Антиоксидантное и антиапоптотическое действие билирубина при патологии печени и желчевыводящих путей

Дудник, Людмила Борисовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Антиоксидантное и антиапоптотическое действие билирубина при патологии печени и желчевыводящих путей
ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Антиоксидантное и антиапоптотическое действие билирубина при патологии печени и желчевыводящих путей"

На правах рукописи

Дудник Людмила Борисовна

АНТИОКСИДАНТНОЕ И АНТИАПОПТОТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ БИЛИРУБИНА ПРИ ПАТОЛОГИИ ПЕЧЕНИ И ЖЕЛЧЕВЫВОДЯЩИХ ПУТЕЙ

03.00.02 - биофизика

Автореферат диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва, 2004

Работа выполнена в Институте биохимической физики им. Н М. Эмануэля РАН

Научные консультанты: доктор биологических наук, профессор

Алесенко Алиса Владимировна

доктор биологических наук, профессор Бурлакова Елена Борисовна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук Ахаладзе Гу-рам Германович

доктор биологических наук, профессор Козлов Юрий Павлович

доктор биологических наук, профессор Петренко Юрий Михайлович

Ведущая организация

Институт биофизики клетки РАН

Защита состоится 11 июня 2004 года в 11 часов на заседании Диссертационного совета Д 002.039.01 при Институте биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН по адресу: 119991, Москва, ул. Косыгина, д.4.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института химической физики им. Н.Н. Семенова РАН.

Автореферат разослан 2004 г.

Ученый секретарь диссертаци энного совета кандидат химических наук

М.А.Смотряева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Желчный пигмент билирубин (БР) является продуктом катаболизма гемсодержащих соединений. На протяжении долгих лет, с MOMeina своего открытия и до 80-х годов прошлого века, БР считался бесполезным продуктом обмена, «промышленным отходом», подлежащим скорейшему выведению из организма. Повышение уровня БР в организме традиционно интерпретировалось как негативное явление и расценивалось как проявление патологии (при заболеваниях печени и желчевыводящих путей), либо как потенциально опасный фактор (при «ядерной желтухе», вызванной резус-несовместимостью матери и ребенка). В 50-х годах прошлого века исследователями-химиками была обнаружена способность БР ингибировать реакции сво-боднорадикального окисления органических веществ [Bernhard et al., 1954]. Однако этот факт в течение долгого времени не привлекал должного внимания биологов и медиков, несмотря на возможность наличия у данного пигмента важной роли (как антиоксиданта) в жизнедеятельности организма.

Впервые физиологическая роль БР как эффективного эндогенного антиоксиданта была показана нами в 1985 году. Начиная с этого времени, в литературе стали регулярно появляться работы, посвященные цитопротекторному действию БР, обусловленному его антиоксидантными свойствами. В настоящее время количество экспериментальных доказательств защитной роли БР при различных патологиях стремительно возрастает с каждым годом. Тем не менее, механизм ингибирующего действия БР в реакциях свободнорадикального окисления и на сегодняшний день остается во многом неизвестным.

Несмотря на общепринятую концепцию о ведущей роли процессов пе-роксидного окисления липидов (ПОЛ) в патогенезе заболеваний печени и жел-чевыводящих путей, сопровождаемых желтухой, роль и значение БР в формировании защитных механизмов при этой патологии до сих пор остаются неизученными. Среди клиницистов по-прежнему доминирующим является мнение о токсичности данного пигмента. Данные о влиянии БР на соотношение между интенсивностью ПОЛ, уровнем антиокислительной активности (АОА) липидов и показателями липидного обмена сыворотки крови при патологии печени и желчевыводящих путей в литературе отсутствуют. Нет и сведений о том, какое действие на протекание ПОЛ в органах и тканях оказывает повышение содержания БР в крови.

Известно, что при заболеваниях печени и желчевыводящих путей гепато-циты гибнут преимущественно по механизму апоптоза [Ziol et al.,2001; Van-landschoot, 2003]. Пути, по которым проходит сигнал апоптоза, наряду с другими возможностями, включает активацию сфннгомиелинового цикла, функционирование которого зависит от интенсивности реакций ПОЛ. Данные о влиянии БР на активность сфингомиелинового цикла и на апоптотическую гибель клеток, индуцированную его продуктами, до публикации наших работ в литературе отсутствовали.

Исследование механизма антиоксидантного действия БР и его цитопро-текторных свойств является актуальным — во-первых, _оно может быть полед-

РОС. НАЦИОНАЛЬНА» } БИБЛИОТЕКА j СПетерйгрг | ОЭ 1<ХП

ным для понимания патогенеза и разработки новых методов терапии ряда распространенных заболеваний. Во-вторых, знание закономерностей протекания процессов ПОЛ при гипербилирубинемии может способствовать выработке критериев дифференциальной диагностики заболеваний, протекающих с желтухой. И, наконец, знание механизма антиоксидантного действия БР может способствовать синтезу новых лекарственных средств из класса антиоксидан-тов, поскольку, в отличие от большинства из них, БР не принадлежит к классу экранированных фенолов.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы явилось изучение механизма ингибирования билирубином реакций свободнорадикального окисления, его действия на процессы, сопровождающие повреждение и апоптотиче-скую гибель клеток, а также влияния на интенсивность пероксидного окисления липидов при патологии печени и желчевыводящих путей в эксперименте и клинике.

Для достижения намеченной цели исследования были поставлены следующие задачи:

1. исследование механизма ингибирующего действия БР в реакциях сво-боднорадикального окисления, определение константы скорости его реакции с пероксильными радикалами и измерение его антиокислительной активности;

2. изучение параметров ПОЛ и липидного обмена при моделировании патологии печени и желчевыводящих путей в экспериментах на животных, а также путем внутрибрюшинного введения им БР;

3. установление характера действия БР на процессы, связанные с апопто-тической гибелью клеток:

• исследование действия БР на апоптоз тимоцитов, индуцированный in vitro УФ-облучением, а также продуктам сфингомиелинового цикла сфингозином;

• изучение влияния желтухи (внутрибрюшинного введения БР подопытным животным и перевязки у них общего желчного протока) на активность ключевого фермента сфингомиелинового цикла, генерирующего вторичные посредники сигн;ша апоптоза, - сфингомиелиназы (СФМазы);

определение связи между активностью СФМазы и содержанием продуктов ПОЛ в норме и при моделировании патологии печени;

• исследование влияния желтухи, вызванной перевязкой общего желчного протока у животных на экспрессию проапоптотического цигокина, фактора некроза опухоли-альфа

4. определение параметров ПОЛ и влияния на них концентрации БР в сыворотке крови больных с патологией печени и желчевыводящих путей.

Основные положения, выносимые на защиту

1. БР является эффективным антиоксидантом, ингибирующее действие которого осуществляется в реакции с пероксильными радикалами. Одна молекула БР может обрывать больше двух цепей окисления за счет образования продуктов превращения, также обладающих ингибирующими свойствами.

2. Между активностью ключевого фермента сфингомиелинового цикла (генератора вторичных посредников сигнала апоптоза) - нейтральной СФМа-зой и интенсивностью ПОЛ существует прямая взаимосвязь. БР как антиокси-дант может не только защищать липиды клеточных мембран от пероксидного окисления, но и, воздействуя на сфингомиелиновый цикл, защищать клетки организма от апоптоза.

3. В сыворотке крови существует взаимосвязь между изменением скорости окислительных реакций в липидах, их составом и антиокислительными свойствами, что является доказательством существования физико-химической системы регуляции ПОЛ на организменном уровне. Ключевую роль в функционировании этой системы играет печень, синтезирующая липопротеиды, в составе которых липиды циркулируют в сыворотке крови. Повышение уровня БР является компенсаторным механизмом, позволяющим регулировать протекание реакций ПОЛ при патологии печени и желчевыводящих путей.

Научная новизна. Впервые изучен молекулярный механизм антиокси-дантного действия БР. Показано, что ингибирующее действие БР осуществляется в реакции с пероксильными радикалами. Продукты превращения БР также обладают ингибирующими свойствами. Константа скорости реакции БР с пе-роксильными радикалами близка к таковой ионола, активность продуктов превращения несколько ниже. АОА БР в два раза превышает активность ионола.

Впервые показано наличие тесной взаимосвязи между изменением скорости окислительных реакций в липидах, их составом и антиокислительными свойствами сыворотки крови, что является доказательством существования физико-химической системы регуляции ПОЛ на организменном уровне. Обнаружено, что желтуха может являться компенсаторным механизмом, позволяющим регулировать протекание реакций ПОЛ при патологии печени и желчевыводя-щих путей, когда функциональные способности гепатоцитов снижены.

Впервые обнаружено, что гипербилирубинемия при остром вирусном гепатите сопровождается выраженным снижением уровня продуктов ПОЛ и нарастанием АОА липидов крови больных. Расчетным путем показано, что повышение уровня АОА при остром вирусном гепатите (ОВГ) происходит за счет БР. При сопоставлении содержания БР с активностью маркерных ферментов в крови больных выявлена обратная зависимость между степенью лабилизации мембран гепатощггов и уровнем гипербилирубинемии. Обнаружено качественное отличие коматогенных форм ОВГ от неосложненных форм этого заболевания, состоящее в том, что накопление продуктов ПОЛ в крови больных с энцефалопатией является результатом свободнорадикалыюго окисления липидов и происходит одновременно с разбалансировкой систем, регулирующих интенсивность ПОЛ. Впервые выявлено, что нормальное содержание продуктов ПОЛ в крови больных хроническими гепатитами и циррозами свидетельствует о наличии у них «скрытого» окислительного стресса. Впервые обнаружено, что при внутрипеченочном холестазе происходит угнетение реакций ПОЛ в сыворотке крови больных и в печени экспериментальных животных.

Впервые определен характер влияния БР на активность СФМазы при введении его подопытным животным, при этом выявлена взаимосвязь между ин-

тенсивностью ПОЛ и активностью СФМазы. Продемонстрировано, что, помимо ингибирования ПОЛ, дополнительным механизмом ингибирования СФМазы может являться избирательное связывание БР со сфинголипидами. Проведено исследование изменения активности СФМазы, содержания ФНО-а и интенсивности ПОЛ в печени крыс при экспериментальной механической желтухе. Обнаружен двухфазный характер изменения исследованных показателей. Их выраженное снижение на ранних сроках холестаза может быть обусловлено ци-топротекторными и антиоксидантнымн свойствами БР.

Впервые исследовано влияние БР на апоптоз, индуцированный продуктом сфингомиелинового цикла, сфингозином, и УФ-облучением. Показана биохимическая связь между БР и окислительным стрессом с одной стороны и БР, сфингомиелиновым циклом и апоптозом - с другой. Полученные данные показывают, что БР, воздействуя на сфингомиелиновый цикл, может защищать клетки организма от апоптоза вызванного не только непосредственно активацией ПОЛ, но и другими стимулами.

Совокупность проведенных исследований позволяет сформулировать создание нового научного направления «физико-химическая регуляция процессов ПОЛ в организме конечным продуктом обмена - билирубином».

Научно-практическая значимость. Показано наличие физико-химической системы регуляции стационарного режима окислительных реакций в липидах сыворотки крови. В норме эту гомеостатическую функцию выполняет печень путем модификации количественного содержания и состава липопро-теидов сыворотки крови. При патологии органа, когда нарушаются функции гепатоцитов, дополнительным способом регуляции интенсивности ПОЛ может являться повышение уровня БР. Знание закономерностей протекания процессов ПОЛ у больных с желтухой необходимо для определения критериев применения гепатопротекторов, поскольку большинство из них относится к классу ан-тиоксидантов.

Практическим следствием из проведенной работы явилась возможность использования показателей ПОЛ для дифференциальной диагностики первичного билиарного цирроза и подпеченочных желтух опухолевого генеза. Диагностика данных заболеваний часто представляет трудности для клиницистов, поскольку проявления холестаза однотипны при всех его формах. Определение содержания продуктов ПОЛ в сыворотке крови больных оказалось также информативным для выявления сопутствующего панкреатита при осложненных формах желчнокаменной болезни. Использование этих показателей представляется целесообразным для выбора лечебной тактики и оптимального времени хирургического вмешательства.

Выявленное нами ингибирование БР апоптотической деградации ДНК может быть полезным при разработке тактики лечения заболеваний, сопровождающихся желтухой. В частности БР может оказывать серьезное влияние на эффективность противораковой радио-, хемо- и фотодинамической терапии (направленной на индукцию апоптоза клеток опухоли) у больных с опухолями в гепатопанкреадуоденальной области.

Диссертационная работа выполнена в Институте биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН в соответствии с планами научно-исследовательских работ Института в рамках грантов РФФИ № 95-04-12209, 98-04-48256-а, 02-04-48048-а, 02-04 48228, Президиума РАН «Фундаментальные науки - медицине», Всесоюзной программы «Биоантиоксидант».

Вклад автора. Личный вклад диссертанта состоял в разработке методологии исследования, определении задач и выборе методов их решения, проведении экспериментов, обобщении, анализе и трактовке полученного экспериментального материала, формулировании положений и выводов работы. В работах, выполненных в соавторстве, соискатель участвовал во всех этапах исследований - от постановки эксперимента до обсуждения, оформления и публикации результатов.

Апробация диссертации и публикации. Основные результаты исследования по теме диссертации представлены в 45 печатных работах.

Материалы диссертации докладывались и обсуждались на различных Международных, Всесоюзных, Всероссийских и Республиканских симпозиумах, конференциях, съездах: Всесоюзн. Конф. «Острая ишемия органов и ранние постишемические расстройства», Москва, 1978; «Структура, биосинтез и превращения липидов в организме животного и человека», Ленинград, 1978; «Физико-химические процессы в газовой и конденсированной фазах» Черноголовка, 1979; VII Intern. Symp. on Med. Chem., Malaga, Spain, 1980; VI Всесоюан. конф. по клинической биохимии, морфологии и иммунологии инфекционных болезней. Рига, 1983; «Цитохром Р-450 и охрана внутренней среды человека», Москва, 1985; П и Ш Республ. конф. ученых-медиков Латв. ССР, Рига, 1985, 1988; П-VI Всесоюзн. (впоследствии - Всеросс. с международным участием, Москва, 1986, 1989, 1991, 1998, 2002) конф. «Биоантиоксидант»; V Всесоюзн. съезде биохимиков, Киев, 1986; «Актуальные вопросы диагностики, эпидемиологии и профилактики острого вирусного гепатита А», 1987, Ленинград; «Биохимия - медицине», Ленинград, 1988; П Всесоюзн. съезде токсикологов. Ростов-на-Дону, 1988; Всесоюзн.симп. "Реконструкция, стабилизация и репарация биологических мембран", Благовещенск, 1989; VII биохим. конф. Прибалт, респ. «Теоретические и практические аспекты современной биохимии, молекулярной биологии и биотехнологии", Вильнюс, 1990; Vispas. latv. zin. kongr., Riga, 1991 (Всемирн. Конгрессе латвийских ученых); Конф ЮНЕСКО, посвященной 100-летию академика Н.Н.Семенова, Москва, 1998; Х Междунар. конф. «Химия органических и элементоорганических пероксидов», Москва, 1998; Всеросс. конф. «В грядущем столетии - к новому качеству жизни больных ишемической болезнью сердца». Москва, 2000; «Свободные радикалы, антиок-сиданты и болезни человека», Смоленск, 2001; Ш Съезде биохимического общества, С.-Петербург, 2002; ХП Менделеевском съезде по общей и прикладной химии, Казань, 2003; ЕМВО Conference, Bologna, Italy,1999; XI Intl. Congr. liver diseases, Basel, Switzerland, 1999; 3rd and 4rd ISSFAL Congr., Lyon, France, 1998 and Tsukuba, Japan, 2000; FEBS Conference, Birmingham, England, 2000; Intl. Congr. "Fortschritte in Gastroenterologie und Hepatologie 2001", Hannover, Germany, 2001; 42-44ICBL Conf., Bergen, Norway, 2001, Graz, Austria, 2002, Oxfoid,

England, 2003; Intl. Congr. "Gastroenterologiewoche Freiburg 2002", Germany; EASL Conf., Madrid, 2002, Spain; XIth Bien. SERR Meet., Paris, France, 2002; 5th Intl. EFAE Congr., Taipei, Taiwan, 2002; VIII Interl. Congr. on Phospholipids, Vienna, Austria, 2002; 25th World ISF Congr., Bordeaux, France, 2003.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 335 стр., включая 78 рисунков, 24 таблицы, и список литературы. Диссертация состоит из введения, описания объектов, материалов и методов исследования, 3-х глав, заключения, выводов и библиографического указателя (776 источников, из них 680 опубликованы в зарубежных изданиях).

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Объекты, материалы и методы исследования

Основным предметом исследования являлись БР и липиды, выделенные из органов животных или сыворотки крови доноров разных возрастных групп, больных с патологией печени и желчевыводящих путей, а также ишеми-ческой болезнью сердца.

Биофизические и биохимические методы. Способность БР реагировать с пероксилънымирадикалами определяли хемилюминесцентным методом на модели инициированного окисления этилбензола [Шляпинтох с соавт., 1966]. Антиокислительные свойства БР и липидов изучали на модели термического окисления метилового эфира олеиновой кислоты. За скоростью окисления следили по накоплению гидропероксидов в окисляющемся субстрате [Бур-лакова с соавт., 1975].

Липиды из гомогенатов и субклеточных фракций тканей животных, а также сыворотки крови доноров экстрагировали по методу [Bligh, Dyer, 1959], их количество определяли гравиметрически, содержание фосфолипидов измеряли по липидному фосфору [Vaskovsky et al., 1975]. Количественное определение белка проводили по методу [Lowry et al., 1951].

Интенсивность ПОЛоценивали по содержанию диеновыхконьюгатов и диенкетонов. Спектры растворов липидов регистрировали в смеси метанол -гексан на спектрофотометре фирмы «Beckman» (США) [Стальная, Еаришвили, 1979].Активностьаскорбат-и Н/ЩФ»Н-индуцированногоПОЛощ>ед,е1шшпо скорости накопления малонового альдегида, согласно методу, описанному [Владимиров, Арчаков, 1972].

Влияние БР на апоптоз, индуцированный in vitro сфингозином и УФ-облучением, изучали по фрагментации ДНК клеток тимуса мышей. Для идентификации апоптоза выделяли фракцию низкомолекулярной ДНК по методу [Herrmann et al., 1994], которую анализировали методом горизонтального электрофореза в агарозном геле на установке GNA-200 («Pharmacia», Швеция).

Идентификацию ФНО-а в печени проводили с помощью ECL-иммуноблотгинга, используя поликлональные антитела производства фирмы «Santa Cruz» (США). Белки гомогената печени разделяли электрофорезом в НААГ по методу [Laemmli, 1970]. В качестве контроля использовали рекомби-нантный ФНО-а, полученный в лаборатории 1В.Г. Коробко| Институте биоорганической химии РАН.

Сфингомиелиназную активность определяли по методике Hostetier, Yazaki, 1976 с использованием [М-метил-14С] сфингомиелина. Радиоактивность определяли на счетчике «Delta» (Нидерланды).

Работа с животными. Эксперименты по определению влияния БР на интенсивность ПОЛ и активность сфингомиелинового цикла в органах животных проводили на мышах линии Balb/c. БР и сфингозин вводили животным внутрибрюшинно в дозах соответственно 50 мг/кг и 0,8 или 4 мг/кг, контрольным животным вводили Tris-HCl буфер. Исследования проводили на печени, почках, сердце и тимусе мышей через 15 минут-6 часов после введения препаратов.

Подпеченочный холестаз вызывали у крыс линии Wistar наложением лигатуры на обший желчный проток. Лапаратомия проводилась под наркозом (внутривенное введение бриетала в дозе 5 0 МГ/КГ). Время холестаза составляло 3-18 суток. В качестве контроля использовали печень интактных и ложноопе-рированных животных. Внутрипеченочный холестаз у крыс линии Wistar вызывали пероральным введением раствора а-нафтилизотиоцианата (АНИТ), приготовленного с применением твина-80, в дозе 100 мг/кг массы животного. Длительность эксперимента составляла 1-5 суток. В качестве контроля использовали животных, получавших водный раствор твина-80.

Стеатоз печени вызывали путем внутримышечного введения крысам линии Wistar нейтрализованного раствора солянокислого гидразина, в дозе 56 мг/кг, контрольные животные получали инъекцию 0,9%-го раствора NaCl. Крыс забивали через 3,24,48 ч и через 5 суток после начала эксперимента.

На каждую экспериментальную и контрольную точку брали не менее 3-х животных, опыты повторяли не менее двух раз.

Исследование сыворотки крови больных. Сыворотка крови доноров (116 образцов) и больных с поражениями печени (495 образцов) была предоставлена сотрудниками Гепатологического центра Рижского медицинского института (рук. - проф., акад. Латв. АН А.Ф. Блюгер), желчевыводящих путей (139 образцов) - сотрудником Рижской 7-й клинической больницы к.м.н. Г.В. Пупелисом, ишемической болезнью сердца (85 образцов) и доноров пожилого возраста (41 образец) - к.м.н. СВ. Дринишиной (НИИ физико-химической медицины МЗ РФ). Диагностика и лечение больных проводилась в соответст-вуюших медицинских учреждениях на основании обшепринятых методов.

Показатели интенсивности ПОЛ и липидный состав сыворотки крови больных определялись так же, как и в органах животных.

Статистическую обработку результатов проводили с помощью компьютерных программ Microsoft Excel и Origin Pro 6.1 методами вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента. Достоверными считали различия при Р^0,05. На рисунках и в таблицах приведены среднеарифметические значения показателей, в качестве разброса экспериментальных данных указаны ошибки средних значений.

2. исследование ингибирующей активности билирубина в реакциях

свободнорадикалыюго окисления Хотя тот факт, что БР in vitro способен ингибировать реакции ПОЛ, на сегодняшний день достаточно хорошо документирован, по-прежнему остается неясным механизм этого действия. В литературе нам до сих пор не удалось об-

наружить данные, однозначно подтверждающие, что БР может реагировать с пероксильными радикалами. Ингибирующая способность БР выявлялась исследователями по торможению накопления гидропероксидов в окисляющемся субстрате, что является необходимым, но не достаточным условием. Это действие зависит как от скорости обрыва цепей окисления на молекулах антиоксиданта и участия его радикалов в продолжении цепей окисления, так и от его способности реагировать с гидропероксидами без образования свободных радикалов. Между тем, влияние БР на концентрацию пероксильных радикалов в окисляющихся системах не исследовалось. Мало известно о продуктах окисления БР, данные об активности БР и его производных по сравнению с известными природными и синтетическими антиоксидантами также весьма противоречивы.

В настоящей работе изучение механизма антиоксидантного действия БР и его кинетических параметров (антиокислительной активности и константы скорости реакции с пероксильными радикалами К7) проводилось на модели окисления чистых эталонных веществ — этилбензола и метилового эфира олеиновой кислоты.

Способность БР реагировать с пероксильными радикалами определяли хемилюминесцентным методом на модели инициированного окисления этил-бензола. Было установлено, что при введении БР в хемилюминесцентную систему в диапазоне концентраций от 2,5 хЮ"6 моль*л-1 до 10"4 моль'л"1 наблюдается уменьшение интенсивности свечения, причем эффективными оказались достаточно разбавленные растворы (Ю^-Ю"5 мольад"1). Это указывает на химический характер природы тушения. Отношение интенсивности свечения сразу после введения БР к интенсивности сечения без добавок не подчинялось закону Штерна-Фольмера, что также говорит о том, что природа тушения не является физической [Шляпинтох с соавт., 1966].

1.0

0,8 0.6

2 0.4 0,2

к/ г о Зх ЛЬ/Л

¿Г —1,5 х 101 иопъ'л

¿Г —О— 2,5 х 16* моль/л

" -А- 5 х 10* мопь/Л

1 | (10х 10^ муль/л

240

0 60 120 180 время, минуты

1. Кинетические кривые изменения

Рис.

интенсивности свечения системы

0 2 4 6 8 10 Концентрация БР, С х 10 моль/л

Рис. 2. Зависимость интенсивности свечения от концентрации БР при инициированном окислении этилбензола.

Кинетические кривые изменения интенсивности свечения при введении в хемилюминесцентную систему БР отличались от кривых свечения, типичных для ингибиторов радикальных процессов (рис.1). Сначала происходило медленное падение интенсивности свечения, а затем — его плавное нарастание. Такой вид кривых указывает на то, что при реакции БР с пероксильными радикалами образуются продукты его превращения, также обладающие антиради-

калькой активностью. Можно предположить, что первый участок хемилюми-несцентной кинетической кривой (до точки минимума) соответствует реакции БР с пероксильными радикалами и накоплению продуктов его превращения, концентрация которых в точке минимума будет максимальна, а плавное нарастание свечения на втором участке связано в основном с расходованием продуктов превращения.

Эффективность действия БР, определенная по изменению интенсивности свечения в координатах - [Я/л] (рис.2) сразу после его введения составила

К7=1,5х104 л^моль'^с"1, то есть БР обладает антирадикальной активностью, близкой к антирадикальной активности ионола. По величине скорости изменения интенсивности свечения для второго участка кинетических кривых была рассчитана константа скорости реакции взаимодействия пероксильных радикалов с продуктами превращения БР. Оказалось, что К'7=4,8х103 л*моль'1*с"1, то есть продукты превращения БР обладают в три раза более низкой антирадикальной активностью, чем сам БР. Значение К7, определенное спекторофото-метрическим методом, по изменению концентрации БР в окисляющейся системе, совпало со значением, полученным методом хемилюминесценции и оказалось равным 1,4х104 л^моль'^с"1. Следует отметить, что механизм реакции БР с пероксильными радикалами отличается от механизма, типичного для большинства антиоксидантов, поэтому вычисленные величины являются эффективными и, строго говоря, не характеризуют константы скоростей элементарных процессов.

•о— метаполеат - V БР, 5x10* мопь/л ■А- ер, 2x10* мопь/л —О— БР, 10x10'* маль/л

50 100 0 2 4 6 В 10 12

Время, часы Концентрация, 10 моль/л

Рис.3. Определение антиокислительной Рис.4. Зависимость периода индукции окисле-активности БР на метилолеатной модели. них \ етилолеата от концентрации введенных

антио ксидангов.

При исследовании АОА БР на метилолеатной модели было установлено, что при его введении до начала окисления (рис.3) происходит торможение окисления. Между периодом индукции и начальной концентрацией БР наблюдалась линейная зависимость (рис. 4), что позволяет предположить, что исследуемый антиоксидант не принимает участия в побочных реакциях, отклонение от линейности могло бы указывать на то, что ингибитор расходуется при окислении воздухом или при взаимодействии с пероксидами. При проверке этого предположения мы установили, что введение БР в метилолеат с разной глубиной окисления не вызывает падения концентрации гидропероксидов, то есть прямое взаимодействие БР с гидропероксидами отсутствует. Эффективность

действия БР сопоставляли с эффективностью ионола (4-метил-2,6-дитрет бутилфенола). Оказалось, что его АОА в 2 раза превышает АОА ионола, рассчитанный для БР стехиометрический фактор оказался равен 4, что подтверждает наличие ингибирующей активности у продуктов его превращения,

Исходя из полученных данных, можно сделать выводы относительно механизма реакции БР с пероксильными радикалами и природы продуктов его превращения. Молекула БР состоит из двух разделенных метиленовым мостиком и содержащих систему сопряженных двойных связей фрагментов - дипир-риноновых хромофоров, расположенных под углом друг к другу. Метиленовый мостик, вокруг которого происходит вращение дипирринонов, является активным реакционным центром. Наиболее вероятной поэтому является следующая схема реакции: при присоединении радикала по С(9) или С(11) к молекуле БР образуется тетрапиррольный радикал, который затем распадается на два ди-пиррольных фрагмента. В результате реакции последних с радикалом могут образовываться однопиррольные соединения (рис.5).

Рис.5. Схема реакции БР с пероксильным радикалом Я*.

Таким образом, в настоящей работе независимыми методами доказано, что БР является антиоксидантом, ингибирующее действие которого осуществляется в реакции с пероксильными радикалами. Способность БР реагировать с пероксильными радикалами близка к способности ионола, вместе с тем его АОА в два раза превышает активность ионола. Высокая АОА БР определяется тем, что одна его молекула может обрывать больше двух цепей окисления за счет образования продуктов превращения, также обладающих ингибирующими свойствами.

3. Влияние экспериментальной желтухи на интенсивность пероксид-ного окисления липидов у подопытных животных

Повышение в организме уровня БР (гипербилирубинемия) наблюдается при поражениях печени, желчевьнюдящих путей и системы эритропоэза. При всех видах желтухи гипербилирубинемия является результатом нарушения равновесия между скоростью образования и выделения БР.

3.1. Изменение содержание продуктов ПОЛ в органах подопытных живот -ныхпри введении им билирубина

Простейшей моделью желтухи является введение БР подопытным животным. При этом увеличение содержания пигмента носит преходящий кратковременный характер, т.к. избыток БР подвергается быстрому выведению с желчью после перевода в водорастворимую форму путем конъюгации с глюкуро-новой кислотой в гепатоцитах.

Внутрибрюшинное введение БР вызывало резкое снижение содержания продуктов ПОЛ в сердце и почках подопытных животных (рис. 6А, Б). В печени БР вызывал некоторое повышение интенсивности ПОЛ (рис.6В). Так же, как и повышение количества липидов (рис.бГ). данный факт связан с особенностл-ми метаболизма БР в этом органе, одной из функций которого является выведение БР и липидов. При нормальном содержании БР в организме печень переводит его в водорастворимую форму путем глюкуронизации. Избыток БР может подвергаться окислению НАДФН-зависимого ПОЛ. Полагают, что это — альтернативный путь его метаболизма [Cuypers et al., 1983;Laer S, 1997]. Другими словами, небольшое усиление ПОЛ при избыточном поступлении БР в печешь может являться реакцией, направленной на снижение его уровня.

Рис.6. Влияние введения БР на содержание продуктов ПОЛ (нмоль/мг липидов, опыт/контроль) в сердце (А), почках (Б) и печени (В), а также на количество липи-дов (мг/г ткани, опыт/контроль) в печени подопытных мышей (Г)-

Выведение и липидов и БР происходит общими путями — через желчь, и конкуренция между этими двумя

процессами может приводить к накоплению липидов в печени. По данным одних авторов БР ингибирует билиарную секрецию фосфолипидов, не влияя на скорость желчетока и секрецию солей желчных кислот [Gonzalez et al., 1987], а по данным других - обладает слабым холестатитческим действием [Labori et al., 2002].

3.2. Пероксидное окислениепри повышении содержаниялипидов впечени

Гипербилирубинемия сопровождается ростом уровня липидов в печени. Такое влияние БР на содержание липидов зачастую представляется как доказательство его усугубляющего действия при патологии печени.

Ряд исследователей полагает, что накопление липидов в ткани печени само по себе может повреждать орган, повышая в нем количество продуктов ПОЛ за счет увеличения содержания субстрата окисления [Letteron et al., 1996; Teranishi et al., 2000]. Между тем, из клинических данных известно, что жировой гепатоз — клинически малосимптомный процесс, и, по некоторым данным встречается в общей популяции с частотой до 40%.

-лилид/белок

— — — фосфолипиды ------ нейтральные лмпиды

ГОМОГЕНАТ

Рис.7. Изменение липидного состава печени крыс при интоксикации гидразином.

120

При исследовании влияния ожирения печени на интенсивность ПОЛ в качестве стеатогенного яда мы использовали гидразин. Интоксикация гидразином позволяет моделировать ожирение печени без воспалительного компонента [Филов, 1983].

После введения гидразина подопытным животным наблюдались выраженные изменения в состоянии липидов печени - в гомогенате, митохондриях и микросомах возрастало содержание общих липидов, в основном за счет фракции нейтральных липидов, количество фосфоли-пидов при этом росло незначительно (рис.7).

—- — диеновые коиъюгаты

О с

?25

!Й1

..... диенкетоны —скорость

аскорбат-эависимого ПОЛ

ГОМОГЕНАТ

3 -

5. х

МО

^ А -----1

Рис.8. Изменение содержания продуктов ПОЛ и скорости индуцированного ПОЛ в печени крыс при интоксикации гидразином.

1:. ____________4

..в .

О 3 24

48 72 Воемя. ч

12С

МИКРОСОМЫ

120

Концентрация продуктов ПОЛ в ли-пидах гомогената и субклеточных фракциях печени снижалась относительно контрольного уровня; то же относится и к ас-корбат-зависимому образованию малонового диальдегида (рис.8). Наиболее выраженное снижение интенсивности перок-сидных реакций в липидах (в 1,7-1,8 раза) наблюдалось через 24 часа после ведения

животным гидразина, одновременно с ростом содержания липидов. Другими словами, проведенное исследование не выявило прооксидантного действия повышенного содержания липидов в печени подопытных животных. 3.3. Влияние билирубина на интенсивность ПОЛ в печени при холестазе, вызванном а-нафтилизотиоцианатом

Одной из наиболее часто встречающихся причин повышения уровня БР в организме является холестаз — застой желчи. Внепеченочный холестаз встречается при желчнокаменной болезни (ЖКБ) или опухолевом росте. Причины внутрипеченочного холестаза лежат в пределах печени, этот вид холестаза встречается при токсических поражениях или первичном билиарном циррозе.

Экспериментальной моделью внутрипеченочного холестаза служит поражение а-нафтилизотиоцианатом (АНИТ). Биохимические признаки холестаза при отравлении крыс АНИТ достигают максимальной выраженности на вторые-третьи сутки эксперимента.

При вызванном введением АНИТ холестазе через 48 ч после начала эксперимента все исследованные параметры ПОЛ в гомогенате и митохондриаль-ной фракции печени резко снижались (рис.9). Наблюдалось накопление липидов, в основном - за счет возрастания фракции нейтральных липидов, в гомогенате при этом снижался уровень фосфолипидов (рис.10).

Рис.9. Изменение интенсивности ПОЛ в печени крыс при интоксикации АНИТ.

В липидах микросом происходило уменьшение количества диеновых конъюга-тов и снижение скорости аскорбат-зависимого ПОЛ, однако интенсивность индуцированного НАДФН ПОЛ при этом увеличивалась. Отношение липид/белок повышалось, содержание нейтральных липидов возрастало в большей степени, чем фосфолипидов (рис.9, 10). Интенсификация НАДФН-зависимого ПОЛ кажется парадоксальной на фоне снижения всех других показателей ПОЛ в печени отравленных АНИТ крыс. Однако, поскольку БР эффективно окисляется в системе НАДФН-зависимого ПОЛ, усиление НАДФН-зависимого ПОЛ при внутрипеченочном холестазе может являться реакцией, направленной на снижение уровня БР. В силу того, что интенсивность неферментативного ПОЛ на порядок выше, чем ферментативного, вклад последнего в содержание продуктов ПОЛ относительно невелик. В связи с этим суммарные показатели интенсивности этого процесса в печени (содер-

жание диеновых конъюгатов и диенкетонов в липидах) при вызванном АНИТ

холестазе оказались резко сниженными.

I 0,5 1

□ Контроль ВЭкспериыанг О 40 0,42 °'43

Рис. 10. Изменение состава липвдов печени крыс при интоксикации АНИТ.

Общие липиды

Фосфолипиды Нейтральны* липиды

Как было отмечено выше, в отличие от вызванного АНИТ холестаза, при внут-рибрюшинном введении БР наблюдалось некоторое повышение содержания продуктов ПОЛ в печени подопытных животных. В последнем случае гипербилирубинемия не достигает столь высоких величин, как при внутрипеченочном холестазе, и носит кратковременный характер. Именно данное обстоятельство может оказывать определяющее влияние на величину суммарных показателей ПОЛ при внутрибрюшинном введении пигмента. Таким образом, снижение интенсивности ПОЛ при развитии внутрипе-ченочного холестаза является доказательством антиоксидантного действия БР in vivo.

3.4. Интенсивность ПОЛ при перевязке общего желчного протока j крыс

Экспериментальной моделью внепеченочного холестаза служит перевязка общего желчного протока. Как и при ЖКБ, длительно текущий холестаз в данном случае приводит к нарушению функций и гибели клеток печеночной паренхимы. Причины гибели клеток печени при обструкции общего желчного протока, исследованы недостаточно. Рядом исследователей отмечено накопление продуктов ПОЛ в печени [Leonarduzzi et al., 1995; Orellana et al., 2000], од-н,ако эти изменения фиксировались ими на стадиях далеко зашедшего процесса, что позволяет выявить наличие патологии, но не ее причины. Общеизвестно, что процессы ПОЛ могут стимулировать гибель гепатоцитов, однако их усиленное протекание может являться также и следствием разрушения или повреждения клеток [Buttke, Sandstrom, 1994; Rosser, Gores, 1995].

Для определения роли реакций свободнорадикального окисления в повреждении печени при подпеченочном холестазе мы исследовали изменение содержания продуктов ПОЛ в печени крыс при перевязке общего желчного протока на ранних стадиях холестаза и на стадии сформировавшейся патологии. Оказалось, что в печени крыс, подвергнутых ложной операции, количество продуктов ПОЛ несколько повышается на ранних, до 3-6 дней, сроках эксперимента. Данный факт объясняется стрессовой реакцией и небольшими воспалительными явлениями в зоне раневой поверхности при ложной операции. В

дальнейшем уровень продуктов ПОЛ в печени ложнооперированных животных монотонно снижался, достигая к 9 дням эксперимента значений, равных показателям интактных животных. У крыс с перевязкой общего желчного протока, напротив, в течение первых дней после операции содержание продуктов ПОЛ в печени интенсивно снижалось, доходя через 9 дней эксперимента до величин на 35-40% меньших, чем в контроле (рис. 12А и Б). Однако позже, к 12-м CJT-кам происходил значительный рост диеновых конъюгатов и диенкетонов, уровень которых к 16 дням превысил контрольные значения более чем в 2 раза.

Рис.11. Изменение содержания продуктов ПОЛ в печени крыс (нмоль/мг липиаов, опыт/контроль) при подпеченочной желтухе, вызванной перевязкой общего желчного протока.

Как показывают кли-0 5 10 15 нические исследования, при

Время после перевязки общего жетного протока, дни закупорке общего ЖвЛЧНОГО

протока камнем патологические процессы имеют сходный характер. Если обструкция в течение 1-2 недель прекращается, показатели быстро нормализуются, и только при обструкции, сохраняющейся более 3-4 недель, появляются признаки глубокого поражения печени [Блюгер, Новицкий, 1984].

В силу особенностей своего метаболизма, компоненты желчи, основными из которых являются БР и желчные кислоты, накапливаются в ткани печени с разной скоростью. Содержание БР быстро возрастает в первые дни холестаза, в дальнейшем его уровень стабилизируется. На поздних сроках более высокими темпами растет количество желчных кислот [Parola et al., 1996]. БР, как было показано выше, обладает антиоксидантными свойствами, а детергентные желчные кислоты способны усиливать процессы ПОЛ [Sokol et al., 1995; Ljubuncic et al., 2000]. Следовательно, ярко выраженный фазовый характер изменения содержания продуктов ПОЛ в печени при холестазе определяется разнонаправленным действием компонентов желчи на изучаемый процесс. Снижение интенсивности ПОЛ на ранних сроках холестаза может быть обусловлено антиок-сидантным действием БР, а при развитии патологии начинают преобладать обусловленные действием желчных кислот деструктивные процессы, что находит отображение в возрастании показателей ПОЛ.

4. Антиапоптотическое действие билирубина, обусловленное влиянием на функционирование сигнальной системы сфингомиелинового цикла

Известно, что окислительный стресс может индуцировать программируемую клеточную смерть - апоптоз, в то время как антиоксиданты подавляют апоптоз [Kamata, Hirata, 1999; Chandra et al., 2000]. Данные о том, что БР может защищать клетки от программируемой смерти, на момент начала проведения данной работы нами обнаружены не были. Пути, по которым проходит сигнал апоптоза, наряду с другими возможностями, включает активацию сфингомие-линового цикла. Сфингомиелиновый цикл является генератором вторичных посредников, участвующих в регуляции апоптоза (продуктов гидролиза сфинго-миелина - церамида и сфингозина).

4.1. Влияние БР на апоптоз, индуцированный сфингозином и УФ-облучением.

Влияние БР на апоптоз изучалось в экспериментах in vitro, на изолированных тимоцитах мышей. Исследование проводилось на двух моделях - индукции апоптоза непосредственно окислительным воздействием (УФ-облучение) и продуктом сфингомиелинового цикла, сфингозином, химическая структура которого не предполагает наличия у него прооксидантных свойств.

Рис. 12. Влияние введения сфингозина на содержание продуктов ПОЛ в печени мышей: 1 -диеновые конъюгаты, 2 -диенкетоны.

Следугт, однако, отметить, что существующие в литературе сведения о влияние продуктов сфингомие-линового цикла на процессы ПОЛ разноречивы [Liu et al., 1998; Li et al., 2002]. Воздействие сфингозина на протекание реакций ПОЛ в дозах, вызывающих фрагментацию ДНК в печени [Alessenko, Khrenov, 1999], исследовалось нами при внутрибрюшинном введении 0 2 « « препарата. Как оказалось, введение сфингозина, вызывает выраженное нарастание содержания продуктов ПОЛ в печени мышей (рис.12).Меланизм усиления ПОЛ при действии сфинго-зина не вполне ясен. Имеются, однако, данные о токсическом действии сфинго-зина на митохондрии, приводящем к увеличению генерации пероксида водорода [Garcia-Ruiz et al., 1997].

i i I « I

Рис.13. Влияние БР на апоптоз, индуцированный in vitro в клетках тимуса мышей с фингозином и УФ-облучением: 1 - контроль, 2 — сфингозин, 3 — офингозин + БР, 4 — УФ-облучение, 5 - БР, добавленный после УФ-облучения.

Исследование влияния БР на фрагментацию ДНК в изолированных тимоцитах мышей под воздействием сфингозина in vitro показало, что БР эффективно защищает клетки от индуцировашюго сфингозином апоптоза. Данные, полученные методом гель-электрофореза, представлены на рис.13 (2 и 3). БР добавленный к тимоцитам после УФ-облучения, также ингибировал межнуклеосом-ную деградацию ДНК, вызванную этим воздействием (4 и 5). Полученные нами результаты находятся в соответствии с представленными выше данными о прооксидантном действии сфингозина и с имеющимися в литературе сведениями о защитном действии БР при УФ-облучении [Ossola, Tomaro, 1998].

4.2. Влияние билирубина на активность нейтральной сфингомиелиназы in vitro

БР является липофильным соединением, продемонстрирована высокая избирательность при связывании БР с фосфолипидами мембран, содержащими катионные головные группы (фосфатидилхолином и сфингомиелином). Показано, что его взаимодействие со сфинго миелином носит предпочтительный ха-

рактер [Eriksen et al., 1981]. В комплексе со сфингомиелином пропионаты БР образуют ионные пары с четверичным аммонием холиновой компоненты сфин-гомиелина [Yang et al., 1991].

Рис.14. Влияние БР на активность нейтральной СФМазы гомогената печени мышей in vitro.

В связи с этим мы предположили, что взаимодействие БР со сфингомиелином может влиять на жизнедеятельность клеток путем воздействия на активность ключевого фермента сфингомиелино-вого цикла - СФМазы, и ингибирования проведения сигнала апоптоза через сфингомиелиновый ЮОимольБР цикл, поскольку СФМаза отщепляет от сфинго-именно фосфохолиновую группу. И действительно, оказалось, что в эксперименте in vitro простое добавление БР к гомогенату печени мыши в концентрации 100 (1М0ЛЬ/Л (соответствующей желтухе средней степени) вызывает снижение активности СФМазы на 25-30% (рис.14).

4.3. Изменение активности нейтральной сфингомиелиназы в органах подопытных животных при введении им билирубина

В экспериментах, проведенных на клеточных культурах, показано, что окислительный стресс вызывает активацию СФМазы [Buttke, Sandstrom, 1994; Huwiler, et al., 2001]. Данных о связи активности СФМазы с уровнем реакций ПОЛ in vivo нами на момент начала проведения этой работы в литературе обнаружено не было.

1|2' i -----------------Рис.15. Влияние внутрибрюшинного введения БР на ак-

тивность СФМгды (имп/мин/мг белка, опыт/контроль) в гомогенатах органов мышей.

Поскольку БР относится к числу эффективных антиоксидантов, закономерно возникает вопрос - может ли БР влиять на активность СФМазы, меняя уровень окислительных процессов в клетке? В связи с этим в настоящей работе была поставлена задача - изучить характер влияния БР на активность СФМазы в различных органах и исследовать связь между активностью фермента и содержанием продуктов ПОЛ.

20 30 40 Время, мин

Рис.16. Взаимосвязь изменения содержания продуктов ПОЛ и активности СФМазы в сердце (А), почках (Б) и печени (В) мышей при введении им БР.

При внутрибрюшинном введении мышам БР активность СФМазы в сердце и почках у подопытных животных падала, уменьшаясь в 1,3-1,6 раза по сравнению с контролем через 30 мин после начала эксперимента. Через 1 ч наблюдалась тенденция к нормализации, однако в сердце и к этому времени показатели не достигали исходного уровня (рис.15). В печени подопытных животных через 15 мин после введения БР в изменении активности СФМазы по сравнению с контрольными животными наблюдалась тенденция к повышению, а через 30 мин активность СФМазы существенно (в 1,4 раза) снижалась, нормализуясь через 1ч после начала эксперимента. БР.

В наших исследованиях характер изменения активности нейтральной СФМазы повторял характер изменения содержания продуктов ПОЛ во всех исследованных органах как у экспериментальных, так и у контрольных животных. На рис.16 продемонстрирована взаимосвязь между этими двумя параметрами с высокими коэффициентами линейной корреляции.

4.4. Роль билирубина в изменении активности нейтральной сфингомиели-назыприхолестатическихпораженияхпечени

Из данных клинических исследований известно, что для холестатических повреждений печени характерно наличие телец Маллори в биоптатах печени, ведущая роль в гибели гепатоцитов при холестазе отводится процессам апопто-за [Rodrigues, Steer, 2000; Rolo et al., 2002]. В связи с этим представляется интересным исследование изменения активности СФМазы в динамике развития хо-лестатического повреждения печени. Сведений о роли активации сфингомие-линового цикла в повреждении печени при холестазе в доступной литературе нами не обнаружено.

5 10 Бремя после герееяэт общего жагмюго прслска, д«

20 ЭО 40 50 Диеновые юнюгаты, нмоль/мггигмда

Рис.17. Изменение активности нейтральной сфингомиелиназы (А) и взаимосвязь между содержанием продуктов ПОЛ и активностью нейтральной сфингомиелиназы в печени крыс при подпеченоч-ной желтухе, вызванной перевязкой общего желчного протока.

Оказалось, что в течение первых 9 дней эксперимента активность СФМазы уменьшалась по сравнению с контролем (ложная операция). Повышение активности СФМазы у ложнооперированных крыс на ранних сроках (3 дня) эксперимента было несущественным и в дальнейшем снижалось до значений, характерных для интактных животных. К 12 дням холестаза активность СФМазы, в печени подопытных животных резко увеличивалась, еще большим было это повышение через 16 суток (рис.17А). Другими словами, активность СФМазы при холестазе изменялась точно таким же образом, как и интенсивность реакций ПОЛ. Между активностью фермента и содержанием продуктов ПОЛ в печени при подпеченочной желтухе, как и при введении БР подопытным животным, выявлена достоверная положительная корреляция (рис.17Б).

Мы полагаем, что изменение активности СФМазы при холестазе, так же как и интенсивности ПОЛ, может определиться балансом между влиянием желчных кислот и БР. Показано, что детергенты (к числу которых относятся желчные кислоты) оказывают на СФМазу активирующее действие [Liu et al., 1998; Tomiuk et al., 2000]. В таком случае, снижение активности фермента на ранних сроках эксперимента может быть обусловлено антиоксидантным действием БР, а на более поздних - влиянием желчных кислот.

4.5. Взаимосвязь экспреОШ-ССиактивностисфингомиелиназыпечени при перевязке общего желчного протокау крыс

Важнейшую роль в индукции апоптоза посредством активации сфинго-миелинового цикла играет провоспалигельный цигокин ФНО-а [Liu et al., 1997]. Другой стороной циготоксического действия ФНО-а является окислительный стресс [Buttke, Sandstrom, 1994; Li et al., 2001]. В печени ФНО-а производят купферовские клетки и холангиоциты [Andus, Holstege, 1994]. Несмотря на то, что основной формой гибели клеток печени при подпеченочном холе-стазе является апоптоз, сведений о роли экспрессии в холестастатиче-

ских повреждениях в литературе нет. В связи с этим одной из задач задачей данного исследования явилось исследование взаимосвязи экспрессии с

активацией сфингомиелинового цикла и накоплением продуктов ПОЛ при перевязке общего желчного протока.

Рис.18. Измененж содержания ФНО-а (мкг/мг белка, опыт/контроль) в печени крыс при подпеченочной желтухе, вызванной перевязкой общего желчного протока.

Оказалось, что в течение первых дней по-еле перевязки общего желчного протока содержание в печени интенсивно снижалось, доходя до величин меньших, чем в контроле (ложная операция). Однако позже, на 12 сутки происходил значительный рост содержания ФНО-Х (рис.18). Подобный характер изменения содержания ФНО-а в может являться отражением воспалительных процессов в печени и в желчных протоках в условиях развившейся патологии.

Таким образом, изменения экспрессии ФНО-а при механической желтухе, также как и сдвиги интенсивности ПОЛ и активности СФМазы, носят фазовый характер. Снижение ФНО-а на ранних сроках экспериментальной механической желтухи совпадает по времени с максимальной скоростью накопления БР. Способность БР снижать экспрессию про воспалительных цитокинов, в том числе ФНО-а показана Pileggi et al., 2001. Желчные кислоты, накапливающиеся на более поздних сроках холестаза, обладают свойством стимулировать выработку ФНО-а моноцитами и печеночными макрофагами [Fox et al., 1997]. В связи с их детергентными свойствами желчные кислоты, также могут менять лиганд-рецепторные взаимодействия. Если предположить, что в условиях холестаза в гепатоцитах также активируются или увеличиваются в количестве рецепторы для ФНО-а, то ФНО-а, ассоциируясь с избыточными рецепторами, должен вызывать активацию СФМазы на поздних сроках эксперимента. И дей-

5 10 1!

Время после перевязки общего желчного протока, они

ствительно, как показано выше, было обнаружено, что на поздних сроках холе-стаза активность СФМазы, как и содержание ФНО-а в печени подопытных животных резко увеличивалась (рис. 18А).

60 -

А ОПЫТ А контроль А Y = 12.1 + 32.3 * X R=0,76, Р=0.02

Рис.19. Связь между изменением содержания ФНО-а и продуктов ПОЛ, а также активности сфинго-миелиназы в печени крыс при перевязке желчного протока.

0,4 0,6 0,8 1,0 ФНО-а, цг/мг белка

Как и следовало ожидать, подпече-ночный холестаз приводит к однотипным сдвигам всех изученных показателей (поскольку токсическое действие ФНО-а тесно связано с усиленной генерацией активных форм кислорода, а активность СФМазы зависит от активности процессов ПОЛ в клетке). На рис. 19 продемонстрированы взаимо-£ "! . м^Г^у = 16,1 +25,6*Х зависимости между этими тремя парамет-в s R=0,89, PcO.OOl рами. Как и при введении БР подопытным

животным, наблюдается тесная взаимосвязь между активностью СФМазы и интенсивностью реакций ПОЛ. Однонаправленность и одновременность изменений не позволяет установить причинно-следственную связь между исследуемыми процессами. В то же время отчетливый фазовый характер изменений дает возможность для оценки их патогенетической значимости при холестазе. По существу, полученные нами данные свидетельствуют о том, что процессы ПОЛ не являются первопричиной гибели клеток печени при холестазе. В то же время, несомненно, что резкое возрастание уровня продуктов ПОЛ при длительно текущем патологическом процессе может являться, не только одним из проявлений гибели гепатоцитов, но и вносить существенный вклад в структурно-функциональные повреждения клеток печени.

Таким образом, результаты наших исследований (как в экспериментах in vitro, так и при моделировании желтухи у животных) показали, что ярко выраженное ингибирующее влияние БР апоптотическую гибель клеток носит комплексный характер. Оказалось, что кроме собственно антиоксидантного действия, БР способен препятствовать прохождению сигнала апоптоза, снижая активность ключевого фермента сфингомиелинового цикла, СФМазы, блокируя, помимо этого, проапоптотическое действие его продукта — сфингозина.

5. Роль БР в регуляции интенсивности ПОЛ при патологии печени и желчевыводящих путей

Известно, что липидный обмен представляет собой систему со многими связями регуляции, и в условиях целостного организма наблюдаются ответы на внешние воздействия всей системы в целом. Эти ответы в значительной степени зависят от состояния печени как центрального органа, ответственного за синтез, катаболизм, всасывание из кишечника и удаление липидов из организма. Состояние этих процессов, в свою очередь, находит отражение в степени

окисленности, качественном составе и количественном содержании липидов в сыворотке крови.

В связи с тем, что реакции ПОЛ являются универсальным модификатором свойств биологических мембран, многие авторы [напр., Suematsu et al., 1977; Loguercio, Federico, 2003] ведущую роль в патологии печени и желчевыводя-щих путей отводят интенсификации процессов ПОЛ. Однако, как было продемонстрировано в предыдущих главах, повышение уровня БР (которое обыкновенно наблюдается при данных заболеваниях.) приводит не к интенсификации, а, напротив, к ингибированию окислительных реакций в липидах мембран органов подопытных животных.

5./. Интенсивность ПОЛи его связь с изменениями состава и антиокислительных свойствлипидов в сывороткекрови практическиздоровых доноров

В исследованиях, проводимых в течение ряда лет в ИБХФ РАН Бурлако-вой с соавт., установлено, что на уровне биологических мембран существует физико-химическая система регуляции, обеспечивающая протекание ПОЛ на стационарном уровне. Параметрами этой системы являются антиокислительная активность (АОА) и состав липидов, способность их к окислению и структурные переходы в мембранах. В случае если аналогичная регуляция существует на организменном уровне, ее показателями должны являться параметры липид-ного обмена сыворотки крови, а ключевую роль в ее функционировании будет играть печень. С целью выяснения данного вопроса в настоящей работе исследовались взаимосвязи между интенсивностью ПОЛ, изменениями липидного состава и антиокислительных свойств липидов в сыворотке крови практически здоровых доноров разных возрастных групп. Содержание продуктов ПОЛ было выше у пожилых людей, что соответствует данных других исследователей [Spiteller, 2001]. Выраженными были и сезонные изменения — уровень АОА липидов был минимальным, а содержание продуктов ПОЛ — максимальным в весенне-летний сезон.

Рис.20. Взаимосвязь между АОА липидов, степенью их окисленности (концентрацией продуктов ПОЛ в липидах) и их содержанием в сыворотке крови доноров.

Между АОА липидов и содержанием диеновых конъю-гатов в них была выявлена отрицательная (рис.20А), а между АОА липидов и содержанием 5 10 липидов в сыворотке крови и

Общие пипиды,

молодых, и пожилых доноров — положительная корреляция. Интересно отметить, что между содержанием общих липидов в сыворотке крови и степенью их окисленности существует обратная корреляция (рис.20Б). Поскольку синтез липопротеидов, в составе которых циркулируют липиды сыворотки крови, происходит в печени, по-видимому, при возрастании в крови уровня продуктов ПОЛ печень таким обра-

-4-2 0.

АОА липидов, (часхмл/фсЮ

зом производит снижение концентрации (разбавление) потенциально опасных продуктов ПОЛ в липидах. Известно, что пероксидному окислению подвергаются в первую очередь фосфолипиды. Как следует из данных, представленных на рис.21, относительное возрастание содержания фосфолипидов в общих ли-пидах у практически здоровых доноров сопровождалось увеличением уровня АОА липидов.

Рис.21. Взаимосвязь между изменением АОАи относительным содержанием фосфолипидов в липидах сыворотки крови практически здоровых доноров.

Обогащение липидов легкоокисляемьми фракциями (фосфолипидами) при повышении уровня антиокси-дантов рассматривается как физико-химическая систему регуляции, обеспечивающая стационарность процессов ПОЛ. Таким образом, взаимосвязь между изменением _д _2 0 скорости окислительных реакций в липидах, их составом АОАлиледов, (часхш1Л>юл и антиокислительными свойствами, т.е. физико-химическая система регуляции окислительных реакций в липидах сыворотки крови действительно существует. Поскольку печень является центральным органом в метаболизме липидов, повышение уровня БР при ее патологии может рассматриваться как фактор, направленный на поддержание функционирования других органов в условиях повышения продукции свободных радикалов или снижения поступления антиоксидантов. Мо;кно предположить, что, если в норме печень выполняет свою гомеостатическую функцию в поддержании стационарного режима реакций ПОЛ в целостном организме путем модификации количественного содержания и качественного состава липопротеидов сыворотки крови, то при патологии органа дополнительным способом регуляции интенсивности ПОЛ является изменение уровня БР. В последующих главах, посвященных исследованию взаимосвязей между количеством БР, показателями ПОЛ и липид-ным составом сыворотки крови больных с поражениями печени и желчевыво-дящих путей, будут рассмотрены факты в пользу этой гипотезы.

5.2. ВлияниеБРна интенсивность ПОЛпри остром вирусном гепатите

Центральное место патогенезе в ОВГ занимает цитолитический синдром, характеризующийся выходом в кровь печеночных ферментов и различных внутриклеточных метаболитов. Непосредственные причины повреждений гепа-тоцитов при ОВГ изучены недостаточно. Тем не менее, многие исследователи как ранее, так и в настоящее время ведущую роль в патогенезе синдрома цитолиза и гибели печеночных клеток при ОВГ отводят ПОЛ. В ряде работ [см., напр., Нисевич с соавт., 1978] продемонстрировано коррелирующее со степенью тяжести заболевания повышение уровня продуктов ПОЛ в крови больных ОВГ, а в качестве патогенетической терапии предлагаются препараты антиок-сидантного действия [von Herbay et al., 1997]. Следует иметь в виду, однако, что содержание липидов в сыворотке крови у больных ОВГ также резко повышено.

Под нашим наблюдением находилось больные с желтушной формой ОВГ в разгаре заболевания. Как видно из табл.1, содержание продуктов ПОЛ в сы-

воротке крови больных было повышено соответственно степени тяжести заболевания, что согласуется с данными других авторов. Однако степень окислен-ности липидов (количество продуктов ПОЛ в пересчете на 1 мг липидов), напротив, с нарастанием степени тяжести заболевания снижалась. В связи с этим мы полагаем, что повышенное содержание продуктов ПОЛ у больных ОВГ определяется не интенсификацией реакций ПОЛ, а увеличением уровня самих липидов в сыворотке крови. При изучении зависимости между уровнем продуктов ПОЛ и общих липидов у больных ОВГ, как и у здоровых доноров была выявлена положительная корреляция (рис.22А).

Таблица 1. Изменение биохимических показателей крови при ОВГ

■\П)утгаы обследованных (в скобках указано количество об-N. следован- ^•чЦЫХЛИЦ) Биохимический \ показатель N. Практически здоровые лица (116) Больные легкой формой ОВГ (49) Больные сред-ветяжеяой формой ОВГ (73) Больные тяжелой формой ОВГ (58)

Общие липиды (мг/мл) 5,9±0,2 б,5±0,3 8,5±0,4* 11,0±0,7*

Фос< юлил иды (мг/мл) 1,8±0,2 1,7±0,1 2,8±0,2* 3,9±0,3*

Фос<! юлипиды/холестерин 0,81±0,0<5 0,72±0,13 0,98±0,08* 1,29±0,07*

Диеновые конъюгаты (нмоль/мл) 136±4 190±10* 207±6* 230±7*

Диеновые конъюгаты (нмоль/мг липидов) 23,1±0,5 29,2±3,1* 24,4±1,4 20,9±1,1*

Диенкетоны (нмоль/мл) 30,б±0,9 47,3±3,3* 37,8±3,3* 37,3±1,$*

Диенкетоны (нмоль/мг липидов) 5,18±0,12 7,28±0,38* 4,45±0,47 3,39±0,20*

АОА ((часхмл/г)х10 ■*) -1,52±0,25 -2,31 ±0,27* -1,09±0,13 -0,10±0,18*

Билирубин (цмоль/л) 9±4 80±6* !25±6* 220±21*

* - достоверные различия между больными ОВГ и практически здоровыми донорами.

Рис.22. Корреляция содержания липидов с количеством продуктов ПОЛ (А), АОА липидов (Б) с уровнем диеновых конъюгатов и общих липидов (В), а также АОА с содержанием фосфо-липидов в липидах сыворотки крови (Г) больных ОВГ и практически здоровых доноров.

АОА ли-пидов сыворотки крови у больных ОВГ повышалась нарастанием тяжести заболе-

вания.

Содержание фосфолипидов в общих липидах у больных с тяжелой формой ОВГ имело тенденцию к повышению по сравнению с таковым у практически здоровых доноров и было в 1,4 раза выше, чем у больных с легкой формой ОЕ'.Г. Все исследованные зависимости между параметрами ПОЛ и липидного об/лена у больных ОВГ практически не отличались от таковых у практически здоровых доноров (рис.22). То есть взаимосвязь между изменением скорости окислительных реакций в липидах, их составом и антиокислительными свойствами или физико-химическая система регуляции стационарного режима окислительных реакций в липидах сыворотки крови, у больных ОВГ не нарушена.

В настоящее время хорошо известно, что БР, уровень которого также повышается соответственно степени тяжести ОВГ, проявляет свойства антиокси-данта. Однако на момент начала проведения настоящего исследования данные о том, что БР может выполнять функции эндогенного антиоксиданта, в частности, в регуляции интенсивности ПОЛ при ОВГ, в литературе отсутствовали.

I »

- *

• •• Y --4,66 + 0,074 * X FU0,74,P<0 0001

Е 3

| 3

| 1 40

С J

£ 1

i 1 0 1 20

• %

Г** * «i

Y = 44,9 - 0,101 * X Rs*0,68, Р<0 0001

: Т^ .

Рис.23. Зависимость содержания продуктов ПОЛ и АОА липидов от содержания БР в сыворотке крови больных ОВГ.

20 40 60 80 Билирубин свободный, нмоль/мл сыворотки

100 200 300

Билирубин общий, нмоль/мл сьвороти*

Между содержанием в сыворотке крови больных ОВГ общего БР и продуктов ПОЛ нами была выявлена отрицательная, а между уровнем АОА липидов и липидорастворимого свободного БР — положительная корреляция, т.е. у больных с высоким уровнем БР содержание продуктов ПОЛ в крови было ниже, а антиоксидантов — выше, чем у больных с низким уровнем БР (рис.23). Это хорошо согласуется с тем фактом, что БР обладает антиоксидантными свойствами. При оценке вклада, вносимого БР в изменение АОА липидов при ОВГ с нарастанием степени тяжести заболевания, оказалось, что он составляет 82±16%. Позже аналогичное, связанное с БР, повышение АОА липидов сыворотки крови было показано [Dailly et al., 1998] при серповидно-клеточной анемии и при желтухе новорожденных [Belange et al., 1997]. Интересно отметить, что при ОВГ А с появлением желтухи большинство патологических симптомов, свойственных продромальному периоду, исчезают. К этому же времени происходит очищение организма от вируса.

Для определения влияния БР на процессы, связанные с повреждением ге-патоцитов, нами было предпринято исследование связи между интенсивностью ПОЛ и изменением активности печеночного фермента аланинаминотрансфера-зы (АлАТ) (как показателя цитолитического синдрома, т.е. лабилизации мембран гепатоцитов) с уровнем продуктов ПОЛ, АОА липидов и БР в динамике развития патологического процесса при ОВГ В.

Выбор данной формы ОВГ обусловлен тем обстоятельством, что, в отличие от ОВГ А, для ОВГ В характерно постепенное нарастание желтухи. Желту-

ха достигает максимального развития не ранее, чем через 5-6 дней с момента появления, в то время как проявления цитолиза наблюдаются значительно раньше, уже в преджелтушном периоде [Блюгер, Новицкий, 1984].

Рис.24. Изменение содержания продуктов ПОЛ, БР, липидов уровня АОА липидов и гк-тивности АлАТ в сыв-ротке крови больных в динамике ОВГ В.

Как оказалось, в процессе нарастания желтухи и па максимуме ее развития наблюдается достоверное снижение активности АлАТ и содержания продуктов ПОЛ, а также повышение АОА липидов по сравнению с величинами, обнаруженными при поступлении больных в стационар (рис.24). При последующем снижении уровня БР (в начале фазы спада желтухи) происходило некоторое повышение активности АлАТ и интенсивности ПОЛ, а также снижение АОА липидов. В дальнейшем, в фазе выздоровления, уровень БР, АОА липидов, активносгь

АлАТ и содержание продуктов ПОЛ в сыворотке Период заболевания, дни -

крови больных монотонно снижались, что коррелировало с нормализацией других клинико-биохимических показателей.

Таким образом, при ОВГ В наблюдается параллелизм между изменением активности АлАТ и уровня продуктов ПОЛ, при этом повышение уровня БР сопровождается повышением АОА, снижением активности АлАТ и интенсивности пероксидных реакций в липидах сыворотки крови больных.

Известно, что антиоксиданты играют важную роль в регуляции клеточной пролиферации, процессы физиологической и репаративной регенерации идут при повышенном уровне АОА липидов [Бурлакова с соавт., 1975]. Регенерация гепатоцитов возникает уже в ранние сроки ОВГ (в течение 1-й недели) [Блюгер с соавт., 1980; ВгаёИаш й а1., 1998]. Интересно отметить, что обладающие повышенным уровнем БР крысы Оыпп на частичную гепатэктомию ст-вечают более интенсивным синтезом ДНК, чем интактные животные [СИаши1еаи е! а1., 1991]. То есть, повышение уровня БР у больных ОВГ и связанное с этим повышение АОА липидов, по-видимому, можно интерпретировать как реакцию, направленную на снижение уровня токсичных продуктов ПОЛ и усиление репарационных процессов в печени.

От неосложненных форм ОВГ В качественно отличаются тяжелые формы с энцефалопатией. В основе этого синдрома лежит массивный некроз паренхимы печени. Поскольку процесс гибели клетки на каком-либо из этапов должен

включать в себя пероксидное окисление ненасыщенных жирных кислот, параметры окислительных реакций в липидах при коматогенных формах ОВГ В, должны подчиняться существенно иным, чем при неосложненных формах заболевания, закономерностям.

Таблица 2. Изменение показателей ПОЛ и клиннко-биохимических проб печени в сыворотке крови больных коматогенными формами ОВГ В.

Группы обследованных (в скобках указано коли* сство обследованных лиц) ОВГ В, очень тяжелая форма МП ОВГ В, пре-кома(18) ОВГ В, кома (21).

Общие липиды (мг/мл) 7,9±0,4*'# 6,410,2° 6,610,3"

Фосфолипиды (мг/мл) 1,6±0,1# 1,1±0,2*° 0,7±0,1*'°

Фосфолипиды/Холестерин 1,10±0,21 0,80±0,14° 0,2410,03*'°

Цигновые конъюгаты (нмоль/мг липидов) 34,9±1,4*'# 37,912,0*° 34,211,5*'°

Цигнкстоны (нмоль/мг липидов) 5,73±0,37* 10,4310,61*° 14,31Ю,68*-°

АОА ((часхмл/г)х 10'3) -0,0310,32* +0,20±0,26* +0,29±0,23*

Би.пгрубин (цмоль/л) 302139* 304141* 368123*'°

Общий белок (г/л) 65 ±5 60±3 41±5

Акгивность АлАТ (ммоль/чхл) 6,6±0,3 6,1±0,3 3,9±0,4

* - достоверные различия между больными ОВГ В и практически здоровыми донорами.

- достоверные различия между тяжелой неосложненной формой ОВГ В и различными стали)! ми печеночно-клеточной комы.

- достоверные различия между тяжелой неосложненной формой ОВГ В и группой риска развития печеночно-клеточной недостаточности.

Как было показано выше, уровень общих липидов и фосфолипидов, а также отношение фосфолшшды/холестерин, в сыворотке крови больных неос-ло:кненным ОВГ В повышались с нарастанием тяжести. В группе больных, находившихся в состоянии прекомы и комы, напротив, происходило резкое снижение этих показателей. Содержание продуктов пероксидного окисления в липидах у больных с энцефалопатией, в отличие от неосложненных форм ОВГ В повышалось. Однонаправленные изменения в группах выявлены лишь при изучении уровня АОА лигшдов сыворотки крови - этот показатель повышался с нарастанием степени тяжести заболевания при неосложненных формах ОВГ В и был еще более высок при печеночно-клеточной коме (см. табл.2).

Повышение АОА липидов и снижение уровня продуктов ПОЛ при неос-ложненных формах ОВГВ происходило параллельно с возрастанием содержания легкоокисляемых фосфолипидов. Иные взаимосвязи были выявлены у больных с энцефалопатией. Если у больных, находящихся в стадии прекомы, никакой корреляции между содержанием продуктов ПОЛ, фосфолипидов и АОА липидов не обнаруживается, то в стадии комы между уровнями диеновых конъюгатов и АОА липидов, так же как и между содержанием фосфолипидов в липидах и уровнем диеновых конъюгатов, выявляется прямая корреляция (рнс.25). То есть физико-химическая система регуляции ПОЛ при коматогенных формах ОВГ В нарушена, накопление продуктов ПОЛ происходит не за счет повышенного содержания липидов в сыворотке крови, а в связи с усилением реакций окисления в липидах. Нарушите стационарности ПОЛ при этом может быть как причиной, так и следствием гибели клеток печени больных.

Одновременное повышение уровней продуктов ПОЛ и АОА липидов можно объяснить, по-видимому, прогрессирующим аутолизом печеночной паренхимы с массивным выходом в кровь продуктов распада гепатоцитов, в том числе и продуктов свободнорадикального окисления фосфолипидов мембран.

Рис. 25. Взаимосвязь медцу содержанием фосфолипвдов и уровнем АОА, а также продуктов ПОЛ у ольных тяжелыми неосложненными и осложненными печеночной комой формами ОВГ В.

Среди контингента больных была выделена группа из 11 человек, которую мы условно обозначили как «больные очень тяжелой формой ОВГ В». Хотя эти больные и не имели признаков энцефалопатии, основные взаимосвязи между параметрами ПОЛ у них были такими же, как у больных, находившихся в прекоматозном состоянии. По сравнению с группой больных тяжелой неосложненной формой, содержание диеновых конъюгатов и диенкетонов в липидах у них повышалось более чем в 2 раза, а фосфолипидов снижалось в 2,5 раза (табл.2). То есть в данном случае, как и при коматогенных формах заболевания, имело место усиление реакций ПОЛ, что может свидетельствовать об опасных тенденциях в развитии патологического процесса. В изменении рутинных клинико-биохимических показателей прослеживалась только тенденция к снижению активности АлАТ. При использовании в качестве дополнительного критерия показателей ПОЛ клиницист мог бы обратить особое внимание на данных больных, которые могут составлять группу риска в плане развития печеночно-клеточной недостаточности. Настороженность должно, на наш взгляд, вызывать одновременное повышение содержания БР и продуктов ПОЛ в сыворотке крови больных.

Как видно из рис.26, при тяжелых неосложненных формах ОВГ В существует обратная корреляция между содержанием диеновых конъюгатов и общего БР и прямая корреляция между уровнем АОА липидов и свободного БР. В стадии прекомы взаимосвязь между содержанием продуктов ПОЛ и содержанием общего БР в крови больных отсутствовала. При развитии у больных коматозного состояния нами была выявлена прямая корреляция как между содержанием диеновых конъюгатов и БР, так и между уровнями АОА липидов и БР.

Рис. 26. Взаимо-

связь между содержанием БР и АОА липидов, а также уровнем продуктов ПОЛ у больных тяжелыми неосложненными и осложненными пече-50 250 450 650 ночной комой о«щи» билирубин (имолк/шл сыворотки) формами ОВГ В.

Закономерно возникают вопрос: почему БР «не справляется» со своими антиоксидантными функциями при печеночно-клеточной коме. Внутриклеточный транспорт, коньюгация и экскреция БР зависят от энергетического состояния клетки, а при коматогенных формах ОВГ В наблюдаются грубые нарушения энергетического обмена, происходит прогрессирующее нарастание уровня неконъюгированного БР в крови. Концентрация БР в гепатоцитах при этом может оказаться недостаточно высокой, чтобы оказать существенное влияние на интенсивность протекания процессов ПОЛ в мембранах. Наблюдаемое возрастание уровня АОА липидов является меньшим, чем ожидаемое, т.е. соответствующее увеличению содержания БР в крови больных. Об этом же свидетельствует и вид зависимости уровня АОА липидов от содержания БР при тяжелых неосложненных и осложненных комой формах заболевания (рис.26). Печень относится к органам с мощными регенераторными способностями, показано, что гибель этого органа происходит при потере только более 80-90% жизнеспособной массы [Eguchi et al., 1997]. По-видимому, когда этот порог бывает превышен, БР уже не способен защищать гепатоциты. Таким образом обнаружено качественное отличие коматогенных форм ОВГ В от неосложненных форм этого заболевания, состоящее в том, что накопление продуктов ПОЛ в крови больных с энцефалопатией происходит одновременно с разбалансировкой систем, регулирующих интенсивность ПОЛ. В свою очередь, нарушение регуляции и резкое возрастание уровня продуктов ПОЛ при коматогенных формах ОВГ В могут являться не только одним из проявлений усиленного массивного некроза паренхимы печени, но и в связи с самоускоряющимся характером процесса и токсичностью его продуктов, вносить существенный вклад в ухудшение состояния больных при этой тяжелой патологии.

5.3. Роль билирубина в регуляции ПОЛ при хронических заболеваниях печени

Исходами ОВГ зачастую являются хронические гепатиты — хронический персистирующий, с доброкачественным течением (ХПГ) и хронический активном (ХАТ), характеризующемся прогрессирующим воспалительным процессом и эволюцией в цирроз печени (ЦП). Степень гипербилирубинемии при данных заболеваниях как правило, невелика. Многие исследователи основным фактором, повреждающим клетки печени, считают хронический окислительный стресс, индуцируемый клетками иммунного ответа организма на вирусные антигены. Наличием постоянного окислительного стресса объясняют также эволюцию ЦП в гепатоцеллюлярную карциному при хронической вирусной инфекции (см., напр., Yamamoto et al., 1998).

При изучении взаимосвязи между уровнем БР и интенсивностью ПОЛ в сыворотке крови при хронических гепатитах и циррозах, в полном соответствии с данными других авторов [Loguercio, Federico, 2003], оказалось, что степень выраженности изменения всех биохимических показателей, включая показатели ПОЛ, была существенно меньшей, чем при острых формах заболевания (рис.27). Следует отметить, что при ХАГ, несмотря на повышенный уровень БР, снижения содержания продуктов ПОЛ в сыворотке крови больных (в отличие от острых форм заболевания) не отмечалось. Данное обстоятельство может свидетельствовать об усиленной индукции реакций ПОЛ при ХАГ.

Конечной стадией ХАГ является развитие ЦП - необратимого процесса, характеризующегося фиброзом и перестройкой сосудистой системы печени. При исследовании интенсивности ПОЛ в крови больных ЦП оказалось, что при компенсированном циррозе наблюдается некоторое снижение содержания продуктов ПОЛ, а в случае декомпенсации цирроза (нарастание активности патологического процесса) показатели ПОЛ в сыворотке крови больных были такими же, как и у практически здоровых доноров (рис.27). В терминальной стадии ЦП, осложненной нарастающими явлениями печеночно-клеточной недостаточности количество продуктов ПОЛ возрастало и становилось подобным таковому при развитии печеночной комы при ОВГ В.

К патологиям, протекающим с такой же степенью гипербилирубинемии, как ХПГ, ХАГ и ЦП (за исключением терминальной стадии заболевания), относится синдром Жильбера. Однако, в отличие от них, остальные функции печени при этом заболевании остаются сохранными. Синдром Жильбера является наследственным доброкачественным пигментным гепатозом, встречается у 2-15% людей. Часть клиницистов не считает синдром Жильбера болезнью [Peгsico et al, 2001]. То есть сравнение параметров ПОЛ при данных четырех патологиях способно выявить степень влияния БР на интенсивность ПОЛ при ХГ и ЦП.

_____А____

'40-----

20 • - . - -

231___

Г*1 ...

25 7 "26 9

т гЬ 2"

Н А

I || I * |

ДО 15 1,1 | ||„а , 1...1 , И,И , 1...1

ПН * 1

Рис.27. Содержание продуктов ПОЛ и уровень АОА липидов сыворотки крови при хронической патологии печени.

Из данных, представленных на рис.27, можно заметить, что при имеющемся в крови больных ХПГ, ХАГ и ЦП уровне БР (А) содержание продуктов ПОЛ (Б, В) у них должно было бы быть существенно меньшим. АОА липидов при ЦП оказалась также значительно более низкой, чем при таком же уровне БР у больных синдромом Жильбера (Г). То есть помимо били-рубинемии на уровень продуктов ПОЛ при XГ и ЦП существенное влияние оказывают иные факторы. Этими факторами могут являться продуцирование провоспалительных цитокинов и активных форм кислорода иммунокомпетентными клетками, а также гипоксия, обусловленная разрастанием соединительной ткани. Именно тот факт, что показатели ПОЛ не отличаются от таковых у практически здоровых доноров, может свидетельствовать об усилении процессов ПОЛ при данных заболеваниях.

5.4 Гипербилирубинемия и интенсивность ПОЛ сыворотки крови при холестатических поражениях печени

Наиболее высоких показателей гипербилирубинемия достигает при холе-стазах, в частности, в случае первичного билиарного цирроза (ПБЦ) и подпече-

ночной желтухи опухолевого генеза (при опухолях желчевыводящих путей и дуоденопанкреатической зоны). Таблица 3. Биохимические показатели сыворотки В

крови больных первичным билиарным циррозом.

первом случае высокий

уровень БР обусловлен нарушением экскреции желчи на уровне внутрипеченочных желчных протоков, а во втором — является следствием сдавления общего желчного протока опухолью. Многие исследователи ведущую роль в патогенезе ПБЦ отводят окислительному стрессу [см., напр., Логинов с соавт., 1995; АЬоиТлеа й а1., 2003], хотя имеющиеся в литературе сведения об интенсивности реакций ПОЛ при ПБЦ весьма противоречивы [Баппай й а1., 1995].

Как ВИДНО ИЗ табл.3, В СЫворотке крови больных ПБЦ рез-обследованных.

ко, в 2-3 раза, повышен уровень общих липидов (в основном за счет фосфолипидов и холестерина). Обращает на себя внимание резкий рост атерогенной фракции липопротеидов — Р-липо-протеидов (электрофоретического эквивалента ЛПНП). Увеличено и содержание продуктов ПОЛ в пересчете на 1 мл сыворотки крови, при этом количество продуктов ПОЛ в пересчете на 1 мг липидов, напротив, в случае неосложнен-ного портальной гипертензией ПБЦ, снижалось. На стадии далеко зашедшего патологического процесса содержание диеновых конъюгатов в липидах становилось равным таковому у практически здоровых доноров, а уровень диенкето-

Биохимические показатели Первичный билиарный цирроз (24)

Билирубин общий, нмоль/мл 178 ±19*

Билирубин свободный, нмоль/мл 26±4*

Активность АлаТ, ммоль/ч»л 1,8 ±0,3*

Общие липиды (мг/мл) 10 4 ±0,9*

Фосфолипиды (мг/мл) 3,4 ±0,4*

Холестерин (мг/мл) 3,9 ±0,3*

З-липопротеиды (ед.) 90 ±5*

Диеновые конъюгаты (нмоль/мл) 233 ±18*

Диенкетоны (нмоль/мл) 35,4 ±3,3

Диеновые конъюгаты (нмоль/мг) 18,1 ±1,4

Диенкетоны (нмоль/мг) 3,10 ±0,25

*- достоверные различия между больными ПБЦ и здоровыми донорами, в скобках указано количество

2 0,5

¥ о.о 2

§ -0.5

8 -'.о

Г»

В=0,86, Р-0,0007

* *ж.~тС

го 4о и во

Билирубин свободный, нмоль/мл

100 200 300 400 Билирубин общий, нмоль/мл

Рис.28. Взаимосвязь между уровнем БР, АОА липидов и содержаниемпродуктов ПОЛ в сыворотке крови больных ПБЦ.

Другими словами, выявляемое многими исследователями повышение содержания продуктов ПОЛ при ПБЦ (как и при ОВГ) связано не с усилением окислительных реакций в липидах, а с повышением содержания липидов в сыворотке крови больных. АОА липидов сыворотки крови у больных неос-ложненным ПБЦ была существенно повышена по сравнению с донорами, при осложненной форме заболевания

она несколько снижалась. Между содержанием в сыворотке крови больных ПБЦ общего БР и диеновых коньюгатов, а также диенкетонов была выявлена обратная, а между уровнем АОА липидов и липидорастворимого свободного БР — прямая корреляция (рис. 28). Эти зависимости согласуются с тем фактом, что БР обладает антиоксидантными свойствами. При проведении расчета (аналогичного тому, что был применен в разделе, посвященном ОВГ) можно убедиться, что, что повышение АОА при ПБЦ обусловлено антиоксидантными свойствами БР.

Убедительным подтверждением отсутствия интенсификации ПОЛ при ПБЦ яляется широко известный факт, что у больных ПБЦ, несмотря на чрезвычайно высокий уровень атерогенных фракций липидов, не выявляется повышенный риск развития атеросклероза. Это явление обычно объясняют изменениями количества холестерина липопротеидов высокой плотности и состава аполипопротеидов сыворотки крови [Cnppin et al., 1992; Propst et al., 1993].

Рис.29. Взаимосвязь между содержанием липидов и продуктов ПОЛ в сыворотке крови больных ИБС, ПБЦ и доноров пожилого возраста.

У больных атеросклерозом, в отличие от здоровых доноров соответствующей возрастной группы и больных ПБЦ, нами выявлена прямая корреляция между содержанием продуктов ПОЛ и общих липидов (рис.29). Данный факт может свидетельствовать о нарушении регуляции процессов ПОЛ или о поступлении дополнительного количества окисленных липидов из очагов гипоксии или воспаления, обусловленных атеросклеротическим повреждением сосудов. Логично предположить, что при ПБЦ, несмотря на выраженные атерогеиные изменения липидного спектра сыворотки крови, БР, в связи с его антиоксидантными свойствами, может уменьшать риск развития атеросклероза. Подтверждением этому является другой известный факт — среди больных синдромом Жильбера также имеет место редкая встречаемость ИБС [У^ек et а1., 2002]. Таким образом, в сыворотке крови больных ПБЦ, так же как и в печени животных с внутрипеченочным холе-стазом, вызванным введением АНИТ, наблюдается угнетение реакций ПОЛ, обусловленное антиоксидантным действием БР.

Среди причин подпеченочной желтухи значительное место занимают опухоли гепатопанкреадуоденальной области. В связи с тем, что клинические и биохимические проявления холестаза однотипны при всех его формах, а инструментальные методы исследования бывают информативны на стадиях далеко зашедшего процесса и небезопасны для больного, дифференциальная диагно-

стика подпеченочной желтухи опухолевого генеза (ПЖОГ) и ПБЦ часто бывает затруднена. До настоящего времени хирурги в диагностически неясных случаях предпочитают прибегать к пробной диагностической лапаротомии, отягощающей течение заболевания, если холестаз связан с ПБЦ.

Рис. 30. Содержание продуктов ПОЛ в сыворотке крови больных ПБЦ и подпеченочными желтухами опухолевого генеза.

2-1

При обследовании больных с холестатически-ми желтухами оказалось, что в сыворотке крови больных ПБЦ и ПЖОГ содержится разное количество продуктов ПОЛ (рис.30), среднее содержание ди-енкетонов при ПЖОГ превышало таковое при ПБЦ более чем в 7 раз. У больных, для которых дифференциальная диагностика при поступлении в стационар по известным критериям представляла определенные трудности, на основании определения содержания продуктов ПОЛ в сыворотке крови правильный диагноз был поставлен в 100% случаев. Точность установленного диагноза была в дальнейшем подтверждена инструментальными методами исследования и дальнейшим клиническим ходом заболевания. Таким образом, определение содержания продуктов ПОЛ в сыворотке крови больных может являться биохимическим критерием для дифференциальной диагностики ПБЦ и ПЖОГ.

и ш с

Рис.31. Взаимосвязь между уровнями БР и продуктов ПОЛ, а также между количеством липидов и продуктов ПОЛ в сыворотке крови больных неосложнен-ными формами ЖКБ.

К одной из наиболее часто встречающихся форм холестаза относится подпече-ночная желтуха при желчнокаменной болезни (ЖКБ). Многие авторы важную роль как в формировании желчных конкрементов, так и в патогенезе повреждения печени при ЖКБ отводят процессам ПОЛ [Bгaganza, "МогШ^^т, 1995]. При ЖКБ, как и при других видах холестаза, в печени и сыворотке крови больных, наряду с другими компонентами желчи, закономерно возрастает уровень БР. Было обнаружено, что показатели ПОЛ сыворотки крови при неосложненных формах ЖКБ мало отличались от таковых у практически здоровых лиц. Между содержанием в сыворотке крови больных ЖКБ общего БР и диеновых коньюгатов, а также диенкетонов была обнаружена обратная корреляция. Эта зависимость хорошо согласуются с тем фактом, что БР обладает антиоксидантными свойствами и свидетельствует о том, что процессы ПОЛ в сыворотке крови больных ЖКБ находятся в сбалансированном состоянии. Об этом же может свидетельствовать обратная, как и у

практически здоровых доноров корреляция между содержанием продуктов ПОЛ и общих липидов (рис.31).

В силу анатомической близости, особенностей кровоснабжения, тесной связи лимфатических сосудов и общей иннервации печени, желчевыводящих путей и поджелудочной железы, частым осложнением ЖКБ является воспаление поджелудочной железы. Лечение подпеченочной желтухи при ЖКБ - хирургическое, однако при неправильном выборе момента операции (обострение сопутствующего панкреатита) могут наблюдаться серьезные осложнения, вплоть до летального исхода. К сожалению, применяемые методы исследования, в силу своей неинформативности, часто не позволяют выявить наличие обострения патологического процесса в поджелудочной железе в предоперационном периоде у больных ЖКБ. Достоверная диагностика дает в этом случае основание рассчитывать на существенное уменьшение осложнений и летальности. Мы предположили, что использование показателей ПОЛ может оказаться целесообразным в качестве дополнительного критерия для выявления обострения сопутствующего панкреатита у больных ЖКБ и выбора оптимального времени хирургического вмешательства.

Было выполнено параллельное обследование больных хроническим экза-цербирующим панкреатитом, неосложненной и осложненной сопутствующим панкреатитом ЖКБ, а также деструктивным холециститом, в качестве групп сравнения были определены практически здоровые доноры и больные, оперированные по поводу послеоперационных грыж.

Рис.32. Показатели ПОЛ в сыворотке крови больных хроническим экзацербирующим панкреатитом и осложненной сопутствующим панкреатитом ЖКБ.

В группах больных хроническим экза-цербирующим панкреатитом и осложненной сопутствующим панкреатитом ЖКБ были выявлены общие закономерности: при обострении патологического процесса в поджелудочной железе в сыворотке крови больных наблюдалось резкое усиление процессов ПОЛ. Еще более были изменены показатели ПОЛ у больных с сочетанной патологией поджелудочной железы и желчевыводящих путей, что может свидетельствовать о взаимоусугубляющем характере биохимических отклонений. При регрессе патологического процесса в поджелудочной железе все исследованные показатели ПОЛ у больных обеих групп нормализовались (рис.32).

У больных неосложненной и осложненной сопутствующим панкреатитом ЖКБ (в случае, если хирургическое вмешательство было произведено в периоде ремиссии панкреатита - показатели ПОЛ, близкие к нормальным) благоприятное течение послеоперационного периода сопровождалось умеренным усилением процессов ПОЛ, что может объясняться стрессовой реакцией, влиянием наркоза и операционной травмой. В дальнейшем, по мере выздоровления, ин-

тенсивность ПОЛ в крови больных снижалась до величин, наблюдаемых у практически здоровых людей (рис.33).

Рис.33. Содержание продуктов ПОЛ в сыворотке крови больных при неосложненном течениии послеоперационного периода (деструктавный холецистит (п=7) и неосложненная ЖКБ (п=14)) и тяжелом течении послеоперационного периода (осложненная сопутствующим панкреатитом ЖКБ(п=9)).

У части больных, которые, согласно данным рутинных исследований, находились в фазе ремиссии панкреатита, чрезвычайно интенсивное возрастание показателей ПОЛ после хирургического вмешательства сопровождалось резким обострением патологического процесса в поджелудочной железе и тяжелым течением послеоперационного периода. При ретроспективном анализе было установлено, что показатели ПОЛ у этой группы больных уже в предоперационном периоде были резко изменены, что может свидетельствовать, по-видимому, об имевшемся у них патологическом процессе в поджелудочной железе, не выявленном при рутинном кли-нико-биохимическом обследовании. При использовании в качестве дополнительного критерия показателей ПОЛ клиницист мог бы рекомендовать данной группе больных в предоперационном периоде консервативное лечение до стихания патологического процесса в поджелудочной железе.

Существенную роль в интенсификации ПОЛ при ЖКБ, осложненной сопутствующим панкреатитом помимо факторов, связанных с воспалением поджелудочной железы, могут играть дефицит жирорастворимых антиоксидант-ных витаминов Е и К, повышенный уровень липидов, которые под действием липазы поджелудочной железы могут превращаться в обладающие мембрано-тропным действием свободные жирные кислоты, ишемия печени, приводящая к усилению свободнорадикального окисления в мембранах гепатоцитов.

Таким образом, процессы ПОЛ могут играть важную роль в патогенезе сочетанных заболеваний желчевыводящих путей и поджелудочной железы процессы ПОЛ. Приведенные в настоящей работе данные свидетельствуют о возможности использования показателей ПОЛ для выбора лечебной тактики и оптимального времени хирургического вмешательства у данного контингента больных. Представляется также целесообразным применение препаратов анти-оксидантного действия в пред- и послеоперационномпериодах у больных желчнокаменной болезнью с сопутствующим панкреатитом с целью профилактики обострения патологического процесса в поджелудочной железе.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Широко известно, что процессы ПОЛ протекают в любой живой клетке и являются необходимым условием ее нормальной жизнедеятельности. Интенсивность ПОЛ регулируется несколькими системами, действие которых взаимосвязано и дополняет друг друга, а общий уровень свободнорадикальных реакций и скорость накопления повреждений в клетках зависит от сбалансиро-

ванного функционирования этих систем. Избыточная генерация активных форм кислорода приводит к тому, что процесс свободнорадикального окисления принимает самоускоряющийся характер, следствием чего является накопление продуктов ПОЛ, повреждение мембранных структур клеток, окислительная модификации белков-ферментов, нарушение функционирования нуклеиновых кислот и, в конечном итоге - повреждение органов и тканей. Гибель клеток, наблюдающаяся при различных патологиях, может происходить посредством некроза или апоптоза. Апоптоз и некроз могут протекать параллельно, а большое количество апоптотических клеток - приводить к вторичному некрозу. Процессы ПОЛ способны стимулировать гибель клеток по обоим механизмам, их усиленное протекание может также являться следствием разрушения клеток.

Одной из важнейших систем, поддерживающих стационарность процессов ПОЛ в организме, является система природных антиоксидантов, поступающих с пищей или генерируемых эндогенно. Антиоксиданты играют важную роль в регуляции структурно-функциональной активности мембран и проявляют терапевтическое действие при заболеваниях, в основе патогенеза которых лежит интенсификация ПОЛ. Как впервые было обнаружено нами, одним из эндогенных антиоксидантов является желчный пигмент БР. Выраженное анти-оксидантное действие БР было показано нами на объектах различной степени сложности - окислении простых химических веществ, введении БР подопытным животным, моделировании сопровождающихся желтухой поражений пг-чени и желчевыводящих путей, а также в клинических исследованиях.

Печень является центральным органом в метаболизме липидов, ответственным за их синтез, катаболизм, всасывание из кишечника и удаление из организма. Как было показано в настоящей работе, в сыворотке крови существует взаимосвязь между изменением скорости окислительных реакций в липидах, их составом и антиокислительными свойствами, что свидетельствует о существовании физико-химической системы регуляции ПОЛ на организменном уровне. Путем изменения количества липопротеидов и варьирования их состава печень может поддерживать стационарный режима ПОЛ в целостном организме. Образование желчи, одним из основных компонентов которой является БР, представляет собой другую важнейшую функцию печени.

Рассмотрим, каким образом уровень БР в организме связан с изменением содержания продуктов ПОЛ в органах и тканях в условиях нормы и при патэ-логии печени. Содержание БР в организме определяется динамическим равновесием между скоростью его образования и выделения. Увеличение уровня БР может быть обусловлено усилением его продукции в гемоксигеназной реакции, либо снижением скорости выведения печенью через желчевыводящие пути. Количество ежедневно образующегося в организме здорового человека БР достаточно велико — 250-300 мг. В связи с этим, его содержание, наличествующее, наряду с другими антиоксидантами, в крови и клетках оказывается достаточным, чтобы предотвращать повреждение клеток в случае стационарного «фонового» действия окислительных стимулов. Усиления процессов ПОЛ при этом не наблюдается, поскольку имеется баланс между про- и антиоксидантами.

В случае умеренного окислительного стресса в клетках происходит усиление выработки БР путем индукции гемоксигеназы, относящейся к классу сгрессовых белков. Такая ситуация характерна, например, для психологических стрессов, физических нагрузок и т.п. [Niess et al., 1999; Benitez et al., 2002]. Наблюдаемое при этом усиление реакций ПОЛ незначительно и носит кратковременный характер. За счет усиления продукции БР система способна быстро восстановить исходный уровень пероксидных реакций в липидах мембран.

Гипербилирубинемия, обусловленная нарушениями выведения БР из организма, характерна для заболеваний печени и желчевыводящих путей. В основе патогенеза заболеваний печени лежит цитолитический синдром, причиной которого, как полагает большинство исследователей, является окислительное повреждение мембран гепатоцитов, индуцируемое иммунокомпетентными клетками. При заболеваниях печени и желчевыводящих путей закономерно нарушается все функции гепатоцитов, в том числе и связанные с поддержанием липидного гомеостаза. При достаточно серьезных, несовместимых с нормальным функционированием, повреждениях клеток печени начинается их гибель по механизму апоптоза. Данная ситуация имеет место, например, при циклическом протекании острого вирусного гепатита, когда апоптоз является способом очищения организма от инфекции вирусом [Kanzler, Galle., 2000]. Одновременно с другими изменениями метаболизма снижается скорость выведения различных веществ, в частности БР, с желчью, что приводит к росту его содержания в ткани печени и сыворотке крови. Благодаря антиоксидантным и антиапоптоти-ческим свойствам БР, гипербилирубинемия приводит к снижению интенсивно-сги ПОЛ, уменьшению темпа гибели гепатоцитов и усилению репарационных процессов в печени. Одновременно с этим, циркулирующий в кровотоке БР способен защищать от окислительного стресса остальные органы. Следова-тгльно, желтуха, наблюдающаяся при заболеваниях печени и желчевыводящих путей, может рассматриваться как дополнительный компенсаторный механизм, позволяющий регулировать интенсивность протекания реакций ПОЛ в организме в условиях нарушения функциональной способности гепатоцитов.

Как было показано в настоящей работе, взаимосвязь между изменением скорости окислительных реакций в липидах, их составом и антиокислительными свойствами, т. е. физико-химическая система регуляции стационарного режима окислительных реакций в липидах сыворотки крови больных острым вирусным гепатитом на максимуме развития желтухи не нарушена. Аналогичные зависимости были выявлены и у больных XOT, компенсированными циррозами и желчнокаменной болезнью, протекающей без осложнений. В связи с вышеизложенным, нам представляется правомочной аналогия между повышением уровня БР при патологии печени и повышением температуры тела при простудных заболеваниях. И то, и другое до недавнего времени рассматривалось как опасное проявление болезни. И, подобно тому, как гипертермия в настоящий момент считается одним из элементов защиты организма от инфекции, так и гипербилирубинемия может снижать индуцированное различными патогенными агентами усиление свободнорадикальных окислительных реакций в ли-пидах. При нарушениях оттока желчи БР способен, по-видимому, компенсиро-

вать дефицит жирорастворимых антиоксидантных витаминов, наблюдаемый при этой патологии из-за малабсорбции. И, наконец, повышение уровня БР может рассматриваться и как фактор, направленный на поддержание функционирования других органов в условиях повышения продукции свободных радикалов при повреждении или гибели гепатоцитов.

Когда сила окислительного стресса чрезмерно велика (например, в связи с силой иммунного ответа при фулминантных формах вирусного гепатита), и количество апопотических клеток достигает некоторой критической величины, происходит массивная гибель гепатоцитов по механизму вторичного некроза. При этом количество БР, генерируемого при протекании гемоксигеназной реакции или накапливаемого при нарушениях его выведения оказывается недостаточным для защиты клеток. Происходит нарушение регуляции и резкое возрастание уровня продуктов ПОЛ, что в связи с самоускоряющимся характером процесса и его разрушительностью, а также из-за токсичности его продуктов приводит организм к гибели. Такая ситуация типична для коматогенных форм острого вирусного гепатита, терминальных стадий хронических заболеваний печени, опухолей панкреадуоденальной области и для представляющих угрозу жизни осложнений, развивающихся у больных желчнокаменной болезнью при неправильном выборе времени проведения хирургического вмешательства.

Тем не менее, в случаях, когда потери жизнеспособных клеток не превышают регенераторные возможности (в случае печени - когда остается не менее 20% гепатоцитов), гипербилирубинемия представляет собой эффективный механизм собственной защиты организма. В силу постоянной выработки БР организмом, индуцибельности фермента, ответственного за его генерацию, и накапливания при патологии печени и желчевыводящих он способен в течение достаточно продолжительного времени предотвращать свободнорадикальное повреждение клеток различных органов и тканей в условиях функциональной недостаточности печени.

Помимо усиленного протекания реакций ПОЛ, к гибели клеток по механизму апоптоза может приводить активация сфингомиелинового цикла - генератора вторичных посредников проведения апоптотических сигналов. Нами было изучено действие БР на апоптоз, индуцированный продуктом сфингомие-линового цикла, сфингозином и УФ-облучением, а также влияние БР на активность СФМазы и связь между активностью этого фермента и интенсивностью ПОЛ. Оказалось, что антиапоптотические свойства БР, помимо его непосредственного антиоксидантного действия могут проявляться опосредованно - через ингибирование СФМазы, активность которой зависит от интенсивности ПОЛ. При этом дополнительным механизмом ингибирования СФМазы БР может являться его избирательное связывание со сфинголипидами мембран при взаимодействии с клеточной поверхностью. Выявленные закономерности заключаются в зависимости активности СФМазы от интенсивности ПОЛ и влиянии БР как на ПОЛ, так и на сигнальную систему сфингомиелинового цикла. Сфингомие-линовый цикл активируется теми же окислительными стимулами, которые вызывают индукцию ответственной за образование БР микросомальной гемокси-геназы. Другими словами, увеличение продукции БР (помимо остальных, хо-

рошо изученных адаптивных реакций), может рассматриваться как явление, направленное на ингибированне проведения сигнала апоптоза через сфингомие-линовый цикл.

Рис 34 Механизм антиапоптотического действия БР.

Исходя из полученных в настоящей работе результатов и имеющихся в литературе сведений, мы предлагаем следующую схему комплексного защитного анти-апоптотического действия БР на уровне липидов мембран: 1) непосредственно ан-тиоксидантное действие; 2) влияние на структурную организацию мембран за счет связывания с холинсодержащими ли-пидами; 3) ингибирование активности СФМазы; 4) предотвращение проокси-дантного действия продуктов сфингомие-линового цикла (рис.34). Кроме этого, БР может оказывать дополнительное цито-протекторное действие путем снижения содержания проапоптотиче-

ские свойства которого также во многом реализуются через активацию сфин-гомиелинового цикла.

Полученные в настоящей работе данные об ингибировании БР апоптоти-ческой деградации ДНК могут, на наш взгляд, быть полезными при разработке методов и выборе тактики лечения заболеваний, сопровождающихся желтухой. В частности, можно предположить, что гипербилирубинемия оказывает серьезное влияние на эффективность противораковой терапии у больных с опухолями гепатопанкреадуоденальной области. Лечение этих больных (радио-, хемо- и фотодинамическая терапия) направлено на индукцию окислительного стресса, приводящего к гибели клеток опухоли путем апоптоза. При этом гипербилиру-бинемия, в связи с антиапоптотическими и антиоксидантными свойствами БР, может снижать эффект лечения. В то же время при вирусном гепатите желтуха должна, по-видимому, рассматриваться не как явление, осложняющее течение заболевания, а как реакция, направленная на защиту организма от интоксикации и стабилизацию гепатоцитов. Данный факт надо иметь в виду, поскольку большинство гепатопротекторов, как и БР, относятся к классу антиоксидантов.

Особое место БР в цитопротекции состоит в том, что он является эффективным компонентом собственной защиты и накапливается в организме или генерируется клетками в ответ на широкий спектр опасных воздействий. Функция БР как одного из важнейших антиоксидантов настоящее время уже не подвергается сомнению большинством исследователей. Усиление продукции БР предлагается использовать в качестве лечебного воздействия при диабете, панкреатите, пневмониях, системных воспалительных заболеваниях, воспалениях

АПОПТОЭ

желудочно-кишечного тракта, ишемической болезни сердца.

В заключение приведем высказывание McDonagh, одного из ведущих специалистов в области исследования свойств билирубина: «Быть может, пока еще преждевременно рекомендовать прием таблеток билирубина вместе с ежедневной порцией витаминов, но наличие полезных свойств у этого золотистого пигмента с такой плохой репутацией больше не кажется абсурдом».

Автор выражает искреннюю благодарность проф. Е.Б. Бурлаковой и проф. А.В. Алесенко за постоянную внимание и поддержку при проведении настоящей работы, акад. Латв. АН А.Ф. Блюгеру и д.х.н. и проф. Н. Г. Храповой за полезные советы и продуктивное обсуждение результатов, а также сотрудникам и аспирантам Лаборатории молекулярных механизмов клеточной пролиферации ИБХФ РАН и Латвийского гепатологического центра за помощь в проведении экспериментов.

СПИСОКСОКРАЩЕНИЙ

• АлАТ-аланинаминотрапсфераза; • ПЖОГ - подпеченочная желтуха опухолевого

генеза;

АНИТ-а-нафтилизотиоцианат; • ПОЛ - пероксидное окисление липидов; АОА-антиокислительная активность;» СФМаза- сфингомиелиназа; БР - билирубин; • • ФНО-а - фактор некроза опухоли-альфа;

ЖКБ - желчнокаменная болезнь; • ХАГ - хронический активный гепатит, ОВГ - острый вирусный гепатит; • ХПГ - хронический персистирующий гепатит; ПБЦ - первичный билиарный цирроз; • ЦП - цирроз печени.

ВЫВОДЫ

Обнаружено, что билирубин обладает антиокислительной активностью, в два раза превышающей активность ионола. Высокая антиокислительная активность билирубина определяется тем, что одна его молекула может обрывать больше двух цепей окисления за счет образования продуктов превращения, также обладающих ингибирующими свойствами. Антирадикальная активность продуктов превращения в 3 раза ниже, чем активность самого билирубина

2. Обнаружено, что in vivo билирубин также обладает свойством ингиби-ровать реакции свободнорадикального окисления липидов: внутрибрюшинное введение билирубина вызывает снижение содержания продуктов ПОЛ в почках и сердце мышей; в печени при этом наблюдается накопление липидов.

3. Выявлено, что гипербилирубинемия, обусловленная внутрипеченоч-ным холестазом (введение животным Ot-нафтилизотиоцианата), сопровождается резким снижением уровня продуктов ПОЛ и уменьшением скорости аскорбат-

зависимого ПОЛ в печени крыс. Происходящее одновременно с этим усиление микросомального НАДФН-зависимого ПОЛ не оказывает существенного влияния на содержание продуктов ПОЛ в органе.

4. Впервые показано, что при желтухе, вызванной перевязкой общего желчного протока, на ранних сроках холестаза в печени крыс наблюдается выраженное снижение содержания продуктов ПОЛ, а также провоспалительного и проапоптотического цитокина ФНО-Ct, что совпадает по времени с максимальной скоростью накопления билирубина. Обнаружено, что на поздних сроках холестаза, при развитии патологического процесса происходит усиление процессов ПОЛ и накопление

5. На экспериментальных моделях ожирения печени, индуцированного введением подопытным животным гидразина, и внутрипеченочного холестаза показано, что повышение содержания липидов не вызывает усиления реакций ПОЛ в печени крыс.

6. Впервые в экспериментах in vivo выявлена взаимосвязь между функционированием сфингомиелинового цикла, генерирующего вторичные посредники сигнала апоптоза, и интенсивностью процессов ПОЛ. Обнаружено, что изменение активности ключевого фермента этого цикла, нейтральной сфинго-миелиназы, происходит одновременно и однонаправленно с изменением содержания продуктов ПОЛ в органах животных. Показано, что продукт сфинго-миелинового цикла сфингозин вызывает усиление реакций ПОЛ в печени мышей.

7. Впервые показано снижение активности нейтральной сфингомиелина-зы в органах подопытных животных при гипербилирубинемии. Обнаружено, что in vitro билирубин также обладает ингибирующим действием на нейтральную сфингомиелиназу.

8. Впервые на изолированных тимоцитах мышей обнаружено ингиби-рующее действие билирубина на апопотоз, индуцированный ультрафиолетовым облучением и продуктом сфингомиелинового цикла сфингозином.

9. Впервые показано, что гипербилирубинемия при остром вирусном гепатите, первичном билиарном циррозе и синдроме Жильбера сопровождается выраженным снижением содержания продуктов пероксидного окисления в ли-пидах и нарастанием антиокислительной активности сыворотки крови больных. Обнаружена достоверная положительная корреляция между уровнем антиокислительной активности липидов и содержанием билирубина в сыворотке крови больных. Показано, что повышение антиокислительной активности липидов происходит за счет билирубина.

10.При исследовании взаимосвязи между изменениями степени билиру-бинемии, уровня продуктов ПОЛ и активности печеночных ферментов в динамике развития патологического процесса при остром вирусном гепатите выявлена обратная зависимость между степенью лабилизации мембран гепатоцитов и содержанием билирубина в сызоротке крови больных. Предположено, что повышение содержания билирубина при остром вирусном гепатите может яв-

ляться защитной реакцией, направленной на стабилизацию гепатоцитов и снижение содержания продуктов ПОЛ.

11.Обнаружено, что при коматогенных формах острого вирусного гепатита В наблюдается резкое усиление процессов ПОЛ в сыворотке крови больных.

12.Показано, что показатели ПОЛ сыворотки крови при неосложненных формах желчнокаменной болезни мало отличаются от таковых у практически здоровых лиц. Между содержанием в сыворотке крови больных билирубина и продуктов ПОЛ обнаружена отрицательная корреляция. При сочетанных заболеваниях желчевыводящих путей и поджелудочной железы выявлена интенсификация процессов ПОЛ.

^.Продемонстрировано, что в сыворотке крови практически здоровых людей существует взаимосвязь между изменением скорости окислительных реакций в липидах, их составом и антиокислительными свойствами, т.е. физико-химическая система регуляции окислительных реакций в липидах сыворотки крови.

14.Показано, что взаимосвязь между изменением скорости окислительных реакций в липидах, их составом и антиокислительными свойствами в ли-пидах сыворотки крови у больных неосложненными формами заболеваний печени и желчевыводящих путей не нарушена.

^.Продемонстрирована информативность определения параметров ПОЛ для дифференциальной диагностики, прогноза и выбора тактики лечения заболеваний, сопровождающихся желтухой.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Дудник Л.Б., Биленко М.В., Алесенко А.В., Слесарева Л.Д., Бурлакова Е.Б. Интенсификация перекисного окисления липидов в гомогенате и субклеточных фракциях ишемизированной печени // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 1980. Т. 89. № 5. С.556-558.

2. Дудник Л.Б., Тихазе А.К., Алесенко А.В , Ланкин В.З., Бурлакова Е.Б. Изменение активности супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы в процессе интенсификации перекисного окисления липидов при ишемии печени // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 1981. Т. 91. № 4. С.451-453.

3. Дудник Л.Б., Биленко М.В., Алесенко А.В., Могилевская М.П., Бурлакова Е.Б. Роль перекисного окисления липидов в повреждении мембран при ишемии печени // Вопр. Мед. Химии. 1981. Т. 27, № 3. С. 380-383.

4. Дудник Л.Б., Майоре А.Я., Миезе И.Э. Связь изменения степени окисленности и антиокислительных свойств липидов с уровнем билирубина в крови больных острым вирусным гепатитом // Тез. докл. VI Всесоюзн. конф. по клинической биохимии, морфологии и иммунологии инфекционных болезней. Рига, 1983. С.337-338.

5. Блюгер А.Ф., Дудник Л.Б., Майоре А.Я., Миезе И.Э. Роль билирубина как природного антиоксиданта в регуляции интенсивности перекисного окисления липи-дов при остром вирусном гепатите // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 1985. Т. 99. № 2. С. 166168.

6. Блюгер А.Ф., Дудник Л.Б., Майоре А.Я., Ноздрунова Н.А., Миезе И.Э. Взаимосвязь интенсивности перекисного окисления липидов с изменением состава липи-дов в сыворотке крови больных острым вирусным гепатитом // Вопр. Мед. Химии. 1985. Т. 31. №5. С.35-37.

7. Дудник Л.Б., Элерте Д.Л., Горштейн Э.С., Майоре А.Я. Изменение содержания цитохрома Р-450 и интенсивности перекисного окисления липидов в микросомах печени крыс при интоксикации гидразином // Тез. докл. Всесоюзн. конф. "Цитохром Р-450 и охрана внутренней среды человека". Москва, 1985. С. 102.

8. Дудник Л.Б., Майоре А.Я. Гипербилирубинемия как фактор защиты липидов биологических мембран от перекисного окисления при остром вирусном гепатите и некоторых других патологических и физиологических состояниях // Биологические мембраны и патология клетки. Рига: Зинатне, 1986. С.32-38.

9. Блюгер А.Ф., Майоре А.Я., Дудник Л.Б., Копылова Т.Н., Сниедзе Т.Н., Кузнецова А.В. Проблемы перекисного окисления липидов в экспериментальной и клини-чгской гепатологии // Тез. докл. V Всесоюзн. съезда биохимиков. Киев, 1986. С.392-393.

10.Элерте Д.Л., Горштейн Э.С., Дудник Л.Б., Майоре Л1Ь, Кремане Г.З., Велика-нова О.В. Влияние введения солянокислого гидразина на перекисное окисления ли-пидов и содержание цитохрома Р-450 в микросомах печени крыс // Изменения липид-ного обмена при патологии внутренних органов. Рига: Зинатне, 1987. С.136-141.

11 Дудник Л.Б., Терентьева Л.А., Горштейн Э.С., Элерте Д.Л., Майоре А.Я., Се-гал Г.П., Филатова Е.Н. Связь изменений липидного состава и интенсивности пере-кисного окисления липидов микросом печени с пролиферативной активностью гепа-тоцитов при экспериментальной интоксикации гидразином// Там же, С.26-30.

12.Дудник Л.Б., Копылова Т.Н., Кузнецова А.В., Майоре А.Я., Виксна Л.М., Филатова Е.Н., Миезе И.Э. Особенности изменения параметров перекисного окисления липидов и и активности систем антиперекисной активности сыворотки крови при остром вирусном гепатите А // Тез. докл. Всесоюзн. научн. конф. "Актуальные вопросы дагностики. эпидемиологии и профилактики острого вирусного гепатита А". Ленинград, 1987, С.13-14.

13.Горштейн Э.С., Майоре А.Я., Дудник Л.Б., Кремане Г.З., Сниедзе Т.Н., Варганова Е.И., Ремберга Л.А., Копылова Т.Н., Кузнецова А.В. Изменение функционального состояния субклеточных структур гепатоцитов при жировом гепатозе в клинике и эксперименте // Успехи гепатологии, Т. 13. Рига: Звайгзне, 1987. С.158-175.

14. Дудник Л. Б., Копылова Т.Н., Майоре А.Я., Новицкий И.Н., Филатова Е.Н. Регуляция интенсивности процесса перекисного окисления липидов при разных формах тяжести острого вирусного гепатита В // Тез. докл. Всесоюзн. конф. "Биохимия - медицине". Ленинград, 1988, С.86-87.

15.Майоре А.Я., Дудник Л.Б., Копылова Т.Н., Варганова Е.И., Кузнецова А.В., Филлер Я.И., Залцмане В.К. Патогенетическое значение дискоординации биохимических процессов на уровне субклеточных структур при жировом гепатозе // Новое в гепатологии. Методы, факты, концепции. Рига: Звайгзне, 1988. С.109-115.

16.Дудник Л.Б., Копылова Т.Н., Майоре А.Я., Новицкий И.Н., Виксна Л.М., Филатова Е.Н. Регуляция интенсивности процесса перекисного окисления липидов при тяжелых и коматогенных формах острого вирусного гепатита // Там же, С. 115-122.

17.Пупелис Г.В., Дудник Л.Б., Лапиня А.Я.. Значение расстройств липидного обмена при осложненной желчнокаменой болезни // Тез. докл. объед. конф. ученых-медиков Латв. ССР. Рига, 1988. С.91.

18.Дудник Л.Б., Элерте Д.Л., Горштейн Э.С., Майоре А.Я., Филатова Е.Н., Сегал Г.П. Изменение липидного состава и интенсивности перекисного окисления липидов митохондрий и гомогената печени крыс при жировом гепатозе. вызванном солянокислым гидразином // Экспериментальное исследование патологических процессов. Рига: Зинатне, 1988. С. 19-26.

19.Блюгер А.Ф., Дудник Л.Б., Майоре А.Я., Новицкий И.Н.. Является ли гипер-билирубинемия при остром вирусном гепатите реакцией, направленной на стабилиза-

цию мембран гепатоцитов? // Тез. докл. Всесоюзн.симп. "Реконструкция, стабилизация и репарация биологических мембран". Благовещенск, 1989. С.76-77.

20.Дудник Л.Б., Пупелис Г.В., Копылова Т.Н., Кузнецова А.В. Исследование роли процессов перекисного окисления липидов и перспективы применения препаратов антиоксидантного действие при сочетанных заболевание желчевыводящих путей и поджелудочной железы // Тез. докл. III Всесоюзн. конф. "Биоантиоксидант". Черноголовка, 1989. Т.2, С. 169-170.

21.Majore A., Dudnika L., Kopilova Т., Kuznecova A., Fillere I., Viksna L, Novickis I. Aknu slimibas, lipidu peroksidacija un antioksidanti // Vispas. latv. zin. kongr. mat. Riga, 1991. 8. Sej. Lp.54-55.

22.Копылова Т.Н., Дудник Л.Б., Силонова Г.И., Майоре А.Я. Диагностическое значение определения интенсивности перекисного окисление липидов и активности антиокислительной ферментативной системы в крови при различных формах цирроза печени // Тез. докл. IV Всесоюзн. конф. "Биоантиоксидант'1. Москва, 1991. Т.2. С.51.

23.Дудник JI.Б., ЭлертеД.Л., Майоре А.Я., Филатова Е.Н. Перекисное окисление липидов при внутрипеченочном холестазе, вызванном а-нафтилизотиоцианатом // Лабораторные животные. 1992. Т. 2. № 3. С.12-18.

24.Дудник Л.Б., Копылова Т.Н., Кузнецова А.В., Валук ВА, Ершова Т.Н. Диско-ординация процессов перекисного окисления липидов и систем антиперекисной защиты при поражениях печени у лиц, участвовавших в ликвидации последствий аза-рии на Чернобыльской АЭС // Латвияс зинатню академияс вестис. 1993. В. № 4. С. 2937.

25.Майоре А.Я., Дудник Л.Б., Копылова Т.Н., Кузнецова А.В., Виксна Л.М., Новицкий И.Н. Теоретические и прикладные аспекты изучения перекисного окислетя липидов при остром вирусном гепатите В и проблема применения антиоксиданто з в лечении больных // Там же, С.74-79.

26.Дудник Л.Б., Храпова Н.Г. Исследование ингибирующей активности билирубина в реакциях свободнорадикального окисления // Биологические мембраны. 19')8. №3, С.83-89.

27.Дудник Л.Б., Хренов А.В., Храпова Н.Г., Алесенко А.В. Антиоксидантные и антиапоптотические свойства билирубина // Тез-V Межд.конф. Биоантиоксидант, Москва, 1998, С.127-128.

28.Дудник Л.Б. Интенсификация пероксидного окисление липидов сыворспхи крови как биохимический признак сопутствующего панкреатита при осложненных формах желчнокаменной болезни // Вопр. Мед. Химии. 1998. Т. 44. № 6. С.571-575.

29.Рылова С.Н., Сомова О.Г., Зубова Е.С. Дудник Л.Б., Коптев Л.С., Козлов А.М., Алесенко А.В., Дятловицкая Э.В. Содержание и структура церамидов и сфингомне-лина и активность сфингомиелиназы в гепатоме-22 мышей // Биохимия. 1999. Т. 64. №4. С.520-525.

30.Dudnik L.B. Intensity of lipid peroxidation and its dependence on the composition and antioxidative properties of lipids in primary biliary cirrhosis // Thes. ofXI International congress of liver diseases. Basel, Switzerland. 1999. P.39-40.

31.Кандыба А.Г., Сомова О.Г., Козлов А.М., Зубова Е.С, Дудник Л.Б., Алесенко А.В., Швец В.И., Дятловицкая Э.В. Сфинголштиды перевиваемой нефромы РА крыс // Биохимия. 2000. Т.65. № 6. С.703-706.

32Дудник Л.Б., Виксна Л.М., Майоре АЛ. Пероксидное окисление липидов и его связь с изменением состава и антиокислительных свойств липидов при комато-генных формах острого вирусного гепатита В // Вопр. Мед. Хим. 2000. Т.46. №6. С.597-609.

33.Dudnik L.B., Zyupko A.N., Khrenov A.V., Alessenko A.V. Bilirubin may protect cells from injury via influence on lipid peroxidatioin and sphingomyelin cycle. // Thes. of

Intl. Congr. "Fortschntte in Gastroenterologie und Hepatologic 2001". Hannover, Germany. 2001. P.38.

34. Дудник Л.Б., Цюпко А.Н., Хренов А.В. Алесенко А.В. Влияние билирубина на интенсивность пероксидного окисления липидов, активность сфингомиелиназы, и апоптоз, индуцированный сфингозином и УФ-облучением // Биохимия. 2001.Т. 66. №9. С.1252-1262.

35.Цюпко А.Н., Дудник Л.Б., Евстигнеева Р.П., Алесенко А.В. Влияние восстановленной и окисленной форм глутатиона на активность сфингомиелиназы и содержание сфингомиелина и продуктов перекисного окисления липидов в печени мышей // Биохимия. 2001. Т. 66. № 9. С. 263-1270.

36.Dudnik L.B., Zyupko A.N., Khrenov A.V., Alessenko A.V. Effect of bilirabin on lipid peroxidation, sphingomyelinase activity and apoptosis induced by sphingosine and UV irnidiation // Chem. Phys. Lipids. 2001. V. 112. № 2. P.74-75.

37. Сыркин А.Л., Азизова О.А., Дриницина СВ., Френкель Е.Е., Соловьева Н.П., Дудник Л.Б., Ключникова Т.И.. Корреляция между тяжестью стенокардии, ее ста-би.гьностью и окислительной модификацией липидов у больных ишемической болезнью сердца // Терап. Архив. 2001. Т. 73. № 9. С.38-42.

38 Рехвишвили М.В., Дриницына СВ., Соловьева Н.П., Дудник Л.Б., Пирязев А.П., Азизова ОА., Шехаде Х.Ю., Иванов Г.Г., Эль Миари Ю.Д., Александрова М.Р. Показатели свободнорадикального окисления плазмы и электрофизиологические свойства миокарда у больных ишемической болезнью сердца // Вести. Университета дружбы народов. 2001. №3. С41-48.

39.Дудник Л.Б., Азизова О.А., Дриницина СВ., Соловьева Н.П., Савченкова А.П., Покровская М.А., Виксна Л.М., Майоре А.Я. Первичный билиарный цирроз и атеросклероз коронарных сосудов: защитное, антиоксидантное действие билирубина // Тез. докл. III Съезда биохимического общества. С.-Петербург, 2002. С. 145.

40.Dudnik L.B., Solovyova N.P., Drinitsina S.V., Azyzova O.A. Intensity of lipid per-oxidation and its dependence on antioxidative properties of lipids in primary biliary cirrhosis and coronary heart disease // Free Radic. Biol. Med. 2002. V. 33. Suppl. №1. P. 13 8.

41Алесенко А. В., Дудник Л.Б. Роль сфингоидных оснований в профилактике и лечении заболеваний, связанных с развитием апоптоза // Наука — производству. 2002. ХаЗ.С.48-52.

42.Савченкова А.П., Дудник Л.Б., Погорецкая И.Л., Соловьева Н.П., Покровская МА., Асейчев А.В., Дриницына СВ., Азизова О.А. Влияние фибриногена на перок-сидаое окисление липидов при ишемической болезни сердца и в экспериментах in vitro II Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 2003. №1. С.37-41.

43.Савченкова А.П., Дудник Л.Б., Соловьева Н.П., Азизова О.А. Кинетические закономерности Cu2+-индуцированного окисления липидов плазмы и сыворотки крови // Биол. Мед, Химия. 2003. Т.49. №6. С.576-587.

44Алесенко А.В., Бугрова А.Е., Дудник Л.Б., Коробко В.Г., Шингарова Л.Н. Роль сфингомиелинового цикла и фактора некроза опухоли альфа в проявлении токсического эффекта Р-амилоидного пептида // Ж. неврологии и психиатрии им. СС. Корсакова. 2004. №3. С.55-61.

45.Alessenko A.V., Bugrova A.E., Dudnik L.B . Connection of lipid peroxide oxidation with sphingomyelin cycle pathway in the development of Alzheimer's disease // Bio-chem. Soc. Transact 2004. V.32. №1. P. 144-146.

1-82 4 0

Подписано в печать 20/0! 2004 г. Формат60x84/16. Заказ ¿ТиражН5экз П.л Отпечатано в РИИС ФИАН с оригинал-макета заказчика. 119991 Москва, Ленинский проспект, 53. Тел. 132 5128

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Дудник, Людмила Борисовна

1. Введение.

2. Обзор литературы.

2.1. Общие сведения об образовании и метаболизме БР в организме человека.

2.2. Структура и физико-химические свойства БР.

2.2.1. Строение молекулы БР.

2.2.2. Растворимость БР в различных средах.

2.2.3. Комплексные соединения БР с биологически значимыми молекулами и свойства этих комплексов.

2.2.4. Взаимодействие БР с липопротеидами и липидами мембран

2.2.5. Окислительно-восстановительные превращения БР.

2.2.6. Антиоксидантные свойства БР в системах in vitro.

2.2.7. Альтернативные пути метаболизма БР.

2.3. Роль БР в защите организма от окислительного стресса.

2.3.1. Г01 - белок, индуцируемый окислительным стрессом.

2.3.2. Влияние БР на апоптоз и пролиферацию.

2.3.3. БР и канцерогенез.

2.3.4. Патологии, возникающие при недостаточности БР.

2.3.5. Желтуха новорожденных как защита от окислительного стресса.

2.3.6. Цитопротекторное действие БР на головной мозг.

2.3.7. Изменения в системе ГО-БР при стрессе.

2.3.8. Защитное действие БР при ишемии-репрефузии.

2.3.9. БР и атеросклероз.

2.3.10. Иммуномодулирующее и противовоспалительное действие БР.

2.3.11. Неизученные аспекты защитного действия БР.

3. Объекты, материалы и методы исследования.

3.1. Биофизические и биохимические методы

3.2. Работа с животными

3.3. Исследование сыворотки крови больных

3.4. Статистическая обработка результатов

4. Результаты исследования.

4.1. Исследование ингибирующей активности БР в реакциях свободнорадикального окисления.

4.1.1. Определение константы скорости реакции БР с пероксильными радикалами на модели инициированного окисления этил-бензола.

4.1.2. Исследование антиокислительной активности БР на модели термического окисления метилового эфира олеиновой кислоты.

4.2. Влияние экспериментальной желтухи на интенсивность ПОЛ у подопытных животных.

4.2.1. Патогенез и моделирование различных видов желтухи.

4.2.2. Изменение содержание продуктов ПОЛ в в органах подопытных животных при введении им БР.

4.2.3. ПОЛ при повышении содержания липидов в печени.

4.2.4. Роль БР в регуляции ПОЛ при холестатических поражениях печени.

4.3. Антиапоптотическое действие БР, обусловленное его влиянием на функционирование сигнальной системы сфингомиелинового цикла.

4.3.1. Влияние БР на активность нейтральной СФМазы - ключевого фермента сфингомиелинового цикла.

4.3.2. Влияние гипербилирубинемии, вызванной перевязкой общего желчного протока на содержание ФНО-а в печени крыс.

4.3.3. Влияние БР на апоптоз, индуцированный сфингозином и

У Ф-облучением.

4.4. Роль БР как природного антиоксиданта в регуляции ПОЛ при заболеваниях печени и желчевыводящих путей.

4.4.1. Интенсивность ПОЛ и его связь с изменениями состава и антиокислительных свойств липидов в сыворотке крови практически здоровых доноров.

4.4.2. Влияние БР на интенсивность ПОЛ при остром вирусном гепатите.

4.4.3. Роль БР в изменении интенсивности ПОЛ при хронических хронических гепатитах и циррозах печени.

4.4.4. Интенсивность ПОЛ в сыворотке крови при синдромеЖи-льбера, жировом гепатозе хроническом носительствеЯДу антигена и опухолях печени.

4.4.5. Роль БР в регуляции ПОЛ при холестатических поражениях печени.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Антиоксидантное и антиапоптотическое действие билирубина при патологии печени и желчевыводящих путей"

Актуальность работы. В течение длительного времени продукт катаболизма гемсодержащих соединений билирубин (БР), наравне с другими продуктами жизнедеятельности, рассматривался исключительно как своего рода «промышленный отход», подлежащий выведению из организма. Несмотря на то, что в 50-х годах прошлого века исследователями-химиками была обнаружена способность БР ингибировать реакции сво-боднорадикального окисления органических веществ [Bernhard et al., 1954], этот факт в течение долгого времени не привлекал должного внимания биологов и медиков. Повышение уровня БР в организме традиционно расценивалось как негативное явление и интерпретировалось как проявление патологии (при заболеваниях печени и желчевыводящих путей), либо как потенциально опасный фактор (при «ядерной желтухе», вызванной резус-несовместимостью матери и ребенка).

Впервые физиологическая роль БР как эффективного эндогенного антиоксиданта была показана нами в 1985 году. Начиная с этого времени, в литературе стали появляться работы, посвященные цитопротекторному действию БР, обусловленному его антиоксидантными свойствами, и количество доказательств защитной роли БР при различных патологиях стремительно возрастает с каждым годом. Тем не менее, механизм инги-бирующего действия БР в реакциях свободнорадикального окисления и в настоящее время остается во многом неизвестным.

Несмотря на общепринятую концепцию о ведущей роли процессов пероксидного окисления липидов (ПОЛ) в патогенезе заболеваний печени и желчевыводящих путей, сопровождаемых желтухой, роль и значение БР в формировании защитных механизмов при этой патологии до сих пор остаются неизученными. Среди клиницистов по-прежнему доминирующим является мнение о токсичности данного пигмента. В норме стационарность процессов ПОЛ на уровне мембран и клеток поддерживается физико-химической системой регуляции, основными параметрами которой являются антиокислительная активность (АОА), состав липидов и структурная организация мембран [Бурлакова, 1975, 1992]. В случае если аналогичная регуляция существует на организменном уровне, ее интегральными характеристиками должны являться параметры липидов сыворотки крови, а ключевую роль в ее функционировании будет играть печень, поскольку именно она является органом, ответственным за поддержание липидного гомеостаза. Роль нарушений липидного обмена при патологии печени общеизвестна, однако данные о влиянии БР на соотношение между интенсивностью ПОЛ, уровнем антиокислительной активности (АОА) липидов и показателями липидного обмена сыворотки крови при патологии печени и желчевыводящих путей в литературе отсутствуют. Нет и сведений о том, какое действие на протекание ПОЛ в органах и тканях оказывает повышение содержания БР в крови.

Известно, что при заболеваниях печени и желчевыводящих путей гепатоциты гибнут преимущественно по механизму апоптоза [Ziol et al.,2001; Vanlandschoot, 2003]. Пути, по которым проходит сигнал апоптоза, наряду с другими возможностями, включает активацию сфингомиели-нового цикла, функционирование которого зависит от интенсивности реакций ПОЛ. Данные о влиянии БР на активность сфингомиелинового цикла и на апоптотическую гибель клеток, индуцированную его продуктами, до публикации наших работ в литературе отсутствовали. Между тем, данный вопрос может представлять дополнительный интерес, поскольку при взаимодействии с клеточной поверхностью БР избирательно связывается со сфинголипидами.

Исследование механизма антиоксидантного действия БР и его ци-топротекторных свойств является актуальным - во-первых, оно может быть полезным для понимания патогенеза и разработки новых методов терапии ряда распространенных заболеваний. Во-вторых, знание закономерностей протекания процессов ПОЛ при гипербилирубинемии может способствовать выработке критериев дифференциальной диагностики заболеваний, протекающих с желтухой. И, наконец, знание механизма ан-тиоксидантного действия БР может способствовать синтезу новых лекарственных средств из класса антиоксидантов, поскольку, в отличие от большинства из них, БР не принадлежит к классу экранированных фенолов.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы явилось изучение механизма ингибирования билирубином реакций свободноради-кального окисления, его действия на процессы, сопровождающие повреждение и апоптотическую гибель клеток, а также влияния на интенсивность пероксидного окисления липидов при патологии печени и желчевы-водящих путей в эксперименте и клинике.

Для достижения намеченной цели исследования были поставлены следующие задачи:

1. Исследование механизма ингибирующего действия БР в реакциях свободнорадикального окисления, определение константы скорости его реакции с пероксильными радикалами и измерение его антиокислительной активности;

3. установление характера действия БР на процессы, связанные с апоптотической гибелью клеток:

• исследование действия БР на апоптоз тимоцитов, индуцированный in vitro УФ-облучением, а также продуктам сфингомиелино-вого цикла, сфингозином;

• изучение влияния желтухи (внутрибрюшинного введения БР подопытным животным или перевязки у них общего желчного протока) на активность ключевого фермента сфингомиелинового цикла, генерирующего вторичные посредники сигнала апоптоза, - сфингомиелиназы (СФМазы);

• определение связи между активностью СФМазы и содержанием продуктов ПОЛ в норме и при моделировании патологии печени;

• исследование влияния желтухи, вызванной перевязкой общего желчного протока у животных на экспрессию проапоптотическо-го цитокина, фактора некроза опухоли-альфа (ФНО-а);

Основные положения, выносимые на защиту

2. Между активностью ключевого фермента сфингомиелинового цикла (генератора вторичных посредников сигнала апоптоза) - нейтральной СФМазой и интенсивностью ПОЛ существует прямая взаимосвязь. БР как антиоксидант может не только защищать липиды клеточных мембран от пероксидного окисления, но и, воздействуя на сфингомиелиновый цикл, защищать клетки организма от апоптоза.

Научная новизна. Впервые изучен молекулярный механизм анти-оксидантного действия БР. Показано, что ингибирующее действие БР осуществляется в реакции с пероксильными радикалами. Продукты превращения БР также обладают ингибирующими свойствами. Константа скорости реакции БР с пероксильными радикалами близка к таковой ио-нола, активность продуктов превращения несколько ниже. АОА БР в два раза превышает активность ионола.

Впервые показано наличие тесной взаимосвязи между изменением скорости окислительных реакций в липидах, их составом и антиокислительными свойствами сыворотки крови, что является доказательством существования физико-химической системы регуляции ПОЛ на организменном уровне. Обнаружено, что желтуха может являться компенсаторным механизмом, позволяющим регулировать протекание реакций ПОЛ при патологии печени и желчевыводящих путей, когда функциональные способности гепатоцитов снижены.

Впервые обнаружено, что гипербилирубинемия при остром вирусном гепатите сопровождается выраженным снижением уровня продуктов ПОЛ и нарастанием АОА липидов крови больных. Расчетным путем показано, что повышение уровня АОА при остром вирусном гепатите (ОВГ) происходит за счет БР. При сопоставлении содержания БР с активностью маркерных ферментов в крови больных выявлена обратная зависимость между степенью лабилизации мембран гепатоцитов и уровнем гиперби-лирубинемии. Обнаружено качественное отличие коматогенных форм ОВГ от неосложненных форм этого заболевания, состоящее в том, что накопление продуктов ПОЛ в крови больных с энцефалопатией является результатом свободнорадикального окисления липидов и происходит одновременно с разбалансировкой систем, регулирующих интенсивность ПОЛ. Впервые выявлено, что нормальное содержание продуктов ПОЛ в крови больных хроническими гепатитами и циррозами свидетельствует о наличии у них «скрытого» окислительного стресса. Впервые обнаружено, что при внутрипеченочном холестазе происходит угнетение реакций ПОЛ в сыворотке крови больных и в печени экспериментальных животных.

Впервые определен характер влияния БР на активность СФМазы при введении его подопытным животным, при этом выявлена взаимосвязь между интенсивностью ПОЛ и активностью СФМазы. Продемонстрировано, что, помимо ингибирования ПОЛ, дополнительным механизмом ин-гибирования СФМазы может являться избирательное связывание БР со сфинголипидами. Проведено исследование изменения активности СФМазы, содержания ФНО-а и интенсивности ПОЛ в печени крыс при экспериментальной механической желтухе. Обнаружен двухфазный характер изменения исследованных показателей. Их выраженное снижение на ранних сроках холестаза может быть обусловлено цитопротекторными и антиоксидантными свойствами БР.

Впервые исследовано влияние БР на апоптоз, индуцированный одним из продуктов сфингомиелинового цикла, сфингозином, и УФ-облучением. Показана биохимическая связь между БР и окислительным стрессом с одной стороны и БР, сфингомиелиновым циклом и апоптозом

- с другой. Полученные данные показывают, что БР, воздействуя на сфингомиелиновый цикл, может защищать клетки организма от апоптоза вызванного не только непосредственно активацией ПОЛ, но и другими стимулами.

Научно-практическая значимость. Показано наличие физико-химической системы регуляции стационарного режима окислительных реакций в липидах сыворотки крови. В норме эту гомеостатическую функцию выполняет печень путем модификации количественного содержания и состава липопротеидов сыворотки крови. При патологии органа, когда нарушаются функции гепатоцитов, дополнительным способом регуляции интенсивности ПОЛ может являться повышение уровня БР. Знание закономерностей протекания процессов ПОЛ у больных с желтухой необходимо для определения критериев применения гепатопротекторов, поскольку большинство из них относится к классу антиоксидантов.

Факт наличия у БР антиоксидантных свойств, в сочетании с имеющимися данными о потенциальной опасности светотерапии желтухи новорожденных (канцерогенное и мутагенное действие, повреждение сосудистых стенок), должен, на наш взгляд, повлиять на критерии применения этого метода.

Диссертационная работа выполнена в Институте биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН в соответствии с планами научно-исследовательских работ Института в рамках грантов РФФИ № 95-0412209, 98-04-48256-а, 02-04-48048-а, 02-04 48228, Президиума РАН «Фундаментальные науки - медицине», Всесоюзной программы «Биоантиок-сидант».

Материалы диссертации докладывались и обсуждались на различных Международных, Всесоюзных, Всероссийских и Республиканских л симпозиумах, конференциях, съездах: Всесоюзн. Конф. «Острая ишемия органов и ранние постишемические расстройства», Москва, 1978; «Структура, биосинтез и превращения липидов в организме животного и человека», Ленинград, 1978; «Физико-химические процессы в газовой и конденсированной фазах» Черноголовка, 1979; VII Intern. Symp. on Med. Chem., Malaga, Spain, 1980; VI Всесоюзн. конф. по клинической биохимии, морфологии и иммунологии инфекционных болезней. Рига, 1983; «Цитохром Р-450 и охрана внутренней среды человека», Москва, 1985; II и III Рес-публ. конф. ученых-медиков Латв. ССР, Рига, 1985, 1988; II-VI Всесоюзн. (впоследствии - Всеросс. с международным участием, Москва, 1986, 1989, 1991, 1998, 2002) конф. «Биоантиоксидант»; V Всесоюзн. съезде биохимиков, Киев, 1986; «Актуальные вопросы диагностики, эпидемиологии и профилактики острого вирусного гепатита А», 1987, Ленинград; «Биохимия - медицине», Ленинград, 1988; II Всесоюзн. съезде токсикологов. Ростов-на-Дону, 1988; Всесоюзн.симп. "Реконструкция, стабилизация и репарация биологических мембран", Благовещенск, 1989; VII биохим. конф. Прибалт, респ. «Теоретические и практические аспекты современной биохимии, молекулярной биологии и биотехнологии", Вильнюс, 1990; Vispas. latv. zin. kongr., Riga, 1991 (Всемирн. Конгрессе латвийских ученых); Конф ЮНЕСКО, посвященной 100-летию академика Н.Н.Семенова, Москва, 1998; X Междунар. конф. «Химия органических и элементоорганических пероксидов», Москва, 1998; Всеросс. конф. «В грядущем столетии - к новому качеству жизни больных ишемической болезнью сердца». Москва, 2000; «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека», Смоленск, 2001; III Съезде биохимического общества, С.-Петербург, 2002; XII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии, Казань, 2003; EMBO Conference, Bologna, Italy, 1999; XI Intl. Congr. liver diseases, Basel, Switzerland, 1999; 3rd and 4rd ISSFAL Congr., Lyon, France, 1998 and Tsukuba, Japan, 2000; FEBS Conference, Birmingham, England, 2000; Intl. Congr. "Fortschritte in Gastroenterologie und Hepatologie 2001", Hannover, Germany, 2001; 42-44 ICBL Conf., Bergen, Norway, 2001, Graz, Austria, 2002, Oxford, England, 2003; Intl. Congr. "Gastroenterologie-woche Freiburg 2002", Germany; EASL Conf., Madrid, 2002, Spain; XIth Bien. SFRR Meet., Paris, France, 2002; 5th Intl. EFAE Congr., Taipei, Taiwan, 2002; VIII Interl. Congr. on Phospholipids, Vienna, Austria, 2002; 25th World ISF Congr., Bordeaux, France, 2003.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Дудник, Людмила Борисовна

6 . ВЫВОДЫ

1. Впервые количественными методами показано, что билирубин является эффективным природным антиоксидантом, ингибирующее действие которого осуществляется в реакции с пероксильными радикалами. Способность билирубина реагировать с пероксильными радикалами близка к способности ионола (К7=Т,5х104 лвмоль'^с"1). Обнаружено, что билирубин обладает антиокислительной активностью, в два раза превышающей активность ионола. Высокая антиокислительная активность билирубина определяется тем, что одна его молекула может обрывать больше двух цепей окисления за счет образования продуктов превращения, также обладающих ингибирующими свойствами. Антирадикальная активность продуктов превращения в 3 раза ниже, чем активность самого билирубина (K'7=0,5x104 л*моль"1*с"1).

2. Обнаружено, что in vivo билирубин также обладает свойством ингибировать реакции свободнорадикального окисления липидов: внут-рибрюшинное введение билирубина вызывает снижение содержания продуктов ПОЛ в почках и сердце мышей; в печени при этом наблюдается накопление липидов.

3. Выявлено, что гипербилирубинемия, обусловленная внутрипе-ченочным холестазом (введение животным а-нафтилизотиоцианата), сопровождается резким снижением уровня продуктов ПОЛ и уменьшением скорости аскорбат-зависимого ПОЛ в печени крыс. Происходящее одновременно с этим усиление микросомального НАДФН-зависимого ПОЛ не оказывает существенного влияния на содержание продуктов ПОЛ в органе.

4. Впервые показано, что при желтухе, вызванной перевязкой общего желчного протока, на ранних сроках холестаза в печени крыс наблюдается выраженное снижение содержания продуктов ПОЛ, а также провоспалительного и проапоптотического цитокина ФНО-а , что совпадает по времени с максимальной скоростью накопления билирубина. Обнаружено, что на поздних сроках холестаза, при развитии патологического процесса происходит усиление процессов ПОЛ и накопление ФНО-а.

6. Впервые в экспериментах in vivo выявлена взаимосвязь между функционированием сфингомиелинового цикла, генерирующего вторичные посредники сигнала апоптоза, и интенсивностью процессов ПОЛ. Обнаружено, что изменение активности ключевого фермента этого цикла, нейтральной сфингомиелиназы, происходит одновременно и однона-правленно с изменением содержания продуктов ПОЛ в органах животных. Показано, что продукт сфингомиелинового цикла сфингозин вызывает усиление реакций ПОЛ в печени мышей.

7. Впервые показано снижение активности нейтральной сфингомиелиназы в органах подопытных животных при гипербилирубинемии. Обнаружено, что in vitro билирубин также обладает ингибирующим действием на нейтральную сфингомиелиназу.

8. Впервые на изолированных тимоцитах мышей обнаружено ин-гибирующее действие билирубина на апопотоз, индуцированный ультрафиолетовым облучением и продуктом сфингомиелинового цикла сфингозином.

9. Впервые показано, что гипербилирубинемия при остром вирусном гепатите, первичном билиарном циррозе и синдроме Жильбера сопровождается выраженным снижением содержания продуктов пероксид-ного окисления в липидах и нарастанием антиокислительной активности сыворотки крови больных. Обнаружена достоверная положительная корреляция между уровнем антиокислительной активности липидов и содержанием билирубина в сыворотке крови больных. Показано, что повышение антиокислительной активности липидов происходит за счет билирубина.

10. При исследовании взаимосвязи между изменениями степени би-лирубинемии, уровня продуктов ПОЛ и активности печеночных ферментов в динамике развития патологического процесса при остром вирусном гепатите выявлена обратная зависимость между степенью лабилизации мембран гепатоцитов и содержанием билирубина в сыворотке крови больных. Предположено, что повышение содержания билирубина при остром вирусном гепатите может являться защитной реакцией, направленной на стабилизацию гепатоцитов и снижение содержания продуктов ПОЛ.

11. Обнаружено, что при коматогенных формах острого вирусного гепатита В наблюдается резкое усиление процессов ПОЛ в сыворотке крови больных.

12. Показано, что показатели ПОЛ сыворотки крови при неослож-ненных формах желчнокаменной болезни мало отличаются от таковых у практически здоровых лиц. Между содержанием в сыворотке крови больных билирубина и продуктов ПОЛ обнаружена отрицательная корреляция. При сочетанных заболеваниях желчевыводящих путей и поджелудочной железы выявлена интенсификация процессов ПОЛ.

13. Продемонстрировано, что в сыворотке крови практически здоровых людей существует взаимосвязь между изменением скорости окислительных реакций в липидах, их составом и антиокислительными свойствами, т.е. физико-химическая система регуляции окислительных реакций в липидах сыворотки крови.

14. Показано, что взаимосвязь между изменением скорости окислительных реакций в липидах, их составом и антиокислительными свойствами в липидах сыворотки крови у больных неосложненными формами заболеваний печени и желчевыводящих путей не нарушена.

15. Продемонстрирована информативность определения параметров ПОЛ для дифференциальной диагностики, прогноза и выбора тактики лечения заболеваний, сопровождающихся желтухой.

7. СПИСОК АББРЕВИАТУР

• АлАТ - аланинаминотрансфераза;

• АНИТ - а-нафтилизотиоцианат;

• АОА — антиокислительная активность;

• АсАТ — аспарагинаминотрансфераза;

• БР - билирубин;

• ВГ - вирусный гепатит;

• ЖКБ - желчнокаменная болезнь;

• ИБС - ишемическая болезнь сердца;

• ЛПВП - липопротеиды высокой плотности;

• ЛПНП - липопротеиды низкой плотности;

• ГО - гемоксигеназа;

• ОВГ - острый вирусный гепатит;

• ПБЦ - первичный билиарный цирроз;

• ПЖОГ - подпеченочная желтуха опухолевого генеза;

• ПОЛ - пероксидное окисление липидов;

• СОД - супероксиддисмутаза;

• СФМаза - сфингомиелиназа;

• ФНО-а - фактор некроза опухоли-альфа;

• ХАГ - хронический активный гепатит;

• ХПГ - хронический персистирующий гепатит;

• ЦНС - центральная нервная система;

• ЦП - цирроз печени;

• GSH - восстановленный глутатион;

• GSH-пероксидаза -глутатионпероксидаза;

• HbsAg - Hbs-антиген.

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На момент начала проведения настоящей работы (80-е годы) среди биохимиков и клиницистов существовала единая точка зрения - повышение содержания БР в организме (желтуха) не может являться ни чем иным, кроме как проявлением патологии печени, желчевыводящих путей или системы эритропоэза. Формированию этого мнения способствовало очевидное обстоятельство - чем тяжелее протекает заболевание, тем, наряду с усилением других патологических проявлений, в сыворотке крови больных наблюдается более высокий уровень БР. В связи с присутствием у БР токсических свойств исследователи не подозревали наличие у него каких-либо позитивных физиологических функций.

В начале 80-х годов, при изучении роли реакций ПОЛ в патогенезе острого вирусного гепатита мы столкнулись с парадоксальным явлением. Оказалось, что с нарастанием степени тяжести заболевания, когда в крови больных резко возрастает активность маркерных печеночных ферментов, что свидетельствует о повреждении мембран гепатоцитов, содержание продуктов пероксидного окисления в липидах сыворотки крови не возрастает, а снижается. При этом между содержанием продуктов ПОЛ и БР наблюдалась обратная, а между уровнями АОА липидов и БР - прямая взаимосвязь. Такая закономерность свидетельствовала о том, что гипербилирубинемия при остром вирусном гепатите может являться чем-то большим, чем банальное проявление патологии, и позволила нам сделать предположение о наличии у БР антиокислительной активности. Именно для проверки этой гипотезы нами и было предпринята настоящая работа -изучение механизма антиоксидантного действия БР и его влияния на интенсивность процессов ПОЛ в системах in vitro, при патологии печени и желчевыводящих путей в экспериментах на животных и в организме человека, а также его действия на процессы, сопровождающие повреждение и гибель клеток.

При анализе химических свойств БР наше внимание прежде всего привлекла его высокая активность в окислительно-восстановительных реакциях. Тем не менее, в литературе нами было обнаружено всего две работы, данные которых позволяли предположить наличие у БР способности ингибировать реакции свободнорадикального окисления липидов - в 50-60-х годах прошлого века исследователями-химиками было показано, что БР уменьшает скорость окисления эмульсий жирных кислот [Bernhard et al., 1954; Kaufmann, Garloff, 1961]. Однако, по всей видимости, в течение долгого времени этот факт не привлекал должного внимания не только врачей-клиницистов, но и исследователей-биохимиков. Кроме того, способ, которым БР осуществляет свое антиоксидантное действие, на момент начала нашего исследования оставался неизвестным, поскольку влияние БР на концентрацию пероксильных радикалов в окисляющихся системах в данных работах не изучалось.

При проведении настоящего исследования выяснилось, что, что ин-гибирующее действие БР осуществляется в его реакции с пероксильными радикалами, т.е., подобно токоферолу, данный пигмент является «классическим» антиоксидантом. Оказалось, что БР обладает чрезвычайно высокой антиокислительной активностью, в два раза превышающей активность ионола. В отличие от токоферола, радикалы которого достаточно активны, чтобы в определенных условиях быть способными инициировать реакции ПОЛ, одна молекула БР может обрывать больше двух цепей окисления за счет образования продуктов превращения, в свою очередь, также обладающих ингибирующими свойствами.

Практически все накопленные к настоящему времени экспериментальные данные свидетельствуют о том, что процессы ПОЛ являются абсолютно необходимым условием нормального существования клеток организма. Продукты ПОЛ являются используются для синтеза биологически активных веществ: стероидных гормонов, простагландинов, тромбок-санов [Subbanagounder et al., 2000]. Пероксиды липидов, так же, как и сами липиды, могут активировать или ингибировать ряд ферментов [Паль-мина с соавт., 1999]. Имеются указания, что процессы клеточной пролиферации, апоптоза и дифференцировки зависят от работы системы ПОЛ в биомембранах [см., напр., Алесенко, Пальмина, 1982; Дмитриев, 1990].

При избыточной генерации активных форм кислорода процесс сво-боднорадикального окисления принимает самоускоряющийся характер, что приводит к накоплению продуктов ПОЛ, повреждению мембранных структур клеток, окислительной модификации белков-ферментов, нарушению функционирования нуклеиновых кислот. Значение нарушения процессов ПОЛ как универсального фактора повреждения мембранных структур клетки в возникновении и развитии таких патологических состояний, как лучевая болезнь, злокачественный рост, действие некоторых ядов, гипер- и гипоксия, Е-авитаминоз является общеизвестным.

Система природных антиоксидантов, поступающих с пищей или генерируемых эндогенно, является одной из важнейших систем, поддерживающих стационарность процессов ПОЛ в организме. Как впервые было показано нами, одним из таких эндогенных антиоксидантов является БР. Антиоксиданты проявляют терапевтическое действие при заболеваниях, в основе патогенеза которых лежит интенсификация ПОЛ. С высокой вероятностью можно было предположить наличие у БР аналогичных цитопро-текторных свойств. В силу высокой АОА и достаточно большого содержания в плазме крови (порядка 10"5 моль»л-1 в норме и 10"4 моль*л"1 и более при патологии печени и желчевыводящих путей) БР может играть существенную роль в защите липидов от пероксидного окисления при различных физиологических и патологических состояниях.

Однако, несмотря на то, что на сегодняшний день наличие антиокислительной активности у БР уже не подвергается сомнению большинством исследователей, многие аспекты его действия до сих пор неизучен-ны. Парадоксально, но в первую очередь это относится к сопровождающимся желтухой заболеваниям печени и желчевыводящих путей; среди клиницистов по-прежнему преобладает мнение о токсичности БР. На основании корреляции между концентрацией БР и тяжестью поражения печени некоторые авторы делают маловероятное, на наш взгляд, предположение о существовании двух видов БР - антиоксиданта и ускорителя окисления («two kinds of bilirubin, an antioxidant and a prooxidant form») [Feher et al., 1998].

Попробуем рассмотреть, каким образом уровень БР в организме может быть связан с изменением содержания активных форм кислорода, во многом определяющим скорость инициирования реакций ПОЛ и содержания его продуктов в органах и тканях в условиях нормы и при патологии. На рис.76 представлена схема, иллюстрирующая возможные ответы клетки на окислительный стресс: 1) отсутствие повреждений в случае, если антиокислительная защита достаточна, чтобы предотвратить или быстро восстановить повреждения; 2) умеренные окислительные повреждения, которые можгут вызывать цитопротекторные ответы, например, индукцию антиокислительных ферментов типа GSH-пероксидазы, каталазы или ГО; 3) более сильные повреждения, которые вызывают апоптоз, потому что превышены возможности как имеющейся, так и индуцибельной репарации; 4) грубые нарушения, которые делают невозможным любой тип метаболического ответа и приводят к некрозу.

ROS

О, , OJ/HjOJ , ONOO-, Oj) I

OOOOOOOOOO OlCytCTtHC усиления ПОЛ (Blame про- n

8И1ИО KCM A iHIOI таш шш

Небольшое усиление ПОЛ

ООН

Резкое усиление ЛОЛ

Выживание и етаболические N вруш еиия

Умеренное усиаемие ЛОЛ усилени

Стрессовый e^eT.PV."!!'f " W сигнал

Индукция онтиоксипвитиой программы

3 а щ н > ы самоубийство клетки

I I I

ПОПЮ9 Некроэ гибель] (гибель)

Стрессовый ситиол I

Индукция

Выживание I

Л маис мембраны

Рис.76. Влияние окислительного стресса на процессы адаптации и гибели клеток [Girotti., 1998].

Содержание БР в организме определяется динамическим равновесием между скоростью его образования и выделения. БР образуется в основном в клетках селезенки и ретикулоэндотелиальной системы, преимущественно из эритроцитов крови путем окисления гемоглобина гемокси-геназой. Органом, ответственным за выведение БР через желчевыводящие пути в кишечник, является печень. Соответственно, увеличение уровня БР может быть обусловлено либо усилением его продукции в гемоксигеназ-ной реакции, либо снижением скорости выведения из организма.

Количество ежедневно образующегося в организме здорового человека БР достаточно велико - 250-300 мг. В связи с этим, его содержание, наличествующее в крови и клетках (наряду с действием других защитных систем), оказывается достаточным, чтобы предотвращать повреждение клеток в случае стационарного «фонового» действия окислительных стимулов. Усиления процессов ПОЛ при этом не наблюдается, поскольку имеется баланс между про- и антиоксидантами.

В случае умеренного окислительного стресса в клетках различных органов и тканей может происходить повышение содержания БР за счет усиления его выработки путем индукции ГО. Данный фермент относится к классу стрессовых белков, и в ответ на окислительные стимулы его количество в клетке способно резко увеличиваться, что является отражением процесса адаптации на клеточном уровне. Такая ситуация характерна, например, для психологических стрессов, физических нагрузок и т.п. Наблюдаемое при этом усиление реакций ПОЛ незначительно и носит кратковременный характер. За счет усиления продукции эндогенного антиок-сиданта БР система способна быстро восстановить исходный уровень пе-роксидных реакций в липидах мембран.

Защитное действие усиленной продукции БР, обусловленной индукцией ГО, показано и при более сильных окислительных воздействиях, приводящих к патологии, например, при ишемии-реперфузии. Изменение интенсивности ПОЛ при этих патологиях носят более выраженный характер. Однако, если сила окислительного стресса не превышает адаптивные возможности (не происходит быстрая гибель большого количества клеток), количество образующегося БР оказывается достаточным, чтобы эти изменения были обратимыми.

200 400 Билирубин, цкмоль/л

5 10 15 Билирубин, цмоль/г ЛИПИДОЕ в о

§5 30

1|20 II

О"4

ИГН

-2 -1 0 АОА липидов, часхмл/пх10"3 Рис.77. Зависимость АОА липидов, а также содержания продуктов ПОЛ от содержания БР и взаимосвязь между уровнем АОА и относительным содержанием фосфолипидов в липидах сыворотки крови больных ОВГ.

Одновременно с другими изменениями метаболизма снижается скорость выведения различных веществ, в том числе и БР, с желчью, что приводит к росту его содержания в сыворотке крови и ткани печени (желтухе). БР, постепенно накапливающийся в организме больного, способен осуществлять защиту от окислительного стресса не только печени, но и других органов и тканей. В конечном итоге это должно приводить к снижению интенсивности ПОЛ, темпа гибели гепатоцитов и усилению репарационных процессов в печени. Данная ситуация имеет место, например, при циклическом протекании острого вирусного гепатита.

При желтухе, возникающей в результате нарушений желчетока, БР может выступать в качестве своего рода суррогата антиоксидантных жирорастворимых витаминов, не поступающих в организм из-за имеющих место при холестазе нарушений кишечного всасывания.

На рис.77 представлены данные, полученные при исследовании влияния БР на параметры ПОЛ и липидного обмена в сыворотке крови больных ОВГ А и В. Каждая точка на графиках представляет собой средние данные по группам с различной степенью тяжести заболевания, включая коматогенные формы.

Повышение уровня БР в сыворотке крови при острых циклических формах заболевания сопровождается выраженным снижением содержания продуктов ПОЛ (рис.77А). Возрастание АОА при этом определяется концентрацией БР в липидах сыворотки крови (рис.77Б). Повышение АОА липидов при неосложненных формах ОВГ происходит одновременно с возрастанием содержания легкоокисляемых фосфолипидов (рис.77В). Обогащение липидов легкоокисляющимися фракциями при повышении АОА липидов является способом физико-химической регуляции процессов ПОЛ. Другими словами, при патологии печени БР поддерживает функционирование этой системы регуляции, обеспечивая тем самым стационарность ПОЛ.

Когда сила окислительного стресса чрезмерно велика (например, в связи с силой иммунного ответа при фулминантных формах вирусного гепатита), и количество апоптотических клеток достигает некоторой критической величины, происходит массивная гибель гепатоцитов по механизму вторичного некроза. При этом количество БР, генерируемого при протекании гемоксигеназной реакции или накапливаемого при нарушениях его выведения оказывается недостаточным для защиты клеток. Происходит нарушение регуляции и резкое возрастание уровня продуктов ПОЛ, что в связи с самоускоряющимся характером процесса и токсичностью его продуктов может приводить к гибели организма. Такая ситуация типична для коматогенных форм острого вирусного гепатита, терминальных стадий хронических заболеваний печени, опухолей панкреадуоденальной области и для представляющих угрозу жизни осложнений, развивающихся у больных желчнокаменной болезнью при неправильном выборе времени проведения хирургического вмешательства. Повышение уровня БР в сыворотке крови осложненных комой форм ОВГ, с присущей им массовой гибелью гепатоцитов не способно привести к снижению содержания продуктов ПОЛ крови больных (рис.77А, правая ветвь кривой). Повышение содержания БР в липидах при этом приводит лишь к весьма незначительному росту АОА липидов (рис.77Б), а повышение АОА сопровождается не ростом, а снижением легкоокисляемых липидных фракций (рис.77В).

Таким образом, в случаях, когда потери жизнеспособных клеток не превышают регенераторные возможности (в случае печени — гибель не более 80% гепатоцитов), гипербилирубинемия представляет собой эффективный механизм собственной защиты организма. В силу постоянной выработки БР организмом, индуцибельности фермента, ответственного за его генерацию, и накапливания при патологии печени и желчевыводящих он способен в течение достаточно продолжительного времени предотвращать свободнорадикальное повреждение гепатоцитов, а также клеток других органов и тканей в условиях функциональной недостаточности печени.

При заболеваниях печени гепатоциты гибнут преимущественно по механизму апоптоза. Например, при вирусном гепатите апоптоз является, способом очищения организма от инфекции. Пути, по которым проходит сигнал апоптоза, наряду с другими возможностями, включает активацию сфингомиелинового цикла. Активность основного фермента сфингомиелинового цикла, - СФМазы - зависит от интенсивности окислительных процессов, а продукты сфингомиелинового цикла способны индуцировать окислительный стресс.

При изучении влияния БР на активность СФМазы и связи между уровнем активности фермента и содержанием продуктов ПОЛ, а также его действия на апоптоз, индуцированный продуктом сфингомиелинового цикла, сфингозином и УФ-облучением, оказалось, что БР помимо непосредственно антиоксидантного действия может ингибировать СФМазу, препятствуя таким образом апоптотической гибели клеток. Оказалось, что дополнительным механизмом ингибирования СФМазы БР может являться его избирательное связывание со сфинголипидами мембран при взаимодействии с клеточной поверхностью. Выявленные закономерности заключаются в зависимости активности СФМазы от интенсивности ПОЛ и влиянии БР как на ПОЛ, так и на сигнальную систему сфингомиелинового цикла. Сфингомиелиновый цикл активируется теми же окислительными стимулами, которые вызывают индукцию ответственной за образование БР микросомальной Г01. Другими словами, увеличение продукции БР может рассматриваться как явление, направленное на ингибирование проведения сигнала апоптоза через сфингомиелиновый цикл.

Бипируби н

-г-► Ф-Хол

Цер&МИД

ЩР—

Апоашгш

Рис.78. Механизм антиапоптотического действия БР.

Исходя из полученных в настоящей работе результатов и имеющихся в литературе сведений, мы предлагаем следующую схему комплексного защитного антиапоптотического действия БР на уровне липидов мембран: I) непосредственно антиоксидантное действие; 2) влияние на структурную организацию мембран за счет связывания с холинсодержащими липидами; 3) ингибирование активности СФМазы; 4) предотвращение прооксидантного действия продуктов сфингомиелинового цикла (рис.78). Кроме этого, ЬР может оказывать дополнительное цитопротекторное действие путем снижения содержания ФНО-а, проапоптотические свойства которого также во многом реализуются через активацию сфингомиелинового цикла.

Полученные в настоящей работе данные об ингибировании БР апоптотической деградации ДНК могут, на наш взгляд, быть полезными при разработке методов и выборе тактики лечения заболеваний, сопровождающихся желтухой. В частности, можно предположить, что гипербилирубинемия оказывает серьезное влияние на эффективность противораковой терапии у больных с опухолями гепатопанкреадуоденальной области. Лечение этих больных (радио-, хемо- и фотодинамическая терапия) направлено на индукцию окислительного стресса, приводящего к гибели клеток путем апоптоза. При этом гипербилирубинемия, в связи с анти-апоптотическими и антиоксидантными свойствами БР, может снижать эффект лечения. При этом гипербилирубинемия, в связи с антиапоптоти-ческими и антиоксидантными свойствами БР, может снижать эффект лечения. В то же время при вирусном гепатите желтуха должна рассматриваться не как явление, осложняющее течение заболевания, а как реакция, направленная на защиту организма от интоксикации и стабилизацию гепатоцитов. Данный факт надо иметь в виду, поскольку реакции ПОЛ играют ведущую роль в патогенезе цитолиза при патологии печени, а большинство гепатопротекторов, как и БР, относятся к классу антиоксидантов. Другим практическим следствием проведенной работы явилась возможность использования определения содержания продуктов ПОЛ в сыворотке крови больных в качестве критерия дифференциальной диагностики заболеваний, протекающих с желтухой.

Исследованиями, на протяжении ряда лет проводящимися в Институте биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН под руководством проф. Е.Б. Бурлаковой показано, что на уровне мембран, клеток и органов существует физико-химическая система регуляции, обеспечивающая протекание ПОЛ на стационарном уровне. Понижение АОА липидов и увеличение интенсивности ПОЛ вызывают такое изменение состава липидов, что эти липиды становятся менее окисляемыми, уменьшается скорость расходования антиоксидантов, АОА постепенно увеличивается и возвращается к норме. При повышении АОА, напротив, повышается относительная концентрация фосфолипидов и снижается концентрация холестерина. Обогащение липидов легкоокисляемыми фракциями и снижение содержания трудноокисляемых фракций при повышении уровня природных антиоксидантов обеспечивает стационарность процессов ПОЛ. Мы предположили, что на организменном уровне существует аналогичная регуляция, а ее интегральными показателями должны являться параметры липидного обмена сыворотки крови.

Центральным органом в метаболизме липидов, ответственным за их синтез, катаболизм, всасывание из кишечника и удаление из организма является печень. Путем изменения количества липопротеидов и варьирования их состава печень может поддерживать стационарный режима ПОЛ в целостном организме.

При проведении настоящей работы выяснилось, что в сыворотке крови практически здоровых доноров действительно существует тесная взаимосвязь между изменением скорости окислительных реакций в липидах, их составом и антиокислительными свойствами, что является доказательством существование физико-химической регуляции ПОЛ на организменном уровне.

В гораздо меньшей степени можно было ожидать, что физико-химическая регуляция стационарного режима окислительных реакций в липидах сыворотки крови остается сохранной при заболеваниях печени и желчевыводящих путей. Несмотря на явные нарушения функций гепатоцитов, зависимости между изученными параметрами у больных острым вирусным гепатитом, хроническими гепатитами, компенсированными циррозами и желчнокаменной болезнью, протекающей без осложнений, оказались аналогичными таковым у практически здоровых доноров. Нарушения физико-химической регуляции ПОЛ наблюдались лишь у больных, находившихся на терминальных стадиях заболевания.

Известно, что интенсивность ПОЛ регулируется несколькими системами, действие которых взаимосвязано и дополняет друг друга, а общий уровень свободнорадикальных реакций и скорость накопления повреждений в клетках зависит от сбалансированного функционирования этих систем. При этом накопление продуктов ПОЛ может не происходить даже в условиях повышения продукции свободных радикалов. В связи с этим мы предполагаем, что желтуха, наблюдающаяся при заболеваниях печени и желчевыводящих путей, является дополнительным компенсаторным механизмом, позволяющим регулировать интенсивность протекания реакций ПОЛ в организме в условиях нарушения функциональной способности гепатоцитов. Нам представляется правомочной аналогия между повышением уровня БР при патологии печени и повышением температуры тела при простудных заболеваниях. И то, и другое до недавнего времени рассматривалось как опасное проявление болезни. И, подобно тому, как гипертермия в настоящий момент считается одним из элементов защиты организма от инфекции, так и гипербилирубинемия может предотвращать индуцированное различными патогенными агентами усиление свободнорадикальных окислительных реакций в липидах. Интересно отметить, что одной из сторон действия гипертермии является увеличение выработки клетками организма БР за счет индукции ГО (белка теплового шока HSP32). При нарушениях оттока желчи БР способен, по-видимому, компенсировать дефицит жирорастворимых антиоксидантных витаминов, наблюдаемый при этой патологии из-за малабсорбции. И, наконец, повышение уровня БР может рассматриваться и как фактор, направленный на поддержание функционирования других органов в условиях повышения продукции свободных радикалов при повреждении или гибели гепатоцитов. Большинство гепатопротекторных лекарств принадлежит к группе антиоксидантов, механизм их действия включает, стабилизацию мембран, нейтрализацию свободных радикалов и иммуномодуляцию. Всеми этими свойствами в полной мере обладает и эндогенный антиоксидант - БР.

В настоящее время предлагается использовать усиление продукции БР путем индукции ГО в качестве в качестве лечебного воздействия при диабете, панкреатите, пневмониях, системных воспалительных заболеваниях, воспалениях желудочно-кишечного тракта, ишемической болезни сердца, рассеянного склероза, болезни Альцгеймера, малярии и даже рака и СПИДа. Оказалось, что действие даже такого препарата, как Viagra, во многом связано с индукцией ГО. Универсальность протекторного действия БР связана с его ролью в осуществлении организмом собственной защиты в ответ на самые различные повреждающие воздействия и представляет собой подтверждение старой медицинской доктрины: наиболее эффективно лечение, помогающее организму самому справиться с болезнью. В настоящее время функции БР как одного из основных антиоксидантов, а ГО - как фермента, абсолютно необходимого для всех организмов, проживающих в кислородной среде, уже не подвергается сомнению большинством исследователей.

В настоящей работе антиоксидантное действие БР впервые продемонстрировано в системах различной степени сложности - индуцированном и аутоокислении простых органических соединений, при введении в организм животных, на моделях внутри- и подпеченочного холестаза и при патологии печени и желчевыводящих путей в клинике. Впервые показано антиапоптотическое действие БР, которое определяется его инги-бирующим действием на СФМазу - генератор вторичных посредников сигнала апоптоза - и предотвращением прооксидантного действия продуктов сфингомиелинового цикла. Благодаря своим антиоксидантным и антиапоптотическим свойствам, БР вызывает снижение интенсивности ПОЛ, уменьшение темпа гибели клеток и усиление репарационных процессов в органах. Особое место БР в цитопротекции состоит в том, что он является эффективным компонентом собственной зашиты. Выявленные нами закономерности, заключающиеся в зависимости активности СФМазы от интенсивности ПОЛ и влиянии БР как на ПОЛ, так и на сигнальную систему сфингомиелинового цикла и апоптоз, могут оказаться полезными для более полного понимания его цитопротекторного действия и столь важных процессов, как пролиферация и гибель клеток.

В заключение приведем высказывание одного из ведущих специалистов в области исследования свойств БР, McDonagh: «Быть может, пока еще преждевременно рекомендовать прием таблеток билирубина вместе с ежедневной порцией витаминов, но наличие полезных свойств у этого золотистого пигмента с такой плохой репутацией больше не кажется абсурдом».

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Дудник, Людмила Борисовна, Москва

1. Алесенко А.В. Роль метаболитов сфингомиелинового цикла в проведении сигналов пролиферации, дифференцировки и смерти клеток // Биол. мембраны. 1999. Т.16. №2. С.242-255.

2. Алесенко А.В. Функциональная роль сфингозина в индукции пролиферации и гибели клеток//Биохимия. 1998. Т.63. №1. С.75-82.

3. Алесенко А.В., Пальмина Н.П. Роль липидов в функциональной активности и биосинтезе ДНК в нормальных и опухолевых клетках // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М: Наука, 1982. С.84-100.

4. Аристархова С.А., Бурлакова Е.Б., Храпова Н.Г. Изучение ингиби-рующей активности токоферола // Изв. АН СССР. 1972. Сер.хим. №12. С.2714-2718.

5. Аристархова С.А., Бурлакова Е.Б., Шелудченко Н.И. Влияние лецитина на перекисное окисление липидов в микросомах печени // Биохимия. 1976. Т.44. №1. С. 125-130.

6. Арчаков А.И. Микросомальное окисление // М.: Наука, 1975. 327с.

7. Арчаков А.И., Девиченский В.М., Карузина И.И. Влияние концентрации буфера на скорость реакции транспорта электронов в микросомах печени // Биохимия. 1968. Т.ЗЗ. №3. С.479-482.

8. Ю.Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов // М.: Медицина, 1985. 368с.

9. Блюгер А. Ф., Новицкий И. Н. Практическая гепатология // Рига: Звайгзне, 1984. 340с.

10. Блюгер А.Ф., Дудник Л.Б., Майоре А.Я., Ноздрунова Н.А., Миезе И.Э. Взаимосвязь интенсивности перекисного окисления липидов с изменением состава липидов в сыворотке крови больных острым вирусным гепатитом //Вопр. Мед. Химии. 1985. Т. 31. № 5. С. 35-37.

11. Болдырев Н.А., Козлов А.В., Змызгова А.В., Азизова О.А., Ромлый И.М., Мусаров А.Л., Владимиров Ю.А. Причины интенсификации перекисного окисления липидов в крови больных вирусным гепатитом В // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 1990. Т.110. №9. С.297-298.

12. Бурлакова Е.Б., Алесенко А.В., Молочкина Е.М., Пальмина Н.П., Хра-пова Н.Г. Биоантиоксиданты в лучевом поражении и злокачественном росте // М.: Наука, 1975.211с.

13. Бурлакова Е.Б., Джалябова М.И., Гвахария В.О., Глущенко Н.Н., Молочкина Е.М., Штолько В.Н. Влияние липидов мембран на активность ферментов//Черноголовка, (Препринт). 1978. 33с.

14. Бурлакова Е.Б., Терехова С.Ф. Холестерин в реакциях свободноради-кального окисления // Свободнорадикальное окисление липидов в норме и патологии. М.: Наука, 1976.С.22-23.

15. Бурлакова Е.Б., Храпова Н.Г., Крашаков Н.В. Токоферолы // Биол. мембраны. 1998. №3. С.4-18.

16. Бурлакова Е.Б., Эмануэль Н.М. Особенности действия меркамина и ингибиторов радикально-цепных процессов в реакциях, моделирующих окисление липидов // Докл. АН СССР. 1960. V.135. №3. С.599-602.

17. Бурмистров С.О., Дубинина Е.Е., Шабалов Н.П., Ходов Д.А., Талаби Е. Влияние билирубина in vitro на антиокислительную активность и пере-кисное окисление липидов плазмы и эритроцитов пуповинной крови // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 1993. Т.116. №7. С.50-52.

18. Бычкова В.И. Нарушение липидного обмена при инфекционном гепатите и циррозах печени // Матер. IV Всес. конф. по клин. биох. морфол. и иммунол. инф. болезней. Рига: РМИ, 1973. С.121-122.

19. Виленский Б.С. Дифференциальная диагностика заболеваний печени // М.: Медицина, 1987. 372с.

20. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах // 1972. М.: Наука, 252с.

21. Владимиров Ю.А., Сергеев П.В., Сейфулла Р.Д., Руднев Ю.М. Влияние стероидов на перекисное окисление липидов мембран митохондрий печени // Молекулярн. Биол. 1973. №7. С.247-259.

22. Гальперин Э.И., Ахаладзе Г.Г. Билиарный сепсис: некоторые особенности патогенеза// 1999. Хирургия. №10. С.24-28.

23. Гальперин Э.И., Семендяева М.М., Неклюдова Е.А. Недостаточность печени // М.: Медицина, 1978. 328с.

24. Деев Л.И., Ахалая М.Я., Кудряшов Ю.В. Влияние холодового стресса на содержание и активность цитохрома Р-450 печени крыс // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 1981. №8. С.28-30.

25. Дмитриев Л.Ф. Малоновый диальдегид может контролировать клеточное деление на стадии репликации ДНК // Ж. Эвол. Биох. Физиол. 1990. Т.28. №6. С.720-730.

26. Дудник Л.Б. Интенсификация пероксидного окисления липидов сыворотки крови как биохимический признак сопутствующего панкреатита при осложненных формах желчнокаменной болезни // Вопр. Мед. Химии. 1998. Т. 44. №6. С. 571-575.

27. Дудник Л.Б., Виксна Л.М., Майоре А.Я. Пероксидное окисление липидов и его связь с изменением состава и антиокислительных свойств липидов при коматогенных формах острого вирусного гепатита В // Вопр. Мед. Хим. 2000. Т.46. №6. С.597-609.

28. Дудник Л.Б., Храпова Н.Г. Исследование ингибирующей активности билирубина в реакциях свободнорадикального окисления // Биологические мембраны. 1998. №3, С. 83-89.

29. Дудник Л.Б., Цюпко А.Н., Хренов А.В. Алесенко А.В. Влияние билирубина на интенсивность пероксидного окисления липидов, активность сфингомиелиназы, и апоптоз, индуцированный сфингозином и УФ-облучением //Биохимия. 2001. Т.66. №9. С.1252-1262.

30. Дудник Л.Б., Элерте Д.Л., Майоре А.Я., Филатова Е.Н. Перекисное окисление липидов при внутрипеченочном холестазе, вызванном а-нафтилизотиоцианатом // Лабораторные животные. 1992. Т. 2. № 3. С. 1218

31. Дятловицкая Э.В. Зависимость биоэффекторных свойств сфинголипи-дов от строения их гидрофобного фрагмента // Биохимия. 1998. Т.63. №1. С.67-74.

32. Жуков Н.А., Жукова Е.Н., Климова С.К. Механизмы активации и роль перекисного окисления липидов в обострении хронического панкреатита // Тер. Арх. 1989. Т.61. №2. С.15-18.

33. Кальнова Н.Ю., Пальмина Н.П. Изменение содержания фосфолипидов и антиокслительной активности липидов эритроцитов при опухолях молочной железы и при радиотерапии // Биохимия. 1980. Т.45. №9. С. 16461653.

34. Катикова О.Ю., Костин Я.В., Тишкин B.C. Гепатопротекторное действие растительных препаратов // Эксп. Клин. Фармакол. 2002. Т.65. №1. С.41-43.

35. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения //СПб.: Питер-пресс, 1998. 505с.

36. Козлов Ю.П., Данилов B.C., Каган В.Е., Ситковский М.В. Свободнора-дикальное окисление липидов в биологических мембранах // М.: Изд. МГУ, 1972. 88с.

37. Коломийцева И.К. Радиационная биохимия мембранных липидов. М.: Наука. 1989. 182с.

38. Леменовская А.Ф., Коен Я.М., Перевозчикова К.А., Збарский И.Б., Дятловицкая Э.В. Состав фосфолипидов ядерных мембран и ядер клеток печени крыс и гепатомы 27 // Биохимия. 1976. Т.41. №6. С. 1000-1003.

39. Логинов А.С., Бендиков Е.А., Петраков А.В. Маркеры перекисного окисления липидов в выдыхаемом воздухе и микросомальное окисление у больных с хроническими диффузными заболеваниями печени // Тер. Арх. 1995. Т.67. №4. С.50-53.

40. Логинов А.С., Джалалов К.Д., Блок Ю.Е., Бендиков Е.А., Аушева Л.Х. Лечение хронических заболеваний печени катергеном // Тер. Арх. 1986. Т.58. №2. С.73-76.

41. Майоре А.Я., Горштейн Э.С., Кузнецова А.В. Некоторые аспекты гепа-тотропного действия а-нафтилизотиоцианата // Экспериментальная патология печени. Рига: Зинатне, 1983. С.77-86.

42. Майоре А.Я., Копылова Т.Н., Кузнецова А.В. Характеристика хеми-люминесценции ткани печени крыс при интоксикации гепатотропными ядами // Биологические мембраны и патология клетки. Рига: Зинатне, 1985. С.51-57.

43. Мартынова Е.А. Влияние сфинголипидов на активацию Т лимфоцитов // Биохимия. 1998. Т.63. №1. С. 122-132.

44. Матюшин А.И., Петренко Ю.М., Попова Е.В. Водорастворимая форма эстрадиола с эстрогенной и кардиотропной активностью // Бюлл. Экспер. Биол. Мед. 1995. Т. 119. №1. С.45-47.

45. Методические указания по применению унифицированных клинических лабораторных методов исследования. // 1973. М.: Медицина, 90с.

46. Мусил Я. Основы биохимии патологических процессов // М.: Медицина, 1985. 432с.

47. Мышкин А.Е., Сахаров В.Н. Фотохимия билирубина // Успехи химиии. 1982. Т.60. №1. С.72-91.

48. Никитин Ю.П., Курилович С.А., Давидик Г.С. Печень и липидный обмен // Новосибирск: Наука, 1985. 191с.

49. Никифорова Н.В., Ходырева JI.A., Кирпатовский В.И., Чумаков A.M. Перекисное окисление липидов в тканях злокачественных опухолей почек у человека//Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 2001. Т.132. №5. С.1096-1099.

50. Нисевич Н. И., Учайкич В. Ф., Молева Т. П. Значение процессов пере-кисного окисления липидов в синдроме цитолиза при вирусном гепатите у детей // Педиатрия. 1978. №6. С.44-48.

51. Нисевич Н.И., Марчук Г.И., Зубикова И.И. Математическое моделирование вирусного гепатита // М.: Наука, 1981. 350с.

52. Новицкий Г.К., Мельникова Г.Ю., Полдлевский А.Ф., Васильев B.C. Перекисное окисление липидов и состав мембран эритроцитов у больных вирусным гепатитом В // Лик. Справа. 1992. №1. С.79-81.

53. Пак С.Г., Никитин Е.В. Состояние процессов свободнорадикального окисления и антиокислительной системы у больных тяжелыми формами гепатита В // Клин. Мед. 1991. Т.69. №9. С.54-57.

54. Пальмина Н.П., Гаинцева В.Д., Сажина Н.П. Использование антиоксидантов в комбинированной терапии опухолей // Вопр. Онкол. 1980. Т.26. №1. С.80-83.

55. Пальмина Н.П., Мальцева E.J1., Бурлакова Е.Б. Протеникиназа С пе-роксилипидзависимый фермент // Химическая физика. 1995 Т.14. №11. С.47-60.

56. Пальмина Н.П., Мальцева E.JL, Пынзарь Е.И., Бурлакова Е.Б. Модификация активности протеинкиназы С лигандами в сверхмалых концентрациях // Росс. Хим. Журн. 1999. Т.43. №5. С.55-63.

57. Пенин В.А., Писаревский Г.Н. Проблемы диагностики острого панкреатита//Хирургия. 1993 №12. С.62-66.

58. Петрусевич Ю.М. Антиокислительные свойства фенолов растительного происхождения // Биоантиоксиданты. М.: Наука, 1975. С.247-255.

59. Петрусевич Ю.М. Исследование фосфолипидов нервных волокон методом ультрафиолетовой абсорбции и электрохимической люминесценции // Сверхслабые свечения в биологии. М.: Наука, 1972. С. 133-137.

60. Пицин Д.Г., Пенев П. Содержание липидных фракций в печени больных с различными заболеваниями печени // Лабораторное дело. 1972. №9. С.513-516.

61. Плохинский Н.А. Математические методы в биологии // М.: Изд-во МГУ, 1978. 362с.

62. Попов Г.А., Конев В.В. Влияние перекисного окисления липидов на синтез ДНК в клетках асцитной карциномы Эрлиха // Биохимия. 1984. Т.49. №7. С. 1199-1202.

63. Поцелуева М.М., Пустовидко А.В., Алябин B.C., Евтодиенко Ю.В. Генерация активных форм кислорода полиморфноядерными лейкоцитами при росте гепатомы в перитонеальной полости животных // Цитология. 1999. Т.41. №2. С.223-228.

64. Пугаев А.В., Багдасаров В.В. Хирургическое лечение осложнений острого панкреатита//Хирургия. 1997. №2. С.79-81.

65. Пупелис Г.В., Дудник Л.Б., Лапиня А.Я. Значение расстройств липидного обмена при осложненной желчнокаменой болезни // Тез. докл. объед. конф. ученых-медиков Латв. ССР. Рига, 1988. С.91.

66. Савченкова А.П., Дудник Л.Б., Соловьева Н.П., Азизова О.А. Кинетические закономерности Си2+-индуцированного окисления липидов плазмы и сыворотки крови // Биол. Мед. Химия. 2003. Т.49. №6. С.576-587.

67. Селищева А.А., Козлов Ю.П. Метаболизм фосфолипидов и биологические мембраны //Иркутск, 1988. 88с.

68. Скакун Н.П., Высоцкий И.Ю. Сезонная зависимость эффективности витамина Е и селенита натрия при индуцированном четыреххлористым углеродом повреждении печени // Вопр. Питан. 1984. №6. С.50-54.

69. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения диеновых конъю-гатов ненасыщенных жирных кислот // Современные методы в биохимии. М.: Медицина, 1977. С.63-64.

70. Темченко О.И. Динамические показатели перекисного окисления липидов и системы антиоксидантов при хирургическом лечении цистомы яичников // Клин. Хирургия. 1998. №1. С.40-41.

71. Тодоров И. Клинические лабораторные исследования в педиатрии // София: Медицина и спорт, 1968. 1064с.

72. Филов B.J1., Данова JI.H., Германович M.J1. Гидразинсульфат: экспериментальные и клинические данные, механизмы действия // Лекарственная терапия опухолей в эксперименте и клинике. Л.: Медицина, 1983. С.91-139.

73. Храпова Н.Г. Кинетические характеристики токоферолов как регуляторов перекисного окисления липидов // Липиды. Структура, биостнтез. превращения и функции. М.: Наука, 1977. С. 157-170.

74. Шишкина Л.Н. Особенности функционирования физико-химической системы регуляции перекисного окисления липидов в биологических объектах разной степени сложности в норме и при действии повреждающих факторов // Автореф. дисс. д.х.н. 2003. М.: 45с.

75. Шляпинтох В.Я., Карпухин О.Н., Постников Л.М., Захаров И.В., Вичу-тинский А.А., Цепалов В.Ф. Хемилюминесцентные методы исследования медленных химических процессов // М.: Наука, 1966. 300с.

76. Элерте Д. Л., Горштейн Э. С Изменение активности индуцированного микросомального перекисного окисления липидов в печени крыс при экспериментальной подпеченочной желтухе // Тез. II Всесоюзн. конф. «Биоантиоксидант». Черноголовка, 1986. Т. 2. С.22-23.

77. Aboutwerat A., Pemberton P.W., Smith A., Burrows Р.С., McMahon R.F., Jain S.K., Warnes T.W. Oxidant stress is a significant feature of primary biliary cirrhosis // Biochim. Biophys. Acta. 2003. V.1637. №2. P.142-150.

78. Adhikari S., Joshi R., Gopinathan C. Bilirubin as an antiprecipitant against copper mediated denaturation of bovine serum albumin: formation of copper-bilirubin complex // Biochim. Biophys. Acta. 1998. V.1380. P.109-114.

79. Aggarwal B.B., Natarajan K. Tumor necrosis factors: developments during the last decade // Eur. Cytokine Netw. 1996. V.7. P.93-124.

80. Akin E., Clower В., Tibbs R., Tang J., Zhang J. Bilirubin produces apop-tosis in cultured bovine brain endothelial cells // Brain Res. 2002. V.931. P.168-175.

81. Alam J., Den Z. Distal AP-1 binding sites mediate basal level enhancement and TPA induction of the mouse heme oxygenase-1 gene // J. Biol. Chem. 1992. V.267. P.21894-21900.

82. Albrecht J., Jones E.A. Hepatic encephalopathy: molecular mechanisms underlying the clinical syndrome // J. Neurol. Sci. 1999. V.170. P. 138-146. « 104. Alessenko A.V., Khrenov A.V. Role of sphingosine in induced apoptosis

83. Lipids. 1999. V.34S. №2. P.75-76.

84. Almasio P., Bortolini M., Pagliaro L., Coltorti M. Role of S-adenosyl-L-methionine in the treatment of intrahepatic cholestasis // Drugs. 1990. V.40. Suppl.№3.P.l 11-123.

85. Alptekin N., Mehmetcik G., Uysal M., Aykac-Toker G. Evidence for oxidative stress in the hepatic mitochondria of bile duct ligated rats // Pharmacol. Res. 1997. V.36. №3. P.243-247.

86. Ames B.N., Cathcart R., Schwiers E., Hochstein P. Uric acid provides anantioxidant defense in humans against oxidant- and radical-caused aging and cancer: a hypothesis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1981. V.78. P.6858-6862.

87. Analay H., Canturk N.Z., Yildirir C., Canturk Z. Effects of vitamin E on neutrophil phagocytosis during experimental obstructive jaundice // Hepatogas-troenterol. 2000. V.47. №32. P.355-358.

88. Andersson A., Lindgren A., Arnadottir M., Prytz H., Hultberg B. Thiols as a measure of plasma redox status in healthy subjects and in patients with renal or liver failure // Clin. Chem. 1999. V.45. №7. P.786-791.

89. Ando K., Moriyama Т., Guidotti L.G., Wirth S. Schreiber R.D., Schlicht H.J., Huang S.N., Chisari F.V. Mechanisms of class I restricted immunopathol-ogy. A transgenic mouse model of fulminant hepatitis // J. Exp. Med. 1993.1. V.178. №5. P.1541-1554.

90. Andrieu-Abadie N., Gouaze V., Salvayre R., Levade T. Ceramide in apoptosis signaling: relationship with oxidative stress // Free Radic. Biol. Med.2001. V.31. №6. P.717-728.

91. Angulo P., Patel Т., Jorgensen R.A., Therneau T.M., Lindor K.D. Sily-marin in the treatment of patients with primary biliary cirrhosis with a subop-timal response to ursodeoxycholic acid // Hepatology. 2000. V.32. №5. P.897-900.

92. Antosiewicz J., Nishizawa Y., Liu X., Usukura J., Wakabayashi T. Suppression of the hydrazine-induced formation of megamitochondria in the rat liver by a-tocopherol // Exper. Mol. Pathol. 1994 V.60. P. 173-187.

93. Apstein M.D. Inhibition of biliary phospholipid and cholesterol secretion by bilirubin in the Sprague-Dawley and Gunn rat // Gastroenterol. 1984. V.87. №3. P.634-638.

94. Arai Т., Yoshikai Y., Kamiya J., Nagino M., Uesaka K., Yuasa N., Oda » K., Sano Т., Nimura Y. Bilirubin impairs bactericidal activity of neutrophilsthrough an antioxidant mechanism in vitro II J. Surg. Res. 2001. V.96. №1. P.107-113.

95. Arimoto S., Hayatsu H. Role of hemin in the inhibition of mutagenic activity of 3-amino-l-methyl-5H-pyrido4,3-b.indole (Trp-P-2) and other ami-noazaarenes // Mutat. Res. 1989. V.213. №2. P.217-226.

96. Arriaga S., Almar A., Mottino A. In vivo anti-complement effect of • bilirubin-IXalpha // Biochem. Pharmacol. 2002. V.64. №4. P.741-743.

97. Arriaga S.M., Mottino A.D., Almara A.M. Inhibitory effect of bilirubin on complement-mediated hemolysis // Biochim. Biophys. Acta. 1999. V.1473.1. P.329-336.

98. Aruoma O.I. Characterization of drugs as antioxidant profilactics // Free Radic. Biol. Med. 1996. V.20. №5. P.675-705.

99. Asad S.F., Singh S., Ahmad A., Hadi S.M. Bilirubin-Cu(II) complex degrades DNA // Biochim. Biophys. Acta. 1999. V.1428. P.201-208.

100. Asad S.F., Singh S., Ahmad A., Hadi S.M. Inhibition of L-DOPA-Cu(II)-mediated DNA cleavage by bilirubin // Toxicol. In Vitro. 2000. V.14. №5. P.401-404.

101. Aykac G., Ozdemirler G. Inhibition of NADPH-induced microsomal lipid peroxidation in the livers of cholestatic rats // Pharmacol. Res. 1989. V.21. №1. P.39-42.

102. Bakken A.F., Thaler M.M., Schmid R. Metabolic regulation of heme ca-tabolism and bilirubin production. I. Hormonal control of hepatic heme oxygenase activity//J. Clin. Invest. 1972. V.51. P.530-536.

103. Balistreri W.F., Grand R., Hoofnagle, J.H. Suchy F.J., Ryckman F.C., Perlmutter D.H., Sokol RJ. Biliary atresia: current concepts and research directions // Hepatology. 1996. V.23. P.1682-1692.

104. Baranano D.E., Rao M., Ferris C.D., Snyder S.H. Biliverdin reductase: A major physiologic cytoprotectant // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 2002. V.99.• №25. P. 16093-16098.

105. Baranano D.E., Snyder S.H. Neural roles for heme oxygenase: contrasts to nitric oxide synthase // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 2001. V.98. №10. P.996-1002

106. Baron V., Muriel P. Role of glutathione, lipid peroxidation and antioxidants on acute bile-duct obstruction in the rat // Biochim. Biophys. Acta. 1999. V.1472. №1-2. P.173-180.

107. Bartolf M., Franson R.C. Characterization and localization of neutral sphingomyelinase in bovine adrenal medulla // J. Lipid Res. 1986. V.27. P.57-63.

108. Baruch Y., Brook J.G., Eidelman S., Aviram M. Increased concentration of high density lipoprotein in plasma and decreased platelet aggregation in primary biliary cirrhosis // Atherosclerosis. 1984. V.53. №2. P. 151-162.

109. Battiston L., Passamonti S., Macagno A., Sottocasa G.L. The bilirubin-binding motif of bilitranslocase and its relation to conserved motifs in ancient biliproteins // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. V.247. P.687-692.

110. Baumruker Т., Prieschl E.E. Sphingolipids and the regulation of the immune response // Sem. Immunol. 2002. V.14. P.57-63.

111. Belanger S., Lavoie J.C., Chessex P. Influence of bilirubin on the antioxidant capacity of plasma in newborn infants // Biol. Neonate. 1997. V.71. №4. P.233-238.

112. Berlett B.S., Stadtman E.R. Protein oxidation in aging, disease, and oxidative stress // J. Biol. Chem. 1997. V.272. №33. P.20313-20316.

113. Bernardo К., Krut О., Wiegmann К., Kreder D., Micheli M., Schafer R., Sickman A., Schmidt W.E., Schroder J.M., Meyer H.E., Sandho K., Kronke M.

114. Purification and characterization of a magnesium-dependent neutral sphingomyelinase from bovine brain // J. Biol. Chem. 2000. V.275. P.7617-7641.

115. Bernhard K., Ritzel G., Steiner K.U. Ueber eine biologishe Bedeutung der Gallenfarbstoffe. Bilirubin und Biliverdin als Antioxidanten fuer das Vitamin A und essentiellen Fettsauren // Helv. Chim. Acta. 1954. V.38. №2. P.306-313.

116. Berry E.M., Kohen R. Is the biological antioxidant system integrated and regulated? // Med. Hypotheses. 1999. V.53. №5. P.397-401.

117. Beuckmann С. Т., Aoyagi M., Okazaki I., Hiroike Т., Toh H., Hayaishi O., Urade Y. Binding of biliverdin, bilirubin, and thyroid hormones to lipo-calin-type prostaglandin D synthase // Biochemistry. 1999. V.38. №25. P.8006-8013.

118. Beutler В., Cerami A. Cachectin and tumour necrosis factor as two sides of the same biological coin //Nature. 1986. V.320. P.584-588.

119. Blaschke T.F., Meffin P.J., Medon K.L., Rowland M. Influence of acute viral hepatitis on phenition kinetics and protein binding // Clin. Pharmacol. Ther. 1975. V.17. P.685-691.

120. Bligh E.G., Dyer W.J. A rapid method of total lipid extraction and purification // Can. J. Biochem. 1959. V.37. P.911-923.

121. Bloomer J.R., Berk P.D., Howe R.B., Berlin N.I. Interpretation of plasma » bilirubin levels based on studies with radioactive bilirubin // J. Am. Med. Assoc. 1971. V.218. P.216-220.

122. Bomzon A., Ljubuncic P. Oxidative stress and vascular smooth muscle cell function in liver disease // Pharmacol. Therap. 2001. V.89. P.295-308.

123. Bowie A., O'Neill L.AJ. Oxidative stress and nuclear factor-kB activation. A reassessment of the evidence in the light of recent discoveries // Bio-chem. Pharmacol. 2000. V.59. P. 13-23.

124. Bowry V.W., Ingold K.U. The unexpected role of vitamin E (a-tocopherol) in the peroxidation of human low-density lipoprotein // Acc. Chem. Res. 1999. V.32. P.27-34.

125. Bowry V.W., Stocker R. Tocopherol-mediated peroxidation. The pro-oxidant effect of vitamin E on the radical-mediated oxidation of human low-density lipoprotein // J. Am. Chem. Soc. 1993. V.l 15. P.6029-6044.

126. Boyer J.L. Silymarin shows no clinical benefit in a pilot study in patients with primary biliary cirrhosis who have responded suboptimally to ursodeoxycholic acid therapy // Hepatology. Highligts. 2000. V. 125. P.897.

127. Bradham C.A., Plumpe J., Manns M.P., Brenner D.A,. Trautwein C. Mechanisms of hepatic toxicity. I. TNF-induced liver injury // Am. J. Physiol. 1998. V.275. №3. P.387-392.

128. Braganza J.M. Pancreatic disease: a casualty of hepatic detoxification? // Lancet. 1983. V.8357. №2. P.1000-1003.

129. Braganza J.M., Scott P., Bilton D., Schofield D., Chaloner C., Shiel N., Hunt L.P., Bottiglieri T. Evidence for early oxidative stress in acute pancreatitis. Clues for correction // Int. J. Pancreatol. 1995. V.17. №1. P.69-81.

130. Braganza J.M., Wickens D.G., Cawood P., Dormandy T.L. Lipid-peroxidation (free-radical-oxidation) products in bile from patients with pancreatic disease // Lancet. 1983. V.8346. №2. P.375-379.

131. Braganza J.M., Worthington H. A radical view of gallstone aetiogenesis //Med. Hypotheses. 1995. V.45. №5. P.510-516.

132. Breimer L.H., Wannamethee G., Ebrahim S., Shaper A.G. Serum bilirubin and risk of ischemic heart disease in middle-aged British men // Clin. Chem. 1995. V.41. P.1504-1508.

133. Brites D., Silva R., Brito A. Effect of bilirubin on erythrocyte shape and haemolysis, under hypotonic, aggregating or non-aggregating conditions, and correlation with cell age // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1997. V.57. P.337-350.

134. Brito M.A., Silva R.F., Brites D. Bilirubin induces loss of membrane lipids and exposure of phosphatidylserine in human erythrocytes // Cell Biol. Toxicol. 2002. V.18. №3. P.181-192.

135. Brodersen R. Bilirubin. Solubility and interaction with albumin and phospholipid // J. Biol. Chem. 1979. V.254. №7. P.2364-2369.

136. Brodersen R., Bartels P. Enzymatic oxidation of bilirubin // Eur. J. Biochem. 1969. V.10. №3. P.468-473.

137. Brodersen R., Theilgaard J. Bilirubin colloid formation in neutral aqueous solution // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1969. V.24. P.395.

138. Broome U., Eriksson L.S., Sundin U., Sundqvist J.G. Decreased in vitro production of tumour necrosis factor in primary bilary cirrhosis patients // Scand. J. Gastroenterol. 1992. V.27. P.l248-1252.

139. Brower J.O., Huggins M.T., Boiadjiev S.E., Lightner D.A. On the mo-lecularity of bilirubins and their esters and anions in chloroform solution //• Monatsh. Chem. 2000. V. 131. P.l047-1053.

140. Brown S.P., Zhu X.X., Saalwachter K., Spiess H.W. An investigation of the hydrogen-bonding structure in bilirubin by double-quantum magic-angle spinning solid-state NMR spectroscopy // J. Am. Chem. Soc. 2001. V.123. №18. P.4275-4285.

141. Burlakova Ye.B., Pal'mina N.P., Mal'tseva Ye.L. A physicochemical system regulating lipid peroxidation in biomembranes during tumor growth // Membrane lipid oxidation. 1992. V.3. P.208-233.

142. Busciglio J., Andersen J.K., Schipper H.M., Gilad G.M., McCarty R., Marzezico F., Toussaint O. Stress, aging, and neurodegenerative disorders. Molecular mechanisms // Ann. N.-Y. Acad. Sci. 1998. V.851. P.429-443.

143. Buttke Т. M., Sandstrom P. A. Oxidative stress as a mediator of apoptosis // Immunol. Today. 1994. V.15. P.7-10.

144. Camhi S.L., Ala, J., Otterbein L., Sylvester S.L., Choi A.M. Induction of heme oxygenase-1 gene expression by lipopolysaccharide is mediated by АР-1 activation // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1995. V.13. P.387.

145. Camhi S.L., Lee P., Choi A.M. The oxidative stress response // New Horiz. 1995. V.3. №2. P. 170-182.

146. Camoirano A., Balansky R.M., Bennicelli C., Izzotti A., D'Agostini F., De Flora S. Experimental databases on inhibition of the bacterial mutagenicityof 4-nitroquinoline 1-oxide and cigarette smoke // Mutat. Res. 1994. V.317. №2. P.89-109.

147. Cardenas-Vazquez R., Yokosuka O., Billing B.H. Enzymic oxidation of unconjugated bilirubin by rat liver // Biochem. J. 1986. V.236. №3. P.625-633.

148. Cardin R., Saccoccio G., Masutti F., Bellentani S., Farinati F., Tiribelli C. DNA oxidative damage in leukocytes correlates with the severity of HCV-related liver disease: validation in an open population study // J. Hepatol. 2001. V.34. P.587-592.

149. Carraway M.S., Ghio A.J., Carter J.D., Piantadosi .CA. Expression of heme oxygenase-1 in the lung in chronic hypoxia // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2000. V.278. P.806-812.

150. Carraway M.S., Ghio A.J., Taylor J.L., Piantadosi .CA. Induction of ferritin and heme oxygenase-1 by endotoxin in the lung // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 1998. V.275. P.583-592.

151. Ceran C., Sonmez K., Turkyllmaz Z., Demirogullarl В., Dursun A., Duzgun E., Basaklar A.C., Kale N. Effect of bilirubin in ischemia/reperfusion injury on rat small intestine // J. Pediatr. Surg. 2001. V.36. №12. P.1764-1767.

152. Chamuleau R.A., Aronson D.C., Frederiks W.M., Bosman D.K., Smit J.J., Maas M.A., Jansen P.L. Liver regeneration after partial hepatectomy in rats with defective bilirubin conjugation or biliary excretion // Dig. Dis. Sci. 1991. V.36. №4. P.510-512.

153. Chandra J., Samali A., Orrenius S. Triggering and modulation of apop-tosis by oxidative stress // Free Radic. Biol. Med. 2000. V.29. №3/4. P.323-333.

154. Chatterjee M., Wu S. Involvement of Fas receptor and not tumor necrosis factor-alpha receptor in ultraviolet-induced activation of acid sphingomyelinase // Mol. Carcinog. 2001. V.30. №1. P.47-55.

155. Chen M.-F., Mo L.-R., Lin R.-C., Kuo J.-Y., Chang K.-K., Liao C., Lu F.-J. Increase of resting levels of superoxide anion in the whole blood of patients with decompensated liver cirrhosis // Free Radic. Biol. Med. 1997. V.23. №4. P.672-679.

156. Ching S., Ingram D., Hahnel R., Beilby J., Rossi E. Serum levels of micronutrients, antioxidants and total antioxidant status predict risk of breast cancer in a case control study // J. Nutr. 2002. V.132. №2. P.303-306.

157. Chisholm J.W., Dolphin P.J. Abnormal lipoproteins in the ANIT-treated rat: a transient and reversible animal model of intrahepatic cholestasis // J. Lipid Res. 1996. V.37. №5. P.1086-1098.

158. Chisolm G.M., Chai Y.-C. Regulation of cell growth by oxidized LDL // Free Radic. Biol. Med. 2000. V.28. №12. P.1697-1707.

159. Chiu S.M., Davis T.W., Meyers M., Ahmad N., Mukhtar H., Separovic D. Phthalocyanine 4-photodynamic therapy induces ceramide generation andapoptosis in acid sphingomyelinase-deficient mouse embryonic fibroblasts //1.t. J. Oncol. 2000. V.16. P.423-427.

160. Choi A.M., Sylvester S., Otterbein L., Holbrook N.J. Molecular responses to hyperoxia in vivo: relationship to increased tolerance in aged rats // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1995. V. 13. P.74-82.

161. Choi A.M.K. Heme oxygenase-1 protects the heart // Circ. Res. 2001. V.89. P.105-107.

162. Christensen Т., Kinn G., Granli Т., Amundsen I. Cells, bilirubin andlight: formation of bilirubin photoproducts and cellular damage at defined wavelengths // Acta Paediatr. 1994. V.83. №1. P.7-12.

163. Christensen Т., Roll E.B., Jaworska A., Kinn G. Bilirubin- and light induced cell death in a murine lymphoma cell line // J. Photochem. Photibiol. 2000. V.58. P.180-184.

164. Clark D.A., Leader G.A., Emmet L.F. Changes in lipids of rat liver after hydrazine injection // Biochem. Pharmacol. 1970. V.19. №5. P. 1743-1752.

165. Clark J.E., Foresti R., Sarathchandra P., Kaur H., Green C.J., Motterlini, R. Heme oxygenase-1-derived bilirubin ameliorates post-ischemic myocardial dysfunction // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2000. V.278. №2. P.643-651.

166. Clavien P.A., Yadav S., Sindram D., Bentley R.C. Protective effects ofischemic preconditioning for liver resection performed under inflow occlusion in humans // Ann. Surg. 2000. V.232. №2. P.155-162.

167. Clot P., Tabone M., Arico S., Dianzani M.U., Albano E. Biological markers of oxidative damage in patients with alcoholic cirrhosis: Evidence fora specific relationship with alcohol-intake // Alcohol. Alcohol. 1993. V.28.1. P.237.

168. Coburn R.F., Williams W.J., White P. Production of carbon monoxide from hemoglobin in vivo II J. Clin. Invest. 1967. V.46. P.346-356.

169. Conjeevaram H.S., Lok A.S.-F. Management of chronic hepatitis В // J. Hepatol. 2003. V.38. P.S90-S103.

170. Cornelussen R.N.M., Knowlton A.A. Heme-oxygenase-1: Versatile sentinel against injury // J. Mol. Cell. Cardiol. 2002. V.34. P.1297-1300.

171. Crocker I.P., Lawson N., Baker P.N., Fletcher J. The anti-inflammatory effects of circulating fatty acids in obstrictive jaundice: similarities wirh pregnancy-induced immunosuppression // Q. J. Med. 2001. V.94. P.475-484.

172. Cruz A., Padillo F.J., Tunez I., Munoz C., Granados J., Pera-Madrazo C., Montilla P. Melatonin protects against renal oxidative stress after obstructive jaundice in rats // Eur. J. Pharmacol. 2001. V.425. P. 135-139.

173. Csonka C., Varga E., Kovacs P., Ferdinandy P., Blasig I.E., Szilvassy Z., Tosaki A. Heme oxygenase and cardiac function in ischemic/reperfused rat hearts // Free Radic. Biol. Med. 1999. V.27. №1/2. P.l 19-126.

174. Cucuianu A. Cell darwinism, apoptosis, free radicals and haematological malignancies //Med. Hypotheses. 2001. V.56. №1. P.52-57.

175. Cui Y., Koenig J., Leier I., Buchholz U., Keppler D. Hepatic uptake ofbilirubin and its conjugates by the human organic anion transporter SLC21A6 // J. Biol. Chem. 2001. V.276. №13. P.9626-9630.

176. Cuypers H.T., Тег Haar E.M., Jansen P.L. Microsomal conjugation and oxidation of bilirubin // Biochim. Biophys. Acta. 1983. V.758. №2. P.135-143.

177. Dahm L.J., Bailie M.B., Roth R.A. Relationship between alpha-naphthylisothiocyanate-induced liver injury and elevations in hepatic nonprotein sulfhydryl content // Biochem. Pharmacol. 1991. V.42. №6. P.1189-1194.

178. Dahm L.J., Roth R.A. Protection against alpha-naphthylisothiocyanate-induced liver injury by decreased hepatic non-protein sulfhydryl content // Biochem. Pharmacol. 1991. V.42. №6. P.l 181-1188.

179. Dahm L.J., Schultze A.E., Roth R.A. An antibody of neutrophils attenuates a-naphthylisothiocyanate-induced liver injury // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1991. V.256. P.412-420.

180. Dailly E., Urien S., Barre J., Reinert P., Tillement J.P. Role of bilirubin in the regulation of the total peroxyl radical trapping antioxidant activity of plasma in sickle cell disease // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. V.248. №2. P.303-306.

181. De Flora S., Rosenkranz H.S., Klopman G. Structural basis of an-timutagenicity of chemicals towards 4-nitroquinoline 1 -oxide in Salmonella ty-phimurium //Mutagenesis. 1994. V.9. №1. P.39-45.

182. De Matteis F., Dawson S.J., Gibbs A.H. Two pathways of iron-catalyzed oxidation of bilirubin: effect of desferoxamine and trolox, and comparison with microsomal oxidation // Free Radic. Biol. Med. 1993. V.15. P.301-309.

183. De Matteis F., Trenti Т., Gibbs A.H., Greig J.B. Inducible bilirubin-degrading system in the microsomal fraction of rat liver // Mol. Pharmacol. 1989. V.35. №6. P.831-838.

184. Deigner H.P., Claus R., Bonaterra G.A., Gehrke C., Bibak N., Blaess M., Cantz M., Metz J., Kinscherf R. Ceramide induces aSMase expression: implications for oxLDL-induced apoptosis // FASEB J. 2001. V.15. P.807-814.

185. Dennery P.A., McDonagh A.F., Spitz D.R., Rodgers P.A., Stevenson D.K. Hyperbilirubinemia results in reduced oxidative injury in neonatal Gunn rats exposed to hyperoxia // Free Radic. Biol. Med. 1995. V.19. №4. P.395-404.

186. Dennery P.A., Spitz D.R., Yang G., Tatarov A., Lee C.S., Shegog M.L., Poss K.D. Oxygen toxicity and iron accumulation in the lungs of mice lacking heme oxygenase-2 // J. Clin. Invest. 1998. V.101. P. 1001-1011.

187. Dennery P.A., Visner G., Weng Y.H., Nguyen X., Lu F., Zander D., Yang G. Resistance to hyperoxia with heme oxygenase-1 disruption: role of iron // Free Radic. Biol. Med. 2003. V.34. №1. P.124-133.

188. Deramaudt B.M., Braunstein S., Remy P., Abraham N.G. Gene transfer of human heme oxygenase into coronary endothelial cells potentially promotes angiogenesis // J. Cell Biochem. 1998. V.68. №1. P. 121-127.

189. Deziel M.R., Girotti A.W. Photodynamic action of bilirubin on liposomes and erythrocyte membranes // J. Biol. Chem. 1980. V.255. №17. P.8192-8198.

190. Di Luzio N.R., Stege Т.Е., Hoffman E.O. Protective effects of diphenyl-p-phenylendiamine on hydrazine induced lipid peroxidation and hepatic injury // Exp. Mol. Pathol. 1973. V.19. №3. P.284-292.

191. Di Mascio P., Devasagayam T.P., Kaiser S., Sies H. Carotenoids, tocopherols and thiols as biological singlet molecular oxygen quenchers // Biochem. Soc. Trans. 1990. V.18. №6. P.1054-1056.

192. Segura J.M., Santamaria L., Trilla C., Escartin P. Identification of a liver growth factor as an albumin-bilirubin complex // Biochem. J. 1987. V.243. №2. P.443-448.

193. Dong Z., Lavrovsky Y., Venkatachalam M.A., Roy A.K. Heme oxy-genase-1 in tissue pathology: the Yin and Yang II Am. J. Pathol. 2000. V.156. №5. P.1485-1488.

194. Dore S. Decreased activity of the antioxidant heme oxygenase enzyme: implications in ischemia and in Alzheimer's disease // Free Radic. Biol. Med. 2002. V.32. №12. P.1276-1282.

195. Dore S., Goto S., Sampei K., Blackshaw S., Hester L.D., Ingi Т., Sawa A., Traystman R.J., Koehler R.C., Snyder S.H. Heme oxygenase-2 acts to prevent neuronal death in brain cultures and following transient cerebral ischemia

196. Neurosci. 2000. V.99. №4. P.587-592.

197. Dore S., Takahashi M., Ferris C.D., Hester L.D., Guastella D., Snyder S.H. Bilirubin, formed by activation of heme oxygenase-2, protects neurons against oxidative stress injury // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1999. V.96. №5. P.2445-2450.

198. Eder M.I., Miquel J.F., Jongst D., Paumgartner G., von Ritter C. Reactive oxygen metabolites promote cholesterol crystal formation in model bile: role of lipid peroxidation // Free Radic. Biol. Med. 1996. V.20. №.5. P.743-749.

199. Eggens I., Backman L., Jakobsson A., Valtersson C. The lipid composition of highly differentiated human hepatomas, with special reference to fattyш acids // Br. J. Exp. Pathol. 1988. V.69. №5. P.211-214.

200. Eguchi S., Lilja H., Hewitt W.R., Middleton Y., Demetriou A.A., Rozga J. Loss and recovery of liver regeneration in rats with fulminant hepatic failure //J. Surg. Res. 1997. V.72.P.112-122.

201. Elbirt K.K., Whitmarsh A.J., Davis R.J., Bonkovsky HL. Mechanism of sodium arsenite-mediated induction of heme oxygenase-1 in hepatoma cells. Role of mitogen-activated protein kinases // J. Biol. Chem. 1998. V.273. P.8922-8931.

202. Eriksen E.F., Danielsen H., Brodersen R. Bilirubin-liposome interaction. Binding of bilirubin dianion, protonization, and aggregation of bilirubin acid // J. Biol. Chem. 1981. V.256. №9. P.4269-4274.

203. Ernster L., Dallner G. Biochemical, physiological, and medical aspects of ubiquinone function // Biochim. Biophys. Acta. 1995. V.l 271. P. 195-204.

204. Ernster L., Herlin, L., Zetterstroem R. Experimental studies on the pathogenesis of kernicterus // Pediatrics. 1957. V.20. P.647-652.

205. Essig D.A., Borger D.R. Induction of heme oxygenase-1 (HSP32) mRNA in skeletal muscle following contractions // Am. J. Physiol. 1997. V.272. P.59-67.

206. Ewing J.F., Haber S.N., Maines M.D. Normal and heat-induced patterns of expression of heme oxygenase-1 (HSP32) in rat brain: hyperthermia causesrapid induction of mRNA and protein I I J. Neurochem. 1992. V.58. №3. P.l 140-1149.

207. Ewing J.F., Maines M.D. Glutathione depletion induces heme oxygenase-1 (HSP32) mRNA and protein in rat brain // J. Neurochem. 1993. V.60. P.1512-1519.

208. Ewing J.F., Weber C.M., Maines M.D. Biliverdin reductase is heat resistant and coexpressed with constitutive and heat shock forms of heme oxygenase in brain//J. Neurochem. 1993. V.61. №3. P. 1015-1023.

209. Eyssen-Hernandez R., Ladoux A., Frelin C. Differential regulation of cardiac heme oxygenase-1 and vascular endothelial growth factor mRNA expressions by hemin, heavy metals, heat shock and anoxia // FEBS Lett. 1996. V.382. P.229-233.

210. Fan X., Zhang Z. Increased tumour necrosis factor alpha production by neutrophils in patients with hepatitis В // J. Clin. Pathol. 1994. V.47. №7. P.616-618.

211. Feher J., Lengyel G., Blazovics A. Oxidative stress in the liver and biliary tract diseases // Scand. J. Gastroenterol. 1998. V.228. Suppl. P.38-46.

212. Fernandez M., Lambrecht R.W., Bonkovsky H.L. Increased heme oxygenase activity in splanchnic organs from portal hypertensive rats: role in modulating mesenteric vascular reactivity // J. Hepatol. 2001. V.34. P.812-817

213. Ferris C.D., Jaffrey S.R., Sawa A., Takahashi M., Brady S.D., Barrow R.K. Haem oxygenase-1 prevents cell death by regulating cellular iron // Nat. Cell. Biol. 1999. V.l. P.152-157.

214. Ferro D., Basili S., Pratico D., Iuliano L., FitzGerald G.A., Violi F. Vitamin E reduces monocyte tissue factor expression in cirrhotic patients // Blood. 1999. V.93. №9. P.2945-2950.

215. Flokemeier V. Choleststische Lebererkrankungen // 2001. Freiburg: Dr. Falk Pharma, 13 OS.

216. Fog J., Jellum E. Structure of bilirubin // Nature. 1963. V.198. P.4875-4876.

217. Fondevila C., Busuttil R.W., Kupiec-Weglinski J.W. Hepatic ische-mia/reperfusion injury a fresh look // Exp. Mol. Pathol. 2003. V.74. №2. P.86-93.

218. Foresti R., Goatly H., Green C.J., Motterlini R. Role of heme oxygenase-1 in hypoxia-reoxygenation: requirement of substrate heme to promote cardio-protection // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2001. V.281. №5. P. 19761984.

219. Foresti R., Sarathchandra P., Clark J.E., Green C.J., Motterlini R. Per-oxynitrite induces haem oxygenase-1 in vascular endothelial cells: a link to apoptosis // Biochem. J. 1999. V.339. 729-736.

220. Fox E.S., Kim J.C., Tracy T.F. NF-kB activation and modulation in hepatic macrophages during cholestatic injury // J. Surg. Res. 1997. V.72. P. 129134.

221. Frei В., Stocker R., Ames B.N. Antioxidant defenses and lipid peroxidation in human blood plasma 11 Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1988. V.85. №24. P.9748-9752.

222. Galbraith R. Heme oxygenase: who needs it? // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1999. V.222. №3. P.299-305.

223. Gallenkamp H., Richter E. Influence of alpha-naphthylisothiocyanate (ANIT) on microsomal cytochrome P-450, protein and phospholipid content in rat liver // Biochem. Pharmacol. 1974. V.23. №17. P.2431-2435.

224. Gardinali M., Conciato L., Cafaro C., Crosignani A., Battezzati P.M., Agostoni A., Podda M. Complement system is not activated in primary biliary cirrhosis // Clin. Immunol. Immunopathol. 1998. V. 87. №3. P. 297-303.

225. Gatt S. Magnesium-dependent sphingomyelinase // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1975. V.68. P.235-241.

226. Geilen C.C., Wieder Т., Orfanos C.E. Ceramide signalling: regulatory role in cell proliferation, differentiation and apoptosis in human epidermis // Arch. Dermatol. Res. 1997. V.289. P.559-566.

227. Gemsa D., Woo C.H., Fudenberg H.H., Schmid R. Stimulation of heme oxygenase in macrophages and liver by endotoxin // J. Clin. Invest. 1974. V.53. №2. P.647-651.

228. Girotti A.W. Lipid hydroperoxide generation, turnover, and effector action in biological systems // J. Lipid Res. 1998. V.39. 1529-1542.

229. Goldbaum O., Richter-Landsberg C. Stress proteins in oligodendrocytes: differential effects of heat shock and oxidative stress // J. Neurochem. 2001. V.78. №6. P. 1233-1242.

230. Goldfarb S., Singer E.J., Popper H Experimental cholestasis due to a-napthylisothiocyanate (ANIT) // Am. J. Pathol. 1962. V.40. P.685-695.

231. Goldie H.E., Hiatt M. The protective role of bilirubin in oxygen-radical diseases of the preterm infant // J. Perinatol. 1994. V.14. №4. P.296-300.

232. Gollan J.L., Hole D.R., Billing B.H. The role of dietary lipid in the regulation of unconjugated hyperbilirubinaemia in Gunn rats // Clin. Sci. 1979. V.57. №4. P.327-337.

233. Goni F.M., Alonso A. Sphingomyelinases: enzymology and membrane activity // FEBS Lett. 2002. V.531. P.38-46.

234. Gonzalez J., Perez-Barriocanal F., Esteller A. Inhibition of biliary phospholipid secretion by bilirubin in partially hepatectomized rats // Exp. Pathol. 1987. V.32. №2. P.81-87.

235. Gonzalez-Correa J.A., de la Cruz J.P., Gordillo J., Urena I., Redondo L., Sanchez de la Cuesta F. Effects of silymarin MZ-80 on hepatic oxidative stress in rats with biliary obstruction // Pharmacol. 2002. V.64. №1. P. 18-27.

236. Gonzalez-Peralta R.P., Galasso G.J., Poynard T. , Schalm S., Thomas H.C., Wright T.L. Summary of the First International Symposium on Viral Hepatitis // Antivir. Res. 1999. V.42. P.77-96.

237. Gopinathan V., Miller N.J., Milner A.D., Rice-Evans C.A. Bilirubin and ascorbate antioxidant activity in neonatal plasma // FEBS Lett. 1994. V.349. №2. P. 197-200.

238. Granato A., Gores G., Vilei M.T., Tolando R., Ferraresso C., Muraca M. Bilirubin inhibits bile acid induced apoptosis in rat hepatocytes // Gut. 2003. V.25. №52. P.1477-1489.

239. Grant D.J., Bell D.A. Bilirubin UDP-glucuronosyltransferase 1A1 gene polymorphisms: susceptibility to oxidative damage and cancer? // Mol. Car-cinog. 2000. V.29. №4. P. 198-204.

240. Gray C.H., Kulczycka A., Nicholson D.C. The photodecomposition of bilirubin and other bile pigments // J. Chem. Soc. 1972. V.l. P.288-294.

241. Gray C.K., Kulczyka A., Nicholson D.C. The chemistry of the bile pigments // J. Chem. Soc. 1961. V.2. P.2264-2285.

242. Gregory W.L., Game F.L., Farrer M., Idle J.R., Laker M.F., James O.F. Reduced serum lipoprotein(a) levels in patients with primary biliary cirrhosis // Atherosclerosis. 1994. V.105. №1. P.43-50.

243. Grether-Beck S., Bonizzi G., Schmitt-Brenden H., Felsner I., Timmer A., Sies H., Johnson J.P., Piette J., Krutmann J. Nonenzymatic triggering of the ceramide signalling cascade by solar UVA radiation // EMBO J. 2000. V.19. P.5793-5800.

244. Grojean S., Koziel V., Vert P., Daval J.L. Bilirubin induces apoptosis viaactivation of NMDA receptors in developing rat brain neurons // Exp. Neurol. 2000. V.166. P.334-341.

245. Gut A., Shiel N., Kay P.M., Segal I., Braganza J.M. Heightened free radical activity in blacks with chronic pancreatitis at Johannesburg, South Africa//Clin. Chim. Acta. 1994. V.230. №2. P. 189-199.

246. Guteridge J.M.C., Stocks J. Caeruloplasmin: Physiological and pathological perspectives // Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. 1981. V.17. P.257-329.

247. Guyan P.M., Uden S., Braganza J.M. Heightened free radical activity in pancreatitis // Free Radic. Biol. Med. 1990. V.8. №4. P.347-354.

248. Haga Y., Tempero M.A., Kay D., Zetterman R.K. Intracellular accumulation of unconjugated bilirubin inhibits phytohemagglutin-induced proliferate tion and interleukin-2 production of human lymphocytes // Dig. Dis. Sci. 1996.1. V.41. №7. P.1468-1474.

249. Haga Y., Tempero M.A., Zetterman R.K. Unconjugated bilirubin inhibits in vitro cytotoxic T lymphocyte activity of human lymphocytes // Biochim. Biophys. Acta. 1996. V.1316. №1. P.65-70.

250. Haga Y., Tempero M.A., Zetterman R.K. Unconjugated bilirubin inhibits in vitro major histocompatibility complex-unrestricted cytotoxicity of human lymphocytes // Biochim. Biophys. Acta. 1997. V. 1317. №1. P.29-34.

251. Hahm J.S., Ostrow J.D., Mukerjee P., Celic L. Ionozation and self-association of unconjugated bilirubin, determined by rapid solvent partition from chloroform, with further stidies of bilirubin solubility // J. Lipid Res. 1992. V.33. №8. P.l 123-1127.

252. Haimovitz-Friedman A., Kan C.C., Ehleiter D., Persaud R.S., McLoughlin M., Fuks Z., Kolesnick R.N. Ionizing radiation acts on cellular membranesto generate ceramide and initiate apoptosis 11 J. Exp. Med. 1994. V.180. P.525-535.

253. Halliwell B. Antioxidant characterization. Methodology and mechanism // Biochem. Pharmacol. 1995. V.49. №10. P.1341-1348.

254. Halliwell B. Antioxidant defence mechanisms: from the beginning to the end (of the beginning) // Free Radic. Res. 1999. V.31. P.261-272.

255. Hammermann C., Goldstein R., Kaplan M., Eran M., Goldschmidt D., Eidelman A.I. Bilirubin in the premature: toxic waste or natural defense? // Clin. Chem. 1998. V.44. №12. P.2551-2553.

256. Hangaishi M., Ishizaka N., Aizawa Т., Kurihara Y., Taguchi J., Nagai R., Kimura S., Ohno M. Induction of heme oxygenase-1 can act protectively against cardiac ischemia/reperfusion in vivo II Biochem. Biophys. Res. Com-mun. 2000. V.279. P.582-588.

257. Hannun Y.A. Functions of ceramide in coordinating cellular responses to stress // Science. 1996. V.274. P.1855-1859.

258. Hannun Y.A., Luberto C., Argraves K.M. Enzymes of sphingolipid metabolism: from modular to integrative signaling // Biochemistry. 2001. V.40. P.4893-4903.

259. Hansen T.W., Allen J.W. Oxidation of bilirubin by brain mitochondrial membranes dependence on cell type and postnatal age // Biochem. Mol. Med. 1997. V.60. P.155-160.

260. Hansen T.W.R. Bilirubin oxidation in brain // Mol. Genet. Metab. 2001.1. V.71.P.411-417.

261. Hansen T.W.R., Tommarello S., Allen J.W. Subcellular localization of bilirubin in rat brain after in vivo i.v. administration of 3H.bilirubin // Pediatr. Res. 2001. V.49. №2. P.203-207.

262. Нага E., Takahashi K., Takeda K., Nakayama M., Yoshizawa M., Fujita H. Induction of heme oxygenase-1 as a response in sensing the signals evoked by distinct nitric oxide donors // Biochem. Pharmacol. 1999. V.58. P.227-236.

263. Harada-Shiba M., Kinoshita M., Kamido H., Shimokado K. Oxidized low-density lipoprotein induces apoptosis in culture human umbilical vein endothelial cells by common and unique mechanisms // J. Biol. Chem. 1998. V.273. P.9681-9687.

264. Hasler J.A., Estabrook R., MurrayM ., Pikuleva I., Waterman M., Cap-devila J., Holla V., Helvig C., Falck J.R., Farrell G., Kaminsky L.S., Spivack S.D., Boitier E., Beaune P. Human cytochromes P450 // Mol. Aspects Med. 1999. V.20. №1-2. P.l-137.

265. Hayward D., Schiff D., Fedunec S., Chan G., Davis P.J., Poznansky M.J. Bilirubin diffusion through lipid membranes // Biochim. Biophys. Acta. 1986. V.860. №1. P.149-153.

266. Heine W., Tittelbach-Helmrich W. Preparation of standard, stable bilirubin solutions using dimethyl sulfoxide // Z. Med. Labortech. 1973. V.14. №6. P.332-337.

267. Hensley K., Robinson K.A., Gabbita S.P., Salsman S., Floyd R.A. Reactive oxygen species, cell signaling, and cell injury // Free Radic. Biol. Med. 2000. V.28. №10. P.1456-1462.

268. Hentze H., Gantner F., Kolb S.A., Wendel A. Depletion of hepatic glutathione prevents death receptor-dependent apoptotic and necrotic liver injury in mice // Am. J. Pathol. 2000. V.15. №6. P.2045-2056.

269. Hernandez O.M., Discher D.J., Bishopric N.H., Webster K.A. Rapid activation of neutral sphingomyelinase by hypoxiareoxygenation of cardiac myocytes // Circ. Res. 2000. V.86. P. 198-204.

270. Herrmann M., Lorenz H.M., Voll R., Woith W., Grunke M., Kalden J.R. A rapid and simple method for the isolation of apoptotic DNA fragments // Nucl. Acids Res. 1994. V.22. №24. P.5506-5507.

271. Higuchi H., Miyoshi H., Bronk S.F. Bid antisenese attenuates bile acid-n induced apoptosis and cholestatic liver injury // J. Pharmacol. Exp. Ther. 2001.1. V.299. P.866-873.

272. Hildt E., Hofschneider P. H., Urban S. Hepatitis В virus X protein: a multifunctional viral regulator// Sem. Virol. 1996. V.7. P.333-347.

273. Hill D.A., Roth R.A. Alpha-naphthylisothiocyanate causes neutrophils to release factors that are cytotoxic to hepatocytes // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1998. V.148. №1. P.169-175.

274. Hilleman M.R. Overview of the pathogenesis, prophylaxis and thera-peusis of viral hepatitis B, with focus on reduction to practical applications // Vaccine. 2001. V.19. P.1837-1848.

275. Hofmann A.F. Cholestatic liver disease: pathophysiology and therapeutic options // Liver. 2002. V.22. №2S. P. 14-19.

276. Hofmann A.F., Rods A. Physicochemical properties of bile acids and their relationship to biological properties: an overview of the problem // J. Lipid Res. 1984. V.12. P.1774-1778.

277. Hopkins P.N., Wu L.L., Hunt S.C., James B.C., Vincent G.M., Williams R.R. Higher serum bilirubin is associated with decreased risk for early familial coronary artery disease // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 1996. V.16. №2. P.250-255.

278. Horikawa S., Yoneya R., Nagashima Y., Hagiwara K., Ozasa H. Prior induction of heme oxygenase-1 with glutathione depletory ameliorates the renal ischemia and reperfusion injury in the rat // FEBS Lett. 2002. V.510. P.221-224.

279. Hostetler K.J., Yazaki P.J. The subcellular localization of neutral sphingomyelinase in rat brain // J. Lipid Res. 1979. V.20. P.456-463.

280. Hostetler K.Y., Zenner B.D, Morris H.P. Abnormal membrane phospholipid content in subcellular fractions from the Morris 7777 hepatoma // Biochim. Biophys. Acta. 1976. V.441. №2. P.231-238.

281. Hristov P., Tyurin V., Petrov L. Factors of Ehrlich ascites tumor resistance to oxidative stress // Acta Physiol. Pharmacol. Bulg. 1995. V.21. №3. P.49-55.

282. Hsieh Y.Z., Morris M.D. Resonance Raman spectroscopic study of bilirubin hydrogen bonding in solutions and in the albumin complex // J. Am. Chem. Soc. 1988. V.l 10. №1. P.62-67.

283. Hulea S.A., Smith T.L., Wasowicz E., Kummerow F.A. Bilirubin sentiz-itized photooxidation of human low density lipoprotein // Biochim. Biophys. Acta. 1996. V.1304. P. 197-209.

284. Hulea S.A., Wasowicz E., Kummerow F.A. Inhibition of metal-catalyzed oxidation of low density lipoprotein by free and albumin-bound bilirubin // Biochim. Biophys. Acta. 1995. V.1259. P.29-38.

285. Huma R., Owais M., Tayyab S. Bilirubin binding to normal and modified human erythrocyte membranes: Effect of phospholipases, neuraminidase, trypsin and CaCl2 // Mol. Cell Biochem. 2001. V.228. P. 15-23.

286. Hutchinson D.W., Johnson В., Knell A.J. Metal complexes of bilirubin in aprotic solvents // Biochem. J. 1973. V.133. P.399-400.

287. Huwiler A., Boddinghaus В., Pautz A., Dorsch S., Briner V.A., Brade V., Pfeilschifter J. Superoxide potently induces ceramide formation in glomerular endothelial cells // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. V.284. P.404-410.

288. Huwiler A., Kolter Т., Pfeilschifter J., Sandho K. Physiology and pathophysiology of sphingolipid metabolism and signaling // Biochim. Biophys. Acta. 2000. V.1485. P.63-99.

289. Huwiler A., Pfeilschifter J., van den Bosch H. Nitric oxide donors induce stress signaling via ceramide formation in rat renal mesangial cells // J. Biol. Chem. 1999. V.274. P.7190-7195.

290. Igimi H., Asakawa S., Tamura R., Yamamoto F., Shimura H. DMSO preparation as a direct solubilizer of calcium bilirubinate stones // Hepatogas-troenterol. 1994. V.41. №1. P.65-69.

291. Ishizaka N., Ishizaka Y., Takahashi E., Yamakado M., Hashimoto, H. High serum bilirubin level is inversely associated with the presence of carotid plaque // Stroke. 2001. V.32. P.581-583.

292. Isobe K., Onishi S. Kinetics of the photochemical interconversion among geometric photoisomers of bilirubin // Biochem. J. 1981. V. 193. P. 1029-1031.

293. Ito K., Ozasa H., Sanada K., Horikawa S. Doxorubicin preconditioning: a protection against rat hepatic ischemia-reperfusion injury // Hepatology. 2000. V.31. №2. P.416-419.

294. Iwai H., Nagaki M., Naito Т., Ishiki Y., Murakami N., Sugihara J., Muto Y., Moriwaki H. Removal of endotoxin and cytokines by plasma exchange inpatients with acute hepatic failure 11 Crit. Care Med. 1998. V.26. №5. P.873-876.

295. Iyanagi Т., Emi Y., Ikushiro S. Biochemical and molecular aspects of genetic disorders of bilirubin metabolism // Biochim. Biophys. Acta. 1998. V.1407. P.173-184.

296. Iyomasa S., Terasaki M., Kuriki H., Nimura Y., Shionoya S., Kojima K., Yoshida S. Decrease in regeneration capacity of rat liver after external biliary drainage // Eur. Surg. Res. 1992. V.24. №5. P.265-272.

297. Jacobsen J. Binding of bilirubin to human serum albumin determination of the dissociation constants // FEBS Lett. 1969. V.5. P.l 12-122.

298. Jaffrezou J.P., Maestre N., de Mas-Mansat V., Bezombes C., Levade Т., Laurent G. Positive feedback control of neutral sphingomyelinase activity by ceramide // FASEB J. 1998. V.12. P.999-1006.

299. Jain S.K., Pemberton P.W., Smith A., McMahon R.F.T., Burrows P.C., Aboutwerat A., Warnes T.W. Oxidative stress in chronic hepatitis C: not just a feature of late stage disease // J. Hepatol. 2002. V.34. P.445-459.

300. Jean P.A., Bailie M.B., Roth R.A. 1-naphthylisothiocyanate-induced elevation of biliary glutathione // Biochem. Pharmacol. 1995. V.49. №2. P.197-202.

301. Jiang C.G. Manganese-containing superoxide dismutase activity in human lung cancer tissue // Zhonghua Zhong Liu Za Zhi. 1990. V.12. №5. P.55-62.

302. Jiang Z., Liu Y., Savas L., Smith L., Bonkovsky H., Baker S., Banner B. Frequency and distribution of DNA fragmentation as a marker of cell death in chronic liver diseases // Virchows Arch. 1997. V.431. P. 189-194.

303. Jori G., Rossi E., Rubaltelli F.F. Phototherapy-induced covalent binding of bilirubin to serum albumin // Pediatr. Res. 1980. V.14. P. 1363-1366.

304. Joshi M., Billing B.H., Hallinan Т. Investigation of the role of reactive oxygen species in bilirubin metabolism in the Gunn rat // Biochim. Biophys. Acta. 1995. V.1243. №2. P.244-250.

305. Juan S.-H., Lee T.-S., Tseng K.-W., Liou J.-Y., Shyue S.-K., Wu K.K., Chau L.-Y. Adenovirus-mediated heme oxygenase-1 gene transfer inhibits the development of atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice // Circulat. 2001. V.104. P.1519-1525.

306. Kakimoto H., Imai Y., Kawata S., Inada M., Ito Т., Matsuzawa Y. Altered lipid composition and differential changes in activities of membrane-bound enzymes of erythrocytes in hepatic cirrhosis // Metabolism. 1995. V.44. №7. P.825-832.

307. Kamata H., Hirata H. Redox regulation of cellular signaling // Cell. Signal. 1999. V.l 1. №1. P.1-14.

308. Kamath P.S., Wiesner R.H., Malinchoc M., Kremers W., Therneau T.M., Kosberg C.L., D'Amico G., Dickson E.R., Kim W.R. A model to predict survival in patients with end-stage liver disease // Hepatology. 2001. V.33. P.464-470.

309. Kamisaka K., Listowsky I., Gatmaitan Z., Arias I.M., Interactions of bilirubin and other ligands with ligandin // Biochemistry. 1975. V.14. №10. P.2175-2180.

310. Капо K., Yoshiyasu K., Hashimoto S. Molecular recognition by saccharides. asymmetric complexation between bilirubin and nucleosides // Chem. Lett. 1990. V.59. P.21-24.

311. Kanzler S. Galle P.R. Apoptosis and the liver // Sem. Cane. Biol. 2000. V.10. P.173-184.

312. Kapitulnik J., Gonzalez F.J. Marked endogenous activation of the CYP1A1 and CYP1A2 genes in the congenitally jaundiced Gunn rat // Mol. Pharmacol. 1993. V.43. №5. P.722-725.

313. Kaplan M.M., Elta G.H., Furie В., Sadowski J.A., Russell R.M. Fat-soluble vitamin nutriture in primary biliary cirrhosis // Gastroenterol. 1988. V.95. №3. P.787-792.

314. Kapoor C.L. Metabolism of bilirubin: an overview // J. Int. Ind. Res. 1978. V.37. P.474-482.

315. Karten В., Beisiegel U., Gercken G., Kontush A. Mechanisms of lipid peroxidation in human blood plasma: a kinetic approach // Chem. Phys. Lipids. 1997. V.88.№2. P.83-96.

316. Katori M., Busuttil R.W., Kupiec-Weglinski J.W. Heme oxygenase-1 system in organ transplantation // Transplantation. 2002. V.74. №7. P.905-912.

317. Kaufmann H.P., Garloff H. Eine Untersuchung der antioxidativen Ac-tivitat von a-Tocopherol, Ubiquinonen und Gallenfarbstotfen in Modellsystem // Fette. Seifen. Anstrichmittel. 1961. V.63. №4. P.334-344.

318. Kaul R., Kaul H.K., Murti K.C.R. An alternative pathway for bilirubin catabolism // FEBS Lett. 1980. V.l 11. №1. P.240-242.

319. Kaur H., Hughes M.N., Green C.J, Naughton P., Foresti R., Motterlini R. Interaction of bilirubin and biliverdin with reactive nitrogen species // FEBS Lett. 2003. V.543. №1-3. P.l 13-119.

320. Kawamura K., Kobayashi Y., Kageyama F., Kawasaki Т., Nagasawa M., Toyokuni S., Uchida K., Nakamura H. Enhanced hepatic lipid peroxidation in patients with primary biliary cirrhosis // Am. J. Gastroenterol. 2000. V.95. №12. P.3596-3601.

321. Kawashima A., Oda Y., Yachie A., Koizumi S., Nakanishi I. Heme oxygenase-! deficiency: The first autopsy case // Hum. Pathol. 2002. V.33. №1. P.125-130.

322. Ke В., Shen X.D., Melinek J., Gao F., Ritter Т., Volk H.D., Busuttil R.W., Kupiec-Weglinski J.W. Heme oxygenase-1 gene therapy: A novel immunomodulatory approach in liver allograft recipients? // Transplant. Proc. 2001. V.33. P.581-582.

323. Kerr J.F., Wyllie A.H., Currie A.R. Apoptosis: a basic biological phenomenon. with wide-ranging implications in tissue kinetics // Br. J. Cancer. 1972. V.26. P.23957.

324. Keyse S.M. Tyrrell R.M. Both near ultraviolet radiation and the oxidizing agent hydrogen peroxide induce a 32-kDa stress protein in normal human skin fibroblasts //J. Biol. Chem. 1987. V.262. P.14821-14825.

325. Kiely M., Morrissey P.A., Cogan P.F., Kearney P.J. Low molecular weight plasma antioxidants and lipid peroxidation in maternal and cord blood // Eur. J. Clin. Nutr. 1999. V.53. №11. P.861-864.

326. King C.M., Barnett Y.A. Oxidative stress and human ageing // Biochem. Soc. Trans. 1995. V.23. №2. P.375.

327. King C.M., Bristow-Craig H.E., Gillespie E.S., Barnett Y.A. In vivo antioxidant status, DNA damage, mutation and DNA repair capacity in cultured lymphocytes from healthy 75- to 80-year-old humans // Mutat. Res. 1997. V.377. №1. P.137-147.

328. Kitamura Y., Ishida Y., Takata K., Mizutani H., Kakimura J., Inden M., Nakata J., Taniguchi Т., Tsukahara Т., Akaike A., Shimohama S. Hyperbilirubinemia protects against focal ischemia in rats // J. NeuroSci. Res. 2003. V.71. №4. P.544-550.

329. Knight J.A. The biochemistry of aging // Adv. Clin. Chem. 2000. V.35. P.1-62.

330. Kobayashi Y., Kariya K., Saigenji K., Nakamura K. Oxidative stress relief for cancer-bearing hosts by the protein-bound polysaccharide of Coriolus versicolor with SOD mimicking activity // Cancer Biother. 1994. V.9. №1. P.55-62.

331. Koga H., Sakisaka S., Ohishi M, Sata M, Tanikawa K. Nuclear DNA fragmentation and expression of Bcl-2 in primary biliary cirrhosis // Hepatol-ogy. 1997. V.25. №5. P.1077-1084.

332. Koizumi Т., Negishi M., Ichikawa A. Induction of heme oxygenase by delta 12-prostaglandin J2 in porcine aortic endothelial cells // Prostaglandins. 1992. V.43. P.121-131.

333. Kolesnick R. The therapeutic potential of modulating the cera-mide/sphingomyelin pathway // J. Clin. Invest. 2002. V.l 10. P.3-8.

334. Komatsu M., Takahashi Т., Abe Т., Takahashi I., Ida H., Takada G. Evidence for the association of ultraviolet-C and H202-induced apoptosis with acid sphingomyelinase activation // Biochim. Biophys. Acta. 2001. V.l533. P.47-54.

335. Kongo M., Ohta Y., Nishida K., Sasaki E., Harada N., Ishiguro I. An association between lipid peroxidation and alpha-naphthylisothiocyanate-induced liver injury in rats // Toxicol. Lett. 1999. V.l05. №2. P. 103-110.

336. Koruk M., Aksoy H., Akcay F., Onuk M.D. Antioxidant capacity and nitric oxide in patients with hepatic cirrhosis // Ann. Clin. Lab. Sci. 2002. V.32. №3. P.252-256.

337. Krahenbuhl S., Talos C., Lauterburg B.H., Reichen J. Reduced antioxi-dative capacity in liver mitochondria from bile duct ligated rats // Hepatology. 1995. V.22. №2. P.607-612.

338. Kranc K.R., Pyne G.J., Tao L., Claridge T.D.W., Harris D.A., Cadoux-Hudson T.A.D., Turnbull J.J., Schofield C.J., Clark J.F. Oxidative degradation of bilirubin produces vasoactive compounds // Eur. J. Biochem. 2000. V.267. P.7094-7101.

339. Kruse P., Anderson M.E., Loft S. Minor role of oxidative stress during intermediate phase of acute pancreatitis in rats // Free Radic. Biol. Med. 2001. V.30. №3. P.309-317.

340. Kubota M., Narita K., Nakagomi Т., Tamura A., Shimasaki H., Ueta N., Yoshida S. Sphingomyelin changes in rat cerebral cortex during focal ischemia //Neurol. Res. 1996. V.18. P.337-341.

341. Kurosawa H., Que F.G., Roberts L.R., Fesmier P.J., Gores G.J. Hepato-cytes in bile duct-ligated rat express Bcl-2 // Am. J. Physiol. 1997. V.272. P.1587-1593.

342. Kushida Т., Li Volti G., Quan S., Goodman A., Abraham N.G. Role of human heme oxygenase-1 in attenuating TNF-alpha-mediated inflammation injury in endothelial cells // J. Cell Biochem. 2002. V.87. №4. P.377-385.

343. Kushida Т., Quan S,. Yang L., Ikehara S., Kappas A., Abraham N.G. A significant role for the heme oxygenase-1 gene in endothelial cell cycle progression//Biochem. Biophys. Res. Commun. 2002. V.291. №1. P.68-75.

344. Kutty R.K., Kutty G., Rodriguez I.R., Chader G.J., Wiggert B. Chromosomal localization of the human heme oxygenase genes: heme oxygenase-1

345. НМОХ1) maps to chromosome 22ql2 and heme oxygenase-2 (HMOX2) maps to chromosome 16pl3 3 // Genomics. 1994. V.20. №3. P.513-516.

346. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 //Nature. 1970. V.227. №259. P.680-685.

347. Laer S., Apel M., Bernhardt J., Kapitulnik J., Kahl R. Interactions between bilirubin and reactive oxygen species in liver microsomes and in human neutrophil granulocytes // Redox Rep. 1997. V.3. P. 119-124.

348. Lamb R.G., Williams W.I. Effect of hydrazine exposure on hepatic tria-cylglycerol biosynthesis // Biochim. Biophys. Acta. 1979. V.574. №3. P.440-447.

349. Landen G.L., Park Y.T., Lightner, D.A. On the role of singlet oxygen in the self-sensitized photo-oxygenation of bilirubin and its pyrromethenone models //Tetrahedron. 1983. V.39. P. 1893-1908.

350. Lane N.J. Blood ties a family of molecules with an unsavoury reputation could aid victims of conditions as diverse as heart disease, malaria and cancer // Science. 1998. V.280. P.24-29.

351. Lau Y., Xie X., Lai M.M., Wu P.C. Apoptosis and viral hepatitis // Semin. Liver Dis. 1998. V.18. №2. P. 169-76.

352. Laughton M.J., Halliwel В., Evans P.J., Hoult J.R.S. Antioxidant and pro-oxidant actions of the plant phenolics quercetin, gossypol and myricetin // Biochem. Pharmacol. 1989. V.38. P.2859-2865.

353. Lautier D., Luscher P., Tyrrell R.M. Endogenous glutathione levels modulate both constitutive and UVA radiation/ hydrogen peroxide inducibleexpression of the human heme oxygenase gene // Carcinogenesis. 1992. V.13. P.227-232.

354. Lavin A., Sung C., Klibanov A.M., Langer R. Enzymatic removal of bilirubin from blood: a potential treatment for neonatal jaundice // Science. 1985. V.230. P.543-545.

355. Lee J., Matheson I.B.C., Wampler J.E., Etheridge R.D., Curry N.U. Inhibition of laser generated singlet oxygen reaction with bilirubin by superoxide dismutase // Fed. Proc. 1973. V.32. №3. P.661.

356. Lee K.S., Gartner L.M. Spectrophotometric characteristics of bilirubin // Pediatr. Res. 1976. V.10. №9. P.782-788.

357. Lee P.J., Alam J., Wiegand G.W., Choi A.M. Overexpression of heme oxygenase-1 in human pulmonary epithelial cells results in cell growth arrest and increased resistance to hyperoxia // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1996. V.93. P.10393-10398.

358. Lee S.M., Park M.J., Cho T.S., Clemens M.G. Hepatic injury and lipid peroxidation during ischemia and reperfusion // Shock. 2000. V.13. №4. P.279-84

359. Lee T.-S., Chau L.Y. Heme oxygenase-mediates the anti-inflammatory effect of interleukin-10 in mice // Nat. Med. 2002. V.8. №3. P.240-246.

360. Leist M., Gantner F., Bohlinger I., Germann P.G., Tiegs G., Wendel A. Murine hepatocyte apoptosis induced in vitro and in vivo by TNF-alpha requires transcriptional arrest 11 J. Immunol. 1994. V.153. №5. P. 1778-1788.

361. Lemonnier F., Cresteil D., Feneant M., Couturier M., Bernard O., Ala-gille D. Plasma lipid peroxides in cholestatic children // Acta Paediatr. Scand. 1987. V.76. №6. P.928-934.

362. Leo M.A., Ahmed S., Aleynik S.I., Siegel J.H., Kasmin F., Lieber C.S. Carotenoids and tocopherols in various hepatobiliary conditions // J. Hepatol. 1995. V.23. №5. P.550-556.

363. Leo M.A., Lieber C.S. Alcohol, vitamin A, and |3-carotene: adverse interactions, including hepatotoxicity and carcinogenicity // Am. J. Clin. Nutr.• 1999. V.69. P.1071-1085.

364. Leonard M., Noy N., Zakim D. The interactions of bilirubin with model and biological membranes // J. Biol. Chem. 1989. V.264. P.5648-5652.

365. Leonard T.B., Popp J.A,. Graichen M.E., Dent JG. alpha-Naphthylisothiocyanate induced alterations in hepatic drug metabolizing enzymes and liver morphology: implications concerning anticarcinogenesis // Carcinogenesis. 1981. V.2. №6. P.473-482.

366. Letteron P., Fromenty В., Terris В., Degott C., Pessayre D. Acute andchronic hepatic steatosis lead to in vivo lipid peroxidation in mice // J. Hepatol. 1996. V.24. P.200-208.

367. Levade Т., Andrieu-Abadie N., Segui В., Auge N., Chatelut M., Jaffre-zou J.-P., Salvayre R. Sphingomyelin-degrading pathways in human cells. Role in cell signaling // Chem. Phys. Lipids. 1999. V.102. P.167-178.

368. Levade Т., Jaffrezou J.P. Signalling sphingomyelinases: which, where, how and why? // Biochim. Biophys. Acta. 1999. V.1438. P. 1-17.

369. Levinson S.S. Relationship between bilirubin, apolipoprotein B, and coronary artery disease // Ann. Clin. Lab. Sci. 1997. V.27. P.185-192.

370. Li Volti G., Wang J., Traganos F., Kappas A., Abraham N.G. Differential effect of heme oxygenase-1 in endothelial and smooth muscle cell cycle progression //Biochem. Biophys. Res. Commun. 2002. V.296. P.1077-1082.

371. Lightner D.A., Cu A, Mc Donagh A.F., Palma L.A. On the autooxidation of bilirubin // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1976. V.69. №3. P.648-657.

372. Lightner D.A., Holmes D.L., McDonagh A.F. Dissociation constants of water insoluble carboxylic acids by 13C-NMR; pKas of mesobiliverdin XIII alpha and mesobilirubin XIII alpha // Experimentia. 1996. V.51. P.639-642.

373. Lightner D.A., Linnane W.P., Ahlfors C.E. Bilirubin photooxidation * products in the urine of jaundiced neonates receiving phototherapy // Pediatr.

374. Res. 1984. V.18. P.696-700.

375. Lightner D.A., Quistad G.B. Meyhylvinylmaleimide from bilirubin photooxidation // Science. 1972. V.175. №4019. P. 175.

376. Lin J.P., Cupples L.A., Wilson P.W., Heard-Costa N., O'Donnell C.J. Evidence for a gene influencing serum bilirubin on chromosome 2q telomere: a genomewide scan in the Framingham study // Am. J. Hum. Genet. 2003. V.72. №4. P.1029-1034.

377. Lindeman J.H., van Zoeren-Grobben D., Schrijver J. Speek A.J., Poorthuis В .J., Berger H.M. The total free radical trapping ability of cord blood plasma in preterm and term babies // Pediatr. Res. 1989. V.26. №1. P.20-24.

378. Lindsey C.C., Gomez-Diaz C., Villalba J.M., Pettus T.R.R. Synthesis of ф the F11334's from o-prenylated phenols: mM inhibitors of neutral sphingomyelinase (N-SMase) // Tetrahedron. 2002. V.58. P.4559-4565.

379. Liovet J.M., Beaugrand M. Hepatocellular carcinoma: present status and future prospects // J. Hepatol. 2003. V.38 Suppl. P.S136-S149.

380. Liu В., Andrieu-Abadie N., Levade Т., Zhang P., Obeid L. M., Hannun Y.A. Glutathione regulation of neutral sphingomyelinase in tumor necrosis fac-tor-a-induced cell death//J. Biol. Chem. 1998. V.273. P.l 1313-11320.

381. Liu В., Hannun Y.A. Inhibition of the neutral magnesium-dependent sphingomyelinase by glutathione // J. Biol. Chem. 1997. V.272. №26. P. 16281-16287.

382. Liu В., Obeid L.M., Hannun Y.A. Sphingomyelinases in cell regulation // Sem. Cell Develop. Biol. 1997. V.8. p311-322.

383. Liu D.X. A new hypothesis of pathogenetic mechanism of viral hepatitis В and С // Med. Hypotheses. 2001. V.56. №3. P.405-408.

384. Liu S.L,. Lin X., Shi D.Y., Cheng J., Wu C.Q., Zhang Y.D. Reactive oxygen species stimulated human hepatoma cell proliferation via cross-talk between PI3-K/PKB and JNK signaling pathways // Arch. Biochem. Biophys. 2002. V.406. №2. P. 173-182.

385. Liu X.M., Chapman G.B., Wang H., Durante W. Adenovirus-mediated heme oxygenase-1 gene expression stimulates apoptosis in vascular smooth muscle cells // Circulation. 2002. V.l05. №1. P.79-84.

386. Liu X.-T., Hu J. Relationship between bilirubin free radical an formation of pigment gallstone // World J. Gastroenterol. 2002. V.8. №3. P.413-417.

387. Ljubuncic P., Fuhrman В., Oiknine J., Aviram M., Bomzon A. Effect of deoxycholic acid and ursodeoxycholic acid on lipid peroxidation in cultured macrophages // Gut. 1996. V.39. P.475-478,

388. Ljubuncic P., Tanne Z., Bomzon A. Ursodeoxycholic acid suppresses extent of lipid peroxidation in diseased liver in experimental cholestatic liver disease // Dig. Dis. Sci. 2000. V.45. №10. P. 1921-1928.

389. Loguercio C., Federico A. Oxidative stress in viral and alcoholic hepatitis // Free Radic. Biol. Med. 2003. V.34. №1. P. 1-10.

390. London I.M., West K., Shemin D. On the origin of bile pigment in normal man // J. Biol. Chem. 1950. V.184. P.351-358.

391. Lopez-Lluch G., Barroso M.P., Martin S.F., Fernandez-Ayala D.J., Gomez-Diaz C., Villalba J.M., Navas P. Role of plasma membrane coenzyme Q on the regulation of apoptosis // Biofactors. 1999. V.9. №2-4. P.171-177.

392. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.J., Randall R.J. Protein measurements with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. 1951. V. 193. P.265-275.

393. Madhavan M., Wattigney W.A., Srinivasan S.R., Berenson G.S. Serum bilirubin distribution and its relation to cardiovascular risk in children and young adults//Atherosclerosis. 1997. V. 131. №1. P. 107-113.

394. Maeshima H., Sato M., Ishikawa K., Katagata Y., Yoshida T. Participation of altered upstream stimulatory factor in the induction of rat heme oxygenase-1 by cadmium // Nucleic Acids Res. 1996. V.24. P.2959-2965.

395. Maines M.D. The heme oxygenase system: a regulator of second messenger gases // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1997. V.37. P.517-554.

396. Maines M.D., Kappas A. Studies on the mechanism of induction of haem oxygenase by cobalt and other metal ions // Biochem. J. 1976. V.154. №1. P.125-131.

397. Maines M.D., Traskhel G.M., Kutty R.K. Characterization of two constitutive forms of rat microsomal heme oxygenase: only one molecular species of the enzyme is inducible // J. Biol. Chem. 1986. V.261. P.411-419.

398. Majumder S., Sarkar U. Sengupta D. Jaundice in new born and erythrocyte and plasma antioxidant defence system // Indian J. Exp. Biol. 1995. V.33. №4. P.303-305.

399. Makino N., Suematsu M., Sugiura Y., Morikawa H., Shiomi S., Goda N., Sano Т., Nimura Y., Sugimachi K., Ishimura Y. Altered expression of heme oxygenase-1 in the livers of patients with portal hypertensive diseases // Hepatology. 2001. V.33. P.32-42.

400. Malaguarnera L., Quan S., Pilastro M.R., Abraham N.G., Kappas A. Diminished heme oxygenase potentiates cell death: pyrrolidinedithiocarbamate mediates oxidative stress // Exp. Biol. Med. 2003. V.228. №5. P.459-465.

401. Mann F.C., Sheard C., Bollman J.L. The formation of bile pigment from hemoglobin // Am. J. Physiol. 1926. V.76. P.306-315.

402. Marini M., Frabetti F., Musiani D., Franceschi C. Oxygen radicals induce stress proteins and tolerance to oxidative stress in human lymphocytes // Int. J. Radiat. Biol. 1996. V.70. №3. P.337-350.

403. Marko H., Mueller N., Falk H. Interactions of bile pigments with small proteins // Monatsh. Chem. 1989. V.120. P. 163-168.

404. Martin N.H. Preparation and properties of serum and plasma proteins. XXI. Interacton with bilirubin // J. Am. Chem. Soc. 1949. V.71. №4. P.1230-1232.

405. Martin S.F., Navarro F., Forthoffer N., Navas P., Villalba J.M. Neutral magnesium-dependent sphingomyelinase from liver plasma membrane: purification and inhibition by ubiquinol // J. Bioenerg. Biomembr. 2001. V.33. №2. P.143-153.

406. Marton L.S., Wang X., Kowalczuk A., Zhang Z.-D., Windmeyer E., Macdonald R.L. Effects of hemoglobin on heme oxygenase gene expression and viability of cultured smooth muscle cells // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2000. V.279. P.2405-2413.

407. Masini E., Vannacci A., Marzocca C., Pierpaoli S., Giannini L,. Fantap-pie O., Mazzanti R., Mannaioni P.F. Heme oxygenase-1 and the ischemia-reperfusion injury in the rat heart // Exp. Biol. Med. 2003. V.228. №5. P.546-549.

408. Mathias S., Pena L.A., Kolesnick, R.N. Signal transduction of stress via ceramide //Biochem. J. 1998. V.335. P.465-480.

409. Matsuhashi Т., Liu X., Karbowski M., Wozniak M., Antosiewicz J., Wa-kabayashi T. Role of free radicals in the mechanism of the hydrazine-induced formation of megamitochondria // Free Radic. Biol. Med. 1997. V.23. №2. P.285-293.

410. Matsumoto M., Wakasugi H., Ibayashi H. Serum vitamin E, lipid peroxide and glutathione peroxidase in patients with chronic pancreatitis // Clin. Chim. Acta. 1981. V.110. №1. P.121-125.

411. Matz P., Turner C., Weinstein P.R., Massa S.M., Panter S.S., Sharp F.R. Heme-oxygenase-1 induction in glia throughout rat brain following experimental subarachnoid hemorrhage // Brain Res. 1996. V.713. №1-2. P.211-222.

412. Maurer B.J., Metelitsa L.S., Seeger R.C., Cabot M.C., Reynolds C.P. Increase of ceramide and induction of mixed apoptosis/necrosis by N-(4-hydroxyphenyl)- retinamide in neuroblastoma cell lines // J. Natl. Cancer Inst. 1999. V.91. P.1138-1146.

413. Mayer M. Association of serum bilirubin concentration with risk of coronary artery disease // Clin. Chem. 2000. V.46. №11. P. 1723-1727.

414. McCoubrey W.K., Huang, T.J., Maines M.D. Isolation and characterization of a cDNA from the rat brain that encodes hemoprotein heme oxygenase-3 // Eur. J. Biochem. 1997. V.247. P.725-732.

415. McDonagh A.F. Evidence for singlet oxygen quenching by biliverdin IX-a -dimethylester and its relevance to bilirubin photooxidation // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1972. V.48. №2. P.408-416.

416. McDonagh A.F. Is bilirubin good for you? // Clin. Perinatol. 1990. V.17. №2. P.359-369.

417. McDonagh A.F. The role of singlet oxygen in bilirubin photo-oxidation //Biochem. Biophys. Res. Commun. 1971. V.44. №6. P. 1306-1311.

418. Meerson F.Z., Kagan V.E., Kozlov Yu.P., Belkina L.M., Arkhipenko Yu.V. The role of lipid peroxidation in pathogenesis of ischemic damage and the antioxidant protection of the heart // Basic Res. Cardiol. 1982. V.77. №5. P.465-485.

419. Meister A., Anderson M. Glutathione-ascorbic acid antioxidant system in animals // Ann. Rev. Biochem. 1983. V.52. P.711-760.

420. Mendez-Sanchez N., Roldan-Valadez E., Flores M. A., Cardenas-Vazquez R., Uribe M. Zinc salts precipitate unconjugated bilirubin in vitro and inhibit enterohepatic cycling of bilirubin in hamsters // Eur. J. Clin. Invest. 2001. V.31. P.773-780.

421. Mietus-Snyder M., Friera A., Glass C.K., Pitas R.E. Regulation of scavenger receptor expression in smooth muscle cells by protein kinase C: a role for oxidative stress // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 1997. V.17. P.969-978.

422. Minetti M., Mallozzi C., Di Stasi A.M., Pietraforte D. Bilirubin is an effective antioxidant of peroxynitrite-mediated protein oxidation in human blood plasma // Arch. Biochem. Biophys. 1998. V.352. №2. P. 165-174.

423. Mireles L.C., Lum M.A., Dennery P.A. Antioxidant and cytotoxic effects of bilirubin on neonatal erythrocytes // Pediatr. Res. 1999. V.45. P.355-362.

424. Mita E., Hayashi N. Apoptosis in human diseases: role of Fas system in liver cell injury by viral hepatitis // Rinsho Byori. 1997. V.45. №5. P.477-482.

425. Moreau R. Heme oxygenase: protective enzyme or portal hypertensive molecule? // J. Hepatol. 2001. V.34. P.936-939.

426. Morimoto K., Ohta K., Yachie A., Yang Y., Shimizu M., Goto C., Toma Т., Kasahara Y., Yokoyama H., Miyata T. Cytoprotective role of heme oxygenase (HO)-l in human kidney with various renal diseases // Kidney Int. 2001. V.60. P.1858-1866.

427. Morse D., Choi A.M.K. Heme oxygenase-1 the Emerging moleculehas arrived // J. Respir. Cell Mol. Biol. 2002. V.27. №1. P.8-16.

428. Motterlini R., Foresti R., Bassi R., Calabrese V., Clark J.E., Green C.J. Endothelial heme oxygenase-1 induction by hypoxia. Modulation by inducible nitric-oxide synthase and s-nitrosothiols // J. Biol. Chem. 2000. V.275. P.13613-13620.

429. Muller G., Rahfeld В., Jannasch M. Malondialdehyde concentration in blood plasma of patients with liver diseases // Z. Gesamte Inn. Med. 1992. V.47. №6. P.263-265.

430. Mullon C.J.-P., Langer R. Determination of conjugated and total bilirubin in serum of neonates, with use of bilirubin oxidase // Clin. Chem. 1987. V.33. P.1822-1825.

431. Murakami S. The role of hepatitis В virus (HBV) in the development of hepatocellular carcinoma // J. Gastroenterol. 2001. V.36. P.651-660.

432. Murawaki Y., Nishimura Y., Ikuta Y., Idobe Y., Kitamura Y., Kawasaki H. Plasma transforming growth factor-beta 1 concentrations in patients with chronic viral hepatitis // J. Gastroenterol. Hepatol. 1998. V.13. P.680-684.

433. Muriel P., Suarez O.R. Role of lipid peroxidation in biliary obstruction in the rat// J. Appl. Toxicol. 1994. V.14. №6. P.423-426.

434. Murti C.K.R. A model for the study of endogenous toxic chemical // Proc. Ind. Natl. Acad. Sci. 1982. V.B48. №3. P.163-175.

435. Mustafa M.G., Cowger M.L., King Т.Е. Effects of bilirubin on mitochondrial reactions // J. Biol. Chem. 1969. V.244. P.6403-6414.

436. Muto Y., Nouri-Aria K.T., Meager A., Alexander G.J., Eddleston A.L., Williams R. Enhanced tumour necrosis factor and interleukin-1 in fulminant hepatic failure // Lancet. 1998. V.8602. P.72-74.

437. Nagaoka S., Cowger M.L. Interaction of bilirubin with lipids studied by fluorescence quenching method // J. Biol. Chem. 1978. V.253. №6. P.2005-2011.

438. Nakagami Т., Toyomura K., Kinoshita Т., Morisawa S. A beneficial role of bile pigments as an endogenous tissue protector: anti-complement effects of biliverdin and conjugated bilirubin // Biochim. Biophys. Acta. 1993. V.l 158. №2. P. 189-193.

439. Nakamoto Y., Kaneko S., Kobayashi K. Monocyte-dependent cell death of T lymphocyte subsets in chronic hepatitis С // Immunol. Lett. 2001. V.78. P.169-174.

440. Nath K.A., Balla G., Vercellott G.M., Balla J., Jacob H.S., Levitt, M.D. Rosenberg M.E. Induction of heme oxygenase is a rapid, protective response in rhabdomyolysis in the rat // J. Clin. Invest. 1992. V.90. P.267-270.

441. Neuzil J., Stocker R. Bilirubin attenuates radical-mediated damage to serum albumin //FEBS Lett. 1993. V.331. №3. P.281-284.

442. Neuzil J., Stocker R. Free and albumin-bound bilirubin are efficient co-antioxidants for alpha-tocopherol, inhibiting plasma and low density lipoprotein lipid peroxidation // J. Biol. Chem. 1994. V.269. №24. P.16712-16719.

443. Noir B.A., Boveris A., Garaza Pereira A.M., Stoppani A.O. Bilirubin: a multi-site inhibitor of mitochondrial respiration // FEBS Lett. 1972. V.27. P.270-274.

444. Norman J.G. New approaches to acute pancreatitis: Role of inflammatory mediators // Digestion. 1999. V.60. №S1. P.57.

445. Novotny L., Vitek L. Inverse relationship between serum bilirubin and atherosclerosis in men: a meta-analysis of published studies // Exp. Biol. Med. 2003. V.228. №5. P.568-571.

446. Oguro Т., Hayashi M., Numazawa S., Asakawa K., Yoshida T. Heme oxygenase-1 gene expression by a glutathione depletor, phorone, mediated through AP-1 activation in rats // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. V.221. №2. P.259-265.

447. Oh G.S., Рае H.O., Moon M.K., Choi B.M., Yun Y.G., Rim J.S., Chung H.T. Pentoxifylline protects L929 fibroblasts from TNF-alpha toxicity via the induction of heme oxygenase-1 // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003. V.302. №1. P.109-113.

448. Ohrui Т., Yasuda H., Yamaya M., Matsui Т., Sasaki H. Transient relief of asthma symptoms during jaundice: a possible beneficial role of bilirubin // Tohoku J. Exp. Med. 2003. V.199. №3. P.193-196.

449. Ohta K., Yachie A., Fujimoto K., Kaneda H., Wada Т., Toma Т., Seno A., Kasahara Y., Yokoyama H., Seki H., Koizumi S. Tubular injury as a cardinal pathologic feature in human heme oxygenase-1 deficiency // Am. J. Kidney Dis. 2000. V.35. P.863-870.

450. Ohta Y., Kongo M., Kishikawa T. Preventive effect of melatonin on the progression of alpha-naphthylisothiocyanate-induced acute liver injury in rats // J. Pineal Res. 2003. V.34. №3. P.185-193.

451. Ohyama К., Yuan В., Bessho Т., Yamakawa Т. Progressive apoptosis in chorion laeve trophoblast cells of human fetal membrane tissues during in vitro incubation is suppressed by antioxidative reagents // Eur. J. Biochem. 2001. V.68. P.6182-6189.

452. O'Kane M.J., Lynch P.L., Callender M.E., Trimble E.R. Abnormalities of serum apo Al containing lipoprotein particles in patients with primary biliary cirrhosis // Atherosclerosis. 1997. V.131. №2. P.203-210.

453. Olinescu R., Alexandrescu R., Militaru M. The significance of the peroxides increase in the plasma of the patients with liver failure // Med. Interne. 1990. V.28. №4. P.323-328.

454. Onishi S., Itoh S., Isobe K. Wavelength-dependence of the relative rate constants for the main geometric and structural photoisomerization of bilirubin IXa bound to human serum albumin // Biochem. J. 1986. V.236. P.23-29.

455. Orellana M., Rodrigo R., Thielemann L., Guajardo V. Bile duct ligation and oxidative stress in the rat: effects in liver and kidney // Сотр. Biochem. Physiol. 2000. V.126. №2. P.105-111.

456. Oren D.A., Desan P.H., Boutros N., Anand A., Charney D.S. Effects of light on low nocturnal bilirubin in winter depression: a preliminary report // Biol. Psychiatry. 2002. V.51. №5. P.422-425.

457. Oren D.A., Terman M. Tweaking the human circadian clock with light // Science. 1998. V.279. №5349. P.333-334.

458. Orsler D.J., Ahmed-Choudhury J., Chipman J.K., Hammond Т., Coleman R. ANIT-induced disruption of biliary function in rat hepatocyte couplets // Toxicol. Sci. 1999. V.47. №2. P.203-210.

459. Ossola J.O., Groppa M.D., Tomaro M.L. Relationship between oxidative stress and heme oxygenase induction by copper sulfate // Arch. Biochem. Biophys. 1997. V.337. №2. P.332-337.

460. Ossola J.O., Kristoff G., Tomaro M.L. Heme oxygenase induction by menadione bisulfite adduct-generated oxidative stress in rat liver // Сотр. Biochem. Physiol. 2000. V.127. №1. P.91-99.

461. Ossola J.O., Tomaro M.L. Heme oxygenase induction by cadmium chloride: evidence for oxidative stress involvement // Toxicol. 1995. V.104. №1-3. P.141-147.

462. Ossola J.O., Tomaro M.L. Heme oxygenase induction by UVA radiation: a response to oxidative stress in rat liver // Int. J. Biochem. Cell Biol. 1998. V.30. P.285-292.

463. Ostrow J.D. Therapeutic amelioration of jaundice // Hepatology. 1988. V.8. P.683-689.

464. Ostrow J.D., Celic L. Bilirubin chemistry, ionozation and solubilisation by bile salts // Hepatology. 1984. V.4. Suppl.№5. P.S38-S45.

465. Otani K., Shimizu S., Chijiiwa K., Yamaguchi K., Kuroki S., Tanaka M. Increased urinary excretion of bilirubin oxidative metabolites in septic patients: a new marker for oxidative stress in vivo II J. Surg. Res. 2001. V.96. P.44-49.

466. Otterbein L.E., Choi A.M.K. Heme oxygenase: colors of defense against cellular stress // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2000. V.279. P. 10291037.

467. Oude Elferink R.P., Ottenhoff R., Radominska A., Hofmann A.F., Kui-pers F., Jansen P.L. Inhibition of glutathione-conjugate secretion from isolated hepatocytes by dipolar bile acids and other organic anions // Biochem. J. 1991. V.274.№1.P.281-286.

468. Owuor E.D., Kong A.-N.T. Antioxidants and oxidants regulated signal transduction pathways // Biochem. Pharmacol. 2002. V.64. P.765-770.

469. Pandey M., Sharma L.B., Shukla V.K. Cytochrome P-450 expression and lipid peroxidation in gallbladder cancer // J. Surg. Oncol. 2003. V.82. №3. P.180-183.

470. Papadakis J.A., Ganotakis E.S., Vrentzos G., Emmanouel D., Mikhailidis D.P. Serum bilirubin and albumin levels are markers of the extent of atherosclerosis in dyslipidaemic patients // Thes Xllth Intern. Symp. Atherosclerosis. 2000. Stockholm. P.246.

471. Papakyriakou P., Tzardi M., Valatas V., Kanavaros P., Karydi E., Notas G., Xidakis C., Kouroumalis E. Apoptosis and apoptosis related proteins in chronic viral liver disease // Apoptosis. 2002. V.7. P. 133-141.

472. Par A., Mezes M., Nemeth P., Javor T. Effects of cianidanol on the blood lipid peroxide status in patients with chronic hepatitis // Int. J. Clin. Pharmacol. Res. 1985. V.5. №6. P.389-397.

473. Paradis K., Le O.N., Russo R. St-Cyr M., Fournier H., Bu D. Characterisation and response to interleukin 1 and tumour necrosis factor of immortalised murine biliary epithelial cells // Gastroenterol. 1995. V.l09. P. 1308-1315.

474. Paradis V., Kollinger M., Fabre M., Holstege A., Poynard Т., Bedossa P. In situ detection of lipid peroxidation by-products in chronic liver diseases // Hepatology. 1997. V.26. №1. P.135-142.

475. Parikh-Patel A., Gold E., Mackay I.R., Gershwin M.E. The geoepidemi-ology of primary biliary cirrhosis: contrasts and comparisons with the spectrum of autoimmune diseases // Clin. Immunol. 1999. V.91. №2. P.206-218.

476. Parola M., Leonarduzzi G., Robino G., Albano E., Poli G., Dianzani M.U. On the role of lipid peroxidation in the pathogenesis of liver damage induced by long standing cholestasis // Free Radic. Biol. Med. 1996. V.20. P.351-359.

477. Parola M., Robino G. Oxidative stress-related molecules and liver fibrosis // J. Hepatol. 2001. V.35. P.297-306.

478. Pauly Т.Н., Smith M., Gillespie M. Bilirubin as an antioxidant: effect on group В streptococci-induced pulmonary hypertension in infant piglets // Biol. Neonate. 1991. V.60. №5. P.320-326.

479. Pessayre D., Mansouri A., Haouzi D., Fromenty B. Hepatotoxicity due to mitochondrial dysfunction // Cell Biol. Toxicol. 1999. V.15. P.367-373.

480. Peterhans E. Oxidants and antioxidants in viral diseases: disease mechanisms and metabolic regulation // J. Nutr. 1997. V.127. №5Suppl. P.962-965.

481. Petit-Bertron A.F., Fitting C., Cavaillon J.M., Adib-Conquy M. Adherence influences monocyte responsiveness to interleukin-10 // J. Leukoc. Biol. 2003. V.73. №1. P.145-154.

482. Petrache I., Otterbein L.E., Alam J., Wiegand G.W., Choi A.M. Heme oxygenase-1 inhibits TNF-alpha-induced apoptosis in cultured fibroblasts // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2000. V.278. №2. P.312-319.

483. Petryka Z. Variations in hydrogenation of bile pigments depending upon type of solvent and other factors // Ann. N.-Y. Acad. Sci. 1973. V.206. P.701.

484. Phelan D., Winter G.M., Rogers W.J., Lam J.C., Denison M.S. Activation of the Ah receptor signal transduction pathway by bilirubin and biliverdin // Arch. Biochem. Biophys. 1998. V.357. №1. P. 155-163.

485. Pieri C., Maurizio M., Fausto M., Recchioni R., Marcheselli F. Melatonin: a peroxyl radical scavenger more effective than vitamin E // Life Sci. 1994. V.55. P.271-276.

486. Pinto H.C., Felipe P., Baptista A., Fernandes A., Camilo E., Ramalho F., Moura M.C. Hepatic steatosis and lipid peroxidation in human chronic liver diseases // Hepatology. 1996. V.24. P.311.

487. Plaa G.L., Priestly B.G. Intrahepatic cholestasis induced by drugs and chemicals // Pharmacol. Rev. 1977. V.28. P.207-273.

488. Piatt J.L., Nath, K.A. Heme oxygenase: Protective gene or Trojan horse //Nat. Med. 1998. V.4. P.1364-1365.

489. Poli G. Pathogenesis of liver fibrosis: role of oxidative stress // Mol. Asp. Med. 2000. V.21. P.49-98.

490. Polte Т., Abate A., Dennery P.A., Schroder H. Heme oxygenase-1 is a cGMP-inducible endothelial protein and mediates the cytoprotective action of nitric oxide 11 Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2000. V.20. №5. P.1209-1215.

491. Poss K. D., Tonegawa S. Reduced stress defense in heme oxygenase 1-deficient cells // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1997. V.94. P. 10925-10930.

492. Primiano Т., Kensler T.W., Kuppusamy P., Zweier J.L., Sutter T.R. Induction of hepatic heme oxygenase-1 and ferritin in rats by cancer chemopre-ventive dithiolethiones // Carcinogenesis. 1996. V.17. №11. P.2291-2296.

493. Propst A., Propst Т., Lechleitner M. Hypercholesterolemia in primary biliary cirrhosis is no risk factor for atherosclerosis // Dig. Dis. Sci. 1993. V.38. P.3 79-3 83.

494. Puntis M.C., Jiang W.G. Plasma cytokine levels and monocyte activation in patients with obstructive jaundice // J. Gastroenterol. Hepatol. 1996. V.ll. №1. P.7-13.

495. Pustovidko A.V., Potselueva M.M., Evtodienko Y.V. Generation of reactive oxygen species by polymorphonuclear leukocytes and its modulation by calcium ions during tumor growth // IUBMB Life. 2000. V.50. №1. P.69-73.

496. Qanungo S., Mukherjea M. Ontogenic profile of some antioxidants and lipid peroxidation in human placental and fetal tissues // Mol. Cell Biochem. 2000. V.215. №1-2. P.l 1-19.

497. Raju V.S., Maines M.D. Renal ischemia/reperfusion up-regulates heme oxygenase-1 (HSP32) expression and increases cGMP in rat heart // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1996. V.277. №3. P.1814-1822.

498. Rabelink T.J., Stroes E. Atherosclerosis: Defeat of the Defense? // Circ. Res. 2001. V.88. P.456.

499. Redaelli C.A., Tian Y.H., Schaffner Т., Ledermann M., Baer H.U., Du-four J.F. Extended preservation of rat liver graft by induction of heme oxygenase^ // Hepatology. 2002. V.35. №5. P.1082-1092.

500. Reddy R., Keshavan M., Yao J.K. Reduced plasma antioxidants in first-episode patients with schizophrenia // Schizophr. Res. 2003. V.62. №3. P.205-212.

501. Reed G.A., Lasker J.M., Thomas E.T. Peroxidative oxidation of bilirubin durin prostaglandin biosynthesis // Prostaglandins. 1985. V.30. №1. P.153-165.

502. Reeves H.L., Burt A.D., Wood S., Day C.P. Hepatic stellate cell activation occurs in the absence of hepatitis in alcoholic liver disease and correlates with the severity of steatosis // J. Hepatol. 1996. V.25. №5. P.677-683.

503. Ren J.-G., Zheng R.-L., Shi Y.-M., Gong В., LI J.-F. Apoptosis, rediffer-entiation and arresting proliferation simultaneously triggered by oxidative stress in human hepatoma cells // Cell Biol. Intern. 1998. V.22. №1. P.41-49.

504. Rice-Evans C.A. Antioxidant activities of carotenes and xanthophylls // FEBS Lett. 1996. V.384. P.240-242.

505. Riley P.A. Free radicals in biology: oxidative stress and the effects of ionizing radiation // Int. J. Radiat. Biol. 1994. V.65. P.27-33.

506. Rizzardini M., Carelli M., Cabello Porras M.R., Cantoni L. Mechanisms of endotoxin-induced haem oxygenase mRNA accumulation in mouse liver: Synergism by glutathione depletion and protection by N-acetylcysteine // Biochem. J. 1994. V.304. P.477-483.

507. Rizzardini M., Terao M., Falciani F., Cantoni L. Cytokine induction of haem oxygenase mRNA in mouse liver: interleukin 1 transcriptionally activates the haem oxygenase gene // Biochem. J. 1993. V.290. P.343-347.

508. Roberts R.J. Microsomal metabolism of the hepatotoxin a-naphthylisothiocyanate (ANIT) following phenobarbital, chlorpromazine or ac-tinomycin D treatment // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1973. V.142. №1. P.365-367.

509. Robertson P., Fridovich I. A reaction of the superoxide radical with tetrapyrroles //Arch. Biochem. Biophys. 1982. V.213. №2. P.353-357.

510. Rodrigues C.M., Steer C.J. Mitochondrial membrane perturbations in cholestasis//J. Hepatol. 2000. V.32. №1. P. 135-141.

511. Rodrigues C.M.P., Sola S., Castro R.E., Laires P.A., Brites D., Moura J.J.G. Bilirubin directly disrupts membrane lipid polarity and fluidity, protein order, and redox status in rat mitochondria // J. Hepatol. 2002. V.35. P.4.

512. Rolo A.P., Palmeira C.M., Wallace K.B. Interactions of combined bile acids on hepatocyte viability: cytoprotection or synergism // Toxicol. Lett. 2002. V.126. P.197-203.

513. Romero M.J., Bosch-Morell F., Romero В., Rodrigo J.M., Serra M.A., Romero F.J. Serum malondialdehyde: possible use for the clinical management of chronic hepatitis С patients // Free Radic. Biol. Med. 1998. V.25. №9. P.993-997.

514. Rosser B.G., Gores G.J. Liver cell necrosis: Cellular mechanisms and clinical implications // Gastroenterol. 1995. V.108. P.252-275.

515. Rossi A., Santoro M.G. Induction by prostaglandin Al of haem oxygenase in myoblastic cells: an effect independent of expression of the 70 kDa heat shock protein // Biochem. J. 1995. V.308. P.455-463.

516. Roth R.A., Hewett J.A. The cholestatic agent, a-naphthylisothiocyanate stimulates superoxide release by rat neutrophils in vitro II Lab. Invest. 1990. V.62. №6. P.736-741.

517. Rudiger W. Bile pigments and biliproteins // Forschr. Chem. Org. Naturst. 1971. V.29. P.60.

518. Russo A., Acquaviva R., Campisi A., Sorrenti V., Di Giacomo C., Vir-gata G., Barcellona M.L., Vanella A. Bioflavonoids as antiradicals, antioxidants and DNA cleavage protectors // Cell Biol. Toxicol. 2000. V.16. P.91-98.

519. Ryter S., Otterbein L.E., Morse D., Choi A.M. Heme oxygenase/carbon monoxide signaling pathways: regulation and functional significance // Mol. Cell Biochem. 2002. V.234-235. №1-2. P.249-263.

520. Ryter S.W., Tyrrell R.M. Singlet molecular oxygen ^Ог): a possible effector of eukaryotic gene expression // Free Radic. Biol. Med. 1998. V.24. №9. P.1520-1534.

521. Ryter S.W., Tyrrell R.M. The heme synthesis and degradation pathways: role in oxidant sensitivity. Heme oxygenase has both pro- and antioxidant properties // Free Radic. Biol. Med. 2000. V.28. №2. P.289-309.

522. Sahoo S.K., Sawa Т., Fang J., Tanaka S., Miyamoto Y., Akaike Т., Maeda H. Pegylated zinc protoporphyrin: a water-soluble heme oxygenase inhibitor with tumor-targeting capacity // Bioconjug. Chem. 2002. V.13. №5. P.1031-1038.

523. Sammut I.A., Harrison J.C. Cardiac mitochondrial complex activity is enhanced by heat shock proteins // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 2003. V.30. №1-2. P.110-115.

524. Sardana M.K., Drummond G.S., Sassa S., Kappas A. The potent heme oxygenase inducing action of arsenic and parasiticidal arsenicals // Pharmacol. 1981. V.23.P.247-253.

525. Sato H., Aono S., Semba R., Kashiwamata S. Interaction of bilirubin with human erythrocyte membranes. Bilirubin binding to neuraminidase- and phospholipase-treated membranes // Biochem. J. 1987. V.248. №1. P.21-26.

526. Sato H., Kashiwamata S. Interaction of bilirubin with human erythrocyte membranes // Biochem. J. 1983. V.210. P.489-496.

527. Scapagnini G., Foresti R., Calabrese V., Stella G.A.M., Green C.J., Mot-terlini R. Caffeic acid phenethyl ester and curcumin: A novel class of heme oxygenase-1 inducers // Mol. Pharmacol. 2002. V.61. №3. P.554-561.

528. Schenker S., McCandless D.W., Zollman P.E. Studies of cellular toxicity of unconjugated bilirubin in kernicteric brain // J. Clin. Invest. 1966. V.45. P. 1213-1220.

529. Schmid R., Hammaker L. Metabolism and disposition of С14- bilirubin in congenital nonhemolytic jaundice // J. Clin. Invest. 1963. V.42. P. 17201734.

530. Schneider C.W. Intracellular distibution of enzymes // J. Biol. Chem. 1948. V. 176. №l.P.259-266.

531. Schutze S., Berkovic D., Tomsing O., Unger C., Kronke M. Tumor necrosis factor induces rapid production of 1, 2-diacylglycerol by a phosphatidyl-choline-specific phospholipase С // J. Exp. Med. 1991. V.174. P.975-988.

532. Schwarz K.B. Oxidative stress during viral infection: a review // Free Radic. Biol. Med. 1996. V.21. №5. P.641-649.

533. Schwertner H.A., Fischer J.R. Comparison of various lipid, lipoprotein, and bilirubin combinations as risk factors for predicting coronary artery disease //Atherosclerosis. 2000. V.150. P.3 81-387.

534. Schwertner H.A. Association of smoking and low serum bilirubin antioxidant concentrations // Atherosclerosis. 1998. V.136. №2. P.383-387.

535. Schwertner H.A., Jackson W.G., Tolan G. Association of low serum concentration of bilirubin with increased risk of coronary artery disease // Clin. Chem. 1994. V.40. №10. P. 18-23.

536. Schwoebel A., Sakraida S. Hyperbilirubinemia: new approaches to an old problem // J. Perinat. Neonatal Nurs. 1997. V.l 1. №3. P.78-97.

537. Scott-Conner C.E.H., Grogan J.B. The pathophysiology of biliary obstruction and its effect on phagocytic and immune function // J. Surg. Res. 1994. V.57. P.316-322.

538. Seidel D., Alaupovic P., Furman R. H. A lipoprotein characterizing obstructive jaundice // J. Clin. Invest. 1969. V.48. P. 1211.

539. Seo J.Y., Kim H., Seo J.T., Kim K.H. Oxidative stress induced cytokine production in isolated rat pancreatic acinar cells: effects of small-molecule antioxidants // Pharmacol. 2002. V.64. №2. P.63-70.

540. Seubert J.M., Darmon A.J., El-Kadi A.O., D'Souza S J., Bend J.R. Apoptosis in murine hepatoma hepa lclc7 wild-type, С12, and C4 cells mediated by bilirubin // Mol. Pharmacol. 2002. V.62. №2. P.257-264.

541. Sevanian A., Davies K.J.A., Hochstein P. Serum urate as anioxidant for ascorbic acid // Am. J. Clin. Nutr. 1991. V.54. Suppl. P.l 129S-1137S.

542. Sherlock S. Summary of the IX International Symposium on Viral Hepatitis //Antivir. Res. 2001. V.52. P.77-81.

543. Shibahara S., Kitamuro Т., Takahashi K. Heme degradation and human disease: diversity is the soul of life // Antioxid. Redox Signal. 2002. V.4. №4. P.593-602.

544. Shibahara S., Muller R.M., Taguchi H. Transcriptional control of rat heme oxygenase by heat shock// J. Biol. Chem. 1987. V.262. P.12889-12892.

545. Shirota Т., Sasajima K. Hyperbilirubinemia after esophagectomy. A possible role of lipid peroxidation // Nippon Ika Daigaku Zasshi. 1992. V.59. №1. P.21-28.

546. Shukla V.K., Shukla P.K., Pandey M., Rao B.R., Roy S.K. Lipid peroxidation product in bile from patients with carcinoma of the gallbladder: a preliminary study // J. Surg. Oncol. 1994. V.56. №4. P.258-262.

547. Silva R.F., Rodrigues C.M, Brites D. Rat cultured neuronal and glial cells respond differently to toxicity of unconjugated bilirubin // Pediatr. Res. 2002. V.51. №4. P.535-541.

548. Simon H.-U., Haj-Yehia A., Levi-Schaffer F. Role of reactive oxygen species (ROS) in apoptosis induction // Apoptosis. 2000. V.5. P.415-418.

549. Simovic M.O., Bonham M.J., Abu-Zidan F.M., Windsor J.A. Manganese superoxide dismutase: A marker of ischemia-reperfiision injury in acute pancreatitis? // Pancreas. 1997. V.l5. №1. P.78-82.

550. Sinai C.J., Bend J.R. Aryl hydrocarbon receptor-dependent induction of cyplal by bilirubin in mouse hepatoma hepa lclc7 cells // Mol. Pharmacol. 1997. V.52. №4. P.590-599.

551. Singh S., Shackleton G., Ah-Sing E., Chakraborty J., Bailey M.E. Antioxidant defenses in the bile duct-ligated rat // Gastroenterol. 1992. V.103. №5. P.1625-1629.

552. Siow R.C., Sato H., Mann G.E. Heme oxygenase-carbon monoxide signalling pathway in atherosclerosis: anti-atherogenic actions of bilirubin and carbon monoxide? // Cardiovasc. Res. 1999. V.41. №2. P.385-394.

553. Sjorstrand T. Endogenous formation of carbon monoxide in man under normal and pathological conditions // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1949. V.l. P.201-214.

554. Snyder S.H., Baranano D.E. Heme oxygenase: a font of multiple messengers // Neuropsychopharmacol. 2001. V.25. №3. P.294-298.

555. Snyder S.H., Jaffrey S.R, Zakhary R. Nitric oxide and carbon monoxide: parallel roles as neural messengers // Brain Res. Rev. 1998. V.26. P. 167-175.

556. Soares M.P., Lin Y., Anrather J., Csizmadia E., Takigami K., Sato K., Grey S.T., Colvin R.B., Choi A.M., Poss K.D., Bach F.H. Expression of heme oxygenase-1 can determine cardiac xenograft survival // Nat. Med. 1998. V.4. №9. P. 1073-1077.

557. Sokol R.J., Balistreri W.F., Hoofnagle J.H., Jones E.A. Vitamin E deficiency in adults with chronic liver disease // Am. J. Clin. Nutr. 1985. V.41. №1. P.66-72.

558. Sokol R.J., Devereaux M., Khandwala R.A., O'Brien K. Evidence for involvement of oxygen free radicals in bile acid toxicity to isolated rat hepato-cytes // Hepatology. 1995. V.17. P.869-881.

559. Song J.H., Shin S. H., Ross G.M. Oxidative stress induced by ascorbate causes neuronal damage in an in vitro system // Brain Res. 2001. V.895. P.66-72.

560. Speck W.T., Rosenkranz H.S. The bilirubin-induced photodegradation of deoxyribonucleic acid // Pediatr. Res. 1975. V.9. №9. P.703-705.

561. Spence M.W. Sphingomyelinases // Adv. Lipid Res. 1993. V.26. P.3-23.

562. Spengler U., Zachoval R., Gallati H., Jung M.-C., Hoffmann R., Rieth-muller G., Pape G. Serum levels and in situ expression of TNF-a and TNF-a binding proteins in inflammatory liver diseases // Cytokine. 1996. V.7. №11. P.753-761.

563. Spiteller G. Peroxidation of linoleic acid and its relation to aging and age dependent diseases // Mech. Ageing Developm. 2001. V.122. P.617-657.

564. Spranger Т., Finckh В., Fingerhut R., Kohlschutter A., Beisiegel U., Kontush A. How different constituents of human plasma and low density lipoprotein determine plasma oxidizability by copper // Chem. Phys. Lipids. 1998. V.91. №1. P.39-52.

565. Stocker R., Ames B.N. Potential role of conjugated bilirubin and copper in the metabolism of lipid peroxides in bile // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1987. V.84. №22. P.8130-8134.

566. Stocker R., Glazer A.N., Ames B.N. Antioxidant activity of albumin-bound bilirubin // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1987. V.84. №16. P.5918-59122.

567. Stocker R., McDonagh A.F, Glazer A.N., Ames B.N. Antioxidant activities of bile pigments: biliverdin and bilirubin // Methods Enzymol. 1990. V.186. P.301-309.

568. Stocker R., Peterhans E. Antioxidant properties of conjugated bilirubin and biliverdin: biologically relevant scavenging of hypochlorous acid // Free Radic. Res. Commun. 1989. V.6. №1. P.57-66.

569. Stocker R., Peterhans E. Synergistic interaction between vitamin E and the bile pigments bilirubin and biliverdin // Biochim. Biophys. Acta. 1989. V.1002. №2. P.238-244.

570. Stocker R., Yamamoto Y., McDonagh A.F., Glazer A.N., Ames B.N. Bilirubin is an antioxidant of possible physiological importance // Science. 1987. V.235. №4792. P.1043-1046.

571. Stocks J., Gutteridge J.M.C., Sharp R.J., Dormandy T.L. The inhibition of lipid autoxidation by human serum and its relation to serum proteins and al-pha-tocopherol // Clin. Sci. Mol. Med. 1974. V.47. P.223-233.

572. Stoll M.S., Zenone E.A., Ostrow J.D., Zarembo J.E. Preparation and properties of bilirubin photoisomers // Biochem. J. 1979. V.183. №1. P. 139146.

573. Subbanagounder G., Watson A.D., Berliner J.A. Bioactive products of phospholipid oxidation: isolation, identification, measurement and activities // Free Radic. Biol. Med. 2000 V.28. №12. P.1751-1761.

574. Subbiah M.T., Kessel В., Agrawal M., Rajan R., Abplanalp W., Ry-maszewski Z. Antioxidant potential of specific estrogens on lipid peroxidation // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1993. V.77. P.1095-1097.

575. Suematsu Т., Kamada Y., Abe H., Kikuchi S., Yagi K. Serum lipoperox-ide level in patients suffering from liver diseases // Clin. Chim. Acta. 1977. V.79. P.267-270.

576. Sugiyama Y., Kobori H., Hakamada K., Seito D., Sasaki M. Altered bile composition in the gallbladder and common bile duct of patients with anomalous pancreaticobiliary ductal junction // World J. Surg. 2000. V.24. P. 17-21.

577. Suzuki N., Nakamura Y., Kobayashi N., Sato T. On metal elements in pure pigment gallstones // Tohoku J. Exp. Med. 1975. V.l 16. №3. P.233-240.

578. Suzuki N., Yamaguchi Т., Nakajima H. Role of high-density lipoprotein in transport of circulating bilirubin in rats // J. Biol. Chem. 1988. V.263. P.5037-5043.

579. Takahashi К., Нага E., Suzuki H., Shibahara S. Expression of heme oxygenase isozyme mRNA in the human brain and induction of heme oxgenase-1 by nitric oxide donors // J. Neurochem. 1996. V.67. P.482-489.

580. Takeda Y., Tashima M., Takahashi A., Uchiyama Т., Okazaki T. Cera-mide generation in nitric oxide-induced apoptosis. Activation of magnesium-dependent neutral sphingomyelinase via caspase-3 // J. Biol. Chem. 1999. V.274. P. 10654-10660.

581. Talafant E. Bile pigment-phospholipid interactions // Biochim. Biophys. Acta. 1971. V.231. №2. P.394-398.

582. Tamiya-Koizumi K., Koizumi K., Ishihara H., Kojima K. Lipid composition of the plasma membrane isolated from hyperplastic nodules of rat liver // J. Biochem. 1985. V.97. №3. P.773-779.

583. Tamiya-Koizumi K., Kojima K. Activation of magnesiumdependent, neutral sphingomyelinase by phosphatidyl serine // J. Biochem. 1986. V.99. P.1803-1806.

584. Tappel A.L. Biological antioxidant protection against lipid peroxidation damage//Am. J. Clin. Nutr. 1970. V.23. №8. P.l 137-1139.

585. Taylor J.L., Carraway M.S., Piantadosi C.A. Lung-specific induction of heme oxygenase-1 and hyperoxic lung injury // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 1998. V.274. P.582-590.

586. Telek G., Ducroc R., Scoazec J.-Y., Pasquier C., Feldmann G., Roze C. Differential upregulation of cellular adhesion molecules at the sites of oxidative stress in experimental acute pancreatitis // J. Surg. Res. 2001. V.96. P.56-67.

587. Temme E.H., Zhang J., Schouten E.G., Kesteloot H. Serum bilirubin and 10-year mortality risk in a Belgian population // Cancer Causes Control. 2001. V.12. №10. P.887-894.

588. Tenhunen R., Marver H.S., Schmid R. The enzymatic conversion of heme to bilirubin by microsomal heme oxygenase // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1968. V.61. P.748-755.

589. Terao J., Matsuchita S. The peroxidazing effect of a-tocopherol on autooxidation on methyl linoleate in bulk phase // Lipids. 1986. V.28. P.255-260.

590. Terasaki M., Kuriki H., Nimura Y., Shionoya S., Kojima K,. Yoshida S. Induction of DNA replication and cell growth in rat liver by obstructive jaundice // Jpn. J. Cancer Res. 1991. V.82. №2. P.170-175.

591. Terry C.M., Clikeman J.A., Hoidal, J.R., Callahan K.S. Effect of tumor necrosis factor-alpha and interleukin-1 alpha on heme oxygenase-1 expression in human endothelial cells // Am. J. Physiol. 1998. V.274. P.883-888.

592. Thalassinos N., Hatzioannou J., Scliros P., Kanaghinis R., Anastasiou C., Crocos P., Thomopoulos D., Gardikas C. Plasma alpha-lipoprotein pattern in acute viral hepatitis // Am. J. Dig. Dis. 1975. V.20. №2. P.148-155.

593. Thomas S.R., Neuzil J., Mohr D., Stocker R. Coantioxidants make alpha-tocopherol an efficient antioxidant for low-density lipoprotein // Am. J. Clin. Nutr. 1995. V.62. Suppl.№6. P.S1357-S1364.

594. Tobiasch E., Gunther L., Bach F.H. Heme oxygenase-1 protects pancreatic beta cells from apoptosis caused by various stimuli // J. Investig. Med. 2001. V.49. №6. P.566-571.

595. Tomaro M.L., Frydman J., Frydman R.B. Heme oxygenase induction by C0CI2, coprotoporphyrin IX, phenylhydrazine, and diamide: evidence for oxidative stress involvement//Arch. Biochem. Biophys. 1991. V.226. P.610-617.

596. Tomiuk S., Zumbansen M., Stoffel W. Characterization and subcellular localization of murine and human magnesium-dependent neutral sphingomyelinase // J. Biol. Chem. 2000. V.275. 5710-5717.

597. Torres A.M., Lunazzi G.C., Stremmel W., Tiribelli C. Bilitranslocase and sulfobromophtalein/bilirubin-binding protein are both involved in the hepatic uptake of organic anions // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1993. V.90. P.8136-8139.

598. Tsai K., Wang S.-S., Chen T.-S., Kong C.-W., Chang F.-Y., Lee S.-D., Lu F.-J. Oxidative stress: an important phenomenon with pathogenetic significance in the progression of acute pancreatitis // Gut. 1998. V.42. P.850-855.

599. Tsai L.Y., Lee K.T., Liu T.Z. Evidence for accelerated generation of hy-droxyl radicals in experimental obstruction jaundice of rats // Free Radic. Biol. Med. 1998. V.24. №5. P.732-737.

600. Tsai L.Y., Lee K.T., Tsai S.M., Lee S.C., Yu H.S. Changes of lipid peroxide levels in blood and liver tissue of patients with obstructive jaundice // Clin. Chim. Acta. 1993. V.215. №1. P.41-50.

601. Tsai L.Y., Tsai S.M,. Lee K.T., Yu H.S. Levels of plasma lipid peroxides before and after choledocholithotomy in patients with obstructive jaundice // Sangyo Ika Daigaku Zasshi. 1992. V.14. №4. P.261-269.

602. Tsukahara H., Haruta Т., Todoroki Y., Hiraoka M., Noiri E., Maeda M., Mayumi M. Oxidant and antioxidant activities in childhood meningitis // Life Sci. 2002. V.71. №23. P.2797-2806.

603. Tsukamoto H., Rippe R., Niemela O., Lin M. Roles of oxidative stress in activation of Kupffer and cells in liver fibrogenesis // J. Gastroenterol. Hepatol. 1995. V.10P.50-53

604. Tulis D.A., Durante W., Peyton K.J., Evans A.J., Schafer A.I. Heme oxygenase-1 attenuates vascular remodeling following balloon injury in rat carotid arteries // Atherosclerosis. 2001. V.155. P.l 13-122.

605. Tyrrell R.M. Approaches to define pathways of redox regulation of a eu-karyotic gene: the Heme oxygenase 1 example // Methods. 1997. V.ll. P.313-318.

606. Vachharajani T.J., Work J., Sekutz A.C., Granger D.N. Heme oxygenase modulates selectin expression in different regional vascular beds // Am. J. Physiol. 2000. V.278. P.1613-1617.

607. Van Bergen P., Rauhala P., Spooner C.M., Chiueh C.C. Hemoglobin and iron-evoked oxidative stress in the brain: protection by bile pigments, manganese and S-nitrosoglutathione //Free Radic. Res. 1999. V.31. №6. P.631-640.

608. Van der Veere C.N., Schoemaker В., Van der Meer R., Groen A.K., Jan-sen P.L.M., Oude Elferink R.P.J. Rapid association of unconjugated bilirubin with amorphous calcium phosphate // J. Lipid Res. 1995. V.36. P. 1697-707.

609. Vandevijver L.P.L. Seasonal variation in low density lipoprotein oxidation and antioxidant status // Free Radic. Res. 1997. V.27. P. 87-96.

610. Vanisree A.J., Shyamaladevi C.S. Status of lipid peroxidation and antioxidant enzymes in malignant (bronchogenic carcinoma) and non-malignant pleural effusions // Indian. J. Cancer. 1999. V.36. №2-4. P. 127-134.

611. Vanlandschoot P., Leroux-Roels G. Viral apoptotic mimicry: an immune evasion strategy developed by the hepatitis В virus? // Trends Immunol. 2003 V.24. №3. P.144-148.

612. Vaskovsky V.E., Kostezky E.I., Vasendin I.M. A universal reagent for phospholipid analysis // J. Chramatogr., V.l 14. P. 129-141.

613. Vassilopoulou-Sellin R., Rey-Bear N., Oyedeji C.O. Bilirubin as an inhibitor of cartilage metabolism: effect on avian chondrocyte proliferation in cell culture // J. Bone Miner. Res. 1990. V.5. №7. P.769-774.

614. Vazquez J., Garcia-Calvo M., Valdivieso F., Mayor F., Mayor F. Interaction of bilirubin with the synaptosomal plasma membrane // J. Biol. Chem. 1988. V.263. №3. P.1255-1265.

615. Vendemiale G., Grattagliano I., Lupo L., Memeo V., Altomare E. Hepatic oxidative alterations in patients with extra-hepatic cholestasis. Effect of surgical drainage // J. Hepatol. 2002. V.37. №5. P.601-605.

616. Vicente A.M., Guillin M.I., Alcaraz M.J. Participation of heme oxygenase-1 in a model of acute inflammation // Exp. Biol. Med. 2003. V.228. №5. P.514-516.

617. Viswalingam A., Caldwell J. Cinnamyl anthranilate causes coinduction of hepatic microsomal and peroxisomal enzymes in mouse but not rat // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1997. V.142. №2. P.338-347.

618. Vitek L., Jirsa M., Brodanova M. Kalab M., Marecek Z. Danzig V., No-votny L., Kotal P. Gilbert syndrome and ischemic heart disease: a protective effect of elevated bilirubin levels // Atherosclerosis. 2002. V.160. №2. P.449-456.

619. Vulapalli S.R., Chen Z., Chua B.H.L., Wang Т., Liang C.S. Cardioselec-tive overexpression of HO-1 prevents I/R-induced cardiac dysfunction and apoptosis // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2002. V.283. №2. P.688-694.

620. Wagner M., Cadetgi P., Ruf R., Mazzucchelli L., Ferrari P., Redaelli C.A. Heme oxygenase-1 attenuates ischemia/reperfusion-induced apoptosis and improves survival in rat renal allografts // Kidney Int. 2003. V.63. №4. P.564-573.

621. Wang J., Lu S., Moenne-Loccoz P., Ortiz de Montellano P.R. Interaction of nitric oxide with human heme oxygenase-1 // J. Biol. Chem. 2003. V.278. №4. P.2341-2347.

622. Ward S. Heme oxygenase-a novel anti-inflammatory mediator // Trends Immunol. 2002. V.23. №9. P.430.

623. Weinzierl M., Mautes A.E., Lin Y., Noble L.J. Attenuated induction of heme oxygenase after intrathecal exposure to lysed blood in mice overexpress-ing superoxide dismutase //Neurosci. Lett. 2003. V.336. №1. P.13-16.

624. Weisiger R.A. Dissociation from albumin: a potentially rate-limiting step in the clearance of substances by the liver // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1985. V.82. №5. P. 1563-1567.

625. Wellington K., Jarvis B. Silymarin: a review of its clinical properties in the management of hepatic disorders // BioDrugs. 2001. V.15. №7. P.465-189.

626. William В., Dwyer K.R., Kennard C.H. Black pigment or polybilirubi-nate gallstonrs // Ann. Surg. 1981. V. 193. P.331-333.

627. Williams G.M., Jeffrey A.M. Oxidative DNA damage: endogenous and chemically induced // Regulat. Toxicol. Pharmacol. 2000. V.32. P.283-292.

628. Williams R.L., Schary W.I., Blaschke T.F. Influence of acute viral hepatitis on disposition and pharmacologic effect of warfarin // Clin. Pharmacol. Ther. 1976. V.20. P.90-97.

629. Willis D., Moore A.R., Frederick R., Willoughby D.A. Heme oxygenase: A novel target for the modulation of the inflammatory response // Nat. Med. 1996. V.2. P.87-90.

630. Witzleben C.L., Boyce W.H. Bilirubin as a cholestatic agent. IV. Effect of bilirubin and sulfobromophthalein (BSP) on biliary manganese excretion // Arch. Pathol. 1975. V.99. №9. P.496-498.

631. Wolfson N., Willbur K., Bernheim F. Lipide peroxide formation in regenerating rat liver // Exp. Cell. Res. 1956. V.2. №2. P.556-559.

632. Wu T.W., Carey D., Wu J., Sugiyama H. The cytoprotective effects of bilirubin and biliverdin on rat hepatocytes and human erythrocytes and the impact of albumin // Biochem. Cell Biol. 1991. V.69. №12. P.828-834.

633. Wu T.W., Fung K.P., Yang C.C. Unconjugated bilirubin inhibits the oxidation of human low density lipoprotein better than Trolox // Life Sci. 1994. V.54. №25. P.477-481.

634. Wu T.W., Wu J., Li R.K., Mickle D., Carey D. Albumin-bound bilirubins protect human ventricular myocytes against oxyradical damage // Biochem. Cell Biol. 1991. V.69. №10-11. P.683-638.

635. Xia Z.W., Cui W.J., Zhang X.H., Shen Q.X, Wang J., Li Y.Z., Chen S.N., Yu S.C. Analysis of heme oxygenase isomers in rat // World J. Gastroenterol. 2002. V.8. №6. P.l 123-1128.

636. Yachie A., Niida Y., Wada Т., Igarashi N., Kaneda H,. Toma Т., Ohta K., Kasahara Y., Koizumi S. Oxidative stress causes enhanced endothelial cell injury in human heme oxygenase-1 deficiency // J. Clin. Invest. 1999. V.103. №1. P.129-135.

637. Yamaguchi Т., Dayton C.B., Ross C.R., Yoshikawa Т., Gute D.C., Korthuis R.J. Late preconditioning by ethanol is initiated via an oxidant-dependent signaling pathway // Free Radic. Biol. Med. 2003. V.34. №3. P.365-376.

638. Yamaguchi Т., Shioji I., Sugimoto A., Komoda Y., Nakajima, H. Chemical structure of a new family of bile pigments from human urine // J. Biochem. 1994V.116. P.298-303.

639. Yamaguchi Т., Shioji I., Sugimoto A., Yamaoka M. Psychological stress increases bilirubin metabolites in human urine // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2002. V.293. P.517-520.

640. Yamaguchi Т., Terakado M., Horio F., Aoki K., Tanaka M., Nakajima H. Role of bilirubin as an antioxidant in an ischemia-reperfusion of rat liver and induction of heme oxygenase // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. V.223. №1. P.129-135.

641. Yamamoto Y., Yamashita S. Plasma ubiquinone to ubiquinol ratio in patients with hepatitis, cirrhosis, and hepatoma, and in patients treated with percutaneous transluminal coronary reperfusion // Biofactors. 1999. V.9. №2-4. P.241-246.

642. Yamamoto Y., Yamashita S., Fujisawa A., Kokura S., Yoshikawa T. Oxidative stress in patients with hepatitis, cirrhosis, and hepatoma evaluated byplasma antioxidants 11 Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. V.247. P. 166170.

643. Yang В., Morris M.D., Xie M., Lightner D.A. Resonance Raman spectroscopy of bilirubins: band assignments and application to bilirubin/lipid com-plexation // Biochemistry. 1991. V.30. №3. P.688-694.

644. Yang K.C., Li X., Tsui Z.C. The relationship between nutritional antioxidants and serum lipid peroxides in cancer patients // In Vivo. 1989. V.3. №3.P.211-214.

645. Yao J.K., Reddy R., van Kammen D.P. Abnormal age-related changes of plasma antioxidant proteins in schizophrenia // Psychiatry Res. 2000. V.97. №2-3. P.137-151.

646. Yasuda S., Itoh S., Imai Т., Isobe K., Onishi S. Cyclobilirubin formation by in vitro photoirradiation with neonatal phototherapy light // Pediatr. Intern. 2001. V.43.P.270-275.

647. Yerushalmi В., Dahl R., Devereaux M.W. Bile acid-induced rat hepato-cyte apoptosis is inhibited by antioxidants and blockers of mitochondrial permeability transition // Hepatology. 2001. V.33. P.616-626.

648. Yesilkaya A., Yegin A., Ozdem S., Aksu T.A. The effect of bilirubin on lipid peroxidation and antioxidant enzymes in cumene hydroperoxide-treated erythrocytes // Int. J. Clin. Lab Res. 1998. V.28. №4. P.230-234.

649. Yokosuka О., Billing В. Enzymatic oxidation of bilirubin by intestinal mucosa//Biochim. Biophys. Acta. 1987. V.923. №2. P.268-274.

650. Yoshicawa Т., Tacemura S., Kondo M. alpha-Tocopherol level in liver diseases // Acta Vitaminol. Enzymol. 1982. V.4. №4. P.311-318.

651. Yoshida Т., Biro P., Cohen Т., Muller R.M., Shibahara S. Human heme oxygenase cDNA and induction of its mRNA by hemin // Eur. J. Biochem. 1988. V.171. P.457-461.

652. Yoshimura S., Banno Y., Nakashima S., Hayashi K., Yamakawa H., Sa-wada M., Sakai N., Nozawa Y. Inhibition of neutral sphingomyelinase activation and ceramide formation by glutathione in hypoxic PC 12 cell death // J. Neurochem. 1999. V.73. P.675-683.

653. Zaccaro C., Sweitzer S., Pipino S., Gorman N., Sinclair P.R.,. Sinclair J.F, Nebert D.W., De Matteis F. Role of cytochrome P450 1A2 in bilirubin degradation. Studies in Cypla2 (2/2) mutant mice // Biochem. Pharmacol. 2001. V.61.P.843-849.

654. Zager R.A., Iwata M., Conrad D.S., Burkhart K.M., Igarashi Y. Altered ceramide and sphingosine expression during the induction phase of ischemic acute renal failure // Kidney Int. 1997. V.52 №1. P.60-70.

655. Zak В., Moss N., Boyle A.J., Zlatkis A. Spectrophotometric study of some oxidative products of bilirubin // Anal. Chem. 1954. V.26. №7. P.1220-1222.

656. Zakim D., Wong P.T.T. A high-pressure, infrared spectroscopic study of the solvation of bilirubin in lipid bilayers // Biochemistry. 1990. V.29. P.2003-2007.

657. Zampetaki A., Minamino Т., Mitsialis S.A., Kourembanas S. Effect of heme oxygenase-1 overexpression in two models of lung inflammation // Exp. Biol. Med. 2003. V.228. №5. P.442-446.

658. Zeise E., Rensing L. Hyperthermic pre-treatment protects rat IPC-81 leukaemia cells against heat- and hydrogen peroxide-induced apoptosis // Int. J. Hyperthermia. 2002. V.18. №4. P.344-360.

659. Zhang Y., Mattjus P., Schmid P.C., Dong Z., Zhong S., Ma W. Y., Brown R.E., Bode A.M., Schmid H.H. Involvement of the acid sphingomyelinase pathway in UVA-induced apoptosis // J. Biol. Chem. 2001. V.276. P.l 1775-11782.

660. Zheng L., Fisher G., Miller R.E., Peschon J., Lynch D.H., Lenardo M.J. Induction of apoptosis in mature T cells by tumour necrosis factor // Nature. 1995. V.377. P.348-351.

661. Zhuang H., Pin S., Christen Y., Dore S. Induction of heme oxygenase 1 by Ginkgo biloba in neuronal cultures and potential implications in ischemia 11 Cell Mol. Biol. 2002. V.48. №6. P.647-653.

662. Zimmerman H.J. Drug-induced liver disease 11 Drugs. 1978. V.16. P.25-45.

663. Ziol M., Tepper M., Lohez M., Arcangeli G., Ganne N., Christidis C., Trinchet J.-C., Beaugrand M., Guillet J.-G., Guettier C. Clinical and biologicalrelevance of hepatocyte apoptosis in alcoholic hepatitis // J. Hepatol. 2001. V.34. P.254-260.

664. Zoulim F. Therapy of chronic hepatitis В virus infection: inhibition of the viral polymerase and other antiviral strategies // Antivir. Res. 1999. V.44. P.l-30.

665. Zucker S.D., Goessling W. Mechanism of hepatocellular uptake of albumin-bound bilirubin // Biochim. Biophys. Acta. 2000. V.31. №12. P. 197208.

666. Zucker S.D., Goessling W., Bootle E.J., Sterritt C. Localisation of bilirubin in phospholipid bilayers by parallax analysis of fluorescnce queching // J. Lipid Res. 2001. V.42. №9. P.1377-1388.

667. Zucker S.D., Goessling W., Hoppin A.G. Unconjugated bilirubin exhibits spontaneous diffusion through model lipid bilayers and native hepatocyte membranes // J. Biol. Chem. 1999. V.274. №16. P.10852-10862.

668. Zucker S.D., Storch J., Zeidel M.L., Gollan J.L. Mechanism of the spontaneous transfer of unconjugated bilirubin between small unilamellar phosphatidylcholine vesicles // Biochemistry. 1992. V.31. P.3184-3192.

669. Zuckerbraun B.S., Billiar T.R. Heme oxygenase-1: A cellular Hercules // Hepatology. 2003. V.37. №4. P.742-744.

Информация о работе

Дудник, Людмила Борисовна
доктора биологических наук
Москва, 2004
ВАК 03.00.02

Диссертация

Антиоксидантное и антиапоптотическое действие билирубина при патологии печени и желчевыводящих путей - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы