Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Значение выявления псевдомонадных бактериофагов для диагностики внутрибольничной синегнойной инфекции

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Значение выявления псевдомонадных бактериофагов для диагностики внутрибольничной синегнойной инфекции"

Р Г Б ОД

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАБ00ХРАНЕ1ИЯ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН -С АЛМЛТ^Ш ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

РТ Б VIи

КМ. С.Д.АСФЕНДКЯРОВА

С > 4 ' . ■ •'

На правах рукописи УДК 616.93:679.841Л 1^022,369-070-078'

КАНТУРйЕВ Волат Меирбеговкч

ЗНАЧЕНИЕ ВЫЯВЛЕНИЯ ПСЕВЛОМОНАДНЫХ БАКТЕРИОФАГОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ВНУТРИБОЛЬНИЧНОЙ СИНЕГНОЙНОЙ • _ ИНФЕКЦИИ

03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата • медицинских наук

АЛМАТЫ, 1995

Работа выполнена на кафедре микробиологии и вирусологии Алматанского государственного медицинского института им.

С.Л. Асфендиярова

Научные руководители - доктор медицинских наук, профессор А.Л.Котова;

кандидат биологических наук,А.Б. Джусупова

Ведущая организация - Казахский Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии МЗ РК

Официальные оппоненты -'доктор медицинских наук, профес-, . -сор Мартиневский И.Л.

доктор медицинских наук, профессор Ж.У.Урдабаев

/рГ „

Защита состоится »¿УД ефия^ 1995 г. в_часов

на заседании специализированного Совета Л 09.01.01 при Алма-тинскоы государственном институте им. А.С.Асфендиярова по ад-рессу: Алматы, 480012, ул. Толе-би 88.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Алма-тинского государственного медицинского института им. А. С.Асфендиярова.

Автореферат разослан "_"_ 1995 г.

Ученый секретарь специализированного Совета, кандидат медицинских наук

Т.А.Султанова

ОВЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность тема. Во всем мире отмечается устойчивая тенденция к увеличению удельного веса заболеваний, вызванных синегнойной палочкой в обсей структуре внутригоспиталышх гнойно-септических инфекций (Беляков В. Д. . и соазт., 1990; Мороз А.Ф., 1088; Vasil M.L., 1986). Порамая в первую очередь лиц со сниженной резистентностью, P.aeruginosa осложняет течение основного заболевания, что требует применения дополнительных методов лечения, увеличивает срою: пребывания больных в стационаре, повшает показатель смертности.

Общепринятая микробиологическая диагностика синегнойной инфекции занимает в среднем 3-4 дня. Широкое распространение (до 75Z) атипичных форм возбудигелч загруднягг постановку диагноза, препятствует своевременному проведению лечебных и противоэпидемических мероприятий (Мороз А.Ф., 1988; Wahca А., 1964). Это приводит к необходимости поиска быстрых и информативных методов диагностики синегнойной инфекции.

В качестве параллельного диагностического теста может быть использован метод индикации микроба по обнаружению гомологичного бактериофага. Такие исследования применялись для диагностики кишечных инфекций в 50-60 гг. (Тимаков В.Д., Голь-дфарб Д.М,, 1962). Применение псевдомонадного бактериофага обычно ограничивается фаготипированием микробов и, в редких случаях, лечением больных с синегнойной инфекцией (Панченкоз Н.Р., 1981; Brokopp С. е.а., 1979), Данные относительно использования фага для диагностики внутриболъничной псевдомо-надной инфекции практически отсутствуют. Лишь, в работе Леви М.И. и др. (1985) было отмечено, что частота выявления синег-ножого фага почти в 20 раз превосходила аналогичные показатели для микроба-хозяина.

В условиях стационара микроб и бактериофаг испытывают постоянное воздействие различных антибиотических средств, в том числе дезинфектантов. Поиск исследователей во всем мире направлен на разработку дезинфектантов, обладающих максимальной широтой и быстротой действия, эффективность», безвредностью для людей и животных, экологической чистотой, доступностью, экономичностью и т.д. Одним из таких новейших препаратов является комплексный дезинфекгаят "Виркон", который разработан фирмой "Антек йнтеряешенал" (Великобритания) и производится фирмой "КРКА" (Словения). Широкие научные исследования

по отработке режимов дезинфекции и эффективности действия вир-кона при этом :ie проводились.

Актуальный для многих исследователей Бопрос о подборе режимов дезинфекции в большинстве случаев решается путем постановки многократных опытов. Однако, это требует больших материальных к временных затрат, нэ гарантируя при этом высокой эффективности (Поляков A.A., 1975; Бажов В.И., 1077). Для расчёта интенсивности отмирания микроорганизмов при дезинфекции, ' а также вероятностной характеристики надежности бактерицидного эффекта при этом Буртовым С.П. и др. (1984) были предложены математические методы. Это позволило значительно уточнить сроки гибели.микробов и рехимы дезинфекции.

Доступная литература не содержит сведений об эпидемиологии псевдомонадных фагов в госпитальных условиях, не изучена сравнительная эффективность традиционного бактериологического метода и метода фагодиагностики для обнаружения синегнойной инфекции в больничной среде. Отсутствуют научные данные о воздействии виркона на синегнойную палочку и её бактериофаг. Нет методики расчёта времени гибели микроорганизмов и надежности бактерицидного эффекта при использовании качественных показателей («стт> рост-нет роста) учота результатов дезинфекционного процесса.

Цель работы: изучить особенности распространения, биологии и выделяемо©» псевдсмонадных бактерий и фагов в госпитальных условиях для улучшения диагностики внутрибольничной синегнойной инфекции и оптимизации мер' борьбы с нею.

Задачи исследования:

- Изучить эпидемиологические особенности синегнойной инфекции в хирургических стационарах г.Алматы;

- Провести сравнительный качественный и количественный анализ эффективности диагностики внутрибольничной синегнойной инфекции с использованием бактериологического подтверждения и метода фагодиагностики;

- Охарактеризовать биологические свойства клинических штаммов синегнойной палочгси и псевдомонадных бактериофагов;

- Изучить устойчивость синегнойной палочки и бактериофагов к новому комплексному дезинфектаяту виркону;

- Разработать упрощенные методы расчёта эффективности ре-

а -

жиме в дезинфекции на основе использования количественных и качественных показателей бактерицидной (вирулицидкой) активности дезинфицирующих средств.

Научная новизна работы заключается а сравнительном изучении бактериологического к вирусологического (обнаружение гомологичного бактериофага) методов диагностики си.чегнойной инфекции в больничных условиях. Впервые в результате проведенных работ:

- описана циркуляция синегконных бвгсгерлэфагсэ о гтспч-тальннх условиях и выязлено, что сияегнойная палечка и бактериофаг занимают аналогичные эконгаи; при этой чгстота обнаружения псевдомонадных фагов превосходит частоту выявления бактерий. что шее? диагностическую ценность;

- установлено, что чем шире спектр аятябиотигоустойчи-вости синегнойной паточки, тем выше частота продукции ею умеренных фагов;

- доказано, что сияегнойкые бактериофаги более чувствительны к виркону, чем мнкроб-хозячн, а рекомендуемые фирмой-изготовителем режимы дезинфекции не являются абсолютно бактерицидными для синегнойной палочки;

- предложены простые формулы расчёта времени гибели микроорганизмов с использованием количественных и качественных методов регистрации чувствительности к дезинфектанту.

Практическая н теоретическая ценность работы. Полученные данные дают дополнительные представления сб эпидемклогии синегнойной инфекции в госпитальных условиях, расшифровывают некоторые вопросы популящонпого взаимодействия системы микроб-фаг.

Фагоднагностика синегнойной палочки является достаточно простым, надежным, результативным и информативным методом, что позволяет рекомендовать её использование в качестве параллельного диагностического теста. Разработаны и предложены для практических целей: комплексный нейтрализатор для нового де~ зинфектанта - виркона, метод определения чувствительности бактериофагов к дезинфектанту в парафиновых лунках, упрощённые формулы расчёта времени гибели микроорганизмов под влиянием дезинфектанта, что позволит более эффективно разрабатывать режимы дезинфекции.

Основные положения, выкоскмые на вгвдггу:

- фагодкагностлка является простым, доступным методом, не уступающим по информативности традиционному бактериологическому методу индикации синегнойной инфекции;

- синегнойная палочка является более устойчивой к действию виркона, чем гомологичный бактериофаг; для полного уничтожения синегнойной палочки требуются концентрации и экспозиции, превшасдие режимы, рекомендованные фирмой-изготовителем.

Апробация яяссэртацконзого материала. Основновные положения работы доложены и обсуждены на заседаниях кафедры микробиологии АГМИ (1992,. 1S93, 1994 гг.), на заседаниях проблемной комиссии (1991-1994 гг.), Учёных Советов АГМИ (1991-1994 гг.), Международной научной конференции "Актуальные проблемы вирусологии" (п. Гвардейский, май 1994 г.), Международном гдапозиуме "Фармацевтические препараты фирмы КРКА" (г.Алматы.май 1994 г.)

Объём и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, 5-и глав, заключения, выводов. Указатель используемой литературы включает 242 наименования, в том числе 144 иностранных авторов. Материалы диссертации изложены на 170 страницах машинописного текста и содержат 40 таблиц и 11 рисунков.

ОБЪЕКТЫ, ОБЪЁМ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

С целью выделения P.aeruginosa и ее бактериофагов проводили бактериологическое и вирусологическое обследование больных и объектов госпитальной среды в хирургическом отделении Больницы Скорой Медицинской Помощи (БСМП), ожоговом и травматологическом отделениях 4 Городской Клинической Больницы (4 ГКБ) и урологическом отделении Центральной Городской Клинической Больницы ЩГКБ). Смывы делали с больных (с кожи предплечья, паховых и подмышечных складок, кожных складок под грудной железой, гнойного и раневого отделимого, перевязочного материала больных) и объектов госпитальной среды.

Всего исследовано 1224 смыва: от больных 275 (22,5 X), с объектов госпитальной среды - 949 проб (77,5 7.). Выделено и изучено 192 штамма синегнойной палочки и 160 штаммов псевдо-монадкых бактериофагов. Из общего числа клинических проб мето-

дом параллельных смывов было проведено 493 (40,7+1,4 %) анализов. Из них было выделено 59 (51,6+3,6 % от всего количества P.aeruginosa) культур синегнойной палочки и 143 штамма бактериофагов (89,4+2,4 7. от всего количества бактериофагов) (табл. 1).

Выделение чистой культуры синегнойной палочки проводили на агаре с этокием и бензилпенициллином (Тыдельскгя И.Л., Ро-жавин М.А., 1QS0). Идентификацию штаммов- проводили на основании общепринятых методов (Мороз А.<5., i960, Крстгекй опрг-сля-тель бактерий Берги, 1980). Клинические ' итаммы изучает на чувствительность к 17 антибиотикам методом диффузии в агар (метод бумажных дисков).

Для бьк....-.-ния синегнойного фага из исследуемого материала использовали общеизвестную модификацгзо "капельного" метода (метод "полосок"). Диагностику проводили на двухслойном агаре по Грациа. В качестве индикаторного использовали штамм P. aeruginosa "РАО 1". Для повышения результативности исследования использовали метод предварительного обогащения смыеов (Адата М., 1961); накопление фага осуществляли методом сливного лизиса на агаре в чазках Петри (Габрилович U.M., 1963). Для очистки фаголизатсв от бактериального загрязнения их центрифугировали при "СО об/мкн. в течение 25-30 мин. с хлороформом. Суспензию фага с титром не менее 109-10i0 БОЕ/мл использовали для дальнейшей работы. Спектр литической активности фагов изучали капельным методом на плотней питательной среде, согласно общепринятым методикам (Адаме М., 1961; Гсльдфарб Д.М., 1961; Габрилович И.М., 1968). Для характеристики фагов по данному критерию использовали показатель индекса литическо.й активности (ИЛА) фагоз.

Изучение спонтанной и индуцированной продукции фага лизо-' генами культурами синегнойной палочки проводили по Габриловичу K.M. (1SS8) И Алфелдк (1957).

Определение устойчивости штаммов синегнойной палочки к экркону прозодили методом батистовых тест-объектов (Вашков В.И., 1977) и суспензионным методом (Наваиия С.М. и др., 1S82). Результаты опытов учитывали в качественных показателях (есть рост-нет роста микробов).

Определение чувствительности бактериофагов к виркону осу-

Таблица 1

Основные использованные в работе экспериментальные методы и объём исследования

Методы исследования Объём исследования

кл. проб кол. штаммов

1. Бактериологический-выделение чистой 1224 культуры P.aeruginosa (Мороз А.,1083)

2. Метод параллельных смывов (из них 498 выделено); - P.aeruginosa

синегнойных бактериофагов ■ -

3. Определение чувствительности синег- 250 нойной палочки к 17 антибиотикам методом диффузии в агар

4. Изучение спонтанной и индуцированной 136 продукции бактериофагов культурами синегнойной палочкой (Габрилович И.

М., 1968; Алфелди, 1957)

б. Определение дезочувствительности Р. 210 aeruginosa к виркону суспензионным и методом батистовых тест-объектов (Навашин С.М.,1982; Вашков В.И.,1977)

6. Определение дезочувствительности бак- 390 териофагов к виркону суспензионным методом, методом тест-объектов (протиранием и погружением) по Bydzovska

О.,(1983) и методом парафиновых лунок (авторская модификация)

7. Метод математических расчетов скорости, времени гибели микроорганизмов под действием дезинфектанта, надёжности бактерицидного эффекта с использованием оригинальных программ на IBM PC AT-286

192

99 143 121

68

(P.aeruginosa)

10

ществляли суспензионном методом и методом тест-объектов ка стеклянных носителях с помощью протирания и погружения в де-зикфектант (Bydzovska 0. и Kneiflova J., 1983) и с использованием парафиновых лунок (авторская модификация). Результату учитывали количественным (ЕОЕ/нл) и лолукаличестзенным (в баллах) способом.

Нейтрализатор виркона для определения дезочувствитель-ности фагов был разработан нами и состоял из Tweeri 80 ( 30 г/л), лецитина (3 г/л) и гипосульфита натрия (1 г/л).

Для определения средней скорости гибели иикроорганизмоБ в случаях, когда учёт результатов действия виркона на микроорганизмы осуществляли в количественных показателях применяли формулу Буртового С.П, (1984); 3

12 No - lg Nt

К - ............... , (1)

t a

где К -средняя скорость отмирания микроорганизмов; ig No и lg Nt десятичные логррифмы исходной и остаточной концентраций микроорганизмов, установленные экспериментально; t - время наблюдения.

Формула расчёта средней скорости гибели микроорганизмов для качественных показателей бьиа разработана нами: 1& N03 х (г0 - rt)

К- -.................. . (2)

t э

где К - средня« скорость гибели микроорганизмов; No -начальная концентрация микроорганизмов, выраженная в КОЕ/мл; г0 - начальное значение условного безразмерного коэффициента (коэффициента ранжирования или бального коэффициента) в начальный период ipei/etm, (как правило, в начальный период времени го равен 1.), s i - значение коэффициента последней точке, когда еще оонарутаваятся микробы : t - время к моменту rt.

Расчётная концентрация микроорганизмов в лобой момент времени определялась по формуле (Буртовой С.П.t 1S84):

ltr N - lff No8 - Kt. . (3)

где N - расчетное количество микроорганизмов в интервале времени от 0 до t.

Время окончательной гибели микробов и фагов рассчитывали

по предложенным на«! упрог^-нпш «¿ирмулам:

а. Для 95 X надежнсста бактерицидного эффекта:

1е м0э

Ьг - 1.2 X -.....- ' (4)

К

б. Для 99,99 % надежности бактерицидного эффекта:

1* Моэ

Ьг - 1.4 X............(5)

К э

где Ьг - конечное время гибели микроорганизмов; Дй N0 -десятичный логарифм начальной концентрации микроорганизмов; К - средняя скорость гибели микроорганизмов, расчитанная по последней точке, в которой еще определяется микроб.

Расчет вероятности отсутствия жизнеспособных микроорганизмов (или надежность бактерицидного эффекта) ео всем исследуемом объеме производился по формуле (Буртовой С.П., 1984):

- КЬ

- М0Э х 10

Р* - е . (6)

где Р* - вероятность отсутствия жизнеспособных клеток бо всем объеме; М0Э - исходное содержание микроорганизмов, установленное экспериментальным путем; К - средняя скорость гибели микроорганизмов для каждой конкретной концентрации дезинфек-танта; Ь - время.

Полученные данные бшш обработаны на 1ВМ РС АТ-286 с использованием оригинальных программ.

Для статистической обработки полученных результатов использовали общепринятые методы: вычисление средних величин, среднеквадратического отклонения, ошибки репрезентативности, коэффициент вариации. Достоверность различия оценивали по критерию Стыодента - Ь.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ В среднем частота выделения синегнойной палочки за 3 года по хирургическим стационарам г. Алматы составила 15,7 7.. Возбудитель достоверно чаще (р<0,05) выделялся от больных, чем из объектов госпитальной среды. Так, почти каждая третья проба от больных (27,6+2,7 X) и каждый десятый смыв из внешней среды

(12,2+1.1 %) содержали микроб.

Считается, что для госпитальных штаммов сезонность не ха- -рактерна (Лошонци Л.. 1978). Однако, наши данные свидетельствуют о том, что частота выделения псевдомонад подчинялась сезонный цикличности. Наибольшая выявляемость синегкойной паяоч-ки приходилась на весенне-осенний период (19,1+3,6 и 18,7+3,0 %%), летом частота обнаружения микроорганизмов падала в 2-3 раза (6,3+2,4 X) (рис. 1).

Наибольший уровень обсеменённости был присущ ожоговому и травматологическому отделениям (23,2+2,0 %), хирургическому (16,2+2,0 X). Наименьшая зараженность отмечалась в урологическом отделении (7,6+1,3 %). От больных частота выделения была следующей: слоговое и травматологическое отделение 34,3+4.0 %, хирургическое - 26.2+4,3 % и урологическое -3,1+3,0 %. Данные различия можно объяснить контингентом пациентов, который определяет сроки пребывания в лечебных учреждениях, тактику и характер противоэпедешческшс, лечебных мероприятий, а также санитарно-гигиеническое состояние стационаров.

При анализе бактериального загрязнения различных функциональных зон стационаров удалось установить, что наиболее кон-т&чияировакными оказались зона вспомогательных медицинских уч-помещений (зона В) - 16,7+5,8 % и блок бытовых помещений (зона С) - 13,6+1,6 Т.. Высокая обсеменённость зоны В обусловлена массивной контаминацией микробами рабочих комнат санитарок, в которой происходит мытье и обработка предметов гигиены и материалов от больных, хранение уборочного инвентаря. Минимальна? выделяемость микробов отмечалась в зоне А (основные медицинские помещения) - 10,4+1,4 7.. В среднем обсемеаённость по всем помещениям составила 12,2+1,1 % (табл. 2).

Практически любой контаминированный синегнойкой палочкой предмет может выполнять роль фактора передачи. Нами были выявлены конкретные эпидемиологически значимые объекты госпитальной среды, являюгдаеся факторами передачи, а тагсге местами резервации микроорганизмов. Ими оказались влаанда места обитания: аппараты для мойки суден, уровень.контаминации которых составил 22,2+9,8 7.-, раковины, барашки кранов, скфонн -21,6+2,9 7.; унитазы (ручки, бачки, сиденья) - 17,5+6,0 %, са-нитарно- техническое оборудование ванных и дузпевых комнат -

7Л

4а-

30-

20-

19,7

10-

10,0

19.1

7.0

эм

I

15.2

18,7

б.З

6,9

45J5 1

14,6

15,7

27j5 f

12,1

Зима

Весна

Лето

Осень

В среднем §а год

а .

и

ЕНЗ _ __

Рис. 1 Посезонная вьйеляемость P.aeruginosa из внешней среды стационара и от больных

в среднем ва сезон от больных из окружающей среды

100-• 90 80 -70 -•60 50'--40 -• 30 -20 ■■ 10 --

% дизогении

33,3

50,0^

85.7

70.0

94.1

12 3 4 б б' 7

количество антибиотиков

Рис. 2 Взаимосвязь уровня лизогении и количества антибиотиков к которым была резистентна?, aeruginosa

- И -

Таблица 2

Контаминация синегнойной палочкой различных функциональных зон стационаров

Количество Количество

Функциональные отделения смнвов штаммов Х1±т

Р.аегиз1пога

Зона А:

операционные/перевязочные 195 20 10,3+2,2

реанимационные палаты 113 15 14,2+3,3

•эндоскопические кабинеты 46 7 15,2+5,3

процедурные кабинеты - 45 1 2,2 +2,1

сестринские посты 61 3 6,9 +3,3

Всего: . 450 47 10,4+1,4

Зона В:

комнаты медперсонала 7 1 ■ 14,3+13,2

рабочие комнаты санитарок 20 5 25,0+9,7

пищеблок 15 1 6,6 +6,4

Всего: 42 7 16,7+5,8

Зона С:

палаты для больных 304 44 14,5+2,0

санузлы 74 ' д 12,2+3,8

ванные и душевые 61 7 11,5+4,1

коридор 18 2 11,1+7,4

Всего: 457 62. 13,6+1,6

Всего: 049 116 12.2+1,1-

16,7+5,8 X. Высокая обсеменённость отмечалась на поверхности полов, уборочном инвентаре - 20,7+7,5 и 14,3+7,6 %%. Объекты, непосредственно контактирующие с больными - мебель,• постельное белье, предметы гигиены, были значительно контаминированы си-негнойной палочкой (12,5+2,7; 10,3+3,9; 10,8+9,8 XX). Достаточно инфицированными оказались перевязочные столы в гнойной перевязочной (8,7+5,9 %), лекарственные и дезинфицирующие средства (6,8+3,8 %). Согласно различным литературным источникам, средняя обсеменённость раковин для мытья рук составляет 40 Z, полов 1,8-20 %, лекарственных препаратов - 25-33 %.

Было установлено, что подавляющее большинство штаммов _(92,2+1,9 %) продуцировало пигменты: более половины культур (58,9+3.6 %) синтезировало сине-зеленый (пиоцианин), каждый пятый штзш (22,4+3,0 Z) - желтый, а каждый десятый (10,9+2,2 Z) - коричневый (пиомеланин) пигменты. Согласно литературным данным, частота выделения беспигментных штаммов колеблется в широких приделах - от 8,3- 22,4 XX (Исхакова Х.И, и др.. 1980, 1985; Арутчева A.A.. 1984) до 75 X (Wahba А.Н., 1964). В наших исследованиях доля беспигментных вариантов составляла 7,8+1,9 %. Было отмечено, что культурам, выделенным от больных, в большей мере, чем штаммам из внешней среды, свойственна выработка пиоцианина (71,0+5,2 и 50,9+4,6 XX соответственно). Желтый и коричневый пигменты чаще продуцировались штаммами из окружающей среды. Беспигментные варианты в равной степени выделялись от больных и из внешней среды. Феномен "радужного" лизиса был присущ более половины штаммов (56,8+3,6 %). При этом, данный признак достоверно чаще отмечался у культур, выделенных от Сольных, а также среди штаммов, синтезирующих сине-зеленый пигмент. Радужка - признак сочеганный с пигментооб-разованием, поэтому беспигментные культуры радужку не образовывали.

Клинические штаммы синегнойной палочки были резистентны к 10 антибиотикам ( бенэилпенициллину. метициллину, ампициллину, оксащшину, дсклщикляну, эритромицину, олеандомицину, цефа-ликсину, ристомицину, линкомицину). По степени влияния оставшиеся 7 препаратов располагались в следующем убывающем порядке: полимиксин (удельный вес чувствительных к нему штаммов составил 84,2+2,1 2), карбенициллин (72,7+4,1 X чувствительных

штаммов), гентачицин (70,2+4,2 %), стрептомицин (52,9+4,5 %), левомицетин (19,0+3,6 %), тетрациклин (9,1+2,6 %), канаыицин (5,8+2,1 Z). При этом было отмечено, что во всех случаях чувствительные штаммы чаще выделялись из внешней среды, чем от больных.

При изучении явления лизогении синегкойной палочки было установлено, что лкзогенкыми, т.е. зараженными умеренным фагом и способными продуцировать фаг. оказалось большинство -77,9+5,7 Z псевдомонад. Из них, у 42,6+6,0 % отмечалась <-тон-1 тачная, а у 35,3+5,7 % культур индуцированная под действием У^-света продукция фагов. С высокой степенью достоверности (р<0,05) было установлено , что фаги, полученные из штаммов синегнойной палочки, выделенных от больных, обладают более выраженными литическими реакциями, чем фаги бактерий, изолированных из внешней среды. В подтверждение тезиса о том, что фаги могут выполнять роль транспозонов и участвовать в переносе геноз, в частности лекарственной устойчивости, нами была установлена прямая зависимость между частотой лизогении и спектром антибиотикорезистентности клинических штаммов псевдомонад. Чем шире круг антибиотиков, к которым были устойчивы штаммы синегнойной палочки, тем чаще они продуцировали бактериофаги. Так, среди штаммов, резистентных к 2 антибиотикам, продукция фагов отмечалась у 50,0+20,4 % культур, к 3 - у 70,0+10,2 Z, к 4 - у 85,7+7,6 %, а к б препаратам - у 94,1+5,7 Z (рис. 2).

Одной из основных задач наших исследований было изучение экониш, занимаемых синегнойной палочкой и специфическим бактериофагом в госпитальной среде и диагностическое значение данного явления. Для этого, методом параллельных смывов в ожоговом, травматологическом и урологическом стационарах мы изучили выделяемость и распространенность бактериофагов в госпитальной среде. В качестве индикаторных использовались референс-штаммы Р.aeruginosa "РАО 1", "PAT 2" и "N 586", Для дальнейшей работы 'мы применяли штамм "РАО 1"» детально списанный Holloway B.W., (1Ö79); Kropinski A.M. е. а., (1977) и др. В наших исследованиях данный штамм обладал наибольшей чувствительностью к диким рассам фагов синегнойной палочки. Выделение фагов производили методом обогащения, который оказался более," чем в 2 раза (р<0,05) результативнее метода без предварительного обогаще-

ния.

В среднем по стационарам выделяемость бактериофагов составила 28,7+2,0 7,что почти в полтара раза вше, чем частота обнаружения бактерий (19,9+1,8 %)*. В ожоговом и травматологическом отделениях Еысеваемость фагов достигала 39,6+3,1 7. (бактерий - 30,6+2,9 X), а в урологическом -17,3+2,4 (синегнойной палочки - 8,6+1,8 %). Бактериофаги, как и микробы, чаще выделялись от больных (39,0+1,7 %), чем из окружающей среды (25,9+2,2 %). В каждом 4-м смыве из внешней среды обнаруживался бактериофаг (25,9+2,2 %). Самая массивная контаминация отмечалась в зоне 8 - 57,1+13,2 X, наименьшая регистрировалась в зоне А - 22,2+3,2 X. Чаще всего фаги обнаруживались на полу, на аппаратах для мойки суден и уток , унитазах, санитарно-техническом оборудовании ванн и душевых, постели больных, раковинах, барашках кранов, сифонах, тазах для отработанного и патологического материала , мебели в палатах . (таб. 3). Таким образом, вышеприведенные данные свидетельствуют, что фагам свойственны те же факторы передачи и места резервации, что и микробам.

Следует отличать феномен истинной бактериофагии от феномена радужного лизиса или "аутоплакш", свойственного некоторым штаммам синегнойной палочки. При осмотре в лучах проходящего света оба явления имеют сходную картину - просветление на плотном фоне бактериального газона. На наш взгляд, принципиальная разница между ними заключается в следующем:

1. из фаговых бляшек можно выделить соответствующий фаг;

2. при осмотре в отраженном свете фаговые бляшки сохраня-, ют свсю прозрачность за счет' лизиса микробов, а радужные пятна

имеют вид плотных, блестящих пятнышек в виде кусочков фалъгя, ' отражающих свет;

3. колонии фага не изменяют рельеф бактериального газона, а радужные пятна имеют вид оспинок (ямок), углублений в гладкой ровной поверхности бактериального газона.

Характерным таксономическим признаком бактериофагов явля-

* - Здесь и далее сравнение частоты выделения фагов и сиегнойной палочки производилось для данных, полученных методом параллельных смывов. ,

Таблица 3

Частота обнаружения синегнойной

Объекты госпитальной сред« Кол-во смывов Количество выделенных штаммов Р.аегиетоза Количество выделенных штаммов бактериофагов Р Разница между показателями

або. те+т абс. %%+ш Р2:Р1

Наркозная и дыхательная

аппаратура Лекарственные й дезинфицирующие средства Столы для инструментов и

лекарственных форм . Тазы для отработанного и патологического материала Мебель медперсонала хстолы,

шкафы, стулья, кушетки) Полотенца медперсонала щетки' для рук Руки медперсонала Раковины, барашки кранов, сифоны

Унитазы,(оачки, ручки, си-

:ое оборудование

Мебель йоЖных1'? кровати, „ тумоочки.столы] Постель Сольных (простыни, „ матрасы, полотенца и т.д>) Предметы гигиены оольного ( „ судна, клеенки и т.д.) Холодильники юлы

?учки дверей затарен отопления Тодокониики

Аппарат для моики суден. Ведра, половые тряпки, бач-„ ки для мусора Прочие предметы,.

Всего:

Сантехнйчёсш

ванн

1 20

14

15 3

I

102

23 28 46 25 5

I

$3

1 5,4+4,9 1 5,4+4,9 -

- - 3 21,4+10,9 - -

3 20,0+10,3 4 26,7+11,4 > 0,05 1,3

Ъ 24,5+4,3 28 27,5+4,4 > 0,05 1,1

4 17,4+7,9 8 34,8+9,9 > 0,05 2,0

4 14,3+6,6 9 32,1+8,8 > 0,05 2,2

7 15,2+5,3 12 26,1+6,5 > 0,05 1,7

4 16,0+7,3 а 32,0+9,3 > 0,05 2,0

1 20,0+17,9 3 60,0+21,9 > 0,05 2,0

1 да I > > Ш У

1 . Ч'МУ 1 тт > > № 1:8

§1 1 102 иш > < 8:881* В

Примечание: * - различие показателей'достоверно

ется морфология образуемых ими негативных колоний. Было установлено, что наибольший удельный вес (39,4+3,9 и 24,4+3,4 XX соответственно) занимали бактериофаги, образующие стерильные бляшки средних (1,0-2,0 мм) и мелких размеров (0,5-1,0 мм) правильной округлой формы, с чистым дном (табл. 4).

Более половины (53,5+5,4 %) штаммов бактериофагов имели умеренный титр, меньшая часть (9,3+3,1 7.) имела высокий титр. Была отмечена закономерность -^чем больше размер негативных колоний, тем выше удельный вес штатов фагов с умеренным и высоким титром (табл. 5),

Важнейшей характеристикой бактериофагов является спектр" их литической активности. Выборочная проверка 20 штаммов фагов показала, что большинство из них (15 штаммов) обладали умеренным (вдекс логической активности - ША=0,25~0,49) и широким (ИЛА-0,5-1.0) спектром литической активности.

Клинические синегнойной палочки, используемые для

проверки спектра литической активности, были неоднородны по степени чувствительности к изученным фагам. Среди изученных 64 культур более половины (38) были высокочувствительными и чувствительными (37,5+бД и 21,0+5,2 ЗД; 28,1+5,6 У. штаммов были сдабочувствительными, а почти каждая десятая культура (12,5+4,1 %) - нечувствительна к испытуемым фагам.

Во всем мире ежегодно синтезируется и апробируется десятки новых дезинфекционных средств. Одним из последних широко рекламируемых дезинфектантов является сложный комплексный препарат "Виркоа", обладающий, согласно данным фирмы-изготовителя, широким антимикробным, антивирусным, фунгицидяым и споро, цидным эффектом. Впервые нами были проведены исследования по ' воздействию данного препарата на бактериофаги.

Учитывая сложный состав к шюгозффектность действия вир-кона, мы попытались подобрать нейтрализатор, по-возможности, максимально ингибируищий действие активных компонентов дезин-фектаята. Была разработана смесь сдедузокего состава: твин 60 ( ЗЭ г/л), лецитин (3 г/л) и гипосульфит натрия (1г/л). Твин 80 - моноэфир олеиновой кислоты, хорошо растворим в воде, маслах; слузяг? хорошим эмульгаторов и стабилизатором. Лецитин - сложный фосфожпнд, состоящий из гдициркка, аыиносанрта холина к вькяшх карболовых кислот- Является структурным элементом кде-

Таблица 4

Частота встречаемости бактериофагов с различной морфологией негативных колоний

Группы фагов Характеристика негативных колоний Количество бактериофагов

абс.(п=1б0) %+ш

I Очень мелкие, размером до 33 20,6+3,2 '

0,5 мм

II Мелкие, размером 0,5-1,0 мм 39 24,4+3,4

III Средние, размером 1,0-2,0 мм' 63 39,4+3,9

IV Крупные, размером 3,0-6,0 мм 25 15,6+2.9

Таблица 5

Зависимость титра выделенных бактериофагов от морфологии негативных колоний

Группы фагов Титр фагов (БОЕ/мл)

низкий 102-104 умеренный 104-10б высокий более 10е

абс. 7.+т абс. %+т абс. Х±т

I (п=25)

II (п-18) III(п=32) IV Сп=И)

Всего: п=86

23

7

2

92,0+5,5 63,6+11,6 6,3+4,3

32 37,2+5,2

2

11

26

7

46

8,0+5,5 36,4+11,6 81.2+6,9 63,6+15,2 53,5+5,4

12,5+5;8 36.7+15,2 9,3+3,1

точной мембраны.

Предположительный механизм действия нейтрализатора мно-госторокен и состоит в следующем: твин 80 растворяет и эмульгирует лецитин, способствуя создания устойчивой еодной эмульсии. Он обладает также антисурфактантным действием. Лецитин защищает клетки от растворяющего действия сурфактанта, органических кислот и окислителей. Гипосульфит натрия используется как нейтрализатор хлора, образующегося в результате взаимодействия составных частей виркона.

Для определения времени гибели микроорганизмов и надежности бактерицидного эффекта при этом были использованы и модифицированы формулы, предложенные Буртовым С.П. и соавт. (1084). Они позволяли определять среднюю скорость гибели микробов, расчётную концентрацию в каждый момент времени и вероятностную характеристику надежности бактерицидного эффекта для количественных показателей убыли микроорганизмов . Наш же бы--ли предложены упрощенные формулы расчёта скорости, времени окончательной гибели микроорганизмов, а также достоверности бактерицидного эффекта не только для количественных (КОЕ/мл, БОЕ/мл), но и для качественных показателей (есть рост-нет роста) гибели микробов.

Согласно дачным фирмы-изготовителя, виркоя вызывает гибель синегнойной палочки при воздействии 1,0 X концентрации в. течении 10 минут. Однако, все протестированные нами итаммы погибали при более высоких концентрациях дезинфекталта и длительных сроках экспозиции. Чувствительность штаммов была высоковариабельной. Использование в этой ситуации предложенного нами расчета сроков окончательной (99,99 %) гибели микробного пула позволило значительно уточнить время, необходимое для эффективного обеззараживания вирконом, и нивелировать вариабельность показателей эксперимента.

Так, экспериментально было установлено, что наиболее чувствительный штамм синегнойной палочки (Б 160) в суспензионном тесте при 1 X концентрации виркона погибал в промежутке от 10 до 20. мин., а при 2 X растворе - от б до 10 минут. В тоже время, с помощью предложенного расчета было установлено, что для достижения надежности бактерицидного эффекта (99,69 X) в суспенэионном тесте при действии 1 X виркона требуется экспо-

зицня 18 мин, а при 2 % растворе - 12 минут. Наиболее устойчивый штамм (R 185) в суспензионном тесте при действии 1 % виркона не погибал даже после 80 минутного воздействия) а при 2 Z концентрации погибач к 30 минуте. Математический расчёт показа^ что с достоверностью 99,99 7. гибель этого штамма в 2 % вирконе наступала ка 33 минуте, а в 3 % растворе дезинфектанта

- на 9 минуте.

Чувствительность бактериофагов к новому дезинфектаату, установленная в суспензионном тесте, была в несколько раз выше, чем синегнойной палочки. Все протестированные фаги, т-носящиеся к одной морфогруппе, обладали одинаковой устойчивостью. Так, 1% раствор виркона в суспензионном тесте был абсолютно губителен для фагоз с первых же моментов воздействия. При действии 0,75 7. раствора гибель фага UR 8S, согласно экспериментальным данным, наступала ка 7 минуте, а расчёты с высокой степенью достоверности (99,99 %) показывали, что гибель наступала на 9 минуте. При действии 0.5 X виркона экспериментальные данные свидетельствуют о гибели фага к 15 минуте, а расчётные - на 16 минуте.

При обработке поверхностей методом протирания 2 X раствором виркона гибель фага наступала с первых же моментов контакта, а 1 %. раствор не вызывал уничтожения фагов через 5 мин. Обработка методом погружения в 1 % раствор дезинфектанта являлась абсолютно губительной для фагов. При погружении в 0,75 Z виркона гибель фагов наступала примерно через 25 минут, в 0,5 и 0.25 XX растворы - к 90 минуте, а 0,125 % раствор не обладал вирулицидным действием даже спустя 3 часа. Данные, полученные методами погружения и с использованием парафиновых лунок, существенно не отличались. Метод парафиновых лунок (авторская модификация) впервые бал предложен Джонсоном и Крюгером для титрования стафилококкового фага, а в дальнейшем использовался Кузнецовой В.Н. (1960) для упрощенной постановки реакции нарастания титра фага. Предложенная нами модификация метода позволила в 2-4 раза снизить расходы питательных сред, s 5-6 раз

- лабораторной посуды и придать ему высокую наглядность.

ВЫВОДЫ

1. Внутрибольничная синегкойная инфекция в хирургических

стационарах имела следующие лабораторно-эпидемиологические характеристики: а) средняя выделяемость синегкойной палочки составила 15,7 %, с наиболее частым её обнаружением в ожоговом, травматологическом (23,2 хирургическом (16,2 X) отделениях и наименьшим - в урологическом (7,7 Х}\ б) возбудитель достоверно чаще выделялся от больных (27,2 Z), чем из внесней среды (12,2 %); в) чаще и массивней микробом были контаминиро-ваны влажные места, санитарно техническое оборудование (16,7-22,2 %), постель, мебель, предметы гигиены болькыя (10,3-12,5 Z), столы в гнойной перевязочной (3,7 X), лекарственные и дезинфекционные средства (6,8 X); г) сезонные различия обсеменённости заключались в минимальной высеваемости псевдомонад летом (6,3 %) и максимальной (19,1 Z) - весной, осенью.

2. Методом параллельных смывов доказано, что фаг занимает аналогичные микробу-хозяину экониши в госпитальной среде, а

. частота его выделения в 1,4-2 раза выше, чем синегнойной палочки. Метод фагодиагкссгики доступен, информативен, позволяет проводить экспресс-анализ синегнойной инфекции без выделения чистой культуры возбудителя, в присутствии посторонней микрофлоры.

3. Штаммы синегнойной палочки, выделенные в хирургических стационарах, были типичны по культуратьно-морфологическим свойствам и имели следующие эпидемиологически значимые признаки: а) 92,2 % культур образовывали пигменты (силе-зеленый, желтый и коричневый), 56,8 X ~ феномен радужного лизиса, не регистрируемый у беспигментных вариантов; б) 77,9 Z штаммов .были лизогеняыми (42,6 % продуцировали фаг-спонтанно, £5,5 2 -под действием УФ-облучения); в) все выделенные штаммы отличались подиантибиотикорезистентностью, широта спектра которой была прямо пропорциональна частоте продукции фага.

4. Методом предварительного подращивания в 2 раза чаде, чем без него, из исследуемого материала выделялись псевдомо-надные бактериофаги, обычно образовывавшие негативные колонии мелких и средних размеров. Титр у половины выделенных штаммов фагов (53,5 X) был умеренный (104 - 10б БОЕУш), у 9,3 X - высокий (> 106 БОЕ/кл). Большинство фагов обладало умеренным (0,29-0,49) и высоким (0.Ü-1.0) индексом логической активное-

ти.

«

5. Клинические штаммы синегнойной п&гочки имели высокую вариабельность устойчивости к новому дезинфектанту виркону. Рекомендованный фирмой-изготовителем режим дезинфекции (10 минутное воздействие 1% раствора препарата) не обладая необходимым бактерицидным эффектом, так как гибель наиболее устойчивого итамма (R185) происходила с высокой степенью достоверности при действии 2 % виркона в течении 33 минут.

Для определения режима эффективного обеззараживания нами предложен расчёт времени гибели микробной популяции и надежности бактерицидного действия дезинфегстанта с использованием качественно-количественных показателей.

6. Чувствительность псевдомонадкых фагов к виркону в. несколько раз превосходила чувствительность синегнойной палочки. Установлено, что в суспензионном методе гибель фагов наступала при действии 0.75 7. виркона на 7 минуте.

7. Предложенная нами модификация способа определения чувствительности фагов к дезинфектантач в парафиновых лунках является эффективной, экономичной и наглядной,

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Выделение псевдомонадных бактериофагов из смывов следует проводить методом "полосования" на двухслойном агаре по Грациа.

2. В качестве индикаторной культуры синегнойной палочки для фагодиагностики следует использовать референс-итамм "РАО 1".

3. Для повышения результативности и эффективности фагодиагностики следует использовать предварительное подращивание (обогащение) смывов индикаторной культурой синегнойной палочки.

4. При интерпретации полученных в ходе фагодиагностики результатов следует отличать феномен истинной бактериофаг:® от феномена радужного лизиса или "аутоплакии", свойственного некоторым штаммам синегнойной палочки. При осмотре в лучах проходящего света оба явления имеют сходную картину - просветление на плотном фоне бактериального газона. На наш взгляд, принципиальная разница между ними заключается в следующем:

а. из фаговых бляшек можно выделить соответствующий фаг;

- ES -

б. при осмотре в отраженном свете фаговые бляшки сохраняют свою'прозрачность за счет лизиса микробов, а радужные пятна имеют вид плотных, блестящих пятнышек (ямок) в виде, кусочков фальги, отражающих свет как зеркало;

в. колонии фага не изменяют рельеф бактериального газона, а радужные пятка имеют вид оспинок, углублений в гладкой ровной поверхности бактериального газона.

5. Для орентировочного определения чувствительности фагов к внркону можно использовать метод парафиновых лунок.

6. Для определения дезоустойчивости бактериофагов к вир-кону рекомендуется применять разработанный нами нейтрализатор, состоящий из твин-80 (SO г/л), лецитина (3 г/л) и гипосульфита натрия ( 1 г/л).

7. Для определения скорости и времени гибели микроорганизмов под действием виркона можно использовать разработанные качи упрощённые математические формулы, применимые для расчета

. как количественных (КОЕ/мл, БОЕ/мл), гак и качественных (есть рост-нет роста) показателей дезинфекционного процесса.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ГО ТШЕ ДИССЕРТАЦИИ ' 1. СинегЕойная инфекция в хирургических стационарах -микробиологические аспекты //Внутрибольничные и кишечные инфекции: Сб. науч. тр. - Алма-Ата, 1992 г. - С. 3-Ю. (соавт. Котова А.Л., Китарова Г.К., Урумбаева К.У., Кондратская С.А., Сабирова М.Г., Кенжебаева 3.С., Таурбаева Н.Т., Кудайбергенов К.К.)

2. Некоторые методические приёмы выделения бактериофагов .Pseudomonas aeruginosa в госпитальной среде //Здравоохранение Казахстана. - 1994. - N 11. - С. 40-43. (соавт. Котова А.Л., Джусупова А.Б., Кенжебаева 3.С., Урумбаева К. У.)

3. К вопросу о диагностике Pseudomonas aeruginosa в условиях госпитальной среды с помощью бактериофагов //Meдк-ко-социадьные аспекты дермато-венерологии: Сб. науч. тр. - Ал-иаты, 1S94. - С. 104-108. (соавт. Джусупова A.B., Урумбаева К.У., Кенжебаева 3.С.)

4. Распространённость бактериофагов Pseudomonas aeruginosa в условиях госпитальной среды //Актуальные проблемы вирусологи!: Тез. докл. Международ, иауч. конф. - п. Гвардейский,

1994. - Ч. 1. - С. 99. (соавт. Джусупова А.Б.)

РАЦИОНАЛИЗАТОРСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Комплексный нейтрализатор виркона //Удостоверение N 385, выданное БРИЗом АГМЙ им. С.Д.Асфендиярова, от 28.03. 1995 г. .

2. Модификация способа определения дезочувствительности бактериофагов //Удостоверение N 386. выданное БРИЗом им. С.Я, Асфендиярова, от 28.03.1995 г.

. 3. Модификация расчёта скорости отмирания микроорганизмов //Удостоверение N 387, выданное БРИЗом АГМй им. С.Д.Асфендиярова, от 28.03. 1995 г. ■

4. Способ расчёта времени гибели микроорганизмов // Удостоверение N 388, выданное БРИЗом АГМИ им. С.Д.Асфендиярова, от 28.03. 1995 Г.

Жактореев Болат Мей1рбек-»ла

Аурухана Шяде болатын КбК1р1!Ш кнфекцияга диагноз коюнда асевдомонадалык бактериофагтарды аныктаудын. мацызы

Т V ¡К Ы Р Ы М

Алматы каласынын, хирургиялык, стационарларында Р. aeruginosa жене кек1р1Н'Таяиунасыньщ сактериофагтарынкн, таралуы, био-логкялын; каоиеттер! жэне бед!ну жшлшнщ ерешел!ктер1 еерг-телд!. Аурухана жагдайында кек1рщдi иифекцияньщ бактериологи-ялык, жэке вирусологиялак, (гомологиялык, Оактериофагтарды табу) диагноз но» едютериац салыстырмала зерттеу1 жкрпзидь KeKipiH, таякшасыиыц жэне оныц фагтарыньщ каз!рп кеэде колда-нылатын "Еиркок" дезинфектантына тезшдиг! зерттелд!.

Жгрпэиген жгмыстардыц нэтижесше KSKipni таяк,шаоы мен бактериофаг аураналаода ездеpiне тиютч экологиялык; куыстарда орныгатыны айкындалды. Бактерияларга Караганда псевдомонадалык фагтардыд табылгу жи 1 лг 1 баоым екен1 анккталды. Иес1-микробк,а Караганда олардын, бактериофагтарынац вирконга сез!мталдыгы ар-тигырац екен! дедендендь дайындаушы-фирма усынган дезкнфекци-ялау эдю 1 кэк1р1н; таякшасын залалсыздандыруда нэтижел1 бола алмайтыны белпм болды.

Алынган мэ-мметтер гоепиталцы жагдайдагы квк1ршд1 инфекцияныц эпидемиодогиясы туралы косымша TrciRiK беред!, мик-роО-фаг ийесшд езара популяциялыь; асертц кейб!р жацтарын ьшып беред!. KeKipiH таль^ьсын фагтардыд кэмегШен аныктау же?.-ул1кт1 карапайым, сен1мд1, нэтижл жане толык мэлинетт! вдю болып еоептелиед!. Сондыктан б уд тэеид! цосымша диаг-ноотикалын тест рэтшде уеынуга my мкл яд i к береди Практикада цолдаку максатында жаца дезинфектанг вирконды кешенд* бейта-раитау жене парафкндег! ойшыктарда бактерисфаггардьщ дезинфек-тантна сед!мталдыгын аныктаудын ед!стемелер1 жэтидгрид!. Де-бинфектант acepiHeß мнкроорганизмдерд|ц гшйлыу мерзiMiн еееп-теудш; жец!лдет1лгея формуласы гсыналды. Бгл дезинфекциялау шараларын нвтежел! журнзуге шык1кдш бередк

JANTURIEV Bolat M?irbecovlch The Importance of isolation of pseudomonal bnotoriopha-ges for the diagnosis of intra-hospital blue-pus Infection

SUMMARY

The peculiarities of spreading, biology and frequency of isolation of P. aeruginosa and blue-pus bacteriophages in the surgical hospitals of A1maty have been studied. The comparative research of bacteriological and virupologioal (isolation of homologenes bacteriophage) methods of diagnosis of blue-pus infection in hospital conditions has been carried out. The resistance of blu-pus baolllus and Its phages to a new desinfectant "Virkon" has been studied.

In the course of the research work It was found out that blue-pus bacillus and bacterlphage have the analogous places of inhabitance in the hospital environment. We have discovered that the frequency of finding of pseudotnonad phages surpasses the frequency of isolation of bacteria. It was proved that blue-pus bacteriophages are more suspectible to vlrcon than microb-host. The regimes of deslnfection proposed by the flrm-productor are not affective for désinfection of blue-pus bacillus.

The obtained data provide additional knowledge about the epidemiology of blue-pus infection in the hospital environment clertfy some questions of population interaction of the microb-phag system. The phagodiagnosls of blue-pus bacillus is a simple, reliable, resultatlve and informative method. So we reccmrend to use it as a parallel diagnostic test. We havè developed for using in practice: a complex neutraliser for a new desinfectant verkon, the method of defining the bacteriophages suspectibillty to deslnfection in paraffin holes. The simplified formulae of calculating the time for destrictlon of microbes under.the impact of deslnfectant have been proposed. Due to this It will be possible to develop mere effective regimes of deslnfection.