Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Антиокислительные свойства комбинированных препаратов фосфолипидов с производными малоновой и тиобарбитуровой кислот (экспериментальное исследование)

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Антиокислительные свойства комбинированных препаратов фосфолипидов с производными малоновой и тиобарбитуровой кислот (экспериментальное исследование)"

РГ8 ОД 1 1 ПОП 1996

На правах рукописи

ШТАРБЕРГ Михаил Анатольевич

АНТИОКИСЛИТЕЛЬНЫЕ СВОЙСТВА КОМБИНИРОВАННЫХ ПРЕПАРАТОВ ФОСФОЛИПИДОВ С ПРОИЗВОДНЫМИ МАЛОНОВОЙ И ТИОБАРБИТУРОВОЙ КИСЛОТ

(экспериментальное исследование)

03.00.04 - биологическая химия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Чита-1996

Работа выполнена на кафедре биохимии (заведующий кафедрой профессор Е.А.БОРОД11Н) Амурской Государственной Медицинской Академии (ректор - член-корр. ПАНИ, заслуженный деятель науки РФ, профессор В-АДОРОВСКИХ)

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Е.А.Бородин

Научный консультант:

заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор В.АЛоровских

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Л.СКолесниченко

кандидат медицинских наук, доцент НЛАвсиенко

Ведущая организация:

Институт физико-химической медицины МЗ РФ

Защита диссертации состоится "_"_1996г.

в_часов на заседании специализированного совета К 084.74.01

в

Читинской Государственной Медицинской Академии (672000, г.Чита,

ул. Горького, 39а).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Читинской Государственной Медицинской Академии (672000, г.Чита,ул.Горького, 39а).

Автореферат разослан "_"_1996г.

Учений секретарь специализированного совета кандидат биологических наук

А.НЛожкина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Перекисное или свободнорадикальное окисле-« яипидов представляет один из путей утилизации кислорода в клетке 3.А.Владимиров, А.И.Арчаков, 1972). 3 физиологически* условиях реак-1*и свободнорадикального окисления принадлежит важная роль а обновле-!к тканевых структур и делении клеток, регуляции фиэико-хияичсских »йств мембранных лилидов, функционирования мембранных белков и про-щаемости клеточных мембран, биосинтезе простагландинов, нуклеиновых »слот и иммунном ответе (O.A.Владимиров, 1983). В условиях патологии сислительная модификация лнпидов биологических мембран приводит к ут->те мембранами барьерной функции и в конечной итоге разрушению мемб-1R » гибели клеток (£. А.Бородин, А. И. Арча ко«, 1937; Vladimircv, 1987; tllivell & Chirico, 1993). 8 настоящее время твердо установлена роль гтивации реакций перекмсного окисления лилидов (ПСЛ) в происхождении эювных неинфекционных заболеваний (Ф.З.Меерсон и соавт., 1982; З.Ланхин, А.К.Тихазе, 1995; Esterbauer et al., 1993; Hall, 1993).

Предупреждение чрезмерной актквашш своФолнорадикальных реакций оможно с помоаьс препаратов антиохсидантсз, представляющих "ловушки" юбодкых радикалов (Е.Б.Бурлаксва и соавт., 1975). К соиаленио, круг дарственных средств антиоксидантного действия ограничен. Поэтому «баема разработки косых препаратов антмоксидантов представляется сьиа актуальной. Один из подходов к се ршземго состоит в исследова-1И возможности созданиа комбинированных препаратов антиоксид а нтов с сфолнпидами, являсщиянск основными компонентами лнпидного бислоя би-кнбран и обдадаоякгш выраженный мекбрзностабклизмруоаия действием -И-Бачмановд, 1983; Borodin, LopuXhin, 1937; Archakov 6 Gundermann, 119). Результаты ряда исследований дазт основания считать подобный «ход оправданным. Усыновлен синергизм в действии фосфолипидов с 1ьфа-токоферолон (Yamaçuchi, Toyosizu, 1984; Вага et al., 1992), при->днычм и синтетическими хинонами (H.H.Сторожок и соавт., 1994), ас-|рбкиовой кислотой (Yanishieva, Marinova, 1988; Han et al., 1990).

В исследованиях, выполненных под руководством проф.В.А.Доровских, жазано наличие умеренно выраженных антиокислительных свойств у проводных тиобарбитуровой и палоновой кислот (Е.В.Зражевская, 1991; А.Доровских и соавт., 1912; 1994; Е.В.Александрович, 1993), обладао-к вкроким кругом фармакологических свойств и нашедшим применение в честве антигипоксантов, актопротекторов, противовоспалительных, альгетических, спазмолитических, гипотензивных, коронаролитических, тиаритмических, нейролептических и противосудорожных средства I.П.Денисенко, Е.О.Гарнушкина, 1990; Bourgeois, Dadson, 1983).

Яель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось выяс-:иие возможности усиления антиокислительных свойств у комбинированных епаратов фосфолипидов с производными налоновой и тиобарбитуровой слот. Поставленная цель предопределила необходимость ревения следую-« конкретных задач:

- разработать модельную систему для оценки антиокислительних ойств фосфолипидных липосом и мицелл в условиях in vitro;

- исследовать возможность усиления антиокислительных свойств проводных малоновой и тиобарбитуровой кислот в условиях in vitro при воои создания их комбинированных препаратов с фосфолипидами;

- исследовать антиокислительные свойства комбинированных препарате фосфолипидов с производными малоновой и тиобарбитуровой кислот в яовиях in vivo при активации процессов ПОЛ у крыс введением четы-ххяористого углерода (CCI4) или под слиянием воздействия низких тем-ратур;

- исследовать возможность дополнительного усиления антиохисли-льных свойств комбинированных препаратов фосфолипидов с антиоксидан-ни за счет одновременного низкоэнергетического лазерного воздейс-мя.

Научная новизна и теоретическая значимость■ В результате настоя яего исследования впервые показана возможность резкого усиления антио кислительных свойств производных калоновой и, в меньшей степени, тио барбитуровой кислот при покой.i использования комбинированных препара тов этих соединений с липосомами и мицеллаги из фосфатидилхо>лина и вы явлены наиболее эффективные формы комбинированных препаратов. Эффек тивность комбинированных препаратов установлена в опытах in vitro н i vivo при активаций процессов ПОЛ в организме ксивотню: введением ССХ или воздействием низких температур. Впервые выявлено, что низкоэнергс тическое гелий-неоновое и инфракрасное лазерное излучение оказывае прооксидантный эффект на ПОЛ в мембранах кикросок печени в условиях i vitro, и, в то же время, антиоксидантный эффект в условиях in vivo пр активация процессов ПОЛ в организме животных под влиянием введани СС14 или холедового воздействия. Впервые продемонстрирована воэво* ность дополнительного усиления антиокислительных свойств комбинирован ных препаратов фосфолилидов с производными тиобарбитуровой кислот з, счет одновременного низкоэнергетического лазерного воздействия.

Практическая ценность. В ходе проведенного исследования нами совместно с К.Е.Егоровым, предложен^ использовать в качестве модельно системы скрининга антиокислителькои активности (&0Д) соединений ида.ци ирование аскорбат(НАД^Н)—зависимого перекисного окисления липидоб микросомах печени, что позволяет оценивать влияние тестируемых соеди нении как на неферментативное, так и на ферментативное ПОЛ.

Внедрение. Предложенный в ходе выполнения настоящей работы спосо-оценки АОА, разработанные модификации определения содержания продукте ПОЛ и компонентов антиокислительной системы (AQC), адаптированные различным тканям, внедрены а практику научных исследований ЦНИЛа и ка федр биохимии, фармакологии, гистологии, госпитальной терапии, аку шерства и гинекологии, неврологии АГКА, ряда кафгдр и лабораторий не дицииских вузов Российской Федерации. Основные результаты настояще работы, вытекающие из них положения и выгоды (¡^пользуются в учебно; процессе на кафедрах биохимии, фаркахолегии, гистологии, а также ряд: клинических кафедр АГНА.

Апробация работы. Результаты исследования доложены на иезкдународ ных и национальных симпозиумах, конференциях и конгрессах, в том чис ле, "Цитохром Р-450. Биохииня, биофизика к молекулярная биология 'Лиссабон, 1933), XV-ой Научной сессии СО РАКИ совместно с ОКИ РАМН ! Ассамблеей кардиологов СНГ по теиз "Бторичкая профилактика и восстано бительная терапия в кардиологии" {Томск, 1994); 2-ом и 3-ен Конгресса: ЯРФМО "Методы и процессы медицинского обмана кежду Японией и Россией (Владивосток, 1994; Осака, 1995), "Л илопротеиды и атеросклероз' (Санкт-Петербург, 19SS),-"Человек и лекарство" (Москва,. 1996).

Публикации. По теие диссертации опубликованы 9 работ.

объем и струхтура диссертации. Диссертация изложена на 18D страницах мааинописного текста, илластрирована 12 таблицами и 11 рисункам и состоит из введения,' обзора литературы, описания материалов н методов исследования, 4 глав результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов к литературного указателя, вклочасщаго 13: отечественных и 122 иностранных источниког.

Положения. выносниыд на защиту.

1. Возможность усиления антиокислитель:!^ саойстз производных калоновой и тиобарбитуроаой ;::-:слот при покоад использования комбинированных препаратов этих соединений с фосфолипидныпи липосомами и мицеллами.

2. Прооксидантныб эффект низкоэнергетического гелий-неонового j инфракрасного лазерного излучения на ПОЛ в' кекбраках кикросом печени i условиях in vitro, и антиоксидантный эффект в условиях in vivo при ак-

гивации процессов ПОЛ з организме животных под влиянием холодового аоздействия.

3. Возможность усиления антиокисяительных свойств комбинированных ipenapaToa производных тиобарбитуровой кислоты с фосфолипидами за счет злноврененного низкоэнергетического лазерного воздействия.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В настоящей исследовании использованы четыре прсизродных малоно-»ой кислоты - препараты с условными номерами 8, 11, 15, 17, и три прб-(зводкых тиобарбитуровой кислоты - препараты ТБ-4, ТБ-6 и ТБ-28. В ка-»ества препаратов фосфолипидов использованы фосфатидилхолиновые липо-:омы и ющеллы. В экспериментах in vivo использованы беспородные белые фысы-сапцы весом 150-200 граммов. Еивотных содержали на стандартной :иете вивария. В опытах использовали животных одного помета.

С целю активации ПОЛ в организме животных использовали две экс->ериментальные модели - впадения CCI4 (50% масляный раствор CCI4 вво-1или подкогно из расчета 0,4 нл на 100 г кассн животного 1 раз в день > течение 3 дней (А.И.Арчаков, 1975) или воздействия низких температур !животных подвергали холодовому воздействие в течение 7 дней по 3 часа !жедневиг> о клинатокамере "Fentron", создавшей постоянный режим охлаждения -15°С) (Е.А.Бородин и соавт., 1992). Животных экспериментальных •рупп пвдвергали указанным воздействиям на фоне внутриброожнного вве-¡ония фоефлтидилхолиновых лнпосом (200 мг фосфатидилхолина/кг массы животного) либо производного малоновой кислоты N17 (10 мг/кг массы жи-ютного), либо производного тиобарбитуровой кислоты ТБ-4 (10 мг/кг laccH животного), либо комбинированных препаратов лнпосом с малонатом [ли ТБ-4 в аналогичной дозе ехеднеЕно. В экспериментах с воздействием la животных инфракрасным нмзкознергетическим лазером животных облуче-|ие осуиествляли чрезкожно на область печени (в эксперименте с введете« CCI4) или грудной клетки (в эксперименте с действием холода) !»седневно при энергетической экспозиции 1,2 дж/см за сеанс.

Фракцго микросом из гомогената печени выделяли методом дифферен-[иального центрифугироЕзния на рефрижераторной центрифуге K24D (Герма-гия). Тени эритроцитов получали по методу Dodge J.Т. и соавт. (1963 ). 1ИПКДЫ из крови и тканей экстрагировали по методу Бланя-Дайера Кейтс, 1975). Суммарные фссфолклиды из яичных желтков и соевых бобоз 1ЫД°ляли согласно Singleton U.S. и соавт. (1965). Выделение фосфп-и-[илхолкнов из суммарных фосфолипидов яичных желтков и соевых бобов юуцествляли нетодом колоночной хроматографии на колонке с окисьо ало-[иння ctiecbD хлсрсформ-метанол 9:1. Келкие фосфатиднлхолиновыо лнпосо-:и и смешанные мицеллы фосфатидилхолина и дезоксихолата натрия приго-•авлизалн с покопьо обработки ультразвуком водных дисперсий липидов, а рупные фосфатидилхолиновые липосомы путем механического диспергирсва-!ия (Е.А.Бородин, А.И.Арчаков, 1987). Окисляемость микросом, теней |ритроцитов, лнпосом и мицелл, плазмы крови и липопротеидоа яичных гелтков определяли по накоплению КДА з инкубационной смеси при индук-¡ии Fe2++ аскорбат-зависнмого или НАДФН-зависимого ПОЛ (D.А.Еладнми-юв, А.И.Арчаков, 1972). Антиокислительнуи активность фосфатидилхолк-овых липосом и.мицелл, плазмы крови, производных калоновой и тиобар-итуровой кислот, комбинированных препаратов липосом (мицелл) с кало-атами и тиобарбитуратами оценивали в условиях in vitro по их способ-ости тормозить аскорбат(НАДФН)-зависнмое ПОЛ э суспензии микросом и ыражали в процентах. В генолизатах крови к гомогенатах печени, легких сердца определяли активность глокозо-б-фосфатдегидрогеназы спект-ально по измененио поглощения при 340 ни (B.C.Асатиани, 1969), ката-

лазы на основе способности Н2О2 образовывать окрашенный комплекс с ко-либдатон аммония (К.Д.Королек и соаат., 1988), содержание церулопдаэ-кина по окисленио р-фенилеиднамина (В.Г.Колб и соавт., 1976). Содери;-ние витамина Е в липидных экстрактах из тканей печени, легких, серди; и крови определяли по цветной реакции с дипиридилои м хлорный железо! (Р.Ж.Кисилевич, С.И.Скварко, 1972). Концентрацию налонового диальдегн-да определяли в цельной крови, гоногенатах печени, легких и сердце, 4 также в кикроссмах печени по цветной реакции с тиобарбитуровой кислотой (Е.Л.Бородин, А.И.Арчаков, 1987). содержание диеновых конъогатса 1 липидных экстрактах измеряли по поглощенно при 233 ни (И.Д.Стальнзч, 1977). Количество гидроперекисей липидсв определяли на основе их ело-собкост;; окислять ионы Ге с последусцсй цветной реакцией на Ке { тиоцнонатом аммония (Л.А.Романова, И.Д.Стальная, 1977). Содержани< фосфолипидов в липидных экстрактах определяли по неорганическому фосфату, используя реактив Фиске-Субарроу. Белок в препаратах иикросон I цитозоле печени, легких и сердца определяли по методу Лоури в присутствии дезоксихолата натрия (Ьоыгу е! а1., 1951).^

Полученные результаты статистически обработаны на персонально] компьютере: 1ВМ РС АТ-386 с использование!« пакета програнм, разработанных на кафедре патологической физиологии Амурской Государственной Медицинской Академии.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

С иепьо разработки оптимальной коделыюй системы скринига АОА соединений в условиях in vitro мы провели исследование окисляемости ряд; потенциальных субстратов такой системы, а именно липолротеидов яичны: желтков, плазмы крови, мембран эритроцитов, различных фосфолипидньс липосок и мицелл, а такие кикросом печени. Результаты отражены в таблице 1.

Охисляекость некоторых потенциальных субстратов для системы скрининга АОА соединений (средние значения н стандартная отклонения)

Таблица

Субстрат

Оки с я е и о с т ь (нноль ЦДЛ мин-1 кг фосфолипида)

Аскорбат-зависимое ПОЛ

НАДФН-зазискяов ПОЛ

Липопротсиды яичных

желтков Тени эритроцитов

Плазка крови Фосфолииидные липосомы:

- мелкие:

- яичный ФХ

- соевый ФХ

- крупные:

- соевый ФХ

Мицеллы из фосфолипидов: -соевый ФХ+ДОХ-Ка

Кикросомы печени

0,0320,006 0,40-0,04 0,08+0,01

1,5±0,53 1,310,16 1,1-0,23 2,020,25 2,5±0,50

не опрсдэляется 0,11±0,01 0,25i0,03

0,1720,03 0,1620,02 0,1520,03 0,25±0,04 1,5020,30

<SX - фосфатидилхолин; ДОХ-Na - дезоксихолат натрия.

Сргдя ксследуемых субсгратса с наибольсей скоростью неферяонтативное эслорбат-завнсияое. и особенно ферментативное НАДФН—зависимое ПОЛ про— такает в кекбргках ншсросои. Поэтому нами предложено использовать в качестве субстрата для модельной системы микросокы печек;. Лреимукест-noyi предложенной системы является возможность генерации в !<икросомах с достаточно высокой скоростью как неферментативного, так и ферментативного ПОЛ и оценки АОА препаратов при двух его разновидностях.

На рисунке 1 отражены результаты исследования АОА фосфатидилхоли-hobssc липосом, четырех производных калоновой кислоты и комбинированных препаратов этих малонатов с липосоиами при НАДФН-эависимом ПОЛ в кик-росоиах печени. АОА фосфатидилхолиновых липосом составляет 254, а производных малоновой кислоты от В до lit. В то же время, АОА комбинированных препаратов малонатов с липосомами выое, чем у каждого из компонентов в отдельности, и составляет от 23 до 34*. Возрастание АОА у комбинированных препаратов в данном случае можно объяснить простым ад-дятмвггы?! эффектом.

В случае неферяентатизногэ аскорЬзт-зааисимого ПОЛ калонаты проявляет слабух) прооксидактнуо активность (рисунок 2). Тем не менее, для комбинированных препаратов малонатов н липосом характерна АОА, причем в случае производных КЗ к IJ17 АОА комбинированных препаратов больае чем у липосом и составляет 351 и 44%, соответственно. Таким образом, усиление антиокиелнтгльного действия у комбинированных препаратов малонатов с липосомами при нефериентативком ПОЛ не укладывается в аддитивный эффект и достигается, по видимому, за счет более слоеных неха-кязвоа.

Еще бользуо АОА эти соединения проявляет в хокб!?нации со смешанная! ннцгллами фосфатидилхолина и деэоксихолата натрия вследствие больвей антнокислительной активности мицелл. Как видно из представленных на рисунке 3 результатов исследования АОА комбинированных препаратов производных маяоновоп кислоты N17 и N8 со смешанными ницелламн фосфатидилхолина и дезокенхолата натрия, АОА этих препаратов при ферментативном ПОЛ достигает 4 5-46%.

Что тхе касается производных тиобарбитуровой кислоты, то в условиях нассй модельной системы только препарат ТБ-4 проявлял слабую проок-сидантнус активность при асхорбат-зависнмок ПОЛ. Препараты ТБ-6 и ТБ-23 практически не проявляли ни анткокислительных, ни проокендантных свойств.

Как видно из предстазлэнтас на рисунке 4 результатов исследования антиокислительных свойств комбинированных препаратов трех производных т!;о5арйитуровой кислота с фосфатндклхолимоБынн липосоиами в систел& £ер«ентативного ПОЛ, АОА комбинированных препаратов чуть ¡¡иже, чей у одних .липосом, что вполне колено объяснить суммированием антнокейдант-ного зйфекта липосом и очень слабого прэоксидчнтного эффекта тиобарби-гурагов. Весьма схсглне результаты получены и при исследовании АОА кон-ёинкрованних препаратов при асхорбзт-завнсимоя ПОЛ. Полученные результата означают, что в комбинации с фосфолипндзми тиобарбктураты проявляет антиокислительные свойства, к этот феномен ножет быть использован для усиления фармакологических эффектов производных тиобзрбитуроьой кислоты.

D целок, результаты экспериментов in vitro позволяет заклочнть, что нам удалось показать возможность усиления антиокислительных свойств пронзподных калоновой кислоты путем использования комбинированных препаратов этих соединений с лнпосомамн и мицеллами из фос?атн-зилхолина. Каибольпуо АОА проявлял комбинированный препарат производного иалсновоП кислоты N17 и липосом. Этот препарат был использован а последующих экспериментах in vivo, э которых исследовали его ЛОЛ при введении жикотныя, получ^птдим млгс подвергнутым холсдовому стрес-

су.

ЩЩ Препараты малоноиой кислоты

Коцби н и роаан « ые препараты _липосом и иалонаггрв

Рис 1 Антнокислительнаа активность липосоы.

Колонатов и их комбинированных препаратов при НАДФН-зависиыои ПОЛ

Е": - 3Препараты малиновой кислоты : Комаинпгх^китт' п^-и.^ми.) липосом и малон.-'ти

Нис 2 Антиокислительная активность липос-ом.

малонатов и их комбинированных преп»]>атов при аскорбат-зависимои ЛСШ

ТБ—4

ТБ-б

ТБ-28

»¡¡¡»¡¿и Iрепариты тнобарбитуроаой кисаоты КИЯ Комбинировали!* препараты •""^липосом и тиобарбитуратов

Рис. 4 Антиокислительная активность липосом, тиобарбитуратов и их комбинированных препаратов при НАДФН-зависиысм ПСШ.

-N8 -N17

Рис 3 ЛмТНОКНСЛИТНЛЬНча ¿ШТиННОСТЪ ипцелл.

иллонатоз и их комбинированных препа[мтог< при НАД'М (~ мвмс-иыии ПСШ

Результаты иэлервння содержания диеновых коиъюгатоа, гидропераки се и и ИДА в печени мнтахтных кивотных, получаваих СС14 (контрольна группа) и получавших СС14 на фоне сведения фссфатидилхолинових лило сон, производного иалоновой кислоты Н17 и комбинированного препарат липоссм и малоката (экспериментальные группа) отражены а таблице 2.

Введение СС14 сопровождается накоплением' продуктоа ПОЯ в ткан печени. Все использованные нами препараты предотвращает активацию по при действии СС14 и с результате содержание его продуктов печени.жи вотных, получавших указанные препараты, достоверно ниже, чем у жиоот ныхконтрольной группы и не отличается от такового у ннтактных крыс Наибольший антиоксидантный эффект проявляет кокбичированныЗ препарат и в этой группе животных содержание, гидроперекисей и НДА достоверн ниже не только чей у контрольных, но и у интактных крыс.

В таблице 3 обобщена результаты исследования влияния использован них нами препаратов на состояние актиокиелнтеяьной системы в печен крыс. Активация перекисного окисления пкштоо при введении СС14 разви вается на фоне снижения активности катадазы и глюкозо-6-фосфатдсгидро генаэы. С антиоксидантным действием использованных нами г.репарато коррелирует их способность в значительной мере предотвращать еннжаки активности каталазы и увеличивать содержание витамина Е, но пэследнг характерно только для производного иалоновой кислоты и особенно ег гэмбинированного препарата с липосокани. Препарата не предупреждав снижения активности глпкоао-6-фосфатдегидрогеназы.

Таблица

Содержание продуктов ПОЛ в печени интактных крыс, при действии ССХ4 на фоне введения фосфатидилхолнновых лнпосом, производного налонсго кислоты (препарат N17) к комбинированного препарата «'^«осфатидилхолиио вых лнпосом и малоигта.

Показатели Интактныо Получавска Получаг-.зиз Получаь'-:.^ Псдучавсие

ССЬ4 ССЬ4 + ОХ ССЬ4+»17 ССЬ4+>517+ФХ (контрольные) (п»й) (п»5) (п=б) (гн-5) (п«5)

/¡неновые хонъогаты (иноль/г)

Гидропере

лнпидов

(ниоль/г)

Калоновый

диальдегид

(нколь/г)

179±35 200113 175±11 153±10

Рг,2<о,оо2 Р2,з<о,оо5 Рг,4<о,оо5 Рг,3>0,1 Р1,4>0,05

26—2 41111 16±3 25±2

Р1,2<0,С05 Р2,3<0,001 Р2,4<0,001 Р1,3<0,02 Р1,4>0,1

7,610,6 10,2±1,1 7,2±0,7 6,2—0,5

Р1,2<0,005 Р2,3<0,005 Р2,4<0,001 Р1,3>0,1 Р1,4<0,05

165111

Р2,5<0,01

Р1,5>0,1

2013 ?2,5<0,00 Р1,5<0,05

5,710,5

Р2,5<0,00

Р1-,5<0,02

И

Р1,2 ~ достоверность различий между контрольными и интактными жисотни ми; Р2 з - достоверность различий между контрольными животными и жи вотными, получавшими СС14 и фосфатидилхолиновые липосомы; р2 4 - дос товарность различий между контрольными животными и животными,'получав шими СС14 и производное малоновой кислоты; Рг 5 " достоверность разли чий между контрольными животными и животными,' получавшими СС14 и кон бинированный препарат фосфатидилхолнновых липосок и производного нало новой кислоты; «Х-фосфатидилхолииовые липссомы; N17 - производное на лоновой кислоты N17.

Годеретки® и активность некоторых гсмгмзнентов АОС в печени илтактных spvc, при действии CCL4 и ка фоне введения фосфатидилхслнновых лнпо-производного иалоноаоЯ кислота (препарат N17) и комбинированного пр•ariapara фосфаткдкяхолиновых л и посол и иадоната.

Показатели Лнтактмга

(п-5)

Получавине Получзеске Пояучавсие Пслучзв-не

ССЪ4 ССХ4 + ФХ CCL4+:il7 CCL4-t?îl7+4>ï (контрольны» J

(П-5) (П»6) (П=5) (п-5)

[Л-6-Ф дг (кволь,НАД*Н

(кволь Н/ Г~ С~ • )

Катзлаэа (квколь Н2О2 г"1с"1)

Церуяоллазкин (r.*r/r)

Виталии Е (кзг/г)

ests

12514

0301131

671#.

43Î4

Pl,2<0,02 62-3

27*2

37Î2

?2,3<0,С01 Р2,4<0,05 Pl,3<0,001 Pl,.1<0,0l

S6-5

10217

Pi,2<o,ooi Рг,з<о,оог P2,4<c,ooi Pl,3<0,002 Pi,4<0,05

16501142 Pl,2<0,02

6SÎ3 Pl,2>0,l

13601241 P2,3<0,05

22201199 4<0,05

Pl,3<0,001 Pl,4<0,001

6716 P2,3>0,1 Pl,3>0,l

7CU P2,4<0,02 Pl,4<0,05

3512 P2,5<0,02 Pl,5<0,001

96Î9 P2,5<0,01 Pl,5<0,05

5501126

PZ,5<0,001 Pl,5>0 ,1

9115 P2,5<0,002 Pl,5<0,02

Условные сбозизчения указаны в подписи к таблице 2.

Схожие результаты получены при исследовании содержания продуктов ПСЗ и состояния ДОС в крови.

Таким образом, результаты экспернместа свидетельствует, что комбинированный препарат производного нзлонозоГ1 кислстн и фосфатидилхоли-нозых липосоя проявляет наибольшие АСА при токсическом поражении печени CCI 4 .

Возможность усилен;;! антис.кислнтель><ы* сзсйсти у комбинированных препаратов яалонатов и фосфолипидов продеионстриров<»на нами также s опытах, в которых свободнорэдмхальное окисление липмдо^ у крыс активировали ъоздеЛствиок низких температур (табл.4). При холодовом поздсйс-тя.'и а.чтнокиелительное действие использованных препаратов проявляется зшчитолъно сильнее, чем при введении СС14. 3 результате содержание продуктов ПО г; у экспериментальных хивогнь'Х значительно ниже не только чем у контрольных, но и ннтактных :<рыс, причем э большинстве случаев наиболее низкое содержание в тканях продуктов ПОЛ характерно для группы животных, подвергнутых действия холода на фоне введения комбинированного препарата. Кзк и в эксперимента с введением животным СС14, ан-тиокислнтельное действие использованных препаратов при действии холода коррелирует с их способностью увеличивать во v всех тканях содержание витамина Е и предупреждать снижение активности каталазы п легких . 3 наибольшей мере эта тенденция характерна для комбинированного препарата малонатз м липосом (табл.5).

Таким образом, полученные результата подтверждает возможность усиления актнокнелительного действия производных кзлоновоП кислоти путем создания комбинированных препаратов калонатов и фосфолипкдоп. В посяедусоих экспериментах мы предприняли попытку дополнительно усилить анткоксидантное действие препаратов при помощи сочетания их с одновре-

Содержание продуктов ПОЛ в легких, сердце и крови интактных крыс, пр| действии холода и на фоне введения фосфатидилхолиновых липосом, проиэ' водного малоновой кислоты (препарат Н8) и комбинированного препарат, фосфатидилхолиновых липосой и маяоната.

Показатели Интактные Холод Холод Холод Холод

(контрольные) +-ФХ +N8 +И8+ФХ

(п=б) (п=6) (п=6) (п-б) (п»б)

Легкие

Диеновые конъогаты (ниоль/г)

Гидроперекиси

липиДов

(ниоль/г)

Диеновые конъсгаты (нноль/г)

Гидроперекиси

липидов

(ниоль/г)

337216

8424

181±17

4326

399257 Pi,2<0,005

9028 Pi,2>0,1

306212 Р2,3<0,001 Pl,3<0,05

69-6 P2.3<o,oi Р1,3<0,001

25527 293251

Р2,4<0,001 Р2,5>0,05 Pi,4<0,001 Pl,5>0,05

85±4 Р2,4>0,1 Pi,4>0,1

6422 Р2,5<0,001 Pl,5<0,001

emus

267254 178215 157213 15024 Pl,2<0,001 Р2,3<0,005 P2,4<0,005 P2,5<0,001

Pl,3>0,l Pl,4>0,05 Pl,5<0,05

87220 4727 23±3 1022

Pl,2<0,001 P2,3<0,001 P2,4<0,001 P2,5<0,001

Pl,3>0,l Pl,4<0,001 Pi,5<0,001

Диеновые

конъегаты

(нполь/мл)

SPffBfe •

162210

Гидроперекиси дипидов 7,123,1

(нполь/мл)

Налоновый диальдегид (нноль/ил)

1,82±0,24

135214

Pl,2<0,05

10,325,0 Р1,2>0,1

2,65±0,42 Pi,2<0,01

129—15

Р2,3>0,1

Pl,3<0,05

7,022,8

Р2,3>0,1

Р1,3>0,1

1.7220,36 Р2,3<0,05 Р1,3>0,1

97±17 Р2,4<0,02 Pi,4<0,001

4,321,6 Р2,4<0,005 Pi,4>0,05

1,6420,12 Р2,4<0,001 Pi,4>0,05

81212 Р2,5<0,001 Pi,5<o,oo:

3,221,1 Р2,5<0,00: Pi,5<0,05

2,2420,12 Р2,5<0,00: Pi,5>0,05

Р1,2 ~ Достоверность различий между контрольными и интактными животными; Р2 з - достоверность различий между контрольными животными и животными, подвергнутыми действие холода на фоне введения фосфатидилхолиновых липосом; Рз 4 ~ достоверность различий между контрольными жи-»отними и животными, подвергнутыми действии холода на фоне введенш производного малоновой кислоты; Рг 5 ~ Достоверность различий межд; контрольными животными и животными, подвергнутыми действию холода н< фоне введения комбинированного препарата фосфатидилхолиновых липосон I произьодного налоновой кислоты; ФХ-фосфатидилхолиновые липосоиы; N8 ■ производное малоновой кислоты N8.

Таблица 5

Содержание и активность некоторых компонентов ДОС в легких, сердце м крови интактных крыс, при действии холода и на фоне введения фосфати-дилхолиновых липосон, производного калоновой кислоты (препарат N8) и комбинированного препарата фосфатидилходинових липосон и палоната.

Показатели Интактные Холод Холод Холод Холод

(контрольные) +*Х +N8 +И8+<»Х

(п«6) (п-6) (п-6) (п-6) (п-6)

Лзгям

Гд-6-Ф дг (нноль НАДФН г~ с" )

Каталаза (пхноль Н2О2 г~ с~ )

Церулоплазкин (икг/г)

Витании В («Г/Г)

Гл-6-Ф ДГ (ниоль НАДФН г с~ )

Каталаза (якноль Н202 г" с" )

Витамин Е (икг/г)

гл-в-Ф дг

НАДФН.

31,515,2 29,112,1 24,113,1 17,215,2 16,514,2

Р1,2>0,1 Р2,3<0,1 Р2,4<0,02 Р2,5<0,02

Р1,3>0,1 Р1,4<0,005 Р1,5<0,001

10,810,8 7,910,3 11,110,6 12,1И 16,911,6

Р1,2<0,02 Р2,3<0,01 Р2,4<0,002 Р2,5<0,001

Р1,3>0,1 Р1,4>0,1 Р1,5<0,001

391199 5651105 313126 2531100 245158

Р1,2>0,1 Р2,3<0,001 Р2,4<0,02 Р2,5<0,001

Р1,3>0,1 Р1,4>0,1 Р1,5>0,05

3312 2512 3214 3412 4416

Р1,2<0,02 Р2,3<0,01 Р2,4<0,001 Р2,5<0,02

Р1,3>0,1 Р1,4>0,1 Р1,5<0,02

3,9Ю,2

11,2-0,8

16*1

Сердце

4,7*0,3 Р1.2<0,01

9,0Ю,6 Р1,2<0,05

11±1 Р1,2<0,001

УР<?ЙЬ

3,710,3 4,6-0,3 4,2-0,3

Р2,3<0,005 Р2,4>0,1 Р2,5>0,1

Р1,3>0,1 Р1,4<0,05 Р1,5>0,1

7,7+1.2 9,2-1,6 7,9*0,4

Р2,3>0,05 Р2,4>0.1 Р2,5<0,05

Р1,3>0,1 Р1,4>0,05 Р1,5<0,05

1812 2713 2813

Р2,3<0,02 Р2,4<0,001 Р2,5<0,001

Р1,3>0,1 Р1,4<0,001 Р1,5<0,001

(МКВОЛЬ ^ Л- С* )

Каталаза (имоль Н2О2 л-1с-1)

Церулоплазкин (мкг/нл)

Витамин Е (мкг/мл)

15,211,4 13,911,7 15,312,3 16,012,1 13,2Ю,»

Р1,2>0,1 ?г,з>о,1 Р1,3>0,1 Р2,4>0,1 Р1,4>0,1 Р2,5>0,1 Р1,5>0,05

50,719,0 57,218,5 45,015,5 66,7110,1 50,017,1

Р1,2>0,1 Р2,3<0,1 Р1,3>0,05 Р2,4>0,1 Р1,4>0,05 Р2,5>0,1 Р1,5>0,1

143145 152127 154131 190153 173138

Р1,2>0,1 » Р2,3>0,1 Р1,3>0,05 Р2,4>0,1 Р1,4>0,05 Р2,5>0,1 Р1,5>0,05

7,411,28 8,611,2 8,711,5 3,711,2 10,011,3

Р1,2>0,1 Р2,3>0,1 Р1,3>0,05 Р2,4>0,1 Р1,4>0,05 Р2,5>0,1 Р1,5>0,05

Условные обозначения указаны в подписи к таблице 4.

конник нкэкоэнергетнчесхим лазерным воздействием. Отправной точкой для подобного подходе явились результаты ряда исследований, указывающие на возможный антиокислитедьный эффект ниэкоэнергетического лазерного воздействия на организм {Н.Т.Васильев и соавт., 1991; М.й.Туяков, 1SS2; С.Н.Зубкова и соавт., 1993).

В последующих экспериментах мы предприняли попытку дополнительно усилить антиоксидантное действие препаратов при помощи сочетания их с одновременны:: низкоэнергетичесхим лазерным воздействием.

Из первой стадии мы исследовали влияние лазерного излучения кг розниц ПОЛ в мембранах иикросом печени в условиях in vitro. Опытные пробы во время инкубации облучали низкоэнергетическими гелий-неоноаки (630 нн) и импульсным инфракрасным (850-900 нм) лазерами. Результаты отражены на рисунках 5 и 6.

Облучение суспензии кикросой лучами гелий-неонового лазера оказывает прооксидаитный эффект, составляющий 29% в случае аскорбат-зависимо го к 67* в-случае НАЛФН-зависиного ПОЛ (рис.5). Болызая выраженность прооксидантного эффекта лучей низкоэнергетнческого лазера в случае НАДФН-завксимого ПОЛ может быть связана с большей энергетической экспозицией лазерного излучения 1Н), составляющей в этом случае 9,12 да/см по отнезгнио к 2,28 дж/см2 при асхорбат-эависимом ПОЛ, с учетом различной продолжительности инкубации при индукции асхорбат н НАД «И!- зависимого ПОЛ - 5 и 20 кинут, соответственно. Аналогичные результаты получены и при облучении кикросон инфракрасным лазером, причем в этом случае величина прооксидантного эффехта пропорциональна энергетической экспозиции в составляет lot при экспозиции 0,1 дж/си н 37% при экспозиции 2 дж/си (рис.6).

¿ля объяснения механизма прооксидантного эффекта низкоэнергетических лазеров на перекисное окисление лилидов в микросомах мы предположили две вероятные причины: 1) наличие в составе инкубационной смеси специфического акцептора лазерного излучения, способного улавливать и использовать его энергию для преодоления энергетического барьера окислительных реакций; 2) носпецифический слабый тепловой эффект. К сожаление, попытка получить экспериментальные доказательства в пользу указанных кеханнзпов с помощыэ регистрации спектров поглощения инкубационной спеси, содержащей иихросоны, Б которых было инициировано ПОЛ, и измерения тенпературы инкубационной снеси не увенчалась успехом - б области 850-900 и 630 ни не отмечалось сколько-нибудь существенного поглощения, ¡з облучение инкубационной смеси инфракрасным лазером при энергетической экспозиции 2 дж/см не вызывало каких либо изменений в характере спектра поглощения (рис.7) и не приводило к повышение температурь: инкубационной смеси.

йа следующей стадии мы исследовали влияние инфракрасного низкоэнергетического лазера на крыс, у которых активировали реакции перекис-иого окисления лилидов sosaeíiCTBitoK низких температур. Из представленных в таблице 6 результатов исследования содержания диеновых кокьага-тов, иалонового диальдегида и витамина Е в легких и крови животных можно заключить, что ежедневное облучение крас инфракрасным лазером перед действием низких температур позволяет в значительной мере предотвратить снижение содержание витамина Е и накопление в тканях продуктов ПОД.

Такин образок, в условиях in vivo выявляется отчетливый антнокси-дантный эффект низкоэнергетичееккх лазеров.

В следующем эксперименте мы предприняли попытку использовать лазерное воздействие для усиления антиоксидантного эффекта комбинированного препарата фосфатидилхолнна и производного тиобарбитуровой кислоты ТБ-4 в условиях другой экспериментальной модели - активации перекисно-го окисления липидов в организме крыс введением CCI4.

ПОЛ пол

Контроль ¡■■•А-",1 Не-Ке лазер

Рис 5 Влияние гелий-неонового лазера на ПОЛ а иикросоыах печени.

Н=п 12 яж/с>? н-го аж/'см*

Рис. 6 Влияние инфракрасного лазера на ПОЛ в микросоыах печен»

Abt

Рис. 7 дифференциальный спектр поглощения суспензии микро-

сом при инициировании в них аскорбат-зависимого ПОЛ и облучении инфракрасным лазером.

Дифференциальные спектры поглощения суспензии микросом объемом 3 мл. содерхащей 12 мкМ Fea-; 0.8 Mil аскорбат; 0.2 МЫ пироФосФат натрия; 50 Mil трис-HCl буфер. рН 7.4; 1 мг белка микросом/мл регистрировали против дистиллированноя воды на спектрофотометре Shimadzu UV-VIS/2100 по двухлучевой схеме в кюветах с длинной оптического пути 1 см до и пссле облучения инфракрасным низкоэнергетическим лазером при энергетической экспозиции 2 дх/сма.

В таблице 7 представлены результата определения содержания диеновых конъюгатов, гидроперекисей и МДА в печени и крови интактных крыс и получавших СС14. Животным трех экспериментальных групп СС14 вводили на фоне фосфатидилхолиновых липосом, препарата ТБ-4 и комбинированного препарата липосом и ТБ-4. Животных последней группы также подвергали воздействие низкоэнергетического инфракрасного лазера на область печени. Во всехьэкспериментальных группах содержание продуктов ПОЛ в печени и крови достоверно ниже чей в контрольной, причем наиболее низкое их содержание характерно для животных последней экспериментальной группы.

Усиление актиокислительного эффекта при сочетаннои применении комбинированного препарата и лазерного воздействия можно связать с изменениями в содержании витамина Е. Из представленных на рисунке 8 результатов исследования содержания витамина Е в крови и печени в различных группах животных очевидно, что введение комбинированного препарата и одновременное воздействие низкоэнергетическим лазером сопровож-

Таблица б

Содержание продуктов ПОЯ и витамина Е в легких и крови интактных крис я подвергнутых действие холода без и на фоне низкоинтенснвного лазерного воздействия

Показатели Интажтниа Действие Действие

холода холода и лазера

(контрольные) (экспериментальные)

(п-5) (П-6) (п-6)

Легкие

Диеновые

конъогаты 290±30 709240 450214

(няоль/г) Р1,2<0,001 Р2,3<0,001

Р1,3<0,001

Гидроперекиси

липидов 3023 31-5 7329

(няоль/г) Р1,2>0,1 Р2,3<0,001

Р1,3<0,001

Нагоновый

диальдегид 9,020,37 13,0±0,55 10,320,33

(нволь/г) Р1,2<0,02 Р2,3<0,01

Витамин Е Р1,3<0,05

(икг/г) 12,5±0,78 7,420,16 10,4—0,62

Р1,2<0,001 Р2,3<0,001

Р1,3<0,05

КРОЯЬ

Ддаиовыа

ковыэгати 130±11 175±34 12225

(нполь/мл) Р1,2<0,05 Р2,3<0,05

Т Р1,3>0,1

Гидроперекиси

сипндоз 41±4 28±4

(няоль/мд) Р1,2<0,001 Р2,3<0,02

Р1,3<0,01

КалоновыЛ

диальдегид 0,72±0,03 1,34±0,11 1,1020,04

(нколь/ял) ?1,2<0,002 Р2,3<0,05

Р1,3<0,01

Витамин Е

(нкг/нл) 3,53—0,26 4,5120,26 5,4020,44

Р1,2<0,02 Р2,3<0,05

Р1,3<0,01

Р1 (2 ~ достоверность различий между контрольными и интактныни животны-ки; Рг,з ~ достоверность различий между контрольными животными и животными, подвергнутыми действие холода на фоне облучения ниэкоэнерге-тическим лазером; Р1,з ~ достоверность различий между интактныки животными и животными, подвергнутыми действию холода на фоне облучения ннзкоэнергетическим лазером.

Содержанка продуктов ПОЛ в печени и крови кнтактных крыс, при действш ССЬ4 н на фоне введения фосфатидилхолиновых липосок, производного тио-барбитуровой кислоты (ТБ-4) и комбинированного воздействия препарата > низкоэнерготического лазера.

И, затели Кнтактнмв Получавшие Получавшие Получавшие Получавшие

СС1<4 ССХ,4+^Х СО,4+ТБ4 СС1.4+ФЛ+ТБ4

(контрольные) -¡-лазер

(П-5) (П-4) (п-4) <П-4) (п=3)

Диеновые

конъегаты

(нмоль/г)

печень

12001140

Гидроперекиси липидов 3414,1

{ниоль/г)

Калоновый

диальдегид

(нноль/г)

Диеновые

коньюгаты

(нмоль/г)

9.311,1

184125

22901310 Р1,2<0,01

Гидроперекиси

липидов 11,210,9

(ниоль/г)

17601210

Р2,3<0,05

Р1,3<0,05

12801150

Р2,4<0,01

Р1,«>0,1

6318,7 Р1,2<0,01

1211,1 Р1,2<0,05

1812,2 3713,4 Р2,3<0,001 Р2,4<0,01 Р1,3<0,01 Р1,4>0,1

9,011,0

Р2,3<0,05

Р1,3>0,1

9,410,9

Р2,4<0,1

Р1,4>0,1

Кровь

11801190 Р2,5<0,01. Р1,5>0,1

2011,9 Р2,5<0,001 Р1,5<0,01

8,210,9

Р2,5<0,01

Р1,5>0,05

355±38 152И7 183И2 100И7

Р1,2<0,005 Р2,3<0,005 Р2,4<0,005 Р2,5<0,001 Р1,3>0,05 Р1,4>0,1 Р1,5<0,002

16,311,3 Р1,2<0,05

9,И1,5 Р2,3<0,01 Р1,3<0,05

15,012,3 Р2,4>0,1 Р1,4<0,05

8,010,9 Р2,5<0,002 Р1,5<0,05

Малоновый

диальдегид

(нколь/г)

3,10Ю,42 5,3610,68 4,2310,38 2,62Ю,33 2,9310,45 Р1,2<С,005 Р2,3<0,1 Р2,4<0,001 Р2,5<0,002 Р1,3<0,05 Р1,4>0,05 Р1,5>0,1

Р1 2 ~ достоверность различий между контрольными и интактныни животными; Р2 з ~ достоверность различий между контрольными животными и животными' получавиими ССЪ4 на фоне введения фосфатидилхолиновых лило-сои; Рг 4 ~ достоверность различий между контрольными животными и животными' получавшими ССЬ4 на фоне введения производного тиобарбитуро-вой кислоты ТБ-4; р2 5 - достоверность различий между контрольными животными и животными,'получавшими ССЬ4 на фоне введения комбинированного препарата производного тиобарбитуровой кислоты ТБ-4 и фосфатидилхо-липовых липосои и действия низкоэнергетического лазерного излучения ФХ-фосфатнднлхолиновые дипосоиы; ТБ4 - производное тиобарбитурово: кислоты (препарат ТБ-4).

Е£2Э Печень ЕЮ Кровь |

Рис 8 Содержание витамина Е в печени и крови крыс при действии ССЪ

Рис 9 Окиеляемость и антиокислительвая активность плазмы крови крыс при. действии СС^

дается резким увеличение!! содержания витаиина Е в крови и позволяе эффективно предупреждать падение содержания витамина Е в печени, ха рактерное для поражения печени четыреххлористым углеродом.

Наиболее убедительные доказательства эффективности сочетания ан1 тиоксидантов с лазерный воздействием получена г.^и исследовании окисля' «мости и антиокнслительной активности плазмы крови (рис.9). Введена CCI4 приводит к трехкратному увеличение окисляемостн и исчезновени! антиокислительной активности плазмы крови. Введение фосфатидилхолино-cur липосон или препарата ТБ-4 не позволяет в полной мере предотвра-тиг» снижения антиокислительной активности и увеличения окисляемост! плазмы крови. В отличие от этого, сочетанное воздействие комбинированным препаратом и ниэкоэнергетяческим лазером резко уменьшает охисляе-иость плазмы крови и в наибольшей мере предотвращает снижение ее антиокислительной активности, вызываемое введением CCI4.

Таким образом, низкоэнергетическое лазерное воздействие на организм позволяет усилить антиокислительный эффект использованного нам! комбинированного препарата фосфатндшгхолнновых липосок и ТБ-4.

ВЫВОДЫ

1. В качестве модельной системы скрининга антиокислительной активности соединений в условиях in vitro предложено использовать аскор-6ат(НАДФН)-зависиное ПОЛ в микросомах печени, что позволяет оценивать влияние тестируемых соединений как на неферментативное, так и на ферментативное ПОЛ.

2. В условиях in vitro показана возможность резкого усиления ан-тиокиелнтелышх свойств производных малоновой и, в меньшей степени, тиобарбитуровой кислот при помоци использования комбинированных препаратов этих соединений с лкпосомами и мицеллами из фосфатидилхолина. Е наибольшей нере антиокислительные свойства выражены у комбинированных препаратов производных малоновой кислоты N8 и Н17 со смешанными мицеллами фосфатиднлхолина и дезоксихолата натрия.

3. Комбинированный препарат производного малоновой кислоты N17 с фосфатидилхолнновыми липосомами проявляет высокус АОА в условиях in vivo при активации процессов ПОЛ в организме животных введением CCI4 или воздействием низких температур.

4. Низкоэнергетическое гелий-неоновое и инфракрасное лазерное излучение оказывает проокекдантный эффект на перекисное окисление липи-дов в мембранах микросом печени в условиях in vitro, и, в то же время, антиоксидантный эффект в условиях in vivo при активации процессов ПОЛ в организме животных под влиянием холодового воздействия.

5. В условиях in vivo при активации процессов ПОЛ в организме животных введением CCI4 установлена возможность дополнительного усиления антиокислительных свойств комбинированного препарата производного тиобарбитуровой кислоты ТБ-4 с фосфатидилхолнновыми липосонани за счет одновременного низкоэнергетического лазерного воздействия.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. On the possible nechanism of the antioxidant effect of exogenous phospholipids in lipid peroxidation in microsome nenbranes // "8-th International Conference on Cytochrome P-450. Biochemistry, Biophysics and Molecular Biology". Abstracts. - Lissabon, Portugal, 1993.- p.24-28. (coauthors Borodin E.A., Dorovskikh V.A., Egorov K.E.)

2. Pyrinidine and malonic acid derivatives ans phospholipids -new antioxidant and membfrane stabilizing drugs // "The Second international Symposium of the JRMEF and the JRMCO on the Methods and Processes of JapanRussia North East Asia Medical Exchange". Prograи

and Abstracts. - Vladivostok, 1994. - p. 52. (coauthors DorovekiJth V.A., Borodin E.A., Alexandrovich E.V., Zrazhevskàya E.V.).

3. Влияние ниь..оинтенсиеного лазерного излучения на лерехисно* окисление лкпидов в ненб{>нах никросон печени // "Прнкенение лазерного излучения в клиничесаой практике и эксперимента". - Благовененск, 1994. - с.46. (соавг. Бородин Е.А., Бородина Г.П., Доровскнх В.А., Зражевская Е.З., Штарберг С.А. ).

4. Препараты фосфолипкдов и производные иалоновой кислоты проявляет антиокислительные свойства и предупреждает повреждение при действии на организм CCL< и низких температур в эксперименте // "Клиническая и патоморфслогнческая диагностика редковстречагинхся повреждения и заболеваний". Выпуск 2. - Вяагосгсеиск, 1994. - с.85. (соавт. Штарберг С.А., Егоров К.Е., Доровских С.Л., Бородин Е.А.).

5. Производные пиримидина, иалоновой кислоты и фосфолипиды - новые некбрзнотропниэ лекарственные средства // "2 Международный симпозиум фонда медицинского обмана Японии, России и стран северо-восточной Азии".- Владивосток, 1994.- с.215.(соавт. Доровских В.А., Бородин Е.А., Александрович Е.В., Зражевскал Е.В.).

6. Lov-intensi'ty laser irradiation and free-radical oxidation of lipids in experimental and clinical conditions // "The Third International Synposiua of the JRKEF and the JRHCO". - Osaka, Japan, 1995. -p.55. (coauthors DorovskiXh V.A., Borodina Q.P., Borodin E.A., Tseluy-ko S.S., Zrazhevskaya E.V., Shtarberg S.A.).

7. Phospholipids as drugs. // "The Third International Synponiun of the JRHEF and the JRHCO". - Osaka, Japan, 1995. - p.56. (coauthoro Borodin C.A., Dorovckikh V.A., Egorov K.E.).

S. Фосфолипиды как антиатеросклеротические лекарственные средства // "Липопротеиды и атеросклероз0. Тезисы дохладов симпозиума, посвященного 110-летио со дня рождения академика Н.Н.Аничкова.- Санкт-Петербург, 1995. - с.33. (соавт. Дорозсккх В.А., Бородин Е.А., Егоров К.Е.).

9. Комбинированные препараты фосфолипидных яипосои с антиокендан-тами и низкоэнергетичесяое лазерное воздействие предупреждают актива-циd свободнорэдикального окисления лкпидоэ в экспериментальных условиях // "Человек и лекарство". III Российский национальный конгресс. Тезисы докладов.- Н., 16-20 апреля 199.6. - с.19. (соавт. дороасккх В.А'., Бородин Е.А., Целуйко С.С., Штарберг С.А.).