Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Анализ иммунотронной активности полиоксидония и белковых препаратов крови в системе in vitro

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Прохорова, Марина Владимировна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1.Современные проблемы иммунокоррекции.

1.1.1. Иммунодефицитные состояния: формы, механизмы, принципы терапии.

1.1.2. Основы иммунокоррекции.

1.1.3. Различные подходы к классификации иммуномодуляторов и механизмы их действия.

1.2. Характеристика некоторых биологически активных препаратов.

1.2.1. Биологическая роль церулоплазмина, альбумина, иммуноглобулина G; возможности клинического применения.

1.2.2. Синтетический иммуномодулятор полиоксидоний (ПО).

1.2.2.1.Основы синтеза и свойства ПО.

1.2.2.2 Механизм иммунотропного действия ПО.

1.2.2.3. Клинические аспекты применения ПО.

1.3. Некоторые показатели иммунного гомеостаза.

1.3.1. Адгезивность.

1.3.2 Образование иммунных комплексов.

1.3.3. Активность комплемента.

1.3.4. Окислительно-восстановительная активность фагоцитов.

1.3.5. Фагоцитарно-бактерицидная функция фагоцитов.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

Глава 3. Результаты работы и их обсуждение.

3.1. Воздействие ПО на иммунологические реакции.

3.1.1. Определение физиологических и цитотоксических концентраций ПО.

3.1.2. Влияние ПО на спонтанное розеткообразование Т-лимфоцитов доноров.

3.1.3. Действие ПО на адгезивность мононуклеарных клеток доноров к синтетическому носителю.

3.1.4. Влияние препарата ПО на классический путь активации системы комплемента.

3.1.5. Воздействие ПО на циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК).

3.1.6. Влияние ПО на активность перекисного окисления липидов (ПОЛ).

3.2. Действие ПО на реакции клеточного иммунитета и неспецифической резистентности у пациентов с термической травмой.

3.2.1. Влияние ПО на розеткообразующую способность Т-лимфоцитов ожоговых больных и доноров.

3.2.2. Действие ПО на уровень циркулирующих иммунных комплексов.

3.2.3. Воздействие ПО на функциональную активность нейтрофилов пациентов с термической травмой.

3.2.4. Влияние ПО на фагоцитарную активность нейтрофилов у ожоговых больных.

3.3. Препараты белков сыворотки крови человека.

3.3.1. Возможности использования церулоплазмина (Ср) как иммуномо дулятора.

3.3.1.1. Влияние Ср на кооперативные свойства Т-лимфоцитов (в тесте розеткообразования и адгезии) и факторы неспецифической резистентности.

3.3.1.2. Исследование совместного действия ПО и Ср на иммунные реакции (возможности использования в практической иммунокоррекции).

3.3.2.1. Воздействие препарата иммуноглобулина (IgG) на показатели состояния иммунной системы в условиях in vitro.

3.3.2.2. Комплексное влияние препаратов ПО и IgG на иммунные реакции.

3.3.3.1. Влияние альбумина (Alb) на реакции клеточного иммунитета и неспецифической резистентности.

3.3.3.2. Эффекты совместного действия Alb и ПО.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Анализ иммунотронной активности полиоксидония и белковых препаратов крови в системе in vitro"

Актуальность проблемы

Последние десятилетия характеризуются интенсивным поиском новых иммуномодулирующих средств, причем особый интерес исследователей вызывают химически синтезированные препараты.

В медицинской практике большое внимание уделяется новому химически синтезированному высокомолекулярному иммуномодулятору - полиоксидонию (ПО), который обладает широким спектром фармакологического действия (Петров Р.В., Кабанов В.А., 2002). ПО — оригинальный отечественный препарат, не имеющий аналогов в мире. Впервые синтезирован д.х.н. профессором А.В. Некрасовым и разработан в государственном научном центре Институте иммунологии МЗ РФ, Москва. ПО является одним из наиболее эффективных препаратов для стимуляции иммунной системы. Лечение многих хронических заболеваний становится более результативным при активации иммунитета больного с помощью ПО в комплексе с терапией основного заболевания. В настоящее время действие ПО in vivo является достаточно изученным, именно поэтому ПО широко применяется в клинической практике (Дьяконова В.А. и др., 2002; Дамбаева С.В. и др., 2000). Однако неисследованными остаются аспекты функционального взаимодействия ПО с белками крови, которые обладают специфической и параспецифической физиологической иммуномодулирующей активностью.

В связи с этим целью настоящей работы является изучение физиологического эффекта совместного воздействия иммуномодуляторов различного происхождения (химически синтезированного ПО и белковых препаратов крови человека) на клеточные реакции и факторы неспецифической резистентности в условиях in vitro.

В соответствии с целью определены следующие задачи:

1. Исследование действия синтетического иммуномодулятора ПО на иммунологические реакции и факторы неспецифической резистентности организма человека in vitro, а также определение границ физиологического и цитотоксического действия на выделенные клетки.

2. Изучение действия ПО на иммунологические показатели клеточных реакций и факторы неспецифической резистентности организма человека при ожоговой интоксикации.

3. Выяснение эффектов воздействия церулоплазмина (Ср), гамма-глобулина (IgG) и альбумина (Alb) на иммунологические реакции и показатели неспецифической резистентности in vitro.

4. Изучение совместного влияния препаратов различного происхождения (ПО и Ср, ПО и IgG, ПО и Alb) на функциональную активность лимфоцитов периферической крови человека и неспецифическую резистентность in vitro.

Новизна научных исследований

• Проведенные исследования позволили установить стимулирующее влияние ПО в системе in vitro на иммунокомпетентные клетки (ИКК), снижение уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), причем мелкодисперсных (повреждающих); выявлена умеренная стимуляция системы комплемента; установлен дозозависимый антиоксидантный эффект ПО на процессы ПОЛ в сыворотке крови.

• Показано действие ПО in vitro на иммунологические реакции крови пациентов с термической травмой как модели воспалительной и интоксикационной патологии.

• Впервые получены данные о комплексном влиянии препаратов различного происхождения (эндогенных и химически чистых) на иммунологические реакции.

Практическая значимость выполненного исследования заключается в том, что получены дополнительные данные, обосновывающие применение ПО в качестве иммуномодулятора. Показана принципиальная возможность комплексного использования препаратов различного происхождения с целью повышения эффективности этиотропной терапии соответствующих заболеваний.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

• На выделенной из крови человека популяции лимфоцитов в экспериментах in vitro определены физиологически действующие, не повреждающие концентрации ПО и доказана его иммуномодулирующая активность.

• Выявлено иммуностимулирующее влияние ПО на кооперативное взаимодействие (ИКК), обеспечивающее реакции розеткообразования Т-лимфоцитов и адгезию мононуклеаров. Установлено активирующее влияние ПО на систему комплемента и снижение уровня мелкодисперсных ЦИК под действием ПО в условиях in vitro.

• Установлено, что стимулирующее воздействие ПО на иммунологические реакции и неспецифическую резистентность сохраняется при использовании с нативными иммуномодуляторами (Ср, IgG, Alb).

• В экспериментах in vitro доказана обоснованность применения ПО при ожоговой интоксикации в ряде случаев.

Апробация работы

По теме диссертации опубликовано 7 научных работ. Основные положения диссертации обсуждены на

• III сессии молодежной школы-семинара «Экологическая и промышленная безопасность» (Саров, 2003),

• 8-й Международной Пущинской конференции молодых ученых (Пущино, 2004),

• Международной конференции молодых ученых «От фундаментальной науки - к новым технологиям.» (Тверь, 2002.),

• IX нижегородской сессии молодых ученых (Н. Новгород, 2004),

• XIII международной конференции «Ферменты микроорганизмов: структура, функции, применение» (Казань, 2005).

Структура и объем диссертации.

Материалы диссертации изложены на 126 страницах машинописного текста, иллюстрированы 26 таблицами и 11 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы, характеристики материалов и методов исследования, обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, содержащего 158 источников, из которых 30 на иностранных языках.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Прохорова, Марина Владимировна

109 ВЫВОДЫ

1. В экспериментах in vitro на популяции лимфоцитов, выделенных из крови человека, установлено отсутствие повреждающего токсического эффекта ПО; доказана выраженная иммуномодулирующая активность ПО в изучаемой системе.

2. Выявлено стимулирующее влияние ПО на кооперативное взаимодействие иммунных клеток (в реакциях розеткообразования Т-лимфоцитов и адгезии мононуклеаров) и систему комплемента. Отмечено снижение уровня мелкодисперсных ЦИК под действием ПО.

3. В модельной системе in vitro на клетках крови пациентов с термической травмой показано стимулирующее действие ПО на клеточные реакции и неспецифическую резистентность. Выявлено дозозависимое влияние ПО на уровень циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке ожоговых больных.

4. Обнаружена зависимость влияния ПО на функциональную активность нейтрофилов в НСТ-тесте от используемой дозы препарата и тяжести состояния ожоговых больных. Фагоцитарно-бактерицидная способность нейтрофилов в отношении микробных клеток увеличивается независимо от используемой дозы ПО и площади ожога.

5. Обнаружено более эффективное совместное действие препаратов ПО с церулоплазмином, гамма-глобулином и альбумином на кооперативные свойства иммунокомпетентных клеток, чем действие отдельных препаратов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Основной предпосылкой данной работы явилась недостаточная изученность клеточно-молекулярных механизмов действия ПО на функционирование клеточных и гуморальных факторов иммунитета. Анализ литературных данных свидетельствует о том, что действие ПО in vivo является достаточно исследованным, именно поэтому ПО широко применяется в клинической практике. Неизученным также остается эффект совместного воздействия ПО с другими препаратами на иммунологические реакции.

В связи с этим цель настоящей работы определена как изучение влияния препарата ПО на иммунологические реакции in vitro в норме и при патологии, а также исследование физиологического эффекта совместного воздействия иммуномодуляторов различного происхождения (химически синтезированного ПО и белковых препаратов) на клеточные реакции и факторы неспецифической резистентности в условиях in vitro.

Для достижения указанной цели было изучено действие препарата ПО отдельно и в комплексе с белками крови на некоторые показатели адаптивного иммунного ответа и факторы неспецифической резистентности.

Первым этапом настоящей работы явилось исследование влияния ПО на кооперативное взаимодействие иммунокомпетентных клеток крови человека, обеспечивающее реакции розеткообразования Т-лимфоцитов и адгезию мононуклеаров in vitro.

Изучение влияния ПО на экспрессию рецепторов контактного взаимодействия мононуклеарных клеток периферической крови человека in vitro был проведен нами с помощью теста спонтанного розеткообразования.

Используя тест спонтанного розеткообразования, мы провели исследование влияния ПО на количественное содержание как «активных», так и «общих» Е-розеткообразующих клеток (Е-РОК) доноров в условиях in vitro.

Изменение количества Е-розеткообразующих Т-лимфоцитов может служить показателем уменьшения либо увеличения уровня экспрессии CD2 антигена. Наряду с другими методами тест спонтанного розеткообразования может быть использован в качестве модели для оценки воздействия различных соединений на уровень экспрессии Т-лимфоцитами молекулы адгезии CD2 (Макарков А.И. и др., 1997). Показано, что во всех исследованных концентрациях ПО обладает эффективным стимулирующим действием на формирование как «активных», так и «общих» Е-РОК.

С целью выяснения механизмов нарастания розеткообразующей активности Т-лимфоцитов, были изучены адгезивные свойства иммунокомпетентных клеток. Данное исследование было проведено нами в условиях in vitro с помощью стандартизованной модельной системы, предусматривающей взаимодействие с синтетическим волокном популяции выделенных и отмытых от плазмы крови клеток. Синтетическое волокно применяли с целью моделирования физиологических процессов межклеточных взаимодействий во время иммунного ответа (Arnold L. et al., 1974).

Нами установлено стимулирующее действие ПО на адгезивную способность популяции мононуклеарных клеток, выделенных из периферической крови доноров во всех исследованных концентрациях препарата.

Сравнивая результаты, полученные с помощью тестов розеткообразования и адгезии, можно заключить, что изменения иммунологических показателей носили однонаправленный характер. То есть, по крайней мере, часть эффекта, состоящего в увеличении процента прилипающих к синтетическому волокну мононуклеарных клеток доноров под влиянием препарата ПО можно объяснить повышением экспрессии молекулы CD2, показателем которого служит увеличение количества Е-розеткообразующих лимфоцитов.

Следующим этапом работы явилось изучение влияния ПО на один из факторов неспецифической резистентности организма - систему комплемента. В диапазоне исследованных концентраций препарата не обнаружено дозозависимого эффекта; активность системы комплемента повысилась на 10-22% в сравнении с контролем, что, вероятно, может быть взаимосвязано со способностью заряженных групп макромолекулы ПО взаимодействовать с активным центром компонентов комплемента, стимулируя, таким образом, протекание следующих протеолитических процессов.

В дальнейшем было исследовано влияние ПО на реакции образования ЦИК. В результате экспериментов нами выявлено стабильное снижение уровня мелкодисперсных ЦИК под действием ПО во всех исследованных концентрациях. Возможно, это взаимосвязано со способностью полярных групп молекул ПО изменять комплексообразование ЦИК. Фактически это коррелирует с детоксицирующим эффектом ПО.

Наряду с иммуномодулирующим и детоксицирующим эффектом ПО в системе in vitro нами были исследованы антиоксидантные свойства с помощью метода оценки активности ПОЛ. В результате проведенных экспериментов установлено дозозависимое действие ПО на общую антиоксидантную активность и потенциальную способность системы к ПОЛ.

В то же время представляло интерес исследовать воздействие ПО на некоторые иммунологические реакции в условиях нарушенного иммунного статуса и эндоинтоксикации. Одним из ярких примеров патологии, сопровождающейся дисбалансом иммунных реакций, является ожоговая болезнь. Кроме того, при ожоговой болезни развивается ее характерный патогномичный синдром — эндоинтоксикация, отражающая тяжесть, остроту заболевания и определяющий различные висцеропатии

Турсунов Б.С. и др. 1992).

С помощью теста спонтанного розеткообразования нами было исследовано воздействие ПО на формирование «активных» и «общих» Е-РОК лимфоцитами периферической крови ожоговых больных, дающее возможность судить об изменении экспрессии молекулы адгезии CD2. Нами было выявлено стимулирующее действие ПО на розеткообразующие свойства Т-лимфоцитов крови пациентов с термической травмой, которое оказалось достоверно выше, чем у доноров.

Одним из этапов работы было исследовано влияние ПО на реакции образования ЦИК в сыворотке пациентов с термической травмой. Установлено дозозависимое действие ПО на уровень ЦИК в сыворотке ожоговых больных.

При исследовании влияния ПО на нейтрофилы периферической крови ожоговых больных обнаружено, что ПО не оказывает цитотоксического действия в изучаемой модельной системе. Установлено, что влияние ПО на функциональную активность нейтрофилов в НСТ-тесте зависит от используемой дозы препарата и тяжести состояния ожоговых больных. Функциональная активность нейтрофилов периферической крови пациентов с ожогом менее 30 % поверхности тела под влиянием ПО в концентрации до 100 мкг/мл снижалась, а под действием концентрации 500 мкг/мл - повышалась. У пациентов с ожогом более 30 % поверхности тела функциональная активность нейтрофилов периферической крови под действием всех исследуемых концентраций ПО достоверно повышалась. Показано, что под влиянием ПО фагоцитарно-бактерицидная способность нейтрофилов в отношении микробных клеток увеличивается независимо от используемой дозы препарата и площади ожога.

Одной из задач настоящего исследования явилось изучение эффектов совместного воздействия ПО с белками сыворотки крови на иммунологические реакции in vitro.

В результате проведённых экспериментов была обнаружена более выраженная стимуляция клеточных реакций (розеткообразования и адгезии) при совместном действии ПО и Ср по сравнению с отдельно взятыми препаратами.

Одним из этапов исследования ПО и Ср на иммунологические реакции было изучение их действия на мелкодисперсные и крупнодисперсные иммунные комплексы. Установлено, что отдельно взятые препараты ПО и Ср и при их совместном использовании однонаправлено влияют на уровень ИК: значительно снижают содержание мелкодисперсных ИК, уровень крупнодисперсных ЦИК снижается незначительно под действием всех исследованных концентраций. Это еще раз подчеркивает значение адаптационного эффекта действия исследованных препаратов, учитывая, что патофизиологическое влияние мелко- и крупнодисперсных ЦИК различно.

Комплексное воздействие ПО с IgG и Alb на иммунные реакции характеризовалось суммирующим эффектом, учитывая, что ПО оказывает стимулирующего влияние на изучаемые реакции, a IgG и Alb, -сдерживающее. Мы предполагаем, что снижение стимулирующего эффекта ПО при совместном использовании с IgG происходит вследствие рецепторных взаимодействий молекул IgG с лимфоцитом, уменьшающих (стерически) свободную для контакта с молекулой ПО поверхность клетки. В случае с Alb, возможно, происходит адсорбирование ПО молекулами Alb, что приводит к снижению концентрации ПО, поскольку в условиях in vivo Alb обладает выраженной комплексирующей и адсорбционной функцией.

Обобщая результаты исследований, можно заключить, что в модельной системе in vitro получены новые данные по действию иммуномодулятора ПО на клетки иммунной системы и факторы неспецифической резистентности не только в норме, но и при патологии (ожоговая травма).

Принципиальное значение имеет исследование действия ПО совместно с белковыми препаратами сыворотки крови. Полученные данные раскрывают новые механизмы действия препаратов различного происхождения и имеют научно-практическое значение.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Прохорова, Марина Владимировна,

1. Коррекция иммунологических нарушений у больных с панкреонекрозом / В. Л. Аверкиев, В. С. Тарасенко, Т. В. Латышева и др. // Иммунология. 2002. - № 6. - С. 356 - 359.

2. Александров А.В. Анализ механизма модуляции межклеточных молекул адгезии ICAM / А.В. Александров, A.M. Джексон, А.Г. Румянцев // Иммунология. 1997. - № 1. - С. 4-11.

3. Алиханов, Х.А. Современное комбинированное лечение сепсиса / Х.А. Алиханов, А.И. Хрипун, И.Н. Хуторянский // Тез. докл. V Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», М. -1998.-С. 10.

4. Асельродова, А.Ш. Иммунопротекторный эффект церулоплазмина в остром периоде у больных, перенесших критические состояния различного генеза / А.Ш. Асельродова // Анастезиология и реанематология. 1992. - №2. - С. 43^45.

5. Иммуномодулятор полиоксидоний в комплексной терапии больных туберкулезом легких / С. С. Аршинова, Б. В. Пинегин, В. А. Стаханов и др. //Иммунология.-2001.-№ 3,-С. 35-40.

6. Беляков, Н.А. Эндогенные интоксикации и лимфатическая система / Н.А. Беляков // Эфферент. терапия 1998. - №2. - С. 10-17.

7. Антиоксидантное и иммуномодулирующее воздействие церулоплазмина при экспериментальной гриппозной инфекции / Н.К. Берлинских, З.Д. Савцова, О.Л. Санина и др. // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1994. - Т. 118. - №9. - С.285-287.

8. Боценовский, В.А. Молекулы клеточной адгезии человека / В.А. Боценовский, А.Ю. Барышников // Успехи современной биологии. -1994. Т.114. - Вып.6. - С.741-753.

9. Вавилова, JI.M. Система комплемента. Механизмы активации и регуляции, значение в биологии и медицине / JI.M. Вавилова, Т.В. Голосова // Итоги науки и техники. Иммунология. 1990. - Т.24. -С. 12-16.

10. Величковский, Б.Т. Свободно-радикальное окисление как звено срочной и долговременной адаптации организма к факторам окружающей среды / Б.Т. Величковский // Вестн. Акад. мед. наук. — 2001.-№9.-С. 45-52.

11. Вершигора, А.Е. Основы иммунологии / А.Е. Вершигора. Киев: Вища школа, 1980. - 504 с.

12. Веретенникова, Н.И. Структурные основы действия пептидных и белковых иммунорегуляторов / Н.И. Веретенникова Рига: Зинатне. 1990.-322с.

13. Вельбри, С.К. Одновременная оценка уровня иммунных комплексов и иммуноглобулинов для характеристики патологического процесса / С.К. Вельбри, А.Л. Лиллеорг, С.Л. Линдстрем // Лабораторное дело. -1987. -№5.-С.7 11.

14. Воложин, А.И. Иммунитет, типовая форма его нарушения и принципы коррекции / А.И. Воложин, Т.И. Сашкина, З.И. Савченко. — М.: Моск. мед. стомат. ин-т им. Н.А. Семашко. 1997. - 100 с.

15. Влияние полиоксидония на уровень интоксикации у ожоговых больных / Н.А. Гординская, С.И. Пылаева, В.Г. Сидоркин и др. // Иммунология. 2002. - №6. - С.363-365.

16. Иммунонлогическая и клиническая эффективность применения полиоксидония в терапии сосудистых осложнений диабета / Т.И. Гришина, А.В. Жданов, А.В. Хаев и др. // Тез. докл. II съезд иммунологов России, Сочи. 1999. - 262 с.

17. Влияние некоторых иммуномодуляторов на функциональную активность фагоцитарных клеток периферической крови доноров Дамбаева С.В., Мазуров Д.В., Голубева Н.М. и др. // Иммунология. -2000.-№6.-С. 15-20.

18. Добротина, Н.А. Эндоинтоксикация организма человека: методологические и методические аспекты / Н.А. Добротина, Т.В. Копытова. Н.Новгород, 2004. - 63с.

19. Долгушин, И.И. Иммунология травмы / И.И. Долгушин, Л .Я. Эберт, Р.И. Лифшиц. Свердловск, 1989. - 187с.

20. Дударев, И.В. Эффективность полиоксидония в экстракорпоральной терапии сепсиса у больных с врожденными пороками сердца / И.В. Дударев, Л.П. Сизякина, А.А. Дюжиков // Иммунология. 2002. - №6. - С.353-356.

21. Изучение взаимодействия полиоксидония с клетками иммунной системы с помощью проточной цитофлюориметрии / В.А. Дьяконова, С.В. Климова, В.В. Кулаков и др. // Иммунология. 2002. - №6. -С.334-337.

22. Жданова, Л.И. Противовирусная эффективность иммуноглобулина и виферона у детей с врожденными пороками сердца / Л.И. Жданова,

23. Л.С. Лозовская, В.А. Тоболин // Тез. докл. IV Российский национальный конгресс «Человеки лекарство», М. -1997.-С. 219.

24. Земсков, A.M. Доступные методы оценки и коррекции иммунных нарушений у больных / A.M. Земсков, В.М. Земсков, В.И. Золоедов // Клиническая лабораторная диагностика. — 1997. — № 3. С. 3 - 4.

25. Синдром вторичной иммунной недостаточности (протоколы диагностики) / Н. И. Ильина, Т. И. Латышева, Б. В. Пинегин и др. // Иммунология. 2000. - № 5. - С. 8 - 9.

26. Исследование иммуностимулирующей активности комплекса веществ мурамилпептидной природы в опытах in vivo и in vitro / А.Н. Ильинская, Л.В. Пичугина, В.В. Кулаков // Иммунология. 2004. - № 5.-С. 271-275.

27. Исрафилов, А.Г. Получение церулоплазмина из отходов производства препаратов крови: Автореф. дис.канд. мед. наук / А.Г. Исрафилов. -Уфа. 1993.-22с.

28. Истамов, Х.И. Экологические аспекты биологического действия ксенобиотиков / Х.И Истамов. Пермь, 1994. - 206 с.

29. Караулов, А.В. Иммунотерапия и иммунореабилитация в клинике внутренних болезней / А.В. Караулов // Тез. докл. II съезд иммунологов России, Сочи. 1999. - С. 209 - 210.

30. Кетлинский, С.А. Эндогенные иммуномодуляторы / С.А. Кетлинский, А.С. Симбирцев, А.А. Воробьев. СПБ. Гиппократ, 1992.

31. Опыт клинического применения иммуномодулятора полиоксидония у детей с лимфомой Ходжкина и гистиоцитозом из клеток Лангерганса / А.В. Киселев, Г.А. Гордина, В.В. Ильяшенко и др. // Иммунология. -2002. №6. - С.370-372.

32. Иммуномодулирующая реактивность организма в условиях естественного дефицита цинка / Р.В. Ковальчук, В. Л. Сусликов, Л.М. Карзакова // Иммунология. 2004. - №6. — С. 336-369.

33. Полиоксидоний в комплексной терапии рецидивирующих инфекций урогенитального тракта / М.Х. Коджаева, Н.М. Подзолкова, А.В. Кулаков и др. // Иммунология. 2002. - №6. - С. 376-379.

34. Козлов, JI.B. Белки системы комплемента: активация и регуляция / Л.В. Козлов // Иммунология. 1997. - № 2. - С. 8 - 13.

35. Константинова, Н.А. Иммунные комплексы и повреждение тканей / Н.А. Константинова. М.: Медицина, 1996. - 256 с.

36. Копытова, Т.В. Информационное значение показателей гуморального гомеостаза при различных формах ИБС: Дис. канд. биол. наук: / Т.В. Копытова. -Н. Новгород. 1991. 186 с.

37. Иммуномодулирующие и микробицидные эффекты полиоксидония в терапии ВИЧ-инфекции / Т.Н. Кузина, Л.П. Сизякина, И.И. Андреева и др. // Иммунология. 2002. - № 6. - С. 346-349.

38. Кульберг, А.Я. Сывороточный иммуноглобулин как ингибитор лектинов: новый подход к изучению функционального взаимодействия факторов естественного и приобретенного иммунитета / А.Я. Кульберг, Ю.Б. Беркун // Иммунология. 1998. - № 2. - С. 26-30.

39. Лазарева, Д. Н. Стимуляторы иммунитета / Д. Н. Лазарева, Е. К. Алехин. М.: Медицина, 1985. - 256 с.

40. Ларский, Э.Г. Методы определения и метаболизм металлобелковых комплексов / Э.Г. Ларский. Итоги науки и техники. Сер. Биологическая химия. - М.: ВИНИТИ, 1990. - Т.41- 198с.

41. Лесков, В.П. Клиническая иммунология для врачей / В.П. Лесков, Л.Н. Чередеев, Н.К. Горлина. Фармарус Принт, 1997. - 120 с.

42. Литман, Г. Иммуноглобулины / Г. Литман, Р. Гуд. М.:Мир. 1981. — 495с.

43. Луйк, А.И. Сывороточный альбумин и биотранспорт ядов / А.И. Луйк, В.Д. Лукьянчук. М.Медицина. 1984. - 224с.

44. Роль иммуномодулирующей терапии в общеклинической практике / Л. В. Лусс, А. В. Некрасов, Н. Г. Пучкова и др. // Иммунология. -2000.-№5. с. 34-39.

45. Ляпон, А.О. Комплексный анализ Т-лимфоцитов в тесте розеткообразования / А.О. Ляпон // Лаб. дело. 1980. - №1. - с.21 -22.

46. Макарков, А.И. Механизмы регуляции экспрессии поверхностных структур дифференцированного лимфоцита / А.И. Макарков, Г.В. Порядин, Ж.М. Салмаси // Иммунология. 1997. - №3. - С. 4-8.

47. Малахова, М.Я. Эндогенная интоксикация как отражение компенсаторной перестройки обменных процессов в организме / М.Я. Малахова // Эфферент. терапия. 2000. - №4. - С. 3-14.

48. Мальева, Л. Простой метод выделения лимфоцитов из периферической крови человека / Л. Мальева, Х.В. Диас, А. Гонсалес-Гриего //Лаб. дело. 1979. - №1. - с. 7 - 9.

49. Манько, В. М. Иммуномодуляция: история, тенденции развития, современное состояние и перспективы / В. М. Манько, Р. В. Петров, Р. М. Хаитов // Иммунология. 2002. - № 3. - С. 132 - 138.

50. Матвеев, Н.А. Медицинские проблемы экологии / Н.А. Матвеев. — Н. Новгород, 1992.- 172 с.

51. Матусис З.Е. К методике определения индекса завершенности фаноцитоза / З.Е. Матусис, С.И. Пылаева // Лаб. дело. 1972. - №4. -С. 237-240.

52. Машковский, М. Д. Лекарственные средства: Пособие для врачей / М. Д. Машковский. М.: Медицина, 1993. - Ч. 2. - С. 192 - 209.

53. Характеристика функциональной активности нейтрофилов крови человека с помощью реакции восстановления нитросинего тетразолия / Маянский А.Н., Виксман М.Е., Котельников П.Н. и др. // Микробиология. 1977. -№ 6. - С. 108 - 110.

54. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск: Наука. 1983. - 340с.

55. Маянский, А.Н. Клинические аспекты фагоцитоза / А.Н. Маянский, О.И. Пикуза. Казань. 1993. -135с.

56. Меньшиков, В.В. Лабораторные методы исследования в клинике / В.В. Меньшиков. М.: Медицина, 1987. - 365 с.

57. Активность церулоплазмина сыворотки крови при прогрессирующих заболеваниях центральной нервной системы / Т.Н. Мжельская, И.А. Завалишин, И.А. Иванова-Смоленская и др. // Лаб. дело. 1989. -№11. - С.12-16.

58. Михайлова, А.А. Индивидуальные миелопептиды лекарства «нового поколения», используемые для иммунореабилитации / А.А. Михайлова // Int. Iwunoreabil. - 1996. - №2. - С. 27-31.

59. Мотавкина, Н.С., Микрометод определения комплементарной активности сыворотки и др. биологических жидкостей / Н.С. Мотавкина, Б.Н. Ковалев, А.С. Шаронов //Лаб. дело. 1980. - №1. - с. 433-434.

60. Мушкамбаров, Н.Н Молекулярная биология. Учебное пособие для студентов медицинских вузов / Н.Н. Мушкамбаров, С.Л. Кузнецов. -М.:МИА. 2003.-535с.

61. Насонов, Е.Л. Иммунные комплексы при ревматических заболеваниях / Е.Л. Насонов // Итоги науки и техники. Иммунология. 1981. - Т.11. -С. 104-144.

62. Некрасов, А.В. Механизм катионной полимеризации азотсодержащих циклов: Авторев. дис.канд. хим. наук: 02.00.08 / А.В. Некрасов -М., 1971.

63. Некрасов, А.В. Химические аспекты создания полиоксидония / А.В. Некрасов, Н.Г. Пучкова, С.А. Иванова // Иммунология. 2000. - №5. - С.9-16.

64. Некрасов, А.В. Полиоксидоний: основы синтеза и свойства / А.В. Некрасов, Н.Г. Пучкова // Иммунология. 2002. - №6. - С.329-334.

65. Нейфах, С.А. Строение, каталитические свойства и эволюция церулоплазмина и других голубых белков / С.А. Нейфах, В.Б. Васильев, М.М. Шавловский // Успехи биол. химии. 1988. - Т. 28. - С. 102-123.

66. Нестерова, И.В. Программа иммунореабилитации больных вторичными иммунодефицитами / И.В. Нестерова // Int. Immunorehabil. 1991. - №9. - С.40-46.

67. Нестерова, И.В. Современная иммунотерапия в клинической медицине: возможности и перспективы / И.В. Нестерова // Тез. докл. II съезд иммунологов России, Сочи. 1999. - С. 229.

68. Николаев, А.И. Подавление и стимуляция иммунитета лекарственными препаратами / А.И. Николаев, О.А. Федоренко. -Ташкент: Медицина. 1984. 224с.

69. Осипов, С.Г. Методы определения циркулирующих иммунных комплексов / С.Г. Осипов, В.В. Еремеев, В.И. Руднев // Лаб. дело. -1983.-№11.-с. 3-8.

70. Пальцев, М.А. Межклеточные взаимодействия / М.А. Пальцев, А.А. Иванов. М.: Медицина. 1995. - 224с.

71. Петров, Р. В. Я или не я. Иммунологические мобили / Р. В. Петров-М., 1987.

72. Петров, Р.В. Иммунология / Р.В. Петров. М.: Медицина, 1987. - 414 с.

73. Петров, Р.В. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. -1994.-№6.-С. 6-10.

74. Петров, Р.В. Иммунодиагностика иммунодефицитов / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 1997. - № 4. - С. 4 - 7.

75. Петров, Р.В. Полиоксидоний иммуномодулятор последнего поколения: итоги трехлетнего клинического применения / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, А.В. Некрасов // Алл. аст. и клин, иммунол. — 1999. -№3.- с. 3-6.

76. Петров, Р.В. Полиоксидоний — препарат нового поколения иммуномодуляторов с известной структурой и механизмом действия / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, А.В. Некрасов // Иммунология. 2000. -№5.-с. 24-28.

77. Конъюгированные полимер-субъединичные иммуногены и вакцины / Р.В. Петров, В.А. Кабанов, P.M. Хаитов и др. // Иммунология. 2002. - №6. - С.324-329.

78. Пинегин, Б.В. Иммунодефицитные состояния: возможности применения иммуномодуляторов / Б.В. Пинегин // Леч. Врач. 2001. №3.-С. 35-37.

79. Плате, Н.А. Физиологически активные полимеры / Платэ Н.А., Васильев А.Е. М., 1986.

80. Плейфер, Дж. Наглядная иммунология / Дж. Плейфер М.: ГЭОТАР Медицина. 1998. - 96с.

81. Пономарева, A.M. Иммунобиологические препараты: сб. науч. трудов / A.M. Пономарева, В.А. Алешкин, М.Н. Розина. М., 1989. - 190с.

82. Взаимодействие церулоплазмина с рецептором плазматической мембраны клеток CV-1 и его регуляция по типу обратной связи / Л.В. Пучкова, Л.К. Сасина, Т.Д. Алейникова и др. // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1995. - Т. 119. - №4. - С.417-420.

83. Реконструирование пути межклеточного переноса пептидной части молекулы церулоплазмина в организме млекопитающих / Л.В. Пучкова, Л.К. Сасина, Т.Д. Алейникова и др. // Биохимия. 1997. — Т.62. - №7.-С.817-825.

84. Романова, А. В. Применение полиоксидония в комплексной терапии больных с тяжелой формой бронхиальной астмы / А. В. Романова, Т.

85. B. Латышева // Иммунология. 2002. - № 6. - С. 372 - 376.

86. Ройт, А. Основы иммунологии / А. Ройт. М.: Мир, 1991. - 327с.

87. Русанов, В. М. Фракционирование белков плазмы в производстве препаратов крови / В. М. Русанов, Л. И. Скобелев. М.Медицина. 1983.-224с.

88. Рутницкий, А.Ю. Роль церулоплазмина в регуляции функционального состояния отдельных звеньев иммунитета: Дис.канд. биол. наук: 03.00.13, 14.00.36 / А.Ю. Рутницкий. -Н. Новгород. 2001. 125 с.

89. Самсыгина, Г.А. Иммунокоррегирующая терапия тяжелых форм кандидоза новорожденных / Г.А. Самсыгина // Тез. докл. IV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», М. — 1997.-С. 233.

90. Санина, О.Л. Биологическая роль церулоплазминаи возможности его клинического применения / О.Л. Санина, Н.К. Берлинских // Вопр. мед. химии. 1986. - Т.32. - №5. - С7-14.

91. Сараф, А.С. Перспектива применения нового отечественного иммуномодулятора полиоксидония в комплексном лечении офтальмохламидиоза / А.С. Сараф, С.А. Борзенок, А.В. Некрасов // Тез. докл. II съезд иммунологов России, Сочи. 1999. - С. 156.

92. Села, М. Перспективы биоорганической химии и молекулярной биологии / М. Села. М.: Наука, 1986. - С. 287-290.

93. Сепиашвили, Р.И. Иммунореабилитация: определение и современная концепция / Р.И. Сепиашвили // Int. Immunorehabil. 1998. - №10.1. C.5-8.

94. Серов, В.Н. Иммуноглобулинотерапия у беременных с герпесвирусной инфекцией // В.Н. Серов, Б.Л. Гуртовой, В.Л. Тютюнник, З.С. Зайдиева // Вестник акушера гинеколога. 1997. - С. 3-4, 42-44.

95. Сизякина, Л.П. Эффективность использования полиоксидония в терапии ВИЧ-инфекции / Л.П. Сизякина, И.Л. Докукина, А.Б. Шемшура // Иммунология. - 2000. - №5. - с. 9 - 10.

96. Сизякина, Л.П. Эффективность иммунокоррегирующей терапии полиоксидонием у детей, прооперированных по поводу врожденных пороков сердца синего типа / Л.П. Сизякина, И.В. Дударев, А.А. Дюжиков // Иммунология. 2002. - №6. - С.356-359.

97. Скрябина, Э.Г. Иммуномодулирующее действие миело- и лейкопептидов на Т-лимфоцитов здоровых (доноров) и больных с тяжелой хирургической инфекцией in vitro / Э.Г. Скрябина, М.Н. Свержева, А.А. Михайлов // Иммунология. 1987. - №4. - с. 93 - 96.

98. Соркина, Д. А. Структурно-функциональные свойства белков / Д. А. Соркина, И. Н. Залевская. Киев: Высш. шк. 1990. - 215с.

99. Степанов, В.М. Молекулярная биология. Структура и функции белков / В.М. Степанов. М.:Высш. шк. 1996. -335с.

100. Скрининг-тест для оценки патогенных свойств ЦИК / Стручков П.В., Константинова Н.А., Лаврентьев В.В. и др. // Лаб. дело. 1989. -№7.-С. 410-413.

101. Суринов, Б.П. Влияние нуклеината натрия на кооперацию и супрессию иммунокомпетентных клеток / Б.П. Суринов, В.Г. Исаева // Иммунология. 1997. -№ 4. - С. 53 - 55.

102. Тешукова, А.В. Применение иммуностимулирующего препарата полиоксидония при хроническом бронхите / А.В. Тешукова, Н.М. Старостина, Н.Ю. Соловьев // Тез. докл. II съезд иммунологов России, Сочи.- 1999.-С. 224.

103. Тимаков В.Д. Микробиология: Учебник / В.Д. Тимаков, B.C. Левашев, Л.Б. Борисов. М.Медицина, 1983. 512с.

104. Титов, В.Н. Роль макрофагов в становлении воспаления / В.Н. Титов // Клин. лаб. диагностика. 2003. - №12. - С. 3-10.

105. Труханова, И. Г. Неспецифическая коррекция иммунной системы при синдроме хронической усталости / И. Г. Труханова, А. В. Малыгина // Иммунотерапия и иммунореабилитация. 2004. - Vol. 9. -с. 273.

106. Туркин, В.В. Иммуноферментный анализ церулоплазмина / В.В. Туркин, И.В. Дробот // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1991. - №7. - С. 66-69.110. Турсунов Б.С. и др. 1992

107. Тютюнников, С. В. Применение полиоксидония у больных с синдромом хронической усталости / С. В. Тютюнников, Е. А. Вагайцева // Иммунотерапия и иммунореабилитация. 2004. - Vol. 9. -с. 273.

108. Утешев Б.С., Сергеев А.В., Коростелев С.А. О некоторых вопросах скрининга иммунотропных препаратов. // Иммунология. 1995. — № 5.-С. 14-19.

109. Флайшман, Д. Иммунология / Д. Флайшман, Д. Дейви. М.:Мир. -1989. -Т.1. -С.313-336.

110. Иммуномодулирующий эффект нуклеината натрия и спленина у больных вирусными и токсическими гепатитами / В.М. Фролов, Н.А. Пересадин, Ю.А. Ененко и др. // Иммунология. 1994. - №6. - С. 65.

111. Иммуномодулятор полиоксидоний в профилактике и лечении хирургической инфекции / Р. М. Хаитов, Т. Л. Щельцына., А. А. Бутаков и др. // Хирургия. 1997. - № 1. - С. 49 - 54.

112. Хаитов, Р. М. Современные подходы к оценке основных этапов фагоцитарного процесса / Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин // Иммунология. 1995. -№ 3. - С. 1 - 13.

113. Хаитов, Р. М. Экологическая иммунология / Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин, X. М. Истамов. М., 1995.

114. Хаитов, Р. М. Иммуномодуляторы и некоторые аспекты их клинического применения / Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин // Клиническая медицина. 1996. - № 8. - С. 7-12.

115. Хаитов, P.M. Оценка иммунной системы человека: современное состояние вопроса, сложности и достижения / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин, А.Н. Чередеев // Иммунология. 1998. - № 6. - С. 8 - 10.

116. Хаитов, Р. М. Современные иммуномодуляторы: основные принципы их применения / Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин // Иммунология. 2000. - № 5. - С. 4 - 7.

117. Хаитов, Р. М. Иммуномодуляторы: механизм действия и клиническое применение / Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин // Иммунология. 2003. - № 4. - С. 196 - 203.

118. Хьюз, Р. Гликопротеины / Р. Хыоз. М.: Мир, 1985. - 160с.

119. Ширинский, B.C. Проблемы иммуностимулирующей терапии B.C. Ширинский, Е.А. Жук //Иммунология. 1991. - № 3. - С. 7 -10.

120. Ширинский, B.C. Проблемы фармакодинамики и фармакокинетики иммуностимулирующих препаратов / B.C. Ширинский, Е.А. Жук // Иммунология. 1994. - № 6. - С. 27 - 29.

121. Шульженко, А.Е. Клиническая эффективность и безопасность применения полиоксидония в лечении хронической рецидивирующей инфекции, вызванной вирусами простого герпеса / А.Е. Шульженко // Иммунология. 2002. - № 6. - С. 353.

122. Ярилин, А. А. Введение в современную иммунологию / А. А. Ярилин, Н. А. Добротина. Н. Новгород: Изд-во Нижегор. ун-та, 1997а. - 238с.

123. Ярилин, А.А. Система цитокинов и принцип ее функционирования в норме и при паталогии / А.А. Ярилин // Иммунология. 19976. -№5.-с.7- 14.

124. Arnold, L. The indaction of augmented granuloegte adherence by a plasma factor / L. Arnold, D. Zentnec, P. Alan // From the Depatment of Medcine University of Pennsylvania. Philadelphia. - 1974. - 111-114.

125. Belardeli, F. Role of interferons and other cytokines in regulation of the immune respons / F. Belardeli // APMIS. 1995. - Vol. 103, №3. - P. 161-179.

126. Analysis of free intracellular calcium by flow cytometry: multiparameter and pharmacological applications / S.W. Burchiel, B.S. Edwards, F.W. Kuckuck et al. // Methods. 2000. - №21. - P. 221-230.

127. Choo, M. Hydrogen peroxide stimulates macrophage vascular endothelial growth factor release / M. Choo, T. Hunt, M. Hussain // Am. J. Phisiol. Heart Circ. Phisiol. -2001. V.280. - P. H2357-H2363.

128. Cuttica, R. J. Vasculitis, Kawasaki disease, and pseudovasculitis / R. J. Cuttica // Curr. Opin. Rheumatol. 1997. - № 9(5). - P. 448-457.

129. Comparative antioxidant and cardioprotective effects of ceruloplasmin, superoxide dismutase and albumin / MJ. Dumoulin, R. Chahine, R. Atanasiu et al. // Arzneimittel Forsch. - 1996. - V. 46. - №9. - P. 855-861.

130. Effect of immunoglobulin therapy on phagocytosis bypolymorphonuclear leucocytes in whole blood of neonates / T. Fujiwara, S. Taniuchi, T. Hattori et al. // Clin. Exp. Immunol. 1997. - 107. - №3. -P. 435-439.

131. Gomi, F. Effect of copper deficiency on the activity levels of ceruloplasmin and superoxide dismutase in tissues of young and old rats / F. Gomi, M. Matsuo//Aging Milano.- 1995.-V.7.-№1. P. 61-66.

132. Hadden, J. W. Immunostimulants / J. W. Hadden // Immunol. Today. -1993.-V. 14.-P. 275-280.

133. Hallivell, E.D. Free radicals, antioxidant and human diseaese: curiosity, course or consequence? / E.D. Hallivell // The lancet. 1994. - V. 344. -№ 8924.-P. 721-724.

134. Hogg, N. Adhesion molecules in cell interactions / N. Hogg, R. C. Landis // Curr. Opin. Immunol. -1993. -V.5. P.383-390.

135. Janssen-Heininger, Y.M. Recent advances towards understanding redox mechanisms in the activation of nuclear factor kB / Y.M. Janssen-Heininger, M.E. Poynter, P.A. Baeuerle // Free radial biology & Medicine. 2000. - V.28. - №9. - P.1317-1327.

136. Hydrogen peroxide activates IkappaB kinases through phosphorilation of serine residues in the activation loops / H. Kamata, T. Manabe, S. Oka et al. //FEBS Lett. 2002.-V. 519(1-3).-P. 231-237.

137. Kelso, A. Cytokines: principles and prospects / A. Kelso // Immunol. Cell. Biol. 1998.-V. 76.-P. 300-317.

138. Klebanoff S.J. The neutrophil: function and clinical desoders / S.J. Klebanoff, R.A. Clark. Amsterdam: Noth. Holland Publ. - 1978. - 313p.

139. High doses immunoglobulin G attenuate immune aggregate-mediated complement activation by enhancing physiologic cleavage of C3b in C3bn-IgG complexes / H. Lutz, P. Stammler, E. Jelezarova et al. // Blood. -1996. 88. -№1. - P. 184-193.

140. Mehta, Y.S. In-vitro inhibition of antiplatelet autoantibodies by intravenous immunoglobulins and Rh immunoglobulins / Y.S. Mehta, S.S. Badakere // J. Postgrad. Med. 1996. - №42(2). - P. 46-49.

141. Neychev, H. Immunomodulatory action of propolis. II Effact of water solutle fraction influenza infection in mice / H. Neychev, V. Dimov, V. Vilcha //Acfa microbial bulg. 1988. - V.23. - P.58-62.

142. B-cell epitope mapping of the bacterial superantigen staphylococcal enterotoxin B: the dominant epitoperegion recognized by intravenous IgG / J. Nishi, S. Kanekura, S. Takei et al. // J. Immunol. 1997. - 158. - №1. -P. 247-254.

143. Ravi, K.V. Peritonsillar abscess an unusual presentation of Kawasaki disease / K.V. Ravi, J. R. Brooks // J. Laringol. Otol. - 1997. -111(1). - P. 79-74.

144. Primary Immunodeficiency Diseases: Report of WHO scientific Group / F. S. Rosen, R. j. Wedgewood, M. Fibl et al. // Clinical and Experimental Immunology. 1995 (99). - P. 1-25.

145. Roussel, R. Antibody purification, blood separation and plasma fractionation / R. Roussel, J. McCue. Editor Jemes Robinson Harris, New York, Wiley-Uss.Inc. - 1991. P. 307-341.

146. Silva, D.M. Ferritin and ceruloplasmin in oxidative damage: review and recent findings / D.M. Silva, S.D/ Aust // Can. J. Physiol. Pharmacol. -1993.-V. 71. -№ 9. P. 715-720.

147. Springer, T.A. The limphocyt funcshion assotiated LFA-1, CD-2 and LFA-3 moleculs cell adgesion receptor of the immune system // T.A.

148. Springer, M.L. Dastin, Т.К. Kishimoto // Ann Rev Immunol. 1987. -V.5. -P.223-252.

149. Stiehm, E. R. Human intravenous immunoglobulin in primary and secondary antibody deficiencies / E. R. Stiehm // Pediatr. Infect. Dis. J. -1997.- 16(7).-P. 696-707.

150. Werner, G.H. Immunostimulating agents: what next? / G.H. Werner, P. Jolles // Europ. Biochem. 1996. - V. 242. - P. 1-19.

151. Update of the epidemiology of Kawasaki disease in Japan-from the result of 1993-94 nationwide survey / H. Yanagawa, Y. Nakamura, M. Yashiro et al. // J. Epidemiol. 1996. -V.6. -№3. P. 148-157.

152. Zgirski, A. Binding of Си (II) to non-prosthetic sites in ceruloplasmin and bovine serum albumin / A. Zgirski, E. Frieden // J. Inorg. Biochem. -1990. V.39. - №2. - P.137-148.