Антигипоксическая защита организма собак гутимином при озонированном искусственном кровообращении

Бояринова, Лариса Валентиновна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Антигипоксическая защита организма собак гутимином при озонированном искусственном кровообращении
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Антигипоксическая защита организма собак гутимином при озонированном искусственном кровообращении"

На правах рукописи

Бояринова Лариса Валентиновна

АНТИГИПОКСИЧЕСКАЯ ЗАЩИТА ОРГАНИЗМА СОБАК ГУТИМИНОМ ПРИ ОЗОНИРОВАННОМ ИСКУССТВЕННОМ КРОВООБРАЩЕНИИ

03.00.13 - физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Нижний Новгород, 2007

003159700

Работа выполнена в военно-медицинском институте Федеральной службы безопасности РФ и ЦНИЛ Нижегородской государственной медицинской академии

Научные консультанты:

Заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор, Крылов Василий Николаевич

Доктор медицинских наук, профессор Никольский Виктор Олегович

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор Бирюкова Ольга Вениаминовна

Доктор биологических наук, профессор Конторщикова Клавдия Николаевна

Доктор медицинских наук, профессор Щербаков Виталий Иванович

Ведущая организация: ГУ НИИ общей реаниматологии РАМН

Защита диссертации состоится «¿!Г» 1® 2007 года в 13 00 часов на заседании диссертационного совета Д 212.166.15 при Нижегородском государственном университете им. Н.И. Лобачевского по адресу. 603950, г.Нижний Новгород, пр. Гагарина, 23, корп. 1, биологический факультет Факс: (8312) 65-85-92

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Нижегородского государственного университета им. Н.И Лобачевского

Автореферат разослан «¿¿» о в 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент

АС Корягин

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность проблемы

В настоящее время в мире ежегодно проводится около 700 тысяч операций с искусственным кровообращением (ИК) (Бунятян А А., 2005). Академиком Петровским Б.В. метод ИК назван «эпохой в медицине 20 века» (Лурье Г.О., 2002). 50 лет назад в нашей стране Вишневским А А. впервые проведена успешная операция в условиях ИК. За это время, несмотря на усовершенствование аппаратов ИК, технологии проведения перфузии, способов ее управления и фармакологическую защиту организма, -наблюдаются осложнения со стороны различных органов. Наиболее грозным осложнением является печеночно-почечная недостаточность и вторичный иммунодефицит (Chiristman J. et al, 1998, Трекова НА. и соавт, 2002, Бричкин Ю.Д., 2003). Одной из важнейших причин развития этих осложнений является гипоксия, формирующаяся в организме больных в процессе искусственного кровообращения. Все это свидетельствует о необходимости повышения устойчивости организма к неблагоприятному воздействию гипоксии в условиях ИК.

В этой связи, в работах Медведева А.П. (1997), Никольского В.О (2003), Киселевича В Е (2006) и других было установлено противогипоксическое действие озона, используемое для обработки перфузата в процессе искусственного кровообращения В эксперименте ими было показано, что озон оказывает коррегирующее действие на уровне микроциркуляторного звена кровообращения, а в клинике выявлено снижение послеоперационных осложнений у кардиохирургических больных, оперируемых в условиях ИК. Однако оксигенация перфузата озонированным кислородом во время проведения ИК в полной мере не предупреждает развитие гипоксических повреждений в органах животных и человека

В проблеме поиска эффективных методов профилактики гипоксических повреждений у кардиохирургических больных обращает внимание применение гутимина (Бояринов ГА., 1987). Экспериментально-клиническими исследованиями установлено, что антигипоксант гугамин проникает в клетки органов, способствует более рациональному использованию кислорода в клетке в условиях гипоксии, поддерживает сопряжение окисления и фосфорилирования, оптимизирует работу дыхательной цепи, тормозит перекисное окисление липидов и стабилизирует мембраны (Оковитый С.В. и соавт, 2006).

Однако опыт его применения в кардиохирургической клинике небольшой. Нет определенной ясности в представлениях о его влиянии на обратимость патологических процессов на разных уровнях жизнедеятельности: системном, органном, клеточном и субклеточном, немногочисленны сведения о времени формирования и продолжительности функционирования адаптационных процессов, стимулируемых гутимином, о содержании углеводных энергетических субстратов и состоянии органелл

клеток, принимающих участие в поддержании этих реакций, а также отсутствуют данные о противогипоксическом действии гутимина на организм во время озонированного ИК,

1.2. Цель и основные задачи исследования

Целью работы явилось изучение противогипоксического действия гутимина на гемодинамику, микроциркуляцию в брыжейке тонкой кишки, метаболические и структурные изменения в печени, почках, селезенке и брыжеечных лимфоузлах у собак при озонированном искусственном кровообращении и постперфузионном периоде

Для достижения цели решались следующие задачи-

1. Исследовать изменения центральной гемодинамики и микроциркуляции в брыжейке тонкой кишки во время озонированного ИК и в постперфузионном периоде

2. Изучить изменения мшфоциркуляции, метаболизма и структуры печени, почек, селезенки и лимфатических узлов через 3 часа озонированного ИК и 2 часа постперфузионного периода.

3. Оценить влияние гутимина на центральную гемодинамику и микроциркуляцию в брыжейке тонкой кишки во время озонированного ИК и в постперфузионном периоде.

4 Выявить влияние гутимина на микроциркуляцию, метаболизм и структуру печени, почек, селезенки и лимфатических узлов через 3 часа озонированного ИК и 2 часа постперфузионного периода.

5 Сопоставить изучаемые параметры при озонированном ИК и озонированном ИК с введением гутимина на одинаковых этапах исследования и, на основании их анализа, оценить противогипоксическое действие гутимина на состояние микроциркуляции в брыжейке тонкой кишки и морфометаболические изменения в печени, почках, селезенке и лимфатических узлах.

1.3. Научная новизна

Настоящее исследование является первым научным анализом результатов изучения противогипоксического действия озона и гутимина на организм собак при искусственном кровообращении и посвящено решению проблемы защиты внутренних органов (печень, почки, селезенка, лимфатические узлы) от гипоксии в этих условиях.

Показано, что оксигенация перфузата озонированным кислородом в процессе искусственного 1фовообращения полностью не предупреждает развития потенциальной патогенности адаптивных механизмов, формирующихся в организме собак в ответ на гипоксию.

системном (сердечно-сосудистая), органном (печень, почки, селезенка, лимфатические узлы), клеточном (эндотелиальные, паренхиматозные и стромальные клетки), субклеточном (органеллы клеток), биохимическом (ферменты, углеводные субстраты и адениловые нуклеотиды).

Выявлено, что гутимин снижает проявление централизации кровообращения в период озонированной перфузии Получены и систематизированы новые факты противогипоксического действия гутимина на микроциркуляцию в брыжейке тонкой кишки (вызывает дилатацию артериолярных сегментов, поддерживает оптимальную скорость кровотока во всех сосудах, сохраняет большое количество функционирующих капилляров, предупреждает агрегацию и явления стаза в мелких венулах и капиллярах) и органов брюшной полости (предупреждает периваскулярные кровоизлияния, формирование микротромбов в микроциркуляторном русле, плазматическое пропитывание стенок артериол, микроклазматоз, повреждения базальной и люминальной мембран эндотелия капилляров)

Выявлено благоприятное влияние гутимина на метаболические процессы в печени, почках, селезенке и лимфатических узлах, восстанавливает активность окислительно-восстановительных ферментов, интенсифицирует процессы утилизации глюкозы, глюкозо-6-фосфата и, особенно, лактата, оптимизирует работу цикла Кребса и дыхательной цепи, поддерживает и активирует пентозофосфатный шунт, увеличивает синтез АТФ.

Оказывая положительное действие на микроциркуляцию и метаболизм, гутимин предупреждает мукоидное набухание коллагеновых волокон, развитие зернистой дистрофии, повреждение митохондрий и расширение саркоплазматического ретикулума в исследуемых органах.

Адаптационные реакции, развившиеся при введении гутимина на фоне озонированного искусственного кровообращения в печени, почках, селезенке и лимфатических узлах, сохраняются и в раннем постперфузионном периоде

1.4. Научно-практическое значение

Совокупность полученных данных и теоретических положений позволили обосновать применение метода введения гутимина для предотвращения развития гипоксических повреждений в печени, почках, селезенке и брыжеечных лимфоузлах при проведении озонированного ИК и в постперфузионном периоде

На основании результатов проведенных исследований разработан эффективный, безопасный и доступный в применении метод повышения устойчивости внутренних органов к гипоксии при ИК Озонированное ИК, в настоящее время, применяется в специализированных кардиохирургических стационарах Нижнего Новгорода и Челябинска, а озонированное ИК с введением гутимина в СККБ Нижнего Новгорода

Результаты работы дают новые представления о противогипоксических эффектах гутимина на фоне озонированного ИК и являются фундаментом

для дальнейшего обоснования и применения антигипоксантов при ИК и озонотерапии.

Опубликованные данные работы о механизмах формирования изменений при озонированном ИК и возможности их предупреждения с помощью гутимина используются в педагогическом процессе профильных кафедр Нижегородской медицинской академии и Военно-медицинского института ФСБ РФ.

1.5. Основные положения, выносимые на защиту

1. Применение метода оксигенации перфузата озонированным кислородом с содержанием озона 0,048-0,105 мг/л при искусственном кровообращении полностью не предупреждает гипоксические нарушения микроциркуляции в брыжейке тонкой кишки, метаболизма и структуры в печени, почках, селезенке и лимфатических узлах.

2. Введение гутимина (50 мг/кг внутривенно за 20 мин до перфузии, 2030 мг/кг в перфузат до и 35-40 мг/кг через каждые 40 мин перфузии) уменьшает проявления централизации кровообращения и улучшает гемомикроциркуляцию в брыжейке тонкой кишки.

3 Гутимин при озонированном искусственном кровообращении благоприятно влияет на метаболические процессы в печени, почках, селезенке и лимфатических узлах, и, вследствие этого, предупреждает структурные нарушения в этих органах.

4. Адаптационные реакции, развившиеся при введении гутимина на фоне озонированного искусственного кровообращения в печени, почках, селезенке и лимфатических узлах, сохраняются и в раннем постперфузионном периоде.

1.6. Апробация работы

Основные положения работы доложены и обсуждены на: 8-м Всероссийском съезде анестезиологов и реаниматологов (Омск, 2002), 1-ой Украинско-русской научно-практической конференции «Озон в биологии и медицине» (Одесса, 2003), 5-ой, 6-ой и 7-ой Всероссийских научно-практических конференциях с международным участием «Озон в биологии и медицине» (Н.Новгород, 2003, 2005, 2007), научно-практической конференции (Чебоксары, 2005), VIII и IX ежегодной сессии НЦССХ им А.Н.Бакулева РАМН с Всероссийской конференцией молодых ученых (Москва, 2004, 2005), Всероссийской научно-практической конференции ассоциации анестезиологов-реаниматологов Юга России (Геленджик, 2004), 3-ей Украинско-русской научно-практической конференции «Озон в биологии и медицине» (Севастополь, 2006), 1-ой научно-практической конференции Азиатско-европейского союза озонотерапевтов «Озон в биологии и медицине» (Большое Болдино, Нижегородская обл., 2006), 2-ой научно-практической конференции Азиатско-Европейского союза

озонотерапевтов и производителей медицинского оборудования «Технические средства и технологии озонотерапии» (Казань, 2007).

1.7. Публикации

По материалам диссертации опубликовано 28 работ, из которых 22 - в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, определенных ВАК.

1.8. Объем и структура работы

Работа включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, 3 главы собственных исследований, заключение, выводы. Список цитируемой литературы включает 436 отечественных и 116 зарубежных источников. Диссертация изложена на 302 страницах машинописного текста, содержит 24 таблицы, 80 рисунков

Личный вклад соискателя. В основу диссертационной работы положены исследования, в которых соискатель ставил проблему, предлагал способы решения задач, планировал эксперимент, принимал личное участие в проведении экспериментальных исследований, обработке и оценке результатов, формулировке выводов, написании статей.

2. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

2.1.Материалы и методы исследования

2.2.1. Биологические объекты

Эксперименты были проведены на беспородных собаках. Работа основана на изучении операционного и секционного материала от 64 собак обоего пола, массой 27,96±2,76 кг.

2.2.2. Инструментальное обеспечение экспериментов

После премедикации (промедолом 10 мг и атропином 0,5 мл 0,1% раствора) осуществляли вводный наркоз внутривенным введением 2,5% раствора тиопентала-натрия (2 мг/кг). Мышечную релаксацию вызывали внутривенным введением дитилина в дозе 2 мг/кг. На этом фоне животных интубировали, переводили на искусственную вентиляцию лёгких и эфирно-кислородный наркоз. Выполняли торакотомию по 5-ым межреберьям с поперечным рассечением грудины и затем перикардиотомию. Выделяли переднюю и заднюю полые вены и аорту, непарную вену перевязывали. Выделяли также левые бедренные сосуды.

Через ушко и стенку правого предсердия в полые вены вводили катетеры для дренирования венозной крови в оксигенатор, артериальную

трассу аппарата искусственного кровообращения через канюлю соединяли с левой бедренной артерией.

Для проведения ИК применяли аппарат "АИК-5М" с оксигенатором противоточного пенно-плёнчатого типа, совмещённым с теплообменником Согревание и охлаждение теплоносителя осуществляли аппаратом "Холод-2Ф". После согревания и насыщения газом первичного перфузата на режиме рециркуляции снимали зажимы с приводящей и отводящей магистралей и проводили параллельную перфузию. После достижения расчетной объемной скорости перфузии (ОСП=115-120 мл/кг/мин) затягивали турникеты на катетерах полых вен и таким образом переходили на полное ИК. С началом полного ИК отключали искусственную вентиляцию легких (ИВЛ). Затем пережимали аорту и останавливали сердечную деятельность введением охлаждённого кардиоплегического раствора в коронарное русло и обкладыванием сердца лёд-снежной массой.

С первых минут перфузии осуществляли гипотермию путём охлаждения крови в теплообменнике до ректальной температуры 28-30°С, к концу ИК организм согревали до исходной температуры. Перфузию проводили в течение трёх часов. Анестезия во время ИК поддерживалась аналгетиками (фентанил, промедол) и нейролептиками (дроперидол) с добавлением миорелаксантов (дитилин)

Общая характеристика экспериментального материала по сериям представлена в таблице 1.

Таблица 1

Общая характеристика экспериментального материала по сериям

Серии Вес, кг Общая характеристика серии опытов Кол-во

1 24,58±3,63 Интактная - премедикация (промедол, атропин), эфирно-кислородный наркоз в течение 3-х часов 15

2 30,07±2,40 Контрольная - озонированное ИК в течение 3-х часов 14

3 31,7б±3,46 Контрольная - 2 часа постперфузионного периода после озонированного ИК И

4 25,1±1,4 Опытная - озонированное ИК в течение 3-х часов + гутимин 10

5 28,3±2,9 Опытная - 2 часа постперфузионного периода после озонированного ИК с введением гутимина 14

Всего животных 64

Необходимость выполнения интахтной серии была обусловлена тем, что у животных контрольных и опытных серий моделирование искусственного кровообращения проводилось в условиях эфирно-кислородного наркоза. Поэтому необходимо было изучить влияние эфирно-кислородного наркоза на микроциркуляцию, метаболизм и структуру органов собак.

В контрольных (2, 3) и опытных (4, 5) сериях проводили озонированное ИК. Перфузат в оксигенаторе обрабатывали озоно-кислородной смесью, поступающей со скоростью 1 л/мин с содержанием озона 0,048 мг/л-0,105 мг/л с помощью аппарата «Озон-5М» Кроме того, в

этих сериях предварительно в течение 10 мин озонировали перфузат, используемый для первичного заполнения АИК, на режиме его согревания и рециркуляции.

В опытных сериях (4, 5) животным вводили гутимин: 50 мг/кг внутривенно за 20 мин до перфузии, 20-30 мг/кг в перфузат до и 35-40 мг/кг через каждые 40 мин перфузии.

У животных 3-ей и 5-ой серий, у которых исследования проводили в постперфузионном периоде, в случае развития фибрилляции желудочков сердца, после открытия аорты выполняли дефибрилляцию

2.2.3. Методы исследования

Методы исследования гемодинамики и микроциркуляции.

Системное артериальное давление (АД) измеряли ртутным манометром Людвига в бедренной артерии, периферическое венозное давление (ПВД) -аппаратом Вальдмана через катетер, введенный в бедренную вену. Общее периферическое сопротивление сосудов (ОПСС) определяли по формуле-

ОПСС = САД х 1333 х 60 / ОСП (Дин х см"5 х с), где САД - системное артериальное давление, ОСП - объемная скорость перфузии. Для перевода единиц сопротивления в Дин х с х см использовали поправочный коэффициент 1333 - фактор перевода миллиметров ртутного столба в Дин х см"5; 60 - секунды, для расчета секундного объема кровотока

САД = АДц + АДгАДд/3, где АД, - систолическое давление, АДд- диастолическое давление, АДс-АДд - пульсовое давление.

О централизации 1фовообращения судили на основании температуры, измеренной с помощью многоканального автоматического электротермометра с датчиками, установленными в прямой кишке (Т° рект ) и скелетной мышце передней лапы (Т° периф ) собаки

Состояние микрогемоциркуляции в брыжейке тонкой кишки исследовали методом биомикроскопии на установке, смонтированной нами на основе микроскопа "МБР-1" в сочетании с микрофотонасадкой МФН № 12. Для количественной характеристики состояния микроциркуляции на этапах контрольного времени производили балльную оценку изменений ее параметров. Высший балл соответствует более выраженным изменениям Схема балльной оценки микроциркуляции в брыжейке тонкой кишки представлена в таблице 2.

Биохимические методы исследования. Количество глюкозы, гликогена, глюкозо-6-фосфата, лактата и пирувата в тканях определяли энзиматически (Кочетов Г.А., 1971).

АТФ, АДФ и АМФ в ткани определяли методом колоночной хроматографии на эктеолцеллулозе по Т.Н.Ивановой и Л.Н Рубель (1969). С

целью прекращения метаболических реакций кусочки ткани органов мгновенно замораживали в жидком азоте

Таблица 2

Схема балльной оценки микроциркуляция

Изменение признака Количество баллов

I Внутрисосудистые изменения

1) Кровоток

а) быстрый мелкозернистый во всех сосудах 0

б) умеренно замедленный в мелких венулах, посткашгиллярах и некоторых

капиллярах 1

в) значительно замедленный во всех венулах, посткапиллярах и некоторых

капиллярах 2

г) резко замедленный во всех венулах, посткагашлярах и замедленный в

артериолах 3

д ) стаз в

(1) венулах единичных 1

венулах множественных 2

(2) капиллярах единичных 1

капиллярах множественных 2

(3) артериолах 3

2) Ретроградный кровоток

а) венулы 1

б) капилляры 2

в) артериолы 3

3) Агрегация эритроцитов

а) венулы

(1) малого калибра (единичные) 1

малого калибра (множественные) 2

(2) крупного калибра (единичные) 3

крупного калибра (множественные) 4

б) капилляры единичные 1

капилляры множественные 2

в) артериолы 3

4) Сдвиг соотношения форменных элементов крови и плазмы в сторону

плазмы

а) в мелких венулах, посткапиллярах и некоторых капиллярах 1

б) во всех венулах, посткапиллярах и некоторых 2

капиллярах 3

в) во всех венулах, посткапиллярах и прекапиллярах 4

г) во всех сосудах (и артериолах) 5

д) капилляры содержащие только плазму крови

II Периваскулярные изменения

Кровоизлияния

а) единичные 1

б) множественные 2

III Количество функционирующих капилляров

1) нормальное 0

2) умеренно уменьшенное 1

3) резко уменьшенное 2

4) заиустевание 3

IV Артериоло-венулярные соотношения (А/В) диаметров сосудов

1) "А 1/3 0

2) 'А, 1/1 1

Гистохимические методы исследования. После секции кусочки печени, почек, селезенки и лимфатических узлов не фиксировали, а сразу помещали в холодильную камеру криостата МК-25М с температурой (-25°С), где изготовляли срезы толщиной 8 мкм В последующем на них определяли активность окислительно-восстановительных и гидролитических ферментов, в частности, связанных с обменом жирных кислот - глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (Гл-З-ФДГ), гликолизом - лактатдегидрогеназы (ЛДГ), циклом трикарбоновых кислот - сукцинатдегидрогеназы (СДГ), пентозофосфатным шунтом - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ), с транспортом электронов в дыхательной цепи -никотинамидадениндинуклеотид восстановленной дегидрогеназы (НАДН-ДГ). При постановке реакций применяли прописи, приведенные в классических руководствах Э.Пирса (1962), М.Берстона (1965), РЛилли (1969) и Х.Луппа (1980).

Оценка результатов энзимогистохимических реакций проводилась по четырех - балльной шкале на пяти уровнях. 0 - 0,25 - отрицательная, 0,25 -1,5 - низкая, 1,5 - 2,5 - умеренная, 2,5 - 3,5 - положительная, 3,5 - 4,0 - резко положительная. Такой способ оценки правомочен и использовался в работах Г.Ф.Журавлевой и соавт. (1972), Р.О.Г.Наупое, О О^Нпо (1983) и другими.

Морфологические методы исследования. По окончании эксперимента иссекали кусочки печени, почек, селезенки и лимфоузлов Сразу после секции материал помещали в 10% забуференный водный раствор нейтрального формалина. Общая фиксация продолжалась 72-96 часов, затем кусочки тканей заключали в парафин Для обзорного просмотра производили окрашивание срезов, приготовленных на санном микротоме МС-2, гематоксилин-эозином. Толщина срезов составляла 7 мкм.

Для электронно-микроскопических исследований кусочки тканей органов сразу после забора фиксировали в 2,5% растворе глютаральдегида с последующей дофиксацией в 1% растворе четырехокиси осмия, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заключали в аралдит (МШошп£, 1961) Ультратонкие срезы изготовляли на ультратоме фирмы ЬКВ и контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца (КеуИоИз, 1963) Материал просматривали в электронном микроскопе ЭМВ-ЮОА.

Статистические методы исследования. Полученные в ходе работы данные обрабатывали на ЭВМ с использованием пакета программ МЕБвТ. В основу алгоритма программы был положен критерий Стьюдента Использовались также непараметрические методы анализа с привлечением критерия Уилкоксона Различие считалось достоверным при р<0,05.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Влияние эндотрахеального эфирно-кислородного наркоза на микроциркуляцию, метаболизм и структуру печени, почек, селезенки и брыжеечных лимфоузлов

В результате проведенных исследований установлено, что 3-х часовой эндотрахеальный эфирно-кислородный наркоз у собак не вызывает нарушений в микроциркуляторном русле печени, почек, селезенки и брыжеечных лимфоузлах, и не оказывает повреждающего действия на их структуру. Данной морфологической картине соответствовало определенное в тканях количество субстратов углеводной природы и адениловых нуклеотидов, сбалансированно умеренная и высокая активность окислительно-восстановительных ферментов (табл. 3-6 , рис. 1-6).

3.2. Изменения гемодинамики, гемомикро циркуля ции, метаболизма и структуры печени, почек, селезенки и лимфатических узлов при озонированном ИК

Период проведения ИК характеризуется стойкой гипотонией, повышением тонуса периферических венозных сосудов и ОПСС. В постперфузионном периоде АД повышается, а ПВД снижается (рис.1).

Ректально-мышечный температурный градиент (РМТГ, отражающий микроциркуляцию) достоверно возрастает в период согревания животных и остается повышенным в постперфузионном периоде (ПП), по сравнению с исходным уровнем, что свидетельствует о формировании феномена централизации кровообращения (рис 1).

Балльная оценка микрогемоциркуляции в брыжейке тонкой кишки в исходном состоянии составляла 4,5 балла. В процессе озонированного ИК уже через 30 минут перфузии она достоверно увеличивается до 7,3 балла и через 3 ч перфузии составляет 15,8 балла (рис.1). В ПП балльная оценка микроциркуляции уменьшается, но при этом превышает в 1,9 раза ее значения в исходном состоянии. Это свидетельствует о развитии нарушений микроциркуляции в брыжейке тонкой кишки во время ИК и сохранении их в ПП Расстройства микроциркуляции через Зч ИК проявляются умеренно замедленным кровотоком в мелких венулах и некоторых капиллярах во всех наблюдениях, вплоть до стаза и ретроградного кровотока в единичных венулах и капиллярах. Уменьшается количество функционирующих капилляров, появляются капилляры, содержащие только плазму. Агрегация эритроцитов и нарушение соотношения форменных элементов крови и плазмы определяется в капиллярах, венулах крупного и мелкого калибра. Соотношение диаметров А/В в большинстве опытов равняется 1/3.

Анализ вышепредставленных данных свидетельствует, что озонированное ИК сопровождается выраженной гипотонией, несмотря на высокую объемную скорость перфузии, централизацией 1фовообращения и нарушениями микроциркуляции в брыжейке тонкой кишки. Выявленные изменения, но в меньшей степени выраженные, сохраняются и в ПП.

Через 3 часа озонированного ИК в микроциркуляторном русле печени выявлялись сладжи эритроцитов в третьей части сосудов, мелкоточечные диапедезные кровоизлияния по ходу перипортальных трактов, интерстициальный и периваскулярный отек, треть митохондрий в эндотелиоцитах имела деформированные кристы, канальцы саркоплазматического ретикулума были расширены.

Анализ окислительно-восстановительных ферментов в ткани печени выявил снижение активности всех исследуемых ферментов, за исключением Гл-З-ФДГ относительно интактных животных. Активность ЛДГ уменьшилась достоверно (рис. 3).

Изучение содержания углеводных субстратов показало достоверное возрастание количества лактата, сохранение гликогена, глюкозы, гл-6-фосфата и пирувата в ткани печени на уровне интактных собак (табл 3).

Содержание АТФ и АДФ достоверно уменьшалось через 3 ч озонированного ИК, а количество АМФ незначительно возрастало (табл 3)

Итак, исследование окислительно-восстановительных ферментов, содержания углеводных субстратов и высокоэнергетических фосфатов в печени показало, что нарушения микроциркуляции при озонированном ИК вызывали ряд метаболических эффектов в органе, снижение активности лактатдегидрогеназы и накопление лактата; уменьшение энергетического потенциала гепатоцитов

Вышеуказанная метаболическая перестройка вызывала изменения в паренхиме печени. Балочная структура гепатоцитов сохранялась, но пространства между балками были расширены за счет отека В гепатоцитах выявлялась гидропическая дистрофия. Целостность плазматической мембраны, кариолеммы, а также мембран митохондрий и СПР были не нарушены, но наблюдалась деструкция микроворсинок плазматической мембраны, третья часть митохондрий в гепатоцитах имела деформированные, укороченные или дезориентированные кристы и просветление матрикса, определялись расширение канальцев эндоплазматического ретикулума, извилистость ядерных контуров и маргинальное расположение хроматина в части печеночных клеток.

Через 2 ч постперфузионного периода после озонированного ИК в ткани печени сохранялись нарушения в мшфоциркуляторном русле, но они имели менее выраженный характер, по сравнению с предшествующим этапом исследования. Сладжирование эритроцитов определялось в четвертой части сосудов, уменьшился интерстициальный и периваскулярный отек, реже встречались мелкоточечные диапедезные кровоизлияния.

Активность ЛДГ восстановилась до уровня интактных животных. Активность других ферментов не отличалась от таковой, как на предшествующем этапе исследования, так и у интактных животных (рис 3).

Количество гликогена, глюкозы, гл-6-фосфата, пирувата, АТФ, АДФ и АМФ в ткани печени достоверно не отличалось от таковых у интактных собак и у животных на предшествующем этапе исследования Исключение

составило лишь достоверное уменьшение содержания лактата в ткани печени относительно этапа искусственного кровообращения (табл. 3)

В гепатоцитах сохранялась гидропическая дистрофия по периферии печеночных ацинусов, встречалось большое количество печеночных клеток с зернистой цитоплазмой и ядром с маргинальным расположением хроматина, часть митохондрий оставалась с деформированными кристами и просветленным матриксом, сохранялось расширение канальцев СПР, но отмечалось уменьшение их диаметра.

При микроскопическом исследовании в ткани почки через 3 часа озонированного ИК были выявлены нарушения микроциркуляции: мелкоточечные кровоизлияния на границе корковой и мозговой зоны, сладжирование эритроцитов в части сосудов микроциркуляторного русла, отек базальной мембраны эндотелия клубочков с явлениями нарушения ее проницаемости, ведущими к появлению эритроцитов в просвете капсулы Шумлянского-Боумена и части канальцев.

Вследствие ухудшения кровоснабжения изменяются метаболические процессы: происходит достоверное повышение активности ЛДГ во всех зонах и достоверное снижение активности Гл-6-ФДГ, НАДН-ДГ в канальцах корковой зоны, а СДГ в канальцах корковой и мозговой зон почки (рис. 4).

Достоверно увеличилось количество гликогена, глюкозы и лактата, а содержание адениловых нуклеотидов снижалось (табл.4). Такая направленность изменений активности ферментов, содержания углеводных субстратов и адениловых нуклеотидов свидетельствует об интенсификации гликолиза, снижении активности пентозофосфатного шунта, цикла Кребса, дыхательной цепи и повышении процессов глюконеогенеза в нефроцитах.

Вышеуказанные изменения метаболизма приводили к структурным нарушениям в ткани почки. В эпителиальных клетках извитых канальцев выявлялась зернистость цитоплазмы Просвет их в большинстве случаев был свободен, в части канальцев отмечалось перекрытие его отекшим эпителием В эпителиальных клетках проксимальных и дистальных канальцев определялись: отек ворсинок щеточной каемки и вакуолизация его цитоплазмы, наличие как нормальных митохондрий, так и находящихся в состоянии гиперфункции (набухших, с увеличенными и деформированными кристами, зонами просветления матрикса)

Через 2 часа постперфузионного периода после озонированного ИК в микроциркуляторном русле почек встречались сладжированные эритроциты. Со стороны сосудов среднего и крупного калибра имелись умеренные явления полнокровия. Сохранялась граница между корковым и мозговым веществом за счет большего полнокровия мозговой зоны В ней обнаруживались мелкоточечные кровоизлияния. Клубочки были с явлениями умеренного отека. В части клубочков в просвете капсулы Шумлянского-Боумена, а также в некоторых канальцах мозговой зоны выявлялись единичные эритроциты. В эндотелиоцитах капилляров клубочков

встречалось небольшое количество митохондрий с зонами просветления матрикса и деформацией крист.

В постперфузионном периоде достоверное снижение активности ЛДГ в канальцах корковой и мозговой зонах, повышение активности Гл-6-ФДГ, СДГ и НАДН-ДГ в канальцах корковой зоны и СДГ в мозговой зоне (рис. 4), уменьшение гликогена и глюкозы при возрастании содержания высокоэнергетических фосфатов в нефроцитах, по сравнению с этапом озонированного ИК, свидетельствует о снижении активности гликолиза, восстановлении процессов утилизации глюкозы в пентозофосфатном шунте, цикле Кребса и дыхательной цепи, а также об уменьшении интенсивности глюконеогенеза в ткани почки (табл. 4).

Положительная направленность метаболических сдвигов полностью не предупреждает развитие гипоксических изменений в нефроцитах В эпителии извитых канальцев определялась зернистость. В эпителиальных клетках проксимальных канальцев наряду с нормальными митохондриями продолжали встречаться находящиеся в состоянии гиперфункции Сохранялся отек щеточной каемки эпителия канальцев Определялись вакуоли и электронно-плотные гранулы в цитоплазме клеток проксимальных и дистальных канальцев.

При микроскопическом исследовании ткани селезенки через 3 ч озонированного ИК были выявлены микротромбы, сладжи эритроцитов в микроциркуляторном русле, плазматическое пропитывание сосудистых стенок и расширение периваскулярных пространств. Определялось мукоидное набухание коллагеновых волокон в трабекулах, наиболее выражено оно было в фасциальных влагалищах внутритрабекулярных сосудов и стенках артериол. Обнаружен отек в эндотелиальных клетках капиллярной сети фолликулов и синусов, разрыхление базальной и люминальной мембран, микроклазматоз эндотелиоцитов Выявлялись единичные митохондрии с частичным разрушением крист и опустошением матрикса, расширение цистерн эндоплазматического ретикулума, возрастала гидратация, проявляющаяся в уменьшении электронной плотности кариоплазмы и протоплазмы клеток. Кариолемма отдельных участков эндотелиальных клеток имела нечеткие границы.

Развившиеся микроциркуляторные нарушения в селезенке в процессе озонированного ИК, вызвали изменение метаболизма спленоцитов Уменьшилась активность всех исследуемых ферментов, причем для ЛДГ в белой пульпе и СДГ в красной пульпе выявленные различия были достоверны (рис. 5). При анализе содержания углеводных субстратов установлено увеличение количества глюкозы, глюкозо-6-фосфата, и, особенно, лактата. Количество АТФ и АДФ достоверно снижалось, а АМФ незначительно возросло (табл. 5). Снижение активности всех изучаемых ферментов и намечающаяся тенденция к накоплению субстратов углеводного обмена при уменьшении содержания высокоэнергетических фосфатов в

ткани селезенки, по сравнению с интактными животными, свидетельствуют о снижении энергетического потенциала спленоцитов и недостаточном использовании клетками глюкозы и лактата в метаболических процессах при озонированном искусственном кровообращении.

Изменения микроциркуляции и метаболизма явились причинами нарушения структуры селезенки Выявлялись отек во внутреннем слое капсулы, мукоидное набухание коллагеновых волокон трабекул, повышенное кровенаполнение красной пульпы и сниженная плотность расположения лимфоцитов в фолликулах белой пульпы, гидропическая дистрофия, гипергидратация в лимфоидных клетках и спленоцитах, деформация органелл (разрушение крист митохондрий, опустошение матрикса, расширение цистерн эндоплазматического ретикулума).

Восстановление самостоятельного кровообращения в организме животных приводит к уменьшению степени выраженности микроциркуляторных расстройств в ткани селезенки через 2 ч постперфузионного периода. При этом сохраняются сладжи в венулах, единичные микротромбы, расширение цистерн СПР, отечность базальной и люминальной мембран эндотелиоцитов.

В постперфузионном периоде уменьшение количества глюкозы, глюкозо-6-фосфата и, особенно, лактата, по сравнению с предшествующим этапом исследования, и приближение их значений к уровню интактных животных свидетельствует об активации процессов аэробного окисления глюкозы. Подтверждением нормализации окислительно-восстановительных процессов является и достоверное увеличение активности ферментов Гл-6-ФДГ и СДГ в белой и красной пульпе и ДДГ в белой пульпе (рис. 5) Следствием такой направленности окислительно-восстановительных процессов является восстановление содержания АТФ и АДФ в ткани селезенки через 2 часа ПП после 3-х часового озонированного ИК (табл. 5),

Улучшение гемомикроциркуляции и клеточного метаболизма в селезенке в постперфузионном периоде не предупреждает структурные нарушения в органе. В капсуле селезенки определялись отечность внутреннего слоя, более выраженная в зонах отхождения трабекул, последние были также с признаками отека Выявлялись мукоидное набухание коллагеновых волокон, разрушения части крист в митохондриях паренхиматозных и эндотелиальных клеток, увеличение гипергидратации в них, явления микроклазматоза в эндотелии капилляров и расширение сети эндоплазматического ретикулума в лимфоцитах, герминобластах и плазматических клетках.

При озонированном ИК в брыжеечных лимфоузлах выявлялись нарушения микроциркуляции В сосудах микроциркуляторного русла появлялись стазы, сладжи и единичные микротромбы. Развивался отек эндотелиальных клеток и периваскулярных пространств. Появлялись зоны

плазматического пропитывания в стенках артериол. Треть митохондрий были с деформированными кристами и сниженной электронной плотности матриксом. Отмечались явления гидратации, проявляющиеся в уменьшении электронной плотности протоплазмы. Наблюдалась конденсация хроматина в глыбки в ядрах эндотелиоцитов, выражено было расширение цистерн саркоплазматического ретикулума. В протоплазме эндотелиальных клеток увеличивалось количество пиноцитозных пузырьков. Люминальная мембрана была несколько набухшая, в отдельных случаях определялись явления микроклазматоза

Соответственно нарушениям микроциркуляции определялось достоверное снижение активности всех изучаемых ферментов в ткани лимфоузлов: ЛДГ, Гл-6-ФДГ и СДГ, за исключением НАДН-ДГ (рис 6). Выявлялось достоверное увеличение количества глюкозы и лактата, наблюдалась тенденция возрастания Гл-6-фосфата Количество АТФ и АДФ достоверно уменьшалось, а АМФ возрастало по сравнению с интактными животными (табл. 6).

Такая направленность изменения активности ферментов, содержания углеводных субстратов и адениловых нуклеотидов убедительно свидетельствует о снижении окисления глюкозы в цикле Кребса и пентозофосфатном шунте, уменьшении синтеза высокоэнергетических фосфатов и накоплении лактата в лимфоузлах.

В структуре паренхиматозного компонента лимфоузлов в светлых центрах фолликулов уменьшалось количество лимфобластов и плазматических клеток, развивался отек в межфолликулярном пространстве, корковом плато, паракортикальной зоне и мякотных тяжах. Возникало мукоидное набухание волокнистого компонента стромы. В лимфоидных клетках происходили изменения ультраструктуры: часть митохондрий выявлялась с деформированными кристами и сниженной электронной плотности матриксом, уменьшалась электронная плотность протоплазмы, определялась конденсация хроматина в глыбки в ядрах в четвертой части лимфоцитов и расширение цистерн саркоплазматического ретикулума по сравнению с интактными животными.

Через 2 ч постперфузионного периода в микроциркуляторном русле лимфоузлов в мелких сосудах определялись сладжи, сохранялось плазматическое пропитывание стенок артериол. В единичных капиллярах встречались небольшие агрегации эритроцитов. В эндотелиоцитах сохранялось увеличение диаметра цистерн саркоплазматического ретикулума Базальные и люминальные мембраны выявлялись с явлениями умеренного отека.

В постперфузионном периоде, по сравнению с предшествующим этапом исследования, в ткани лимфоузлов возрастает активность всех исследуемых ферментов (достоверность выявлена по ЛДГ и СДГ), активизируются процессы утилизации глюкозы, глюкозо-6-фосфата и лактата, количество пирувата остается на прежнем уровне и наблюдается

тенденция к увеличению содержания макроэргических фосфатов (АТФ, АДФ) и достоверно снижается АМФ (рис. 6, табл. 6).

Несмотря на положительную направленность изменения метаболизма в паренхиматозных клетках лимфоузлов, в клеточном составе светлых центров увеличивалось число лимфобластов и плазматических клеток. Межфолликулярные пространства, корковое плато и паракортикальная зоны были заполнены лимфоцитами, отек этих зон лимфоузлов сохранялся. Дистрофические изменения волокнистого компонента стромы лимфоузлов проявлялись в мукоидном набухании коллагеновых волокон в хиларной зоне. Сохраняются повреждения в митохондриях в виде деформации крист и просветления матрикса, расширения канальцев СПР, конденсация хроматина в ядрах лимфоидных клеток

Подводя итог вышесказанному, на основании анализа результатов биохимических, морфофункциональных и гистохимических исследований, можно заключить, что оксигенадия перфузата озонированным кислородом в процессе ИК не предупреждает в полной мере гипоксические нарушения микроциркуляции, метаболизма и структуры печени, почек, селезенки и лимфоузлов. Эти нарушения сохраняются в постперфузионном периоде и сопровождаются перенапряжением компенсаторных механизмов в эндотелиоцитах, паренхиматозных и стромальных клетках вышеперечисленных органов, что может быть причиной их неадекватного функционирования В этой связи своевременное проведение дополнительных противопшоксических мероприятий при кардиохирургических вмешательствах в условиях озонированного ИК, позволят уменьшить число случаев острой печеночно-почечной недостаточности и вторичного иммунодефицита в послеоперационном периоде. С этой целью мы изучили противогипоксическое действие гутимина на гемодинамику, мюфоциркуляцию в брыжейке тонкой кишки, метаболические и структурные изменения в печени, почках, селезенке и лимфоузлах у собак при озонированном искусственном кровообращении и постперфузионном периоде.

3.3. Влияние гутимина на гемодинамику, микроциркуляцию, структуру и метаболизм печени, почек, селезенки и лимфатических узлов при озонированном искусственном кровообращении

Установлено, что у животных с введением гутимина при озонированном ИК в большей степени была выражена гипотония, чем в серии с озонированием перфузата, несмотря на одинаковые объемные скорости перфузии. Такая направленность системного артериального давления (АД), спустя час перфузии, очевидно, обусловлена сосудорасширяющим действием гутимина. Этот тезис подтверждают и, определяемые во время ИК на более низком уровне, общее периферическое сопротивление сосудов, периферическое венозное давление и ректально-мышечный температурный градиент (рис. 1; рис. 2).

№ \ ; "Г. и Й6

Ф* .'К -- * ^

4 г ^Х в А

* ¿V

Ч и % 5 Ш: ' - V ПВД ¿"Г : вЯг Ж:

- ? 2 -5'"*

1 -♦-озонированное ИК —озонированное ИК+гуташн

к _ Едр гг. .' - "

Балльная оценка м нкроцаркуляци и

■ияян

оэомиромикое КК

иотфмамиое ИК с иедениец гриппа

По оси абсцисс - этапы исследования: I - исходный; 2 - перед ИК; 3, 4 и 5 — соответственно 1, 2 и 3 ч ИК, 6 — 2 ч постперфузионного периода;

в - достоверность различия показателей на одинаковых этапах исследования в сравниваемых сериях.

Рис. 1, Изменение АД, ПВД, РМТГ к балльной оценки мокро циркуляции в брыжейке тонкой кишки в динамике ИК и постперфуэнонном периоде.

В исходном состоянии микрогемоциркуляция в брыжейке тонкой кишки у животных с введением гутимина не отличалась от таковой в серии с озонированным ИК и составляла 4,5 балла. Через 1 час перфузии у животных опытной серии балльная оценка достигала максимального значения и составляла 10,2 балла, в то время как при озонированном ИК на данном этапе контрольного времени она выявлялась достоверно выше (14,8 балла) и продолжала возрас тать к концу ИК, определяясь на уровне ] 5,8 баллов.

Применение гутимина при озонированном ИК вызывает дилатацию артериолярных сегментов сферы М1Д в брыжейке тонкой кишки,

восстанавливает скорость кровотока во всех сосудах, в большей степени, чем при озонированном ИК, сохраняет количество функционирующих капилляров, предупреждает агрегацию эритроцитов и явления стаза в мелких венулах и капиллярах, особенно, на высоте гипотермической перфузии.

По оси абсцисс -этапы исследования: I, 2, 3 и 4 соответственно 30, 60, 120 и 180 мин искусственного кро вообраще ния в - достоверность различия показателей на одинаковых этапах исследования в сравниваемых сериях.

Рис. 2. Изменение ОПСС у собак в динамике искусственного кровообращения.

Через 3 ч ИК с введением гутимина, по сравнению с озонированным ИК, в печени в эндотелиальных клетках синусов и сосудов микроциркуляторного русла изменений не выявлялось, меньше встречалось кровоизлияний по ходу пер «портальных трактов. Наряду с этим, определялись явления интерстициального и периваскулярного отека. Сосуды среднего и крупного калибра были более полнокровными.

В печеки отмечалось достоверное снижение активности ЛДГ, Г-6-ФДГ, СДГ и Гл-З-ФДГ. Активность НАДН-ДГ не изменялась (рис. 3).

ЛДГ Dve-ФДГ СДГ НАДНДГ rivM>nr

И интвхтные животные ■ 3 ч озонированного ИК

■ 2 ч ПП после озонированного ИК И 3 ч озонирован нота ИК+гугимин

• 2ч ПП посте оютироааниота ИК+сутш™

Рис. 3. Активность ферментов печени на этапах исследования.

Примечание: а — достоверность различия показателей по сравнению с таковыми у интактных животных; б - достоверность различия показателей в сериях на различных этапах исследования; в - достоверность различия показателей в сравниваемых сериях на аналогичных этапах исследования.

В углеводном обмене ткани печени выявлено достоверное снижение количества гликогена, лактата и пирувата Изменений в содержании остальных исследуемых углеводных субстратов не установлено. Гугимин достоверно увеличивал количество АТФ и АМФ и незначительно повышал содержание АДФ в ткани печени (табл. 3).

Таблица 3

Изменение содержания углеводных субстратов и макроэргических фосфатов в печени (М±т)

Показатель (мкм/г ткани) Интакт- ные животные п 3 часа иеху кровооб сственного ращения 2 часа постперфузионного периода

Озонированное ИК п Озониро ванное ИК+гу-тимин п Озонированное ИК п Озонированное ИК+гу-тимин п

Гликоген 38,670± 4,399 8 38,583± 1,663 12 33,378± 2,664' 10 34,783± 3,761 11 37,245± 5,263 14

Глюкоза 7,546± 0,931 8 8,658± 0,893 12 9,299± 0,469 9 8,763± 2,744 11 7,844± 1,835 14

Г-6-фосфат 0,474± 0,068 8 0,474± 0,048 12 0,486± 0,037 9 0,452± 0,056 11 0,443± 0,046 14

Лактаг 5,188± 0,467 8 6,798± 0,349а 11 4,856± 0,675 е 9 5,375± 0,447 6 11 5,201± 0,546 14

Пируват 0,146± 0,018 8 0,138± 0,015 И 0,102± 0,012м 10 0,140± 0,032 11 0,145± 0,038 14

АТФ 1,437± 0,118 8 1,117± 0,1153 12 1,537+ 0,174" 9 1,354± 0,281 И 1,510± 0,336 14

АДФ 1,666± 0,250 8 1,070± 0,122 8 12 1,280± 0,158 8 1,410+ 0,338 11 1,612± 0,289 14

АМФ 1Д61± 0,111 8 1,296± 0,170 12 1,648± 0,168м 8 1,243± 0,212 И 1,311± 0,455 14

Примечание: а - достоверность различия показателей по сравнению с таковыми у штатных животных; б - достоверность различия показателей в сериях на различных этапах исследования, в - достоверность различия показателей сравниваемых серий на аналогичных этапах исследования; п - количество наблюдений

Сопоставляя направленность изменений активности ферментов, углеводных субстратов и адениловых нуклеотидов, можно заключить, что гутимин во время озонирования перфузата поддерживает, усиливает и включает новые приспособительные метаболические реакции в гепатоцитах. интенсифицирует процессы утилизации лактата и пирувата по пути окислительного фосфорилирования и, вследствие этого, нормализует уровень молочной кислоты; увеличивает энергообеспечение печеночных клеток; замедляет процессы утилизации печенью жирных кислот и глицерола

Анализ световой и электронной микроскопии печени выявил сохранение дольчатой и балочной структуры органа; в гепатоцитах, расположенных по периферии ацинуса, определялась только зернистость цитоплазмы, имеющая полностью обратимый характер Ядра печеночных клеток имели правильную округлую или эллипсовидную форму.

Обнаруживались гепатоциты в состоянии митоза, а также и двухъядерные юс представители.

В цитоплазме гепатоцитов выявлялись гранулы гликогена, определялось большое число митохондрий, содержащих плотно упакованные кристы Матрикс их был средней электронной плотности, не исчезали внутримитохондриальные гранулы Зарегистрирована гиперплазия органелл, что свидетельствовало о повышении их функциональной активности Соотношение элементов гладкого и гранулярного эндоплазматического ретикулума не изменялось. В гепатоцитах определялось большое количество свободных и связанных с мембранами полирибосом. При исследовании поверхности плазматической мембраны клеток, обращенной к синусоидам, выявлялись многочисленные микроворсинки, проникающие в пространство Диссе

Через 2 ч постперфузионного периода после ИК с введением гутимина в ткани печени большинство сосудов микроциркуляторного русла были равномерно заполнены эритроцитами, средние и крупные сосуды были не изменены. Кровоизлияния по ходу перипортальных трактов не определялись. Эндотелий печеночных синусоидов имел вид, сходный с таковым у интактных животных.

Активность исследуемых ферментов, содержание углеводных субстратов и адениловых нуклеотидов в ткани печени не отличались от таковой на аналогичном этапе исследования после озонированного ИК и интактных животных (рис 3)

Одинаковый уровень энергообеспечения гепатоцитов как и при ИК в постперфузионном периоде достигается не только функционированием окислительного фосфорилирования, но и активацией пентозофосфатного шунта, процессов окисления глицерола и жирных кислот, что предупреждает развитие гидропической дистрофии, расширение канальцев и цистерн саркоплазматического ретикулума, отека мшфоворсинок плазматической мембраны, обращенных в пространство Диссе, увеличение количества клеток Купфера. Ядра гепатоцитов определяются с ровными контурами и равномерным распределением хроматина и лишь в отдельных случаях встречаются двухядерные гепатоциты и в состоянии митоза.

При мшфоскопическом исследовании почек через 3 ч ИК с введением гутимина изменений микроциркуляторного русла корковой зоны не установлено Кровоизлияний и явлений отека не зарегистрировано Отмечено сохранение нормальной ультраструктуры эндотелиоцитов капилляров клубочков. В единичных случаях обнаруживалось утолщение, набухание и разрыхление клубочковых базальных мембран.

Введение гутимина в период озонированного ИК вызывает достоверное уменьшение активности ЛДГ и тенденцию повышения Гл-6-ФДГ во всех отделах почечных нефронов, достоверное снижение активности СДГ в клубочках и увеличение в канальцах и мозговой зоне, достоверное возрастание активности НАДН-ДГ в канальцах. В клубочках и мозговой зоне

нефрона активность НАДН-ДГ определялась одинаковой. Обращает на себя внимание выравнивание активности ферментных ансамблей дыхательной цепи (СДГ и НАДН-ДГ) на фоне применения гутимина в корковой и мозговой зонах (рис. 4).

При исследовании субстратов углеводного обмена в почечной ткани установлено, что введение гутимина на фоне озонированного ИК вызывает достоверное возрастание содержания гликогена и глюкозы, как относительно животных с озонированным ИК, так и интактных Количество лактата достоверно уменьшилось, по сравнению с животными с озонированным ИК, и не отличалось от такового у интактных животных Содержание пирувата имело тенденцию к возрастанию, а глюкозо-6-фосфата к уменьшению, как по сравнению с животными с озонированием перфузата, так и интактными (табл. 4).

Содержание макроэргических соединений АТФ, АДФ и АМФ в почке на фоне действия гутимина не отличалось от такового у интактных животных. В то же время, количество АТФ было достоверно выше, а содержание АДФ и АМФ имело тенденцию к увеличению по сравнению с животными с озонированным ИК.

Сопоставляя направленность активности ферментов, содержания углеводных субстратов и адениловых нуклеотидов можно заключить, что введение гутимина на фоне озонированного ИК оказывает положительное влияние на метаболизм почек' восстанавливает нормальное соотношение активности различных участков дыхательной цепи и увеличивает синтез АТФ; активизирует пентозофосфатный путь окисления глюкозы; увеличивает активность процессов глюконеогенеза

Введение гутимина на фоне озонированного ИК в почках предупреждает развитие кровоизлияний на границе между корковой и мозговой зонами; спадение клубочков, повреждение митохондрий, расширение саркоплазматического ретикулума и формирование дистрофических изменений в эпителии извитых канальцев проксимальной и дистальной их части и петле Генле.

Через 2 ч постперфузионного периода после озонированного ИК с введением гутимина микроциркуляторное русло почек было равномерно заполнено эритроцитами без выраженного периваскулярного отека Сосуды среднего и крупного калибра были не изменены. Большинство клубочков выявлялось без признаков отека базальной мембраны. Клеточные ядра и органеллы эндотелия капилляров клубочков имели вид сходный с таковыми у интактных животных.

Активность всех исследуемых ферментов во всех отделах почечных нефронов не отличалась от таковой в этих же участках у интактных животных и у собак через 2 часа ПП после озонированного Ж. Исключение отмечалось лишь в достоверном уменьшении активности ЛДГ в клубочках относительно животных в ПП после озонированного ИК.

Корковая зона(клубочки)

ЛДГ Гп-^ФДГ сдг

Корковая зона (канальцы)

надн-дг

ЛДГ Пу$-ФДГ сдг

Мозговая зона

НАДНДГ

Баллы

Гл-6-ФДГ

В интактные животные

■ 2 ч ПП после озонированного ИК

В2ч ПП после озонированного И К+гугимии

СДГ КОД+ДГ

13 ч озонированного И К и 3 ч озонированного ИК+гутимин

Рис. 4. Активность ферментов почки на этапах исследования.

Примечание; а - достоверность различия показателей по сравнению с таковыми у интактных животных; б - достоверность различия показателей в сериях на различных этапах исследования; в — достоверность различия показателей в сравниваемых сериях на аналогичных этапах исследования.

Изменение содержания углеводных субстратов и макроэргических фосфатов в почках (М±т)

Таблица 4

Интакт

ные животные

3 часа искусственного кровообращения

Озонированное ИК

Озониро ванное ИК+гу-тимин

2 часа постперфузионного периода

Озонированное ИК

Озонированное ИК+гу-тимин

7,136± 1,627

29,606± 2,211а

35,653± 1,634®=°

22,571± 3,3458

15,235± 2,746^

4,647± 0,180

7,135± 0,337а

8,751± 0,564 °-в

5,974± 0,868

4,924± 0,7736

0,238± 0,044

0,209± 0,020

0,174± 0,019

0,247± 0,029

0,285± 0,054б

4,123± 0,293

4,769± 0,282а

4,051± 0,202'

4,721± 0,429а

4,436± 0,638

0,107± 0,007

0,113± 0,021

0,133± 0,015

0,125± 0,018

0,102± 0,007®

0,838± 0,089

0,597± 0,067а

0,909± 0,147°

0,788± 0,136

0,845± 0,141

1,280± 0,087

0,811± 0,120°

1,087± 0,141

U31± 0,074

1,322± 0,063®

1,959± 0,283

1,173± 0,099 "

1,473± 0,184

1,583± 0,425

1,876± 0,366

Примечание, а - достоверность различия показателей по сравнению с таковыми у интакгаых животных, б - достоверность различия показателей в сериях на различных этапах исследования, в - достоверность различия показателей сравниваемых серий на аналогичных этапах исследования, п - количество наблюдений.

Количество гликогена определялось достоверно меньше, а содержание глюкозы, глюкозо-6-фосфата, лактата, пирувата и адениловых нуклеотидов не отличалось от такового на аналогичном этапе исследования после озонированного ИК и интакгаых животных (табл. 4).

Благодаря равномерному кровоснабжению почечной ткани граница между корковым и мозговым веществом была не резко выражена. Микроскопически эпителиальные клетки извитых канальцев были не изменены. Просвет канальцев определялся свободным. Клубочки имели заполненные эритроцитами капиллярные петли, капсула Шумлянского-Боумена выявлялась без выраженных признаков отека.

Щеточная каемка эпителия канальцев имела четкие контуры. Уменьшалось количество вакуолей и электронноплотных гранул в цитоплазме клеток проксимальных и дистальных канальцев Митохондрии в них имели овальную и округлую форму с четкими плотно упакованными кристами.

Через 3 часа озонированного ИК с введением гутимина в сосудах микроциркуляторного русла селезенки редко определялись стазы и сладжи, микротромбы отсутствовали. В сосудистых стенках плазматического пропитывания не выявлялось, Периваскулярные пространства были не широкие и по своим размерам приближались к интактным животным. Состояние стенок фолликулярных артериол не изменялось. Минимальными определялись дистрофические изменения эндотелиальных клеток синусов, Назальная и люминальная мембраны эндотелия капилляров выявлялись с четкими границами без разрывов. Не определялся микроклазматоз. В меньшей степени, по сравнению с животными только с озонированием перфузата, отмечался отек эндотелиальных клеток капиллярной сети фолликулов и мукоидное набухание коллагеновых волокон фасциальных влагалищ внутрктр&бекупярных сосудов.

При исследовании окислительно-восстановительных ферментов в ткани селезенки, по сравнению с животными без введения гутимина, определялось достоверное увеличение активности ЛДГ, Гя-6-ФДГ и СДГ в красной и белой пульпе. Активность НАДН-ДГ в белой пульпе и красной пульпе достоверно не изменялась (рис. 5).

Белая пульпа

ПДГ Глвлдг СДГ НАДН-ДГ

Красная пульпа

ЛДГ Гл-в-ФДГ СДГ НАДН-ДГ

И кчльст^ыв Ш Л ■-< озонированного К

■ 2чПП пиую озонированного ПК Я Зч озонированного УЖ+гутимин

0 2 ч ПП после озонированного ИК+гутимин

Рис. 5. Активность ферментов селезенки на этапах исследования.

Примечание: а - достоверность различия показателей по сравнению с таковыми у интактных животных; б - достоверность различия показателей в сериях на различных этапах исследования; в - достоверность различия показателей в сравниваемых сериях на аналогичных этапах исследования.

Анализ содержания углеводных субстратов выявил достоверное уменьшение количества глюкозо-6-фосфата и лактата. Содержание глюкозы и пирувата также уменьшалось, но недостоверно. В спектре адениловых нуклеотидов определялось достоверное увеличение количества АТФ и тенденция возрастания АДФ и АМФ относительно животных только с озонированием перфузата (табл 5)

Таблица 5

Изменение содержания углеводных субстратов и макроэргических фосфатов в селезенке (М±т)

Показатель (мкм/г ткани)

Интакт ныежи вотные

3 часа искусственного кровообращения

Озонированное Ж

Озонированное Ж + гути-мин

2 часа постперфузионного периода

Озонированное Ж

Озонированное Ж + гути-мин

Глюкоза

4,761± 2,364

6,285± 1,917

5,831± 2,187

5,474± 0,986

4,910± 1,184

Г-6-фосфаг

0,258± 0,063

0,305± 0,042

0,204± 0,039"

0,243+ 0,073

0,238± 0,049

Лактат

6,322± 0,256

7,925± 0,328"

5,522± 0,558й

6,547± 0,2486

б,284± 0,744

Пируват

0,115± 0,038

0,116± 0,051

0,109± 0,064

0Д18± 0,038

0,117± 0,028

АТФ

0,681± 0,112

0,421+ 0,114"

0,752± 0,058в

0,674± 0,133е

0,691± 0,108

АДФ

0,932± 0,184

0,728+ 0,104

0,791± 0,134

0,857± 0,122

0,886± 0,133

АМФ

0,564± 0,078

0,692± 0,114

0,776± 0,089а

0,659± 0,104

0,637± 0,082

Примечание, а - достоверность различия показателей по сравнению с таковыми у интактных животных, б - достоверность различия показателей в сериях на различных этапах исследования, в - достоверность различия показателей сравниваемых серий на аналогичных этапах исследования; п - количество наблюдений

Таким образом, в ткани селезенки через 3 часа озонированного ИК с введением хугимина отмечались следующие изменения метаболизма: активация пентозофосфатного пути окисления глюкозы и цикла Кребса; поддержание на высоком уровне количества высокоэнергетических фосфатов и уменьшение количества лактата.

При микроскопическом исследовании селезенки, по сравнению с животными только с озонированием перфузата, выявлялся менее выраженный отек капсулы и трабекул, явления гидратации и расширения цистерн саркоплазматического ретикулума, реже отмечалась агрегация хроматина по периферии ядра лимфоцитов, количество герминобластов и плазматических клеток определялось увеличенным, лимфоидные фолликулы

в белой пульпе имели четкие контуры, плотность расположения лимфоцитов в них была сравнима с таковой у интактных животных Большинство митохондрий в лимфоидных клетках выявлялись с сохранными кристами и матриксом умеренной электронной плотности.

Через 2 ч постперфузионного периода после ИК с введением гутимша наблюдалось умеренное равномерное кровенаполнение красной пульпы, отсутствие плазматического пропитывания стенок артериол и периваскулярного отека. В сосудах микроциркуляторного русла не обнаруживались сладжи и микротромбы. Эндотелий капиллярной стенки фолликулов и эндотелий синусов выявлялся без признаков отека и вакуолизации цитоплазмы. В эндотелиоцитах отмечалось умеренное количество пиноцитозных пузырьков, базальная и люминальная мембраны имели четкие границы, периваскулярные пространства были не расширены

Активность ЛДГ, Гл-6-ФДГ, СДГ и НАДН-ДГ в ткани селезенки поддерживается на уровне интактных животных и не отличается от их значений в сериях через 3 часа озонированного ИК и введения гутимина и через 2 часа постперфузионного периода после озонированного ИК (рис 5).

Количество углеводных субстратов (глюкозы, глнжозо-6-фосфата, лактата и пирувата) и адениловых нуклеотидов (АТФ, АДФ и АМФ) достоверно не отличалось от такового у интактных собак, у животных через 3 часа озонированного ИК с введением гутимина и в серии через 2 часа ПП после озонированного ИК (табл. 5).

Применение гутимина на фоне озонированного ИК предупреждает в постлерфузионном периоде развитие отека белой пульпы, капсулы и трабекул, гидропической дистрофии паренхиматозных клеток. Митохондрии имеют четкие контуры и плотно упакованные кристы, умеренной электронной плотности матрикс, цистерны эндоплазматического ретикулума не расширены

Через 3 часа озонированного ИК с введением гутимина в сосудах микроциркуляторного русла лимфоузлов, по сравнению с серией, в которой только озонировался перфузат, снижалось количество стазов и сладжей, микротромбы не определялись, в меньшей степени выявлялся отек эндотелия и периваскулярных пространств. В стенках артериол не определялось плазматического пропитывания и мукоидного набухания волокнистого компонента стромы. Базальная и люминальная мембраны эндотелия капилляров имели четкие контуры, не развивались микроклазматоз и агрегация эритроцитов в сосудах микроциркулярного русла

При изучении окислительно-восстановительных ферментов в лимфоузлах выявлялось достоверное увеличение активности Гл-6-ФДГ и СДГ, активность ЛДГ и НАДН-ДГ не изменялась по сравнению с озонированием перфузата. На данном этапе контрольного времени активность Гл-6-ФДГ, СДГ и НАДН-ДГ не отличалась от таковой у интактных животных, ЛДГ определялось уменьшенной, как и у собак с озонированием перфузата (рис. 6).

Баллы

лдг гп-&фдг сдг иадн-дг

И интяктные животные ЯЗч озонированного ИК

■ 2 ч ГП посла озонированного ИК а 3 ч озонированного ИК+гутимин

Я 2 ч ПП riocne озонированного ИК+гутимин

Рис. 6. Активность ферментов в брыжеечных лимфоузлах на этапах исследования.

Примечание: а - достоверность различия показателей по сравнению с таковыми у иятактных животных; б - достоверность различия показателей в сериях на различных этапах исследования; в - достоверность различия показателей в сравниваемых сериях на аналогичных этапах исследования.

В брыжеечных лимфоузлах отмечалось достоверное уменьшение количества субстратов углеводной природы (глюкозы, глюкозо-6-фосфата и лактата), по сравнению с озонированием перфузата, Количество пирувата определялось одинаковым в сравниваемых сериях. Содержание АТФ достоверно увеличивалось, АДФ и АМФ несколько возрастало по сравнению с озонированием перфузата (табл, 6),

Анализируя направленность изменений содержания углеводных субстратов, адениловых нуклеотидов и активности окислителъно-восстановительных ферментов, логично заключить, что введение гутимина на фоне озонированного ИК вызывает метаболическую перестройку в ткани брыжеечных лимфоузлов, которая проявляется в: восстановлении активности пентозо-фосфатного шунта; нормализации активности СДГ и, вследствие этого, восстановлении равномерного потока электронов по дыхательной цепи; уменьшение количества лактата и увеличении синтеза АТФ.

Через 3 ч ИК с введением гутимина в лимфоузлах выявлялась высокая митотическая активность клеток светлых центров фолликулов, в меньшей степени определялся отек межфолликулярных пространств, коркового плато, паракортикалькой зоны и мякотных тяжей по сравнению с озонированным ИК. В протоплазме лимфоидных клеток уменьшались зоны перинуклеарного отека. Хроматин в ядрах лимфоцитов не агрегировался в глыбки, ядерная мембрана имела четкие контуры.

Таблица б

Изменение содержания углеводных субстратов и макроэргических фосфатов в брыжеечных лимфатических узлах (М±т)_

Показатель (мкм/г ткани) Интакт ные животные п 3 ча к са иску ровооб сетвенного ращения 2 часа постперфузионного периода

Озонированное ИК я Озонированное ИК + гути-мин п Озонированное ИК а Озонированное ИК + гути-мин п

Глюкоза 4,583± 1,654 15 7,448± 1,993° 14 4,635± 1,2418 10 5,982± 1,873 И 5,164± 1,763 14

Г-6-фосфат 0,23б± 0,071 15 0,325± 0,044 13 0,215± 0,048в 10 0,288+ 0,057 11 0,242± 0,063 14

Лактат б,357± 0,453 15 7,665± 0,575° 14 6,155± 0,672в 10 7,183+ 0,686а И 6,857± 0,654 14

Пируват 0,122± 0,057 15 0,120± 0,081 14 0,114± 0,052 10 0,123± 0,075 11 0,124± 0,042 14

АТФ 0,568± 0,133 15 0,393+ 0,108а 14 0,601± 0,105° 10 0,531+ 0,283 11 0,542± 0,384 14

АДФ 0,846± 0,165 15 0,635+ 0,182а 14 0,665± 0,174 10 0,793± 0,354 11 0,818± 0,342 14

АМФ 0,553± 0,068 15 0,784± 0,075а 14 0,822± 0,115а 10 0,618± 0,034°'6 11 0,593± 0,062® 14

Примечание, а - достоверность различия показателей по сравнению с таковыми у интактных животных, б - достоверность различия показателей в сериях на различных этапах исследования; в - достоверность различия показателей сравниваемых серий на аналогичных этапах исследования, п - количество наблюдений

Через 2 ч постперфузионного периода после ИК с введением гутимина в лимфоузлах не встречались диапедезные кровоизлияния В сосудах микроциркуляторного русла отсутствовали стазы, сладжи и микротромбы, эндотелий имел уплощенную форму. Периваскулярные пространства были узкими В стенках артериол не выявлялось плазматического пропитывания.

Активность всех исследуемых ферментов на данном этапе контрольного времени достоверно не отличалась от таковой у интактных животных. Относительно аналогичного этапа исследования после озонированного ИК активность ЛДГ и СДГ определялась достоверно меньше, Гл-6-ФДГ достоверно больше, а НАДН-ДГ одинаковой (рис. 6)

При этом количество углеводных субстратов и адениловых нуклеотидов на данном этапе контрольного времени не отличалось от такового у интактных животных и у собак на аналогичном этапе исследования после озонированного ИК

В постперфузионном периоде после ИК с введением гутимина в лимфоузлах увеличивалась митотическая активность клеток светлых центров

фолликулов. Не наблюдался отек межфолликулярных пространств, коркового плато, паракортикальной зоны и мякотных тяжей, в лимфоидных клетках не определялась гидропическая дистрофия Наружные мембраны митохондрий были без разрывов, кристы плотно упакованы, матрикс имел умеренную электронную плотность. Цистерны саркоплазматического ретикулума были не расширены. Ядерные мембраны имели ровные контуры, не отмечалось конденсации хроматина в глыбки.

На основании комплексного исследования гемодинамики и микрогемоциркуляции в брыжейке тонкой кишки собак установлено, что введение гутимина при озонированном ИК сопровождается снижением артериального давления, ОПСС и улучшением микроциркуляции. Это обусловлено тем, что гутимин вызывает дилятацию артериолярных сегментов микроциркуляции. Такая направленность изменения гемодинамики и микроциркуляции уменьшает явление «централизации кровообращения» и обеспечивает на более высоком уровне, по сравнению с контрольной серией, транспорт кислорода к клеткам печени, почек, селезенки и лимфатических узлов. Александрова А.Е. и соавт (1977) выявили увеличение диссоциации оксигемоглобина в задыхающихся тканях и повышение активности натрий-калиевого насоса эритроцитов под действием гутимина при гипоксии. В связи с этим можно предположить, что гутимин, активизируя гликолиз в эритроцитах, приводит к увеличению содержания АТФ и 2,3-дифосфоглицериновой кислоты, биологическая роль которой заключается в облегчении диссоциации кислорода из оксигемоглобина Улучшение кровообращения, оксигенации тканей и усиливающиеся процессы репарации в интерстиции под действием гутимина (Смирнов В.П., 1993) приводят к метаболической перестройке в исследуемых органах Гутимин, обладая свойством переключать обмен на энергетически более выгодный при экстремальных воздействиях на организм, вызывает активацию компонентов клеточной адаптации в условиях гипоксии (Конторщикова К.Н. и соавт., 1987, Мухина И.В., 1992; Андреева Н.Н., 1992) Способность гутимина тормозить процессы перекисного окисления липидов и повышать резистентность клеточных и митохондриальных мембран (Александрова А.Е., 1980; Матюшин И.Ф, 1982) также благоприятно отражается на процессах синтеза энергии. В исследуемых органах при озонированном ИК с введением гутимина, по сравнению с контрольной серией, наблюдается выраженная интенсификация процессов пентозофосфатного шунта, цикла Кребса и окислительного фосфорилирования. Предотвращение разобщения окисления сопряженного с фосфорилированием и оптимизация работы дыхательной цепи под действием гутимина, способствуют утилизации лакггата и поддерживают достаточный уровень макроэргических фосфатов, необходимых для быстрого восстановления функции печени, почек, селезенки и лимфоузлов в постперфузионном периоде.

Морфологическое исследование показало, что при введении гутимина на фоне озонированного ИК отмечаются менее выраженные, чем у контрольных собак, изменения структуры органов. Выявлены более поверхностные дистрофические изменения в паренхиматозных клетках и большее число неповрежденных клеток. Реже отмечаются кровоизлияния вокруг сосудов микроциркуляторного русла, а также явления интерстициального и периваскулярного отека. Не нарушается проницаемость сосудов микроциркуляторного русла, наблюдается улучшение кровообеспечения органов.

Результаты электронно-микроскопического изучения печени, почек, селезенки и лимфоузлов показали, что применение гутимина во время озонированного ИК повышает резистентность мембран внутриклеточных органелл, о чем свидетельствует меньшая степень их повреждений в опытной серии.

Таким образом, анализ результатов исследований позволяет заключить о целесообразности сочетанного применения озонирования перфузата и введения гутимина в процессе ИК, т.к. при этом вследствие улучшения микрогемоциркуляции значительно уменьшаются морфометаболические изменения печени, почек, селезенки и лимфоузлов. Последнее может являться хорошей гарантией нормального функционирования этих органов в постперфузионном периоде и позволит снизить частоту послеоперационных осложнений яри хирургических вмешательствах на сердце с применением искусственного кровообращения.

ВЫВОДЫ

1. Оксигенация перфузата в процессе искусственного кровообращения озонированным кислородом с содержанием озона 0,048-0,105 мг/л у собак полностью не предупреждает гипоксические нарушения микроциркуляции в брыжейке тонкой кишки, метаболизма и структуры печени, почек, селезенки и брыжеечных лимфатических узлов. Эти нарушения сохраняются в постперфузионном периоде и сопровождаются перенапряжением компенсаторных механизмов в эндотелиоцитах, паренхиматозных и стромальных клетках органов брюшной полости, что может привести к развитию острой почечно-печеночной недостаточности и вторичного иммунодефицита.

2. Введение гутимина во время озонированного искусственного кровообращения оказывает противогипоксическое действие на разных уровнях жизнедеятельности организма собак: системном (сердечнососудистая), органном (печень, почки, селезенка, лимфатические узлы), клеточном (эндотелиальные, паренхиматозные и стромальные клетки), субклеточном (органеллы клеток) и биохимическом {ферменты, углеводные субстраты и адениловые нуклеотиды)

3. При озонированном искусственном кровообращении гутимин снижает системное артериальное и периферическое венозное давление, общее периферическое сопротивление сосудов и ректально-мышечный температурный градиент и, вследствие этого, уменьшает явление «централизации кровообращения», улучшает гемомикроциркуляцию в брыжейке тонкой кишки, вызывает дилатацию артериолярных сегментов, поддерживает оптимальную скорость кровотока во всех сосудах, сохраняет большое количество функционирующих капилляров, предупреждает агрегацию и явления стаза в мелких венулах и капиллярах

4. В печени, применение гутимина в процессе озонированного искусственного кровообращения предупреждает формирование кровоизлияний по ходу перипортальных трактов, сохраняет большое количество митохондрий с неповрежденными кристами и явлениями реактивной гиперплазии, интенсифицирует процессы утилизации лактата и пирувата по пути окислительного фосфорилирования, поддерживает активность пентозофосфатного шунта и, вследствие этого, нормализует уровень молочной кислоты и увеличивает энергообеспечение гепатоцитов и сохраняет на должном уровне содержание глюкозы, глюкозо-6-фосфата и гликогена.

5. В постперфузионном периоде одинаковый уровень энергообеспечения гепатоцитов, как и при ИК, достигается не только функционированием окислительного фосфорилирования, но и активацией пентозофосфатного шунта, процессов окисления глицерола и жирных кислот, что предупреждает развитие гидропической дистрофии, расширение канальцев и цистерн саркоплазматического ретикулума, отёка микроворсинок плазматической мембраны, обращенных в пространство Диссе, увеличение количества клеток Купфера. Ядра гепатоцитов определяются с ровными контурами и равномерным распределением хроматина

6 В дочках введение гутимина на фоне озонированного ИК предупреждает развитие кровоизлияний на границе между корковой и мозговой зонами, спадение клубочков, повреждение митохондрий, расширение саркоплазматического ретикулума и формирование дистрофических изменений в эпителии извитых канальцев проксимальной и дистальной их части и петле Генле, восстанавливает нормальное соотношение активности различных участков дыхательной цепи, интенсивность ПФШ в корковой (клубочки и канальцы) и мозговой зонах и, вследствие этого, увеличивает энергетический потенциал нефроцитов и активирует в них глюконеогенез.

7. В постперфузионном периоде после озонированного ИК с введением гутимина в ткани почки нормализуются активность окислительно-восстановительных энзимов, уровень субстратов углеводного обмена и высокоэнергетических фосфатов, и это сопровождается меньшим напряжением компенсаторно-приспособительных механизмов органелл нефроцитов, чем у животных после озонированного ИК.

8. В селезенке гутимин при озонированном ИК щ>едупреждает формирование микротромбов в микроциркуляторном русле, мукоидное набухание коллагеновых волокон фасциальных влагалищ внутритрабекулярных сосудов, плазматическое пропитывание стенок сосудов, нарушение целостности базальной и люминальной мембран и микроклазматоз эндотелия капилляров, расширение периваскулярных пространств; уменьшает кровенаполнение красной пульпы, отек белой пульпы, капсулы и трабекул, активирует пентозофосфатный путь окисления глюкозы и цикл Кребса и, вследствие этого, снижает уровень лактата и увеличивает синтез АТФ в спленоцитах.

9. Метаболические изменения, вызванные гутимином в селезенке во время ИК, поддерживаются и в постперфузионном периоде. Активность ЛДГ, Гл-6-ФДГ, СДГ и НАДН-ДГ, содержание углеводных субстратов и высокоэнергетических фосфатов в ткани селезенки восстанавливаются до уровня интактных животных, возрастает количество герминобластов и плазматических клеток в лимфоидных фолликулах белой пульпы, сохраняются большее количество митохондрий с неповрежденными кристами, ровные контуры ядер и уменьшается расширение цистерн саркоплазматического ретикулума в лимфоидных и эндотелиальных клетках

10 В лимфоузлах гутимин на фоне озонированного ИК предупреждает формирование микротромбов в микроциркуляторном русле, плазматическое пропитывание стенок артериол, микроклазматоз, повреждения базальной и люминальной мембран эндотелия капилляров, повышает активность Гл-6-ФДГ, СДГ и процессы утилизации глюкозы, глюкозо-6-фосфата и лактата, что свидетельствует об активизации пентозофосфатного шунта и восстановлении равномерного потока электронов по дыхательной цепи и, вследствие этого, увеличивает синтез АТФ и предотвращает мукоидное набухание волокнистого компонента стромы, уменьшает перинуклеарный отек и диаметр канальцев саркоплазматического ретикулума

11 Метаболические процессы, вызванные гутимином в ткани лимфоузлов во время озонированного ИК, продолжают функционировать и через 2 часа постперфузионного периода; сопровождаются уменьшением отека эндотелиальных клеток и периваскулярных пространств, межфолликулярных пространств коркового плато и паракортикальной зоны мякотных тяжей, сохранением большинства митохондрий неповрежденными, ровных контуров ядерной мембраны, отсутствием расширения канальцев и цистерн саркоплазматического ретикулума в лимфоцитах и увеличением митотической активности лимфоидных клеток в светлых центрах фолликулов.

Список основных публикаций по теме диссертации А) Статьи в журналах, рекомендованных ВАК

1. Бояринов, Г.А. Иммунный статус у больных инфекционным эндокардитом после протезирования клапанов сердца в условиях оксигенированного и озонированного ИК /Г А Бояринов, В.О Никольский, Ю,Д. Бричкин, JI.B. Бояринова, В Е. Киселевич //Вестник интенсивной терапии - 2002. - Ks 6 - С 132-134

2 Никольский, В О. Влияние озона на микроциркуляторное русло функционального элемента (ФЭ) печени при ИК /В О Никольский, Г. А Бояринов, JI.B. Бояринова, Д М Зеленов //Нижегородский медицинский журнал «Озонотерапия». -ННовгород,2003 -С 10-11.

3 Никольский, ВО Влияние озона на морфометаболизм функционального элемента (ФЭ) органов иммунитета при длительном ИК /В.О Никольский, Г А Бояринов, Л.В. Бояринова, Зеленов Д М //Нижегородский медицинский журнал «Озонотерапия» -Н.Новгород, 2003 - С. 9-10

4 Бояринов, Г А. Влияние озона на фармакологические средства, применяемые во время анестезиологического пособия и искусственного кровообращения у кардиохирургических больных /Г.А.Бояринов, АС. Гордецов, ВЕ Киселевич, ЮД Бричкин, А Ю Сморкалов, JI.B. Бояринова //Вестник интенсивной терапии - 2004 - № 5 -С 30-31 -ISSN 1726-9806.

5 Бояринов, Г А. Изучение взаимодействия озона и препаратов, применяемых в комплексе анестезиологического обеспечения и послеоперационной интенсивной терапии кардиохирургических больных /ГА.Бояринов, А.С Гордецов, ВЕ Киселевич, Ю.Д. Бричкин, А.Ю.Сморкалов, JI.B. Бояринова //Бюл. НЦССХ им А.Н Бакулева РАМН-Сердечно-сосудистые заболевания -2004 -Т.5 - №5 - С 226 - ISSN 1810-0694

6 Бояринова, JI.B. Влияние озона и гутимина на микрогемоциркуляцию и микроциркуляторное русло в селезенке при искусственном кровообращении /Л В Бояринова, А.И Коржевский, В.О Никольский, Г А Бояринов //Нижегородский медицинский журнал- «Озонотерапия» - Н.Новгород, 2005 - С 53-54.

7. Бояринова, JI.B. Протекторное действие озона и гутимина на структуру печени во время искусственного кровообращения /Л В. Бояринова, В.О Никольский, Г.А Бояринов // Нижегородский медицинский журнал- «Озонотерапия» - Н Новгород, 2005 -С 54-55.

8. Бояринова, Л.В. Влияние озона и гутимина на микроциркуляцию и мшфоциркуляторное русло печени при искусственном кровообращении /Л.В Бояринова,

А И Коржевский, В О. Никольский, Г А Бояринов //Нижегородский медицинский журнал «Озонотерапия» - Н.Новгород, 2005 - С 55-56

9. Бояринов, ГА. Изучение влияния озона на фармакологические средства, применяемые в комплексе анестезнолого-реанимационного пособия у кардиохирургических больных /Г А Бояринов, В Е Киселевич, А Ю Сморкалов, Ю Д Бричкин, JI.B. Бояринова //Бюл НЦССХ им А Н Бакулева РАМН- Сердечно-сосудистые заболевания - 2005 - Т 6 - №3. - С 114

10 Бояринова, JI.B. Влияние озона и гутимина на микроциркуляцию и микроциркуляторное русло почек при искусственном кровообращении /Л В Бояринова, А И Коржевский, ВО Никольский, ГА Бояринов //Нижегородский медицинский журнал- «Озонотерапия» - Н Новгород, 2005 - С. 56-57

И Бояринова, JI.B. Протекторное действие озона и гутимина на структуру брыжеечных лимфоузлов во время искусственного кровообращения /Л В. Бояринова, А И Коржевский, В О Никольский //Нижегородский медицинский журнал «Озонотерапия» -Н.Новгород,2005 -С 57-58

12 Бояринова, Л.В. Электронно-микроскопическое исследование функционального элемента печени при искусственном кровообращении с введением озона и гутимина/Л.В Бояринова//Общая реаниматология - 2006 -т2, №4/1 -С 197

13 Бояринова, Л.В. Влияние озона и гутимина на метаболизм функционального элемента печени при искусственном кровообращении /Л В. Бояринова Л.В //Общаяреаниматология -2006 -т2. -№4/1.-С 198-200

14 Бояринова, Л.В. Влияние озона и гутимина во время искусственного кровообращения на структуру брыжеечных лимфоузлов /Л В Бояринова Л В // Общая реаниматология - 2006 - т 2 - №4/1 - С 200

15 Бояринова, Л.В. Влияние озона и гутимина во время искусственного кровообращения на структуру селезенки /Бояринова Л В //Общая реаниматология -2006.-т2.-№4/1 -С 201

16 Бояринова, Л.В. Влияние озона и гутимина на метаболизм функционального элемента почек при искусственном кровообращении /Л В Бояринова //Общаяреаниматология -2006 -т2 -№4/1 -С 201-202.

17 Бояринова, Л.В. Влияние гутимина на метаболизм брыжеечных лимфатических узлов при озонированном искусственном кровообращении /Л В Бояринова //Казанский медицинский журнал - 2007 - т 88. - №4. - С. 28-29

18 Бояринова, Л.В. Влияние гутимина, введенного в период озонированного искусственного кровообращения, на структуру и метаболизм печени в постперфузионном

периоде/Л В Бояринова //Казанский медицинский журнал. - 2007 - т 88 - №4 - С. 2123

19 Бояринова, Л.В. Влияние гутимина, введенного в период озонированного искусственного кровообращения, на структуру и метаболизм почек в постперфузионном периоде /Л В Бояринова //Казанский медицинский журнал - 2007 - т 88 - №4 - С. 2628

20. Бояринова, Л.В. Влияние гутимина на метаболизм селезенки при озонированном искусственном кровообращении /Л В Бояринова //Казанский медицинский журнал - 2007 - т. 88 - №4 - С. 24-26

21 Бояринов, ГА Детоксицирующее действие озона /ГА Бояринов, НЮ. Векслер, М Ю Юрьев, Л.В. Бояринова, Е.В. Дудина //Казанский медицинский журнал. -Казань, 2007 -т 88 -№4 - С, 261-263

22 Коржевский, А И Влияние озона на морфометрические показатели и морфологию микроциркуляторного русла печени при искусственном кровообращении /А.И Коржевский, Л.В. Бояринова, В О Никольский //Казанский медицинский журнал. -2007 -т 88.-№4.-С 19-20.

П. Статьи, доклады, тезисы докладов региональных и международных конференций.

1. Бояринова, Л.В. Влияние озонированного кислорода и гутимина на микроциркуляцию в брыжейке тонкой кишки при ИК /Л В. Бояринова, В О Никольский, А И Тарасова //Материалы 8-ого Всероссийского съезда анестезиологов и реаниматологов. - Омск, 2002 - С 296-297

2. Бояринова, Л.В. Влияние различных режимов озонирования перфузата на состояние микроциркуляции в брыжейке тонкой кишки при ИК /Л.В Бояринова, В.О Никольский, А И Тарасова //Материалы 8-ого Всероссийского съезда анестезиологов и реаниматологов - Омск,2002 -С 297

3 Никольский, В О Влияние озона на морфологию органов иммунитета при длительном ИК /В.О. Никольский, Л.В. Бояринова, Г.А Бояринов, ЕИ. Яковлева //Материалы 1-ой Украинско-русской научно-практической конференции «Озон в биологии и медицине» - Одесса, 2003 -С. 48-51,

4 Бояринова, Л.В. Влияние озона и гутимина на микрогемоциркуляцию и микроциркуляторное русло в селезенке при искусственном кровообращении /Л В Бояринова, А И. Коржевский, В О Никольский //Тез докл. научно-практ. конф, Чебоксары, 2005 (27 мая) С 3-5

5 Бояринова, Л.В. Протекторное действие озона и гутимина во время искусственного кровообращения на структуру селезенки /Л В Бояринова, А И Коржевский, В.О Никольский //Тез докл научно-практ конф, Чебоксары, 2005 (27 мая) - С. 5-6

6 Коржевский, А И Влияние озона и гутимина во время искусственного кровообращения на функциональный элемент печени /А И. Коржевский, Л.В. Бояринова, В О Никольский, Г.А Бояринов //Вестник физиотерапии и курортологии 2006 - № 5 -С 11-12.

Подписано к печати 21 09 07. Формат 60x84'/и Бумага писчая Печать офсетная Гарнитура «Тайме» Усл. печ. л 2. Тираж 100 экз. Заказ 183.

Полиграфический участок НГМА 603005, Н Новгород, ул Алексеевская, 1

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Бояринова, Лариса Валентиновна

Глава 1. ИЗМЕНЕНИЯ ГЕМОДИНАМИКИ И МИКРОЦИРКУЛЯЦИИ, ПЕЧЕНИ, ПОЧЕК, СЕЛЕЗЕНКИ И ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ ПРИ ИСКУССТВЕННОМ КРОВООБРАЩЕНИИ И СПОСОБЫ ИХ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ (обзор литературы).

1.1. Краткий очерк развития искусственного кровообращения.

1.2. Изменения гемодинамики и микроциркуляции при ИК.

1.3. Гипоксические нарушения в печени, почках, селезенке и лимфатических узлах при ИК.

1.4. Средства, повышающие устойчивость печени, почек, селезенки и лимфоузлов к гипоксии.

1.4.1. Биологические эффекты озона и его применение в медицине.

1.4.2. Физико-химические, фармакологические и биологические эффекты гутимина.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Подготовка животных к эксперименту и воспроизведение модели.

2.2. Общая характеристика экспериментального материала.

2.3. Методы исследования.

2.3.1. Методы исследования гемодинамики и микроциркуляции.

2.3.2. Биохимические методы исследования.

2.3.3. Морфологические методы исследования.

2.3.4. Гистохимические методы исследования.

2.3.5. Электронно-микроскопические методы исследования.

2.3.6. Статистические методы исследования.

Глава 3. ВЛИЯНИЕ ЭФИРНО-КИСЛОРОДНОГО НАРКОЗА НА МИКРОЦИРКУЛЯЦИЮ, СТРУКТУРУ И МЕТАБОЛИЗМ ПЕЧЕНИ, ПОЧЕК, СЕЛЕЗЕНКИ И ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ.

3.1 Микроциркуляция, структура и метаболизм печени через 3 часа эфирно-кислородного наркоза.

3.2. Микроциркуляция, структура и метаболизм почек через 3 часа эфирно-кислородного наркоза.

3.3. Микроциркуляция, структура и метаболизм селезенки через 3 часа эфирно-кислородного наркоза.

3.4. Микроциркуляция, структура и метаболизм брыжеечных лимфатических узлов через 3 часа эфирно-кислородного наркоза.

Глава 4. ИЗМЕНЕНИЯ ГЕМОДИНАМИКИ, МИКРОЦИРКУЛЯЦИИ, МЕТАБОЛИЗМА И СТРУКТУРЫ ПЕЧЕНИ, ПОЧЕК, СЕЛЕЗЕНКИ И ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ ПРИ ОЗОНИРОВАННОМ ИСКУССТВЕННОМ КРОВООБРАЩЕНИИ.

4.1. Гемодинамика и микроциркуляция.

4.2. Микроциркуляция, структура и метаболизм печени.

4.3. Микроциркуляция, структура и метаболизм почек.

4.4. Микроциркуляция, структура и метаболизм селезенки.

4.5. Микроциркуляция, структура и метаболизм брыжеечных лимфоузлов

Глава 5. ВЛИЯНИЕ ГУТИМИНА НА ГЕМОДИНАМИКУ, МИКРОЦИРКУЛЯЦИЮ, СТРУКТУРУ И МЕТАБОЛИЗМ ПЕЧЕНИ, ПОЧЕК, СЕЛЕЗЕНКИ И ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ ПРИ ОЗОНИРОВАННОМ ИСКУССТВЕННОМ КРОВООБРАЩЕНИИ.

5.1. Гемодинамика и микроциркуляция.

5.2. Микроциркуляция, структура и метаболизм печени.

5.3. Микроциркуляция, структура и метаболизм почек.

5.4. Микроциркуляция, структура и метаболизм селезенки.

5.5. Микроциркуляция, структура и метаболизм брыжеечных лимфоузлов

Список сокращений

АД - артериальное давление

АИК - аппарат искусственного кровообращения

АОЗ - антиоксидантная защита АОС - антиоксидантная система

АТФ, АДФ, АМФ - аденозинтри-, ди-, монофосфорная кислота

ГБО - гипербарическая оксигенация

ГП - глютатионпероксидаза

Гл-З-ФДГ - глицерол-3-фосфатдегидрогеназа

Г-6-ФДГ - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа

Г-6-Ф - глюкозо-6-фосфат

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ЖК - жирные кислоты

ИВЛ - искусственная вентиляция легких

ИК - искусственное кровообращение

КОС - кислотно-основное состояние

ЛДГ -лактатдегидрогеназа

ЛПВП - липопротеиды высокой плотности

МДА - малоновый диальдегид

МЦ - микроциркуляция

МЦР - микроциркуляторное русло

НАД - никотинамидадениндинуклеотид

НАДН - никотинамидадениндинуклеотид восстановленный

НАДН-ДГ - никотинамидадениндинуклеотид восстановленная дегидрогеназа НАДФ - никотинамидадениндинуклеотидфосфат НЖК - ненасыщенные жирные кислоты

ОВФ - окислительно-восстановительные ферменты

ОППН - острая печеночно-почечная недостаточность

ОПС - общее периферическое сопротивление

ОСП - объемная скорость перфузии

ОЦК - объем циркулирующей крови

ПВД - периферическое венозное давление

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ПОФ - полиоксифумарин

1111Н - печеночно-почечная недостаточность

ППП - постперфузионный период

РМТГ - ректально-мышечный температурный градиент

РНК - рибонуклеиновая кислота

ПФШ - пентозофосфатный шунт

САД - системное артериальное давление

СДГ - сукцинатдегидрогеназа

СПР - саркоплазматический ретикулум

Т° рект. - ректальная температура

Т° периф. - периферическая температура

ЦВД - центральное венозное давление

ЦХО - цитохромоксидаза

ЭКН - эфирно-кислородный наркоз

Введение Диссертация по биологии, на тему "Антигипоксическая защита организма собак гутимином при озонированном искусственном кровообращении"

Актуальность проблемы. В настоящее время в мире ежегодно проводится около 700 тысяч операций с искусственным кровообращением (Бунятян A.A., 2005). Академиком Петровским Б.В. метод ИК назван «эпохой в медицине 20 века» (Лурье Г.О., 2002). 50 лет назад в нашей стране Вишневским A.A. проведена успешная операция в условиях ИК. За это время, несмотря на усовершенствование аппаратов РЖ, технологии проведения перфузии, способов ее управления и фармакологическую защиту организма - наблюдаются осложнения со стороны различных органов. Наиболее грозным осложнением является печеночно-почечная недостаточность и вторичный иммунодефицит (Chiristman J. et al., 1998, Трекова H.A. и соавт., 2002, Бричкин Ю.Д., 2003). Одной из важнейших причин развития этих осложнений является гипоксия, формирующаяся в организме больных в процессе искусственного кровообращения. Все это свидетельствует о необходимости повышения устойчивости организма к неблагоприятному воздействию гипоксии в условиях ИК.

В этой связи в работах профессоров Медведева А.П. (1997), Никольского В.О. (2003), Киселевича В.Е. (2006) и других было установлено противогипоксическое действие озона, используемое для обработки перфузата в процессе искусственного кровообращения. В эксперименте ими было показано, что озон оказывает коррегирующее действие на уровне микроциркуляторного звена кровообращения, а в клинике выявлено снижение послеоперационных осложнений у кардиохирургических больных, оперируемых в условиях ИК. Однако оксигенация перфузата озонированным кислородом во время проведения ИК в полной мере не предупреждает развитие гипоксических повреждений в органах животных и человека. Это, вероятно, связано с низкими концентрациями озона (0,048-0,105 мг/л), которыми обрабатывают перфузат, а длительное барботирование крови более 8 высокими концентрациями озона, как следует из исследований Зеленова Д.М. (1988), может привести к повреждению мембран эритроцитов.

В проблеме поиска эффективных методов профилактики гипоксических повреждений у кардиохирургических больных обращает внимание применение гутимина (Бояринов Г. А., 1987). Экспериментально-клиническими исследованиями установлено, что антигипоксант гутимин проникает в клетки органов, способствует более рациональному использованию кислорода в клетке в условиях гипоксии, поддерживает сопряжение окисления и фосфорилирования, оптимизирует работу дыхательной цепи, тормозит перекисное окисление липидов и стабилизирует мембраны (Никольский В.О., 1995; Оковитый С.В., 2006).

Цель и основные задачи исследования. Целью работы явилось изучение противогипоксического действия гутимина на гемодинамику, микроциркуляцию в брыжейке тонкой кишки, метаболические и структурные изменения в печени, почках, селезенке и брыжеечных лимфоузлах у собак при озонированном искусственном кровообращении и постперфузионном периоде. 9

Для достижения цели решались следующие задачи:

1. Исследовать изменения центральной гемодинамики и микроциркуляции в брыжейке тонкой кишки во время озонированного ИК и в постперфузионном периоде.

2. Изучить изменения микроциркуляции, метаболизма и структуры печени, почек, селезенки и лимфатических узлов через 3 часа озонированного ИК и 2 часа постперфузионного периода.

4. Выявить влияние гутимина на микроциркуляцию, метаболизм и структуру печени, почек, селезенки и лимфатических узлов через 3 часа озонированного ИК и 2 часа постперфузионного периода.

5. Сопоставить изучаемые параметры при озонированном ИК и озонированном ИК с введением гутимина на одинаковых этапах исследования и, на основании их анализа, оценить антигипоксическое действие гутимина на состояние микроциркуляции в брыжейке тонкой кишки и морфометаболические изменения в печени, почках, селезенке и лимфатических узлах.

Научная новизна. Настоящее исследование является первым научным анализом результатов изучения противогипоксического действия озона и гутимина на организм собак при искусственном кровообращении и посвящено решению проблемы защиты внутренних органов (печень, почки, селезенка, лимфатические узлы) от гипоксии в этих условиях.

Показано, что оксигенация перфузата озонированным кислородом в процессе искусственного кровообращения полностью не предупреждает развития потенциальной патогенности адаптивных механизмов, формирующихся в организме собак в ответ на гипоксию.

Установлено, что гутимин на фоне озонированного ИК поддерживает и усиливает функционирующие и включает новые противогипоксические адаптационные реакции на разных уровнях жизнедеятельности организма: системном (сердечно-сосудистая), органном (печень, почки, селезенка, лимфатические узлы), клеточном (эндотелиальные, паренхиматозные и стромальные клетки), субклеточном (органеллы клеток), биохимическом (ферменты, углеводные субстраты и адениловые нуклеотиды).

Выявлено, что гутимин снижает проявление централизации кровообращения в период озонированной перфузии.

Получены и систематизированы новые факты противогипоксического действия гутимина на микроциркуляцию в брыжейке тонкой кишки (вызывает дилатацию артериолярных сегментов, поддерживает оптимальную скорость кровотока во всех сосудах, сохраняет большое количество функционирующих капилляров, предупреждает агрегацию и явления стаза в мелких венулах и капиллярах) и органов брюшной полости (предупреждает периваскулярные кровоизлияния, формирование микротромбов в микроциркуляторном русле, плазматическое пропитывание стенок артериол, микроклазматоз, повреждения базальной и люминальной мембран эндотелия капилляров).

Выявлено благоприятное влияние гутимина на метаболические процессы в печени, почках, селезенке и лимфатических узлах: восстанавливает активность окислительно-восстановительных ферментов, интенсифицирует процессы утилизации глюкозы, глюкозо-6-фосфата и, особенно, лактата, оптимизирует работу цикла Кребса и дыхательной цепи, поддерживает и активирует пентозофосфатный шунт, увеличивает синтез АТФ.

Оказывая положительное действие на микроциркуляцию и метаболизм, гутимин предупреждает мукоидное набухание коллагеновых волокон,

11 развитие зернистости цитоплазмы, повреждение митохондрий и расширение саркоплазматического ретикулума в исследуемых органах.

Научно-практическое значение. Совокупность полученных данных и теоретических положений позволили обосновать применение метода введения гутимина для предотвращения развития гипоксических повреждений в печени, почках, селезенке и брыжеечных лимфоузлах при проведении озонированного ИК и в постперфузионном периоде.

На основании результатов проведенных исследований разработан эффективный, безопасный и доступный в применении метод повышения устойчивости внутренних органов к гипоксии при ИК. Озонированное ИК, в настоящее время, применяется в специализированных кардиохирургических стационарах Нижнего Новгорода и Челябинска, а озонированное ИК с введением гутимина в СККБ Нижнего Новгорода.

Результаты работы дают новые представления о противогипоксических эффектах гутимина на фоне озонированного ИК и являются фундаментом для дальнейшего обоснования и применения антигипоксантов при ИК и озонотерапии.

Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены: на 8-м Всероссийском съезде анестезиологов и реаниматологов

Омск, 2002), 1-ой Украинско-русской научно-практической конференции «Озон в биологии и медицине» (Одесса, 2003); 5-ой, 6-ой и 7-ой Всероссийских научно-практических конференциях с международным участием «Озон в биологии и медицине» (Н.Новгород, 2003, 2005, 2007), научно-практической конференции (Чебоксары, 2005); 3-ей Украинско-русской научно-практической конференции «Озон в биологии и медицине» (Севастополь, 2006), 1-ой научно-практической конференции Азиатско-европейского союза озонотерапевтов «Озон в биологии и медицине» (Большое Болдино, Нижегородская обл., 2006), 2-ой научно-практической конференции Азиатско-Европейского союза озонотерапевтов и производителей медицинского оборудования «Технические средства и технологии озонотерапии (Казань, 2007).

Основные положения, выносимые на защиту

2. Введение гутимина (50 мг/кг внутривенно за 20 мин до перфузии, 2030 мг/кг в перфузат до и 35-40 мг/кг через каждые 40 мин перфузии) уменьшает проявления централизации кровообращения и улучшает микроциркуляцию в брыжейке тонкой кишки.

3. Гутимин при озонированном искусственном кровообращении улучшает метаболические процессы в печени, почках, селезенке и лимфатических узлах, и, вследствие этого, предупреждает структурные нарушения в этих органах.

4. Адаптационные реакции, развившиеся при введении гутимина на фоне озонированного искусственного кровообращения в печени, почках,

13 селезенке и лимфатических узлах, сохраняются и в раннем постперфузионном периоде.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Бояринова, Лариса Валентиновна

ВЫВОДЫ

2. Введение гутимина во время озонированного искусственного кровообращения оказывает противогипоксическое действие на разных уровнях жизнедеятельности организма собак: системном (сердечнососудистая), органном (печень, почки, селезенка, лимфатические узлы), клеточном (эндотелиальные, паренхиматозные и стромальные клетки), субклеточном (органеллы клеток) и биохимическом (ферменты, углеводные субстраты и адениловые нуклеотиды).

3. При озонированном искусственном кровообращении гутимин снижает системное артериальное и периферическое венозное давление, общее периферическое сопротивление сосудов и ректально-мышечный температурный градиент и, вследствие этого, уменьшает явление «централизации кровообращения», улучшает гемомикроциркуляцию в брыжейке тонкой кишки: вызывает дилатацию артериолярных сегментов, поддерживает оптимальную скорость кровотока во всех сосудах, сохраняет большое количество функционирующих капилляров, предупреждает агрегацию и явления стаза в мелких венулах и капиллярах.

4. В печени2 применение гутимина в процессе озонированного искусственного кровообращения предупреждает формирование

251 кровоизлияний по ходу перипортальных трактов, сохраняет большое количество митохондрий с неповрежденными кристами и явлениями реактивной гиперплазии, интенсифицирует процессы утилизации лактата и пирувата по пути окислительного фосфорилирования, поддерживает активность пентозофосфатного шунта и, вследствие этого, нормализует уровень молочной кислоты и увеличивает энергообеспечение гепатоцитов и сохраняет на должном уровне содержание глюкозы, глюкозо-6-фосфата и гликогена.

5. В постперфузионном периоде одинаковый уровень энергообеспечения гепатоцитов, как и при РЖ, достигается не только функционированием окислительного фосфорилирования, но и активацией пентозофосфатного шунта, процессов окисления глицерола и жирных кислот, что предупреждает развитие гидропической дистрофии, расширение канальцев и цистерн саркоплазматического ретикулума, отека микроворсинок плазматической мембраны, обращенных в пространство Диссе, увеличение количества клеток Купфера. Ядра гепатоцитов определяются с ровными контурами и равномерным распределением хроматина.

6. В почках введение гутимина на фоне озонированного РЖ предупреждает развитие кровоизлияний на границе между корковой и мозговой зонами, спадение клубочков, повреждение митохондрий, расширение саркоплазматического ретикулума и формирование дистрофических изменений в эпителии извитых канальцев проксимальной и дистальной их части и петле Генле; восстанавливает нормальное соотношение активности различных участков дыхательной цепи, интенсивность ПФШ в корковой (клубочки и канальцы) и мозговой зонах и, вследствие этого, увеличивает энергетический потенциал нефроцитов и активирует в них глюконеогенез.

7. В постперфузионном периоде после озонированного РЖ с введением гутимина в ткани почки нормализуются активность окислительно

252 восстановительных энзимов, уровень субстратов углеводного обмена и высокоэнергетических фосфатов, и это сопровождается меньшим напряжением компенсаторно-приспособительных механизмов органелл нефроцитов, чем у животных после озонированного ИК.

8. В селезенке гутимин при озонированном ИК предупреждает формирование микротромбов в микроциркуляторном русле, мукоидное набухание коллагеновых волокон фасциальных влагалищ внутритрабекулярных сосудов, плазматическое пропитывание стенок сосудов, нарушение целостности базалЕ>ж>й и люминальной мембран и микроклазматоз эндотелия капилляров, расширение периваскулярных пространств; уменьшает кровенаполнение красной пульпы, отек белой пульпы, капсулы и трабекул; активирует пентозофосфатный путь окисления глюкозы и цикл Кребса и, вследствие этого, снижает уровень лактата и увеличивает синтез АТФ в спленоцитах.

9. Метаболические изменения, вызванные гутимином в селезенке во время ИК, поддерживаются и в постперфузионном периоде. Активность ЛДГ, Гл-6-ФДГ, СДГ и НАДН-ДГ, содержание углеводных субстратов и высокоэнергетических фосфатов в ткани селезенки восстанавливаются до уровня интактных животных; возрастает количество герминобластов и плазматических клеток в лимфоидных фолликулах белой пульпы, сохраняются большее количество митохондрий с неповрежденными кристами, ровные контуры ядер и уменьшается расширение цистерн саркоплазматического ретикулума в лимфоидных и эндотелиальных клетках.

10. В лимфоузлах гутимин на фоне озонированного ИК предупреждает формирование микротромбов в микроциркуляторном русле, плазматическое пропитывание стенок артериол, микроклазматоз, повреждения базальной и люминальной мембран эндотелия капилляров; повышает активность Гл-6-ФДГ, СДГ и процессы утилизации глюкозы, глюкозо-6-фосфата и лактата, что свидетельствует об активизации пентозофосфатного шунта и

253 восстановлении равномерного потока электронов по дыхательной цепи и, вследствие этого, увеличивает синтез АТФ и предотвращает мукоидное набухание волокнистого компонента стромы, уменьшает перинуклеарный отек и диаметр канальцев саркоплазматического ретикулума.

11. Метаболические процессы, вызванные гутимином в ткани лимфоузлов во время озонированного ИК, продолжают функционировать и через 2 часа постперфузионного периода; сопровождаются уменьшением отека эндотелиальных клеток и периваскулярных пространств, межфолликулярных пространств коркового плато и паракортикальной зоны мякотных тяжей, сохранением большинства митохондрий неповрежденными, ровных контуров ядерной мембраны, отсутствием расширения канальцев и цистерн саркоплазматического ретикулума в лимфоцитах и увеличением митотической активности лимфоидных клеток в светлых центрах фолликулов.

254

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Бояринова, Лариса Валентиновна, Нижний Новгород

1. Абрамова, Ж.И. Человек и противоокислительные вещества /Ж.И. Абрамова, Г.И. Оксегендлер. Л.: Наука, 1985. - 230 с.

2. Автандилов, Г.Г. Стереометрическое исследование системы «мышечное волокно-капилляр» сердца человека в функциональном аспекте /Г.Г. Автандилов, Т.А. Гевоядян // Арх. анат. 1980. - № 7. - С. 33-37.

3. Авцин, А.П. Принципы и методы гистохимического анализа в патологии /А.П. Авцин, А.И. Струков, Б.Б. Фукс. М.: Медицина, 1971. -388с.

4. Агаджанян, H.A. Физиология человека /H.A. Агаджанян, Л.З. Тель, В.И. Циркин. М.: Медицинская книга, Н.Новгород: Изд-во НГМА, 2001.-526 с.

5. Адамян, A.A. Кровоостанавливающие свойства газообразного озона /A.A. Адамян, Ю.П. Кашперский, В.А. Жуков //Озон в биологии и медицине: тез. докл. П-й Всерос. научно-практ. конф. с междунар. участием. Н.Новгород, 1995.-С. 13-14.

6. Акимов, Г.А. Клинические синдромы и патоморфология нервной системы после оживления //Постреанимационная патология мозга: матер, междунар. симпоз. М., 1978. - С.2-4.

7. Александров, В.Я. Клетки, макромолекулы и температура. Л.: Наука, 1975.-330 с.

8. Александров, П.Н. Чтения им. A.M. Чернуха /Сб. научн. докл. -М., 1986.-С. 23-37.255

9. Александрова, А.Е. Изменение интенсивности анаэробного окисления углеводов под влиянием гутимина //Фармакол. и токсикол. 1972.- № 5. С. 592-595.

10. Александрова, А.Е. К механизму защитного действия гутимина при гипоксии. Антилиполитическая активность //Бюлл. экспер. биол. 1980.- № 5. С. 640-642.

11. Алехина С.П. Озонотерапия: клинические и экспериментальные аспекты /С.П. Алехина, Т.Г. Щербатюк Саров, ФГУП РФЯЦ-ВНИИЭФ, 2004. - 244с.

12. Асатиани, В.С. Новые методы биохимической фотометрии. М.: Наука, 1965. - 264 с.

13. Асатиани, В.С. Ферментные методы анализа. М.: Наука, 1969.740 с.

14. Баззаев Т.В. Озонотерапия гнойных заболеваний легких и плевры / Т.В. Баззаев., С.А. Руделев //Озон и методы эфферентной терапии в257медицине: тез. докл. 3-й Всерос. начно-практ. конф. с междунар. участием. -Н.Новгород, 1998. С. 63.

15. Барышникова, H.A. Кровоснабжение, метаболизм и функция органов при реконструктивных операциях /H.A. Барышникова, Э.М. Коган. -Ереван, 1984.-С. 511-513.

16. Барышникова, H.A. Морфологическое исследование трупной, консервированной и перфузированной почки: дис. канд. мед. наук. Москва, 1973.-181 с.

17. Бельков, A.B. Влияние пульсирующего и непульсирующего ИК при протезировании клапанов сердца на тканевой кровоток (клиническое исследование): дис. . канд. мед. наук. Москва, 1986. - 197 с.

18. Бельков, A.B. Проблемы трансплантологии и искусственных органов /A.B. Бельков, В.Н. Гребенников, Ю.Г. Матвеев М., 1983. - С. 144.

19. Биленко, М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов (молекулярные механизмы, пути предупреждения и лечения). М.: Медицина, 1989.-368 с.

20. Биохимические основы механизмов гомеостаза /B.C. Ильин, Т.Н. Протасова, Г.В. Титова и др. //Гомеостаз. М., 1981. - С. 114-160.

21. Биохимическое исследование ферментных систем эндоплазматической сети, лизосом, митохондрий и цитозоля при экспериментальном воздействии озоном /Р.В. Меркурьева, Б.В. Аулика, Д.И. Исмаилова и др. М., 1981. - 11 с. - Деп. в ВИНИТИ 30.01.81. - № 411 - 81.

22. Бобков Ю.И. Действие озона на энергетические резервы печени / Ю.И. Бобков, Н.П. Лебкова, В.Л. Зайцев //Озон в биологии и медицине: тез. докл. 1-й Всерос. научно-практ. конф. с междунар. участием. Н.Новгород, 1992.-С. 17-18.259

23. Бобков, Ю.Г. Методические подходы к изысканию новых аутопротекторов, обладающих антигипоксической активностью //Фармакологическая коррекция кислородзависимых состояний: тез. докладов 1-го Всесоюзного симпозиума. М., 1984. - С. 4 - 5.

24. Богословский H.H., Кацуба A.M., Багрий И.Н., Хлопотова М.А. Опыт применения озонотерапии в лечении язвенной болезни //Тез. докл. Юбилейной научно-практической конференции врачей. Нижний Новгород, 1997.-с. 75.

25. Болдина, И.Г. Оксибиотические и аноксибиотические процессы при экспериментальной и клинической патологии. Киев, 1975. - С. 33.

26. Бояринов, Г. А. Влияние антигипоксантов на обратимость патологических изменений при кровопотере: Автореф. дис. . докт. мед. наук. Казань, 1987. - 34 с.

27. Бояринов, Г.А. Озонированное искусственное кровообращение: экспериментальное обоснование и результаты клинического применения: монография /Г.А. Бояринов, В.В. Соколов. Н.Новгород: Покровка, 1999. -318 с.

28. Бояринов, Г.А. Озонотерапия в комплексном лечении пневмоний у нейрохирургических больных /Г.А. Бояринов, М.Ю. Юрьев, СЛ. Лебедь //Нижегородский медицинский журнал. Озонотерапия, приложение. 2003. -С. 159.

29. Бояринов, Г.А. Озонотерапия в комплексном лечении простатита /Г.А. Бояринов, С.Б. Житенев, В.В. Гуревич //Озон и методы эфферентной260терапии в медицине, приложение. Реаниматология и интенсивная терапия. Анестезиология. 2000. - № 4 - С. 83.

30. Бояринова, Л.В. Влияние озона и цитохрома С на функциональное состояние крови и сердца при искусственном кровообращении: дис. . канд. биол. наук: Бояринова Лариса Валентиновна. 03.00.13-физиология человека и животных. Н.Новгород, 1999. - 163 с.

31. Бричкин, Ю.Д. Оптимизация искусственного кровообращения при протезировании клапанов сердца у больных инфекционным эндокардитом: автореф. дис. . докт. мед. наук: Бричкин Юрий Дмитриевич. 14.00.37- анестезиология и реаниматология Москва, 2003. - 47с.

32. Бунятян, A.A. Руководство по кардиоанестезиологии /Под ред. A.A. Бунятяна, H.A. Трековой. М.: Мед. информ. аг-во, 2005. - 688 с.

33. Бураковский, В.И. Актуальные вопросы применения гипербарической оксигенации в кардиохирургии /В.И. Бураковский, JI.A. Бокерия //Тез. докл. 7-го Международного конгресса по гипербарической медицине. М., 1981.-е. 4-5.

34. Бураковский, В.И. Кардиология в СССР /В.И. Бураковский, B.C. Чеканов / Под ред. Е.И.Чазова. М.: 1982. - С. 218 - 255.

35. Бураковский, В.И. Осложнения при операциях на открытом сердце /В.И. Бураковский, Я. Л. Рапопорт, Г.Г. Гелыптейн и др. / В кн.: Основы реаниматологии в кардиохирургии. М.: Медицина, 1972. - 304 с.

36. Бухтияров, Л.Г. Патологическая физиология ИК /Многотомное руководство по патологической физиологии. М., 1966. - Т. 3. - С. 580 - 602.

37. Быков, А.Т. Характер изменений функциональных резервов сердечно-сосудистой системы у больных стенокардией при применении озона в комплексе санаторно-курортной терапии /А.Т. Быков, К.Н.262

38. Конторщикова, Е.И. Сычёва //Озон и методы эфферентной терапии в медицине, приложение. Реаниматология и интенсивная терапия. Анестезиология. 2000. - № 4 - С. 44.

39. Быков, Н.П. Сравнительное исследование эффективности некоторых антигипоксантов и их комбинаций //Фармакология и токсикология. 1976. - №4. - С.696-698.

40. Валеева, Л.Б. Терминальные и экстремальные состояния /Л.Б. Валеева, B.C. Литвинов, А.П. Родин Новосибирск, 1980. - С. 57.

41. Ван Лир, Э. Гипоксия /Э. Ван Лир, К. Стикней / Пер. с англ. М.: Мир, 1967.-364 с.

42. Вартанов, С. Изменение функций печени при длительном искусственном кровообращении в зависимости от нарушений гемодинамики: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Ереван, 1969. - 20с.

43. Вегеле, Л.С. Оптимизация лечения хронических гнойных ран при патологии опорно-двигательной системы //Нижегородский медицинский журнал. Озонотерапия, приложение. 2003. - С. 196.

44. Векслер, Н.Ю. Комплексная детоксикация при коррекции хирургических эндотоксикозов /Н.Ю. Векслер, Г.А. Бояринов //Озон в биологии и медицине: материалы 6-й Всерос. науч.-практ. конф. (Н.Новгород, 21-23 сентября). Н.Новгород, 2005. - С. 233-235.

45. Верхнев, В.А. Сравнительная характеристика бактерицидного действия озонированного физиологического раствора различной концентрации /В.А. Верхнев, М.И. Романова //Нижегородский медицинский журнал. Озонотерапия, приложение. 2003. - С. 18.263

46. Верхнев, В.А. Тактика эфферентной терапии при ожоговой болезни /В.А. Верхнев., O.JI. Ведерникова, E.H. Вараксина //Нижегородский медицинский журнал. Озон в биологии и медицине: материалы 5-й науч.-практ. конф. (21-23 мая) М., 2003. - С. 283-284.

47. Виноградов, В.М. Защитное действие антигипоксических средств при гравитационных перегрузках /В.М. Виноградов, JI.B. Пастушенков //Космическая биология и медицина. 1969. - №2. - С.12-16.

48. Виноградов, В.М. Некоторые итоги и перспективы изучения гутимина одного из первых антигипоксических средств //Фармакология амидиновых средств: сб. науч. раб. - Кишинев, 1972. - С. 106-114.

49. Виноградов, В.М. Пути лекарственной профилактики и терапии гипоксических состояний /В.М. Виноградов, JI.B. Пастушенков //Дыхательная недостаточность в клинике и эксперименте: тез. докл. науч. конф. Куйбышев, 1977. - С. 285-287.

50. Виноградов, В.М. Фармакологические средства для профилактики и лечения гипоксии /В.М. Виноградов //Кислородный гомеостаз и кислородная недостаточность: сб. науч. работ. Киев, 1978. -С.183-192.

51. Влияние методов эфферентной терапии на развитие полиорганной недостаточности при хирургическом лечении пациентов с инфекционным эндокардитом / В.В. Пичугин, А.П. Медведев, Т.К. Павлова,

52. A.B. Иванов, JI.A. Щегольков, О.В. Горох //Общая реаниматология. М., 2006.-т. 2.-№4/1 -С.93-96.

53. Влияние озона во время длительного искусственного кровообращения на микроциркуляцию в печени и брыжейке тонкой кишки /

54. B.О. Никольский, Г.А. Бояринов, Д.М. Зеленов, А.И. Тарасова //Инф. сб. Озон и методы эфферентной терапии в медицине: материалы докл. 4-й Всерос. науч.-практ. конф. (Н.Новгород, 6-8 декабря) Н.Новгород, 2000. -№4. - С. 18-19.

55. Влияние озона на морфометаболизм функционального элемента органов иммунитета при длительном искусственном кровообращении /В.О. Никольский, Г.А. Бояринов, JI.B. Бояринова и др. //Нижегородский медицинский журнал. Озонотерапия, приложение. 2003. - С. 9.

56. Войнов, В.А. Атлас по патофизиологии /В.А. Войнов. М.: Мед. информ. аг-во. - 2004. - 217 с.266

57. Вольф, А. Озон в медицине. /Пер. с нем. Гейдельберг: Медицина. - 1979. - 226 с.

58. Восстановительный период после оживления /В.М. Виноградов, Г.А. Акимов, А.Е. Александрова, В.Н. Белый М., 1970. - 186 с.

59. Галетти, П.М. Основы и техника экстракорпорального кровообращения /П.М. Галетти, Г.А. Бричер /Пер. с англ. М.: Медицина, 1966.-236 с.

60. Гальперин, Э.И. Недостаточность печени /Э.И. Гальперин, М.И. Семендяева, Е. Неклюдова М.: Медицина, 1978. - 328 с.

61. Гистология /под ред. Афанасьева Ю.И., Юриной H.A. М.: Медицина, 1989. - 671с.

62. Главинская, Т.А. Иммунный статус при озонотерапии больных нейродермитом /Т.А. Главинская, O.A. Иванова, В.Д. Комарова //Озон в биологии и медицине: тез. докл. 2-й Всерос. научно-практ. конф. с междунар. участием. Н.Новгород, 1995. - С. 85.

63. Гликолиз во внутренних органах после экспериментальной термической травмы /В.Д. Слободин, B.C. Якушев, Т.В. Бочина и др. //Вопросы биохимии ожоговой травмы: сб. науч. тр. Челябинск, 1973. - С. 100-110.

64. Головинский, И.В. Цит. по Брюхоненко С.С., Чечулину С.И. // Труды научно-химического фармацевтического института. М., 1928. - С. 20.

65. Гомес, М. Применение озон-кислородных смесей у больных с серповидноклеточной анемией /М. Гомес, Е. Еспиноза, И.А. Каплан //Озон в биологии и медицине: тез. докл. 2-й Всерос. научно-практ. конф. с междунар. участием. Н. Новгород, 1995. - С. 69-70.

66. Горбунов, С.Н. Применение медицинского озона при интенсивной терапии тяжелой травмы //Матер. 4-го Всерос. съезда анест. и реаним. Москва, 1994. - С. 146.267

67. Грек, O.P. Влияние гипоксии и гипертермии на процессы перекисного окисления липидов печени крыс на фоне действия гутимина и ненасыщенных аминов //Фармакология и токсикология. 1978. - №1. - С. 101104.

68. Гречканев, Г.О. Озонотерапия в акушерстве /Г.О. Гречканев, Т.С. Качалина //Нижегородский медицинский журнал. Озонотерапия, приложение. 2003. - С. 112.

69. Гречко, В.Н. Применение комплексной озоно- и фототерапии в хирургии //Нижегородский медицинский журнал. Озонотерапия, приложение. 2003. - С. 228.

70. Гречко, В.Н. Применение озона в комплексном лечении больных с остеоартрозом крупных суставов /В.Н. Гречко, A.A. Диденко, Л.А. Фомина //Нижегородский медицинский журнал. Озонотерапия, приложение. 2003. -С. 232.

71. Гречко, Р.Н. Использование озона и озонированных растворов в лечении гнойных ран //Озон и методы эфферентной терапии в медицине: тез. докл. 3-й Всерос. научно-практ. конф. с междунар. участием. Н. Новгород, 1998.-С. 74.268

72. Густов, A.B. Озонотерапия в неврологии /A.B. Густов, С.А. Котов, К.Н. Конторщикова, Ю.П. Потехина. Н.Новгород: Литера, 1999. -179 с.

73. Давыдов, В.В. Содержание креатинфосфата при инфаркте миокарда у крыс, подвергнутых действию эмоционально-болевого стресса /

74. B.В. Давыдов, В.П. Твердохлеб, B.C. Якушев // Пат. Физиол. 1983. - № 1.1. C. 33-36.

75. Двойникова, Е.В. Влияние гипоксии и антигипоксических средств на функциональные показатели почек /Е.В. Двойникова, В.А.Кантария, Р.А.Тимурбулатов //Дыхательная недостаточность в клинике и эксперименте: сб. науч. работ. Куйбышев, 1977. - С.291-292.

76. Дворецкий, Д.П. Движение крови по микрососудам и транскапиллярный обмен /Д.П. Дворецкий, С.А. Поленов //Физиология кровообращения. Физиология сосудистой системы /под ред. Б.И. Ткаченко. -Л.: Наука, 1984. С. 212-218.

77. Дементьева, И.И. Теоретическое обоснование роли и значения систолы сердца в механизме кровообращения Л., 1984. - 195 с.

78. Дементьева, И.И. Циркуляторная гипоксия во время и после искусственного кровообращения: автореф. дис. . докт. биол. наук. -Москва, 1983.-39 с.

79. Ефименко, H.A. Озонотерапия в хирургической клинике /H.A. Ефименко, Н.Е. Чернеховская М.: Рос. мед. академия последипл. образования, 2001. - 160 с.

80. Ефименко, H.A. Озонотерапия в хирургической практике /H.A. Ефименко, Н.Е. Чернеховская М.: Российская мед. Академия последипломного образования, 2001. - 147 с.

81. Жаденов, И.И. Характеристика микрофлоры гнойных ран после обработки повиарголом и озоном /И.И. Жаденов и др. //Озон и методы эфферентной терапии в медицине: материалы 4-й Всерос. научн.-практ. конф. Н.Новогород, 2000. - С. 15-16.

82. Журавлева, Т.Б. Методические правила количественной гистоэнзимологии /Т.Б. Журавлева, В.З. Клечиков, P.A. Прочуханова //Архив патологии. 1972. - № 1. - С. 84 - 88.

83. Загвозкин, В.Н. К вопросу о взаимосвязи гемодинамики, транспорта и потребления кислорода во время искусственного кровообращения: дис. . канд. мед. наук. Москва, 1973. - 159 с.

84. Зайцев, В.Я. Озонидотерапия /В.Я. Зайцев, С.Д. Разумовский //Озон в биологии и медицине: тез. докл. 2-й Всерос. научно-практ. конф. с междунар. участием. Н. Новгород, 1998. - С. 11-12.

85. Зеленов, Д.М. Влияние озонированного кислорода и гутимина на морфометаболические изменения в печени и почках при длительном искусственном кровообращении: автореф. дис. . канд. мед. наук, Казань, 1988.- 15 с.

86. Зильбер, А.П. Клиническая физиология в анестезиологии и реаниматологии. М.: Медицина, 1984. - 480 с.

87. Зимина, Г.А. Коррегирующее действие гутимина на активность супероксиддисмутазы и каталазы сердца и печени при кровопотере //Науч. конф. молодых ученых Горьковской области: тезисы докладов. Горький: ГГПИ им. М.Горького, 1984. - С. 55-56.

88. Змызгова, A.B. Клинические аспекты озонотерапии /A.B. Змызгова, В.А. Максимов Москва, 2003. - 287с.

89. Значение озонотерапии в комплексном лечении невынашивания беременности /В.М. Зуев, Н.М. Побединский, Т.А. Джибладзе и др. //Озон в биологии и медицине: тез. докл. 2-й Всерос. научно-практ. конф. с междунар. участием. Н. Новгород, 1995. - С. 64

90. Иванов, К.П. Биоэнергетика и температурный гомеостазис. Л.: Наука, 1972. - 172 с.

91. Иванова, И.П. Влияние озона на структуру и функции эритроцитов собак // Озон в биологии и медицине: тез. докл. 3-й Всерос. науч.-практ. конф. (Н.Новгород, 16-18 сентября). -Н.Новгород, 1998 С. 1314.271

92. Иванова, Т.Н. Некоторые стороны энергетического обмена крыс в условиях повышенного парциального давления кислорода /Т.Н. Иванова, JI.H. Рубель // Эволюц. биохим. и физиол. 1965. - Т. 5. - С. 279 - 287.

93. Изменение активности антиокислительных ферментов у больных с хронической сердечной недостаточностью /Р.И. Сайфутдинов, Ч.И. Коц, А.К. Тихадзе и др. //Кардиология. 1990. - № 3. - С. 65-68.

94. Иммунокоррегирующее действие озона при остром деструктивном панкреатите /В.В. Ворончихин, А.Н. Волков, О.С. Сергеева и др. // Нижегородский медицинский журнал. Озонотерапия, приложение. -2003. С. 82.

95. Иоселиани, Г.Д. Пульсирующая перфузия в условиях фторуглеродной оксигенации крови /Т.Д. Иоселиани, С.М. Чилая, З.А. Чхаидзе //Анестезиология и реаниматология, 1984. №4. - с. 27-30.

96. Иост, X. Физиология клетки /Пер. с англ. М.: Медицина, 1975.864 с.

97. К биохимическим механизмам антигипоксического действия амиклофена /A.C. Захаревский, Г.Н. Смелянская, П.П. Саксонов и др.// Фармакол. и токсикол. 1976. - № 1. - С. 108-114.

98. Казначеев, В.П. Клиническая патология транскапиллярного обмена /В.П. Казначеев, A.A. Дзизинский М: Медицина, 1975. - 205с.

99. Казуева, Т.В. Травматический шок /Т.В. Казуева, Э.Е. Коврижных, Р.И. Кузьмина- Л., 1974. Вып. 1. - С. 48 - 53.

100. Караганов, Я.Л. Микроангиология /Я.Л. Караганов, Н.В. Кердиваренко, В.Н. Левин Кишинев: Штиица, 1982. - 247 с.

101. Кардиотропное действие озонированного перфузионного раствора /И.В. Мухина, A.B. Дворников, С.П. Перетяган и др. //Озон и методы эфферентной терапии в медицине: тез. докл. 3-й Всерос. научно-практ. конф. с междунар. участием. Н.Новгород, 1998. - С. 23.

102. Кендыш, И.Н. Регуляция углеводного обмена. М.: Медицина, 1985.-272 с.

103. Киняпина, И.Д. Озонотерапия в лечении воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области /И.Д. Киняпина, Е.А. Дурново //Озон в биологии и медицине: тез. докл. 2-й Всерос. научно-практ. конф. с междунар. участием. Н.Новгород, 1995. - С. 42.

104. Киселева, О.М. Коррекция нарушений микрогемодинамики у больных диабетической ретинопатией под влиянием озонотерапии /О.М. Киселева, А.Г. Куликов //Нижегородский медицинский журнал. Озонотерапия, приложение. 2003. - С. 106.

105. Кламмер, М.Е. Аспекты методики, гемодинамики и потребления кислорода при искусственном кровообращении: дис. . докт. мед. наук. -Москва, 1974.-325 с.274

106. Климчук, З.Г. Функциональное состояние печени у больных приобретенными пороками сердца до и после операции: автореф. дис. . канд. мед. наук. Москва, 1972. - 24 с.

107. Кобахидзе, Э.А. Актуальные вопросы хирургического лечения пороков сердца и заболеваний магистральных сосудов /Э.А. Кобахидзе, Е.Р. Соболева, В.Н. Кислов. -М., 1981. С. 184 - 185.

108. Ковалев, Н.Е. Биология: Пособие для подгот. отд. мед. институтов / Н.Е. Ковалев, Л.Д. Шевчук, Л.Д. Щуренко /Под ред. Ковалева Н.Е. М.: Высшая школа, 1986. - 384 с.

109. Козлов, В.И. Гистофизиология капилляров /В.И. Козлов, Е.П. Мельман, Е.М. Нейко. СПб.: Наука, 1994. - 234 с.

110. Козлов, В.И. Некоторые морфологические особенности эндотелия сосудов микроциркуляторного русла //Арх. анат. 1971. - № 5. -С. 45-56.

111. Козлов, В.И. Развитие системы микроциркуляции в онтогенезе /В.И. Козлов, С.А. Гурова //Успехи соврем, биол. 1989. - № 3 - С. 460-475.

112. Колесова, O.E. Механизмы стимуляции секреции инсулина озоном /O.E. Колесова, Т.М. Фролова, Т.Ю. Уханова //Озон в биологии и медицине: тез. докл. 2-й Всерос. научно-практ. конф. с междунар. участием. -Н.Новгород, 1995.-С. 16-17.

113. Колотилова, В.Г. Пентозофосфатный путь обмена углеводов в процессе эмбриогенеза /В.Г. Колотилова, Г.В. Кудрявцева //Биохимия гипоксии : сб. науч. тр. Горький, 1975. - С. 153-156.

114. Комаров, В.И. Антигипоксические препараты в лечении и профилактике экстрасистолических аритмий /В.И. Комаров, Ю.С. Денещук // Тез. докл. научн. конф. слушателей BMA им. С.М. Кирова. Л., 1975. - С. 36-37.

115. Комбинированная иммунотерапия больных с ожоговой травмой /Л.Ф. Максютова, С.Н. Хунафин, Ю.А. Медведев и др. //Озон и методы275эфферентной терапии в медицине, приложение. Реаниматология и интенсивная терапия. Анестезиология. 2000. - № 4 - С. 131.

116. Комплексная озонотерапия осложненных язв желудка /М.Р. Асадулаев, А.И. Корабельников, М.Д. Файзенберг и др. // Нижегородский медицинский журнал. Озонотерапия, приложение. 2003. - С. 90.

117. Комплексная озонотерапия при операциях по поводу активного инфекционного эндокардита /Г.А. Бояринов, А.П. Медведев, Ю.Д. Бричкин и др. //Нижегородский медицинский журнал. Озонотерапия, приложение. -2003. -С. 158.

118. Кондрашова, М.Н. Латентная активность дыхательной цепи клетки и регуляция их активности: сб. научн. тр. /М.Н. Кондрашова, E.H. Маевский, Е.Б. Окон Горький, 1978. - С. 12-13.

119. Конев, C.B. Озонобиология: молекулярно-мембранные основы /C.B. Конев, В.К. Матус //Озон в биологии и медицине: материалы 2-ой науч.-практ. конф. Н.Новгород, 1992. - С. 18.

120. Кононский, А.И. Гистохимия. Львов.: Виша школа, 1976. - 280с.

121. Константинов, Б.А. Физиологические и клинические основы хирургической кардиологии. Л.: Наука, 1981. - 264 с.

122. Конторщикова, К.Н. Биохимические основы эффективности озонотерапии //Озон в биологии и медицине: тез. докл. 2-й Всерос. научно-практ. конф. с междунар. участием. Н.Новгород, 1995. - С. 8.

123. Конторщикова, К.Н. Влияние гутимина на метаболизм и сократительную функцию миокарда при гипотермической защите /К.Н.276

124. Конторщикова, И.В. Мухина, Т.И. Соловьева //Республ. конф. по применению гипотермии в клинике кардиохирургии: Сб. докл. (Новосибирск). М., 1987. - С. 56.

125. Кораблев, М.В. Противогипоксические средства /М.В. Кораблев, П.И. Лукиенко Минск: Беларусь, 1976. - 196 с.

126. Королев, Б.А. Фармакологическая коррекция центрального и периферического кровообращения при гипоксии /Б.А. Королев, И.Ф. Матюшин, Г.А. Бояринов //Актуальные вопросы фармакологии кровообращения: сб. научн. тр. конф. Горький, 1980. - С. 29.

127. Коррекция механизмов защиты организма при перитоните /И.Т. Васильев, O.E. Колесова, Р.Б. Мумладзе, И.Н. Марков, С.М. Чудных //Озон в биологии и медицине: тез. докл. 2-й Всерос. науч.-практ. конф. (Н.Новгород, 6-8 сентября). Н.Новгород, 1995. - С. 16.

128. Костяев, A.A. Перспективы применения озона в клинической криобиологии //Озон и методы эфферентной терапии в медицине: тез. докл. 3-й Всерос. научно-практ. конф. с междунар. участием. Н.Новгород, 1998. -С. 119.

129. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии. М.: Высшая школа, 1980. - 272 с.

130. Кочетыгов, H.H. Гемодинамика, артериовенозные анастомозы и кислородный режим организма при тяжелой кровопотере и ее инфузионной терапии /Н.И. Кочетыгов, П.К. Поздняков //Патол. физиология и эксперим. терапия. -1981. № 4. - С. 32 - 37.

131. Кочетыгов, Н.И. Повышение эффективности инфузионной терапии экстремальных состояний в эксперименте //Патогенез, клиника и терапия постреанимационной болезни: тез. докл. Омск, 1983. - С. 140.

132. Кочетыгов, Н.И. Экспериментальное обоснование применения антигипоксантов при ожоговом шоке /Н.И. Кочетыгов, В.М. Виноградов //Актуальные вопросы постреанимационного периода: сб. науч. тр. -Саранск, 1982.-С. 65.

133. Криваткина, Е.В. Озонотерапия в практике врача-косметолога /Е.В. Криваткина, C.JL Криваткин //Озон в биологии и медицине: тез. докл. 2-й Всерос. научно-практ. конф. с междунар. участием. Н.Новгород, 1995. -С. 89.

134. Криволуцкая, Н.П. Применение озонотерапии в гнойной хирургии /Н.П. Криволуцкая, В.В. Дудка //Озон и методы эфферентной терапии в медицине: тез. докл. 3-й Всерос. научно-практ. конф. с междунар. участием. Н.Новгород, 1998. - С. 76.

135. Кривцов, В.А. Влияние озонированного физиологического раствора на систему гемостаза у больных с инфекционным эндокардитом /В.А. Кривцов, JI.A. Новиков, H.A. Ашинов //Тез. докл. 4-го ВСССХ. М., 1998 (8-11 декабря).-С. 178.278

136. Кричевская, A.A. Биохимические механизмы кислородной интоксикации /A.A. Кричевская, А.И. Лукаш, З.Г. Броновицкая Ростов: Изд-во Ростовск. Ун-та, 1980. - 116 с.

137. Крю, Ж. Биохимия: Медицинские и биологические аспекты / Пер. с франц. М.: Медицина, 1979. - 510 с.

138. Кудрин, А.И. Влияние гутимина на кислотно-щелочное равновесие церебральной крови и ликвора у кроликов /А.И. Кудрин, Г.А. Кузовков //Материалы науч. конф. слушателей BMA им. С.М. Кирова. Л., 1972.-С. 99-100.

139. Кудрин, В.Н. Влияние гутимина на устойчивость крыс к тяжелой мехонической травме /В.Н. Кудрин, И.Г. Болдина //Повышение резистентности организма к экстремальным воздействиям: сб. науч .тр. -Кишинев, 1973.-С. 174.

140. Кузовков, Г.А. Антигипоксическое действие гутимина в экспериментальной терапии острых отравлений хлорофосом //Пат. Физиология и экспериментальная терапия 1982. - № 3. - С. 50-53.

141. Куприянов, В.В. Изучение микроциркуляции в эксперименте и клинике: научный обзор /В.В. Куприянов, В.Н. Колмыкова М., 1979. - С. 10-15.

142. Куприянов, В.В. Микроциркуляторное русло /В.В. Куприянов, Я. Л. Караганов, В.И. Козлов М.: Медицина, 1975. - 214 с.

143. Лабори, А. Регуляция обменных процессов /Пер. с фр. М.: Медицина, 1970. - 3 80 с.279

144. Лайда, 3. Гистохимия ферментов /3. Лайда, Р. Госсрау, Т. Шиблер / Пер. с англ. М.: Мир, 1981.-272 с.

145. Лебедева Р.Н., Аббакумов В.В., Третьякова Е.С., Свирщевский Е.Б. //Анест. и реаниматол. 1984. - № 5. - С. 30 - 33.

146. Лебкова, Н.П. Ультраструктурные критерии детоксикационного действия озонотерапии /Н.П. Лебкова, В.Я. Зайцев, Л.Н. Зейтленок //Озон в биологии и медицине: тез. докл. 2-й Всерос. научно-практ. конф. с междунар. участием. Н.Новгород, 1995. - С. 19.

147. Ленинджер, А. Биохимия /Пер. с англ. В 3-х т. - М.: Мир, 1985.- 1056 с.

148. Ленинджер, А. Митохондрия /Пер. с англ. М.: Мир, 1966. - 316с.

149. Лилли, Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия / Пер с англ. М.: Мир, 1969. - 646 с.

150. Логинов, Д.Т. История РЖ. Эволюция насосов аппаратов РЖ (1848-1960) //Бюл. НЦССХ им. А.Н.Бакулева РАМН: тез докл. 8-го Всероссийского съезда серд-сосуд. хирургов. М., 2002 (18-22 ноября). - т. 3.- № 11.-С. 219.

151. Лойда, 3. Гистохимия ферментов /3. Лойда, Р. Госсрау, Т. Шиблер / Пер. с англ. М.: Мир, 1982. - 272 с.

152. Лопухин, Ю.М. Критерии жизнеспособности органов и тканей перед трансплантацией /Ю.М. Лопухин, Э.М. Коган М.: Медицина, 1975. -282 с.280

153. Лопухин, Ю.М. Ультраструктурные основы жизнеспособности печени, почек и сердца /Ю.М. Лопухин, Э.М. Коган, Я.Л. Караганов М.: Медицина, 1977. - 256 с.

154. Лукиных, Л.М. Влияние озонотерапии на гигиеническое состояние полости рта //Озон и методы эфферентной терапии в медицине: тез. докл. 3-й Всерос. научно-практ. конф. с междунар. участием. -Н.Новгород, 1998.-С. 132.

155. Лунец, Е.Ф. Состояние метаболических процессов в ткани головного мозга во время ишемии и в раннем постишемическом периоде /Е.Ф. Лунец, А.Н. Харламова //Постреанимационная патология мозга: материалы междунар. симпоз. М., 1978. - С. 58-63.

156. Луппа, X. Основы гистохимии / Пер. с англ. М.: Мир, 1980.344 с.

157. Лурье Г.О. Искусственное кровообращение. М.: МИА, 2002.

158. Лурье, Ю.Ю. Справочник по аналитической химии. М.: Химия, 1979.-С. 207.

159. Макова, З.С. Озонотерапия и иммунный статус у больных с анастомозитами после резекции желудка /З.С. Макова, H.A. Мизуров, В.Н. Григорьев //Нижегородский медицинский журнал. Озонотерапия, приложение. 2003. - С. 165.

160. Максимов, В.И. Функциональное состояние селезенки при проведении прямого механического массажа сердца : автореф. дис. . канд. мед. наук Томск, 1983. - 19 с.

161. Маргулис, М.С. Искусственное кровообращение и разработка методов, обеспечивающих адекватность при операциях на сердце. Экспериментально- клиническое исследование: дис. . докт. мед. наук -Москва, 1965.-326 с.

162. Маркелов, И.М. Кислотно-щелочное равновесие //Реаниматология. М.: Медицина, 1976. - С. 155-173.

163. Масютова, Г.Ф. О влиянии некоторых производных гуанилтиомочевины на высшую нервную деятельность крыс при ударных ускорениях /Г.Ф. Масютова, Ю.М. Громов //Повышение резистентности организма к экстремальным воздействиям. Кишинев, 1973. - С. 237-241.

164. Медведев, А.П. Изменение функции печени и почек при протезировании митрального клапана и осложненном течении282послеоперационного периода: автореф. дис. канд. мед. наук. Москва, 1981.-15 с.

165. Мензель, Д.В. Свободные радикалы в биологии / Пер. с англ. Т. 2.-М.: Мир, 1979.-328 с.

166. Метаболизм и ультраструктура миокарда при защите сердца от ишемии озонированным кардиоплегическим раствором /Б.А. Королев, Г.А. Бояринов, А.Н. Монахов и др. //Грудная хирургия. 1983. - № 5. - С. 27 -30.

167. Метелкин, Б.В. Опыт парентерального применения озонотерапии в наркологической практике //Озон и методы эфферентной терапии в медицине: тез. докл. 3-й Всерос. научно-практ. конф. с междунар. участием. -Н.Новгород, 1998.-С. 115-116.

168. Метелкин, Б.В. Применение озонотерапии в лечении наркомании (опийной) //Нижегородский медицинский ж-л. Приложение к НМЖ. Озон в биологии и медицине: материалы 6-й Всерос. науч.-практ. конф. (Н.Новгород, 21-23 сентября) Н. Новгород, 2005. - С. 116-117.

169. Механизмы влияния облучения ультрафиолетовыми лучами крови на организм человека и животных: сб. науч. тр. /Под ред. И.Е.Ганелиной, К.А.Самойловой. Л.: Наука, 1986. - 264 с.

170. Мочалов, О.Ю. Первый опыт применения полиоксифумарина при операциях на открытом сердце /О.Ю. Мочалов, В.В. Гриценко, Д.Н. Дойников //Тез. докл. 4 ВСССХ. М., 1998 (8-11 декабря). - С. 179.

171. Мусил, Я. Основы биохимии патологических процессов / Пер. с чешек. М.: Медицина, 1985. - 432 с.

172. Мусил, Я. Современная биохимия в схемах /Я. Мусил, О. Новакова, К. Кунц / Пер. с англ. М.: Мир, 1981. - 216 с.

173. Мухина, И.В. Влияние озонированного физиологического раствора на содержание нитритов/нитратов в плазме крови / И.В. Мухина, Е.В. Дудина, Е.Б. Манухина //Нижегородский медицинский ж-л.284

Информация о работе

Бояринова, Лариса Валентиновна
доктора биологических наук
Нижний Новгород, 2007
ВАК 03.00.13

Диссертация

Антигипоксическая защита организма собак гутимином при озонированном искусственном кровообращении - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы