Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Анализ экспрессии клеточных онкогенов в нормальных и опухолевых тканях человека

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мелков, Александр Михайлович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Характеристика онкогенов.

2.2. Продукты онкогенов.

2.3. Большие концевые повторы.

2.4. Химический и радиационный канцерогенез в свете концепции онкогена.

2.5. Экспрессия онкогенов в человеческих опухолях.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1. Выделение РНК.

3.1.1. Центрифугирование в хлористом цезии.

3.1.2. Метод экстракции горячим фенолом.

3.2. Денатурирующий электрофорез РНК в агарозном 50 геле.

3.3. Перенос денатурированной РНК на нитроцеллшозный фильтр.

3.4. Гибридизация РНК.

3.5. Выделение ДНК.

3.6. Электрофорез ДНК.

3.7. Перенос фрагментов ДНК из геля на нитроцеллшозный фильтр.

3.8. Гибридизация ДНК.

3.9. Экспозиция фильтров.

3.10. Выделение плазмидной ДНК.

3.11. Клонирование ДНК.

3.11.1. Приготовление векторной ДНК.

3.11.2. Приготовление вставки.

3.11.3. Лигирование.

3.11.4. Трансформация клеток E.coli

3.12. Рестрикционный анализ ДНК.

3.13. Выделение фрагментов ДНК из агарозных гелей.

3.14. Введение метки в ДНК.

3.15. Трансформация NIH ЗТЗ клеток.

3.16. Получение опухолей на бестимусных мышах.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. Анализ РНК опухолевых и нормальных клеток человека.

4.1.1. Получение онк-специфических зондов.

4.1.2. Транскрипция онкогенов в клетках различных опухолей и нормальных тканей.

4.1.3. Изменения размеров транскриптов и уровня экспрессии при опухолевом росте.

4.1.4. Анализ экспрессии онкогена гаэ в клетках нормальной и опухолевой ткани молочной железы

4.2. Трансформация НШ ЗТЗ клеток ДНК из опухолей человека и дальнейшее получение опухолей на бестимус-ных мышах.

4.3. Гибридизация онк-зондов с ДНК, выделенной из крови больных разными формами лейкозов.

5. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Анализ экспрессии клеточных онкогенов в нормальных и опухолевых тканях человека"

На сегодняшний день одной из самых бурно развивающихся областей биологии и медицины является изучение молекулярных механизмов канцерогенеза. Большое количество исследований, проводимое во многих лабораториях у нас в стране и за рубежом привело к стремительному накоплению информации, связанной с процессами неопластической трансформации.

Обнаружение онкогенов, специальных генов, способных в определенных условиях вызывать образование злокачественных опухолей, а так же последовавшие за этим генно-инженерные эксперименты позволили разработать концепцию онкогена - ключевого элемента процесса трансформации.

К сожалению, пока не возможно, используя накопленные экспериментальные факты, составить четкую картину процессов, происходящих в клетке при ее злокачественной трансформации, однако, тем не менее, каждая новая работа вносит новое в понимание сущности этого биологического феномена.

В общебиологической проблеме непостоянства генома особый интерес представляют те его перестройки, которые служат факторами дифференцировки клеток и регуляции активности генов, приводя к специфическим изменениям их структуры и количества в индивидуальном развитии /12/.

FHK-содержащие онкогенные вирусы (ретровирусы)служат эффективными факторами изменчивости генома клеток животных, поскольку обладают способностью в виде ДНК-провирусов включаться в разные локусы хромосом, внося тем самым дополнительную информацию или изменяя проявление генов хозяина.

Вирусо-генетическая теория возникновения опухолей, у истоков которой стоял замечательный советский ученый Л.А.Зильбер /5/, в период своего становления столкнулась с основным затруднением, которое было преодолено открытием "обратной транскрипции" /4,20/. Первоначально функции "ревертазы" могла выполнять обычная ДНК-по-лимераза, использующая как затравку тРНК, ген которой слился с историческим предшественником ретровируса и благодаря гомологии последовательности служит сайтом прикрепления этой тРНК /13/.

Изучение ретровирусов и, в частности, носителей их трансформирующего потенциала-онкогенов, вносит в понимание механизмов возникновения и развития злокачественных опухолей, являющихся по словам Л.А.Зильбера ".одним из тяжелых несчастий современного человечества" /5/ те небольшие крупицы знаний, которые, без сомнения, со временем позволят решить и эту, по истине, актуальнейшую задачу, стоящую перед людьми.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Мелков, Александр Михайлович

ВЫВОДЫ

1. В результате сравнительного анализа ИЖ из 18 типов нормальных и опухолевых тканей человека, полученных из операционного материала, генетическая идентичность которого была на уровне одного органа и отличалась лишь злокачественной трансформацией, получено достоверное увеличение степени экспрессии онк-специфи-ческой РНК в опухолях по сравнению с нормальной тканью.

2. РНК, выделенная из клеток опухолевых тканей, часто содержит транскрипты, по размеру отличающиеся от таковых в клетках нормальных тканей. Это позволяет сделать вывод о том, что в геноме трансформированной клетки происходит реорганизация генетического материала, что может являться как первичной причиной опухолевого роста, так и одним из звеньев в цепи внутриклеточных превращений.

3. При анализе заболевания раком молочной железы человека у всех больных обнаружено увеличение уровня ras -специфической РНК в клетках опухоли по сравнению с нормальной тканью молочной железы.

4. При гибридизации ДНК из клеток крови больных различными формами лейкозов с онк-пробами выявлены отличия между ними на уровне рестриктного анализа.

5. В ДНК М9, полученной изначально из клеток опухоли легкого человека и ДНК 24-4, полученной из доброкачественной опухоли-папилломы, содержится активизированный человеческий протоонкоген.

6. Совокупность полученных результатов позволяет сделать вывод о возможности применения методов молекулярной биологии для характеристики различных видов злокачественных новообразований.

- 92

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Мелков, Александр Михайлович, Москва

1. Альтштейн А.Д. Онкогены опухолеродных вирусов. -Ж.Всес.хим. об-ва им.Менделеева, 1973, т.18, с.630-683.

2. Амбарцумян Н.С., Татосян А.Г., Ениколопов Г.Н. Молекулярное клонирование фрагментов ДНК вируса саркомы Рауса. -Мол.биол., 1982, т.16, c.II83-II87.

3. Георгиев Г.П. О механизме канцерогенеза: "промоторная гипотеза", -Мол.биол., 1981, т.15, с.261-274.

4. Гершензон С.М., Александров Ю.Н., Малюта С.С. Мутагенное действие ДНК и вирусов у дрозофилы, Киев: Наукова думка, 1975,с.57-58.

5. Зильбер Л.А. Вирусная теория происхождения злокачественных опухолей, М.: Медгид, 1946, с.З.

6. Киселев Ф.Л., Татосян А.Г., Гудков А.В., Колобков С.Л. Итоги науки и техники. Вирусология, 1983, т.10, с.25-27.

7. Мазуренко Н.Н. Структура и свойства белков ретровирусов типа С. Вопр.вирусологии, 1980, т.6, с.644-654.

8. Мазуренко Н.Н. Индукция лейкозов у мышей вирусом осповакцины. В кн., Роль вирусов в этнологии лейкозов, М.: Медицина, 1962, с.59.

9. Меклер Л.Б. Антигенная топография поверхности клеток, нуклеиновые кислоты плазмы крови и онкогенез (общая теория онкоге-неза). Ж.Всес.хим.об-ва им.Менделеева, 1968, т.4, с.431-444.

10. Татосян А.Г., Галецкий С.А. и др. Анализ экспрессии онкогенов в опухолях человека. Докл.АН СССР, 1983, т.272, с.726-728.

11. Фролова Л.Ю. Итоги науки и техн. Мол.биол., 1982, т.19, с.117-182.

12. Хесин Р.Б. Непостоянство генома, М.: Наука, 1984, с.З.13. Хесин Р.Б. Там же, с.294.

13. Abelson U.Т., Rabstein L. Influence of prednisolone on mo-lony leukemogenic virus in BALB/c mice. Cancer Res., 1970, v. 30, p.2208-2212.

14. Adkins В., Hunter Т., Beemon K. Expression of the PRCII avian sarcoma virus genome. J. Virology, 1982, v. 41, 3, p. 767-780.

15. Anderson S.N., Hanafusa H. Characterization of avian erythroblastosis virus p75. Virology, 1982, v. 121, p. 32-50.

16. Balduzzi P.C., Notter P.D., Morgan U.R. et al. Some biological properties of two new avian sarcoma viruses. J. Virology, 1981, v. 40, 1, p. 268-275.

17. Baltimore D. Tumor viruses; 1974.- Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1975, v. 39, p.1187-1200.

18. Barbacid M., Beemon K., Devares S. Origin and functional properties of the major gene product of the Soyder-Theilen strain of feline sarcoma virus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA1980, v. 77, p.5158-5162.

19. Barbacid M., Beemon K., Devare S. Biochemical and immunological characterization of polyproteins coded for by the McDonough, Gardner-Arnstein, and Snyder-Theilen strain of feline sarcoma virus. J. Virology, 1980, v. 33, N1, p.196-207.

20. Barbacid M., Breitman M.C., Lauver A.V. et al. The transformation-specific proteins of avian (Fujinami and PRC II) and feline (Snyder-Theilen and Garclner-Arnstein) sarcoma viruses are immunologically related. Virology, 1981,v. 110, p. 411-419.

21. Becker D., Lane M.A., Cooper G. Identification of an antigen associated with transforming genes of human and mouse mammary carcinomas. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982,v. 79, P. 3316-3319.

22. Beemon K. (Transforming proteins of some feline and avian sarcoma viruses are related structurally and functionally.-Cell, 1981, v. 24, p. 145-153.

23. Beemon K., Duesberg P., Vogt P. Evidence for crossing-over between avian tumor viruses based on analysis of viral ENAs. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1974, v. 71, p.4254-4258.

24. Beemon K., Hunter T. Characterization of Eous sarcoma virus src gene products synthesized in vitro. J. Virology, 1978, v.28, 2, p. 551-566.

25. Bentvelzen P. Genetical control of the muhlblock mammary tumor virus. Amsterdam, Elsevier, 1968, p.5-292.

26. Besmer P., Snyder U., Murphy J. et al. Abstr. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 1982, p.22.

27. Beug H., Graf Т., Hayman M. Production and characterization of antisera specific for the erb-portion of p75i the presumptive transforming protein of avian erythroblastosis virus. Virology, 1981, v. 111, p. 201-210.

28. Birnboim H., Doly J.A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA. Nucl. Acids Res., 1979, v. 7, p. 1513-1522.

29. Bister K., Lee W.H., Duesberg P.H. Phosphorylation of the nonstructural proteins encoded by three avian acute leukemia viruses and by avian Fujinami sarcoma virus. J. Virology, 1980, v. 36, p. 617-621.

30. Bister K., Ramsey G., Hayman M. Deletion within the transformation-specific RNA sequences of acute leukemia virus MC29 give rise to partially transformation defective mutants. - J. Virology, 1982, v. 41, p. 754-766.

31. Blair D.G., McClement W.L., Oskarsson M.K. Biological activity of cloned moloney sarcoma virus DNA: terminally redundant sequences may enhance transformation efficiency. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v. 77, p.3504-3508.

32. Blair D.G., Oskarsson M., McClement W.L. et al. Modem trends in human leukemia. IV. Berlin Springer Yerlag, 1981, p. 460-466.

33. Blomberg J., Van de Ven W., Reynolds F.H. et al. Snyder-Theilen feline sarcoma virus p85 contains a single phospho-tyrosine acceptor site recognized by its associated protein-kinase. J. Virology, 1981, v. 38, p.886-894.

34. Breitman M.L., Hikano A., Wong T. et al. Characteristics of avian sarcoma virus strain PRCIV.and comparison with strain PRCII-p. Virology, 1981, v. 114, p. 4^1-462.

35. Brugge J.S., Erikson R.C. Identification of a transformation-specific antigen induced by an avian sarcoma virus. -Nature, 1977, v. 269, P« 346-348.

36. Brugge J., Erikson E., Collett M.S. et al. Peptide analysis of the transformation-specific antigen from avian sarcoma virus. transfected cells. - J. Virology, 1978, v. 26,p. 773-783.

37. Brugge J.S., Erikson E., Erikson R.L. Antibody to virion structural proteins in mammals bearing avian sarcoma virus-induced tumors. Virology, 1978, v. 84, p. 429-433.

38. Brugge J.S., Steinbungh P., Erikson R.L. Characterization1. S3? Сof the avian sarcoma virus protein p60 . Virology, 1978, v. 91, p. 130-140.

39. Brugge J.S., Collett M.S., Siddiqui A. et al. Detection of the viral sarcoma gene product in cell infected with various strains of avian sarcoma virus and of a related proteinin uninfected chicken cells. J. Virology, 1979» v. 29, p. 1196-1203.

40. Chiswell D.J., Enrietto P.J., Evans S. et al. Molecular mechanisms involved in morphological variation of avian sarcoma virus-infected rat cells. Virology, 1982, v. 116,p. 428-440.

41. Coffin J., Varmus H., Bishop J.M. et al. Proposal for naming host cell-derived inserts in retrovirus genomes. J. Virology, 1981, v. 40, p. 953-957.

42. Collett M.S., Erikson R.L. Protein kinase activity associated with the avian sarcoma virus src gene product. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1978,v.?5 p.2021 -2024.

43. Collett M.S., Erikson E., Erikson E.L. et al. Structural analysis of the avian sarcoma virus transforming protein: sites of phosphorylation. J. Virology, 1979, v. 29, p.770-781.

44. Cooper G.M., Okenquist S., Silverman L. Transforming activity of DM of chemically transformed, and normal cells. -Nature, 198О, v. 284, p. 418-421.

45. Cooper G.M., Neiman P.E. Transforming genes of neoplasms induced by avian lymphoid leikosis viruses. Nature, 1980,v. 287, p. 656-659.

46. Czernilofsky A.P., Levinson A.D., Varmus H.E. et al. Nucleotide sequence of an avian sarcoma virus oncogene (src) and proposed amino acid sequence for gene product. Nature, 1980, v. 287, p. 198-203.

47. Curran Т., Teich N. Candidate product of the FBJ murine osteosarcoma virus oncogene: characterization of a 55,000-dalton phosphoprotein. J. Virology, 1982, v. 42, p.114-122.

48. De Lorbe W., Luciw В., Goodman N. et al. Molecular cloning and characterization of avian sarcoma virus circular DNA molecules. J. Virology, 1980, v. 36, p. 50-51.

49. Dhar W., McClement L., Enquist G. et al. Nucleotide sequences of integrated Moloney sarcoma provirus long terminal repeats and their host and viral junctions. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 198О, v. 77, p. 3937-3940.

50. Dina D. The "sarcoma-specific" region of Moloney murine sarcoma virus 124. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1970, v. 75, p. 2694-2698.

51. Donner L., Pedele L., Garon C. et al. McDonough feline sarcoma virus: characterization of the molecularly cloned pro-virus and its feline oncogene (v-fms). J. Virology, 1982, v. 41, p. 489-500.

52. Duesberg P., Bister K. Modern Trends in Human Leukemia IV. Berlin, Karger, 1981, p. 383-396.

53. Duesberg P.H., Kawai S., Wang L.-V., Vogt P.K. eb al. MA of replication-defective strains of Rous sarcoma virus. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1975, v. 72, p. 1569-1573.

54. Duesberg P.H., Vogt P.K. Differences between the ribonucleic acids of transforming and nontransforming avian tumor viruses. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1970, v. 67, p. 1673-1680^

55. Duesberg P.H., Vogt P.K. RNA species obtained from clonal lines of avian sarcoma and from avian leukosis virus. -Virology, 1973, v. 54, p. 207-218.

56. Duesberg P.K., Vogt P.K. Avian acute leukemia viruses MC29 and MH2 share specific RNA sequence: evidence for a second class of transforming genes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1979, v. 76, p. 1633-1637.

57. Ellis R., De Feo D., Shin T. et al. The p21 src genes of Harvey and Kirsten sarcoma viruses originate from divergent members of a family of normal vertebrate genes. Nature, 1982, v. 292, p. 506-511.

58. Erikson E., Collett M.S., Erikson R.L. In vitro synthesis of a functional avian sarcoma virus transforming-gene product. -Nature, 1978, v. 274, p. 919-921.

59. Erikson R.L., Collett M.S., Erikson E. et al. Evidence that the avian sarcoma virus transforming gene product is a cyclic AMP-independent protein kinase. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1979, v. 76, p. 6260-6264.

60. Eva A., Robbins K.C., Anderson Ph. et al. Cellular genes analogous to retroviral one genes are transcribed in human tumour cells. Nature, 1982, v. 295, p. 116-119.

61. Eva A., Tronick S. et al. Transforming genes of human hema-topoetic tumors: frequent detection of ras-related oncogenes whose activation appears to be independent of tumorphenotype. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1983,v.80, p. 49264930.

62. Feldman. R., Hanafusa Т., Hanafusa H. Characterization of protein kinase activity associated with the transforming gene product of Fujinami sarcoma virus. Cell, 1980, v.22, p. 757-765.

63. Feldman R.A., Wang L.-H., Hanafusa H. et al. Avian sarcoma virus TJR2 encodes a transforming protein which is associated with a unique protein kinase activity. J. Virology, 1982, v. 42, p. 228-236.

64. Finkel M.P., Biskis В., Tinkis P. Virus induction of osteosarcomas in mice. Science, 1966, v. 151» Р» 698-702.

65. Fujita D., Radul J., Baar J. et al. Abstr. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1982, p. 108.

66. Fung I.Т., Robinson D., Crittenden L.B. et al. Abstr. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1982, p. 114.

67. Georgiev G.P., Ilyin Y.V., Ryskov A.P., Kramerov D.A. Mobile dispersed genetic elements and their possible relation to carcinogenesis. Mol. Biol. Hep., 1981, v. 6, p. 249-254.

68. Ghysdael J., Neil C., Vogt D.K. A third class of avian sarcoma viruses, defined by related transformation-specific proteins of Yamaguchi 73 and Esh sarcoma viruses. Proc. Natl. Acad. Sci.USA, 1981, v.78, p. 2611-2615.

69. Goff S., Gilboa E., Witte 0. et al. Structure of the Abelson murine leukemia virus genome and the homologous cellular gene: studies with cloned viral DNA. Cell, 1979, v. 22,1. P. 777-785.

70. Gonda M., Yong N., Rasheed S. et al. Abstr. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1982, p. 87.

71. Graf Т., Beng H. Avian leukemia viruses. Interaction with their target cells in vivo and in vitro. Biochim. Biophys. Acta, 1978, v. 516, p. 269-299.

72. Graham F.L., Van der Ebb A.J. Transformation of rat cells by DNA of human adenovirus type 5» Virology, 1973» v. 5^» p. 536-539.

73. Groffen J., Shibuya M., Stephenson I. Abstr. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1982, p. 103.

74. Grunwald D.J., Dale В., Dudley et al. Loss of viral gene expression and retension of tumorigenicity by Abelson Lymphoma cells. J. Virology, 1982, v. 43, p. 92-103.

75. Guntaka R., Misialis A. Cloning of avian tumor virus DNA fragments in plasmid pBR322: evidence for efficient transcription in E. coli from a virus-coded promoter. Gene, 1980, v. 12, p. 113-121.

76. Hanafusa H., Halpern C., Buehhagen D. et al. Recovery of avian sarcoma virus from tumors induced by transformation-defective mutants. J. Exp. Med., 1977, v. 146, p.1735-1747.

77. Hanafusa Т., Wang L.-H., Anderson S.M. et al. Characterization of the transforming gene of Pujinami sarcoma virus. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v. 77, p. 3009-3013.

78. Hayman M. Transforming proteins of avian retroviruses. -J. Gen. Virol.,1981, v. 52, p. 1-14.

79. Hayman M., Kitchener G., Graf T. Cells transformed by avian myelocytomatosis virus strain СМИ contain a 90K gag-related protein. Virology, 1979, v. 98, p. 191-199.

80. Hayman M.J., Royer-Pokora В., Graf T. Defectiveness of avian erythroblastosis virus: synthesis of a 75K gag-related protein. Virology, 1979, v. 92, p. 31-45.

81. Hizi A., Wundecli W., Joklik W.K. Purification and partial characterization of a protein kinase from the Praque-S strain of Rous sarcoma virus. Virology, 1979, v. 93, p.146-158.

82. Hayward W.S., Neel B.G., Fang J. et al. Modern Trends in Human Leukemia IV. Berlin, Springer Verl., 1981, S.439-443.

83. Huebner R., Todaro G. Oncogenes of RNA tumour viruses as determinants of cancer. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1969» v. 64, p. 1087-1094.

84. Kahn P., Nakamura K., Skin S. et al. Tumorigenicity of partial transformation mutants of Rous sarcoma virus. J. Virology, 1982, v. 42, p. 602-611.

85. Eawai S., Duesberg P.H., Hanafusa H. Transformation-defective mutants of Rous sarcoma virus with src gene deletions of varying length. J. Virology, 1977, v. 24, p. 910-916.

86. Kawai S., Yoshida M., Segawa K. et al. Characterization of Y73, an avian sarcoma virus: a unique transforming gene and its product, a phosphopolyprotein with protein kinase activity. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v. 77, p. 61996203.

87. Kitamura N., Kitamura A. Avian sarcoma virus Y73 genome sequence and structural similarity of its transforming gene product to that of Rous sarcoma virus. Nature, 1982,v. 297, p. 205-208.

88. Klemphauer K.-H., Gonda T.J., Bishop J.M. Abstr. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1982, p. 19.

89. Krontiris T.G., Cooper G.M. Transforming activity in human tumor DNAs. Eroc. Natl. Acad. Sci. USA, 1981, v.78,p. 1181-1184.

90. Kung H.T., Fung J.K., Crittenden L.C. et al. Modern Trends in Human Leukemia IV. Berlin, Springer Verlag, 1981, S, 445451.

91. Lai M.M., Neil J.C., Vogt P. Cell-free translation of avian erythroblastosis virus RNA yields two specific and distinct proteins with molecular weights of 75.000 and 40.000. -Virology, 1980, v. 100, p. 475-483.

92. Lane M.A., Sainten A., Cooper G.M. Activation of related transforming genes in mouse and human mammary carcinomas.-Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1981, v. 78, p. 5185-5189.

93. Lane M.A., Sainten A., Cooper G.M. Stage-specific transforming genes of human and mouse B- and T-lymphocyte neoplasms. Cell, 1982, v. 28, p. 873-880.

94. Lee W.H., Bister K., Parsson A. et al. Fujinami sarcoma virus: an avian RNA tumor virus with a unique transforming gene. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 198О, v. 77, p.2018-2022.

95. Lee W.H., Bister K., Moscovici C. et al. Temperature-sensitive mutants of Fuji nam! sarcoma virus: tumorigenicity and reversible phosphorylation of the transforming p140 protein. J. Virology, 1981, v. 38, p. 1064-1076.

96. Lee W.H., Nunn M., Duesberg P. Src genes of ten Rous sarcoma virus strains, including two reportedly, transduced from the cell, are completely alletic; putative markers oftransduction are not detected. J. Virology, 1981» v.'39» p. 758-776.

97. Li I., Magarian C., Staimrer E. Abstr. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1982, p. 21.

98. Maness P., Engereser H., Greenberg M. et al. Characterization of protein kinase activity of avian sarcoma virus src gene product. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1979, v.76,p.5028-5032.

99. Martin G.S. Rous sarcoma virus: a function required for the maintenance of the transformed state. Nature, 1970, v.227, p. 1021-1023.

100. Mandel M., Higa A. Calcium dependent bacteriophage DNA infection. J. Mol. Biol., 1970, v.53, P. 154.

101. McDonough S., Larsen S., Brocley E. et al. A transmissible feline fibrosarcoma of viral origin. Cancer Res., 1971, v. 31, P. 953-956.

102. Murray M.J., Shilo В., Shih C. et al. Three different human tumor cell lines contain different oncogenes. Cell, 1981, v. 25, p. 355-361.

103. Musckel R., Khoury G. et al. The human c-ras oncogene a muta ion in normal and neoplastic tissue from the same patient. Science, 1983, v. 219, p. 853-856.

104. Neil J.C., Breitman M., Vogt P. Characterization of a 105.000 molecular weight gag-related phosphoprotein from cells transformed by the defective avian sarcoma virus PRCII. Virology, 1981, v. 108, p. 98-110.

105. Owada M., Moelling K. Temperature-sensitive kinase activity associated with various mutants of avian sarcoma viruses which are temperature sensitive for transformation. Virology, 1980, v. 101, p. 157-168.- 105

106. Parada L.F., Tabin C.J., Shih C. et al. Human EJ bladder carcinoma oncogene is homologue of Harvey sarcoma virus ras gene. Nature, 1982, v. 297, p. 474-478.

107. Parke R.C., Varmus H.E., Bishop J.M. Abstr. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1982, p. 49.

108. Patchinsky Т., Sefton B. Evidence that there exist four classes of ENA tumor viruses which encode proteins with associated tyrosine protein kinase activities. J. Virology, 1981, v. 39, p. 104-114.

109. Pawson T., Guyden J., Kung T.-H. et al. A strain of Fuji-nami sarcoma virus which is temperature-sensitive in protein phosphorylation and cellular transformation. Cell, 1980, v. 22, p. 767-775.

110. Pawson Т., Kung Т.Н., Martin S. Structure and phosphorylation of the Fujinami sarcoma virus gene product. J. Virology, 1981, v. 40, p. 665-672.

111. Perbal В., Baluda M. Avian myeloblastosis virus transforming gene is related to unique chicken DNA regions separated by at least intervening sequence. J. Virology, 1982, v. 41, p. 250-257.

112. Perucho M., Goldfarb M., Shimizu X. et al. Human-tumor-derived cell lines contain common and different transforming genes. Cell, 1981, v. 27, p. 467-476.

113. Porzig K., Barbacid M., Aaronson S. Biological properties and translational products of three independent isolates of feline sarcoma virus. Virology, 1979, v.92, p.91-107.

114. Pulciani S., Santos E., Laurer A.V. et al. Oncogenes in human tumor cell lines: molecular cloning of a transforming gene from human bladder carcinoma cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, v. 79, p. 2845-2849.- 106

115. Purchio A.F., Erikson E., Brugge J.S. et al. Identification of a polypeptide encoded by the avian sarcoma virus src gene. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1978, v. 75, p.1567-1571.

116. Ramsay G., Hayman M.J. Analysis of cells transformed by defective leukemia virus 0K10: production of noninfectious particles and synthesis of Pr and an additional 200.000 Dalton protein. Virology, 1980, v. 106, p.71-81.

117. Rattenmier C.W., Anderson S.M., Riemen M. et al. Gag-related polypeptides endoded by replication-defective avian oncoviruses. J. Virology, 1979, v. 32, p. 74-9-761.

118. Reinolds F.U., Van der Ven W., Stephenson J.R. Abelson murine leukemia virus transformation-defective mutants with impaired P 120-associated protein kinase activity. J. Virology, 1980, v. 36, p. 374-386.

119. Rigby P., Dieckmann M., Rhodes C., Berg P. Labeling deoxyribonucleic acid to high specific activity in vitro by nick translation with DNA polymerase I. J. Mol. Biol., 1977, v. 113, p. 237-251.

120. Robins Т., Bisterk K., Garon C. et al. Structural relationship between a normal chicken DNA locus and the transforming gene of the avian acute leukemia virus MC29. J. Virology, 1982, v. 41, p. 635-642,

121. Roussel M., Saule S., Lagron C. et al. Three new types of viral oncogene of cellular origin specific for haematopoietic cell transformation. Nature, 1979, v. 281, p.452-455.

122. Rosenberg N., Witte 0. Abelson murine leukemia virus mutants with alterations in the virus-specific P120 molecule. J. Virology, 1980, v. 33, p. 340-348.

123. Rosok M., Watson K. Fractionation of two protein kinases- 107

124. Saule S., Koll J., Leprince D. et al. Abstr. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1982, p. 142.

125. Saule S., Possel H., Lagron C. Characterization of the oncogene (erb) of avian erythroblastosis virus and its cellular progenitor. J. Virology, 1981, v. 38, p.409-419.

126. Saule S., Sergeant A., Torpiek G. , Raes М.Б. et al. Sub-genomic mRNA in OK 10 defective leukemia virus-transformed cells. J. Virology, 1982, v. 42, p. 71-82.

127. Scolnick E.M., Pargeorge A.G., Shik T. Guanine nucleotide-binding activity as an assay for src protein of rat derived murine sarcoma viruses. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1979» v. 76, p. 5355-5359.

128. Scolnick E.M., Parks E. Harvey sarcoma virus: a second murine type С sarcoma virus with rat genetic information. -J. Virology, 1974, v. 13, p. 1211-1219.

129. Sefton B.M., Beemon K., Hunter T. Comparison of the expression of the src gene of Rous sarcoma virus in vitro andin vivo. J. Virology, 1978, v. 28, p. 957-971.

130. Sefton B.M., Hunter Т., Beemon K. Product of in vitro translation of the Rous sarcoma virus src gene has protein kinase activity. J. Virology, 1979, v. 30, p. 311-318.

131. Sefton В., Hunter Т., Beemon E. Temperature-sensitive transformation by Rous sarcoma virus and temperature-sensitive protein kinase activity. J. Virology, 1980, v. 33, p. 220-239.

132. Sefton В., Hunter Т., Beemon K. Evidence that the phosphorylation of tyrosine is essential for cellular transformation by Rous sarcoma virus. Cell, 1980, v. 20, p. 807-816.

133. Sefton В., Patchinsky Т., Berdot C. et al. Phosphorylation and metabolism of the transforming protein of the Rous

134. Shalloway D., Zelenetz A.D., Cooper G.H. Abstr. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1981, p. 51.

135. Sherr C., Fedele L. et al. Molecular cloning of Snyder-Theilen feline leukemia and sarcoma viruses: comparative studies of feline sarcoma virus with its natural helper virus and with Moloney murine sarcoma virus. J. Virology, 1980, v. 34, p. 200-212.

136. Shibuya M., Hanafusa V. Abstr. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1982, p. 17.

137. Shibuya M., Hanafusa 7., Stephenson J.R. Homology exists among the transforming sequences of avian and feline sarcoma viruses. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, I98O, v.77,p. 6536-6540.

138. Shibuya M., Hanafusa V., Balduzzi P.C. Cellular sequences related to three new one genes of avian sarcoma virus (fps, yes and ras) and their expression in normal and transformed cells. J. Virology, 1982, v. 42, p. 143-152.

139. Shibuya M., Wang L.-V., Hanafusa U. Molecular cloning of the Fujinami sarcoma virus genome and its comparison with sequences of other related transforming viruses. J. Virology, 1982, v. 42, p. 1007-1016.

140. Shields A., Goff S., Paskind M. et al. Structure of the Abelson murine leukemia virus genome. Cell, 1979, v. 18, p. 955-962.

141. Shih T.J., Weeks M.O., Young H.A. et al. Identification of a sarcoma virus-coded phosphoprotein in nonproducer cells transformed by Kirsten or Harvey murine sarcoma virus. -Virology, 1979, v. 96, p. 64-79.

142. Shih C., Shilo В., Goldfarb M.P. et al. Passage of phenotypes of chemically transformed cells via transfection of DNA and chromatin. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1979, v. 76, p. 5714-5718.

143. Shih C., Padhy L.C., Murray M. et al. Transforming genes of carcinomas and neuroblastomas introduced into mouse fibroblasts. Nature, 1981, v. 290, p. 261-264.

144. Shih Т., Weeks M., Gruss P. et al. Identification of a precursor in the biosynthesis of the p21 transforming protein of Harvey murine sarcoma virus. J. Virology, 1982, v.42, p. 253-261.

145. Southern E.M.- Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electrophoresis. J. Mol. Biol., 4975, v. 98, p. 503-517.

146. Souza L., Komaromy M., Baluda M. Identification of a pro-viral genome associated with avian myeloblastic leukemia. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v. 77, p. 3004-3008.

147. Spector D,, Varmus H., Bishop J. Nucleotide sequences related to the transforming gene of avian sarcoma virus are present in DNA of uninfected vertebrates. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1978, v. 75, p. 4101-4106.

148. Stehelin D., Varmus H., Bishop J.M. Purification of DNA complementary to nucleotide sequences required for neoplastic transformation of fibroblasts by avian sarcomaviruses. J. Mol. Biol., 1976, v. 101, p. 349-365.

149. Stehelin D., Varmus H., Bishop J. et al. DNA related to the transforming gene(s) of avian sarcoma viruses is present in normal avian DNA. Nature, 1976, v. 260, p.170-173.

150. Takeda Т., Hanafusa U. Abstr. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1982, p. 14.

151. Temin H. Function of the retrovirus long terminal repeat. Cell, 1982, v. 28, p. 3-5»

152. Thomas P.S.; Hybridization of denatured ENA and small DNA fragments transferred to nitrocellulose. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v.77, p. 5201-5204.

153. Tooze J. The Molecular Biology of Tumor Viruses. New York, Pergamon Press, 1973, p. 3-378.

154. Tsichlis P.N., Coffin J.M. Eecombinants between endogenous and exogenous avian tumor viruses: role of the С region and other portions of the genome in the control of replication and transformation. J. Virology, 1980,v33, p.238-249.

155. Van Beveren C., Galleshard J., Jonas V. et al. Nucleotide sequence and formation of the transforming gene of a mouse sarcoma virus. Nature, 1981, v. 289, P« 258-262.

156. Van йе Ven W., Reynolds F.V., S The nonstructural components of polyproteins encoded by replication-defective mammaliam transforming retroviruses are phospho-rylated and have associated protein kinase activity. -Virology, 1980, v. 101, p. 185-197.

157. Varmus H. Form and function of retroviral proviruses. -Science, 1982, v. 216, p. 812-820.

158. Vennstrom В., Fanshier L., Moscovici 0., Bishop J.M. Molecular cloning of the avian erythroblastosis virus genome and recovery of oncogenic virus by transfection of chicken cells. J. Virology, 1980, v. 36, p. 575-585.

159. Vennstrom В., Sheiness P., Zabielski J. et al. Isolation and characterization of c-myc, a cellular homolog of the oncogene (v-myc) of avian myeloblastosis virus strain 29. -J. Virology, 1982, v. 42, p. 773-779.

160. Vigne В., Britman M., Moscovici C. et al. Restitution of fibroblast-transforming ability in src deletion mutants of avian sarcoma virus during animal passage. Virology, 1979, v. 93, p. 413-426.

161. Vigne R., Neil M., Breitman M.L. et al. Recovered src genes are polymorphic and contain host markers. Virology, 1980, v. 105, p. 71-85.

162. Vogt P., Breitman M., Neil J. Proc. ICN-UCLA Symp. Keyston Colo, 1980, New York e.a., 198О, p. 515-526.

163. Wang L.-H., Feldman R., Shibuya M. et al. Genetic structure, transforming sequence, and gene product of avian sarcoma virus URI. J. Virology, 1981, v. 40, p. 258-276.

164. Wang L.-H., Duesberg P.N., Kawai S. et al. Location of envelope-specific and sarcoma-specific oligonucleotides on RNA of Schmidt-Ruppin Rous sarcoma virus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1976, v. 73, p. 447-451.

165. Wang L.-H., Zeldman R., Shibuya M. et al. Abstr. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1981, p. 74.

166. Wang L.-H., Halpern C.C., Nadel M. et al. Recombination between viral and cellular sequences generates transforming sarcoma virus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1978, v. 75» p. 5812-5816.

167. Wang L.-H., Hanafusa H., Notter M. et al. Genetic structure and transforming sequence of avian sarcoma virus UR2. J. Virology, 1981, v. 41, p. 833-841.

168. Wei 0., Lowy D., Scolnik E. Mapping of transforming region of the Harvey murine sarcoma virus genome by using inser-tiob-deletion mutants constructed in vitro. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 198О, v. 77, p. 4674-4678.

169. Weinberg R. Integrated genomes of animal viruses. Ann. Rev. Biochem., 1980, v. 49, p. 197-226.

170. Weiss S.R., Varmus H.E., Bishop J.M. Cell free translation of purified avian sarcoma virus src mRNA. Virology, 1981, v. 110, p. 476-478.

171. Wilhelmsenk K., Chen J., Temin H. Abstr. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1982, p. 90.

172. Witte 0., Dasgupta A., Baltimore D. Abelson murine leukemia virus protein is phosphorylated in vitro to form phospho-tyrosine. Nature, 1980, v. 283, p. 826-830.

173. Witte 0., PonticeHi A., Gifford A. et al. Phosphorylation of the Abelson murine leukemia virus transforming protein.-J. Virology, 1981, v. 39, p. 870-878.

174. Wong Т., Lai T. Avian reticuloendotheliosis virus contains a new class of oncogene of turkey origin. Virology, 1981, v. 111, p. 289-293.

175. Wong-Staal F., Dalla-Favera E., Eranchini G., Gelmanu Б., Gallo E. Three distinct genes in human ША related to the transforming genes of mammalian sarcoma retroviruses. -Science, 1981, v. 213, p. 226-228.

176. Wyke J.S., Beamont J.F. Genetic recombination ia Rous sarcoma virus: the genesis of recombinants and lack of evidence for linkage between pol, env, and src genes in three factor crosses. J. Gen. Virol., 1977» v. 43,p. 349-364.

177. Yoshida M., Kawai S., Toyoshima K. Uninfected avian cells contain structurally unrelated progenitors of viral sarcoma genes. Nature, 1980, v. 287, p. 653-656.

178. Yoshida M., Kawai S., Toyoshima J. Genome structure of avian sarcoma virus Y73 aud unique sequence coding for polyprotein p90. J. Virology, 1981, v. 38, p. 430-437.

179. Yoshida M., Kitamura N., Toyoshima K. et al. Abstr. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1982, p. 16.

180. Young V.A., Rasheed S., Sowder R. et al. Rat sarcoma virus: further analysis of individual viral isolates and the gene product. J. Virology, 1981, v. 38, p. 286-293.