АФК-зависимые механизмы регуляции вторичными посредниками электрической и сократительной активности гладких мышц

Гусакова, Светлана Валерьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
АФК-зависимые механизмы регуляции вторичными посредниками электрической и сократительной активности гладких мышц
ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "АФК-зависимые механизмы регуляции вторичными посредниками электрической и сократительной активности гладких мышц"

Гусакова Светлана Валерьевна

АФК-ЗАВИСИМЫЕ МЕХАНИЗМЫ РЕГУЛЯЦИИ ВТОРИЧНЫМИ ПОСРЕДНИКАМИ ЭЛЕКТРИЧЕСКОЙ И СОКРАТИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ГЛАДКИХ МЫШЦ

03.03.01 - физиология

03.01.02 - биофизика

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

1 О НОЯ 2011

Томск - 2011

4859555

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научные консультанты:

доктор медицинских наук,

профессор Баскаков Михаил Борисович

доктор биологических наук,

профессор Орлов Сергей Николаевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Байкоь Александр Николаевич

доктор медицинских наук,

профессор, залуженный деятель науки РФ,

член-корреспондент РАМН Зефиров Андрей Львович

доктор медицинских наук,

профессор Россиги Дмитрий Анатольевич

Ведущая организация: НИИ физиологии СО РАМН (г. Новосибирск)

диссертационного совета Д 208.096.01 при ГОУ ВПО СибГ'МУ Минздравсоцразвития России (634050 г. Томск, Московский тракт, 2).

С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке Сибирского государственного медицинского университета

Защита состоится

часов на заседании

Ученый секретарь диссертационного совета

Петрова И.В.

; ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Универсальным механизмом адаптации и повреждения клеточных систем является окислительный стресс. Одним из важнейших элементов редокс-системы клеток являются активные формы кислорода (АФК), выполняющие функции вторичных посредников и реализующие ли-ганд-рецепторные взаимодействия. В число таких лигандов входят гормоны, медиаторы и цитокины. Многочисленные исследования продемонстрировали способность сосудистых клеток, включая эндотелиальные клетки, гладкомы-шечные.клетки .(ГМК), и фибробласты, генерировать АФК [Touyz R.M. et al., 2002; Clempus R^E.', Grïendling K.K., 2006]. К АФК относят супероксидный анион (02")» перекись водорода (Н202) и другие пероксиды, а также их радикальные формы, гидроксильный. радикал, озон, оксид азота и ряд других соединений [Владимиров Ю.А., 2000; Донцов В.И., 2006; Santos С.М. et al., 2010].

Показано, что АФК активируют протеинкиназу С (ПК-С), фосфолипазу А2, NO-синтазу, циклооксигеназу и гуанилатциклазу [Rodriguez-Martinez М.А. et al., 1998; Thakali К. Et al., 2005], МАРК- [Lee К. et al., 2002; Blanc A. et al., 2004] и Rho-киназы [Sward К. et al., 2003; Jin L. Et al., 2004; Thakali K. Et al, 2005], которые, кроме того, .что находятся под контролем внутриклеточных сигнальных систем или' являются их компонентами, сами оказывают регулирующее влияние на уровень АФК в клетке. Получены свидетельства того, что многие эффекты АФК опосредованы изменением ионной проводимости мембраны [Barlow R.S. et al., 2000; Wo|in M. et al,2002; Thakali K. et al, 2006]. Одним из ключевых звеньев в механизмах действия Н202 является модификация калиевой проводимости мембраны ГМК [Barlow R.S, White R.E, 1998; Gao Y.J. et al, 2003; Thengchaisri N„ Kuo L„ 2003; Rogers P.A. et al, 2006].

Наряду с изучением механизмов влияния АФК на функциональные свойства сосудов, актуальным представляется исследование роли эндогенных протекторов окислительного стресса в клетках. Одним из наиболее обсуждаемых в последнее время является сероводород (H2S), который "в небольших количествах синтезируется в клетках, и получил признание как газотрансмиттер с высоким терапевтическим потенциалом при сердечнососудистых заболеваниях [Calvert J.W. et al, 2010; Li L. et al, 2011]. Имеются сведения q том,'," что "кардиопротекторное действие H2S опосредовано активацией АТФ-чувствительных калиевых каналов [Kimura Y. et al, 2006]. Другим возможным механизмом защиты кардиомиоцитов при окислительном стрерсе является связырани^ рероводородом АФК [Lefer D.J. et al, 2007].

Несмотря на серьезные.успехи в изучении механизмов действия АФК, до настоящего времени нет достаточной ясности в молекулярных основах влияния дисбаланса редокс-зависимых сигнальных систем на сократительную функцию клеток, установлении редокс-чувствительности отдельных каскадов внутри этих систем трансдукции сигналов и редкс-зависимости их взаимодействия.

2000; Anfinogenova Y.J. et al., 2004; Burgstaller G., Gimona M., 2004; Zhang D. et al., 2001, 2006; Svitkina Т., 2009]. Транспортная функция цитоскелета является одним из факторов, обеспечивающим реализацию сигнального действия вторичных посредников [Chen N.X. et. al., 2010]. Изменения состояния элементов цитоскелета влияют на ионные каналы и мембранные транспортеры. В кардиомиоцитах актин-зависимая модуляция показана для Ж+/Са2,-обменника [Li Z. et al., 1993], Ыа+-К+-АТФ-азы, рианодиновых рецепторов [Shibayama Т. et al., 1993] и потенциал-зависимых натриевых каналов [Srinivasan Y. et al., 1988]. Имеются данные, свидетельствующие о том, что микротубулы опосредуют транслокацию протеинкиназ, активация которых в большинстве случаев обеспечивает передачу сигналов в клетке [Chitaley К., Webb R.C., 2001; Zhang D. et al., 2001].

Показано, что сеть цитоскелета является первичной мишенью окислительного стресса [Zhao Y., Davis H.W., 1998; Dalle-Donne I. et al., 2001]. Диссоциация белков цитоскелета является начальным этапом альтерации клеток, вызванной окислительным стрессом. Окислительному повреждению подвергаются отдельные белки цитоскелета [Aksenov M.Y. et al., 2001], однако причины неодинаковой чувствительности его различных элементов к действию АФК неясны [Dalle-Donne 1. et al., 2001]. Обнаружено, что Н202 вызывает реорганизацию актина в эндотелиальных клетках [Huot J. et al., 1998]. В экспериментах на культуре сосудистых ГМК продемонстрировано, что необходимым условием для активации ангиотензином II NAD(P)H-0Kcaaa3bi и продукции 0{ является интактная сеть актиновых филаментов цитоскелета [Touyz RJV1. et al., 2005]. Показана существенная роль микротубул в стимуляции аниготензином II продукции Н202 [Zuo L. et al., 2004].

Таким образом, несмотря на значительный прогресс в изучении механизмов регуляции вторичными посредниками сократительной функции гладких мышц, ряд вопросов не нашел удовлетворительного решения. И это, прежде всего, касается взаимоотношений «классических» вторичных посредников, АФК и цитоскелета. Последний, по мнению ряда авторов [Orlov S.N. et al., 1996; Anfinogenova Y.J. et al., 2004; Zhang D. et al., 2001, 2006], может являться именно тем звеном внутриклеточной коммуникации, к которому конвергруют различные сигнальные системы и отдельные каскады в пределах одной системы трансдукции сигнала в ГМК. Выяснение механизмов, используемых клетками с участием АФК и опосредованных цитоскелетом, является актуальной задачей современной биологии и медицины, решение которой позволит приблизиться к пониманию условий и способов кооперативных взаимодействий внутриклеточных сигнальных путей в обеспечении регуляции клеточного гомеостаза и функциональных свойств клеток, тканей и органов. Все это может стать основой для разработки молекулярных подходов к управлению функциональными свойствами гладких мышц внутренних органов и кровеносных сосудов при физиологических и патологических состояниях, сопряженных с нарушением внутриклеточной коммуникации, и позволит модернизировать современные медицинские технологии патогенетической терапии большого числа социально-значимых заболеваний.

Цель работы: изучить роль активных форм кислорода и элементов цитоскелета в механизмах регуляции электрической и сократительной активности гладкомышечных клеток. Задачи исследования:

1. Исследовать участие активных форм кислорода (перекиси водорода и оксида азота) и элементов цитоскелета в сократительных реакциях сосудистых гладкомышечных сегментов при стимуляции а,-адренергических рецепторов и гиперкалиевой деполяризации мембраны.

2. Изучить роль активных форм кислорода в сократительных реакциях гладких мышц при изменении объема клеток.

3. Выявить вклад №+,К\2СГ-котраиспорта в цитоскелет-зависимую регуляцию электрических и сократительных свойств гладкомышечных клеток.

4. Исследовать влияние перекиси водорода и оксида азота на цАМФ-зависимые механизмы регуляции электрической и сократительной активности гладкомышечных клеток.

5. Изучить роль цитоскелета в регуляции циклическими АМФ и ГМФ электрических и сократительных ответов гладкомышечных клеток.

6. Исследовать механизмы влияния сероводорода на сократительную активность гладкомышечных клеток.

Научная новизна

Впервые установлено разнонаправленное влияние перекиси водорода на сокращения сосудистых гладкомышечных клеток при деполяризации мембраны гиперкалиевым раствором и действии фенилэфрина: снижение величины контрактуры, вызванной фенилэфрином и увеличение ее при действии гиперкалиевого раствора. Генерация потенциалов действия и сокращений гладкомышечных клеток мочеточника при действии деполяризующего тока дозозависимо угнетается перекисью водорода.

Впервые установлено стимулирующее влияние оксида азота на сократительную активность гладких мышц мочеточника. Активация сокращений гладкомышечных клеток мочеточника при действии оксида азота обусловлена увеличением длительности вызванных деполяризующим током потенциалов действия вследствие стимуляции №+,К+,2СГ-котранспортера.

Впервые исследована роль активных форм кислорода в сократительных реакциях сосудистых гладких мышц, вызванных изменением объема клеток. Выявлено, что перекись водорода не влияет на сокращения, вызванные гиперосмотической и изоосмотической стрикцией, однако увеличивает сократительные реакции, вызванные гипоосмотическим набуханием гладкомышечных клеток. Оксид азота, в отличие от перекиси водорода, вызывает снижение величины механического напряжения сосудистых гладких мышц, индуцированного гиперосмотической и изоосмотической стрикцией, и не влияет на сокращения, вызванные гипоосмотическим набуханием клеток.

зависят от состояния микротубул и микрофиламентов. В отличие от этого сократительные ответы, индуцированные изоосмотической стрикцией клеток, подавляются при разрушении только микрофиламентов. Сокращения, вызванные гипоосмотическим набуханием клеток, не зависят от состояния элементов цитоскелета.

Впервые показано, что микрофиламенты цитоскелета участвуют в сокращениях сосудистых гладких мышц, индуцированных деполяризацией мембраны клеток гиперкалиевым раствором, а также в генерации потенциалов действия и сокращений гладкомышечных клеток мочеточника при действии деполяризующего тока. Показано, что микрофиламенты цитоскелета вовлечены в механизмы действия перекиси водорода на сокращения сосудистых гладких мышц, вызванные фенилэфрином, но не гиперкалиевым раствором. Установлено, что в расслабление оксидом азота гладких мышц сосудов, предсокращенных гиперкалиевым раствором вовлечены микротубулы. Впервые показано, что релаксирующее действие оксида азота в сосудистых гладких мышцах при активации агадренергических рецепторов фенилэфрином зависит от состояния микрофиламентов и микротубул.

Впервые установлено, что вклад отдельных элементов цитоскелета в регуляцию циклическим АМФ электрогенеза и сокращений неодинаков в различных типах гладких мышц. В реализацию угнетающего действия циклического АМФ на сократительную активность сосудистых гладкомышечных клеток вовлечены микрофиламенты. В гладкомышечных клетках мочеточника подавление цАМФ потенциалов действия и сокращений опосредовано преимущественно микротубулами.

Впервые установлено разнонаправленное влияние сероводорода на сократительную активность сосудистых гладких мышц. Показано констрикторное действие низких концентраций сероводорода на гладкомышечные клетки, деполяризованные гиперкалиевым раствором и расслабляющее влияние высоких.

Теоретическая и практическая значимость работы

государственного медицинского университета, на кафедре физиологии человека и животных Томского государственного университета. Методические приемы и полученные данные используются в научных исследованиях, выполняемых на кафедрах биофизики и функциональной диагностики, нормальной физиологии Сибирского государственного медицинского университета и в отделе сердечно-сосудистой хирургии НИИ кардиологии СО РАМН. Областями применения полученных данных являются физиология, биофизика, фармакология.

Положения, выносимые на защиту

1. Перекись водорода угнетает фенилэфрин-индуцированные сокращения гладких мышц, но потенцирует сокращения сосудистых сегментов, вызванные гиперкалиевым раствором. Эффекты перекиси водорода не зависят от эндотелия и сохраняются в условиях снижения калиевой проводимости мембраны гладкомышечных клеток тетраэтиламмонием. Перекись водорода дозозависимо подавляет электрическую и сократительную активность гладкомышечных клеток мочеточника и это действие обусловлено повышением калиевой проводимости мембраны.

2. Микрофиламенты цитоскелета в большей степени, чем микротубулы, вовлекаются в регуляцию сокращений, вызванных гиперкалиевой деполяризацией сосудистых гладких мышц, а также в генерацию потенциалов действия и сокращений гладкомышечных клеток мочеточника.

3. Релаксирующее действие оксида азота в гладкой мышце аорты при стимуляции фенилэфрином он-адренергических рецепторов зависит от состояния микрофиламентов и микротубул, тогда как в деполяризованной гиперкалиевым раствором гладкой мышце расслабление опосредовано преимущественно тубулиновыми элементами цитоскелета. В механизмы действия перекиси водорода на сокращения сосудистых гладких мышц, вызванные фенилэфрином вовлечены микрофиламенты.

4. Сокращения сосудистых сегментов, вызванные гиперосмотическим раствором, зависят от состояния микрофиламентов и микротубул. В генерации сокращений при изоосмотической стрикции клеток основную роль играют микрофиламенты цитоскелета.

5. Опосредованное циклическим АМФ угнетение сократительной активности сосудистых сегментов при действии гиперкалиевого раствора, зависит от состояния микрофиламентов цитоскелета, а потенциалов действия и сокращений гладкомышечных клеток мочеточника - от состояния микротубул.

6. Направленность и величина эффектов сероводорода в сосудистой гладкой мышце зависит от активности цАМФ-опосредованной внутриклеточной сигнальной системы.

(Москва). • XVI European Meeting on Hypertension, 2006 (Madrid, Spain). • IX Конгресс молодых ученых и специалистов «Науки о человеке», 2008 (Томск). • VI Сибирский физиологический съезд, 2008 (Барнаул). • IV Международная научная конференция «Психофизиологические и висцеральные функции в норме и патологии», посвященная 90-летию со дня рождения П.Г. Богача, 2008 (Украина, Киев). • XVIII European Meeting on Hypertension, 2008, (Berlin, Germany). • «Окислительный стресс и свободнорадикальные патологии», 2009 (Судак, Украина) • X международный конгресс «Здоровье и образование в XXI веке» «Инновационные технологии в биологии и медицине», 2009 (Москва). • XX European Meeting on Hypertension, 2010 (Oslo, Norway). • XXI Съезд физиологического общества им. И.П.Павлова, 2010 (Калуга). • 6th International Congress of Pathophysiology and the 14th International SHR Symposium, 2010 (Montréal, Canada). • 23rd Scientific Meeting of the International Society of Hypertension, 2010 (Vancouver, Canada). • V Международная научная конференция «Психофизиол. и висцер. функции в норме и патологии» посвященная 100-летию со дня рождения проф. Харченко П.Д. и 65-летию НИИ физиологии им. академика Петра Богача, 2010 (Киев, Украина).

Исследование выполнено при поддержке Федеральной целевой программы («Разработка технологии селективного управления внутриклеточной газовой сигнализацией» ГК № 02.740.11.5031, «Разработка технологических основ управления функциональным состоянием клеток на основе идентификации ключевых звеньев трансляции сигналов с участием активных форм кислорода и элементов цитоскелета» ГК № П445, «Селективная модуляция внутриклеточной коммуникации как основа молекулярных технологий управления функциями клеток» ГК № 14.740.11.0932) и Российского фонда фундаментальных исследований («Исследование механизмов регуляции цитоскелетом сократительной активности гладких мышц» ГК № 07-04-01184, «Исследование мембранных и молекулярных механизмов регуляции сократительной активности гладких мышц» ГК № 08-04099037, «Разработка технологии селективного управления внутриклеточными редокс-зависимыми сигнальными системами» ГК № 09-04-99026).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 28 научных работ, в том числе 10 - в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 247 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы», главы собственных результатов и их обсуждения и заключения. Библиография включает 388 ссылок, в том числе 132 - на работы отечественных авторов и 256 - зарубежных. Работа иллюстрирована 45 рисунками и включает 9 таблиц.

Личное участие автора. Основные результаты исследования, вошедшие в диссертацию, получены лично автором. Анализ литературных данных по теме диссертации, статистическая обработка полученных результатов, их научный анализ, обсуждение и написание диссертации выполнены самостоятельно автором.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Объект исследования: изолированные сегменты грудного отдела аорты 360 беспородных белых крыс весом 200-250 г, которые являются традиционной моделью артериальных сосудов мышечного типа и изолированные гладкомышечные препараты мочеточника 156 морских свинок весом 180-230 г.

Подготовка гладкомышечных препаратов: после удаления адвентиции и эндотелия механическим путем из грудного отдела аорты нарезались сегменты шириной 2-3 мм [Cakici J. et al, 1993].

Сегменты мочеточника длиной 10-12 мм вырезались после удаления с их поверхности соединительнотканных оболочек.

Все манипуляции выполнялись в препаровальных ванночках с раствором Кребса при комнатной температуре.

Исследование сократительной активности гладкомышечных, сегментов аорты. Для исследования сократительной активности сосудистые гладкомышечные сегменты после предварительной нагрузки 500 мг фиксировались в термостатируемой перфузионной камере объемом 10 мл.

Измерение механического напряжения ГМК проводили с помощью четырехканальной системы для проведения электрофизиологических исследований Myobath II (Германия).

Амплитуду контрольных (100 %) сократительных ответов сегментов на действие гиперкалиевого раствора (замещение 30 мМ NaCl на КС1) регистрировали после 40-50 минут перфузии нормальным раствором Кребса. В ряде экспериментов амплитуду сократительных ответов рассчитывали в процентах от амплитуды контрольного фенилэфрин-индуцированного (10 мкМ) сокращения.

Исследование электрической и сократительной активности ГМК мочеточника. Для одновременной регистрации электрической и сократительной активности ГМК мочеточника использовалась методика двойного сахарозного моста [Артеменко Д.П. с соавт., 1982]. Раствор сахарозы в концентрации 0.3 М приготовлялся на основе деионизированной воды с удельным сопротивлением не ниже 15 МОм-см. Отведение электрических потенциалов производили с помощью неполяризующихся хлор-серебряных электродов. Механическое напряжение (МП) гладкомышечных препаратов регистрировали изометрическим датчиком силы FT10G, который был соединен с 16-битным АЦП L-791. Далее сигнал регистрировался и обрабатывался с помощью ПК и соответствующего программного обеспечения AC Test.

В качестве контрольных (100 %) значений служили параметры потенциалов действия (амплитуда пикового компонента, амплитуда и длительность плато) и величина сокращений ГМК в нормальном растворе Кребса, вызванных деполяризующим током. Сопротивление мембраны ГМК оценивалось по величине анэлектротонических потенциалов.

Исследование соотношения F- и G-актина в ГМК методом флуоресцентной микроскопии. После стимуляции сократительной активности (фенилэфрином, гиперкалиевым раствором, гиперосмотической стрикцией, гипоосмотическим набуханием) гладкомышечные сегменты аорты помещали в

среду для фиксирования (tissue-embedding medium Neg 52) и замораживали, используя сухой лед (-78±0.1 °С).

Полученные с использованием криостата (Cryostats, Richard-Allen Scientific) поперечные срезы аорты толщиной 8 мкм помещали на стекло и высушивали на воздухе, затем фиксировали 4 % формальдегидом в фосфатном буфере (0.05М Tris Base, 0.9 % NaCI, pH 7.6) при комнатной температуре в течение 30 мин. После 5 минутного трехкратного отмывания в фосфатном буфере срезы обрабатывали 0.2 % раствором Triton Х100 в течение 5 минут с последующим повторным отмыванием. Неспецифический сигнал блокировали 2 % раствором альбумина бычьей сыворотки (АБС) в фосфатном буфере в течение 30 мин. при 37 "С и полном насыщении водяными парами.

Для окрашивания F-актина, срезы инкубировали с меченым фаллоидином в разведении 1:100 в 2 % растворе АБС в течение 1 часа при 37±0.1 °С и полном насыщении водяными парами.

После отмывания (фосфатный буфер, 3x5 мин.), срезы инкубировали с флуоресцентным красителем D12371, специфичным к G-актину, в разведении 1:100 в 2 % растворе АБС в течение 1 часа при 37±0.1 °С при полном насыщении водяными парами.

После инкубации и отмывания, срезы высушивали на воздухе при комнатной температуре и накрывали покровными стеклами, предварительно нанося реагент Fluoromount-G. Сигнал визуализировали с помощью флуоресцентного микроскопа Leica DM/RB и обрабатывали с помощью программы Multi Gauge V3.0.

Используемые растворы. Растворы готовились на основе дистиллированной воды добавлением соответствующих реактивов (ХЧ, «Реахим», РФ). Физиологический раствор Кребса содержал (мМ): 120.4 NaCI, 5.9 KCl, 2.5 СаС12, 1.2 MgCl2, 5.5 глюкозы, 15 C4Hn03N [tris(oxymethyl)-aminometan] (л=31б,4 моем). Гиперосмолярный раствор (я=466.4 моем) приготавливали добавлением к раствору Кребса 150 мМ сахарозы, а гипоосмолярный (л=56.4 моем) - снижением концентрации NaCI до 40.4 мМ вместо исходных 120.4 мМ. В растворах поддерживались значения pH в пределах 7.35-7.40 и температуры 37±0.1 °С.

Используемые реактивы: колхицин, цитохалазин В или D, винбластин, нокодазол, фенилэфрин, нитропруссид натрия, дибутирил-цГМФ, метиленовый синий, форсколин, буметанид (все Sigma); тетраэтиламмония хлорид (Serva); перекись водорода (Россия).

Статистическая обработка. Анализ данных проводили при помощи программы Statistica 6.0 for Windows фирмы Statsoñ. Фактические данные представлены в виде «среднее ± ошибка среднего» (Х±т). Для определения характера распределения полученных данных использовали критерий нормальности Колмогорова-Смирнова. Сформированные выборки не подчинялись закону нормального распределения, поэтому для проверки статистических гипотез были использованы непараметрические критерии [Гланц С., 1999]. Для проверки гипотезы об однородности двух независимых выборок использовался U-критерий Манна-Уитни (Mann-Whitney U-test). Для

проверки однородности парных или зависимых выборок был использован Т-критерий Вилкоксона (Wilcoxon mached pairs test). Статистически значимыми считали различия при значении р<0.05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Одними из важнейших элементов редокс-системы клеток являются супероксид анион и оксид азота (N0). Несмотря на высокую реакционную активность, физиологическая и патофизиологическая значимость супероксид аниона невелика ввиду короткого времени «жизни». Поэтом основную роль играет метаболит сунероксид аниона - перекись водорода [Wolin М., 2000]. Перекись водорода, как и оксид азота, является важным ауто- и паракринным регулятором в гладких мышцах висцеральных органов и сосудов. 1. Влияние активных форм кислорода на сократительную активность гладкомышечных клеток при гиперкалиевой деполяризации мембраны и действии фенилэфрина

Для изучения влияния оксида азота в экспериментальной практике широко используются нитросоединения - доноры NO. В своих экспериментах мы использовали нитропруссид натрия (НП) [Ignarro L., 1987; Ertemi Н. et al., 2011].

1.1. Влияние нитропруссида натрия на сокращения сосудистых гладких Mbiiuif, вызванные гиперкалиевым раствором. При добавлении в перфузионный раствор нитропруссида натрия в концентрации 0.01-1 мкМ, исходное механическое напряжение (МН) гладких мышц сосудов не изменялось. Перфузия препаратов раствором, содержащим 30 мМ хлорида калия (30 мМ) приводила к развитию поддерживаемого сокращения, величина которого принималась за 100 %.

Нитропруссид натрия (0.01-1 мкМ) вызывал снижение величины сокращений гладкомышечных сегментов, вызванных гиперкалиевым раствором Расслабление близкое к полумаксимальному наблюдалось при добавлении 0.05 мкМ НП: механическое напряжение снижалось до 41.6±3.7 % (п=9, р<0.05) от контрольного гиперкалиевого сокращения (рис.1). ЕС50 для нитропруссида натрия составила 0.04 мкМ.

Известно, что основные эффекты оксида азота в ГМК обусловлены активацией растворимой гуанилатциклазы (ГЦ) [Северина И.С., 2002]. Вместе с тем, ранее было установлено и цГМФ-независимое действие НП [Ковалев И.В. с соавт., 1997]. Для выявления цГМФ -независимого компонента действия НП использовали ингибитор ГЦ - метиленовый синий [Реутов В.П. с соавт., 1994;

Нитропруссид натрмя,икМ

Рис.1. Влияние нитропруссида натрия на механическое напряжение сосудистой гладкой мышцы, пред-сокращенной гиперкалиевым (30 мМ KCl) раствором___

Drewett J., Garbers D., 1994; Huang W.F. et al„ 2009].

Добавление 10 мкМ метиленового синего в раствор Кребса течение 30 минут не изменяло исходное МН гладких мышц, но статистически значимо снижало расслабляющее влияние НП (0.01-1 мкМ) на предсокращенную гиперкалиевым раствором (30 мМ КС1) гладкую мышцу. При действии 0.05 мкМ НП в этих условиях МН сегментов снижалось до 83.2±5.7 % (п=6, р<0.05), тогда как в отсутствии метиленового синего - до 41.6±3.7 %. Полученные данные указывают на то, что основной мишенью для НП в исследуемых ГМК является растворимая ГЦ и расслабляющее действие оксида азота на гладкую мышцу (ГМ), сокращенную в гиперкалиевом растворе, в своей большей части, опосредовано цГМФ.

Сократительные ответы сосудистых гладких мышц инициируются многими физиологически активными веществами. Для изучения роли оксида азота и перекиси водорода в регуляции сократительной активности сосудистых ГМ, вызванной стимуляцией аг адренергических рецепторов, применяли фенилэфрин.

1.2. Влияние нитропруссида натрия на фенилэфрин-индуцированные сокращенна сосудистых гладкомышечных клеток. Амплитуда сокращений в ответ на добавление 10 мкМ фенилэфрина (ФЭ) в раствор Кребса была сравнима с ответной реакцией ГМ на действие 30 мМ КС1

Нитропруссид натрия (0.001-0.05 мкМ) вызывал снижение силы ФЭ-индуцированных сокращений сосудистых сегментов. При этом близкое к полумаксималыюму расслабление наблюдалось при добавлении 0.005 мкМ НП: МН снижалось до 57.4±6.3 % (п=6, р<0.05) относительно контрольных значений (рис.2). ЕС50 для нитропруссида натрия составила 0.007 мкМ. В присутствии метиленового синего расслабляющее действие НП (0.005 мкМ) на предсокращенную ФЭ гладкую мышцу статистически значимо уменьшалось: механическое напряжение ГМК снижалось до 84.3±9.1 % (п=6, р<0.05), против 57.4±6.3 % - в отсутствии метиленового синего. Полученные данные указывают на то, что при фенилэфрин-индуцированном сокращении сосудистой гладкой мышц, как и в случае с ГМ, предсокращенной гиперкалиевым раствором, растворимая ГЦ является основной мишенью для НП. Следовательно, релаксирующее влияние НП на гладкую мышцу сосудов проявлялось независимо от природы предсокращающего фактора. Вместе с тем, НП оказывал более сильное действие на сокращения гладкомышечных сегментов, вызванные ФЭ, чем деполяризацией мембраны ГМК.

| Фенилзфрин(10мк1Ч) |

а а.5 ив 15 2л бремя (часы)

Рис.2. Влияние нитропруссида натрия на сокращение гладкой мышцы аорты, вызванное фенилэфрином

Активация ai-адренорецепторов вовлекает многочисленные сигнальные пути, контролирующие взаимодействие актина и миозина. Известно, что в обеспечение сокращений сосудистых гладких мышц в ответ на стимуляцию а,-адренергических рецепторов, кроме хорошо изученных рецептор-управляемых и потенциал-зависимых ионных каналов вовлечены Са-КМ, ROCK и ПК-С [Guimaräes S., Moura D„ 2001; Wier W.G., Morgan K.G., 2003; Docherty J.R., 2010]. EC50 при ФЭ-индуцированном сокращении для нитропруссида натрия составила 0.007 мкМ, тогда как при гиперкалиевом сокращении - 0.04 мкМ. Возможно, более выраженное расслабляющее действие NO на сокращения, вызванные фенилэфрином, обусловлено большей чувствительностью к действию оксида азота С-киназной ветви кальциевой сигнальной системы ГМК. Ингибирование оксидом азота ПК-С продемонстрировано в ряде исследований [Ковалев И.В. с соавт., 2002, 2003; Muniyappa R. et al., 1998; Vouyouka A.G. et al., 2006].

1.3. Влияние перекиси водорода на сокращения сосудистых гладких мышц, вызванные деполяризацией мембраны гиперкалиевыми растворами. При добавлении в перфузионный раствор Н202 в концентрации 1-500 мкМ исходное МЫ сегментов аорты не изменялось.

Для исследования влияния перекиси водорода (1-500 мкМ) на сокращения сегментов, вызванные деполяризацией мембраны клеток, воздействовали гиперкалиевыми растворами, содержащими 30, 60 и 120 мМ KCl. В этих условиях механическое напряжение гладкой мышцы увеличивалось до 129.1±6.8 % (60 мМ KCl) и 145.5±13.6 % при действии 120 мМ KCl (п=6, р<0.05) от контрольного гиперкалиевого сокращения (30 мМ KCl).

Перекись водорода (500 мкМ) увеличивала МЫ сосудистых гладких мышц, предсокращенных растворами с повьн 60 и 120 мМ KCl) до 125.2±2.9 %, 125.4±7.7 % и 126.3±2.3 % (п=6, р<0.05) от гиперкалиевой (30, 60 и 120 мМ KCl) контрактуры, соответственно (рис. 3).

Амплитуда сокращений при действии хлорида калия (30, 60 и 120 мМ KCl) и активирующее влияние Н202 в интактных сегментах статистически значимо не отличались от значений, полученных на сегментах с сохраненным эндотелием (п=6).

Полученные данные свидетельствуют о том, что Н202 оказывает возбуждающее действие на деэндотели-зированные сегменты аорты, предсо-кращенные гиперкалиевым раствором. При этом величина прироста сокращения на действие перекиси водо-

й концентрацией ионов калия (30,

Q 0.5 1.0 1.5 2.1

Врвия (часы)

Рис.3. Влияние перекиси водорода на механическое напряжение сосудистой гладкой мышцы, предсокращенной гиперкалиевым (ЗОмМ KCl) раствором

рода не зависела от величины мембранного потенциала сосудистых гладкомы-шечных клеток.

1.4. Влияние перекиси водорода на фенилэфрич-индуцированные сокращения сосудистых гладких мышц. Перекись водорода в концентрации 500 мкМ уменьшала МН сосудистых сегментов, предсокращенных ФЭ, до 48.3±3.5 % (п=7, р<0.05) (рис.4).

Для изучения влияния Н202 на рецептор-управляемый вход ионов кальция ФЭ добавляли в условиях инактивационного выключения потенциал-зависимых кальциевых каналов. Для этого использовали ГМК, деполяризованные в присутствии 120 мМ KCl. Фенилэфрин (10 мкМ) вызывал повышение МН таких глад-комышечных препаратов на 51.5±4.7 % (п=б, р<0.05) от контрольного гиперкалиевого сокращения. В этих условиях перекись водорода (500 мкМ) не влияла на величину механического напряжения гладкомышечных сегментов.

Полученные данные указывают, во-первых, на то, что расслабляющее влияние Н202 на гладкие мышцы, предсокращенные фенилэфрином, не связано с угнетением рецептор-управляемого входа ионов кальция в ГМК, и ее расслабляющее действие проявляется только при субмаксимальных концентрациях кальция в клетке, во-вторых. Последнее также может служить косвенным подтверждением того, что расслабление ГМ, предсокращенной ФЭ, по крайней мере, частично связано с угнетением перекисью водорода С-киназной ветви кальциевой сигнальной системы.

1.5. Исследование роли калиевой проводимости мембраны с реализации влияния перекиси водорода на сокращения сосудистых гладкомышечных сегментов, индуцированные гиперкалиевым растворов или фенилэфрином. Изменения калиевой проводимости мембраны ГМК во многом определяют направленность и величину сократительных реакций гладких мышц на действие биологически активных веществ. Добавление в раствор Кребса 10 мкМ блокатора кальций-активируемых, потенциал-зависимых и АТФ-чувствительных калиевых каналов тетраэтиламмония [Zhao Y., 1998] не влияло на исходное механическое напряжение ГМ и амплитуду сокращений, вызванных гиперкалиевым раствором (30 мМ KCl), но вызывало увеличение амплитуды фенилэфрин-индуцированных сокращений до 111,4±7.2 % (п=6, р<0.05) от контрольных значений.

1.5

Время (часы)

Рис.4. Влияние перекиси водорода на сокращение гладкой мышцы аорты, вызванное фенилэфрином

Тетраэтиламмоний не оказывал влияния на эффекты перекиси водорода в предсокращенных гиперкалиевым раствором или фенилэфрином гладкомы-шечных сегментах. Эти данные указывают на то, что действие перекиси водорода на величину сокращений, вызванных гиперкалиевым раствором или фенилэфрином не связано с модуляцией потенциал-зависимой и Са2+-активируемой калиевой проводимости мембраны сосудистых ГМК.

2. Исследование влияния активных форм кислорода на сократительные реакции гладких мышц в моделях изменения объема клеток

Известно, что поддержание относительно постоянного объема большинства клеток, в том числе ГМК обеспечивается работой специфических метаболических и транспортных систем.

2.1. Сократительные реакции гладкомышечных сегментов аорты в моделях изменения объема клеток. Изменение осмолярности среды инкубации является хорошо апробированным методическим подходом для активации объем-чувствительного ионного транспорта и выяснения роли систем поддержания клеточного объема в регуляции клеточных функций [Anfinogenova Y.D. et al,

2004]. Этот прием позволяет модулировать объем-чувствительные ионтранс-портирующие системы клетки без воздействия какими-либо биологически активными соединениями.

Участие объем-чувствительных механизмов в регуляции сократительной активности изолированных сегментов аорты было изучено при моделировании гиперосмотического и изоосмотического сжатия, а также гипоосмотического набухания гладкомышечных клеток.

Для гиперосмотически-индуцированного снижения объема клеток использовался модифицированный физиологический раствор, содержащий 150 мМ сахарозы (466.4 моем) в качестве непроникающего осмолита. Повышение осмолярности раствора приводило к развитию воспроизводимого, поддерживаемого в течение 45 мин. сокращения. Амплитудные параметры этих сократительных ответов оставались стабильными при трехкратном повторении аппликации 150 мМ сахарозы с последующим отмыванием в течение 30 мин. между ними. Амплитуда сокращений гладкомышечных сегментов на 20-ой минуте действия 150 мМ сахарозы составляла 51.8±9.0 % (п=9) в сравнении с величиной контрольного гиперкалиевого сокращения.

Перфузия гладкомышечных препаратов гипоосмотическим раствором (40.4 мМ NaCl) приводила к быстрому транзиторному сокращению сегментов аорты, амплитуда которых составила 75.7±8.9 % (п=8) по сравнению с величиной контрольного гиперкалиевого сокращения, а длительность-40±4.8 мин.

Ключевую роль в обеспечении сокращений сосудистых гладких мышц при гипоосмотическом набухании играют неравновесное распределение ионов СГ и входящий хлорный ток, который деполяризует мембрану [Анфиногенова Я.Д,

2005]. Для получения изоосмотической стрикции сегменты аорты экспонировали в гипоосмотической среде (40.4 мМ NaCl) в течение 60 мин, затем возвращали их в нормоосмотический раствор. Восстановление осмолярности раствора во всех случаях приводило к развитию транзиторных сокращений, амплитуда

которых составляла 21.6±6.1 % по сравнению с величиной контрольной гиперкалиевой контрактуры, а длительность - 38.8±1.6 мин. (п=10).

Согласно литературным данным, одним из ключевых механизмов стабилизации объема клеток при стрикции, вызванной абсолютным или относительным увеличением осмотического давления среды, является активация №+,К+,2СГ-котранспорта (NKCC) [Mongin A., Orlov S., 2001; Lang F. et a!., 2000; Rüssel J.M., 2000], однако при гиперосмотическом воздействии активация NKCC носит постоянный характер, а в случае изоосмотической стрикции - транзиторный. Показано фосфорилирование легких цепей миозина и Rho-зависимая транслокация миозина II при гиперосмотической стрикции клеток [Klein J.D., O'Neill W.C., 1995; Pedersen P.A. et al., 2002]. Сокращение сегментов аорты, индуцированное гипоосмотическим воздействием обусловлено наличием неравновесного электрохимического хлорного потенциала, открыванием объем-чувствительных и Са2+-активируемых СГ каналов, входом Са2+ по потенциал-зависимым кальциевым каналам и угнетением Ыа+/Са2+-обмена [Anfinogenova Y.D. et.al., 2004]. Кроме того, сокращение, вызванное изоосмотической стрикцией, в отличие от сокращения в гиперосмотическом растворе, сопровождается регуляторным увеличением объема клеток [Mongin A., Orlov S., 2001], что представляет значительный интерес для сравнения результатов, полученных в этих двух моделях.

2.2. Влияние активных форм кислорода на сокращения гладкомышечных сегментов аорты в моделях изменения объема клеток. При добавлении 0.05 мкМ нитропруссида натрия на плато сокращений, вызванных гиперосмотической стрикцией амплитуда последних статистически значимо снижалась и составляла 26.3±4.7 % (п=4, р<0.05) от контрольного гиперкалиевого сокращения. Добавление 0.05 мкМ НП на фоне действия гипоосмотического раствора не изменяло амплитуду сокращений гладкомышечных сегментов.

Аппликация 0.05 мкМ НП снижала амплитуду сокращений при изоосмотической стрикции до 8.9±3.1 % (п=4, р<0.05) в сравнении с величиной контрольной гиперкалиевой контрактуры.

Перекись водорода (500 мкМ) не влияла на сокращение, вызванное гиперосмотической (150 мМ сахарозы) и изоосмотической стрикцией. Амплитуда сокращений сосудистых сегментов составила 54.6±3.3 % (п=6) и 19.9±5.8% (п=5, р<0.05) от контрольного гиперкалиевого сокращения. В отличие от этого, добавление 500 мкМ Н202 в гипоосмотический раствор статистически значимо увеличивало амплитуду сокращений до 98.2±4.1 % (п=7, р<0.05) от величины контрольного гиперкалиевого сокращения. В отсутствие Н202 амплитуда сократительных ответов ГМ аорты при действии гипоосмотического раствора составила 75.7±8.9 %.

3. Изучение роли цитоскелета в регуляции сократительной активности гладкомышечных сегментов аорты

Для изучения участия цитоскелета в сократительных ответах на действие гиперкалиевого раствора и фенилэфрина, а также при моделировании набухания и стрикции сосудистых ГМК было исследовано влияние

дезинтегратора микротубул и микрофиламентов цитоскелета колхицина [Nakamura М. et al., 2000].

Для дифференцировки участия отдельных элементов цитоскелета в сократительных реакциях гладкомышечных клеток аорты использовались селективные модификаторы микрофиламентов и микротубул цитохалазин В (или D) и винбластин (или нокодазол), соответственно.

3.1. Влияние колхт1ина на сокращения сегментов аорты, вызванные деполяризацией мембраны ГМК гиперкалиевым раствором. Добавление 10 мкМ колхицина в раствор Кребса не изменяло исходное механическое напряжение гладкомышечных сегментов аорты.

После 90-минутной обработки колхицином амплитуда сокращений сосудистых сегментов, вызванных гиперкалиевым раствором (30 мМ) снизилась до 62.9±12.6% (п=9, р<0.05) от контрольной гиперкалиевой контрактуры (рис. 5), что свидетельствует о вовлечении элементов цитоскелета в генерацию сокращений гладкомышечных клеток, индуцированных деполяризацией мембраны.

Увеличение концентрации колхицина до 100 мкМ не привело к дополнительному снижению амплитуды гиперкалиевой контрактуры гладкомышечных скгементов. Поэтому в последующих экспериментах использовался колхицин в концентрации 10 мкМ.

3.2. Влияние колхицина на сокращения гладкомышечных сегментов аорты, вызванные стрикцией клеток в гиперосмотическом растворе. Амплитуда сокращений гладкомышечных сегментов при действии раствора Кребса, содержащего 150 мМ сахарозы, составляла 51.8±9.0 % (п=9) в сравнении с величиной контрольного гиперкалиевого сокращения.

После 90-минутной предобработки гладкомышечных сегментов аорты колхицином (10 мкМ) амплитуда сокращения ГМ в гиперосмотическом растворе снизилась и составила 35.9±9.6 % (п=8, р<0.05) от контрольного гиперкалиевого сокращения (рис. 6). Полученные результаты свидетельствуют о вовлечении элементов цитоскелета в развитие сокращений, индуцированных гиперосмотической стрикцией клеток.

3.3. Влияние колхицина на сокращения гладкомышечных сегментов аорты, вызванные набуханием клеток в гипоосмотическом растворе. После инкубации сегментов в растворе Кребса, содержащем 10 мкМ колхицина, амплитуда и длительность сокращений, вызванных гипоосмотическим раствором, достоверно не изменялись.

| Колхицин (10 мкМ) {

Г—---,-,-

0 0.5 2.0 2.6

Время (часы)

Рис.5. Влияние колхицина на гиперкалиевое сокращение гладкомышечного сегмента аорты

Эти данные свидетельствуют о том, что дезинтеграция колхицином цитоскелета не влияет на тран-зиторное сокращение сегментов аорты при гипоосмотическом набухании клеток, а следовательно, можно предполагать, что хлорные токи, ответственные за деполяризацию мембраны ГМК в этих условиях [Апйпо£епоуа У.Э. е1 а1., 2004], не зависят от состояния цитоскелета.

3.4. Влияние колхицина на сократительные реакции сегментов аорты в модели изоосмотической стрикции клеток. После 90-минутной предобработки колхицином (10 мкМ) амплитуда сокращений при изоосмотической стрикции достоверно уменьшилась и составила 15.8±5.2 % (п=6, р<0.05) по сравнению с величиной контрольной гиперкалиевой контрактуры (рис.7). Длительность сократительного ответа не изменилась.

Следовательно, цитоскелет принимает участие в обеспечении сокращений гладкой мышцы в условиях изоосмотической стрикции.

Результаты, полученные с использованием дезинтегратора ак-тинового и тубулинового элементов цитоскелета колхицина, свидетельствуют о вовлечении элементов цитоскелета в сократительные ответы при гиперкалиевой деполяризации, гипер- и изоосмотической стрикции клеток.

Для изучения роли микроту-бул в сократительных реакциях гладкомышечных сегментов аорты мы использовали алкалоид винбластин, который деполимеризует микротубулы.

3.5. Влияние винбластина на сокращения сосудистых гладких мышц, вызванные гиперкалиевым раствором. Добавление 10 мкМ винбластина в раствор Кребса не изменяло исходное МН гладкомышечных сегментов аорты. После предобработки гладкомышечных препаратов в течение 60 мин. винбластином

17.5 10 иМ КС1

15.0

/ ' 1

* 10.0 - 1 |

с >« 1 7.5- ! 1

о ? 5-0- X X « » 2.5£ | 1

0- V

Рис.6. Влияние колхицина на амплитуду сокращения гладкомышечного сегмента аорты, вызванного стрикцией клеток в гиперосмотическом растворе

17.5 15,0

X X

; 12.5

£10.0 с

I М «

X £.0

I 2.5 0

Колхицин {10 мкМ]

0.5 1,0 1.5 3.5

Время (часы)

Рис.7. Влияние колхицина на амплитуду сокращения, вызванного изоосмотической стрикцией гладкомышечных клеток аорты_

(10 мкМ) амплитуда сокращений сосудистых сегментов, вызванных гиперкалиевым раствором Кребса достоверно не изменилась и составила 103.9±6.5 % от контрольного гиперкалиевого сокращения (п=6, р>0.05).

Эти данные указывают на то, что микротубулы не участвуют в генерации сокращений при деполяризации мембраны ГМК гиперкалиевым раствором.

3.6. Влияние винбластина на сокращения сосудистых гладких мышц, вызванные гиперосмотической и изоосмотической стрикцией. Предобработка гладкомышечных препаратов аорты винбластином (ЮмкМ, 60 мин.) приводила к снижению амплитуды сокращения, вызванного гиперосмотическим раствором до 35.13±3.4 % (п=6, р<0.05) от контрольного гиперкалиевого сокращения.

Амплитуда сокращений, индуцированных изоосмотической сгрикцией, после предобработки винбластином не изменилась.

Таким образом, по данным экспериментов с винбластином, микротубулы не играют существенной роли в обеспечении сократительных ответов, вызванных деполяризацией мембраны ГМК, а также изоосмотической стрикцией. Вместе с тем, ингибирование полимеризации микротубул достоверно уменьшает величину сокращений сегментов аорты в ответ на стрикцию в гиперосмотическом растворе.

Известно, что фибриллярный актин, образованный мономерами G-актина, является структурным элементом цитоскелета. В клетке G-актин находится в равновесии с F-актином; их соотношение позволяет судить о целостности цитоскелета [Okamato К.1., 2004; Connelly J.T. et al. 2010].

3.7. Изучение соотношения F- и G-актина в ГМК аорты при действии гиперкалиевого, гипо- и гиперосмотического растворов. Для определения соотношения F- и G- актина использовали метод флуоресцентной микроскопии.

При деполяризации мембраны гиперкалиевым раствором, при сокращениях, вызванных гипер- и гипоосмотическими растворами, отношение F/G актина смещалось в сторону F-актина. При действии гиперосмотического раствора это отношение более чем в 2 раза превышало исходные значения (табл.1).

Таблица /

Соотношение F- и G-актина в гладкомышечных клетках аорты при

действии гнперкалиевого, гипо- и гиперосмотического растворов

Контроль (F/G) Гиперкалиевое сокращение (30 мМ KCI) Сокращение, вызванное гипоосмотическим раствором (40.4 мМ NaCl) Сокращение, вызванное гиперосмотическим раствором (150 мМ сахарозы)

1.05±0.44 1.56±0.25 * 1.78±0.58 * 2.40±0.31 #

* - статистическая значимость различий по сравнению с контролем (р<0.05)

# - статистическая значимость различий по сравнению с контролем (р<0.01)

3.8. Влияние цитохалазина В на сокращения сосудистых гладких мышц, вызванные гиперкалиевым раствором. Для определения участия актиновых микрофиламентов цитоскелета в сократительных ответах сегментов аорты использовали цитохалазин В.

Добавление 10 мкМ цитохалазина В в раствор Кребса приводило к снижению исходного МН сегментов аорты, которое к 40-ой минуте составило 9.7±3.5 % (п=6, р<0.05) от контрольной гиперкалиевой контрактуры.

После предобработки гладкомышечных сегментов цитохалазином В (10 мкМ, 40 мин.) амплитуда сокращений, вызванных гиперкалиевым раствором, снизилась до 40.1±4.9 % (п=6, р<0.05) от контрольных значений.

Полученные данные свидетельствуют о том, что микрофиламенты цитоскелета вовлечены в механизмы, обеспечивающие поддержание исходного МН и генерацию сокращений сосудистых гладких мышц, индуцированных деполяризацией мембраны ГМК гиперкалиевым раствором.

3.9. Влияние цитохалазина В на сокращения, вызванные гиперосмотической и изоосмотической стрищией сосудистых гладкомышечных клеток. После инкубации сегментов в течение 40 мин. в растворе, содержащем 10 мкМ цитохалазина В амплитуда сокращений ГМК аорты, вызванных гиперосмотическим раствором, уменьшилась до 17.2±3.8 % (п=6, р<0.05) от контрольного гиперкалиевого сокращения. Величина сокращений, индуцированных изоосмотической стрикцией, после предобработки препарата цитохалазином В снизилась до 6.5±1.5 % (п=6, р<0.05) от контрольного гиперкалиевого сокращения. Эти данные свидетельствуют об участии актиновых филаментов цитоскелета в развитии сокращений сосудистых ГМК, вызванных гипер- и изоосмотической стрикцией.

Угнетение цитохалазином В сокращений гладкой мышцы аорты в ответ на деполяризацию мембраны может быть обусловлено нарушением оперирования потенциал-зависимых Са2+-каналов, открывание которых в этом случае является основным механизмом увеличения концентрации иоиов кальция в цитозоле и активации сокращения. По мнению Ы.5рсге1аЫ$ (2000), такой эффект цитохапазина В может быть связан с освобождением нерецепторной формы тирозиновой протеинкиназы (с-Бгс) от цитоплазматической поверхности плазмалеммы в цитозоль. Как следствие, будет нарушаться Туг-РК-зависимое фосфорилирование потенциал-зависимых Са2+-каналов и их способность активироваться при деполяризационных смещениях мембранного потенциала в гиперкалиевом растворе.

Снижение цитохалазином В амплитуды сокращений, вызванных гипер- и изоосмотической стрикцией клеток указывает на участие микрофиламентов цитоскелета в объем-зависимой регуляции механического напряжения сосудистых ГМ.

3.10. Изучение роли цитоскелета в регуляции сократительной активности сосудистых гладких мышц при действии фенилэфрина. Для определения участия цитоскелета в генерации сокращений сегментов аорты при стимуляции агадренорецепторов изучалось влияние колхицина, винбластина и цитохалазина В на эффекты фенилэфрина.

Фенилэфрин (0.01, 0.1, 1 и 10 мкМ) в растворе Кребса вызывал дозозависимое увеличение МН гладкомышечных сегментов аорты (табл.2).

После предобработки гладких мышц колхицином амплитуда сокращений сосудистых сегментов, вызванных добавлением фенилэфрина в тех же концентрациях, статистически значимо снижалась (табл.2).

Таблица 2

Влияние колхицииа на фенилэфрин-ипдуцированные сокращения _гладкомышечных сегментов аорты _

Амплитуда сокращения, вызванного фенилэфрином

0.01 мкМ 0.1 мкМ 1 мкМ 10 мкМ

Контроль, % 10.8±7.4 74.1±9.2 103.1 ±4.9 107.8±6.9

+Колхицин (10 мкМ), % 3.7±1.5 * 31.1±2.8 * 81.8±2.9 * 87.7±10.3 *

* - статистически значимые различия по сравнению с амплитудой фенилэфрин-индуцированных сокращений в отсутствие колхицина (р<0.05)

На фоне цитохалазина В (10 мкМ, 40 мин.) амплитуда сокращений, вызванных 1 мкМ фенилэфрина уменьшилась до 20.6±3.7 % (п=6, р<0.05) от величины контрольного фенилэфрин-индуцированного (1 мкМ) сокращения.

Предобработка гладкомышечных препаратов аорты винбластином (10 мкМ, 60 мин.) приводила к увеличению амплитуды сокращений, вызванных 1 мкМ фенилэфрина, до 121,0± 12.1 % (п=6, р<0.05) от контрольного фенилэфрин-индуцированного сокращения.

Методом флуоресцентной микроскопии было показано, что при действии фенилэфрина в той же концентрации соотношение Р и й-актина сместилось в сторону Р-актина (2.27±0.31 % по сравнению с 1.05±0.44 % в контроле, п=7, р<0.01).

Как следует из полученных данных, актиновые элементы цитоскелета и микротубулы вовлекаются в развитие фенилэфрин-индуцированного сокращения. Это дает основание предполагать участие цитоскелета в оперировании сигнальных путей, включаемых стимуляцией а,-адренергических рецепторов. Угнетение цитохалазином В сокращений гладкомышечных сегментов аорты при действии ФЭ, также как и в случае деполяризации мембраны ГМК в гиперкалиевом растворе, может быть связано с нарушением оперирования потенциал-зависимых Са-каналов Ь-типа [Ыакашига М. й а1., 2000], открывание которых является одним из ключевых этапов генерации фазного компонента сокращения в ответ на стимуляцию арадренорецепторов. Деполимеризация микро-тубул в присутствии винбластина, напротив, вела к повышению сократительной активности исследуемых ГМК. К. С1п1а1еу (2001) показал участие микроту-бул в регуляции ЯЬо-киназы. Активация этой киназы угнетает фосфатазу легких цепей миозина и, таким образом, увеличивает степень фосфорилирования легких цепей миозина. Ослабление негативного контроля активности Юю-киназы со стороны микротубул при их деполимеризации может быть причиной

усиления сокращений ГМК в ответ на фенилэфрин в присутствии винбластина.

3.11. Исследование участия :\'а \ К',2СГ-котранспортера в регуляции сократительной активности сосудистых гладкомышечных клеток. Согласно данным С.Н.Орлова [1992], гиперосмотическое воздействие ведет к стрикции клеток, сопровождающейся поддерживаемой активацией NKCC. Предобработка сегментов в течение 15 мин. ингибитором NKCC буметанидом (100 мкМ) не изменяла величины базального тонуса, но вызывала снижение величины сокращений при действии гиперкалиевого раствора до 76.6± 3.5% (п=5, р<0.05) от контрольного сокращения (30 мМ KCl). При фенилэфрин-индуцированном сокращении предобработка гладкомышечного препарата буметанидом (100 мкМ) снижала амплитуду сокращений до 53.7±3.2 % (п=8, р<0.05) от контрольного ФЭ-индуцированного сокращения. Полученные данные свидетельствуют о том, что NKCC участвует в сократительных реакциях ГМ, индуцированных деполяризацией мембраны и стимуляцией а-адренергических рецепторов. На кардиомиоцитах крысы показано, что NKCC регулируется а,-адренергической стимуляцией путем фосфорилирования этого белка с участием ERK-пути [Andersen G. et al., 2004]. Вероятнее всего в сосудистых гладких мышцах а,-адреномиметики активируют NKCC. Следствием активации котранспорта будет повышение электрохимического потенциала ионов хлора, усиление СГ- токов и более выраженная деполяризация мембраны ГМК. Выключение буметанидом этого звена в механизмах формирования сократительной реакции сосудистых ГМК при действии фенилэфрина ведет к снижению эффективности их действия.

Активность NKCC модулируется изменениями клеточного объема [Lang F. et al., 1998; Mongin A.A., Orlov S.N., 2001; Anfinogenova Y.D. et al., 2004], зависит от состояния цитоскелета и при разрушении актиновых филаментов цитохалазинами в большинстве типов клеток происходит ингибирование этого переносчика [Orlov S.N. et al., 1996; Haas M., Forbush В., 1998; Russell J.M., 2000]. В частности, в культуральных ГМК из аорты крысы цитохалазин или не оказывал влияния на активность NKCC [Smith J., Smith L., 1987], или ингибировал его на -70 % [Orlov S.N. et al., 1995]. Однако имеются также сообщения о том, что деполимеризация актинового цитоскелета ассоциирована с активацией NKCC в клетках Ehrlich ascites tumor cells [Jessen B.S., Hoffmann E.K., 1992] и клетках Т84 [Mathews J. et al., 1997].

На фоне действия колхицина (10 мкМ) добавление буметанида (100 мкМ) приводило к снижению величины сократительных ответов как на деполяризацию мембраны в гиперкалиевом растворе ГМК до 35.8±7.5 % от контрольного гиперкалиевого сокращения, так и ФЭ-индуцированных сокращений, величина которых составила 7.5±1.8 % от контрольного ФЭ-индуцированного сокращения (п=4, р<0.05).

На фоне действия нокодазола (10 мкМ) добавление буметанида (100 мкМ) не вызывало значимых изменений величины гиперкалиевого сокращения, а амплитуда ФЭ-индуцированных сокращений в таких условиях снижалась до 64.3±8.7 % (п=4, р>0.05).

Добавление буметанида (100 мкМ) на фоне действия цитохалазина О (0.05 мкМ) приводило к снижению как гиперкалиевых, так и ФЭ-индуцированных сокращений до 2.2±0.8 % и 4.1±3.2 % от величины контрольных сокращений (п=4, р<0.05), соответственно.

Таким образом, усиление релаксирующего влияния буметанида на ГМ после предобработки колхицином или цитохалазином О свидетельствует о вовлечении микрофиламентов цитоскелета в процессы объем-зависимой регуляции.

4. Изучение роли цитоскелета в механизмах действия АФК на сократительные реакции гладко-мышечных сегментов аорты

4.1. Влияние дестабилизации элементов цитоскелета на эффекты оксида азота. Нитропруссид натрия в концентрации 0.05 мкМ вызывал расслабление близкое к полумаксимальному. 90-минутная предобработка гладкомышечных сегментов колхицином статистически значимо снижала влияние 0.05 мкМ НП на исследуемую ГМ (рис.8), что свидетельствует о вовлечении элементов цитоскелета в реализацию расслабляющего действия оксида азота на сокращения сосудистых ГМ, вызванных депс растворе.

В присутствии нокодазола расслабляющее влияние НП на предсокращен-ную гиперкалиевым раствором (30 мМ КС1) гладкую мышцу статистически значимо снижалось. На фоне действия нокодазола амплитуда сокращений при добавлении 0.05 мкМ НП уменьшалась до 75.5±8.1 % (п=6, р<0.05), против 41.6-3.7 % в его отсутствии. Расслабляющее действие НП (0.05 мкм) на фоне цитохалазина В статистически значимо усиливалось: сосудистый сегмент расслаблялся полиостью (п=6, р<0.05).

Эти данные указывают на то, что микротубулы вовлечены в механизмы расслабляющего действия оксида азота на ГМК аорты.

Метиленовый синий (10 мкМ), добавленный после обработки гладкомышечных препаратов'колхицином (10 мкМ, 90 мин.), значимо уменьшал расслабляющее влияние НП (табл.3).

Полученные результаты свидетельствуют о вкладе элементов цитоскелета в реализацию цГМФ-независимого компонента расслабляющего действия НП.

Для выяснения вклада цитоскелета в обеспечение цГМФ-зависимого компонента расслабляющего действия оксида азота были проведены исследования с использованием проникающего аналога цГМФ - дибутирил-цГМФ.

Я 0.5 2Л

дреия (часы)

Рис.8. Влияние нитропруссида натрия на механическое напряжение гладкой мышцы аорты, предсокращенной гиперкалиевым (30 мМ KCl) раствором

после предобработки колхицином_

эляризацией мембраны в гиперкалиевом

Таблица 3

Влияние колхицина на эффекты НП и дибутирил-цГМФ в гладкой мышце

Амплитуда сокращений, %

30 мМ КС1 +НП(0.05 мкМ) 30 мМ КС1+метиленовый синий (10 мкМ) +НП(0.05 мкМ) 30 мМ КС1 +Дибутирил-цГМФ (100 мкМ)

Контроль 41.6±3.7 83.2 ±5.7 78.5±6.4

+Колхицин (10 мкМ) 68.9±7.2 * 91±1.2 * 91.4±7.3 *

* - статистически значимые различия по сравнению с эффектами НП или дибутирил цГМФ в отсутствии колхицина (р<0.05)

Дибутирил-цГМФ (100 мкМ) вызывал снижение МН гладкомышечных сегментов аорты, предсокращенных гиперкалиевым раствором до 78.5±6.4% (п=5, р<0.05) от контрольного сокращения (30 мМ КС1). После обработки гладкомышечных препаратов колхицином (10 мкМ) действие дибутирил-цГМФ статистически значимо снижалось (табл.3).

Полученные данные свидетельствуют о вовлечении цитоскелета в реализацию цГМФ-зависимого и независимого от этого циклического нуклеотида действия оксида азота на механическое напряжение гладкой мышцы аорты.

Результаты проведенных исследований указывают на то, что эффективность расслабляющего действия оксида азота в гладкомышечных клетках аорты зависит от состояния микротубул и микрофиламентов. При этом они вовлечены в различные процессы, которые являются мишенями для N0. По -видимому, микрофиламенты контролируют внутриклеточные системы или процессы, поддерживающие сокращение, напротив, микротубулы прямо или опосредованно участвуют в реализации расслабляющего действия N0.

4.2. Исследование роли цитоскелета в регуляции оксидом азота сокращений гладкой мышцы аорты при действии фенилэфрина. После 90-минутной обработки колхицином расслабляющее влияние 0.005 мкМ НП на ФЭ-индуцированные сокращения ГМК статистически значимо усиливалось (40.2±3.6 %, п=6, р<0.05 от величины ФЭ-индуцированного сокращения в присутствии только колхицина. Полученные результаты свидетельствуют об участии цитоскелета в механизмах действия оксида азота на сокращения гладкой мышцы аорты, вызванные стимуляцией агадренергических рецепторов.

После предобработки гладкомышечных сегментов нокодазолом или цито-халазином П наблюдалось статистически значимое усиление расслабляющего действия НП: сосудистые сегменты под влиянием НП (0.005 мкМ) в первом случае расслаблялись до 33.3±2.1 % (п=6, р<0.05), в сравнении с 57.4±6.3 % без нокодазола, во втором - расслаблялись полностью (п=б, р<0.05).

Как следует из полученных данных, эффективность действия оксида азота на сокращения ГМК, вызванные фенилэфрином, зависит от состояния микрофиламентов и микротубул. При этом, по-видимому, микротубулы в большей степени, чем микрофиламенты участвуют в реализации расслабляющего действия оксида азота на гладкую мышцу аорты.

4.3. Исследование роли цитоскелета в механизмах регуляции перекисью водорода сокращений гладкой мышцы аорты. Как показано в ряде исследований [Valen G. et al„ 1999; Aksenov M.Y et al., 2001; Dalle-Donne I. et al., 2001] цитоскелет может быть одной из мишеней для АФК. После предобработки сосудистых сегментов колхицином (10 мкМ, 90 мин.) активирующее влияние Н202 на сокращения, вызванные хлоридом калия, статистически значимо не изменялось. МН при действии Н202 (500 мкМ) увеличивалось до 125.6±5.1 % (п=8) от величины гиперкалиевого сокращения в присутствии колхицина.

Предобработка сосудистых гладкомышечных препаратов колхицином статистически значимо усиливала расслабляющее действие Н202 на сокращения, вызванные фенилэфрином. Перекись водорода на фоне действия колхицина снижала амплитуду фенилэфрин-индуцированных сокращений до 16.5±2.1 %, против 48.3±3.5 % (п=8, р<0.05) в его отсутствии.

После 60-ти минутной обработки сосудистых сегментов нокодазолом (10 мкМ) активирующее влияние перекиси водорода (500 мкМ) на сокращения гладких мышц, вызванные хлоридом калия, статистически значимо не изменялось: МН составляло 118.6±2.9 % (п=8) от величины гиперкалиевого сокращения в присутствии нокодазола. Расслабляющее влияние перекиси водорода (500 мкМ) на сокращения, вызванные ФЭ, после предобработки сосудистого сегмента нокодазолом (10 мкМ), также не изменялось: МН составляло 57.2±3.7% (п=6) от амплитуды ФЭ-индуцированного сокращения в присутствии нокодазола.

Обработка сосудистых сегментов цитохалазином D (0.5 мкМ, 30 мин.) не влияла на активацию перекисью водорода (500 мкМ) сокращений, вызванных гиперкалиевым раствором. Механическое напряжение при действии Н202 увеличивалось до 123.3±3.5 % (п=6) от величины гиперкалиевого сокращения в присутствии цитохалазина D. После предобработки гладкомышечных сегментов цитохалазином D (0.5 мкМ, 30 мин.) релаксирующее влияние Н202 (500 мкМ) на сокращения, вызванные ФЭ, статистически значимо увеличивалось. Перекись водорода на фоне действия цитохалазина D снижала амплитуду ФЭ-индуцированных сокращений до 11.6±0.8 %, против 48.3±3.5 % (п=8, р<0.05) в отсутствии только цитохалазина D.

Потенцирование эффектов перекиси водорода на фоне колхицина при фенилэфрин-индуцированном сокращении гладких мышц аорты свидетельствует о вовлечении цитоскелета в механизмы расслабляющего действия Н202. Данные, полученные в экспериментах с нокодазолом и цитохалазином D, указывают на то, что микрофиламенты, но не микротубулы, участвуют в реализации расслабляющего влияния перекиси водорода на сосудистые ГМ, предсокращенные фенилэфрином. Активирующее влияние

перекиси водорода на сокращения, индуцированные гиперкалиевым раствором,

5. Исследование роли перекиси водорода и цитоскелета в регуляции циклическим АМФ сократительной активности

сосудистых гладкомышечных клеток

Известно, что цАМФ играет ключевую роль в расслаблении гладких мышц в ответ на стимуляцию ß-адренорецепторов и этот процесс обусловлен активацией калиевой проводимости мембраны [Silva A.S, Zanesco А, 2010].

Для увеличения внутриклеточной концентрации цАМФ использовали активатор аденилатциклазы ди-терпен форсколин, который в концентрации 1 мкМ вызывал близкое к полу максимальному (49.7±7.8 % от контрольного гиперкалиевого сокращения, п=7, р<0.05) снижение механического напряжения гладко-мышечного препарата, предсокращенного гиперкалиевым раствором.

Перекись водорода (500 мкМ) на фоне действия форсколина (1 мкМ) увеличивала механическое напряжение гладкомышечного препарата, предсокращенного гиперкалиевым раствором на 24±4.5 % (п=4, р<0.05, рис.9), что не отличалось от действия Н:02 в отсутствие форсколина (25.2±2.1 %). Полученные данные указывают на то, что возбуждающее действие Н202 на гладкие мышцы, предсокращенные гиперкалиевым раствором, не связано с оперированием цАМФ-опосредованной сигнальной системы сосудистых ГМК.

Расслабляющее влияние форсколина на предсокращенные гиперкалиевым раствором гладкомышечные сегменты достоверно не изменялось как после предобработки 10 мкМ колхицина (63.9±9.5 %, п=5, р>0.5), так и 10 мкМ винбластина (70.1±13.5 %, п=5, р>0.05). На фоне действия 10 мкМ цитохалазина В наблюдалось достоверное усиление релаксирующего действия форсколина. Сосудистый сегмент под влиянием форсколина в этих условиях расслаблялся до 15.8±1.34 % (п=5, р<0.05) от величины гиперкалиевого сокращения в присутствии цитохалазина.

Из полученных результатов следует, что эффективность функционирования цАМФ-опосредованной сигнальной системы в ГМК аорты в большей мере зависит от состояния актинового, но не тубулинового элементов цитоскелета. Усиление расслабляющего действия форсколина после обработки гладкой мышцы цитохалазином В может быть свидетельством взаимодействия актино-

не зависит от состояния цитоскелета.

11.5

15.0

й 12.5

а 10.0

* 5.0

2.5

I Фоцско.ищ. 1 мкМ j

в 0.5 1.0 1.5

Вр«.\гв (часы)

Рис.9. Влияние перекиси водорода на сокращение гладкой мышцы аорты, вызванное гиперкалиевым растворам (ЗОмМ КС1) на фоне действия форсколина

вых филаментов и цАМФ-зависимой протеинкиназы в регуляции оперирования потенциал-зависимых Са2+-каналов L-типа.

6. Влияние сероводорода на сократительную активность гладкой мышцы аорты

Для изучения влияния и механизмов действия сероводорода в экспериментальной практике широко используется его донор - гидросульфид натрия (NaHS) [Wang R„ 2003].

NaHS в концентрациях 5-1000 мкМ не влиял на исходное МН сосудистых сегментов. На фоне гиперкалиевого предсокращения NaHS (5, 10, 50 мкМ) вызывал прирост МН, а в концентрациях 500 и 1000 мкМ сероводород снижал МН гладкомышечных препаратов (табл.4).

При действии 100 мкМ NaHS наблюдалась двухфазная реакция гладкомышечного сегмента: транзиторное увеличение МН до 127.5-1-5.7 % с последующим снижением констрикции до 112.2±2.4 % (п=9, р<0.05) от контрольного гиперкалиевого предсокращения.

Таблица 4

Влияние NaHS на механическое напряжение гладкомышечных сегментов _аорты, предсокращенных гиперкалиевым раствором_

Амплитуда сокращений, вызванных гиперкалиевым (ЗОмМ КС1) раствором, %

1 мкМ NaHS 5 мкМ NaHS 10 мкМ NaHS 50 мкМ NaHS 100 мкМ NaHS 500 мкМ NaHS 1000 мкМ NaHS

Контроль, п=9 Ю3.9±1.9 109.1±2.5 * 115.9±3.4 * И8,5±3.5 * 112.2±2.4 * 64.9±7.5 * 48,3±5.0 *

+Тетраэтил-аммоний (10 мМ), п=6 100.9±0.6 103.8±0.9 Ю4.9±1.7 * 108.5±2.3 * 116.7±3.7 * 106.4±7.8 * 95.4±7

* - статистически значимые различия по сравнению с контрольным гиперкалиевым сокращением (р<0.05)

На фоне действия тетраэтиламмония (10 мМ) наблюдалось снижение величины констрикторного влияния низких (10 и 50 мкМ) концентраций №НБ и обращение эффекта высоких: МН при действии 500 мкМ ШШ увеличивалось до 106.4±7.8 % (п=6, р<0.05), а расслабление ГМ, вызываемое добавлением 1000 мкМ значимо уменьшалось (табл. 4).

во всем диапазоне концентраций (5-1000 мкМ) приводил к снижению МН гладкомышечных сегментов, предсокращенных ФЭ (10 мкМ) (табл.5). На фоне действия тетраэтиламмония релаксирующее действие ЫаШ на ФЭ-индуцированное сокращение уменьшалось (табл. 5).

Таблица 5

Влияние N8118 на механическое напряжение гладкомышечных сегментов ______ аорты, предсокращенных раствором феиилэфрина_

Амплитуда сокращения, вызванного фенилэфрином (10 мкМ), %

1 мкМ 5 мкМ 10 мкМ 50 мкМ 100 мкМ 500 мкМ 1000 мкМ N^8

К'аНБ ЫаШ ЫаШ Ыа!« ЫаШ

Контроль, 98.8±1.4 89.8±4.1 83.0±6.2 62.1±7.3 44.2±7.2 33.8±7.5 17.8±8.1

п=6 * * * * * *

+Тетраэтила

ммониГ) 108.04±3.4 111 9±5,34 109.4±4.7 113.7±9.0 77.6±9.7 61 6±6.2 54.9±3.6

(10 мМ), п=9 * * * * * * *

* - статистически значимые различия по сравнению с фенилэфрин-индуцированным сокращением (р<0.05)

На фоне действия форсколина (0.5, 1 и 10 мкМ) ШНБ в концентрации 10 мкМ оказывал расслабляющее действие, величина которого составила 25.1 ±3.4 % (п=6, р<0.05), 19.4±2.3 % и 16.6±2.7 % (п=6, р<0.05) от величины контрольного гиперкалиевого сокращения, соответственно (рис.10).

ид ».5 3.0

Нро»»я, чпси

ал

11>*ил». час

Рис.10 Влияние сероводорода (10 мкМ на амплитуду сокращений

гладкомышечных сегментов аорты, индуцированных гиперкалиевым раствором (А) и на фоне действия: Б - 0,5 мкМ форсколина, В - 1 мкМ форсколина, Г - 10 мкМ форсколина________

Релаксирующее действие NaHS в концентрации 1000 мкМ в присутствии 0.5 и 1 мкМ форсколина обращалось на констрикторное: механическое напряжение гладкомышечного сегмента, предсокращенного гиперкалиевым раствором, повышалось на 21.0±4.1 % и 9.3±2.6 % от величины контрольного гиперкалиевого сокращения (п=6, р<0.05), соответственно (рис. 11). На фоне 10 мкМ форсколина Ь'аН5 (1000 мкМ) вызывал расслабление гладкой мышцы, величина которого составила 38.0±6.4 % (п=6, р<0.05) от величины контрольного гиперкалиевого сокращения.

ч;

ц «

=5 «

;|ОмМ Е(.1

/ !

КрПкШ, 'ИГЦ(

1мМ N«115

Ч*

фпропмш | м«М

!>„ч |,й г,о ад з.о

Время, «исм

•7Л

=5 «

I мМ N»11.4

Т\./"

фирсммкао^икИ

1,<» »,5 а.о 5Ц5 3,0

Время, ><«гы

па

з «

I \

\ |

=53

ал А»

Puc.ll. Влияние сероводорода (1 мМ N0115) на амплитуду сокращений гладкомышечных сегментов аорты, индуцированных гиперкапиевым раствором (А) на фоне действия: Б - 0,5 мкМ форсколина, В - 1 мкМ форсколина, Г - 10 мкМ форсколина

Полученные данные свидетельствуют о взаимодействии Н28 и цАМФ-опосредованной внутриклеточной сигнальной системы в сосудистых ГМК. Величина и направленность сократительных реакций сосудистых сегментов зависела от внутриклеточной концентрации циклического АМФ. Увеличение форсколином внутриклеточной концентрации цАМФ приводило к устранению активирующего ГМ действия низких (10 мкМ) концентраций сероводорода и инверсии влияния высоких (1000 мкМ) при концентрациях форсколина 0.5 и 1 мкМ.

7. Влияние акгивных форм кислорода на механизмы сопряжения возбуждение-сокращение гладкомышечных клеток мочеточника

7.1. Исследование влияния нитрапруссида натрия на электрическую и сократительную активность ГМК мочеточника. Одновременная регистрация электрической и сократительной активности ГМК препаратов аорты в условиях двойного сахарозного моста затруднена из-за большого содержания в ее стенке соединительной ткани. Поэтому для выяснения участия АФК в сопряжении возбуждения-сокращения в ГМК, исследования проводились на изолированных препаратах мочеточника морской свинки, который является классическим для подобного рода исследований и наиболее изученным объектом.

После 40 минут отмывания препаратов нормальным раствором Кребса в ответ на пороговые и сверхпороговые деполяризующие электрические стимулы регистрировались типичные для ГМК мочеточника потенциалы действия (ПД) и сокращения.

При добавлении в перфузионный раствор нитропруссида натрия в концентрациях 0.1-1000 мкМ исходное МН и мембранный потенциал покоя (МП) ГМК мочеточника не изменялись.

Присутствие НП не влияло на вольт-амперные характеристики мембраны ГМК мочеточника. Эти данные свидетельствуют о том, что НП не изменяет потенциал-зависимую калиевую проводимость мембраны гладкомышечных клеток мочеточника.

Нитропруссид натрия в концентрациях 0.01-50 мкМ не влиял на вызванную деполяризующим током электрическую и сократительную активность ГМК мочеточника. При добавлении 100 мкМ НП плато потенциалов действия и амплитуда сокращений увеличивались до 113.2±6.1 % и 130.4±7.2 % (п=7, р<0.05) относительно исходных значений в нормальном растворе Кребса, соответственно (рис.12). __

Рис.12. Влияние нитропруссида натрия на сокращения и потенциалы действия ГМК мочеточника в присутвии метиленового синего (Б) Справа калибровочный сигнал и отметка времени.

а - сократительная активность; б - потенциалы действия_

Для изучения роли растворимой гуанилатциклазы в реализации эффектов НП использовался ингибитор ГЦ метиленовый синий.

Метиленовый синий в концентрации 10 мкМ не влиял на исходный уровень МП и МН, а также на вызванные ПД и сокращения, но полностью

устранял влияние нитропрусеида натрия на электрическую и сократительную активность ГМК мочеточника (рис.12).

Полученные данные указывают на то, что основной мишенью для нитропрусеида натрия в ГМК мочеточника, как и в сосудах, является растворимая ГЦ.

Блокирование калиевых каналов тетраэтиламмонием (5 мМ) вызывало увеличение амплитуды, длительности плато ПД и силы сокращений ГМК мочеточника до 121.2+9.1 %, 216.3±23.3 % и 157.3+18.1 % (п=7, р<0.05) относительно контрольных значений в нормальном растворе Кребса, соответственно. На фоне действия тетраэтиламмония нитропруссид натрия в концентрации 100 мкМ увеличивал амплитуду пикового компонента, длительность плато ПД и амплитуду сокращений ГМК мочеточника на 11.4±6.1 %, 21.4±9.2 % и 27.1 ±6.0 % (п=7, р<0.05) относительно исходных значений в присутствии тетраэтиламмония, соответственно. В отсутствие тетраэтиламмония эти параметры составляли 12.2±5.1 %, 13.4±4.1 % и 30.6±6.1 % (п=7, р<0.05) относительно контрольных значений в нормальном растворе Кребса.

Таким образом, активирующее действие НП на ПД и сокращения ГМК мочеточника в нормальном растворе Кребса не связано с изменением потенциал-зависимого и Са24-активируемого компонентов калиевой проводимости мембраны ГМК.

7.2. Влияние модуляторов состояния цитоскелета на электрическую и сократительную активность гладкомышечных клеток мочеточника. После обработки гладкомышечных препаратов колхицином (10 мкМ, 90 мин.), происходило уменьшение амплитуды пикового компонента до 86.5±3.6 % без изменения длительности плато ПД и снижение силы сокращений до 84.3±2.6 % (п=7, р<0.05) относительно контрольных значений в нормальном растворе Кребса.

В отличие от этого, винбластин (10 мкМ, 60 мин.) не влиял на амплитуду пикового компонента, но вызывал увеличение длительности плато ПД и амплитуды сокращений до 136.0±16.3 % и 127.0±13.3 % (п=7, р<0.05) в сравнении с контрольными значениями в нормальном растворе Кребса, соответственно.

Цитохапазин В (10 мкМ, 40 мин.) снижал амплитуду пикового компонента ПД и сокращений ГМК до 34.2±7.1 % и 21.7± 1.4 % (п=5, р<0.05) относительно контрольных значений в нормальном растворе Кребса, соответственно. Длительность плато ПД при действии цитохалазина В не изменялась.

Эти данные свидетельствуют о том, что разрушение микрофиламентов цитохалазином В и микротубул винбластином оказывает разнонаправленное влияние на электрическую и сократительную активность ГМК мочеточника. Угнетение ПД и сокращений цитохалазином В может быть обусловлено снижением потенциал-зависимой кальциевой проводимости мембраны ГМК, которая контролируется микрофиламентами [Ыакатига М. е1 а1., 2000].

Известно, что в формировании плато ПД ГМК мочеточника участвуют медленные потенциал-зависимые натриевые и кальциевые токи мембраны.

Можно предположить, что дезинтеграция микротубул винбластином приводит к увеличению натриевого и (или) снижению медленного кальциевого тока. В последнем случае увеличение длительности плато связано с ослаблением лимитирующего его длительность выходящего кальций-активируемого калиевого тока [Баскаков М.Б. с соавт, 1994]. Активирующее сокращение влияние винбластина отсутствовало в сосудистых гладких мышцах, что может служить указанием на особенности участия микротубул в сопряжении возбуждения-сокращения различных типов ГМК.

Форсколин в концентрации 1 мкМ вызывал снижение амплитуды пикового компонента ПД до 85.6±3.0 %, длительности плато до 35.7±4.5 % и силы сократительного ответа до 20.1±5.0 % в сравнении с контрольными значениями в нормальном растворе Кребса (п=7, р<0.05).

Угнетающее действие форсколина на ПД в большей степени связано с активацией калиевой проводимости мембраны гладкомышечных клеток, что подтверждают эксперименты с блокатором калиевых каналов тетраэтиламмонием. На его фоне амплитуда, длительность плато ПД и сила сокращений после добавления форсколина составляли 105.7±15.1 %, 135.4±12.0 %, 155.Ш4.4 % (п=6, р<0.05), соответственно, относительно контроля в растворе Кребса.

После предобработки препаратов колхицином (10 мкМ) форсколин вызывал снижение амплитуды пикового компонента ПД, длительности плато и силы сократительного ответа до 83.9±5.1 %, 38.3±7.1 % и 23.0±6 % (п=6, р<0.05) в сравнении с контрольными значениями в нормальном растворе Кребса, соответственно, что достоверно не отличалось от действия форсколина в отсутствие колхицина.

Предобработка цитохалазином В не влияла на угнетающий эффект форсколина в ГМК мочеточника. Амплитуда, длительность плато ПД и величина сократительных ответов ГМК при действии форсколина снижались до 87.9±3.0 %, 35.8±6.2 %, 21.4±7.1 % (п=7, р<0.05) относительно значений в нормальном растворе Кребса, соответственно. Эти величины близки к контрольным без предобработки цитохалазином.

На фоне винбластина длительность плато ПД и амплитуда сокращений под влиянием форсколина снизились лишь до 85.8±9.1 % и 58±6 % (п=6, р<0.05) относительно контрольных значений в отсутствие винбластина, соответственно.

Таким образом, угнетающее действие форсколина на ПД и сокращения ослаблялось винбластином, но не колхицином или цитохалазином В. Полученные данные свидетельствуют в пользу предположения о том, что в ГМК мочеточника цАМФ-опосредованная сигнальная система оперирует с участием микротубул.

Стимулирующее влияние нитропруссида натрия на фоне действия колхицина усиливалось: при добавлении 100 мкМ НП длительность плато ПД и амплитуда сокращений увеличивались до 133.6±3.4 % и 149.5±5.3 % (п=5, р<0.05), в сравнении с контрольными значениями в нормальном растворе Кребса в присутствии колхицина, тогда как в отсутствие колхицина эти

параметры составляли 113.6±6.3 % и 130.7±7.2 % (п=7, р<0.05) относительно контрольных значений в нормальном растворе Кребса.

На фоне действия цитохалазина В нитропруссид натрия, также как и в нормальном растворе Кребса, повышал длительность плато ПД и амплитуду сокращений ГМ мочеточника на 9.1±6.2 % и 28.5±4.2 % (п=7, р<0.05) относительно исходных значений в присутствии цитохалазина В.

После предобработки гладкомышечного препарата винбластином НП не влиял на амплитуду пикового компонента и длительность плато ПД, амплитуда сокращений ГМК мочеточника при этом увеличивалась до 111.7±6.3 % (п=5, р<0.05) относительно исходных значений в присутствии винбластина, тогда как в отсутствие дезинтегратора микрогубул этот параметр составлял 130.5±7.4% (п=7, р<0.05) относительно контрольных значений в нормальном растворе Кребса.

Из полученных результатов следует, что эффективность оперирования цГМФ-опосредованной сигнальной системы в ГМК мочеточника в большей мере зависит от состояния тубулинового, но не актинового элементов цитоскелета.

7.3. Исследование влияния перекиси водорода на потенциалы действия и сокращения ГМК мочеточника. Н202 в концентрации 1 мкМ не оказывала влияния на электрическую и сократительную активность ГМК мочеточника, тогда как в концентрациях 10, 100 и 500 мкМ вызывала снижение амплитуды пикового компонента ПД до 79.4±14.1 %, 52.7±9.2 %, 18.5±8.3 % (п=6, р<0.05) и амплитуды сокращений до 84.3±7.3 %, 61.5±7.2 % и 12.4±9.1 % (п=6, р<0.05) относительно исходных значений в нормальном растворе Кребса, соответственно. В последующих экспериментах использовали перекись водорода в концентрации 100 мкМ, при действии которой наблюдались близкие к полумаксимальным изменения исследуемых параметров.

В присутствии тетраэтиламмония (5 мМ) перекись водорода в концентрации 100 мкМ не оказывала статистически значимого влияния на электрическую и сократительную активность ГМК мочеточника.

Полученные данные свидетельствуют в пользу того, что угнетающее ПД и сокращения ГМК мочеточника влияние перекиси водорода в нормальном растворе Кребса связано с повышением калиевой проводимости мембраны исследуемых клеток.

7.4. Влияние нитропруссида натрия на объем-зависимую регуляцию электрической и сократительной активности ГМК мочеточника. Как уже указывалось выше, NKCC вовлечен в объем-зависимую регуляцию сократительной активности сосудистых ГМК [Lang F. et al., 1998; Mongin A.A., Orlov S.N., 2001; Anfmogenova Y.D. et al., 2004]. Ингибитор NKCC буметанид в концентрации 10 мкМ на 8-10 минуте действия вызывал гиперполяризацию мембраны и снижение силы сокращений ГМК мочеточника до 83±12 % (п=9, р<0.05) относительно контрольных значений в нормальном растворе Кребса. Амплитуда и длительность плато потенциала действия не изменялись. В более высоких концентрациях (50-100 мкМ) буметанид не влиял на электрическую и сократительную активность ГМК мочеточника.

На фоне блокирования калиевых каналов тетраэтиламмонием (5 мМ) добавление 10 мкМ буметанида приводило к уменьшению длительности плато ПД и амплитуды сокращений ГМК мочеточника до 80.6±16.2 % и 76.4±18.3 % (п=6, р<0.05) от контрольных значений в нормальном растворе Кребса, соответственно.

В присутствии 100 мкМ нитропруссида натрия добавление 10 мкМ буметанида вызывало снижение электрической и сократительной активности ГМК мочеточника. Амплитуда пикового компонента ПД и сокращений составляли 78.5±15.2 % и 79.7±13.5 % (п=6, р<0.05) относительно контрольных значений в присутствии НП, соответственно. Величина анэлектротонических потенциалов и длительность плато ПД не изменялись.

Увеличение концентрации буметанида в растворе до 100 мкМ на фоне нитропруссида натрия приводило к еще большему угнетению сокращений ГМК мочеточника: амплитуда сокращений составляла 71.5±4.2 % (п=6, р<0.05) относительно контрольных значений в присутствии НП. Предобработка гладкомышечных препаратов буметанидом ослабляла активацию сокращений ГМК мочеточника нитропруссидом натрия. Так, при добавлении 100 мкМ НП на фоне действия 10 мкМ буметанида амплитуда сокращений составляла 80.7±12.5 % (п=11, р<0.05) от контрольных значений в присутствии НП. Достоверных изменений электрической активности ГМК не наблюдалось (р>0.05).

Полученные данные свидетельствуют в пользу того, что активация оксидом азота сокращений ГМК мочеточника, по крайней мере, частично, связана со стимуляцией NKCC.

Заключение

На протяжении многих десятилетий в центре внимания исследователей находятся ключевые механизмы внутриклеточной трансдукции сигналов, в том числе обусловленные активными формами кислорода (АФК). АФК вовлечены во внутри- и межклеточную коммуникацию во всех клетках, тканях и органах. Несмотря на то, что их функция аналогична таковой для классических посредников (органические молекулы и Са2+), АФК имеют отличительные признаки. Так как они - растворимые в липидах молекулы, их деятельности не препятствуют клеточные мембраны, хранение этих трансмиттеров в везикулах или органеллах для более позднего освобождения также невозможно. Однако, допускается, что NO может быть связан с гемсодержащими белками и при определенных условиях освобождаться от них, и тогда, очевидно, преобладает другой механизм генерации и регуляции величины внутриклеточного сигнала -это de novo синтез посредника [Ding Y. et al., 1999].

Сочетание деструктивных и защитных эффектов активных форм кислорода (NO, Н20, и др.) позволяют считать их одними из центральных фигур в поддержании жизнеобеспечения клеток, основанном на балансе между физиологическими и патофизиологическими процессами. Исследование редокс-модуляции функций клеток представляет определенные трудности, во-первых потому, что АФК могут не только изменять эффекты вторичных мессенджеров, но и сами выполнять их функции и, во-вторых, нет надежных

специфичных инструментов для управления уровнем таких молекул и они способны легко и быстро модифицировать многие аминокислотные остатки, в том числе цистеина, метионина, гистидина, триптофана и тирозина.

В проведенном исследовании показано, что N0 расслабляет сосудистые гладкие мышцы предсокращенные всеми исследуемыми факторами: деполяризацией мембраны, активацией агадренергических рецепторов, набуханием и стрикцией клеток. Наиболее чувствительными к действию NO являются сосудистые ГМК, стимулированные фенилэфрином.

К настоящему времени накоплено большое количество данных о механизмах действия N0. Оксид азота индуцирует NO-зависимые внутриклеточные процессы посредством активации цитозольного фермента - растворимой гуа-нилатциклаш [Реутов В.П., Орлов С.Н., 1993; Drewett J.G., Garbers D.L., 1994; Северина И.С., 2002]. Установлены молекулярные мишени, которые могут регулироваться I1KG, в том числе Са2'-активируемые К+-каналы [Robertson В.Е. et al., 1993; Stockand J.D., Sansom S.C., 1996; Yang J. et al., 2005], Ca2+ каналы L-типа [Tewari K., Simard J.M., 1997], Са2+-депонирующие и механизмы, выводящие Са2+ из ГМК (Са2+-насосы саркоплазматического ретикулума и плазмалем-мы) [Yoshida Y. et al., 1991], киназа и фосфатаза легких цепей миозина [Lee M.R. et al., 1997]. Есть сведения о существовании цГМФ-независимого механизма регуляции NO [Sobey C.G., Farad F.M., 1997; Alonso-Galicia М. et al., 1999]. Показано, что ТЯРСб-каналы вовлечены в регуляцию NO-цГМФ-ПКС пути [Takahashi S. et al., 2008]. Действие доноров N0 - нитросоединений на электрические и сократительные свойства ГМК достаточно полно исследовано [Капилевич JI.B. с соавт.,1995-2005; Ковалев И.В. с соавт.,1997-2004]. Было показано, что потенциал-зависимые эффекты доноров оксида азота связаны с угнетением кальциевой и/или натриевой проводимостей и повышением калиевой проводимости мембраны ГМК за счет ее кальций-зависимого и АТФ-чувствительного компонентов Потенциал-нечувствительные механизмы расслабляющего действия оксида азота на ГМК связаны с угнетением С-киназной ветви кальциевой сигнальной системы этих клеток.

Наряду с вышеперечисленными путями реализации эффектов NO, проведенное исследование позволяет заключить, что сигнальные каскады, индуцируемые оксидом азота, оперируют с участием микрофиламентов и микротубул. Элементы цитоскелета вовлечены в реализацию цГМФ-зависимого и независимого от этого циклического нуклеотида действия N0 на механическое напряжение гладкой мышцы аорты. Эффективность расслабляющего действия N0 в гладкомышечных клетках аорты зависит от состояния микротубул и микрофиламентов. При этом они вовлечены в различные процессы, которые являются мишенями для N0. По-видимому, микрофиламенты контролируют внутриклеточные системы или процессы поддерживающие сокращение, напротив, микротубулы прямо или опосредованно участвуют в реализации расслабляющего действия оксида азота.

Функциональным антагонистом оксида азота является нейтрализующий его супероксид анион, продуцируемый эндотелиоцитами и гладкомышечными клетками. Однако короткий период жизни супероксид аниона ограничивает роль этой АФК как аутокринного, а тем более паракринного регулятора в сосудах. Его метаболит, перекись водорода, является устойчивой молекулой, и основные эффекты супероксид аниона связывают с действием Н202.

В проведенном исследовании показано, что аппликация Н202 приводит к дополнительному увеличению механического напряжения сосудистых сегментов, вызванного деполяризацией мембраны гиперкалиевым раствором и гипоосмотическим набуханием ГМК. В последнем случае сокращение обусловлено деполяризацией мембраны входящим хлорным током вследствие увеличения электрохимического потенциала этих анионов в гипохлорном гипотоническом растворе и открыванием объем-зависимых и Са2+-активируемых СГ-каналов [Anfinogenova Y.D. et al., 2004]. Констрикторное действие Н202 документировано и в условиях активации форсколином цАМФ-опосредованной сигнальной системы сосудистых ГМК.

Как указывалось выше (гл.5) активатор аденилаггциклазы форсколин вызывает расслабление деполяризованных гиперкалиевым раствором сосудистых сегментов. В литературе имеется много сведений о влиянии активации цАМФ-опосредованного сигнального пути на сокращения гладких мышц, индуцированные деполяризацией мембраны ГМК [Komalavilas Р. et al., 2001; Pulver-Kaste R.A. et al., 2006; Luykenaar K.D., Welsh D.G., 2007], действием агонистов [Kornfeld М., 2001] раздражением механорецепторов [Mills I. et al., 1990; Iba Т. et al., 1992; Cohen .CR. et al., 1997], а также изменением объема клеток [Sandau K.B. et al., 2001; Orlov S.N. et al., 2004]. Феноменология действия агентов, индуцирующих увеличение активности цАМФ однообразна: во всех исследованных типах гладких мышц увеличение внутриклеточной концентрации аденилатциклазы.

Несмотря на многочисленные исследования, вопрос о роли Н202 в регуляции сосудистого тонуса и сократительных ответов ГМК на действие различных возбуждающих и релаксирующих агентов не нашел удовлетворительного решения. Убедительно продемонстрированы как констрикторное, так и расслабляющее влияние Н202, зависящие от вида, принадлежности сосуда к определенному руслу и его состояния [Yang Z. et al., 1998; Taddei S. et al„ 1998; Yang Z.W. et al., 1999; Gao Y.J., Lee R.M., 2001; Blumenstein A., 2004].

Вероятно, в механизмы констрикторного действия Н202 вовлечены потенциал-зависимые Са2+-канапы [Sotnikova R., 1998; Yang Z.W. et al., 1999], так же как и кальций-освобождающие молекулярные структуры саркоплазматического ретикулума [Favero T.G. et al., 1995; Yang Z. et al., 1998], ингибирование Са2+-АТФазы [Grover A.K. et al., 1992]. Допускается выход Ca2+ из митохондрий через образование гидроксильного радикала [Redondo P.C. et al., 2004]. Все эти процессы объединяет общий конечный результат -увеличение внутриклеточной концентрации и принадлежность к кальмодулиновой ветви кальциевой сигнальной системы. Таким образом, Н202

является важным модулятором оперирования этого пути внутриклеточной сигнализации, и ее констрикторное действие на предсокращенную гиперкалиевым раствором гладкую мышцу аорты может быть реализовано через многочисленные молекулярные мишени.

Наряду с этим, Н202 индуцирует сокращение сосудистых ГМК, предобработанных форсколином. т.е. в условиях активации цАМФ-опосредованной сигнальной системы. Имеются данные о том Н202 не влияет на прирост внутриклеточной концентрации цАМФ [Jackson Т.С. et al, 2004; Kim S.H. et al, 2007]. Следовательно, сокращение, вызываемое перекисью водорода в условиях действия форсколина на предсокращенные гиперкалиевым раствором ГМ, по всей вероятности, обусловлено влиянием на молекулярные мишени, реализующие эффекты цАМФ и Са2+.

Вторая группа механизмов, индуцирующих констрикцию сосудистых ГМК и подверженных влиянию перекиси водорода, прямо не связана с увеличением внутриклеточного кальция. Это активация тирозин-киназы [Yang Z. et al, 1998, 1999; Oeckler R.A. et al, 2003], циклооксигеназы [Gao Y.J, Lee R.M. 2001], ПК-C [Yang Z. et al, 1998, 1999], митоген-активируемой протеинкиназы [Yang Z. et al, 1998; Oeckler R.A. et al, 2003, 2005], Rho-киназы [Thakali K. et al, 2005] и фосфорилирование ЛЦМ [Jin N, Rhoades R.A, 1997]. Некоторые из этих путей могут быть определены как кальций-сенситизирующие, т.е. повышающие генерацию мышцей силы без увеличения внутриклеточного кальция [Somlyo А.Р, Somlyo A.V, 2003]. Это приводит к увеличению фосфорилирования ЛЦМ главным образом через ингибирование фосфатазы ЛЦМ, но могут влиять и на активность киназы ЛЦМ, действовать через белки теплового шока, через механизмы, вовлекающие актиновую регуляцию сократительного аппарата ГМК (кальдесмон и кальпонин). Фосфатаза ЛЦМ ингибируется при фосфорилирова-нии интегрин-связанной киназой [Deng J.T. et al, 2001; Muranyi A. et al, 2002], ПК-С [Li L. et al, 1998] и Rho-киназой [Kimura K. et al, 1996; Koyama M. et al, 2000; Jin L. et al, 2004]. Последнее следует особо подчеркнуть в связи с полученными данными о роли цитоскелета в реализации модулирующего действия АФК. Rho-киназа ассоциирована с микротубулами, активируется АФК [Jin L. et al, 2004] и может быть прямо вовлечена в констрикторное действие Н202 [Thakali К. et al, 2005].

Учитывая потенциало-независимость констрикторного действия Н202 на сосудистые сегменты, предсокращенные гиперкалиевым раствором, наиболее вероятным представляется вовлечение группы молекулярных мишеней, воздействие на которые не влечет за собой повышения внутриклеточной концентрации Са2+. Вместе с тем, нельзя исключить и влияние Н202 на кальциевые пулы и кальциевый насос саркоплазматического ретикулума. Наконец, Н202 может приводить к вазоконстрикции через МАРК [Klemke R.L. et al, 1997; D'Angelo G, Adam L.P, 2002]. Показано участие МАРК в сокращении брыжеечной артерии, деполяризованой гиперкалиевым раствором [Lucchesi Р.А. et al, 2005]. Активация перекисью водорода сокращений при гипоосмотическом набухании клеток, вероятно, имеет ту же природу, что и усиление сокращений, вызванных гиперкалиевым раствором.

В проведенном исследовании показано, что Н202 расслабляет изолированные сегменты аорты, предсокращенные фенилэфрином. Эти данные согласуются с литературными [Yang Z. et al., 1999; Ellis A. et al., 2003] и подтверждаются наблюдениями, сделанными на других сосудах [Fujimoto S. et al., 2001; Matoba Т. et al., 2002; Lucchesi P.A. et al., 2005]. Некоторые авторы отмечают эндотелий-зависимый характер этой релаксации сосудов [Bharadwaj L. et al., 1995; Yang Z. et al., 1998, 1999; Hirai T. et al., 2000]. Однако, в проведенных экспериментах установлен эндотелий независимый путь, используемый перекисью водорода для расслабления сосудов при агонист-стимулированном предсокраще-нии. Аналогичные результаты были получены и другими исследователями [Burke-Wolin Т.М. et al., 1991; Barlow R.S. et al., 1998; Fujimoto S. et al., 2001; Lucchesi P.A. et al., 2005]. Для объяснения полученных результатов предлагаются различные механизмы. Так допускается, что Н2Огиндуцированная эндотелий-независимая релаксация обусловлена активацией гуанилатциклазы и аккумуляцией цГМФ [Burke-Wolin Т.М. et al., 1991; Fujimoto S. et al., 2001, 2003]. Принципиально иной подход состоит в том, что Н202-индуцированная релаксация агонист-предсокращенных сосудов обусловлена активацией Ca2t-зависимых [Thengchaisri N., Kuo L., 2003; Barlow R.S. et al., 2000], АТФ-чувствительных [Wei E.P. et al., 1996; Gao Y-J. et al., 2003] и потенциал-зависимых К+-каналов [Gao Y-J. et al., 2003]. В проведенных экспериментах тетраэтиламмоний не оказывал влияния на расслабляющее действие Н202 в предсокращенных фенилэфрином гладкомышечных сегментах аорты. Эти данные указывают на то, что действие Н202 в этих случаях не связано с модуляцией потенциал-зависимой и Са2+-активируемой калиевой проводимости мембраны сосудистых ГМК. В этой связи более предпочтительным представляется цГМФ-опосредованный механизм Н202-индуцированного расслабления ГМК аорты, молекулярные мишени которого обсуждались выше.

Представленные данные о том, что Н202 на фоне колхицина при фенилэфрин-индуцированном сокращении гладких мышц аорты вызывает достоверно большее расслабление, чем в контроле, свидетельствуют о вовлечении цитоскелета в механизмы расслабляющего действия Н202. Данные, полученные в экспериментах с избирательной дезинтеграцией элементов цитоскелета нокодазолом и цитохалазином D, указывают на то, что микрофиламенты, но не микротубулы, опосредуют расслабляющее влияние перекиси водорода в гладкой мышце предсокращенной фенилэфрином.

В отличие от сокращений гладкой мышцы, вызванных фенилэфрином, величина которых цитоскелет-зависимо модулируется перекисью водорода, активирующее действие Н202 на сократительные ответы ГМК при деполяризации мембраны гиперкалиевым раствором не зависит от состояния цитоскелета.

сигнальных систем клеток, равно как и аппликация биологически важных веществ, активирующих сигнальные системы, во многих случаях ведет к изменению объема клеток.

Проведенное исследование убедительно показывает, что разрушение микрофиламентов, а следовательно, и изменение уровня соотношения F/G-актина, играет ключевую роль в сокращениях ГМК сосудов, индуцированных модуляцией клеточного объема.

В отличие от гипер- и изоосмотического сокращений гладких мышц, при гипоосмотическом набухании ГМК активируется потенциал-зависимый вход ионов кальция. В этом смысле механизмы индукции сокращений при гиперкалиевой деполяризации мембраны и набухании ГМК сходны. Действительно, проведенные исследования на гладкомышечных сегментах аорты показали, что перекись водорода вызывает однонаправленную сократительную реакцию на гиперкалиевый и гипоосмотический растворы.

Донор N0 нитропруссид натрия в отличие от Н202 вызывал снижение механического напряжения при действии гиперосмотического раствора и изоосмотической стрикции, и не влиял на гипоосмотическое сокращение.

Таким образом, представленные экспериментальные данные, полученные с цитоскелет-модифицирующими агентами, убедительно свидетельствуют о том, что совместно с регуляцией процессов сопряжения возбуждения-сокращения в ГМК уникальными механизмами внутриклеточной сигнализации, эффективно оперируют процессы, связанные с реорганизацией цитоскелета. Ремоде-лирование цитоскелета регулируется внешними и внутренними сигналами в пространстве и времени и участвует в обеспечении адаптации клеток к окружающей среде, равно как и в регуляции биологической подвижности.

Полученные результаты свидетельствуют о существовании особой ветви регуляции сократительной активности сосудистых ГМК, включающей специфический объем-зависимый ионный транспорт. Изменение объема клеток является своеобразным сигнальным механизмом, который может запускать сокращение гладкомышечных клеток и модулировать возбуждающее действие физиологически активных соединений и деполяризации мембраны ГМК.

Известно, что H2S обладает выраженным защитным действием против повреждения при ишемии/реперфузии миокарда. Один из предполагаемых механизмов реперфузионных повреждений включает генерацию, аккумуляцию и освобождение различных АФК с одновременным расходованием эндогенных антиоксидантов [Hu F.L. et al„ 1993; Zhao W. et al, 2001; Yang G. et al, 2004]. Предобработка H2S уменьшала аритмию изолированного сердца при глобальной ишемии/реперфузии и улучшала выживание миоцитов [Moore P.K. et al., 2003].

Проведенные исследования показали, что сероводород, не являясь по сути АФК, имеет много сходного с ними по механизмам влияния на сократительную активность ГМК. Полученные данные в экспериментах с неселективным блокатором калиевых каналов тетраэтиламмонием позволяют предположить участие калиевой проводимости мембраны в механизмах расслабляющего действия сероводорода на сосудистые ГМК, предсокращенные гиперкалиевым раствором, и этот процесс модулируется активностью аденилатциклазы.

выводы

1. Перекись водорода независимо от эндотелия модулирует сократительные реакции гладких мышц: снижает величину сократительного ответа при действии фенилэфрина, но потенцирует сокращения гладких мышц аорты, вызванные гиперкалиевым раствором. Усиление сокращений деполяризованных гладкомышечных клеток обусловлено влиянием перекиси водорода на потенциал-независимые механизмы активации и поддержания сокращений гладкой мышцы аорты.

2. Микрофиламенты цитоскелета участвуют в формировании исходного механического напряжения гладкой мышцы аорты, вовлечены в генерацию и поддержание сокращений, индуцированных гиперкалиевым раствором, изоосмотической стрикцией и фенилэфрином. Сокращение, индуцированное гиперосмотическим раствором, зависит от состояния микрофиламентов и микротубул.

3. Расслабляющее действие оксида азота на гладкомышечные клетки аорты при действии фенилэфрина зависит от состояния микротубул и микрофиламентов цитоскелета, тогда как при деполяризации мембраны ГМК гиперкалиевым раствором - только микротубул.

4. Снижение перекисью водорода сократительных ответов гладких мышц аорты при действии фенилэфрина осуществляется с преимущественным участием микрофиламентов, тогда как активирующее влияние перекиси водорода на сокращения, индуцированные гиперкалиевым раствором, не зависит от состояния цитоскелета.

5. Перекись водорода потенциирует сокращение, индуцированное гипоосмотическим набуханием. Оксид азота оказывает релаксирующее влияние на сокращения, индуцированный гиперосмотическим раствором и изоосмотической стрикцией.

7. Расслабляющее действие сероводорода в присутствии низких концентраций активатора аденилатциклазы форсколина сменяется сократительным эффектом. Активирующее гладкую мышцу влияние сероводорода снижается при увеличении концентрации форсколина.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Гусакова, C.B. Влияние блокатора микротрубочек колхицина на развитие сократительных реакций сосудистых гладкомышечных клеток / C.B. Гусакова, A.A. Килин, Я.Д. Анфиногенова // «Науки о человеке»: Материалы VI конгресса молодых ученых и специалистов. - Томск. - 2005. - С. 72.

2. Механизмы действия мезатона и гистамина на электрическую и сократительную активность гладкомышечных клеток мочеточника морской свинки: роль Na+K+2Cl"-KOTpaiicnopTa и хлорной проводимости мембраны / И.Л. Миноченко,

A.A. Килин, C.B. Гусакова, Я.Д. Анфиногенова // «Науки о человеке»: Материалы VI конгресса молодых ученых и специалистов. - Томск. - 2005. - С. 78-79.

3. Cell shrinkage-induced smooth muscle contraction: evidence for microfilament mediated signaling / S.V. Gusakova, Y.D. Anfinogenova, A.A. Kilin et al. // J. Of Hypertension: The 15th Europen Meeting on Hypertension. - Milan. - 2005. - V. 23, suppl. 2.-P. S359.

4. Роль Ыа+К+2СГ-котранспорт и хлорной проводимости мембраны в регуляции электрической и сократительной активности гладкомышечных клеток мочеточника морской свинки биологически активными веществами: мезатоном и гистамином / И.В. Ковалев, М.Б. Баскаков, И.Л. Миноченко, Я.Д. Анфиногенова, Ю.Л. Бородин, A.B. Васюков, C.B. Гусакова и др. // Научные труды 1 съезда физиологов СНГ, Сочи. - 2005. - Том 2. - С. 94-95.

5. Роль циклических нуклеотидов в объем-зависимой регуляции электрической и сократительной активности гладкомышечных клеток / C.B. Гусакова, C.B. Кольцова, A.B. Васюков и др. // «Науки о человеке»: Материалы VII конгресса молодых ученых и специалистов. - Томск. - 2006. - С. 100-102.

6. The role cytoskeleton in smooth muscle cell contractile responses evoked by depolarization, Phenylephrine, end Forskolin / S.V. Gusakova, I.V. Kovalev, M.B. Baskakov et al. // J. Of Hypertension: The 16th Europen Meeting on Hypertension. -Madrid. - 2006. - V. 24, suppl. 4. - P. S390.

7. Исследование роли цитоскелета в регуляции циклическими нуклеотидами электрической и сократительной активности гладкомышечных клеток / И.В. Ковалев, C.B. Гусакова, М.Б. Баскаков и др. // Вестник Томского государственного университета: Сборник материалов Всероссийской научной конференции «Механизмы индивидуальной адаптации», посвященной памяти и 100-летию со дня рождения профессора В.А. Пегеля. - Томск. - 2006. - № 23. - С. 63-65.

8. Изучение роли Ма+К+2СГ-котранспорта и хлорной проводимости мембраны в регуляции электрической и сократительной активности гладкомышечных клеток мочеточника морской свинки мезатоном и гистамином / И.В. Ковалев, М.Б. Баскаков, М.А. Медведев, И.Л. Миноченко, A.A. Килин, Я.Д. Анфиногенова, Ю.Д. Бородин, C.B. Гусакова и др. // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. - 2007. -93 №3. - С. 306-317.

9. Гусакова, C.B. Исследование роли цитоскелета в регуляции сократительной активности гладкомышечных клеток аорты крысы / C.B. Гусакова // Бюллетень Сибирской медицины. - 2007. - Т. 6. - №1. - С. 78-82.

10. Цитоскелет-зависимая регуляция цГМФ сократительной активности гладких мышц аорты крысы / О.С. Мельник, C.B. Гусакова, В.В. Дряпочка В.В. Попов // «Науки о человеке»: материалы VIII конгресса молодых ученых и специалистов. -Томск: СибГМУ, 2007. - С. 189-190.

11. Влияние состояния цитоскелета на цАМФ и цГМФ-зависимую рефляцию сократительной активности гладкомышечных сегментов аорты крысы / C.B. Гусакова, И.В.Ковалев, М.Б. Баскаков и др. // «Актуальные проблемы медицины»: материалы межрегиональной научно-практической конференции. -Абакан, 2007.-С. 55-56.

12. Объем-зависимая регуляция сократительной активности гладкомышечных клеток: роль микрофиламентов / C.B. Гусакова, И.В. Ковалев, М.Б. Баскаков и др.

// «Нейрогуморальные механизмы, регуляции органов пищеварительной системы в норме и при патологии»: материалы международной научной конференции. -Томск: СибГМУ, 2007.-С. 62-65. : ■

13. Влияние перекиси водорода на электрическую и сократительную активность гладкомышечных клеток / И.В. Ковалев, C.B. Гусакова,'ŒÇ,, Мельник и др..// «Нейрогуморальные механизмы регуляции органов пищеварительной системы в норме и при патологии»: Материалы международной научной конференции. -Томск: СибГМУ, 2007. - С. 65-68. .' , . "••>.* '

14. Мельник, О.С. Влияние перекиси водорода, на сократительную активность гладкомышечных клеток: роль цитоскелета / Ö..C. Мельник,. Дв. Гусакова,

0. В.Шутова // «Науки о человеке»: Материалы IX конгрессу молодых ученых и

специалистов. - Томск: СибГМУ, 2008. - С. 95-97.

15. Cytoskeleton-dependent mechanisms of smooth muscle contraction /. S. Gusakova,

1. Kovalev, M. Baskakov et al. // Hypertension: The 18th , Scientific Meeting European Society on Hypertension. - Berlin, 2008. - P. 323.

16. Regulation contractile activity in smooth muscle.cell: The role of cytoskeleton and cyclic nucleotides / O. Melnik, S. Gusakova, I. Kovalev et al. // Hypertension: The 18th Scientific Meeting European Society on Hypertension. - Berlin, 2008. - P. 324.

17. Механизмы регуляции электрической и сократительной активности гладкомышечных клеток: роль цитоскелета / М.А. Медведев, М.Б. Баскаков, C.B. Гусакова и др. // Бюллетень сибирской медицины. - 2008. - Т. 7. - № 4. - С. 31-36.

18. Влияние перекиси водорода на фенилэфрин-индуцировашюе сокращение гладких мышц аорты крысы: роль цитоскелета / JI.B. Капилевич, О.С. Мельник, C.B. Гусакова и др. // Вестник российского университета дружбы народов. -2008.-№7.-С. 658-660.

19. Vascular Smooth Muscle Contraction Evoked by Cell Volume Modulation: Role of the Cytoskeleton Network / S.V. Koltsova, S.V. Gusakova, Y.D. Anfinogenova et al. // Cell Physiol Biochem. - 2008. -21 (1-3). - P. 29-36.

20. Цитоскелет и активные формы кислорода в механизмах регуляции сократительной активности гладкомышечных клеток / C.B. Гусакова, М.Б. Баскаков, И.В. Ковалев и др. // Научные труды X международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке». - М.: РУДН, 2009. - С. 1191-1192.

21. Роль оксида азота и элементов цитоскелета в регуляций сократительной активности гладкомышечных клеток/ C.B. Гусакова, М.Б. Баскаков, И.В. Ковалев и др. // Бюллетень сибирской медицины. - 2009. - Т.8. - № 3. - С.17-23.

22. Влияние перекиси водорода на сократительную активность гладкомышечных клеток: роль цитоскелета / И.В. Ковалев, C.B. Гусакова, О.С. Мельник и др. // Бюллетень сибирской медицины. - 2009. - Т.8. - № 4. -С. 41-47.

23. Исследование цитоскелет-зависимых механизмов регуляции сократительной активности гладких мышц / C.B. Гусакова, И.В. Ковалев, М.Б. Баскаков и др. // Российский физиологический журнал им. И.А. Сеченова, - 2009. - Т. 95. - JN» 6. - С. 583-593.

24. Гусакова, C.B. Роль цитоскелета и оксида азота;в 'регуляции фенилэфрин -индуцированных сокращений сосудистых гладких 'мышц / C.B. Гусакова, J1.B. Смаглий, О.С. Мельник // Науки о человеке: материалы X конгресса молодых ученых и специалистов - Томск: СибГМУ. - 2009. - С. 77 - 79.

25. Regulation of contractile activity of smooth muscle cells by reactive oxygen species: evidence for cytoskeleton-mediated signaling / S. Gusakova, M. Baskakov, I. Kovalev et al. // 20th European Meeting on Hypertension Oslo, Norway, June 18-21,-2010.-№28.-P. 350

26. Влияние сероводорода на сократительную активность гладкомышечных клеток аорты крысы / М.Б. Баскаков, С.В. Гусакова, А.С. Желудева и др. II Бюллетень Сибирской медицины. - 2010. -Т.9.-№ 6.- С. 12-17.

27. Гусакова, С.В. Активные формы кислорода в регуляции сократительной активности гладкомышечных клеток / С.В. Гусакова, Л.В. Смаглий, А.С. Желудева // «Науки о человеке»: Сборник статей по материалам XII Российского конгресса молодых ученых с международным участием (Томск, 26-27 мая 2011 г.) - Томск: СибГМУ. - 2011. - С. 72-74.

28. Механизмы регуляции сократительной активности гладкомышечных клеток: роль активных форм кислорода / С.В. Гусакова, М.Б. Баскаков, И.В.Ковалев и др. II Бюллетень Сибирской медицины. - 2011. - Т. 10. - №.3. - С. 30-36.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АФК - активные формы кислорода АБС - альбумин бычьей сыворотки ГМК -гладкомышечная клетка ГЦ - гуанилатциклаза МН - механическое напряжение МП - мембранный потенциал НП - нитропруссид натрия ПД- потенциал действия

ПК С - протеинкиназа С ФЭ - фенилэфрин Н202 - перекись водорода ЫаШ - гидросульфид натрия ЖСС - 1Ма+,К+,2СГ-котранспорт 02" - супероксидный анион ; Н28 - сероводород N0-оксид азота

Подписано в печать 22.08.2011 г. Усл. печ. листов 1,37 Печать на ризографе. Отпечатано в лаборатории оперативно полиграфии СибГМУ 634050, г. Томск, Московский тракт, 2, тел. 53-04-08 Заказ №312 Тираж 110 экземпляров

Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Гусакова, Светлана Валерьевна

ВВЕДЕНИЕ.

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА I.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Особенности молекулярной организации сократительного аппарата гладких мышц.

1.2. Функциональная организация внутриклеточных сигнальных систем.

1.3. Механизмы регуляции объема клеток.

1.4. Строение цитоскелета гладкомышечных клеток.

1.5. Роль цитоскелета в регуляции сократительной активности сосудистых гладкомышечных клеток.

1.6. Активные формы кислорода в регуляции сократительной активности гладких мышц.

ГЛАВА II.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Объект исследования.

2.2. Методики исследования.

2.3. Растворы и реактивы.

2.4. Статистическая обработка.

ГЛАВА III.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Влияние активных форм кислорода на сократительную активность гладкомышечных клеток при гиперкалиевой деполяризации мембраны и действии фенилэфрина.

3.1.1. Влияние нитропруссида натрия на сокращения сосудистых гладких мышц, вызванные гиперкалиевым раствором.

3.1.2. Влияние нитропруссида натрия на фенилэфрин-индуцированные сокращения сосудистых гладкомышечных клеток.95 3.1.3 Влияние перекиси водорода на сокращения сосудистых гладких мышц, вызванные деполяризацией мембраны гиперкалиевыми растворами.

3.1.4. Влияние перекиси водорода на фенилэфрин-индуцированные сокращения сосудистых гладких мышц.

3.1.5. Влияние перекиси водорода на амплитуду сокращений гладкомышечных сегментов аорты, индуцированных гиперкалиевым раствором, фенилэфрином, в условиях ингибирования каталазы.

3.1.6. Исследование роли калиевой проводимости мембраны в реализации эффектов перекиси водорода на сокращения гладкомышечных сегментов аорты, индуцированные гиперкалиевым раствором или фенилэфрином.

3.2. Исследование влияния активных форм кислорода на сократительные реакции гладких мышц в моделях изменения объема клеток.

3.2.1. Сократительные реакции гладкомышечных сегментов аорты в моделях изменения объема клеток.

3.2.2. Влияние активных форм кислорода на сокращения гладкомышечных сегментов аорты в моделях изменения объема клеток.

3.3. Изучение роли цитоскелета в регуляции сократительной активности гладкомышечных сегментов аорты.

3.3.1. Влияние колхицина на сокращения сегментов аорты, вызванные деполяризацией мембраны ГМК гиперкалиевым раствором.

3.3.2. Влияние колхицина на сокращения гладкомышечных сегментов аорты, вызванные стрикцией клеток в гиперосмотическом растворе

3.3.3. Влияние колхицина на сокращения гладкомышечных сегментов аорты, вызванные набуханием клеток в гипоосмотическом растворе

3.3.4. Влияние колхицина на сократительные реакции сегментов аорты в модели изоосмотической стрикции клеток.

3.3.5. Исследование роли микротубул в регуляции сокращений гладких мышц.

3.3.6. Изучение соотношения F- и G-актина в ГМК аорты при действии гиперкалиевого, гипо- и гиперосмотического растворов.

3.3.7. Изучение роли цитоскелета в регуляции сократительной активности сосудистых гладких мышц при действии фенилэфрина.

3.3.8. Исследование участия №+,К+,2СГ-котранспортера в регуляции сократительной активности сосудистых гладкомышечных клеток.

3.4. Изучение роли цитоскелета в механизмах действия АФК на сократительные реакции гладкомышечных сегментов аорты.

3.4.1. Влияние дестабилизации элементов цитоскелета на эффекты оксида азота.

3.4.2. Исследование роли цитоскелета в механизмах регуляции перекисью водорода сокращений гладкой мышцы аорты.

3.5. Исследование роли перекиси водорода и цитоскелета в регуляции циклическим АМФ сократительной активности сосудистых гладкомышечных клеток.

3.6. Влияние сероводорода на сократительную активность гладкой мышцы аорты.

3.7. Влияние активных форм кислорода на механизмы сопряжения возбуждение-сокращение гладкомышечных клеток мочеточника. 176 3.7.1. Влияние активных форм кислорода на электрическую и сократительную активность гладкомышечных клеток мочеточника

3.7.2. Влияние модуляторов состояния цитоскелета на электрическую и сократительную активность гладкомышечных клеток мочеточника

Введение Диссертация по биологии, на тему "АФК-зависимые механизмы регуляции вторичными посредниками электрической и сократительной активности гладких мышц"

Универсальным механизмом адаптации и повреждения клеточных систем является окислительный стресс. Одним из важнейших элементов редокс-системы клеток являются активные формы кислорода (АФК), выполняющие функции вторичных посредников и реализующие лиганд-рецепторные взаимодействия. В число таких лигандов входят гормоны, медиаторы и цитокины. Многочисленные исследования продемонстрировали способность сосудистых клеток, включая эндотелиальные клетки, гладкомышечные клетки (ГМК) и фибробласты, генерировать АФК [174, 202]. К АФК относят супероксидный анион (02"), перекись водорода (Н2О2) и другие пероксиды, а также их радикальные формы, гидроксильный радикал, озон, оксид азота и ряд других соединений [22, 3, 183].

Показано, что АФК активируют протеинкиназу С (ПК-С), фосфолипазу А2, ЫО-синтазу, циклооксигеназу и гуанилатциклазу [322, 198], МАРК- [154, 250] и Шю-киназы [241, 360, 198], которые, кроме того, что находятся под контролем внутриклеточных сигнальных систем или являются их компонентами, сами оказывают регулирующее влияние на уровень АФК в клетке. Получены свидетельства того, что многие эффекты АФК опосредованы изменением ионной проводимости мембраны [148, 310, 380]. Одним из ключевых звеньев в механизмах действия Н202 является модификация калиевой проводимости мембраны ГМК [149, 268, 213,362].

Наряду с изучением механизмов влияния АФК на функциональные свойства сосудов, актуальным представляется исследование роли эндогенных протекторов окислительного стресса в клетках. Одним из наиболее обсуждаемых в последнее время является сероводород (Н28), который в небольших количествах синтезируется в клетках, и получил признание как газотрансмиттер с высоким терапевтическим потенциалом при сердечно-сосудистых заболеваниях [164, 254]. Имеются сведения о том, что кардиопротекторное действие H2S опосредовано активацией АТФ-чувствительных калиевых каналов [225]. Другим возможным механизмом защиты кардиомиоцитов при окислительном стрессе является связывание сероводородом АФК [252].

Несмотря на серьезные успехи в изучении механизмов действия АФК, до настоящего времени нет достаточной ясности в молекулярных основах влияния дисбаланса редокс-зависимых сигнальных систем на сократительную функцию клеток, установлении редокс-чувствительности отдельных каскадов внутри этих систем трансдукции сигналов и редкс-зависимости их взаимодействия.

Поддержание формы и обеспечение мышечной и немышечных форм биологической подвижности, а также электрогенез ГМК во многом определяются цитоскелетом, основными компонентами которого являются актиновые филаменты, микротубулы и промежуточные филаменты [371, 301, 158, 347, 273, 384]. Транспортная функция цитоскелета является одним из факторов, обеспечивающим реализацию сигнального действия вторичных посредников [321]. Изменения состояния элементов цитоскелета влияют на ионные каналы и мембранные транспортеры. В кардиомиоцитах актин-зависимая модуляция показана для Na+/Ca2+-обменника [354], №+-К+-АТФ-азы, рианодиновых рецепторов [332] и потенциал-зависимых натриевых каналов [142]. Имеются данные, свидетельствующие о том, что микротубулы опосредуют транслокацию протейнкиназ, активация которых в большинстве случаев обеспечивает передачу сигналов в клетке [173, 273].

Показано, что сеть цитоскелета является первичной мишенью окислительного стресса [352, 388]. Диссоциация белков цитоскелета является начальным этапом альтерации клеток, вызванной окислительным стрессом. Окислительному повреждению подвергаются отдельные белки цитоскелета [314], однако причины неодинаковой чувствительности его различных элементов к действию АФК неясны [352]. Обнаружено, что Н2О2 вызывает реорганизацию актина в эндотелиальных клетках [327]. В экспериментах на культуре сосудистых ГМК продемонстрировано, что необходимым условием для активации ангиотензином II ЫАО(Р)Н-оксидазы и продукции О2 является интактная сеть актиновых филаментов цитоскелета [300]. Показана существенная роль микротубул в стимуляции аниготензином II продукции Н2Ог [274].

Таким образом, несмотря на значительный прогресс в изучении механизмов регуляции вторичными посредниками сократительной функции гладких мышц, ряд вопросов не нашел удовлетворительного решения. И это, прежде всего, касается взаимоотношений «классических» вторичных посредников, АФК и цитоскелета. Последний, по мнению ряда авторов [348, 371, 297, 273, 384], может являться именно тем звеном внутриклеточной коммуникации, к которому конвергруют различные сигнальные системы и отдельные каскады в пределах одной системы трансДукции сигнала в ГМК. Выяснение механизмов, используемых клетками с участием АФК и опосредованных цитоскелетом, является актуальной задачей современной биологии и медицины, решение которой позволит приблизиться к пониманию условий и способов кооперативных взаимодействий внутриклеточных сигнальных путей в обеспечении регуляции клеточного гомеостаза и функциональных свойств клеток, тканей и органов. Все это может стать основой для разработки молекулярных подходов к управлению функциональными свойствами гладких мышц внутренних органов и кровеносных сосудов при физиологических и патологических состояниях, сопряженных с нарушением внутриклеточной коммуникации, и позволит модернизировать современные медицинские технологии патогенетической терапии большого числа социально-значимых заболеваний.

Цель работы: изучить роль активных форм кислорода и элементов цитоскелета в механизмах регуляции электрической и сократительной активности гладкомышечных клеток.

Задачи исследования:

1. Исследовать участие активных форм кислорода (перекиси водорода и оксида азота) и элементов цитоскелета в сократительных реакциях сосудистых гладкомышечных сегментов При стимуляции (XI-адренергических рецепторов и гиперкалиевой деполяризации мембраны.

2. Изучить роль активных форм кислорода в сократительных реакциях гладких мышц при изменении объема клеток.

3. Выявить вклад Ыа+,К+,2СГ-котранспорта в цитоскелет-зависимую регуляцию электрических и сократительных свойств гладкомышечных клеток.

6. Исследовать механизмы влияния сероводорода на сократительную активность гладкомышечных клеток.

Научная новизна

Впервые установлено разнонаправленное влияние перекиси водорода на сокращения сосудистых гладкомышечных клеток при деполяризации мембраны гиперкалиевым раствором и действии фенилэфрина: снижение величины контрактуры, вызванной фенилэфрином и увеличение ее при действии гиперкалиевого раствора. Генерация потенциалов действия и сокращений гладкомышечных клеток мочеточника . при действии деполяризующего тока дозозависимо угнетается перекисью водорода.

Впервые исследована роль цитоскелета в сократительных реакциях сосудистых гладких мышц, индуцированных изменениями объема клеток. Установлено, что сокращения, вызванные гиперосмотическим сжатием клеток, зависят от состояния микротубул и микрофиламентов. В отличие от этого сократительные ответы, индуцированные изоосмотической стрикцией клеток, подавляются при разрушении только микрофиламентов. Сокращения, вызванные гипоосмотическим набуханием клеток, не зависят от состояния элементов цитоскелета.

Впервые показано, что микрофиламенты цитоскелета участвуют в сокращениях сосудистых гладких мышц, индуцированных деполяризацией мембраны клеток гиперкалиевым раствором, а также в генерации потенциалов действия и сокращений гладкомышечных клеток мочеточника при действии деполяризующего тока. Показано, что микрофиламенты цитоскелета вовлечены в механизмы действия перекиси водорода на сокращения сосудистых гладких мышц, вызванные фенилэфрином, но не гиперкалиевым раствором. Установлено, что в расслабление оксидом азота гладких мышц сосудов, предсокращенных гиперкалиевым раствором вовлечены микротубулы. Впервые показано, что релаксирующее действие оксида азота в сосудистых гладких мышцах при активации оц-адренергических рецепторов фенилэфрином зависит от состояния микрофиламентов и микротубул.

Теоретическая и практическая значимость работы

Результаты исследования являются вкладом в развитие фундаментальных знаний о роли активных форм кислорода и цитоскелета в механизмах регуляции вторичными посредниками сократительной функции гладких мышц. Полученные данные дополняют представления о механизмах сосудистых реакций при гипертонической болезни и патологических состояниях, сопровождающихся нарушениями редокс-состояния организма. Установленные в исследовании взаимодействия активных форм кислорода и элементов цитоскелета создают перспективы для разработки молекулярных технологий управления функциями клеток в норме и при патологии, базирующихся на модификации критических молекулярных мишеней внутриклеточной коммуникации, которые могут быть использованы для модернизации лечебных вмешательств, профилактики, прогнозирования течения и исходов социально-значимых заболеваний. Основные положения работы используются в курсах лекций и практических занятиях, проводимых на кафедрах биофизики и функциональной диагностики, нормальной физиологии Сибирского государственного медицинского университета, на кафедре физиологии человека и животных Томского государственного университета. Методические приемы и полученные данные используются в научных исследованиях, выполняемых на кафедрах биофизики и функциональной диагностики, нормальной физиологии Сибирского государственного медицинского университета и в отделе сердечно-сосудистой хирургии НИИ кардиологии СО РАМН. Областями применения полученных данных являются физиология, биофизика, фармакология.

Положения, выносимые на защиту

3. Релаксирующее действие оксида азота в гладкой мышце аорты при стимуляции фенилэфрином оц-адренергических рецепторов зависит от состояния микрофиламентов и микротубул, тогда как в деполяризованной гиперкалиевым раствором гладкой мышце расслабление опосредовано преимущественно тубулиновыми элементами цитоскелета. В механизмы действия перекиси водорода на сокращения сосудистых гладких мышц, вызванные фенилэфрином вовлечены микрофиламенты.

Апробация и реализация работы. Основные результаты диссертации обсуждены на всероссийских и международных конгрессах: • Международный конгресс молодых ученых и специалистов «Науки о человеке», 2005, 2006, 2007 (Томск). • XV European Meeting on Hypertension, 2005 (Milan, Italy). • Пятый Сибирский физиологический съезд, 2005 (Томск). • 10-ая Пущинская школа - конференция молодых ученых «Биология - наука XXI века», 2006 (Москва). • XVI European Meeting on Hypertension, 2006 (Madrid, Spain). • IX Конгресс молодых ученых и специалистов «Науки о человеке», 2008 (Томск). • VI Сибирский физиологический съезд, 2008 (Барнаул). • IV Международная научная конференция «Психофизиологические и висцеральные функции в норме и патологии», посвященная 90-летию со дня рождения П.Г. Богача, 2008 (Украина, Киев). • XVIII European Meeting on Hypertension, 2008, (Berlin, Germany). • «Окислительный стресс и свободнорадикальные патологии»,

2009 (Судак, Украина) • X международный конгресс «Здоровье и образование в XXI веке» «Инновационные технологии в биологии и медицине», 2009 (Москва). • XX European Meeting on Hypertension, 2010 (Oslo, Norway). • XXI Съезд физиологического общества им. И.П.Павлова,

2010 (Калуга). • 6th International Congress of Pathophysiology and the 14th International SHR Symposium, 2010 (Montréal, Canada). • 23rd Scientific Meeting of the International Society of Hypertension, 2010 (Vancouver, Canada). • V Международная научная конференция «Психофизиол. и висцер. функции в норме и патологии» посвященная 100-летию со дня рождения проф. Харченко П.Д. и 65-летию НИИ физиологии им. академика Петра Богача, 2010 (Киев, Украина).

Исследование выполнено при поддержке Федеральной целевой программы («Разработка технологии селективного управления внутриклеточной газовой сигнализацией» ГК № 02.740.11.5031, «Разработка технологических основ управления функциональным состоянием клеток на основе идентификации ключевых звеньев трансляции сигналов с участием активных форм кислорода и элементов цитоскелета» ГК № П445, «Селективная модуляция внутриклеточной коммуникации как основа молекулярных технологий управления функциями клеток» ГК № 14.740.11.0932) и Российского фонда фундаментальных исследований («Исследование механизмов регуляции цитоскелетом сократительной активности гладких мышц» ГК № 07-0401184, «Исследование мембранных и молекулярных механизмов регуляции сократительной активности гладких мышц» ГК № 08-04099037, «Разработка технологии селективного управления внутриклеточными редокс-зависимыми сигнальными системами» ГК № 09-04-99026).

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Гусакова, Светлана Валерьевна

выводы

5. Перекись водорода потенцирует сокращение, индуцированное гипоосмотическим набуханием. Оксид азота оказывает релаксирующее влияние на сокращения, индуцированные гиперосмотическим раствором и изоосмотической стрикцией.

6. Опосредованное циклическим АМФ угнетение сократительной активности гладкомышечных сегментов аорты зависит от состояния микрофиламентов цитоскелета, а потенциалов действия и сокращений гладкомышечных клеток мочеточника - от состояния микротубул. 7. Расслабляющее действие сероводорода в присутствии низких концентраций активатора аденилатциклазы форсколина сменяется сократительным эффектом. Активирующее гладкую мышцу влияние сероводорода снижается при увеличении концентрации форсколина.

Заключение

На протяжении многих десятилетий в центре внимания исследователей находятся ключевые механизмы внутриклеточной трансдукции сигналов, в том числе обусловленные активными формами кислорода (АФК). АФК вовлечены во внутри- и межклеточную коммуникацию во всех клетках, тканях и органах. Несмотря на то, что их функция аналогична таковой для классических посредников (органические молекулы и Са ), АФК имеют отличительные признаки. Так как они - растворимые в липидах молекулы, их деятельности не препятствуют клеточные мембраны, хранение этих трансмиттеров в везикулах или органеллах для более позднего освобождения также невозможно. Однако, допускается, что N0 может быть связан с гемсодержащими белками и при определенных условиях освобождаться от них, очевидно преобладание другого механизма генерации и регуляции величины внутриклеточного сигнала - это de novo синтез посредника [185].

Сочетание деструктивных и защитных эффектов активных форм кислорода (N0, Н202 и др.) позволяют считать их одними из центральных фигур в поддержании жизнеобеспечения клеток, основанном на балансе между физиологическими и патофизиологическими процессами. Исследование редокс-модуляции функций клеток представляет определенные трудности, во-первых потому, что АФК могут не только изменять эффекты вторичных мессенджеров, но и сами выполнять их функции и, во-вторых, нет надежных специфичных инструментов для управления уровнем таких молекул и они способны легко и быстро модифицировать многие аминокислотные остатки, в том числе цистеина, метионина, гистидина, триптофана и тирозина.

В проведенном исследовании показано, что NO расслабляет сосудистые гладкие мышцы иредсокращенные всеми исследуемыми факторами: деполяризацией мембраны, активацией оц-адренергических рецепторов, набуханием и стрикцией клеток. Наиболее чувствительными к действию N0 являются сосудистые ГМК, стимулированные фенилэфрином.

К настоящему времени накоплено большое количество данных о механизмах действия N0. Оксид азота индуцирует NO-зависимые внутриклеточные процессы посредством активации цитозольного фермента - растворимой гуанилатциклазы [101, 110, 190]. Установлены молекулярные мишени, которые могут регулироваться nKG, в том числе Са2+-активируемые К+-каналы [170, 345, 265], Са2+ каналы L-типа [351], Са2+-депонирующие и механизмы, выводящие Са2+ из ГМК (Са2+-насосы саркоплазматического ретикулума и плазмалеммы) [180], киназа и фосфатаза легких цепей миозина [251]. Есть сведения о существовании цГМФ-независимого механизма регуляции NO [177, 337]. Показано, что ТКРСб-каналы вовлечены в регуляцию NO-цГМФ-nKG пути [287]. Действие доноров NO - нитросоединений на электрические и сократительные свойства ГМК достаточно полно исследовано [47-53, 58-66]. Было показано, что потенциал-зависимые эффекты доноров оксида азота связаны с угнетением кальциевой и/или натриевой проводимостей и повышением калиевой проводимости мембраны ГМК за счет ее кальций-зависимого и АТФ-чувствительного компонентов Потенциал-нечувствительные механизмы расслабляющего действия оксида азота на ГМК связаны с угнетением С-киназной ветви кальциевой сигнальной системы этих клеток.

Оксид азота выступает не только в роли регуляторной молекулы с характерными для первичного и/или вторичного посредника свойствами, но и является по своей химической структуре газом и активной формой кислорода. Функциональным антагонистом оксида азота является нейтрализующий его супероксид анион, продуцируемый эндотелиоцитами и гладкомышечными клетками. Однако короткий период жизни супероксид аниона ограничивает роль этой АФК как аутокринного, а тем более паракринного регулятора в сосудах. Его метаболит, перекись водорода, является устойчивой молекулой, и основные эффекты супероксид аниона связывают с действием Н202.

2+ открыванием объем-зависимых и Са -активируемых СГ-каналов [371]. Констрикторное действие Н202 документировано и в условиях активации форсколином цАМФ-опосредованной сигнальной системы сосудистых гладкомышечных клеток.

Как указывалось выше, активатор аденилатциклазы форсколин вызывает расслабление деполяризованных гиперкалиевым раствором сосудистых сегментов. В литературе имеется много сведений о влиянии активации цАМФ-опосредованного сигнального пути на сокращения гладких мышц, индуцированные деполяризацией мембраны ГМК [308, 262, 162, 377], действием агонистов [355] раздражением механорецепторов [138, 228, 271], а также изменением объема клеток [144, 289]. Феноменология действия агентов, индуцирующих увеличение активности цАМФ однообразна: во всех исследованных типах гладких мышц увеличение внутриклеточной концентрации аденилатциклазы.

Вероятно, в механизмы констрикторного действия Н202

2+ вовлечены потенциал-зависимые Са -каналы [341, 219], так же как и кальц'ий-освобождающие молекулярные структуры

О 4саркоплазматического ретикулума [204, 269], ингибирование Са -АТФазы [210]. Допускается выход Са из митохондрий через образование гидроксильного радикала [192]. Все эти процессы объединяет общий конечный результат - увеличение внутриклеточной концентрации и принадлежность к кальмодулиновой ветви кальциевой сигнальной системы. Таким образом, Н202 является важным модулятором оперирования этого пути внутриклеточной сигнализации, и ее констрикторное действие на предсокращенную гиперкалиевым раствором гладкую мышцу аорты может быть реализовано через многочисленные молекулярные мишени.

Наряду с этим, Н202 индуцирует сокращение сосудистых ГМК, предобработанных форсколином. т.е. в условиях активации цАМФ-опосредованной сигнальной системы. Имеются данные о том Н20? не влияет на прирост внутриклеточной концентрации цАМФ [238, 194]. Следовательно, сокращение, вызываемое перекисью водорода в условиях действия форсколина на предсокращенные гиперкалиевым раствором ГМ, по всей вероятности, обусловлено влиянием на молекулярные мишени, реализующие эффекты цАМФ и Са2+.

Вторая группа механизмов, индуцирующих констрикцию сосудистых ГМК и подверженных влиянию перекиси водорода, прямо не связана с увеличением внутриклеточного кальция. Это активация тирозин-киназы [294, 269, 219], циклооксигеназы [207], ПК-С [269, 219], митоген-активируемой протеинкиназы [294, 293, 269], Шю-киназы [198] и фосфорилирование ЛЦМ [242]. Некоторые из этих путей могут быть определены как кальций-сенситизирующие, т.е. повышающие генерацию мышцей силы без увеличения внутриклеточного кальция [339]. Это приводит к увеличению фосфорилирования ЛЦМ главным образом через ингибирование фосфатазы ЛЦМ, но могут влиять и на активность киназы ЛЦМ, действовать через белки теплового шока, через механизмы, вовлекающие актиновую регуляцию сократительного аппарата ГМК (кальдесмон и кальпонин). Фосфатаза ЛЦМ ингибируется при фосфорилировании интегрин-связанной киназой [161, 306], ПК-С [311] и КЬо-киназой [241, 317, 305]. Последнее следует особо подчеркнуть в связи с полученными данными о роли цитоскелета в реализации модулирующего действия АФК. Rho-киназа ассоциирована с микротубулами, активируется АФК [241] и может быть прямо вовлечена в констрикторное действие Н2О2 [198].

Учитывая потенциало-независимость констрикторного действия

Н2О2 на сосудистые сегменты, предсокращенные гиперкалиевым раствором, наиболее вероятным представляется вовлечение группы молекулярных мишеней, воздействие на которые не влечет за собой

2+ повышения внутриклеточной концентрации Ca . Вместе с тем, нельзя исключить и влияние Н202 на кальциевые пулы и кальциевый насос саркоплазматического ретикулума. Наконец, H2Ü2 может приводить к вазоконстрикции через МАРК [181, 316]. Показано участие МАРК в сокращении брыжеечной артерии, деполяризованой гиперкалиевым раствором [260]. Активация перекисью водорода сокращений при гипоосмотическом набухании клеток, вероятно, имеет ту же природу, что и усиление сокращений, вызванных гиперкалиевым раствором.

В проведенном исследовании показано, что Н202 расслабляет изолированные сегменты аорты, предсокращенные фенилэфрином. Эти данные согласуются с литературными [167, 219] и подтверждаются наблюдениями, сделанными на других сосудах [270, 260, 218]. Некоторые авторы отмечают эндотелий-зависимый характер этой релаксации сосудов [152, 193, 269, 219,]. Однако, в проведенных экспериментах установлен эндотелий независимый путь, используемый перекисью водорода для расслабления сосудов при агонист-стимулированном предсокращении. Аналогичные результаты были получены и другими исследователями [149, 220, 270, 260]. Для объяснения полученных результатов предлагаются различные механизмы. Так допускается что Н202-индуцированная эндотелий-независимая релаксация обусловлена активацией гуанилатциклазы и аккумуляцией цГМФ [220, 270, 205]. Принципиально иной подход состоит в том, что Н202-индуцированная релаксация агонист-предсокращенных сосудов обусловлена активацией Са2+-зависимых [148, 362], АТФ-чувствительных [268, 375] и потенциал-зависимых К+-каналов [268]. В проведенных экспериментах тетраэтиламмоний не оказывал влияния на расслабляющее действие Н202 в предсокращенных фенилэфрином гладкомышечных сегментах аорты. Эти данные указывают на то, что действие Н202 в этих случаях не связано с модуляцией потенциал-зависимой и Са2+-активируемой калиевой проводимости мембраны сосудистых ГМК. В этой связи более предпочтительным представляется цГМФ-опосредованный механизм Н202-индуцированного расслабления ГМК аорты, молекулярные мишени которого обсуждались выше.

Представленные данные о том, что Н202 на фоне колхицина при фенилэфрин-индуцированном сокращении гладких мышц аорты вызывает достоверно большее расслабление, чем в контроле, свидетельствуют о вовлечении цитоскелета в механизмы расслабляющего действия Н202. Данные, полученные в экспериментах с избирательной дезинтеграцией элементов цитоскелета нокодазолом и цитохалазином Б, указывают на то, что микрофиламенты, но не микротубулы, опосредуют расслабляющее влияние перекиси водорода в гладкой мышце предсокращенной фенилэфрином.

В регуляцию разнообразных функций клеток, включая сокращение гладких мышц, пролиферацию, рост, программируемую гибель и некроз, вовлечен клеточный объем. Механизмы связи объема клеток и регуляции их сократительной активности остаются мало изученными. Вместе с тем, показано, что модуляция объема клеток влияет на оперирование основных сигнальных систем клеток, равно как и аппликация биологически важных веществ, активирующих сигнальные системы, во многих случаях ведет к изменению объема клеток.

Проведенное исследование убедительно показывает, что разрушение микрофиламентов, а следовательно, и изменение уровня соотношения Б/О-актина, играет ключевую роль в сокращениях ГМК сосудов, индуцированных модуляцией клеточного объема.

Донор N0 нитропруссид натрия в отличие от Н2О2 вызывал снижение механического напряжения при действии гиперосмотического раствора и изоосмотической стрикции, и не влиял на гипоосмотическое сокращение.

Таким образом, представленные экспериментальные данные, полученные с цитоскелет-модифицирующими агентами убедительно свидетельствуют о том, что совместно с уникальными механизмами внутриклеточной сигнализации, сопряжения возбуждения-сокращения, в ГМК эффективно оперируют механизмы, связанные с реорганизацией цитоскелета. Ремоделирование цитоскелета регулируется внешними и внутренними сигналами в пространстве и времени и участвует в обеспечении адаптации клеток к окружающей среде, равно как и в регуляции биологической подвижности.

Известно, что H2S обладает выраженным защитным действием против повреждения при ишемии/реперфузии миокарда. Один из предполагаемых механизмов реперфузионных повреждений включает генерацию, аккумуляцию и освобождение различных АФК с одновременным расходованием эндогенных антиоксидантов [278, 361, 383]. Предобработка сероводородам уменьшала аритмию изолированного сердца при глобальной ишемии/реперфузии и улучшает выживание миоцитов [280].

Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Гусакова, Светлана Валерьевна, Томск

1. Авдонин, П.В. Рецепторы и внутриклеточный кальций /

2. П.В.Авдонин, В.А. Ткачук // 1994.- М.: Наука. 288 с.

3. Активная защита при окислительном стрессе. Антиоксидантреспонсивный элемент / В.В. Ляхович, В.А. Вавилин, Н.К. Зенков, Е.Б. Меныцикова // Биохимия. 2006. - Т. 71, вып. 9. - С. 11 SSII 97.

4. Активные формы кислорода как система: значение в физиологии,патологии и естественном старении / В.И. Донцов, В.Н. Крутько, Б.М. Мрикаев, C.B. Уханов // Журнал инфекционной патологии. -2006.-Т. 19.-С. 50-69.

5. Александрова, А.Ю. Эволюция взаимодействий клеток свнеклеточным матриксом в канцерогенезе / А.Ю. Александрова // Биохимия. 2008. - Т. 73. № 7. - С. 915-924.

6. Андреев, А.Ю. Метаболизм активных форм кислорода вмитохондриях (обзор) / А.Ю. Андреев, Ю.Е. Кушнарева, A.A. Старков // Биохимия. 2005. - Т. 70. № 2. - С. 246-264.

7. Антипенко, А.Е. Вторичные посредники в клетках сердца и гладкихмышц сосудов / А.Е. Антипенко // Биохимия. 1991. - Т. 56, вып. 4. -С. 589-620.

8. Анфиногенова, Я.Д. Роль ионного транспорта, сопряженного сизменениями клеточного объема, в механизмах регуляции сократительной функции сосудистых гладкомышечных клеток / Я.Д. Анфиногенова: Дисс. д.м.н. Томск, 2005. - 237с.

9. Артеменко, Д.П. Модификация метода одиночного сахарозногомостика./ Д.П.Артеменко, В.А.Бурый., И.А.Владимирова, М.Ф.Шуба//Физиол. ж.-1982.-Т.28,Ю.-С. 377-380.

10. Байдан, JI.B. Действие нитроглицерина и нитропруссида натрия нагладкомышечные клетки кишечника / JI.B. Байдан, С.М. Тишкин, М.Ф. Шуба // Физиол. журнал им. И.М. Сеченова.-1987.-Т.73,N11,-С.1569-1572.

11. Баскаков, М.Б. Исследование роли вторичных мессенджеров инатрий-протонного обмена в регуляции функций гладкой мышцы / М.Б Баскаков, М.А. Медведев, Б.И. Ходоров // Внутриклеточная сигнализация. М: Наука. - 1988. - С.90-97.

12. Баскаков, М.Б. Кальмодулин в механизмах регуляциисократительной функции гладкой мускулатуры / М.Б. Баскаков, М. А. Медведев //Бюлл. СО АМН СССР. 1984. - N4. - С. 83-88.

13. Баскаков, М.Б. Механизмы регуляции вторичными посредникамиэлектрической и сократительной активности гладких мышц / М.Б. Баскаков: Дисс. д.м.н. Томск, 1988. - 367с.

14. Баскаков, М.Б. Роль вторичных мессенджеров и Na/Н-обмена врегуляции электрической и сократительной активности гладких мышц / М.Б. Баскаков, М.А. Медведев // Кальций регулятор метаболизма.-Томск: 1987.-С.128-151.

15. Богомолова, И.К. Оксид азота и его метаболиты как маркерыдисфункции эндотелия у больных сахарным диабетом / И.К. Богомолова, В.А. Михно. Забайкальский медицинский вестник. -2011. № 1.-С. 140-146.

16. Болдырев, A.A. Двойственная роль свободнорадикальных формкислорода в ишемическом мозге / A.A. Болдырев // Нейрохимия -1995.-Т. 12,вып.3.-С.3-13.

17. Болдырев A.A. Карнозин и защита тканей от окислительного стресса

18. A.A. Болдырев // М.: Изд-во Диалог-МГУ. 1999. - 364 с.

19. Болдырев, A.A. Является ли Na/K-АТФаза мишенью окислительногостресса / А.А Болдырев, Е.Р. Булыгина, Г.Г. Крамаренко // Бюлл. эксперим. биол. и мед.-1996.-N3.-C.275-278.

20. Бурый, В.А. О неоднородности популяции потенциало-зависимых

21. Са2+-каналов в гладкомышечных клетках мезентериальной артерии морской свинки / В.А. Бурый, Д.В. Гордиенко, М.Ф. Шуба // Биол. мембраны,- 1989-T.6,N7.-C.740-748.

22. Бурый, В.А. Характеристика калиевой проводимости мембраныизолированной гладкомышечной клетки мезентериальной артерии /

23. B.А. Бурый, Д.В. Гордиенко, М.Ф. Шуба // Биол. мембраны-1992.-T.9.N6,- С.595-601.

24. Варфоломеев, С.Д. Биокинетика: практический курс /

25. C.Д. Варфоломеев, К.Г. Гуревич. -М.: ФАИР-ПРЕСС, 1999. 720с.

26. Ведерникова, Е.А Функциональная характеристика и молекулярнаятопология потенциал-независимых натриевых каналов / Е.А. Ведерникова, A.B. Максимов, Ю.А. Негуляев // Цитология. Т. 41 N8,- 1999.-С. 658-666.

27. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах /

28. Ю.А. Владимиров // Соросовский образовател. журн. 2000. - №12. ' - С.13-19.

29. Власов, Б.Я. Сигнальная роль активных форм кислорода в клеткахживотных / Б.Я. Власов, А.Г. Булавинцев, А.К. Подшивалова // Вестник Иркутской государственной сельскохозяйственной академии. 2009. - № 35. - С. 24-29.

30. Власова, Ю.А. Антиоксидантный эффект альфа-токоферола внаномолярных концентрациях, роль модуляции активности сигнальных систем / Ю. А. Власова, Н. Ф. Аврова // НЕЙРОХИМИЯ. 2010. - Т. 27, № 3. - С. 202-208.

31. Влияние нитроглицерина, нитросорбида и нитропруссида навнутриклеточное содержание ионов Ca в лимфоцитах человека / П.В. Сергеев, Г.И. Сторожаков, A.C. Духанин и др. // Бюлл. эксперим. биол. и мед.- 1992.-T.il6,N11.-С.487-489.

32. Влияние нитропруссида натрия и нитросодержащих вазодилататоровна микросомные монооксигеназы печени крыс / Е.И. Асташкин, А.З. Приходько, C.B. Глезер и др. // Экспер. и клин, фармакология.-1997.-T.60,N2.-C. 27-29.

33. Влияние нитропруссида натрия на мембранный потенциал имеханическое напряжение гладкомышечных клеток аорты крысы / И.В. Ковалев, М.Б. Баскаков, A.A. Панов и др. // Российский Физиол.ж. им. И.М. Сеченова.-1997.-Т.83,№7.-С.70-76.

34. Влияние нитросоединений на электромеханическое сопряжениегладкомышечных клеток мочеточника / И.В. Ковалев, A.A. Панов, Ю.Л. Бородин и др.// Бюлл. экспер. биол. и мед.- 2000, T.129.-N5. С.539-541.

35. Внутриклеточные сигнальные системы в эпителии и гладких ' мышцах воздухоносных путей / М.Б. Баскаков, Л.В. Капилевич,

36. М.А. Медведев и др.// Пульмонология, 1997-N 2,- С.72- 76.

37. Воробьева, Е. Н. Роль свободнорадикального окисления в патогенезеболезней системы кровообращения / Е. Н. Воробьева, Р. И. Воробьев // Бюллетень СО РАМН. 2005. № 4 (118). - С. 24-30.

38. Воротников, A.B. Внутриклеточная сигнализация и

39. Фосфорилирование белков при сокращении гладких мышц / A.B. Воротников, М.А. Крымскмй, В.П. Ширинский // Биохимия. 2002. - Т. 67, вып. 12. - С. 1587-1610.

40. Галагудза, М.М. Роль активных форм кислорода в механизмахлокального и дистантного ишемическогопрекондиционирования миокарда / М.М. Галагудза // Регионар. кровообр. и микроцирк. 2005. - 4(4). - С. 72-78.

41. Ганиткевич, В.Я. Характеристика потенциалозависимого Са2+входящего тока в мембране изолированных ГМК коронарной артерии / В.Я. Ганиткевич, С.В Смирнов, М.Ф Шуба // Биол. мембр.- 1989.-T.6,Nl.-C.51-85.

42. Герштейн, Е.С. Основа создания новых противоопухолевыхпрепаратов-исследование механизмов передачи митогенных сигналов факторов роста / Е.С. Герштейн, Н.С. Кушлинский, H.H. Трапезников// Сиб. мед. ж.-1999.-Т.14,Ш-4.-С.55-66.

43. Гланц, С. Медико-биологическая статистика: Пер. с англ. / С. Гланц 1 // М.: «Практика», 1999. 459 с.

44. Глушанкова, Н. А. Цитоскелет и межклеточная адгезия / H.A.

45. Глушанкова // Вестник Российского онкологического научного центра имени Н. Н. Блохина. 2003. -N 3. - С. 50-58.

46. Гомоцистеин- важный фактор риска сердечно сосудистыхзаболеваний / Г.И. Сидоренко, А.Г. Мойсеенок, М.Г. Колядко и др. // Кардиология. 2001. - № 1. - с. 6 - 11.

47. Гордиенко, Д.В. Действие кофеина на трансмембранные калиевыетоки в изолированных гладкомышечных клетках мезентериальной артерии морской свинки / Д.В. Гордиенко, В.А. Бурый, М.Ф. Шуба // Биологические мембраны 1995. - Т. 12.N2, - С. 129-137.

48. Динамика параметров баланса оксидантной антиоксидантнойсистем и лазерно-терапевтическая коррекция его сдвигов при рецидивирующем обструктивном бронхите у детей/ К.А.Барабадзе, Т.А.Чурадзе, М.Б Цулукидзе, М.А.Папава // Ж. Педиатрия. 2005. -№3.-С. 37-40.

49. Дозозависимый эффект нокодазола на цитоскелет эндотелиальныхклеток / K.M. Смурова, A.A. Бирюкова, А.Д. Верин, И.Б. Алиева

50. Биологические мембраны. 2008. - Т. 25. № 3. - С. 181-190.

51. Дубинина, Е.Е. Продукты метаболизма кислорода в функциональнойактивности клеток (жизнь и смерть, созидание и разрушение). Физиологические и клинико-биохимические аспекты / Е.Е. Дубинина // СПб.: Медицинская пресса. 2006. - 400 с.

52. Дьячук, Г.И. Возможные пути регуляции кальциевого обмена / Г.И.

53. Дьячук // Физиол.журн.СССР.-1991 .-T.77,N11 .-С. 117-125.

54. Зенков, Н.К. Окислительный стресс: Биохимические ипатфизиологические аспекты / Н.К. Зенков, В.З. Ланкин, Е.Б. Меныцикова // М.: МАИК «Наука /Интерпериодика», 2001. - 343 с.

55. Зинчук, В.В. Прооксидантно-антиокислительное состояниеорганизма при введении липополисахарада в условиях коррекции ' сродства гемоглобина к кислороду и Ь-аргинин-NO системе /В.В. Зинчук // Бюлл. Экспер. Биол. и мед.- 2001.-Т. 131, N1,- С. 39-42.

56. Зинчук, В.В. Участие оксида азота в формированиикислородсвязывающих свойств гемоглобина /В.В. Зинчук // Успехи физиологических наук. 2003. - Т. 34, № 2. - С. 33-45.

57. Ивантер, Э.В. Введение в количественную биологию / Э.В. Ивантер,

58. A.B. Коросов. Петразаводск, 2003. - 304 с.

59. Исследование механизмов NO-зависимого расслабления гладкихмышц аорты крысы с помощью нитросоединений / И.В. Ковалев, ■ А.Г. Попов, A.A. Панов и др.// Экспер. и клин, фармакол,- 2001,-T.64,N3.-C. 33-36.

60. Исследование роли внутриклеточного пула Ca в релаксирующемэффекте нитропруссида натрия в гладкомышечных полосках аорты крысы./ И.В.Ковалев, М.Б.Баскаков, Л.В.Капилевич и др.// Бюлл. экспер. биол. и мед.-1999.-Т. 127,N2.- С. 177-179.

61. Исследование цГМФ-зависимых механизмов действия винпоцетинана гладкомышечные клетки./ И.В. Ковалев, А.Г. Попов, М.Б. Баскаков и др. // Эксп.и клин.фармакол.-2003.-Т.66.№4.-С. 25-28.

62. Кансон, К.П. Програмированная клеточная гибель (апоптоз):молекулярные механизмы и роль в биологии и медицине / К.П. Кансон // Вопр. мед.химии. 1997. - Т.43,вып 5. - С.402-415.

63. Капилевич, J1.B. Функциональная характеристика эпителиальногладкомышечных взаимодействий в стенке воздухоносных путей и кровеносных сосудов / JI.B. Капилевич.:-Дисс.д.м.н.-Томск, 1995.-236 с.

64. Караман, Ю. К. Нитроксидергические механизмы регуляцииокислительного стресса / Ю.К. Караман, Т.П. Новгородцева, Н.В. Бивалькевич и др./ Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. -2011.-Т. 31. №3.-С. 57-62.

65. Киреева, Н. Н. сАМР-специфическая фосфодиэстераза циклическихнуклеотидов нерастворимой фракции мозга человека / H.H. ' Киреева, И.Д. Бобрускин, С.Е. Северин // Биохимия. 1995. - Т.60, вып.5. - С.694-708.

66. Клещев, A.JL Биохимические аспекты дейтвия натрия нитропруссида

67. A.JI. Клещев, М.Я. Демидов, K.P. Седов // Эсперим. и клин. фармакол.-1994.-Т.57, N2.-С.74-78.

68. Кобляков, В.А. Механизмы опухоль-промоторного действияактивных форм кислорода: обзор / В.А. Кобляков // Биохимия. -2010. Т. 75, N 6. - С. 757-769.

69. Коляденко, В.Ф. Влияние гнотобиологической изоляции на ■ состояние системы «Перекисное окисление липидовантиоксидантная активность» у детей с бронхиальной астмой / В.Ф.Коляденко, Ю.А.Царева // Ж. Педиатрия. 2001. - № 1. - С. 2628.

70. Кометиани, З.П. Кинетика мембранных транспортных ферментов /

71. Биохимия мембран:Кн.5. / З.П.Кометиани, М.Г.Векуа.-М.:Выс.ш.,1988-111с.

72. Кондратюк, Т.М., Мембранные механизмы релаксирующеговоздействия цАМФ в гладкомышечных волокнах миометрия / Т.М. Кондратюк, М.Д. Курский // Докл. РАН.- 1992,- T.324,N1. -С.220-223.

73. Костерин, С. А. Транспорт кальция в гладких мышцах /

74. С.А. Костерин. Киев : Наукова думка. - 1990. - 216с.

75. Костюк, П.Г. Кальций и клеточная возбудимость / П.Г.Костюк. М.:1. Наука. 1986.-256 с.

76. Кочемасова, Н.Г. Роль ионов кальция в формировании платопотенциала действия гладкомышечных клеток мочеточника морской свинки в безнатриевых растворах / Н. Г. Кочемасова // Физиол. ж. 1982. - Т. 28, N2. - С. 206-214.

77. Крутецкая, З.И. Метаболизм фосфоинозитидов и формированиекальциевого сигнала в клетках / З.И. Крутецкая, O.E. Лебедев // Цитология. 1992. - Т. 34, N 10. - С. 26-44.

78. Крутецкая, З.И. Механизмы внутриклеточной сигнализации / З.И.

79. Крутецкая, O.E. Лебедев, Л.С. Курилова // СПб: Изд-во СПб ун-та. -2003.-208 с.

80. Крутецкая, З.И. Роль структур цитоскелета в регуляции Ca -ответовв макрофагах / З.И. Крутецкая, O.E. Лебедев, Н.И. Крутецкая, Л.С. Курилова//Цитология.-2001.-43, № 1,-С. 61-71.

81. Крутецкая, З.И. Структурно-функциональная организациясигнальных систем в клетках / З.И. Крутецкая, O.E. Лебедев // Цитология. 2000. - Т. 42. № 9. - С. 844-874.

82. Курилова, Л.С. Влияние латрункулина В, джасплакинолида ибрефельдина А на депозависимый вход Ca в макрофаги / Л.С. Курилова, З.И. Крутецкая, O.E. Лебедев // Цитология. 2006. -Т. 48, N 10. - С. 867-874

83. Курский, М.Д., Транспорт кальция и функции гладких мышц /

84. М.Д. Курский, Е.Т. Михайленко, А.Н. Федоров. Киев : Наукова думка, - 1981.- 127с.

85. Левицкий, Д.О. Кальций и биологические мембраны / Д.О.

86. Левицкий.- М.: Высш.школа, 1990.-124 с.

87. Майданник, В.Т. Роль активных форм кислорода в повреждениисосудов в эксперименте и клинике / В.Т. Майданник, Н.В. Хайтович, Е.А. Бурлака // Вопросы современной педиатрии. 2006. - № 5. - С. 352а.

88. Малета, Ю.С. Непараметрические методы статистического анализа вбиологии и медицине / Ю.С. Малета, В.В. Тарасов // Моск. гос. ун-т им. М.В. Ломоносова. М.: Изд-во МГУ, 1982. - 178 с.

89. Матвеева, Е.А. Виментиновые промежуточные филаментызащищают митохондрии от окислительного стресса / Е.А. Матвеева, И.С. Черноиваненко, Л.А. Минин // Биологические мембраны. -2010. Т. 27, № 6. - С. 471-481.

90. Медведева, М.В. Современные представления о многообразии форм

91. ФДЭ циклических нуклеотидов в тканях млекопитающих / М.В. Медведева // Биохимия.-1995.-Т.60.вып.3., С.25 - 32.

92. Мельников, К. Н. Разнообразие и свойства кальциевых каналоввозбудимых мембран / К. Н. Мельников // Психофармакология и биологическая наркология. -2006. Т. 6. № 1-2. - С. 1139-1155.

93. Мельников, К. Н. Кальциевые каналы возбудимых мембран / К. Н.

94. Мельников // Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. 2007. - Том 5, N 1. - С. 28-42.

95. Мельницкая, А. В. Структурно-функциональная организациятранспорта Na+ в эпителиальных системах. I. Эпителиальные Na+-каналы / А. В. Мельницкая, 3. И. Крутецкая, О. Е. Лебедев // Цитология. 2006. - Том 48, N 10. - С. 817-840.

96. Механизмы регуляции оксидом азота электрической исократительной активности гладких мышц./ И.В.Ковалев, Л.В.Капилевич, М.Б.Баскаков и др. // Успехи физол. наук.-2004.-Т.35,№3.-С.36-52.

97. Механизмы регуляции функций гладких мышц вторичнымипосредниками / М.Б. Баскаков, М.А. Медведев, И.В. Ковалев и др. // Томск, 1996.- 154с.

98. Миогенные эффекты циклического гуанозинмонофосфата вгладкомышечных клетках. Роль протеинкиназы С./И.В.Ковалев, М.Б.Баскаков М.А.Медведев и др.// Рос.Физиол.ж. им. И.М.Сеченова.- 2003.-Т.89,№4.-С.436-446.

99. Мирошниченко, В.П. Роль гема в активации гуанилатциклазымиокарда крысы нитропруссидом натрия / В.П. Мирошниченко, И.С. Северина // Биохимия.-1995.-Т.60,вып 4.-С.499-507.

100. Некрасова, O.E. Протеинкиназа С регулирует подвижностьмитохондрий / O.E. Некрасова, A.B. Кулик, A.A. Минин // Биол. мембраны. 2007. - № 24. - С. 126-132.

101. Окислительный стресс. Патологические состояния и заболевания /

102. Е.Б. Меныцикова, Н.К. Зенков, В.З. Ланкин и др. / Издательство: Новосибирск, Сибирское университетское издательство. 2008. -284 с.

103. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты / Е.Б.

104. Меньшикова, В.З. Ланкин, Н.К. Зенков и др. М.: Слово. - 2006. -556 с.

105. Орлов, С.Н. Кальмодулин / С.Н. Орлов. М: Итоги науки и техники.- 1987.-209с.

106. Орлов, С.Н. Са-насос плазматической мембраны // Кальцийрегулятор метаболизма / С.Н.Орлов. Томск. - 1987. - С. 74-96.

107. Особенности гистаминэргической регуляции гладких мышцлегочных артерий кролика / Л.В. Капилевич, Я.Д. Анфиногенова, А.В. Носарев и др.// Бюлл. экспер. биол. и мед.-2001.-Т.132,Ы8.-С.142-144.

108. Особенности регуляции гладких мышц сосудистой стенки легочнойартерии кролика / Л.В Капилевич, А.В Носарев, Е.Ю. Дьякова, и др.//Рос.физиол. ж. им. И.М.Сеченова.-2002.-Т.83,Ж,- с.452-458.

109. Особенности холинэргической регуляции гладких мышц легочныхартерий кролика / Л.В. Капилевич, Я.Д. Анфиногенова, М.Б. Баскаков и др.// Бюлл. экспер. биол. и мед.-2000.-Т.130,.Ч8.-С.134-136.

110. Першина, Л.И. Уровень циклических нуклеотидов в течениеспонтанных гладкомышечных сокращений у морских свинок / Л.И. Першина, Данилов А.Ф. // Физиол.журн.им.И.М. Сеченова.-1994.1. T.80,N10.-C.18-23.

111. Петренко, Ю.М. Новые источники оксида азота, их возможнаяфизиологическая роль и значение / Ю.М. Петренко, Д.А. Шашурин, В.Ю. Титов // Эксперим. клинич. фармакол. 2001. - Т. 64, № 2. - С. 72-80.

112. Раевский, К.С. Оксид азота новый физиологический мессенджер:возможная роль при патологии центральной нервной системы /К.С. Раевский // Бюлл.экспер. биол.и мед.-1997.-Т.123,М5.-С.484-490.

113. Расмуссен, Г. Циркуляция кальция и внутриклеточная передачасигнала / Г. Расмуссен. В мире науки. - 1989. -N12. - С. 36-43.

114. Регуляторная роль активных форм кислорода: от бактерий дочеловека / Ю.А. Лабас, A.B. Гордеева, Ю.И. Дерябина и др. // Успехи современной биологии. 2010. - Т. 130. № 4. - С. 323-335.

115. Редокс-регуляция депонирования оксида азота в сердечнососудистой системе / В.И. Шебеко, A.C. Дорошенко, А.П. Солодков и др. // Вестник Витебского государственного медицинского университета. 2004. - Т. 3. № 4. - С. 8-15.

116. Резник, Н. J1. Третий газ / Н. J1. Резник // Химия и жизнь. 2009.1. Ю.-С.40-46.

117. Рекалов, В.В. Кальциевый ток и сокращение гладкомышечнойклетки / В.В. Рекалов, В.В. Тараненко, М.Ф. Шуба // Докл. АН СССР. 1985. - Т.281, N2. - С. 462-466.

118. Релаксирующий эффект нитропруссида натрия в гладких мышцах:роль ионов кальция / И.В. Ковалев, A.A. Панов, JI.B. Капилевич и др.// Ж.Пульмонология. Актуальные проблемы пульмонологии. Сб.статей.- Москва.- 2000.- с.722-729.

119. Реутов, В.П. Физиологическое значение гуанилатциклазы и рольокиси азота и нитросоединений в регуляции активности этого фермента / В.П. Реутов, С.Н. Орлов // Физиология человека.- 1993. 1. T.19,N1.- С.124-137.

120. Реутов, В.П. Физиологическая роль цикла окиси азота в организмечеловека и животных / В.П. Реутов, Л.П. Каюшин, Е.Г. Сорокина // Физиология человека.- 1994.-T.20,N3.-C.165-174

121. Реутов, В.П. Цикл окиси азота в организме млекопитающих инитритредуктазная активность гемсодержащих белков / В.П. Реутов, Е.Г. Сорокина, Л.П. Каюшин // Вопр. мед. химии.-1994,-Т.40,вып. 6.-С.31-35.

122. Роль внутриклеточного кальция в активации сокращения гладкихмышц легочных артерий / В.А. Бурый, A.B. Гурковская, Н.И. Гокина и др. // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. 1989. - Т. 105, N9.-С. 261-264.

123. Роль натрий-протонного обмена в регуляции электрической исократительной активности гладких мышц / М.Б. Баскаков, И.В. Ковалев., Л.В. Капилевич др. // Рос. физиол.ж. им. И.М. Сеченова.-2000.-T.86,Nl,- С.68-75.

124. Роль оксида азота и кислородных свободных радикалов в патогенезеартериальной гипертензии / Е.Б. Манухина, Н.П. Лямина, П.В. Долотовская и др. // Кардиология. 2002. - № 11.- С.73-84.

125. Роль протеинкиназы С в регуляции электрической и сократительнойактивности гладких мышц: эффект форболового эфира / М.Б. Баскаков, В.Б Студницкий, М.А. Медведев и др. // Бюлл. эксперим. биол. мед.- 1987.- N7.-C.8-ll.

126. Роль цитоскелета в регуляции метаболизма глюкозы / Ж. Лиу, Й.В.

127. Жанг, Й.Ш. Чан и др. // Биохимия. 2006. - Т. 71. № 5. - С. 592-597.

128. Сазонтова, Т.Г. Роль свободнорадикальных процессов и редокссигнализации в адаптации организма к изменению уровня кислорода / Т.Г. Сазонтова, Ю.В. Архипенко // Российский физиологический журнал им. И. М. Сеченова. 2005. - Т. 91,1. N 6. С. 636-655.

129. Северина, И.С. Роль растворимой гуанилатциклазы в механизмах еефизиологических эффектов / И.С. Северина // Вопросы мед.химии.-2002.-Т.48,вып. 1 .-С.4-30.

130. Скок, В.И. Нервно-мышечная физиология / В.И. Скок, М.Ф. Шуба.

131. Киев : Вища школа. 1986. - 224 с.

132. Собакарь, М.С. Антиоксидантная терапия и метаболические подходык лечению заболеваний сердечно сосудистой системы / М.С. Собакарь, Е.В. Ших // Биомедицина. - 2010. - № 3. - С. 10-21

133. Сумароков, А.Б. Толерантность к нитратам при лечении стенокардии

134. А.Б. Сумароков // Терапевтический архив.- 1989.-T.61.N8.-C.146-149.

135. Тепперман, Дж. Физиология обмена веществ и эндокриннойсистемы / Дж. Тепперман, X. Тепперман : Пер. с англ. М. : Мир. - 1989. - 656с.

136. Титов, В.Н. Анатомические и функциональные основы эндотелийзависимой вазодилатации, оксид азота и эндотелии. Артериолы мышечного типа как перистальтические насосы / В.Н. Титов //

137. Успехи современной биологии. 2010. - Т. 130. № 4. - С. 360-380.2+

138. Ткачук, В.А. Гормональная регуляция транспорта Са в клеткахкрови и сосудов / В.А. Ткачук // Российский Физиол. ж. им. И.М.Сеченова. 1998. - Т.84, N10. - С. 1006-1018.

139. Ткачук, В.А. Регуляция кальцием аденилатциклазной системысердца / В.А. Ткачук // Кальций регулятор метаболизма. - Томск. -1987.-С. 25-37.

140. Ткачук, В.А. Фосфоинозитидный обмен и осцилляции ионов1. Са ./

141. В.А.Ткачук // Биохимия,-1998.-Т.62,вып1.-С.47-56.

142. Турпаев, К.Т. Активные формы кислорода и регуляцияэкспрессии генов / К.Т. Турпаев // Биохимия. 2002. - Т. 67,(3). 339-352.

143. Участие актиновых филаментов в действии окисленного глутатионаи препарата глутоксим на внутриклеточную концентрацию Са2+ в макрофагах / З.И. Крутецкая, O.E. Лебедев, Л.С. Курилова и др.// Докл. акад. наук. 2011. - Т.436, №5. - С.705-708.

144. Фултон, А. Цитоскелет. Архитектура и хореография клетки /

145. A. Фултон. М. : «Мир». - 1987. - 120с

146. Циклические превращения оксида азота в организме млекопитащих /

147. B.П. Реутов, Е.Г. Сорокина, В.Е. Охотин и др. // .М.: Наука 1998.159 с.

148. Ширинский, В.П. Клеточная подвижность в сердечно-сосудистойсистеме / В.П. Ширинский, A.B. Воротников // Природа. №12. -2005.-С. 39-44.

149. Шуба, М.Ф. Мембранные механизмы возбуждения гладкомышечныхклеток / М.Ф. Шуба, В.А Бурый // Физиол. ж. 1984. - Т.30, N5. 1. C. 545-559.

150. Шуба, М.Ф. Механизмы возбуждения и сокращения гладких мышцмозговых сосудов / М.Ф. Шуба, Н.И. Гокина. Киев : Наукова думка. - 1991.- 129с.

151. Шуба, М.Ф. Пути и механизмы трансмембранного входа вгладкомышечные клетки ионов кальция, участвующих в активации сокращения / М.Ф. Шуба // Физиологический журнал. 1981. -Т.27, N4.-С. 533-541.

152. Шуба, М.Ф. Физиология сосудистых гладких мышц / М.Ф. Шуба,

153. Н.Г Кочемасова. Киев: Наукова думка. - 1988. - 250с.

154. Эпителиально-гладкомышечное взаимодействие в регуляции тонусавоздухоносных путей крыс / JT.B. Капилевич, М.Б. Баскаков, М.А.Медведев и др. // Физиол. журнал им. И.М. Сеченова.- 1995.-Т.81, N7.- С.99-105.

155. Эпителий-зависимая регуляция тонуса бронхов / JI.B. Капилевич,

156. М.Б. Баскаков, М.А. Медведев и др. // Матер. Всерос. конф., , Сыктывкар, 6 8 июля 1994. - Сыктывкар, 1994. - С. 82 - 85.

157. Эффект перекиси водорода на спонтанную квантовую и неквантовуюсекреции ацетилхолина из двигательных нервных окончаний крысы / А.В. Шакирзянова, А.И. Маломуж, Н.В. Науменко, Е.Е. Никольский // Доклады Академии наук. 2009. - Т. 424. № 4. - С. 567-569.

158. Юнкеров, В.И. Математико-статистическая обработка данныхмедицинских исследований / В.И. Юнкеров, С.Г. Григорьев // СПб.: ВМедА. 2002. - 266 с.

159. Abe, К. The possible role of hydrogen sulfide as an endogenousneuromodulator / K. Abe, H. Kimura // J. Neurosci. 1996. - 16. -P. 1066-1071.

160. Abedi, H. Cytochalasin D stimulation of tyrosine phosphorylation andphosphotyrosine-associated kinase activity in vascular smooth muscle cells / H. Abedi, I. Zachary // Biochem Biophys Res Commun. 1998. -№245 (3) - P. 646-650.

161. Actin-binding protein contributes to cell volume regulatory ion channelactivation in melanoma cells / H.F. Cantiello, A.G. Prat, J.V. Bonventre, C.C. Cunningham et al // J. Biol. Chem. 1993. - 268. - P. 4596-4599.

162. Actin filament disruption inhibits L-type Ca2+ channel current in culturedvascular smooth muscle cells / M. Nakamura, M. Sunagawa, T. Kosugi et al. // Am. J. Physiol. Cell. 2000. - 279. - P. C480-C487.

163. Activation of KATP channels by H2S in rat insulin-secreting cells and theunderlying mechanisms / W. Yang, G. Yang, X. Jia et al. // The Journal of Physiology. 2005. - 569. - P. 519-531.

164. Activation of the adenylyl cyclase/cyclic AMP/protein kinase A pathwayin endothelial cells exposed to cyclic strain / C.R. Cohen, I. Mills, W. Du etal.//Exp Cell Res. 1997.-231(1).-P. 184-9.

165. Adames, N.R. Microtubule interactions with the cell cortex causingnuclear movements in Saccharomyces cerevisiae / N.R. Adames, J.A. Cooper // J. Cell Biol. 2000. - №149 (4). - P. 863-874.

166. Adragna, N. K-Cl cotransport in vascular smooth muscle enderythrocytes: possible implicathion in vasodilathion / N. Adragna, E. Richard., S. Orlov, P. Lauf.//Am.J.Physiol.Cell Physiol.-2000.-V.278,-C.381-390.

167. Anderson, R.G.W. The caveolae membrane system / R.G.W. Anderson //

168. Annu. Rev. Biochem. 67. - 1998. - P. 199-225.

169. Ankyrin and spectrin associate with voltage-dependent sodium channelsin brain / Y. Srinivasan, L. Elmer, J. Davis et al. // Nature. 1988. 333. -P. 177-180.

170. Annexin II modulates volume-activated chloride currents in vascularendothelial cells / B. Nilius, V. Gerke, J. Prenen, G. Szucs et al. // J. Biol. Chem. 1996. - 271. - P. 30 631-30 636.

171. Apoptosis in serum-deprived vascular smooth muscle cells: evidence forcell volume-independent mechanism / S.N. Orlov, D. Pchejetski, S. Taurin, N .Thorin-Trescases et al. // Apoptosis. 2004. - 9. - P. 55-66.

172. A role for MAP kinase in differentiated smooth muscle contractionevoked by alpha-adrenoceptor stimulation / C. Dessy, I. Kim, C.L. Sougnez, R. Laporte et al // Am J Physiol. 1998. - 275 (4 Pt 1). - P. C1081- C1086.

173. Barany, M. Exchange of the actin-bound nucleotide in intact arterialsmooth muscle / M. Barany, J.T. Barron, L. Gu // J. Biol. Chem. 2001. -276.-P. 48398-48403.

174. Barany, M. Protein phosphorylation during contraction and relaxation / K.

175. Barany, Barany M // Biochemistry of Smooth Muscle Contraction (M. Barany, Ed.). 1996. - P. 321-339.

176. Barlow, RS. H202 opens BKCa channels via the PLA2-arachidonicacid signaling cascade in coronary artery smooth muscle / RS. Barlow, AM. El Mowafy, RE. White // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2000. - 279 - P. 475-483.

177. Barlow, RS. Hydrogen peroxide relaxes porcine coronary arteries bystimulating BKCa channel activity / RS. Barlow, RE. White // Am J Physiol. 1998. - 275. - P. 1283-1289.

178. Barnes, P.J. Beta-adrenoreceptors smooth muscle, nerves cells /

179. P. J.Barnes // Life sci. 1993. - V.52, N26. - P. 2101- 2109.

180. Berridge, M. Receptors and on calcium signaling / M. Berridge // Tends.

181. Pharmacol. Sci. 1984. - V.2101. - P. 345-360.

182. Bharadwaj, L. Mediation of H202-induced vascular relaxation byendothelium-derived relaxing factor / L.Bharadwaj, K.Prasad // Mol Cell Biochem. 1995. - 149. - P.267-270.

183. Birukov, K.G. Cyclic Stretch, Reactive Oxygen Species, and Vascular

184. Remodeling / K.G. Birukov // Antioxid Redox Signal. 2009. - 11(7). -P. 1651-1667.

185. Blanc, A. Distinct roles of Ca2+, calmodulin, and protein kinase C in

186. H202-induced activation of ERK1/2, P38 MAPK, and protein kinase B signaling in vascular smooth muscle cells / A. Blanc, NR. Pandey, AK. Srivastava // Antioxid Redox Signal. 2004. - 6. - P. 353-366.

187. Brady, T. Nitric oxide inhalation transiently elevates pulmonary levels ofcGMP, iNOS mRNA, and TNF-alpha / T. Brady, J. Crapo, R. Mercer // Am.J.Physiol.-l998.-V.275(3 Pt 1).-P 509-515.

188. Broillet, M. C. S-nitrosylation of proteins / M. C. Broillet // Cell. Mol.1.fe Sci. 1999. - 55. - P. 1036-1042.

189. Burg, M.B. Macromolecular Crowding as a Cell Volume Sensor / MB.

190. Burg // Cell Physiol Biochem. 2000. -10. - P. 251-256.

191. Burgstaller, G. Actin cytoskeleton remodelling via local inhibition of ■ contractility at discrete microdomains / G. Burgstaller, M. Gimona // J

192. Cell Sci.-2004,- 117 (Pt 2).-P. 223-231.

193. Ca-activated K channels of erythrocytes: the study by means of theregistration of Ca-induced alterations of membrane potential / S.N. Orlov, I.V.Petrova, M.B. Baskakov et al. // Biol Membr. 1992. - 9. -P. 885-903.

194. Ca2+-dependent activation of Rho and Rho kinase in membranedepolarization-induced and receptor stimulation-induced vascular smooth muscle contraction / S. Sakurada, N. Takuwa, N. Sugimoto, Y. Wang et al. // Cire Res. 2003. - 93 (6). - P. 548-556.

195. Ca2+-independent smooth muscle contraction, a novel function forintegrin-linked kinase / J.T. Deng, J.E. Van Lierop, C. Sutherland et al. // J Biol Chem. 2001. - 276. - P. 16365-16373.

196. Ca2+ source-dependent transcription of CRE-containing genes in vascularsmooth muscle / R.A. Pulver-Kaste, C.A. Barlow, J. Bond et al. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2006. - 291(1). - P. 97-105.

197. Calponin is required for agonist-induced signal transduction-evidence from an antisense approach in ferret smooth muscle / . H.D. Je, S.S. Gangopadhyay, T.D. Ashworth et al. // J. Physiol. -2001. 537 (Pt 2). - P. 567-577.

198. Calvert, J.W. Novel insights into hydrogen sulfide-mediatedcytoprotection / J.W. Calvert, W.A. Coetzee, D.J. Lefer // Antioxid Redox Signal. 2010. - 12(10). - P. 1203-17.

199. Capaldo, B. Abnormal Vascular Reactivity in Growth Hormone

200. Deficiency / B. Capaldo, V.Guardasole, F. Pardo // Circulation. — 2001.1. V. 103. P. 520-524.

201. Carbon monoxide and hydrogen sulfide: gaseous messengers incerebrovascular circulation / C. W. Leffler, H. Parfenova, J. H. Jaggar et al. // J Appl Physiol. 2006. - 100(3). - P. 1065-1076.

202. Catalase has negligible inhibitory effects on endothelium-dependentrelaxations in mouse isolated aorta and small mesenteric artery / A. Ellis, M. Pannirselvam, T.J. Anderson et al. // Br J Pharmacol. -2003. 140. -P.1193-1200.

203. Caveolins, a family of scaffolding proteins organizing 'preassembledsignalling complexes' at the plasma membrane / T. Okamoto, A. Schlegel, P.E. Scherer et al. // J. Biol. Chem. 1998. - 273. - P. 5419-5422.

204. Cell volume in the regulation of cell proliferation and apoptotic cell death

205. Chamberlin, M.E. Anisosmotic cell volume regulation: a comparativeview / M.E. Chamberlin, K. Strange // Am. J. Physiol. Cell Physiol. -1989.-257.-P. C159-C173.

206. Characterization of the rat Na+/H+ exchanger isoform NHE4 andlocalization in rat hippocampus / C. Bookstein, M.W. Musch, A. DePaoli etal.//Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1996.-271.-P. 1629-1638.

207. Chitaley, K. Microtubule depolymerization facilitates contraction ofvascular smooth muscle via increased activation of RhoA/Rho-kinase / Chitaley K, Webb RC // Med Hypotheses. 2001. - 56 (3). - P. 381385.

208. Clempus, R.E. Reactive oxygen species signaling in vascular smoothmuscle cells / R.E. Clempus, K.K.Griendling // Cardiovasc Res. 2006. - 71(2). - P.216-25.

209. Coiled-coil unwinding at the smooth muscle myosin head-rod junction isrequired for optimal mechanical performance / A.M. Lauzon, P.M. Fagnant, D.M. Warshaw et al. // Biophys. J. 2001. - 80. - P. 19001904.

210. Contractile and vasorelaxant effects of hydrogen sulfide and itsbiosynthesis in the human internal mammary artery / G. D. Webb, L. H. Lim, V. M. S. Oh et al. // JPET. 2008. - 324(2). - P. 876-882.

211. Contribution of 20-HETE to vasodilator actions of nitric oxide in thecerebral microcirculation / M. Alonso-Galicia, A.G. Hudetz, H. Shen et al. // Stroke. 1999. - 30(12). - P. 2727-34.

212. Cooke, J.P. Nitric oxide synthase: role in the genesis of vasculardisease / J.P. Cooke, V.J. Dzau // Ann. Rev. Med. 1997,- Vol. 48. — P. 489-509.

213. Cyclic GMP-dependent protein kinase stimulates the plasma membrane

214. Ca2+ pump ATPase of vascular smooth muscle via phosphorylation of a 240-kDa protein / Y. Yoshida, H.T. Sun, J.Q. Cai et al. // J Biol Chem. -1991.-266(29).-P. 19819-25.

215. D'Angelo, G. Inhibition of ERK attenuates force development bylowering myosin light chain phosphorylation / G. D'Angelo, L.P. Adam // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2002. - 282 (2). - P. H602- H610.

216. Differential effects of Rho-kinase inhibition on artery wall mass andremodeling / J.D. Pearce, J. Li, M.S. Edwards, W.P. English et al. // J Vase Surg. 2004. - 39(1). - P. 223-8.

217. Ding, Y. Interaction of heme oxygenase-2 with nitric oxide donors.1. the oxygenase an intracellular 'sink' for NO? / Y. Ding, W.K. Jr McCoubrey, M.D. Maines // Eur J Biochem. 1999. - 264. - P. 854-861.

218. Direct stimulation of KATP channels by exogenous and endogenous • hydrogen sulfide in vascular smooth muscle cells / G. Jang, L. Wu, W.1.ang et al. // Mol. Pharmacol. 2005. - 68. - P. 1757-1764.

219. Distinct subcellular localizations of noxl and nox4 in vascular smoothmuscle cells / LL. Hilenski, RE. Clempus, MT. Quinn et al. // Arterioscler Thromb Vase Biol. 2004. - 24. - P. 677-683.

220. Dombkowski, R.A., B.A Effects of hydrogen sulfide in vertebrate smoothmuscle / R.A. Dombkowski, B.A.: A Dissertation for the degree of doctor of philosophy Notre Dame, 2006. - 268p.

221. Docherty J.R.Subtypes of functional alpha 1-adrenoceptor / J.R. Docherty

222. Cell Mol Life Sci. 2010. - 67(3):405-17.

223. Drewett, J. The family of guanylyl cyclase receptors and their ligands / J.

224. Drewett, D. Garbers //Endoc. Rev. -1994.-V.15, N2.-P. 135-162.

225. Earley, J.J. Caldesmon inhibits active crossbridges in unstimulatedvascular smooth muscle: an antisense oligodeoxynucleotide approach / J.J. Earley, X. Su, R.S. Moreland // Circ Res. 1998. -83 (6).-P. 661-667.

226. Effect of hydrogen peroxide on Ca2+mobilisation in human plateletsthrough sulphydryl oxidation dependent and independent mechanisms / PC. Redondo, GM. Salido, JA. Rosado et al. // Biochem Pharmacol. -2004.-67.-P. 491-502.

227. Effect of hydrogen peroxide on guinea pig nasal mucosa vasculature / T.

228. Hirai, H. Tsuru, N. Tanimitsu et al. // Jpn J Pharmacol. 2000. - 84. -P.470-473.

229. Effect of hydrogen peroxide on VIP-induced relaxation of the cat loweresophageal sphincter / S.H. Kim, J.H. Youm, D.K. Lee et al. // Arch Pharm Res. 2007. - 30(11). - P. 1419-25.

230. Effect of isoprenaline on Ca2/ channel current in single smoothmuscle cells isolated from taenia of the guinea-pig caecum / K. Muraki, T.B. Bolton, Y. Imaizumi et al. // J. Physiol. (Lond.). -1993. 471. - P. 563-582, 764.

231. Effect of propofol on hypotonic swelling-induced membranedepolarization in human coronary artery smooth muscle cells / T. Masuda, Y. Tomiyama, H. Kitahata, Y. Kuroda et al. // Anesthesiology. -2004.- 100 (3).-P. 648-656.

232. Endogenous vascular hydrogen peroxide regulates arteriolar tension invivo / T. Suvorava, N. Lauer, S. Kumpf et al. // Circulation. 2005. -112. - P.2487-2495.

233. Endothelin-1-induced contraction in veins is independent of hydrogenperoxide / K. Thakali, SL. Demel, GD. Fin et al. //Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2005. - 289. - P. 1115-1122.

234. Endothelium-derived relaxing factor produced and secreted from arteryand vein is nitric oxide / L. Ignarro, G. Buga, K. Wood, et al. // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-l 987.-V.84.-P.9265-9269.

235. Evidence for modulation of smooth muscle force by the p38 MAPkinase/HSP27 pathway / I.A. Yamboliev, J.C. Hedges, J.L.Mutnick et al. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2000. - 278(6). - P.1. H1899-1907.

236. Exogenous hydrogen sulfide inhibits superoxide formation, NOX-1expression and Rac, activity in human vascular smooth muscle cells / S. Muzaffar, N. Shukla, M. Bond et al // Journal of Vascular Research. -2008.-45.-P. 521-528.

237. Expression of a functionally active Gp91phox-containing neutrophil-type

238. NAD(P)H oxidase in smooth muscle cells from human resistance arteries. Regulation by angiotensin II / RM. Touyz, X. Chen, F. Tabet et al. // Cire Res. 2002. - 90. - P. 1205-1213.

239. Extracellular matrix controls myosin light chain phosphorylation and cellcontractility through modulation of cell shape and cytoskeletal prestress / T.R. Polte, G.S. Eichler, N. Wang et al. // Am J. Physiol Cell Physiol. -2004. 286 (3). - P. C518-528.

240. Favero, T.G. Hydrogen peroxide stimulates the Ca2+ release channel fromskeletal muscle sarcoplasmic reticulum / T.G. Favero, A.C. Zable, J.J. Abramson // J Biol Chem. 1995. - 270. - P. 25557-25563.

241. Fujimoto, S. Mechanisms underlying the hydrogen peroxide-induced, ■ endothelium-independent relaxation of the norepinephrine-contraction inguinea-pig aorta / S. Fujimoto, M. Mori, H. Tsushima // Eur J Pharmacol. 2003. - 459(1). - P. 65-73.

242. Functional significance of cell volume regulatory mechanisms / F. Lang,

243. G.L. Busch, M. Ritter et al. // Physiol. Rev. 1998. - 78. - P.247-306.

244. Gorren, A. The versatil and complex enzymology of nitric oxide synthase / A. Gorren, B. Mayer // Biochemestry (Moscow).-1997,-V.63,N7.-P.745-755.

245. Grover, AK. Peroxide inactivates calcium pumps in pig coronary artery / AK. Grover, SE. Samson, VP. Fomin // Am J Physiol. 1992. -263. - P.537-543.

246. Haas, M. The Na-K-Cl cotransporters / M. Haas, B. Forbush // J. Bioenerg. Biomemb. 1998. - 30. - P.161-172.

247. Hamilton, C. Calmodulin and excitation-contraction coupling / C. Hamilton, I. Serysheva, G. Strasburg // News Physiol. Sci. 2000. -V.15, N.12. - P. 201-204.

248. H202-induced redox-sensitive coronary vasodilation is mediated by 4-aminopyridine-sensitive K+ channels / P.A. Rogers, G.M. Dick, J.D. Knudson et al. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2006. - 291(5). - p. H2473-82.

249. Hosoki, R. The possible role of hydrogen sulfide as an endogenous smooth muscle relaxant in synergy with nitric oxide / R. Hosoki, N. Matsuki, H. Kimura // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997. - 237. -P. 527-531.

250. Hughes, A.D. Calcium channels in vascular smooth muscle cells / A.D. Hughes// 1995.

251. Hughes, S. Characterization of smooth muscle cell and pericyte differentiation in the rat retina in vivo / Hughes S, Chan-Ling T. // Invest Ophthalmol Vis Sci. 2004. - 45 (8). - P. 2795-2806.

252. Hydrogen peroxide, an endogenous endothelium-derived hyperpolarizing factor, plays an important role in coronary autoregulation in vivo / T. Yada, H. Shimokawa, O. Hiramatsu et al. // Circulation. 2003. - 107. - P. 1040-1045.

253. Hydrogen peroxide is an endothelium-derived hyperpolarizing factorin human mesenteric arteries / T. Matoba, H. Shimokawa, H. Kubota et al. // Biochem Biophys Res Commun. 2002. - 290. - P. 909-913.

254. Hydrogen sulfide dilates cerebral arterioles by activating smooth muscle cell plasma membrane KATP channels / G. H. Liang, A. Adebiyi, M. D. Leo et al. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2011. -300(4).-(Inpress)

255. Hydrogen sulfide in combination with taurine or cysteic acid reversibly abolishes sodium currents in neuroblastoma cells / M. W. Warenycia, J. A. Steele, E. Karpinski et al. // Neurotoxicology. 1989. -10.-P. 191-199.

256. Hydrogen sulfide induses the synthesis of proinflammatory cytokines in human monocyte cell line U 937 via the ERK-NF-kB pathway / L. Zhi, A. D. Ang, H. Zhang et al. // J. Leukoc. Biol. 2007. - 81. - P. 1322-1332.

257. Hydrogen Sulfide Is an Endogenous Inhibitor of Phosphodiesterase Activity / M. Bucci, A. Papapetropoulos, V. Vellecco et al // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 2010. - 30. -P. 1998-2004.

258. Hydrogen sulfide protects HT22 neuronal cells from oxidative stress / Y. Kimura, R. Dargusch, D. Schubert et al. // Antioxid. Redox Signal. -2006.-8.-P. 661-70.

259. Hydrogen sulphide regulates intracellular pH in vascular smoothmuscle cells / S. W. Lee, Y. Cheng, P. K. Moorea et al. // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2007. -358 (4). -P.1142-1147.

260. Hypotonie activation of volume-sensitive outwardly rectifying chloride channels in cultured PASMCs is modulated by SGK / G.X. Wang, C. McCrudden, Y.P. Dai et al. // Am J. Physiol. Heart Circ.

261. Physiol. 2004. - 287(2). - P. H533-544.

262. Iba, T. Intracellular cyclic AMP levels in endothelial cells subjected to cyclic strain in vitro / T. Iba, I. Mills, B.E. Sumpio / J Surg Res. 1992. -52(6).-P. 625-30.

263. Increase in calcium channel current by beta-adrenoceptor agonists in single smooth muscle cells isolated from porcine coronary artery / T. Fukumitsu, H. Hayashi, H. Tokuno et al. // Br. J. Pharmacol. 1990. -100.-P. 593-599.

264. Inhibitors of actin filament polymerisation attenuate force but notglobal intracellular calcium in isolated pressurised resistance arteries / L. Shaw, S. Ahmed, C. Austin et al. // J. Vase Res. -2003. 40 (1). - P. 1-10.

265. Inhibition of high K+-induced contraction by the ROCKs inhibitor Y-27632 in vascular smooth muscle: possible involvement of ROCKs in a signal transduction pathway / K. Sakamoto, M. Hori, M. Izumi et al. H J. Pharmacol Sci. 2003. - 92 (1). - P. 56-69.

266. Inhibition of volume-regulated anion channels by dominant-negative caveolin-1 / D. Trouet, D. Hermans, G. Droogmans et al. // Biochem.

267. Biophys. Res. Commun. 2001. - 284. - P. 461-465.

268. Inoue, R. Acetylcholine activates nonselective cation channels in guinea-pig ileum through a G-protein / R. Inoue, G. Isenberg // J. Physiol. 1990.-258.-P. C1173-C1178.

269. Involvement of nitric oxide in the endothelium-dependent relaxationinduced by hydrogen peroxide in the rabbit aorta / A. Zembowicz, RJ. Hatchett, AM. Jakubowski et al. // Br J Pharmacol. 1993. - 110. - P. 151-158.

270. Involvement of Rho-kinase in contraction of guinea-pig aorta induced by prostanoid EP3 receptor agonists / W.W. Shum, G.Y. Le, R.L. Jones et al. // Br. J. Pharmacol. 2003. - 139(8). - P. 1449-1461.

271. Isoform switching from SM-B to SM-A myosin results in decreased contractility and altered expression of thin filament regulatory proteins / G.J. Babu, G.J. Pyne, Y. Zhou et al. // Am J Physiol Cell Physiol. -2004. 287 (3). - P. 723-729.

272. Jackson, T.C. Modulation of cyclic AMP production by signal transduction pathways in preglomerular microvessels and microvascular smooth muscle cells / T.C. Jackson, Z. Mi, E.K. Jackson // J Pharmacol Exp Ther. 2004. -310(1). - P. 349-58.

273. Jaimes, EA, Sweeney C, Raij L. Effects of the reactive oxygen species hydrogen peroxide and hypochlorite on endothelial nitric oxide production. Hypertension 38:877-883, 2001.

274. Jessen, B.S. Activation of Na+,K+,2C1- cotransport system by reorganization of the actin filaments in Ehrlih ascites tumor cells /B.S. Jessen, E.K. Hoffmann // Biochim. Biophys. Acta. 1992. — 1110. — P. 199-201.

275. Jin, L. Activation of Rho/Rho kinase signaling pathway by reactive oxygen species in rat aorta / L. Jin, Z. Ying, RC. Webb // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2004. - 287. - P. 1495-1500.

276. Jin, N. Activation of tyrosine kinases in H202-induced contraction in pulmonary artery / N. Jin, R.A. Rhoades // Am J Physiol. 1997. -272(6 Pt 2). - P. H2686-92.

277. Kamoun, P. Endogenous production of hydrogen sulfide in mammals / P. Kamoun // Amino Asids. 2004. - 26. - P. 243-254.

278. Kanner, J. Neurons that say NO / J. Kanner // Free Radic. Biol, and Med. 1990.-№ l.-P. 12-18.

279. Katayama, Y. Niric oxide mysterious messenger / Y. Katayama // DojindoNewsletter 1995. - № l.-P. 1-20.

280. Klein, J.D. Myosin light chain phosphorylation in endothelial cells is regulated by cell volume and correlates with volume-regulatory Na-K-2C1 cotransport (Abstract) / J.D. Klein, W.C. O'Neill // J.Gen.Physiol. 1993. - 102. - P.18a.

281. Korn, E.D Actin polymerization and its regulation by proteins from nonmuscle cells / E.D Korn // Physiological Rev. 1982. -62. - P. 672-737.249. ' Lancaster, J.R. Nitric oxide: Biology and chemistry / J.R. Lancaster,

282. J.B. Hibbs // Lancet. 1990. - № 335. - C. 669-671.

283. Lee, K. Inhibition of PTPs by H202 regulates the activation of distinct MAPK pathways / K. Lee, WJ. Esselman // Free Radic Biol Med. -2002. -33. -P.1121-1132.

284. Lee, M.R. Cyclic GMP causes Ca2+ desensitization in vascular smooth muscle by activating the myosin light chain phosphatase / M.R. Lee, L. Li, T. Kitazawa // J Biol Chem. 1997. - 272(8). - P. 5063-8.

285. Lefer, D.J. A new gaseous signaling molecule emerges: cardioprotectiverole of hydrogen sulfide / D.J. Lefer // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2007. 104. - P. 17907-17908.

286. Li, H. Nitric oxide in the pathogenesis of vascular disease / H. Li, U. ' Forstermann // J. Pathol. — 2000. — V. 190— P. 244-254.

287. Li, L. Hydrogen sulfide and cell signaling // L. Li, P. Rose, P.K. Moore // Annu Rev. Pharmacol. Toxicol. 2011. - 51. - P. 169-87.

288. Lim, J. J. Vasoconstrictive effect of hydrogen sulfide involvesdownregulation of cAMP in vascular smooth muscle cells / J. J. Lim, Y.- H. Liu, E. S. Win Khin, J. S. Bian // Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 2008.-295.-P. 1261-1270.

289. Lincoln, TM. Cyclic GMP-mediated signaling mechanisms in smooth muscle / TM. Lincoln, P. Komalavilas // J New York: Academic. 2000. -P. 401-425.

290. Localization of a constitutively active, phagocyte-like NADPH oxidase in rabbit aortic adventitia: enhancement by angiotensin II / PJ. Pagano, JK. Clark, ME. Cifuentes-Pagano et al. // Callis Proc Natl Acad Sci USA. 1997. - 94. - P.483-488.

291. Long-term inhibition of Rho-kinase suppresses angiotensin Il-induced cardiovascular hypertrophy in rats in vivo: effect on endothelial NAD(P)H oxidase system / M. Higashi, H. Shimokawa, T. Hattori et al. // Circ Res. 2003. - 93(8). - P. 767-775.

292. Lowicka, E. Hydrogen sulfide the third gas of interest for pharmacologists / E. Lowicka, J. Beltowski // Pharmacol. Reports.- 2007. 59. - P. 4-24.

293. Lucchesi, PA. Hydrogen peroxide acts as both vasodilator and vasoconstrictor in the control of perfused mouse mesenteric resistance arteries / PA. Lucchesi, S. Belmadani, K. Matrougui // J Hypertens. -2005.-23.-P. 571-579.

294. Luscher, T.F. The endothelium: modulator of cardiovascular function /

295. T.F. Luscher, G. Noll, P.M. Vanhoutte // J. Hypertens. — 1996. — V. 14 (5).—P. 383-393.

296. Luykenaar, K.D. Activators of the PKA and PKG pathways attenuate RhoA-mediated suppression of the KDR current in cerebral arteries / K.D. Luykenaar, D.G. Welsh // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2007. -292(6).-P. 2654-63.

297. Macknight, A.D. Regulation of cellular volume / A.D. Macknight, A. Leaf

298. Physiol. Rev. 1977.-57.-P. 510-573.

299. MAPK and PKC activity are not required for H202-induced arterialmuscle contraction / NJ. Pelaez, SL. Osterhaus, AS. Mak et al. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2000. - 279. - P. 1194- 1200.

300. Mathematical modeling of the nitric oxide/cGMP pathway in the vascularsmooth muscle cell / J. Yang, J.W. Clark, R.M. Bryan et al. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2005. - 289(2). - P. H886-97.

301. Mathews, J. Effects of F-actin stabilization or disassembly on epithelial CIsecretion and Na-K-2C1 cotransport / J. Mathews, J. Smith, B. Hrnjez. // Am. J. Physiol. 1997. -272 (Cell Physiol. 41). -P. C254-C262.

302. Mechanical function of intermediate filaments in arteries of different sizeexamined using desmin deficient mice / O.K. Wede, M. Lofgren, Z. Li, D. Paulin et al. // J. Physiol. 2002. - 540(3). - P. 941-949.

303. Mechanisms of hydrogen-peroxide-induced biphasic response in ratmesenteric artery / YJ. Gao, S. Hirota, D-W. Zhang et al. // Br J Pharmacol. 2003. - 138. - P.1085-1092.

304. Mechanisms of hydrogen peroxide-induced contraction of rat aorta /

305. Z. Yang, T. Zheng, A. Zhang et al. // Eur J Pharmacol. 1998. -344. - P. 169-181.

306. Mechanisms of hydrogen peroxide-induced relaxation in rabbit mesentericsmall artery / S. Fujimoto, T. Asano, M. Sakai et al. // Eur J Pharmacol. -2001.-412.-P. 291-300.

307. Mechanosensitiveadenylatecyclase activity in coronary vascular smoothmuscle cells / I. Mills, G. Letsou, J. Rabban et al. // BiochemBiophys Res Commun. 1990. - 171(1). - P. 143-7.

308. Mehta, D. Actin polymerization stimulated by contractile activationregulates force development in canine tracheal smooth muscle / D. Mehta, S.J. Gunst // J. Physiol. 1999. - 519. - P. 820-840.

309. Microtubule disruption modulates the Rho-kinase pathway in vascularsmooth muscle / D. Zhang, Z. Wang, N. Jin et al. // J. Muscle Res. Cell. Motil. 2001. - 22(2). - P. 193-200.

310. Microtubules Regulate Angiotensin II Type 1 Receptor and Racl1.calization in Caveolae/Lipid Rafts Role in Redox Signaling / L. Zuo, M. Ushio-Fukai, L.L. Hilenski et al. // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2004.-.24. - P. 1223-1228.

311. Modulation of extracellular superoxide dismutase expression byangiotensin II and hypertension / T. Fukai, MR. Siegfried, M. Ushio-Fukai et al. // Cire Res. 1999. - 85. - P.23-28.

312. Modulation of protein kinase C (PKC)-mediated contraction and thepossible role of PKC epsilon in rat mesenteric arteries / Y. Shirasawa, T.J. Rutland, J.L. Young et al. // Front Biosci. 2003. -1;8. - P. al33-138.

313. Mohazzab-H, KM. NADH oxidoreductase is a major source of superoxideanion in bovine coronary artery endothelium / KM. Mohazzab-H, PM. Kaminski, MS. Wolin // Am J Physiol. 1994. - 266. - P. 2568-2572.

314. Molecular basis of cystathionine beta-synthase deficiency in pyridoxineresponsive and nonresponsive homocystinuria / F.L. Hu, Z. Gu, V. Kozich et al. // Hum Mol Genet. 1993. - 2. - P. 1857-60.

315. Mongin, A.A. Mechanisms of cell volume regulation and possible nature of the cell volume sensor / A.A. Mongin, S.N. Orlov // Pathophysiology. 2001. - 8. - P. 77-88.

316. Moore, P.K. Hydrogen sulfide: from the smell of the past to the mediator of the future? / P.K. Moore, M. Bhatia, S. Moochhala // Trends Pharmacol Sci. 2003. - 24. - P. 609-11.

317. Murphy, H. An inflammatory mediator of glomerular mesangial cells / H. Murphy, J. Pfeilschifter, D. Kunz // Nephron. 1993. - Vol. 64. - P. 518-528.

318. Myosin phosphatase-Rho interacting protein. A new member of the myosin phosphatase complex that directly binds RhoA / H.K. Surks, C.T. Richards, M.E. Mendelsohn et al. // J. Biol Chem. 2003.278(51).-P. 51484-51493.

319. Myosin phosphatase: structure, regulation and function / M. Ito, T. Nakano, F. Erdodi et al. // Mol Cell Biochem. 2004. - 259 (1-2). - P. 197-209.

320. NAD(P)H oxidase-derived hydrogen peroxide mediates endothelial nitric oxide production in response to angiotensin II / H. Cai, Z. Li, S. Dikalov et al. // J Biol Chem. 2002. - 277. - P.48311-48317.

321. Nelson, M. Quayle Physiological roles and properties of potassiumchannels in arterial smooth muscle / M. Nelson //Am.J. Physiol. 1995. -V.268.-P. 799-822.

322. Nitric oxide: biological mediator, modulator and effector / M.S.

323. Carreras, G.A. Pargament, S.D. Catz et al. // Ann. Med. -1994. № 27. -C. 321-329.

324. Nitric oxide-cGMP-protein kinase G pathway negatively regulatesvascular transient receptor potential channel TRPC6 / S. Takahashi, H. Lin, N. Geshi et al. // J Physiol. 2008. - 586(Pt 17). - P. 4209-23.

325. Nitric oxide increases carbon monoxide production by piglet cerebralmicrovessels / C.W. Leffler, L. Balabanova, A.L. Fedinec et al. // Am J ' Physiol Heart Circ Physiol. -2005. -289. P. 1442-1447.

326. Nitric oxide-induced F-actin disassembly is mediated via cGMP,cAMP, and protein kinase A activation in rat mesangial cells / K.B. Sandau, F. Gantner, B. Brune et al. // Exp Cell Res. 2001. -10.-271(2).-P.329-36.

327. Noma, K. Physiological role of ROCKs in the cardiovascular system / K.

328. Noma, N. Oyama, J.K. Liao // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2006. -290 (3). -P. C661-8.

329. Nunes, J.P. Cytoskeleton, passive tension and the contraction of the rataorta to phorbol 12,13-dibutyrate / J.P. Nunes // Pharmacol. Res. 2002. -46(2).-P. 113-117.

330. O'Donnel, M. Regulation of ion pumps and carriers in vascular smoothmuscle / M. O'Donnel, N. Owen // Physiol. Rev. 1994. - V.74, N3. -. P. 683-721

331. Oeckler, R.A. Cytosolic NADH redox and thiol oxidation regulatepulmonary arterial force through ERK MAP kinase / R.A. Oeckler, E. Arcuino, M. Ahmad et al. // Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. -2005. № 288(6). - P. 1017-1025.

332. Ohashi, T. Dynamics and Elasticity of the Fibronectin Matrix in Living

333. Cell Culture Visualized by Fibronectin Green Fluorescent Protein / T. Ohashi, Kiehart, D., Erickson, H. P. // Proc. Nat. Acad. Sci. - 1999. -Vol. 96.-P. 2153-2158.

334. Orlov, S.N. Bumetanide-sensitive ion fluxes in vascular smooth musclecells: lack of functional Na+,K+,2C1" cotransport / S.N. Orlov, J. Tremblay, P. Hamet // J. Membrane Biol. 1996. - 153. - P. 125-135.

335. Orlov, S.N. cAMP signaling inhibits dihydropyridine-sensitive Ca2+ influxin vascular smooth muscle cells / S.N. Orlov, J. Tremblay, P. Hamet // Hypertension. 1996. - V.27. - P. 774-780

336. Orlov, S.N. Cell volume in vascular smooth muscle is regulated bybumetanide-sensitive ion transport / S.N. Orlov, J. Tremblay, P. Hamet // Am. J. Physiol. Cell Physiol. -1996b. 270. - P. C1388-C1397.

337. Orlov, S.N. Hypertension. In Red cell membrane transport in health anddisease / Bernhardt I. and Ellory J.C. // editors. Springer, Berlin. 2003. -P. 587-602.

338. P47phox associates with the cytoskeleton through cortactin in humanvascular smooth muscle cells / R.M. Touyz, G. Yao, M.T. Quinn et al. // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. -2005. -25.-P. 512.

339. Papakonstanti, E.A. Actin cytoskeleton: a signaling sensor in cell volumeregulation / E.A. Papakonstanti, E.A. Vardaki, C. Stournaras // Cell. Physiol. Biochem. 2000. - 10. - P. 257-264.

340. Paul, R.J. Effects of microtubule disruption on force, velocity,stiffness and Ca2+.j in porcine coronary arteries / R.J. Paul, P.S. Bowman, M.S. Kolodney // Am J. Physiol Heart Circ Physiol. -2000. 279 (5). - P. H2493- H2501.

341. Perivascular superoxide anion contributes to impairment of endotheliumdependent relaxation. Role of Gp91phox / FE. Rey, XC. Li, OA. Carretero et al. // Circulation. 2002. - 106. - P. 2497-2502.

342. Perry, P.B. Swelling-activated K fluxes in vascular endothelial cells:volume regulation via K-Cl cotransport and K channels / P.B. Perry, W.C. O'Neill // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1993.- 265. -P. C763-C769.

343. Phosphorylation of CPI-17, an inhibitory phospho-protein of smooth muscle myosin phosphatase, by Rho-kinase / M. Koyama, M. Ito, J. Feng, et al. // FEBS. 2000. - Lett 475. - P.197-200.

344. Phosphorylation of the myosin phosphatase target subunit by integrin-linked kinase / A. Muranyi, J.A. MacDonald, J.T. Deng et al. // Biochem J.-2002.-366.-P. 211-216.

345. Physiological features of visceral smooth muscle cells, with special reference to receptors and ion channels / H. Kuriyama, K. Kitamura, T. Itoh et al. // Physiol. Rev. 1998. - V. 78, No.3 - P. 811-920.

346. PI3-kinase/Akt modulates vascular smooth muscle tone via cAMPsignaling pathways / P. Komalavilas, S. Mehta, C.J. Wingard et al. // J Appl Physiol. 2001. - 91(4). - P. 1819-27.

347. Platts, S.H. Microtubule-dependent regulation of vasomotor tone requires

348. Rho-kinase / S.H. Platts, L.A. Martinez-Lemus, G.A. Meininger // J. Vase Res. 2002. - 39 (2). - P. 173-182.

349. Pleiotropic effects of hydrogen peroxide in arteries and veins fromnormotensive and hypertensive rats / K. Thakali, L. Davenport, G.D. Fink et al. // Hypertension. 2006. - 47(3). - P. 482-7.

350. Possible involvement of the novel CPI-17 protein in protein kinase Csignal transduction of rabbit arterial smooth muscle / L. Li, M. Eto, M.R. Lee et al.//J Physiol. 1998.-508.-P. 871-881.

351. Primary structure and functional expression of a high voltage activatedcalcium channel from rabbit lung / M. Biel, P. Ruth, E. Bosse et al. // FEBS Lett 1990. - 269. - P. 409-412.

352. Protein kinase C activation during Ca2+-independent vascular smoothmuscle contraction / D.C. Throckmorton, C.S. Packer, C.M. Brophy // J. Surg Res. 1998. - 78(1). - P. 48-53.

353. Protein oxidation in the brain in Alzheimer's disease / M. Y.Aksenov, M.

354. V. Aksenova, D. A. Butterfield et al. // J. Neuroscience. 2001. -Vol. 103.-P. 373-383.

355. Receptor-mediated control of regulatory volume decrease (RVD) andapoptotic volume decrease (AVD) / Y. Okada, E. Maeno, T. Shimizu etal. // J. Physiol. 2001. - 532 (Pt 1). - P. 3 -16.

356. Regulation of cell motility by mitogen-activated protein kinase /

357. R.L. Klemke, S. Cai, A.L. Giannini et al. // J Cell Biol. 1997. -137.-P. 481-492.

358. Regulation of myosin phosphatase by Rho and Rho-associated kinase

359. Rho-kinase) / K. Kimura, M. Ito, M. Amano et al. // Science. 1996. -273.-P. 245-248.

360. Regulation of vascular smooth muscle tone by N-terminal region ofcaldesmon. Possible role of tethering actin to myosin / Y.H. Lee, C. Gallant, H. Guo et al. // J. Biol Chem. 2000. - 275 (5). - P. 3213-3220.

361. Regulatory volume increase is associated with p38 kinase-dependent actincytoskeleton remodeling in rat kidney MTAL / M. Bustamante, F. Roger, M.L. Bochaton-Piallat et al. // Am J Physiol Renal Physiol. -2003 285 (2). - P. F336- F347.

362. RhoA/Rho kinase (ROCK) alters fetuin-A uptake and regulatescalcification in bovine vascular smooth muscle cells (BVSMC) / N.X.Chen, X. Chen, K.D. O'Neill et al. // Am J Physiol Renal Physiol. -2010.-299(3).-P. F674-80.

363. Role of lipid peroxidation and the glutathione-dependent antioxidantsystem in the impairment of endothelium-dependent relaxations with age / M.A Rodrigues-Martinez, M.J. Alonso, J. Redonto et al. // Br. J. Pharmacol. 1998. - 123. -P.l 13-121.

364. Role of the C-terminal extremities of the smooth muscle myosinheavy chains: implication for assembly properties / S. Quevillon-Cheruel, G. Foucault, M. Desmadril et al. // FEBS Letters. 1999.-454.-P. 303-306.

365. Role of xanthine oxidoreductase and NAD(P)H oxidase in endothelialsuperoxide production in response to oscillatory shear stress / JS. Nally, ME. Davis, DP. Giddens et al. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. -2003. 285. - P. 2290-2297.

366. Russell, J.M. Sodium-potassium-chloride cotransport / J.M. Russell //

367. Physiol.Rev. 2000. - 80. - P. 212-276

368. Rutllant, J. Osmotic tolerance limits and properties of rhesus monkey

369. Macaca mulatta) spermatozoa / J. Rutllant, A.C. Pommer, S.A. Meyers // J. Androl. 2003. - 24 (4). - P. 534-41.

370. SAPK2/p38-dependent F-actin reorganization regulates early membraneblebbing during stress-induced apoptosis. / J. Huot, F. Houle, S. Rousseau et al. // J Cell Biol. 1998. - 143(5). - P. 1361-73.

371. Sato, A. Mechanism of dilation to reactive oxygen species in humancoronary arterioles / A. Sato, I. Sakuma // Am J Physiol Heart Circ Physiol Gutterman DD. 2003. - 285. - P.2345-2354.

372. Schmidt, H.H.H.W. The nitric oxide and cGMP signal transduction system: Regulation and mechanism of action / H.H.H.W. Schmidt, H. Nau, W. Wittfoht // Europ. J. Pharmacol. 1988. - V. 154. - P. 213-216.

373. Schmidt, H.H.H.W. The role of nitric oxide in physiology and ' patophysiology / H.H.H.W. Schmidt // FEDS Lett. 1992. - Vol. 307,l.-P. 102-107.

374. Sendao Oliveira, AP. Relaxation induced by acetylcholine involves endothelium-derived hyperpolarizing factor in 2-kidney 1 -clip hypertensive rat carotid arteries / AP. Sendao Oliveira, LM. Bendhack // Pharmacology. 2004. - 72. - P.231-239.

375. Shibayama, T. Differential binding activity of erythrocyte ankyrin to thealpha-subunits of Na+, K+-ATPases from rat cerebral and axonal membrane / T. Shibayama, K. Nakaya, Y. Nakamura // Cell Structureand Function. 1993. - 18. - P. 79-85.

376. Signal transduction in matrix contraction and the migration of vascularsmooth muscle cells in three-dimensional matrix / S. Li, J.J. Moon, H. Miao, G. Jin et al. // J. Vase Res. 2003. - 40 (4). - P.378-388.

377. Small, C. The cytoskeleton of the vertebrate smooth muscle cell / C.

378. Small, H. Gimona // Acta Physiologia Scandinavica. 1998. -V.164.-P. 341.

379. Smirnov, S.V. Ca2+ currents in single myocytes from humanmesenteric arteries: evidence for a physiological role of L-type channels / S.V. Smirnov, PL. Aaronson // J. Physiol. (Lond.). 1992. -457.-P. 455-475.

380. Smith, J.B. Na+/K+/Cl" cotransport in cultured vascular smooth musclecells: stimulation by angiotensin II and calcium ionophores, inhibition by cyclic AMP and calmodulin antagonists / J.B. Smith, L. Smith // J.Membrane Biol. 1987. - 99. - P.51-63.

381. Sobey, C.G. Effect of nitric oxide and potassium channel agonists andinhibitors on basilar artery diameter / C.G. Sobey, F.M. Faraci // Am J Physiol. 1997. - 272(1 Pt 2). - P. 256-62.

382. Solaro, R.J. Myosin light chain phosphatase a Cinderella of cellularsignaling / R.J. Solaro // Circ. Res. 2000. - 87. - P. 173-175

383. Somlyo, A.P. Ca2+ sensitivity of smooth muscle and nonmuscle myosin1.: modulated by G proteins, kinases, and myosin phosphatase / A.P. . Somlyo, A.V. Somlyo // Physiol Rev. 2003. - 83(4). - P. 1325-58.

384. Somlyo, A.P. Signal transduction and regulation in smooth muscle / A.P.

385. Somlyo, A.V. Somlyo//Nature. 1994.-372.-P. 231-236.

386. Sotnikova, R. Investigation of the mechanisms underlying H202- evokedcontraction in the isolated rat aorta / R. Sotnikova // Gen Pharmacol. -1998.-31.-P115-119.

387. Sperelakis, N. Properties of calcium channels in cardiac muscle andvascular smooth muscle / N. Sperelakis // Molecular, and Cell Biochem.- 1990.-V.99.-P. 97-109.

388. Standley, P.R. Cyclic stretch regulates autocrine IGF-I in vascularsmooth muscle cells: implications in vascular hyperplasia / P.R. Standley, T.J. Obards, C.L. Martina // Am J. Physiol. 1999. - 276 (4 Pt 1). - P. E697-705.

389. Steenbergen, J.M. The quantal nature of calcium release to caffeine insingle smooth muscle cells results from activation of the sarcoplasmic reticulum Ca2/-ATPase / J.M. Steenbergen, F.S. Fay // J. Biol. Chem. -1996.-271.-P. 1821-1824.

390. Stockand, J.D. Mechanism of activation by cGMP-dependent proteinkinase of large Ca(2+)-activated K+ channels in mesangial cells / J.D. Stockand, S.C. Sansom // Am J Physiol. 1996. - 271(5 Pt 1). - P. 1669-77.

391. Strange, K. Cellular and molecular physiology of volume-sensitive anionchannels / K. Strange, F. Emma, P.S. Jackson // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1996. - 270. - P. C711-C730.

392. Svitkina, T. Imaging cytoskeleton components by electron microscopy / T.Svitkina // Methods Mol Biol. 2009. - 586. - P. 187-206.

393. Swelling-induced K+ fluxes in vascular smooth muscle cells are mediated by charybdotoxin-sensitive K+ channels / Y.J.Anfinogenova, X. Rodriguez, R.Grygorczyk et al. // Cell Physiol Biochem.-2001.- 11.-P. 295-310.

394. Tang, D.D. Downregulation of profilin with antisenseoligodeoxynucleotides inhibits force development during stimulation of smooth muscle / D.D. Tang, J. Tan // Am J. Physiol Heart Circ Physiol.- 2003. 285(4). - P. H1528- H1536.

395. Tani, E. Continuous elevation of intracellular Ca is essential for thedevelopment of cerebral vasospasm / E. Tani, T. Matsumoto // Curr.

396. Vase. Pharmacol. 2004. - 2(1). - P. 13-21.

397. Tewari, K. Sodium nitroprusside and cGMP decrease Ca2+ channelavailability in basilar artery smooth muscle cells / K. Tewari, J.M. Simard // Pflugers Arch. 1997. - 433(3). - P. 304-11.

398. The actin cytoskeleton response to oxidants: from small heat shockprotein phosphorylation to changes in the redox state of actin itself / I. Dalle-Donne, R. Rossi, A. Milzani et al. // Free radical biology & medicine. 2001.-31(12). P. 1624-1632.

399. The carboxyl-terminal isoforms of smooth muscle myosin heavychain determine thick filament assembly properties / A.S.Rovner, P.M.Fagnant, S. Lowey et al. // J. Cell. Biol. 2002. - 156. - P. 113-124.

400. The cardiac Na -Ca exchanger binds to the cytoskeletal protein ankyrin /

401. Z.P. Li, E.P. Burke, J.S. et al. // Journal of Biological Chemistry. 1993. -268.-P. 11489-11491.

402. The influence of beta-adrenergic activation on noradrenergic alpha 1activation of rabbit afferent arterioles / M. Kornfeld, M. Salomonsson, A. Gutierrez, et al. // Pflugers Arch. 2000. - 441(1). - P.25-31.

403. The interaction between the regulatory light chain domains on two headsis critical for regulation of smooth muscle myosin / X-D. Li, J. Saito, R. Ikebe, K. Mabuchi, et al. // Biochemistry 2000. - 39. - P. 2254-2260.

404. The mechanism of phenylephrine-mediated Ca(2+).(i) oscillationsunderlying tonic contraction in the rabbit inferior vena cava / C.H. Lee, D. Poburko, P. Sahota, J.Sandhu et al. // J.Physiol. 2001. 534 (Pt 3). -P. 641-650.

405. The NAD(P)H oxidase homolog nox4 modulates insulin-stimulatedgeneration of H202 and plays an integral role in insulin signal transduction / Mahadev K, Motoshima H, Wu X et al. // Mol Cell Biol 24:1844-1854, 2004.

406. The Role of Endogenous H(2)S in Cardiovascular Physiology / N.

407. Skovgaard, A. Gouliaev, M. Aalling et al. // Curr Pharm Biotechnol. -2011. (Epub ahead of print)

408. The role of RhoA and Rho-associated kinase in vascular smooth musclecontraction / K. Sward, M. Mita, D.P. Wilson, J.T. Deng et al. // Curr Hypertens Rep. 2003. - 5 (1). - P. 66-72.

409. The vasorelaxant effect of H2S as a novel endogenous gaseous K(ATP)channel opener / W. Zhao, J. Zhang, Y. Lu et al. // EMBO J. 2001. -20.-P. 6008-16.

410. Thengchaisri, N. Hydrogen peroxide induces endotheliumdependent andindependent coronary arteriolar dilation: role of cyclooxygenase and potassium channels / N. Thengchaisri, L. Kuo // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2003. - 285. - P. 2255-2263.

411. Theurkauf, W.E. / Molecular characterization of the cAMP-dependentprotein kinase bound to microtubule-associated 2 / W.E. Theurkauf, R.B. Vallee // J. Biol. Chem. 1982. - 257. - P. 3284-3290.

412. Timasheff, S.N. In vitro assembly of cytoplasmic microtubules /

413. S.N. Timasheff, L.M. Grisham // Ann. Rev. Biohem. 1980 - 49. -P. 565-591.

414. Urban, N.H. K+ depolarization induces RhoA kinase translocation tocaveolae and Ca sensitization of arterial muscle / N.H. Urban, K.M. Berg, P.H.Ratz // Am J. Physiol Cell Physiol. 2003. - 285(6). - P. C1377-1385.

415. Valen, G. Hydrogen peroxide induces endothelial cell atypia andcytoskeleton depolymerization / G. Valen, A.Sonden, J. Vaage. // Free Radical Biology and Medicine. 1999. - V. 26, N. 11. - P. 1480 - 1488.

416. Vanin, A.F. Biology of nitric oxide / A.F. Vanin, I.V. Malenkova, V.A. Serezhenkov//Biochemistry. 1997. - № 1. - P. 191-203.

417. Vascular endothelium expresses 3-mercaptopyruvatesulfurtransferase and produces hydrogen sulfide / N. Shibuya, Y. Milkanai, Y. Kimura et al. // Journal of Biochemistry Advance Access. 2009. - 146. - P.623-626.

418. Vascular smooth muscle cell phenotypic modulation in culture is ' associated with reorganisation of contractile and cytoskeletal proteins /

419. N.F. Worth, B.E. Rolfe, J. Song et al. // Cell Motil. Cytoskeleton. -2001.-49(3).-P. 130-145.

420. Vascular relaxation response to hydrogen peroxide is impaired inhypertension / YJ. Gao, Y. Zhang, S. Hirota et al. // Br J Pharmacol. -2004,- 142. -P.143-149.

421. Vascular smooth muscle contraction in hyperosmotic medium: role of

422. Ca , anion channels and cell volume-sensitive Na+,K+,2C1" cotransport / Y. J. Anfmogenova, A. A. Kilin, I. V. Kovalev et al. // J. Hypertens.• 2004.-21.-P. S101.

423. Vitamin C improves endothelium-dependent vasodilation by restoringnitric oxide activity in essential hypertension / S. Taddei, A. Virdis, L. Ghiadoni et al. / Circulation. 1998. - 97. - P.2222-2229.

424. Wang, R. Signaling pathways for the vascular effects of hydrogen• sulfide / R. Wang // Curr Opin Nephrol Hypertens. 2011. - 20(2). -P.107-112.

425. Wei, E.P. Mechanisms of cerebral vasodilation by superoxide, hydrogenperoxide, and peroxynitrite / E.P. Wei, H.A. Kontos, J.S. Beckman // Am J Physiol. 1996.-271.-P. 1262-1266.

426. Wedgwood, S. Endothelin-1 decreases endothelial NOS expression and activity through ETA receptor-mediated generation of hydrogenperoxide / S. Wedgwood, SM. Black // Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2005. - 288. - P. 480^187.

427. Welsh, D.G. Oxygen induces electromechanical coupling in arteriolarsmooth muscle cells: a role for L-type Ca21 channels / D.G. Welsh, W.F. Jackson, S.S. Segal // Am J Physiol. 1998. - 274. - P. H2018-H2024.

428. Wier, W.G. Alpha 1-adrenergic signaling mechanisms in contraction ofresistance arteries / W.G. Wier, K.G. Morgan // Rev Physiol. Biochem. Pharmacol. 2003. - 150. - P. 91-139.

429. Wolin, M. Interactions of Oxidants With Vascular Signaling Systems /

430. M.Wolin // J. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. -2000.-20.-P. 1430-1442.

431. Wolin, M.S. Superoxide in the vascular system / M.S. Wolin, S.A. Gupte,

432. R.A. Oeckler // J. Vase. Res. 2002. - 39(3). - P. 191-207.

433. Xiong, Z. Regulation of L-type calcium channels of vascular smoothmuscle cells / Z. Xiong, N. Sperelakis // J. Mol. Cell. Cardiol. 1995. -27.-P. 75-91.

434. Yan, H. The possible role of hydrogen sulfide on the pathogenesis ofspontaneous hypertension in rats / H. Yan, J. Du, C. Tang // Biochem. Biophys. Res. Common. 2004. - 313. - P. 22-27.

435. Yang, G. Hydrogen sulfide-induced apoptosis of human aorta smoothmuscle cells via the activation of mitogenactivated protein kinases and caspase-3 / G. Yang, X. Sun, R. Wang // FASEB J. 2004. - 18. - P. 1782-4.

436. Zhang, D. State-to-state quantum reactive scattering for four-atomchemical reactions: Deferential cross section for the H+H20-> H2+OH abstraction reaction / D. Zhang // J. Chem. Phys. 2006. -125.-P. 133-145.

437. Zhang, W. Dynamic association between a-actinin and P integrinregulates contraction of canine tracheal smooth muscle / W. Zhang, S. J.

438. Gunst // 2006. Physiology in Press.

439. Zhao, W. H2S-induced vasorelaxation and underlying cellular andmolecular mechanisms / W. Zhao, R. Wang // Am. J. Physiol. Heart. Circ Physiol. 2002. - 283. - P. 474-480.

440. Zhao, W. Modulation of endogenous production of H2S in rat tissues //

441. W. Zhao, J. F. Ndisang, R. Wang // Can. J. Physiol. Pharmacol. 2003. - 81. - P.848-853.

442. Zhao, Y. Hydrogen peroxide-induced cytoskeletal rearrangement incultured pulmonary endothelial cells / Y. Zhao, H. W. Davis // J Cell Physiol 1998. - 174. - P.370-379.

Информация о работе

Гусакова, Светлана Валерьевна
доктора медицинских наук
Томск, 2011
ВАК 03.03.01

Диссертация

АФК-зависимые механизмы регуляции вторичными посредниками электрической и сократительной активности гладких мышц - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы