Антиоксидантная система сыворотки крови и слюны детей при нейроциркуляторной дистонии

Нагорная, Галина Юрьевна

Автореферат диссертации по теме "Антиоксидантная система сыворотки крови и слюны детей при нейроциркуляторной дистонии"

На правах рукописи^ /

НАГОРНАЯ Галина Юрьевна

Антиоксидантная система сыворотки крови и слюны детей при нейроциркуляторной дистонии

03.00.04 - Биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Ростов-на-Дону 2005

Работа выполнена в ГОУ ВПО Ростовском государственном медицинском университете.

Ведущая организация - Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии.

Защита состоится 13 октября 2005 г. в 11 ч 30 мин на заседании диссертационного совета Д 208.082.01 в ГОУ ВПО Ростовском государственном медицинском университете (344022, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, 29).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Ростовского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан 12 сентября 2005 г.

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Микашинович Зоя Ивановна.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Терентьев Владимир Петрович; доктор биологических наук, профессор Горошинская Ирина Александровна.

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

Н.Я. Корганов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

В настоящее время среди всей группы заболеваний сердечнососудистой системы вегетативные расстройства, в частности нейроциркуляторная дистония (НЦД), являются одной из актуальных проблем (Маколкин В.И., Аббакумов С.А., 1985; Белоконь НА., Кубергер М.Б., 1987; Вейн A.M., Молдавану И.В., 1988; Вейн A.M. с соавт., 1991; Отева Э.А. с соавт., 2000).

Вегетативные нарушения берут свое начало преимущественно в детском возрасте (Малая JT.T., 1978; Клиорин А.Н., 1981; Мазо Р.Э., Надеждина С.А., 1985; Калоева З.Д., 1989). Материалы VIII Конгресса педиатров (2003) со всей очевидностью демонстрируют закономерную тенденцию к ухудшению физического и психического здоровья подрастающего поколения. НЦД можно рассматривать как состояние, отражающее особенности этапов развития ребенка в условиях современной окружающей среды, т.е. НЦД - «болезнь развития».

Одновременно с этим, как считают P.A. Калюжная (1980), Р.Н. Аляветдинов, М.Ф. Исмаилов (1987) и многие другие исследователи, при отсутствии своевременных лечебно-профилактических мероприятий у значительного числа людей НЦД может приобретать стойкий характер и трансформироваться в дальнейшем в гипо- или гипертоническую болезнь, атеросклероз, ишемическую болезнь сердца (ИБС).

Данные свидетельствуют о том, что при нейроциркуляторных расстройствах у детей в патологический процесс вовлекается весь организм, а не только лишь сердечно-сосудистая и вегетативная нервная система. В работах последних лет приведены неоспоримые доказательства «полиорганности» поражений при НЦД у детей (Середа Ю.В., Шабалов Н.П., 1999).

Число здоровых детей в различных регионах России сократилось до 8-10%. Как подчеркнул в своем докладе на IX Конгрессе педиатров (2004) Председатель Союза педиатров России академик РАМН A.A. Баранов, приоритетными научными исследованиями фундаментального и прикладного характера являются в т.ч. следующие: дальнейшее изучение механизмов функционирования физиологических систем здорового и « больного ребенка, особенно в критические периоды роста и развития,

ответных реакций организма ребенка на острый и хронический стресс.

На X Конгрессе педиатров «Пути повышения эффективности

медицинской помощи детям» (2005) наряду с вопросами обсуждения

клинических рекомендаций по бронхиальной астме, атопическому

дерматиту, ставились вопросы методологии оценки состояния здоровья

детей. 1 ..........—

РОС НАЦИОНАЛЬНА».

БИБЛИОТЕКА I

¿Mk±L

Морфо-функциональные изменения жизненно важных органов и систем, несомненно, приводят к гормонально-метаболическим сдвигам. Это, в свою очередь, провоцирует изменения общей и специфической реактивности организма, что сопровождается нарушением компенсаторно-адаптивных механизмов и ведет к формированию стойкой органной патологии в процессе взросления организма.

Несмотря на то, что с момента описания «синдрома раздраженного сердца» у молодых солдат в США прошло уже свыше 100 лет, в настоящее время многие аспекты патогенеза данного заболевания остаются недостаточно изученными. Так, в частности, в доступной литературе отсутствуют сведения о состоянии ферментативного звена антиоксидантной системы у детей с НЦД.

Антиоксидантная система (АОС) является показателем состояния адаптивно-компенсаторного потенциала организма, поэтому представляется целесообразным выяснить особенности антиоксидантных ферментных процессов у детей с НЦД, определить их взаимосвязь с биохимическими показателями, характеризующими функциональное состояние внутренних органов. С другой стороны, необходим поиск доступных, неинвазивных технологий, позволяющих повысить диагностическую и прогностическую информативность лечебно-профилактического процесса.

В настоящее время экспертами ВОЗ разработан перечень факторов риска развития сердечно-сосудистых заболеваний, а в отношении оценки степени дисфункциональных расстройств внутренних органов, формирующихся уже в детском возрасте, четкой концепции нет.

В связи с этим нам представляется актуальным поиск специфичных и чувствительных биохимических критериев, позволяющих своевременно выявлять потенциально устранимые функциональные нарушения со стороны висцерально-соматических органов и систем, к тому же являющихся диагностической частью протоколов ведения больных с данной нозологией.

Целью настоящей работы в связи с вышеизложенным явилось создание системы комплексной биохимической оценки возникновения и прогрессирования НЦД у ребенка на основе анализа функционирования ферментативных звеньев антиоксидантной защиты (АОЗ). Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи исследования:

1. Определить диапазоны нормативных значений показаний функционирования основных звеньев АОЗ в крови и ротовой жидкости у детей разных возрастных групп.

2. Выделить группы детей с доминирующей соматической дисфункцией по данным клинико-лабораторного обследования с учетом возраста.

3. Определить выраженность гипоксических сдвигов у детей с НЦД в разных возрастных группах по данным изучения уровня лактата и пирувата в сыворотке крови и слюне.

4. Установить характер изменений показателей системы глутатиона у детей разных возрастных групп с НЦД в сравнении со здоровыми.

5. Определить активность супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы в исследуемых группах детей.

6. Выявить характер изменения миелопероксидазы (МПО), характеризующей состояние антибактериальной резистентности детского организма.

7. Разработать критерии, позволяющие проводить донозологическую диагностику у детей, угрожаемых по развитию НЦД.

Научная новизна работы

В работе впервые проведена комплексная сравнительная характеристика активности антиоксидантных систем в слюне и сыворотке крови детей в норме и при НЦ Д.

В работе впервые доказательно продемонстрирован вклад ферментативного звена в антиоксидантный потенциал крови и слюны детей при НЦД.

Впервые установлены корреляционные взаимосвязи между показателями АОЗ сыворотки крови и слюны и их динамика у этих детей с учетом выраженности соматической дисфункции в различных возрастных группах.

Обнаруженные нами выраженные корреляционные связи между антиоксидантными системами крови и ротовой жидкости указывают на вероятную общность некоторых механизмов организации защитных реакций в слюне и крови при вегетативной дисфункции.

Впервые показано, что слюна по ряду показателей АОЗ является более предпочтительным для диагностических целей биологическим материалом по сравнению с сывороткой крови у детей с НЦД с доминирующей соматической дисфункцией.

Научно-практическая значимость работы

Впервые доказана у детей с НЦД перспектива использования слюны как биологического материала для оценки эффективности лечебно-диагностического процесса.

Впервые в работе проведен отбор информативных биохимических критериев, позволивших упростить и уточнить прогностические и диагностические схемы лечебно-профилактического процесса у детей с НЦД.

Впервые показано, что существует зависимость между ферментами антирадикальной защиты и ферментами, определяющими

функциональное состояние печени у детей с НЦД, что позволило расширить наши представления о биохимической составляющей патогенеза НЦД в детской популяции.

Впервые уточнены возможности исследования слюны у детей с НЦД для оценки активности АОС защиты у детей с соматической доминантой.

Впервые установлены взаимоотношения между активностью АОС в сыворотке крови и слюне детей с НЦД, что может способствовать более широкому использованию слюны для их оценки и упрощения и уточнения прогностических и диагностических схем лечебно-профилактического процесса у детей с НЦД с выраженной соматической доминантой.

Полученные в работе данные позволяют оценить роль антиоксидантного статуса в комплексе метаболических изменений, возникающих при формировании дистресс-синдрома у детей с НЦД, и решить следующие задачи в клинической практике:

Применение чувствительных прогностических биохимических маркеров возникновения и прогрессирования НЦ Д в детской популяции.

Формирование дифференцированного подхода к биохимической диагностике НЦ Д у детей разных возрастных групп.

Использование фармакотерапии, дифференцированной на основе данных биохимической диагностики.

Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены на IX Российской гастроэнтерологической неделе (20-23 октября 2003 г., г. Москва) и на конференции кафедры общей и клинической биохимии № 1 РостГМУ (29 июня 2005 г., г. Ростов-на-Дону).

Публикации

По материалам данного исследования опубликовано 2 печатных работы. Подана заявка на выдачу патента на изобретение под названием «Способ диагностики нейроциркуляторной дистонии»,

зарегистрированная под № 2005111311/15.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Выявлена взаимосвязь между изменениями активности ферментов антирадикальной защиты, ферментами, отражающими соматическую дисфункцию и степенью изменения кислородного режима организма ребенка.

2. Возрастные особенности характеризуются усилением анаэробной ориентации обмена веществ в группе детей 12-14 лет, дисбалансом различных линий ферментативной АОС.

3. В ротовой жидкости у детей, страдающих НЦД, выявлено изменение активности ферментов АОЗ в сравнении со здоровыми детьми.

4. Установлено, что характер метаболических нарушений в слюне сопряжен с тяжестью течения НЦД, разработан способ диагностики ранних проявлений НЦД.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, 6 глав, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, содержащего 87 отечественных и 59 иностранных источников. Объем диссертации - 108 печатных страниц ф. А4, включая 17 таблиц и 15 рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Для реализации поставленной цели было проведено биохимическое исследование сыворотки крови и слюны у 40 детей в возрасте от 6 до 17 лет, поступивших в детское отделение клиники РостГМУ с предварительным диагнозом НЦД, и 40 детей из первой группы здоровья, составивших контрольную группу.

Все дети клинической группы с НЦД и контрольной группы были распределены на 4 возрастные группы (в каждой по 10 человек):

1-ю группу составили дети в возрасте 6-9 лет;

2-ю группу -10-11 лет;

3-ю группу - 12-14 лет;

4-ю группу - 15-17 лет.

Определение содержания лактата проводили по методу В.В. Меньшикова, JI.H. Делекторской, Р.П. Золотницкой (1987). Содержание лактата выражали в мкмоль/л.

Определение содержание пировиноградной кислоты (ПВК) в слюне и сыворотке крови крови проводили по методу М.П. Бабаскина (1981). Содержание ПВК выражали в мкмоль/л.

Активность каталазы определяли колориметрически по методу М.А. Королюк с соавт. (1988). Активность каталазы выражали в мккат/л.

Определение концентрации восстановленного глутатиона проводили методом G.L. Ellman (1959). Концентрацию выражали в мкмоль/мг белка.

Активность глутатионпероксидазы (ГПО) определяли по скорости окисления восстановленного глутатиона в присутствии гидроперекиси третичного бутила по методу В.М. Моина (1986). Активность выражали в МЕ/мг белка.

Активность глутатионредуктазы (ГР) определяли по скорости окисления НАДФ методом Л.Б. Юсуповой (1989). Активность фермента выражали в мкмоль/мг белка.

Определение активности супероксиддисмутазы (СОД) проводили по методу Н.Р. Misra и I. Fridovich (1972) в модификации, проведенной на кафедре общей и клинической биохимии № 1 РостГМУ (Саркисян О.Г.,

2000). Активность СОД выражали в усл. ед./мг белка.

Определение активности миелопероксидазы (МПО) проводили по методу S.J. Klebanoff (1971), описанному М.Г. Шафран и О.Н. Лызловой (1975). Результаты выражали в усл. ед./мг белка.

Определение активности ACT, AJTT, щелочной фосфатазы (ЩФ) проводили по унифицированным методикам: ACT, AJTT - по методу Райтмана-Френкеля (1957) (активность выражали в мм-ч/л), щелочной фосфатазы - по гидролизу п-нитрофенилфосфата (Меньшиков В.В., 1987), активность которой выражали в Ед/л.

Результаты собственных исследований

Наряду с биохимическими показателями, отражающими функциональное состояние внутренних органов, в частности печени, такими, как ЩФ, ACT и AJIT, было проведено определение показателей, характеризующих состояние АОЗ у детей: первой линии защиты - СОД-каталаза, второй линии защиты - МПО, и третьей линии защиты -глутатион-зависимых ферментов: общего глутатиона, ГР и ГПО.

Для определения выраженности гипоксических сдвигов определяли уровни лактата и пирувата в сыворотке крови и слюне.

При исследовании крови детей с НЦЦ и контрольной групп выявлено статистически достоверное увеличение содержания лактата в клинической группе на 102,5%. Уровень ПВК в крови у детей с НЦД достоверно снижен по сравнению с контрольной группой на 40,7%, что, возможно, обусловлено усилением восстановления в лактат в условиях гипоксии (рис. 1).

%

Рис.1. Уровень ла1сгата и пирувата в сыворотке крови у детей с НЦД

202,5 *

220 200180160 140120100806040' 20

100 /-7]

59,3

*

о

Лактат

ПВК

□ Контрольная группа

■ Клиническая группа

Примечание. * различия статистически достоверны

В клинической группе детей, больных НЦЦ, выявлено статистически достоверное увеличение активности СОД на 67,3% по сравнению с контрольной группой. При обследовании этих детей выявлено, что уровень активности каталазы в клинической группе превышает показатели в контрольной группе лишь на 8,57% (рис. 2) и носит недостоверный характер.

Каталаза, являясь синергистом СОД в клетке, препятствует накоплению перекиси водорода - ингибитора СОД (Hodgson Е.К., Fridovich I., 1975). Изменения каталазы статистически не достоверны.

Активность ГПО в сыворотке крови клинической группы оказалась достоверно повышенной на 35,57% по сравнению с контрольной группой. Напротив, активность ГР в сыворотке крови клинической группы детей с НЦД оказалось ниже, чем в контрольной группе на 27,8%.

Антиоксидантный механизм действия различных линий защиты несколько отличается. Так, в отличие от каталазы, активной только в отношении перекиси водорода, ГПО менее специфична и разрушает не только гидроперекиси ВЖК, которые могут образовываться в небольшом количестве под действием 02' и НО', но и принимает участие в обезвреживании пероксинитрита.

Рис.2. Активность каталазы и СОД в сыворотке крови у детей с НЦД

167,3*

О/ 1

150-1 1401301201101009080706050403020100-

Каталаза СОД

□ Контрольная группа ■ Клиническая группа

Примечание• * различия статистически достоверны.

Активность МПО в клинической группе детей превышала на 15,9% содержание МПО в контрольной группе детей. При этом изменения МПО носят статистически достоверный характер. Обращает на себя внимание,

что изменения фермента МПО достигли наивысших значений в клинической и контрольной группах детей 12-14 лет.

В организме человека МПО - единственный фермент, генерирующий в физиологических условиях НОС1 (гипохлорную кислоту), которая играет огромную роль в повреждении эндотелия сосудов при атерогенезе. А литературные данные свидетельствуют о том, что липидные пятна появляются в эндотелии сосудов уже в детском возрасте (Климов А.Н., Никульчева Н.Г., 1999).

Повышение активности МПО можно расценивать как усиление второй линии защиты от токсических производных Ж)-радикала, а также как усиление микробицидного потенциала организма.

Рис.3. Активность МПО в сыворотке крови у детей с НЦД

%

100

140-1

120- А-

1008060-

ад-

го- -

о--

МПО

□ Контрольная группа ■ Клиническая группа

115,9*

Примечание• * различия статистически достоверны

Таким образом, анализируя вышеизложенные факты, можно заметить, что накопление лактата в сыворотке крови у детей с НЦД свидетельствует о развитии гипоксии в тканях при НЦЦ и переходе на анаэробный путь энергетического обмена, что является важнейшим компенсаторно-приспособительным механизмом при кислородной недостаточности.

Известно, что следствием гиперлактацидемии является метаболический ацидоз, являющийся дополнительным повреждающим фактором. Надо полагать, что выявленные нами метаболические сдвиги при НЦД являются отражением изменений, характерных для тканевой и циркуляторной гипоксии. Повышение активности СОД связано с усилением дисмутации Ог. Однако при этом нарушается согласованное действие паттерна ферментов первой линии защиты: СОД - каталаза, так, активность СОД значительно увеличивается, а в связи с недостаточной активацией каталазы по сравнению с СОД могут накапливаться неустраненные кислородные радикалы, оказывая токсическое действие на

мембрану клетки. Параллельно нарушается координированная деятельность глутатионзависимых ферментов. Так, выявленное снижение активности фермента ГР, вероятно, является причиной дефицита восстановленного глутатиона и накопления его окисленной формы, что приводит к дисбалансу в работе всей глутатион-зависимой ферментативной системы.

В связи с выявленными сдвигами в организации работы разных уровней АОС и изменениями клинико-биохимических показателей (повышение активности ACT, AJIT, ЩФ) можно сделать вывод о наличии определенной взаимосвязи между активностью ферментов антирадикальной защиты, ферментами, отражающими функциональное состояние печени (рис. 4), и степенью изменения кислородного режима организма ребенка.

Как видно из рис. 4, прослеживается выраженная связь между степенью нарастания гипоксических сдвигов (судя по росту уровня лактата), активацией СОД и гиперферментемией со стороны ACT.

AJIT и ACT являются стандартизированными маркерами цитолиза. В гепатоцитах ACT больше, чем AJ1T, и представлен он, в основном, митохондриальной изоформой. Повышение активности ACT, по-видимому, является следствием значительного гипоксического воздействия на клеточные и субклеточные мембраны.

Применение слюны в качестве биологического материала для биохимических исследований, особенно в детской практике, представляется нам наиболее обоснованным, учитывая простоту и неинвазивность методики. На основании анализа полученных нами ранее данных перспективным представляется определение в слюне у детей с НЦЦ: уровня лактата и ПВК, активности СОД, каталазы, ферментов системы глутатиона (особенно ГПО), МПО. В литературе мы не нашли сведений по данному вопросу. В слюне присутствуют свободные радикалы, которые образуются в процессе антибактериальной защиты и ферментативным путем в пероксидазных реакциях разной субстратной специфичности. Имеются единичные сведения о катапазной и глутатионредуктазной активности слюны.

Установлено, что содержание лактата в слюне клинической группы детей значительно повышено - на 53,6%. Уровень же ПВК в слюне детей с НЦД достоверно снижен по сравнению с контрольной группой на 61,6%. Такой резкий рост уровня лактата при значительном снижении ПВК позволяет полагать, что при НЦД выражены нарушения кислородного режима в организме, и по уровню лактата в ротовой жидкости можно судить о выраженности гипоксии. В этой связи являлось целесообразным проведение корреляционного анализа средних значений лактата и ПВК в слюне и сыворотке крови детей исследуемой группы (табл. 1).

Рис. 4. Взаимоотношения между показателями гипоксического состояния, антиоксидантными ферментами и кпинико-биохимическими показателями крови у

детей сНЦД

%

250

202,5 *

100

Лактат ПВК Каталаза СОД ACT АЛТ

Я Контрольная группа ■ Клиническая группа

Примечание: * различия статистически достоверны.

ЩФ

Таблица 1

Коэффициент корреляции меэду биохимическими показателями СРО-АОС в крови и слюне детей клинической группы___

Показатели Коэффициент корреляции (г)

Кровь

ПВК, мкмоль/мл / СОД, усл. ед./мг белка -0,88***

Лактат, мкмоль/мл / СОД, усл. ед./мг белка 0,90***

Общий глутатион, мкмоль/мг белка / ПВК, мкмоль/мл 0,87***

ГР, мкмоль/мг белка / ГПО, МЕ/мг белка -0,79***

Слюна

ПВК, мкмоль/мл / СОД, усл. ед./мл белка -0,94***

Лактат, мкмоль/мл / СОД, усл. ед./мл белка 0,66**

ГПО, мкмоль/мг белка / СОД, усл. ед./мг белка 0,84***

Кровь - слюна

ПВК, мкмоль/мл 0,99***

Лактат, мкмоль/мл 0,52**

СОД, усл. ед./мг белка 0,88***

ГПО, мкмоль/мг белка 0,89***

Примечания, нет достоверных различий;

* р <0,05; ** р < 0,01; *** р < 0,001

Нами установлены выраженные изменения параметров системы АОЗ в слюне. Наблюдается разобщение деятельности синергистов первой линии защиты от свободных радикалов, происходит недостаточное усиление активности каталазы (на 8,2%) по сравнению с СОД (на 59,4%).

Активность ГР в слюне и в крови имеет однонаправленную тенденцию к снижению, но выраженную в разной степени: в слюне снижение произошло на 25%, в сыворотке крови - на 27,8%.

Полученный результат указывает, с одной стороны, на важную патогенетическую значимость глутатионзависимого участка АОС, а с другой - несет информацию диагностической направленности. Повышение уровня активности ГПО в слюне детей с НЦД (на 35,5%), соответствующее повышению активности в сыворотке крови (35,6%), свидетельствует о диагностически значимой изменчивости данного фермента в слюне. Доказано, что уровень лактата в большей степени повышается в сыворотке крови детей с НЦД (на 102,5%), а в слюне - на 53,6%, а снижение содержания ПВК оказывается более выраженным в слюне: в слюне понижение на 61,6%, а в крови - на 40,2%. Такой

дисбаланс между снижением ПВК и повышением лактата в слюне детей с НЦД демонстрирует картину выраженности анаэробного гликолиза при развитии гипоксии у детей с НЦ Д.

Активность МПО в слюне детей с НЦД оказалась статистически достоверно повышенной по сравнению с контрольной группой на 24,0%.

Выявлен параллелизм в изменении активности СОД и уровнем лактата (рис. 5). Такое повышение уровня лактата (на 53,6%) является проявлением гипоксии, а еще более резкий рост активности СОД (на 59,4%) можно трактовать как компенсаторный механизм в ответ на развитие гипоксии.

Рис. 5. Изменение активности СОД и уровня лактата в слюне детей с НЦД

СОД Лактат

□ Контрольная группа ■ Клиническая группа

Примечание * различия статистически достоверны

Подводя итоги анализа проведенного исследования слюны, можно высказать предположение о том, что полученные результаты имеют важное практическое и теоретическое значение.

В связи с вышеизложенным, представляется целесообразным выделить информативные критерии, имеющие прогностическое значение, оценить их перспективность для выделения группы риска.

В ходе математической обработки данных обнаружены сильные положительные корреляционные зависимости между показателями содержания лактата и уровнем СОД, а также концентрацией общего глутатиона и ПВК в крови. Одновременно отмечена отрицательная

корреляционная зависимость между уровнем ПВК и СОД, а также активностью ГР и ГПО в крови. Параллельно отмечена положительная корреляция средней степени выраженности между уровнем лактата и СОД, а также сильная положительная корреляция между содержанием ГПО и СОД в слюне при отрицательной корреляционной зависимости между содержанием ПВК и СОД в слюне.

При этом корреляционный анализ биохимических показателей крови и слюны продемонстрировал следующие закономерности: наличие сильной корреляции по показателям ПВК, СОД, ГПО при положительной корреляции средней степени выраженности по содержанию лактата (см. табл. 1).

Обнаруженные достоверные корреляции (сыворотка крови - слюна) по изученным показателям при НЦД у детей свидетельствуют о возможной перспективе и актуальности исследования слюны как альтернативного анализу крови биологического материала, с одной стороны, а с другой стороны - как носителя самостоятельной и дополнительной анализу крови информации. Таким образом, анализ изменения метаболических процессов в сыворотке крови и слюне при НЦД у детей позволяет четко определить наиболее информативные показатели, свидетельствующие о выраженности гипоксии, с одной стороны, и о состоянии ферментативного антиоксидантного звена - с другой. Такими наиболее информативными показателями оказались в крови: лактат, ПВК, СОД, в слюне: лактат, ПВК, СОД и ГПО.

Учитывая одинаковую направленность изменений в слюне и сыворотке крови уровня ПВК и лактата, можно полагать, что при определении вышеуказанных параметров в слюне можно судить о направленности обмена веществ и выраженности гипоксии. Наряду с этим, характер изменений ферментативного звена обмена глутатиона в слюне с большой вероятностью указывает на изменение состояния АОС.

Направленность изменений метаболических процессов в слюне по большинству показателей оказались практически такими же, как и в крови (увеличение активности каталазы, повышение активности СОД, повышение содержания глутатиона, снижение активности ГР, увеличение активности ГПО). Тем самым подтверждается многогранное значение исследования слюны в диагностическом и прогностическом аспекте при НЦ Д у детей.

Обнаруженные достоверные корреляции (сыворотка крови - слюна) по изученным показателям у детей свидетельствуют о возможности и актуальности анализа слюны как биологического материала в диагностических и прогностических целях при НЦД.

Полученные корреляционные коэффициенты свидетельствуют о том, что между изменениями метаболизма, интенсивностью перекисного окисления липидов и состоянием АОС имеются глубокие внутренние

связи. Другими словами, колебания величин физиологических показателей отражают наличие различных вариантов адаптации организма к окружающей среде, т.е. при НЦД формируется симптомокомплекс, отражающий аварийную перестройку всех систем организма, которые демонстративно проявляются на молекулярном уровне.

Отслеживая динамику СРО-АОС в сыворотке крови и слюне в разных возрастных группах детей, можно выявить общие закономерности и различия в направленности биохимических изменений в зависимости от возраста.

Так, в клинической и контрольной группах детей общим для всех возрастных диапазонов является характер изменений ГПО и МПО. Анализируя изменения активности ферментов системы глутатиона, необходимо отметить, что наиболее статистически значимые изменения активности фермента ГПО наблюдались в возрастной группе детей 15-17 лет. Эти результаты отражают период становления этой системы защиты. Как известно, ГПО является ключевым ферментом в защите клеток как в норме, так и в условиях окислительного стресса. Изменения активности фермента МПО достигли наивысших значений в возрастной группе детей 12-14 лет как в клинической группе, так и в группе сравнения (значения средних показателей составили в сыворотке крови 16,72 ± 0,32 и 23,16 ± 2,00 мкмоль/мл; в слюне соответственно 42,35 ± 2,63 и 35,9 ± 2,5 мкмоль/мл).

Основываясь на полученных данных, можно отметить, что у детей с НЦД возрастная индивидуальность характеризуется несбалансированностью молекулярных механизмов неспецифической резистентности в возрасте 12-14 лет, в то время как в 15-17 лет защитные молекулярные механизмы, в том числе и АОЗ, достигают тех значений, которые необходимы для поддержания гомеостаза. Суммируя все вышеизложенное, можно отметить, что при гипоксии, лежащей в основе НЦД, у детей всех обследованных групп, имеет место усиление процессов СРО, что подтверждается данными A.A. Сависько (1994).

Итак, анализ изменения исследуемых параметров в сыворотке крови и слюне при НЦД у детей позволяет четко определить наиболее информативные показатели, свидетельствующие, с одной стороны, о выраженности гипоксии, а с другой - о состоянии ферментативного антиоксидантного звена. Такими наиболее информативными показателями для выявления НЦД оказались изменения уровня лактата, ПВК, СОД в сыворотке крови и слюне, что позволяет включить эти параметры в алгоритм обследования детей при диагностическом мониторинге.

Выводы

1. Во всех возрастных группах детей с НЦД выявлены изменения процессов АОЗ клетки, заключающиеся в нарушении согласованного действия паттерна ферментов первой линии защиты СОД-каталаза и координации работы ферментативной системы обмена глутатиона.

2. По характеру метаболических сдвигов в слюне можно выделить четыре группы детей, которые отражают различные особенности взаимосвязи между кислородным режимом клетки и активностью исследуемых ферментов.

3. Формирование процесса развития НЦД сопряжено с накоплением лактата в сыворотке крови и слюне детей, снижением уровня ПВК, что свидетельствует о развитии тканевой гипоксии.

4. Повышение активности МПО в клинической группе детей с НЦД можно расценивать, с одной стороны, как усиление второй линии защиты от токсических производных N0-радикала, а с другой, - как свидетельство напряжения работы кислородзависимого микробицидного потенциала организма.

5. У детей с НЦД выявлены коррелятивные статистически достоверные изменения между активностью ферментов антирадикальной защиты, ферментами, отражающими функциональное состояние печени, и степенью изменения кислородного режима организма ребенка.

6. Обнаруженные достоверные корреляции «сыворотка крови - слюна» по изученным показателям у детей свидетельствуют о перспективности анализа слюны как информативного и доступного биологического материала для диагностики НЦД. На основании отбора биохимических критериев (лактат, ПВК, СОД) разработан способ диагностики НЦД.

Практические рекомендации

1. Степень изменения уровня лактата, ПВК и активности СОД в слюне детей при проведении массовых профилактических осмотров позволяет диагностировать ранние проявления НЦД. Основным преимуществом такого метода диагностики является его неинвазивность, простота сбора материала и доступность. Учитывая несбалансированность молекулярных механизмов неспецифической резистентности, рекомендуется всех детей в возрасте 12-14 лет протестировать на выявление групп риска по НЦД.

2. При проведении массовых медицинских осмотров у детей производят забор слюны в количестве приблизительно 1,0 мл, в ней определяют уровень лактата, ПВК и активность СОД. При выявлении повышения уровня лактата по сравнению с нормой, снижения уровня ПВК по сравнению с нормой и повышения активности СОД по сравнению с нормой диагностируют доклиническую стадию заболевания у детей.

Список печатных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Нагорная Г.Ю., Микашинович З.И., Ставиский И.М. Значение определения ферментов сыворотки крови и слюны для оценки функционального состояния ЖКТ у детей с нейроциркуляторной дистонией // Тез. науч. работ. Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии. Т. 3, № 2. Томск, 2004. С. 265.

2. Нагорная Г.Ю., Микашинович З.И., Ставиский И.М. Ферменты сыворотки крови как критерий оценки функционального состояния ЖКТ у детей с нейроциркуляторной дистонией // Тез. науч. работ. IX Российская гастроэнтерологическая неделя. Москва, 2003. С. 444.

3. Способ диагностики нейроциркуляторной дистонии (заявка № 2005111311/15).

Список условных сокращений

А 03 - антиоксидантная защита

АОС - антиоксидантная система

ГПО - глутатионпероксидаза

ГР - глутатионредуктаза

ИБС - ишемическая болезнь сердца

МПО - миелопероксидаза

НЦЦ - нейроциркуляторная дистония

ПВК - пировиноградная кислота

СОД - супероксидцисмутаза

СРО - свободнорадикальное окисление

ЩФ - щелочная фосфатаза

Подписано к печати 9.09.05 г. Печать цифровая. Бумага офсетная. Гарнитура «Тайме». Формат 60x84/16 «С» 282. 0бъем1,0 уч.-изд -л. Заказ № 631. Тираж 100 экз. Отпечатано в КМЦ «КОПИЦЕНТР» 344006, г Ростов-на-Дону, ул Суворова, 19, тел 247-34-88

*¿Í65 5¿

РНБ Русский фонд

2006-4 12865

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Нагорная, Галина Юрьевна

Список условных сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Эпидемиологические аспекты НЦД у детей

1.2. Особенности патогенеза НЦД у детей

1.3. Изменения метаболических параметров крови у детей при НЦД

1.4. Роль биохимического исследования слюны в диагностике заболеваний

1.5. Характеристика ферментов АОЗ и клинико-диагностических маркеров соматической патологии

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Клинический материал

2.2. Биохимические методы исследования сыворотки крови и слюны

Глава 3. Метаболические изменения в сыворотке крови у детей с

3.1. Кровь как биологический материал для исследования ферментативного звена АОС

3.2. Содержание лактата и ПВК в сыворотке крови у здоровых детей и детей с НЦД

3.3. Активность каталазы и СОД в сыворотке крови у здоровых детей и детей с НЦД

3.4. Содержание общего глутатиона и ферментов обмена глутатиона в сыворотке крови у здоровых детей и детей с

3.5. Активность МПО в сыворотке контрольной и клинической групп детей с НЦД

3.6. Содержание ACT и AJIT, ЩФ в сыворотке крови у здоровых детей и детей с НЦД

3.7. Сравнительный анализ активности ферментов АОЗ и ферментов-маркеров соматической патологии

3.7.1. Активность СОД и уровень лактата в сыворотке крови у здоровых детей и детей с НЦД

3.7.2. Активность СОД и ACT в сыворотке крови у здоровых детей и детей с НЦД

3.7.3. Активность каталазы и ГПО в сыворотке крови у здоровых детей и детей с НЦД

Глава 4. Метаболические изменения в слюне у детей с НЦД

4.1. Слюна как биологический материал для исследования ферментативного звена АОС

4.2. Уровень лактата и ПВК в слюне у здоровых детей и детей с НЦД

4.3. Активность каталазы и СОД в слюне у здоровых детей и детей с НЦД

4.4. Уровень общего глутатиона и активность ферментов обмена глутатиона в слюне у здоровых детей и детей с НЦД

4.5. Активность МПО в слюне у здоровых детей и детей с НЦД

4.6. Активность каталазы и ГПО в слюне у здоровых детей и детей с НЦД

4.7. Сравнительный анализ изменений активности СОД и уровня лактата в слюне у здоровых детей и детей с НЦД

Глава 5. Корреляционный анализ биохимических показателей сыворотки крови и слюны

Глава 6. Особенности метаболических процессов в сыворотке крови и слюне у детей с НЦД в зависимости от возраста

Введение Диссертация по биологии, на тему "Антиоксидантная система сыворотки крови и слюны детей при нейроциркуляторной дистонии"

Актуальность проблемы НЦД состоит также и в том, что этот синдром может предшествовать развитию очень многих заболеваний, относящихся, в первую очередь, к группе полигенно наследуемых, составляющих 90-95% всей хронической патологии взрослого населения (Вельтищев Ю.Е., 1984; Клюева С.К., 1990). В отличие от моногенных наследственных болезней, развивающихся на основе мутации единственного гена, полигенно наследуемые болезни обусловлены суммарным (аддитивным) эффектом нескольких малых генных мутаций при неблагоприятном влиянии факторов внешней среды (питание, стрессы, климатические условия, инфекции и т.д.). С этим связана их сложная многофакторная природа и неподчинение при наследовании классическим законам Менделя (Вельтищев Ю.Е., 1984; Ростовцев В.Н., 1986).

Вегетативные нарушения берут свое начало преимущественно в детском возрасте (Малая JI.T., Волков В.И., 1978; Клиорин А.И., 1981; Мазо Р.Э., Надеждина С.А., 1985; Калоева Э.Д., 1989а, 19896). НЦД можно рассматривать как состояние, отражающее особенности этапов развития ребенка в условиях современной окружающей среды, т.е. НЦД - «болезнь развития».

Данные свидетельствуют о том, что при нейроциркуляторных расстройствах у детей в патологический процесс вовлекается весь организм, а не только лишь сердечно-сосудистая и вегетативная нервная система. В работах последних лет приведены неоспоримые доказательства «полиор-ганности» поражений при НЦД у детей (Середа Ю.В., Шабалов Н.П., 1999).

Число здоровых детей в различных регионах России сократилось до 8-10%. Как подчеркнул в своем докладе на IX Конгрессе педиатров (2004) Председатель Союза педиатров России академик РАМН A.A. Баранов, приоритетными научными исследованиями фундаментального и прикладного характера являются в т.ч. следующие: дальнейшее изучение механизмов функционирования физиологических систем здорового и больного ребенка, особенно в критические периоды роста и развития, ответных реакций организма ребенка на острый и хронический стресс.

На X Конгрессе педиатров «Пути повышения эффективности медицинской помощи детям» (2005) наряду с вопросами обсуждения клинических рекомендаций по бронхиальной астме, атопическому дерматиту, ставились вопросы методологии оценки состояния здоровья детей.

Морфо-функциональные изменения жизненно важных органов и систем, несомненно, приводят к гормонально-метаболическим сдвигам. Это, в свою очередь, провоцирует изменения общей и специфической реактивности организма, что сопровождается нарушением компенсаторно-адаптивных механизмов и ведет к формированию стойкой органной патологии в процессе взросления организма.

Несмотря на то, что с момента описания «синдрома раздраженного сердца» у молодых солдат в США прошло уже свыше 100 лет, в настоящее время многие аспекты патогенеза данного заболевания остаются недостаточно изученными. Так, в частности, в доступной литературе отсутствуют сведения о состоянии ферментативного звена антиоксидантной системы у детей с НЦД.

Антиоксидантная система (АОС) является показателем состояния адаптивно-компенсаторного потенциала организма, поэтому представляется целесообразным выяснить особенности антиоксидантных ферментных процессов у детей с НЦД, определить их взаимосвязь с биохимическими показателями, характеризующими функциональное состояние внутренних органов. С другой стороны, необходим поиск доступных, неинвазивных технологий, позволяющих повысить диагностическую и прогностическую информативность лечебно-профилактического процесса.

В настоящее время экспертами ВОЗ разработан перечень факторов риска развития сердечно-сосудистых заболеваний, а в отношении оценки степени дисфункциональных расстройств внутренних органов, формирующихся уже в детском возрасте, четкой концепции нет.

В связи с этим нам представляется актуальным поиск специфичных и чувствительных биохимических критериев, позволяющих своевременно выявлять потенциально устранимые функциональные нарушения со стороны висцерально-соматических органов и систем, к тому же являющихся диагностической частью протоколов ведения больных с данной нозологией.

Целью исследования явилось создание системы комплексной биохимической оценки возникновения и прогрессирования НЦД у ребенка на основе анализа функционирования ферментативных звеньев антиокси-дантной защиты (АОЗ). Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи исследования:

1. Определить диапазоны нормативных значений показаний функционирования основных звеньев АОЗ в крови и ротовой жидкости у детей разных возрастных групп.

2. Выделить группы детей с доминирующей соматической дисфункцией по данным клинико-лабораторного обследования с учетом возраста.

3. Определить выраженность гипоксических сдвигов у детей с НЦД в разных возрастных группах по данным изучения уровня лактата и пирувата в сыворотке крови и слюне.

4. Установить характер изменений показателей системы глутатиона у детей разных возрастных групп с НЦД в сравнении со здоровыми.

5. Определить активность супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы в исследуемых группах детей.

6. Выявить характер изменения миелопероксидазы (МПО), характеризующей состояние антибактериальной резистентности детского организма.

7. Разработать критерии, позволяющие проводить донозологическую диагностику у детей, угрожаемых по развитию НЦД.

Научная новизна работы

В работе впервые проведена комплексная сравнительная характеристика активности антиоксидантных систем в слюне и сыворотке крови детей в норме и при НЦД.

Впервые установлены корреляционные взаимосвязи между показателями АОЗ сыворотки крови и слюны и их динамика у этих детей с учетом выраженности соматической дисфункции в различных возрастных группах.

Обнаруженные нами выраженные корреляционные связи между ан-тиоксидантными системами крови и ротовой жидкости указывают на вероятную общность некоторых механизмов организации защитных реакций в слюне и крови при вегетативной дисфункции.

Впервые показано, что слюна по ряду показателей АОЗ является более предпочтительным для диагностических целей биологическим материалом по сравнению с сывороткой крови у детей с НЦД с доминирующей соматической дисфункцией.

Научно-практическая значимость работы

Впервые доказана у детей с НЦД перспектива использования слюны как биологического материала для оценки эффективности лечебных мероприятий и диагностического процесса.

Впервые в работе проведен отбор информативных биохимических критериев, позволивших упростить и уточнить прогностические и диагностические схемы лечебно-профилактического процесса у детей с НЦД.

Впервые показано, что существует зависимость между ферментами антирадикальной защиты и ферментами, определяющими функциональное состояние печени у детей с НЦД, что позволило расширить наши представления о биохимической составляющей патогенеза НЦД в детской популяции.

Впервые уточнены возможности исследования слюны у детей с НЦД для оценки активности АОС защиты у детей с соматической доминантой.

Впервые установлены взаимоотношения между активностью АОС в сыворотке и слюне детей с НЦД, что может способствовать более широкому использованию слюны для их оценки, для упрощения и уточнения прогностических и диагностических схем лечебно-профилактического процесса у детей с НЦД с выраженной соматической доминантой.

Полученные в работе данные позволяют оценить роль антиокси-дантного статуса в комплексе метаболических изменений, возникающих при формировании дистресс-синдрома у детей с НЦД, и решить следующие задачи в клинической практике:

Применение чувствительных прогностических биохимических маркеров возникновения и прогрессирования НЦД в детской популяции.

Формирование дифференцированного подхода к биохимической диагностике НЦД у детей разных возрастных групп.

Использование фармакотерапии, дифференцированной на основе данных биохимической диагностики.

Наряду с этим, практическая значимость работы состоит в следующем:

Внедрение в практику

Степень изменения уровня лактата, пировиноградной кислоты и активности СОД в слюне у детей при проведении массовых профилактических осмотров позволяют диагностировать ранние проявления НЦД- Основным преимуществом такого метода диагностики является его неин-вазивность, простота сбора материала и его доступность.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Выявлена взаимосвязь между изменениями активности ферментов антирадикальной защиты, ферментами, отражающими соматическую дисфункцию и степенью изменения кислородного режима организма ребенка.

2. Возрастные особенности характеризуются усилением анаэробной ориентации обмена веществ в группе детей 12-14 лет и дисбалансом различных линий ферментативной АОС.

3. В ротовой жидкости у детей, страдающих НЦД, выявлено изменение активности ферментов АОЗ в сравнении со здоровыми детьми.

4. Установлено, что характер метаболических нарушений в слюне сопряжен с тяжестью течения НЦД, разработан способ диагностики ранних проявлений НЦД.

Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены на IX Российской гастроэнтерологической неделе (20-23 октября 2003 г., г. Москва) и на конференции кафедры общей и клинической биохимии № 1 РостГМУ (29 июня 2005 г., г. Ростов-на-Дону).

Публикации

По материалам данного исследования опубликовано 2 печатных работы. Подана заявка на выдачу патента на изобретение под названием «Способ диагностики нейроциркуляторной дистонии», зарегистрированная под №2005111311/15.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, 6 глав, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, содержащего 87 отечественных и 59 иностранных источников. Объем диссертации - 108 печатных страниц ф. А4, включая 17 таблиц и 15 рисунков.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Нагорная, Галина Юрьевна

ВЫВОДЫ

1. Во всех возрастных группах детей с НЦД выявлены изменения процессов АОЗ клетки, заключающиеся в нарушении согласованного действия паттерна ферментов первой линии защиты СОД-каталаза и координации работы ферментативной системы обмена глутатиона.

2. По характеру метаболических сдвигов в слюне можно выделить четыре группы детей, которые отражают особенности взаимосвязи между кислородным режимом клетки и активностью исследуемых ферментов.

3. Формирование процесса развития НЦД сопряжено с накоплением лактата в сыворотке крови и слюне детей, снижением уровня ПВК, что свидетельствует о развитии тканевой гипоксии.

4. Повышение активности МПО в клинической группе детей с НЦД можно расценивать, с одной стороны, как усиление второй линии защиты от токсических производных ЫО-радикала, а с другой, - как свидетельство напряжения работы кислородзависимого микробицидного потенциала организма.

5. У детей с НЦД выявлены коррелятивные статистически достоверные изменения между активностью ферментов антирадикальной защиты, ферментами, отражающими функциональное состояние печени, и степенью изменения кислородного режима организма ребенка.

6. Обнаруженные достоверные корреляции «сыворотка крови - слюна» по изученным показателям у детей свидетельствуют о перспективности анализа слюны как информативного и доступного биологического материала для диагностики НЦД. Разработан способ диагностики НЦД.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Степень изменения уровня лактата, ПВК и активности СОД в слюне детей при проведении массовых профилактических осмотров позволяет диагностировать ранние проявления НЦД. Основным преимуществом такого метода диагностики является его неинвазивность, простота сбора материала и доступность. Учитывая несбалансированность молекулярных механизмов неспецифической резистентности, рекомендуется всех детей в возрасте 12-14 лет протестировать на выявление групп риска по НЦД.

2. При проведении массовых медицинских осмотров у детей производят забор слюны в количестве приблизительно 1,0 мл, в ней определяют уровень лактата, ПВК и активность СОД. При выявлении повышения уровня лактата по сравнению с нормой, снижения уровня ПВК по сравнению с нормой и повышения активности СОД по сравнению с нормой диагностируют доклиническую стадию заболевания у детей.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Нагорная, Галина Юрьевна, Ростов-на-Дону

1. Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И. Человек и противоокислительныевещества. JL: Наука, 1985.

2. Афанасьев И.Б. Анион-радикал кислорода О' в химических ибиологических процессах // Успехи хим. 1979. - Т. 48, № 6. - С. 977-1014.

3. Афанасьев И.Б. Свободные кислородные радикалы и процессыжизнедеятельности // В сб.: Кислородные радикалы в химии и биологии. Минск: Наука и техника, 1984. - С. 13-29.

4. Бабаева А.Г., Шубникова Е.А. Структура, функция и адаптивныйрост слюнных желез. — М.: Медицина, 1979.

5. Бабаскин М.П. Способ определения пировиноградной кислоты вкрови. A.C. № 877436, СССР. -Бюл. № 40.- 1981.

6. Барабой В.А., Брехман И.И., Голотин В.Г., Кудряшов Ю.Б.

7. Перекисное окисление и стресс. СПб.: Наука, 1992. — 142 с.

8. Белоконь H.A., Кубергер М.Б. Болезни сердца и сосудов у детей.1. М.: Медицина, 1987.

9. Беляева JIM. Основы прогнозирования эссенциальной артериальнойгипертензии у детей и подростков: Автореф. дис. . д-ра мед. наук.-Л., 1990.-36 с.

10. Беляева Л.М. Современные представления о генезе вегетососудистых дистоний у детей // Здравоохр. Беларуси. 1996. - № 1.-С. 7-9.

11. Беляева Л.М., Жданович Э.Я. Патогенетические и средовые факторыриска предрасположенности к ИБС у детей с наследственной отягощенностью // Здравоохр. Беларуси. 1994. - № 12. - С. 23-27.

12. Бурлакова Е.Б., Губарева Е.А., Архипова Г.В., Рагинский В.А.

13. Модуляция перекисного окисления липидов биогенными аминами в модельных системах // Вопр. мед. хим. — 1992. — № 2. С. 17-20.

14. Варенко Ю.С., Шевченко В.Г., Жавниренко Л.П. Методика отборапроб слюны для определения концентрации и дебита лизоцима // Лаб. дело. 1987. -№ 5. - С. 366-370.

15. Вейн A.M. Вегетативные расстройства: клиника, лечение,диагностика / Под ред. A.M. Вейна. — М.: Медицинское информационное агентство, 1998. 752 с.

16. Вейн A.M., Колосова O.A., Варакин Ю.Я., Табеева Г.Р.

17. Эпидемиология вегетативных расстройств — синдрома вегетативной дистонии и особенности ее при церебральной патологии // Журн. невропатол. и псих. им. С.С. Корсакова. - 1991. -Т. 91,№ 11.-С. 11-14.

18. Вейн A.M., Молдавану И.В. Нейрогенная вентиляция. Кишинев,1988.-181 с.

19. Вельтищев Ю.Е. Наследственное предрасположение к болезням,диатезы и пограничные состояния у детей // Педиатрия. 1984. -№ 12.-С. 3-9.

20. Виноградов А. Д. Свободнорадикальные процессы и продуктыазотистого катаболизма в крови при гипоксии и гипероксии: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Ростов-на-Дону, 1994. — 22 с.

21. Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев А.И. и др. Свободныерадикалы в живых системах // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. 1991. - Т. 29. - С. 1-249.

22. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов вбиологических мембранах. М.: Наука, 1972. - 252 с.

23. Волков B.C., Цикулин А.Е. Некоторые особенностипсихосоматических состояний у больных гипертонической болезнью // Тер. архив. 1985. - № 10. - С. 108-110.

24. Воскресенский О.Н., Жутаев И.А., Бобырев В.Н., Безуглый Ю.В.

25. Антиоксидантная система, онтогенез и старение // Вопр. мед. хим.- 1982. -№ 1.-С. 14-27.

26. Габович Р.Д., Припутина JI.C. Гигиенические основы охраныпродуктов питания от вредных химических веществ. — Киев: Здоровье, 1987. 247 с.

27. Гавриков К.В., Глазачев О.С. Динамика показателей вегетативнойрегуляции у детей шести лет в условиях эмоционального напряжения поступления в школу. — Волгоград; М., 1989. — С. 18.

28. Гоготов М.Н., Кулакова С.М. Функции и свойствасупероксидисмутаз микроорганизмов // Успехи микробиол. — 1981.- № 6. С. 30-55.

29. Горошинская И.А. Дезаминирование аденозинмонофосфата в мозгекрыс при гипероксии, гипоксии и холодовом стрессе // Биохимия.- 1992. Т. 57, № 2. - С. 220-225.

30. Горошинская И.А. Роль моноаминооксидазы в реакции организма наэкстремальные воздействия: Дис. . д-ра биол. наук. М., 1988. -411 с.

31. Горошинская И.А., Могильницкая JI.B. Интенсивность ПОЛ припериодической гипоксии и защитном действии пиразидола // Биохимия. 1994. - Т. 59, № 7. - С. 974-982.

32. Горошинская И.А., Могильницкая Л.В., Немашкалова A.A.,

33. Ходакова A.A. Состояние мембранных ферментов клетки при гипоксии и защитный эффект пиразидола // Биохимия. 1993. - Т. 58, № 1.-С. 62-69.

34. Грубан 3., Рехцигл М. Микротельца и родственные им структуры. —1. М.: Мир, 1972.-310 с.

35. Густинов Т.М., Насибов Э.М., Джафаров А.И. Участие селена врегуляции перекисного оксиления липидов биомембран и активность глутатионпероксидазы // Биохимия. 1990. — Т. 55, вып. З.-С. 499-508.

36. Зенков Н.К., Меныцикова Е.Б. Активированные кислородныеметаболиты в биологических системах // Успехи соврем, биол. — 1993.-Т. 113, вып. З.-С. 286-296.

37. Ивницкий Д.М., Ситдыков P.A., Плескановская С. А.

38. Электрохимический метод определения пероксидазы в слюне // Лаб. дело.-1991.- №. 3. С. 31-34.

39. Каган B.C. Механизмы структурно-функциональной модификациибиомембран при перекисном окислении липидов: Автореф. дис. . докт. мед. наук. М., 1981. - 48 с.

40. Калоева Э.Д. Некоторые аспекты нейрогуморальной регуляциипервичной артериальной гипотензии у детей // Экспериментально-клинический анализ механизмов действия гормонов: Сб. научн. тр. -Краснодар, 1989а. С. 37-40.

41. Калоева Э.Д. Эпидемиология артериальной гипотензии у детейдошкольного возраста // Педиатрия. 19896. — № 2. - С. 55-57.

42. Калюжная P.A. Гипертоническая болезнь у детей и подростков. Л.,1980.

43. Карпищенко А.И. Медицинские лабораторные технологии идиагностика: Справочник / Под ред. проф. А.И. Карпищенко. -СПб.: Интермедика, 1999.

44. Киеня А.И., Афанасенко C.B., Сударенко C.B. Исследованиеактивной концентрации ионов йода в слюне школьников // Физиология развития человека: тезисы IV Всесоюзной конференции. М.: Изд-во Акад. пед. наук СССР, 1990. - 325 с.

45. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Обмен липидов и липопротеидов иего нарушения: Руководство для врачей. СПб.: Питер, 1999. -504 с.

46. Клиорин А.И. Атеросклероз в детском возрасте. Л.: Медицина,1981.-142 с.

47. Клюева С.К. Клинический полиморфизм и генетическаягетерогенность атеросклероза и ишемической болезни сердца // Тез. докл. 2 Всесоюзного съезда медицинских генетиков. М., 1990.-С. 195-196.

48. Конвей В.Д., Лукошкин A.B., Смирнова В.Б. О возможныхмеханизмах перекисного окисления липидов печени крыс в восстановительном периоде после механической асфиксии // Вопр. мед. хим. 1982. - Т. 28, № 4. - С. 42-46.

49. Копаладзе P.A., Гурова М.Ф. Влияние антенатальной гипоксии напроцессы переокисления липидов мембран развивающегося мозга крыс и возможности их коррекции. — М., 1984. — 9 с. (Деп. в ВИНИТИ 30.03.84 № 1785-84)

50. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.Е. Методопределения активности каталазы // Лаб. дело. 1988. - № 1. - С. 16-19.

51. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Биологическая роль глутатиона

52. Успехи соврем, биол. 1990. - Т. 110, вып. 1. - С. 20-33.

53. Кучеренко А.О. Свободнорадикальные процессы в крови и слюнелюдей при эмоциональном напряжении: Автореф. дис. . канд. биол. наук. 1998. - 23 с.

54. Ларкий Э.Г. Методы определения и метаболизм металлобелковыхкомплексов // Итоги науки и техники. Сер. Биологическая химия. — 1990.-Т. 41.

55. Левин А.М. Металлосодержащие соединения исвободнорадикальные процессы в сыворотке крови при изменениях кислородного режима организма: Дис. . канд. биол. наук. Ростов-на-Дону, 1988. - 159 с.

56. Мазо Р.Э., Надеждина С.А. Артериальная гипертензия у детей.

57. Минск: Наука и техника, 1985. 178 с.

58. Маколкин В.И., Аббакумов С.А. Нейроциркуляторная дистония впрактике терапевта. М: Медицина, 1985. - 185 с.

59. Маколкин В.И., Аббакумов С.А. Нейроциркуляторная дистония втерапевтической практике. — М., 1995.

60. Маколкин В.И., Аббакумов С.А., Сапожников A.A.

61. Нейроциркуляторная дистония. Чебоксары, 1995. - 250 с.

62. Малая Л.Т., Волков В.И. Ишемическая болезнь сердца у молодых.

63. Киев: Здоров'я, 1978. 454 с.

64. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных иишемических повреждений сердца. М.: Медицина, 1984. - 266 с.

65. Меерсон Ф.З., Архипенко Ю.В., Рожицкая И.Н. и др.

66. Противоположное влияние адаптации к непрерывной и периодический гипоксии на антиоксидантные ферменты // Бюл. экспер. биол. и мед. 1992. -№ 7. - С. 14-15.

67. Меньшиков В.В., Делекторская Л.Н., Золотницкая Р.П.

68. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник. — М.: Медицина, 1987. 364 с.

69. Меньшикова Е.Б., Зенков Н.К., Шерин С.М. Биохимияокислительного стресса. Оксиданты и антиоксиданты. -Новосибирск: Изд-во СО РАМН, 1994. С. 58-77.

70. Михайлов В.В., Русанова А.Г. Катехоламины в ткани слюнныхжелез, слизистой полости рта и в слюне при остром воспалении мягких тканей полости рта // Бюл. экспер. биол. и мед. 1993. — Т. 126, №7.-С. 44-45.

71. Михайлов В.В., Русанова А.Г. К механизму трофических влиянийслюнных желез на слизистую полости рта // Бюл. экспер. биол. и мед. 1993. - Т. 115, № 2. - С. 139-140.

72. Моин В.М. Простой и специфический метод определения активностиглутатионпероксидазы в эритроцитах // Лаб. дело. 1986. - № 12. - С. 724-727.

73. Наикин А.Н., Михайлов A.A., Кустикова Ю.Г. // Вопр. вирусол.1993. Т. 38, № 5. - С. 201-204.

74. Осадчая А.И. Сравнительная клинико-функциональная илабораторная характеристика гипертонической болезни и нейроциркуляторной дистонии: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Красноярск, 2001. С. 25.

75. Отева Э.А., Николаева A.A., Николаев К.Ю., Масленников А.Б.,

76. Пиковская Н.Б., Лифшиц Г.И. Синдром вегетососудистой дисфункции как интегральный показатель высокого риска развития сердечно-сосудистых заболеваний у лиц молодого возраста с отягощенной наследственностью // Тер. архив. — № 4. — 2000.-С. 31-34.

77. Петрович Ю.А. Проблемы нейростоматологии и стоматологии //

78. Бюл. симпозиума по «Биохимии слюны». — 1988. — № 2. С. 75.

79. Петрович Ю.А., Подорожная Р.П. Селеноэнзимы и другиеселенопротеиды, их биологическое значение // Успехи соврем, биол.-1981.-Т. 91, вып. 1.-С. 127-144.

80. Поколев Г.М. Нейроциркуляторная дистония. Н. Новгород: НГМИ,1994.-297 с.

81. Попова O.B, Беляева JI.M. Особенности исходного вегетативногофона у детей с наследственной отягощенностью по артериальной гипертензии // Здравоохр. Беларуси. 1992. - № 1. - С. 40-43.

82. Радышевская Т.Н. Особенности стоматологического статуса у детейс различными типами вегетативных регуляций: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Волгоград, 1999. 17 с.

83. Ростовцев В.Н. Генетика и диагноз. — Минск: Университетека, 1986.-189 с.

84. Рубенчик Б.Л, Костюковский Л.П, Меломед Д.Б. Профилактиказагрязнений пищевых продуктов канцерогенными веществами. — Киев: Здоров'я, 1983. 160 с.

85. Сависько A.A. Липидный спектр плазмы крови и мембранэритроцитов детей с различными типами нейроциркуляторной дистонии: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Ростов-на-Дону, 1994.-26 с.

86. Садекова С.И. Влияние гипоксии, гипербарической оксигенации и ихпоследовательного действия на микросомальное окисление и состояние мембран микросом: Дис. . канд. биол. наук. — Ростов-на-Дону, 1991.-140 с.

87. Саркисян О.Г. Особенности изменений метаболических процессовпри атрофических кольпитах и их коррекция: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Ростов-на-Дону, 2000. - 23 с.

88. Семченко В.В, Полуэктов Л.В, Конвей В.Д. Роль перекисногооксиления липидов в повреждении нейронов мозга при ишемии и в постишемическом периоде // Бюл. экспер. биол. и мед. 1983. -Т. 46, №7.-С. 12-14.

89. Середа Ю.В, Шабалов Н.П. Нейроциркуляторная дисфункция удетей: проблемы трактовки и диагностики // Тер. архив. 1999. — С. 16-21.

90. Сукманский О.И. Биологически активные вещества слюнных желез.-Киев, 1991.

91. Турбина Л.Г., Пузин М.Н., Окнин В.Ю., Козлов В.Ю. Вегетативнаярегуляция при пародонтите // Стоматология. — 1995. № 6. - С. 6971.

92. Удут В.В., Наумов С.А., Карпов А.Б. Лизоцим слюны в скрининге нарак желудка // Вопр. онкол. 1992. - Т. 38, № 2. - С. 177-181.

93. Успенский В.М., Галузо В.В. Некоторые типологическиеособенности секреторного аппарата желудка у здоровых и их роль в формировании гастродуоденальной патологии // Тер. архив. -1981.- № 10.-С. 58-61.

94. Фридович И. Радикалы кислорода, пероксид водорода и токсичностькислорода // В кн.: Свободные радикалы в биологии. Под ред. У. Прайора. -М.: Мир. - 1979. - Т. 1, гл. 6. - С. 272-314.

95. Часовникова Л.В., Формазюк В.Е., Сергиенко В.И., Кокряков В.Н.

96. Взаимодействие миелопероксидазы и дефензинов с монослоями липидов // Биохимия. 1992. - Т. 57, вып. 1. - С. 97-102.

97. Шафран М.Г., Лызлова С.Н. Очистка и некоторые свойствамиелопероксидазы лейкоцитов белых мышей // Вопросы мед. хим. 1975.-№6.-С. 629-633.

98. Юсупова Л.Б. О повышении точности определения активностиглутатионредуктазы эритроцитов // Лаб. дело. 1989. - № 4. - С. 19-21.

99. Adachi T., Ohta H., Yamada H. Quantitative analysis of extracellularsuperoxide dismutase in serum and urine by ELISA with monoclonal antibody // Clin. Chim. Acta. 1992. - Vol. 212. - P. 89-102.

100. Beauvais F., Michel L., Dubertret L. Exogenous nitric oxide elicitschemotaxis of neutrophils in vitro // J. Cell. Physiol. 1995. - Vol. 165.-P. 610-614.

101. Ben-Aryeh H., Gordon N., Stargel R. // Oral Surg. 1993. - Vol. 75. - №6.-P. 696-699.

102. Bjerrum O.W. Human neutrophic structure and function with specialreference to cytochrome b559 and 12-microglobulin // Danish Med. Bull. 1993. - Vol. 40. - P. 163-189.

103. Chance B., Sies H., Boveris A. Hydroperoxide metabolism in mammalianorgans // Physiol. Rev. 1979. - Vol. 59. - P. 527-605.

104. Chu F.-F., Doroshow J.H., Esworthy R.S. Expression, characterizationand tissue distribution of a new cellular selenium-dependent glutathione peroxidase // GSHPx-GI. J. Biol. Chem. 1993. - Vol. 268. - P. 25712576.

105. Da-Silva M.V., Dias-Camargo E., Vaz A.J. // Trans, roy. Soc. trop. Med.

106. Hyg. 1992. - Vol. 86. - № 5 - P. 560-561.

107. Dougherty H.W., Sadovski B.J., Baker E.E. A new iron-containingsuperoxide dismutase from Escherichia coli // J. Biol. Chem. 1978. -Vol. 253.-P. 5220-5223.

108. Ellman G.L. Tissue sulfhydryl groups // Arch. Biochem. Biophys. 1959.-Vol. 82.-P. 70-77.

109. Flohe L. Gluthathione peroxidase brought into focus // Free radicals in

110. Biol. 1982. - Vol. 5. - P. 223-254.

111. Floris R., Piersma S.R., Yang G. et al. Interaction of myeloperoxidasewith peroxynitrite: A comparison with lactoperoxidase, horseradish peroxidase and catalase // Eur. J. Biochem. 1993. - Vol. 215. - P. 767-775.

112. Forman H.J. Oxidant radical production and lung injury. Oxygen

113. Radicals: Systemic Events and Disease Process. Basel: Karger, 1990. -P. 71-96.

114. Fridovich I. // J. pathology of oxygen. 1982. - P. 1-19.

115. Goldberg D.G., Tappin D.M., Cameron S. // Lancet. 1993. - Vol. 341.8841.-P. 382.

116. Gorman A., McGowan A., Cotter T.G. Role of peroxide and superoxideanion during tumour cell apoptosis PEBS Letters. 1997. - Vol. 404. -P. 27-33.

117. Hakeem V., Fifield R., al-Bayaty H.F. // Arch. Dis. Child. 1992. - Vol.67.-№6.-P. 724-727.

118. Halliwell B., Gutteridge J.M.C. Oxygen toxicity, oxygen radicals,transition metals and disease // Biochem. J. 1984. - Vol. 219. - P. 114.

119. Halliwell B., Wasil M., Grootveld M. Biologically significant scavengingof the myeloperoxidase derived oxidant hypoclorous acid by ascorbic acid//FEBS Lett. - 1987.-Vol. 213.-P. 15-18.

120. Harle J.A., Swiader L., Disdier P. // Rev. Med. Interne. 1993. - Vol. 14.-P. 1005.

121. Hopkins F.G., Elliott K.A. The relation of gluthatione to cell respirationwith special reference to hepatic tissue // Proc. Royal Soc. B. 1931. -Vol. 109.-P. 58-88.

122. Ichikawa S., Tsukano K., Ito A. // Kansenshogaku Zasshi 1993. - Vol.67.-№10.-P. 1031-1037.

123. Klebanoff S.J. Myeloperoxidase: role in neutrophil mediated toxicity //

124. Molecular Biology and Infectious Diseases. Paris: Elsevier, 1988. -P. 283-289.

125. Kokkaliari M., Farribe O., Berry M., Baum H. Serum catalase as theprotective agent against inactivation of al-proteinase inhibitor by hydrogen peroxide: Comparison between normal and rheumatoid sera // Biochem. Int. 1992. - Vol. 28. - P. 219-227.

126. Left J.A., Parsons P.E., Day C.E. et al. Serum antioxidants as predictors ofadult respiratory distress syndrome in patients with sepsis. // Lancet. -1993. Vol. 341. - P. 777-780.

127. Lock R., Dahlgren C. Characteristics of the granulocytechemiluminescence reaction following an interaction between human neutrophils and salmonella typhimurium bacteria // Acta Pathol., Microbiol, and Immunol. Scand. 1988. - Vol. 96. - P. 299-306.

128. Mansson-Rahemtulla B., Rahemtulla F., Baldone D.C., Pruitt K.M.,

129. Hjerpre A. Purification and characterization of human salivary peroxidase // Biochemistry. 1988. - Jan. 12. - Vol. 27(1). - P. 233239.

130. Marklund S.L. Expression of extracellular superoxide dismutase byhuman cell lines // Biochem. J. 1990. - Vol. 266. - P. 213-219.

131. Marklund S.L. Extracellular superoxide dismutese in human tissus andhuman cell lines // J. Clin. Invest. 1984. - Vol. 74. - P. 1398-1403.

132. Marklund S.L., Karlsson K. Extracellular-superoxide dismutase,distribution in the body and therapeutic Implication // Antioxidants in Therapy and Preventive Medicine. N.Y.: Plenium Press., 1990. - P. 1-4.

133. Mathyhartert M., Debydupont G., Melin P. et al. Bactericidal activityagainst Pseudomonas aeruginosa is acquired by cultured human monocyte derived macrophages after uptake of myeloperoxidase // Experentia. - 1996. - Vol. 52. - P. 167-174.

134. McCord J.M., Fridovich I. Superoxide dismutase. An enzyme function forerythrocuprein (hemocuprein) // J. Biol. Chem. 1969. - Vol. 244. - P. 6049-6055.

135. Michalickova I., Kapellerova, Sulko M. Diagnisticke a terapeutickevyuzitie vysetrovania slin u deti // Cs. Pediat. 1987. - № 5. - C. 271-273.

136. Mills G.C. Hemoglobin catabolism J. Glutathione peroxidase, anerithricyte enzyme which protects hemoglobin from oxidactive breakdown // J. Biol. Chem. 1957. - Vol. 229. - P. 189-197.

137. Misra H.P., Fridovich I. // J. Biol. Chem. 1972. - Vol. 247. - P. 188.

138. Moran MJ., Santos J.L., Fontanellos A. et al. // J. Derm. Sci. 1993.1. Vol. 6.-№2.-P. 155-158.

139. Musumeci V., Cherubini P., Zuppi C. et al. // J. Oral Path. Med. 1993.1. Vol. 22,-№2.-P. 73-76.

140. Nauseef W.M., Olsson L., Arnliots K. Biosynthesis and processing ofmyeloperoxidase a marker for myeloid cell differentitation // Eur. J. Haematol. - 1988.-Vol. 40.-P. 97-110.

141. Nieuw-Amerongen A.V., Strooker H., Oderkerk C.H. // Ibid. 1992.1. Vol. 21.-№5.-P. 203-208.

142. Parris W.C., Sastry B.V., Kambam J.R. et al. // Ann. N. Y. Acad. Sci.1993.-Vol. 694-P. 308-310.

143. Pfister H.-W., Koedel U., Lorenze S., Tomasz A. Antioxidant attenuatemicrovascular chages in the early phase of experimental pneumoceal meningitis in rat Stroke. 1992. - Vol. 23. - P. 1798-1804.

144. Piacentini S.C., Thime T.R., Beller M. et al. // Ibid. P. 334-336. - 1998.

145. Rabinovitch M.R., Iversen I.M., Resnick L. // Crit. Rev. oral Biol. Med.1993.-Vol. 4.-№3-4.- P. 455-459.

146. Rotruch J.T., Pope A.L., Ganther H.E. et al. Selenium: biochemical roleas a component of glutathione peroxidase // Science. -1973. Vol. 179. -P. 585-590.

147. Salonen J.T., Alfthan G., Pikkarainen J. et al. Association betweencardiovascular death and myocardial infarction and serum selenium in a mathed-pair longitudinal study // Lancet. 1982. - Vol. 24. - P. 175179.

148. Salonen J.T., Salonen R., Lappetelainen R. Risk of cancer in relation toserum concentrations of selenium and vitamins A and E. matched case control analysis of prospective data // Brit. Med. J. 1985. - Vol. 290. -P. 417-420.

149. Stark K., Warnecke C., Brinkmann V. // Med. Microbiol. Immunol.1993.-Vol. 182. — № 3. P. 147-151.

150. Takahashi K., Avissar N., Whitin J., Cohen H. Purification andcharacterization of human plasma glutathione peroxidase: a selenoprotein distinct from the known cellular enzyme // Arch. Biochem. and Biophys. 1987. - Vol. 256. - P. 677-686.

151. Tappel A.L. Measurement of and protection from in vivo lipidperoxidation. Free Radicals in Biol., 1975, 4: P. 2-47.108 !

152. Watson R.D., Cannon R.A. Selenium responsive myositis duringprolonged home total parenteral nutrition in cystic fibrosis // J. Parent. Ent. Nutr. 1985. - Vol. 9. - P. 58-60.

153. Weiss S.J. Tissue destruction by neutrophies // New Engl. J. Med. 1989.-Vol. 320.-P. 365-367.

154. Wendel A. Enzymes acting against reactive oxygen // Enzymes: Tools and Targets. Basel: Karger, 1988. - P. 161-167.

155. Wilke B.C., Vidaihnet M., Favier A. et al. Selenium, glutathioneperoxidase (GSH-Px) and lipid peroxidation prodycts before and after selenium supplementation // Clin. Chim. Acta. 1992. - Vol. 207. - P. 137-142.

156. You X.Y., Jiang J., Yin F.Z. // Chin. Med. J. 1993 - Vol. 106. - №3 - P.179.182.

157. Zanma A. Conjugates of superoxide dismutase with the Fc fragment ofimmunoglobulin G // J. Biochem. 1991. - Vol. 110. - P. 868-872.

158. Zhang Z.Q. // Microbiol, and Immunol. 1993. - Vol.37. - № 10.1. P.773-777.