Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Адгезивные белки поверхности клеток сетчатки глаза позвоночных
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Краснов, Михаил Сергеевич
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
I. Особенности строения и межклеточного взаимодействия в сетчатке позвоночных
II. Адгезивные белки, обнаруженные в сетчатке позвоночных 14 II. 1. Семейство кадгеринов
11.2. Суперсемейство иммуноглобулинов
11.3. Суперсемейство интегринов
III. Адгезивные молекулы в пигментном эпителии сетчатки
IV. Особенности структуры адгезивных молекул
V. Молекулы внеклеточного матрикса
VI. Белки интерфоторецепторного матрикса
VII. Кальций-связывающие нейроспецифические регуляторные белки (S-100 белки и их гомологи)
VIII. Маркерные молекулы дифференцировки клеток сетчатки и пигментного эпителия
IX. Основные подходы и модели для идентификации адгезивных молекул
X. Модели культивирования тканей сетчатки и пигментного эпителия глаза 46 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 53 Используемые реактивы и оборудование
1. Получение тканевых экстрактов
2. Получение фракций S-100 белков
3. Изоэлектрофокусирование тканевых экстрактов
4. Определение концентрации белка
5. Высокоэффективная жидкостная хроматография
6. Определение углеводного состава исследуемых фракций
7. Определение вторичной структуры с помощью метода кругового дихроизма
8. Определение кальций-связывающей активности методом равновесного микродиализа
9. Электрофорез белков в полиакриламидном геле
10. Определение аминокислотного состава исследуемых белков
11. Определение влияния исследуемых гликопротеинов на вязкоупругие свойства мембран гепатоцитов мыши при кратковременном органном культивировании in vitro
12. Исследование клеточной агрегации в суспензионных культурах
13. Получение политональной кроличьей антисыворотт
14. Иммуноферментный анализ антител (Elisa)
15. Изолирование тканей глаза и их культивирование
16. Культивирование нейральной сетчатки
17. Использование специфических маркеров основных клеточных типов сетчатки и иммуногистохимия
18. Гистохимическое окрашивание культивированных эксплантатов сетчатки тритона для определения активности ацетилхолинэстеразы
19. Морфологическое исследование
20. Количественные исследования
21. Иммуногистохимичесое окрашивание с использованием FITC-меченых вторых антител
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Введение Диссертация по биологии, на тему "Адгезивные белки поверхности клеток сетчатки глаза позвоночных"
Осуществление различных биохимических и физиологических процессов в различных тканях связано с деятельностью множества регуляторных белков.Регуляция происходит как внутри клетки, с помощью цитоплазматических белков и каскадов их взаимодействий (Ашмарин, Стукалов, 1996; Schenk, SnaarJagalski, 1998); так и со стороны внеклеточного пространства, через секреторные регуляторные белки и их связь с различными рецепторами клеточной поверхности (Adler, Evans, 1985; Wiggert, Chader, 1985; Ашмарин, Стукалов, 1996) . В настоящее время подробно изучены белки, участвующие во внутриклеточных каскадах реакций, приводящих к запуску ряда генетических программ: пролиферация, дифференцировка, апоптоз и др. (АрНп et al., 1999; Schoenwaelder, Burridge, 1999). Несколько меньшее внимание уделено регуляторным белкам, осуществляющим запуск различных процессов в клетке со стороны внеклеточного пространства. Из последней группы наиболее полно изучены белки внеклеточного матрикса (ВМ), трансмембранные адгезивные белки, а также гормоны и цитокины (Kreis, Vale, 1993; Nicola, 1994; Harris, 1997) .Передача информации из внеклеточного окружения внутрь клетки через различные регуляторные молекулы называется сигнальной трансдукцией (см. напр. обзор Bissel et a l , 1982; Schenk, Snaar-Jagalski, 1998). При этом инициирзтощие сигналы могут быть физическими (свет, температура, давление, элетрический ток) и химическими (гормоны, нейротрансмиттеры, и другие сигнальные молекулы). В ответ клетки могут и воспринимать, и продуцировать сигналы одновременно, взаимодействуя таким образом друг с другом (Schenk, Snaar-Jagalski, 1998). Сигнальные молекулы узнаются рецепторами, расположенными на плазматической мембране клеток. Связывание лиганда с его рецептором может приводить к стимуляции энзиматической активности данного рецептора или к модуляции белков трансдукции (Schenk, Snaar-Jagalski, 1998).Модуляция одного или нескольких белков трансдукции в итоге приводит к активации или ингибированию внутриклеточных «эффекторных белков». В свою очередь, последние могут взаимодействовать с компонентами цитоскелета.Во многих случаях это приводит также к изменению экспрессии генов (Bissel et a l , 1982; Schenk, Snaar-Jagalski, 1998; Aplin et a l , 1999). Адгезивные белки участвуют как во взаимодействии клеток между собой, так и в проведении сигналов между клетками. Молекулы адгезии в процессах сигнальной трансдукции играют инициирующую роль, передавая сигнал от клеточного микроокружения внутрь клеток. В нейральных тканях, к которым относится сетчатка глаза, адгезивные межклеточные взаимодействия связаны с процессами сигнальной трансдукции, опосредующими основную функцию этих тканей проведение нервного импульса (Reichardt, 1993).Современный экспериментальный подход для исследования молекулярньпс основ клеточной адгезии основан на применении методов иммунохимии и молекулярной биологии, с помощью которых осуществляется поиск и идентификация молекул адгезии, изучение их локализации в тканях, а также исследование генов, их кодирующих (Edelman, Thiery, 1985). Такой экспериментальный подход имеет некоторые ограничения. Наиболее существенными из них являются возможность, во-первых, проявления молекулами адгезии слабых антигенных свойств, и, во-вторых, потеря некоторых из них (например, слабо связанных с клеточной поверхностью) в процессе приготовления препаратов для иммунизации. Тем не менее, благодаря названным методам к настоящему времени уже удалось идентифицировать многие адгезивные белки (Kreis, Vale, 1993). Некоторые из них относятся к интегральным или полуинтегральным белкам плазматической мембраны клетки, другие - входят в состав специализированных ультраструктур межклеточных контактов и различных компонентов ВМ. Эти данные способствовали формированию современных представлений о пространственно-функциональной организации клеточного микроокружения как о сложнейшей надмолекулярной структуре межклеточного пространства, определяющей цитоархитектонику ткани.Данная работа выполнена с помощью нового разработанного методического подхода, основу которого составляет комплекс оригинальных адгезиометрических методов исследования тканей взрослых млекопитающих, а также методы выделения и очистки белков, участвующих в адгезионных процессах в тканях (Ямскова и др., 1977; Ямскова, Резникова, 1991; Ямсков и др., 1999). С помощью этого экспериментального подхода были обнаружены и исследованы низкомолекулярные, гликозилированные белки клеточного микроокружения многих тканей: печени, легкого, сыворотки крови (Ямскова и др., 1977; Ямскова, Резникова, 1979; Ямскова, Резникова, 1984; Буеверова и др., 1985; Ямскова, Резникова, 1991; Ямсков, Ямскова, 1998). В настоящее время проводятся исследования белков данной группы, выделенных из других тканей позвоночных животных (Ямсков, Ямскова, 1998). Адгезивные белки этой группы обладали целым рядом свойств, отличающих их от уже известных белков ВМ. Было установлено, что идентифицированные гликопротеины участвовали в процессах клеточной адгезии, являясь, очевидно, белками межклеточного пространства (Ямскова, Туманова, 1994; Ямскова, Туманова, 1996). Эти гликопротеины оказались способны вызывать в сверхмалых дозах различные биологические эффекты: регулировать биосинтез белков, клеточное деление, миграцию, жизнеспособность клеток (Ямскова, Резникова, 1991; Ямскова, Туманова, 1994; Ямскова, Туманова, 1996; Ямсков, Ямскова, 1998). В результате данная группа белков получила условное название APRULD (Adhesion Proteins Regulators at Ultra Low Doses). Исследование биологической активности и физико-химических свойств этих молекул показало, что они обладают высокой устойчивостью к различным воздействиям: изменениям р Д температуры, действию хелатирующих агентов, протеаз, а также могут образовывать агрегаты, как гомологичных молекул между собой, так и смешанных молекул (Ямскова, Туманова, 1994; Ямскова, Туманова, 1996).Биологическая активность обнаруженньк гликопротеинов проявлялась при использовании их сверхмалых доз и только в условиях сохранения целостности адгезивных контактных взаимодействий между клетками в тканях (Ямскова и др., 1994). Было выдвинуто предположение о том, что ВМ погружен в гель, образованный молекулами воды и исследуемыми низкомолекулярными белками.Этот гель был назван "малый матрикс" и выдвинуто предположение, что эта надмолекулярная структура является активным участником процессов регуляторной трансдукции (Ямсков, Ямскова, 1998).На основании данных исследования биологической активности и физикохимических свойств идентифицированных гликопротеинов клеточного микроокружения, была разработана концепция создания фармакологических препаратов нового поколения (Ямсков, Ямскова, 1998). В плане практического применения данных белков в настоящее время на основе сывороточного адгезивного гликопротеина уже создан новый офтальмологический препарат, эффективный для лечения кератопатий любой этиологии.Цель и задачи исследования.Целью настоящего исследования явилась идентификация новых адгезивных белков группы APRULD из нейральной сетчатки и пигментного эпителия сетчатки (ПЭС) глаза позвоночных, а также изучение их физикохимических и биологических свойств.В отдельные задачи входили: 1) . Выделение и очистка адгезивных белков тканей нейральной сетчатки и ПЭС глаза позвоночных.2) . Исследование физико-химических свойств адгезивных белков, выделенных из тканей глаза позвоночных животных.3) . Разработка модели тестирования in vitro специфической активности данных белков в тканях нейральной сетчатки и ПЭС глаза.4) Исследование влияния биологического действия исследуемых адгезивных белков на проницаемость и вязко-упругие свойства плазматической клеточной мембраны, а также на агрегацию, дифференцировку и жизнеспособность клеток in vitro.5) . Определение локализации исследуемых белков в тканях глаза позвоночных.Научная новизна работы.Для кислого адгезивного белка, полученного из сетчатки глаза быка, показана локализация на поверхности наружного и внутреннего сегментов фоторецепторов.Вьювлено различие в биологических свойствах регуляторных белков, полученных из сетчатки и ПЭС глаза куриных эмбрионов на разных этапах дифференцировки клеток этих тканей. Для изз^чения специфической биологической активности исследуемых адгезивных белков разработана модель органотипического культивирования тканей нейральной сетчатки и ПЭС глаза низших позвоночных.Практическая значимость.Согласно разработанной концепции создания фармакологических препаратов нового поколения, на основе белков группы АРКЦЬБ уже получены положительные результаты в клинике. На основе слабокислого адгезивного белка из сыворотки крови крупного рогатого скота разработаны два фармакологических препарата - «Адгелон глазные капли» и «Адгелон для инъекций» (Ямсков и др., 1998; Гундорова и др., 2000; Каспаров и др., 2000; Неверкович, 2000). Исследуемые нами адгезивные регуляторные белки из тканей глаза позвоночных животных, в дальнейшем, могли бы найти применение в медицине в качестве офтальмологических препаратов при различных заболеваниях сетчатки.Обзор литертатуры. I. Особенности строения и межклеточных взаимодействий в сетчатке позвоночных.Сетчатка глаза позвоночных животных состоит из собственно нейральной сетчатки, имеющей многослойное, характерное для всех тканей нервной системы, строение (3 ядерных и 2 сетчатых слоя) и ПЭС (Adler, 1993) (Рис. 1). В ПЭС (1) основными типами межклеточных контактов являются: плотные и щелевые соединения, а также десмосомы на латеральных сторонах клеток (Farguhar, Palade, 1963; Zhao et al., 1997). Каждый из указанньпс типов контактов выполняет определенные функции: барьерные, метаболитические, структурные (Gumbiner, 1993; Paul, 1995; Garrod, 1993). На базальной стороне клетки ПЭС выстланы мембраной Бруха - специализированной структурой внеклеточного матрикса (Панова, 1993; Zhao et al, 1997). Апикальной стороной эпителиальные пигментированные клетки обращены в межфоторецепторное пространство и с помощью микровиллей взаимодействуют с наружными сегментами фоторецепторов сетчатки (2). Далее расположен наружный ядерный слой (3), состоящий из ядер палочек и колбочек. За ним следует наружный сетчатый слой (4), образуемый отростками фоторецепторов, интернейронов, горизонтальных клеток и Мюллеровской глин. Следующим расположен внзггренний ядерный слой (5), представленный ядрами нескольких клеточных типов: биполярных, амакриновых, горизонтальных и Мюллеровских клеток. Еще витреальнее локализован внутренний сетчатый слой (6), образуемый отростками интернейронов, амакриновых, ганглиозных клеток и Мюллеровской глии.Данные отростки взаимодействуют с ганглиозными клетками, ядра которых составляют следующий ядерный слой (7). Отростки ганглиозных клеток формируют зрительный нерв (8). Отростки клеток Мюллеровской глии тянутся через всю толщу сетчатки и взаимодействуют с фоторецепторами и ганглиозными клетками и принимают участие в образовании наружной (9) и внутренней (10) пограничных мембран (например см. Копаева, 2002).Проведение зрительного сигнала в сетчатке осуществляется посредством синаптических контактов, а также благодаря межклеточным взаимодействиям.Рис. 1. Схема строения глаза: Iris -радужка. Vitreous body -стекловидное тело. Lens -хрусталик. Cornea - роговица. Ciliary body - цилиарное тело, Retina сетчатка. Fovea - желтое пятно.Нейральная сетчатка и ПЭС представляют собой ткани различного функционального типа и разной дифференцировки, хотя имеют общее происхождение (Лопашов, Строева, 1963). Функциональное взаимодействие между сетчаткой и ПЭС осуществляется через интерфоторецепторный матрикс (ИФМ), компоненты которого секретируются клетками обеих тканей (Панова, 1993; Zhao et al., 1997). Помимо этого, и в нейральной сетчатке и в ПЭС на поверхности клеток присутствуют различающиеся адгезивные молекулы, которые участвуют в работе молекулярных механизмов межклеточного взаимодействия (Anderson, 1990; Turner, 1992). Исследования механизмов межклеточных взаимодействий и, в частности, межклеточной адгезии представляет большой интерес, так как эти механизмы лежат в основе не только функционирования сетчатки, но также ее формообразования в развитии и регенерации у взрослых животных.В процессе морфогенеза клеточная адгезия обеспечивает кооперативность клеток, их правильную локализацию в тканях и построение мозаик как нейральной сетчатки, так и ПЭС (Reichardt,1993). Клетки способны взаимодействовать непосредственно друг с другом, или же адгезировать к субстратам, поэтому принято выделять два типа адгезивных взаимодействий: "клетка-клетка" и "клетка-субстрат". В зависимости от участия ионов кальция молекулярные механизмы клеточной адгезии разделяют на Са^^-зависимый и Са^^ -независимый. Классификация на гомофильный и гетерофильный механизмы адгезии отражает участие во взаимодействии между клетками одинаковых или различающихся адгезивных молекул (Edelman., 1984; Reichardt, 1993). Многие адгезивные белки сетчатки идентифицированы, изучена их первичная структура, локализация в ткани, выделены и изучены кодирующие их гены (Piggot, Power, 1993; Kreis, Vale, 1993).В тканях нейрального происхождения, к которым относятся ПЭС и нейральная сетчатка, адгезивные межклеточные взаимодействия связаны с процессами сигнальной трансдукции, опосредующими основную функцию этих тканей - проведение нервного импульса (Reichardt, 1993). Сигнальная трансдукция в сетчатке может включать связывание лигандов с рецепторами ионных каналов, что в свою очередь приводит к изменениям в их открытии и закрытии. Это меняет мембранный потенциал клеток. Так происходит, например, в случае ацетилхолиновой трансмиссии (Schenk, Snaar-Jagalska, 1999). С другой стороны, связывание лиганда может приводить к стимуляции энзиматической активности его рецептора или модуляции трансдукционных белков, например G-белков. Основными энзиматическими модуляторами в нервной ткани явяляются сериновые, треониновые и тирозиновые киназы и фосфотазы (Schenk, Snaar-Jagalska, 1999), которые, в свою очередь, запускают каскады внутриклеточных реакций, приводящих к регуляции процессов на уровне генов (Tan, Kim, 1999; Aplin et al., 1999; Schoenwaelder, Burridge, 1999).Клеточная адгезия осуществляется в нейральной сетчатке взаимодействием по типу "клетка - клетка". В сетчатке глаза, как и в мозге, с помощью электронномикроскопической техники не удалось обнаружить каркасной структуры внеклеточного матрикса (ВМ) (Reichardt, 1993). И только применение иммунохимических методов способствовало идентификации ряда белков ВМ в межклеточном пространстве этих тканей (Reichardt, 1993). Повидимому, ВМ в тканях нервной системы существует, но не представляет собой высокоупорядоченной надмолекулярной структуры, свойственной, например, соединительной и эпителиальной тканям (ICreis, Vale, 1993).П. Адгезивные белки, обнаруженные в сетчатке позвоночных.Архитектоника в нейральной сетчатке и ПЭС поддерживается благодаря белкам адгезии, которые могут бьп-ь как трансмембранными, так и секреторными внеклеточными (Kreis, Vale, 1993). В сетчатке, как и в нервной системе в целом, присутствуют представители трех больших суперсемейств трансмембранных адгезивных молекул: кадгеринов, интегринов и иммуноглобулинов (Kreis, Vale, 1993; Wolpert, 1998). В тканях сетчатки представители этих семейств выполняют различные функции, связанные с ростом аксонов, адгезией, передачей сигналов между клетками, и др. Ниже коротко расмотрены каждое из указанных семейств в отдельности.П.1. Семейство кадгеринов.Кадгерины представляют собой суперсемейство адгезивных белков, опосредующих Са^^-зависимый гомофилический механизм клеточной адгезии в нервной и других тканях позвоночньсс (Wolpert, 1998). Эти белки являются компонентами специализированньпс ультраструктур межклеточных контактов десмосом. Последние представлены во многих тканях, и особенно широко в эпителии, где они входят в состав специальной области клеточной поверхности, называемой контактным комплексом (Wolpert, 1998). Кадгерины являются трансмембранными белками и имеют 5 чередующихся аминокислотных фрагментов, которые не похожи по последовательности Halg-подобные домены, но имеют схожий с ними размер (Рис. 2). Определенные области молекул на поверхностях повторов содержат участки, связывающие Са^^ (Rutishauser, Jessel, 1988; Anderson, 1990). С помощью цитоплазматических доменов кадгерины взаимодействуют с цитоскелетом клетки посредством внутриклеточных белков - ß и Y катенинов. Благодаря этому кадгерины могут быть вовлечены в процессы регуляторной трансдукции (Balsamo et al., 1996). В настоящее время обнаружено около 30 различных типов кадгеринов: N - , Р-, R, Е, Т, В, 7 и др. (Wolpert, 1998). При развитии сетчатки каждый из этих типов в течение ретинотектального синаптогенеза экспрессируется в определенной очередности (Miskevich et al., 1998). Экспрессия кадгеринов в развитии сетчатки возможно регулируется различным уровнем фосфорилирования, за счет работы киназ и фосфотаз (Lee et al., 1997; Balsamo et al., 1996). Различные кадгерины экспрессируются в различных типах клеток нейральной сетчатки (Wohrn et al., 1998; Honjo et al., 2000). Молекулы кадгеринов имеют не только несколько сайтов для связывания ионов кальция, но и потенциальные сайты для N гликозилирования (Piggot, Power, 1993).П.2. Суперсемейство иммуноглобулинов.Рис. 2. Схема строения молекул суперсемейства кадгеринов.Установлено, что первичная структура полипепетидной части для обеих форм молекулы N C A M у разных видов животных весьма схожа или даже идентична.Формы А и Е различаются по длине их сиалополимеров, которая, в свою очередь, регулируется действием специфических сиалидаз клеточной поверхности, а также внутриклеточных сиалилтрансфераз (Rutishauser, Jessel, 1988). Молекулы гликопротеина обеих форм N C A M имеют тенденцию к самоагрегации, при этом А-форма - в большей степени, как предполагается, за счет меньшего содержания полисиаловых кислот (Rutishauser, Jessel, 1988).Полученные при исследовании N C A M данные свидетельствуют о том, что этот адгезивный гликопротеин является одним из участников процесса ранней нейральной дифференцировки. Позже в онтогенезе N C A M продолжает экспрессироваться многими клеточными типами нейрального происхождения.К суперсемейству иммуноглобулинов принадлежит также и адгезивный белок гицерин, который активно экспрессируется эмбриональными клетками сетчатки, но практически отсутствует в зрелой ткани (Tsukamoto et al., 1997; Taira, 1999). Гицерин взаимодействует с компонентом ВМ - фактором роста нейритов (NOF) по гетерофильному механизму, и это взаимодействие играет важную роль при росте нейритов нейральных клеток развивающейся сетчатки in vitro (Tsukamoto et al., 1997).П.З. Суперемейство интегринов.Суперсемейство интегринов представлено нековалентно связанными гетерогенными гликопротеиновыми комплексами, которые экспрессируются на поверхности клеток всех типов и функционируют в качестве трансмембранных рецепторов почти всех гликопротеинов внеклеточного матрикса, за исключением агрина и тенасцина (Рис. 4) (Hynes, 1992; Reichardt, 1993). У позвоночных к настоящему времени выявлено 20 различных интегриновых рецепторов (Wolpert, 1998). Являясь трансмембранными белками, интегрины своими цитоплазматическими доменами (особое значение имеют цитоплазматические домены бета-цепей интегринов) взаимодействуют с компонентами цитоскелета, осуществляя тем самым, непосредственную связь внеклеточного матрикса, плазматической мембраны и цитоскелета клеток (Reichardt, 1993). Каждый гетеродимер интегрина состоит из нековалентно связанных альфа- и бета-субъединиц. Известно 9 ß субъединиц и 15 а субъединиц (Wolpert, 1998). Многие молекулы ВМ узнаются более, чем одним интегрином. Интегрины связывают не только молекулы ВМ, но также способны связываться через собственные цитоплазматические домены с белками цитоскелета (Wolpert, 1998). Это взаимодействие дает возможность интегринам передавать информацию внуть клетки о состоянии ВМ. Таким образом, сигналы, создаваемые во внеклеточном матриксе при посредничестве интегринов способны влиять на форму, метаболизм, дифференцировку и функционирование клеток (Wolpert, 1998). Взаимодействие интегринов с компонентами цитоскелета является одним из основных путей регуляторной трансдукции (Hynes, 1992).Разнообразие интегринов может увеличиваться и за счет образования изоформ каждой а- и ß-субъединиц, возникающих в результате альтернативного сплайсинга (Hynes, 1992). Интегрины участвуют в многочисленных адгезивных процессах, при которых клетки вступают в разнообразные взаимодействия по типу "клетка-клетка" и "клетка-субстрат".Показано, что для связывания бета-субъединиц интегринов с компонентами цитоскелета необходимо их фосфорилирование (Hynes, 1992). В сетчатке интегрины могут участвовать в процессе слущивания дисков фоторецепторов (Rizzolo et al., 1994; Finnemann et al., 1997). Различные интегриновые субъединицы имеют уникальное распределение у разных животных, например, во взрослой сетчатке человека и тигровой саламандры (Brem et al., 1994; Sherry, Proske, 2001). Понимание локализации и функционирования интегринов в клетках нормальной сетчатки необходимо для сравнения с изменениями экспрессии интегринов при различных заболеваниях сетчатки (Brem et al., 1994).Ш. Адгезивные молекулы в пигментном эпителии сетчатки.В ПЭС, как и во всех типах эпителиев, присутствуют межклеточные контактные комплексы (Zhao et al., 1997). Они состоят из плотных соединений, щелевых контактов и десмосом, расположеных на латеральной стороне клеток (Hundspeth, Yee, 1973). Основной вклад в контактные межклеточные взаимодействия такого типа вносят трансмембранные адгезивные белки (десмоглеины, коннексины, окклюдины и др.) (Kreis, Vale, 1993; Альберте и др., 1994).В отличие от мозга и нейральной сетчатки молекулярные основы клеточной адгезии в ПЭС изучены мало. В ПЭС был обнаружен 100 кД белок клеточной поверхности, участвующий в Са^"^-зависимой адгезии между клетками ПЭС (Chu, Grunward, 1990). В интактной ткани ПЭС этот белок содержится в адгезивных зонах. Предполагается, что он является членом семейства кадгеринов (Chu, Grunward, 1990). Для ПЭС глаза куриных эмбрионов показано преобладание Са^^-зависимого механизма адгезии по мере приближения клеток к терминальной дифференцировке (Дольникова и др., 1986).Из известных и изучаемых молекул адгезии можно еще упомянуть так называемую межклеточную молекулу адгезии - ICAM-1, которая опосредует связывание эпителиальных клеток с лейкоцитами и которая, как было установлено, экспрессируется клетками ПЭС (Einer et al., 1992). Наличие адгезивных молекул на базальной стороне клеток ПЭС мало изучено. В основном, с помощью гистохимических методов показано, что во взаимодействии клеток ПЭС с мембраной Бруха участвуют гликопротеины и полисахариды (Панова, 1993). Клетки ПЭС секретируют также белки, влияющие на выживание и созревание фоторецепторов у крыс in vitro, инъекция в стекловидное тело антител к этим белкам вызывала замедление созревание внешних сегментов фоторецепторов (Sheedlo et a l , 1998). IV. Особенности структуры адгезивных молекул.В итоге, рассмотрев основные группы трансмембранных адгезивных молекул, присутствующих в нейральной сетчатке и ПЭС, можно отметить, что почти все они представляют собой либо гликопротеины, либо содержат потенциальные сайты гликозилирования. Это указывает на решающую роль углеводных остатков в процессах межклеточного узнавания и адгезии.В связи с этим, исследование новых гликопротеинов, обладающих регуляторными функциями в тканях сетчатки и пигментного эпителия глаза является актуальным. Это важно и для понимания молекулярных механизмов, лежащих в основе зрительной трансдукции и применения полученных данных в практической медицине.Для выделения трансмембраных молекул нужна обработка тканей и клеток ферментами (Kreis, Vale, 1993). Мы же исследовали секреторные регуляторные белки, получаемые без обработки ферментами и механической дезорганизации клеток (Shasoua et al., 1984, Ямскова, Резникова, 1991). Поэтому далее в обзоре будут рассмотрены, кроме трансмембранньк молекул, секреторные адгезивные белки. К ним относятся белки В М и низкомолекулярные сигнальные молекулы (Kreis, Vale, 1993; Nicola, 1994; Han-is, 1997). V. Молекулы внеклеточного матрикса.ВМ представляет собой супрамолекулярный комплекс, являющийся фрагментом микроокружения клеток, который влияет на адгезию клеток, их дифференцировку, пролиферацию, формообразование в ткани. Он играет ключевую роль как в эмбриогенезе, органогенезе, постгравматическом заживлении, так и в канцерогенезе, опухолевой инвазии и хоминге метастазирующих опухолевых клеток (Пальцев, Иванов, 1995). Как уже упоминалось выше, в межклеточном пространстве тканей нейрального происхождения не обнаружено надмолекулярной структуры матрикса, аналогичной обнаруженной в соединительной или эпителиальных тканях различных органов ненейрального происхождения (Riechardt, 1993). Однако, с помощью иммунохимических методов было показано присутствие в межклеточном пространстве мозга некоторых гликопротеинов ВМ, например, фибронектина, ламинина, тенасцина (Riechardt, 1993). Кроме того, было показано, что культивированные ретинальные нейроны и фоторецепторы способны синтезировать в среду культивирования глюкозаиминсульфат, а также гепаран- и хондроитинсульфаты (Adler, 1993). Растворимые гепарансульфат протеогликаны были обнаружены в базальных мембранах, таких как внутренняя ограничивающая мембрана и мембрана Бруха, тогда как гепрансульфат протеогликаны, имеющие домен связывающий их с мембранами клеток, локализованы в нейритах нейронов сетчатки, выступая в данном случае как рецепторы к цитокинам (Inatani, Tanihara, 2002). В свою очередь, хондроитинсульфат протеогликаны локализованы в сетчатых слоях сетчатки и в ИФМ, причем, по мере развития сетчатки, локализация хондроитинсульфат протеогликанов увеличивается в ИФМ и уменьшается в сетчатых слоях сетчатки (Inatani, Tanihara, 2002).Тенасцин является гликопротеином с молекулярной массой 190-200 к Д состоит из шести полипептидньпс фрагментов, соединенных между собой в звездчатую надмолекулярную структуру (Gfrumet et al, 1985). Тенасцин проявляет антиадгезионную активность, т.е. ингибирует межклеточные адгезионные взаимодействия. В сетчатке этот гликопротеин способствует ослаблению взаимодействия между клетками глии и нейронами (Hoffman et al., 1988). Как было установлено, тенасцин синтезируется клетками глии, а на поверхности нейронов экспрессируется протеогликан, с которым он взаимодействует (Hoffman et a l , 1988). Взаимодействие молекул тенасцина и протеогликана, осуществляемое через гликозилфосфатидилинозитол, препятствует межклеточной адгезии. Выдвинуто предположение о том, что опосредованное тенасцином ингибирование межклеточных адгезионных взаимодействий играет исключительно важную роль в миграции нейронов головного мозга по глиальным клеткам in vitro (Chuong et a l , 1987).Предполагается, что тенасцин играет регуляторнучо роль в ретинотектальном развитии. В небольших количествах тенасцин был обнаружен в слое сетчатки, образующим волокна зрительного нерва и самом зрительном нерве. В больших количествах он экспрессируется в тектуме и мишенях аксонов сетчатки в мозге, вблизи зрительных дисков, внешней поверхности зрительного нерва и супраохггической коммиссуре (Perez, Halfer, 1993). Тенасцин-R (янусин у крыс, и, рестриктин у цыплят) имеет 14 сайтов N-гликозилирования (Zamze et a l , 1999). Тенасцин может связываться как с N-кадгерином, так и с интегринами (Li et a l , 2000).При исследовании трех типов подложек, обработанных фибронектином, ламинином, коллагеном IV, в качестве адгезивных субстратов для культивирования клеток эмбриональной нейральной сетчатки было установлено, что ламинин и коллаген IV способствуют прикреплению культивированных клеток к ним лучше, чем фибронектин. Рост нейритов наблюдался лучше при контакте с ламинином, чем с фибронектином и коллагеном IV. Было также установлено, что на поверхности клеток нейральной сетчатки существует определенный адгезивный сайт, представленный гликопротеином, который ответственней за взаимодействие с белками ВМ (Hall et al., 1987). На разных стадиях развития клетки нейральной сетчатки эмбрионов различаются по их способности взаимодействовать с ВМ (Hall et a l , 1987). Так, например, было показано, что на ранних стадиях развития куриных эмбрионов в сетчатке преобладает Са^^-независимый механизм клеточной адгезии, а по мере приближения клеток сетчатки к дефинитивному сосоянию, начинает преобладать Са^"^-зависимый механизм адгезии (Дольникова и др., 1986).ИФМ играет важную роль в процессах взаимодействия сетчатки и ПЭС, в связи с этим входящие в его состав молекулы адгезии будут рассмотрены отдельно. VI. Белки интерфоторецепторного матрикса.ИФМ - тонкий слой внеклеточного материала в субретинальном пространстве глаз позвоночных. Он ограничен апикальными микровиллями клеток пигментного эпителия и наружной пограничной мембраной, образованной контактами между Мюллеровскими клетками и внутренними сегментами фоторецепторов (Adler, Evans, 1985). В ИФМ найдены гликозаминогликаны, протеогликаны, белки, лизосомные гидролазы и гликопротеиновые компоненты. Коллаген и фибронектин не содержатся в ИФМ, но был обнаружен ламинин. На поверхности клеток сетчатки был обнаружен ЮОкД белок - рецептор к нему (Adler, 1993). ИФМ является областью переноса различных метаболитов из кровяного русла через клетки пигментного эпителия к клеткам сетчатки и обратно. Белки ИФМ могут принимать участие в инициации ферментативного переваривания и слущивания дисков фоторецепторов, а также выполнять роль сигнальных молекул для фагоцитоза и адгезии клеток в сетчатке (Adler, Evans, 1985).При ДЦС-Ка-электрофорезе солюбилизированных препаратов ИФМ обнаружено около 20 белковых полос, среди которых мажорные имели мол. массу 47 кД, 55 кД и 140 кД (Adler, Evans, 1985). Состав белковых фракций, выделенных из цитоплазмы клеток сетчатки и ПЭС, отличается существенно от состава белков в ИФМ. Но с другой стороны, все компоненты интерфоторецепторного матрикса синтезируются клетками ПЭС и фоторецепторами сетчатки (Adler, Evans, 1985; Панова, 1994). Известно, что нормальное поддержание взаимодействия нейральной сетчатки с ПЭС необходимо для функционирования сетчатки. В этом процессе участвуют матриксные и мембранные гликопротеины. Одним из первых изученых факторов адгезии клеток нейральных тканей был углеводсодержащий белок с мол. массой 50 кДа и изоэлектрической точкой 3,8-4,1, выделенный из среды культивирования клеток сетчатки куриных зародышей и названый когнином (Moscona, 1963; Дольникова, Ямскова, 1990). Когнин ускорял спонтанную агрегацию клеток сетчатки, причем в агрегатах восстанавливалась гистологическая структура, характерная для сетчатки in vivo (Linser, Moscona, 1983) . На начальных этапах гистогенеза когнин равномерно распределен по всей сетчатке, а в дефинитивной ткани - концентрируется в ганглиозном слое.Когнин может опосредовать взаимодействие нейронов с клетками глии (Ophir et al., 1984).В тканях сетчатки и ПЭС обнаружены адгероны, представляющие собой белки и протеогликаны. Адгероны усиливают адгезию клеток к субстрату, а также друг к другу, ускоряя агрегацию, при этом проявляя тканеспецифичность (Shubert et al., 1983). На поверхности клеток был обнаружен адгезивный лиганд адгеронов - сульфатированный белок с мол. массой 170 кДа, который сам проявлял способность усиливать адгезию клеток к субстрату (Cole, Glaser, 1984) .Участвующий во взаимодействии по типу «клетка-субстрат» белок с молекулярным весом 20 кД, был обнаружен в сетчатке и назван ретинальный пурпурин, который также относится к адгеронам. Было показано, что он способствует выживанию нейральных клеток сетчатки кур в культуре in vitro (Schubert, la Corbière, 1985). Пурпурин способен связываться с компонентами ВМ. При исследовании первичной структуры пурпурина было обнаружено его сходство с ретинолсвязывающим белком сыворотки крови (Shubert et al., 1986).Пурпурин экспрессируется только клетками сетчатки и отсутствует в сердце, печени, мышцах и мозге (Berman et al., 1987). В сетчатке пурпурин локализован на поверхности наружных сегментов фоторецепторов, а также между фоторецепторами. Пурпурин опосредует адгезию фоторецепторов сетчатки и клеток ПЭС, а также обладает ретинолсвязывающей активностью (Berman et a l , 1987). При реакции на связывание СопА был выявлен гликопротеин с мол. массой 140 кД-внеклеточный ретиноид-связывающий белок (ШВР) (Adler, Evans, 1985). Он необходим для связывания и переноса эндогенного ретинола и ретиналя из фоторецепторов в клетки ПЭС, где происходит их транс- цисизомеризация. Данные исследования углеводного состава ШВР свидетельствуют о том, что данный гликопротеин имеет 4-5 гибридные N олигосахаридные цепи. Этот гликопротеин содержит 5,5% нейтральных Сахаров (маннозы, галактозы, фукозы), 4% N-ацетилглюкозамина, 1,5% сиаловых кислот. Молекула ШВР имеет вытянутую форму, ее вторичная структура описывается в терминах статистического клубка (16% а-спиралей, 19% ß-слоев и 65% неупорядоченной конформации) (Adler, Evans, 1985).Кроме указанного гликопротеина, в ИФМ, а также на поверхности фоторецепторов и клеток ПЭС, были обнаружены гликопротеины, участвующие в межклеточном узнавании и адгезии (Hall et al, 1990). Причем в зависимости от типа фоторецепторов на клеточной поверхности присутствовали различные по строению гликопротеины: около палочек - N-олигосахаридные гликопротеины, а около колбочек - 0-гликозилированные белки. Эти данные свидетельствуют о специфической мозаичности пространственной организации ИФМ (Sameshima et al, 1987). Vn. Кальций-связывающие нейроспецифические регуляторные белки (S100 белки и их гомологи).Кроме гликозилирования, очень велика роль ионов кальция в межклеточных взаимодействиях. Поэтому, отдельно мы рассмотрим группу нейроспецифических кальций-связывающих регуляторных белков, относящихся к семейству "EF"-hand, так как они могут присутствовать в цитоплазматической, трансмембранной и внеклеточной формах, и по физико-химическим свойствам данная группа белков наиболее близка к изучаемым нами белкам (Ямскова, Ямсков, 1999). Vn . l . История открытия и физико-химические свойства белков S-100.За последние годы получено большое количество данных, выявляющих важную роль S-100 белков в регуляции различных процессов в организме. Большинство проводимых исследований по S-100 белкам направлено на их изучение в качестве специфических маркеров нервной системы (Borrnin, Rubinstein, 1984; Donato, 1999). Значительный интерес к этим белкам обусловлен их использованием в медицине, в частности, при диагностике оп)^олевых заболеваний (Filipek, 1993; Tomaszewski, Lupton, 1998). В 1965 году Мур выделил экстракт из мозга быка, содержащий кислую, быстро двигающуюся при электрофорезе белковую фракцию, которая не была обнаружена в других органах и тканях. В дальнейшем процессе очистки и выделения белка Муром было обнаружено, что он остается в растворимом состоянии в насыщенном (100%) растворе сульфата аммония, за что этот белок и был назван S-100 (Moore, 1965).Такая высокая консервативность свидетельствует о важных биологических функциях S-100 белков.Интересно, что линии мышей, характеризующиеся высоким содержанием S-100 белков (DBA/2J и BALB/cLac), оказались наиболее способны к обучению в эксперименте Бове (Bovet et a l , 1969). В этой связи важно упомянуть, что есть и другие данные об увеличении синтеза S-100 белка в процессе обучения животного (Hyden, Lange 1970; Старостина, Свиридов, 1977; Fazeli et a l , 1990).Мыши с высоким уровнем S-100 белков в мозге более способны к обучению, чем таковые с низким (Старостина, Свиридов, 1977; Zimmer et a l , 1995). При развитии ЦНС зфовень S-100 белков в мозге крыс увеличивается в 4 раза. Он достигает максимума на 21 день постнатапьного развития и далее остается постоянным в течение 2 лет. В этот период глиальные клетки пролиферируют, а нейроны уже заканчивают дифференцировку. Период резкого возрастания S-100 белков в мозге мышей и крыс совпадает с моментом, когда у животных появляются глаза, координированная мышечная активность и животные начинают исследовать окружающую среду. Соответственно, S-100 белки участвуют в формировании связей между группами функционирующих нейронов (Sviridov et a l , 1972; Старостина, Свиридов, 1977).Несколько S-100-подобных белков, гомологичных хорошо охарактеризованным S-100 белкам из мозга быка, были открыты позже. Для них характерна различная степень гомологии (от 25% до 65% сходства по аминокислотному составу) (Schafer, Heizmann, 1996). Несмотря на это, их стали относить к белкам S-100 семейства (Kligman, Hilt, 1988). В настоящее время описано более 17 различных белков, относящихся к этому семейству (Donato, 1996). Члены семейства S-100 белков имеют сходство в первичной и вторичной структзфе в четырех специфических доменах. Это N - и С-концевые области, содержащие консервативные гидрофобные аминокислотные домены. Также есть консервативный основной домен, содержащий N-концевую кальцийсвязывающую область, и консервативный кислый домен, содержащий Сконцевой EF-hand сайт (Kligman, Hilt, 1988). Хотя первичная аминокислотная последовательность варьирует, гидрофобные и гидрофильные области этих белков высоко консервативны. Важно отметить, что помимо сходства членов S100 семейства в сайтах связывания кальция, они имеют схожую аминокислотную последовательность в других областях, что говорит о важной функциональной роли этих участков. Важно подчеркнуть, что S-100 белки не проявляют энзиматической активности и не содержат углеводных цепей, липидов, нуклеиновых кислот или фосфатов (Fano et al., 1995). Vn.2. Присутствие белков S-100 в различных тканях млекопитающих.Вьювленная эволюционная стабильность белков S-100, позволяет предполагать их связь с основными функциями нервной системы (Moore, 1982).УП.З. функции кальций-связывающих белков S-100.Белки S-100 способны выполнять большое число различных функций.Повышенное содержание белков S-100 в нейронах и клетках глии обнаружено при различных нейродегенеративных заболеваниях: болезнь Альцгеймера, Даун Синдром, эпилепсия, прогрессивная нейродегенерация и СПИД (Filipek, 1993; Zimmer et al., 1995; Fano et al., 1995). Одним из объяснений данного явления может быть то, что ген, кодирующий белок S-lOOb, расположен на хромосоме 21q 22 (трисомР1я по данной хромосоме обнаруживается при Даун синдроме) (Schafer, Heizmann, 1996). С другой стороны, корелляция между увеличением уровня белка S-lOOb и болезнями Альцгеймера и Даун-синдромом может быть непрямой. Высокий уровень S-100 белка может индуцировать изменения в росте нейритов, пролиферации и морфологии глии, а также изменению Са^^ гомеостаза, что в свою очередь приводит к клеточной гибели, по аналогии с процессами происходящими in vitro в PC 12 клетках (Marshak, Pena, 1992).Количество кальбиндина (Д-28к), представителя S-100 семейства, напротив снижено при болезни Альцгеймера, Даун синдроме и паркинсонизме в пораженных очагах мозга (lacopano et al., 1992; Mattson et al., 1991; Zimmer et al., 1995). В больших концентрациях белки S-100 найдены в неопластических клетках (Schafer, Heizmann, 1996; Zimmer et al., 1995). Так, синтез S100A2, A4, А6, и S-lOOb значительно увеличивается в неопластических клетках (Schafer, Heizmann, 1996). Белок S-lOOb белок найден в меланомах, а белок S-100A4 - в метастазирующих эпителиальных клетках крыс (Schafer, Heizmann, 1996).Несмотря на это, определенной функции данных белков в неопластическом образовании не выяснено. Белок S-lOOß может регулировать скорость деления клеток (Kligman, Marshal, 1985), а также стимулировать пролиферацию клеток в культуре (Van Eldik, Hu, 1996). Вытягивание нейритов в нейробластах и глиальная пролиферация могут также происходить под влиянием белка S-lOOb (Van Eldik, Zimmer, 1988; Zimmer et al., 1995; Schafer, Heizmann, 1996). К этому можно добавить, что кальретинин - белок гомологичный кальбиндину (Д-28к) на 58%, появляется в цитоплазме клеток линии •\УЮг только во время их деления (Filipek, 1993). Так как данные белки имеют в своей структуре сайты связывания кальция, то их активность зависит от данного иона и от его концентрации (Kligman, Hilt, 1988; Van Eldik, Zimmer, 1988; Schafer, Heizmann, 1996). Кроме того, S-100 белки самостоятельно принимают участие в регуляции кальциевого гомеостаза (буфферными свойствами для Са^^ обладает S-100 белок CALB3). Показано также, что белок S-100A1 стимулирует выход ионов Са^ "^ из саркоплазматического ретикулума (Schafer, Heizmann, 1996).Выявлена также роль белков S-100 в синаптической передаче и в функционировани щелевых контактов. Проницаемость щелевых контактов зависит от изменения внутриклеточного кальция, который в свою очередь связывается с S-100 белками и кальмодулином (РегассЫа, 1990). S-100A1 и SЮОЬ белки влияют на клеточную проницаемость через взаимодействие с полипептидом щелевого контакта (Van Eldik et al., 1985; Zimmer et al., 1995). SlOOa и S-100b белки могут взаимодействовать с искусственными мембранами и модулировать диффузию через них в присутствии ионов Са^^ моновалентных ионов (Donato, 1986). Кроме того, методом электронного спинового резонанса показано, что S-100 белки могут изменять физический уровень полярной поверхности и гидрофобного кора липидного бислоя мембран мозга (Cúratela et al., 1985).Другие белки семейства S-100, такие, например, как S-100A8 в концетрации 10'^ ^ - 10"'^М обладают хемотаксической активностью для макрофагов (Schafer, Heizmann, 1996); кроме того, MRP-8 белок (S-100A8), продуцируемый моноцитами и гранулоцитами, является потенциальным хемостатическим агентом для миелоидных клеток (Donato, 1996). Комплекс MRP-8 и MRP-14 белков появляется во время воспаления и активирует лейкоциты, оказывая бактериостатический и грибостатический эффект (Sorg, 1996). Белок S-100A10 участвует в регуляции высвобождения нейротрансмиттеров и обладает антивоспалительной функцией (Zimmer et al, 1995). S-100A6 (кальциклин) - участвует в стимуляции Са^^-зависимого высвобождения инсулина, пролактиновой секреции, эндоцитозе (Schafer, Heizmann, 1996). Выявлены случаи, когда секреция S-100 белков регулируется гормонами. Например, высвобождение S-lOOß белка из адипоцитов стимулируется изопротеренолом и адренокортикотропным гормоном, что говорит о физиологическом контроле внеклеточного уровня данного белка (Donato, 1986; Kligman, Hilt, 1988).Рековерин - еще один представитель S-100 белков (Dizhoor, 1991), содержит EF-hand домен, активирует гуанилат циклазу, соответственно происходит синтез цГМФ, при снижении концентрации Са^^ до 0,1 мкМ (Filipek, 1993). Кальций-связывающий белок рековерин, впервые обнаруженный в сетчатке быка (Дижур и др., 1991; Dizhoor et al, 1991; Lambrecht, Koch, 1991), высокоспецифичен для этой ткани и кроме нее выявлен только в эпифизе, который, как известно, содержит пинеалоциты, близкие фоторецепторным клеткам сетчатки (Korf et al., 1992; Bastianeiii, Pochet, 1994). В сетчатке глаза рековерин найден в фоторецепторных клетках обоих типов - в палочках и колбочках (Dizhoor et al, 1991), а также других нейронах - в биполярных и ганглиозных клетках сетчатки целого ряда видов (Milam et al, 1993; Wiechman, Hammarback, 1993a,b; De Raad et al, 1995; McGinnis, 1997). В фоторецепторных клетках сетчатки млекопитающих рековерин содержится в наружных сегментах палочек и колбочек (Dizhoor et al, 1991), где он, предположительно, Са^^-зависимым образом регулирует фосфорилированне родопсина (Kawamura et al, 1993; Gorodovikova et al, 1994a,b). Кроме того, присутствие рековерина обнаружено во внутренних сегментах и окончаниях аксонов фоторецепторных клеток (Dizhoor et al., 1991; Wiechman, Hammarback, 1993 a), однако каких-либо экспериментальных данных, указывающих на функцию рековерина в этих отделах фоторецепторов, или хотя бы экспериментально обоснованных гипотез на этот счет до сих пор нет. Ничего неизвестно также о функции рековерина в нейронах сетчатки, отличных от палочек и колбочек.Рековерин обнаружен в сетчатке всех изученных на сегодня видов: у человека, мартышки, быка, кролика, крысы, мыши, лягушки, тритона, хамелеона и миноги (Korf et al, 1992; Kawamura et al, 1993; Milam et al, 1993; Wiechman, Hammarback, 1993a; De Raad et al, 1995; BastianelU et al, 1995; McGinnis etal, 1997; Dalil-Thiney etal, 1998; Бажин и др., 2002).Таким образом, мы убедились в полифункциональности биологического действия группы белков S-100, а также их высокого консерватизма у различных видов животных. Кроме того, мы видим, что важную роль в активности указанных белков играют ионы кальция и некоторые другие ионы. Vn.4. Возмюжные молекулярные механизмы действия S-100 белков.Конформационные изменения в присутствии ионов Са^^ определяют гетерогенные свойства S-100 белков (Moore, 1982). При связывании ионов Са^^ происходящие в молекуле S-100 белка конформационные изменения приводят к выставлению гидрофобных участков для взаимодействия с белками мишенями.На поверхности оказываются также ароматические аминокислоты и две сульфгидрильные группы, которые могут быть окислены. В этой форме способность изменения конформации в присутствии ионов Сд?^ блокируется (Fano et al., 1995). По гипотезе Калиссано (Calissano, 1973), находясь в данной конформации белок способен растворяться в липидах и включаться в мембрану.УШ. Маркерные молекулы дифференцировки клеток сетчатки и пигментного эпителия.Развитие сетчатки регулируется извне действием компонентов ВМ и растворимьк факторов, продуцируемых нейронами (Hunter et al., 1992; Altshuler, Серко, 1992; Watanabe, Raff, 1992; Bormann et al., 1993; Kelley et al., 1994) . Среди работ самых последних лет значительная часть посвящена исследованию факторов дифференцировки клеток сетчатки, здесь применение маркеров различных белков особенно широко. В настоящее время наиболее существенная роль в регуляции развития сетчатки отводится ростовым факторам семейства активинов/ингибинов, в свою очередь являющихся мультифункциональными членами суперсемейства TGPp (Beleckyadams et al., 1999). Интересна работа, продемонстрировавшая иммуногистохимически избирательную локализацию ингибина в межфоторецепторном матриксе сетчатки, что свидетельствует о ростовой и/или трофической роли этого фактора в установлении дифференцировки фоторецепторов и ПЭС (Ying et al., 1995) .Значение ингибиторных взаимодействий в морфогенезе сетчатки отмечалось и в некоторых других работах. Так, например, локальное введение нейротоксина 6-гидроксидофамина приводит к гибели части серотонинпозитивных амакриновых клеток в развивающейся сетчатке лягушки, что инициирует быстрое образование новой генерации тех же клеток (Reh, TuUy, 1986). Наиболее вероятным объяснением этого феномена является регуляция численности данной клеточной популяции ее уже дифференцированными клетками. Сходный регуляторный ответ получен и для биполяров и горизонтальных клеток при использовании другого нейротоксина каиновой кислоты (Reh, 1987). И наконец, существуют сведения о том, что клетки ПЭС, взаимодействующие с фоторецепторами in vivo, могут оказывать ингибирующий эффект, тормозящий дифференцировку фоторецепторов и экспрессию ими опсина в развивающейся сетчатке цыпленка (Schlosshauer et al., 1997).Интересно, что относительные количества тех или иных, возникающих in vitro клеточных типов сетчатки, зависят от условий микроокружения. Это подтверждает суждение о том, что специфические для определенной стадии развития взаимодействия опосредованы локальными условиями, влияющими на ход приобретения клетками их окончательного фенотипа (Ahmad et al., 1999). FGF2 является необходимым компонентом микроокружения, стимулирующим дифференцировку нейронов и предохраняющим их от гибели (McFarlane et a l , 1998) . Помимо FGF2, в сетчатке позвоночных животных присутствуют TGFa , TGFß и IGF, которые также стимулируют пролиферацию клеток развивающейся сетчатки (Adler, 1993). Следует отметить, что TGFa в низких концентрациях стимулирует пролиферацию in vitro, тогда как в высоких концентрациях ингибирует дифференцировку палочек и обеспечивает дифференцировку клеток Мюллеровской глии (Harris, 1997).Меланин - является молекулой, адсорбирующей свет в ПЭС, которая связываясь с другими белками и аггрегируя, формирует пигментные гранулы меланосомы. Меланин в ПЭС может связывать ионы металлов. Пигментация является натуральным индикатором развития ПЭС и изменения его фенотипа т vivo и in vitro (Панова, 1993). Созревание ПЭС регулируется факторами сетчатки (Zhao et a l , 1997). Во время ранних стадий развития различные молекулы клеточной адгезии и рецепторы FGF экспрессируются в ретинальном нейроэпителии (Brittis et al., 1996). Эмбриональный ретинальный N C A M содержит в основном 140 кД изоформу (Storms et al., 1994). В сетчатке и пигментном эпителии глаз 8-ми дневных куриных зародышей были идентифицированы и исследованы адгезивные белки, представляющие собой кислые гликопротеины, которые в одинаковой степени стимулировали агрегацию клеток сетчатки и клеток пигментного эпителия в суспензионных клеточных культурах in vitro (Дольникова и др., 1985а; 1986). В этих исследованиях при получении тканевых экстрактов, содержащих адгезивные белки, применялась механическая диссоциация тканей, их обработка ферментами и Са^^-хелатирующими агентами (Дольникова и др., 1985а; 19856).Указанный метод агрегации обладает рядом принципиальных недостатков.Наиболее значительным из них является повреждение поверхности клеток в процессе приготовления суспензионных культур (обработка тканей ферментами, хелатирующими ионы металлов соединениями, механическая дезинтеграция и т.д.). Другие адгезиометрические методы, разработанные для оценки состояния межклеточной адгезии в тканях, основывались также на определении величины параметров, характеризующих механическую сцепленность клеток в момент отрыва их друг от друга, который осуществлялся, например, с помощью фиксированных микроигл или потоков жидкости, или же при механическом диспергировании ткани (Маленков, Модянова, 1968; Модянова, 1968; Маленков, Чуич, 1979).Позже метод агрегации практически полностью заменил другой экспериментальный подход, основанный на применении методов иммунохимии (Anderson, 1990; Turner, 1992; Riechardt, 1993). Очевидно, это было связано с тем, что метод клеточной агрегации оказался мало перспективным при изучении адгезионных взаимодействий клеток, дифференцировка которых была близка к терминальному состоянию. Суть нового методического подхода заключается в получении клона специфических антител к некоторому антигену клеточной поверхности и демонстрации адгезивной активности этого антигена по способности специфических антител предотвращать клеточную агрегацию in vitro (Edelman, 1984). Несмотря на то, что результаты, полученные при применение такого экспериментального подхода, не предоставляют прямого доказательства участия изучаемых веществ в адгезивном процессе, иммуноцитохимический анализ продолжает оставаться основным современным методом изучения молекулярных основ клеточной адгезии. О причастности исследуемых веществ к клеточной адгезии судят также по их способности оказывать влияние на процессы, сопряженные с адгезивными взаимодействиями. Для нервной ткани, например, таковым является рост нейритов (Kreis, Vale, 1993). X. Модели культивирования тканей сетчатки и пигментного эпителия глаза.Анализ механизмов развития сенсорной нейральной ткани в процессе ретиногенеза, поиск и оценка регулирующих этот процесс факторов, тестирование агентов, обладающих нейротрофическим, морфогенетическим или защитным действием, исследование циркадных ритмов, изучение цитотоксичности и клеточной гибели - вот неполный перечень проблем, для решения которых необходимы надежные модельные системы вне организма (in vzvo-like in vitro models). В настоящее время используются клеточное, тканевое, органное культивирование, ретинобластомные клеточные линии и генетически сконструированные линии клеток сетчатки in vitro (Seigel, 1999). При этом используется как стационарное, так и ротационное культивирование (Layer, Willbold, 1993). Одним из несложных методов культивирования клеток эмбриональной сетчатки и пигментного эпителия является постановка суспензионных культур (Moscona, 1961; Matsuo et al., 1998). При таком способе культивирования происходит взаимодействие клеток между собой, без прикрепления их к субстрату. Благодаря этому, можно изучать непосредственное действие добавляемых в среду культивирования веществ на поверхность клеток, в частности, на клеточные рецепторы. При этом можно исключить передачу информационного сигнала через внеклеточный матрикс.Применяли также культивирование эмбриональной сетчатки кур в монослое изначально диссоциированных клеток (Araki 1984). Иногда удавалось культивировать клетки сетчатки взрослых животных. Так, культивировали диссоциированные нейроны сетчатки взрослого человека (Picaud et al., 1998), ферментативно изолированные клетки ПЭС кошек (Stramm et al., 1983). В среде с 20% фетальной лошадиной сывороткой первичная культура выживала 145 дней, с сохранением своей морфологии и фенотипа (Stramm et al., 1983). Очень распространено культивирование пигментного эпителия в монослое (Hadlock et al., 1999). При монослойном культивировании, или культивировании в виде фрагментов ПЭС, частично сохраняется внеклеточный матрикс и возможно им опосредованное взаимодействие между клетками. При таком подходе отсутствует влияние других тканей, например, сетчатки, что в определенных экспериментах является важным.Кроме клеточного, распространено культивирование фрагментов ткани, полз^енных различными способами. Среди способов выделения ПЭС, как эмбрионального, так и взрослого организма, был прежде всего механический, с последующим разделением пласта на фрагменты и культивированием в течение 10-14 дней (Zhu et al., 1998). Данная методика использовалась преимущественно для получения клеток эмбрионального пигментного эпителия (Zhu et al., 1998).На более поздних сроках развития и у взрослых животных выделение клеток ПЭС было преимущественно ферментативным.Длительное культивирование нейральной сетчатки проводилось в основном при использовании эмбрионального или постнатального материала (Kelley et al., 1995). Неонатальную сетчатку кролика удавалось культивировать на протяжении двух недель (Germer et e l , 1997; Pinzon-Duarte et al., 2000).Неонатальные мышиные эксплантаты сетчатки культивировали в бессывороточной среде четыре недели (Ogilvie et a l , 1999; Caffe et a l , 1993).Существуют также способы культивирования тканей глаза в передней и задней камерах глаза (Строева, 1971). При имплантации в заднюю камеру глаза ПЭС взрослых тритонов вместе с сосудистой и склеральными оболочками глаза возможна даже регенерация сетчатки (Григорян, Миташов, 1985). В случае имплантации ПЭС только с сосудистой оболочкой наблюдается более высокий уровень пролиферации в первые 10 дней культивирования, но образования дифференцированной сетчатки впоследствии не обнаруживается. Сравнение поведения клеток пигментного эпителия тритона при культивировании in vitro и в линзэктомированном глазу показывает, что при культивировании in vitro из клеток пигментного эпителия формируются лентоиды, а в полости глаза сетчатка (Eguchi, 1982). Данные цитированных работ говорят о том, что условия окружения могут бьггь решающими для проявления потенций ПЭС к формированию либо лентоидов, либо сетчатки, а также для проявления способности ПЭС регенерировать сетчатку. Условия окружения включают в себя морфогенетические факторы, ответственные за состояние клеток в пласте ПЭС (контакты, полярность, взаимоотношение с субстратом) и химические факторы среды культивирования (Григорян, Миташов, 1985). Были проведены эксперименты по трансплантации ПЭС лягушек в полость или орбиту глаза.Было показано, что важную роль в процессах трансдифференцировки играют мембрана Бруха и сосудистая оболочка глаза (Lopashov, Sologub, 1972; Lopashov, 1983). При трансплантации ПЭС взрослых лягушек Rana temporaria, освобожденного максимально от оболочек (мембраны Бруха, сосудистой оболочки и склеры) в полости глаза в результате развивалась трансдифференцировка в атипичную сетчатку.Проводили также культивирование сетчатки 5-6 дн эмбрионов кур с ПЭС и без него в течении 6 дней (Liu et a l , 1988). Культуры нейральной сетчатки с ПЭС в течение первых 2 дней демонстрировали значительный клеточный рост, а уровень пролиферации в сетчатке, по сравнению с культурами без ПЭС, оказывался намного выше. Культуры без ПЭС, однако, обладали нейронами с более упорядоченным ростом нейритов. После 5-6 дней культивирования культуры с ПЭС образовывали слои подобные таковым in vivo, а культуры без ПЭС не стратифицировались и погибали (Liu et a l , 1988). Авторы этих работ предполагают, что ПЭС может выполнять роль стимулятора роста и дифференцировки клеток сетчатки в условиях in vitro и in vivo. К тому же, при культивировании сетчатки или ПЭС без подлежащих соседних тканей снимается естественное механическое натяжение, которое в свою очередь очень существенно влияет на биохимические и формообразовательные процессы (Строева, 1971).Для изучения роли субстрата, применяли культивирование тканей сетчатки и пигментного эпителия на различных подлолжках - компонентах внеклеточного матрикса (Ban, Rizzolo, 1997). Задачами культивирования было изучение формирования межклеточных контактов, влияния адгезии на формировние целостного пласта и полярности слоя. Показано, что гиалуронан и хондроитинсульфат глюкозаминогликаны секретируются при культвировании на подложках и при этом поддерживается поляризация клеток. В то же время известно, что гиалуроновая кислота в ИФМ выделяется в основном с апикальной стороны ПЭС, где помимо этого секретируются матриксные металлопротеиназы, IRBP, фактор ПЭС (PEDF) и новые молекулы SPACR и SPACRCAN. Некоторые из этих молекул могут связываться с гиалуроновой кислотой, которая может выступать в роли первичного каркаса нерастворимого ИФМ. Гиалуроновая кислота также синтезируется Мюллеровской глией (Senanayake et al., 2000). Клетками ПЭС синтезируются также ламинин, фибронектин, интегрины, гепарин сульфат протеогликаны, коллаген, тканевый ингибитор матриксных металлопротеиназЗ. При культивировании клеток ПЭС использовали также и синтетические подложки (Hadlock et al., 1999; Lu et al., 1998). Это позволяло выявить уровень клеточной адгезии, формирование плотных контактов, пролиферацию и изменения в морфологии в зависимости от субстрата. Разработка методики с использованием синтетических субстратов была важна для последующего использования монослоя пигментного эпителия в глаз в качестве трансплантата.Органное (органотипическое) культивирование наилучшим образом помогает решать задачи, связанные с поддержанием нормальной морфологии и функций глаза и вьывлением молекул, участвующих в этих процессах. При таком методе часто использовали передний и задний отделы глаз птиц и млекопитающих (CafFe et al., 1993; Soderpalm et al., 1994; Jaworowski et al., 1995; Salla et al., 1995; Finlay et al., 1996; Foreman et al., 1996; Tosini, Menaker, 1996; Germer et al., 1997; Hoff et al., 1999; Rickman, 1999; Moroi et al., 2000). Кроме этого, применяли культивирование радиальных срезов сетчатки различной толщины, полученных также от высших и низших позвоночных (Маек, Fernald, 1991; Feigenspan et al., 1993; Sassoe-Pognetto et al., 1996). Оказалось возможным культивировать даже целиком глазные бокалы 2-5 дневных куриных и перепелиных эмбрионов, содержащие сетчатку, хрусталик и стекловидное тело, в течение 1-2-х дней (Halfter, Deiss, 1986). Культивировали также глазной бокал зеленых лягушек Rana perezi. В этих культурах сохранялась цикличность синтеза мелатонина и N-ацетилтрансферазной активности, как это происходит в сетчатке in vivo (Alonso-Gomez et al., 2000).Для изучения механизмов, вовлеченных в процесс слущивания и поглощения клетками ПЭС наружных дисков сегментов фоторецепторов палочек использовали кратковременное (1-3 час) культивирование заднего отдела глаза взросльгх лягушек Xenopus laevis и Ranapipiens (Defoe et al., 1992).Добавление в среду культивирования L-глутамата стимулировало слущивание дисков. Предполагается, что данная аминокислота способна увеличивать адгезивность между фоторецепторами и клетками ПЭС и фагоцитоз дисков фоторецепторов. При добавлении в среду L-глутамата наблюдали также увеличение уровня пигментации клеток ПЭС (Defoe et al., 1992).Регулирующая роль компонентов ВМ в осуществлении трансдифференцировки клеток ПЭС бесхвостых амфибий была продемонстрирована в работах Ре и др. в условр1ях культивирования (Reh et al., 1987). Авторы использовали диссоциированные клетки ПЭС личинок бесхвостых амфибий. Ламинин оказался наиболее благоприятным субстратом для проявления сетчаточной дифференцировки, а коллаген I - для хрусталиковой (Reh et a l , 1987).Тсунематсу и Коломбр использовали культивирование фрагментов ПЭС ранних куриных эмбрионов (4-5дней инкубации) При этом формировались структуры типичные для сетчатки, содержащие ядерные и сетчатые слои. При культивировании ПЭС более поздних стадий (8-9 дней инкубации) из клеток ПЭС образовывались лентоиды. ПЭС взятый у эмбрионов птиц более поздних стадий развития вовсе утрачивал пособность к трансдифференцировке (Tsunematsu, Coulombre, 1981).В настоящее время эксперименты на сетчатке позвоночных, в том числе, и с использованием методов культивирования, выявили эффективность различных факторов в увеличении жизнеспособности и снижении риска повреждения нейронов. Среди таких веществ отмечены ростовые факторы, нейротрофины, цитокины (Steinberg, 1994), а также белки клеточной адгезии (Rattner et al., 2001). При этом обнаружено, что последние обладают высоко специализированной биологической функцией - локализованной адгезионной активностью, и в сетчатке особенно важны для сохранения жизнеспособности фоторецепторов и ганглиозных клеток (Rattner et al., 2001). Было показано также, что ганглиозные клетки выделяют в среду фактор, препятствующий дифференцировке клеток сетчатки в данном направлении (Waid, McLoon, 1998).Этот фактор активируется в среде, полученной с более поздних стадий развития сетчатки. Показано, что фактор этот стабилен к нагреванию и находится в двух фракциях (менее 3 кД и более 10 кД). Показано, что фактор, секретируемый клетами сетчатки позвоночных с поздних стадий развития ингибирует продукцию ганглиозных клеток по другому пути, нежели это осуществляет фактор Notch (Notch - нейрогенный белок, способный блокировать дифференцировку ганглиозных клеток). (Waid, McLoon, 1998).В итоге, рассмотрев различные типы культивирования клеток и тканей глаза позвоночных, можно понять, что органное культивирование наиболее удовлетворяет условиям тестирования исследуемых нами веществ. При этом, органное культивирование взрослой сетчатки тритона, как представляется, обладает рядом особых преимуществ, делающих ее незаменимой моделью для тестирования биологически активных соединений. Сетчатка тритона, как было показано ранее (Григорян и др., 1996; Григорян, Поплинская, 1999) демонстрирует наилз^шие жизнеспособность в ранние и регенерацию - в поздние сроки после отслойки in vivo. При кратковременном культивировании in vitro клетки сетчатки амфибий не только хорошо сохраняются, но обладают активным синтезом белков (Симирский и др., 1984). С другой стороны, сетчатка глаза тритона по строению и функционированию существенно не отличается от сетчатки других позвоночных и в связи с этим на ней в равной мере можно решать все те проблемы, которые анализируются на моделях сетчатки млекопитающих и птиц. Однако самое существенное ее преимущество в аспекте наших исследований заключается в том, что возможно культивирование зрелой сетчатки взрослых животных, в которой происходят только частичные гибель клеток и нарушение межклеточных взаимодействий, но при этом сохраняются клеточные дифференцировка и функционирование. Это дает возможность анализировать влияние новых белков, претендующих на роль тонких регуляторов, "настройщиков" клеточного поведения и функционирования.Материалы и методы.Используемые реактивы и оборудование.Методы.
Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Краснов, Михаил Сергеевич
Выводы.
1. В сетчатке и пигментном эпителии глаза позвоночных животных обнаружены Са2+-связывающие, гликозилированные адгезивные белки, способные проявлять биологическую активность в сверхмалых дозах. По физико-химическим свойствам, исследованным с помощью методов электрофореза в ПААГ, ВЭЖХ, кругового дихроизма, аминокислотного и углеводного анализов, данные белки отличаются от других, уже изученных белков тканей нейральной сетчатки и пигментного эпителия глаза позвоночных.
2. Для изучения специфической биологической активности исследуемых адгезивных белков разработаны модели органотипического культивирования тканей нейральной сетчатки и ПЭС in vitro.
3. Показано, что исследуемые белки в сверхмалых дозах в отношении клеток нейральной сетчатки и ПЭС глаза тритона PI. waltl. проявляют протекторные свойства, которые выражаются в стабилизации адгезивных взаимодействий и клеточной дифференцировки и повышению жизнеспособности клеток in vitro. Среди изученных, белковые фракции, выделенные из ПЭС со значением pi в области рН=8,5-9,5 (фракции ПЭСОБ-Э и ПЭСОБ8-Э) обладают наиболее выраженным биологическим действием.
4. При исследовании адгезивных белков, выделенных из тканей сетчатки и ПЭС куриных эмбрионов 8-ми и 19-ти суток инкубации, показано, что уже на стадии Е8 в данных тканях изучаемые белки присутствуют. В периоде развития, предшествующем терминальной дифференцировке, происходит модификация функционирования адгезивных систем, опосредованных исследуемыми нами белками.
5. С помощью иммуногистохимических методов изучена локализация кислого адгезивного белка, выделенного из ткани сетчатки глаза быка. Установлено, что данный белок, или его антигенная детерминанта локализованы на поверхности внутренних и наружных сегментов фоторецепторов сетчатки хвостатых амфибий. В связи с этим предполагается высокая консервативность данных регуляторных молекул у разных классов позвоночных животных.
Заключение.
Анализ полученных данных показывает, что исследуемые нами белки относятся к секреторным низкомолекулярным гликопротеинам, проявляющих биологическую активность в сверхмалых дозах. Вторичная структура
Рис. 50. Иммунофлуоресцентное окрашивание сетчатки тритона антисывороткой кролика, содержащей поликлональные антитела к кислому белку фракции СКБ-Э,. Видно присутствие слабого окрашивания на поверхности сегментов фоторецепторов. а) - поперечный срез (ув. ок.х10, об.хЮО); б) - продольный срез (ув. ок.х10, об.хЮО). исследуемых белков описывается в терминах ß-структур, а их углеводная компонента содержит остатки Man и NacGlc.
По некоторым своим свойствам (по способности связывать ионы кальция и участвовать в кальциевом гомеостазе) исследуемые белки близки к неферментным нейроспецифическим Са2+-связывающим белкам, по другим (по способности влиять на адгезивные свойства клеток в тканях) - к нейроспецифическим белкам адгезии, по третьим (по способности влиять на важнейшие процессы жизнедеятельности клеток: жизнеспособность, апоптоз, дифференцировка) - к цитокинам или секретируемым регуляторным и транспортным нейроспецифическим белкам (Kreis, Yale, 1993; Nikola, 1994; Ашмарин, Стукалов, 1996). Но, если рассматривать совокупность всех обнаруженных нами физико-химических и биологических свойств этих белков, то их трудно отнести к конкретной из указанных выше групп белков. Как нам представляется, они наиболее близки к группе белков, ранее выделенных в лаборатории из тканей позвоночных животных и получивших условное название APRULD.
Поскольку мы предполагаем, что исследуемые белки являются секретируемыми (о чем свидетельствует метод выделения их из тканей), то локализация их возможна в пространстве, образующем микроокружение клеток сетчатки. Подтверждением этого явились данные по локализации белка фракции СКБ-Э на поверхности наружного и внутреннего сегментов фоторецепторов.
Было показано, что некоторые исследуемые белки в сверхмалых дозах по отношению к клеткам нейральной сетчатки и ПЭС глаза тритона PL waltl. проявляют протекторные свойства, которые выражаются в стабилизации адгезивных взаимодействий, поддержании клеточной дифференцировки и увеличению жизнеспособности клеток in vitro. В этой связи белковая фракция, выделенная из ПЭС со значением pi в области рН=8,5-9,5 (фракции ПЭСОБ-Э и ПЭСОБ8-Э) обладает наиболее выраженным биологическим действием.
Механизм действия изучаемых белков нам пока не известен, но, исходя из результатов исследований, можно сделать несколько спекулятивных построений. То, что фракции ПЭСОБ-Э и ПЭСОБ8-Э обладают позитивным влиянием на переживающие клетки нейральной сетчатки in vitro, можно объяснить влиянием, опосредованным клетками ПЭС. Мы показали, что при снятии ПЭС, исследуемые фракции белков регенерирующим действием на нейральную сетчатку in vitro не обладали. С другой стороны показано, что изучаемые адгезивные белковые фракции оказывали положительный эффект на клетки ПЭС, при культивировании его с подлежащими тканями, но без нейральной сетчатки in vitro. Предположение подтверждается и работами других исследователей, которые показали, что факторы, выделяемые клетками ПЭС, существенно влияют на развитие и регенерацию сетчатки как in vivo, так и in vitro (Gaur et al, 1992; Sheedlo et al, 1992). Как же передается сигнал от клеток ПЭС к клеткам нейральной сетчатки? В эмбриогенезе это взаимодействие происходит через систему щелевых контактов, но во взрослом состоянии щелевые контакты утрачиваются и сигнал может распространяться только через систему ВМ (Grun, 1982). С другой стороны, ранее выдвинуто предположение, что действие белков группы APRULD заключается в их взаимодействии с молекулами воды, и передаче регуляторного сигнала через воду (Ямскова, Ямсков, 1999).
Таким образом, возможно, фракции ПЭСОБ-Э и ПЭСОБ8-Э являются регуляторными по отношению к клеткам ПЭС и ответственны за поддержание нормального состояния их дифференцировки и жизнеспособности. Далее, уже за счет нормализации клеток ПЭС происходит активирующее регенерацию влияние фракций ПЭСОБ-Э и ПЭСОБ8-Э на клетки нейральной сетчатки, так же, как это было описано для других белков (Bissel et al, 1982; Sheedlo et al, 1992; Raymond, Jackson, 1995; Jensen, 2001). Исходя из этого, можно предложить схему позитивного действия фракции ПЭСОБ-Э и ПЭСОБ8-Э на состояние сетчатки in vitro:
ПЭСОБ-Э-►вода —►ВМ-►ПЭС-► нейральная сетчатка.
Можно предположить также, что исследуемая нами фракция выполняет функцию регуляции по типу гуморальной и связывается с пептидными регуляторами, как это показано для секреторных регуляторных нейроспецифических белков (Ашмарин, Стукалов, 1996). В клетках ПЭС имеются рецепторы к меланоцитстимулирующему гормону (МСГ), а также гормон мелатонин (Панова, 1993). В принципе, действие на увеличение концентрации пигментации в клетках ПЭС и сосудистой оболочки может быть обусловлено связыванием фракций ПЭСОБ-Э и ПЭСОБ8-Э с рецепторами
155
МСГ, либо с самим МСГ, и уже этот комплекс мог оказаться активным. Однако, данная гипотеза не прошла проверки, поскольку при добавлении мелатонина или МСГ в среду культивирования в сетчатке in vitro не было обнаружено отличий от контроля, т.е. не было выявлено положительных изменений в сетчатке аналогичных вызванным фракциями ПЭСОБ-Э и ПЭСОБ8-Э.
При исследовании адгезивных белков, выделенных из тканей сетчатки и ПЭС куриных эмбрионов 8- и 19-суток инкубации, было показано, что уже на стадии 8-ми дней инкубации в данных тканях белки группы APRULD присутствуют. В процессе дифференцировки клеток тканей сетчатки и ПЭС глаз куриных эмбрионов предполагается изменение состава белковых фракций группы APRULD, либо модификация белков в указанных фракциях, с последующим изменением их биологических свойств.
В дальнейшем мы планируем продолжить изучение структуры полученных белков, уточнить их локализацию в тканях глаза, продолжить тестирование этих белков на сетчатке млекопитающих, а также наметить сферу их практического применения в медицине.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Краснов, Михаил Сергеевич, Москва
1. Альберте Б., Брей Д., Льюис Дж., Рэфф М, Роберте К, Уотсон Дж. Молекулярная биология клетки //Москва: Изд. "Мир". 1994.
2. Ашмарин И.П., Стукалов П.В. ред. в Нейрохимия М. Изд. Института биомедицинской химии РАМН. 1996. 470 с.
3. Бажин А.В., Григорян Э.Н., Тихомирова Н.К., Поплинская В.А., Филиппов П.П. Иммунохимическое изучение локализации кальций-связывающего белка рековерина в сетчатке тритона Pleurodeles waltl // Известия РАН. Сер. биологическая. 2002. № 4. С. 427-436.
4. Буеверова Э.И., Брагина Е.В., Резникова М.М., Ямскова В.П., Хрущов Н.Г. Действие адгезионного фактора сыворотки крови на пролиферацию клеток млекопитающих in vitro //ДАН СССР, 1985, т.281, N1, с. 158-160
5. Гауровиц Ф. Химия и функции белков // 1965. М.: Изд. "Мир". 53Ос.
6. Григорян Э.Н., Антон Г.Дж. Появление и распределение белка нейрофиламентов НФ-200 в трансдифференцирующихся клетках пигментного эпителия и других клетках глаза в процессе регенерации сетчатки у тритонов // Онтогенез. 1993. Т. 24. № 4. 39—52.
7. Григорян Э.Н., Поплинская В.А. Обнаружение внутренних источников регенерации нейральной сетчатки после ее отслойки у тритонов. II. Радиоавтографическое исследование // Известия РАН. Сер. биологическая. 1999. N5. С. 583-591.
8. Григорян Э.Н., Миташов В.И. Культивирование пигментного эпителия сетчатки в полости линзэктомированного глаза тритонов // Онтогенез. 1985. Т.16. N 1. С. 34-43.
9. Дарбре А. Ред. в Практическая химия белка// Мир. Москва. 1989. С. 300302.
10. Дижур А.М., Некрасова Э.Н., Филиппов П.П. Новый специфичный для фоторецепторных клеток белок с молекулярной массой 26 кДа, способный связываться с иммобилизованным делипидизированным родопсином //
11. Биохимия. 1991. Т. 56. Вып. 2. С. 225 229.
12. Долъникова А.Э., Ямскова В.П. Молекулярные факторы адгезии клеток нейральных тканей, Са2+-независимая система адгезии. Онтогенез. 1990. т.21. N4. с.358-367.
13. Долъникова А.Э., Ямскова В.П., Сологуб A.A., Строева О.Г. Биохимическая характеристика адгезионных факторов клеток сетчатки куриных зародышей // Онтогенез. 1985а. Т. 16. № 5. С.497-506.
14. Долъникова А.Э., Сологуб A.A., Строева О.Г., Ямскова В.П. Роль кальций-зависимого и кальций-независимого механизмов в адгезии клеток сетчатки и пигментного эпителия куриных зародышей // Онтогенез. 19856. Т. 16. № 2. С. 149-155.
15. Долъникова А.Э., Ямскова В.П., Сологуб A.A., Строева О.Г. Исследования специфической и неспецифической адгезии в процессе агрегации клеток сетчатки куриных зародышей // Онтогенез. 1986. Т. 17. №6. С.620-626.
16. КопаеваВ.Г. ред. в Глазные болезни//М.: Медицина. 2002. 559с.l.Jlonaiuoe Г.В., Строева О.Г. Развитие глаза в свете экспериментальныхисследований. М.: Изд. АН СССР. 1963. 205 с.
17. Максимов Г.В., Ямскова В.П., Лазарева Е.С., Ямское И.А. Действие сверхмалых доз адгезивных белков из мозга и сетчатки глаза млекопитающих на проведение возбуждения при демиелинизации нервного волокна// Онтогенез. 2000. т.31. N4. с.277-278.
18. Маленков А.Г., Модянова Е.А. Прочность межклеточных контактов и пролиферативный пул в мышиных гепатомах //Цитология. 1968. N9. С. 1087-1093.
19. Маленков А.Г., Чуич Г.А. Межклеточные контакты и реакция ткани // М. Медицина. 1979. 135С.
20. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека // М.: изд. "Мир". 1993.
21. Модянова Е.А. Изучение контактов паренхиматозных клеток печени методом диспергирования ткани // Цитология. 1968. N9. С. 1081-1086.
22. Остерман Л.А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами//М.: Изд. "Наука". 1983. 304с.
23. Остерман JI. А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот // М.: Изд. "Наука". 1985. 536с.
24. Пальцев М. А., Иванов A.A. Межклеточные взаимодействия // М.: изд. "Медицина". 1995. 224с.
25. Панова И.Г. Цитоструктура и цитохимия пигментного эпителия сетчатки. // Известия академии наук, Серия биологическая 1993. N.2.C. 165-190.
26. Панова И.Г. «Межфоторецепторный матрикс: развитие, состав и функциональное значение».//Онтогенез. 1994. т. 25. N. 1. с. 5 12.
27. Панова И.Г., Бурлакова О.В., Ершов A.B., Строева О.Г. Меланотропная активность в гипофизе и крови у крыс в раннем постнатальном развитии // Докл. АН СССР. 1987. Т. 295. №5. С. 1258-1260.
28. Резникова М.М., Ямскова В.И Получение и свойства неспецифического адгезионного фактора из сыворотки крови теплокровных животных и человека //Журнал общей биологии. 1985. Т. 46. №3. С. 389-400.
29. Старостина М.В., Свиридов С.М. //Нейроспецифический белок S-100, Успехи современной биологии, том 84, вып. 2(5), стр. 176-188, 1977.
30. Степанов В.М. Молекулярная биология. Структура и функции белков. // 1996. М.: Высшая школа. 335с.
31. Строева О.Г. Морфогенез и врожденные аномалии глаза млекопитающих. 1971. М, Наука. 242 с.
32. Строева О.Г., Бибикова А.Д. Гормоночувствительная стадия в развитии ретинального пигментного эпителия у генотипически нормальных крыс // Докл. АН СССР. 1987. Т. 292. №5. С. 1249-1252.
33. Строева О.Г., Хорошшова И.П., Поплинская В.А. Меланогенез в ретинальном пигментном эпителии у нормальных и мутантных крыс Hunter с наследственной дегенерацией сетчатки //Докл. АН СССР. 1985. Т. 285. №3. С. 692-695.
34. Челышев Ю.А., Черепнев Г.В., Сайткулов К.И. Апоптоз в нервной системе //
35. Онтогенез. 2001. Т.32. N 2. С. 118-129.38 .Ямскова В.П., Модянова Е.А., Резникова М.М., Маленков А.Г. Высокоактивные тканевоспецифические адгезионные факторы печени и легкого // Молекулярная биология. 1977. т.11. N5. с. 1147-1154.
36. Ямскова В.П., Резникова М.М. Роль макромолекулярных компонентов клеточной поверхности в специфической адгезии клеток // Успехи биологической химии. 1979. т.20, с.95-112.
37. Ямскова В.П., Резникова М.М. Адгезин-фактор из сыворотки крови животных и человека //Журнал общей биологии. 1984. т.45, N3, с.373-382.
38. Ямскова В.П., Резникова М.М. Низкомолекулярный полипептид сыворотки крови теплокровных: влияние на клеточную адгезию и пролиферацию// Журн. Общ. Биол. 1991. Т.52. № 2. С.181-191.
39. Ямскова В.П., Туманова Н.Б. Макромолекулярные факторы Ca -зависимой адгезии клеток печени // Известия Акад. наук. Серия биол. 1994. N.5. с. 73 2737.
40. Ямскова В.П., Туманова Н.Б. Роль межклеточной адгезии гепатоцитов в процессах спонтанного гепатобластомогенеза // Успехи Современной Биологии. 1996. Т. 116. Вып.2. с. 194-205.
41. Ямское И.А., Ямскова В.П. Фармакологические препараты нового поколения на основе гликопротеинов клеточного микроокружения // Росс. Хим. Ж. 1998. Т. 42. № 3. С. 85-90.
42. Ямскова В.П., Ямское И.А. Механизм биологического действия физико-химических факторов в сверхмалых дозах // Росс. Хим. Ж. 1999. Т. 43. № 3. С. 74-79.
43. Ямское И.А., Ямскова В.П., Даниленко А.Н., и др. Экспериментальные доказательства роли физико-химических факторов в механизме биологического действия сверхмалых доз // Росс. Хим. Ж. 1999. Т. XLIII. № 5. С. 34-39.
44. Ямское H.A., Виноградов A.A., Даниленко А.Н., Маслова Л.А., Рыбакова
45. Е.Ю., Ямскова В.П. Низкомолекулярный гликопротеин из сыворотки крови крупного рогатого скота: структура и свойства // Прикладная биохимия и микробиология. 2001. Т.37. №4. С. 36-42.
46. Abe S., Eguchi G. An analysis of differentiative capacity of pigmented epithelial cells of adult newt iris in clonal cell culture // Develop. Growth Differ. 1977. V.19. P. 309-317.
47. Abe, Т., Takahashi, K., andAndo, T. Purification and properties of S-100 protein from porcine brain. J. Biochem. 1974. V.75. p. 11-22
48. Acevedo M.C., Ortiz J.R. Effect of serum, fibronectin and laminin on cell morphology and growth of Xenopus laevis dorsal iris cells in vitro // J. Cell Biol.1989. V.109. N4. P. 324a.
49. Adler R. Plasticity and differentiation of retinal precursor cells // International
50. Review of Cytology. 1993. V. 146. P. 145-190.
51. Adler A.J., Evans C.D. in The Interphotoreceptor Matrix in Health and Disease (Bridges, C.D., ed.), Alan R. Liss, INC., New York, 1985. pp. 65-88.
52. Ahmad I., Dooley C.M., Thoreson W.B., et al. In vitro analysis of a mammalian retinal progenitor that gives rise to neurons and glia // Brain Res. 1999. V. 831. P. 1-10.
53. Albers K., Fuchs E. The molecular biology of intermediate filament proteins // Internat. Rev. Cytol. 1992. V. 134. P. 243 279.
54. Allore RJ., Friend W.C., O'Hanlon D., Neilson K.M., Baumal R., Dunn R.J., Marks A. Cloning and expression of the human SI00(3 gene // J. Biol. Chem.1990. V. 265. P. 15537-15543.
55. Alonso-Gomez A.L., Valenciano A.I., Alonso-Bedate M., DelgadoM.J. Melatonin synthesis in the greenfrog retina in culture: II. Dopaminergic and adrenergic control // Life Sci. 2000 Jan 14. V. 66(8). P. 687-95.
56. Altshuler D., Cepko C.L. A temporally regulated, diffusible activity is required for rod photoreceptor development in vitro // Development. 1992. V. 114. P. 947-957.
57. Anderson H. Adhesion molecules and animal development // Experientia. 1990. V. 46. P. 2-13.
58. AndradeM.A., Chacon P., Merelo J.J., Moron F., 1993. Prot. Eng. V.6. p. 383390.
59. Aplin A.E., Howe A.K., Juliano RL. Cell adhesion molecules, signal transduction and cell growth // Current Opinion in Cell Biology. 1999. V. 11. P. 737-744.
60. Araki M. Immunocytochemical study on photoreceptor cell differentiation in the cultured retina of the chick // Dev Biol. 1984. Jun. V. 103(2). P. 313-318.
61. Balsamo J., Leung 71, Ernst H, Zanin M.K., Hoffman S., Lilien J. Regulated binding of PTP1B like phosphotase to N - cadherin: control of cadherin -mediated adhesion by dephosphorylation of beta - catenin //J. Cell Biol. 1996. Aug. V. 134. p. 801 - 813.
62. Ban Y., Rizzolo L.J. A culture model of development reveals multiple properties of RPE tight junctions // Mol Vis. 1997. Dec. v. 31. P. 3:18.
63. Bastianelli E, Pochet R Calbindin-D28k, calretinin, and recoverin immunoreactivities in developing chick pineal gland // J. Pineal. Res. 1994. V. P. 17. P. 103-111.
64. Baudier J., Gerard D. Ions binding to S-100 proteins: structural changes induced by calcium and zinc on S-lOOa and S-lOOb proteins // Biochemistry. 1983. V. 22. P. 3360-3369.
65. Baudier J., Glasser N., Gerrard D. Ions binding to S-100 proteins. I. Calcium -binding and zinc properties of bovine brain S-100aa, S-lOOa(aP) and S-100b(pp). Zn2+regulates Ca2+ binding on SlOOp protein // J. Biol. Chem. 1986. V. 261. P. 8192-8203.
66. Bavik C.O. Levy E, Hellman U et al. The retinal pigment epithelial membrane receptor for plasma retinol-binding protein: isolation and cDNA cloning of the 63-kDa protein // J. Biol. Chem. 1993. V. 268. P. 20540-20546.
67. Beleckyadams T.L., Scheurer D., Adley R. Activin family members in the developing chick retina: expression patterns, protein distribution, and in vitro effects//Devel. Biol. 1999. V. 210. №1. P. 107-123.
68. Berman P., Gray P., Chen K., et al. Sequence analysis, cellular localization and expression of a neuroretina adhesion and cell survival molecule // Cell. 1987. V. 51. P. 135-142.
69. Bissell M.J., Hall H.G., Parry G. How does the extracellular matrix direct gene expression? //J. Theor. Biol. 1982. V.99. 31-68.
70. Bonnin J.M., Rubinstein L.J. Immunohistochemistry of central nervous system tumors. Its contributions to neurosurgical diagnosis // J. Neurosurg. 1984. V.60(6). P. 1121-1133.
71. Bork P., Ouzounis C, Sander C., Scharf M., Schneider R., Sonnhammer E. Protein Sei. 1992. V.l. p. 1677-1699.
72. Bormann J., Feigenspan A., Wassle H. Organotypic slice culture of the mammalian retina // Visual Neurosci. 1993. V. 10. P. 203-217.
73. BovetD., BovetN., Oliverio A. Science. 1969. V. 163. P. 3864.
74. Brem RB., Robbins SG., Wilson DJ., O'Rourke IM., Mixon RN., Robertson JE., Planck SR., Rosenbaum JT. Immunolocalization of integrins in the human retina // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 1994. V. 35. P. 3466-3474.
75. Brittis P.A., Silver J., Walsh F.S., DohertyP. Fibroblast Growth Factor Receptor Function Is Required for the Orderly Projection of Ganglion Cell Axons in the Developing Mammalian Retina // Mol Cell Neurosci. 1996. Aug. v. 8(2/3). P. 120-128.
76. Buchi E.R. Cell death in the rat retina after a pressure-induced ischemia-reperfusion insult: an electron microscopic study. I. Ganglion cell layer and inner nuclear cell layer // Exp. Cell Res. 1992. V. 55. P. 605-613.
77. Calissano P. Specific properties of the brain specific protein S-100 // In: Proteins of the Nervous System. 1973. P. 13-26. Eds. B.W. Moore, A. Friesen, Levine L. Raven Press: New York.
78. Calissano P., Moore B.W., Friesen A. Effect of calcium on S-100, a protein of the nervous system//Biochemistry. 1969. V. 8. P. 4318-4326.
79. Cheon E. W., Saito T. Choline acetyltransferase and acetylcholinesterase in the normal, developing and regenerating newt retinas // Develop. Brain Res. 1999. V. 116. P. 97-109.
80. ChuP.G., Grunwald G.B. «Identification of an adhesion-associated protein of the retinal pigment epithelium».// Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 1990. May. V. 31. p.847 855.
81. Chuong C., Crossin M., Edelman G. «Sequental expression and differential function of multiple adhesion molecules during the formation of cerebellar cortical layers».//! Cell Biol. 1987. V. 104. p. 331 342.
82. Cicero T., Cowan W.M., Moore B. W. Brain Res. 1970. V. 24. P. 1
83. Cicero T., ProvineRR. Brain Res. 1972. V. 44. P. 294.
84. Cole G.J., GlaserL. Cell-substratum adhesion in embryonic chick central nervous system is mediated by a 170,000-mol-wt neural-specific polypeptide // J Cell Biol. 1984. Nov. v. 99(5). P. 1605-1612.
85. Cook B., Lewis G.P. Fisher S.K., Adler R. Apoptotic photoreceptor degeneration in experimental retinal detachment //Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1995. V. 36. N 6. P. 990-996.
86. Cunningham B.A. Cell adhesion molecules as morphoregulators. // Current Opinion in Cell Biology. 1995. v. 7 p. 628-633.
87. Curatola G., Mazzanti L., Ferretti G., Donato R. S-100 protein-induced changes in the physical state of synaptosomal particulate fractions as monitored by spin labels // Arch. Biochem. Biophys. 1985. V. 240. P. 435-445.
88. Dalil-Thiney N., Bastianelli E., Pochet R, Reperant J., Versaux-Botteri C. Recoverin and hippocalcin distribution in the lamprey (Lampreta fluviatilis) retina // Neurosci. Lett. 1998. V. 247. P. 163-166.
89. Daniloff J., Chuong C., Levi G., Edelman G. Differential distribution of cell adhesion molecules during histogenesis of the chick nervous system //J. Neurosci. 1986. V. 6. p. 739 758.
90. Dannies P.S., Levine L. Demonstration of subunits in beef brain acidic protein (S-100)//Biochem. Biophys. Res. Commun. 1969. V.37. p. 587-592.
91. Dannies P.S., Levine L. Structural properties of bovine brain S-100 protein //. 1971a J. Biol. Chem. V. 246, p. 6276-6283
92. DanniesP.S., Levine L. Ibid. 1971b. V. 246. P. 6284
93. De Raad S., Comte M., Nef P., Lenz S.E., Gundelfinger E.D., Cox J.A. Distribution pattern of three neural calcium-binding proteins (NSC-1, VILIP and recoverin) in chicken, bovine and rat retina // Histochem. J. 1995. V. 27. P. 524535.
94. Dizhoor A., Ray S., Kumar S., et al. Recoverin: a calcium sensetive activator ofretinal rod guanilate cyclase // Science 1991. V. 251. P. 915 918.
95. Donato R. Further studies on the specific interaction of S-100 protein with synaptosomal particulates//!. Neurochem. 1976. V. 27. P. 439-447.
96. Donato R. S-100 proteins // Cell Calcium, 1986. vol. 7, pp. 123-145.
97. Donato R. Perspectives in S-100 protein biology // Cell Calcium, 1991. vol. 12, pp. 713-726,
98. Donato R. S-100 proteins: recent progress and unanswered questions //Fourth European Symposium on Calcium Binding Proteins in Normal and Transformed Cells, University of Perugia, Italy, 1996. May 2-5, pp. 91-92.
99. Donato R. Functional role of S-100 proteins, calcium-binding proteins of the EF-hand type // Biochimica et Biophysica Acta (BB A) / Molecular Cell Research. 1999. V. 1450. N3. P. 191-231.
100. Donato R, Michetti F. S-100 protein in cerebral cortex synaptosomes // Experientia. 1974. V. 30. P. 511-512.
101. Donato R, Michetti F. Specific binding sites for S-100 protein in isolated brain nuclei // J. Neurochem. 1981. V. 36. P. 1698-1705.
102. Donato R., Michetti F., Miani M. Soluble and membrane-bound S-100 protein in cerebral cortex synaptosomes. Properties of the S-100 receptor // Brain Res. 1975. V. 98. P. 561-573.
103. Edelman G.M. Modulation of cell adhesion during induction, histogenesis, and perinatal development of the nervous system // Ann. Rev. Neurosci. 1984. V. 7. P. 339-377.
104. Edelman G., Thiery J.-P. (Eds) The cell in contact IIN.Y. Chichester. Brisbane. Toronto. Singapore. John Wiley&Sons. 1985. 508P.
105. Egensperger R, Maslim J., Bisti S., Hollander H., Stone J. Fate of DNA from retinal cells dying during development: uptake by microglia and macroglia (Muller cells) //Dev Brain Res 1996 Nov 22. 97(1), pp. 1-8.
106. Eguchi G. Lens transdifferentiation in the vertebrate retinal pigmented epithelial cells //Prog. Ret Res. 1993. V. 12. P. 205-230.
107. Eguchi G., Abe S.I., Watanabe K. Differentiation of lens-like structures from newt iris epithelial cells in vitro // Proc. Natl. Acad.Sci. USA. 1974. V. 71. P. 5052-5056.
108. Ezzedine Z.d, YangX., DeChiara T., Yancopoulos G., Cepko C.Z. Postmitotic cells fated to become rod photoreceptors can be respecified by CNTF treatment of the retina // Development. 1997. V. 124. P. 1055-1067.
109. Fano G., Biocca S., Fulle S., MariggioM.A., Belia S., Calissano P. The S-100: A protein family in search of a function I I Progress in Neurobiology, vol.46, pp. 71-82, 1995.
110. Fano G., Marriggio M.A., Angelella P., Nicoletti /., Antonica A., Fulle S., Calissano P. The S-100 protein causes an increase of intracellular calcium and death of PC12 cells //Neuroscience. 1993. V. 53. P. 919-925.
111. FarguharM.G., Palade G.E. II J. Cell Biol. 1963. V. 17. P. 375-412.
112. FazeliM.S., ErringtonM.L., Dolphin A.C., Bliss T. V.P. Extracellular proteases and S 100 protein in long term potentiation in the dentate gyrus of the anaesthetized rat // Adv. Expt. Med. Biol. 1990. V. 268. P. 369-375.
113. Feigenspan A., Bormann J., Wassle H. Organotypic slice culture of the mammalian retina // Visual Neurosci. 1993. V.10. P.203-217.
114. Fillipek A. Bialka wiazace wapn wystepujace w ukladzie nerwowym // Postepy Biochemii, 1993. vol. 39, No. 2, pp. 126-133.
115. Finne J., Finne H., Bazin Deagostini A., Goridis C. Occurence of a - 2 - 8' -linked polysialosil units in a neural cell adhesion molecule //Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1983. V. 112. p. 482 - 487.
116. FinlayD., Wilkinson G., KyptaR., de CurtisI., ReichardtL. Retinal cultures/7 Methods Cell Biol. 1996. V.51. p. 265-283.
117. Fliesler S.J, Cole G.J, Adler A.J. Neural cell adhesion molecule (NCAM) in adult vertebrate retinas: tissue localization and evidence against its role in retina -pigment epithelium adhesion // Exp. Eye Res. 1990. May. V. 50. p. 475 482.
118. Fong S.L., Irimura T., Landers R.A., Bridges C.D.B. (1985) in The1.terphotoreceptor Matrix in Health and Disease, (Bridges, C.D, ed.), Alan R. Liss, INC, New York, pp. 111-128.
119. Foreman D.M., Pancholi S., Jarvis-Evans J., McLeod D., Boulton U.K. A simple organ culture model for assessing the effects of growth factors on corneal re-epithelialization //Exp. Eye Res. 1996. V.62(5). P. 555-564.
120. Frade J.M., Bovolenta O., Rodrigueztebar A Neurotrophins and other growth factors in the generation of retinal neurons // Microsc. Res. Technique. 1999. V. 5. P. 214-218.
121. Friedlander D., Grumet M., Edelman G. Nerve growth factor enhances expression of neuroglia cell molecule in PC 12 cells //J. Cell Biol. 1986. V. 102. p. 413 -420.
122. Fit D., O'Neill R. A. Monosaccaride composition analysis of oligosaccharides and glycoproteins by high-performance liquid chromatography // Anal. Biochem. 1995. V.227. P. 377-384.
123. GarrodD.R. II Ibid. 1993. V. 5. № 1. P. 30-40.
124. Gaur V.P., Liu Y., Turner J.E. RPE conditioned medium stimulates photoreceptor cell survival, neurite outgrowth and differentiation in vitro // Exp. Eye Res. 1992. May. V. 54(5). P. 645-659.
125. Germer A., Kuhnel K., Grosche J., et al. Development of the neonatal rabbit retina in organ culture. 1. Comparison with histogenesis in vivo, and the effect of a gliotoxin (alpha-aminoadipic acid) // Anat. Embryol. (Berl). 1997b. V. 196. N1. P. 67-79.
126. Gorodovikova E.N., Gimelbrant A.A., Senin I.I., Philippov P.P. Recoverin mediates the calcium effect upon rhodopsin phosphorylation and cGMP hydrolysis in bovine retina rod cells //FEBS. Lett. 1994a. V. 349. P. 187-190.
127. Gorodovikova E.N., Senin I.I., Philippov P.P. Calcium-sensitive control of rhodopsin phosphorylation in the reconstituted systen consisting of photoreceptor membranes, rhodopsin kinase and recoverin // FEBS Lett. 1994b. V. 353. P.171
128. Grumet M., Edelman G. Neuron glia cell adhesion molecule interacts with neurons and astroglia via different binding mechanisms //J. Cell Biol. 1988. V. 106. p. 487 - 507.
129. Grumet M., Hoffman S., Edelman G. Two antigenically related neuronal cell adhesion molecules of different specifities mediate neuron neuron and neuron -glia adhesion //Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1984. V. 81. p. 267 - 271.
130. Grumet M., Hoffman S., Crossin K., Edelman G. Cytotactin, an extracellular matrix protein of neural and non neural tissues that mediates glia - neuron interactions//Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1985. V. 82. p. 8075 - 8079.
131. Grumet M., Mauro V., Burgoon M.P., Edelman G.M., Cunningham B.A. Structer of a new nervous system glycoprotein, Nr CAM, and its relationships of neural cell adhesion molecules //J. Cell Biol. 1991. Jun. V. 113. p. 1399- 1412.
132. Gumbiner B.M. //J. Cell Biol. 1993. V. 121. P. 1631-1633.
133. Grun G. The development of the vertebrate retina: a comparative survey // Advances in anatomy embriology and cell biology. 1982. V.78. Springer-Verlag. Berlin Heidelberg. New York. 85p.
134. Gundersen D, Powell SK., Rodriguez-Boulan E. Apical polarization of N-CAM in retinal pigment epithelium is dependent on contract with the neural retina //J. Cell Biol. 1993. V. 121. P. 335-343.
135. Hadlock T., Singh S., Vacanti J.P., McLaughlin B.J. Ocular cell monolayers cultured on biodegradable substrates // Tissue Eng. 1999. Jun. V. 5(3). P. 187-196.
136. HaglidK.G., Hamberger A., Hansson H.A., Hyden H., Persson L., Ronnbach L. S-100 protein in synapses of the central nervous system// Nature. 1974. V. 251. P. 532-534.
137. Haglid K., Hamberger A., Hansson H.A., Hyden H., Persson L., Ronnbach L. Cellular and subcellular distribution of the S-100 protein in rabbit and rat central nervous system // J. Neurosci. Res. 1976. V. 2. P. 175-192.
138. Halfter W., Deiss S. Axonal pathfinding in organ-cultured embryonic avian retinae // Dev Biol. 1986. Apr. v. 114(2). P. 296-310.
139. Hall M.O., Burgess B.L., Arakawa H., Fliesler S.J if Glycobiology, 1990. 1 (1), 51-61.
140. Hall DE., Neugebauer KM., Reichardt LF. Embryonic neutral retinal cell response to extracellular matrix proteins: developmental changes and effects of the cell substratum attachment antibody (CSAT) // The J. Of Cell Biol. 1987. V. 1104. P. 623-634.
141. Hamel C.P., Tsilou E., Harris E et al. A developmentally regulated microsomal protein specific for the pigment epithelium of the vertabrate retina // Ibid. 1993a. v. 34. P. 414-425.
142. Harris W. A. Cellular diversification in the vertebrate retina // Current Opinion in Genetics & Development. 1997. V. 7. P. 651-658.
143. Hausman R, Moscona A. Purification and characterization of the retina specific cell-aggregating factor // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1975. V.72. P. 916919.
144. Hermann S., Saarikettu J., Onions J., Hughes K., Gmndstrom T. Calcium regulation of basic helix-loop-helix transcription factors // Cell Calcium. 1998. V. 23(2-3). P. 135-142.
145. Hoff A., Hammerle H, Schlosshauer B. Organotypic culture system of chicken retina // Brain Res. Protocols. 1999. V. 4. N 3. P. 237-248.
146. Hoffman S., Friedlander D., ChuongC. et al. Differential contributions of Ng CAM and N - CAM to cell adhesion in different neural regions //J. Cell Biol. 1986. V. 103. p. 145 - 158.
147. Honjo M., Tanihara H., Suzuki S., Tanaka T., Honda Y., Takeichi M. Differential expression of cadherin adhesion receptors in neural retina of the postnatal mouse//Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2000. V. 41. P. 546-551.
148. Hooper J.E., KelleyRB. II J. Biol/Chem, 1984. 259 (1), 141-147.
149. Hundspeth A.J., Yee A.G. The intercellular junctional complexes of retinal pigment epithelia // Invest. Ophtalmol. 1973. V.12. p. 354-365.
150. HunterD.D., MurphyM.D., Olsson C.V., Brunken W.J. S-laminin expression in adult and developing retinae: a potential cue for photoreceptor morphogenesis // Neuron. 1992. V. 8. P. 399-413.
151. Hutchins J.B. Acetylcholine as a neurotransmitter in the vertebrate retina // Exp. Eye Res. 1987. V. 45. P. 1- 38.
152. Hyden H., Lange P.W. Brain protein: correlation with behavior // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1970. V. 67. P. 1959-1966.
153. Hyden H., McEwen B. A glial protein specific for the nervous system // Proc. Natl.Acad. Sci. USA. 1966. V. 55. P. 354-358.
154. Hynes R. Integrins: versatility, modulation, and signaling in cell adhesion //Cell. 1992. V. 269. p. 11-25.
155. Iacopcmo A., Christakos S., German D.,Somalia P.K., Altra C.A.// Mol. Brain Res. 1992. V. 13. P. 251-261.
156. Inatani M., Tanihara H. Proteoglycans in retina // Prog Retin Eye Res. 2002 Sep; V. 21(5). p. 429-447.
157. Isobe T., Ishioka N., Okuyama T. Structural relation of two S-100 proteins in bovine brain; subunit composition of S-lOOa protein // Eur. J. Biochem. 1981. V. 115. P. 469-474.
158. Isobe T., Ishioka N., Masuda T., Takahashi Y., Ganno S., Okuyama T. A rapid separation of S-100 subunits by high performance liiquid chromatography: the subunit composition of S-100 proteins //Biochem. Int. 1983. V. 6. P. 419-426.
159. Isobe T., Nakajima T., Okuyama T. Reinvestigation of extremely acidic proteins in bovine brain // Biochem. Biophys. Acta. 1977. vol. 494, pp. 222-232
160. Isobe T., Okuyama T The amino-acid sequence of S-100 protein (PAP i-b protein) and its relationship to calcium-binding proteins // Eur. J. Biochem. 1978. V. 89, p. 379-388
161. Isobe T., Okuyama T. The amino-acid sequence of a-subunit in bovine brain S-100 protein // Eur. J. Biochem. 1981. V. 116, p. 79-86
162. Isobe T., Takahashi K., Okuyama T. S-lOOaa is present in neurons of the central and peripheral nervous system 11 J. Neurochem. 1984a. v. 43. P. 14941496.
163. Jaworowski A., Fang Z, Khong T.F., Augusteyn R.C. Protein synthesis and secretion by cultured pigment epithelia//Biochim. Biophys. Acta. 1995. Aug 17. V. 1245(1). P. 121-129.
164. Jensen A.M., Walker C., Westerfield M. Mosaic eyes: a zebrafish gene required in pigmented epithelium for apical localization of retinal cell division andlamination. // Development. 2001. V. 128. p. 95-105.
165. Kaneko Y, Matsumoto G., Hanyu Y. The occurrence of apoptosis during retinal regeneration in adult newts //Develop. Brain Res. 1999. V.117. P. 225228.
166. Kaneko Y., Saito T. Appearance and maturation of voltage-dependent conductances in solitary spiking cells during retinal regeneration in the adult newt //J. Comp. Physiol. 1992. P. 411-425.
167. Kawamura S., Hisatomi O., Kayada S., Tokunaga F., Kuo C.H. Recoverin has S-modulin activity in frog rods //J. Biol. Chem. 1993. V. 268. P. 14579-14582.
168. Keefe J.R An analysis of urodelian retinal regeneration// J. Exp. Zool. 1973. V. 184. P. 185-257.
169. Keller C.H., Olwin B.B., LaPorte D.C., Storm D.R II Biochemistry, 1982. 21 (1), 156-162.
170. Kelley M.W., Turner J.K, Reh T.A. Retinoic acid promotes differentiation of photoreceptor s in vitro // Development. 1994. V. 120. P. 2091-2102.
171. Kelley M.W., Turner J.K, Reh T.A. Regulation of proliferation and photoreceptor differentiation in fetal human retinal cell cultures // Invest. Ophthalmol. V is. Sci. 1995. Jun. V. 36(7). P. 1280-1289.
172. Kelley M.W., Williams R.C., Turner J.K. et al. Retinoic acid promotes rod photoreceptor differentiation in rat retina in vivo // Neuroreport. 1999. V. 10. №11. P. 2389-2394.
173. Kessler D., Levine L., Fasman G. //Biochemistry. 1968. V. 7. P. p. 758.
174. Kligman D. Hilt D.C. The S 100 protein family. // TIBS. 1988. V.13. p. 437443.
175. Kligman D., Marshak D.R Purification and characterization of a neurite extension factor from bovine brain // Proc. Natn. Acad. Sci. USA. 1985. V. 82. P. 7136-7139.
176. Korte G.E. Perlman J.I. Pollack A. Regeneration of mammalian retinal pigment epithelium // Internal Rev. Cytol. 1994. V. 152. P. 223-263.
177. KochKW., StecherP., KellnerR. //Eur. J. Biochem, 1994. 222 (2), 589-595.
178. KorfH.W., White B.H., SchaadN.C., Klein D.C. Recoverin in pineal organs and retinae of various vertebrate species including man // Brain Research. 1992. V.595. P.57- 66.
179. Koro L.A., Marchase R.B. H Cell, 1982. 31 (3 Pt 2), 739-748.
180. KosakaM., Kodama R., Eguchi G. In vitro culture system for iris-pigmented epithelial cells for molecular analysis of transdifferentiation // Exp. Cell Res. 1998. V. 245.N.2. P. 245-251.
181. Kosaka J., Watcmabe K., Eguchi G. Transdifferentiation of chicken retinal pigmented epithelial cells in serum-free culture // Exp. Eye Res. 1992. V. 55. P. 261-267.
182. Kreis T., Vale R Eds. In: Guidebook to the Extracellular Matrix and Adhesion Proteins//Oxford University Press. 1993. 176p.
183. Kugler P. Improvement of the method of Karnovsky and Roots for the histochemicaln demonstration of acetylcholinesterase // Histochemistry. 1987. V.86. P. 531-532.
184. Kuroda Y. Preparation of an aggregation-promoting supernatant from embryonic chick liver cells // Exp. Cell Res. 1968. V.49. P.626-637
185. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the headof bacteriophage T4// Nature. 1970. V. 227. P. 680-685.
186. Lambrecht H.G., Koch KW. A 26 kd calcium binding protein from bovine rod outer segments as modulator of photoreceptor guanilate cyclase // EMBO J. 1991. V. 10. P. 793 -798.
187. Layer P. G., Willbold E. Histogenesis of the avian retina in reaggregation culture: from dissociated cells to laminar neuronal networks // Int Rev Cytol. 1993. V. 146. P. 1-47.
188. Lee MM., Fink BD., Grumvald GB. Evidence that tyrosine phosphorylation regulates N-cadherin turnover during retinal development // Dev. Genet. 1997. V. 20. P. 224-234.
189. Lewis G.P., Erickson P.A., Guerin C.J. et al. Changes in the expression of specific Muller cell proteins during long term retinal detachment // Exp. Eye Res. 1989. V. 49(1). P. 93-111
190. Lewis G.P., Linberg K.A., Geller S.F., et al. Effects of the neurotrophin brain-derived neurotrophic factor in an experimental model of retinal detachment // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1999. V. 40. № 7. P. 1530-1544.
191. Li H., Leung TC., Hoffman S., Balsamo J., Lilien J. Coordinate regulation of cadherin and integrin function by the chondroitin sulfate proteoglycan neurocan // J. Cell Biol. 2000. V. 149. P. 1275-1288.
192. Lin W., SzaroB.G. Neurofilaments help to maintain normal morphologies and support elongation of neurites in Xenopus laevis cultured embryonic spinal cord neurons//J. Neurosci. 1995. V. 15. P. 8331 8344
193. Linser P., Moscona A. Hormonal induction of glutamine synthase in cultures of embryonic retina cells: requirement for neuroglia contact interactions // Develop. Biol. 1983. V. 96. P. 529-531.
194. Liu L., ChengS.H., JiangL.Z., Hansmann G., Layer P.G. The pigmented epithelium sustains cell growth and tissue differentiation of chicken retinal explants in vitro // Exp Eye Res. 1988. May. V. 46(5). P. 801-812.
195. Loeffel S.C., Gillespie G.Y., Mirmiran S.A., Miller E.W., Golden P., Asian F.B., Siegal G.P. Cellular immunolocalization of S-100 protein within fixed tissue sections by monoclonal antibodies // Arch. Lab. Med. Int. 1985. V. 109. P. 117122.
196. Lopashov G. V. Transdifferentiation of pigmented epithelium induced by the influence of lens epithelium in frogs // Differentiation. 1983. V. 24. P. 27-32.
197. Lopashov G. V., Sologub A.A. Artificial metaplasia of pigmented epithelium into retina in tadpoles and adult frogs // J. Embryol. Exp. Morphol. 1972. V. 28. P. 521-547.
198. LuL., Garcia C.A., Mikos A.G. Retinal pigment epithelium cell culture on thin biodegradable poly(DL-lactic-co-glycolic acid) films // J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 1998. V. 9(11). P. 1187-1205.
199. Ludwin S.K., KosekJ.C., EngL.F. The topographical distribution of S-100 and GFA proteins in the adult rat brain: an immunogistochemical study using horseradish peroxidase labelled antibodies // J. Comp. Neurol. 1976. V. 165. P. 197-208.
200. Mack A.F., Fernald R.D. Thin slices of teleost retina continue to grow in culture //J. Neurosci. Methods. 1991. V.36. P. 195-202.
201. Magnani J., Thomas W., Steinberg M. Two distinct adhesion mechanisms in embryonic neural retina cells. 1. A kinetic analysis // Dev. Biol. 1981. V.81. P.96-105.
202. Mani R.S., Kay CM. Isolation and spectral studies on the calcium bindingproperties of the bovine braine S-lOOa protein // Biochem. 1983. V. 22. P. 39023907.
203. Mani RS., Shelling J.G., Sykes B., Kay CM. Spectral studies on the calcium binding properties of bovine brain SlOOb protein // Biochem. 1983. V. 22. P. 1734-1740.
204. Marchase R.B., Koro L.A., Kelly CM., McClay D.R II Cell, 1982. 28 (4), 813820.
205. Marshak D.R., Pena L.A. Potential role of S-100 in Alzheimer's disease: An hypothesis involving mitotic protein kinases // Prog. Clin. Biol. Res. 1992. V. 379. P. 289-307.
206. Masure H.R., Head J.F., Tice H.M. Studies on the a-subunit of bovine brain S100 protein // Biochem. J. 1984. V. 218. P. 691-696.
207. Matsuo T., Tsutsui Y., Matsuo N Transdifferentiation of chick embryonic retinal pigment epithelial cells to lentoid structure in suspension culture // Acta Med. Okayama. 1998. Jun. V. 52. P. 125-130.
208. MattsonM.P., RychlikB., Chu Ck, Christakos S. //Neuron. 1991. V. 6. P. 4151.
209. Matus A., Mughal S. Immunogistochemical localization of S-100 protein in brain //Nature. 1975. V. 258. P. 746-748.
210. McFarlane S., Zuber M.E., Holt C.E. A role for the fibroblast growth factor receptor in cell fate decisions in the developing vertabrate retina // Development. 1998. V. 125. P. 3967-3975.
211. McGinnis J.F., Stepanik P.L., Jariangprasert S., Lerious V. Functional significance of recoverin localization in multiple retina cell types // J. Neurosci. Res. 1997.V.50. P. 487-495.
212. Merril C.R. II Meth Enzymol. 1990. V. 182. p. 477-486.
213. MerrilC.R., GoldmanD., VanKeurenM.L. Gel protein stains: Silver stain// Methods Enzymol 1984. V.104. p. 441-447.
214. Michetti F, Miani N., De Renzis G., Caniglia A., Correr S. Nuclear localization of S-100 protein // J. Neurochem. 1974. V. 22. P. 239-244.
215. Milam A., Dacey D., Dizhoor A. Recoverin immunoreactivity in mammalian cone bipolar cells//Vis. Neurosci. 1993. V. 10. P. 1-12.
216. Miskevich F., Zhu Y., Ranscht В., Sanes J.R. Expression of multiple cadherins and catenins in the chick optic tectum // Mol. Cell Neurosci. 1998. Nov. V. 12. p. 240 255.
217. Mitashov V.I. Arsanto J.P., Markitantova Y.V., Thouveny Y. Remodelling processes during neural retina regeneration in adult urodeles: An immunohistochemical survey // Internat. J. Develop. Biol. 1995. V. 39. P. 9931003.
218. Moore, B.E. A soluble protein characteristic of the nervous system // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1965. V. 19(6), p. 739-744.
219. Moore B.W. Chemistry and biology of the S-100 proteins // Scand. J. Immunol. (Suppl.). 1982. V. 9. P. 53-74.
220. Moore B. W., McGregor D. Chromatographic and electrophoretic fractionation of soluble proteins of brain and liver// J. Biol. Chem. 1965. V. 240, p. 1647-1653
221. Moroi S.E., Hao Y, Inoue-Matsuhisa E., Pozdnyakov N., Sitaramayya A. Cell signaling in bovine ciliary epithelial organ culture // J. Ocul Pharmacol. Ther. 2000. V.16(l). P. 65-74.
222. Morrissey J.H. Silver stain for proteins in polyacrylamide gels: A modified procedure with enhanced uniform sensitivity// Anal. Biochem. 1981. V. 117. P. 307-310.
223. Moscona A.A. Rotation mediated histogenetic aggregation of dissociated cells//Exp. Cell Res. 1961. V. 22. P. 455-465.
224. Moscona A. Studies of cell aggregation: demonstration of material with selective cell-binding activity//Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1963. V.49. P.743-748.
225. Muller W., ZahnR Purification and characterization of a species-specific aggragation factor in sponges // Exp. Cell Res. 1973. V.80. C.95-104.
226. Muller W., Muller I., ZahnR. Two different aggregation principles in reaggragation process of dissociated sponge cell (Geodia cydonium) // Experrientia. 1974. V.30. C.899-901.
227. Neill J.M., Barnstable C.J. Expression of the cell surface antigens RET-PE2 and N-CAM by rat retinal pigment epithelial cells during development and in tissue culture // Ibid. 1990. V. 51. P. 573-583.
228. Neill J.M., Thornquist S.C., Raymond M.C. et al. RET-PE10: a 61 kD polypeptide epitope expressed late during vertabrate RPE maturation // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1993. V. 34. P. 453-462.
229. Nicola N.A. ed. In: Guidebook to cytokines and their receptors // Oxford University press. 1994. A Sambrook and Tooze Publication. 261p.
230. Nishizono H., Murata Y., Tanaka M. et al. Evidence that Mueller cells can phagocytize egg-lectin coated silicone particles // Tissue and Cell. 1993. V. 25(2). P. 305-310
231. Ogilvie JM., Speck JD., Lett JM., Fleming TT. A reliable method for organ culture of neonatal mouse retina with long-term survival // J. Of Neuroscience Methods. 1999. V. 87. №1. P. 57-65.
232. Okada T. S. Transdifferentiation. Oxford. Clarendon Press, 1991. 238 p.
233. Ophir Y., Moscona A., Ben-Shaul Y. Cell disorganization and malformation in neural retina caused by antibodies to R-cognin: ultrastructural study // Cell Differ. 1984. V. 15. P. 53-61.
234. Osborn M., Weber K. Intermediate filaments: cell type specific markers in differentiation and pathology // Cell. 1982. V. 31. P. 303-306.
235. Pang S.F., Yu H.S., TangP.L. Regulation of melatonin in the retinae of Guinea Pigs: effect of environmental lighting I J J. Exptl. Zool. 1982. V. 222. №1. P. 1115.
236. Peracchia C. Control of gap junction permiability and calmodulin-like proteins // In: sperelakis, N.; Cole, W.C., eds. Cell interactions and gap junctions. Cleveland: CRC Press. 1990. P. 1250142.
237. PaulD. II Curr. Opin. Cell Biol. 1995. V. 7. № 5. P. 665-673.
238. Perez R.G., Halfter W. Tenascin in the developing chick visual system: distribution and potential role as a modulator of retinal axon growth // Dev. Biol. 1993. Mar. V. 156. p. 278 292.
239. Persechini A., Moncrief N.D., Kretsinger R.H. The EF-hand family of calcium-modulated proteins. // TINS. 1989. V. 12. N. 11. P.462-467.
240. Picaud S., Hicks D., Forster V., Sahel J., Dreyfus H. Adult human retinal neurons in culture: Physiology of horizontal cells // Invest Ophthalmol Vis Sci. 1998. Dec. v. 39(13). P. 2637-2648.
241. Pifl C., Plank B., Wyskovsky W, Bertel o., Hellmcmn G, Suko J. II Biochim. Biophys. Acta, 1984. 773 (2), 197-206.
242. Pigott R, Power C. ed. In: The adhesion molecule facts book // Academic press. 1993. Harcourt Brace & Company, Publishers. 190p.
243. Pinzon-Duarte G., Kohler K., Arango-Gonzales B., Guenther E. Cell differentiation, synaptogenesis, and influence of the retinal pigment epithelium in a rat neonatal organotypic retina culture // Visual Res. 2000. V. 40. N 25. P. 34553465.
244. Rattner A., Smallwood P.M., Williams J., et al. A photoreceptor-specific cadherin is essential for the structural integrity of the outer segment and photoreceptor survival //Neuron. 2001. V. 32. N 5. P. 775-786.
245. Raymond SM, Jackson I.J. The retinal pigmented epithelium is required for development and maintenance of the mouse neural retina. // Curr Biol. 1995. Nov 1. V. 5(11). P. 1286-95.
246. Redburn D.A., Rowe-Rendleman Ch. Developmental neurotransmitters: signals for shaping neuronal circuitry // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1996. 37. N 8. 1479-1482.
247. Reh T.A. Cell-specific regulation of neuronal production in the larval frog retina//J. Neurosci. 1987. V. 7. P. 3317-3324.
248. Reh T.A., Nagy T., GrettonH. Retinal pigmented epithelial cells induced to transdifferentiate to neurons by laminin // Nature. 1987. V. 330. P. 68-71.
249. Reh T.A., Tully T. Regulation of tyrosine hydroxylase-containing amacrine cell number in larval frog retina // Devel. Biol. 1986. V. 114. P. 463-489.
250. Reichardt L.F. Extracellular Matrix Molecules and their Receptors // Guidebook to the Extracellular Matrix and Adhesion Proteins. Eds. Kreis T., Vale R. Oxford University Press. 1993. P. 3-11.
251. Rickman D.W. Parvalbumin immunoreactivity is enhanced by brain-derived neurotrophic factor in organotypic cultures of rat retina. // J/ Neurobiol. 1999. V.41(3). P. 376-384.
252. Rizzolo LJ., Zhou S., Li ZQ. The neural retina maintains integrins in the apical membrane of the RPE early in development // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1994. V. 35. P. 2567-2576.
253. Robitzki A. et al. Antisense 5'-DNA butyrylcholiesterase increases retinal apoptosis // J. Neurochem. 1998. V.71. N 4. P. 1413-1420.
254. Rutishauser U. and Jessel T.M. Cell adhesion molecules in vertebrate neural development //PhysiologicalReviews. 1988. V.68. N.3. p. 819-857.
255. Saimi 7, LingKY. //J. Membr. Biol, 1995.144 (3), 257-265.
256. Salla S., Redbrake C, Becker J., Reim M. Remarks on the vitality of the human cornea after organ culture. // Cornea. 1995. V.14(5). P. 502-508.
257. SameshimaM., UeharaF., OhbaN. Specialization of the interphotoreceptor matrices around cone and rod photoreceptor cells in the monkey retina, as revealed by lectin cytochemistry// Exp Eye Res 1987. Dec. v. 45(6). P. 845-63.
258. Sassoe-Pognetto M., Feigenspan A., Bormann J., Wassle H. Synaptic organization of an organotypic slice culture of the mammalian retina // Vis. Neurosci. 1996. V.13. N4. P. 759-771.
259. Schoenwaelder S.M., Burridge K. Bidirectional signalling between the cytoskeleton and integrins // Current Opinion in Cell Biology. 1999. V. II P. 274-286.
260. Schreiber W.E., Sasagawa T., Titani K., Wade R.D., Malencik D., Fischer E.H. //Biochemistry, 1981. 20 (18), 5239-5245.
261. SchenkP.W., Snaar-JagalskaB.E. Signal perception and transduction: the role of protein kinases//BBA. 1999. V. 1449. P. 1-24.
262. Schafer B.W., Heizmann C.W. The S100 family of EF-hand calcium-binding proteins: function and pathology// TIBS, 1996. vol.21-April, pp. 134-140.
263. Schlosshauer B., BauchH., Stier H. Photoreceptor differentiation analyzed by the novel monoclonal antibodiy 1G1 // Europ. J. Cell. Biol. 1997. V. 73. P. 150157.
264. Seigel G.M. The golden age of retinal cell culture // Mol. Vis. 1999. V. 19. N5. P. 5-14.
265. Senanayake P.S., Calabro A., Nishiyama K., Hu J.G., Bok D. Glycosaminoglycan synthesis and secretion by the retinal pigment epithelium: polarized delivery of hyaluronan from the apical surface// Journal of Cell Science. 2000. V. 114. P. 199-205.
266. Shashoua V.E., Hesse G. W., Moore B. W. Proteins of the Brain Extracellular Fluid: Evidence for Release of S-100 Protein// J. ofNeurochemistry. 1984. V. 42. №6. P. 1536-1541.
267. Sheedlo H.J., Li L., Turner J.E. Effects of RPE-cell factors secreted from permselective fibers on retinal cells in vitro // Brain Research. 1992. V. 587. P. 327-337.
268. Sheedlo HJ., Nelson TH., Lin N., Rogers TA., Rouel SR., Turner JE. RPE secreted proteins and antibody influense photoreceptor cell survival and maturation //Dev. Brain Res. 1998. V. 107. №1. P. 57-69.
269. Shen X., Perreault H. Characterization of carbohydrates using a combination of derivatization, high-performance liquid chromatography and mass spectrometry //J. Chromatog. 1998. V. 811. P. 47-59.
270. Sherry DM., Proske PA. Localization of alpha integrin subunits in the neural retina of the tiger salamander // Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 2001. V. 239. P. 278-287.
271. Shubert D., La Corbiore M. Isolation of a cell-surface receptor for chick neural retina adherons // J. Cell Biol. 1985. V. 100. P. 56-64.
272. Shubert D., La Corbiore M., Esch F. A chick neural retinal adhesion and survival molecule is a retinol-binding protein // J. Cell Biol. 1986. V. 102. P. 2295-2301.
273. Shubert D., La Corbiore M., Klier F.G., Birdwell C.A. A role for adherons in neural retina cell adhesion // J. Cell Biol. 1983. V. 96. P. 930-939.
274. Silva A.J., Stevens C.F., Tonegawa S., Wang Y. II Science. 1992. V. 257. P. 201-206.
275. Smith etal. //Anal. Biochem, 1985. 150, 76-85.
276. Soderpalm A., Szel A., Cqffe A.R. van Veen T. Selective development of one cone photoreceptor tipe in retinal organ culture // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1994. V. 35. P. 3910-3921.
277. Sorg C. MRP8 and MRP14: expression by myelomonocytic cells and its relation to inflammatory processes // Fourth European Symposium on Calcium Binding Proteins in Normal and Transformed Cells, University of Perugia, Italy, 1996. May 2-5, p. 97
278. Steinberg R.H. Survival factors in retinal degeneration // Curr. Opin. Neurobiol. 1994. V.4. P. 515-524.
279. Storms S.D., Jensen J. J., Yaghmai D., Murray B.A. Multiple mechanisms of N2A and CHO cell adhesion to NCAM purified from chick embryonic brain and retina // Exp Cell Res. 1994. Sep. v. 214(1). P. 100-112.
280. Stramm L.E., Haskins M.E., McGovern M.M., Aguirre G.D. Tissue culture of cat retinal pigment epithelium // Exp Eye Res. 1983. Jan. v. 36(1). P. 91-101.
281. Strydom D., Tarr G.E., Pan Y.-C.E., Paxton R. // in Techniques in Protein Chemistry, in (Angeletti R.H., Ed.). 1992. Academic Press. New York.
282. Sviridov S.M., Korochkin LJ., Ivanov V.N., Maletskaya EL, and Bakhtina T.K. Immunohistochemical studies of S-100 protein during postnatal ontogenesis of the brain of two strains of rats // Journal of Neurochemistry, 1972. vol. 19, pp. 713-718.
283. Taira E. Functional analysis of a novel cell adhesion molecule, gicerin // Nippon Yakurigaki Zasshi 1999. V. 113. P. 133-143.
284. Tan P.B.O., Kim S.K. Signaling specificity the RTK/RAS/MAP kinase pathway in metazoans // TIG. 1999. V. 15. № 4. P. 145-149.
285. Tezel T.H., Del Priore L.V. Serum-free media for culturing and serial-passaging of adult human retinal pigment epithelium // Exp. Eye Res. 1998. V. 66. N6. P. 807-815.
286. Thiery J., Brackenbuty R, Rutishauser U., Edelman G. Adhesion among neural cells of chick embryo. II. Purification and characterization of a cell adhesion molecule ( CAM ) from neural retina // J. Biol. Chem. 1977. V. 252. p. 6841 6849.
287. Tomaszewski M.M., Lupton G.P. Unusual expression of S-100 protein in histiocytic neoplasms // J. Cutan. Pathol. 1998. V. 25(3). P. 129-135.
288. Tosini G., Menaker M. Circadian rhythms in cultured mammalian retina. // Science. 1996. Apr 19. V.272(5260). P. 419-421.
289. Tsukamoto Y, TairaE., YamateJ., Nakane Y., Kajimura K., TsudzukiM., Kiso Y., Kotani T., MikiN., Sakuma S. Gicerin, a cell adhesion molecule, participates in the histogenesis of retina // J. Neurobiol. 1997. Nov. 20. V. 33. p. 769 780.
290. Tsunematsu Y, Coulombre A.J. Demonstrationof transdifferentiation of neural retina from pigmented retina in culture //Develop. Growth Differ. 1981. V. 23. P. 297-311.
291. Turner M.L. Cell adhesion molecules: a unifying approach to topographic biology// Biol. Rev. 1992. V. 67. P. 359-377.
292. Van Eldik L.J., Hu J. The glia-derived protein, S-100(3: trophic or toxic? // Fourth European Symposium on Calcium Binding Proteins in Normal and Transformed Cells, 1996. University of Perugia, Italy, May 2-5, p. 93.
293. Van Eldik L.J., Zimmer D.B. Approaches to study the role of S-100 proteins in calcium-dependent cellular responses // J. Dairy Sci., 1988. vol. 71, pp. 20282034.
294. Waid D.K., McLoon S.C. Ganglion cells influence the fate of dividing retinal cells in culture // Development. 1998. Mar. v. 125(6). P. 1059-66.
295. Watanabe T., RqffM.C. Diffusible rod-promoting signals in the developing rat retina//Development. 1992. V. 114. P. 899-906.
296. Wiechman A.F., Hammarback J.A. Molecular cloning and nucleotide sequence of a cDNA encoding recoverin from human retina // Exp. Eye Res. 1993a. V.56. P. 463 470.
297. Wiechman A.F., Hammarback J.A. Expression of recoverin mRNA in the human retina: localization by in situ hybridization //Exp. Eye. Res. 1993b. V. 57. P. 763-769.
298. Wiggert B., Chader G.J. in The Interphotoreceptor Matrix in Health and Disease, (Bridges, C.D., ed.), 1985. AlanR. Liss, INC., New York, pp. 89-110.
299. WillboldE., Layer P.G. Muller glia cells and their possible roles during retina differentiation in vivo and in vitro II Histol. Histopathol. 1998. V.13. N 2. P. 531552.
300. Wilson C.M. Staining of proteins on gels: comparison of dyes and procedures// Methods in Enzymol. 1983. V. 91. P. 236-247.
301. Wolpert L. Principles of development // Current Biology Ltd. London. New York. Oxford University Press. Oxford N4 - Tokyo. 1998. P. 232-235.
302. Worn J.C., Puelles L., Nakagawa S., Takeichi M., Redies C. Cadherin expression in the retina and retinofugal pathways of the chicken embryo // J. Comp. Neurol. 1998. Jun. 22. V. 396 p. 20 38.
303. Fan E, Lutz D.A., Shepherd V.L., Boyle D., McLaughlin B.J. II Curr. Eye Res;1995. 14 (6), 465-471.
304. YasudaK. Transdifferentiation of -"lentoid" structures in cultures derived from pigmentedepithelium was inhibited by collagen//Develop. Biol. 1979. V. 68. P. 618-623.
305. Ying S. Y., Ishikawa S.L.M., Johnson L. V. Immunohistochemical localization of inhibin in the retinal interphotoreceptor matrix // Exp. Eye Res. 1995. V. 60. P. 585-590.
306. Zhao S., Lawrence J., Rizzolo, Barnstable C.J. Differentiation and transdifferentiation of the retinal pigment epithelium ft International Review of Cytology. 1997. V. 171. P. 225-266.
307. Zhu M., Provis J.M. Penfold P.L. Isolation, culture and characteristics of human foetal and adult retinal pigment epithelium // Aust. NZJ. Oprthalmol. 1998. May. V. 26. Suppl. 1. P. 50-52.
308. Zimmer D.B., Cornwall E.H., Landar A., Song W. The S-100 protein family: history, function, and expression // Brain Research Bulletin, 1995. vol. 37, No.4, pp. 417-429.
309. Zuckerman J.E., Herschman H.R., Levine L. Appearence of a brain specific183antigen (the S-100 protein) during human foetal development // J. Neurochem. 1970. V. 17. P. 247-251.
-
Краснов, Михаил Сергеевич
-
кандидата биологических наук
-
Москва, 2003
-
ВАК 03.00.25
- Исследование взаимодействия полностью транс-ретиналя с компонентами фоторецепторной мембраны и ретиналь-переносящими белками
- Идентификация нуклеотидных последовательностей генов, экспрессирующихся при регенерации хрусталика и сетчатки у хвостатых амфибий
- Активные в сверхмалых дозах биорегуляторы тканей глаза млекопитающих
- Исследование повреждения и процессов восстановления сетчатки глаза мышей после облучения ускоренными протонами и действия метилнитрозомочевины
- Цитологические основы трансдифференцировки в тканях глаза позвоночных животных
