Антикарнозиновая активность стафилококков

Потехина, Лидия Петровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Антикарнозиновая активность стафилококков
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Антикарнозиновая активность стафилококков"

004614662

На правах рукописи

Потехина Лидия Петровна

АНТИКАРНОЗИНОВАЯ АКТИВНОСТЬ СТАФИЛОКОККОВ

03.02.03 - «Микробиология»

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 5 НОЯ 2010

Оренбург-2010

004614662

Работа выполнена в УРАН Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской академии наук

Научный руководитель:

член-корреспондент РАН, директор учреждения Российской академии наук Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза

Уральского отделения РАН Бухарин Олег Валерьевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор ГОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская

академия Росздрава» Усвяцов Борис Яковлевич

кандидат биологических наук, доцент ГОУ ВПО «Тюменская государственная

медицинская академия Росздрава» Тимохина Татьяна Харитоновна

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Росздрава»

Защита состоится « & » декабря 2010 г. в часов на засе-

дании диссертационного совета Д. 208.066.03. при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (Россия, 460000, г. Оренбург, ул. Советская, д. 6, зал заседаний диссертационного совета). С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО ОрГМА.

Автореферат разослан «¿^октября 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук,

профессор

Немцева Наталия Вячеславовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Феномен выживания бактерий в организме хозяина рассматривается как одно из важных звеньев в патогенезе инфекционного процесса. Выживание бактерий в макроорганизме реализуется через их адаптацию к факторам защиты хозяина и может быть связано с инактивацией последних. В настоящее время установлено, что микроорганизмы способны подавлять факторы естественной резистентности организма хозяина, такие как лизо-цим, комплемент, лактоферрин и др. [Бухарин О.В., 1999]. Одним из факторов защиты хозяина является природный дипептид карнозин (ß-аланил-L-гистидин), который оказывает антибактериальное действие, обладает антиоксидантной активностью [Дупин A.M. с соавт., 1984], проявляет ан-тистрессорный [Гуляева Н.В. с соавт., 1989], иммуномодулирующий [Мальцева В.В. с соавт., 1992] и радиопротекторный [Северин С.Е. с соавт., 1990] эффекты, обнаружено также его противоаллергическое действие [Адо А.Д. с соавт., 1977]. Отмечено, что дифтерийные бактерии, нуждающиеся для своего роста в ß-аланине, могут получать его из L-карнозина [Mueller, 1938], установлено разрушение карнозина бактериями [Gefter, 1925], а также способность бактерий, преимущественно стафилококков, его инактивировать, определенная как антикарнозиновая активность (АКрА) [Бухарин О.В. с соавт., 1999]. Карнозин является эндогенным компонентом быстрых скелетных мышц [Severin S.F., 1964], однако наибольшее количество дипептида содержится в обонятельном эпителии слизистой оболочки передних носовых ходов [Margolis F., 1974], являющимся естественным биотопом для микроорганизмов (в частности, стафилококков) при бактерионосительстве.

В связи с этим, известный интерес представляет, с одной стороны, -изучение распространенности антикарнозиновой активности у разных видов стафилококков, выделенных со слизистой оболочки переднего отдела носа, у здоровых лиц, бактерионосителей S. aureus и из очагов инфекции от больных инфекционно-воспалительными заболеваниями, расшифровка биологической роли антикарнозиновой активности у стафилококков, а с

другой — разработка новых подходов к диагностике и санации бактерионосителей под контролем этого признака.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы являлось определение роли антикарнози-новой активности стафилококков в формировании бактерионосительства и разработка новых методов диагностики и санации стафилококковых бактерионосителей.

Для реализации этой цели были поставлены и решены следующие задачи:

1. Изучить распространенность и выраженность антикарнозиновой активности у стафилококков разных видов.

2. Оценить биологическую роль антикарнозиновой активности стафилококков при бактерионосительстве.

3. Разработать подходы к дифференциации резидентной и транзи-торной стафилококковой микрофлоры при бактерионосительстве.

4. Изучить регуляторное действие Циклоферона на антикарнозино-вую активность стафилококков in vitro и in vivo.

Научная новизна

Проведенные исследования позволили установить, что АКрА является широко распространенным признаком стафилококков и зависит от источника выделения: антикарнозиновая активность с высокими значениями признака характерна для культур, выделенных из биотопа с высокой концентрацией карнозина (обонятельный эпителий слизистой оболочки носовых ходов) в сравнении со стафилококками, выделенными из очагов от больных инфекционно-воспалительными заболеваниями. При сравнительной оценке значимости персистентных свойств стафилококков, выделенных от бактерионосителей, установлено, что ведущим свойством стафилококков, определяющим формирование бактерионосительства, является их антикарнозиновый признак.

Экспериментально в опытах in vivo показан вклад антикарнозиново-го признака в персистенцию золотистых стафилококков.

Обоснована возможность использования антикарнозиновой активности в дифференциации стафилококковой микрофлоры при бактерионосительстве и в прогнозировании развития стафилококковых инфекций.

В экспериментальных условиях установлена способность Циклофе-рона подавлять АКрА стафилококков, что позволило обосновать новый способ санации стафилококковых бактерионосителей.

Практическая ценность

Полученные данные расширяют теоретические представления о биологических свойствах стафилококков, способствующих их персистен-ции.

Практическая ценность исследования заключается в возможности использования антикарнозиновой активности стафилококков в качестве маркера при диагностике стафилококкового бактерионосительства, разработана математическая модель дифференциации резидентной стафилококковой микрофлоры от транзиторной. Предложен способ дифференциации ассоциативной микрофлоры, вызывающей развитие местных гнойно-воспалительных заболеваний, по уровню экспрессии антикарнозиновой активности (Патент РФ на изобретение №2318021) и способ санации резидентных стафилококковых бактерионосителей Циклофероном.

Положения, выносимые на защиту

1. Антикарнозиновая активность стафилококков - фактор их перси-стенции, способствующий выживанию микроорганизмов в организме хозяина и формированию бактерионосительства.

2. Антикарнозиновый признак стафилококков — маркер при диагностике бактерионосительства.

3. Способность Циклоферона снижать антикарнозиновую активность стафилококков позволяет обосновать подход к отбору препарата для санации резидентных бактерионосителей.

Апробация работы

Материалы работы были доложены и обсуждены на конференции молодых ученых и специалистов Оренбургской области (Оренбург, 2006; 2009); V и VI Всероссийской конференции по персистенции микроорга-

низмов (Оренбург, 2006; 2009); Всероссийской научной конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс» (Москва, 2007); IX съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007); I международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых (Донецк, 2009); Всероссийской научной конференции с международным участием «Физиология и генетика микроорганизмов в природных и экспериментальных системах» (Москва, 2009).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ, в том числе 3 публикации в журналах, рекомендованных ВАК, получен патент на изобретение № 2318021 от 27 февраля 2008 года.

Материалы диссертации представлены на региональном конкурсе научно-исследовательских работ для молодых учёных по медицине и отмечены Дипломом лауреата III премии Губернатора области (Оренбург, 2009).

Объем и структура диссертационной работы

Текст диссертации изложен на 117 страницах машинописи, содержит введение, 4 главы, заключение, выводы, указатель литературы, включающий 114 отечественных и 75 иностранных источников и приложение.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследования

Для характеристики распространенности и выраженности АКрА клинических изолятов использовали: 134 штамма Staphylococcus aureus, 254 - Staphylococcus epidermidis, выделенных со слизистой оболочки переднего отдела носа у здоровых лиц (17-18 лет) и часто длительно болеющих (ЧДБ) респираторными заболеваниями детей 9-14 лет, являющихся резидентными бактерионосителями. Были изучены золотистые и эпидер-мальные стафилококки, выделенные от 42 больных с гнойным воспалением околоносовых пазух, 27 больных с постинъекционными абсцессами мягких тканей, 10 больных с трофическими язвами нижних конечностей, 15 - с гнойными заболеваниями легких и плевры.

Выделение и идентификацию стафилококков от бактерионосителей проводили в соответствии с «Методическими рекомендациями по выделению и идентификации бактерий рода Staphylococcus» (Москва, 1990), выделение культур от больных осуществляли при помощи «Унифицированных методов лабораторной диагностики инфекционных заболеваний» (Приказ МЗ СССР №535).

Экспериментальная часть работы по созданию модели для дифференциации резидентной и транзиторной микрофлоры выполнена на штаммах S. aureus и S. epidermidis, выделенных у 50 человек, обследованных на стафилококковое бактерионосительство. Дифференциация типов носи-тельства проводилась по Чистовичу Г.Н. (1969) и включала сопоставление видовых и типовых характеристик штаммов, выделенных трехкратно от одного лица с интервалами 10 суток.

Все культуры обладали типичными морфологическими, биохимическими и культуральными свойствами. Идентификацию выделенных штаммов проводили по биохимическим тестам фирмы «Lachema» (Чехия).

Антилизоцимную (АЛА), «антиинтерфероновую» (АИА), антикомплементарную (АКА), антикарнозиновую (АКрА) и антилактоферрино-вую (АЛфА) активности штаммов определяли по разработанным методи-

кам (Бухарин O.B. и сотр., 1999). Полученные данные были обработаны посредством комплекса программ многомерных вероятностно-статистических критериев: «информативность», «корреляционный анализ», «факторный анализ» и «дискриминантный анализ».

Для определения биологической роли АКрА микроорганизмов использовали интраорбитальное заражение (Анатолий С.А. с соавт., 1971) мышей-самцов линии СВА массой 18 - 20 г отобранной парой изогенных клонов, отличающихся по уровню АКрА, штамма N 52 S. aureus, выделенного со слизистой оболочки переднего отдела носа от резидентного бактерионосителя. Анализу подвергались длительность бактериовыделе-ния и массивность обсеменения почечной ткани животных. Для оценки биологической роли АКрА стафилококков в биотопе был использован метод интраназального заражения беспородных крыс-самцов экспериментально отобранными изогенными клонами («АКрА+» и «АКрА-»), полученными с использованием метода популяционного анализа (Lederberg J., Lederberg М., 1952). Полученный материал подвергали гистологической обработке на световом и электронно-микроскопическом уровнях с последующей статистической обработкой количественных параметров.

Экспериментальное изучение влияния Циклоферона на АКрА стафилококков проводили на 12 штаммах S. aureus, выделенных от резидентных бактерионосителей по методике Кириллова Д.А. (2004).

Статистическую и математическую обработку результатов проводили общепринятыми методами с использованием критерия Стъюдента (Ашма-рин И.П., Воробьев A.A., 1962).

Результаты исследования и их обсуждение При проведении сравнительного анализа распространения антикар-нозиновой активности у золотистых и эпидермальных стафилококков, выделенных от бактерионосителей, было установлено, что карнозин инакти-вировали 94±4,4% S. epidermidis и 86,1 ±6,9% S. aureus. Среди штаммов, выделенных от больных гнойно-воспалительными заболеваниями, анти-карнозиновый признак определялся у 83,8±12,4% S. epidermidis и 79,8±8,4% S. aureus.

При оценке уровня выраженности способности стафилококков к инактивации карнозина в зависимости от источника выделения отмечено, что у S. epidermidis, выделенных от бактерионосителей, значение признака (2,1±0,09 мг/мл) было в 1,3 раза выше, по сравнению со штаммами, выделенными от больных гнойно-воспалительными заболеваниями, у которых среднее значение АКрА составило 1,6±0,4 мг/мл (р<0,05). Аналогичная закономерность наблюдалась и в отношении S. aureus: среднее значение АКрА стафилококков, выделенных со слизистой оболочки переднего отдела носа составило 2,7±0,03мг/мл, тогда как у изолятов от больных -1,7±0,2 мг/мл (р<0,05).

Таким образом, при исследовании стафилококков оказалось, что АКрА является широко распространенным признаком и существенно зависит от источника выделения: признак наиболее выражен и чаще встречается у штаммов стафилококков, выделенных из биотопа с высокой концентрацией карнозина (обонятельный эпителий слизистой оболочки носовых ходов) (Margolis F., 1974), что, по-видимому, имеет значение в феномене бактерионосительства, и в меньшей степени у штаммов, выделенных от больных гнойно-воспалительными заболеваниями.

Далее была изучена выраженность АКрА у разных видов стафилококков, выделенных из носовой полости у здоровых лиц, бактерионосителей и часто длительно болеющих детей. Установлено, что при стафилококковом бактерионосительстве резидентная микрофлора отличается от вариантов, непродолжительно находящихся на слизистой оболочке носовых ходов (выделенных у здоровых лиц), уровнем экспрессии способности к инактивации карнозина. Так, АКрА у S. epidermidis, выделенных от резидентных бактерионосителей составляла 1,7±0,2 мг/мл, у S. aureus -2,3±0,3 мг/мл, тогда как у здоровых лиц 1,3±0,2 мг/мл и 0,8±0,1 мг/мл соответственно. Высокие значения признака регистрировали у штаммов как золотистых, так и эпидермальных стафилококков (3,2±0,4 мг/мл и 2,7±0,4 мг/мл соответственно), выделенных от часто длительно болеющих детей, являющихся резидентными бактерионосителями.

Отмечено, что частота встречаемости и уровни выраженности АКрА стафилококков нарастали в ряду: здоровые лица < резидентные бактерионосители < часто длительно болеющие дети.

При сравнительной оценке распространенности АКрА у разных видов стафилококков, выделенных со слизистой оболочки носовой полости резидентных и транзиторных бактерионосителей (табл. 1), было показано, что стафилококки, выделенные от резидентных бактерионосителей, обладали способностью инактивировать карнозин практически в 100% случаев (исключение составили штаммы S. warneri - 70%). Штаммы стафилококков, выделенные от транзиторных бактерионосителей, характеризовались меньшей распространенностью признака: 40% у S. cohtiii и S. warneri, 80% у S. aureus, S. epidermidis и S. xylosus и 100% у остальных видов.

АКрА стафилококков, выделенных со слизистой оболочки носовой полости резидентных бактерионосителей, была максимальной у S. xylosus и S. aureus (2,9±0,02 и 2,8±0,04 мг/мл). Уровень антикарнозиновой активности у других видов стафилококков, выделенных от резидентных бактерионосителей, был высок и варьировал от 2,1 ±0,18 мг/мл (S. haemolyticus) до 2,6±0,08 мг/мл у S. epidermidis и S. hominis.

Таким образом, оказалось, что при стафилококковом бактерионосительстве резидентная микрофлора отличалась от транзиторных вариантов уровнем экспрессии способности к инактивации карнозина.

Для определения биологической роли АКрА стафилококков при бактерионосительстве мы использовали модели экспериментальной инфекции.

Изучение длительности персистирования изогенных клонов при ин-траорбитальном заражении мышей показало, что стафилококк с низким уровнем АКрА выделялся из органов инфицированных мышей в течение 42 дней (в среднем - 37,5±2,0 дней), тогда как клон с высоким уровнем признака выделялся более длительно: до 63 дня с момента заражения (в среднем 54,2±2,8 дня) (р<0,05).

Таблица 1.

Распространенность и выраженность АКрА у разных видов стафилококков, выделенных со слизистой оболочки носовой полости

Резидентные Транзиторные

бактерионосители бактерионосители

Вид Распро- Выражен- Распро- Выражен-

стафило- n странен- ность странен- ность

кокка ность АКрА, ность АКрА,

АКрА, % мг/мл АКрА, % мг/мл

S. aureus 10 100±3,1 2,8±0,04 80±12,6 1,8±0,24*

S.epidermidi s 10 100±3,1 2,6±0,08 80±12,6 0,8±0,45*

S. cohnii 10 100±3,1 2,4±0,12 40±15,5 1,2±0,36*

S. capitis 10 100±3,1 2,5±0,10 100±3,1 0,9±0,42*

S. xylosus 10 100±3,1 2,9±0,02 80±12,6 1,9±0,22*

S. hominis 10 100±3,1 2,6±0,08 100±3,1 1,2±0,36*

S. haemolyticus 10 100±3,1 2Д±0,18 100±3,1 1,1±0,38*

S. schleiferi 10 100±3,1 2,3±0,14 100±3,1 0,9±0,43*

S. warnen 10 70±14,4 2,3±0,14 40±15,5 1,3±0,33*

Примечание: * - р < 0,05 для сравниваемых групп

Поскольку при стафилококковой экспериментальной инфекции в почечной ткани животных наблюдаются стабильные и высокие показатели микробной обсемененности (Шеенков Н.В., 1993), этот орган был выбран для высева микроорганизмов. Бактериологическое исследование почечной ткани животных выявило более высокий уровень микробной обсемененности практически на всех сроках наблюдения мышей, инфицированных клоном золотистого стафилококка с высоким значением признака в сравнении с изогенным клоном (рис. 1). Массивность обсеменения почечной ткани мышей, зараженных клоном с низкой АКрА, в ходе течения экспериментальной инфекции снижалась. Если на 10 день она составляла 8,0±1,5 ^ КОЕ/мл, на 15 - 6,0±1,5 1§ КОЕ/мл, 25 - 5,5±1,5 ^ КОЕ/мл, то

перед прекращением бактериовыделения, на 35 день, данный показатель снизился до 1,0 КОЕ/мл и на 42 день выделение стафилококков прекратилось. При инфицировании мышей клоном с высокой АКрА исходная массивность обсеменения почек составила 8,0±1,5 ^ КОЕ/мл, затем она снизилась до 3,0±0,5 ^ КОЕ/мл на 35 сутки и оставалась на этом уровне до 49 дня, предшествовавшего окончанию выделения стафилококков (63 день).

Таким образом, использование экспериментальной модели доказало участие АКрА бактерий в их персистенции. Полученные в ходе экспериментального инфекционного процесса результаты показали, что клон золотистого стафилококка, обладающий высоким уровнем антикарнозино-вой активности, длительнее выделялся из организма мышей по сравнению с клоном с низкой АКрА, динамика показателя микробной обсемененно-сти почек зависела от исходного уровня АКрА стафилококка.

—- АКрА - 3,0 мг/мл -■•- - АКрА-0,1 мг/мл

Рис.1. Динамика микробной обсемененности почек мышей в зависимости от исходного уровня АКрА.

На следующем этапе работы методами световой и электронной микроскопии изучено взаимодействие стафилококков с «АКрА+» и «АКрА-» с эукариотическими клетками, которое позволило отметить большую деструкцию ультраструктурных компонентов эукариотических клеток, а также снижение их пролиферативной активности при инфицировании штаммом с «АКрА+», который, в свою очередь, был более устойчив к действию защитных систем эукариот в сравнении со штаммами с «АКрА-». Установленные адаптивные и реактивные изменения в про- и эукариотических организмах в условиях их взаимодействий свидетельствуют, что со стороны как макро-, так и микроорганизма вырабатываются адаптационные механизмы, обеспечивающие динамическое равновесие в системе «эукариот - прокариот», что и обеспечивает их персистентное состояние.

Важная роль в формировании резидентного стафилококкового бактерионосительства принадлежит секретируемым микробным факторам, обуславливающим внутриклеточное паразитирование возбудителя: анти-лизоцимной, антиинтерфероновой, антикомплементарной, антилактофер-риновой активностям. В этой связи интерес представляет сравнительная оценка информативных персистентных характеристик микроорганизмов при бактерионосительстве и возможность использования данных свойств для построения диагностических моделей.

Изучение распространенности и выраженности факторов персистен-ции у стафилококков, выделенных от резидентных и транзиторных бактерионосителей показало, что штаммы от резидентных бактерионосителей значительно чаще обладали факторами персистенции с более высокими значениями признаков (исключение составила «антиинтерфероновая» активность бактерий).

Степень значимости изученных персистентных характеристик с учетом их выраженности (в ед.) у S. aureus, выделенных от резидентных бактерионосителей, нарастала в ряду: АЛА (0,11), АИА (0,31), АКА (0,36), АЛфА (0,66), АКрА (0,93). Аналогичная тенденция наблюдалась при ранжировании признаков у S. epidermidis, выделенных также от резидентных

бактерионосителей. Что же касается S. aureus, выделенных от транзитор-ных бактерионосителей, наименее значимыми признаками оказались AJIA и АКА, наиболее - АКрА. Ведущим свойством у S. epidermidis, выделенных от транзиторных бактерионосителей была АКрА, а за ней следовали в порядке убывания АЛфА, АИА, АЛА и АКА.

Для выяснения внутренних связей между данными признаками у разных видов стафилококков, выделенных от бактерионосителей резидентного и транзиторного типа, был проведен корреляционный анализ, который позволил охарактеризовать ряд достоверных (р<0,01) корреляционных связей: АЛА и АКА (г=0,45) у золотистых стафилококков, выделенных от бактерионосителей резидентного типа, АКА и АИА (г=0,48), АЛА и АЛфА (г=0,47) у эпидермальных стафилококков, выделенных от бактерионосителей резидентного типа, а также АКрА и АЛфА (г=0,48) у эпидермальных стафилококков, выделенных от бактерионосителей транзиторного типа. Других корреляционных связей проведенный анализ не выявил.

В совокупности представленные данные указывали на определенное участие всех изученных факторов персистенции в формировании бактерионосительства. С целью конкретизации данного положения был проведен факторный анализ, с помощью которого были выявлены пять факторов с разной степенью удельного веса. Итоги проведенного анализа свидетельствовали о наличии тесных, функциональных взаимосвязей между изученными характеристиками стафилококков и подтверждали роль факторов персистенции в формировании бактерионосительства.

В связи с тем, что все изученные показатели вносили определенный вклад в формирование стафилококкового бактерионосительства, мы использовали их в дальнейшем для построения дискриминантной модели, позволяющей дифференцировать штаммы стафилококков, выделенных со слизистой оболочки переднего отдела носа по формуле:

Д = xia, + х2а2 + ... х„а„ + С, где Д - дискриминантная функция, характеризующая резидентный или транзиторный тип штамма;

х - значение показателя в баллах; а - коэффициент показателя; С - поправочная константа. В таблице 2 даны коэффициенты для каждого показателя и поправочные константы.

Таблица 2.

Коэффициенты показателей и поправочные константы для дифференциации резидентной и транзиторной микрофлоры

при бактерионосительстве.

1. Staphylococcus aureus_

АКрА АЛА АКА АЛфА АИА С

Рези- AI,62 56,63 5,14 0,11 -1,26 -265,35

дентные

Транзи- 17,39 -8,67 1,8 0,01 3,64 -35,67

торные

2. Staphylococcus epidermidis

АКрА АЛА АКА АЛфА АИА С

Рези- 51,32 171,78 32,05 7,27 20,26 -634,80

дентные

Транзи- 28,58 61,23 7,27 -2,38 6,61 -107,55

торные

Для установления принадлежности штамма к определенному типу, полученные у стафилококка количественные значения по показателям, переводят баллы и используют для расчета дискриминантной функции по приведенной формуле. Расчет проводят по всем строкам соответствующей таблицы.

Наибольшая величина дискриминантной функции из всех полученных будет в 95% случаев соответствовать обозначенному на данной строке типу бактерионосительства.

Пример 1. Исследуемый штамм золотистого стафилококка характеризовался следующими признаками: АКрА - 3 мг/мл (10 баллов), АЛА - 1

мкг/мл (1 балл), АКА - 20 усл. ед. (8 баллов), АИА - 5 усл. ед. (5 баллов), АЛфА - 10,5 нг/мл (7 баллов). Расчет по формуле с использованием представленных в таблице коэффициентов следующий:

Д,=47,62x10 + 56,63x1 +5,14 х8 +0,11x7+ -1,26x5 + -265,35 = 303,07 Д2=17,39x10 + -8,67x1 + 1,8x8 + 0,01x7+3,64x5 + - 35,67 = 162,23 В результате проведенного расчета максимальная величина дискри-минантной функции установлена на первой строке (ДО, что позволило отнести данный штамм к резидентному типу.

Пример 2. Исследуемый штамм эпидермального стафилококка характеризовался следующими признаками: АКрА - 0,6 мг/мл (2 балла), АЛА - 1 мкг/мл (1 балл), АКА -2,5 усл. ед. (1 балл), АИА - 1 усл. ед. (1 балл), АЛфА - 1,5 нг/мл (1 балл). Расчет по формуле с использованием представленных в таблице коэффициентов следующий:

Д!=51,32х2 + 171,78x1 +32,05x1 +7,27x1+20,26x1 -634,80= -300,80 Д2=28,58х2 + 61,23x1 + 7,27x1 + -2,38x1+ 6,61x1+ -107,55 = 22,34 В результате проведенного расчета максимальная величина дискри-минантной функции установлена на второй строке (Дг), что позволило отнести данный штамм к транзиторному типу.

При ретроспективном сопоставлении прогнозируемых и реальных результатов дифференциации штаммов, выделенных со слизистой оболочки переднего отдела носа, эффективность разработанной модели отмечена в 93,6% случаев.

Нами экспериментально установлена значимость уровня выраженности антикарнозиновой активности у разных видов стафилококков, выделенных со слизистой оболочки носа для дифференциации стафилококковой микрофлоры на нормальную микрофлору и микрофлору, способную вызвать развитие местных инфекционно-воспалительных заболеваний. Показано, что высокий уровень АКрА у стафилококков, вегетирую-щих на слизистой переднего носа у бактерионосителей, обуславливает развитие местных инфекционно-воспалительных заболеваний.

Для проведения эффективных мероприятий по санации резидентных бактерионосителей целесообразно использование лекарственного препа-

рата, который, с одной стороны, стимулировал бы местный иммунитет и естественную колонизационную резистентность слизистых оболочек макроорганизма, а с другой - снижал персистентные свойства патогена, в частности, его антикарнозиновую активность.

В качестве такого препарата нами был выбран иммуномодулятор Циклоферон, который к тому же снижал персистентный потенциал микроорганизмов (Кириллов Д.А., 2005). В связи с этим мы проверили его влияние на АКрА стафилококков, проведя исследования in vitro и in vivo.

В экспериментальных условиях нами была изучена способность стафилококков к инактивации карнозина под воздействием Циклоферона, полученные результаты представлены в табл. 3.

Таблица 3.

Изменение антикарнознновой активности стафилококков под

воздействием Циклоферона

Дни эксперимента АКрА активность (мг/мл)

Контроль Опыт

до инкубации 2,9+0,05 2,9+0,05

1 2,8+0,03 2,2+0,021,2

2 2,7+0,02 2,0+0,011'2

3 2,6+0,03 1,7+0,011,2

4 2,7+0,01 1,6+0,011,2

5 2,8+0,01 1,4+0,02 u

6 2,7+0,01 1,2+0,02й

Примечание:1 - р < 0,01 в опытной группе (к исходу) 2 - р < 0,01 для сравниваемых групп (контроль - опыт)

Среднее значение АКрА у стафилококков опытной группы до инкубирования с Циклофероном и контрольной группы было сходным и составляло 2,9+0,05 мг/мл; после однократного инкубирования с Циклофероном в опытной группе обследуемых способность стафилококков к инактивации карнозина снизилась до 2,2+0,02, в контрольной до 2,8+0,03 мг/мл; на 2 день эксперимента значение АКрА стафилококков составило 2,01+0,01 мг/мл, тогда как в контроле 2,7+0,02 мг/мл. На 3 день - анти-

карнозиновая активность бактерий в опытной группе составляла 1,7+0,01 мг/мл, в контрольной - 2,6+0,03 мг/мл. На 4 день в опытной группе АКрА продолжала снижаться и составляла 1,5±0,03 мг/мл, тогда как в контрольной равнялась 2,7+0,01 мг/мл. На 5 день эксперимента АКрА стафилококков снизилась до 1,4+0,02 мг/мл, тогда как у стафилококков контрольной группы среднее значение АКрА составляло 2,8+0,01 мг/мл. В результате к 6 дню способность стафилококков инактивировать карнозин была равна 1,2+0,02 мг/мл в опытной группе (р<0,05) и 2,7+0,01 мг/мл в контрольной (р>0,05). Таким образом, антикарнозиновая активность в опытной группе снизилась на 1,7 мг/мл, что составило 58,3+6,5%, а в группе сравнения изучаемый признак был в пределах физиологических колебаний.

Таким образом, проведенный анализ по изучению динамики анти-карнозиновой активности стафилококков под воздействием Циклоферона показал однозначное ее снижение.

Исходя из полученных данных, мы предположили, что применяя Циклоферон, вероятно, можно санировать передний отдел носа, снижая число стафилококковых бактерионосителей.

С целью проверки этого положения были проведены наблюдения по действию Циклоферона на динамику стафилококкового бактерионосительства у 20 резидентных бактерионосителей S. aureus.

Среднее значение АКрА у штаммов стафилококков, выделенных до санации, составило 2,9±0,24 мг/мл; на 1 день санации данный признак снизился до 2,9±0,25 мг/мл, ко 2 дню способность носительских штаммов инактивировать карнозин была равна 2,7±0,32 мг/мл. На 3, 4 и 5 дни санации АКрА стафилококков снизилась до 2,2±024, 1,8±0,27 и 1,6±0,25 мг/мл соответственно и к 6 дню составляла 1,4+0,6 мг/мл. Таким образом, за время санации АКрА снизилась на 1,6 мг/мл, что составило 52,7%.

Проведенное через месяц обследование этих же лиц показало, что у половины бактерионосителей золотистый стафилококк заменился на эпи-дермальный, а у тех лиц, у которых золотистый стафилококк продолжал высеваться, АКрА снизилась до 0,9±0,12 мг/мл. Через два месяца эпидер-мальный стафилококк высевался у 72% санированных лиц, а способность

золотистых стафилококков к инактивации карнозина снизилась до 0,5±0,09 мг/мл.

Таким образом, применение Циклоферона позволяет нормализовать качественные характеристики микробного биоценоза слизистой оболочки носа за счет снижения антикарнозиновой активности у золотистых стафилококков и последующей их элиминации.

Подводя итог проделанной работе, следует отметить, что антикарно-зиновая активность, контролирующая длительность пребывания стафилококков в организме, широко распространена среди штаммов разных видов, выделенных от бактерионосителей. Выявленная связь антикарнозиновой активности стафилококков с их персистированием в организме хозяина важна для понимания патогенеза бактерионосительства, связанного с длительным пребыванием возбудителя на слизистой оболочке переднего отдела носа. На основе полученных экспериментальных данных разработан способ дифференциации резидентных бактерионосителей от транзи-торных, и использован новый методический подход к отбору препарата для санации стафилококковых бактерионосителей под контролем антикарнозиновой активности.

ВЫВОДЫ

1. Антикарнозиновая активность - широко распространенный признак у стафилококков, зависящий от источника их выделения. Высокие значения АКрА характерны для стафилококков, выделенных из биотопа с высокой концентрацией карнозина (слизистая оболочка переднего отдела носа) по сравнению со штаммами, изолированными из других биотопов от больных инфекционно-воспалительными заболеваниями.

2. Пенетрантность и экспрессия АКрА у стафилококков, выделенных со слизистой оболочки переднего отдела носа, нарастают в ряду: здоровые лица < резидентные бактерионосители < часто длительно болеющие.

микробной обсемененности почек находилась в прямой зависимости от исходного уровня антикарнозиновой активности.

4. Установлены адаптивные и реактивные изменения в про- и эукариотических организмах в условиях их взаимодействий: стафилококки с антикарнозиновым признаком вызывают большую деструкцию ультраструктурных компонентов эукариотических клеток, а также снижение их пролиферативной активности и являются более устойчивыми к действию защитных систем эукариот в сравнении со штаммами без признака.

5. Установлено, что ведущим свойством стафилококков, определяющим формирование бактерионосительства, является их антикарнозиновый признак, при этом высокий уровень АКрА у штаммов, вегетирующих на слизистой переднего носа у бактерионосителей, обуславливает развитие местных инфекционно-воспалительных заболеваний.

6. Разработана модель, позволяющая проводить дифференциальную диагностику резидентного и транзиторного бактерионосительства с учетом персистентных свойств стафилококков.

7. Установлена способность Циклоферона снижать антикарнозино-вую активность стафилококков in vitro, что позволяет рекомендовать его для санации бактерионосителей.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Антнкарнозиновая активность и ее роль в персистенции микроорганизмов / Бухарин О.В., Киргизова С.Б., Карташова O.JI., Потехн-на Л.П. // Вестник Оренбургского государственного университета. 2006. № 12. С. 23-26.

2. Потехина Л.П. Антнкарнозиновая активность микроорганизмов, выделенных от больных гнойно-воспалительными заболеваниями // Вестник Оренбургского государственного университета. 2006. № 13. С. 269-270.

3. Диагностическое значение персистентных характеристик стафилококков при бактерионосительстве / Карташова О.Л., Киргизова С.Б., Потехина Л.П., Бухарин О.В. // Журнал микробиологии, эпидемиологии н иммунобиологии. 2007. № 5. С. 13-16.

4. Киргизова С.Б., Карташова О.Л., Потехина Л.П. Факторы персистенции стафилококков при бактерионосительстве // Материалы IX съезда Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. Москва, 2007. С. 111.

5. Потехина Л.П. Дифференциация стафилококков с помощью математической модели // Успехи современного естествознания. 2007. № 7. С. 33.

6. Потехина Л.П. Роль антикарнозиновой активности при стафилококковом бактерионосительстве // Материалы I международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых. Донецк, 2009. С. 298-299.

7. Потехина Л.П. Использование персистентных свойств микроорганизмов для дифференциации резидентной и транзиторной микрофлоры // Вестник Оренбургского государственного университета. Оренбург. 2009. №2. С. 134.

8. Способ дифференциации стафилококковой микрофлоры слизистой оболочки носа человека / Карташова О.Л., Киргизова С.Б., Бухарин О.В., Потехина Л.П. // Патент РФ на изобретение № 2318021. Бюл. № 6. 2008.

ПОТЕХИНА ЛИДИЯ ПЕТРОВНА

АНТИКАРНОЗИНОВАЯ АКТИВНОСТЬ СТАФИЛОКОККОВ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Оригинал макет подготовлен в программе Word for Windows 2003 Подписано в печать 06.10.2010 Формат 60*84/16. Усл.-печ. л. 1,0. Печать оперативная. Бумага офсетная. Гарнитура Times. Тираж 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Потехина, Лидия Петровна

Страница

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ПЕРСИСТЕНЦИЯ СТАФИЛОКОККОВ: МЕХАНИЗМЫ И РЕГУЛЯЦИЯ (обзор литературы).

1.1. Механизмы персистенции стафилококков.

1.2. Диагностика и санация стафилококковых бактерионосителей.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Характеристика микроорганизмов.

2.2. Выделение и идентификация стафилококков.

2.3. Методы изучения биологических свойств стафилококков.

2.4. Методы воспроизведения экспериментальной стафилококковой инфекции.

2.5. Методы гистологической обработки материала.

2.6. Методика определения влияния циклоферона на антикарнозиновую активность стафилококков.

2.7.Методы статистической обработки результатов.

ГЛАВА 3. ХАРАКТЕРИСТИКА АНТИКАРНОЗИНОВОЙ

АКТИВНОСТИ СТАФИЛОКОККОВ.

ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ РОЛИ

АНТИКАРНОЗИНОВОЙ АКТИВНОСТИ СТАФИЛОКОККОВ.

4.1. Роль антикарнозиновой активности микроорганизмов в развитии экспериментального инфекционного процесса.

4.2. Морфофункциональная характеристика тканей макроорганизма при экспериментальной инфекции.

ГЛАВА 5. РОЛЬ АНТИКАРНОЗИНОВОЙ АКТИВНОСТИ В ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ СТАФИЛОКОККОВОЙ МИКРОФЛОРЫ

ПРИ БАКТЕРИОНОСИТЕЛЬСТВЕ И ПРОГНОЗИРОВАНИИ

РАЗВИТИЯ СТАФИЛОКОККОВЫХ ИНФЕКЦИЙ.

5.1. Диагностическое значение антикарнозиновой активности стафилококков при бактерионосительстве.

5.2. Использование показателя антикарнозиновой активности микроорганизмов в клинико-лабораторной практике.

ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ РЕГУЛЯТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ ЦИКЛОФЕРОНА НА АНТИКАРНОЗИНОВУЮ АКТИВНОСТЬ

СТАФИЛОКОККОВ IN VITRO И IN VIVO.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Антикарнозиновая активность стафилококков"

Феномен выживания бактерий в организме хозяина рассматривается как одно из важных звеньев в патогенезе инфекционного процесса. Выживание бактерий в макроорганизме реализуется через их адаптацию к факторам защиты хозяина и может быть связано с инактивацией последних. В настоящее время установлено, что микроорганизмы способны подавлять факторы естественной резистентности организма хозяина, такие как лизоцим, комплемент, лакто-феррин и др. [Бухарин О.В., 1999]. Одним из таких факторов защиты хозяина является природный дипептид карнозин ф-аланил-Ь-гистидин), который оказывает антибактериальное действие [French Patent №71.07856 of March 1, 1971], обладает антиоксидантной активностью [Дупин A.M. с соавт.,1984], проявляет антистрессорный [Гуляева Н.В., Обидин А.Б., Левшина И.П.,1989], иммуномо-дулирующий [Мальцева В.В., Сергиенко В.И., Стволинский С.Л.,1992] и радиопротекторный [Северин С.Е., Болдырев A.A., Стволинский С.Л., 1990] эффекты, обнаружено также его противоаллергическое действие [Адо А.Д., Алексеева Т.А., Лукманова Ф.Ф., 1977]. Отмечено, что дифтерийные бактерии, нуждающиеся для своего роста в ß-аланине, могут получать его из L-карнозина [Mueller, 1938], установлено разрушение карнозина бактериями [Gefter, 1925], а также способность бактерий, преимущественно стафилококков, его инактиви-ровать, определенная как антикарнозиновая активность (АКрА) [Бухарин О.В., Чернова О.Л., Матюшина С.Б., 1999]. Карнозин является эндогенным компонентом быстрых скелетных мышц [Severin S.F., 1964]. Однако наибольшее количество дипептида содержится в обонятельном эпителии слизистой оболочки передних носовых ходов [Margolis F., 1974], являющимся естественным биотопом для микроорганизмов (в частности, стафилококков) при бактерионосительстве.

В связи с этим, известный интерес представляет, с одной стороны, - изучение распространенности антикарнозиновой активности у разных видов стафилококков, выделенных со слизистой оболочки переднего отдела носа, у здоровых лиц, бактерионосителей S. aureus и из очагов инфекции больных инфек-ционно-воспалительными заболеваниями, расшифровка биологической роли антикарнозиновой активности у этих микроорганизмов, а с другой - разработка новых подходов к диагностике и санации бактерионосителей под контролем этого признака.

Цель и задачу исследования

Целью настоящей работы являлось определение роли антикарнозиновой активности стафилококков в формировании бактерионосительства и разработка новых методов диагностики и санации стафилококковых бактерионосителей.

Для реализации этой цели были поставлены и решены следующие задачи:

1. Изучить распространенность и выраженность антикарнозиновой активности у стафилококков разных видов.

2. Оценить биологическую роль антикарнозиновой активности стафилококков при бактерионосительстве.

3. Разработать подходы к дифференциации резидентной и транзиторной стафилококковой микрофлоры при бактерионосительстве.

4. Изучить регуляторное действие циклоферона на антикарнозиновую активность стафилококков in vitro и in vivo.

Научная новизна

Проведенные исследования позволили установить, что АКрА является широко распространенным признаком стафилококков и зависит от источника выделения: антикарнозиновая активность с высокими значениями признака характерна для культур, выделенных из биотопа с высокой концентрацией карно-зина (обонятельный эпителий слизистой оболочки носовых ходов) в сравнении со стафилококками, выделенными из очагов от больных инфекционно-воспалительными заболеваниями. При сравнительной оценке значимости пер-систентных свойств стафилококков, выделенных от бактерионосителей, установлено, что ведущим свойством стафилококков, определяющим формирование бактерионосительства, является их антикарнозиновый признак.

Экспериментально в опытах in vivo показан вклад антикарнозинового признака в персистенцию золотистых стафилококков.

В экспериментальных условиях выявлена способность циклоферона подавлять АКрА стафилококков, что позволило обосновать новый способ санации стафилококковых бактерионосителей.

Практическая ценность

Полученные данные расширяют теоретические представления о биологических свойствах стафилококков, способствующих их персистенции.

Практическая ценность исследования заключается в возможности использования антикарнозиновой активности стафилококков в качестве значимого маркера при диагностике стафилококкового бактерионосительства, разработана математическая модель дифференциации резидентной стафилококковой микрофлоры от транзиторной. Предложен способ дифференциации ассоциативной микрофлоры, вызывающей развитие местных гнойно-воспалительных заболеваний, по уровню экспрессии антикарнозиновой активности (Патент РФ на изобретение №2318021) и способ санации резидентных стафилококковых бактерионосителей циклофероном.

Положения, выносимые на защиту

1. Антикарнозиновая активность стафилококков - фактор их персистенции, способствующий выживанию микроорганизмов в организме хозяина и формированию бактерионосительства.

2. Антикарнозиновый признак стафилококков - маркер при диагностике бактерионосительства.

Апробация работы

Материалы работы были доложены и обсуждены на: конференции молодых ученых и специалистов Оренбургской области (Оренбург, 2006; 2009); V и VI Всероссийской конференции по персистенции микроорганизмов (Оренбург, 2006; 2009); Всероссийской научной конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс» (Москва, 2007); IX съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007); I международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых (Донецк, 2009); Всероссийской научной конференции с международным участием «Физиология и генетика микроорганизмов в природных и экспериментальных системах» (Москва, 2009).

Публикации

Объем и структура диссертационной работы

Текст диссертации изложен на 118 страницах машинописи, содержит введение, 4 главы, заключение, выводы, указатель литературы, включающий 116 отечественных и 72 иностранных источников и приложение.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Потехина, Лидия Петровна

ВЫВОДЫ

1. Антикарнозиновая активность - широко распространенный признак у стафилококков, зависящий от источника их выделения. Высокие значения АКрА характерны для стафилококков, выделенных из биотопа с высокой концентрацией карнозина (слизистая оболочка переднего отдела носа), по сравнению со штаммами, изолированными из других биотопов от больных инфек-ционно-воспалительными заболеваниями.

3. На модели экспериментальной инфекции установлено, что золотистый стафилококк, обладающий высоким уровнем АКрА (3,0 мг/мл), длительнее выделяется из организма мышей, по сравнению со стафилококком с низкой АКрА (63 и 42 дня соответственно); динамика показателя микробной об-семененности почек находилась в прямой зависимости от исходного уровня антикарнозиновой активности.

7. Установлена способность циклоферона снижать антикарнозиновую активность стафилококков in vitro, что позволяет рекомендовать его для санации бактерионосителей.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Персистенцию бактерий определяют как биологические свойства возбудителя, так и иммунный статус хозяина [Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., 1996].

В связи с этим, не случайно персистенцию стафилококков связывают с образованием патогенами факторов, направленных на специфическую инактивацию факторов естественной противоинфекционной резистентности макроорганизма.

Среди этих факторов бактериальной персистенции стафилококков определенное место отводится секретируемым началам: антилизоцимной [Усвяцов Б.Я., 1986]; «антиинтерфероновой» [Соколов В.Ю., 1990]; антикомплементарной [Брудастов Ю.А.,1990]; антигистоновой [Соколов В.Ю., 1993] и другим видам бактериальной активности [Михайлова Е.А. с соавт., 1990; Валышев А.В., 1997].

Известно, что природный дипептид хозяина карнозин ((З-аланил-L-гистидин) оказывает антибактериальное, противоаллергическое действие, обладает антиоксидантной активностью, проявляет антистрессорные, иммуно-модулирующий и радиопротекторный эффекты.

Ранее было показано, что стафилококки, выделенные от бактерионосителей, обладали наиболее высокой способностью к инактивации карнозина по сравнению с изолятами при гнойно-воспалительных заболеваниях [Бухарин О.В. с соавт., 1999].

В связи с этим, известный интерес представляло, с одной стороны - изучение распространения этого признака у разных видов стафилококков, выделенных со слизистой оболочки переднего отдела носа бактерионосителей S. aureus и расшифровка биологической роли АКрА у этих микроорганизмов, а с другой — разработка новых способов диагностики и санации бактерионосителей под контролем этого признака.

Целью настоящей работы являлось определение роли антикарнозиновой активности у штаммов стафилококков, выделенных от бактерионосителей, совершенствование методов диагностики и санации стафилококкового бактерионосительства.

Для реализации этой цели были изучены: распространенность и выраженность антикарнозиновой активности стафилококков разных видов, биологическая роль антикарнозиновой активности стафилококков, использованы новые походы к дифференциации резидентной и транзиторной микрофлоры при бактерионосительстве, изучено регуляторное действие циклоферона на антикарнозиновую активность стафилококков in vitro и in vivo.

Эта работа была проведена на 134 штаммах S. aureus, 254 — S. epidermi-dis, 36 — S. hominis, 18 - S. haemolyticus, 20 - S. capitis, 6 - S. schleiferi, 11 — S. warneri, 26 - S. xylosus, 18 - S. cohnii, выделенных со слизистой оболочки переднего отдела носа у здоровых лиц, резидентных бактерионосителей (17-18 лет) и часто длительно болеющих (ЧДБ) респираторными заболеваниями детей 9-14 лет, являющихся резидентными бактерионосителями; 6 штаммов S. aureus, 6 штаммов S. epidermiáis, выделенных из исследуемого материала у больных с ограниченными гнойно-воспалительными заболеваниями легких и плевры. Кроме того, были изучены золотистые и эпидермальные стафилококки, выделенные от 42 больных с гнойным воспалением околоносовых пазух и 27 больных с постинъекционными абсцессами мягких тканей, 10 больных с трофическими язвами нижних конечностей.

У всех выделенных штаммов определяли факторы персистенции: анти-лизоцимную, антикомплементарную, антикарнозиновую, антилактоферрино-вую, «антиинтерфероновую» активности.

Полученные нами результаты показали, что способность бактерий к инактивации карнозина является широко распространенным признаком, а ее выраженность существенно зависит от источника выделения.

Проведенное сравнительное изучение антикарнозиновой активности у стафилококков, выделенных при гнойно-воспалительных заболеваниях и у бактерионосителей, позволило установить не только широкое представительство данного свойства у изученных патогенов, но и зависимость его выраженности от источника выделения. Выявлено, что у стафилококков, выделенных со слизистой оболочки переднего отдела носа, АКрА определялась значительно чаще (85%-90,9%) в сравнении со штаммами, выделенными при гнойно-воспалительных заболеваниях (70%-82%), при этом высокие значения признака регистрировали у штаммов как золотистых, так и эпидермальных стафилококков (2,7±0,4 мг/мл и 2,5±0,4 мг/мл соответственно), выделенных от часто длительно болеющих детей, являющихся резидентными бактерионосителями. Отмечено, что уровни выраженности АКрА стафилококков нарастали в ряду: здоровые лица < резидентные бактерионосители < часто длительно болеющие дети.

Данный факт, по-видимому, можно объяснить высокой концентрацией карнозина в слизистой оболочке передних носовых ходов [Margolis F.,1974], что способствует селекции штаммов, способных адаптироваться к защитным системам организма хозяина и формированию устойчивых патомикробиоце-нозов слизистой оболочки переднего отдела носа [Бухарин О.В., Литвин В.Ю., 1997].

Способностью стафилококков к инактивации карнозина, оказывающего противоалергическое действие [Адо А.Д. с соавт, 1977], вероятно, наряду с другими факторами, можно объяснить высокую частоту встречаемости аллергических заболеваний органов дыхания (респираторный аллергоз, бронхиальная астма, астматический бронхит) у резидентных бактерионосителей [Кулагина Е.П., 1995; ДимоваС.Г., 1996].

Изучена антикарнозиновая активность и у других видов микроорганизмов. Так, Гудима И.А (2002) показала, что энтеробактерии инактивировали карнозин в 72,7% случаев. Среди выделенных дрожжевых грибов рода Candida только 22,2% штаммов обладали этой активностью. Степень выраженности актикарнозиновой активности была достаточно однородной у большинства бактериальных патогенов различных родов и видов и находилась в пределах 2,0±0,2 -3,0±0,4 мг/мл, исключение составили культуры микромицетов, у которых были выявлены более низкие показатели АКрА (1,3±0,1 мг/мл).

Воронина Л.Г. с соавт. (2007) охарактеризовали антикарнозиновую активность Neisseria gonorrhoeae, выделенных от больных со свежей и хронической гонококковой инфекцией: АКрА регистрировалась у 33% и 44% штаммов соответственно, выраженность признака достоверно не отличалась (2,4±0,2 мг/мл и 2,7± 0,1 мг/мл).

В плане расшифровки биологической роли антикарнозиновой активности у стафилококков, были получены прямые доказательства связи антикар-нозинового признака с персистированием штаммов в дополнение к уже имеющимся материалам по распространению данного признака у стафилококков, выделенных от бактерионосителей и больных гнойно-воспалительными заболеваниями.

Полученная при анализе клинического материала зависимость (высокие значения АКрА характерны для стафилококков, выделенных от бактерионосителей, по сравнению со штаммами, изолированными от больных инфекцион-но-воспалительными заболеваниями) нашла подтверждение при использовании модели экспериментальной инфекции, позволившей выявить связь между уровнем АКрА стафилококков и характером течения экспериментальной инфекции: так, инфицирование мышей клонами стафилококка с разным уровнем АКрА существенно влияло на длительность ее течения. Представленный материал свидетельствовал о том, что АКрА стафилококков - патогенетически важная характеристика, определяющая возможность их длительного переживания (персистенции) в организме хозяина.

Изучение взаимодействия стафилококков с «АКрА+» и «АКрА-» с эука-риотическими клетками с помощью методов световой и электронной микроскопии позволило отметить деструкцию ультраструктурных компонентов эу-кариотических клеток, а снижение их пролиферативной активности при инфицировании штаммом с «АКрА+», который, в свою очередь, был более устойчив к действию защитных систем эукариот в сравнении со штаммом с «АКрА-». Наиболее характерной адаптивной реакцией со стороны стафилококков явилось усиление гетероморфизма в их популяции (размеры микроорганизмов, форма их поверхности), а также снижение электронной плотности нуклеоида микроорганизмов и ультраструктурные повреждения их мембранных компонентов, причём более выраженным это было у стафилококков с «АКрА-».

Установленные адаптивные и реактивные изменения в про- и эукариотических организмах в условиях их взаимодействий свидетельствуют, что со стороны как макро-, так и микроорганизма вырабатываются адаптационные механизмы, обеспечивающие динамическое равновесие в системе «эукариот - прокариот», что и обеспечивает их персистентное состояние .

Полученные нами с помощью экспериментальной инфекции прямые экспериментальные доказательства о связи антикарнозиновой активности с персистирующей способностью стафилококков вкупе с данными о высокой частоте распространения стафилококков с антикарнозиновым признаком среди бактерионосителей характеризуют антикарнозиновую активность как маркер персистенции стафилококков.

Персистенция возбудителей в макроорганизме - широко распространенное явление, патогенетически связанное с бактерионосительством.

Важная роль в формировании резидентного стафилококкового бактерионосительства принадлежит секретируемым микробным факторам, обуславливающим внутриклеточное паразитирование возбудителя: антилизоцим-ной [Бухарин О.В. с соавт., 1993], «антиинтерфероновой» [Рищук C.B., Смо-лягин А.И., Стадников A.A. и др., 1996], антикомплементарной [Брудастов Ю.А., Дерябин Д.Г., 1994], антилактоферриновой активностям [Бухарин О.В. с соавт., 2005]. Принимая во внимание, что в разных биотопах функцию защиты от микроорганизмов осуществляют различные субстраты, было отмечено, что бактерии при бактерионосительстве преодолевают ключевой физиологический барьер (субстрат) биотопа, чтобы закрепиться и выжить [Бухарин О.В. с соавт., 2006]. Таким субстратом для слизистой оболочки носа является природный дипептид карнозин [Болдырев A.A., 1998], который стафилококки, выделенные от бактерионосителей, инактивируют за счет антикарнозиновой активности [Бухарин О.В., Стадников A.A., Чернова O.JI. и др., 2000; Карта-шова О.Л., Киргизова С.Б., Стадников A.A. и др., 2006].

Проведенная сравнительная оценка информативных персистентных характеристик микроорганизмов при бактерионосительстве позволила использовать данные свойства для построения диагностических моделей.

Установлена важная роль факторов персистенции стафилококков в формировании бактерионосительства. Изучение частотной способности стафилококков, выделенных от резидентных и транзиторных бактерионосителей, к инактивации отдельных факторов естественной противоинфекционной резистентности позволило ранжировать изученные признаки по степени их информативности. При этом ведущим свойством стафилококков, определяющим формирование бактерионосительства, явился их антикарнозиновый признак. Данный факт может быть объяснен высоким содержанием субстрата (карно-зина) в биотопе, инактивация которого позволяет бактериям адаптироваться и длительно находиться на слизистой оболочке переднего отдела носа.

Что же касается других персистентных свойств стафилококков, то они оказались также информативными при построении модели дифференциации резидентной микрофлоры от транзиторной, хотя их вклад для диагностики меньше. •

Подобный подход использовался в других работах, где ведущими признаками, дифференцирующими резидентные и транзиторные культуры S. aureus являлись АЛА и АИА [Дерябин Д.Г., 2000], а также АЛА, АИА, АКА, микробная обсемененность и чувствительность бактерий к фузидину, пригодные для дифференциации стафилококковой микрофлоры при бактерионосительстве [Бухарин О.В., Чернова О.Л., Матюшина С.Б., 1996]. Преимуществом данного исследования явилось использование в диагностической модели ан-тикарнозинового признака, вносящего существенный вклад в формирование бактерионосительства. Полученные данные позволяют, с одной стороны, эффективно проводить диагностику бактерионосителей, отбирать контингент для последующей санации, а с другой, избежать неоправданной санации лиц, у которых стафилококки обнаруживаются на слизистой оболочке переднего отдела носа кратковременно.

При отборе эффективного санирующего средства мы исходили из возможностей препарата повышать сопротивляемость организма к инфекции, подавляя факторы персистенции стафилококковой микрофлоры. Таким препаратом, на наш взгляд, мог бы стать циклоферон, который, являясь индуктором эндогенного интерферона, обладает широким диапазоном антимикробной активности. Кроме того, известны данные о влиянии циклоферона на антикомплементарную активность стафилококков,'приводящего к снижению уровня выраженности данного признака у изученных штаммов на 50-62% от исходного уровня [Бухарин О.В. с соавт., 2005].

В результате проведенной работы установлено модифицирующее влияние препарата циклоферона на антикарнозиновую активность стафилококков in vivo и in vitro.

Проведенные исследования показали, что циклоферон не только способствовал снижению антикарнозиновой активности стафилококков в эксперименте, но и снижал микробную обсемененность слизистой оболочки переднего отдела носа и подавлял АКрА стафилококков in vivo.

Полученные результаты открывают новые возможности для поиска санирующих веществ не только в группе препаратов, обладающих прямым антибактериальным действием, но и в группе лекарственных веществ другой природы по их влиянию на антикарнозиновую активность стафилококков.

Установлена возможность модификации АКрА под воздействием лекарственных средств и химически синтезированных соединений. Изучено влияние антибиотиков на АКрА стафилококков [Чуенко Э.А., 2006]. Показано, что эритромицин, ристомицин, доксициклин, линкомицин проявляют ингиби-рующее влияние на АКрА S. aureus и S. epidermidis, тогда как бензилпеницил-лин, ампиокс, полимиксин, цефазолин, неомицин оказывают индифферентное влияние на АКрА. Гандыбиным Е.А. (2009) в эксперименте изучено влияние эфирных масел на персистентные свойства, в том числе и на АКрА S. aureus, выделенных из венозных трофических язв нижних конечностей. Полученные данные позволили рекомендовать эвкалиптовое масло, как наиболее эффективно снижающее персистентные свойства золотистых стафилококков, выделенных в монокультуре, а в сочетании с полупроводниковым лазером — в ассоциации с другими микроорганизмами. Модификация АКрА S. aureus и К. pneumoniae под воздействием химически синтезированных соединений позволила выявить корреляционную связь между уровнем антиоксидантной активности соединений и степенью снижения персистентного потенциала микроорганизмов: соединения с высокой антиоксидантной активностью наиболее эффективно подавляли персистентные свойства микроорганизмов, в том числе и антикарнозиновую активность [Уткина Т.М., 2009].

Подводя итог полученным материалам, следует отметить, что антикар-нозиновая активность, контролирующая длительность пребывания стафилококков в организме, широко распространена среди штаммов разных видов, выделенных от бактерионосителей, а выявленная связь антикарнозиновой активности стафилококков с их персистированием в организме хозяина, важна для понимания патогенеза бактерионосительства, связанного с длительным пребываниием возбудителя на слизистой оболочке переднего отдела носа. На основе полученных экспериментальных данных разработан способ дифферен-цировки резидентных бактерионосителей от транзиторных и использован новый методический подход к отбору препаратов для санации стафилококковых бактерионосителей под контролем антикарнозиновой активности.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Потехина, Лидия Петровна, Оренбург

1. Адо А.Д., Алексеева Т.А., Лукманова Ф.Ф. Торможение пассивной кожной анафилаксии дипептидами // Бюлл. экспер. биол. мед. 1977. № 10. С. 460466.

2. Антикарнозиновая активность стафилококков как критерий оценки их пер-систентного потенциала / Карташова О.Л., Киргизова С.Б., Стадников A.A., Шевлюк H.H., Ковбык Л.В. // Журн. микробиол., эпидемиол. и имму-нобиол. 2006. № 4. С. 13 16.

3. Антилактоферриновая активность микроорганизмов / Бухарин О.В., Карташова О.Л., Киргизова С.Б., Валышева И.В. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2005. № 6. С. 7-10.

4. Ашмарин И.П., Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Медгиз, 1962. 180 с.

5. Бабаянц A.A., Кагранова Г.Г. Антитоксическое действие лейкоцитарного интерферона в опытах in vitro // Антибиотики и мед. биотехнология. 1984. № 11. С. 834-836.

6. Биологическое значение антикарнозиновой активности / Бухарин О.В., Стадников A.A., Чернова О.Л., Киргизова С.Б., Ковбык Л.В., Болдырев A.A. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2000. № 4. С. 59-62.

7. Болдырев A.A. Карнозин (биологическое значение и возможности применения в медицине). Москва: Изд-во Московского университета, 1998. 319 с.

8. Болдырев A.A. О биологическом значении гистидинсодержащих дипепти-дов//Биохимия. 1986. Т. 51. № 12. С. 1930-1943.

9. Брудастов Ю.А. Антикомплементарная активность бактерий // Персистен-ция бактерий. / Под ред. О.В.Бухарина. Куйбышев, 1990. С. 100-107.

10. Брудастов Ю.А. Антикомплементарная активность бактерий: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Челябинск, 1992. 20 с.

11. И. Брудастов Ю.А., Дерябин Д.Г. Биологическое значение антикомплементарной активности бактерий // Журн. микробиол, эпидемиол. и иммуноби-ол. 1994. Прил. С. 27-32.

12. Бухарин О.В. Биомедицинские аспекты персистенции бактерий // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1994. Прил. С. 4-13.

13. Бухарин О.В. Механизмы бактериальной персистенции // Персистенция бактерий / Под ред. О.В.Бухарина. Куйбышев, 1990. С. 5-14.

14. Бухарин О.В. Персистенция бактериальных патогенов как результат отношений системы паразит хозяин // Журн. микробиол., эпидемиол., иммунобиол. 1997. № 4. С. 3-9.

15. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. М.: Медицина; Екатеринбург: УрО РАН, 1999. 366 с.

16. Бухарин О.В., Брудастов Ю.А., Дерябин Д.Г. Изучение антикомплементарной активности стафилококков // Клин. лаб. диагностика. 1992. № 1112. С. 68-71.

17. Бухарин О.В., Дерябин Д.Г. Дифференциация резидентной и транзиторной стафилококковой микрофлоры при бактерионосительстве // Клин. лаб. диагностика. 1994. № 1. С. 44-46.

18. Бухарин О.В., Дерябин Д.Г. Экологическая детерминированность маркеров персистенции стафилококков // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1997. № 4. С. 60-63.

19. Бухарин О.В., Дерябин Д.Г., Бойко В.И. Характеристика микрофлоры воздушной среды и верхних дыхательных путей человека при проведении буровых работ // Гигиена и санитария. 1991. № 11. С. 39-41.

20. Бухарин О.В., Дерябин Д.Г., Немцева Н.В. Бактерионосительство стафилококка у работающих на Астраханском газоконденсатном месторождении // Гигиена и санитария. 1993. № 7. С. 44-47.

21. Бухарин О.В., Литвин В.Ю. Патогенные бактерии в природных экосистемах. Екатеринбург: Уро РАН, 1997. 269 с.

22. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я. Антилизоцимный тест как маркер персистенции микроорганизмов // Теоретическая и прикладная иммунология: Тез. докл. I Всесоюз.конф. М., 1982. С. 87-88.

23. Бухарин О.В., Усвяцов Б .Я. Бактерионосительство (медико-экологический аспект). Екатеринбург: УрО РАН, 1996. 207 с.

24. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Шеенков Н.В. Характеристика антилизоцим-ной активности золотистого стафилококка при разных типах течения экспериментальной инфекции // Бюл. экспер. биол. и медицины. 1993. № 2. С. 178

25. Бухарин О.В., Чернова O.JL, Матюшина С.Б. Построение диагностической модели дифференциации резидентной и транзиторной стафилококковой микрофлоры при бактерионосительстве // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1996. № 3. С. 68-70.

26. Бухарин О.В., Чернова O.JL, Матюшина С.Б. Способность стафилококков к инактивации карнозина // Бюл. экспер. биологии и медицины. 1999. № 5. С. 545-546.

27. Валышева И.В. Антилактоферриновая активность микроорганизмов: Ав-тореф. дис. . канд. биол. наук. Оренбург, 2005. 22 с.

28. Веселов А.Я. Значение исходного иммунологического фона у хирургических больных для прогноза осложнений // Хирургия. 1986. № 6. С. 29-33.

29. Веселов А.Я., Бахлыкова С.Е. Иммунный ответ у доноров разных фенотипов ABO на введение стафилококкового анатоксина // Журн. микробиол., эпидемиол., иммунобиол. 1990. № 12. С. 106-107.

30. Влияние карнозина на морфофункциональное состояние клеток слизистой оболочки мягкого неба крыс при стафилококковой инфекции / Стадников A.A., Чернова О.Л., Ковбык Л.В., Шевлюк H.H. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2000. № 4. С. 59-62.

31. Влияние препарата интерферона а/р и g-типов на функциональную активность макрофагов при экспериментальной стафилококковой инфекции / Вихоть Н.Е., Спивак Н.Я., Черная Л.Н., Пастер Е.У. // Журн. микробиол.,эпидемиол. и иммунобиол. 1989. № 4. С. 57-60.

32. Влияние циклоферона на биологические свойства бактериальных внутриклеточных патогенов / О. В. Бухарин, Д. А. Кириллов, Н. В. Шеенков, В. А. Кириллов // Журнал микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2005. № 3. С. 8-10.

33. Войно-Ясенецкий М.В. Биология и патология инфекционных процессов. Л.: Медицина, 1981. 208 с.

34. Волков И.И. Совершенствование микробиологической диагностики стафилококковых инфекций и экологические аспекты их возбудителей: Авто-реф. дисс. . канд. мед. наук. Санкт-Петербург, 1999. 22 с.

35. Гандыбин Е.А. Прогнозирование течения и местное лечение венозных трофических язв нижних конечностей: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Оренбург, 2009. 23 с.

36. Герман Г.П., Лаврова Н.В., Шерер Л.А. Иммунохимическое определение лектоферрина человека // Жури, микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1983. №9. С. 17-20.

37. Гублер Е.В., Генкин A.A. Применение непараметрических критериев статистики в медикобиологических исследованиях. Л.: Медицина, 1973. 142 с.

38. Гудима И.А. Микробные биоценозы при гипертрофии лимфоидного кольца глотки и хроническом тонзиллите у детей: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Ростов-на-Дону, 2002. 24 с.

39. Гуляева Н.В., Обидин А.Б., Левшина И.П. Влияние карнозина на показатели своднорадикального окисления липидов при остром стрессе у крыс // Биол. науки. 1989. № 8. С. 5-16.

40. Дворецкий Л.И., Дидковская H.A., Чарлыев Г. Изучение содержания лак-тоферрина в бронхиальном содержимом у больных хроническим бронхитом // Здравоохр. Туркменистана. 1985. № 10. С.15-18.

41. Дерябин Д.Г. Антилизоцимная активность бактерий как фактор их фаго-резистентности: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Челябинск, 1989. 20 с.

42. Дерябин Д.Г. Способность к инактивации факторов естественной резистентности в биологии и экологии стафилококков: Автореф. дисс. .докт. мед. наук. Челябинск, 1997. 38 с.

43. Дерябин Д.Г. Стафилококки. Экология и патогенность. Екатеринбург: УрО РАН, 2000. 149 с.

44. Дидковский H.A., Дворецкий Л.И. Наследственные факторы и местная защита при неспецифических заболеваниях легких. М.: Медицина, 1990. 224 с.

45. Димова С.Г. Динамика стафилококкового бактерионосительства у детей с респираторным аллергозом в условиях спелеотерапии: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Оренбург, 1996. 30 с.

46. Дмитриева Н.В., Солодовник Ф.И., Петухова И.Н. Опыт применения му-пироцина при назальном носительстве золотистого стафилококка у медицинского персонала// Антибиотики и химиотерапия. 2000. № 3. С. 35-38.

47. Дроздов В.В., Руденко В.Н., Макарова С.С. Аннотация к алгоритму "Дис-криминантный анализ" // Информация программ для ЭВМ, разработанных в странах членах СЭВ с целью решения геологических задач: Сб. науч. трудов. ГДР, Берлин, 1975. С. 143-145.

48. Зайцева Г.А., Колеватых Е.П., Дюпина Н.С. Характер распределения HLA-антигенов среди носителей патогенных стафилококков // Антигены гистосовместимости и заболев. СПб., 1991. С. 60-62.9+

49. Защита карнозином транспорта Ca от повреждений, вызываемых пере-кисным окислением липидов / Дупин A.M., Болдырев A.A., Архипенко Ю.В., Каган В.Е. //Бюлл. экспер. биол. и мед. 1984. Т. 97. № 5. С. 186-188.

50. Касымов К.Т. Иммунологическая толерантность в патогенезе «злостного» носительства патогенных стафилококков // Лаб. дело. 1981. № 5. С. 300304.

51. Кириллов Д.А. Лекарственная регуляция персистентных свойств микроорганизмов: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Оренбург, 2004. 23 с.

52. Количественное определение бактерий в клинических материалах / Фельдман Ю.М., Миханева Л.Г., Шапиро А.В., Кузьменко В.Д. // Лабораторное дело. 1984. № 10. С. 616-619.

53. Кондратьева Е.И. Экстренная неспецифическая профилактика ОРВИ и гриппа препаратом циклоферон у детей в эпидемический период // Вестник Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова. 2005. № 1. С. 100-103.

54. Королева Е.Г. Терапия респираторной микоплазменной инфекции у детей // Сборник научных статей. Санкт-Петербург, 2007. С. 15-17.

55. Красилова Е.В. Клинико-патогенетическое значение носительства стафилококка у часто болеющих респираторными заболеваниями детей: Авто-реф. дис. . канд. мед. наук. Астрахань, 2003. 23 с.

56. Краснова Е.И. Особенности иммунного ответа при инфекционном моно-нуклеозе и подходы к иммуномодулирующей терапии // Вестник Санкт-петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова. 2005. № 1.С. 105-107.

57. Кулагина Е.П. Клиническое значение резидентного и транзиторного стафилококкового бактерионосителя у детей: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Оренбург, 1995. 21 с.

58. Кулаичев А.П. Методы и средства комплексного анализа данных. Изд. 4перераб. и доп. М: ИНФРА-М, 2006. 512 с.

59. Лобзин Ю.В., Добрица В.П., Цыган В.Н. Способ профилактики назофа-рингиального носительства патогенной микрофлоры Патент РФ на изобретение № 2339389. Опубликован 27.11.2008.

60. Мальцева В.В., Сергиенко В.И., Стволинский С.Л. Влияние карнозина на активность гемопоэтических стволовых клеток у облученных животных // Биохимия. 1992. Т. 57. С. 1378.

61. Матюшина С.Б. Роль факторов персистенции стафилококков при бактерионосительстве: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Оренбург, 1996. 22 с.

62. Метод определения антилизоцимной активности микроорганизмов / Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Малышкин А.П., Немцева Н.В. // Журн. микро-биол., эпидемиол. и иммунобиол. 1984. № 2. С. 27-28.

63. Михайлова Е.А., Луда А.П., Бигеев М.И. Антииммуноглобулиновая активность бактерий и ее диагностическая ценность // Персистенция бактерий. Куйбышев, 1990. С. 107-111.

64. Мухаметзянова В.Г. Внебольничная пневмония у подростков // Сборник научных статей. Санкт-Петербург, 2007. С. 70-72.

65. Некоторые механизмы персистенции in vivo микоплазм и L-форм бактерий / Прозоровский С. В., Вульфович Ю. В., Раковская И. В., Горина Л. Г. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1994. Прил. С. 14-18.

66. Новый метод определения антилактоферриновой активности микроорганизмов / Валышева И.В., Валышев A.B., Карташова О.Л., Чайникова H.H., Бухарин О.В. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2003. № 4. С. 64-67.

67. Особенности формирования стафилококкового пейзажа слизистой носа у бактерионосителей разного типа / Усвяцов Б.Я., Чернова О.Л., Гербич И.И., Матюшина С.Б. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1994. Прил. С.48-51.

68. Пальчун В.Т., Полякова Т.С., Романова О.Н. Лечебно-диагностические подходы к проблеме хронического тонзиллита // Вестник оториноларингологии. 2001. № 1. С. 4-5.

69. Парфенов О.Г., Гриценко В.А. Опыт санации стафилококковых бактерионосителей на базе санатория-профилактория УБР ПО «Оренбургнефть» // Персистенция бактерий / Под. ред. О.В. Бухарина. Куйбышев, 1990. С. 121124.

70. Паршута Л.И. Особенности формирования микробного биоценоза слизи-стои оболочки носа при стафилококковом бактерионосительстве: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Оренбург, 1998.

71. Паршута Л.И., Усвяцов Б.Я. Роль факторов персистенции в формировании микробного биоценоза слизистой носа у стафилококковых бактерионосителей // Журн. микробиол., эпидемиол., ммунобиол. 1998. № 1. С. 17-21.

72. Первушина Л.А. Антилизоцимный признак микроорганизмов в бактериологической диагностике и лечении воспалительных заболеваний внутренних женских половых органов: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Челябинск, 1990. 23 с.

73. Печеркина С.А., Малеева Л.И., Щицина И.В. О влиянии интерферона на стафилококки // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1982. № 2. С. 54-56.

74. Пискунов С.З., Пискунов З.Г., Ельков И.В. Проблема общего и местного консервативного лечения острого и хронического гайморита // Российская ринология. 1994. № 1. С. 7.

75. Поспелова С.В., Горовиц Э.С. Еще раз о бактерионосительстве // Медицинский альманах. 2009. № 2. С. 77-79.

76. Примак Т.Д., Эрдынеева Б.С. Способ лечения стафилококкового бактерионосительства в носоглотке. Патент РФ на изобретение №2341273. Опубликован 20.12.2008.

77. Применение иммуномодуляторов в хирургической практике / Под ред. В.А. Ступина // Методическое пособие для врачей. Москва, 2005. 56 с.

78. Прозоровский С.В., Кац Л.Н., Каган Г.Я. Ь- формы бактерий (механизм образования, структура, роль в патологии). М.: Медицина, 1981. 240 с.

79. Прохоров В.Я., Акатов А.К., Хатеневер М.Л. Капсулообразование у золотистых стафилококков госпитального происхождения // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1976. № 7. С. 124-127.

80. Райцелис И.В. Клиническое значение биологических свойств микроорганизмов для прогнозирования течения и лечения больных гнойным гайморитом: Автор, дис. . канд. мед. наук. Оренбург, 2000. 26 с.

81. Родионов Д.А. Статистические методы разграничения геологических объектов по комплексу признаков. М.: "Недра", 1968. 158 с.

82. Роль гипоталамических нонапептидов во взаимодействиии про- и эу-кариотических клеток / Стадников A.A., Чернова O.JL, Ковбык Л.В., Шевлюк H.H., Бухарин О.В. // Вестник РАМН. 2000. № 2. С. 49-52.

83. Роль инактивации сальмонеллами антибактериальной составляющей препарата интерферона при экспериментальном инфекционном процессе / Рищук С. В., Смолягин А. И., Стадников А. А. и др. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1996. № 3. С. 98-99.

84. Роль факторов персистенции Staphylococcus epidermidis в инфекционном процессе / Чернова О.Л., Матюшина С.Б., Иванов Ю.Б., Райцелис И.В. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1997. № 4. С. 83.

85. Романцов М.Г., Ершов Ф.И. Часто болеющие дети. Современная фармакотерапия. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2006. 192 с.

86. Сафронов A.A., Желтова В.И. Значение антилизоцимной активности микроорганизмов в диагностике осложнений открытых переломов // Перси-стенция бактерий/Под ред. О.В. Бухарина. Куйбышев, 1987. С. 58-61.

87. Связь биологических свойств стафилококков с течением гнойных синуситов / Бухарин О.В., Чернова О.Л., Матюшина С.Б. и др. // Вестник оториноларингологии. 1998. № 5. С. 35.

88. Северин С.Е., Болдырев A.A., Стволинский С.Л. О радиомодифицирую-щих свойствах карнозина // Радиобиология. 1990, Т. 39. С. 765.

89. Смирнова A.M., Трояшкин A.A., Падерина Е.М. Микробиология и профилактика стафилококковых инфекций. Л.: Медицина, 1977. 216 с.

90. Смирнова A.M., Трояшкин A.A., Падерина Е.М. Микробиология и профилактика стафилококковых инфекций. Л.: Медицина, 1977. 216 с.

91. Соколов В.Ю. Антиинтерфероновая активность микроорганизмов // Пер-систенция бактерий / Под ред. О.В. Бухарина. Куйбышев, 1990. С. 83-93.

92. Состав для санации носителей золотистого стафилококка / Ерофеева JT.Н., Затолокин В.Д., Андреев И.А. и др. / Патент РФ на изобретение № 2187300, опубликован 20.08.2002.

93. Способ санации респираторного тракта бактерионосителей / Башкина О.А., Бойко А.В., Красилова Е.В. с соавт. Патент РФ № 2257223, опубликован 27.07.2005.

94. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / М.О. Биргер. 3-е изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 1982. 464 с.

95. Сравнительная характеристика некоторых экспериментальных моделей стафилококковой инфекции / Анатолий С. А., Антоновская И.И., Таек С.Я. и др. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1971. № 9. С. 60-63.

96. Стафилококк (биологически активные субстанции, иммунный ответ на антигены) / Смирнова В.В., Вершигора А.Е., Вихоть Н.Е. и др. Киев: Наукова думка, 1994. 248 с.

97. Терновская JI.H. Персистенция золотистых стафилококков в клетках слизистой оболочки передних отделов носа материальная основа длительного бактерионосительства // Стафилококковые инфекции. СПб, 1991. С. 2126.

98. Тихомирова О.В. Ротавирусная инфекция. Особенности клинического течения и тактика терапии // Учебное пособие. Санкт-Петербург, 2005. 32 с.

99. Усвяцов Б.Я. Лизоцимная и антилизоцимная активность патогенных кокков: Дис. докт. мед. наук. Оренбург, 1986. 32 с.

100. Усвяцов Б.Я., Паршута Л.И., Бухарин О.В. Характеристика микробного биоценоза слизистой оболочки носа у здоровых людей и бактерионосителей // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2000. № 5. С. 65-66.

101. Уткина Т.М. Влияние химических соединений на динамику антилизоцим-ной активности Staphylococcus aureus и Klebsiella pneumoniae // Вестник

102. Оренбургского государственного университета. 2000. № 2. С. 137-138.

103. Фенотипическая характеристика стафилококков и местный иммунитет при бактерионосительстве / Карташова О.Л., Норкина А.С., Чайникова И.Н., Смолягин А.И. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2009. № 4. С. 99-103.

104. Характеристика антикарнозиновой активности Neisseria gonorrhoeae, выделенных от больных со свежей и хронической гонококковой инфекцией / Воронина Л.Г., Михайлова Е.А., Кузнецова Е.К., Михайлова О.О. // Венеролог. 2007. № 2. С. 47.

105. Характеристика микрофлоры, выделенной при хронических и острых гнойных синуситах / Карташова О.Л., Боклин А.К., Киргизова С.Б., Пашкова Т.М. // Журн. «Современные наукоемкие технологии». № 2. 2005. С. 36-37.

106. Хохолявина P.M., Мефодьев В.В., Козлов Л.Б. Этиология возбудителей гнойно-септических заболеваний и их антибиотикорезистентность // Научный вестник ТМА. 2000. № 1. С. 79-80.

107. Циклоферон средство сохранения репродуктивного здоровья / Рыбалкин С.Б., Романцов М.Г., Аспель Ю.В. // Венеролог. 2007. № 2. С. 23-28.

108. Чахава О.В., Горская Е.М. Носительство патогенных микроорганизмов как фаза резарвации возбудителя в межэпидемическом периоде // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1984. № 9. С. 9-16.

109. Чернова О.Л. Антилизоцимная активность стафилококков, выделенных при бактерионосительстве: Автореф. дис.канд. биол. наук. Челябинск, 1989. 22 с.

110. Чуенко Э.А. Влияние антибиотиков на антикарнозиновую активность стафилококков. Вестник РГМУ. 2006. № 2/49. С. 439-440.

111. Чуенко Э.А., Усвяцов Б.Я. Характеристика антикарнозиновой активности разных видов стафилококков // Вестник Оренбургского государственного университета. 2005. № 12. С. 63-65.

112. Шеенков Н.В. Роль антилизоцимной активности бактерий в развитии инфекционного процесса и пути ее регулирования: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Оренбург, 1993. 21 с.

113. ПЗ.Шульга И.А. Фурункул носа: Автореф. дис. . докт. мед. наук. Самара, 1996. 26 с.

114. Экология микроорганизмов человека / Бухарин О.В, Валышев А.В., Гиль-мутдинова Ф.Г. и др. Екатеринбург: УрО РАН, 2006. 476 с.

115. Эффект аэрозольной терапии циклофероном у пациентов с хроническими ринитами / Высочина И.Л., Шостакович-Корецкая А.Е. и др. // Грузинские медицинские новости. 2006. № 135. С. 39-44.

116. Accurate analysis of taurine, anserine, carnosine and free amino acids in a cattle muscle biopsy sample / Imanari M., Higuchi M., Shiba N., Watanabe A. // Anim Sci J. 2010. V. 81(3). P. 369-376.

117. Akhtar N. Staphylococcal nasal carriage of health care workers // J Coll Physicians Surg Pak. 2010. V. 20(7). P. 439-443.

118. Alacam T. et al. Slime production by coagulase-negative staphylococci in the infected pulps.//J.Clin.Pediatr.Dent.-1995.-V. 19.-№2.-P. 117-119.

119. Barbour A., Derendorf H. Resistance and the management of complicated skin and skin structure infections: the role of ceñobiprole // Ther Clin Risk Manag. 2010. V. 6. P. 485-495.

120. Baselga R., Albizu I., Amorena B. Staphylococcus aureus capsule and slime as virulence factors in ruminant mastitis // Vet. Microbiol. 1994. V. 39. № 3-4. P. 195-204.

121. Biological activity of novel synthetic derivatives of carnosine / Stvolinsky S.L., Bulygina E.R., Fedorova T.N., Meguro K., Sato T., et al. // Cell Mol Neurobiol. 2010. V. 30(3). P. 395-404.

122. Boldyrev A.A. Molecular mechanisms of homocysteine toxicity // Biochemistry. 2009. V. 74(6). P. 589-598.

123. Branger C., Fournier J.M., Loulergue J. Epidemiology of Staphylococcus aureus in patients with cystic fibrosis // Epidemiol, infect. 1994. V. 112. № 3. P. 489-500.

124. Britigan B.E., Serody J.S., Cohen M.S. The role of lactoferrin as an antiinflammatory molecule // Adv. Exp. Med. Biol. 1994. V. 357. P. 143-156.

125. Brown E.J. Interaction of gram-positive microorganisms with complement // Cuit. Top. Microbiol. Immunol. 1985. V. 121. P. 159-187.

126. Buswell J., CTRourke D., Craven N. L-forms of staphylococci and streptococci // Vet. Rec. 1995. V. 136. № 12. P. 304.

127. Carnosine as a natural antioxidant and geroprotector: from molecular mechanisms to clinical trials / Boldyrev A.A., Stvolinsky S.L., Fedorova T.N., Suslina Z.A. //Rejuvenation Res. 2010. V. 13(2-3). P. 156-158.

128. Cheung A.L., Yeaman M.R., Sullum P.M. Role of the sar locus of Staphylo-coccys aureus in induction of endocarditis in rabbits // Infect.Immun. 1994. V. 62. №5. P. 1719-1725.

129. Cole R.M. Some implications of the comparative ultrastructure of bacterial L-forms. In: Mycoplasma and L-Forms of Bacteria (S.Madoff) // New York, 1971. P. 49-83.

130. Ecological temporal stability of Staphylococcus aureus nasal carriage / Sak-winska O., Blanc D.S., Lazor-Blanchet C., et al. // J Clin Microbiol. 2010. V. 48(8). P. 2724-2728.

131. Effect of carnosine treatment on oxidative stress in serum, apoB-containing lipoproteins fraction and erythrocytes of aged rats / Aydin A.F., Küskü-Kiraz Z., Dogru-Abbasoglu S., Uysal M. // Pharmacol Rep. 2010. V. 62(4). P. 733-739.

132. Forsgren A. Protein A from Staphylococcus aureus. Production of protein A by bacterial and L-forms of Staphylococcus aureus // Acta Pa-thol.Microbiol.Scandinav. 1969. V. 75. P. 481-490.

133. Forsgren A., Nordstrom K. Protein A from staphylococcus aureus: the biological significance of its reaction with IgG // Ann. N.Y. Acad.Sci. 1974. V. 2367. P. 252-265.

134. Forsgren A., Quie P. Effect of staphylococcal protein A on heat-labile opsonin //J.Immunol. 1974. V. 112. P. 1177-1180.

135. Forsgren A., Svedjelung A., Wigzell H. Lymphocyte stimulation by protein A of Staphylococcus //Europ.J.Biochem. 1976. V. 6. P. 207-213.

136. Grov A. Human colostral IgA interacting with staphylococcal protein A // Acta path.microbiol.scand. 1976. Sect. C. V. 84. P. 71-72.

137. Hipkiss A.R. Aging, Proteotoxicity, Mitochondria, Glycation, NAD and Carnosine: Possible Inter-Relationships and Resolution of the Oxygen Paradox // Front Aging Neurosci. 2010. V. 18. P. 10.

138. Hipkiss A.R. Carnosine and its possible roles in nutrition and health // Adv Food Nutr Res. 2009. V. 57. P. 87-154.

139. Hipkiss A.R. Carnosine, a protective, anti-ageing peptide? // Int J Biochem Cell Biol. 1998. V. 30(8). P. 863-868.

140. Hipkiss A.R., Brownson C., Carrier M.J. Carnosine, the anti-ageing, antioxidant dipeptide, may react with protein carbonyl groups // Mech Ageing Dev. 2001. V. 122(13). P. 1431-1445.

141. Human milk lactoferrin inactivates two putative colonization factops expressed by Haemophilus influenzae / Qiu J., Hendrixson D.R., Baker E.N. et al. // Microbiology. 1998. V. 95. № 10. P. 12641-12646.

142. Important role of muscle carnosine in rowing performance .Baguet A, Bourgois J., Vanhee L., Achten E., Derave W.J. // Appl Physiol. 2010. V. 109(4). P. 10961101.

143. In vitro and in vivo (LD50) effects of human lactoferrin on bacteria // Czirok E., Milch H., Nemeth K. et al. // Acta.Microbiol. Hung. 1990. V. 37. №1. P. 55-71.

144. Jiang H.Q., Chen Y.F., Li A.N. Clinical burn wond infection caused by L-forms of Staphylococcus aureus // Burns. 1994. V. 20. № 1. P. 83-84.

145. Johnson G.M., Lee D.A., Regelmann W.E. Interference with granulocyte function by Staphylococcus epidermidis slime // Infect.Immun. 1986. V. 54. № 1. P. 13-20.

146. Johnson G.M., Schumacher-Perdreau F., Peters G. Accumulative growth of Staphylococcus epidermidis (Se) in resistance of neutrophil (PMN) opsonopha-gocytic killing, mechanisms and pathways // Clin.Infec.Diseases. 1994. № 3. P. 567.

147. Karamanos N.K., Panagiotopoulou H.S., Syrokou A. Identity of macromole-cules present in the extracellular slime layer of Staphylococcus epidermidis // Biochimie. 1995. V. 77. № 3. P. 217-224.

148. Khama-Murad A.Kh. Protective properties of L-carnosine studied in vitro on a hemorrhagic stroke model // Eksp Klin Farmakol. 2009. V. 72(6). P. 46-48.

149. Kolawole D.O., Adedayo O. Resistence of mouse-virulent encapsulated nasal isolated of Staphylococcus aureus to disinfectants and antiseptics // Biomed.Lett. 1994. V. 50. № 198. P. 151-156.

150. Kuo W.N., Ganesan U., Davis D.L. Regulation of Staphylococcus protease using complement, interferon and immunoglobulin as substrates // Cytobios. 1992. V. 71. №284. P. 29-36.

151. Lavctoferrin: a multifunctional glycoprotein involved in the modulation of the inflammatory process / Baveye S., Elass E., Mazurier J et al. // Clin. chem. lab. med. 1999. V. 37. № 3. p. 281-283.

152. Lederberg J. Lederberg E.M. Replica plating and indirect selection of bacterial mutants // J.Bacteriol. 1952. V. 63. P. 399-406.

153. Margolis F.L. Camosine in the primary of olfactory pathway // Science. 1974. V. 184. P. 909-911.

154. Matsunaga T., Kamata S., Kakiichi N. Characteristics of Staphylococcus aureus 1 isolated from peracute, acute and chronic bovine mastitis // J.Vet.Med.Sci. 1993. V. 55. № 2. P. 297-300.

155. Maxillary sinuses microbiology from patients with chronic rhinosinusitis / Man-tovani K., Bisanha A.A., Demarco R.C., et al. // Braz J Otorhinolaryngol. 2010. V. 76(5). P. 548-551.

156. Movitz J., Masuda S., Sjoquist J. Physico- and immunochemical properties of staphylococcal proteun A extracellulary produced by a set of mutants from Staphylococcus aureus Cowan 1 // Microbiol. Immunol. 1979. V. 23. P. 51-60.

157. Nasal carriage of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in university students / Prates K.A., Torres A.M., Garcia L.B., et al. // Braz J Infect Dis. 2010. V. 14(3). P. 316-318.

158. Prokesova L. et al. Cleavage of human immunoglobulins by proteinase from Staphylococcus aureus // Adv.Exp.Med.Biol. 1995. V. 371A. P. 613-616.

159. Protective effects from carnosine and histidine on acetaminophen-induced liver injury / Yan S.L., Wu S.T., Yin M.C., Chen H.T., Chen H.C. // J Food Sci. 2009. V. 74(8). P. 259-265.

160. Rasanen L., Karhumaki E., Krohn K. Elaboration of leucocyte migration factor by human lymphocyte subpopulations stimulated with mitigens // Cell.Immunol. 1978. V. 37. P. 221-228.

161. Ratliff T., McCool R., Catalona W. Interferon induction and augmintation of natural killer activity by staphylococcal protein A // Cell.Immunol. 1981. V. 57. P. 1-12.

162. Reynolds E.S. The use of lead citrate at high pH as an electron opaque stain in electron microscopy // J.Cell.Biol. 1963. V. 17. № 1. P. 208-212.

163. Rodgers J., Phillips F., Olliff C. The effects of extracellular slime from Staphylococcus epidermidis on phagocytic ingestion and killing 11FEMS Immunol. And Med.Microbiol. 1994. V. 9. № 2. P. 109-116.

164. Romagnani S., Gluidzi G., Alimerigogna F. Protein A of Staphylococcus aureus is mitogenic for IgG-bearing but also for a subpopulation of IgM and/or IgD-bearing human lymfocytes // Immunology. 1980. V. 39. P. 417-425.

165. Sakurada J., Zhijun L., Seki K. Biochemical and genetic heterogeneity of staphylococcal protein A // FEMS Microbiol.Lett. 1994. V. 119. № 1-2. P. 59-63.

166. Sato T., Shamoto M. A simple rapid polychrome stain for epoxy-embedded tissue // Stain Technol. 1973. V. 48. № 5. P. 223-227.

167. Schmitt-Slomska J., Michailova L., Ivanova E. Adhesion and phagocytosis of Staphylococcus aureus L-forms // J. Basic Microbiol. 1986. V. 26. P. 429-440.

168. Severin S.F. Problems and Perspectives in Studying the Biological Role of Car-nosine // Proc. 6-th Int.Congr.Biochem., Plenary Sessions, N.Y., 1964. P. 45-61.

169. Shiro H. et al. Transposon mutants of Staphylococcus epidermidis deficient in elaboration of capsular polysaccharide/adhesin and slime are avirulent in a rabbit model of endocarditis // J.Infect.Dis. 1994. V. 169. № 5. P. 1024-1049.

170. Smith H. Bacterial subversion rather then suppression of immune defences // Bacterial and viral inhibition and modulation of host defences. Acad.Press, London, 1984. P. 171-189.

171. Soos J.M., Jonson H.M. Type I interferon inhibition of superantigen stimulation: implications for treatment of superantigen-associated disease // J.Interferon.Cytokine.Res. 1995. V. 15. № 1. P. 39-45.

172. Staphylococcus aureus carnage in the anterior nares of close contacts of patients with atopic dermatitis / Chiu L.S., Chow V.C., Ling J.M., et al. // Arch Dermatol. 2010. V. 146(7). P. 748-752.

173. Staphylococcus aureus nosocomial infections: the role of a rapid and low-cost characterization for the establishment of a surveillance system / Valaperta R., Tejada M.R., Frigerio M., et al. // New Microbiol. 2010. V. 33(3). P. 223-232.

174. Successful treatment for carriage of methicillin-resistant Staphylococcus aureus and importance of follow-up / Mollema F.P., Severin J.A., Nouwen J.L., et al. // Antimicrob Agents Chemother. 2010. V. 54(9). P. 4020-4025.

175. Takahashi S., Nakashima Y., Toda K. Carnosine facilitates nitric oxide production in endothelial f-2 cells // Biol Pharm Bull. 2009. V. 32(11). P. 1836-1839.

176. Takeuchi S., Matuda K., Sasano K. Protein A in Staphylococcus aureus isolates from pigs //J.Vet.Med.Sci. 1995. V. 57. № 3. P. 581-582.

177. Töwe J., Neumayer E., Stark K.H., Räch G. Zur Anwendung der Diskrimi-nanzanalyse in der Perinatiligie // "Zbl. Gynak". 1976. Bd. 98. №. 21. P. 12871295.

178. Umeda A.T., Ikebuchi T., Amako K. Localization of bacteriophage receptor, clumping factor and protein A on the cell surface of Staphylococcus aureus // Bacteriol. 1980. V. 141. P. 838-844.

179. Verhoef J., Peterson P.K., Quie P.G. Immunology of Staphylococci // Immunology. Human.Infection. N.Y.,London. 1981. Pt. 2. P. 93-111.

180. Vh3 family antibodies bind domain D of staphylococcal protein A / Robe N., Paul W., Salem Aram N., Silverman Gregg J. // J.Immunol. 1995. V. 154. № 12. P. 6437-6445.

Информация о работе

Потехина, Лидия Петровна
кандидата медицинских наук
Оренбург, 2010
ВАК 03.02.03

Диссертация

Антикарнозиновая активность стафилококков - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы