Влияние вакцины гриппол на радиорезистентность организма

Рогожин, Дмитрий Владимирович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние вакцины гриппол на радиорезистентность организма
ВАК РФ 03.01.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние вакцины гриппол на радиорезистентность организма"

На правах рукописи

РОГОЖИН ДМИТРИЙ ВЛАДИМИРОВИЧ

ВЛИЯНИЕ ВАКЦИНЫ ГРИППОЛ НА РАДИОРЕЗИСТЕНТНОСТЬ ОРГАНИЗМА

03.01.01 - Радиобиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

004613961

2 5 НОЯ 2010

Москва-2010

004613961

Работа выполнена на базе Федерального государственного учреждения «Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна ФМБА России»

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Иванов Александр Александрович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

Осипов Андреян Николаевич доктор биологических наук, Штемберг Андрей Сергеевич

Ведущая организация: «Объединенный институт ядерных исследований», г.Дубна.

Защита состоится « _ 2010 г. в « » часов на заседании

диссертационного совета^Федерального государственного учреждения «Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна ФМБА России» по адресу: 123182, г.Москва, ул.Живописная, д.46

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ ФМБЦ им.А.И. Бурназяна ФМБА России.

Автореферат разослан «2010 г. Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

Н.К. Шандала

I. Общая характеристика работы.

Актуальность исследования

Возможность повышения устойчивости организма к поражающему действию ионизирующего излучения с помощью вакцин известна давно (Клемпар-ская H.H., Раева Н.В. и Сосова В.Ф., 1963) . При этом установлено, что противолучевой эффект наблюдается при использовании бактериальных и вирусных вакцин как при профилактическом, так и при лечебном их применении. Возможность использования для этих целей гриппозной вакцины, применяемой для иммунизации населения, продемонстрирована на инактивированной хрома-тографически чистой (тип AI и А2) вакцине производства Омутнинского химического завода Кировской области (Иванов A.A. и соавт.,1995) . Показано, что профилактическое введение этой вакцины повышало выживаемость облученных и защищенных животных по сравнению с незащищенными на 25-40 %. Однако, данная вакцина снята с производства в связи с ее слабыми специфическими иммуногенными свойствами.

В настоящее время для иммунизации населения широко применяется вакцина Гриппол, разработанная сотрудниками Государственного научного центра - Института иммунологии ФМБА России. На данный момент вакциной иммунизировано уже более 40 млн. человек. Разработчики вакцины установили, что Гриппол не только формирует специфический противовирусный иммунитет, но и повышает устойчивость организма человека к другим острым респираторным заболеваниям (Хаитов Р. М. и соавт.,2001) Однако, механизмы этой устойчивости до конца не расшифрованы. В связи с этим, представлялось актуальным исследовать динамику интерферонового статуса организма под влиянием вакцины Гриппол, поскольку система ИФН является одной из важнейших систем, обеспечивающих неспецифическую противовирусную резистентность организма.

К моменту начала работы не было обнаружено каких-либо публикаций, посвященных влиянию вакцины Гриппол на интерфероновый статус организма.

В рассмотренных нами публикациях остается не изучен вопрос о противолучевой эффективности Гриппола, как вакцины массового применения, и установлении механизма повышения радиорезистентности под влиянием вакцины, что, безусловно, является актуальным и имеет не только научный, но и практический интерес. Цель работы

Определить способность вакцины Гриппол повышать радиорезистентность, а также роль иммунологических механизмов в противолучевом действии данной вакцины.

Основные задачи исследования:

• Исследовать противолучевое действие вакцины Гриппол.

• Исследовать влияние вакцины Гриппол на интерфероновый статус животных и человека.

• Исследовать влияние вакцины Гриппол на специфический иммунный ответ.

• Установить коррелятивные связи между уровнем интерферонов и радиорезистентностью организма.

• Обосновать возможность переноса данных о противолучевом действии вакцины Гриппол с животных на человека.

Научная новизна

Впервые изучено влияние вакцины Гриппол на радиорезистентность организма. Показано, что вакцина, введенная в дозе 0,2 мл за 14 суток до облучения (7,5 Гр), статистически достоверно повышает выживаемость мышей в опытной группе по сравнению с контрольной, на 25% и 60%, и положительно влияет на динамику массы тела, показатели периферической крови мышей при облучении в минимальной летальной дозе (6 Гр).

Введение Гриппола собакам в дозе 0,5 мл за 16 суток до облучения в дозе 2,5 Гр, оказывает положительное влияние на скорость восстановления показателей периферической крови.

Впервые выявлена взаимосвязь между уровнем противолучевой резистентности и содержанием сывороточного ИФН в периферической крови организма. Показано, что темпы падения содержания лейкоцитов периферической крови у сублетально облученных собак ниже в группе с исходно высоким до облучения содержанием ИФН в сыворотке по сравнению с аналогичными показателями в группе с низким содержанием ИФН в сыворотке.

Разработаны критерии переноса данных о противолучевых свойствах Гриппола с животных на человека. Согласно нашим данным, повышенное содержание сывороточного ИФН в сыворотке крови перед облучением повышает выживаемость животных Положения, выносимые па защиту

• Вакцина Гриппол обладает противолучевыми свойствами.

• Вакцина Гриппол активирует процессы интерфероногенеза в организме животных и человека.

• Периоды повышения радиорезистентности, формируемые после иммунизации вакциной Гриппол, совпадают со временем повышения интерфе-ронсинтезирующей активности клеток крови.

Практическая значимость

Результаты данного исследования позволяют рекомендовать Гриппол как препарат двойного действия - антигриппозного и как средство повышения радиорезистентности. Вакцина может быть предназначена, в частности, для иммунизации работников атомной промышленности, личного состава Российской Армии, сотрудников МЧС и других групп риска радиационного воздействия. Основываясь на данных о повышении интерферонсинтезирующей способности лейкоцитов крови после иммунизации у человека (7-56 сутки) и у животных (721 сутки), а также на данных о том, что в период 7-21 суток у животных отмечено повышение радиорезистентности можно прогнозировать повышение радиорезистентности у человека в период 7-56 суток после иммунизации.

Экспериментальные данные, приведенные в диссертационной работе, включены в методические рекомендации по использованию показателей ин-терферонового статуса для прогнозирования радиорезистентности и методические рекомендации по применению вакцины «Гриппол» для повышения неспецифической противолучевой резистентности.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», VI Всероссийском конгрессе «Профессия и здоровье» и на научной конференции отдела №1 Федерального государственного учреждения Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна ФМБА России.

Публикации

По теме диссертации опубликованы 5 печатных работ (из них 2 статьи) в журналах, рекомендованных ВАК.

Структура диссертационной работы:

Диссертация состоит из введения, трех глав собственных исследований, обсуждения результатов и выводов. Работа изложена на 98 страницах, иллюстрирована 8 таблицами и 16 рисунками. Библиографический указатель включает в себя 123 наименования печатных источников, из них 31 на иностранных языках.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Экспериментальные животные

Исследования проводили на мышах СБА хС57В 1 (Р)) самцах (масса тела 20-21г) и беспородных собаках обоего пола (масса тела 13-24 кг). Во время экспериментов животные содержались в условиях вивария, соответствующих санитарным нормам (рекомендованный рацион, свободный доступ к питьевой воде), при естественном фоне освещенности и температуре воздуха 20-22°С.

Все работы проведены в соответствии с "Общими положениями по соблюдению стандартных условий проведения опытов на животных в ИБФ" и

"Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных" (Приказ Минздрава СССР № 755 от 12.08.1977). Эксперименты выполнены на 346 мышах и 15 собаках. Группа добровольцев.

Исследование влияния вакцины Гриппол на интсрфероновый статус проводилось на 12 добровольцах. Группа состояла из 2 мужчин и 10 женщин в возрасте 22-30 лет, иммунизированных вакциной Гриппол (серия С Н2-0906, производитель ФГУП НПО «Микроген») в эпидемическом сезоне 2008 года. Одна иммунизирующая доза Гриппола (0,5 мл) содержит по 5 мкг гемагглюти-нина штаммов вирусов гриппа типов A (H1N1), A (H3N2), 11 мкг вируса гриппа типа В и 500 мкг полиоксидония. Вакцина является высокоочищенным препаратом, свободным от примесей невирионного происхождения. Консервант — мертиолят от 85 до 115 мкг/мл.

Оценка радиопротекторных свойств вакцины Гриппол.

Тотальное облучение мышей и собак проводили гамма-квантами l37Cs на установке ИГУР. Мощность дозы 1,2- 2,0 рад/сек. Контроль за мощностью дозы и ее пространственным распределением проводили с помощью термолюми-нисцентного дозиметра ИКС-A с использованием термолюминисцентного алю-мофосфатного стекла ИС-7 с погрешностью ±10 %. В качестве модели использовали однократное равномерное радиационное воздействие, вызывающее костномозговую форму острой лучевой болезни различной степени тяжести. Использованы дозы облучения с различной биологической активностью: 6,0 (СД1(узо) и 7,5 (СД 7о/эо) Гр для мышей и 2,5 Гр - для собак (СД 30/45).

В качестве радиозащитного средства использовали Гриппол, оценивали

влияние вакцины на выживаемость и динамику массы тела мышей на 30 сутки

течения ОЛБ, а также выживаемость собак на 45 сутки после облучения. Состав

периферической крови облученных животных определяли с использованием

гематологического анализатора Alcon-б. Гриппол вводили мышам однократно

подкожно в область задней лапы в дозе - 0,5; 0,2 и 0,05 мл за 7 или 14 суток до

облучения. Собак иммунизировали подкожно в область предплечья за 16 суток до облучения, доза вакцины - 0,5 мл. Контрольным животным вводили официальный 0,9% раствор хлорида натрия - мышам 0,2 мл, собакам -0,5 мл. Специфический ответ на иммунизацию Грипполом необлученных мышей и собак.

Для изучения специфического иммунного ответа использовалась однократная иммунизация вакциной Гриппол, мышей в дозе 0,2 мл, собак - 0,5 мл. Сроки забора крови - до иммунизации на 1,7,14,28,35 сутки. Оценка иитерфероногенных свойств вакцины Гриппол.

В эксперименте по оценке иитерфероногенных свойств Гриппола облучение животных не проводилось. Мышей вакцинировали однократно внутри-брюшинно в дозе 0,2 мл. Интерфероновый статус определяли через 4 часа спустя 1, 7, 14 и 28 суток после введения вакцины. Собак иммунизировали однократно в область предплечья в дозе 0,5 мл. Забор крови проводили через 7,14,21,28,35 суток. Добровольцев иммунизировали однократно в дельтовидную мышцу (доза вакцины - 0,5 мл). Обследование проводили через 1,7,14,28 и 60 суток.

Анализ взаимоотношений уровня радиорезистентности и интерферонового статуса.

Эксперимент проводили на 15 собаках обоего пола, массой тела 12-15 кг. Животных подвергали воздействию у-лучей шСб в дозе 2,5 Гр (СД 30/45). До облучения у животных определяли содержание ИФН в сыворотке крови и состав периферической крови. На 7-е, 14-е, 21-е, 28-у и 35-е сутки после облучения определяли клеточный состав периферической крови и скорость оседания эритроцитов. После облучения животных разделили на две группы - согласно исходным значениям сывороточного ИФН - титр ИФН > 8 и титр ИФН < 8. Затем провели сопоставление показателей выживаемости облученных собак и скорости восстановления гемопоэза с исходным уровнем сывороточного ИФН.

Схема исследования влияния вакцины Гриппол на интерферонсинтези-рующую активность клеток периферической крови и специфический иммунный ответ.

Добровольцев и животных иммунизировали вакциной Гриппол за 7 и 14 суток до облучения. Мышам вводили подкожно по 0,2 мл, собакам - по 0,5 мл, добровольцам - по 0,5 мл вакцины. Обследование контрольных и опытных мышей проводили на каждом сроке опыта (динамический контроль), через 4 часа, 1, 7, 14 и 28 суток после иммунизации. Добровольцев и собак, предварительно обследовали до иммунизации, для определения титров сывороточного ИФН и ин-терферонсинтезирующей активности клеток крови, а затем в динамике исследования. Забор крови у собак проводили через 1,7,14,21,28,35 суток после введения вакцины и у добровольцев - через 1,7,14,28 и 56 суток. Одну часть полученных от экспериментальных животных проб использовали для определения в сыворотке крови уровня специфических антител методом РТГА (реакция торможения гемагглютинации), в другую часть добавляли гепарин (5 ед/мл) и определяли способность лейкоцитов крови продуцировать а - и у - ИФН после взаимодействия с индукторами.

Количественную оценку уровня специфических антигемагглютинино-вых антител проводили в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) в соответствии с МУ 3.3.2. 1758-03 «Методы определения показателей качества иммунобиологических препаратов для профилактики и диагностики гриппа»

Состояние системы синтеза а - и у - ИФН у животных определяли по уровню продукции этих цитокинов лейкоцитами, выделенными из периферической крови, после воздействия вирусным индуктором - вирус болезни Ньюкастла (ВБН) в дозе 1-10 цитопатических доз (ЦПД) на 1 лейкоцит для а - интерферона и митогеном - фитогемагглютинин (ФГА) в дозе 1-10 ед/мл для у - интерферона. Определение активности синтезируемого лейкоцитами ИФН у мышей и собак проводили путем титрования на культуре клеток костно-мышечной ткани

эмбриона человека (диплоидный кариотип) против вируса энцефаломиокардита мышей (ЭМС). Активность ИФН у привитых добровольцев оценивали методом двухстадийного иммуноферментного анализа. На первой стадии анализа исследуемые и контрольные образцы инкубировали в лунках с иммобилизованными антителами. Имеющийся в образцах а -ИФН связывается с иммобилизованными антителами. Несвязавшийся материал удаляли отмывкой. Связавшийся а -ИФН взаимодействует при инкубации с конъюгатом антител к а -ИНФ человека с пероксидазой хрена. После второй отмывки количество связавшегося конъю-гата определяли цветной реакцией с использованием субстрата пероксидазы хрена - перекиси водорода и хромогена - тетраметилбензидина. Реакцию останавливали добавлением раствора серной кислоты и измеряли оптическую плотность растворов в лунках при длине волны 450 нм. Интенсивность желтого окрашивания пропорциональна количеству содержащегося в образце а -ИФН. Титр а - и у -ИФН определяли по калибровочной прямой.

Методы статистического анализа.

Полученный цифровой материал обработан с помощью общепринятых

методов вариационной статистики, а также встроенного пакета статистического анализа MS Excel 2003. Достоверность различий сравниваемых средних величин оценивали по t-критерию Стьюдента. Для выявления корреляций вычислялся стандартный коэффициент корреляции. Достоверность данных, полученных по выживаемости животных, оценивали методами у? и критерием Фишера.

Расчет точности прогноза выживаемости облученных в летальной дозе животных в зависимости от исходного уровня сывороточного ИФН проводили по тесту Т. Шеллинга-Вольфеля (Малета Ю.С., Тарасов В.В., 1982).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Противолучевое действие Гриппола

В экспериментах по исследованию влияния Гриппола на выживаемость

мышей, облученных в дозе 7,5 Гр, были получены следующие данные. Введение Гриппола за 14 суток до облучения повышает выживаемость мышей в опытной группе на 60%, по сравнению с контрольной. Эффект статистически значим: /2=5,2 р=0,02. Менее эффективно введение вакцины за 7 суток. Выживаемость защищенных мышей на 25% выше таковой в контроле. Эффект статистически не значим по сравнению с контрольной группой. Результаты проиллюстрированы в таблице 1.

Таблица 1 - Выживаемость мышей, защищенных Грипполом в дозе 0,2 мл до облучения гамма-квантами 137С$ в дозе 7,5 Гр.

Группа мышей Срок введения вакцины до облучения, сут. Число Из них Выживаемость за 30 суток, (М±ш, %)

Пало Выжило

Опыт 14 10 1 9 90+10

Контроль - 10 7 3 30+15

Опыт 7 12 3 9 75+13

Контроль - 10 5 5 50+16

Полученные результаты подтверждаются данными по динамике массы тела. Из таблицы 2 видно, что у мышей, облученных в дозе 7,5 Гр, отмечается четко выраженное падение массы тела, тогда как в опытной группе, защищенной Грипполом в дозе 0,2 мл, отмечается меньшая глубина снижения массы тела на 15-е сутки после облучения. Соответственно, масса мышей на 15 сутки ОЛБ в опытной группе составляла 22,4+0,4 г, в контрольной - 20,4+0,8 г. Как известно, наиболее важным показателем в проявлении радиобиологического эффекта является состояние периферической крови. Результаты оценки влияния вакцины Гриппол на состав периферической крови мышей представлены в таблице 3. Получены статистически достоверные данные: у мышей, защищенных вакциной Гриппол, введенной в дозе 0,2 мл за 14 суток до облучения, а так же -

в дозе 6,0 Гр, на 8 сутки течения ОЛБ, содержание нейтрофилов, ретикулоци-тов, эритроцитов и гемоглобина в периферической крови выше, по сравнению с мышами контрольной группы.

Таблица 2 - Динамика массы тела у мышей, защищенных вакциной Гриппол, вводимой за 7

Доза вакцины, мл Время обследования после облучения, сут.

0 7 10 15 20

0,5 23,6+0,3 20,5±0,9 20,8+0,9 21,5±0,7 22,5 ±0,5

0,2 23,8+0,1 22,0+0,3 22,0+0,3 22,4+0,4* 23,4+0,5

0,05 24,1 ±0,2 21,9+0,4 21,1+0,7 19,7+0,9 21,7+1,0

Контроль облучения 23,1+0,6 21,5±0,6 21,7+0,7 20,4+0,8 22,0+0,6

Примечание. * статистически значимая разница по сравнению с контролем, критерий Стьюдента, р<0,05.

Как известно, наиболее важным показателем в проявлении радиобиологического эффекта является состояние периферической крови. Результаты оценки влияния вакцины Гриппол на состав периферической крови мышей представлены в таблице 3. Получены статистически достоверные данные: у мышей, защищенных вакциной Гриппол, введенной в дозе 0,2 мл за 14 суток до облучения, а так же - в дозе 6,0 Гр, на 8 сутки течения ОЛБ, содержание нейтрофилов, ретикулоцитов, эритроцитов и гемоглобина в периферической крови выше, по сравнению с мышами контрольной группы.

Таблица 3 - Влияние вакцины Гриппол, введенной в дозе 0,2 мл за 14 суток до облучения

Группа жи- До После

Клетки крови вотных Облучения облучения,

8-е сутки

Нейтрофилы (х109/л) Контроль 0,9±0,1 0,1 ±0,02

Опыт 0,3±0,04*

Ретикулоциты (х109/л) Контроль 201,2±19,7 18,1±3,8

Опыт 114,8+16,8*

Эритроциты (х10 /л) Контроль 9,9+0,3 8,3+0,1

Опыт 9,3+0,2*

Гемоглобин (г/л) Контроль 128,5±5,1 105,4+2,2

Опыт 119.1±1,8*

Примечание. * статистически значимая разницг по сравнению с контролем, критерий Стьюдента, р<0,05.

Суммируя вышеизложенное, следует отметить, что вакцина Гриппол, введенная в дозе 0,2 мл за 14 суток до облучения, оказывает благоприятное влияние на состояние периферической крови облученных мышей и способствует более интенсивному восстановлению массы тела в период ОЛБ. Полученные данные полностью согласуются с литературными сведениями по хроматогра-фической вакцине (Иванов A.A. и соавт.,1995).

В экспериментах на 15 собаках, разделенных на опытную и контрольные группы - 7 и 8 животных соответственно, и облученных в дозе 2,5 Гр, статистически достоверных различий по тесту выживаемости не отмечено. Однако наблюдается положительное влияние Гриппола, введенного до облучения, на показатели периферической крови. Данные представлены в таблице 4.

Таблица 4 - Влияние вакцины Гриппол на динамику показателей периферической крови у собак, облученных в дозе 2,5 Гр.

Показатель (М±ш) Наличие или отсутствие вакцинации, +/- Время после облучения, сут

Фон 7 14 21 35

Лейкоциты, х109л + 11,9+1 4,3±0,4 1,9±0,5 4,4±0,9 7,9±2,5

- 11,2+0,9 4,3+0,3 1,8+0,3 2,4+0,7 5,1±1,8

Тромбоциты, х109л + 190,2+14,3 100,3±9,6 14,3+7,1 31,7+4,2 88±22,7

- 180,1+9 100,8+6,2 12,4+2,4 21,3+6,7 108,3+41

Эритроциты х1012л + 7±0,2 6±0,2 5,9+0,3 5,9±0,3 5,9+0,2

- 6,8+0,2 6,1+0,2 5,7+0,2 5,6±0,6 5,1+0,6

СОЭ, мм/ч + 5+1,4 14,9±5,3 30,5+8,4 12+9 5+2,5

- 4,8+1,3 10,1+4 29,1+8,9 27,8+8,1 29,5+14

Как видно из таблицы, у облученных собак развивается существенное нарушение показателей периферической крови, отмечается выраженная лейкопения, тромбопения, увеличение СОЭ. Тогда как у собак в опытной группе, иммунизированных Грипполом за 16 суток до облучения в дозе 0,5 мл, наблюдается определенное восстановление числа форменных элементов периферической крови, что особенно четко прослеживается по определению увеличения содержания количества лейкоцитов в восстановительный период (рисунок 1,2).

время после облучения, сут

— вакцинированные —в— невакцинироваиные

Рисунок 1 - Динамика содержания лейкоцитов периферической крови у собак, облученных в дозе 2,5 Гр.

время после облучения, суг

Рисунок 2 - Содержание лейкоцитов в периферической крови собак иммунизированных вакциной Гриппол и облученных (1) и только облученных гамма-квантами в дозе 2,5 Гр (2)

Представленные данные свидетельствуют о благоприятном влиянии вакцины Гриппол на динамику восстановления показателей периферической крови.

Подводя итог, следует отметить, что вакцина Гриппол, введенная в дозе 0,2 мл за 14 суток до облучения (6 Гр и 7,5 Гр), статистически достоверно повышает выживаемость облученных в летальной дозе мышей, положительно влияет на динамику массы тела и показатели периферической крови. Введение

Гриппола собакам в дозе 0,5 мл за 16 суток до облучения в дозе 2,5 Гр, оказы-

вает положительное влияние на скорость восстановления показателей периферической крови.

Специфический ответ на иммунизацию Грипполом необлученных мышей и собак.

При однократной иммунизации мышей вакциной Гриппол в дозах, применяемых в радиобиологических экспериментах, удалось зарегистрировать наличие иммунного ответа невысокой интенсивности. Результаты исследования проиллюстрированы на рисунке 3. Представлена динамика титров антител к трем штаммам, входящим в состав вакцины Гриппол в эпидемическом сезоне 2005-2006г.г: A/New Caledonia (H1N1), A/New York (H3N2) и B/Jiangsu.

60 50

£■ зо

I 20

a- io

IRIiifHilM

t _ - >

л * »!

--------

г,., . «— -

4 часа

7 14 28

Время после иммунизации (сут)

--титр AT к B/Jiangsu

-титр AT к AiNewYork

-титр AT к A/Hew Caledonia

Рисунок 3 - Среднее геометрическое титра АТ к гемагглютинину различных штаммов вируса гриппа у мышей, однократно иммунизированных вакциной Гриппол в дозе 0.2 мл.

Как видно на рисунке 3, для штаммов типа А титр антител растет, начиная с 7 дня, и достигает защитного титра (1:40) к 14 суткам (для НШ1) и 28 (НЗШ) дням. Уровень антител к гемагглютинину штамма B/Jiangsu также

возрастает, однако более плавно и не достигает уровня защитного титра в тече-

ние наблюдаемого периода. Известно, что но вирулентности, эпидемической значимости и иммуногенности вирусы гриппа типа В уступают вирусам гриппа тина А (Карпухин Г.И, 2001; Hu YM .,2005). Поэтому, по-видимому, однократной иммунизации в низкой дозе оказалось недостаточно для этого штамма.

При однократной иммунизации вакциной Гриппол собак в дозе 0,5 мл максимальные значения титров AT к штаммам вируса грипп A/New Caledonia (H1N1) и A/New York (H3N2) регистрировались на 35 сутки после введения вакцины. Хотя защитных значений титры не достигали, можно с уверенностью говорить об активации специфического звена иммунитета. Результаты представлены на рисунке 4.

фон 1 7 14 21 28 35

Время после иммунизации (сут)

[ --»--B/Jiangsu > M-lew Caledonia —* - A/New Yoifc ]

Рисунок 4 - Среднее геометрическое титра AT к гемагглютинину различных штаммов вируса гриппа у собак, однократно иммунизированных вакциной Гриппол в дозе 0.5 мл.

Титры AT к штамму A/New Caledonia (H1N1) начинают расти на 7 сутки, а к штамму A/New York (H3N2) к 14 суткам. Исходно высокие и колеблющиеся на протяжении всего исследования тигры AT к штамму B/Jiangsu можно объяснить таксономической близостью вируса гриппа типа В к вирусу парагриппа собак и отсутствием в этой связи выраженного ответа на иммунизацию.

Интерфероногенные свойства вакцины Гриппол

Результаты динамического наблюдения интерферонсинтезирующей активности лейкоцитов крови иммунизированных животных и добровольцев представлены на рис 5 (а,б,в) и рис 6 (а,б,в). Установлено, что титры а - ИФН у мышей достигают максимальных значений на 7 сутки (435,2 ед./мл) (рис 5а), а у собак на 14 сутки (480 ед./мл) (рис 56) после введения вакцины. Максимальные титры у — ИФН у мышей определялись на 28 сутки ( >40 ед,/мл) (рис 6а) и у собак на 21 сутки (25,6 ед/мл) (рис 66). Рассматривая динамику системы а -ИФН, полученную в группе обследованных добровольцев можно проследить общую направленность, как у животных так и у человека, в изменении системы ИФН после иммунизации вакциной Гриппол.

Согласно нашим данным, максимальные титры а - ИФН в группе добровольцев отмечаются на 7 сутки (732 пг/мл) и на второй месяц (886 пг/мл) после вакцинации (рис 5в). Титры у - ИФН у привитых добровольцев демонстрируют иную динамику. Постепенно снижаясь, титры у — ИФН достигают минимальных значений на 7 сутки (427 пг/мл), затем плавно нарастают до 783 пг/мл во втором месяце наблюдений (рис 6в).

Рисунок (а) - Эксперименты на мышах

* - 7 сутки, значение статистически достоверно, р=0,023д=-2,739

1 7 14 21 время после иммунизации су!

Рисунок (б) - Эксперименты на собаках

* - 14 сутки, значение статистически достоверно р=0,047,1=-2,350

1000

800 600

= 400

ив

Ё 200

фон

^ г"

/ '!

^^^ 1 .V._

. „,... ...

1 7 14 28

время после иммунизации.сут

Рисунок (в) - Наблюдения за добровольцами

* - 7 сутки, значение статистически достоверно р=0,01,1=-2,817 ** - 2-ой месяц, значение статистически достоверно р=0,00д=-4,511

Рисунок 5 (а,б,в) - Иитерферон-а синтезирующая активность клеток периферической крови после иммунизации вакциной Гриппол.

- среднее значение тиггра ИФН; .... границы доверительного интервала значений у неиммукизиро-

ванных животных и человека

Рисунок (а) - Эксперименты на мышах Рисунок (б) - Эксперименты на собаках

* - 28 сутки, значение статистически достоверно * - 14 сутки, значение статистически достоверно

р=0,03Д=-2,566 р=0,038д=-2.475

** - 21 сутки, значение статистически достоверно р=0,011,1=-3,267

Рисунок (в) - Наблюдения за добровольцами

* - 7 сутки, значение статистически достоверно р=0,015,Ь=2,642 ** - 14 сутки, значение статистически достоверно р=0,041 ,1=2,167

Рисунок 6(а,б,в) - Интерферон-у синтезирующая активность клеток периферической крови после иммунизации вакциной Гриппол

- среднее значение титра ИФН; ----границы доверительного интервала значений у неиммунизирован-

ных животных и человека

фон 4 часа 1 7 14 21 время после иммунизации, сут

фон 1 7 14 21 28 время поел« иммунизации, сут

Как следует из представленных данных, максимальные титры а- ИФН у мышей отмечаются на 7 сутки, у собак - на 14 сутки, что подтверждается литературными источниками (Иванов A.A. и соавт.,1995). Известно, что а- ИФН, усиливающий специфический иммунный ответ, относится к цитокинам, определяющим ранние цитокиновые реакции организма на введение антигенов, а у — ИФН, как один из регуляторных цитокинов иммунной системы, может служить показателем сдвига иммунных реакций в сторону Т-клеточного ответа, активации макрофагов и NK-клеток. Титры у - ИФН, по нашим данным, достигают максимальных значений у мышей на 28 сутки, у собак на 21 сутки. Отличие во времени обнаружения максимальных титров интерферона у мышей и собак наиболее вероятно объясняется видовыми физиологическими особенностями подопытных животных. В наблюдениях за динамикой титров а- ИФН у вакцинированных Грипполом добровольцев наибольшие значения титров отмечается на 7 и 60-е сутки, титры у - ИФН не повышены.

Таким образом, вакцина Гриппол помимо усиления выработки специфических противогриппозных антител обладает неспецифическим эффектом, а именно стимулирует процессы интерфероногенеза. Поскольку реакция системы ИФН опережает развитие специфического иммунного ответа, вероятно именно стимуляция интерфероногенеза обуславливает развитие первой ранней неспецифической фазы повышения резистентности, развивающейся до формирования иммунного ответа.

Учитывая литературные данные, описанное влияние вакцины Гриппол на продукцию а - и у — ИФН, можно объяснить двумя составляющими: непосредственно биологическими свойствами гриппозных антигенов и наличием в составе вакцины иммуномодулятора полиоксидония.

Как известно, моноциты/макрофаги, нейтрофилы и лимфоциты являются

источниками цитокинов. Активация функциональной активности клеток моно-

цитарно-макрофагальной системы лежит в основе выраженного клинического

эффекта полиоксидония при разных по этиологии патологических процессах. В

частности, показано, что полиоксидоний обладает способностью активировать

продукцию цитокинов лейкоцитами периферической крови (Петров Р.В. и соавт.,1999). Полиоксидопий усиливает продукцию ИЛ-1Р, ИЛ-6, ФНО-а, т.е. цитокинов, продуцируемых преимущественно клетками моноцитарно-макрофагальной системы. Под влиянием полиоксидония активируются практически все звенья иммунной система организма.

Наблюдаемые в данном исследовании изменения интерферонового статуса на фоне нарастания титра специфических антител являются отражением целого ряда метаболических процессов в ходе ответа на вакцинацию. Полученные данные позволяют предполагать, что вакцина Гриппол, помимо усиления выработки специфических противогриппозных антител, обладает широким спектром неспецифических эффектов, обеспечивающих повышение резистентности при различных видах иммунозависимых патологий.

Экспериментальные данные, приведенные выше, позволяют перейти к оценке взаимосвязи между уровнем радиорезистентности и интерфероновым статусом организма.

Анализ взаимоотношений уровня радиорезистентности и интерферонового статуса животных.

После облучения животных разделили на две группы согласно исходным

значениям сывороточного ИФН: титр ИФН > 8 и титр ИФН < 8. Затем провели сопоставление показателей смертности облученных собак с исходным уровнем сывороточного ИФН. При оценке статистической значимости различий по выживаемости из выборки были исключены 2 животных с неопределяемыми титрами сывороточного ИФН (титр =0)

Таблица 5. Влияние исходного уровня сывороточного интерферона в сыворотке крови на выживаемость собак после облучения в дозе 2,5 Гр._

Группа Число животных Радиобиологический э )фект

Выжило, число животных (инд. значения ИФН, титр) Пало, число животных (инд. значения ИФН, титр)

ИФН >8 10 7(32,16,16,8,8,8,8) 3 (32,16,8)

ИФН <8 3 — 3 (4,4,4)

Полученные и приведенные в таблице 5 данные свидетельствуют о том, что в группе собак с исходно высокими титрами сывороточного ИФН до облучения (ИФН > 8 ед/мл) выжило 7 из 10 животных. В то же время в группе животных с исходно низкими титрами сывороточного ИФН до облучения (ИФН < 8 ед/мл) пали все 3 собаки.

Влияние исходного уровня ИФН сыворотки крови на смертность облученных в дозе 2,5 Гр собак представлена на рисунке 7.

100

90 80

□ штрсыеорогочного ИФН28 Щтигр сывороточного ИФН<8

Рисунок 7. Смертность собак, облученных в дозе 2,5 Гр с высоким и низким исходным (до облучения) содержанием интерферона в сыворотке крови.

Из рисунка 7 следует, что смертность собак с высоким исходным уровнем ИФН в сыворотке была равна 30%, с исходно низким - 100%. Исходя из малого количества наблюдаемых животных (N=13), оценку статистической значимости проводили с использованием критерия Фишера (при 2-х стороннем распределении Р = 0,07).

На основании этих данных можно построить прогноз выживаемости облученных собак в зависимости от исходного содержания сывороточного интерферона в периферической крови.

Расчет точности прогноза исхода ОЛБ по Т-тесту Шеллинга - Вольфейля (Малета Ю.С., Тарасов В.В., 1982) показал, что с вероятностью 95,9% можно го-

ворить о более высокой возможности выживания облученных собак с высоким исходным уровнем содержания ИФН в сыворотке (титр 1:8 и выше) и гибели животных с низким его содержанием (титр 0-1:4).

Результаты определения содержания лейкоцитов периферической крови облученных собак, разделенных на группы в зависимости от исходного уровня сывороточного ИФН, представлены на рисунке 8.

фон 7 14

Время после облучения, сут

Рисунок 8. Количество лейкоцитов в периферической крови собак с высоким и низким содержанием ИФН в сыворотке перед облучением (2,5 Гр) в период разгара ОЛБ (7-! 4 сут).

Из представленных на рисунке данных видно, что темпы падения содержания лейкоцитов периферической крови собак в разгар ОЛБ в группе с высоким исходным до облучения содержанием ИФН в сыворотке ниже, по сравнению с аналогичными показателями в группе собак с исходно низким содержанием ИФН в сыворотке. Полученные данные статистически достоверны на 14 сутки наблюдения (уровень значимость по критерию Стьюдента р=0,028) Приведенные результаты исследования позволяют сделать вывод, что повышенное содержание сывороточного ИФН в сыворотке крови собак перед облучением спо-

собствует ослаблению скорости опустошения клеточного состава периферической крови в период разгара ОЛБ.

Основываясь на приведенных выше экспериментальных данных, можно предполагать, что наличие повышенного содержания ИФН в сыворотке крови перед облучением повышает выживаемость облученных собак и отражает состояние, обеспечивающее замедление темпов падения содержания лейкоцитов периферической крови, что, в свою очередь, способствует лучшему перенесению ОЛБ.

Таким образом, используя значения титров сывороточного ИФН в сыворотке крови перед облучением, можно прогнозировать выживаемость животных и человека. Так как ИФН, не зависимо от вида млекопитающих играют в организме животных и человека схожую физиологическую роль, то экстраполяция данных, полученных в экспериментах на животных, принципиально возможна и на человека.

Суммируя все вышеизложенное, следует отметить, что иммунизация вакциной Гриппол повышает радиорезистентность экспериментальных животных. Способность Гриппола активировать процессы интерфероногенеза в периферических клетках крови играет ключевую роль в повышении радиорезистентности организма.

ВЫВОДЫ

1. Вакцины Гриппол активирует процессы интерфероногенеза в организме животных и человека. Титры а - интерферона у мышей достигают максимальных значений на 7 сутки, а у собак - на 14 сутки после введения вакцины. У человека наибольшие титры а - интерферона отмечаются на 7 и 56 сутки после введения Гриппола.

2. Вакцина Гриппол, введенная в дозе 0,2 мл за 7 и 14 суток до облучения (7,5 Гр), статистически достоверно повышает выживаемость иммунизированных мышей по сравнению с нсиммунизированными на 25% и 60% со-

ответственно и положительно влияет на динамику массы тела и скорость восстановления показателей периферической крови.

3. Введение Гриппола собакам до облучения в количестве 0,5 мл за 16 суток в дозе 2,5 Гр оказывает положительное влияние на скорость восстановления показателей периферической крови.

4. У животных (собак) с исходно высокими титрами сывороточного ИФН перед облучением отмечено увеличение выживаемости и снижение темпов падения лейкоцитов периферической крови по сравнению с животными с исходно низкими титрами сывороточного ИФН перед облучением.

5. Основываясь на совпадении сроков повышения интерферонсинтезирую-щей способности лейкоцитов крови у животных (7-21 сутки) с периодами повышения радиорезистентности, можно прогнозировать повышение радиорезистентности у человека на 7-56 сутки, что соответствует периоду повышения а - ингерферонсинтезирующей активности клеток периферической крови.

Практические рекомендации

1. Иванов A.A., Уланова A.M., Мальцев B.H., Ставракова Н.М., Рогожин Д.В. Использованию показателей интерферонового статуса для прогнозирования радиорезистентности // Методические рекомендации ФМБЦ им. А.И.Бурназяна ФМБА России, 2008г.

2. Иванов A.A., Уланова A.M., Мальцев В.Н., Ставракова Н.М., Рогожин Д.В. Применение вакцины «Гриппол» для повышения неспецифической противолучевой резистентности //Методические рекомендации ФГУП ГНЦ Институт биофизики ФМБА России, 2008г.

Список опубликованных работ по теме диссертации.

1. Рогожин Д.В., Бабаянц A.A., Иванов A.A. Влияние вакцины Гриппол на ин-терфероновый статус организма II Тез-XIV Российского национального конгресса «Человек и лекарство», 16-20 апреля, 2007 года, Москва

2.Нванов A.A., Рогожин Д.В., Бабаянц A.A., Уланова A.M. Расширение показаний к применению вакцины «Гриппол» на основании новых данных ответа организма на иммунизацию. Тез. VI Всероссийского конгресса «Профессия и здоровье», 30 октября - 1 ноября 2007 г., Москва.

3. Рогожин Д.В., Бабаянц A.A., Пинегин Б.В., Иванов A.A. Влияние вакцины Гриппол на интерфероновый статус // Тез. Всероссийской научной конференции "Объединенный иммунологический форум", Санкт-Петербург, 30 июня - 5 июля 2008 г.

4.Иванов A.A., Бабаянц A.A., Дешевой Ю.Б., Ильина Н.И., Мальцев В.Н., Пинегин Б.В., Рогожин Д.В., Уланова A.M. Интерфероногенная активность вакцины Гриппол II Иммунология. - 2008. - Т. 29, № 5. - С. 278-280.

5. Иванов A.A., Иванова A.C., Уланова А.М., Ставракова Н.М., Дешевой Ю.Б., Рогожин Д.В., Андрианова И.Е., Мальцев В.Н. Противолучевое действие вакцины «Гриппол» // Радиационная биология. Радиоэкология. - 2010. - Т. 50, № 1. -С. 52-57.

Подписано в печать:

11.10.2010

Заказ № 4243 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Рогожин, Дмитрий Владимирович

Введение.

1 Обзор литературы.

1.1. Прошволучевые свойства веществ микробного происхождения. Бактериальные вакцины. Эндотоксины. Полисахариды.

1.1.2 Механизм противолучевого действия веществ микробного происхождения.

1.2 Противолучевые свойства вирусных вакцин.

1.2.1 Иммунобиологические свойства вакцины Гриппол.

1.3.1 Механизм противолучевого действия гриппозных вакцин.

1.4 Медико-биологические свойства синтетических полимеров.

1.4.1 Прошволучевые свойства синтетических полимеров.

1.4.1.2 Синтетические полимеры как индукторы синтеза интерферона.

1.4.2 Иммунобиологические свойства полиоксидония.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние вакцины гриппол на радиорезистентность организма"

Актуальность нее./едовання

Возможность повышения устойчивости организма к поражающему действию ионизирующего излучения с помощью вакцин известна давно. При эгом установлено, что противолучевой эффект наблюдается при использовании бактериальных и вирусных вакцин как при профилактическом, так и при лечебном их применении. Противолучевое действие вакцинации продемонстрировано многими отечественными и зарубежными исследователями [53]. Возможность использования для этих целей гриппозной вакцины, применяемой для иммунизации населения, продемонстрирована на инактивированной хроматографи чески чистой (тип А1 и А2) вакцине производства Омутнинского химического завода Кировской области [75]. Показано, что профилактическое введение этой вакцины повышало выживаемость облученных и защищенных животных по сравнению с незащищенными на 25-40 % [75]. Однако данная вакцина в настоящее время снята с производства в связи с ее слабыми специфическими иммупогенными свойствами.

В настоящее время для иммунизации населения широко применяется вакцина Гриппол, разработанная сотрудниками Государственного Научного центра -Института иммунологии. На текущий момента вакциной иммунизировано более 40 млн. человек. Гриппол является высокоочищенным эффективным и полностью безопасным препаратом. Результаты вакцинации свидетельствуют о безвредности, хорошей переносимости и высокой профилактической эффективности препарата. Однако, согласно инструкции, вакцинация Грипполом противопоказана при аллергических реакциях на куриный белок и компоненты вакцины.

Разработчики вакцины установили, что Гриппол не только формирует специфический противовирусный иммунитет, но и повышает устойчивость организма человека к другим острым респираторным заболеваниям. Однако 4 механизмы этой устойчивости не расшифрованы. В этой связи представляется актуальным исследовать динамику интерферонового статуса организма под влиянием вакцины Гриппол, поскольку система интерферонов является одной из важнейших систем обеспечивающих неспецифическую противовирусную резистентность организма.

К моменту начала работы, практически отсутствовали публикации посвященные влиянию вакцины Гриппол на интерфероновый статус, который отражает неспецифическуто устойчивость организма. И совершенно не изученным в рассмотренных нами публикациях остаехся вопрос о противолучевой эффективности Гриппола и установлении механизма повышения радиорезистентности под влиянием вакцины, что, безусловно, является актуальным и имеет не только научный, но и практический интерес.

Цели и задачи исследования

Цель работы: Определить способность вакцины Гриппол повышать радиорезистентность и роль иммунологических механизмов в противолучевом действии вакцины Гриппол.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие экспериментальные задачи:

• Исследовать противолучевое действие вакцины Гриппол.

• Исследовать влияние вакцины Гриппол на интерфероновый статус животных и человека.

• Исследовать влияние вакцины Гриппол на специфический иммунный ответ.

• Установить коррелятивные связи между уровнем интерферонов и радиорезистентностью ор[ анизма.

• Обосновать возможность переноса данных о противолучевом действии вакцины Гриппол с животных на человека.

Положения, выносимые на защиту

• Вакцина Гриппол обладает противолучевыми свойствами.

• Вакцина Гриппол активирует процессы интерфероногснеза в организме животных и человека.

• Периоды повышения радиорезистентности, формируемые после иммунизации вакцигтой Гриппол, совпадают со временем повышения интерферонсинтезирующей активности клеток крови.

Научная новизна

Впервые изучено влияние вакцины Гриппол на радиорезистентность организма. Показано, что вакцина, введенная в дозе 0,2 мл за 14 суток до облучения

7,5 Гр), статистически достоверно повышает выживаемость мышей в опытной группе по сравнению с контрольной на 25% и 60% и положительно влияет на динамику массы тела, показатели периферической крови мышей при облучении в минимальной летальной дозе (6 Гр).

Впервые выявлена взаимосвязь между уровнем противолучевой резистентности и содержанием сывороточного интерферона в периферической крови организма. Показано, что темпы падения содержания лейкоцитов периферической крови у сублетально облученных собак ниже в группе с исходно высоким до облучения содержанием ИФН в сыворотке по сравнению с аналогичными показателями в группе с низким содержанием ИФН в сыворотке.

Разработаны критерии переноса данных о противолучевых свойствах Гриппола с животных на человека. Согласно нашим данным, повышенное содержание сывороточного интерферона в сыворотке крови перед облучением повышает выживаемость животных

Практическая значимость

Результаты данного исследования позволяют рекомендовать Гриппол как препарат двойного действия: антигриппозного и средства повышения радиорезистентности, предназначенный, в частности, для иммунизации работников атомной промышленности, личного состава Российской Армии, сотрудников МЧС и других групп риска радиационного воздействия. Основываясь на данных о повышении интерферопсинтезирующей способности лейкоцитов крови после иммунизации у человека (7 56 сутки) и у животных (7-21 сутки), а также на данных о том, что в период 7-21 с) юк > животных отмечено повышение радиорезистентности, можно прогнозировать повышение радиорезистентности у человека в период 7-56 суток после иммунизации.

Экспериментальные данные, приведенные в диссертационной работе, включены в методические рекомендации но использованию показателем ишерферонового статуса для прогнозирования радиорезистентности и методические рекомендации по применению вакцины «Гриппол» для повышения неспецифической противолучевой резистентности.

1 Обзор литературы

1.1. Противолучевые свойства веществ микробного происхождения. Бактериальные вакцины. Эндотоксины. Полисахариды.

Весь мировой опыт применения вакцинных препаратов свидетельствует, что вакцинопрофилактика является наиболее мощным методом борьбы с инфекционной патологией. Накопленные данные - как у нас, так и за рубежом, убедительно показали, что риск реакций при введении современных вакцин несоизмеримо ниже, чем последствия перенесения соочветсгвующей инфекции [5,30,43].

В тоже время, исследования, начатые в 50-60 годы, показали возможность использования вакцин не только для профилактики различных инфекционных заболеваний, но и как средств, повышающих радиорезистентность организма к лучевым поражениям. Было установлено, что введение вакцин за 1-2 или 10-14 суток существенно повышает выживаемость облученных животных [36J

В последующих работах [74] детально исследовались феноменология и механизмы радиопротекторного действия вакцин. Рассматривались такие параметры как: тип вакцины, время, кратность и место введения, диапазон доз в котором наблюдался радиозащитный эффект.

Проведенные исследования убедительно доказали эффективность использования вакцинных препаратов не только для профилактики лучевых поражений, но и как средств ранней терапии острой лучевой болезни [11.

Прежде всего, следует отмстить, что противолучевой активностью обладают как препараты цельных микробных клеток (живых или убитых), так и различные их компоненты. В профилактике и лечении исследованы различные бактериальные агенты, но в первую очередь - вакцины: БЦЖ, чумная, туляремийная, бруцеллезная, сибиреязвенная, из бактерий кишечной группы [741

Наиболее эффективно однократное парентеральное введение вакцин из бактерий кишечно-тифозной группы (внутривенное, внутрибрюшипное, подкожное, внутримышечное). Максимальный эффект проявляется в диапазоне доз излучения, вызывающих костномозговую форму ОЛБ (ЛД50 -ЛД99). Выживаемость животных после облучения варьирует в пределах 2090 % при профилактическом и 10-90 % в лечебном варианте применения ВМП [741. Состав вакцинного препарата оказывает непосредственное влияние на эффект, максимально он проявляется при использовании вакцин из бактерий кишечно-тифозной группы, полисахаридных, липополисахаридных, и белково-липополисахаридных компонентов этих микробов. Оценка зависимости противолучевого эффекта от времени введения показывает, что наиболее значительное повышение выживаемости животных отмечается при назначении ВМП (эндотоксинов, полисахаридов) за несколько часов или 1-2 суток до и в первые часы и сутки после облучения. Характерно наличие бимодального типа радиозащитного действия эндотоксина с двумя пиками повышения радиорезистентности (23-и и 10-14-е сутки после иммунизации) [96].

Еще одной важной закономерностью противолучевого действия ВМП является отсутствие видовой специфичности. Это может свидетельствовать о реализации действия ВМП через универсальные гомсостатичсскис механизмы, выработанные в процессе эволюции [3,74].

Интерес представляет оценка дозовых зависимостей действия ВМП. Можно выделить ряд особенностей, характеризующих их как вещества с выраженным рецепторным, пусковым типом действия:

1. активность проявляется в малых дозах, составляющих миллиграммы, а для некоторых (поли - и липополиахариды) даже десятые и сотые доли миллиграммов;

2. наличие пороговых доз, при превышении которых наблюдается резкое увеличение эффективности с выходом на плато;

3. большой диапазон доз от минимально до максимально эффективных [87j

Какие же компоненты бактериальной клетки обеспечивают спектр биологической активности и противолучевое действие? Оказывается, что активными в плане повышения радиорезистентности являются совершенно различные по первичной структуре вещества, выделенные из микробов: анатоксины [761, фильтраты, лишенные эндотоксина [101], липиды [120], пептидогликаны [112]. Можно сделать вывод, что наиболее общими признаками, объединяющими биологически активные ВМП, являю ich трехмерная конфигурация в пространстве (четвертичная структура) и полимерность (многократное повторение в молекуле однотипных детерминант). Как полагают, именно полимерность обеспечивает максимальную способность молекул ВМП образовывать комплексы с рецепторами эффекторных иммунокомпетентных клеток [53].

Итак, приведенные данные позволяют сделать вывод о том, что ряд вакцин при определенных условиях их применения обладает противолучевой эффективностью, и поиск протекторов среди микробных антигенов целесообразен. Использование веществ микробного происхождения для повышения радиорезистентности является одним из важных направлении решения проблемы профилактики и терапии острой лучевой болезни. Это обусловлено тем, что вещества, выделенные из микроорганизмов, характеризуются высокой биологической активностью. Введение их в организм может приводить к изменению функции ряда органов и систем. Результатом такой перестройки является повышение резистентности организма к инфекционному заражению и другим экзогенным факторам, оказывающим неблагоприятное воздействие [44].

В течение нескольких десятилетий многие исследователи для защиты животных от облучения и лечения экспериментальной острой лучевой болезни применяли широкий спектр препаратов, в состав которых входят бактериальные антигены: вакцина ттз кокков [93J, вакцина БЦЖ 138], вакцина из бактерий кишечной группы [74], убитая и живая аутофлора [37], бактериальные препараты из нормальной микрофлоры кишечника [52], споры некоторых анаэробных бактерий [37], различные фракции микроорганизмов [93], эндотоксин [36], антигены [53].

Большая часть этих препаратов обладает противолучевой эффективностью. По тесту выживаемости облученных животных, в случае профилактического применения, защитный эффект составил 20-90% и варьировал в пределах 30-80% - в лечебном' варианте применения лих бактериальных препаратов. Максимальный эффект наблюдался при использовании препаратов из грамотрицательных бактерий кишечно-тифозной группы. Например, при внутривенном введении липополисахарида, выделенного из Sal. typhimurium за сутки до облучения, наблюдалось повышение выживаемости облученных белых мышей (ЛД 7о/зо) в среднем на 50% [14]. |

Заключение Диссертация по теме "Радиобиология", Рогожин, Дмитрий Владимирович

Выводы

1. Вакцина Гриппол активирует процессы интерфероногенеза в организме животных и человека. Титры а - интерферона у мышей достигаю] максимальных значений на 7 сутки, а у собак - на 14 сутки после введения вакцины. У человека наибольшие титры а - интерферона отмечаются на 7 и 56 сутки после введения Гриппола.

2. Вакцина Гриппол, введенная в дозе 0,2 мл за 7 и 14 суток до облучения (7.5 Гр), статистически достоверно повышает выживаемость иммунизированных мышей по сравнению с неиммунизированными на 25% и 60% соответственно и положительно влияет на динамику массы тела и скорость восстановления показателей периферической крови.

5. Основываясь на совпадении сроков повышения интерферонсинтезирующей способности лейкоцитов крови у животных (7-21 сутки) с периодами повышения радиорезистентности, можно прогнозировать повышение радиорезистентности у человека на 7-56 сутки, что соответствует периоду повышения а интерферонсинтезирующей активности клеток периферической крови.

Практические рекомендации

1. Иванов A.A., Уланова A.M., Мальцев В.Н., Ставракова Н.М. Рогожин Д.В. Использованию показателей интерфероновою ста! vea для прогнозирования радиорезистентности // Методические рекомендации ФМБЦ им. А.И.Бурназяна ФМБА России, 2008г.

2. Иванов A.A., Уланова A.M., Мальцев В.И., Ставракова Н.М., Рогожин Д.В. Применение вакцины «Гриппол» для повышения неспецифической противолучевой резистентности //Методические рекомендации ФГУП ГНЦ Институт биофизики ФМБА России, 2008г.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Рогожин, Дмитрий Владимирович, Москва

1. Андрущенко В. Н. Преображенский Ю. Ю. Клиническое применение зимозана и изучение механизма его действия. Рига: Рижск.мед.ин-т, 1982. - 148 с.

2. Аптиоксиданты и лазерное излучение в черапии рай и трофических язв /Тспляшин А.С. и др.. М.: Медицина, 2001. - 127 с.

3. Аполлонии А. В., Яковлев М. Ю., Рудик А. А. Эндотоксинсвязывающие системы крови // Журнал микробиологии, эпидемиологии, иммунологии. -1990. -№11. С. 100-106.

4. Аршинова С. С., Пинегин Б. В., Стаханов В. А. Иммуномодуляюр полиоксидоний в комплексной герагши больных туберкулезом легких // Иммунология. 2001. - № 3. - С. 35-40.

5. Брагинская В. П., Соколова А. Ф. Активная иммунизация детей. М.: Медицина, 1990. - 208 с.

6. Бектимиров Т. А, Ельшина Г. А., Горбунов М. А. Результаты изучения эффективности гриппозной пнактивированной субъединичной вакцины Инфлювак // ЖМЭИ. 2000. - № 2. - С. 50-54.

7. Буковская С. Н., Карпович Л. Г., Романов В. Н. Изменения популяционного состава лимфоцитов периферической крови и гуморального иммунного ответа у людей, привитых живыми гриппозными вакцинами // Микробиология. 1984. - № 11. - С. 95-100.

8. Бурцева Е. И., Слепушкин А. Н., Беляева A. JI. "Гриппол" -эффективный препарат для иммунизации лиц пожилого возраста против гриппа // Иммунология. 2000. - № 2. - С. 39-42.

9. Бурцева Е. И., Слепушкин А. И. Опыт вакцинопрофилактикп гриппа у лиц пожилого возраста. Реактогенность и иммуногенность инактивированных вакцин // ЖМЭИ. 2005. - № 5. - С. 40-46.

10. Ю.Владимиров, Ю. А., Арчаков А. И. Перекиспое окисление липидов биологических мембран. М.: Медицина, 1972. - 155 с.

11. Влияние некоторых биологически активных препаратов на популяцию клеток стволовой фракции кроветворения и на выживаемость, облученных мышей. Сообщение 3. Интерферон / Семина О. В. и др.1 // Радиобиология. 1976. - Т. 16, № 2. - С. 218-222.

12. Влияние тимогепа па образование КОЕс из облученного in vitro костпою мозга мышей // Семина О. В. и др.// Бюл.экспсрим.биологии и медицины. 1980. - Т. 90, № 9. - С. 334-336.

13. Выживаемость облученных клеток млекопитающих и репарация ДНК. / Пелевина И. И. и др.. М.: Энергоатомиздат, 1985. - 120 с.

14. Н.Гордеева М. С. Дуплищева А. П., Туманян, М. А. Успехи иммунологии // Радиобиология. 1974. - Т. 14, № 4. - С. 348-352.

15. Дарспская Н. Г., Ушаков И. Б., Насонова Т. А. Экстраполяция экспериментальных данных на человека в физиологии и радиобиологии. Воронеж.: Истоки, 2004. - 232 с.

16. Ершов Ф. И., Новохатский А. С. Интерферон и его индукторы. М.: Медицина, 1980. - 174 с.

17. Ершов Ф. И. Система интерферона в норме и при патологии. М.: Медицина, 1994.- 240 с.

18. Жслезникова Г. Ф. Варианты реакции иммунной системы детей па острые респираторно-вирусные инфекции: автореф. дис. .д-ра. мед. наук.-СПб., 1996.- 21 с.

19. Железникова Г. Ф. Иммуномодулирующее действие вакцин: новые аспекты известной проблемы // Иммунология. 2000. - № 4. - С. 20-23.

20. Железникова Г. Ф. Типы иммунного ответа при острых инфекционных заболеваниях // Успехи физиологических наук. 1997. - № 5. - С. 6480.

21. Иванов A.A. Влияние радиации на систему иммунитета и иммуиоло1 ические методы модификации радиорезистентности /Лучевое поражение / Под ред. проф. Ю.Б. Кудряшова. М.: Изд-во МГУ, 1987. -С.154-161.

22. Иванов A.A. Иммунный статус и радиация // Сборник тезисов науч. конф.-М., 1991.-С. 15.

23. Иванов A.A., Клемпарская H.H. и Шальнова Г.А Противолучевые эффекты иммуноглобулинов. М.: Энергоатомиздат, 1990. - 176 с.

24. Иванов A.A., Кузнецов В.П., Уланова A.M. Противолучевые терапевтические свойства лейкинферона // Радиационная биология. Радиоэкология. 1998. - Т. 38, № 1. - С. 62-69.

25. Иванов A.A., Уланова A.M. Противолучевой защитный эффект гриппозной вакцины/ Иммунный статус человека и радиация // Тез. докл. Всесоюзн. научн. конф. Гомель, 1991.-С. 158.

26. Иващенко H. Н., Якупов В. М., Надточей Л. А. Об итогах специфической профилактики острых респираторных заболеваний и гриппа В в г.Когалым в эпидемическом сезоне 1998-1999 гг. // Иммунология. -2000. № 3. - С. 25-26.

27. Изучение клеточных и молекулярных механизмов взаимодействия иммуномодулятора полиоксидония с клетками иммунной системы человека / Дьяконова В. А. и др. // Иммунология. 2004. № 3. - С. 145-151.

28. Индукторы ингерферонов / Сыдыков А. С. и др.. Ташкент: Фан, 1978. - 303 с.

29. К оценке иммунологической безопасности вакцин. Пост вакцинальные осложнения: патогенез, профилактика, лечение / Буковская С. Н. и др.1//

30. Матер. Всесоюзн. научн.- практ. конф. Ленинград, 1991. - С. 38.87

31. Камалян JT.А. К вопросу о повышении радиорезистентности кроликов путем иммунизации их вирусом осповакцины // Радиобиология. 1966. Т. 6, № 6. С. 860-864.

32. Карпочева С. В. Вакцинация против дифтерии и столбняка детей, имеющих в анамнезе солидные опухоли: автореф. дис. .канд. мед. паук. -М„ 1998.- 23 с.

33. Каулен Д. Р., Санин А. В. Влияние гуморальных факторов, Т-лимфоцитов и инфекционных агентов на дифференцировку стволовых клеюк и иммуногенез // Итоги науки и техники. Иммунология. 1982. -№ 10. - С. 54-79.

34. Кинетика форменных элементов крови / Мосягина Е. Н. и др.. М.: Медицина, 1976.- 272 с.

35. Клебанов Г. И., Любицкий О. Б., Дьяконова В. А. Изучение антиоксидаптных свойств иммуномодулятора полиоксидопия // Иммунология. 2005. - № 4. - С. 200-205.

36. Клемпарская И. И., Раев П. В., Сосова В. Ф. Антибактериальный иммунитет и радиорезистентность. М.: Медгиз, 1963. - 78 с.

37. Клемпарская H.H., Шальпова Г. А. Стимуляция иммуногенеза облученных животных комбинированным применением некоторых бактериальных антигенов // Радиобиология. 1962. - Т. 2. № 2. - С. 1.

38. Клемпарская H.H., Шальнова Г.А и Поздняков А.Л. О возможности неспецифического повышения антиинфекционной резистентности мышей, привитых вакциной БЦЖ // Микробиология эпидемиология и иммунобиология. . 1964. - № 2. - С. 14.

39. ЗЭ.Коноплянников А. Г. Влияние некоторых биологически активных препаратов на популяцию клеток стволовой фракции кроветворения и на выживаемость облученных мышей. Сообщение 1. Полианионы // Радиобиология. 1974. - Т. 14, № 1. - С. 49-52.

40. Коноплянников А. Г. Радиобиология стволовых клеток. М.: Энергоатомпздат, 1984. - 119 с.4¡.Коррекция иммунологических нарушений у болных с панкреонекрозом / Аверкиев В. Л. и др. // Иммунология. 2002. - № 6. - С. 356-359.

41. Кост Е. А. Справочник по клиническим и лабораторным методам исследования. М.: Медицина. 1964. - 436 с.

42. Костипов М. II. Новое в клинике, диагностике и вакципопрофилактике управляемых инфекций. М.: Медицина, 1997. - 112 с.

43. Краскина П. А., Зегер Э., Лопатина Т. К. Иммуномодулирующне свойства вакцинных препаратов // Тезисы первого всесоюзного иммунологического съезда. Сочи, 1989. - С. 39.

44. Краскина Н. А., Лопатина Т. К., Бляхер М. С. Об иммунологической безопасности вакцин. Поствакцинальные осложнения: патогенез, профилактика, лечение. // Матер. Всесоюзн. научн.-пракг. конф. 19-21 ноября 1991г. Л-д.,1991. - С. 55.

45. Лусс Л. В., Некрасов А. В., Пучкова Н. Г. Роль иммуномодулирующей терапии в общеклинической практике // Иммунология. 2000. - № 5. -С. 34-39.

46. Максимова Н. VI. Динамика напряженности иммунитета против дифтерии и столбняка при профилактических прививках у детей: автореф. дис. .д-ра мед. наук. М., 1991. - 25 с.

47. Малета Ю. С., Тарасов В. В. Непараметрические методы статистического анализа в биологии и медицине. М.: Издательство МГУ, 1982.- 123 с.

48. Мальцев. В.Н. Количественные закономерности радиационной иммунологии. М.: Энергоатомиздаг, 1983. - 217 с.

49. Мальцев В.Н., Гуценко К.К. и Емченко H.H. Влияние бактериальных препаратов на выживаемость облученных животных // Радиац. биология. Радиоэкология. 1994. - Т.34. , №. 4-5. - С. 578-581.

50. Мальцев В. Н., Смирнова О. В. и Стрельников, В. А. Радиация и вакцинация. М.: Медицина, 1976. - 155 с.

51. Мельников В. Я., Догодаева J1. И., Тур А. И. Использование нового природного антиоксиданта гистохрома в лечении и профилактике внутриглазных кровоизлияний: сб. материалов Юбилейной науч.-иракт.конф. М., 1997. - Вып. 3. - С. 166-168.

52. Морозов В. Г., Хавинсон В. X. Иммунологическая функция тимуса // Успехи соврем, биологии. 1984. - Т. 97, № 1. - С. 36-49.

53. Муратходжаев Ф. Н., Семина,О. В., Поверенный, А. М. Миграция стволовых кроветворных клеток мышей под влиянием декстрансульфата // Радиобиология. 1979. - № 5. - С. 68-73.

54. Нерсссян А. К., Кумкумаджян В. А., Зильфян В. Н. Снижение цитогенетического действия адрибластина и фарморубицпна с помощью туляремийной вакцины в эксперименте // Цитология и генетика. -1989.-Т. 23, №6.-С. 15-18.

55. Николаснко В. Н. Сдвиги в системе имупокомпстентных клеток у людей, иммунизированных различными вакцинными препаратами: дис. .д-ра мед. наук. -М., 1990. 179 с.

56. Острые респираторные вирусные инфекции и их профилактика у детей с атоническими болезнями / Сенцова Т. Б. и др. // Вопросы современной педиатрии. 2003. - Т. 2, № 3. - С. 8-15.

57. Пат. 2312675 Российская Федерация. А61К39/145, А61К39/385. А61Р43/00 Способ профилакшки радиационного поражения / Иванов

58. Петри А., Собин К. Наглядная медицинская статистика / пер. с ашл.

59. B.П. Леонова. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. - 168 с.

60. Петров Р. В., Хаитов Р. М. Итоги науки и техники // Иммунолошя.1982. № ю. - С. 6-30.

61. Петров Р. В., Хаитов Р. М. Миграция стволовых клеток из экранированного костного мозга при неравномерном облучении // Радиобиология. 1978. - Т. 12, № 1. - С. 69-76.

62. Петров Р. В., Хаитов Р. М., Некрасов, А. В. Полиоксидоний-иммуномодулятор нового поколения: итоги трехлетнего клинического применения // Аллергия, астма и клин.иммунол. 1999. - № 3. - С. 3-6.

63. Петров Р. В., Хаитов Р. М. Новости вакцинопрофилактики // Вакцинация. 1999. - № 5. - С. 6-7.

64. Пинегип Б. В., Сараф А. С. Отечественный имм> помодуля юр "Полиоксидоний": механизм действия и клиническое применение. М.: Иммафарма, 2000. - 97 с.

65. Полякова Д. Гриппол вакцина нового поколения // Еженедельник Аптека. - 2005. - № 40. - С. 39-41.

66. Препараты интерферона в комплексной терапии бактериальных инфекций / Кузнецов В. П. и др. // Антибиотики и химиотерапия. -1989. Т. 34, № 9. - С. 646-652.

67. Продукция цитокинов под действием полиоксидония in vitro / Дьяконова В. А. и др. // Иммунология. 2002. - № 6. - С. 337-340.

68. Противолучевое действие веществ микробного происхождения / Андрущенко В. II. и др. // Радиационная биология. Радиоэкология. -1996.-Т. 36, №1.- С. 195-207.

69. Радиопротективные и интерфероногенные свойства гриппозной вакцины / Иванов А. А. и др. 1 // Радиационная биология. Радиоэкология. 1995. -Т. 35, №2.-С. 231-235.

70. Результаты и перспективы научных исследований микробных полисахаридов // Матер. Всесоюзн. научн.-практ. конф. Ленинград,1984. С. 185-186.

71. Роль тимусных клеток в селезеночном колонисобразованип. Сообщение 1 / Поверенный А. М. и др. // Радиобиология. 1978. - Т. 18, № 4. - С. 545-547.

72. Романова А. В., Латышева Т. В. Применение полиоксидония в комплексной 1ерапии больных с тяжелой формой бронхиальной астмы // Иммунология. 2002. - № 6. - С. 372-376.

73. Семина О. В. Влияние некоторых биологически активных веществ на популяцию стволовых кроветворных клеток и на выживаемость облученных мышей: автореф. дис. . канд. биол. наук. Ленинград, 1976. - 17 с.

74. Семина О. В., Коногшяипиков А. Г., Поверенный А. М. Влияние полиинозиновой-полицитидиловой кислоты на колониеобразующуго способность клеток стволовой фракции кроветворения в условиях аллогенного ингибировапия // Бголл.экспер.биол. 1976. № 4. - С. 450.

75. Склянская Е.И. Влияние ионизирующего излучения на восприимчивость белых мышей к некоторым нейотропным вирусам // Вопросы вирусологии. 1957. - № 6. - С. 354-359.

76. Слепушкин А. IT., Бурцева Г,. И. Реактогенность и пммуногенность вакцины гриппол у детей младшего школьного возраста (6-11 лет) // Аллергия, астма и клиническая иммунология. 1999. - № 5. - С. 3-7.

77. Смородинцев A.A. Течение экспериментальной гриппозной инфекции у белых мышей и крьтс в условиях общего облучения // Вопросы вирусологии. 1956. - № 3. - С. 32-35.

78. Современные аспекты изучения иммунной безвредности и эффективности вакцинации. Под. ред. М. С. Бляхер: сб. науч. тр. НИИЭМ им. Габричевского. М„ 1988. - С. 107.

79. Стрелин Г. С., Ярмоненко С. П. Пострадиационная репарация. М.: Аюмиздат, 1970. - 264 с.

80. Стрельников Ю. В., Либикова Н. И. Сравнительное исследование биологических свойств ряда бактериальных полисахаридов //

81. Радиобиология. 1988. - Т. 28, № 3. - С. 323-328.93

82. Туманян М.А., Извекова А.В. Действие ионизирующего излучения на иммунитет к кишечным инфекциям // Медицинская радиология. 1956. № 1. - С. 59-65.

83. Хаитов Р. М., Некрасов А. В., Горбунов М. А Вакцинация Грипполом детей // Вакцинация. 2001. - Т. 5, № 17. - С. 56-59.

84. Хаитов Р. М., Некрасов А. В., Лыткина И. П. О влиянии вакцинопрофилактики на уровни заболеваемости гриппа и ОРЗ // Вакцинация. 2001. - Т. 5, № 17. - С. 38-43.

85. Хаитов Р. М., Черменева Л. М., Рябова Л. В. Факторы, кошролпруюшие рециркуляцию кроветворных стволовых клеток // Цитология. 1979. -№2.-С. 248-251.

86. Ярилин А. А. Основы иммунологии. М.: Медицина, 1999. - 204 с.

87. Ainsworth Е. From endotoxins to newer immunomodulators: survival-promoting effects of microbial polysaccharide complexes in irradiated animals // Pharm.Thcr. 1988. - Vol. 39. - P. 223-241.

88. Bach J., Dardenne M. Appearance of T-cell markers in bone marrow rosette-forming cells after incubation with thymosin, a thymic hormone // Proc.Nat.Acad.Sci.USA. 1971. - Vol. 68, № 11. - P. 2734.

89. Beneficial Effects of Eudotoxins / D. Pluznik. N.V.L.: Pergarnon Press, 1983. - P. 124 - 128.

90. Behling U. Beneficial Effects of Endotoxins. N.Y.L.: Pergamon Press., 1983. - 148 p.

91. Blazck A., Mathe J. Phannacotherap // Biomed. 1983.- Vol. 37, №6. - P. 258 265.

92. Choo M., Hunt Т., Hussain M. Hydrogen peroxide stimulates macrophage vascular endothelial growth factor release // Am. J. Physiol. Heart Circ. -2001.- № 280. P. 2357-2363.

93. Claesson M. Scand J. Colony formation by subpopulations of human T lymphocytes. V. Helper and suppressor activity of cloned human T-cell lines1.munol. 1984,- Vol. 19, №1. - P. 85-90.94

94. Cox Rebecca Jane The humoral immune response and protective efficacy of vaccination with inactivated split and whole influenza virus vaccines in BALB/c mice // Vaccine. 2006. - Vol. 24, № 1. - P. 44-46

95. Fedorocko P., Bresani P. Mackova N. Radioprotection of mice by the bacterial extract Broncho-Vaxom haemopoietic stem cells and survival enhancement//Int.J.Radiat.Biol. 1992. - Vol. 61, № 4. - P. 511-518.

96. Fuji A., Kakumu S., Onlani G. Interferon-gamma production by peripheral blood mononuclear cell of patients with chronic licer disease // llepatology. 1987. - Vol. 7, № 1. - P. 7-14.

97. Goodman G., Shinpock S. In vitro studies of erythropoietic progenitors (CFU-E) in marrow from neonatal and young mice // Exp Hematol. 1984. -Vol. 135, №2. - P. 150-158.

98. Hale W., Stoner K. Effects of ionizing radiation on immunity // Rad.Res. . 1954,- Vol. 1, №1-6. - P. 459-469.

99. Hensley K., Robinson K. A., Gabbita S. P. Reactivc oxygen species, cell signaling, and cell injury. Free Radiac // Biol. Med.1 2000. - Vol. 28, № 10.-C. 1456-1462.

100. Janssen-Heininger Y. M., Poynter M. E. Baeuerle P. A. Recent advances towards understanding relox macanisms in the activation of nuclear factor kB. Free Radiac // Biol. Med. 2000. - Vol. 28, № 9. - C. 1317-1327.

101. Junn E., Lee K., Ju H. Requirement of hydrogen peroxide generation in TGF-|3, signal transduction in human lung fibroblast cells: invovement of hydrogen peroxide and Ca2+ in TGF-|31 -induced IL-6 expression // J.Immunol. 2000. - № 165. - C. 2190-2197.

102. Kamata H., Manabe T., Oka S. Hydrogen peroxide activates IkappaB kinses through phosphorilation of serine residues in the activation loops // FEBS Lett. 2002. - № 519. - C. 231-237.

103. Li Ziyi Cloned ferrets produced by somatic cell nuclear transfer // Developmental Biology. 2006. - № 2. - P. 439-448.

104. Los M. Droge W. Sticker K. Hydrogen peroxide as a potent activater of T-lyrnphocyte functions // Eur.J.Immunol. 1995.- Vol. 25. № 1. - P. 159-165.

105. Mathison J., Ulevitch R. The clearance, tissue distribution, and cellular localization of intravenously injected lipopolysaccharide in rabbits // J.Immunol.-1979. Vol. 123, № 5. - P. 21332143.

106. Nakajima R. Arzneim. Forschung. // Drug.Res.BRD. 1980. - Vol. 38, № 7a. - P. 982-986.

107. Neta R., Oppenheim J. Radioprotection with cytokines: a clarification of terminology// Cancer Cells. 1991. - Vol. 3, № 10. - P. 391-396.

108. Neuman H., Fauser A. Effect of interferon on pluripotent hemopoietic progenitors (CFU-GEMM) derived from human bone marrow // Exp Hematol. 1982. - Vol. 10, №7. - P. 587-590.'

109. Patchen L., D'Alesandro M., Chirigos A. Radioprotection by biological response modifiers alone and in combination with WR-2721 // Pharm Ther. -1988.-Vol. 39.-P. 247-254.

110. Pearson R. C., Gorham J. R. Viral disease models // Fox, J.D. (Ed.), Biology and Disease of Ferret. 1998. - № 3. - P. 487-497.

111. Ploemacher R., Brons N. Role of splenic stroma in the action of bacterial lipopolysaccharides on radiation mortality: a study in mice carrying the Slj allele // Cell Tiss.Kinet. 1987. - Vol. 20, №1.-P. 29-36.

112. Sasaki S. Production of lymphocytosis by polysaccharide polysulphates (heparinoids) // Nature. 1967. - Vol. 214, № 3. - P. 1041-1042.

113. Sasaki S., Suchi T. Mobilization of lymphocytes from lymph nodes and spleen by polysaccharide polysulphate. // Nature. 1967. - Vol. 216, № 1. -P. 114.

114. Snyder S., Walden T., Pacten, M. Radioprotective properties of detoxified lipid A from Salmonella minnesota R595 // Radial.Res. 1986. -Vol. 107, № l.-P. 107-111.

115. Tatla S. The role of reactive oxygen spesies in triggering proliferation and IL-2 secretion in T-cells // Free Radiac.Biol.Med. 1999. - Vol. 26. № l.-P. 14-24.

116. Wang X.-T., McCullough K., Wang X.-J. Oxidative stress-induced phospholipase C-y activation enchances cell survival //J.Biol.Chem. 1984. -№ 276.-P. 28364-28371.

117. YM IIu Evaluation on the safely and immunogenicity of Canada split influenza virus vaccine // Zhonghua liuxingbingxue zazhi. 2005. Vol. 26, № 7. P. 503-506.

Информация о работе

Рогожин, Дмитрий Владимирович
кандидата биологических наук
Москва, 2010
ВАК 03.01.01

Диссертация

Влияние вакцины гриппол на радиорезистентность организма - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы