Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Антигенная структура гемагглютинина подтипов H5 и H9 вируса гриппа A и фенотипические свойства их антигенных вариантов

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ильюшина, Наталия Александровна

Список сокращений.

Используемые в работе названия вирусов.

Таблица аминокислот.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Общее строение и характеристика вириона вируса гриппа А

1.2. Характеристика генома вируса гриппа. Функции вирусных белков вируса гриппа А.

1.2.1. Сегменты РНК 1, 2, 3. Гены, кодирующие Р-полипептиды

1.2.2. 5-ый сегмент РНК кодирует нуклеокапсидный белок.

1.2.3. 4-ый и 6-ой сегменты РНК кодируют соответственно белки гемагглютинин и нейраминидазу.

1.2.4.7-ой сегмент РНК кодирует матриксный белок М1 и трансмембранный белок М2.

1.2.5 8-й сегмент РНК кодирует неструктурный белок NS1 и белок ядерного экспорта NS2 (NEP).

1.3. Молекулярные основы антигенной изменчивости вируса гриппа А при эпидемическом процессе.

1.4. Картирование антигенных участков (сайтов) в трехмерной структуре гемагглютинина вируса гриппа А разных подтипов.

1.5. Влияние структурных изменений гемагглютинина вируса гриппа

А на его функциональные свойства.

1.6. Вирусы гриппа А подтипов Н5 и Н9, как возможные агенты будущих пандемий.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Экспериментальные методы.

2.1.1. Использованные в работе вирусы.

2.1.2 Адаптация вируса к репродукции в легких мышей.

2.1.3. Панель моноклональных антител (МКАТ).

2.1.4. Селекция еБсаре-мутантов.

2.1.5. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА).

2.1.6. Концентрация и очистка вируса.

2.1.7. Твердофазный иммуноферментный анализ (ТФИФА).

2.1.8. Определение сродства гемагглютинина к сиалосодержащим субстратам.

2.1.9. Титрование инфекционности вирусов на куриных эмбрионах.

2.1.10. Определение летального эффекта вирусов для мышей

2.1.11. Реакция нейтрализации инфекционности.

2.1.12. Метка белков 14С-гидролизатом хлореллы в зараженных клетках.

2.1.13. Электрофорез белков в полиакриламидном геле (ПААГ).

2.1.14. Радиоиммунопреципитационный анализ.

2.1.15. Выделение вирусной РНК.

2.1.16. Получение вирусной кДНК.

2.1.17. Полимеразная цепная реакция.

2.1.18. Электрофорез в агарозном геле.

2.1.19. Автоматическое секвенирование.

2.2. Программная обработка результатов. Анализ нуклеотидных последовательностей.

2.3. Статистическая обработка результатов. Вычисление ошибки эксперимента.

Глава 3. Результаты.

3.1. Анализ антигенной структуры гемагглютинина подтипа Н5.

3.1.1. Получение одиночных, двойных и тройных еБсаре-мутантов подтипа Н5.

3.1.2. Характеристика евсаре-мутантов подтипа Н5 в перекрестных иммунологических реакциях (РТГА и ТФИФА) с панелью моноклональных антител.

3.1.3. Секвенирование генов гемагглютинина еэсаре-мутантов подтипа Н5.

3.1.4. Построение трехмерной структуры гемагглютинина подтипа Н5.

3.1.5. Роль дополнительного сайта гликозилирования в блокировании связывания молекулы гемагглютинина с МКАТ

3.2. Анализ антигенной структуры гемагглютинина подтипа Н9.

3.2.1. Адаптация вируса А/8\¥те/Ног^ Ког^/9/98 (Н9Ы2) к репродукции в легких мышей.

3.2.2.Получение одиночных и двойных еэсаре-мутантов подтипа Н9.

3.2.3. Характеристика еэсаре-мутантов подтипа Н9 в перекрестных иммунологических реакциях (РТГА и ТФИФА) с панелью моноклональных антител.

3.2.4. Секвенирование генов гемагглютинина евсаре-мутантов подтипа Н9.

3.2.5. Построение трехмерной структуры НА подтипа Н9. Ю

3.3. Фенотипическая характеристика евсаре-мутантов подтипов

Н5 и Н9.

3.3.1. Вирулентность еэсаре-мутантов подтипов Н5 и Н9.

3.3.2. Аффинность гемагглютинина евсаре-мутантов подтипов Н и Н9 к сиалосодержащим субстратам.

Глава 4. Обсуждение.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Антигенная структура гемагглютинина подтипов H5 и H9 вируса гриппа A и фенотипические свойства их антигенных вариантов"

Вирус гриппа является одним из важнейших патогенных вирусов человека и животных, вызывающих широко распространенные заболевания и приводящих к высокой смертности. Вирус гриппа А способен вызывать пандемии. Поэтому он с момента выделения является объектом пристального изучения и к настоящему времени изучен более полно, чем вирусы типов В и С. Вирус гриппа А, в отличие от вирусов гриппа В и С, поражает многие виды млекопитающих и птиц и отличается весьма значительной вариабельностью. Особенно вариабельными являются поверхностные гликопротеины вириона, гемагглютинин (НА) и нейраминидаза (NA).

В настоящее время описаны 15 антигенных подтипов гемагглютинина (от HI до HI 5) и 9 подтипов нейраминидазы (от N1 до N9) вируса гриппа А. За последние 17 лет удалось обнаружить только два новых подтипа НА вируса гриппа А (Н14 и Н15) [118; 192], несмотря на интенсивный скрининг вирусов среди птиц, низших млекопитающих и людей [23; 144; 145]. Возможно, что этим не ограничивается многообразие подтипов гемагглютинина вируса гриппа А, наблюдаемое в природе. Разные подтипы вируса гриппа поражают свиней (HI и НЗ), лошадей (НЗ и Н7), тюленей (Н4 и Н7), норок (НЮ), чаек(Н13). Все подтипы, кроме Н13, циркулируют в популяции уток, одни постоянно (НЗ, Н4, Н6), другие периодически.

В человеческой популяции в настоящее время циркулируют вирусы гриппа А, гемагглютинины которых относятся к 2-м подтипам - HI и НЗ. Другие подтипы НА (Н2 и Н4-Н15) не представлены в человеческой популяции. Иммунитет, направленный против гемагглютинина, является наиболее важным фактором в защите от инфекции. Поэтому люди не имеют иммунной защиты против вирусов подтипов Н4 - HI5, а против вируса подтипа Н2 иммунную защиту имеют только лица старше 35 лет, так как подтип Н2 циркулировал с 1957 по 1968 гг. Вирус гриппа А любого подтипа, отсутствующего в человеческой популяции, может быть источником гена НА вирусов будущих пандемий [229].

В связи с этим следует отметить, что подтипы гемагглютинина Н5 и Н9 находятся в центре внимания исследователей после осени 1997 г., когда вирус гриппа А подтипа H5N1 (штамм A/Hong Kong/156/97) вызвал в Гонконге эпизоотию у кур и ограниченную вспышку заболевания у людей с высокой летальностью (гибель каждого третьего из 18 заболевших), обусловленную передачей вируса гриппа от кур к человеку [213]. В марте 1999 г. в Гонконге от 2 детей с респираторными симптомами были выделены вирусы подтипа H9N2 [170]. Таким образом, вирусы H5N1 и H9N2 могут обладать высокой для вирусов гриппа птиц способностью заражать человека. В связи с отсутствием у людей антител к НА Н5 и Н9, вирусы этих подтипов обладают потенциалом пандемических агентов.

Для всех подтипов гемагглютинина известна аминокислотная последовательность, но в остальном разные подтипы исследованы в разной степени. В связи с актуальностью проблемы гриппа человека для медицины наиболее детально исследованы подтипы HI и НЗ, в несколько меньшей степени - Н2, а также вызывающий эпизоотии у кур и индеек Н7. В отношении распределения антигенных участков (сайтов) в трехмерной структуре молекулы гемагглютинина надежные данные до недавнего времени имелись только для подтипа НЗ. По данным рентгеноструктурного анализа для этого подтипа в 1981 г. была получена трехмерная структура молекулы НА штамма A/Aichi/2/68 (H3N2) [241], с помощью которой было проведено операционное картирование антигенных сайтов на основе анализа аминокислотной последовательности НА дрейфовых вариантов НЗ и еБсаре-мутантов, устойчивых к моноклональным антителам (МКАТ) [129; 240]. В дальнейшем подробно была исследована локализация сайтов в структуре НА подтипа Н1 [43] и ориентировочно в структуре НАН5 [174]. В 2001 г. подобное исследование было осуществлено в отношении антигенной структуры гемагглютинина подтипа Н2 [218]. Поскольку во всех случаях использовали только трехмерную структуру НЗ, все полученные при этом антигенные карты, кроме карты НЗ, являются предварительными и дают лишь приближенное представление об антигенных эпитопах.

Выявленный у подтипов Н5 и Н9 потенциал инфекционности и вирулентности для человека делает весьма актуальным детальное исследование их антигенной структуры в связи с возможностью в будущем антигенного дрейфа в случае заноса Н5 или Н9 в человеческую популяцию с последующей постоянной циркуляцией. Недавно опубликованные работы, в которых на основе рентгеноструктурного анализа были построены модели трехмерной структуры НА подтипов Н5 и Н9 [90] и проведено их сравнение с трехмерной структурой НЗ [89], дают возможность адекватного антигенного картирования с использованием трехмерной структуры НА соответствующего подтипа.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы было выявление тонкой антигенной структуры гемагглютинина подтипов Н5 и Н9, наиболее актуальных в качестве компонентов возможного пандемического варианта вируса гриппа А.

Для достижения этой цели предстояло решить ряд задач:

1. Получить мутанты вирусов подтипов Н5 и Н9, резистентные к моноклональным антителам (еБсаре-мутанты), и определить их перекрестную реактивность с МКАТ.

2. Провести секвенирование генов гемагглютинина всех еэсаре-мутантов для определения локализации мутаций, определяющих их устойчивость к моноклональным антителам.

3. На основании этих данных картировать антигенные сайты в трехмерной структуре гемагглютинина с использованием опубликованных трехмерных моделей гемагглютинина Н5 и Н9.

4. Провести исследование влияния аминокислотных замен еБсаре-мутантов вируса гриппа А подтипов Н5 и Н9 на их фенотипические свойства, включая вирулентность и сродство к сиалосодержащим субстратам.

Научная новизна и практическая ценность работы

Построены антигенные карты гемагглютинина вируса гриппа А подтипов Н5 и Н9 на основании данных иммунологической характеристики 17 евсаре-мутантов подтипа Н5 и 20 еэсаре-мутантов подтипа Н9 в перекрестных реакциях с моноклональными антителами и секвенирования мутантных генов НА. Впервые продемонстрирована четкая корреляция между различиями в трехмерной структуре молекулы гемагглютинина и распределением в ней антигенных сайтов у разных подтипов.

Установлено соответствие между появлением дополнительного сайта гликозилирования в структуре НА подтипов Н5 и Н9 и изменением фенотипических свойств вируса гриппа, в том числе вирулентности.

Выявлены изменения рецепторной специфичности еБсаре-мутантов подтипа Н5, связанные с распознаванием рецетор-связывающим сайтом гемагглютинина вируса гриппа не только сиалил-(2,3)-галактозной связи, но и более дистальных участков рецепторной молекулы. При этом различия сиаловых субстратов, распознаваемые гемагглютинином евсаре-мутантов, соответствуют различиям в составе рецепторов на хозяйских клетках.

Представленные результаты указывают на корреляцию между сниженной вирулентностью и низким сродством к сиалосодержащим субстратам у еБсаре-мутантов подтипа Н9. Данные по аффинности НА Н9 к сиаловым субстратам демонстрируют сдвиг в рецепторной специфичности евсаре-мутантов с заменой Ь226<5 к рецепторам "птичьего" типа.

Изучение антигенной структуры НА Н5 и Н9, проведенное в настоящей работе, вносит существенный вклад в развитие представлений об соотношении антигенной специфичности и структурной вариабельности данных вирусов.

Поскольку вирусы гриппа А подтипов Н5 и Н9 могут рассматриваться в качестве вероятного источника гена гемагглютинина для возможного высоковирулентного пандемического штамма, исследования вирусов этих подтипов актуальны в медицинском аспекте. Ценность полученных данных обусловлена тем вкладом, который она вносит в понимание молекулярных основ патогенного и эпидемического потенциала вирусов гриппа А подтипов Н5 и Н9, как вероятных агентов будущей пандемии.

Положения, выносимые на защиту:

1. Существуют особенности в расположении антигенных сайтов гемагглютинина у вирусов разных подтипов, выявляемые при антигенном картировании с использованием соответствующих трехмерных структур молекул гемагглютинина.

2. В соответствии с различиями в трехмерной структуре распределение аминокислотных позиций в антигенных сайтах гемагглютинина вируса гриппа разных подтипов может резко отличаться от распределения антигенно значимых позиций у других подтипов, исследованных к настоящему времени. Аминокислотные позиции, принадлежащие к одному и тому же сайту в гемагглютининах одних подтипов, могут соответствовать разным антигенным сайтам у других подтипов НА.

3. Совпадение позиций аминокислотных замен у ряда езсаре-мутантов подтипа Н5 с заменами дрейфовых вариантов подтипа Н2 указывает на вероятную роль антигенных сайтов, выявленных в диссертационной работе, при дрейфе в случае заноса вирусов подтипов Н5 или Н9 в человеческую популяцию.

4. Аминокислотные замены у ряда еэсаре-мутантов подтипов Н5 и Н9 способны оказывать плейотропный эффект на их фенотипические свойства, такие как аффинность гемагглютинина к сиалосодержащим аналогам рецепторов хозяйских клеток и/или вирулентность. При этом у одних и тех же еэсаре-мутантов может наблюдаться четкая корреляция между изменениями разных фенотипических свойств.

5. С помощью детального картирования антигенных сайтов гемагглютинина подтипов Н5 и Н9, впервые проведенного в диссертационной работе с использованием трехмерной структуры гемагглютининов соответствующих подтипов, создана основа для структурного анализа эволюционных изменений вирусов этих подтипов, являющихся вероятными агентами будущих пандемий.

Считаю своим приятным долгом выразить глубокую и искреннюю благодарность моему научному руководителю, заведующему лабораторией физиологии вирусов ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, член-корреспонденту РАМН, профессору Каверину Н.В. за предоставленную тему диссертационной работы и за постоянную и всестороннюю помощь, оказанную в процессе моих исследований. Сердечно благодарю кандидата биологических наук Рудневу H.A. за ценные обсуждения, сотрудничество и неоценимую помощь в работе. Искренне благодарю кандидата биологических наук Гамбарян A.C. за помощь и ценные замечания при проведении экспериментов, связанных с определением сродства гемагглютинина к сиалосодержащим субстратам. Выражаю признательность доктору биологических наук Варич H.JL, а также остальным сотрудникам лаборатории физиологии вирусов за дружеское отношение и поддержку в ходе научной работы.

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Ильюшина, Наталия Александровна

Выводы

1. Антигенное картирование гемагглютинина вирусов гриппа А подтипов Н5 и Н9, впервые проведенное с использованием трехмерной структуры молекул гемагглютинина Н5 и Н9, выявило ряд особенностей в распределении антигенных участков гемагглютинина у вирусов разных подтипов.

2. Антигенно значимые аминокислотные замены, выявленные в гемагглютинине еБсаре-мутантов вируса гриппа А/Ма11агс1/Репп8у1уата/10218/84 (Н5Ш) группируются в трех участках полипептидной цепи (позиции 129-133, 140-145 и 156-157).

3. В трехмерной структуре молекулы гемагглютинина аминокислотные замены у еБсаре-мутантов подтипа Н5 образуют два антигенных участка (сайта), один из которых соответствует сайту А в гемагглютинине подтипа НЗ, а другой частично соответствует сайту В у НЗ, но включает дополнительный участок, перекрывающийся с сайтом 8а подтипа Н1 и с антигенной зоной 1-С у подтипа Н2.

4. Распределение аминокислотных позиций в антигенных сайтах гемагглютинина вируса гриппа подтипа Н9 (штамм А/8"\уте/Ноп§ Коп£/9/98) резко отличается от распределения антигенно значимых позиций у других подтипов, исследованных к настоящему времени, что соответствует различиям в трехмерной структуре. Два антигенных сайта гемагглютинина подтипа Н9 частично перекрываются, причем перекрывающаяся зона включает аминокислотные позиции 133, 135, 189 и 198, а два не перекрывающихся участка - позиции157 и 162 в одном участке и позиции 145, 193 и 226 в другом. В каждый из двух сайтов подтипа Н9 входят аминокислотные позиции, не принадлежащие к одному и тому же сайту в гемагглютининах других подтипов.

5. Аминокислотные замены у ряда escape-мутантов подтипов Н5 и Н9 обладают плейотропным эффектом, влияя на аффинность гемагглютинина к сиаловым рецепторам и/или на вирулентность вируса для мышей.

6. Вариации аффинности гемагглютинина к высокомолекулярным сиаловым субстратам у escape-мутантов проявляются либо в резком изменении специфичности взаимодействия, либо в частичном усилении или ослаблении аффинности к тому или иному субстрату. Снижение вирулентности escape-мутантов подтипа Н9 для мышей коррелирует со снижением аффинности гемагглютинина к сиалосодержащим субстратам. У низковирулентных escape-мутантов подтипа Н5 наблюдается как снижение, так и повышение аффинности к сиаловым субстратам, но отмечается четкая обратная корреляция между вирулентностью и чувствительностью к ингибиторам гемагглютинации в нормальной сыворотке мышей.

7. Позиции аминокислотных замен у ряда escape-мутантов подтипа Н5 (131, 144, 156, 157 и 189) совпадают с заменами у дрейфовых вариантов подтипа Н2, что указывает на вероятную роль описанных антигенных сайтов при дрейфе в случае появления вирусов Н5 или Н9 в человеческой популяции.

8. Детальный анализ антигенных сайтов гемагглютинина подтипов Н5 и Н9, впервые проведенный в диссертационной работе с использованием кристаллографической и пространственной структуры гемагглютининов соответствующих подтипов (а для НА Н9 вообще впервые), создает основу для структурного анализа эволюционных изменений вирусов этих подтипов, являющихся вероятными агентами будущих пандемий.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ильюшина, Наталия Александровна, Москва

1. Ашмарин И.П. Вычисление LD50 при малом числе подопытных животных. //ЖМЭИ. 1959. - Т.2. - С. 102.

2. Бессмертный B.C., Ткачева М.Н. Статистические методы в эпидемиологии. // Гос. Издат. Мед. Лит. 1961.

3. Бэйли Н. Математика в биологии и медицине. // М: Мир. 1970.

4. Гамбарян A.C., Ямникова С.С., Львов Д.К., Робертсон Д.С., Вебстер Р.Г., Матросович М.Н. Сравнение рецепторной специфичности вирусов гриппа А, выделенных от уток, кур и человека. // Молекул, биол. -2002. Т.36. - С.542-549.

5. Говоркова Е.А., КизинаА.А., Крылов В.Ф., Смирнов Ю.А. Уровень иммунитета населения к вирусам гриппа А с гемагглютинином подтипа H2N2. // ЖМЭИ. 1993. - Т.6. - С.58-59.

6. Говоркова Е.А., Смирнов Ю.А. Молекулярные основы и механизмы адаптации вирусов гриппа к репродукции в легких мышей. // Вопр. Вирусол. -2000. -Т.45. С.4-10.

7. Иванова В.Т., Бурцева Е.И., Оскерко Т.А., Колобухина JI.B., Слепушкин А.Н. Изменчивость и особенности распространения вируса гриппа А (H1N1) в период 1990-1998 гг. // Вопр. Вирусол. 2000. - Т.5. - С. 18-22.

8. Иванова В.Т., Бурцева Е.И., Слепушкин А.Н., Оскерко Т.А., Вартанян Р.В. Изменчивость гемагглютинина штаммов вируса гриппа А (H3N2), изолированных в России с 1989 по 1999 г. // Вопр. Вирусол. 2000. -Т.З. - С.28-31.

9. Каверин Н.В., Смирнов Ю.А. Межвидовая трасмиссия вирусов гриппа А и проблема пандемий. // Вопр. Вирусол. 2003. - Т.48. - С.4-10.

10. Руднева И.А., Гительман А.К., Каверин Н.В., Харитоненков И.Г., Жданов В.М. Антигенные вариации вируса гриппа А при смене хозяина. // Мол. генет., микробиол. и вирусол. 1984. - Т.8. - С.37-41.

11. Смирнов Ю.А., Липатов A.C., Окуно И., Гительман А.К. Общий антигенный эпитоп в гемагглютинине вирусов гриппа А (HI, Н2, Н5, Н6). // Вопр. Вирусол. 1999. - Т.44. - С.111-115.

12. Соколов Б.П., Руднева H.A. Изучение изменчивости белков вируса гриппа А. // Вопр. Вирусол. 1981. - Т.4. - С.471-477.

13. Феннер Ф., Мак-Ослен Б., Миме С., Сэмбрук Дж., Уайт Д. Биология вирусов животных. // М: Мир. 1977. - Т.1. - С. 447.

14. Шилов A.A., Руднева И.А., Обросова-Серова Н.П., Жданов В.М. Генетическая изменчивость вируса гриппа в процессе адаптации к новому хозяину. // Доклады Акад. Наук СССР. 1984. - Т.274. - С. 1217-1220.

15. Шилов A.A., Руднева И.А., Обросова-Серова Н.П., Чайка О.В., Синицын Б.В., Жданов В.М. Генетическая изменчивость вируса гриппа человека в процессе адаптации к мышам. // Вопр. Вирусол. 1984. - Т.4. -С.410-417.

16. Шилов A.A., Синицын Б.В., Руднева И.А. Роль гемагглютинина в процессе адаптации вируса гриппа к новому хозяину и приобретении им вирулентных свойств. // Доклады Акад. Наук СССР. 1991. - Т.4. - С.995-998.

17. Ямникова С.С., Мясникова И.А. Циркуляция вирусов гриппа на территории СССР (1980-1981 гг.). // Экология вирусов. 1982. - С.119-123.

18. Atay S., Schulze LT. Single aminoacid substitution in the hemagglutinin can alter the host and receptor binding properties of HI strains of influenza A viruses. // J.Virol. 1991. - V.87.- P.3022-3028.

19. Austin F.J., KawaokaY., Webster R.G. Molecular analysis of the hemagglutinin gene of an avian H1N1 influenza virus. // J.Gen.Virol. 1990. -V.71. - P.2471-2474.

20. Austin F.J., Webster R.G. Antigenic mapping of an avian HI influenza virus haemagglutinin and interrelationships of HI viruses from humans, pigs and birds. // J.Gen.Virol. 1986. - V.67. - P.983-992.

21. Baigent S.J., McCauley J.W. Glycosylation of haemagglutinin and stalk-length of neuraminidase combine to regulate the growth of avian influenza viruses in tissue culture. // Vir.Res. 2001. - V.79. - P. 177-185.

22. Baudun F., Bach C., Cusack S., Ruiqrok R.W., Structure of influenza virus RNP. I. Influenza virus nucleoprotein mel secondary structure in panhandle RNA and exposes the bases to tl solvent. // EMBO J. 1994. - V.3. - P.3158-3165.

23. Beard C.W., Brugh M., Webster R.G. Emergence of amantadine-resistant H5N2 avian influenza virus during a simulated layer flock treatment program. //Avian. Dis. 1987. - V. 119. - P.533-537.

24. Beaton A.R., Krug R.M. Transcription antitermination during influenza viral template RNA synthesis requires the nucleocapsid protein and the absence of a 5'capped end. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 1986. - V.83. - P.6282-4286.

25. BergmannM., Garcia-Sastre A., Carnero E., Pehamberger H., Wolff K., Palese P., Muster T. Influenza virus NS1 protein counteracts PKR-mediated inhibition of replication. // J.Virol. 2000. - V.74. - P.6203-6206.

26. Both G.W., Sleigh M.J. Conservation and variation in the hemagglutinins of Hong Kong subtype influenza viruses during antigenic drift. // J.Virol. 1981. - V.39. - P.663-672.

27. Both G.W., Sleigh M.J., CoxN.J., Kendal A.P. Antigenic drift in influenza virus H3 hemagglutinin from 1968 to 1980: multiple evolutionary pathways and sequential amino acid changes at key antigenic sites. // J.Virol. -1983. V.48. -P.52-60.

28. Bouloy M., Plotch S.J., Krug R.M. Globin mRNAs are primers for the transcription of influenza viral RNA in vitro. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 1978. -V.75. - P.4886-4890.

29. Boya P., Roques B., Kroemer G. New EMBO member's review: viral and bacterial proteins regulating apoptosis at the mitochondrial level. // EMBO J. -2001. V.20. - P.4325-4331.

30. Brand C.M., Skehel J.J., Crystalline antigen from the influenza virus envelope. //Nat.New.Biol. 1972. - V.238. - P.145-147.

31. Brown C.C., Olander H.J., Senne D.A. A pathogenesis study of highly pathogenic avian influenza virus H5N2 in chickens, using immunohistochemistry. // J.Comp.Pathol. 1992. - V.107. - P.341-348.

32. Capua I, Alexander D.J. Avian influenza and human health. // Acta Trop. 2002. - V.83. - P. 1-6.

33. Castrucci M.R., Kawaoka Y. Biologic importance of neuraminidase stalk length in influenza A virus. // J.Virol. 1993. - V.67. - P.759-764.

34. Castrucci M.R., Kawaoka Y. Reverse genetics system for generation of an influenza A virus mutant containing a deletion of the carboxyl-terminal residue of M2 protein. // J.Virol. 1995. - V.69. - P.2725-2728.

35. Caton A.J., Browlee G.G., Yewdell J.W., Gerhard W. The antigenic structure of the influenza virus A/PR/8/34 hemagglutinin (HI subtype). // Cell. -1982. V.31. -P.417-427.

36. Centers for disease control and prevention. Isolation of avian influenza A (H5N1) viruses from humans Hong Kong, 1997-1998. // Morb.Mortal.Week.Rep.- 1998. V.46. - P.1245-1247.

37. Claas E.J., Osterhaus A.E., BeekR., Jong J.C., Rimmelzwaan G.F., Senne D.A., Krauss S., Shortridge K.F., Webster R.G. Human influenza A H5N1 virus related to a highly pathogenic avian influenza virus. // Lancet. 1998. - V.351.- P.472-477.

38. Colman P.M. Influenza virus neuraminidase: enzyme and antigen. // The Influenza Viruses. 1989. - P. 175-218.

39. Compans R.W., Content J., Duesberg P.H. Structure of the ribonucleoprotein in influenza virus. // J.Virol. 1972. - V.10. - P.795-800.

40. Connor R.J., KawaokaY., Webster R.G., Paulson J.C. Receptor specificity in human, avian, and equine H2 and H3 influenza virus isolates. // Virology. 1994. - V.205. - P. 17-23.

41. Cox N.J., Bender C. The molecular epidemiology of influenza viruses. // Virology. 1995. - V.6. - P.359-370.

42. Cox N.J., XuX., Bender C. Evolution of haemagglutinin in epidemic variants and selection of vaccine viruses. // Options for the Control of Influenza Virus II. 1993. -P.223-230.

43. Davies W.L., GrunertR.R., HaffR.F. Antiviral activity of 1-adamantanamine (amantadin). // Science. 1964. - V.144. - P.862-863.

44. Deom C.M, Caton A.J., Schulze I.T. Host cell-mediated selection of a mutant influenza A virus that has lost a complex oligosaccharide from the tip of the hemagglutinin. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 1986. - V.83. - P.3771-3775.

45. Duff K.C., Gilchrist P.J., Saxena A.M., Bradshaw J.P. Neutron diffraction reveals the site of amantadine blockade in the influenza A M2 ion channel. // Virology. 1994. - V.202. - P.287.

46. Dybing J.K., Schultz-Cherry S., Swayne D.E., Suarez D.L., Perdue M.L. Distinct pathogenesis of Hong Kong-origin H5N1 viruses in mice compared to that of other highly pathogenic H5 avian influenza viruses. // J.Virol. -2000. V.74. -P.1443-1450.

47. Eisen M.B., Sabesan S., Skehel J.J., Wiley D.C. Binding of the influenza A virus to cell-surface receptors: structures of five hemagglutinin-sialoligosaccharide complexes determined by X-ray crystallography. // Virology.1997. V.232. -P.19-31.

48. Els M.C., Air G.M., Murti K.G., Webster R.G., LaverW.G. An 18 amino acid deletion in an influenza neuraminidase. // Virology. 1985. - V.142. -P.241-248.

49. Fang R., Min Jou W., Huylebroeck D., Devos R., Fiers W. Complete structure of A/Duck/Ukraine/63 influenza hemagglutinin gene: animal virus as progenitor of human H3 Hong Kong 1968 influenza hemagglutinin. // Cell. 1981. -V.25. - P.315-323.

50. Fanning T.G., Reid A.H., Taubenberger J.K. Influenza A virus neuraminidase: regions of the protein potentially involved in virus-host interactions. // Virology. 2000. - V.276. - P.417-423.

51. Fields S., Winter G., Brownlee G.G. Structure of the neuraminidase gene in human influenza virus A/PR/8/34. // Nature. 1981. - V.290. - P.213-217.

52. Fleury D., Wharton S.A., Skehel J.J., Knossow M., Bizebard T. Antigen distortion allows influenza virus to escape neutralization. // Nat. Struct. Biol.1998. V.5. -P.l 19-123.

53. Gambaryan A.S., Matrosovich M.N. A solid-phase enzyme-linked assay for influenza virus receptor-binding activity. // J.Virol.Meth. 1992. - V.39. -P.111-123.

54. Gambaryan A.S., Webster R.G., Matrosovich M.N. Differences between influenza virus receptors on target cells of duck and chicken. // Arch. Virol. 2002. -V.147. - P.1197-1208.

55. GaoP., WatanabeS., Ito T., Goto H., Wells K., McGregor M., Cooley A.J., Kawaoka Y. Biological heterogeneity, including systemic replication in mice, of H5N1 influenza A virus isolates from humans in Hong Kong. // J.Virol. -1999. V.73. - P.3184-3189.

56. Garcia-Sastre A. Influenza A virus lacking the NS1 gene replicates in interferon-deficient systems. // Virology. 1998. - V.252. - P.324-330.

57. Gibbs M.J., Armstrong J.S., Gibbs A.J. Recombination in the hemagglutinin gene of the 1918 "Spanish" flu. // Science. 2001. - V.293. - P. 18421845.

58. Gitelman A.K., Kaverin N.V., Kharitonenkov I.G., Rudneva I.A., Zhdanov V.M. Antigenic changes in mouse-adapted influenza virus strains. // Lancet. 1983. - V.8338. - P.1229.

59. Gitelman A.K., Kaverin N.V., Kharitonenkov I.G., Rudneva I.A., Zhdanov V.M. Changes in the antigenic specificity of influenza hemagglutinin in the course of adaptation for mice. // Virology. 1984. - V.134. - P.230-232.

60. Gomez-Puertas P., Albo C., Peres-Pastrana E., Vivo A., Portela A. Influenza virus matrix protein in the major driving force in virus budding. // J.Virol. -2000. -V.74. P. 11538-11547.

61. Gorman O.T., Bean W.J., Kawaoka Y., Webster R.G. Evolution of the nucleoprotein gene of influenza A virus. // J.Virol. 1990. - V.64. - P. 1487-1497.

62. Goto H., Kawaoka Y. A novel mechanism for the acquisition of virulence by a human influenza A virus. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 1998. - V.95. -P. 10224-10228.

63. Goto H., Wells K., Takada A., Kawaoka Y. Plasminogenbinding activity of neuraminidase determines the pathogenicity of influenza A virus. // J.Virol. -2001. V.75. - P.9297-9301.

64. Gottshalk A. The chemistry of virus reseptor. // The viruses. 1959. -P.51-61.

65. Griffin J.A., Compans R.W. Effect of hexose starvation and the role of sialic acid in influenza virus release. // Virology. 1983. - V. 125. - P.324-334.

66. GuanY., Shortridge K.F., Krauss S., Webster R.G. Molecular characterization of H9N2 influenza viruses: were they the donors of the "internal" genes of H5N1 viruses in Hong Kong? // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 1999. - V.96. - P.9363-9367.

67. Gunter I., Glatthaar B., Doler G., Garten W. A HI hemagglutinin of a human influenza A virus with a carbohydrate-modulated receptor binding site and unusual cleavage site. // Vir. Res. 1993. - V.27. - P.147-160.

68. GuoY., WangM., Kawaoka Y., Gorman O., Ito T., Saito T., Webster R.G. Characterization of the a new avian-like influenza A virus from horses in China. // Virology. 1992. - V.188. - P.245-255.

69. HaY., Stevens D.J., Skehel J.J., Wiley D.C. H5 avian and H9 swine influenza virus hemagglutinin structures: possible origin of influenza subtypes. // EMBO J. 2002. - V.21. - P.865-875.

70. Ha Y., Stevens D.J., Skehel J.J., Wiley D.C. X-ray structures of H5 avian and H9 swine influenza virus hemagglutinins bound to avian and human receptor analogs. //Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 2001. - V.98. - P. 11181-11186.

71. HatadaE., Fukuda R. Binding of influenza A virus NS1 protein to dsRNA in vitro. // J.Gen.Virol. 1992. - V.73. - P.3325-3329.

72. Hatada E, Saito S., Fukuda R., Mutant influenza viruses with a detective NS1 protein cannot block the activation of PKR in infected cells. // J.Virol. 1999. - V.73. - P.2425-2433.

73. Hatta M., Gao P., HalfmanP., KawaokaY. Molecular basis for high virulence of Hong Kong H5N1 influenza A viruses. // Science. 2001. - V.293. -P. 1840-1842.

74. Hay A.J., Kennedy N.C., Skehel J.J., Appleyard G. The matrix protein gene determines amantadine-sensitivity of influenza viruses. // J.Gen.Virol. 1979. -V.42. - P.189-191.

75. Hinshaw V.S., Bean W.J., Webster R.G., Sriram G. Genetic reassortment of influenza A viruses in the intestinal tract of ducks. // Virology. 1980. - V.102. -P.412-419.

76. Hinshaw V.S., Webster R.G., Naeve C.W., Murphy B.R. Altered tissue tropism of human-avian reassortant influenza viruses. // Virology. 1983. - V.128. -P.260-263.

77. Hiti A.R., David A.R., NayakD.P. Complete sequence analysis shows that the hemagglutinins of the HO and H2 subtypes of human influenza virus are closely related. //Virology. 1981. - V.l 11. - P.l 13-124.

78. Horimoto T., Kawaoka Y. Pandemic threat posed by avian influenza A viruses. // Clin.Microbiol.Rev. 2001. - V.14. - P.129-149.

79. Horimoto T., Kawaoka Y. Reverse genetics provides direct evidence for a correlation of hemagglutinin cleavability and virulence of avian influenza A virus. // J.Virol. 1994. - V.68. - P.3120-3128.

80. Huang R.T., WahnK., KlenkH.D., RottR. Fusion between cell membrane and liposomes containing the glycoproteins of influenza virus. // Virology. 1980. - V.104. - P.294-302.

81. Huddleston J.A., Brownlee G.G. The sequence of the nucleoprotein gene of human influenza A virus, strain A/NT/60/68. // Nucleic.Acids.Res. 1982. -V.10. -P.1029-1038.

82. Ito T., KidaH., YanagawaR. Antigenic analysis of H4 influenza virus isolates using monoclonal antibodies to defined antigenic sites on the hemagglutinin of A/Budgerigar/Hokkaido/1 /77 strain. // Arch.Virol. 1985. - V.84. - P.251-259.

83. Jackson D.C., Nestorowicz A. Antigenic determinants of influenza virus haemagglutinin. // Virology. 1985. - V.145. - P.72-83.

84. Jayakar H.R., Murti K.G., WhittM.A. Mutations in the PPPY motif of vesicular stomatitis virus matrix protein reduce virus budding by inhibiting a late step in virion release. // J.Virol. 2000. - V.74. - P.9818-9827.

85. Jennings P.A., Finch J.T., Winter G., Robertson J.S. Does the higher order structure of the influenza virus ribonucleoprotein guide sequence rearrangements in influenza viral RNA? // Cell. 1983. - V.34. - P.619-627.

86. Kato N., Eggers H.J. Inhibition of uncoating of fowl plague virus by 1-adamantanamine hydrochloride. // Virology. 1969. - V.37. - P.632-641.

87. Katz J.M., LuX., Tumpey T.M., Smith C.B., Shaw M.W., Subbarao K. Molecular correlates of influenza A H5N1 virus pathogenesis in mice. // J.Virol. -2000. V.74. - P.10807-10810.

88. Katz J.M., Naeve C.W., Webster R.G. Host cell-mediated variation in H3N2 influenza viruses. // Virology. 1987. - V.156. - P.386-395.

89. Katz J.M., Webster R.G. Amino acid sequence identity between the HA1 of influenza A(H3N2) viruses grown in mammalian and primary chick kidney cells. // J.Gen.Virol. 1992 - V.73. - P. 1159-1165.

90. KawaokaY., Krauss S., Webster R.G. Avian-to-human transmission of the PB1 gene of influenza A viruses in the 1957 and 1968 pandemics. // J.Virol. -1989. V.63. - P.4603-4608.

91. Kawaoka Y., Naeve C.W., Webster R.G. Is virulence of H5N2 influenza viruses in chickens associated with loss of carbohydrate from the hemagglutinin? // Virology. 1984. - V.139. - P.303-316.

92. Kawaoka Y., Webster R.G. Interplay between carbohydrate in the stalk and the length of the connecting peptide determines the cleavability of influenza virus hemagglutinin. // J.Virol. 1989. - V.63. - P.3296-3300.

93. Kawaoka Y., Webster R.G. Sequence requirements for cleavage activation of influenza virus hemagglutinin expressed in mammalian cells. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 1988. - V.85. - P.324-328.

94. Kawaoka Y., Yamnikova S., Chambers T.M., Lvov D.K., Webster R.G., Molecular characterization of a new hemagglutinin, subtype HI4, of influenza A virus. // Virology. 1990. - V.179. - P.759-767.

95. KellW., Niemann H., Schwars R.T., KlenkH.D. Carbohydrates of influenza virus. V. Oligosaccharides attached to individual glycosylation sites of the hemagglutinin of fowl plaque virus. // Virology. 1984. - V. 133. - P.77-91.

96. Khatchikian D., Orlich M., RottR. Increased viral pathogenicity after insertion of a 28S ribosomal RNA sequence into the hemagglutinin gene of an influenza virus. //Nature. 1989. - V.340. - P. 156-157.

97. KidaH., Brown L.E., Webster R.G. Biological activity of monoclonal antibodies to operationally defined antigenic regions on the hemagglutinin molecule of A/Seal/Massachusetts/1/80 (H7N7) influenza virus. // Virology. 1982. - V.122. - P.38-47.

98. KidaH., Ito T., YasudaJ., ShimizuY., Itakura C., Shortridge K.F., Kawaoka Y., Webster R.G. Potential for transmission of avian influenza viruses to pigs. // J.Gen.Virol. 1994. - V75. - P.2183-2188.

99. Kilbourne E.D. Influenza. // Plenum Press: New York. 1987.

100. Klenk H.D., Garten W. Host cell proteases controlling virus pathogenicity. // Trends. Microbiol. 1994. - V.2. - P.39-43.

101. KlenkH.D., RottR. The molecular biology of influenza virus pathogenicity. // Adv.Vir.Res. 1988. - V.34. - P.247-281.

102. Klenk H.D., RottR., Orlich M., Blodorn J. Activation of influenya A viruses by trypsin treatment. // Virology. 1975. - V.68. - P.426-439.

103. KlenkH.D., Wagner R., Heuer D., Wolff T. Importance of hemagglutinin glycosylation for the biological functions of influenza virus. // Vir.Res. 2002. - V.82. - P.73-75.

104. Klimov A.I., Bender C.A., Hall H.E., Cox N.J. Evolution of human influenza A (H2N2) viruses. // Elsevier Science B.V. 1996. - P.546-552.

105. Knossow M., Daniels R.S., Douglas A.R., Skehel J.J., Wiley D.C. Three-dimensional structure of an antigenic mutant of the influenza virus haemagglutinin. //Nature. 1984. - V.311. - P.678-680.

106. Kolakofsky D., OrtinJ. Negative strand RNA viruses come of age. //New Biol. 1991. - V.3. - P.754-758.

107. KrugR.M. Priming of influenza viral RNA transcription by capped heterologous RNAs. // Curr.Top.Microbiol.Immunol. 1981. - V.93. - P. 125-149.

108. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. // Nature. V.227. - 1970. - P.680-685.

109. Lamb R.A. The influenza virus RNA segments and their encoded proteins. // Genetic of Influenza Viruses Ed. P. Palese, D.W. Kingsbury, SpringerVerlag: Vienna. 1983. - P.21-69.

110. Lamb R.A., Choppin P.W. Identification of a second protein (m2) encoded by RNA segment 7 of influenza virus. // Virology. 1981. - V.112. -P.727-737.

111. Laver W.G. Crystallization and peptide maps of neuraminidase "heads" from H2N2 and H3N2 influenza virus strains. // Virology. 1978. - V.86. - P.78-87.

112. Laver W.G., Air G.M., Webster R.G., Markoff L.J. Amino acid sequence changes in antigenic variants of type A influenza virus N2 neuraminidase. // Virology. 1982. - V.122. - P.450-460.

113. Lazarowitz S.G., ChoppinP.W. Enhancement of the infectivity of influenza A and B viruses by proteolytic cleavage of the hemagglutinin polypeptide. // Virology. 1975. - V.68. - P.440-454.

114. Li S., Schulman J., Itamura S., Palese P. Glycosylation of neuraminidase determines the neurovirulence of influenza A/WSN/33 virus. // J.Virol. 1993. -V.67. - P.6667-6673.

115. Lu X.H., Tumpey T.M., Morken T., Zaki S.R., CoxN.J., Katz J.M. A mouse model for the evaluation of pathogenesis and immunity to influenza A (H5N1) viruses isolated from humans. // J.Virol. 1999. - V.73. - P.5903-5911.

116. Lu Y., Qian X. Y., Krug R.M. The influenza virus NS1 protein: a novel inhibitor oh pre- mRNA splicing. // Genes Dev. 1994. - V.8. - P. 1817-1828.

117. Lvov D.K. Influenza A viruses a sum of populations with a common protected gene pool. // Sov.Med.Rev.Virol. - 1987. - V.2. - P. 15-37.

118. Lvov D.K., Zhdanov V.M. Circulation of influenza virus genes in the biosphere. // Sov.Med.Rev.Virol. 1987. - V.l. - P. 129-152.

119. Lvov D.K., Zhdanov V.M. Persistence of genes of epidemical influenza viruses in natural populations in the USSR. // Sov.Med.Rev.Virol. 1983. - V.61. -P.83-91.

120. Martin J., Wharton S.A., LinY.P., Takemoto D.K., Skehel J.J., Wiley D.C., Steinhauer D.A. Studies of the binding properties of influenza hemagglutinin receptor-site mutants. // Virology. 1998. - V.241. - P. 101-111.

121. Martin K., Helenius A. Nuclear transport of influenza virus ribonucleoproteins: the viral matrix protein (Ml) promotes export and inhibits import. //Cell. 1991,-V.67.-P. 117-130.

122. Massin P., Van der VefS., NaffakhN. Residue 627 of PB2 is a determinant of cold sensitivity in RNA replication of avian influenza viruses. // J.Virol. 2001. - V.75. - P.5398-5404.

123. Matrosovich M.N., Krauss S., Webster R.G. H9N2 influenza A viruses from poultry in Asia have human virus-like receptor specificity. // Virology. 2001. - V.281. - P.156-162.

124. Matrosovich M.N., Miller-Podraza H., Teneberg S., Robertson J., Karlsson K.-A. Influenza viruses display high-affinity binding to human plyglycosylceramides represented on a solid-phase assay surface. // Virology. -1996. V.223. - P.413-416.

125. Matrosovich M.N., ZhouN., Kawaoka Y., Webster R. The surface glycoproteins of H5 influenza viruses isolated from humans, chickens, and wild aquatic birds have distinguishable properties. // J.Virol. 1999. - V.73. - P.1146-1155.

126. Medeiros R., EscriouN., NaffakhN., Manuguerra J.C., WerfS. Hemagglutinin residues of recent human A(H3N2) influenza viruses that contribute to the inability to agglutinate chicken erythrocytes. // Virilogy. 2001. - V.289. -P.74-85.

127. MukaigawaJ., NayakD.P. Two signals mediate nuclear localization of influenza virus (A/WSN/33) polymerase basic protein 2. // J.Virol. 1991. - V.65. -P.245-253.

128. Murti K.G., Webster R.G., Jones I.M. Localization of RNA polymerases on influenza viral ribonucleoproteins by immunogold labeling. // Virology. 1988. -V.164. - P.562-566.

129. NaeveC.W., HinshawV.S., Webster R.G. Mutations in the hemagglutinin receptor-binding site can change the biological properties of an influenza virus. // J.Virol. 1984. - V.51. - P.567-569.

130. Nakajima K., Desselberger U., Palese P. Recent human influenza A (H1N1) viruses are closely related genetically to strains isolated in 1950. // Nature. -1978. V. 274. - P.334-359.

131. Nermut M.V. Further investigation on the fine structure of influenza virus. //J.Gen.Virol. 1972. - V. 17. - P.317-331.

132. Neumann G., Hughes M.T., Kawaoka Y. Influenza A virus NS2 protein mediates vRNP nuclear export through NES-independent interaction with hCRMl. // EMBO J. 2000. - V.19. - P.6751-6758.

133. O'Neill R.E., Talon J., Palese P. The influenza virus NEP (NS2 protein) mediates the nuclear export of viral ribonucleoproteins. // EMBO J. 1998. - V.17. -P.2888-2296.

134. Ohuchi M., Cramer A., VeyM., Ohuchi R., Garten W., Klenk H.D. Rescue of vector-expressed fowl plague virus hemagglutinin in biologically active form by acidotropic agents and coexpressed M2 protein. // J.Virol. 1994. - V.68. -P.920-926.

135. Oxford J.S., Hockley D.J. Orthomyxoviridae. // Animal Virus Structure. 1987. -P.213-232.

136. Palese P., Compans R.W. Inhibition of influenza virus replication in tissue culture by 2-deoxy-2, 3-dehydro-N-trifluoroacetylneuraminic acid (FANA): mechanism of action. // J.Gen. Virol. 1976. - V.33. - P. 159-163.

137. Paulson J.C., Sadler J.E., Hill R.L. Restoration of specific myxovirus receptors to asialoerythrocytes by incorporation of sialic acid with pure sialyltransferases. // J.Biol.Chem. 1979. - V.254. - P.2120-2124.

138. Peiris M., Yam W.C., Chan K.H., Ghose P., Shortridge K.F. Influenza A H9N2: aspects of laboratory diagnosis. // J.Clin.Microbiol. 1999. - V.37. - P.3426-3427.

139. Pensaert M., Ottis K.,. Vandeputte J., Kaplan M.M., Bachmann P.A. Evidence for the natural transmission of influenza A virus from wild ducks to swine and its potential importance for man. // Bull. W.H.O. 1981. - V.59. - P.75-78.

140. Philpott M., Easterday B.C., HinshawV.S. Neutralizing epitopes of the H5 hemagglutinin from a virulent avian influenza virus and their relationship to pathogenicity. // J.Virol. 1989. - V.63. - P.3453-3458.

141. Philpott M., HioeC., SheerarM., HinshawV.S. Hemagglutinin mutations related to attenuation and altered cell tropism of a virulent avian influenza A virus. // J.Virol. 1990. - V.64. - P.2941-2947.

142. Plotch S.J., Bouloy M., Krug R.M. Transfer of 5'-terminal cap of globin mRNA to influenza viral complementary RNA during transcription in vitro. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 1979. - V.76. - P.1618-1622.

143. Pyle G.F., Patterson K.D. Influenza diffusion in European history: patterns and paradigms. // Ecol.Dis. 1984. - V.2. - P. 173-184.

144. Qian X.Y., Alonso C.F., Krug R.M. Two functional domains of the influenza virus NS1 protein are required for regulation of nuclear export of mRNA. //J.Virol. 1994. - V.68. - P.2433-2441.

145. Qiu Y., Krug R.M. The influenza virus NS1 protein is a poly(A)-binding protein that inhibits nuclear export of mRNAs containing poly(A). // J.Virol. 1994. - V.68.-P.2425-2432.

146. Qiu Y., NemeroffM., Krug R.M. The influenza virus N31 protein binds to a specific region in human U6 snRNA and inhibits U6-U:-' and U6-U4 snRNA interactions during splicing. // RNA. 1995.-V.1. - P.304-316.

147. Raymond R.L., Caton A.J., CoxN.J., Kendal A.P., Brownlee G.C. The antigenicity and evolution of influenza HI hemagglutinin, from 1950-1957 and 1977-1983: Two pathways from one gene. // Virology. 1986. - V.148. - P.275-287.

148. Reading P.C., Morey L.S., Crouch E.C., Anders E.M. Collectin-mediated antiviral host defense of the lung: evidence from influenza virus infection of mice. //J.Virol. 1997. - V.71. - P.8204-8212.

149. Reed L.J., Muench H. A simple method for estimating 50% endpoints. // Amer.J.Hyg. 1932. - V.27. - P.493-497.

150. Reid A.H., Fanning T.G., Hultin J.V., Taubenberger J.K. Origin and evolution of the 1918 "Spanish" influenza virus. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. -1999. V.96. - P.1651-1656.

151. Robertson J.S., Bootman J.S., Newman R. Change in the hemagglutinin of influenza A (H1N1) virus during egg adaptation. // J.Cell.Biochem. 1985. -V.59. - P.270-277.

152. Robertson J.S., BootmanJ.S., Newman R., Oxford J.S., Daniels R.S., Webster R.G., Schild G.C. Structural changes in the hemagglutinin which accompany egg adaptation of an influenza A(H1N1) virus. // Virology. 1987. -V.160. -P.31-37.

153. Robertson J.S., Naeve C.W., Webster R.G., BootmanJ.S., Newman R., Schild G.C. Alterations in the hemagglutinin associated with adaptation of influenza B virus to growth in eggs. // Virology. 1985. - V. 143. - P. 166-174.

154. Robertson J.S., Nicolson C., MajorD., Robertson E.W., WoodJ.M. The role of amniotic passage in the egg-adaptation of human influenza virus is revealed by haemagglutinin sequence analysis. // J.Gen.Virol. 1993. - V.74. - P.2047-2051.

155. Robertson J.S., Schubert M., Lazzarini R.A. Polyadenylation sites for influenza virus mRN A. //J.Virol. 1981. - V. 38. - P. 15 7-163.

156. Rogers G.N., Daniels R.S., Skehel J.J., Wiley D.C., Wang X., Higa H.H., Paulson J.C. Host-mediated selection of influenza virus receptor variants. // J.Biol.Chem. 1985. - V.260. - P.7362-7367.

157. Rogers G.N., Paulson J.C., Daniels R.S., .Skehel J.J., Wilson I.A., Wiley D.C. Single amino acid substitutions in influenza hemagglutinin change receptor binding specificity. // Nature. 1983. - V.304. - P.76-78.

158. Rogers G.N., Pritchett T.J., Lane J.L., Paulson J.C. Differential sensitivity of human, avian, and equine influenza A viruses to a glycoprotein inhibitor of infection: selection of receptor specific variants. // Virology. 1983. -V.131. - P.394-408.

159. Rohm C., Zhou N., Suss J., Mackenzie J., Webster R.G. Characterization of a novel influenza hemagglutinin, HI5: criteria for determination of influenza A subtypes. //Virology. 1996. - V.217. - P.508-516.

160. Rudneva I.A., Sklyanskaya E.I., Barulina O.S., Yamnikova S.S., Kovaleva V.P., Tsvetkova I.V., Kaverin N.V. Phenotypic expression of HA-NA combinations in human-avian influenza A virus reassortants. // Arch.Virol. 1996. -V.141. - P.1091-1099.

161. Sahasrabudhe A., BlickT., McKimm-Breschkin J.L. Influenza variants resistant to GG167 with mutations in the hemagglutinin. // Virology. 1996. -V.246. - P.748-752.

162. SaitoT., LimW., Suzuki T., Suzuki Y., Kida H., Nishimura S.I., Tashiro M. Characterization of a human H9N2 influenza virus isolated in Hong Kong. // Vaccine. 2002. - V.20. - P. 125-133.

163. Scholtissek C., Rohde W., Von HoyningenV., RottR. On the origin of the human influenza virus subtype H2N2 and H3N2. // Virology. 1978. - V.87. -P.13-20.

164. Schreier E., Roetske H., Driesel G., KunkelU., PetzoldD.R., Berlinghoff R., Michael S. Complete nucleotide sequence of the neuraminidase gene of the human influenza virus A/Chile/1/83 (H1N1). // Arch.Virol. 1988. - V.99. -P.271-276.

165. Schulze I.T. Effect of glycosylation on the properties and functions of influenza virus hemagglutinin. // J.Infect.Dis. 1997. - V.176. - P.24-28.

166. Schulze I.T. The structure of influenza virus. II. A model based on the morphology and composition of subviral particles. // Virology. 1972. - V.47. -P.181-196.

167. Seo S.H., Hoffmann E., Webster R.G. Lethal H5N1 influenza viruses escape host anti-viral cytokine responses. // Nature Med. 2002. - V.8. - P.950-954.

168. Shapiro G.I., Krug R.M. Influenza virus RNA replication in vitro: synthesis of viral template RNAs and virion RNAs in the absence of an added primer. // J.Virol. 1988. - V.62. - P.2285-2290.

169. Skehel J.J., Hay A.J. Nucleotide sequences at the 5' termini of influenza vims RNAs and their transcripts. // Nucleic.Acids.Res. 1978. - V.5. - P. 12071219.

170. Skehel J.J., Waterfields M.D. Studies on primary structure of the influenza virus hemagglutinin. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 1975. - V.72. - P.93-97.

171. Smirnov Y.A., Lipatov A.S., Van Beek R., Gitelman A.K., Osterhaus A.D, Claas E.C. Characterization of adaptation of an avian influenza A (H5N2) virus to a mammalian host. // Acta Virol. 2000. - V.44. - P. 1-8.

172. Steinhauser D.A., Holland J.J. Rapid evolution of RNA viruses. // Annu.Rev.Microbiol. 1987. - V.41. - P.409-433.

173. Stieneke-Grober A., Vey M., AnglikerH., Shaw E., Thomas G. Roberts C., KlenkH.D., Garten W. Influenza virus hemagglutinin with multibasic cleavage site is activated by furin, a subtilisin-like endoprotease. // EMBO J. 1992.- V.ll. P.2407-2414.

174. Suarez D.L., Perdue M.L., CoxN., Rowe T., Bender C., Huang J., Swayne D.E. Comparisons of highly virulent H5N1 influenza A viruses isolated from humans and chickens from Hong Kong. // J.Virol. 1998. - V.72. - P.6678-6688.

175. Sugrue R.J., Hay A.J. Structural characteristics of the M2 protein of influenza A viruses: evidence that it forms a tetrameric channel. // Virology. 1991.- V.180. P.617-624.

176. Suzuki Y. Gangliosides as influenza virus receptors. Variation of influenza viruses and their recognition of the receptor sialo-sugar chains. // Prog.Lipid Res. 1994. - V.33. - P.429-457.

177. Thomas D.B., Patera A.C., Graham C.M., Smith C.A. Antibody-Mediated Immunity. In: K.G. Nicholson, R.G. Webster, and A.J. Hay A.J. (eds.). // Textbook of influenza. Blackwell Science. 1998. - P.267-286.

178. Tsuchiya E., Sugawara K., Hongo S., Matsuzaki Y., Muraki Y., Li Z.N., Nakamura K. Antigenic structure of the haemagglutinin of human influenza A/H2N2 virus. // J.Gen.Virol. 2001. - V.82. - P.2475-2484.

179. Underwood P.A., Skehel J.J., Wiley D.C. Receptor-binding characteristics of monoclonal antibody-selected antigenic variants of influenza virus. // J.Virol. 1987. - V.61. - P.206-208.

180. Verhoeyen M., Fang R., Min J.W., Devos R., Huylebroeck D., Saman E., Fiers W. Antigenic drift between the hemagglutinin of the Hong Kong influenza strains A/Aichi/2/68 and A/Victoria/3/75. // Nature. 1980. - V.286. - P.771-776.

181. Vines A., Wells K., Matrosovich M., Castrucci M.R., Ito T., Kawaoka Y. The role of influenza A virus hemagglutinin resides 226 and 228 in receptor specificity and host range restriction. // J.Virol. 1998. - V.72. - P.7626-7631.

182. Wagner R., HeuerD., Wolff T., HerwigA., Klenk H.D. N-glycans attached to the stem domain of haemagglutinin efficiently regulate influenza A virus replication. // J.Gen.Virol. 2002. - V.83. - P.601-609.

183. Ward C.W., Dopheide T.A. Evolution of the Hong Kong influenza A sub-type. Structural relationships between the haemagglutinin from A/Duck/Ukraine/1/63 (Hav7) and the Hong Kong (H3) haemagglutinins. // Biochem.J. 1981. - V.195. - P.337-340.

184. Watowich S.J., SkehelJ.J., Wiley D.C. Crystal structures of influenza virus hemagglutinin in complex with high-affinity receptor analogs. // Structure. -1994. V.2.-P.719-731.

185. Webby R.J., Webster R.G. Emergence of influenza A viruses. // Phil. Trans. Roy. Soc. Lond. 2001. - V.356. - P.1818-1828.

186. Webster R.G., Bean J., Gorman O.T., Chambers T.M., Kawaoka Y. Evolution of ecology of influenza A viruses. // Microbiol. Rev. 1992. - V.56. -P.152-179.

187. Webster R.G., Hinshaw V.S., Bean W.J., Van Wyke K.L., Geraci J.R., St AubinD.J., PeturssonG. Characterization of an influenza A virus from seals. // Virology. 1981. - V.l 13. - P.712-724.

188. Webster R.G., Walker E.J. Influenza. // American Sci. 2003. - V.91. -P.122-129.

189. Weis W., Brown J.H., Cusack S., Paulson J.C., Skehel J.J., Wiley D.C. Structure of the influenza virus haemagglutinin complexed with its receptor sialic acid. //Nature. 1988. - V.333. - P.426-431.

190. Wharton S.A., Weis W., Skehel J.J., Wiley D.C. Structure, function and antigenicity of the hemagglutinin of influenza virus. // The Influenza Viruses. -1989. -P.153-174.

191. White J., Matlin K., Helenius A. Cell fusion by Semliki Forest, influenza, and vesicular stomatitis viruses. // J.Cell Biol. 1981. - V.89. - P.674-679.

192. Whittaker G., Bui M., Palese P. The role of nuclear import and export in influenza virus infection. // Trends Cell Biol. 1996. - V.6. - P.65-71.

193. Wiley D.C., Skehel J.J. The structure and function of the hemagglutinin membrane glycoprotein of influenza virus. // Annu.Rev.Biochem. 1987. - V.56. -P.365-394.

194. Wiley D.C., Wilson I.A., Skehel J.J. Structural identification of the antibody-binding sites of Hong Kong influenza hemagglutinin and their involvement in antigenic variation. // Nature. 1981. - V.289. - P.373-378.

195. Wilson J.A., Skehel J.J., Wiley D.C. Structure of the hemagglutinin membrane glycoprotein of influenza virus at 3A resolution. // Nature. 1981. -V.289. -P.366-373.

196. Wrigley N.G., Brown E.B., Daniels R.S., Douglas A.R., Skehel J.J., Wiley D.C. Electron microscopy of influenza hemagglutinin-monoclonal antibody complexes. //Virology. 1983. - V.131. - P.308-314.

197. Wrigley N.G., Skehel J.J., Charlwood P.A., Brand C.M. The size and shape of influenza virus neuraminidase. // Virology. 1973. - V.51. - P.525-529.

198. Yamada A., Brown L.E., Webster R.G. Antigenic analysis of H2 influenza virus haemagglutinin with monoclonal antibodies. // Vaccine. 1985. -V.3. -P.195-198.

199. Yasuda J., Nakada S., Kato A., Toyoda T., Ishihama A. Molecular assembly of influenza virus: association of the NS2 protein with virion matrix. // Virology. 1993. - V.196. - P.249-255.

200. Yates P.J., Bootman J.S., Robertson J.S. The antigenic structure of a human influenza A (H1N1) virus isolate grown exclusively in MDCK cells. // J.Gen.Virol. 1990. - V.71. - P.1683-1688.

201. Yoshida T., Shaw M.W., Young J.F., Compans R.W. Characterization of the RNA associated with influenza A cytoplasmic inclusions and the interaction of NS1 protein with RNA. // Virology. 1981. - V.l 10. - P.87-97.

202. Zebedee S.L., Lamb R.A. Influenza A virus M2 protein: monoclonal antibody restriction of virus growth and detection of M2 in virus. // J.Virol. 1988. - V.62. - P.2762-2772.