Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Анализ каллусной ткани Aconitum septentrionale Koelle

ВАК РФ 03.00.12, Физиология и биохимия растений

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мигранова, Ирина Гайсаровна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Растения борца северного - перспективный источник дитерпеновых алкалоидов фармакологического назначения.

1.1.1. Ботанико-морфологическая характеристика борца северного.

1.1.2. Алкалоиды борца северного.

1.2. Методы анализа межпопуляционного полиморфизма.

1.3. Культивируемые in vitro клетки борца северного -дополнительный источник дитерпенового алкалоида лаппаконитина.

1.3.1. Характеристика каллусной ткани.

1.3.2. Генетическая обусловленность способности каллусных тканей к длительному культивированию in vitro.

1.3.3. Способность каллусных тканей к синтезу вторичных метаболитов.

1.3.3.1. Влияние компонентов питательной среды на синтез вторичных метаболитов.

1.3.3.3. Сомаклональная изменчивость в культуре in vitro.

1.3.3.4. Индуцированный мутагенез в культуре клеток.

1.3.3.5. Генетическая трансформация в культуре клеток.

1.4. Применение метода полимеразной цепной реакции с использованием случайных праймеров для оценки генетической стабильности каллусных тканей.

2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объект исследования.

2.1.1. Получение и культивирование каллусной ткани.

2.2. Определение содержания лаппаконитина в растениях и каллусной ткани борца северного.

2.3. Выделение ДНК.

2.4. Амплификация ДНК методом полимеразной цепной реакции.

2.5. Расщепление ДНК рестрикционными эндонуклеазами.

2.6. Электрофоретическое разделение ДНК в агарозном геле.

2.7. Реактивы.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1 Получение каллусной ткани борца северного.

3.2. Анализ генетической гетерогенности популяций борца северного методом полимеразной цепной реакции с использованием случайных праймеров (RAPD-PCR). северного, полученных из различных популяций.

3.4. Характеристика каллусной ткани борца северного.

3.5. Изучение степени стабильности генома борца северного.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Анализ каллусной ткани Aconitum septentrionale Koelle"

Актуальность исследования

Известно, что в результате все возрастающего антропогенного воздействия на окружающую среду происходит сокращение численности многих видов лекарственных растений. В качестве дополнительного источника сырья при получении продуктов вторичного метаболизма, имеющих широкое применение в медицинской, пищевой и парфюмерной промышленности, могут служить клетки, культивируемые in vitro. К сожалению, как правило, в каллусных и суспензионных культурах происходит снижение содержания искомых продуктов вторичного метаболизма как минимум на порядок, хотя имеются и некоторые исключения. Наблюдаемая в настоящее время низкая эффективность клеточных технологий объясняется, главным образом, недостатком знаний об особенностях биологии клеток, выращиваемых в асептических условиях. Известно, что при введении в культуру in vitro многих видов лекарственных растений возникают определенного рода трудности, в частности, связанные с обильным выделением полифенолов, приводящим к гибели клеток. Кроме того, каллусные и суспензионные культуры достаточно часто оказываются неспособными к длительному выращиванию в условиях in vitro. Для решения данных проблем необходимо расширение исследований с привлечением большего количества видов растений, вводимых в культуру in vitro, и оптимизация условий получения и культивирования свободноживущих клеток.

При лечении аритмии сердца используют препарат Аллапинин, действующим началом которого является дитерпеновый алкалоид лаппаконитин, который получают из корневищ борца белоустого (Aconitum leucostomum) [Машковский, 1993]. С целью увеличения сырьевой базы для производства Аллапинина проводятся исследования другого вида - борца 7 северного (Aconitum septentrionale Koelle). Установлено, что содержание лаппаконитина в его подземной части колеблется от 0,47% до 2.31% в зависимости как от места обитания, так и от возраста растения; содержание же данного дитерпенового алкалоида в надземной части находится в пределах

0.01% - 0,1% [Федоров и др., 1996]. Имеется одно сообщение об успешном введении в культуру in vitro этого лекарственного растения [Иванцов и др., 1988]. Однако, полученные результаты практически невоспроизводимы.

Исходя из вышесказанного, цель настоящей работы заключалась в разработке подходов стабильного получения каллусной ткани борца северного (Aconitum septentrionale Koelle), способной к длительному культивированию in vitro.

Для достижения вышеуказанной цели были поставлены следующие задачи:

1) оптимизация условий получения каллусных тканей борца северного;

2) анализ межпопуляционного полиморфизма методом полимеразной цепной реакции с использованием случайных праймеров;

3) изучение влияния генотипа борца северного на жизнеспособность каллусных тканей;

4) изучение степени стабильности генома клеток борца северного, культивируемых in vitro, методом полимеразной цепной реакции.

Научная новизна работы

1. Выявлено, что отбор эксплантов на ранней стадии вегетации растений позволяет избавиться от выделения полифенолов в питательную среду при индукции каллусообразования. 8

2. Методом полимеразной цепной реакции с использованием случайных праймеров установлено наличие генетического полиморфизма трех популяций борца северного.

3. Показано, что каллусные ткани, полученные из растений борца северного различных популяций, отличаются по способности к длительному культивированию in vitro.

4. Методом полимеразной цепной реакции с использованием случайных праймеров выявлена нестабильность генома клеток борца северного, культивируемых in vitro.

Научно-практическая значимость

Полученные результаты имеют прежде всего теоретическое значение, расширяющее наше представление об особенностях биологии свободноживущих клеток. Использованные подходы при изучении генетического полиморфизма трех популяций борца северного могут применяться для дальнейшего исследования генетической неоднородности различных популяций лекарственных растений. Разработанный подход к индукции каллусообразования может использоваться при введении в культуру in vitro других представителей лекарственных растений, получение которых затруднено из-за обильного выделения полифенолов.

Апробация работы

Полученные результаты докладывались и обсуждались на Международной конференции «Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда» (Москва, 1997), Международной конференции «Состояние и перспективы развития биотехнологии растений» (Алматы, 1997), 9

Международной конференции «Молекулярная генетика и биотехнология» (Минск, 1998), конференции биохимиков Урала и Западной Сибири (Уфа, 1998), Республиканской конференции «Современные проблемы естествознания на стыках наук» (Уфа, 1998), Международной конференции «Молекулярная и клеточная биология на рубеже веков» (Алматы, 1999).

Публикации

По материалам диссертационной работы опубликовано 8 работ. Благодарность

Считаю своей приятной обязанностью выразить искреннюю признательность моим научным руководителям д.б.н. Мардамшину А.Г. и д.б.н. Чураеву Р.Н., сотрудникам лаборатории математической и молекулярной генетики к.б.н. Федорову Н.И., к.б.н. Ишбирдиной JIM., м.н.с. Сидоровой JI.B., м.н.с. Лукичевой И.А., сотрудникам Института цитологии и генетики (г. Новосибирск) к.б.н. Салиной Е.А. и к.б.н. Леоновой И.Н.

10

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Физиология и биохимия растений", Мигранова, Ирина Гайсаровна

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что при индукции каллусообразования на эксплантах, полученных от растений борца северного, на начальных этапах его развития не происходит обильного выделения полифенолов. Это обуславливает образование жизнеспособного первичного каллуса на листовых, стеблевых и корневых эксплантах растений четырех исследованных популяций Aconitum septentrionale К.

2. Методом RAPD-PCR продемонстрирован высокий уровень генетического полиморфизма трех популяций борца северного: различие по количеству и размеру ДНК-ампликонов наблюдалось по 13-ти праймерам из 98-ми, использовавшихся в исследовании.

3. Показано, что каллусные ткани борца северного, полученные от растений различных популяций, отличаются по способности к длительному культивированию in vitro. Можно полагать, это свойство зависит от генотипа растений.

4. Показано, что сравнительный анализ межпопуляционных различий с использованием полимеразной цепной реакции может быть использован при отборе эксплантов различных видов лекарственных растений для успешного введения их в культуру in vitro.

5. Методом полимеразной цепной реакции с использованием случайного праймера установлено, что при культивировании клеток борца северного in vitro происходят изменения на генетическом уровне.

79

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Клетки растений, культивируемые in vitro, являются перспективным источником продуктов вторичного метаболизма, имеющих практическую значимость. Расширение количества видов растений, вводимых в культуру, изучение особенностей образования каллусов на эксплантах и факторов, повышающих частоту каллусообразования, а также изучение условий, определяющих способность клеток и тканей к длительному выращиванию на искусственных питательных средах, позволят иметь более реальное представление о биологии клеток, культивируемых in vitro. Это в конечном итоге может привести к увеличению количества суперпродуцентов биологически активных соединений, имеющих практическую значимость.

В результате проведенной работы нам удалось оптимизировать процесс получения каллусной ткани из различных частей такого трудного объекта, как борец северный. Использование эксплантов на начальных этапах его развития позволило избавиться от выделения полифенолов при индукции каллусообразования. При получении каллусных тканей лекарственных растений, способных к длительному культивированию in vitro, успех главным образом достигался за счет увеличения количества высаживаемых эксплантов. Использование современных методов физико-химической биологии, позволяющих на генном уровне отбирать различающиеся особи, дает основание для более целенаправленного отбора экземпляров растений для введения в культуру. Методом полимеразной цепной реакции был обнаружен полиморфизм по количеству и размеру ДНК-ампликонов трех популяций борца северного на территории башкирского Предуралья. Это послужило основанием для сравнительного анализа жизнеспособности каллусных тканей, полученных из растений различных популяций. Данный подход позволил получить жизнеспособную каллу сную ткань борца северного. Нельзя исключить

78

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Мигранова, Ирина Гайсаровна, Уфа

1. Айала Ф.Дж. Эволюция: Молекулярная биология предлагает эффективные методы реконструкции филогении // Журнал общей биологии. 1986. - Т. 17. -Вып. 4.-С. 479-493.

2. Алдашев A.A. Акониты в этиологии пастбищных токсикозов овец. Фрунзе.- 1964. 103с.

3. Батыгина Т.Б. Хлебное зерно. JL - Наука. - 1987. - 102 с.

4. Бородько A.B., Исаева H.A., Годовикова В.А., Шумный В.К. Сравнение сортов и линий ячменя (Hordeum vilgare L.) на способность к эмбриогенезу в каллусной ткани и суспензионной культуре // Цитология и генетика. 1991.80

5. Бутенко Р.Г. Биология высших растений in vitro и биотехнология на их основе. М. - ФБК-ПРЕСС. - 1999. - 159 с.

6. Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М. - Наука. 1964. - 272с.

7. Бутенко Р.Г. Экспериментальный морфогенез и дифференциация в культуре клеток растений. М. - Наука. - 1975. - 47 с.

8. Бутенко Р.Г., Гусев М.В. Клеточная инженерия // Биотехнология. М. -1987.-С. 30-51.

9. П.Валиева Р.Д., Мардамшин А.Г., Ахметов P.P. // Результаты научных исследований преподавателей биологического факультета Башкирского государственного университета. Уфа.-1997.-С.36-38.

10. Витанова 3., Влахова М., Денчев П., Маринова Е., Витанов В., Атанасов А. Сомаклональная изменчивость // Физиология и биохимия культурных растений. 1990. - Т.22. - №5. - С. 419-426.

11. Воллосович А.Г. Культура изолированных тканей как продуцент фармакологически важных веществ // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. М. - Наука. - 1970. - 330 с.

12. Ворошилов В.Н. Ритм развития у растений М. - Издательство АН СССР.811960.- 136с.

13. Ворошилов В.Н. Сибирские виды рода Aconitum // Бюллетень ГБС АНСССР. 1967. Вып. 65. - С. 33-40.

14. Глеба Д.М., Глеба Ю.Ю. Мутации и эпигенетические изменения в культуре клеток и протопластов высших растений // Цитология и генетика. 1978. -№12. - С. 458-469.

15. Горбунова В.Ю. Микроклональное размножение борца северного -продуцента антиаритмического алкалоида // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1994. - №4. - С. 19-20.

16. Государственный реестр лекарственных средств, разрешенных для применения в медицинской практике и к промышленному производству в 1986-1987 гг. -М.-1988.

17. Дедов A.B., Абдуллина И.Ш., Старухин Ф.Н., Никитина B.C., Чураев Р.Н. // II съезд Биохимического общества РАН. Тезисы докладов. - Пущино. -1997.-С.492-493.

18. Джангиров Ф.Н., Садритдинов Ф.С. Сравнительная противоаритмическая и противофибрилляторная активность аллапинина и известных антиаритмических средств // Доклады АН УзССР. 1985. - №7. - С. 47-48.

19. Дорохов Д.Б., Клоке Э. Быстрая и экономочная технология RAPD анализа // Генетика. 1997. - 33. - №4. - С. 443-450.

20. Дрейпер Дж., Скотт Р. Выделение нуклеиновых кислот из клеток растений // Генная инженерия растений. М. - 1991. - 408 с.82

21. Иванцов А.И., Дедов A.B., Мартьянов H.A., Чураев Р.Н. Введение в культуру in vitro Aconitum septentrionale Koelle продуцента лекарственных алкалоидов // Биология культивируемых клеток и биотехнология. Тезисы докладов. Новосибирск. - 1988. - С. 16.

22. Кайданов JI.3. Генетика популяций // М. Высшая школа. - 1996. - 320с.

23. Калинин Ф.А., СарнацкаяВ.В., Полищук В.Е. Методы культивирования тканей в физиологии и биохимии растений. М.-1980.-488с.

24. Каляева М.А., Балохина Н.В. Разработка методов регенерации и генетической трансформации спаржи лекарственной // 2 Открытая научная конференция молодых ученых Пущино. - 1997. - С. 54.

25. Каранова C.JI., Шамина З.Б., Бутенко Р.Г. Влияние N-метил-мочевины на изменчивость клеточных популяций Dioscorea deltoidea Wall, in vitro // Генетика. №11. - С. 5-9.

26. Картель H.A., Манегина T.B. Каллусообразование у разных по генотипу растений ячменя (Hordeum vuigare L.) // Цитология и генетика. 1977. - Т. XI. - №6. - С. 468-490.83

27. Козыренко М.М., Артюкова Е.В., Реунова Г.Д., Илюшенко М.В., Журавлев Ю.Н. RAPD-PCR-типирование дальневосточных видов ирисов // 2-ой Съезд Биохимического общества РАН. Пущино. - Тезисы стендовых сообщений. - 1997. - Ч. 1. - С.146.

28. Козыренко М.М., Артюкова Е.В., Реунова Г.Д., Чернодед Г.Л., Ходаковская М.В., Журавлев Ю.Н. Геномный полиморфизм в культивируемых клетках женьшеня // Биотехнология. 1997. - №5. - С. 10-14.

29. Конарев В.Г. Н.И.Вавилов и проблемы вида в прикладной ботанике, генетике и селекции М. - Агропромиздат. - 1991. - 47 с.

30. Кочиева Е.З. Использование методов на основе полимеразной цепной реакции для анализа и маркирования растительного генома // Сельскохозяйственная биология. 1999. - №3. - С. 3-14.

31. Кречетович JI.M. Ядовитые растения. Их польза и вред. М. JI. -Сельхозгиз. - 1931- 317с.

32. Кунах В.А. Цитогенетическая разнокачественность штаммов листового и корневого происхождения культуры тканей Haplopappus gracilis (Nutt). Gray // Цитология и генетика. 1971. - Т.5. - С. 241-248.

33. Курсанов А., Дубинина И., Кудрявцева Л., Бураханова Е. Некоторые особенности углеводного обмена в культурах дифференцированных тканей сахарной свеклы // Физиология растений. 1976. - Т.23. - Вып.6. - С. 11191126.84

34. Лавренко А.Н., Сердитов Н.П. Кариосистематическое исследование представителей семейств Ranunculaceae и Paeoniaceae на северо-востоке европейской части СССР // Ботанический журнал. 1984. - Т. 70. - №10. - С. 1346-1354.

35. Лукнер М. Вторичный метаболизм у микроорганизмов, растений и животных // М. Мир. - 1979. - 512с.

36. Лутова Л.А., Верзина И.И. Наследование способности к каллусо- и корнеобразованию у изолированных семядолей редиса в условиях асептической культуры // Генетика. 1984. - Т.20. - №10. - С.1663-1670.

37. Малахова Л.А., Козлова A.A., Карташова H.H. Изучение хромосом дикорастущих растений Приобья. III Сравнительный анализ кариотипов трех видов борца Aconitum L. (Ranunculaceae) // Ботанический журнал. 1976. -№8.-С. 1137-1141

38. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии: // Молекулярное клонирование М. - Мир. - 1984. - 480с.85

39. Мардамшин А.Г., Ильгулова Д.Ф., Шайхутдинова С.А. Каллусная ткань солодки голой продуцент глицерризиновой кислоты // Биотехнология. -1996.-№3.-С. 62-64.

40. Мардамшин А.Г., Старухин Ф.Н., Валиева Р.Д. Содержание лаппаконитина и дезацетиллаппаконитина в каллусной ткани Aconitum leucostomum Worosch. // Растительные ресурсы.-1997.-Т.ЗЗ.-Вып.2.-С.59-60.

41. Марченко А.О. Реализация морфогенетического потенциала растительных организмов // Успехи современной биологии. 1997. - Т.166. - №3. - С. 306317.

42. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М. - Медицина - 1993. - 4.1. -С.480.

43. Мезинцев A.B., Карелина H.A. Влияние генотипических особенностей люцерны на каллусообразование и соматический эмбриогенез при различных условиях культивирования тканей // Генетика. 1982. - Т. 18. -№6. - С.999-1003.

44. Михайловская И.С. Особенности анатомической структуры геофильного органа борца высокого Aconitum excelsum Rchb.// Бюллетень МОИП. Отделение биологии. 1976. - Т.81. - Вып.6. - С. 357-362.

45. Муромцев Г.С., Бутенко Р. Г., Тихоненко Т.Н., Прокофьев М.И. Основы сельскохозяйственной биотехнологии М. - Агропромиздат. - 1990. - 384 с.

46. Негрук В.И. Проблемы и перспективы генетической инженерии растений // Биотехнология. М. - Наука. - 1984. - 309с.86

47. Никонович T.B. Оптимизация условий каллусогенеза томата в культуре in vitro // 6-ой съезд Белорусского общества генетиков и селекционеров. -Тезисы докладов. Горки. - 1992. - С.52.

48. Носов A.M. Функции вторичных метаболитов растений in vivo и in vitro // Физиология растений. 1994. - Т.41. - №6. - С.873-878.

49. Носов A.M., Орешников A.B., Кандароков О.Ф. Культуры клеток высших растений как продуценты вторичных метаболитов // 2-ой съезд Биохимического общества РАН. Тезисы докладов. - Пущино. - 1997. - С. 97.

50. Пирузян Э.С. Основы генетической инженерии растений // Москва. Наука. - 1988.-302с.

51. Платонова Т.Ф., Кузовков А.Д., Массагетов П.С. Исследование аконитовых алкалоидов. IX. Об алкалоидах Aconitum excelsum // Журнал общей химии. -1958. -Т.28(90). Вып. 1. - С. 258-261.

52. Поглазов А.Б.Б Щукин Н.И. Плазмиды Ti Agrobacterium tumifaciens и их роль в образовании опухолей растений // Молекулярная биология. 1980. -14.-С. 725-733.

53. Репях С.М., Юшкова Е.В., Величко H.A. Влияние химических и физических факторов на рост и развитие каллусных тканей левзеи сафлоровидной // Биотехнология. 1996. - №8. - С. 45-49.

54. Ригер Р., Михаэлис А. Генетический и цитогенетический словарь. М. -Колос.- 1967.-607 с.

55. Садиков А.З., Шакиров Т.Т. Способ получения аллапинина из надземной части Aconitum leucostomum // Химия природных соединений. 1988. - №1.- С.91-94.

56. Саики Р., Гиленстен У., Эрлих Г. Полимеразная цепная реакция // Анализ генома: Методы. М. Мир. - 1990. - С. 176-190.

57. Сапко O.A., Мухамеджанов Б.Г., Кунаева Р.Н. Образование фенольных соединений в культуре тканей верблюжьей колючки // Физиология растений.- 1992. №5.-С. 1020-1026.

58. Серебряков И.Г. Структура и ритм жизни цветковых растений // Бюллетень МОИП. 1949. - Т. 54. - Вып. 5. - С.47-61.

59. Серебрякова Т.И., Полынцева H.A. Ритм развития побегов и эволюция жизненных форм в роде Aconitum L. // Бюллетень МОИП. 1974 - Т.79. -Вып. 6.-С. 78-97.

60. Сиволп Ю.М., Брик А.Ф., Сичкарь В.И. Исследование молекулярно-генетического полиморфизма сои (Glycina max L.) с помощью ПЦР-анализа // Цитология и генетика. 1998. - Т.32. - №4. - С. 89-96.88

61. Сиволп Ю.М., Календарь Р.Н. Генетический полиморфизм ячменя, выявленный ПЦР с произвольными праймерами // Генетика. 1995. - Т. 31. -№10. - С. 1358-1364.

62. Сиволп Ю.М., Календарь Р.Н., Чеботарь C.B. Генетический полиморфизм злаковых растений при помощи ПЦР с произвольными праймерами // Цитология и генетика. 1994. - Т.28. - №6. - С. 54-61.

63. Сидоров В.А, Сидорова Н.В. Сомаклональная изменчивость источник генетического разнообразия у растений // Цитология и генетика. - 1987. -Т.21. - №3. - С.230-237.

64. Скотт Р. Анализ ДНК путем рестрикции и гибридизации по Саузерну // Генная инженерия растений. М. - 1991. - 408 с.

65. Соколов B.C. Алкалоидоносные растения СССР М. - Издательство АН СССР. Серия биология - 1932. -№10. - С. 1517-1530.

66. Усманова С.К., Тельнов В.А., Абдуллаев Н.А. Строение нового алкалоида сентенина // Химия природных соединений. 1993. - №3. - С. 412-414.

67. Усманова С.К., Юсупова И.М., Ташходжаев Б., Бессонова И.А. Структура септедина // Химия природных соединений. 1995. - №1. - С.104-108.89

68. Федоров Н.И., Мартьянов Н.А. Особенности распространения и динамики популяций Aconitum septentrionale К. В растительных сообществах Башкортостана // Растительные ресурсы. 1993. - Т.27. - Вып. 3. - С. 29-34.

69. Федоров Н.И., Мартьянов НА., Никитина B.C., Ишбирдина JI.M. Содержание алкалоида лаппаконитина в подземной и надземной частях Aconitiirn septentrionale Koelle в растительных сообществах в Башкирии // Растительные ресурсы. 1996. - №3. - С.96-101.

70. Фогель Ф., Мотульски А. Генетика человека М. - Мир. - 1990. - 457с.

71. Фролова JI.В. Цитогенетическая изменчивость и автоселекция растительных клеток в условиях in vitro // Биотехнология. M. 1984. - 309 с.

72. Ходаковская М.В., Булгаков В.П., Маханьков В.В. Влияние фитогармонов на накопление биомассы и содержание гинзенозидов в каллусных культурах Panax ginseng С. А. Меу // Биотехнология. 1995. - №9-10. - С. 40-45.

73. Холина А.Б., Журавлев Ю.Н. Культура клеток растений как источник протобербериновых алкалоидов // Растительтные ресурсы. 1996. - 32. - Т. 32.-№1-2.-С. 134-151.

74. Хотылева JÏ.B., Полонецкая J1.M., Корпусенко Л.И., Кавцевич В.Н. Влияние генотипа на индукцию каллуса и регенерацию растений у льна-долгунца //90

75. Весщ АН Беларусь -1996. №3. - С. 60-63.

76. Хромосомные числа цветковых растений JI. - Наука. - 1969. - 927 с.

77. Цицилин А.Н., Шретер А.И. Прогноз природных ресурсов Aconitum septentrionale Koelle в Башкирской АССР // Растительные ресурсы. 1990. -Т. 26.-Вып. 4.-С. 513-539.

78. Чеченева Т.Н., Труханов В. А. Генетическая обусловленность каллусообразования и регенерационной способности у кукурузы // Цитология и генетика. 1994. - Т.28. - №5. - С.46-50.

79. Шретер А.И. Лекарственная флора советского Дальнего Востока. М. -Медицина. - 1975. - 328с.

80. Штейнберг Е.Н. Аконит или борец -Aconitum L. // Флора СССР.- М,- Л. -1937.-Т.7.-С. 183-236.

81. Юдин С.И. Особенности доразвития зародыша в семенах Aconitum leucostonum Worosch., в зависимости от условий произрастания // Экологические проблемы семеноведения интродуцентов. Рига. - 1984. -С.146-147.

82. Юнусов М.С. Алкалоидоносная флора бывшего СССР источник биологически активных соединений // Химия в интересах устойчивого развития. - 1997. - №5. - С. 41-56.

83. Юнусов С.А. Алкалоиды. Ташкент.-1981.-268с.

84. Юнусов С.Ю. Алкалоиды. Справочник. Приложение II. Ташкент. - ФАН. -1989.91

85. Юркова Г.Н., Левенко Б.А., Новожилов О.В. Плоидность каллусной ткани твердой и мягкой пшеницы // Цитология и генетика. 1985. - Т. 19. - №4. -С.264-267.

86. Arnheim N., Erlich H. Polymerase chain reaction strategy // Annu. Rev. Biochem. 1992.-V. 61.-P. 131-156.

87. Banthorpe D.V., White J.J. Nevel anthraquinones from undifferented cell cultures of Galium verum // Phytochemistry. 1995. - 38. - №1. - P. 107-111.

88. Bodean J.P., Walbot V. Genetic regulation of anthocyanin biosynthesis in embryogenic maize callus // Maydica. 1995. - 40. - №1. - P. 77-83.

89. Caltaneo M., Qiao Y.M. Anther culture medium effects on callus development and plantlet regeneration // J. Genet, and Breed. 1991. - 45. - №3. - P. 197-205.

90. Chaleff R.S., Carlson P.S. Higher plant cells as experimental organisms // Modification Information Content Plant Cells. Amsterdam-Oxford. - 1975. - P. 197-214.

91. Chan W., Staba E.J. Alkaloid production by Datura callus and suspension tissue cultures// Lloydia. 1965. - 1. - P. 65.92

92. Cipriani G., Di Bella R., Testolin R. Screening RAPD primers for molecular taxonomy and cultivar fingerprinting in the genus Actinidia // Euphytica. 1996. -90. -№2.-P. 169-174.

93. Craig A., Millam S. Modification of oilseed rape to produce oils for industrial use by means of applied tissue cultures methodology // Euphytica. 1995. - 85. -№1-3. - P. 323-327.

94. Davey M.C., Erte J.R., Chen Chong-maw. Biosynthesis of pyrethrins in cultured plantlets of Chrysanthemum cinerariafolium // Plant Physiol. 1994. -105.-№1 Suppl.-P. 90.

95. Echt C.S., Erdahl L.A., Mccoy T.J. Genetic segregation of random amplified polymorphic DNA in diploid cultivated alfalfa // Genome. 1991. - V.85. - P. 84-87.

96. Emons A.M.C., Kieft H. Somatic embriogenesis in maiz (Zea mays L.) // Biotechnology in Agriculture and Forestry. 1995. - Vol. 31. - P. 25-39.

97. Fett-Neto A.G., Melanson S.J., Nicholson S.A., Pennington J.J., DiCosmo F. Improved taxol yield by aromatic carboxylic acid and amino acid feeding to cell cultures of Taxus cuspidata // Biotechnol. and Bioeng. 1994. - 44. - №8. - P. 967-971.

98. Fowler M. W. The large-scale cultivation of plant cells // Prog. Ind. Microbiol. 1982.- 17.-P. 209-229.

99. Fowler M.W. Substrate utilisation by plant cell cultures // J. Chem. Technol. Biotechnol. 1982. - 32. - P. 338-346.93

100. Fraley R.T. Plant biotechnology news and views // Plant Mol. Biol. 1982. -1.-P. 251-256.

101. Fransz P., Shel J. Ultrastructural studies on callus developmental and somatic embriogenesis in Zea may // Biotechnology in Agriculture and Forestry. 1994. -Vol. 25.-P. 50-65.

102. Frischinecht P.M. Tissue culture of Coffea arabica: Growth and Caffeine formation // Planta Med. 1977. - 31. - P. 344-350.

103. Furuya T. and Iishii T. The manufacture of Panax: Plant tissue culture containing crude saponins and crude sapogenins which are identical with those of natural Panax roots // Japanese Patent. № 48-31917.

104. Gibbs R.A. DNA amplification by the polymerase chain reaction // Anal. Chem. 1990. - V. 62. - P. 1202-1214.

105. Gupta S.D., Ahmed P. Structural alterations of chromosomes during callus culture of Triticum aestivum // Cereal Res. Commun. Vol. 14. - P. 33-40.

106. Haemmerli U.A., Brandle U.E., Patrini O. Differentiation of isolates of Discula umbrinella from beech, chestnut, and oak using randomly amplified polymorphic DNA markers // Mol. Plant Microb. Ind. 1992. - V. 5. - P. 479-483.

107. Hatano K., Shoyama Y., and Nishioka I. Somatic embryogenesis and plant regeneration from the anther of Aconitum carmichaeli Debx.// Plant Cell Reports.-1987.-№6.-P.446-448.

108. Heinze B., Schmidt J. Monitoring genetic fidelity somaclonal variation in Norway spruce (Picea abies) somatic embryogenesis by RAPD analysis // Euphytica. 1995. - 85. - №1-3. - P. 341-345.

109. Henry Y., Vain P, Buyser J. Genetic analysis of in vitro plant tissue culture responses and regeneration capacities // Euphytica. 1994. - 79. - № 1-2. - P. 4558.

110. Iqbal M.J., Asad S., Zafar Y. DNA polymorphisms in banana and sugar cane variety revealed by rapid analysis // Induced Mutat. and Mol. Techn. Crop Improv. 1995. - P. 309-317.

111. Jayarao B.M., Bassam B.J., Caento-Anolles G. Subtyping Streptococcus uberis by DNA amplification fingerprinting // J. Clin. Microbiol. 1992. - V.30. - P. 1347-1350.

112. Joshi Ch., Nguyen H. Application of the random amplified polymorphic DNA technique for the detection of polymorphism among wild and cultivated tetraploid wheat // Ibid. 1993. - V. 36. - №3. - P. 612-618.95

113. Kaemmer D., Afza R., Weising K. Oligonucleotide and amplification fingerprinting of wild species and cultivars of banana (Musa spp) // Biotechnology. 1992. - V.10. - P. 1030-1035.

114. Kakegawa Koichi, Suola Jun, Sugiyama Munetaka, Komamine Atsushi. Regulation of anthocyanin biosynthesis in cell suspension cultures of Yitis in relation to cell division // Physiol. Plant. 1995. - 94. - №4. - P. 661-666.

115. Kaul B., Stohs S.J. and Staba E.J. Discorea tissue culture. III. Influence of various factors on diosgenine production by Discorea deltoidea callus and suspension culture // Lloydia. 1969. - 32. - 347 p.

116. Kawamura M. Production of secondary metabolites by organ of cell culture // 15-th Int. Bot. Cong. Abstracts. - Yokogama. - 1993. - P. 194.

117. Kishan G.R., Harish C.A. Effect of aminoacid on ephedrine production in Ephedra ceraroliona // Phytochemistry. 1979. - V. 18. - №3. - P. 484-485.

118. Ko K.S., Noguchi H., Ebizuka Y., Sankawa U. Oligoside production by hairy root cultures transformed by Ri plasmids // Chem. Pharm. Bull. 1989. - V.37. -P. 245-248.96

119. Kuklin A., Weaver K., Gerny T., Conger B. DNA amplification fingerprinting of embryogenic and nonembryogenic clones of orcharolgrass (Dactylis glomerata L.) // Biotechnol. and Biotechnol. Equip. 1994. - 8. - №1. - P. 53-56.

120. Liang P., Pardee A.B. Differential display of eukaryotic messenger RNA by means of the polymerase chain reaction // Science. 1992. - 257. - P. 967-971.

121. Lindsey K., Yeoman M.M. Dynamics of plant cell cultures // Cell culture and somatic cell genetics of plants. 1985. - V.2. - P. 61-103.

122. Love A., Love D. Cytotaxonomical atlas of the Arctic flora // Vaduz. 1975. -589 p.

123. Mallahon P.N., Mcintosh M.S. Isolation and random amplified polymorphic DNA analysis of genomic DNA from soybean embryos // Biotechnol. Techn. -1996.-10. №6,- c. 407-412.

124. Maluszynski M., Ahloowalia Beant S., Sigurbiornsson B. Application of in vivo and in vitro mutation techniques for crop improvement // Euphytica. 1995. -85.-№1-3.-P. 303-315.

125. Martin G.B., Williams J.G.K., Tanksley S.D. Rapid identification of markers linked to Pseudumonas resistance gene in tomato by using random primers and near isogenic linnes // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1991. - V.88. - P. 23362340.

126. Matsumoto T., Kanno N., Ikeda T., Obi Y., Kisaki T. and Noguchi M. Selection of cultured tobacoo cell strains producing high levels of Ubiquinone 10 by a cell cloning technique // Agric. Biol. Chem. 1981. - 45. - P. 1627-1633.97

127. McDonald K.A., Jackman A.P., Thorup J.E., Dandekar A.M. Plant callus as a source of biochemicals // Appl. Biochem. and Biotechnol. A. 1995. - 54. - №13. - P. 93-108.

128. Mohanty B.D., Paul N.K., Ghosh P.D. Chromosomal behavior in callus cultures of Zea mays L. // Cytologia. 1986. - Vol.51. - P. 37-41.

129. Mullis K.B., Ferre F., Gibbs R.A. The polymerase chain reaction. Boston. -1994. -458p.

130. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacoo tissue culture// Phisiol. Plant. 1962. - Bd. 15. N.13.P.473-497.

131. Murashige T., Skoog F. A revisal medium for rapid growth and bioassays with tobacoo tissue culture// Phisiol. Plant. 1962. - Bd. 15. N.13.P.473-497.

132. Nickell L.G., Tulecke W. Responses of plant tissue cultures to gibberellin // Science. 1959. - 130.-P. 863.

133. Nickell L.G.,Tulecke W. Submerged growth of cells of higher plants// J. Biochem., Microbiol., Technol. And Eng. 1960. - 2. - P. 287.

134. Paniego N.B., RodriguezT.J., Giulietti A.M. Artemisin production by transformed cultures of Artemisia annua // Pharm. World and Sci. 1995. - 17. -№6. - C. 10.

135. Parker J.D., Rabinovitch P.S., Burmer G. Targeted gene walking polymerase chain reaction // Nucleic Acids Res. 1991. - V.19. - P. 3055-3060.

136. Paul N.K., Ghosh P.D. Cytological behavior during cultures of Zea mays L.// CIS.- 1984.-P. 6-8.98

137. Peters I., Wu P., Sharp W. Rooting and the metabolism of nicotine in tobacco callus cultures // Physiol. Plant. 1974. - V.31. - №2. - P. 97-100.

138. Plant biochemictry (Ed. James Bonner and J.E.Vamer). 1965. Academic Press. New York - London. - 624 p.

139. Rapley R. Methods in molecular biology. Vol. 65. PCR sequencing protocols. Totowa.- 1996.-221p.

140. Razzaque A. and Ellis B.E. Rosmarinic acid production in Coleus cell cultures // Planta. 1977. - 137. - P. 287.

141. Reinhard E., Gorduan R.F., Volk O.H. Detection of harmine in tissue cultures of Peganum harmala // Planta Medica. 1968. -16. - 1. - P. 357.

142. Rosenberg H., Maheshwari V., Stohs A. Alkaloid screening of fungi // Planta med. 1976. - V.30. - №2. - P. 146-150.

143. Saiki R.K., Scharf S., Faloona F., Mullis K.B., Horn G.T. Erlich H.A. Enzymic amplification of P-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis sickle cell anemia // Arnheim Science. 1985. - 230. - P. 1350.

144. Saito K., Kaheko H., Yamazaki M., Yoshida M., Murskoshi I. Stable transfer and expression of chimeric genes in Licorice (Glycyrrhiza uralensis) using on Ri plasmid binary vector // Plant cell reports. 1990. - V. 8. - P. 718-721.99

145. Samir A. Ross and S. William Pelletier. New Norditerpenoid Alkaloids from Aconitum septentrionale// Tetrahedron. 1992. - Vol.48. - №7. - P.P. 1183-1192.

146. Samir A. Ross, Balawant S. Joshi, S. William Pelletier, M. Gary Newton and Arne J. Aasen. 2-Acetylseptentriosine, a New Diterpenoid Alkaloid from Aconitum septentrionale // Journal of Natural Products. 1993. - Vol.56. - №3. -P.424-429.

147. Sasson A. Production of useful biochemicals by higher-plant cell cultures: biotechnological and economical aspects // Biotechnol.: Economic and social aspects. Cambridge. - 1992. - P. 81-109.

148. Schneider S., Reustle G., Zuprian E. Detection of somaclonal variation in grapevine régénérants from protoplasts by RAPD-PCR // Vitis. 1996. - 35. -№2. -P. 99-100.

149. Schulthess B.H., Boumann T.W. Stimulation of coffein biosynthesis in suspension-cultured coffee cells and the in situ existence of 7-methylxanthosine // Phytochemistry. -1995. 38. - №6. - P. 1381-1386.

150. Singh R.J., Chromosomal variation in immature embryo derived calluses of barley // Theor. Appl. Genet. 1986. - Vol. 72. - №6. - P. 710-716.100

151. Stockint J., Obitz P., Falkenhagen H., Lutterbach R., Endreb S. Natural products and enzymes from plant cell cultures //Plant Cell, Tissue and Organ. Cult. 1995. - 43. - №2. - P. 97-109.

152. Susheelamma B.N., Shekar K. Raja, Sarkar A., Rao M.R., Datta R.K. Genotype and hormonal effects on callus formation and regeneration in mulberry // Euphytica. 1996. - 90. - №1. - P. 25-29.

153. Tabata M., Vizurami H., Hiraoka N., Sano Y., Konoshima M. The production of anthroquinones in callus cultures of Cassia tora // Lloydia. 1975. - V. 13. - P. 131-134.

154. Tabata V., Hiraoka N. Variation of alkaloid production in Nicotiana tabacum callus cultures // Physiol. Plant. 1976. - 38. - P. 19-23.

155. Telle J., Goutheret R. Cullus culture of Hyoscyamus niger // C. r. Acad. Sci. -1947.-224. -P.1653.

156. Tingey S.V., del Tufo J.P. Genetic analysis with random amplified polymorphic DNA markers // Plant Physiol. 1993. - 101. - P. 349-352.

157. Trigiano R., Caetano-Anolles G., Bassam B.G. DNA amplification fingerprinting of dogwood anthracnose fungi // Proc. South. Nurs. Assoc. 1992. -V. 37.-P. 196-199.101

158. Utelli A.-B., Roy B.A., Baltisberger M. History can be more important than 'pollination syndrome' in determining the genetic structure of plant populations: the case of Aconitum lycoctonum (Ranunculaceae) // Geobotanical Institute ETH

159. Valpuesta M., Posadas N., Ruiz A., Silva M.V., Gomes A.I., Suan R., Perez B., Pliego F., Cabezudo B. Alkaloids from Caratocopnos heterocarpa plants and in vitro cultures // Phytochemistry 1995. - 38. - №1. - p. 113-118.

160. Vazguez Flota F.A., Loyola Vargas M. A catharanthus roseus salt tolerant line. II. Alkaloid production // J. Plant Physiol. 1994. - 144. - №4-5. - P. 613-616.

161. Waller G., Nowacki E. Alkaloid biology and metabolism in planta // N.Y.; L.: Plenum Press. 1978. - 274p.

162. Welsh J., McClelland M. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers // Ibid. 1990. V.18. -P. 7211-7218.

163. White P.R. Developmental responses in isolated plant tissue systems// Expt. Sta. Record. 1945. - 92. - P. 184-185.

164. Williams J.G.K., Kubelik A.R., Livak K.J., Kafalski J.A., Tmgey V. DNA polymorphisms amplified by arbitrary polimerase useful as genetic markers // Nucleic Acids Res. -1990. Y.18. - P. 6531-6535.