в контрольной группе, равного 0.81 ±0.16 О

(Р<0.01, Меритерий Стъюдента).

Для анализа приведенных данных весь диапазон значений исследуемого показателя был разбит на 4 поддиапазона: "пониженный", "нормальный", "повышенный" и "высокий" уровень ААТкФРН.

К "пониженному" уровню отнесены значения, меньшие, чем Мад-Озд , или 0.64 Б. Такие значения характерны для 10% здоровых доноров, в то же время они не были выявлены в группе больных РС.

К "нормальному" уровню отнесены значения, которые лежат в интервале Мад±сгзя или 0.64 4- 0.97 О. Такие показатели уровня ААТ к ФРН характерны для 79% здоровых доноров и лишь для 22.5% больных РС.

"Повышенный" уровень ААТ к ФРН составляют значения, лежащие в пределах Мэд+сгзд и Мзя+2сгзд или 0.98 и 1.14 Р. Такой уровень ААТ к ФРН выявлен у 11% здоровых обследованных и у 22,5% больных РС.

"Высокий" уровень ААТ к ФРН - это все значения, превышающие величину Мад+2сгзд или более 1.14 Б. В сыворотке крови обследованных здоровых такие значения не были выявлены. Вместе с тем, указанное высокое содержание ААТ к ФРН было выявлено у 55% больных РС.

Таким образом, можно заключить, что для больных РС характерно достоверное увеличение содержания ААТ к ФРН в сыворотке крови. При этом более половины (55%) обследованных больных характеризуются значениями ААТ к ФРН, не наблюдаемыми у здоровых доноров, в 1.5-2.5 раз превышающими среднее содержание ААТ к ФРН в контрольной группе.

Была изучена также взаимосвязь уровня ААТ к ФРН в

сыворотке крови больных и формой течения рассеянного склероза, стадией процесса и длительностью заболевания.

Для выявления взаимосвязи уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови и формой течения РС были сопоставлены уровни ААТ к ФРН в крови больных с ремиттирующим и неуклонно прогрессирующим течением заболевания. Обследованные группы больных не отличались между собой по данному показателю: 1.1310.27 и 1.1410.29 О соответственно, в то же время обе они достоверно отличались от контрольной группы (Р< 0.01).

Также не были выявлены отличия в уровне ААТ к ФРН в крови больных, находящихся на различных стадиях заболевания: средний уровень этих ААТ в крови больных в острой стадии составил 1.1410.27 Б, а в стадии ремиссии -1.1210.27 О.

Аналогичные результаты (отсутствие различий в уровне сывороточных ААТ к ФРН) были получены при обследовании больных с различной длительностью заболевания: до 1 года, 1-10 лет и более 10 лет. Соответствующие средние значения уровня этих ААТ в обследованных подгруппах составили: 1.2010.26; 1.1010.27 ; 1.1410.29 а

Таким образом, в настоящем исследовании было выявлено достоверное повышение уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови больных РС по сравнению с контрольной группой, не коррелирующее ни с формой течения, ни со стадией патологического процесса, ни с его длительностью.

Отсутствие взаимосвязи между уровнем ААТ к ФРН и особенностями клинического статуса больных дает основание полагать, что эти ААТ не участвуют ни в процессе формирования

новых очагов демиелинизации, появление которых сопровождается обострением клинической симптоматики, ни в процессе ремиелинизации.

В то же время выявленная и подтвержденная различными исследователями корреляция между уровнем ААТ к основному белку миелина в сыворотке крови больных PC и активностью патологического процесса, дает основание связывать повышение . уровня этих ААТ с процессом деструкции мозговой ткани (Herbrink, 1985; Warren and Catz, 1989; Olsson et al., 1990; van Noort et.al., 1995).

Приведенная выше совокупность результатов настоящего исследования и данных литературы свидетельствует о том, что в организме больных PC, наряду с антителами, непосредственно участвующими в деструкции миелина, синтезируется широкий спектр аутоантител к различным мозговым (возможно, и не только к мозговым) аутоантигенам, не определяющим характер патологического процесса.

Сопоставляя результаты определения уровня ААТ к ФРН при шизофрении и PC, можно отметить, что эти два заболевания в плане зависимости изучаемого показателя от особенностей клинического статуса больных существенно различаются между собой. В случае , шизофрении наблюдается взаимосвязь между уровнем ААТ к ФРН и течением патологического процесса, хотя пока остается неизвестным, причиной или следствием это'го процесса является повышение уровня ААТ. В случае PC повышение уровня ААТ к ФРН, по-видимому, можно считать неспецифическим следствием активации аутоиммунного процесса.

8. ААТ к ФРН в СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ ДЕМЕНЦИЯМИ АЛЬЦГЕЙМЕРОВСКОГО ТИПА.

В настоящей работе обследовано 20 больных болезнью Альцгеймера (БА) в возрасте от 48 до 70 лет и 22 больных сенильной деменцией (СД) в возрасте от 67 до 82 лет. Контрольную группу составили 22 донора в возрасте старше 56 лет.

В крови всех обследованных больных были выявлены ААТ к

ФРН.

Среднее их содержание в сыворотке крови больных БА и СД составило I.15±0.17 D, и 1.23±0.16 D, соответственно. Эти величины

I

не отличаются от среднего содержания ААТ к ФРН в контрольной группе, равного 1.18±0.16 D. Не выявлено ни одного больного с содержанием ААТ к ФРН в сыворотке крови, выходящим за пределы Мзя±2стзд контрольной группы.

Таким образом, проведенные исследования не выявили изменения уровня ААТ к ФРН в крови обследованных больных БА и СД по сравнению с контролем, что свидетельствует об отсутствии аутоиммунного компонента (по крайней мере, в отношении ФРН) в патогенезе деменций Альцгеймеровского типа.

Эти результаты хорошо согласуются с данными, полученными другими исследователями. Действительно, в ряде работ указывается, что частота выявления аутоантител к мозговым антигенам в сыворотке крови больных БА значительно ниже по сравнению с больными шизофренией (McRae-Degueurce et а!., 1987; Sagiura et al., 1989). Кроме того, по-видимому, меньше и разнообразие ААТ, циркулирующих в крови этих больных (Sagiura et al., 1989).

Таким образом, совокупность полученных в данном разделе

работы результатов и данных литературы свидетельствует о том, что сама по себе деструкция мозговой ткани не влечет "автоматически" образования ААТ ко всем компонентам мозговой ткани, выходящим в кровь.

ГУ. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

В ходе проведенных исследований было установлено 3 группы фактов, касающихся уровня ААТ к ФРН в крови человека:

1-я группа фактов основана на результатах исследования здоровых доноров.

Установлено присутствие в крови человека ААТ к ФРН. При этом показано, что уровень этих ААТ является конституциональным признаком, обусловленным высоким коэффициентом наследуемости. Далее, обнаружено транзиторное повышение уровня ААТ к ФРН в крови здоровых детей на возрастном интервале 1-3 года, коррелирующее с параметрами ЭЭГ, характеризующими процессы функциональной перестройки развивающегося мозга. В своей совокупности эти данные существенно подкрепляют ранее неоднократно высказываемые предположения о том, что аутоантитела, циркулирующие в крови, выполняют регуляторную функцию (Аугатеаэ, 1991; Полетаев, 1995).

2-я группа фактов включает результаты, полученные при изучении уровня ААТ к ФРН в крови больных. В четырех из шести изученных патологических процессов выявлено достоверное увеличение уровня ААТ к ФРН (таблица 5) в сравнении с контрольной группой.

Таблица 5. Особенности иммунореактивности сыворотки крови больных к ФРН и другим антигенам

нервной ткани.

Заболевания Повышение уровня ААТ к ФРН Корреляция уровня ААТ к ФРН с особенностями клинического статуса Выявленный аутоиммунный компонент (по литературным данным) Повышение уровня ААТ к другим антигенам мозга

Шизофрения + + + +

Синдром слабости синусового узла + + - +

Синдром Романо-Уорда + не исслед. - +

Рассеянный склероз + - + +

Болезнь Альцгеймера - - +/- +/-

Сенильная деменция - - +/- +/-

Обнаружено, что эти исследованные заболевания четко распадаются на две группы: в одной из этих групп уровень ААТ к ФРН коррелирует с тяжестью болезненного процесса и его этапом у обследованных больных - это заболевания, которые могут быть связаны с нарушением развития нервной системы: шизофрения и жизнеугрожающие аритмии детского возраста (синдром Романо-Уорда и синдром слабости синусового узла); в других случаях - у обследованных больных с нейродегенеративными заболеваниями-эти корреляции либо отсутствуют (рассеянный склероз), либо уровень ААТ к ФРН остается в пределах нормы (болезнь Альцгеймера и сенильная деменция).

Эти факты указывают на необходимость дальнейшей разработки проблемы по изучению аутоиммунного компонента в отношении нейротрофических факторов в патогенезе заболеваний, связанных с патологией развития и функционирования нервной системы на различных уровнях ее структурной и функциональной организации.

Полученные результаты позволяют предположить, что включение в исследование более широкой группы заболеваний, также в той или иной мере обусловленных недоразвитием нейрональных механизмов (например, патология развития слухового и зрительного анализатора), может оказаться перспективным в плане наличия соответствующего аутоиммунного компонента.

Установленная в работе тенденция к возрастанию уровня ААТ к ФРН в раннем детстве при нормальном развитии и увеличение этого уровня при патологическом процессе может быть рассмотрено с единых позиций: в первом из упомянутых выше случаев (детский возраст) мы имеем дело с нормально функционирующим механизмом регуляции процесса становления функциональных систем,

в то время как в условиях патологии - с нарушением работы этого механизма.

. Проведенное в настоящем исследовании одновременное

изучение уровней ААТ к ряду антигенов мозга при шизофрении и жизнеугрожающих аритмиях показало, что каждое из этих заболеваний характеризуется относительно специфическим профилем иммунореактивности. Это свидетельствует о сложности взаимосвязей между иммунной системой и патологическим процессом, развивающимся в организме больного. Вместе с тем, эти данные могут послужить в дальнейшем в качестве основы для ранней диагностики этих патологических состояний.

Относительно результатов исследования больных рассеянным склерозом можно отметить, что отсутствие значимых клинико-биологических корреляций между повышением уровня ААТ к ФРН в крови этих больных и активностью патологического процесса позволяет предположить, что ААТ к ФРН в данном случае можно рассматривать в качестве "свидетеля" патологического процесса, обусловленного, скорее всего, активацией аутоиммунных процессов. Это предположение хорошо согласуется с представлениями об

| аутоиммунной природе данного заболевания. Хотя в настоящее время обсуждаются различные этиологические факторы (генетические и средовые) и механизмы, участвующие в развитии демиелинизирующего процесса, ведущая роль аутоиммунных реакций, связанных с образованием ААТ к основному белку миелина, не вызывает сомнений.

Совокупность данных, полученных в настоящем исследовании, свидетельствует, что высокий уровень ААТ к ФРН можно рассматривать в качестве маркера группы заболеваний,

включающей патологические состояния, связанные с нарушением развития нервной системы, а также классические аутоиммунные заболевания. Вероятнее всего, конкретная роль образующихся в организме больных ААТ к ФРН может быть различной: они могут либо принимать непосредственное участие в реализации патологического процесса, т.е. быть его участниками, либо возникать вследствие активации иммунной системы, т.е. являться неспецифическими свидетелями патологического процесса.

V. ВЫВОДЫ.

1.Разработан вариант твердофазного иммуноферментного анализа для определения суммарного содержания аутоантител класса 1§0 и 1§М к фактору роста нервов в сыворотке крови человека. Применение в данном варианте анализа фактора роста нервов из семенной плазмы быка вместо традиционно используемого в биологических исследованиях фактора роста нервов из подчелюстных слюнных желез мыши позволило значительно удешевить метод, тем самым сделав его пригодным для массового обследования.

2.Впервые определено наличие ААТ к ФРН в сыворотке крови здорового человека, составляющее 400-900 нг/мл. Установлено, что в крови здорового человека уровень этих ААТ конституционально обусловлен и является постоянной величиной (ст < 10% от среднего), вместе с тем постепенно увеличивающейся с возрастом; отмечается высокая межиндивидуальная вариабельность этого показателя (ст = 14 -ь 40% от среднего).

3.Изучение уровня ААТ к ФРН у здоровых детей (в возрасте от нескольких дней жизни до 14 лет) выявило достоверное (Р < 0.01)

» транзиторное возрастание этого показателя на возрастном интервале 1- 3 года. Установлено, что это возрастание коррелирует с нейрофизиологическими показателями, характеризующими процессы функциональной перестройки развивающегося мозга (Ттзх , сх- и [!• сенсомоторных ритмов).

4.Впервые установлено достоверное повышение уровня ААТ к ФРН (Р < 0,01) в сыворотке крови больных шизофренией. Повышение уровня этих ААТ в крови детей, больных шизофренией, коррелирует с остротой болезненного процесса (этапом заболевания) и степенью прогредиентности процесса. Аналогичная взаимосвязь между уровнем ААТ к ФРН и стадией заболевания выявлена и при изучении больных шизофренией зрелого возраста.

Эти данные могут послужить для объективизации состояния больных, а также в качестве прогностических при проведении мониторинга и оценки динамики развития заболевания. ^ 5.Выявлено изменение иммунореактивности сыворотки крови

детей с ранней детской шизофренией по отношению к антигенам ФРН, астроцитарному белку Б-100, глиальному фибриллярному кислому протеину ГФКП и мембранному белку из семейства интегринов МП-65, которое проявляется в значительном увеличении доли сывороток, выходящих за пределы "нормы реакции" (М±2а контрольной группы). Изменение иммунореактивности к использованным тест- антигенам выражено в различной степени и наиболее значительно в отношении ФРН: соответствующая величина для ФРН составляет 46%, для других антигенов - не превышает 19%.

6.Впервые выявлен аутоиммунный компонент в виде повышенного уровня ААТ к ФРН и трем другим антигенам мозга (в-100, ГФКП и МП-65) у больных детей с синдромом слабости синусового узла и синдромом Романо-Уорда - патологических состояниях, относящихся к тяжелым нарушениям ритма сердца, обусловленным нарушением развития соответствующих нейрональных систем. Уровень ААТ к ФРН в крови больных с синдромом слабости синусового узла коррелирует с выраженностью клинико-электрокардиографических проявлений синдрома.

Таким образом, было установлено наличие нового (аутоиммунного) компонента в развитии этих нарушений, что может быть использовано для оптимизации терапевтических подходов.

7.Выявлено достоверное увеличение (Р < 0.01) уровня ААТ к ФРН в крови больных рассеянным склерозом, не коррелирующее ни с формой течения заболевания, ни со стадией патологического процесса, ни с его длительностью.

8.Показано, что такие нейродегенеративные заболевания как болезнь Апьцгеймера и сенильная деменция не сопровождаются повышением уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови больных.

9.Совокупность результатов, полученных в настоящем исследовании, свидетельствует о наличии тесной взаимосвязи между уровнем ААТ к ФРН и процессами, приводящими к патологическому развитию нервной системы (как ЦНС, так и ПНС). Выявленные закономерности позволяют сформулировать гипотезу о возможном участии ААТ к ФРН в развитии нейрональной составляющей различных функциональных систем в условиях нормального и патологического развития.

VI. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ РЕЗУЛЬТАТОВ

ИССЛЕДОВАНИЯ;

Определение уровня аутоантител к фактору роста нервов в крови рекомендуется проводить в психиатрических и детских кардиологических клиниках для мониторинга состояния больных, а также для прогноза течения заболевания и оценки эффективности проводимой терапии у больных шизофренией, а также с нарушениями проводящей системы сердца.

Разработанный метод иммуноферментного определения аутоантител к фактору роста нервов может также применяться в научно-исследовательских целях для изучения патогенеза заболеваний, связанных с патологией развития нервной системы.

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Brusov O.S., Plashhe К., Klushnik Т.Р., Yakovlev A,G. "Nerve growth factor induces the aggregation and serotonin release reaction in human platelets. International Symposium "Structure and Function of Regulatory Polypeptides", Moscow - Tver. Russia, p.58, 1992.

2. Brusov O.S., Klushnik T.P., Klimshina O.A., Danilovskaya E.V. "Enzyme-linked immunosorbent assay for anti-nerve growth factor autoantibody: high level in children with mental retardation", International Symposium "Structure and Function of Regulatory Polypeptides", Moscow - Tver. Russia, p.59,1992.

3. Klushnik T.P., Brusov O.S., Danilovskaya E.V., et.al. "High level of anti-NGF autoatibodies in the serum of patients with schizophrenia", 9-th Wold Congress of Psychiatry, Rio de Janeiro, Brazil, p.434, 1993.

4. Turkova T.L., Zacharova M.H., Danilovakaya E.V., Voloshchuk S.G., Zavalishin I.A., Klushnik T.P. "The autoantibody levels to nerve growth factor in blood serum and liquor of patients with neurodegenerative disease". The Intern, symposium "Physiological and Biochemical Basis of Brain Activity", St. Peterburg, Russia, p.96,1994.

5. Brusov O.S., Chekalina N.D., Klushnik T.P. "Nerve growth factor receptor on human platelets: identification and mechanism of platelet activation". European neuropsychopharmacology, v.4, N 3, p.425, 1994.

6. Клюшник Т.П., Козлова И.А., Даниловская E.B., Башина В.М., Симашкова Н.В., Туркова И.Л. "Аутоантитела к фактору роста нервов в крови детей с первазивными расстройствами", XII Российская научная конференция "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях"., Челябинск, Россия, р.56, 1995.

7. Клюшник Т.П., Башина В.М., Горбачевская Н.Л., Даниловская Е.В., Туркова ИЛ., Симашкова Н.Л., Козлова И .А. "Возрастные различия уровня аутоантител к фактору роста нервов в крови здоровых детей". XII Российская научная конференция "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях", Челябинск, Россия, р.55,1995.

8. Брусов О.С., Школьникова М.А., Березницкая В.В., Даниловская Е.В., Павлова О.А., Клюшник Т.П. "Состояние серотониновой системы и системы фактора роста нервов у детей с тахиаритмиями и синдромом Романо-Уорда". 2-ой Международный славянский конгресс по электростииуляции и клинической электорофизиологии сердца. С-Петербург, Россия, с. 48,1995.

, 9. Башина В.М., Горбачевская Н.Л., Клюшник Т.П., Симашкова Н.В., Якупова Л.П., Даниловская Е.В.Дуркова ИЛ., "Критические периоды онтогенеза и их связь с психическими расстройствами" В кн: "Экопатология детского возраста", под ред. Ярыгина В.Н. и др., М., с.283-287,1995.

10. Башина В.М., Горбачевская Н.Л., Клюшник Т.П., Симашкова Н.В., Якупова Л.П., Даниловская Е.В.Дуркова И.Л. "Возрастной фактор в патогенезе инфантильного аутистического психоза (Биологичские маркеры критических периодов и их связь с психическими расстройствами)", в сб: "Исцеление" под ред. Скворцова И А., вып. 2, М., с.440-444, 1995.

11. Клюшник Т.П. "Нейротрофические факторы как возможное эффекторное звено при терапии с использованием фетальных клеток и тканей", в кн: "Трансплантация фетальных тканей и клеток человека" под ред. Сухих Г.Т., Ерина А.Н., с. 103-107, 1996.

^ 12. Чекалина Н.Д., Клюшник Т.П., Брусов О.С., Даниловская Е.В., Дейнеко Н.Л. "Идентификация мест специфического связывания фактора роста нервов на тромбоцитах крови человека и мембранах мозга быка". Бюлл. эксп. биол. мед. 121, 3, 295-297, 1996.

^ 13. Koziova I., Bashina V., Kluscnik T., Simashkova N., Danilovskaya E., Turkova I. "Anti-NGF antibodies in children's sera with pervasive I disorders". X World Congress of Psychiatry, Madrid, August 23-28,

V.2, p. 31-32, 1996.

14. Bashina V., Gorbachevskaya N., Klushnik T., Simashkova N., Yakupova L., Danilovskaya E. "Critical periods of ontogenesis and mental Diseases". X World Congress of Psychiatry, Madrid, August 23-28, V.2, p. 33,1996.

15. Klushnik T.P., Danilovskaya E.V., Ponomareva I.P., Bondar O.E., Sukhikh G.T. "The level of autoantibodies to nerve growth factor in mothers with a history of recurrent abortion and their newborn infants". 3rd Int. Forum of reproductive Immunology, Magdeburg, Germany, June 12-15, p.43,1996.

16. Башина B.M., Козлова И.А., Юпошник Т.П., Симашкова Н.В., Даниловская Е.В., Горбачевская НЛ., Туркова И.Л., Якупова Л.П., Грачев В.В. "Повышение уровня аутоантител к фактору роста нервов в сыворотке крови детей, больных шизофренией". Ж. неврол. и псих. им. С.С. Корсакова, т.97, N1,47-51,1997.

17. Юпошник Т.П., Лидеман Р.Р, Даниловская Е.В. "Аутоантитела к фактору роста нервов при патологии развития нервной системы" Российский Вестник перинат. и педиатр., N3, с.36-40,1997.

18. Завалишин И.А., Захарова М.Н., Юпошник Т.П., Даниловская Е.В., Переседова А.В., Жилова Л.Б. "Исследование антител к фактору роста нервов у больных с рассеянным склерозом и нейродегенеративными заболеваниями". 2-ая Всесроссийская конференция (с международным участием) по психонейроиммунологии, Томск, Россия, с. 13-15, 1997.

19. Klushnik Т., Danilovskaya Е., Kozlova I., Tsutsulkovskaya М., Gnedenko В., Vabischevich N. "Alteration of serum immunoreactivity to brain antigens in patients with schizophrenia", 6th World Congress of Biological Psychiatry, Nice, France, p.225,1997.

20. Klushnik T.P., Danilovskaya E.Y., Galkina N.S., Boravova A.I., Gorbachevskaya N.L. "Anti-nerve growth factor autoantibodies and sensory specific EEG rhythms in young children". 6th World Congress of Biological Psychiatry, Nice, France, p.226, 1997.