Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Антимикробные свойства блокаторов Н1-рецепторов гистамина

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Антимикробные свойства блокаторов Н1-рецепторов гистамина"

' ' и

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР МОСКОВСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭПИДЕМИОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ им. Г.Н.ГАБРИЧЕВСКОГО

На правах рукописи

ШЕВЕЛЕВА Наталья Ефимовна

АНТИМИКРОБНЫЕ СВОЙСТВА

БЛОКАТОРОВ Н^ -РЕЦЕПТОРОВ Г ИСТ АМИ НА

03.00.07 - Микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва -1991

Работа выполнена на кафедре микробиологии Харьковского ■ фармацевтического института.

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор

И.Л.Дикий

доктор медицинских наук, профессор . Б.А.Шендеров

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Н. М.Грачева

доктор медицинских наук, профессор С.Д.Воропаева

Ведущая организация: Всесоюзный научно-исследовательский

химико-фармацевтический институт им.С.Орджоникидзе

Защита состоится-

"Ж" 1991 г. в ¿1 .часов

на за седа нии. специа лизирова иного совета. К 084.18.01 Московского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н.Габричевского МЗ РСФСР С125212, Москва, ул.Адмирала Макарова,10).

С диссертацией,можно ознакомиться-в-библиотеке института.

Автореферат разослан " ¿Л" ОСИП АО* $ 1991 г.

Л.П.Семенова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕШИИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Инфекционно-аляергические и гнойно-воспалительные заболевания составляют значительный процент в общей патологии человека. Причиной их являются антибиотико-резистентные формы микроорганизмов, а возникновению способствуют выраженные дефекты в иммунном и микроэкологическом статусах больного (Навашин С.М., 1989).

Стратегию и тактику.лечения гнойно-воспалительных и инфекционно-а ллергических заболеваний на современном этапе характеризует поиск и использование препаратов, одновременно обеспе-_ чивающих эффективное.влияние на этиологический и ведущий патогенетический факторы. Наряду с интенсивным синтезом и внедрением в медицинскую практику новых антимикробных средств в последние годы значительное внимание уделяется изучению ухе используе-. мых в клинике препаратов.с целью их применения по новому назначению (Базанов Г.А., 1987).

Одной из широко используемых в инфекционной патологии ^рупп лекарственных препаратов, помимо антибиотиков, являются антигис-таминные средства - блокаторы .^-рецепторов гистамина, обладающие сосудосуживающим, анестезирующим. и_другими фармакологическими--, эффектами. Имеются единичные сведения, что наряду с.этим, отдельные антигистаминные препараты способны оказывать антибактериальный и.антимикотический эффекты (Шендеров Б.А., 1975;. Курнатов- . ски П., 1981). Опубликованы данные о том, что эти препараты также способны элиминировать И-факторы и ингибировать.экспрессию плазмидных генов у кишечных бактерий (Шендеров Б.А., 1975; . мо1паг <1. ег а1.Д991). В то же время многие вопросы, синергизма антибиотиков с антигистаминными препаратами в литературе практи-

чески не освещены. Неизвестны механизмы их антимикробного действия, химиотерапевтическая эффективность, влияние на микроэкологив хозяина и некоторые другие показатели, связанные с перспективами применения по новому назначению.

Дель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось определение антимикробного действия антигистаминных препаратов-блокаторов Hj-рецепторов, выяснение возможности и обоснование их применения как своеобразных.химиотерапевтических средств, разработка рациональных схем их применения отдельно и в сочетании с антибиотиками.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи исследования:

1) охарактеризовать различные блокаторы Hj-гистаминовых рецепторов по наличию, уровню и спектру антибактериальной и антифунгаль-ной активности, оценить возможность применения по новому назначению;

2) изучить некоторые биохимические механизмы действия антигистаминных препаратов на микробную клетку;

3) на моделях стафилококковой и синегнойной.генерализованных инфекции белых мышей определить химиотерапевтическую эффективность антигистаминных препаратов;

4) в опытах in vitro и in vivo отобрать наиболее перспективные комбинации антибиотиков и.блокаторов Hj-гистаминовых.рецепторов с целью их'рекомендации для клинического применения;

5) исследовать некоторые микроэкологическ.ие.последствия орального применения некоторых блокаторов Hj-рецепторов гистамина.

Научная новизна. Впервые.показано наличие у блокаторов Нт-гистаминовых рецепторов сочетанной антибактериальной и анти-

фунтальной активностей.

Установлены синергидные, индифферентные и антагогистические комбинации антигистаминных препаратов с антибиотиками.

Впервые на модели генерализованной инфекции выявлена отчетливая химиотерапевтическая эффективность антигистаминных препаратов как противомикробных средств.

Установлено, что антимикробный эффект этих соединений обус-. ловлен ингибированием синтеза белка-И ДНК в бактериальной.клетке.

. Микробиологическими-и биохимическими.-методами, продемонстрировано влияние.блокаторов ^-рецепторов гистамина на микробную экологии толстой кишки.

По.материалам.работы оформлены.две заявки на изобретение.

Практическая значимость работы. Полученные результаты позволяют рекомендовать определенные блокаторы ^-рецепторов гистамина как эффективные химиотерапевтические. препараты.

Разработаны рациональные сочетания антигистаминных препаратов и антибиотиков в отношении возбудителей гнойно-воспалительных и инфекционно-аллергических заболеваний различной, этиологии.

Доказана потенциальная способность этих.соединений вызывать' микроэкологические нарушения в толстой кишке.

Результаты исследований оформ^ны в виде информационного, письма "Применение антигистаминных.препаратов как противомикробных средств",.утвержденного. РПК-"Фармация" МЗ.УОСР, 1939.

Основные положения, выносимые на защиту.

I. Антигиста минные препарату - блокаторы ^-рецепторов гистамина обладают антибактериальной и противогрибковой активностью в отношении возбудителей инфекционно-аллергических и гнойно-воспалительных заболеваний.

2. Противомикробные свойства антигнетамииных препаратов реализуются за счет ингибирования синтеза белка и ДНК в бактериальной клетке.

3. Антигистаминные препараты и антибиотики.при сочетанном применении могут проявлять синергидное, индифферентное и антагонистическое действие на патогенные микроорганизмы, что необходимо учитывать при их клиническом применении, и в терапевтических дозах, оказывают.незначительное влияние на фекальную микрофлору.

Апробация работы. Результаты .исследований.доложены на конференциях молодых ученых Харьковского фармацевтического.института (1988-1990 гг.), Областной научно-практической.конференции . молодых ученых-медиков "Научно-технический прогресс в медицине", на 1-ой Областной конференции "Вторичные иммунодефициты инфекционной и неинфекционной природы" С1989 г.., Харьков), на Ц-ой . _ Областной межинститутской конференции молодых ученых."микробиология, иммунология и биотехнология-», практике здравоохранения" (1989 г., Харьков), научной конференции молодых ученых и. специалистов ХНИ.И эндокринологии и химии гормонов (1990 г., Харьков), на Ш съезде.фармацевтов Туркмении (1989 г., Ашхабад). . . .

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ в.журналах и сборниках. ...............

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа со- -стоит из введения, обзора литературы, 5 собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы. Диссертация изложена на 163- страницах машинописного текста. Работа иллюстрирована 29 таблицами и 7 рисунками. Указатель литературы включает 151 отечественный и 66 зарубежных источников.

МАТЕШАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В работе изучены восемь коммерческих антигистаминных препаратов - блокаторов Hj-рецепторов гистамина (табл. 1).и антибиотики: тетрациклин, гентамицин, канамицин, ампициллин, эритромицин, а также диски с антибиотиками для определения чувствительности микроорганизмов, выпускаемые, в СССР.

В исследованиях по изучению антимикробной активности, а нтигистаминных препаратов или их..сочетаний.с антибиотиками.использовано 175 музейных.и клинических штаммов микроорганизмов, из них 164 штамма бактерий относились к родам: staphylococcus (32 DlTaMMa),Escherichia ( б) .Citrobacter (2), Enterobacter (26), Klebsiella (II). Proteus (5l), Shigella (5), Salmonella (26), Pseudomonas (5) И II ШТЭММОВ ГрибоВ; рода Candida (6 штаммов), Trichophyton (2), Epidermophyton (2),

Microsporum - (I)» Музейные культуры получены из. ГИСК им. Л.А.Тарасевича, клинические штаммы получены из 8-*й детской инфекционной больницы г.Харькова, ВШИЛ, ХНИИДиВ в течение 19801990 гг.

Бактериальные культуры хранили в столбиках.полужидкого .. _ (О,МПА под слоем-вазелинового-масла. Культуры патогенных грибов поддерживали на полужидкой (0,15$).среде Сабуро. . ..

В исследованиях применяли также другие питательные среды для различных целей: I).бульон на переваре Хоттингера с содержанием 120-140 мг//? а минного азота и pH 7,2-7,4 и мясопептонный.. агар для определения антибактериальной активности препаратов методом серийных разведений; 2).бульон и агар Сабуро для изучения противогрибковых свойств препаратов (pH 6,5-7,0).

Для выделения культур при бактериологическом исследовании

Таблица I

Препараты - блокаторы Н^-рецепторов гистамина, использованные ав работе

Назва ние Формула соединения

коммерческое ; химическое (международное) ;

Димедрол (СССР)

( дифенгидрамин)

Та вегил (ВНР)

( клемастин)

Счастии (хлорпирамин)

Пипольфен (ВНР) ч (прометазин)

Фенкарол (СССР)

Диазолин. (СССР)

(мебгидролин)

Димебон (СССР)

Перитол • (ВЙР)

(ципрогептадин)

Д-ди мети ла ми но-этилового эфира бензгидрола гид. рохлорид

1-метил-2[2-^-метил-парахлор-ди фе ни лмети окси -этил]пирроли дина гидрофумарат

к-диметиламино-эти л-и_( парах лор' бензил) -амино-пиридина гидрохлорид

10-(2-Димети л. аминопропил)-фенотиазина гидрохлорид

-о-сн^сн^ (сн^.на

н.-сн,-

хинуклидил-з-ди-

фенилкарбинола

гидрохлорид

л/ад,-на

щ-сн-ясснз^на СН3

9-бензил-1,2, 3, 4-тетрагидро-3-метилкарболи-на дисульфат

9- [2(2-мети лпири ди л-5)-этил] ~ 3,б-диметил-1, 2,3,4-тетрагидро гаммакарболина дигидрохлорид'

4-5-дибензо[а,сГГ ци кло(гепта три е-нили ден)-1-мети л. пиперидина гидоо. хлорид

(ОСТ*

СН2.-СНг-0-СН3

.ссо .

.....¿н3 ........

.2нсг

фекалия крыс использовали: I) среду Эндо; 2) бактоагар Плоскире-ва; 3) маннито-солевой агар фирмы bio Merieux ; 4) азидовый агар фирмы bio Merieux ; 5) срвДу ТSH фирмы bio Merieux !

6) селективную среду для энтерококков фирмы bio Merieux ;

7) среду mes фирмы serva ; 8) анаэробный агар с кровью типа Bremer фирмы M.fco . Идентификацию культур проводили на основании изучения.роста бактерий в аэробных, и анаэробных условиях, отношения, к. окраске по Грану,..характеру роста на.се-„ лективных средах, продукции каталазы, цитохромоксидазы,-продукции индола, сероводорода, утилизации цитрата натрия, определения подвижности и др. (Готтшалк Г., 1982).

Эксперименты проведены на 620 белых нелинейных мышах обоего пола массой 18-20 г и 90 белых нелинейных крысах - самцах массой 180-200 г.

Определение антибактериальной активности испытуемых лекарственных препаратов проводили методом серийных разведений в плотных и жидких питательных средах в соответствии с "Методиче-.. скими указаниями по применению унифицированных методов определения чувствительности микроорганизмов к химическим препаратам" (1981). Для дополнительной оценки активности.лекарственных средств использовали полученные.рассчетным. путем показатели . ... МПК50 и МПКд0 - концентраций, подавляющих рост 50$ и 90$ штаммов одного вида соответственно. ...

Изучение противогрибковых свойств лекарственных препаратов проводили также методом серийных разведений в соответствующих . средах. Микробную нагрузку рассчитывали по бактериальному стан-. дарту мутности: с учетом того, что размеры.клеток дрожжеподобных грибов и клеточных элементов.нитчатых грибов превышают бактериальные, для грибов инокулят содержал 10^-3« ic£ КОЕ/мл. Инкубация

при культивировании дрожжеподобных грибов составляла. 48 часов. За ростом дерматофитов наблюдали в течение 7-10 дней.

Для оценки химиотерапевтической эффективности препаратов использовали модели стафилококковой и синегнойной генерализованной инфекции белых мышей.(Першин Г.Н., 1976). Испытуемые препараты вводи ли . однократно и одновременно с .внугрибрюшинным заражением в дозах, рассчетно соответствующих.максимальным одноразовым, для человека с учетом межвидовой экстраполяции данных .(Рыболов-лев. Ю.П., 1981). Химиотерапевтический эффект лекарственных . средств оценивали на основании показателей выживаемости животных в течение 10 дней на фоне габели контрольных.мышей, а также по суммарной продолжительности жизни мышей на протяжении срока наблюдения и высеваемости возбудителей из паренхиматозных органов в различные сроки после заражения.

Действие блокаторов Н^-гистаминовых рецепторов на.синтез ДНК и белка исследовали на модели золотистого стафилококка АТСС 25923 радиоизото.пным методом с использованием меченых %-тимидина, ^-глицина и смеси -^-а ми но кис лот. Обработку радиоактивных проб, проводи ли по методу Д.Кеннела (1970). Радиоактивность проб определяли на сцинтилляционном спектрофотометре ЗЬ -40 " 1г^е1Ческп1цие " В ТОЛуОЛОВОМ СЦИНТИЛЛЯТОре. -

Для оценки влияния пипольфена на микробную экологию и колонизационную резистентность толстой кишки белых крыс, использова-. ли. различные.методы. Действие.препарата-на просветную микрофлору изучали в процессе бактериологического .исследования испражнений ._ крыс по методу, разработанному в лаборатории гигиены и экологической микробиологии ВНИИА ("Методические указания ...", 1989).

Эффект пипольфена на антагонистическую активность фекалий

определяли по методу s. p. Borrieiio (1986) в модификации С.Д.Митрохина и Б.А.Шендерова. (I99Ö). Для характеристики изменения метаболической активности анаэробных микроорганизмов применяли метод газо-жидкостной хроматографии, методику н. Hidaca (1986) в модификации С.Д.Митрохина и Б.А.Шендерова (1990). Исследования проведены на газовом хроматографе свои -5 (ЧСФР).

Пипольфен вводили животным интрагастрально однократно в дозах,.соответствующих максимальной терапевтической и.субтокси-ческой: 3 мг/кг и 12 мг/кг массы тела. Микроэкологические эффекты пипольфена определяли на 2-й день восстановительного периода.

Результаты исследований обработаны методами вариационной, статистики по критерию Стьюдента (Ашмарин И.П., Воробьев A.A., 1962; Малета Ю.С., Тарасов В.В., 1982).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение антимикробного действия.антигистаминных препаратов. В результате определения противогрибковых свойств восьми препа- ■ ратов-блокаторов Hj-гистами новых рецепторов: димедрола, тавеги-ла, пипольфена, супрастина, фенкарола, димебона, диазолина и пе-ритола нами установлено, что на среде. Сабуро в концентрациях 63-50000 мкг/мл они оказывают фунгицидное,действие на штаммы, возбудителей кандидоза, трихофитии, эпидермофитии и микроспории. Факт. обнаружения фунгицидного действия антигистаминных препаратов на дрожжеподобный гриб .Candida albicans' . имеет большое

практическое.значение, поскольку создает реальные предпосылки по их использованию для.предупреждения.кандидозных инфекций, возникающих, как правило, на фоне дисбактериозов и иммунодефицит-ных состояний, вызванных антибиотикотерапией и иными причинами.

ю

Выявленное действие антигистаминных препаратов на возбудителей дерматомикозов позврляет по-новому оценить их лечебный эффект, сочетающий не только десенсибилизацию организма хозяина, но и специфическую активность в отношении этих патогенных грибов.

Изучение антибактериального действия блокаторов Hj-гистами-новых рецепторов в отношении бактерий продемонстрировало, что их рост в МПБ ингибировался антигистаминными препаратами в концентрациях 31,3-50000 мг/мл. Оказалось, что пертол, тавегил, диме-бон и фенкарол наиболее, эффективны в отношении s. aureus- . Их... . показатели МПКзд/МПКэд соответственно.составили 78,1/265,6 мкг/мл, 101,6/296,9 мкг/мл, 257,8/1125 мкг/мл, 312,5/1062 мкг/мл..Некоторые штаммы s. aureus проявили чувствительность.к концентрациям пипольфена в 156 мкг/мл, супрастина - 312 мкг/мл, в отличии от димебона, подавлявшего рост 90$ всех штаммов золотистого стафилококка концентрацией 3875 мкг/мл.

Димедрол, пипо.льфен, супрастин.оказались более активными в отношении грамотрицатедьных бактерий. Выявлен значительный эффект димедрола, на разные виды бактерий сем. Enterobacteriacea , особенно ОТНОСЯЩИХСЯ К родам Escherichia , Klebsiella (ЧПК50 41,5 мкг/мл и 86,2-мкг/мл). Тавегил, оказался активным в отношении эшерихий, шигелл, сальмонелл, клебсиелл. и протея в концентрациях 78-2500 мкг/мл. Действие пипольфена проявилось в . отношении всех представленных грамотрицательных культур.в пределах 39-3125 мкг/мл. Супрастин подавлял развитие энтеробактерий в концентрациях 156-2500 мкг/мл, воздействуя наиболее сильно на. Escherichia coll , Shigella eonnei разные ВИДЫ .са льмонелл.

Сходная тенденция выявлена в действии перитола, величина МПКдд которого в отношении перечисленных тест-культур составила

285,5-871,4 мкг/мл. Фенкарол, димебон и особенно диазолин оказались менее активными в отношении энтеробактерий и псевдомонад.

Таким образом, антигистаминные препараты продемонстрировали широкий спектр антимикробного действия.

Антигистаминные препараты нередно используют при патогенетическом лечении инфекционных заболеваний. При этом, как правило, не учитывается возможность синергидного или антагонистического эффекта их совместного применения с. антибиотиками. Исследования -синергидного потенциала тавегила, супрастина, пипольфена, димед-. рола, фенкарола и димебона с десятью антибиотиками (ристомицином, гентамицином, канамицином, ампициллином, метициллином, левомице-. тином, тетрациклином, стрептомицином, олеандомицином, эритромицином) показали принципиальную возможность дифференцированного взаимодействия вышеуказанных антигистаминных препаратов с. определенными антибиотиками. Наибольший синергидный эффект проявили антигистаминные препараты при сочетанном применении с аминоглико-зидами (гентамицином, канамицином); в частности, комбинация ген-тамицина с димедролом позволила в 16 раз повысить прогивостафи-лококковое действие антибиотика. Мы изучили физико-химическую. совместимость этих препаратов. С этой целью были проведены исследования по совместимости.фармакопейного раствора.димедрола для инъекций с I, 2, 3, 4$ растворами гентамицина. В результате., данной серии опытов установлено, что сочетание гентамицина с димедролом в одном растворе совместно по.микробиологической и токсикологической характеристикам. Таким образом, проведенные исследования позволили обосновать целесообразность совместного введения для реализации синергидного эффекта аминогликозидов с антигистамииными препаратами.

2. Сравнительная оценка химиотерапевтической эффективности антига стаминных препаратов.и-их сочетаний с антибиотиками на модели генерализованной гнойной инфекции. Как уже отмечалось, бло-каторы Hj-рецепторов гистамина способны элиминировать плазмиды антибиотикорезистентности. Это в сочетании со способностью анти-гистаминных препаратов подавлять рост широкого спектра потенциальных возбудителей, гнойно-воспалительных и септических инфекций, включая грибы, создает реальную основу целенаправленного применения этих препаратов по новому назначению как химиотерапевтических средств. '......

Исследование химиотерапевтической активности антигистамин-. ных препаратов и их сочетаний с антибиотиками проводили на модели генерализованной гнойной инфекции белых мышей. При этом.оказалось, что эффективность монотерапии стафилококкового сепсиса тавегилом, су.прастином,..димедролом, перитолом сравнима с действием гентамицина и тетрациклина и превышала таковую.эритромицина и канамицина (табл. 2). Сочетание названных блокаторов Hj-гиста-миновых рецепторов с.гентамицином приводило к усилению химиотерапевтической активности этого антибиотика.

На модели синегнойного сепсиса белых мышей нами также обнаружен высокий лечебный эффект.димедрола, тавегала, супрастина, и их.сочетаний с гентамицином. Однако, при совместном применении этого антибиотика с диазолином, перитолом, фенкаролом.и димебо-

ном терапевтическая эффективность.снижалась (табл..з),______

. . Некоторые механизмы действия антигистаминных.препаратов на бактериальную клетку. При анализе полученных результатов.естественно возникает вопрос механизма действия блокаторов.Н^-ре-цепторов гистамина на микробную клетку. При решении данного воп-

Химиотерапевтическая эффективность актигистаминных препаратов, антибиотиков и их комбинаций при стафилококковом сепсисе у белых мышея

Препараты Дозы мг/кг 3-й день после заражения 10-й день после заражения

Выжило Погибло Суммарная продолжительность" ' жи зни Выжи-:Погиб-:суммарная про ло ' :ло ;должитедьность"-: Гжизни *

абс.. : % Р.. .....*абс.- " % -Р -

• •

I 2 3 4 5 : 6 : 7 8 : 9 : 10 : II : 12

Контроль

Перитол

Димедрол

Фенкарол

Супрастин

Диазолин

Димебон

Пипольфен_

Тавегил...

Тетрациклин

Гентамицин

Ампициллин

Канамицин . _.

Эритромицин. ... ..

Перито л/а мпи ци лли.н.

Перитол/гентамиция.

Ди ме дро л/ге нта ми ни н

5е нка ро л/г е нта ми ци н

1,50 9,40 9,40 3,80 56,60 3,80 9Г50 0,38 18,90 13,20 188,60 94,20 . 94,20. 1,50/188,60 1,50/13,20 9,40/13,20 9,49/13,20

О 70 60 60 60 40 70 10 10 80 70 70 60 50 10 90 90 80

100 30

4/30 21/30

40 20/30 40 23/30 40 18/30 60 17/30 30 " " 90 90 20 30 30 40 50 90 Ю

21/30 7/30 5/30 25/30 21/30 23/30 20/30 15/30 3/30 29/30 10 28/30 20 26/30

13

70 <0, 67 г-" 77 60 -" 57 70

23 >0, 17

83 <р. 70 -" 77 67 50

Ю XI, 97 <р, 93 -я 87

О

05 60 50

• 50 - 20 - 30 30 О О

05 30

100 40

05

40 30 40 10 05 10 05 70

- 70

- 80

4/100. 66/100

50 61/100

50 59/100

80 39/100

70 40/100

70 38/100

100 13/100

100 9/100

70 63/Ю0

60 63/100

70 58/100

60 53/100

90 40/100 90 • 10/100

30 88/100

30 83/Ю0

20 82/ЮО

66 <0,05 61 59

39 -"40 -'.'38 -"-т 13 >С,05

9

63 <0,05 63 -"58 -"53

40

Ю >0,05 88 <0,05 83 -Л-82

Продолжение табл. 2

2

: 3 : 4 :

10 90

90 10

?о 80

10 90

90 10

ТО 90

ТО 90

70 30

90 10

40 60

50 50

70 30

90 100

90 10

5

7

8

Ю : II : 12

Су пра ст и н/а мпи ци л ли н Супра с тин/ге нта мици н Диа зо лин/ампициллин Диазоли н/тетра цикли н Диа зо ли н/ге нта ми ци н ^имебон/канамицин Та ве ги л/а мпи ци лли н Тавегил/эритромицин. Та веги л/г ента ми ция Пиполь фен/ампициллин.. Пипольфе н/э рат ромици н Пипо льте н/т етра ци кли н Пи по ль® е н/ге нта ми ци н пяпольфев/гента ийцян"

3,80/188,60 3,80/13,20 56,60/188,60 56,60/18,90 56,60/13,20 3,80/94,20 0,38/188,60 0,38/94,20 0,38/13,20 9,50/188,60 9,50/94,20 9,50/18,90 9,50/13, 20 "9,50/6,60

3/30 28/30 6/30 5/30 29/30 4/30 10/30 21/30 28/30 12/30 16/30 22/30 27/30 27/30

10 >0,05 93 <0,05 20 >0,05 17 >0,05 97 <0,05 13 >0,05 33 >0,05 70 <0,05 93

40 -"53 73 90 90

10 90 20 10 90 О О 20 50 40 20 60 80 80

90 10 80 90

10/100 91/100 20/100 12/100

10 92/100

100 5/100

100 11/100

80 48/100

50 74/100

60 13/100

80 42/100

40 68/100

20 87/100

20 84/100

10 >0,05

91 <0,05 20 >0,05

12 >0,05

92 <0,05 5 >0,05

11 >0,05 48 <0,05 74

13 42 68 87

84" -"-

Примечание:

1) Р-- вероятность .отсутствия.различий между опытом и .контролем,

2)'Комбинации димебона (3,80 мг/кг), фенкарола-С9,.40 мг/кг), димедрола. (9,40-мг/кг), перитола (1,50 мг/кгк . супрастина Х3.80 мг/кг) с тетрациклином-(18, 90 мг/кг) и димебона (3,80 мг/кг), фенкарола (9,40 мг/кг), димедрола (9,49 мг/кг) с ампициллином (188,60 мг/кг) не проявили химиотерапевтического эффекта.

Химиотерапевтическая эффективность антигиста минных препаратов, антибиотиков и их.комбинаций.при синегнойном.сепсисе у белых.мышей

Препараты Дозы мг/кг 3-й день после заражения. Ю-й день после заражения

Выжи-!Погиб-:Суммарная про-ло ;ло :должительность- -' ;жизни Выжило Погиб-;суммарная про-ло :должительность " ;жизни

: . :абс. % : р : абс. : % : р

Контроль Тавегил. Диазо.лин Супрастин Димедрол. ......

Пипольфен .... ....

Та веги л/ге нта ми ци н. _ Диазолин/гентамицин Супрастин/гентамицин Димедрол/гентамицин Перитол/геятамици н фенкарол/гентамицин Димебон/гентамишч... Гёнтамицйн

0,38 56,60 3,80 -9,40 .

0,3^13)20 56,60/13,20 56,60/13,20 9,40/13,20 1,50/13,20 9,49/13,20 .3,80/13*20. 13,20

О 100 100 90 80 20 80 40 100 100 30 10 . .10.. 80

100 4/20 О 20/20

О 10 20 80

20/20 18/20 18/20 9/20

20 17/20

60 15/20

О 20/20

О 20/20

70 11/20

90 5/20

30.. 6/20

20 18/20

13 ^

Ю0<0 100 -" 90 90

45 X), 85 <0. 75 100 100 -'! 55 <0, 25 >0, ..30 90 <0,

О

05 50 80 50 60 05 О 05 40 10 50 60 05 10 05 О О

65' 70'

100 50 20 50 40 100 60 90 50 40 90 100 100 30*""

4/20 71/Т00 _ 87/100 87 66/100 66 75/100 9/100 55/100 27/100 73/100 73/100 27/100 5/100

13

71 <0,05

75 -'-'9 >0,05 55 <0,05 27

73 -?-73 -'*-

27 <0,05

„,„. 5 >0,05 6/100 6 -"- „

'87/100 87 <0,05

Примечание: I) Р - вероятность отсутствия.различий между..опытом и контролем.--.

2) Пеоитол (1,50 мг/кг), фенкарол (9,40 мг/кг), димебон (3..80 мг/кг) и комбинация пипольфен/гентамицин (9,50 мг/кг 13,20 мг/кг; не проявили химиотерапевтического эффекта.

роса объектом нашего изучения были стафилококки. Используя метод радиоактивной метки с ключением %-тимидина. и суммы ^^С-амино-кислот, мы определили влияние этих.препаратов на синтез ДНК и белка. В результате обнаружено, что димедрол, пипольфен практически не влияли на синтез ДНК, в то время как остальные препараты в той или иной мере подавляли этот процесс. Все исследованные лекарственные средства в концентрациях, равных МПК, активизировали процесс включения ..^с-аминокислот в суммарные.белки стафилококков, а их возрастающие концентрации инг.ибировали..белковый -синтез (рис. I, 2). Мы полагаем, что эти данные, свидетельстзуют • о том, что антигистаминные препарат, способствуя лабилизации.би-липидного слоя, вызывают.осмотический шок в микробных клетках, то есть.в основе антимикробного действия этих препаратов лежит... их способность взаимодействовать с рецепторами клеточных мембран, изменяя их проницаемость для предшественников ДНК и белков, что

приводит-к. нарушению.их синтеза...........................-------

.....Влияние-ииподьфена-на-микробнуюэкологию и колонизационную

резистентность тодетой кишки. Исходя из.теоретических.посылок,_ высказанных в.ряде, работ (тендеров. Б.А.,.1967, 1990), о .потен» циальной возможности соединений - производных фенотиазина, вызывать дисбиотические.изменения, мы исследовали действие пипольфе-на в отношении микрофлоры толстой кишки белых.крыс. Еактериоло-. гическое исследование фекалий опытных и контрольных животных позволило нам обнаружить достоверное увеличение числа.кишечных палочек и.фекальных стрептококков.в просветном.содержимом-топстой кишки крыс, получивших, максимальную одноразовую и четырехкратно увеличенную дозы пипольфена. В.фекалиях, опытных крыс обеих групп также резко возрастало количество клостридий, которые у больший-

Рис. I. Действие блокаторов Н^-рецепторов' гистани на -на синтез ДНК в клетках золотистого стаяло- ' кокка: I -пипольфен, 2 - димедрол; 3 -"периуол, 4 - фенкарол, 5 - димебон, б --диазолин,' 7 - супрастин, 8 - тавегил, 9 - контроль.

Рис. 2. Действие блокаторов Н^-рецепторов гистамина'на синтез белка в клетках золотистого стафилококка; I - пипольфен, 2 - димедрол, 3 - перитол, ц - фенкарол, 5 --димебон, б - диазолин,' 7 - супрастин, 8 - тавегил, 9 - контроль.

ства животных контрольной группы отсутствовало. В то же время количество стафилококков, облигатно анаэробных грамположительных и гра«отрицательных неспорообразущих бактерий сохранилось на уровне интактных животных. Изменения количественного и качественного состава микробиоценоза кишечника носили умеренный.характер и, вероятно, явились закономерным итогом адаптации микроорганизмов просветной флоры толстой кишки на пипольфен. Эти данные являются новой дополнительной характеристикой пипольфена как проти-вомикробного агента.

Влияние пипольфена на колонизационную резистентность толстой кишки оценено нами в экспериментах in vitro путем определения антагонистической активности фекалий крыс, получивших препарат по той же схеме, что и.в предыдущей серии опытов, по отношению к 4-м видам УПМ: кишечной палочке, си негнойной палочке, клебсиелле и стафилококку. При этом продемонстрировано.отсутствие достоверного увеличения.числа микробных клеток.индикаторных бактерий в опытных и контрольных .группах (рис. 3).

Определение концентрации-и спектра летучих жирных кислот (Cj-Cy) в фекалиях белых крыс, получивших пипольфен по вышеуказанной схеме, пока зало .незначительное повышение (Р. > 0,05)- процентного содержания уксусной и капроновой кислот при одновременном снижении (Р > 0,05) концентрации пропионовой и масляной.кислот в опытных образцах (рис. 4). Это может свидетельствовать о потенциальной способности пипольфена изменять метаболические процессы анаэробных бактерий толстой кишки.

Из этого можно заключить, что вводимый интрагастрально.даже в дозах, в четыре раза превышавших терапевтическую,он оказывает слабое негативное влияние на микроэкологию толстой кишки.

1,8 К0Е/п1 10 8

. • Г - •« V ч У- *у . « '•' *.....»••.«■

уЧЧЧЧ'У Ч

ЧччЧчЧччЧч^чч^

р.' аегийпоеа-5

Я, ер1аегт!с118-7

К. оху1;оса-3

е. сои- ,х-бг

Рис. 3. Антагонистическая активность фекалий крыс, получавших пипольфен:

|—| - исходное количество микробных клеток;

количество жизнеспособных клеток после контакта с фекалиями контрольных крыс;

ЕЗ

м

количество жизнеспособных клеток после контакта с фекалиями крыс, получавших терапевтическую дозу пипольфена;

Количество жизнеспособных клеток после контакта с фекалиями крыс, получавших четырехкратно увеличенную дозу пипольфена.

пропионовая кислота

масляная кислота

валериановая кислота

|| капроновая кислота

Рис. Ч. Количественное содержание летучих-жирных кислот (С2-С7) в фекалиях белых крыс, получавших пипольфен.

По оси ординат: содержание в общем количе-. стве, %.

I | _ контрольная,группа крыс;

_ опытная группа животных, получавших терапевтическую дозу пипольфена;

_ опытная группа животных, получавших" четы-

ишшн ■■

рехкратно увеличенную дозу пипольфена.

ВЫВОДЫ

1. Антигистаминные препараты, относящиеся к группе блокато-ров Hj-рецепторов гистамина, обладают широким спектром антибактериальной и фунгицидной активности, в отношении медицински значимых грамположительных и грамотрицательных бактерий и грибов.

2. Блокаторы Hj-гистаминовых рецепторов в комбинации с антибиотиками разных групп оказывают синергидный, индифферентный и антагонистический антимикробные эффекты.

3. Сочетание гентамицина с димедролом совместимо в одном растворе, что позволяет реализовать синергидный эффект этой комбинации ln vivo.

П. На моделях генерализованных гнойных инфекций,., вызванных ... стафилококком и синегнойной палочкой у белых мышей, доказана принципиальная возможность использования антигистаминных препаратов как антимикробных средств, сравнимых по активности с антибиотиками.

.5. На модели стафилококкового, сепсиса, комбинации, гентамици-. на со всеми.антигистаминными .препаратами продемонстрировали высокую химиотерапевтическую эффективность. При синегнойном сепсисе. оптимальными являются сочетания гентамицина с димедролом, супрас-тином, тавегилом. ...

6. Антимикробный эффект а нтигистаминных препаратов может.. .. быть связан со способностью ингибиции синтеза белка и ДНК в бактериальной клетке.. .....

7, Пипольфен оказывает слабое действие на просветную. микро-, флору и модифицирует метаболическую активность микробных ассоциаций, без снижения антагонистического эффекта фекалий в отношении., оппортунистических патогенов, что является выгодной терапевтиче-

{

fi

ской характеристикой данного препарата.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Шевелева Н.Е., Чернуский В.Г. Антимикробные свойства блокато-ров Hj-рецепторов гистамина и.перспективы их использования в клинической медицине // Ш съезд фармацевтов Туркменской ССР:

. Тез.докл. - Ашхабад, 1989. - С.201.

2. Шевелева Н.Е. Антимикробные, свойства антигистаминных препаратов // П обл.межинститут.конф.. молодых ученых '.'Микробиология, иммунология, биотехнология - практике здравоохранения" (2425 мая 1989): Тез.докл. -.Харьков, 1989.- С.II.

3. Шевелева Н.Е., Шевченко Н.И. К вопросу повышения специфической активности антибиотиков // ХУП науч.конф.молодых ученых и.специалистов Харьк.ШИ эндокринологии и химии гормонов": Прогр.

и аннот.докл. - Харьков, 1990. - С.40.

4. Шевелева■ Н.Е.-К микроэкологической характеристике дипразина // ХУП науч.конф.молодых ученых и специалистов Харьк.ШИ-эндо~ . кринологии и химии гормонов.'.'Актуал.вопр.современ.эндокринологии и химии гормонов": Прогр.и аннот.докл. - Харьков, 1990. -С.48.

5. Шевелева Н.Е., Шевченко МЛ. К применении антигистаминных .. средств по новому назначению // ХУП.науч.конф.молодых ученых и специалистов Харьк.ШИ эндокринологии и химии.гормонов "Актуал.вопр.современ.эндокринологии и химии гормонов": Прогр. и аннот.докл..- Харьков, 1990. - С.47-48.

6. Шевченко М.И., Шевелева Н.Е. К вопросу создания инъекционной лекарственной формы гентамицина сульфата и. димедролом II ХУП науч.конф.молодых ученых и специалистов Харьк.ШИ эндокрино-