Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Активность Ca2+ /Mg2+-зависимых эндонуклеаз в эндометрии

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Колобова, Елена Александровна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Концепция апоптоза, морфологическая характеристика программированной клеточной гибели

1.2. Этапы реализации апоптоза

1.2.1. Фаза индукции апоптоза

1.2.2. Эффекторная фаза апоптоза

1.2.3. Фаза деградации клетки при апоптозе

1.2.3.1. Структурные изменения хроматина и фрагментация ДНК при апоптозе

1.2.3.2. Изменения клеточной мембраны и фагоцитоз

1.3. Эндогенные регуляторы апоптоза

1.3.1. Эндогенные ингибиторы апоптоза

1.3.2. Эндогенные активаторы апоптоза

1.3.3. Взаимодействие активаторов и ингибиторов апоптоза

1.4. Роль апоптоза в многоклеточном организме

1.4.1. Апоптоз в патогенезе различных заболеваний

1.4.2. Роль апоптоза в атрофии гормонзависимых тканей

1.4.3. Апоптоз и канцерогенез в эндометрии

1.5. Методы выявления апоптоза

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и реактивы

2.2. Характеристика клинического материала

2.2.1. Выделение мононуклеарных клеток периферической крови человека

2.2.2. Подготовка операционного материала

2.3. Методы исследования

2.3.1. Определение активности СМЭ

2.3.2. Приготовление срезов тканей и их окрашивание гематоксилин-эозином

2.3.3. Выявление клеток с фрагментированной ДНК in situ (TdT-mediated dUTP-biotin nick end-labeling, TUNEL)

2.3.4. Статистическая обработка результатов

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Модификация метода определения активности Ca2+/Mg2+-зависимых эдонуклеаз

3.2. Оценка активности Са /Mg -зависимых эдонуклеаз в различных тканях

3.3. Оценка активности эндонуклеаз в неизмененном эндометрии в различные фазы менструального цикла

3.4. Оценка активности эндонуклеаз при различных гиперпластических и неопластических состояниях эндометрия

3.5. Активность СМЭ в ткани аденокарциномы эндометрия

3.6. Оценка активности СМЭ в мононуклеарных клетках периферической крови

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Активность Ca2+ /Mg2+-зависимых эндонуклеаз в эндометрии"

Апоптоз представляет собой нормальный физиологический процесс гибели, направленный на удаление генетически дефектных клеток, а также на поддержание постоянства численности и обеспечение правильного соотношения клеток различных типов. Апоптоз является защитным механизмом от нерегулируемого клеточного деления.

Баланс процессов пролиферации и гибели клеток имеет особое значение в поддержании гомеостаза в активно пролиферирующих тканях. Нарушение апоптоза является важным звеном в патогенезе многих так называемых пролиферативных заболеваний. Показано, что опухолевые процессы в различных тканях сопровождаются не только увеличением скорости пролиферации клеток, но и снижением их способности к апоптозу. Наиболее изученными заболеваниями, при которых происходит ингибирование апоптоза, являются лейкозы и лимфомы, развитие которых сопряжено с изменением экспрессии регуляторов апоптоза, в частности, с гиперэкспрессией ингибитора апоптоза Bcl-2 [Cleary et al., 1986; Korsmeyer et al., 1992].

В то же время данные литературы о нарушениях процесса апоптоза и его роли в патогенезе пролиферативных заболеваний эндометрия очень противоречивы. Выбор эндометрия в качестве объекта исследования обусловлен тем, что в течение менструального цикла в этой ткани происходят последовательные процессы пролиферации, дифференциации и элиминации клеток, в связи с чем эндометрий представляет собой хорошую модель для изучения процессов клеточной пролиферации и гибели. По данным литературы апоптоз играет ключевую роль в опосредованном гормонами циклическом отторжении клеток функционального слоя эндометрия [Gompel et al., 1994]. Несбалансированность гормональной стимуляции эндометрия в течение менструального цикла приводит к нарушению баланса пролиферации и гибели клеток и гиперпластическим изменениям эндометрия. Гиперпластические процессы в эндометрии в ряде случаев являются предвестником неопластической трансформации клеток и развития аденокарциномы. Частота перехода гиперплазии в рак колеблется от 2 до 30% [Бохман, 1989; Макаров и 5 соавт., 1993; Савельева и Серов, 1980]. Для четкого представления клеточной динамики при заболеваниях опухолевого генеза важна адекватная оценка не только процессов клеточной пролиферации и дифференцировки, но и клеточной гибели. В этой связи необходим поиск маркеров, позволяющих оценить изменения, которые происходят при переходе от нормальной пролиферации, контролируемой конкурентным процессом клеточной гибели, к неконтролируемой пролиферации, приводящей к гиперплазии и неоплазии тканей эндометрия.

Одним из главных критериев апоптоза является расщепление ДНК на олигонуклеосомные фрагменты, которые выявляются при электрофорезе в виде дискретных полос [Wyllie et al., 1984; Cohen et al., 1993]. Межнуклеосомная фрагментация ДНК осуществляется, главным образом, Са /Mg -зависимыми эндонуклеазами, локализованными в клеточном ядре [Ribeiro and Carson, 1993; Pandey et al., 1997; Khodarev and Ashwell, 1996]. Изменения активности Са2+/М£2+-зависимых эндонуклеаз отмечены при некоторых патологических процессах [Kyprianov et al., 1988; McConkey et al., 1996]. В частности, наблюдаемое при лимфопролиферативных заболеваниях значительное снижение активности ядерных Са /Mg -зависимых эндонуклеаз, считается признаком нарушения апоптоза [Соколова и соавт., 1988; Ткачева и соавт., 1990].

В этой связи представляется актуальным исследование активности

Л I ^ i ядерных Са /Mg -зависимых эндонуклеаз в эндометрии.

Цель работы: у I <2 I

Исследование активности ядерных

Са /Mg

-зависимых эндонуклеаз при физиологических и патологических состояниях эндометрия, сопровождающихся изменением баланса пролиферации и гибели клеток.

Задачи исследования:

Л I

1. Разработать метод определения активности

Са /Mg

-зависимых эндонуклеаз в эндометрии. 6

2. Исследовать зависимость активности СМЭ в эндометрии от фазы менструального цикла.

3. Определить активность Ca2+/Mg2+-3aBHCHMbix эндонуклеаз в тканях эндометрия с разной степенью выраженности гиперпластических и неопластических процессов.

4. Оценить уровень активности СМЭ в мононуклеарных клетках периферической крови в зависимости от состояния эндометрия.

Научная новизна работы:

Впервые показано, что гиперплазия ткани эндометрия сопровождается уменьшением активности СМЭ в измененных участках ткани, но не в клетках периферической крови. Активность СМЭ в ткани эндометрия при его гиперпластических и неопластических изменениях снижается в ряду: неизмененный эндометрий - гиперпластический эндометрий - аденокарцинома эндометрия.

Выявлена зависимость между уровнем активности СМЭ и степенью дифференцированности аденокарцином эндометрия. Активность Ca2+/Mg2+-зависимых эндонуклеаз снижается по мере уменьшения степени дифференцировки аденокарцином.

Практическая значимость работы:

Проведена адаптация метода количественной оценки активности Ca2+/Mg2+-3aBHCHMbix эндонуклеаз для исследования эндометрия. Показано, что снижение активности СМЭ зависит от степени выраженности патологического процесса в эндометрии. Снижение активности Ca2+/Mg2+ -зависимых эндонуклеаз, по-видимому, является маркером нарушений процесса апоптоза, приводящих к изменению баланса клеточной пролиферации и гибели в ткани эндометрия. Предложенный метод измерения уровня активности СМЭ позволяет выявить нарушения механизмов регуляции апоптоза в ткани эндометрия и оценить степень риска их малигнизации. 7

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Разработан метод определения активности СМЭ в эндометрии.

2. Активность СМЭ в эндометрии не зависит от фазы менструального цикла.

3. Снижение активности СМЭ в эндометрии коррелирует со степенью выраженности гиперпластических и неопластических процессов.

4. Уменьшение активности СМЭ в трансформированных тканях эндометрия не сопровождается изменением активности нуклеаз в клетках периферической крови. $

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Колобова, Елена Александровна

ВЫВОДЫ.

Разработан метод определения активности ядерных Ca2+/Mg2+-3aBHCHMbix эндонуклеаз в эндометрии.

В ткани эндометрия не выявлено зависимости активности Ca2+/Mg2+-3aBHCHMbix эндонуклеаз от стадии менструального цикла.

Гиперплазия эндометрия сопровождается снижением активности Ca2+/Mg2+ -зависимых эндонуклеаз. Уровень активности Ca2+/Mg2+-3aBHCHMbix эндонуклеаз в эндометрии уменьшается в ряду: неизмененный эндометрий -гиперпластический эндометрий - аденокарцинома эндометрия.

Активность Ca2+/Mg2+-3aBHCHMbix эндонуклеаз снижается по мере уменьшения степени дифференцировки аденокарцином.

Уровень активности Ca2+/Mg2+ -зависимых эндонуклеаз в периферической крови, по-видимому, не коррелирует с выраженностью гиперпластических процессов в эндометрии.

81

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Колобова, Елена Александровна, Москва

1. Бохман Я.В. (1989) Руководство по онкогинекологии. Л., 384.

2. Макаров О.В., Исаева Е.Г., Косецкий В.Н. (1993) Акушерство и гинекология. 1, 8-12.

3. Савельева Г.М. и Серов В.Н. (1980) Предрак эндометрия. Москва. Медицина. 85.

4. Соколова И.А., Ходарев Н.Н., Александрова С.С., Вотрин И.И. (1988) Выделение и анализ Ca/Mg-зависимой эндонуклеазы из клеточных ядер спленоцитов человека. Биохимия 53, 1011-1014.

5. Ткачева Т.И., Кирзон С.С., Ходарев Н.Н., Вотрин И.И. Изменение Са, Mg-зависимого эндонуклеолиза ДНК в изолированных ядрах лимфоцитов человека при лимфопролиферативных заболеваниях. Бюллетень Эксперим. Биол. Мед. 1990, 109, 543-546.

6. Ярилин А.А. (1998) Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме. Патол. физиол. эксп. терап. 2, 38-48.

7. Aiuti A., Cicchini С., Bernardini S., Fedele G., Amicone L., Fantoni A., Tripodi M. (1998) Hematopoietic support and cytokine expression of murine-stable hepatocyte cell lines (MMN). Hepatology 28,1645-1654.

8. Agutter P.S. (1972) The isolation of the envelopes of rat liver nuclei. Biochim. Biophys. Acta 255, 397-401.

9. Arends M.J., Morris R.J., Wyllie A.H. (1990) Apoptosis: the role of endonuclease. Am. J. Pathol. 136, 593-608.

10. Ashkenazi A. and Dixit V.M. (1999) Apoptotic control by death and decoy receptors. Curr Cell Biol. 11, 255-260.

11. Ashkenazi A. and Dixit V.M. (1998) Death receptors: signaling and modulation. Science 281, 1305-1308.

12. Bahner M., Rausch U., Goebel H.W., Polzar B. and Mannerz H.G. (1993) Stromal and epithelial cells from rat ventral prostate during androgen deprivation and estrogen treatment-regulation of transcription. Exp. Clin. Endocrin. 101, 78-86.82

13. Barry M.A. and Eastman A. (1993) Identification of deo^yribonuclease П as an endonuclease involved in apoptosis, Arch. Biochem. Biophys. 300, 440-450.

14. Baxter G.D., Smith P.J., Lavin M.F. (1989) Molecular changes associated with induction of cell death in a human T-cell leukaemia line: putative nuclease indentified as histons. Biochem. Biophys. Res. Communs. 162,30-37.

15. Be R., Chertsen B.T., Vintemyr O.K. (1991) The protein phosphatase inhibitor okadaic acid induces morphological chages typical of apoptosis in mammalian cell. Exp. Cell Res. 195,237-242.

16. Bellamy C.O.C., Malcomson R.D.J., Harrison D.J., Wyllie A.H. (1995) Cell death in health and disease: the biology and regulation of apoptosis. Semin. Cancer Biol. 6, 3.

17. Berchuck A. and Boyd J. (1995) Molekular basis of endometrial cancer. Cancer 76, 2034-2040.

18. Boise L.H., Gonzalez-Garcia M., Postema C.E., Ding L., Lindsten Т., Turka L.A., Мао X., Nunez G., Thompson C.B. (1993) bcl-x, a bcl-2-related gene that functions as a dominant regulator of apoptotic cell death. Cell 74, 597-608.

19. Borner C.D., Oldenburg N.B.E., Cidowski J.A. (1995) The role of DNA fragmentation in apoptosis. Trends Cell Biol. 5, 21-26.

20. Boyum A. (1968) Separetion of leucocytes from peripheal blood and bone marrow. Scand. J. Clin. Lab. 21, 77-82.

21. Brawerman G. (1987) Determinants of messendger RNA stability. Cell 48. 5-6.

22. Bursch W.C., PaffB., Putz G., Schulte-Hermann R. (1990) Determination of the lenght of the histological stages of apoptosis in normal liver and in altered hepatic foci of rats. Carcinogenesis 11, 847.

23. Cain K., Inayat-Hussain S.H., Wolfe J.T., Cohen G.M. (1994) DNA fragmentation into 200-250 and/or 30-50 kilobase pair fragments in rat liver83nuclei is stimulated by Mg2+ alone and Ca2+/ Mg2+ but not by Ca2+ alone. FEBS Letters 349, 385-391.

24. Chan W.K., Mole M.M., Levison D.A., Ball R.Y., Lu Q.L., Patel K., Hanby A.M. (1995) Nuclear and cytoplasmic bcl-2 expression in endometrial hyperplasia and adenocarcinoma. J. ofpathol. 177, 241-246.

25. Chiou S.K., Rao L., White E. (1994) Bcl-2 block p53-dependent apoptosis. Mol. Cell Biol. 14, 2556-2563.

26. Cleary M.L., Smith S.D., Sklar J. (1986) Cloning and structural analysis of cDNAs for bcl-2 and hybrid bcl-2. Immunoglobulin transcript resulting from the t (14;18) translocation. Cell 47,19-28.

27. Clifford S.L., Kaminetsky C.P., Cirisano F.D., Dodge R., Soper J.T., Clarke-Pearson D.L., Berchuck A. (1997) Racial disparity in overexpression of the p53 tumor supressor gene in stage I endometrial cancer. Am. J. Obstet. Gynecol. 176, 230-232.

28. Coates P.J., Hales S.A., Hall P.A. (1996) The association between ceil proliferation and apoptosis: studies using the cell cycle-associated proteins Ki67 and DNA polymerase alpha. J. of Pathol. 178,71-77.

29. Cohen G.M. (1997) Caspases: the executioners of apoptosis. Biochem. J. 326, 1-16.

30. Cohen G.M., Sun X.M., Fearnhead H., MacFarlane M., Brown D.G., Snowden R.T., Dinsdale D. (1994) Formation of large molecular weight fragments of DNA is a key committed step of apoptosis in thymocytes. J. Immunol. 153, 507516.

31. Cohen J. (1993) Apoptosis. Immunol. Today 14, 126.

32. Darzynkiewicz Z., Bruno S., Del Bino G., Gorczyca W., Hotz M., Lassota P., Traganos F. (1992) Features of apoptotic cells measured by flow cytometry. Cytometry 13, 795-808.

33. Darzynkiewicz Z., Li X., Gong J. (1994) Assay of Cell Viability: Discrimination of Cells Dying by Apoptosis. In book «Methods in cell biology», 41,15-38.84

34. Deligdisch L. and Cohen C.J. (1985) Histologic correlates and virulence implications of endometrial carcinoma associated with adenomatous hyperplasia. Cancer 56,1452-1455.

35. Duvall E., Wyllie A.H., Morris R.G. (1985) Macrophage recognition of cells undergoing programmed cell death (apoptosis). Immunology 56, 351-358.

36. Earnshaw W.C. (1995a) Apoptosis: lessons from in vitro systems. Trends Cell Biol. 5,217-220.

37. Earnshaw W.C. (1995b) Nuclear changes in apoptosis. Curr. Opin. Cell Biol. 7, 337-343.

38. Eissa S., Saada M.A., Sharkawy Т.Е. (1997) Flow cytometric cell cycle kinetics and quantitative measurement of c-erbB-2 and mutant p53 proteins in normal, hyperplastic, and malignant endometrial biopsies. Clinical Biochemistry 30,209214.

39. Enari M., Sakahira H., Yokoyama H., Okawa K., Iwamatsu A., Nagata S. (1998) A caspase-activated DNase that degrades DNA during apoptosis, and its inyibitor ICAD. Nature 391,43.

40. Evan G.I., Wyllie A.H., Gilbert C.S., Littlewood T.D., Land H., Brooks M., Waters C.M., Penn L.Z., Hancock D.C. (1992) Induction of apoptosis in fibroblast by c-myc protein. Cell 69,119-128.

41. Fadok V.A., Voelker D.R., Campbell P.A., Cohen J.J., Bratton D.L., Henson P.M. (1992) Exposure of phosphatidylserin on the surfase of apoptotic lymphocytes triggers specific recognition and removal by macrophages. J. Immunol. 148,2207-2216.

42. Gaido and Cidlowski J. A. (1991) Identification, purification, and characterization of a calcium-dependent endonuclease (NUC-18) from apoptotic rat thymocytes. NUC-18 is not histone H2B. Journal of Biological Chemistry 266, 18580-18585.

43. Garcia I., Martinou I., Tsujimoto Y., Martinou J.C. (1992) Prevention of programmed cell death of symphathetic neurons by the bcl-2 proto-oncogene. Science 258, 302-304.85

44. Giannakis С., Forbes I.J., Zalewski P.D. (1991) Ca2+/Mg2+-dependent nuclease: tissue distribution, relationship to inter-nucleosomal DNA fragmentation and inhibition by Zn2+. Biochem Biophys. Res. Commun., 181,915-920.

45. Golstein P., Marguet D., Depraetere V. (1995) Homology between reaper and the cell-death domains ofFas and TNFR1. Cell 81, 185-186.

46. Gompel A., Sabourin J.C., Martin A., Yaneva H., Audouin J., Decroix Y., Poitout P. (1994) Bcl-2 expression in normal endometrium during the menstrual cycle. Amer. J. Pathol. 144,1195-1201.

47. Gorczyca W., Gong J., Darzynkiewicz Z. (1993) Detection of DNA strand breaks in individual apoptotic cell by the in situ terminal deoxynucleotidyl transferase and nick translation assays. Cancer Research 53, 1945-1951.

48. Green D.R. and Reed J.C. (1998) Mitochondria and apoptosis. Science 281, 1309-1312.

49. Green D.R., Zheng H., Shi Y. (1992) Antisense oligodeoxy-nucleotides as probes of T-lymphocyte gene function. Ann. N. Y. Acad. Sci. 660, 193-203.

50. Griffith T.S., Brunner Т., Fletcher S.M., Green D.R., Ferguson T.A. (1995) Fas ligand-induced apoptosis as a mechanism of immune privilege. Science 270, 1189-1192.

51. Hale A.J., Smith C.A., Sutherland L.C., Stoneman V.E.A., Longthorne V.L., Culhane A.C., Williams G.T. (1996) Apoptosis: molecular regulation of cell death. Eur. J. Biochem. 236,1-26.

52. Hannun Y.A. and Obeid L.M. (1995) Ceramide: an intracellular signal for apoptosis. Trends Biochem. Sci. 20, 73-77.

53. Hockenbery D.M., Oltvai Z.N., Yin X.M., MillimanC.L., Korsmeyer S.J. (1993) Bcl-2 functions in an antioxidant pathway to prevent apoptosis. Cell 75,241-251.

54. Hoffman B. and Liebermann D.A. (1994) Molecular controls of apoptosis: differentiation/growth arrest primary response genes, protooncogenes, and tumor supressor genes as positive and negative modulators. Oncogene 9, 1807-1812.

55. Hollstein M., Sidransky D., Vogelstein В., Harris C.C. (1991) p53 mutations in human cancer. Science 253, 49-53.86

56. Homburg C.H.E., de Haas M., von dem Borne A.E.G.K., Verhoeven A.J., Reutelingssperger C.P.M., Roos D. (1995) Human neurophils lose their surfase FcyRIII and accquire Annexin V binding sites during apoptosis in vitro. Blood 85,532-540.

57. Hopwood D. and Levison D.A. (1976) Atrophy and apoptosis in the cyclial human endometrium. J. Pathol. 119, 159-166.

58. Hu S., Snipas S.J., Vincenz C., Salvesen G., Dixit V.M. (1998) Caspase-14 is a novel developmentally regulated protease. J. Biol. Chem. 273,29648-29653.

59. Irwin J.C., Utian W.H., Eckert R.L. (1991) Sex steroid and growth factors differentially regulate the growth and differentiation of cultured human endometrial stromal cells. Endocrinology 129.2385-2392.

60. Ito K., Watanabe K., Nasim S., Sasano H., Sato S., Yajima A., Silverberg S., Garrett C.T. (1994) Prognostic significance ofp53 overexpression in endometrial cancer. Cancer Res. 54,4667-4670.

61. Jarvis W.D., Kolesnick R.N., Fornari F.A., Traylor R.S., Gewirtz D.A., Grant S. (1994) Induction of apoptotic DNA damage and cell death by activation of the sphingomielin pathway. Proc. Natl Acad. Sci. USA 91, 73-77.

62. Jones R.K., Searle R.F., Bulmer J.N. (1998) Apoptosis and bcl-2 expression in normal human endometrium, endometriosis and adenomyosis. Human Reproduction 13, 3496-3502.

63. Kastan M.B., Onyekwere O., Sidransky D., Vogelstein В., Craig R.W. (1991) Participation of p53 protein in the cellular response to DNA damage. Cancer Res. 51,6304-6311.

64. Kerr J.F.R., Wyllie A.H., Currie A.R. (1972) Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics. Br. J. Cancer 26, 239.87

65. Khodarev N.N. and Ashwell J.D. (1996) An indusible lymphocyte nuclear Ca2+/Mg2+-dependent endonuclease associated with apoptosis. Immunology 156, 922-931.

66. Klingholtz R. and Stratling W.H. (1981) Digestion of chromatin to Hl-depleted 166 base pair particles by Ca2+/Mg2+-dependent endonuclease. FEBS Lett. 139, 105-110.

67. Kohler M.F., Berchuck A., Davidoff A.M., Humphrey P.A., Dodge R.K., Iglehart J.D., Soper J.T., Clarke-Pearson D.L., Bast R.C. Jr., Marks J.R. (1992) Overexpression and mutation of p53 in endometrial carcinoma. Cancer Res. 52, 1622-1627.

68. Kohler M.F., Nishii H., Humphrey PA., Saski H., Marks J., Bast R., Clarke-Pearson D.L., Boyd J., Berchuck A. (1993) Mutation of the p53 tumor-supressor gene is not a feature of endometrial hyperplasias. Am. J. Obstet. Gynec. 169, 690-694.

69. Konlberger P., Gitsch G., Loesch A., Tempfer C., Kaider A., Reithaller A., Kainz C., Breitenecker G. (1996) p53 protein overexpression in early stage endometrial cancer. Gynecologic oncology 62, 213-217.

70. Konno R., Igarashi Т., Okamoto S., Sato S., Moriya Т., Sasano H., Yajima A. (1999) Apoptosis in human endometrium mediated by perforin and granzyme В of NK cells and cytotoxic T lymphocytes. J. Exp. Med. 187,149-155.

71. Korsmeyer SJ. (1992) Bcl-2 initiates a new category of oncogenes: regulators of cell death. Blood 80, 879-886.

72. Krajewski S., Krejewska M., Shabaik A., Miyashita Т., Wang H.G., Reed J.C. (1994) Immunohistochemical determination of in vivo distribution of Вах, a dominant inhibitor of Bcl-2. Am. J. Pathol. 145, 1323-1336.

73. Kumar S. and Harvey N.L. (1995) Role of multiple cellular proteases in the execution of programmed cell death. FEBS Lett. 375 (3), 169-173.

74. Kyprianou N., English H., Isaacs J.T. (1988) Activation of a Ca2+Mg2+dependent endonuclease as an early event in castration-induced prostatic cell death. Prostate 13, 103-107.

75. Lam M., Dubyak G., Chen L., Nunez G., Miesfeld R.L., Distelhorst C.W. (1994) Evidence that bcl-2 represses apoptosis by regulating eddoplasmicry Ireticulum-associated Ca fluxes. Proc. Natl Acad. Sci. USA 91, 6569-6573.

76. Lane D.P. (1992) p53, guardian of the genome. Nature 358, 15-16.

77. Le Brun D.P., Warnke R.A., Cleary M.L. (1993) Expression of bcl-2 in fetal tissues suggests a role in morphogenesis. Am. J. Pathol. 142, 743-753.

78. Leek L.D., Kaklamanis L., Pezzella F., Gatter K.C., Harris A.L. (1994) Bcl-2 in normal brest and carcinoma, association with oestrogen receptor-positive, growth factor receptor-negative tumours and in situ cancer. Br. J. Cancer 69, 135-139.

79. Lithgow Т., Driel R., Bertram J.F., Strasser A. (1994) The protein product of the oncogene bcl-2 is a component of the nuclear envelope, the endoplasmatic reticulum, and the outer mitochondria membrane. Cell Growth Differ. 5, 411417.

80. Lowe S.W., Schmitt E.M., Smith S.W., Osborne B.A., Jacks T. (1993) p53 is required for radiation-induced apoptosis in mouse thymocytes. Nature, 362, 847849.

81. Lu Q.L., Poulsom R., Wong L., et al. (1993) Bcl-2 expression in adult and embryotic non-hematopoietic tissues. J. Pathol. 169,431-437.

82. Martin S.J., O'Brein G.A., Nishioka W.K. (1995) Proteolysis of fodrin (non-erytroid spectrin) during apoptosis. J. Biol. Chem. 270, 6425-6428.

83. McConkey DJ. (1993) Cellular signalling in death. New-Horiz 1, 52-59.

84. McConkey D.J., Nicoreta P., Hartzell P. et. al. (1989) Glucocorticoids activate a suicide process in thymocites throught an elevation of cytosolic Ca2+ concentration. Arch. Biochem. Biophys. 269, 365-370.

85. McConkey D.J., Nicotera P., Orrenius S. (1994) Signaling and chromatin fragmentation in thymocyte apoptosis. Immunol. Rev. 142,343-363.

86. Miura M., Zhu H., Rotello R., Hartwieg E.A., Yuan L. (1993) Induction of apoptosis in fibroblast by IL-l(3-converting enzyme, a mammalian homolog of the C. elegans cells death gene Ced-3. Cell 75, 653-660.

87. Miyashita T. and Reed J.C. (1995) Tumor-supressor p53 is a direct transcriptional activator of the human bax gene. Cell 80,293-299.

88. Miyashita Т., Krajewski S., Rrajewska M., Wang H.G., Lin H.K., Liebermann D.A., Hoffman В., Reed J.C. (1994) Tumor-supressor p53 is a regulator of bcl-2 and bax gene-expression in vitro and in vivo. Oncogene 9,1799-1805.

89. Nagata S. and Golstein P. (1995) The Fas death factor. Science 267, 1449-1456.

90. Neamati N., Fernandez A., Wright S. Kiefer J., McConkey D.J. (1995) Degradation of lamin B1 preceds oligonucleosomal DNA fragmentation in apoptotic thymocyte nuclei. J. Immunol. 154, 3788-3795.

91. Nelipovich P., Nikonova L., Umansky S. (1988) Inhibition of poly (ADP-ribose) polymerase as a possible reason for activation of Ca/Mg dependent endonuclease in thymocytes of irradiated rats. Intern. J. Radiat. Biol. 53, 749-765.

92. Nicotera P., Zhivotovsky В., Orrenius S. (1994) Nuclear calcium transport and the role of calcium in apoptosis. Cell. Calcium 16,279-288.

93. Novack D.V. and Korsmeyer S J. (1994) Bcl-2 protein expression during murine development. Am. J. Pathol. 145, 61-73.90

94. Ojcius D.M., Zychlisky A., Zheng L.M., Young D.E. (1991) Ionophore-induced apoptosis: role of DNA fragmentation and calcium fluxex. Exp. Cell Res. 197, 43-48.

95. Oltvai Z.N., Milliman C.L., Korsmeyer S.J. (1993) Bcl-2 heterodimerized in vivo with a concerved homolog, Bax, that accelerates programmed cell death. Cell 74, 609-919.

96. Pandey S., Walker P.R., Sikorska M. (1997) Identification of a novel 97 kDa endonuclease capable of internucleosomal DNA cleavage. Biochemistry 36, 711720.

97. Peitsch M.C., Muller C., Tschopp J. (1993b) DNA fragmentation during apoptosis is caused by frequent single-strand cuts. Nucleic Acids Res. 21, 42064209.

98. Peitsch M.C., Polzar В., Stephan H., Crompton Т., MacDonald H., Mannhertz H.G., Tschopp J. (1993a) Characterization of the endogeneous deoxyribonuclease involved in nuclear DNA degradation during apoptosis (programmed cell death). EMBO J. 12,371-377.

99. Pezzella F., Turley H., Kuzu I., Tungekar M.F., Dunnill M.S., Pierce C.B., Harris A., Gatter K.C., Mason D.Y. (1993) Bcl-2 protein in non-small-sell lung carcinoma. N. Engl. J. Med. 329, 690-694.

100. Pollard J.W., Pacey J., Cheng S.V., Jordan E.G. (1987) Estrogens and cell death in murine uterine luminal epithelium. Cell Tissue Res. 249, 533-540.91

101. Polzar В., Peitsch M.C., Loos R., Tschopp J., Mannhertz H.G. (1993) Overexpression of deoxyribonuclease I (DNase I) transfected into COS sells: its distribution during apoptotic cell-death. Eur. J. Cell. Biol. 62, 397-405.

102. Preston G.A., Barrett J.C., Biermann J.A., Murphy E. (1997) Effect of alterations in calcium homeostasis on apoptosis during neoplastic progression. Cancer Res. 57, 537-542.

103. Raff M.C., Barres B.A., Burne J.F. Coles H.S., Ishizaki Y., Jacobson M.D. (1993) Programmed cell death and the control of cell survival: lessons from the nervous system. Science 262,695-700.

104. Ramachandra S. and Studzinski G.P. (1998) Morphological and biochemical criteria of apoptosis. In book «Cell Growth and Apoptosis: a practical approach», 119-143.

105. Reisman D., Elkind N.B., Roy В., Beamon J., Rotter V. (1993) c-Myc trans-activates the p53 promoter through a required down-stream CACGTG motif. Cell Growth Differ. 4, 57-65.

106. Ribeiro J.M. and Carson D.A. (1993) Ca2+/Mg2+-dependent endonuclease from human spleen: purification, properties, and role in apoptosis. Biochemistry 32, 9129-9136.

107. Rotello R.J., Lieberman R.C., Lepoff R.B., Gerschenson L.E. (1992) Characterization of uterine epithelium apoptotic cell death kinetics and regulation by progesteron and RU 486. Amer. J. Pathol. 140, 449-456.

108. Roy C., Brown D.L., Little J.E., Valentine V.K., Walker P.A., Sikorska M., Leblanc J., Chaly N. (1992) The topoisomerase II inhibitor teniposide (VM-26)92induces in unstimulated mature murine lymphocytes. Exp. Cell Res. 200, 416424.

109. Satoh M. and Lindahl T. (1993) Role of poly (ADP-ribose) formation in DNA repair. Nature 356,356-358.

110. Savill J. (1995) The innate immune system: recognition of apoptotic cells, in Apoptosis and the immune response (Gregory C.D., ed., Wiley-Liss Inc., New York), 341-369.

111. Savill J., Fadok V., Herson P., Haslett C. (1993) Phagocyte recognition of cells undergoing apoptosis. Immunol. Today 14, 131-136.

112. Scheffner M., Werness B.A., Huibregtse J.M., Levine A.J., Howley P.M. (1990) The E6 oncoprotein encoded by human papillomavirus types 16 and 18 promotes the degradation of p53. Cell 63, 1129-1136.

113. Selvakumaran M., Lin H.K., Miyashita Т., Wang H.G., Krajewski S., Reed J.C., Hoffman В., Lieberman D. (1994) Immediate early up-regulation of bax expression by p53 but not TGFJ31: a paradigm for distinct apoptotic parthways. Oncogene 9, 1791-1798.

114. Shiokawa D. and Tanuma S. (1998) Molecular cloning and expression of a cDNA encoding an apoptotic endonuclease DNase gamma. Biochem. J. 332, 713-720.

115. Shiokawa D., Ohyama H., Yamada T. and Tanuma S. (1997) Purification and properties of DNase gamma from apoptotic rat thymocytes. Biochem. J. 326, 675-681.

116. Squier M.K., Miller A.C.K., Malkinson A.M., Cohen J.J. (1994) Calpain activation in apoptosis. J. Cell Physiol. 159, 229-237.

117. Suda Т., Takahashi Т., Golstein P., Nagata S. (1993) Molecular cloning and expression of Fas ligand, a novel member of the tumor necrosis factor family. Cell 75,1169-1178.93

118. Tabibzaden S. (1995) Signals and molecular pathways involved in apoptosis, with special emphasis on human endometrium. Hum. Repr. Update 1,303-323.

119. Thompson C.B. (1995) Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease. Science 267, 1393-1564.

120. Thornberry N.A. and Lazebnik Y. (1998) Caspases: enemies within. Science 281, 1312-1316.

121. Tinnemants M.M. F.J., Lenders M.H.J.H., Velde G.P.M. (1995) Alterations in cytoskeletal and nuclear matrix-associated proteins during apoptosis. Eur. J. Cell Biol. 68, 35-46.

122. Tomei L.D., Kanter P., Wenner C.E. (1988) Inhibition of radiation-indused in vitro by tumour promoters. Biochem. Biophys. Res. Commun. 155, 324-331.

123. Tsujimoto Y. and Croce C.M. (1986) Analysis of the structure, transcripts, and protein products of bcl-2, the gene involved in human follicular limfoma. Proc. Natl Acad. Sci. USA 83, 5214-5218.

124. Van de Craen M., Van Loo G., Pype S., Van Criekinge W., Van den brande I., Molemans F., Fiers W., Declercq W., Vandenabeele P. (1998) Identification of a new caspase homologue: caspase-14. Cell Death Differ. 5, 838-846.

125. Voelkel-Jonson C., Entingh A.J., Wold W.S. (1995) Activation of intracellular proteases in a early event in TNF-induced apoptosis. J. Immunol. 154,1707-1716.

126. Wang Y., Sheen V.L., Macklis J.D. (1998) Cortical interneurons upregulate neurotrophins in vivo in response to targeted apoptotic degeneration of neighboring pyramidal neurons. Exp Neurol 154, 389-402.

127. Weaver V.M., Lach В., Walker P.R., Sikorska M. (1993) Role of proteolysis in apoptosis: involvement of serine proteases in internucleosomal DNA fragmentation in immature thymocytes. Biohem. Cell. Biol. 71, 488-500.94

128. Williams G.T. and Smith C.A. (1993) Molecular regulation of apoptosis: genetic controls on cell death. Cell. 74, 777-779.

129. Wyllie A.H. (1980) Glucocorticoid induced thymocytes apoptosis is assosiated with endogenous endonuclease activation. Nature 284. 555-556.

130. Wyllie A.H., Morris R.G., Smith A.L., Dunlop D. (1984) Chromatin cleavage in apoptosis: association with condensed chromatin morphology and dependence on macromolecular syntesis J. Pathol. 142, 67.

131. Yasuda M., Umemura S., Osamura R.Y., Kenjo Т., Tsutsumi Y. (1995) Apoptotic cells in the human endometrium and placental villi: pitfals in applying the TUNEL method. Arch. Histol. Cytol. 58, 185-190.

132. Yew P.R. and Berk A.J. (1992) Inhibition of p53 transactivation required for transformation by adenovirus early IB protein. Nature 357, 82-85.

133. Yin X.M., Oltvai Z.N., Korsmeyer S.J. (1994) BH1 and BH2 domains of Bcl-2 are required for inhibition of apoptosis and heterodimerization with Bax. Nature 369, 321-323.

134. Yonish-Rouach E., Resnitzky D., Lotem J., Sachs L., Kimchi A., Oren M. (1991) Wild-type p53 induces apoptosis of myeloid leukaemic cells that is inhibited by interleukin-6. Nature 352,345-347.

135. Zamzami N., Marchetti P., Castedo M. (1995a) Reduction in mitohondrial potential constitutes an early irreversible step of programmed lymphocyte death in vivo. J. Exp. Med. 181, 1661-1672.

136. Zamzami N., Marchetti P., Castedo M. (1995b) Sequential reduction of mitochondrial transmembrane potential and generation of reactive oxygen species in early programmed cell death. J. Exp. Med. 182, 367-377.

137. Zhivotovsky В., Wade D., Gahm A., Orrenius S., Nicotera P. (1994) Formation of 50 kbp chromatin fragments in isolated liver nuclei is mediated by protease and endonuclease activation. FEBS Lett. 351, 150-154.95