Роль pH в регуляции функции гладких мышц начальной части толстого кишечника

Погудин, Юрий Анатольевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Роль pH в регуляции функции гладких мышц начальной части толстого кишечника
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Роль pH в регуляции функции гладких мышц начальной части толстого кишечника"

На правах рукописи

Погудин Юрий Анатольевич

РОЛЬ рН В РЕГУЛЯЦИИ ФУНКЦИИ ГЛАДКИХ МЫШЦ НАЧАЛЬНОЙ ЧАСТИ ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА

03 00 13- физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ООЗОбЗЬиг:

Томск-2007

003059602

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"

Научный руководитель доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН,

Заслуженный деятель науки РФ Медведев Михаил Андреевич

Официальные оппоненты доктор медицинских наук,

профессор Барбараш Нина Алексеевна

доктор медицинских наук,

профессор Ковалев Игорь Викторович

Ведущая организация-ГУ НИИ Физиологии СО РАМН

Защита состоится « 2J » 2007г в ft часов, на

заседании диссертационного совета Д 208 096 01 при ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава (634050, г Томск, Московский тракт, 2)

С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава (634050, г Томск, пр Ленина, 107)

Автореферат разослан « 2Г» 2007г

Ученый секретарь

диссертационного совета

Суханова Г А

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Гладкие мышцы желудочно-кишечного тракта характеризуются большим многообразием электрических и сократительных свойств, которые находятся под сложным контролем нервной и гуморальной системы регуляции организма [Курский МД, Михальченко ЕТ. и др, 1975 - 1992, и другие; Шуба М.Ф, 1965 - 1992, Богач П Г, Рыбапьченко В Г. 1978, Баскаков М Б и др 1980 - 2000, Медведев М А. 1980 - 2006] В связи с поисками новых методов лечения нарушений моторной деятельности гладкомышечных органов пищеварительного тракта необходимы новые знания для понимания не только общих закономерностей функционирования гладких мышц, но также знания фундаментального характера индивидуальных особенностей отдельных гладкомышечных образований ЖКТ

Особого внимания в этом плане заслуживают не только сфинктерные образования желудочно-кишечного тракта, но и прилегающие к ним гладкомышеч-ные структуры, которые имеют ряд особенностей функционирования миоген-ной природы, а также регуляции со стороны как нервно-гуморальной, так и клеточно-межклеточных и тканевых информационных посредников [Ходоров БИ, 1975, Амвросьев АП, 1977, Ноздрачев АД, 1981, Геннис Р, 1997, Allescher Н D et al, 1988, Rattan S et al, 1989, Whalen E.J et al, 2000, Waka-bayashi I et al, 2001]

Наряду с классическими клеточными и межклеточными информационными посредниками, такими как концентрация свободного внутриклеточного кальция (Са,), цАМФ, цГМФ, инозитол-3-фосфат и другие, ионы водорода, имеющий определенный внутриклеточный уровень и создающие определенное значение внутриклеточного рН (рН,), существенным образом могут изменять функциональный ответ гладкомышечных клеток к воздействию регулирующих внутриклеточных, межклеточных, экстраклеточных и других факторов регуляции конечного ответа [Орлов С Н , 1987 - 1989, Баскаков М Б , 2004, Weinberg A G , 1970, Qween N F , 1984, Allan S Pollook et al, 1986, Bobik A , Weissberg P , 1986, Bund S J 1989, Kamp T J et al, 2000, Cao W et al, 2003, W F Boron et al, 2004]

Являясь одной из основных констант внутриклеточного гомеостаза, в результате определенного уровня внутриклеточного метаболизма ГМК и работы ионтранспортирующих систем, ионы водорода могут определять функциональный ответ клеток, влияя на уровень Са, в покое и при возбуждении, определяя особенности электро- и фармакомеханического сопряжения гладкомышечных клеток желудочно-кишечного тракта [Goyal R К, Rattan S , 1980, Sohn U D et al, 1997, Buharalioglu С К et al, 2002] Это в свою очередь определяется перестройкой функции многих ферментативных систем и регуляторных белков, концентрацией Са,, состоянием потенциале- и рецепторзависимых ионных каналов различного типа и других ионтранспортирующих систем мембраны гладкомышечных клеток В конечном итоге эти изменения приводят к модулирующему или определяющему влиянию на конечный функциональный ответ гладкомышечной ткани отдельного региона в виде изменения как электро-, так и фармакомеханического сопряжения [Студницкий В Б 1989, Rajendran V М et

al, 1999, Orlov S N et al, 2000, Noboru Toda and Frnold G Herman, 2005]

Наиболее важная роль среди этих ионтранспортирукмцих систем регуляции рН, принадлежит катионному — Na+/H+ обменнику и анионному - натрий зависимому - или натрий независимому СГ/НС03 обменнику [Геннис Р ,1997, Орлов С H и др , 1992, Berk ВС et al, 1990, Blank Р S et al, 1992, Fitzgerald R С et al, 1998, Duquette RA et al, 2001, Yeung E W et al, 2002, W F Boron et al, 2004]

Разрозненность и неоднородность экспериментальных данных в приведенных работах о роли и значении внутриклеточного рН в регуляции функции ГМК определили необходимость проведения анализа влияний изменения рН, в реакциях гладкомышечных клеток на электромеханическое сопряжение и действие биологически активных веществ в начальной части толстого кишечника, прилегающего к Баугиновой заслонке

Вышеизложенное позволяет выдвинуть данное направление нашего исследования в ряд наиболее актуальных исследовательских задач электрофизиологии гладких мышц желудочно-кишечного тракта

Нами были проведены исследования по изучению влияния изменения рН, на функциональную активность циркулярных гладких мышц начальной части толстого кишечника котов, в области илеоцекального сфинктера

Цель исследования:

Изучить роль и механизмы регуляции электрической и сократительной активности циркулярного слоя гладкомышечных клеток начальной части толстого кишечника в условиях измененного внутриклеточного рН

Задачи исследования:

1 Изучить основные параметры электрической и сократительной активности ГМК циркулярного слоя начальной части толстого кишечника

2 Изучить влияние изменения вне- и внутриклеточного рН на параметры электромеханического сопряжения ГМК начальной части толстого кишечника

3 Исследовать влияние ацетилхолина на показатели электрической и сократительной активности гладких мышц в условиях измененного рН,

4 Изучить эффекты и механизмы регуляции электрической и сократительной активности циркулярного слоя ГМК начальной части толстого кишечника при действии нитропруссида натрия (как донора оксида азота) в условиях измененного внутриклеточного рН

Научная новизна

В работе впервые проведен анализ электрических и сократительных свойств ГМК циркулярного слоя начальной части толстого кишечника, прилегающего к Баугиновой заслонке, в условиях внутриклеточного закисления и защелачивания Показано, что в нормальном растворе Кребса гладкие мышцы не обладали спонтанной электрической и сократительной активностью Потенциал действия имеет кальциевую природу

Внутриклеточное закисление оказывало активирующее влияние на электрическую и сократительную активности гладких мышц не только за счет подавления калиевой проводимости мембраны, но и за счет активации кальциевой проводимости мембраны Внутриклеточное защелачивание

вызывало подавление электрической и сократительной активности гладкомышечных клеток за счет активации калиевой и подавления кальциевой проводимости мембраны В поддержании постоянства рН, определяющая роль принадлежит натрий-протонному и хлор-бикарбонатному обменникам

Внутриклеточное закисление приводит к увеличению сократительных ответов на ацетилхолин, а внутриклеточное защелачивание - к достоверному подавлению его действия

Нитропруссид натрия оказывает дозозависимое ингибирующее действие на параметры электрической и сократительной активности ГМК как в нормальном растворе Кребса, так и на фоне влияния измененного рН, Его действие проявляется цГМФ-зависимым и цГМФ-независимым путем При этом внутриклеточное закисление снижает ингибирующие эффекты нитропруссида натрия, в основном за счет подавления калиевой проводимости мембраны

Научно-практическая значимость работы

В результате проведенного исследования получены новые данные для понимания фундаментального характера, роли и значения внутриклеточного закисления и защелачивания в регуляции электрической и сократительной активности гладких мышц начальной части толстого кишечника в области Баугиновой заслонки Полученные данные могут быть использованы при разработке средств и способов фармакологической коррекции патологических состояний, связанных с нарушением функции проксимального отдела толстого кишечника в области илеоцекального сфинктера, а также служат теоретической и экспериментальной базой целенаправленного поиска модуляторов передачи сигналов в ГМК

Положения, выносимые на защиту

1 Гладкомышечные клетки начальной части толстого кишечника не обладали спонтанной электрической и сократительной активностью Потенциал действия имеет кальциевую природу

2 Внутриклеточное закисление сопровождается активацией сократительной активности гладких мышц начальной части толстого кишечника не только за счет подавления калиевой проводимости мембраны, но и за счет активации кальциевой проводимости мембраны гладкомышечных клеток

3 Внутриклеточное защелачивание вызывает достоверное подавление сократительной активности гладкомышечных клеток начальной части толстого кишечника за счет активации калиевой проводимости и подавления кальциевой проводимости мембраны

4 Внутриклеточное закисление вызывает увеличение сократительных ответов на ацетилхолин, а внутриклеточное защелачивание ведет к их снижению

5 Внутриклеточное закисление снижает угнетающие эффекты нитропруссида натрия за счет подавления калиевой проводимости мембраны

Основные положения используются в курсе лекционных и практических занятий по нормальной физиологии и биофизике в разделе "Физиология возбудимых тканей"

Апробация работы

Основные материалы доложены и обсуждены на 4, 5 и 6 международном конгрессе молодых учёных и специалистов (Томск 2003, 2004, 2005 г), на симпозиуме «Мембранные и молекулярные механизмы регуляции функций гладких мышц» г Томск 27-28 мая 2004 , на XIX съезде физиол общ им И,П, Павлова г Екатеренбург, 2004 г , на Всерос конф молод исслед "Физиология и медицина" С Петербург 2005 г, на 5 съезде физиологов Сибири, г Томск, 2005 г

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 16 статей, из них 2 в центральной печати

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 137 страницах, иллюстрирована 43 рисунками и состоит из введения, 4 глав, обсуждения, выводов, указателя литературы из 229 источников (63 отечественных и 166 иностранных авторов) и приложения

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследования являлись гладкомышечные полоски циркулярного слоя начальной части толстого кишечника котов, на расстоянии до 1,5 см от илеоцекального сфинктера Использовались половозрелые животные, весом 23,5 кг

Исследование электрофизиологических свойств циркулярного слоя гладких мышц начальной части толстого кишечника проводилось методом двойного «сахарозного мостика» с одновременной регистрацией электрической и сократительной активности [Артеменко Д П , Шуба М Ф , 1964]

Применение данной методики позволяет решать задачу одновременной регистрации электрической и сократительной активности гладких мышц

Нормальный раствор Кребса, использовавшийся в опытах, имел следующий состав (мМ) №С1 - 120,4, КС1 - 5,9, ЫаНС03 - 15,5, НаН2Р04 - 1,2, МцС12 -1,2, СаС12 - 2,5, глюкоза - 11,5

Бескарбонатный - «Трис»-содержащий раствор был приготовлен из нормального раствора Кребса путем эквимолярной замены ЫаНСОэ на Трис-аминометан

Гиперкалиевый раствор (120 мМ) был приготовлен за счет увеличения концентрации КС1 с одновременным эквимолярным уменьшением №С1 в нормальном растворе Кребса и содержал (мМ) №С1 -4,7, ЫаНСОз - 3,6, КС1 -120, М%С\г~\,2, СаС12 -0,4, глюкоза-11,5 [Ходоров и др , 1987]

Изотонический раствор КС1 содержал 12,4 г/л химически чистой соли Все растворы готовили на бидистиллированной воде из солей марки ХЧ или ЧДА, рН растворов поддерживали в пределах 7,3-7,35, температура в пределах 36,5-36,7°С Изотонический раствор сахарозы (108,8 г/л) готовили на деионизированной воде Удельное сопротивление раствора было 3-5 мОм/см, а рН - 6,2

Используемые препараты хлористый аммоний, тетраэтиламмоний, ацетат натрия - «Реахим» (Россия), Трис-(гидроксиметил)-аминометан - «Reanal», амилорид, нитропруссид натрия, метиленовая синь — «Sigma» (США)

На электро- и механограммах работы гладкомышечных препаратов оценивались следующие параметры амплитуда ан- и катэлектротонических потенциалов, амплитуда потенциала действия, сила сокращений, вызванных различными воздействиями, и изменение мышечного тонуса

Полученные результаты обсчитывались и выражались как в абсолютных единицах, так и в процентных отношениях к исходным показателям Для статистической обработки использовались методы вариационной статистики Для сравнения наблюдений в динамике использовался критерий Вилкоксона [Айвазян С А , 1989, Лакин Г Ф , 1990, Гланц С , 1999]

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Электрические и сократительные свойства циркулярного слоя ГМК начальной части толстого кишечника

Электрическая и сократительная активность ГМК начальной части толстого кишечника в нормальном растворе Кребса характеризовалась стабильным мембранным потенциалом покоя (МП) со средним значением 32,6±3,2 мВ Спонтанной электрической и сократительной активности не наблюдалось Гладко-мышечные препараты не имели исходного тонуса

Действие поляризующих импульсов электрического тока различной направленности на мышечные полоски сопровождалось развитием электротонических потенциалов, амплитуда которых зависела от силы тока Изучение действия гиперполяризующего тока на ГМК показало, что амплитуда анэлектротониче-ского потенциала (АЭП) имела практически линейный характер от силы приложенного тока в диапазоне от 0,01 до 0,5 мкА Дальнейшее увеличение силы гиперполяризующего тока сопровождалось развитием на нисходящей части АЭП заметного взлета, который наиболее отчетливо проявлялся при силе раздражающего тока 1мкА и выше Одновременно с появлением взлета происходило снижение прироста амплитуды АЭП, что приводило к изменению хода анодной ветви вольтамперной характеристики

Деполяризующие импульсы раздражающего тока силой 0,01 -0,1 мкА приводили к развитию катэлектротонических потенциалов (КЭП), амплитуда которых зависела от силы раздражающего тока Сила тока 0,2 мкА и выше являлась для большинства гладкомышечных препаратов пороговой и вызывала генерацию ПД Амплитуда ПД у различных полосок находилась в пределах 3-5 мВ Генерация ПД сопровождалась сокращением препаратов, в которых фаза расслабления была значительно больше фазы сокращения

Увеличение силы деполяризующих импульсов тока до 0,4 мкА сопровождалось незначительным ростом амплитуды ПД на плато КЭП Увеличение силы деполяризующих импульсов тока приводило к значительному повышению

амплитуды и продолжительности сокращений, которые достигали своих максимальных значений при токе 1,0 мкА

Обобщая вышеизложенный материал, можно заключить, что сократительные ответы, продуцируемые ГМК начальной части толстого кишечника, обеспечиваются генерацией ПД

Для выяснения характера связи между уровнем МП и величиной сокращения ГМК начальной части толстого кишечника были проведены опыты с гиперкалиевым раствором [Ходоров и др , 1987, Баскаков М Б , 1988]

Действие гиперкалиевого раствора сопровождалось деполяризацией мембраны ГМК до постоянного стабильного уровня с генерацией на восходящей части деполяризации нескольких ПД При этом развивалось сокращение, имеющее фазную и тоническую компоненты Величина тонической компоненты составляла 42,6±2,21 % и сохранялась в течение всего времени действия деполяризующего раствора

Основной измеряемой характеристикой в этих экспериментах служила величина и продолжительность сократительного размыкательного ответа (РО) на прекращение действия гиперполяризующих импульсов тока длительностью 11 сек и силой 10 мкА Величина РО не превышала величины силы фазной компоненты и составляла 32,3±2,04% (р>0,05) РО длились не менее 3 мин и использовались в дальнейшем для оценки вклада роли кальциевой компоненты в регуляции сокращений ГМК [Ходоров и др , 1987]

Таким образом, применение гиперкалиевого раствора приводило к развитию стойкой деполяризации и формированию фазно-тонического сокращения Стимуляция мышечных полосок гиперполяризующими импульсами тока большой продолжительности и силы сопровождалось развитием РО, по характеру которых можно было судить о роли кальциевых каналов в регуляции сократительного ответа

Известно, что параметры ПД, генерируемые висцеральными и сосудистыми ГМК, обеспечиваются двумя основными проводимостями - кальциевой и калиевой Для изучения роли калиевой проводимости мембраны в генерации ПД ГМК циркулярного слоя начальной части толстого кишечника было изучено влияние блокатора калиевых каналов мембраны - тетраэтиламмония (ТЭА)

Применение ТЭА в концентрации 10 мМ приводило к стойкой деполяризации мембраны на 0,92±0,03мВ Одновременно с этим происходил рост сопротивления мембраны ГМК, которое достигало своего максимума на 4-5 минуте действия ТЭА и составляло 107,6±5,1% (р<0,05) от исходных значений в нормальном растворе Кребса При этом, на 4-5 минуте действия ТЭА, появлялись анодоразмыкательные ответы В отдельных случаях электрическая активность усиливалась, при этом на плато КЭП могли возникать несколько потенциалов действия Происходило увеличение мышечного тонуса препаратов, которое достигало наибольших значений к 3 - 4 минуте действия ТЭА В дальнейшем тонус гладкомышечных полосок оставался неизменным на протяжении всего времени перфузии раствором, содержащим ТЭА Сила вызванных сокращений при этом увеличивалась на 265±10,6 % (р<0,05)

У части ГМ препаратов, при действии ТЭА (ЮмМ), возникала спонтанная электрическая и сократительная активность Данная активность на 10 - 15 минуте постепенно снижалась, что характеризовалось уменьшением амплитуды и частоты генерации ПД

Окончание воздействия ТЭА приводило к восстановлению электрической и сократительной активности ГМК начальной части толстого кишечника на 10 -15 минуте перфузии мышечных полосок нормальным физиологическим раствором Кребса

Таким образом, подавление калиевой проводимости мембраны ГМК начальной части толстого кишечника оказывает активирующее действие на электрическую и сократительную активность исследуемых гладких мышц, что сопровождается деполяризацией мембраны, увеличением амплитуды АЭП, повышением возбудимости, увеличением амплитуды и количества ПД на КЭП, увеличением тонуса и силы вызванных сокращений

Для изучения роли АТФ-зависимых калиевых каналов в генерации ПД ГМК начальной части толстого кишечника использовали глибенкламид в концентрации 100 мкМ, он не оказывал влияния на величину ПД Регистрация показателей вызванной электрической и сократительной активности также не сопровождалась какими - либо существенными изменениями

Таким образом, влияние глибенкпамида не показало существенного вклада на АТФ-зависимые калиевые каналы в электрическую и сократительную активность изучаемой ГМК

Для выяснения роли внеклеточных ионов Са2+ в электрогенезе ГМК начальной части толстого кишечника изучалось влияние блокатора кальциевых каналов никардипина на показатели электрофизиологических свойств [ТокиШгш У, 2001]

Применение никардипина в концентрациях от 100 нМ до 100 мкМ приводило к дозазависимому ингибированию электрической и сократительной активности гладких мышц начальной части толстого кишечника

Так, никардипин в концентрации 100 нМ вызывал снижение величины ан-электротонических потенциалов на 18,08 ± 1,12% (р<0,05) При этом сила вызванных сокращений снижалась на 3,56 ± 0,58 % (р<0,05) от контрольных значений в нормальном растворе Кребса В концентрации 1 мкМ наблюдалось дальнейшее уменьшение сопротивления мембраны ГМК на 32,65±1,22%(р<0,05), подавление вызванной электрической активности и снижение силы сократительных ответов на 45,9 ± 2,14 % (р<0,05) В концентрации 10 мкМ никардипин вызывал снижение сопротивления мембраны на 33,18±1,33% (р<0,05), более выраженное подавление вызванной электрической активности и снижение силы вызванных сокращений на 69,32 ± 2,18 % (р<0,05) от контрольных значений в нормальном растворе Кребса В концентрации ЮОмкМ никардипин вызывал полное подавление вызванной электрической и сократительной активности

Окончание действия никардипина на ГМК приводила лишь к частичному восстановлению электрической и сократительной активности ГМК начальной части толстого кишечника

На фоне действия гиперкалиевого раствора никардипин (ЮОмкМ) приводил к тому, что на 4 -5 минуте своего действия величина вызванных РО составляла 85,2 ± 9,5 % (р<0,05) от фоновых значений в гиперкалиевом растворе К 7 - 10 минуте РО полностью исчезали

В растворе Кребса на фоне действия ТЭА (10 мМ) никардипин (10 мкМ) полностью подавлял спонтанную электрическую и сократительную активность Сопротивление мембраны ГМК снижалось на 12,8 ± 1,34 % (р<0,05) На 3 - 4 минуте наблюдалось снижение величины и количества ПД на плато КЭП и полностью они исчезали с 12 - 14 минуты действия никардипина Вызванная сократительная активность и анодоразмыкательные ответы на 4 - 5 минуте действия никардипина снижались до 43,1 ± 2,19 % (р<0,05) и 17,4 ± 0,86 % (р>0,05), соответственно от фоновых значений, и к 10 - 12 минуте полностью подавлялись

Таким образом, опыты с подавлением кальциевой проводимости мембраны циркулярного слоя гладких мышц начальной части толстого кишечника показывают, что в генерации ПД основная роль принадлежит кальциевым каналам, а калиевая проводимость вносит существенный вклад в электровозбудимость и состояния потенциалозависимых кальциевых каналов ГМК

Изучение влияния биологических активных веществ в регуляции электрической и сократительной активности гладких мышц циркулярного слоя ГМК начальной части толстого кишечника

Для изучения роли биологических активных веществ в регуляции функции гладких мышц начальной части толстого кишечника был использован ацетил-холин, как медиатор парасимпатической нервной системы [Амвросьев А П, 1977], и нитропруссид натрия - как донор активной формы NO [Daniel ЕЕ, 2000]

Ацетилхолин (АцХ) в концентрации от 10 нМ до 1 мкМ оказывал дозозави-симое активирующее влияние на параметры электрической и сократительной активности ГМК начальной части толстого кишечника, вызывая начальную деполяризацию мембраны, которая сопровождалась генерацией нескольких ПД и развитием сокращения Величина сократительного ответа на АцХ в концентрации 10 нМ составляла 86,3 ± 4,1 мН, а в концентрации 100 нМ 248,6±10,2мН

Наиболее выраженный эффект АцХ наблюдался в концентрации 1 мкМ Действие АцХ приводило к деполяризации мембраны, развитию спонтанной электрической активности на всем протяжении действия препарата Величина сократительного ответа составляла 563,6 ± 23,7 мН Окончание действия АцХ сопровождалось исчезновением спонтанной активности и восстановлением тонуса ГМ препаратов до исходного уровня

Оксид азота (NO ) считается одним из медиаторов неадренергической - не-холинергической природы [Поленов H П , 1995, Реутов В П и др , 2004], является одним из важнейших регуляторов функции ГМ висцеральных органов

В концентрации 100 нМ НК'а наблюдалось снижение сопротивления ГМК на 4,1±0,2 % (р>0,05), частичное подавление вызванной электрической активности, а величина тонического напряжения сопровождалась снижением на 6,3±0,7 мН Также происходило снижение величины вызванных сократительных ответов на 10,2±0,1% (р>0,05) по сравнению со значениями в нормальном растворе Кребса В концентрации 1 мкМ НЫа приводил к снижению тонического напряжения препаратов на 12,8±1,2 мН от исходного уровня в нормальном растворе Кребса Происходило также снижение сопротивления ГМК на 13,3±0,64 % (р>0,05) и снижение амплитуды, вызванной катэлектротонически-ми потенциалами, сократительной активности до 74,5±3,7% (р<0,05) от исходных значений В концентрации 10 мкМ 1Ша наблюдалось дальнейшее подавление тонуса на 34,5±2,1 мН, снижение сопротивления мембраны на 28,6±1,6%(р<0,05), а величина вызванной сократительной активности составляла всего 39,4±2,05% (р<0,05) от исходной величины в нормальном растворе Кребса

Данные изменения начинались с первой секунды действия НЫа на гладко-мышечные препараты и заканчивались на 15 - 20 минуте после удаления НЫа из омывающего раствора

Действие нитропруссида натрия (НЫа) в концентрациях от 100 нМ до 10 мкМ оказывало дозозависимое ингибирующее влияние на параметры вызванной электрической и сократительной активности ГМК начальной части толстого кишечника ЖКТ котов, вызывая дозозависимое снижение сопротивления, подавление вызванной электрической и сократительной активности

Действие нитропруссида натрия в этих концентрациях не приводило к развитию начальной гиперполяризации мембраны ГМК При этом наблюдалось постепенное снижение тонуса ГМ препаратов, снижение сопротивления мембраны и постепенное снижение величины вызванных сокращений

В концентрации 100 мкМ НЫа приводил к гиперполяризации мембраны на 1,4±0,2 мВ Сопротивление мембраны ГМК снижалось на 31,1±1,8% (р>0,01) по сравнению с контрольными значениями в нормальном растворе Кребса Наблюдалось снижение амплитуды ПД, сократительные ответы полностью исчезали Эти эффекты сохранялись в течение всего времени действия НЫа Восстановление данных параметров регистрировалось на 20 - 22 минуте отмыва в нормальным раствором Кребса

На фоне действия ТЭА (10 мМ) воздействие НЫа (100 мкМ) приводило к снижению величины сопротивления мембраны ГМК на 11,5±0,8% (р>0,05) Величина гиперполяризации в первую минуту действия препарата составляла 0,4±0,05 мВ (р>0,05) и восстанавливалась на 3 - 4 минуте его действия Сопротивление мембраны снижалось до 83,9±4,1%( р<0,05), при этом анодоразмыка-тельные ответы не исчезали в течение 4-5 минут действия НЫа Величина амплитуды ПД снижалась до 57,3±2,63% (р<0,05), а сократительные ответы, вызванные действием деполяризующего тока, составляли 18,5±1,08% (р>0,05) от исходной величины. В этих условиях у части препаратов происходило восстановление спонтанной электрической и сократительной активности Оконча-

ние действия HNa сопровождалось восстановлением исходных параметров на 10-12 минуте после отмены HNa

На фоне действия гиперкалиевого раствора (120 мМ) применение HNa в концентрации 100 мкМ не приводило к изменению уровня тонического напряжения Сила вызванных РО уменьшалась на 87,4±3,7% (р<0,05) от исходных значений, а длительность тонической компоненты увеличивалась в 3 - 4 раза по сравнению с контрольными значениями

Для изучения роли растворимой фракции гуанилатциклазы в регуляции функции ГМК начальной части толстого кишечника был применен ее блокатор - метиленовый синий [Wang Y , 1995]

Метиленовый синий (100 мкМ) приводил к начальной деполяризации мембраны ГМК величиной 0,4±0,03 мВ, при этом происходило снижение сопротивления мембраны на 9,2±0,4% (р<0,05) Сила вызванных сокращений составляла 176,8±8,3% (р<0,05) без изменения исходного тонуса

Нитропруссид натрия (100 мкМ) на фоне метиленового синего вызывал начальную гиперполяризацию величиной 1,1±0,06 мВ, которая исчезала на 4 - 5 минуте, при этом регистрировалось снижение тонуса мышечных полосок на 54,9±5,2 мН в течение всего времени его действия Сопротивление мембраны снижалось до 82,4±3,93 % (р<0,05), а вызванные действием деполяризующего тока сократительные ответы уменьшались на 74,6±2,86 % (р<0,05) от исходного значения

Таким образом, нитропруссид натрия оказывал дозозависимое ингибирую-щее влияние на ГМК начальной части толстого кишечника, а его действие в концентрации 100 мкМ сопровождалось гиперполяризацией, снижением величины АЭП и подавлением вызванными деполяризующими импульсами тока электрической и сократительной активности Эти эффекты нитропруссида натрия опосредуются не только изменением калиевой проводимости мембраны, но и кальциевой, как цГМФ-зависимым, так и цГМФ-независимым путем

Влияние изменения вне - и внутриклеточного рН в регуляции электрической и сократительной активности циркулярного слоя гладких мышц начальной части толстого кишечника

Известно, что активность ионных обменников, участвующих в поддержании рН„ определяется градиентом концентрации протонов через плазматическую мембрану [Орлов Р С, 1987, Boron W F et al, 2004]

Перфузия гладкомышечных полосок раствором Кребса рН = 6,7 не вызывала изменение величины МП, но при этом регистрировалось уменьшение амплитуды вызванных ПД (92,6 ± 4,2 % (р<0,05)), первоначальное увеличение величины вызванных сокращений (104,3 ± 4,9 % (р<0,05)), с последующем их снижение до 91,4 ± 4,2 % (р<0,05) При этом отмечалось снижение величины сопротивления мембраны (98,6 ± 3,83 % (р>0,05))

Применение раствора Кребса рН = 8,0 приводило к снижению тонуса мышечных полосок на 34,1 ±1,2 мН, подавлению амплитуды вызванных ПД (89,5±3,68 % (р<0,05)), сопротивления мембраны (84,7 ± 3,87 % (р<0,05)) и

величины вызванных сокращений (82,4 ±4,1 % (р<0,05))от исходных значений в нормальном растворе Кребса Описанные изменения носили обратимый характер

Варьирование внеклеточного рН на фоне действия ТЭА (ЮмМ) сопровождалось изменениями электрической и сократительной активности, подобными в нормальном растворе Кребса

Так, действие раствора Кребса с рН 6,7 приводило к снижению амплитуды вызванных ПД (95,3 ± 4,5 % (р<0,05)), уменьшению их количества на плато КЭП, снижению сопротивления мембраны (97,0 ± 4,13 % (р<0,05)), без изменения силы развивающихся при этом вызванных сокращений При этом происходило полное подавление спонтанной электрической и сократительной активности и подавление анодоразмыкательных ответов

Перфузия гладкомышечных полосок раствором Кребса с рН - 8 0 на фоне ТЭА (10 мМ) приводила к росту амплитуды вызванных ПД (104,3±4,98%(р>0,05)), снижению сопротивления мембраны

(82,3±3,58%(р<0,05)) и силы сокращений (97,2 ± 4,3 % (р<0,05)) от контрольных значений При этом отмечалась активация спонтанной электрической и сократительной активности

Таким образом, внеклеточное закисление снижало вызванную электрическую активность, но при этом вызванная сократительная активность не изменялась, а внеклеточное защелачивание приводило к подавлению вызванной электрической и сократительной активности Данные эффекты нивелировались ТЭА

Одним из методических приемов для изменения внутриклеточного рН клеток является применение раствора хлорида аммония (NH4C1) Показано, что при инкубации клеток в растворе, содержащим хлорид аммония, свободное основание NH3 легко проникает через плазматическую мембрану и, протонируясь до NH4+ , вызывает защелачивание цитоплазмы Удаление хлорида аммония из омывающего раствора приводит к тому, что молекулы NH3 выходят из клеток с большей скоростью, чем протоны, а это приводит к внутриклеточному закисле-нию ниже исходного уровня состояния pHi в покое [Roos А , 1981, Little Р G , 1986, Boron WF et al, 2004]

Хлорид аммония (20 мМ), в первые 2-3 минуты, вызывал снижение тонуса гладкомышечных полосок на 19,8 ± 0,87 мН, уменьшение сопротивления мембраны (84,25±3,84 % (р<0,05)), уменьшение амплитуды ПД (96,0±4,78%(р>0,05)) и силы вызванных сокращений до 36,4 ± 2,33 % (р<0,05) от контрольных значений в нормальном растворе Кребса В дальнейшем происходило постепенное восстановление электрофизиологических параметров (рис 1)

Окончание действия NH4C1 сопровождалось повышением тонуса ГМ полосок на 64,3 ± 3,95 мН Увеличивалась амплитуда вызванных ПД, составляющая 107,0 ±4,1 % (р>0,05), при восстановлении величины АЭП мембран до 90±3,95%(р>0,05) Увеличивалась сила вызванных сокращений (122,3±5,2%(р<0,05)) от контрольных значений в нормальном растворе Кребса (рис 1)

Рис 1 Действие хлорида аммония (20мМ) на

электрические и сократительные свойства циркулярного слоя гладких мышц начальной части толстого кишечника А1 -АЗ - анэлектротонические потенциалы,

К1-КЗ - катэлектротонические

потенциалы,

С1-СЗ - сокращение

A) Регистрация записи проводилась на самопишущем потенциометре КСП - 4

B) Микрофотографии регистрировались ФОР 2

Здесь и далее нижняя кривая -электрическая, верхняя кривая -сократительная активность

Для выяснения роли калиевой проводимости мембраны ГМК начальной части толстого кишечника в эффектах внутриклеточного закисления и защела-чивания с использованием МН4С1 была проведена серия опытов с использованием ТЭА

На фоне действия ТЭА (ЮмМ) хлорид аммония (20 мМ) вызывал частичное подавление вызванных ПД (43,5± 1,83% (р<0,05)), снижение сопротивления мембраны (89,5 ± 3,56% (р<0,05)) и силы вызванных сокращений (61,4±2,6%(р<0,05)), у которых тоническая компонента длилась 35 - 45 секунд, от контрольных значений в нормальном растворе Кребса с тетраэтиламмонием При этом происходило полное подавление как электрических, так и сократительных анодоразмыкательных ответов (рис 2)

В этих условиях окончание действия МН4С1 сопровождалось повышением тонуса гладкомышечных препаратов (73,2 ± 3,78 мН), величины сопротивления мембраны (96,8 ± 4,2% (р>0,05)) от значений, регистрируемых в нормальном растворе Кребса При этом восстанавливались электрические и сократительные анодоразмыкательные ответы, при чем сила анодоразмыкательных ответов составляла 124,7±9,4% (р<0,05), а вызванная сократительная активность восстанавливалась до исходного уровня (рис 2)

Я—Г Я__Г

5 ыВ | т 100 нМ

Рис 2 Действие хлорида аммония (20мМ) на электрические и

сократительные свойства циркулярного слоя гладких мышц начальной части толстого кишечника на фоне действия тет-раэтиламмония (ЮмМ) Обозначения аналогичны рисунку 1

На фоне гиперкалиевой деполяризации действие ЫН4С1 (20 мМ) вызвало снижение РО до 67,4±3,3% (р<0,05) от исходных значений При этом наблюдалось снижение не только фазной компоненты, но и тонической Внутриклеточное закисление, вызванное удалением КН4С1, сопровождалось увеличением РО,

которое составило

127,4±8,3% (р<0,05)

Рис 3 Влияние хлорида аммония (20мМ) на величину

сократительного раз-мыкательного ответа циркулярного слоя

гладких мышц начальной части толстого

кишечника на фоне действия гиперкалиевого раствора (120 мМ КС1)

5 чин

+>Н4С1 (20 мМ)

■ 1ЧН,С1 (20 мМ)

Для выяснения роли изменения рН, в эффектах нитропруссида натрия, как донора N0, была проведена серия экспериментов с добавлением и отменой ЫН4С1 (20 мМ)

На второй минуте воздействия НЫа (100 мкМ) происходила гиперполяризация мембраны на 1,5±0,08 мВ, которая к 5 - 6 минуте частично нивелировалась При этом величина сопротивления мембраны составила 42,4 ± 2,03% (р<0,05) по сравнению с контрольными значениями в нормальном растворе Кребса Вызванными импульсами деполяризующего тока электрические и сократитель-

Рис 4 Влияние

нитропруссида натрия

(ЮОмкМ) на электрические и сократительные свойства циркулярного слоя гладких мышц начальной части толстого кишечника на фоне действия и отмены хлорида аммония (20 мМ) Обозначения аналогичны рисунку 1

+N11,С1 + НМа - М1.С1

<20м\1) (ЮОмкМ) (20чМ)

Окончание действия МН4С1 сопровождалось постепенным восстановлением величины МП до исходного уровня, сопротивления мембраны до 72,4±3,6%(р<0,05) и величины вызванных сократительных ответов до 12,5±0,04% (р<0,05) по сравнению с контрольными значениями в нормальном растворе Кребса (рис 4)

На фоне действия тетраэтиламмония (10 мМ) и ЫН4С1 (20 мМ), нитропрус-сид натрия (100 мкМ) вызывал начальную гиперполяризацию величиной 0,3±0,02 мВ, снижение величины сопротивления мембраны на 9,4±0,71%(р>0,05) и силы вызванных сократительных ответов 42,4±2,14%(р<0,05) от контрольных значений При этом сохранялись анодораз-мыкательные электрические ответы, а сила, возникающих при этом сокращений, составляла 9,5±0,05 % от исходных значений

Окончание воздействия М-14С1 сопровождалось повышением тонуса ГМ препаратов 21,2 ± 3,78 мН , частичным восстановлением сопротивления мембраны (94,9±4,45 % (р<0,05)), величины вызванного сократительного (66,4±2,68% (р<0,05)) и анодоразмыкательного ответа (75,6±3,26 % (р<0,05))

На фоне действия (20 мМ) влияние ацетилхолина (1 мкМ) сопровож-

далось снижением величины сократительного ответа на 54,2±2,4 % (р<0,05)

На фоне внутриклеточного закисления, связанного с окончанием действия ЫН4С1, величина АцХ вызванного сокращения составляла 118,6 ± 7,3 %(р<0,05) от контрольных значений в нормальном растворе Кребса

ные ответы полностью подавлялись (рис 4)

гШ

jЗ мВ 1 мин

В других методических приемах для изменения внутриклеточного pH клеток используется ацетат натрия (С2НзОСЖа), действие которого вызывает внутриклеточное закисление, а его отмыв ведет к внутриклеточному защелачива-нию [Korbmacher С et а!, 1988]

Ацетат натрия (50 мМ) приводил к снижению тонуса ГМ полосок (12,4±1,8мН (р>0,05)), снижению сопротивления мембраны (89,84±4,78%(р<0,05)), а вызванная при этом действием деполяризующих импульсов тока сократительная активность составляла 112,4 ± 4,72 % (р>0,05) от фоновых значений в растворе Кребса

Окончание действия ацетата натрия сопровождалось дальнейшим снижением тонуса ГМ препаратов, величины вызванных сократительных ответов на 40,23 ± 2,03 % (р<0,05) и сопротивления мембраны на 90,3 ± 3,54 % (р<0,05) в сравнении с контрольными значениями в растворе Кребса

На фоне действия TEA (10 мМ) ацетат натрия (50 мМ) не приводил к изменению исходного тонуса ГМ препаратов, достоверному изменению сопротивления мембраны и силы вызванных сокращений Окончание его действия также не приводило к изменению МП, сопротивлению мембран, при этом сила вызванных сокращений увеличивалась и составляла 132,6 ± 7,3% (р<0,05) от контрольных значений в растворе ТЭА

Гладкомышечные препараты начальной части толстого кишечника, демонстрировавшие спонтанную электрическую и сократительную активность, и анодоразмыкательные ответы в присутствии TEA теряли эту способность, как в условиях ацетата натрия, так и при окончании его действия

На фоне действия ацетата натрия нитропруссид натрия (100 мкМ) вызывал развитие начальной гиперполяризации мембраны 0,27±0,02 мВ, которая не восстанавливалась до исходного уровня в течение всего времени действия HNa При этом происходило снижение сопротивления мембраны до 91,5±5,07%(р<0,05) и полностью подавились деполяризующими импульсами постоянного электрического тока вызванные ПД и сократительные ответы в сравнении с контрольными значениями

В этих условиях окончание воздействия ацетата натрия не сопровождалось восстановлением изучаемых электрофизиологических параметров гладкомы-шечных препаратов

Таким образом, изменение pH, ГМК начальной части толстого кишечника, вызванное различными методическими приемами, сопровождалось ярко выраженными изменениями электрической и сократительной активности При этом внутриклеточное защелачивание приводило к подавлению уровня электрической и сократительной активности, а внутриклеточное закисление повышало уровень этих показателей Изменение калиевой проводимости мембраны существенным образом меняло характер воздействия этих изменений

В следующих сериях экспериментов была предпринята попытка оценки роли катионного - Na'/H ' и анионного - С1 /НС03 обменников в регуляции электрической и сократительной активности циркулярного слоя гладких мышц начальной части толстого кишечника

Амилорид, как один из блокаторов Ыа+/Н+ обмена, в концентрации 100 мкМ вызывал повышение тонуса на 17,4 ± 0,4 мН, вызванного импульсами деполяризующего тока, сократительных ответов (123 ± 5,14 %) и снижение сопротивления мембраны на 8,5 ± 0,65 % (р<0,05) в сравнении с контрольными значениями в нормальном растворе Кребса

На фоне действие амилорида ацетилхолин (1 мкМ) приводил к увеличению величины сократительного ответа до 104 ± 6,8 % (р<0,05) в сравнении с контрольными значениями в растворе Кребса

Таким образом, результаты опытов с амилоридом показывают, что внутриклеточное закисление характеризуется возбуждающим влиянием на величину электрофизиологических показателей и величину вызванного АцХ сократительного ответа

Известно, что функционирование хлор - бикарбонатного обменника зависит от концентрации ионов хлора и гидрокарбонат анионов в омывающем клетку растворе [Капшк1 Ь Р , 1989]

Применение раствора Кребса с заменой ЫаНСОз на трис - аминометановый буфер в эквимолярной концентрации приводило к незначительному изменению величины МП и сопротивления мембраны 95,6±4,5 % (р>0,05) На 5 - 7 минуте действия данного раствора наблюдалось повышение тонуса ГМ препаратов (75,8 ± 6,3 мН), а величина сократительных ответов, вызванных действием деполяризующих импульсов электрического тока, снижалась и составляла 72,5±3,24 % (р<0,05) от контрольных значений в нормальном растворе Кребса

Таким образом, замена гидрокарбонатного буфера в растворе Кребса на трис - аминометан вызывала частичное угнетение вызванной электрической и сократительной активности гладких мышц начальной части толстого кишечника

В этих условиях применение раствора с рН = 6,7 приводило к развитию незначительной гиперполяризации мембраны ГМК, увеличению тонуса ГМ препаратов 43,6 ± 2,2 мН, уменьшению амплитуды ПД до уровня 97,3±5,3%(р>0,05) Сила вызванных сокращений на 2 - 3 минуте составляла 91,2 ± 3,9 % (р>0,05), но в дальнейшем наблюдалось повышение вызванных сократительных ответов до 107,7 ± 5,4 % (р<0,05) Сопротивление мембраны ГМК не изменялось

Повышение данного раствора до рН 8,0 приводило к снижению тонуса мышечных полосок на 15,3±0,7 мН Параметры вызванной электрической и сократительной активности составляли амплитуда пикового компонента ПД -93,2±4,8 % (р>0,05), сопротивление мембраны - 96,3 ± 4,87 % (р>0,05), величина вызванных сокращений - 92,3 ± 4,5 % (р<0,05) от исходных значений в растворе Кребса, содержащего трис - аминометан

На фоне данного раствора воздействие М-ЦС1 (20мМ) вызывало увеличение тонуса ГМ препаратов на 77,5±3,9 мН, уменьшение сопротивления мембраны до 98,7 ± 4,75 % (р>0,05), а сила вызванных сокращений полностью подавлялась В дальнейшем регистрировалось постепенное восстановление вызванных сократительных ответов до 16,7 ± 0,83 % от исходных значений в растворе Кребса с трис - аминометаном

Окончание действия хлорида аммония в этих условиях не изменяло тонус мышечных ГМК полосок, но приводило к восстановлению величины сопротивления мембран и увеличению силы вызванных сокращений до 189,6±9,4%(р<0,05) по сравнению с контрольными значениями

В этих условиях на фоне действия ТЭА применение раствора с рН = 6,7 приводило к полному подавлению спонтанной электрической и сократительной активности, снижению амплитуды вызванных ПД (95,3 ± 4,5 % (р>0,05)), к уменьшению их количество на КЭП, снижению силы вызванных сокращений (88,6 ± 4,8 % (р>0,05)) и сопротивления мембраны (97,0 ± 4,13 % (р>0,05)), по сравнению с контрольными значениями

Применение аналогичного раствора с рН - 8 0 приводило с увеличению амплитуды ПД (104,3 ± 4,98 % (р>0,05)), снижению сопротивления мембраны (82,3 ± 2,58 % (р<0,05)), а сила вызванных сокращений составляла 97,2±4,3%(р>0,05)от контрольных значений Имевшаяся спонтанная электрическая и сократительная активность активировалась

В аналогичных условиях применение хлорида аммония ( 20 мМ ) вызывало увеличение амплитуды ПД и вызванных сокращений, которые составили 141,0±5,4 % (р<0,05) и 171,0 ± 7,1 % (р<0,05) соответственно, от контрольных значений. Сопротивление мембраны снижалось и составляло 89,5 ± 3,56% (р<0,05) от исходных значений Полностью исчезали анодоразмыкательные ответы, а у вызванных действием деполяризующих импульсов тока продолжительность сократительных ответов возрастала за счет увеличения тонической компоненты

При удалении хлорида аммония из раствора, содержащего ТЭА и трис -аминометановый буфер, наблюдалось увеличение мышечного тонуса ГМ препаратов в среднем на 73,2 ± 3,78 мН Величина сопротивления мембраны составляла 96,8 ± 4,2% (р>0,05) от контрольных значений, при этом восстанавливались анодоразмыкательные ответы, а сила возникающая при этом составляла 124,7±9,4 % (р<0,05) от контрольных значений

Таким образом, замена бикарбоната в растворе Кребса на трис - аминометан приводит к подавлению вызванной электрической и сократительной активности Данные эффекты нивелируются тетраэтиламмонием В этих условиях внутриклеточное защелачивание приводило к усилению подавляющего эффекта данного раствора, а внутриклеточное закисление характеризовалось восстановлением параметров электрической и сократительной активности

Сопоставляя результаты полученных экспериментальных данных по влиянию изменения рН, на параметры электрической и сократительной активности ГМК начальной части толстого кишечника котов, можно сделать заключения о их общем влиянии

во-первых, внутриклеточное закисление приводит к активации показателей вызванной электрической и сократительной активности ГМК, которые усиливались на фоне подавления калиевой проводимости мембраны Данные эффекты также связаны с повышением кальциевой проводимости мембраны,

во-вторых, внутриклеточное защелачивание характеризуется подавлением параметров вызванной электрической и сократительной активности ГМК за

счет активации калиевой проводимости мембраны и подавления кальциевой компоненты

в-третьих, при внутриклеточном закислении отмечается увеличение сократительного ответа на ацетилхолин, а внутриклеточное защелачивание приводит к подавлению его действия

в-четвертых, нитропруссид натрия вызывал дозозависимые ингибирующие эффекты на параметры вызванной электрической и сократительной активности Внутриклеточное закисление при этом снижает угнетающие эффекты нитропруссида натрия преимущественно за счет подавления калиевой проводимости мембраны

Обобщая вышеизложенный материал, можно заключить, что в ГМК начальной части толстого кишечника активно функционирует не только натрий-протонный обменник, но и хлор - бикарбонатный, изменение активности, которых вносит существенный вклад в регуляцию электрофизиологических свойств данного отдела кишечника При этом внутриклеточное закисление оказывает активирующее действие на параметры электрической и сократительной активности, а внутриклеточное защелачивание приводит к повышению угнетающего влияния нитропруссида натрия, который может оказывать как прямое цГМФ-зависимое, так и цГМФ-независимое действие на параметры электромеханического сопряжения

ВЫВОДЫ

1 Гладкие мышцы циркулярного слоя начальной части толстого кишечника котов не обладали исходной спонтанной электрической и сократительной активностью Потенциал действия имеет кальциевую природу, определяя вход ионов кальция во время возбуждения, вызванного как деполяризующими импульсами тока, так и гиперкалиевым раствором, как по инактивирующимся, так и по неактивирующимся потенциалозависивым кальциевым каналам, и играет определяющую роль в формировании электромеханического сопряжения

2 Внутриклеточное закисление гладкомышечных клеток оказывает активирующее влияние на электрическую и сократительную активность не только за счет подавления калиевой проводимости мембраны, но и за счет активации её кальциевой компоненты

3 Внутриклеточное защелачивание вызывает подавление электрической и сократительной активности гладкомышечных клеток преимущественно за счет активации калиевой и подавления кальциевой проводимости мембраны

4 Внутриклеточное закисление вызывает усиление ответов на ацетилхолин, а внутриклеточное защелачивание ведет к их подавлению

5 Нитропруссид натрия оказывает дозозависимое ингибирующее действие на параметры электрической и сократительной активности как цГМФ-зависимым, так и цГМФ-независимым путем При этом внутриклеточное закисление снижает угнетающие эффекты нитропруссида натрия преимущественно за счет подавления калиевой проводимости мембраны

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1 Ногу дин Ю А , Изменение электрической и сократительной активности циркулярных гладких мышц начальной части восходящей ободочной кишки при влиянии донора оксида азота / Ю А Погудин // Материалы четвертого конгресса молодых ученых и специалистов "Науки о человеке", сборник статей -Томск, 2003,-С 169-170

2 Погудин Ю А , Влияние внутриклеточного рН на эффекты нитропруссида натрия в гладких мышцах толстого кишечника / Ю А Погудин, А О Стальбовский // Материалы пятого конгресса молодых ученых и специалистов "Науки о человеке", сборник статей - Томск, 2004, - С 315 -317

3 Медведев М А , К вопросу о роли внутриклеточного рН в эффектах нитропруссида натрия на гладкие мышцы желудочно-кишечного тракта / М А Медведев, В Б Студницкий, Ю А Погудин , А В Кольцов, Т Г Легоминова, В Ю Бармин // Сибирский журнал гастроэнтерологии и гепатологии 2004 , № 18,-С 109- 112

4 Погудин Ю А , Влияние изменения внутриклеточного рН на эффекты нитропруссида натрия в гладких мышцах толстого кишечника / М А Медведев, В Б Студницкий, Ю А Погудин // Сибирский журнал гастроэнтерологии и гепатологии 2004 , № 18, С - 114 - 115

5 Медведев М А , Оксид азота в регуляции функции гладких мышц желудочно-кишечного тракта / М А Медведев, В Б Студницкий, Ю А Погудин, А В Кольцов, А О Стальбовский // Российский физиологический журнал им И М Сеченова 2004 , том 90 , № 8, XIX съезд физиологического общества им ИП Павлова Тезисы докладов Ч 2,-С 110-112

6 Погудин Ю А , Влияние нитропруссида натрия на электрофизиологические свойства гладких мышц толстого кишечника при изменении внутриклеточного рН / Ю А Погудин // Российский физиологический журнал им И М Сеченова 2004 , том 90 , № 8, XIX съезд физиологического общества им И,П, Павлова Тезисы докладов Ч 2, С—114—115

7 Medvedev М А , A nitric oxide in regulating smooth muscles functions of gastrointestinal tract / M A Medvedev, V В Studnitskii, V Y Barmin, Y A Pogudin, A O Stalbovskn, A V Koltsov // Symposium Biological Motility in Pushchino 2004, - С 137-139

8 Медведев M A , Модулирующее влияние внутриклеточного рН на эффекты нитропруссида натрия в гладких мышцах желудочно-кишечного тракта / М А Медведев , В Б Студницкий, Ю А Погудин, В Ю Бармин, Панов А А , А О Стальбовский, А В Кольцов, Т Г Легоминова // Материалы симпозиума с международным участием посвященные 115 каф физиол ТГУ и СибГМУ "Мембранные и молекулярные механизмы регуляции функции гладких мышц" 2004, - С 28 -32

9 Погудин Ю А , Влияние нитропруссида натрия на электрофизиологические свойства гладких мышц толстого кишечника на фоне изменения внутриклеточного рН / Ю А Погудин, В Б Студницкий, М А Медведев // Материалы симпозиума с международным участием посвященные 115 каф физиол ТГУ и

СибГМУ, " Мембранные и молекулярные механизмы регуляции функции гладких мышц " 2004 Томск, - С 54 - 55

10 Погудин Ю А , Изменение воздействия внутриклеточного рН на гладкие мышцы толстого кишечника / Ю А Погудин, В Б Студницкий // Вестник молодых учёных Спис материалов всероссийской конференции молодых исследователей "Физиология и медицина" С Петербург 2005, - С 121 - 123

11 Студницкий В Б, Функциональная роль внутриклеточного рН в регуляции электромеханического сопряжения гладких мышц различных отделов желудочно-кишечного тракта / В Б Студницкий, ЮА. Погудин, А В.Кольцов, В Ю Бармин, Т Г Легоминова, Медведев М А // Сибирский журнал гастроэнтерологии и гепатологии 2005 , сентябрь, № 19, - С 67 - 70

12 Погудин Ю А , Изменение электрофизиологических параметров гладких мышц толстого кишечника в условиях различного внутриклеточного рН / Ю А Погудин, В Б Студницкий // Бюллетень сибирской медицины 2005 , том 4, приложение 1 Тезисы докладов V сибирского физиологического съезда, - С 50

13 Медведев М А , Значение внутриклеточного рН в действии оксида азота на гладкие мышцы желудочно-кишечного тракта / М.А. Медведев, В.Б. Студницкий, Ю А Погудин, В Ю Бармин, А В Кольцов, Т Г Легоминова // Бюллетень сибирской медицины 2005 , том 4, приложение 1 Тезисы докладов V сибирского физиологического съезда, - С 43 - 44

14 Медведев М А , Модулирующая роль рН, в регуляции функции гладких мышц пищеварительного тракта / М А Медведев, В Б. Студницкий, Ю А Погудин, В Ю Бармин, А В Кольцов, Т Г Легоминова // Мат I съезда физиологов СНГ "Физиология и здоровье человека", г Сочи, том 2, 2005, С 97

15 Погудин Ю А , Роль внутриклеточного рН в эффектах ацетилхолина на гладкие мышцы начальной части толстого кишечника / Ю А Погудин, В Б Студницкий, М А Медведев // Сибирский журнал гастроэнтерологии и гепатологии 2006 , сентябрь, № 20, - С 98 - 100

16 Медведев М А , Внутриклеточное рН - как фактор регуляции функции гладких мышц различных отделов желудочно-кишечного тракта / М А. Медведев , В Б Студницкий, Ю А Погудин, А В Кольцов, В Ю Бармин, Т Г Легоминова // Материалы региональной научно-практической конференции, посвященной 70-летию со дня рождения д м н профессора Ю И Савченкова -Красноярск 2007, С 152- 159

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АЭП - анэлектротонический потенциал

АцХ - ацетилхолин

ГМК - гладкомышечная клетка

ГМ — гладкая мышца

ГЦ - гуанилатциклаза

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

КЭП - катэлектротонический потенциал

МП — мембранный потенциал

НКа - нитропруссид натрия

ПД - потенциал действия

ПП - потенциал покоя