Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Аутоантитела к ДНК в сыворотке крови больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Аутоантитела к ДНК в сыворотке крови больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом"

На правах рукописи

Темесген Белайхун Кибрет

АУТОАНТИТЕЛА К ДНК В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКОЙ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань - 2007

003057725

Работа выполнена на кафедре биохимии государственного образовательного Учреждения высшего профессионального образования Казанского государственного университета им. В.И. Ульянова-Ленина

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор Ишмухаметова Диляра Галимовна

Официальные оппоненты- доктор ветеринарных наук,

профессор Госманов Рауис Госманович (заведующий кафедрой микробиологии, вирусологии и иммунологии, Казанская государственная Академия ветеринарной медицины им. Н Э. Баумана)

кандидат биологических наук Уразов Наиль Гумерович (заведующий отделом культивирования и идентификации вирусов Республиканского центра по борьбе с о СПИД и ИБ МЗ РТ, г. Казань)

Ведущая организация: Казанский институт биохимии и биофизики ШЦ РАН

Защита состоится 22 марта 2007г. в 13щ часов на заседании диссертационного Совета Д 212.081.08 при Казанском государственном университете по адресу: г Казань, ул Кремлевская 18, главное здание КГУ, аудитория 209.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке им. Н.И.Лобачевского Казанского государственного университета

Автореферат разослан февраля 2007г.

Ученый секретарь диссертационного Совета, д.б.н.

З.И. Абрамова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

По современным представлениям о природе иммунитета основным назначением иммунной системы является защита организма от внешней и внутренней биологической агрессии. Развитие защитной реакции связано со способностью иммунной системы распознавать чужеродные для данного организма макромолекулы и отличать их от собственных антигенов. С другой стороны, известно, что иммунная система в норме обладает потенциальной способностью вырабатывать антитела к большинству собственных антигенов и в сыворотке крови здоровых людей (Добродеева, Суслонова 1990, Несвижский и др.,1988, Lacroix-Desmazes et al., 1998) и интактных животных (Poverenny et al., 1966) всегда присутствует небольшой уровень аутоантител к собственным антигенам. Нарушение механизмов иммунорегуляции может привести к развитию аутоиммунных процессов в организме с повышением содержания в сыворотке крови аутоантител (ААТ) к собственным антигенам организма, что обычно сопровождается патологическими изменениями в различных органах и тканях (Spartz et al., 1997; Christen et al., 2004). Для большинства аутоиммунных заболеваний (АИЗ) характерно повышение содержания в сыворотке крови ААТ к нативной и (или) денатурированной ДНК, что рассматривается как один из диагностических признаков аутоиммунных заболеваний (Arbuckle et al, 2001; Gill et al., 2003; Sherer et al., 2004).

На различных моделях аутоиммунных патологий продемонстрирована возможность активного участия ААТ к ДНК в развитии заболевания (Сучков и др., 2001, Robin et al., 2006). Показано, что ААТ к ДНК проникают в клетки (Koren et al., 1995; Reichlin et al., 1995), перекрестно реагируя с рецепторами клеточной мембраны, способны запускать апоптоз (Paul et al., 2002). Они обладают цитотоксической активностью (Sasaki et al, 1991, Kramers et al., 1994; Neslin et al., 1998; Kozyr et al.,2002), которая коррелирует с их ДНК-гидролизующей активностью (Сучков и др., 2006). Имеются прямые доказательства повреждающего действия ААТ к ДНК при СКВ на ткань

клубочков почек (Morioka, 1996; van Brüggen et al, 1997; Limaye, Mohan, 2004; Zeng et al., 2004).

В последние годы появились сведения об обнар; аутоиммунных процессов при вирусных заболеваниях, кото з АИЗ (Hansen et al., 1998). Повышение содержания в сывор компонентам собственных клеток и тканей, в.том числе к сыворотке крови при вирусном гепатите (Pawlotsky et al (Massabki et al., 1997; Zandman-Goddard, Shoenfeld, 2002), ви (Гармашова и др., 2004), парвавирусной инфекции (Kerr et al.

Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (. РНК-содержащими хантавирусами (Raftery, 2002; Miyai Lednicky, 2003), является одним из опасных, характериз; летальностью, вирусных заболеваний. Для ГЛПС характерно органов и систем, в особенности почек, вследствие по: микроциркуляторного русла (Сиротин, 1994). Одним из повреждения почек при ГЛПС являются циркулирующие им (ЦИК), содержащие, наряду с антителами к вирусу, pai. гиперактивации иммунной системы, в том числе аутоантит антигенам (Сомова-Исачкова и др., 2003).

В литературе отсутствуют сведения по характ аутоантител при ГЛПС, и, неизвестно, присутствуют ли у сыворотке крови и в составе ЦИК ААТ к ДНК. Принимая литературы о повышении уровня содержания ААТ к ДНК инфекциях, мы предполагаем, что при инфицировании сыворотке крови больных также могут появиться ААТ способны вносить существенный вклад в развитие нефропа СКВ (Gaynor et al., 1997, Сучков и др., 2005). Выяснение во ААТ к ДНК в развитии ГЛПС является одним из подходов ААТ к ДНК при вирусных инфекциях и поиска новых методе

у юг

ос:

во

. пр i

Witte et al., 1998;

'жении признаков ые не относятся к отке крови ААТ к ДНК, выявлено в , 1994), при ВИЧ усном энцефалите 1996). Г|ЛПС), вызываемая moto et.al, 2003;

щихся высокой поражение многих феждения сосудов новных факторов рунные комплексы личные продукты ла к собственным

еристике спектра больных ГЛПС в внимание данные многих вирусных хантавирусами в к ДНК, которые гии как у больных - можности участия ¡я понимания роли в лечения.

Цель исследования: выяснить возможность участия аутоантител к нативной и денатурированной ДНК в развитии геморрагической лихорадки с почечным синдромом.

Были поставлены следующие задачи:

• определить уровень содержания и ^М ААТ к нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС и здоровых лиц;

• выделить из индивидуальных образцов сыворотки крови больных ГЛПС и здоровых лиц циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) и выяснить присутствие в них ААТ к ДНК методом ИФА;

• исследовать ДНК-гидролизующую активность ААТ в сыворотке крови больных ГЛПС;

• выделить из сыворотки крови очищенные фракции ААТ к ДНК методом аффинной хроматографии на ДНК-сорбентах и определить их удельную ДНК-связывающую активность.

Научная новизна

В работе впервые исследованы ААТ к ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС и дана их характеристика.

Во всех исследованных образцах сыворотки крови больных ГЛПС, в отличие от здоровых лиц, выявлена ДНК-абзимная активность, характерная для цитотоксических ААТ к ДНК.

Обнаружено, что уровень содержания ^М и ААТ к дДНК в

сыворотке крови больных ГЛПС достоверно превышает уровень их содержания в сыворотке крови здоровых лиц.

Установлен ранее неизвестный факт присутствия ААТ к ДНК в составе ЦИК в сыворотке крови больных ГЛПС. Практическая значимость

Обнаруженное в работе достоверное повышение уровня содержания ААТ к дДНК в сыворотке крови больных ГЛПС по сравнению с уровнем их содержания у здоровых лиц может иметь важное клинико-диагностическое значение. Присутствие ААТ к ДНК в составе ЦИК у больных ГЛПС указывает

на то, что эти аутоантитела вовлечены в патогенез заболеваний что необходимо учитывать при выборе стратегии иммунокоррекции при ГЛПС Положения, выносимые на защиту:

1. Установлено, что в сыворотке крови больных ГЛПС присутствуют ААТ к нативной и денатурированной ДНК. Уровень содержания и ^М ААТ к денатурированной ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС достоверно превышает уровень их содержания в сыворотке крови здоровы:

2. Выявленные существенные различия свойств ААТ к ДНК больных ГЛПС и здоровых лиц, свидетельствуют о возможности участия ААТ к ДНК в развитии заболевания.

Апробация работы

Основные результаты исследований докладывав

с лиц.

сыворотки крови потенциальной

международной научной конференции «Ферменты микроорганизмов:

структура, функции, применение»,- Казань, 2005; 9-ой Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биолоп века».- Пущино, 2005; 10-ой Международной Пущинской шкс молодых ученых «Биология - наука XXI века».- Пу: всероссийском научном форуме «Дни иммунологии»,- Санкт-Петербург, 2006; а также на ежегодных итоговых научных конференциях Казанского государственного университета в 2004-2005 гг.

Публикации По материалам диссертации опубликовано 6 работ.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 117 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и метода результатов и их обсуждения с 25 рисунками и 10 таблицами, выводов и списка цитируемой литературы с 155 наименованиями.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследования явились образцы сыворотки крови больных

ГЛПС, находившихся на стационарном лечении в городе!

инфекционной больнице г. Казани. Диагноз установлен на основании

6

ись

на

XIII

Международной ля - наука XXI ле- конференции щино, 2006; X

клинических и серологических данных. В качестве контроля использовали образцы сыворотки крови практически здоровых людей, проходящих плановые медицинские осмотры в лечебных учреждениях г. Казани, не страдающих аутоиммунными заболеваниями. В качестве положительного стандарта при определении ААТ к ДНК использовали сыворотки крови больных СКВ из республиканской клинической больницы № 2 г. Казани.

Содержание ААТ к ДНК определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА), оптимизированным ранее в нашей лаборатории (Саттарова и др., 1994). В качестве антигена использовали нДНК эритроцитов цыплят ("11еапаГ, Венгрия), о нативности ДНК судили по величине гиперхромного эффекта. Денатурированную ДНК (нДНК) получали методом термической денатурации. В качестве вторичных антител использовали меченые пероксидазой антитела против иммуноглобулинов человека ("Сорбент Лтд", Россия). Уровень ответа цветной реакции ИФА измеряли на спектрофотометре "МиШ8сап"('Т1ол¥", Великобритания) при длине волны 492нм (ОП492).

Для стандартизации результатов всей серии экспериментов каждый раз параллельно анализировали одну и ту же положительно реагирующую с ДНК сыворотку крови больных СКВ с высоким содержанием ААТ к ДНК, обозначенный как "стандарт". Содержание ААТ к ДНК в сыворотке крови выражали в относительных единицах (отн.ед.), которые вычисляли, как отношение ОП492ОПЫТ/ОП492 стандарт. Для анализа выборок индивидуальных значений уровня содержания ААТ к ДНК применяли структурное среднее -медиану и коэффициент асимметрии (Акберова, 20046; Лакин,1990). Достоверность различий оценивали с использованием непараметрических ранговых критериев Краскелла-Уоллиса и Манна-Уитни (Акберова, 2004а).

Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) из сыворотки крови выделяли методом преципитации ПЭГ-6000 на ОДМ боратном буфере, рН 8,4 (Фримель, 1987). Для определения ААТ к нДНК и дДНК в составе ЦИК их диссоциировали добавлением ОДМ боратного буфера рН 10,2 с последующей инкубацией при 37°С в течение 1 часа (Тагпаска е(:. а1., 2002).

и ААТ в качестве плазмиды pBR322 >торых определяли в течение 40 минут

часов при 37°С с 1енные интервалы акции подвергали согласно методике

Для определения ДНК-гидролизующей активност

субстрата использовали коммерческий препарат ДНК («СибЭнзим», Россия). Образцы сывороток крови, в кс абзимную активность, предварительно прогревали при 56°С для инактивации сывороточных ДНКаз.

Гидролиз плазмидной ДНК проводили в течение 15 отбором аликвот из реакционной смеси через опреде. времени. Для оценки ДНКазной активности продукты р электрофорезу в 0,7% агарозном геле ("Serva", Германия) Shuster и др. (Shuster et al., 1992). Окрашивание гелей приводили в растворе этидия бромида и фотографировали в проходящем УФ-свете (Гааль др., 1982) в системе Gel-Imager-2 (Вектор Бест, Россия). Для вычисления количественного соотношения форм ДНК в гидролизате использовали программу Scion Image (Pió et al, 1998).

Выделение из сыворотки крови и получение фракций, обогащенных IgG ААТ кДНК включало в себя осаждение иммуноглобулинов сульфатом аммония, гель-фильтрацию на колонке с акрилексом Р-20С концентрирование (мембранные конусы"Агшсоп",США), "Pierce", США). Ионообменную хроматографию проводили (Леках и др., 1997), и аффинную хроматографию - на Фракции собирали с помощью коллектора фракций Muí системой ("LKB", Швеция).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Нами исследовано методом ИФА содержание ААТ kj|; нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови 60 6i

здоровых лиц. На рис. 1 представлена частота встречаемое! и индивидуальных значений содержания ААТ к нДНК (А) и дДНК (Б). Из группа больных и здоровых лиц в целом не отличаются индивидуальных уровней содержания ААТ к нДНК (рис.1, А).

(Остерман, 1985), диализ (кассеты на QAE- сефадексе ДНК- целлюлозе, irac с оптической

ассов IgG и IgM к >льных ГЛПС и 25

эисунка видно, что по распределению

отн.ед.

отн.ед.

Рис. 1. Частота встречаемости индивидуальных уровней содержания ДАТ к нДНК (А) и дДНК (Б) в сыворотке крови больных ГЛПС и здоровых лиц (в % от обследованных) (----ГЛПС, - здоровые)

В случае ЛАТ к дДНК (рис 1. Б) у большинства здорошх лиц уровень содержания ААТ к дДНК не превышает 0,45 отн. ед , в то время как у больных содержания ААТ к дДНК находится в основном в пределах 0,45- 0,85 отн. ед.

В группе больных ГЛПС среднее значение содержания медиане составляет 0,10, то есть близко к норме, и 95%

значений не превышает пороговые пределы данного показателя в норме (рис.2).

Совершенно иная картина выявляется при сравнении уровня сс

ААТ к нДНК по индивидуальных

дДНК в сыворотке крови больных ГЛПС и здоровых лиц Средний уровень

содержания ААТ к дДНК по медиане у больных ГЛПС состав, что в 2 раза превышает аналогичный показатель у здоровых ГЛПС 50% индивидуальных показателей содержания ААТ к дДНК (между 25-м

и 75-м перцентилями) находятся в пределах 0,52-0,69, превышает пороговые значения нормы

Приведенные данные свидетельствуют о том, что человека хантавирусом и последующее развитие ГЛПС активацией аутоиммунных процессов в организме и усиление\ кдДНК.

0,90 1

= ОД

0,70 0,60 0,50 0,40 ' 0,30 -0,20 0,10 -0,00

- 97,5-й перцентиль

— 2.5-й перцентиль О медиана

ААТ к дДНК

ААТ к нДНК

больные здоровые

1-1-

больные здоровье

держания ААТ к

тяет 0,60 отн ед., лиц. У больных

что достоверно

инфицирование сопровождаются продукции ААТ

Рис. 2. Уровень содержания ААТ к ДНК у больных и здоровых лиц

"ЛПС

В литературе имеются данные, косвенно указывающие на возможность участия в регуляции аутоиммунных процессов при вирусных инфекциях ААТ к ДНК, принадлежащих к классу ^М (Воеэ е1 а!., 2000). В связи с этим нами исследованы уровни содержания ^М ААТ к нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС и здоровых лиц (рис.3).

Л %Ч

VI' , С)-''' й-'"' О" О? Ч-.

Л4' Ф' ^

Л отн.ед.

%

Л £ ф (О) ф (¿V <ь ^ г<р ^

О' Ч- Ч* ч- ч* , ч->

^ ^ %Ч- с^ <$>'

^ о? 0)? «Vх о,? V" \?отед.

Рис. 3. Частота встречаемости индивидуальных уровней содержания ^М ААТ к нДНК (А) и дДНК (Б) в сыворотке крови больных ГЛПС и здоровых лиц ( в % от обследованных)(----ГЛПС, - здоровые)

Встречаемость различных уровней индивидуальных значен: ш содержания ^М ААТ к нДНК (рис. 3, А) в группах больных ГЛПС и здоровых лиц сходна. Частота встречаемости уровней содержания ^М ААТ к дДНК (рис. 3, Б) в группе больных заметно смещена в область более высоких значений.

Средние уровни содержания 1§М ААТ к нативной и денатурированной ДНК, рассчитанные по медиане и перцентилям, представлены на рис. 4. Различия средних значений содержания ^М ААТ к нДНК в сыворотке крови больных (0,53 ± 0,27) и здоровых лиц (0,41 ± 0,25) недостоверны. По ААТ к дДНК средний уровень 1§М ААТ у больных (0,71 ± 0,22) достоверно превышает средний уровень 1§М ААТ к дДНК у здоровых лиц (0,57 ± 0,19).

ч 1,40

I 1,20 -1,00 -0,80 -0,60 " 0,40 " 0,20 -0,00

ААТкнДНК

-97,5-й перцемту —2,5-й перцентто]! О медиана

ААТкдДНК

больные здоровые больные здоров

Рис. 4. Уровень содержания 1§М ААТ к ДНК у больных и здоровых лиц

В связи с возможностью участия ^М ААТ в регуляции Аутоиммунных процессов, представляло интерес выяснить корреляционную связь между содержанием и ^М ААТ к ДНК в сыворотке крови болькых ГЛПС. По зависимости уровня содержания ААТ к нДНК от ^М группы больных можно разделить на 2 подгруппы. В первой из них, которая составляет 43,3 %

12

ые

ГЛПС

от обследованных лиц, выявляется прямая корреляция, во второй подгруппе (33.3%) - обратная (коэффициенты корреляции 0,51 и - 0,51 соответственно). Неоднородность группы может быть связана как с индивидуальными особенностями так и с тем, что пациенты находятся на разных стадиях заболевания. Положительная корреляция (r=0,58) IgG и IgM ААТ к дЦНК наблюдается у 58% больных ГЛПС, что указывает на более тесную взаимосвязь IgG и IgM аутоантител к дДНК. Эти данные указывают на возможность участия IgM в усилении синтеза IgG ААТ к дДНК. Они не согласуются с результатами авторов, которые показали, что IgM способствуют снижению интенсивности аутоиммунных процессов (Boes et al., 2000). Мы полагаем, что взаимосвязь IgG и IgM неоднозначна и зависит от многих других факторов, прежде всего, от стадии развития заболевания.

Известно, что ГЛПС является иммунокомплексной патологией, и повреждению мелких сосудов способствуют иммунные комплексы (Сомова -Исачкова и Плехова, 2003). Мы предполагаем, что в повреждении сосудистой системы почек при ГЛПС могут участвовать ИК, содержащие цитотоксические ААТ к ДНК как это показано при СКВ (Nezlin et al., 1999; Zeng et al, 2004). В литературе отсутствуют какие-либо сведения о присутствии ААТ к ДНК в составе ЦИК при ГЛПС.

Уровень содержания ЦИК в сыворотке крови определяли методом осаждения ПЭГ-6000 с некоторыми модификациями (Golda et. al., 2004). Среднее значение содержания ЦИК в сыворотке крови больных ГЛПС (0,21±0,11) достоверно превышает (р<0,05) средний уровень их содержания у здоровых лиц (0,08±0,07).

Наличие IgG ААТ к нативной и денатурированной ДНК в составе ЦИК исследовали в 34 образцах сыворотки крови больных ГЛПС. Из образцов сыворотки выделяли ЦИК (Фримель, 1987), после диссоциации определяли в них ААТ к ДНК методом ИФА. В составе ЦИК, выделенных из сыворотки крови больных ГЛПС, обнаруживаются ААТ как к нДНК, так и к дДНК, основная часть ААТ к ДНК представлена аутоантителами к дДНК (рис.5).

0,50 п

нДНК дДНК

Рис. 5. Уровень содержания ААТкДНК в ЦИК у больных ГЛПС (й = 34)

Нам и исследована зависимость содержания АА'Г к нативной и денатурированной ДНК в составе ЦИК от уровня их содержания в образцах сыворотки крови больных ГЛПС. Существует прямая зависимость уровня содержания АА'Г к дДНК в ЦИК от их содержания в сыворотке крови (рис.6, Б). В отношении ААТ к нДНК корреляция выражена слабо (рис.6, А). Это свидетельствует о том, что присутствие ААТ к ДНК в составе ЦИК не является артефактом и отражает уровень содержания ААТ к ДНК в сыворотке крови.

. 0,12 и ч

и

ё о,ю ■

о

| 0,08 -и

Н 0,06 i <

< 0,04 -0,02 "

0,00

г - 0,028 п = 34

♦ ♦

♦

>4 *

. 1,00 -§ 0,90 -

о 0,80 " Я 0,70 " § 0,60 "

Н °'50 "

< 0,40 " ' 0,30 -0,20 " 0,10 " 0,00

♦

* г = 0.46 п= 34 ♦ р<0,05

0,00 0,10 0,20 0,30 0,40 ААТ в сыворотке, опт.ед.

0,30 0,50 0,70 0,90 ААТ в сыворотке, опт.ед.

Рис. 6. Зависимость уровня содержания ААТ к нДНК (А) и дДНК (Б)

в ЦИК от их содержания в сыворотке крови больных ГЛПС

14

присутствие н составе ЦИК при ¡VIIК АЛ"1 к ДНК указывает на возможность их участия в развитии почечного синдрома ею механизму прямого цитотоксического действия АЛТ к: ДНК на эндотелиалыше клетки микроциркуляторного русла почек.

Известно, что цвтотоксичоская активность ААТ к ДНК коррелирует с их ЯбзйМНОЙ активностью (Когуг е! а!.. 2002). В связи с этим нами исследована абзимная активность в сыворотке крови 16 больных ГЛЛС и 16 моровых лиц. Ио всех исследованных 16 сыворотках крови больных Г Л ПС обнаружена ДНК-абзимпая активность. В 4 из 1 & образцов сыворотки крови здоровых лиц также выявлена небольшая абзимная активность. На рис. 7 представлен! одна из з л ектро форе грамм с результатами исследования абзимноЙ активности сыворотки крови больных ! Л ПС И здоровых доноров. Все 5 образцов сыворотки крови больных ГЛПС проявляют ярко выраженную ДЕ 1Казиую активность, превращая супсрспирализованную (ее) ДНК в кольцевую форму (дорожки 9-13), как и сыворотка крови больной СКВ (дорожка 8). При инкубации с образцами сыворотки крови здоровых лиц (дорожки 2-6) основная часть ссДНК сохраняется. Из 5 образцов сыворотки крови здоровых лиц в двух выявляется ДНКазная активность (дорожка 4 и 5).

! 2 3 4 5 6 ~ 3 9 10 Л 12 13

Рис.7. Злектрофореграмма продуктов гидролиза ДНК плазмиды рВИ322 после ее 15-часовой инкубации с сыворотками крови больных ГЛПС и здоровых лиц (1 - негретая, ГЛПС; 2-6, норма; 7- контроль (ДНК рВИЗ22); 8-СКВ; 9-13, ГЛПС

(я-сунертнрализованная: п - котьпевая: в - катеианы; г - линейная)

Про,

Это можно объяснить наличием у них скрытых аутои\ Об обнаружении абзимной активности в некоторых образц! здоровых доноров сообщают и другие авторы (Власов и др.,

На рис. 8(А) представлены результаты анализа плазмидной ДНК в динамике с отбором проб через О инкубации с сывороткой крови. Через 4 часа инкубации с ГЛПС 80% ссДНК превращается в кольцевую форму, сывороткой крови здорового донора за это время лишь 30/ превращается в кольцевую форму.

мунных процессов, ах сыворотки крови 1999)

дуктов гидролиза 4, 6 и 8 часов ее сывороткой крови при инкубации с о плазмидной ДНК

0

0 4 6: время инкубации (часы)

ьй Д Ч >8 о

03

о Я" л

4 о

ьв о

5 §

*

а. и ч о о

45 п 40 35 30 Н 25 20 Н

15 10 -5 "

4-

О 10 20 3

д-

Д'

) 40 50 60

время инкубации (мин.)

Рис.8. Динамика гидролиза плазмидной ДНК при инкуб крови (А- ГЛПС, □ - здоровый донор) — суперспирализованная ДНК, — кольцевая форма ДНК

ации с сывороткой

Различие абзимной активности в сыворотке крови больных ГЛПС и здоровых лиц особенно четко выявляется при исследовании динамики превращения ссДНК в кольцевую форму при краткосрочной инкубации плазмидной ДНК с образцами сыворотки крови (рис.8, Б). Уже в первые 30 минут инкубации с сывороткой крови больного ГЛПС более 20% плазмидной ДНК превращается в кольцевую форму, а через 60 минут количество кольцевой формы ДНК превышает 40%. За это время абзимная активность сыворотки крови здорового донора еще не проявляется.

Аутоантитела к ДНК в сыворотке крови могут находиться как в свободном так и в "скрытом" состоянии, что связано с их способностью связываться с неродственными антигенами, образуя низкоаффинные комплексы. Скрытые аутоантитела можно выявить методом ионообменной хроматографии на колонке с С>АЕ-сефадексом (Леках и др., 1991, Баепко е! а1., 1992). Поэтому перед фракционированием на ДНК-сорбентах иммуноглобулины, выделенные из сыворотки крови, предварительно подвергали процедуре очистки на С?АЕ-сефадексе. Фракцию иммуноглобулинов элюировали 1М ЫаС1, диализовали против буфера А, концентрировали и наносили на колонку с ДНК-сорбентом (Сизякина и др., 1996).

На рис.9 представлены результаты аффинной хроматографии иммуноглобулинов, выделенных из сыворотки крови здоровых лиц (А) и больных ГЛПС (Б) на дДНК-сорбенте. Не связывающиеся с сорбентом неспецифические белки (фракция I) удаляли буфером А (0,01М трис-НС1, 0.12М ИаС1, 0.002М ЭДТА, рН 7,2). Прочно связанные с сорбентом ААТ к ДНК элюировали 0,1 М глициновым буфером рН 2,3 (фракция И). При последующей промывке сорбента буфером А элюируются следовые количества кислых белков (фракция III). Как видно из рисунка, прочно связывающаяся с дДНК сорбентом фракция ААТ к дДНК у больных ГЛПС (рис 9,Б) значительно более выражена по сравнению со сходной фракцией у здоровых лиц (рис 9,А). Хроматографические профили на нДНК сорбенте иммуноглобулинов,

выделенных из сыворотки крови здоровых лиц и больных ГЛПС, были идентичными (данные не представлены).

11111 III III III НИ ИМИ 111111 III III 1П III П1 III 111111.

1 5 9 13 17 21 25 29 33 37 41 45 49 53 57

№

II III 191 III II

61 65 69 фракции

1 5 9 13 17 21 25 29 33 37 41 45 49 53 ^7 61 65 69

фракции

Рис. 9. Аффинная хроматография фракции сыворотки крови здоровых (А) и больных ГЛПС (Б) на дДНК-целлюлозе

Результаты определения в очищенных фракциях ДАТ к л ЛИК методом ИФА показали, что удельная активность ААТ к дДНК у больных ГЛПС в 2,5 раза выше по сравнению со здоровыми донорами (рис 10).

^ 6,00 -

я

4)

Ё 4,50 -

< 3,00 -

а

К 1,50"

0,00 -

Рис. 10. Удельная активность ААТ к нДНК и дДНК в очищенных фракциях

здоровые больные

□ нДНК □ дДНК

Таким образом, результаты аффинной очистки аутоантител на ДНК-сорбеитах подтверждают полученные нами ранее на дельных сыворотках данные о повышении содержания ААТ к дДНК в сыворотке крови при развитии

ВЫВОДЫ

1. В сыворотке крови больных ГЛПС обнаружены ААТ к нативной и денатурированной ДНК, принадлежащие к и изотипам. Уровень содержания ААТ к нативной ДНК близок к значениям данного показателя в группе здоровых лиц. Средний уровень содержания ЗцС ААТ к денатурированной ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС в 2 раза превышает уровень их содержания в сыворотке крови здоровых лиц.

2, У 58% обследованных больных выявлена положительная корреляция между содержанием ААТ к дДНК классов 1зО и ^М. Для ААТ к нДНК у 43 % больных корреляция .между содержанием 1§0 и ^М носит положительный, а у

ГЛПС.

33% - отрицательный характер, что, повидимому, связан стадиях развития заболевания.

3. Из сыворотки крови больных ГЛПС и здоровых лиц хроматографии на ДНК-сорбентах выделена фракция I] Удельная дДНК связывающая активность этой фракции аутЬ; значительно выше по сравнению с соответствующей фракци

4. В составе циркулирующих иммунных комплексов (Щ образцов сыворотки крови больных ГЛПС обнаружены денатурированной ДНК, что свидетельствует о возможное этих аутоантител в развитии нефрита при отл микроциркуляторном русле почек.

5. Во всех исследованных сыворотках крови больных Г здоровых лиц, выявлена ДНК-абзимная активность, цитотоксических ААТ к ДНК, что является дополнительнь возможности участия ААТ к ДНК в повреждении почек при

о с различиями в

методом аффинной ААТ к дДНК. •антител при ГЛПС зй у здоровых лиц. ПС), выделенных из ДАТ к нативной и и прямого участия эжении ЦИК в

ЛПС, в отличие от характерная для м подтверждением "ЛПС.

микроорганизмов:

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ

1. Коннова Н.В. Аутоантитела к ДНК в сыворотке крови при рассеянном склерозе / Н.В. Коннова, Б.К. Темесген, Д.Г. Ишмухаметови // Материалы XIII международной научной конференции «Ферменты структура, функции, применение». - Казань, 2005. - С.48-49.

2. Темесген Б.К. Аутоиммунный компонент у больных геморрагической лихорадкой / Б.К. Темесген, Д.Г. Ишмухаметова // 9-я Международная пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология - Пущино, 2005. - Тезисы докладов. - С.172.

3. Темесген Б.К. Аутоантитела к ДНК класса IgM б больных геморрагической лихорадкой / Б.К. Темесген,

Ишмухаметова // 10-я Международная пущинская школа-конференция

молодых ученых «Биология - наука XXI века». - Пущт докладов. - С.165.

- наука XXI века».

сыворотке крови Э.В. Власова, Д.Г.

о, 2006. - Тезисы

4. Ишмухаметова Д.Г. ДНК-абзимы в сыворотке крови больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / Д.Г. Ишмухаметова, Б.К. Темесген., JI.P. Гизатуллина, В.Х. Фазылов // X всероссийский научный форум «Дни иммунологии» - Санкт- Петербург, 2006. Сборник тезисов. -Медицинская иммунология. - 2006. - Т.8. - №. 2-3. - С.267-268.

5. Ишмухаметова Д.Г. Аутоантитела к РНК в сыворотке крови здоровых людей и опухоленосителей / Д.Г. Ишмухаметова, A.C. Зайнуллина, Б.К. Темесген И Ученые записки Казан, гос. ун-та. - 2006. - Т. 148. - Кн.2. - С.73-82.

6. Ишмухаметова Д.Г. Аутоантитела к ДНК в сыворотке крови больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / Д.Г. Ишмухаметова, Б.К. Темесген, О.В. Власова, Ф.А. Бабушкина // Медицинская иммунология. - 2006. - Т.8. - №.5-6. - С653-658.

Email: Belayhurt.Temesgen@ksu.ru

Факс:+7 (843) 2387121

Отпечатано в ООО «Печатный двор», г. Казань, ул. Журналистов, ¡/16, оф.207

Тел: 272-74-59, 541-76-41, 541-76-51. Лицензия ПД№7-0215 от 01.11.2001 г. Выдана Поволжским межрегиональным территориальным управлением МПТР РФ. Подписано в печать 16.02.2007г. Усл. п.л 1,31. Заказ № К-6331. Тираж 100 экз. Формат 60x841/16. Бумага офсетная. Печать - ризография.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Темесген Белайхун Кибрет

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Аутоантитела к ДНК.

1.1.1. Полиреактивность A AT к ДНК.

1.1.2. Происхождение ААТ к ДНК.

1.1.3. Каталитическая активность ААТ к ДНК.

1.2. Взаимосвязь вирусных инфекций и аутоиммунитета.

1.2.1. Индукция аутоиммунных процессов при вирусных инфекциях.

1.2.2. Аутоантитела к ДНК при вирусных инфекциях.

1.2.3. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) краткая характеристика).

1.2.4. Изменения в иммунной системе при ГЛПС.

1.2.5. Циркулирующие иммунные комплексы при ГЛПС.

1.3. Участие иммуноглобулинов М (IgM) в регуляции иммунного ответа.

1.3.1. Функциональные свойства IgM.

1.3.2. Роль IgM в регуляции иммунного ответа на вирусные

Инфекции.

1.3.3. Роль IgM в регуляции аутоиммунного процесса.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Оборудование и реактивы.

2.2. Объект исследования.

2.3. Определение аутоантител к ДНК методом ИФА.

2.3.1. Подбор оптимальной концентрации конъюгата.

2.3.2. Статистическая обработка результатов.

2.4. Выделение циркулирующих иммунных комплексов.

2.5. Определение ДНК- абзимной активности в сыворотке крови.

2.6. Выделение и очистка IgG и IgM иммуноглобулинов сыворотки крови.

2.6.1 Осаждение иммуноглобулинов сульфатом аммония.

9 2.6.2 .Обессоливание СА-фракции методом гель-фильтрации.

2.6.3. Хроматография на колонке с QAE-сефадексом А-50.

2.6.4 Аффинная хроматография ААТ к ДНК на нДНК и дДНК-целлюлозе.

2.6.5 Выделение IgM ААТ к ДНК.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Содержание ААТ к нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС и здоровых лиц.

3.1.1. Содержание IgG ААТ к ДНК в сыворотке крови при ГЛПС.

3.1.2. Содержание IgM ААТ к ДНК в сыворотке крови при ГЛПС.

3.1.3. Зависимость содержания IgG ААТ к ДНК от уровня содержания IgM.

3.2. Характеристика ЦИК в сыворотке крови больных и здоровых лиц.

3.2.1. Содержание ЦИК в сыворотке крови больных ГЛПС.

3.2.2. Определение ААТ к ДНК в составе ЦИК.

3.2.3. Зависимость содержания ААТ к ДНК в ЦИК от уровня их содержания в сыворотке крови больных ГЛПС.

3.3. ДНК-абзимная активность в сыворотке крови больных ГЛПС.

3.3.1. Определение абзимной активности в сыворотке крови.

3.4. Выделение и характеристика IgG ААТ к ДНК.

3.4.1. Определение удельной активности IgG ААТ к ДНК.

3.5. Выделение и характеристика IgM ААТ к ДНК.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Аутоантитела к ДНК в сыворотке крови больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом"

Актуальность проблемы

По современным представлениям о природе иммунитета основным назначением иммунной системы является защита организма от внешней и внутренней биологической агрессии. Развитие защитной реакции связано со способностью иммунной системы распознавать чужеродные для данного организма макромолекулы и отличать их от собственных антигенов. С другой стороны, известно, что иммунная система в норме обладает потенциальной способностью вырабатывать антитела к большинству собственных антигенов и в сыворотке крови здоровых людей (Добродеева, Суслонова 1990, Несвижский и др., 1988, Lacroix-Desmazes et al., 1998) и интактных животных (Poverenny et al., 1966) всегда присутствует небольшой уровень аутоантител к собственным антигенам. Нарушение механизмов иммунорегуляции может привести к развитию аутоиммунных процессов в организме с повышением содержания в сыворотке крови аутоантител (ААТ) к собственным антигенам организма, что обычно сопровождается патологическими изменениями в различных органах и тканях (Spartz et al., 1997; Christen et al., 2004). Для большинства аутоиммунных заболеваний (АИЗ) характерно повышение содержания в сыворотке крови ААТ к нативной и (или) денатурированной ДНК, что рассматривается как один из диагностических признаков аутоиммунных заболеваний (Arbuckle et al, 2001; Gill et al., 2003; Sherer et al., 2004).

На различных моделях аутоиммунных патологий продемонстрирована возможность активного участия ААТ к ДНК в развитии заболевания (Сучков и др., 2001, Robin et al., 2006). Показано, что ААТ к ДНК проникают в клетки

Koren et al., 1995; Reichlin et al., 1995), перекрестно реагируя с рецепторами клеточной мембраны, способны запускать апоптоз (Paul et al., 2002). Они обладают цитотоксической активностью (Sasaki et al, 1991, Kramers et al., 1994; Nezlin et al., 1999; Kozyr et al., 2002), которая коррелирует с их ДНК-гидролизующей активностью (Сучков и др., 2006). Имеются прямые доказательства повреждающего действия ААТ к ДНК при СКВ на ткань клубочков почек (Morioka, 1996; van Bruggen et al, 1997; Witte et al., 1998; Limaye, Mohan, 2004; Zeng et al., 2004).

В последние годы появились сведения об обнаружении признаков аутоиммунных процессов при вирусных заболеваниях, которые не относятся к АИЗ (Hansen et al., 1998). Повышение содержания в сыворотке крови ААТ к компонентам собственных клеток и тканей, в том числе к ДНК, выявлено в сыворотке крови при вирусном гепатите (Pawlotsky et al., 1994), при ВИЧ (Massabki et al., 1997; Zandman-Goddard, Shoenfeld, 2002), вирусном энцефалите (Гармашова и др., 2004), парвавирусной инфекции (Kerr et al., 1996).

Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС), вызываемая РНК-содержащими хантавирусами (Raftery, 2002; Miyamoto et.al, 2003; Lednicky, 2003), является одним из опасных, характеризующихся высокой летальностью, вирусных заболеваний. Для ГЛПС характерно поражение многих органов и систем, в особенности почек, вследствие повреждения сосудов микроциркуляторного русла (Сиротин, 1994). Одним из основных факторов повреждения почек при ГЛПС являются циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК), содержащие, наряду с антителами к вирусу, различные продукты гиперактивации иммунной системы, в том числе аутоантитела к собственным антигенам (Сомова-Исачкова и др., 2003).

В литературе отсутствуют сведения по характеристике спектра аутоантител при ГЛПС, и, неизвестно, присутствуют ли у больных ГЛПС в сыворотке крови и в составе ЦИК ААТ к ДНК. Принимая во внимание ► данные литературы о повышении уровня содержания ААТ к ДНК при многих вирусных инфекциях, мы предполагаем, что при инфицировании хантавирусами в сыворотке крови больных также могут появиться ААТ к ДНК, которые способны вносить существенный вклад в развитие нефропатии как у больных СКВ (Gaynor et al., 1997, Сучков и др., 2005). Выяснение возможности участия ААТ к ДНК в развитии ГЛПС является ' одним из подходов для понимания роли ААТ к ДНК при вирусных инфекциях и поиска новых методов лечения.

Цель исследования: выяснить возможность участия аутоантител к нативной и денатурированной ДНК в развитии геморрагической лихорадки с почечным синдромом.

Были поставлены следующие задачи:

• определить уровень содержания IgG и IgM ААТ к нативной иденатурированной ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС и здоровых лиц;

• выделить из индивидуальных образцов сыворотки крови больных ГЛПС и здоровых лиц циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) и выяснить присутствие в них ААТ к ДНК методом ИФА;

• исследовать ДНК-гидролизующую активность ААТ в сыворотке крови больных ГЛПС;

• выделить из сыворотки крови очищенные фракции IgG и IgM ААТ к ДНК методом аффинной хроматографии на ДНК-сорбентах и определить их удельную ДНК-связывающую активность.

Научная новизна

В работе впервые исследованы ААТ к ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС и дана их характеристика.

Во всех исследованных образцах сыворотки крови больных ГЛПС, в отличие от здоровых лиц, выявлена ДНК-абзимная активность, характерная для цитотоксических ААТ к ДНК.

Обнаружено, что уровень содержания ААТ к дДНК в сыворотке крови больных ГЛПС достоверно превышает уровень их содержания в сыворотке крови здоровых лиц.

Установлен ранее неизвестный факт присутствия ААТ к ДНК в ЦИК в сыворотке крови больных ГЛПС.

Практическая значимость

Обнаруженное в работе достоверное повышение уровня содержания ААТ к дДНК в сыворотке крови больных ГЛПС по сравнению с уровнем их содержания у здоровых лиц может иметь важное клинико-диагностическое значение.ПрисутствиеААТ к ДНК в составе ЦИК у больных ГЛПС указывает на то, что эти аутоантитела вовлечены в патогенез заболевания, что необходимо учитывать при выборе стратегии иммунокоррекции при ГЛПС.

Положения, выносимые на защиту:

1 .Установлено, что в сыворотке крови больных ГЛПС присутствуют ААТ к нативной и денатурированной ДНК

2. Выявленные существенные различия уровня содержания и свойств ААТ к ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС и здоровых лиц, свидетельствуют о потенциальной возможности участия ААТ к ДНК в развитии заболевания.

Апробация работы

Основные результаты исследований докладывались на XIII международной научной конференции «Ферменты микроорганизмов: структура, функции, применение».- Казань, 2005; 9-ой Международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века».- Пущино, 2005; 10-ой Международной Пущинской школе> конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века».- Пущино, 2006; X всероссийском научном форуме «Дни иммунологии». - Санкт-Петербург, 2006; а также на ежегодных итоговых научных конференциях Казанского государственного университета в 2004-2005 гг.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 117 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения с 25 рисунками и 10 таблицами, выводов и списка цитируемой литературы с 165 наименованиями.

По материалам диссертации опубликовано 6 работ.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Темесген Белайхун Кибрет

выводы

1. В сыворотке крови больных ГЛПС обнаружены ААТ к нативной и денатурированной ДНК, принадлежащие к IgG и IgM изотипам. Уровень содержания ААТ к нативной ДНК близок к значениям данного показателя в группе здоровых лиц. Средний уровень содержания IgG ААТ к денатурированной ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС в 2 раза превышает уровень их содержания в сыворотке крови здоровых лиц.

2. У 58% обследованных больных выявлена положительная корреляция между содержанием ААТ к дДНК классов IgG и IgM. Для ААТ к нДНК у 43 % больных корреляция между содержанием IgG и IgM носит положительный, а у 33% - отрицательный характер, что, повидимому, связано с различиями в стадиях развития заболевания.

3. Из сыворотки крови больных ГЛПС и здоровых лиц методом аффинной хроматографии на ДНК-сорбентах выделена фракция IgG ААТ к дДНК. Удельная дДНК связывающая активность этой фракции аутоантител при ГЛПС значительно выше по сравнению с соответствующей фракцией у здоровых лиц.

4. В составе циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), выделенных из образцов сыворотки крови больных ГЛПС обнаружены ААТ к нативной и денатурированной ДНК, что свидетельствует о возможности прямого участия этих аутоантител в развитии нефрита при отложении ЦИК в микроциркуляторном русле почек.

5. Во всех исследованных сыворотках крови больных ГЛПС, в отличие от здоровых лиц, выявлена ДНК-абзимная активность, характерная для цитотоксических ААТ к ДНК, что является дополнительным подтверждением возможности участия ААТ к ДНК в повреждении почек при ГЛПС.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ действие на эндотелий микроциркуляторного русла почек. Особого внимания заслуживает тот факт, что ААТ к ДНК выявлены нами в составе циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), выделенных из сыворотки крови больных ГЛПС. Образование ЦИК у больных ГЛПС можно рассматривать как результат естественного ответа иммунной системы на вирусную инфекцию, направленного на элиминацию вируса в составе ЦИК. При неэффективной элиминации ЦИК моноцитарно-макрофагальной системой, что характерно для ГЛПС, существует вероятность отложения ЦИК, содержащих цитотоксические ААТ к ДНК, в стенках сосудов и тканях, особенно в почках с последующим развитием воспалительных процессов.

В совокупности полученные результаты указывают на реальную возможность вовлеченности ААТ к ДНК в развитие заболевания при ГЛПС по указанным выше механизмам.

Второй аспект сравнительного исследования ААТ к ДНК в сыворотке крови здоровых лиц и больных ГЛПС - это возможность использования этих данных при диагностике заболевания. Нами выявлены два основных отличия в характеристике ААТ к ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС и здоровых лиц. Во-первых, уровень содержания ААТ к дДНК в сыворотке крови больных ГЛПС в 2 раза выше, чем у здоровых лиц. Во-вторых, в отличие от ААТ к ДНК у здоровых лиц, они обладают высокой ДНК-гидролизующей активностью. Мы полагаем, что эти данные могут быть использованы как дополнительный критерий при диагностике ГЛПС, при условии установления специфичности указанных свойств ААТ для данной вирусной инфекции, что требует специальных исследований.

В настоящее время рассматривается несколько возможных путей индукции синтеза ААТ к ДНК при вирусной инфекции. Одной из основных причин повышения уровня их содержания при ГЛПС может быть нарушение утилизации апоптотических клеток макрофагами (Lorenz et al., 2000) , что обусловлено, в свою очередь, существенными нарушениями клеточного иммунитета при ГЛПС. Кроме того, в качестве потенциального триггера синтеза ААТ к ДНК могут выступать внеклеточные ДНК сыворотки крови, содержание которых повышается при разных патологиях (Ravard-Goulvestre et al., 2004) Нами обнаружено, что уровень содержания внеклеточных ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС достоверно превышают их содержание в сыворотке крови здоровых лиц (данные не опубликованы). Любой из этих путей может, вероятно, привести к повышенному синтезу разных типов полиреактивных ААТ к ДНК.

Характерной особенностью ААТ к ДНК является наличие двух центров взаимодействия AT с ДНК: антигенсвязывающего участка и участка вне антигенсвязывающего центра с низкой специфичностью и сродством, что обусловливает полиреактивность и гетерогенность ААТ к ДНК. Учитывая данные литературы, и, исходя из полученных нами результатов, можно предположить, что субпопуляции ААТ к нативной и денатурированной ДНК могут иметь разное происхождение и выполнять разную роль в патогенезе заболевания.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Темесген Белайхун Кибрет, Казань

1. Акберова, Н.И. Сравнение данных. 1.. Непараметрические критерии значимости / Н.И. Акберова. - Казань: Издательство КГУ, 2004а. -50с.

2. Акберова, Н.И. Описательная статистика. Интервальные оценки / Н.И. Акберова. Казань: Издательство КГУ, 20046. - 450с.

3. Андриевская, О.А. Иммуноглобулины класса М из сыворотки крови больных системной красной волчанкой эффективно расщепляют РНК / О.А. Андриевская, В.Н. Бунева, В.Г. Забара и др. // Молекуляр. биология. 1998. - Т.32. - №5.- С.908-915.

4. Барановский, А.Г. ДНК- и РНК- гидролизжующие антитела из крови больных различными формами вирусного гепатита / А.Г Барановский, В.Г. Матюшин, А.В. Власов и др. // Биохимия. -1997. -Т.62.-№ 12.-С. 1590-1599.

5. Башкирев, Т.А. Современные аспекты морфогенеза геморрагической лихорадки с почечным синдромом. Анализ летальных случаев / Т.А. Башкирев, Ю.Г. Забусов // Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом в Среднем Поволжье и Приуралье. Л., 1980. - С. 84103.

6. Бойко, А.Н. Рассеянный склероз: Молекулярные и клеточные механизмы / А.Н. Бойко, О.О. Фаворова // Молекуляр. биология .1995. -Т.29. № 4. -С.727-749.

7. Бунева, В.Н. Взаимодействие каталитически активных антител солигорибонуклеотидами / В.Н. Бунева, О.А. Андриевская, И.В. Романникова и др. // Молекуляр. биология. 1994. - Т.28. - №4. -С. 738-743.

8. Бунева, В.Н. Динамика уровня нуклеазной активности антител крови женщины во время беременности и лактации / В.Н. Бунева, А.Н. Кудрявцева, А.В Гальвита и др. // Биохимия. 2003. - Т.68. - № 8. -С. 1088-1100.

9. Власов, А.В. Субстратная специфичность ДНК- и РНК-гидролизующих антител из крови больных полиартритом и аутоиммунным тиреоидитом / А.В. Власов, А.Г. Барановский, Т.Г. Канышкова и др. // Молекуляр. биология . -1998. -Т.32. № 3. -С.559-569.

10. Воронин, Е.С. Иммунология / Е.С. Воронин, A.M. Петров, М.М. Серых, Д.А. Девришов. М.: Колос-пресс, 2002. - 408с.

11. Гааль, Э. Электрофорез в разделениии биологических макромолекул / Э.Гааль, Г.Медьеши, Л.Верецкеи. М.: Мир, 1982. - 447с.

12. Галактионов, В.Г. Иммунология / В.Г. Галактионов. М.: Академия, 2004.-528с.

13. Гармашова Н.В. Антитела к ДНК в крови больных клещевым энцефалитом / Н.В. Гармашова., В.Е. Казанский, О.Б. Тышкевич и др. // Молекуляр. биология . -2004. -Т.38. № 4. - С.723-730.

14. Генералов, И.И. Поликлональные каталитические антитела и их возможное биологическое значение / И.И. Генералов, Д.К. Новиков // Усп. совр. биол. 1998. -Т.118. -№ 2. - С. 178-193.

15. Генералов, И.И. Усиление абзимной активности поликлональных IgG при взаимодействии с катионами металлов / И.И. Генералов, Е.В. Сидорская, А.Г. Генералова и др. // Иммунопатология, аллергология, инфектология. -2000. -№ 1. -С 40-43.

16. Герасимова, И.Г. Оптимизация метода определения концентрации циркулирующих иммунных комплексов различной величины / И.Г. Герасимова, Е.В. Зоркова // Клиническая лабораторная диагностика. -2001. -№7. С. 48-49.

17. Дарбре, А. Практическая биохимия белка / А. Дарбре. М.: Мир, 1989-528с.

18. Константинова, Н.А. Иммунные комплексы и повреждение тканей / Н.А. Константинова. М.: Медицина, 1996. - 256с.

19. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М.: Высшая школа, 1990. -352с.

20. Леках, И.В. Свойства свободных и скрытых природных антител, реагирующих с ДНК и кардиолипином / И.В. Леках, В.И. Киселева, A.M. Поверенный // Молекуляр. биология. -1997. -Т.31. №1. -С. 176-179.

21. Леках, И.В. Гетерогенность и авидность аутоантител, реагирующих с ДНК/ И.В. Леках, Г.М. Ротт, A.M. Поверенный // Молекуляр. биология. -1991. -Т.25. -№ 5. С. 1391-1399.

22. Нго Н.Н. Иммуноферментный анализ / Н.Н. Нго, Г.М. Ленхофф. -М.: Мир, 1988.-360с.

23. Несвижский, Ю.В. Особенность фенотипической изменчивость уровней аутоантител к ДНК у здоровых людей /Ю.В. Несвижский, Л.Г. Сибирякова, Д.В. Корогодин и др. // Бюлл. эксп. биол. и мед. -1988. -№11. -С.585-587.

24. Остерман, J1.A. Хроматография белков и нуклеиновых кислот / J1.A. Остерман. М.: Наука, 1985. -536с.

25. Паутова JI.B. Исследование взаимодействия полиреактивных антител с нуклеиновыми кислотами с помощью аклирующих проиводных олигонуклеотидов/ J1.B. Паутова, Е.Ю. Рыкова, П.П. Лактионов и др. // Мол. биол. —1996. —Т.ЗО. Вып. 4. - С.941-950.

26. Ройт, А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл // Пер. с англ. -М.: Мир, 2000. 592 с.

27. Саттарова, Л.И. Оптимизация иммуноферментной тест-системы для определения антител к ДНК / Л.И. Саттарова, Л.А. Гафиатуллина, Д.Г. Аглиуллина, В.Г. Винтер // Биотехнология. 1994. -№ 11-12.- С.38-41.

28. Сомова-Исачкова, Л.М. Патоморфогенез геморрагической лихорадки с почечным синдромом: от прошлого к будущему / Л.М. Сомова-Исачкова, Н.Г. Плехова // Хантавирусы и хантавирусные инфекции.- Владивосток: ОАО «Примполиграфкомбинат», 2003. С. 182-200.

29. Сизякина Л.П. В сыворотках больных синдромом приобретенного иммунодефицита содержатся находящиеся в скрытом состоянии специфические антитела / Л.П. Сизякина, В.М. Орлова, A.M. Поверенный // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1996. - № 3. - С.315-316.

30. Сиротин, Б.З. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом / Б.З. Сиротин. Хабаровск, 1994. - 302с.

31. Сидорова, Е.В. Антигензависимые неспецифические иммуноглобулины. Природа и возможные механизмы образования / Е.В. Сидорова // Усп. совр. биол. 1993. - Т.113. - С.675-701.

32. Сучков, С.В. ДНК-абзимы и механизмы цитотоксичности при системной красной волчанке / С.В. Сучков, А.Г. Габибов, Н.В. Гнучев// Иммунология. 2001. - № 4. - С.47-51.

33. Сучков, С.В. Новые механизмы антителоопосредованной цитотоксичности и их возможная роль в патогенезе аутоиммунных заболеваний / С.В. Сучков, Т.Е. Наумова, А.Н. Хитров и др. // Молекулярная медицина. 2005. - № 1. - С.32-36.

34. Сучков, С.В. Достижения и перспективы клинической абзимологии / С.В. Сучков, З.С. Алекберова, А.Н. Хитров и др. // Медицинская иммунология. 2006. - № 1. - С.23-30.

35. Tao, X. Патогенез ГЛПС. Выявление преципитатов комплексов антиген-антитело и подобных вириону ХВ структур в почках / X. Тао // Международн. симп. по ГЛПС: Тез. докл. Л., 1991. - С. 14.

36. Фримель, Г. Иммунологические методы / Г. Фримель. М.: Медицина, 1987. - 472с.

37. Abakushin, D.N. Histones interact with immunoglobulins and give them polispesificity / D.N. Abakushin, A.M. Poverenny // Immunology Letters. -1996. -V.53. -P.95-99.

38. Akerblom, H.K. Environmental factors in the etiology of type 1 diabetes / H.K. Akerblom, O. Vaarala, H. Hyoty, J. Ilonen, M. Knip // Am. J. Med. Genet. -2002. -V.l 15. -P. 18-29.

39. Anker, P. Circulating Nucleic Acid in plasma or serum / P. Anker, M. Stroun, J. Lederrey // Clinical Chemica Acta. -2001. -V.313. -P.143-146.

40. Andersen, O. Viral infections trigger multiple sclerosis relapses: a prospective seroepidemiological study / O. Andersen, P.E. Lygner, T. Bergstrom, M. Andersson, A. Vahlne // J. Neurol. 1993. - № 240 -P.417-422.

41. Arbuckle, M.R. Development of anti-dsDNA autoantibodies prior to clinical diagnosis of systemic lupus erythematosus / M.R. Arbuckle, J. A. James, K.F. Kohlhase et al., // Scand. J. Immunol. -2001. -V. 54. -P.211-219.

42. Avrameas, S. Natural autoantibodies: from 'horror autotoxicus' to 'gnothi seaution' / S. Avrameas // Immunol. Today. 1991. - V. 12. - P. 154-159.

43. Baranovskii, A.G. Catalytic heterogeneity of polyclonal DNA-hydrolyzing antibodies from the sera of patients with multiple sclerosis / A.G. Baranovskii, N.A. Ershova, V.N. Buneva et al. // Immunol. Lett. -2001. -V.76. -P.163-167.

44. Betterle C. Autoimmune polyglandular syndrome type 1/ C. Betterle, N.A. Greggio, M. Volpato // J Clin Endocrinol Metab. -1998. V.83. -№ 4. -C.1049-1055.

45. Boes, M. Accelerated development of IgG antibodies and autoimmune disease in the absence of secreted IgM / M. Boes, T. Schmidt, K. Linkemann et al. // Procl. Natl. Acad. Sci. USA. 2000a. - № 97. -P.l 184-1189.

46. Boes, M. Role of natural and immune IgM antibodies in immune responses // Mol Immunol. 2000b. -№ 37. - P.l 141-1149.

47. Carroll, M.C. Linkages of innate and adaptive immunity / M.C. Carroll, A.P. Prodeus//Curr. Opin. Immunol.- 1998.- V.10.-P. 36-40.

48. Casali, P. Structure and function of natural antibodies / P. Casali, E.W. Schettino // Curr. Top. Microbiol. Immunol. 1996. -V.210. -P.167-179.

49. Challoner, P.B. Plaque-associated expression of human herpesvirus 6 in multiple sclerosis / P.B. Challoner, K.T. Smith, J.D. Parker, D.C. MacLeodet al. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. -№ 92. - P.7440-7444.

50. Chen, H.D. Memory CD8+T cells in heterologous antiviral immunity and immunopatology in the lung / H.D. Chen, A.E. Fraire, I. Joris, M.A. Brehm et al. // Nat. Immunol. 2001. -№ 2. - P. 1067-1076.

51. Christen, U. Induction, acceleration or prevention of autoimmunity by molecular 40.-P.l 113-1120.

52. Clough, J.D. Relationship of renal histopathology in SLE nephritis to immunoglobulin class of anti-DNA/ J.D. Clough, R. Valenzuela //Am. J. Med. 1980. - № 68. - P.80-85.

53. Cloyd, M.V. How does HIV cause depletion of CD4 lymphocytes? A mechanism involving virus signaling through its cellular receptors / M.V. Cloyd, J.J. Chen, P. Adeqboyega, L. Wang // Curr. Mol. Med. 2001. -№ 1. -P.545-550.

54. Culley, F.J. Age .at first viral infection determines the pattern of T cell-mediated disease during reinfection in adulthood / F.J. Culley, J. Pollott, P.J. Openshaw // J. Exp. Med. 2002. -№ 196. - P.1381-1386.

55. Currie, P.F. Cardiac autoimmunity in HIV related heart muscle disease / P.F. Currie, J.H. Goldman, A.L. Caforio et al. // Heart. 1998. - № 79. -P.599-604.

56. Ehrenstein, M.R. Deficiency in Serum Immunoglobulin (Ig)M Predisposes to Development of IgG Autoantibodies / M.R. Ehrenstein, H.T. Cook, M.S. Neuberger // J. Exp. Med. 2000. - V. 191. - № 7. -P.1253-1257.

57. Eilat, D. Anti-DNA autoantibodies: a puzzle of autoimmune phenomena / D.Eilat, Y. Naparstek // Immunol. Today. -1999. -V.10. -№ 8. -P.339-342.

58. Elenkov I.J. Stress hormones, proinflammatory and anti-inflammatory cytokines, and autoimmunity / I.J. Elenkov, G.P. Chrousos // Ann. New York Acad. Sci. 2002. -№ 966. - P.290-303.

59. Elson, C.J. Autoreactive T cells repertoire / C.J. Elson, N.A. Williams // Immunol. Today. 1995. - V.16. - P.62-71.

60. Fillion, M.C. Autoreactive t cells in healthy individuals show tolerance in vitro with characteristics similar to but distinct from clonal anergy / M.C. Fillion, A.J. Bradley, D.V. Devine et al. // Eur. J. Immunol. 1995. -V.25.-P.3114-3123.

61. Fischer, M.B. Regulation of the В cell response to T-dependent antigens by classical pathway complement / M.B. Fischer, M. Ma, S. Georg et al. // J. Immunol. 1996. - V. 157. - P.549-556.

62. Flodstrom, M. Target cells defense prevents the development of diabetes after viral infection / M. Flodstrom, A. Maday, D. Balakrishna et al. // Nat. Immunol. 2002a. -№ 3. - P.373-382.

63. Flodstrom, M. The natural killer cell friend or foe in autoimmune disease? / M. Flodstrom, F.D. Shi, N. Sarvetnick, H.G. Ljunggren // Scand. J. Immunol. - 2002b. - № 55. - P.432-441.

64. Flodstrom-Tullberg, M. Viral infections: their elusive role in regulating susceptibility to autoimmune disease // Microbes and Infections. 2003. -№ 5. -P.911-921.

65. Gaynor, В. Peptide inhibition of glomerular deposition of an anti-DNA antibody /В. Gaynor, C. Putterman, P. Valadon et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1997. -V.94. -P.1955-1960.

66. Ge, Q. Different contributions of thymopoesis and homeostasis-driven proliferation to the reconstitution of naive and memory T cell compartments / Q. Ge, H. Hu, H.N. Eisen, J. Chen // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. - №. 99. - P.2989-2994.

67. Gianani, R. Viruses, cytikines, antigens, and autoimmunity / R. Gianani, N. Sarvetnick // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - V. 93. - P.2257-2259.

68. Gill, J.M. Diagnosis of systemic lupus erythematosus / J.M. Gill, A.M. Quisel, P.V. Rocca, D.T. Walters // Am. Fam. Physician. 2003. - V. 68. -P.2179-2186.

69. Golda, R. The presence and structure of circulating immune complexes in patients with prostate tumors / R. Golda, Z. Wolski, M. Wyszomirska-Golda, K. Madalinski, J. Michalklewicz // Med. Sci. Monit. -2004. V. 3. -№ 3. - P. 123-127.

70. Gololobov, G.V. DNA-protein complexes. Natural targets for DNA-hydrolyzing antibodies / G.V. Gololobov, S.Y. Mikhalap, A.V. Starov et al. // Appl. Biochem. Biothechnol. 1994. - V.47. - P.305-315.

71. Graves, P.M. The role of enteroviral infections in the development of IDDM: limitations of current approaches / P.M. Graves, J.M. Norris, M.A. Pallansch, I.C. Gerling, M. Rewers // Diabetes. 1997. - № 46. -P.161-168.

72. Hahn, B.H. Antibodies to DNA /В.Н. Hahn// N. Engl. J. Med. 1998. -V.338. -P.1359-1368.

73. Hammond, K.J. NKT cells: potential targets for autoimmune disease therapy? / K.J. Hammond, D.I. Godfrey //Tissue Antigens. 2002. -№59. -Р.353-363.

74. Hansen, К.Е. Autoantibodies and Common Viral Illnesses / K.E. Hansen, J. Aranson, A.J. Bridges // Seminars in Arthritis and Rheumatism. 1998. - V.27. -№ 5. - P.263-271.

75. Heino, M. Autoimmune regulator is expressed in the cells regulating immune tolerance inthymus medulla/ M. Heino, P. Peterson, J. Kudoh et al. // Biochem. Biophy. Res. Commun. -1999. -V. 257. -P821-825.

76. Honeyman M. C. Association between rotavirus infection and pancreatic islet autoimmunity in children at risk of developing type I diabetes / M.C. Honeyman, B.S. Coulson, N.L. Stone et al. // Diabetes. 2000. - № 49. -P.1319-1324.

77. Kanerva M., Mustonen J., Vaheri A. Pathogenesis of Puumala and other hantavirus infections // Rev. Med. Virol. -1998. -V8. -P67-86.

78. Kasaian, M. T. Identification and analysis of a novel human surface CD5-B lymphocyte subset producing natural antibodies / M.T. Kasaian, H. Ikematsu, P. Casali // J. Immunol. 1992. - V.148. - P.2685-2690.

79. Kastrukoff, L.F. Oligodendrocytes from human donors differ in resistance to herpes simplex virus 1 (HSV-1) / L.F. Kastrukoff, S.U. Kim // Glia. -2002. № 38. - P.87-92.

80. Kearney, J. Idiotype-directed interactions during ontogeny play a major role in the establishment of the adult В cell repertoire / J. Kearney, M. Vakil // Immunol. Rev. 1986. - V.94. - P.27-39.

81. Kellerman S. A. TSN receptor sequences recognised by CD4+ T cells in Graves disease patients and healthy controls / S.A. Kellerman, D.J. McCormick, S.L. Freeman et al. // J. Autoimmun. 1995. - V.8. -P.673-685.

82. Kerr, J.R. Autoantibodies following parvovirus В 19 infection / J.R Kerr, N. Boyd // Journal of Infection. 1996. - V.32. - P.42-47.

83. Kozyr A.V. Anti-DNA antibodies real toxicity to tumor cell lines/ A.V. Kozyr, L.P. Sashchenko, A.V. Kolesnikov et al.// Immunol. Lett. -2002. -V. 80. -P.41-47.

84. Lacroix-Desmazes, S. Self-reactive antibodies (natural autoantibodies) in healthy indviduls / S. Lacroix-Desmazes, S.V. kaveri, L. Mouthon et al. //J. Immunol. Meth. 1998. -V.216. -P.l 17-137.

85. Lednicky, J.A. Hantavirus / J.A. Lednicky // Arch.Pathol. Lab. Med. -2003. -V. 127. -P.30-35.

86. Li, L. Catalytic activity of anti-thyroglobulin antibodies / L. Li, S. Paul, S. Tyutyulkova, M.D. Kazatchkine, S. Kaveri // J. Immunol. . 1995. -V. 154. -№ 7. - P.3328-3332.

87. Limaye, N. Pathogenicity of anti-DNA / glomerular autoantibodies -weighing the evidence / N. Limaye, C. Mohan // Drug Discovery Today : Disease Models. 2004. - V.l. -№ 4. - P.395-403.

88. Liu, Y. Potential Contribution of VH Gene Replacement in Immunity and Disease / Y. Liu, R. Fan, S. Zhou et al. // Ann. N.Y. Acad. Sci. 2005. - V.1062. -P.175-181.

89. Lorenz, H. Role of apoptosis in autoummunity / H. Lorenz, M. Herrmann, T. Winkler et al. // Apoptosis. 2000. - V.5. - № 5. - P.443-449.

90. Macrotic, A. The possible role of cytokines, chemokines and theirreceptors in immunopathogenesis of HFRS and HPS / A. Macrotic, K.th

91. Anderson, C. Schmaljohn // 5 Intern. Conf. on Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome (HFRS), Hantavirus Pulmonary Syndrome (HPS) and Hantaviruses: Abstract Book. 2001. - P. 103.

92. Martin, R. Fine specificity and restriction of myelin basic protein specific cytotoxis T cell lines from multiple sclerosis patients and healthy controls / R. Martin, D. Jaraquemada, M. Flerlage et al. // J. Immunol. 1990. -V.145. -P.536-540.

93. Massabki, P.S. Clinical implication of autoantibodies in HIV infection / P.S Massabki, C. Accetturi, I.A. Nishie et al. // AIDS. 1997. - V.l 1. -P.1845-1850.

94. Miyamoto, H. Serological analysis of hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) patients in Far Eastern Russian ana identification of the causative hantavirus genotype / H. Miyamoto, H. Kariwa, K. Araki et al. // Arch. Virol. V.148. - P.1543-1556.

95. Мок, C.C. Pathogenesis of systemic lupus erythematosus / C.C. Мок, C.S. Lau // J. Clin. Pathol. 2003. - V.56. - P.481-490.

96. Mumford, P.A. The frequency of circulating immune complx in rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus / P.A. Mumford, A.C. Horsfall, R.N. Maini // J. Rheumatology International. -1982. V.l. -№ 4. - P. 181-186.

97. Nagamine, K. Positional cloning of the APECED gene / K. Nagamine, P. Peterson, H.S. Scott, J. Kudoh et al. // Nat. Genet. -1997. V.17. - P. 393-398.

98. Naparstek, Y. The role of autoantibodies in autoimmune disease / Y. Naparstek, P.H. Plotz // Annu. Rev. Immunol. 1993. - V.l 1. - P.79-104.

99. Nevinsky, G.A. Human catalytic RNA- and DNA-hydrolyzing antibodies /G.A. Nevinsky, V.N. Buneva // Methods Immunol. 2002. -№ 269. -P.235-249.

100. Nezlin, R. DNA levels in immune complexes circulating in mice with induced systemic lupus erythematosus / R. Nezlin, M. Dayan, H. Zinger, E. Mozes // Immunol. Lett. 1999. - V.67. - P.85-90.

101. Panoutsakopoulou, V. On the Relationship Between Viral Infection and Autoimmunity / V. Panoutsakopoulou , H. Cantor // Journal of Autoimmunity. 2001. -V.16. - C.341-345.

102. Pawlotsky, J. Immunologic disorders in С virus chronic active hepatitis: a prospective case-control study / J. Pawlotsky, M. Yahia, C. Andre et al. //Hematology. 1994. - Vol.19. - P.841-848.

103. Pio, R. Granule associated DNase in T4 and T8 lymphocytes from patients with autoimmune diseases / R. Pio, A. Gonzaleze M.J. Lopez-Zabala et al.// Biochimica et Biophysica Acta. 1998. - V. 1406. - P.51-61.

104. Ponomarenko, N.A. Catalytic antibodies in clinical and experimental pathology: human and mouse models / N.A. Ponomarenko, O.M. Durova, I.I. Vorobiev et al. // J. Immunol. Methods. 2002. - № 1-2. - P. 197211.

105. Poverenny, A.M. Interactions of protein (antibodies) with the deoxyribonucleic acid molecule / A.M. Poverenny, A.S. Sainko, V.G. Kreier, V.A. Nasonova // Nature. 1996. - V. 181. - №55. - P. 12971298.

106. Puccetti, A. Anti-DNA antibodies bind to Dnase I / A. Pucetti, M.P. Madaio, G. Bellese, P. Migliorini // J. Exp. Med. 1995. - V. 181. - №5. -P. 1797-1804.

107. Raftery M.J. Hantavirus Infection of Dendritic Cells// Raftery M.J.

108. Kraus A.A., Ulrich R., Kruger D.H., Schonrich G. Journal of Virology. -2002. V.76. -№. 21. - P.l0724-10733.

109. Ramanathan, S. Thymectomy and radiation-induced type I diabetes in nonlymphopenic BB rats / S. Ramanathan, M.T. Bihoreau, A.D. Paterson, L. Marandi, D. Gauguier, P. Poussier // Diabetes. 2002. - № 51. -P.2975-2981.

110. Ravard-Goulvestre, C. Successful extraction of human genomic DNA from serum and its application to forensic identification / C. Ravard-Goulvestre, K. Crainic, F. Guillon et al. // J. Forensic Sci. 2004. - V. 49. - №1. - P. 60-63

111. Ray, S.K. Pathogenic autoantibodies are routinely generated during the response to foreign antigen: a paradigm for autoimmune disease / S.K. Ray, C. Putterman, B. Diamond // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. -V. 93.-P. 2019-2024.

112. Reichlin, M. Characterization of anti-dsDNA antibodies: cross-react with the snRNP polypeptides and cell-binding abilities/ M. Reichlin, B. Hahn, E. Koren// The Immunologist. -1995. -V.3. -№3. -P.84-88.

113. Salmi, A.A. Suppression of T-cell immunity after measles infection: is the puzzle solved? // Trends Microbiol. 1997. -№5. - P.85-86.

114. Sandberg, J.K. Selective loss of innate CD4(+)V alpha 24 natural killer T cells in human immunodeficiency virus infection / J.K. Sandberg, N.M. Fast, E.H. Palacios et al. // J. Virol. 2002. -V. 76. - C.7528- 7534.

115. Sasaki, T. Circulating anti-DNA immune complexes in active lupus nephritis / T. Sasaki, T. Muryoi, A. Hatakeyama et al. // Am. J. Med. -1991. V.91. -№4. -P.355-362.

116. Sharma, A. Crossreactivity of human anti-dsDNA antibodies to phosphorilcholine: clues to their origin/ A. Sharma, D.A. Isenberg, B. Diamond// J. Autoimun. -2001. -V. 16. P.479-481.

117. Sherer, Y. Autoantibody Explosion in Systemic Lupus Erthematosus: More than 100 Different Antibodies Found in SLE Patients / Y. Sherer, A. Gorstein, M.J. Fritzler, Y. shoenfeld // Seminars in Arthritis and Rheumatism. -2004. -V.34. -P.501-537.

118. Shi F. Innate immunity and autoimmunity: from self-protection to self-destruction / F. Shi, H.G. Ljunggren, N. Sarvetnick // Trends Immunol. -2001. -№ 22. -P.97-101.

119. Shuster, A.M. DNA hydrolyzing autoantibodies / A.M. Shuster, G.V. Gololobov, O.A. Kvashuk et al. // Science. -1992. -V.256. -P.665-667.

120. Smeenk, R.J.T. Dissociation studies of DNA/anti-DNA complexes in relation to clinical value / R.J.T. Smeenk, A. Van Rooijen, T.J.D. Swaak //J. Immunol. Meth. -1988. -V.109. -P.27-35.

121. Smeenk, R.J.T. Antinuclear antibodies: cause of disease or caused by disease? /R.J.T. Smeenk// Rheumatology. 2000. -V.39. -P.581-584.

122. Spartz L. Studies of the structure, regulation, and pathogenic potential of anti-dsDNA antibodies/L.Spartz, A. Ilies, V. Saenko et al.// Methods: A companion to methods in enzymology. -1997. -V.l 1. -P.70-78.

123. Stahl, D. Analysis of human self-reactive antibody repertoires by quantative immunobloting / D. Stahl, S. Lacroix-Desmazes, L. Mouthon et al. // J. Immunol. Meth. 2000. - V.240. - P. 1-14.

124. Stauffer, Y. Interferon-alpha-induced endogenous superantigen. A model linking environment and autoimmunity / Y. Stauffer, S. Marguerat, F. Meylan, C. Ucla, N. Sutkowsky, B. Huber, T. Pelet, B. Conrad // Immunity. 2001. -№ 15. - P.591-601.

125. Steinman L. Multiple sclerosis: a two-stage disease / L. Steinman // Nat. Immunol. 2001. - № 2. - P.2762-2764.

126. Sun, К. H. Anti-dsDNA antibodies cross-react with ribosomal P proteins expressed on the surface of glomerular mesangial cells to a cytostatic effect /К.Н. Sun, W.T. Liu, C.Y. Tsai et al.// Immunology. -1995. -V.85. -№2. -P.262-269.

127. Suzuki, N. Development of pathgenic anti-DNA antibodies in patients with systemic lupus eruthematosus / N. Suzuki, S. Mihara, T. Sakane // FASEB J. 1997. - V. 11. - P. 1033-1038.

128. Tarnacka, B. Increased circulating immune complexes in acute stroke. The triggering role of Chlamydia pneumoniae and cytomegalovirus / B. Tarnacka, G. Gromadzka, A. Czlonovska // Stroke. 2002. - № 33. -P. 936-940.

129. Teodorescu, M. Clinical value of anti-ssDNA (denatured DNA) autoantibody test: beauty is in the eyes of the beholder / M. Teodorescu // Clin. Appl. Immun. Reviews. 2002. - V.2. - P.l 15-128.

130. Theofilopoulos, A.N. T cell homeostasis and systemic autoimmunity // A.N. Theofilopoulos, W. Dummer, D.H. Kono I I J.Clin. Invest. 2001. -№ 108 -P.335-340.

131. Van Bruggen, M.C.J. Nucleosomes and histones are present in glomerular deposits in human lupus nephritis / M.C.J, van Bruggen, C. Kramers, B. Walgreen et al. // Nephrol. Dial. Transplant. 1997. - V.12. - P.57-66.

132. Van Epps, H. Long-lived memory T lymphocyte responses after hantavirus infection / H. Van Epps, M. Terajima, J. Mustonen et al. // J. Exp. Med. 2002. - V. 196. - № 5. - P.579-588.

133. Van Helden, P.D. Autoantibodies from patients with systemic lupus erythematosus can affect DNA and RNA synthesis in cultured cells / P.D. Van Helden, L.Van Lill, A.J. Bester et al. // Biochimica et Biophysica Acta. 1989. - V.1009. - №2. - P. 137-142.

134. Veiga-Fernandes, H. Response of nai've and memory CD8+ T cells to antigen stimulation in vivo / H. Veiga-Fernandes, U. Walter, C. Bourgeois, A. McLean, B. Rocha // Nat. Immunol. 2000. -№ 1. - P.47-53.

135. Vlock, D.R. Clinical correlates of circulating immune complexes and antibody reactivity in squamouscell carcinoma of the head and neck / D.R. Vlock, S.P. Schantz, S.G. Fischer//J. Clin. Oncol. 1993. -V.12. -P. 2427-2433.

136. Vogel, A. The genetic background of autoimmune polyendocrinopathy-candidiasis-ectodermal dystrophy and its autoimmune diseasecomponents/ A. Vogel, C.P. Strassburg, P. Obermayer-Straub, G. Brabant, M. P. Manns //J. Mol. Med. 2002. - № 80. - P.201-211.

137. William, W.M. A cross sectional study of anti-DNA antibodies in the serum and IgG and IgM fraction of health individuals, patients with SLE and their relatives / W.M. William, D.A. Isenberg // Lupus. 1996. - V.5. -P.576-586.

138. Williamson R.A. Anti-DNA antibodies are a major component of the intrathecal В cell response in multiple sclerosis / R.A. Williamson, M.p. Burgoon, G.P. Owens et al. // Procl. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. - № 98. -P.1793-1797.

139. Witte, T. Association of IgA anti-dsDNA antibodies with vasculitis and disease activity in systemic lupus erythematosus / T. Witte, K. Hartung, T. Matthias et al. // Rheumatol. Int. 1998. - V.18. - P.63-69.

140. Yamada, E. Structural changes of immunoglobulin G oligosaccharides with age in healthy human serum /Е. Yamada, Y. Tsukamoto, R. Sasaki et al.// Glycoconjugate J. 1997. - V.14. - P.401-405.

141. Yanase, K. Receptor-mediated cellular entry of nuclear localizing anti-DNA antibodies via myosin 1 / K. Yanase, R.M. Smith, A. Pucetti et al. // J. Clin. Invest. 1997. - V. 100. - № 1. - P.25-31.

142. Ye, Y.L. In vitro and in vivo functional analysis of CD5+ and CD5" B-cells of NZBxNZW F1 mice / Y.L. Ye, Y.H. Chuang, B.L. Chiang // Clin. Exp. Immunol. 1996. - V.106. - P.246-253.

143. Youd, M.E. IgM monomers accelerate disease manifestations in autoimmune-prone Fas-deficient mice / M.E. Youd, L. Luus, R.B. Corley // Journal of Autoimmunity. 2004. -№23. - P.333-343.

144. Xie, C. Use of a novel elution regimen reveals the dominance of polyreactive antinuclear autoantibodies in lupus kidneys / C. Xie, Z. Liang, S. Chang, C. Mohan //Arthritis Rheum. 2003. -№48. - P.2343-2352.

145. Zandman-Goddard, G. HIV and autoimmunity / G. Zandman-Goddard, Y. Shoenfeld // Autoimmunity Reviews. -2002. V. 1. -P329-337.

146. Zeng, F. Characterization of DNA antigens from immune complexes deposited in the skin of patients with systemic lupus erythematosus / F. Zeng, R.Yin, G. Tan et al. // Chinese Medical Journal 2004. - V.l 17. -№ 7. - P. 1066-1071.

147. Zhang, M. Identification of a specific self-reactive IgM antibody that initiates intestinal ischemia/reperfusion injury/ M. Zhang, W. G. Austen, I. Chiu et al. // Proc Natl Acad Sci USA.- 2004. V.101. -№ 11 - P. 3886-3891.

148. Zhao, Z. Molecular Mimicry by Herpes Simplex Virus-Type I: Autoimmune Disease After Viral Infection / Z. Zhao, F. Granucci, L. Yeh et al. // Science. 1998. - V.279. - P. 1344-1347.

149. Zhao, Z. Cross-Reactivity of Human Lupus Anti-DNA Antibodies with Actinin and Nephrogenic Potential / Z. Zhao, E. Weinstein, M. Tuzova et al. // Arthritis and Rheumatism. 2005. - V.52. - P.522- 530.