Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Значение иммуногенетических факторов в развитии глютенчувствительной целиакии

ВАК РФ 03.02.07, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Значение иммуногенетических факторов в развитии глютенчувствительной целиакии"

094612013

па правах рукописи

ПУХЛИКОВА ТАТЬЯНА ВЛАД11М11РОВНА

ЗНАЧЕНИЕ ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ В РАЗВИТИИ ГЛЮТЕНЧУВСТВИТЕЛЬНОЙ ЦЕЛИАКИИ

03.02.07 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 1 НОЯ 2010

Москва-2010

004612013

Работа выполнена в Государственном учреждении здравоохранения города Москвы «Банк стволовых клеток Департамента здравоохранения города Москвы», Федеральном государственном учреждении «Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии» Росздрава.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Астрелина Татьяна Алексеевна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Глинкина Жанна Ивановна

кандидат биологических наук, доцент Гигани Ольга Олеговна

Ведущая организация: Учреждение Российской академии наук Институт биологии гена РАН

Защита диссертации состоится 2010 г. в^^часов

на заседании диссертационного совета Д 212.203.05 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6.

Автореферат разослан « ' ' 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность

Большие успехи в конце прошлого столетия были достигнуты в диагностике заболевания Глютенчувствительная целиакия (ГЦ). До 80-х годов прошлого века ГЦ считалась редким заболеванием, распространенность ее составляла от 1 : 1000 до 1 : 3000 в общей популяции (Парфенов А.И., 2007). В настоящее время частота заболеваемости в Европе составляет около 0,4 - 1% населения (Catassi С., 1996; Not Т., 1998; Baldas V., 2000; Peter H. R. Green, M.D., 2007). Частота заболеваемости в различных странах закономерно возрастает с увеличением настороженности врачей по отношению к ГЦ, улучшением диагностики, применением скрининговых программ (Dickey W., 2005; Distefano R., 2010).

Известно, что более 5% населения имеет генетическую предрасположетюсть к ГЦ. Механизм наследования ГЦ относится к аутосомно-доминантному типу с неполной пенетрантностью (Парфенов А.И., 2007; Зарецкая Ю.М., 2008). В настоящее время выявлена ассоциация заболевания с антигенами главного комплекса гистосовместимости человека HLA-DQ2 (DQA1*0501, DQB1*0201) и HLA-DQ8 (DQA1*0301, DQB 1*0302) (Peter H. R. Green, 2003; Kim C.Y., 2004; Парфенов А.И., 2007; Зарецкая Ю.М., 2008). Гетеродимер DQ2 обнаруживается приблизительно у 90-95% больных ГЦ (Kim C.Y., 2004; Парфенов А.И., 2007). Он сформирован бетта-цепочкой, кодируемой аллелями DQB 1*0201 или DQB 1*0202, и альфа-цепочкой, кодируемой DQA1*05. Однако, аллель HLA-DQ2 является распространенным в популяции, он определяется приблизительно у 30% белых европейцев без всяких признаков заболевания ГЦ (Ludvig M., 2000; Парфенов А.И., 2007; Зарецкая Ю.М., 2008). Гетеродимер DQ8, связанный с ГЦ, присутствует у 5 - 10% больных. Он также сформирован альфа- и бета-цепочками, кодируемыми DQA1*03 и DQB1*0302 соответственно (Зарецкая Ю.М., 2008; Malamut G., 2009; Distefano R, 2010). Некоторые исследователи отмечают ассоциацию ГЦ с антигенами В8 и DR3 (Зарецкая Ю.М., 2008).

Накоплено значительное количество данных о том, что при возникновении ГЦ важную роль играет наличие определенных антигенов и комбинация генов HLA I и II классов - гаплотипов (Louca A.S., 2003; Karell Kati, 2003; Malamut G., 2009). Во многих исследованиях отмечается, что именно комбинация гаплотипов дает более сильную ассоциацию с ГЦ (Lopez-Vazquez А., 2004). Однако, суммарная роль HLA-гаплотипов в определении клинических результатов ГЦ остается до сих пор не изученной.

Стратегия применения новых молекулярно-генетических диагностических методов исследования до сих пор еще не ясна. До настоящего времени предпринимались лишь немногочисленные попытки изучения генетической предрасположенности и риска возникновения заболевания целиакия с учетом иммуногенетических характеристик. Не охарактеризованы: частота встречаемости генетических факторов, связь их с клиническими формами, с возрастом и полом развития заболевания ГЦ у взрослой и детской популяции. Исходя из вышеизложенного, настоящее исследование представляется актуальным.

Цель и задачи исследования

Цель исследования: изучить генетическую предрасположенность развития ГЦ с учетом иммуногенетических характеристик и клинических форм у взрослых и детей.

Задачи исследования

1. Проанализировать частоту встречаемости всех групп аллелей (специфичностей) генов НЬА-системы у больных ГЦ и здоровой популяции московского населения.

2. Выявить НЬА - маркеры диагностики заболевания у пациентов с ГЦ.

3. Выявить сочетания НЬА - маркеров ГЦ в генотипе у детей и взрослых пациентов.

4. Установить ассоциации между НЬА-специфичностями главного комплекса гистосовместимости и клиническими формами, возрастом и полом у пациентов, больных ГЦ.

5. Обосновать необходимость использования современных молекулярно-гснетических методов исследования в качестве дополнительных при диагностике заболевания ГЦ.

Научная новизна

Впервые в московском регионе проведено НЬА - генотипирование детей и взрослых, больных ГЦ, современным молекулярно-генетическим методом ПЦР.

Впервые изучен профиль распределения генов НЬА класса I и II у взрослого и детского населения с ГЦ московской популяции.

Впервые выявлены генетические маркеры заболевания ГЦ НЬА-В*08, НЬА-ВЯВ1*03, НЬА-01*В1*07 и НЬА-0(2В1*02 у взрослого и детского населения московской популяции, определяющие риск возникновения заболевания.

Впервые выявлены сочетания генетических маркеров заболевания ГЦ у детей и взрослых НЬА-В*08; НЬА-01Ф1*03; НЬА-ОдВ1*()2 и НЬА-В11В1*07; НЬА-В(ЗВ1*02/НЬАВ(2В1*03, определяющие риск возникновения заболевания.

Выявлены отрицательные ассоциации с заболеванием ГЦ по группам аллелей НЬА-ОдВ1*05 и НЬА-БС>В1*06.

Научно-практическая значимость

В результате исследования на основе тестирования с помощью молекулярно-генетического метода НЬА-типирования полиморфных НЬА-генов были выявлены маркеры диагностики ГЦ НЬА-В*08, НЬА-01Ш1*03, НЬА-Б11В1*07 и НЬА-' ВдВ1*02 у детей и взрослых московской популяции. Показаны сочетания генетических маркеров заболевания ГЦ у детей и взрослых НЬА-В*08; НЬА-Б11В1*03; НЬА-0(}В1*02 и НЬА-01Ш1*07; НЬА-В(}В1*02/НЬА13(}В1*03, каждое из которых можно рассматривать как генетический маркер. Вероятное прогнозирование риска развития ГЦ на основе анализа полиморфных НЬА-генов позволит верифицировать диагноз на начальных этапах её развития.

Данные о генетических маркерах заболевания ГЦ позволяют врачам-гастроэнтерологам, терапевтам и педиатрам своевременно диагностировать заболевание, выявлять группу риска и проводить генетическое прогнозирование в семьях больных ГЦ, что имеет большую практическую значимость. Результаты выполненной работы создают дополнительную базу для создания регистра

больных ГЦ. Практическое значение работы подтверждает качество использованного молекулярного метода HLA-типирования. Использование этого метода позволяет изучить характер распределения и частоту встречаемости генов HLA-системы среди детей и взрослых, больных ГЦ, и здорового детского населения московской популяции.

Положения, выносимые на защиту

1. Полиморфизм генов и их белковых продуктов МНС позволяет изучить характер распределения специфичностей HLA-системы у детей и взрослых, больных ГЦ.

2. Изучение иммуногенетических особенностей у детей и взрослых, больных ГЦ, позволяет обнаружить маркеры HLA-B*08, HLA-DRB1*03, HLA-DRB1*07 и HLA-DQB1*02, определяющие риск возникновения заболевания.

3. Изучение отдельных HLA - специфичностей и сочетаний генетических маркеров заболевания ГЦ HLA-B*08; HLA-DRB1*03; HLA-DQB1*02 и HLA-DRB1*07; HLA-DQB1 »02/HLADQB1 *03 позволяет использовать их как дополнительный диагностический и прогностический признак у детей и взрослых.

4. Выявленные отрицательные ассоциации по группам аллелей HLA-DQB1*05 и HLA-DQB1*06 свидетельствуют об устойчивости к заболеванию.

Внедрение результатов в практику

Результаты исследования внедрены в практику работы Государственного учреждения здравоохранения «Банка стволовых клеток Департамента здравоохранения г. Москвы».

По материалам диссертации опубликовано 13 печатных работ в России и за рубежом.

Материалы диссертации доложены на: XIV конгрессе педиатров России с международным участием «Актуальные проблемы педиатрии» (Москва, 2010г.), 5-й иммуногенетической международной конференции «East-Wést Immunogenetics Conference» (Пилсен, 2010г.), 36-м Международном симпозиуме Европейской группы ЕВМТ (Вена, 2010г.), III научно-практической конференции «Современные технологии и методы диагностики различных групп заболеваний, лабораторный анализ» (Москва, 2010г.), 24-й Европейской конференции по иммуногенетике и гистосовместимости (European Immunogenetics and Histocompatibility Conference, EFI and 17th the Italian Society for Immunogenetics and Transplantation, AIBT) (Флоренция, 2010г.).

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций, списка литературы. Работа изложена на 119 страницах машинописного текста. Диссертация иллюстрирована 28 таблицами, 8 рисунками. Библиографический указатель содержит 20 источников отечественной и 147 источников иностранной литературы.

Апробация диссертации

Апробация диссертации проведена 21 июня 2010 г. на совместной научной конференции сотрудников отделов молекулярной гематологии, клинической гематологии, клинической иммунологии, химиотерапии ФГУ «Федерального научно-клинического центра детской гематологии, онкологии и иммунологии» Росздрава, Государственного Учреждения Здравоохранения «Банка стволовых клеток Департамента здравоохранения г. Москвы» и отделений трансплантации костного мозга, общей гематологии и онкогематологии Российской детской клинической больницы (РДКБ).

Работа выполнена на базе Государственного учреждения здравоохранения города Москвы «Банк стволовых клеток Департамента здравоохранения города Москвы» (директор - к.м.н. М.В.Яковлева), на базе отделения Научного центра здоровья детей Российской академии медицинских наук (директор - академик РАМН, профессор, д.м.н. А.А.Баранов), ЦНИИ Гастроэнтерологии г. Москвы (директор - профессор, д.м.н. Л.Б.Лазебник).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Характеристика материала и методов исследования

В исследование было включено 3 группы пациентов:

Первую (основную) группу составили 28 детей в возрасте от 1 года до 17 лет (средний возраст - 7,53 ± 4,9) с установленным диагнозом ГЦ, состоящие на .'учете в Научном центре здоровья детей Российской академии медицинских наук.

Вторую группу (группу сравнения) составили 17 взрослых пациентов в возрасте от 19 лет до 81 года (средний возраст - 48,4 + 17,3) с диагнозом ГЦ, установленным в ЦНИИ Гастроэнтерологии г. Москве.

Диагноз ГЦ был установлен в соответствии с критериями ESPGHAN.

Контрольная группа была представлена 1700 образцами пуповинной крови новорожденных, условно здоровых детей, родившихся на 37-41 неделе гестации в г. Москве, прошедшие тестирование на вирусную и микробную контаминацию и ' внесенные в реестр неродственных доноров в г. Москве за период с 2004 по 2009 год.

Методы исследования Выделение ДНК из биоматериала.

Геномную ДНК выделяли из свежих или замороженных образцов крови методом сепарации на магнитных частицах с использованием сертифицированных коммерческих наборов BioSprint 15 DNA Blood kit фирмы Qiagen (США), основанном на способности магнитных частиц адсорбировать на своей поверхности высвобожденную из клеток ДНК с помощью специфических лиганд.

-'■ - Метод состоит из двух этапов. На первом этапе в пробирку с протеазой вносили исследуемый образец крови, лизирующий буфер, инкубировали при температуре 75° С и добавляли изопропанол для осаждения ДНК. На втором этапе образовавшийся лизат переносили в специальные стрипованные пробирки, в которые были заранее внесены промывочные буферы и элюирующий раствор. Система ставилась на платформу-держатель и загружалась в прибор KingFisher, снабженный специальным программным обеспечением.

Измерения концентрации и чистоты ДНК на спектрофотометре.

Характеристики выделенной ДНК измеряли с помощью спектрофотометра SmartSpec Plus фирмы Biorad (США). Концентрацию ДНК измеряли против чистого элюирующего раствора по оптической плотности OD260/280 . С помощью многоволнового режима А260/280 определяли степень чистоты образцов ДНК. Образцы для исследования соответствовали предъявляемым требованиям: концентрация ДНК была > 50 нг/мкл, А260/280 составляло 1,7-1,9.

Молекулярные методы типирования. Генотипирование методом гибридизации с помощью олигонуклеотидных зондов.

Данным методом выявлялись HLA-специфичности по всем исследуемым локусам на уровне групп аллелей.

Исследование проводили с использованием полностью автоматического процессора Dynal AutoRELI™ 48 Mk на сертифицированных реагентах RELI™ SSO фирмы Invitrogen. Процедура проведения анализа была разделена на четыре стадии: 1. Амплификация исследуемого фрагмента ДНК. 2. Гибридизация на стрипах с нанесенными олигонуклеотидами. 3. Отмывание не связавшихся продуктов. 4. Детекция. На первом этапе приготавливали рабочую ПЦР-смесь для амплификации определенного локуса HLA (-А, -В, -Cw, -DRB или DQB1), следующего состава: 7,5 мкл 0,6 мМ MgC12; 15 мкл Mastermix (который включал 20% глицерол, 100м КС1, нуклеотиды, биотинилированные праймеры и 100 ед./мл Taq polymerase); 7,5 мкл ДНК (концентр. 13-15 нг/мкл). Концентрированный раствор исследуемой ДНК разбавляли стерильной деионизованной водой до рабочей концентрации. Приготовленные таким образом пробирки с исследуемыми и контрольными образцами закладывали в термоциклер и запускали программу. Весь процесс прохождения программы составлял 1,5 часа. Для формирования одноцепочной ДНК, по окончании процесса проводили денатурацию ампликонов щелочью. На следующем этапе проводили гибридизацию на стрипах. Вся последующая процедура гибридизации, отмывки и детекции проводилась в автоматическом режиме в течение 2,5 часов. Считывание и интерпретацию результатов проводили с помощью сканирующего устройства и компьютерной программы РМР.

Образцы, у которых были получены двойные интерпретации результатов, дополнительно типировались методом ПЦР с помощью аллель-специфических праймеров.

Генотипирование методом ПЦР с помощью аллель-специфических праймеров.

Исследования проводили на коммерческих сертифицированных наборах ALLSet™GOLD SSP фирмы Invitrogen. Метод состоял их нескольких этапов и включал: 1. Амплификацию. 2. Элетрофорез в агарозном геле. 3. Интерпретацию результатов. На первом этапе, в пробирку, содержащую Mastermix, добавляли ДНК (концентрацией 50 нг/мкл) и термостабильную ДНК-полимеразу. Полученную смесь затем помещали в термоциклер и запускали программу. Весь процесс прохождения программы составлял 2 часа. На следующем этапе проводили детекцию продуктов генамплификации с помощью элетрофореза в 2% агарозном геле. Регистрацию сигналов полученной электрофореграммы, фотографирование изображения и документирование их в электронном виде осуществляли с помощью гельдокумектирующей системы «ДиДжиДок» (США) и с

использованием компьютерной программы UPV. Интерпретацию результатов проводили с помощью таблиц.

Всего было проведено 10 500 лабораторных исследований.

Статистическая обработка результатов.

Для оценки полученных результатов и степени достоверности ассоциативных связей между генами системы HLA и изучаемыми заболеваниями в работе были использованы показатели: частота встречаемости, критерий Z, критерий X2 с поправкой Йейтса, уровень достоверности р. Для малых чисел использовался точный двусторонний критерий Фишера. В случае, когда нулевая гипотеза отвергалась с вероятностью ошибки меньше, чем 5%, рассчитывался относительный риск RR и отношение шансов OR с доверительным интервалом CI 95% по формуле Woolf. В том случае, когда один из показателей был равен 0, относительный риск вычислялся по формуле Певницкого (1988), модифицированной Haldane для малых чисел. В случаях, когда RR>1 (0R>1) вычислялась этиологическая фракция - доля всех случаев заболевания в изучаемой популяции (экспонированных и неэкспонированных), отнесенных за счет воздействия фактора риска при допущении наличия причинной связи и превентивная фракция по формуле Svejgaard ЕА (1983).

Сравнение групп производилось по методике Стснтона Гланца (1999). Статистический анализ исследования ассоциаций проводился с использованием двупольной таблицы при помощи программы «Open Epi» (Open Source Epidemiologic Statistics for Public Health), версия 2.3 (2009/20/05) и программы «Biostat».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Сравнение частоты встречаемости специфичностей локусов HLA у здоровых доноров и пациентов с ГЦ

В настоящее время роль генетической предрасположенности в развитии ГЦ не вызывает сомнения. Существует большая группа HLA - ассоциированных заболеваний. Для части из них ассоциации с HLA - антигенами являются слабыми или случайными, для других — настолько выражены, что нет сомнения, что один или более генов вовлечены в патогенез заболевания. Молекулы HLA принимают участие в процессах инициации и поддержания патологической аутоиммунной агрессии. Специфическую чувствительность или резистентность к заболеванию формируют не отдельные антигены, а весь иммуногснетический комплекс, поэтому, целесообразно использовать всю информацию об HLA-генотипе каждого больного.

Были протипированы все HLA - локусы I класса: А*, В*, Cw* и П класса: DRB1* и DQB1*. У исследуемых групп были выявлены следующие группы аллелей (специфичности): А*01, А*02, А*03, А*23, А*24, А*25, А*26, А*29, А*30, А*31, А*32, А*33, А*34, А*66, А*68, А*69, А*80, В*07, В*08, В*13, В*14, В*15, В* 18, В*27, В*35, В*37, В*38, В*39, В*40, В*41, В*44, В*45, В*46, В*47, В*48, В*49, В*50, В*51, В*52, В*53, В*54, В*55, В*56, В*57, В*58, В*73, В*78, Cw*01, Cw*02, Cw*03, Cw*04, Cw*05, Cw*06, Cw*07, Cw*08, Cw*12, Cw*14, Cw*15, Cw*16, Cw*17, Cw*18, DRB1*01, DRB1*03, DRB1*04, DRB1*07, DRB1*08,

01Ш1*09, 0Ю31*Ю, 0КВ1*11, 011В1*12, 011В1*13, БИВ 1*14, 0ЯВ1*15, олв 1*16, оив 1*17, о<зв 1 *02, оо>в 1 *оз, о(зв 1*04, оо>в 1 *05, оо>в 1 *об.

Проведенные исследования показали, что характер распределения генных частот НЬА класса I и II во всех трех группах в целом соответствовал европеоидам (Болдырева М.Н., 2007).

Для изучения генетической предрасположенности к ГЦ был проведен сравнительный анализ как отдельных аллельных вариантов всех генов НЬА, так и их межлокусных сочетаний в генотипе больных и в контрольной группе.

Распределение специфичностей НЬА 1 и II классов у больных ГЦ по сравнению с контрольной группой показано на рисунках 1 и 2.

-й-

оав1*02 (р=о,ои)

01)В1*07(р=0,032) ОЙВГОЗ (р<0,0001| С<я*17(р=0,СВД В'50(р=0,042) В*41(Р=0,044} В*08(Р<0,0001)

¡¿»ВЯВЕ! 3.53 ■13,19

16.75

19,64

"(42,86

г основная группа ■ контрольная группа

Рисунок 1. Сравнение частоты встречаемости статистически значимых специфичностей в основной и контрольной группах (в %)

На рисунке 1 графически представлены различия частоты встречаемости специфичностей, с которыми была выявлена статистически значимая положительная ассоциация с ГЦ при сравнении основной и контрольной групп.

Как следует из полученных данных, представленных на рисунке 1, статистически значимая положительная ассоциация с ГЦ при сравнении основной и контрольной групп была выявлена для специфичности НЬА - В*08. В основной группе она составляла 19,64% (Г=0,1964), в то время как в контрольной группе -6,75% (1=0,0675); р<0,0001; г = 3,492. При г > 1,96 можно говорить о статистически значимом различии долей. Помимо этого, были обнаружены следующие положительные ассоциации. Специфичность НЬА - В*41 выявлялась в 8,93% (1=0,0893) основной группы, 3,19% ^=0,0319) контрольной группы, р=0,044; г=2,011. Специфичности НЬА - В*50 составляла 5,36% (Г=0,0536) основной группы, 1,44% (Г=0,0144) контрольной группы, р=0,042. На основании полученных данных «нулевую гипотезу» можно отклонить.

При сравнении частоты встречаемости специфичностей локуса НЬА-Сш* в основной и контрольной группах было выявлено статистически значимое отличие

между ними по специфичности НЬА-Сш*17. Данная специфичность в основной группе выявлялась у 8,93% (£=0,0893), тогда как в контрольной группе - у 3,02% (£=0,0302); р=0,022; 2=2,133.

Интересные результаты были получены при сопоставлении частоты встречаемости генов НЬА II класса, статистически значимые положительные ассоциация с ГЦ при сравнении основной и контрольной групп были выявлены для специфичностей НЬА - ОЯВ1*03 и НЬА - Б1Ш1*07. В основной группе специфичность НЬА - 01*131*03 выявлялась у 21,43% (1=0,2143), тогда как в контрольной группе - у 6,50% (£=0,0650); р<0,0001; г=4,143. Специфичность НЬА -ОЯВ1*07 в основной группе выявлялась у 25,00% (£=0,2500, в контрольной группе - у 14,86% (£=0,1486); р=0,032; г =2,145.

Частота встречаемости специфичностей НЬА-А* незначительно отличалась у пациентов основной группы и здоровых индивидов группы сравнения. Отличия не являлись статистически достоверными.

По литературным данным, стойкую ассоциацию с ГЦ чаще всего связывали с антигенами НЬА-[)(3 (Парфенов А.И., 2007). В наших исследованиях был изучен локус НЬА-ОдВ1*.

Статистически значимая положительная ассоциация с ГЦ была выявлена для специфичности НЬА-ОС)В1*02, которая составила 42,86% (£=0,4286) основной группы в отличие от 21,14% (£=0,2114) контрольной группы, р=0,011; г=2,538. Достоверного отличия, позволяющего исключить «нулевую гипотезу» по специфичность НЬА-Б(}В 1*03 выявлено не было.

Была выявлена статистически значимая отрицательная ассоциация с ГЦ для специфичности НЬА-ОрВ1* 06 (основная группа - 7,14% (£=0,0714); контрольная группа - 22,24% (£=0,2224), р=0,002.

На рисунке 2 графически представлены различия частоты встречаемости специфичностей, статистически значимых для целиакии в группе сравнения и контрольной группе.

00в1*02 (р<0,0001)

тттткш

¡76,47

ОЮ1*07(р=0,049)

ОЙВ1*03 (р<0,0001) 6,5

С»«07 (р<0,0001|

В*08(р<0,0001) рее,75

В 52,94

я группа сравнения

■ контрольная группа

А*01 (р=0,015)

¡26,47

О 10 20 30 40 50 60 70 80

Рисунок 2. Сравнение частоты встречаемости статистически значимых специфичностей в группе сравнения и контрольной группе (в %)

Как видно из представленного рисунка 2, при анализе полученных результатов в группе сравнения выявлена положительно значимая ассоциация с ГЦ для специфичности НЬА-А*01. В группе сравнения составляла 26,47% (Г=0,2647), в то время как в контрольной группе - 11,48% (Г=0,1148), р=0,015.

При анализе группы сравнения с контрольной группой для специфичности НЬЛ - В*08 также была выявлена статистически значимая положительная ассоциация с ГЦ. В группе сравнения она определялась у 44,12% (£=0,4412), в контрольной группе - 6,75% (Г=0,0675); р<0,0001; г=8,086. Положительных ассоциаций со специфичностями НЬА -В*41 и В*50 не выявлено.

При анализе данных групп сравнения и контрольной группы статистически значимая ассоциация с ГЦ была обнаружена для специфичности НЬА-С\у*07. В группе сравнения она выявлялась у 52,94% (£=0,5294), в контрольной группе - у 25,73% (£=0,2573); р<0,0001; г=3,400.

Интересные результаты были получены при сопоставлении частоты встречаемости генов НЬА II класса. В группе сравнения были выявлены аналогичные статистически значимые специфичности. Специфичность НЪА -0!1В1*03 была выявлена у 47,06% (£=0,4706), в контрольной группе - 6,50% (£=0,0650); р<0,0001; г=8,922. Специфичность НЬА - ШШ1*07 выявлялась у 26,47% (£=0,2647) в группе сравнения, а в контрольной группе - у 14,86% (£=0,1486); р=0,049; г=1,96б.

Особенное внимание в наших исследованиях группы сравнения было также уделено локусу НЬА-0(}В1*, т. к. по литературным данным стойкую ассоциацию с ГЦ чаще всего связывали с антигенами НЬА-0(2 (Парфенов А.И., 2007).

В группе сравнения статистически значимая положительная ассоциация с ГЦ была выявлена для специфичности НЬА-В<ЗВ1*02, которая определялась у 76,47% (£=0,7647) в отличие от 21,14% (£=0,2114) контрольной группы, р<0,0001; г=7,566. Достоверного отличия, позволяющего исключить «нулевую гипотезу» по специфичность НЬА-0(ЗВ1*03 также как и в основной группе, выявлено не было.

Статистически значимая отрицательная ассоциация была выявлена для специфичности НЬА-Ц(}В1*05 (группа сравнения - 2,94% (£=0,0294); контрольная группа - 19,94% (£=0,1994);' р=0,0045).

Риск развития заболевания

Результаты относительного риска развития заболевания, отношение шансов, этиологическая фракция для аллелей с положительной ассоциацией в основной группе представлены в таблице 1.

Среди вычисленных показателей относительного риска и отношения шансов, как видно из представленной таблицы 1, высокие значения этих показателей в основной группе отмечены для специфичностей: НЬА-В*08 (Ю1=3,265; СЖ=3,378; ЕГ=13,83%); НЬА-В*41 (1Ж=2,885; 011=2,975; ЕГ=5,927%); НЬА-В*50 (1111=3,697; (Ж=3,87; ЕР=3,973%); НЬА-С\у*17 (ЮЪ=3,043; СЖ=3,151; ЕР=6,095%); НЬА-Б1Ш1*03 (1111=3,764; ОЯ=3,926; ЕР=15,97%); НЬА-ОКВ1*07 (1Ж=2,062; (Ж=2,096; ЕР=14,01%); НЬА-БдВ1*02 (ИЯ=2,733; 011=2,798; ЕР=27,54%); НЬА-ПдВ1*03 (№=1,404; 011=1,414; ЕР=12,02%). Однако, следует отметить, что доверительные интервал для показателей этиологической фракции у специфичностей НЬА-В*41, Н1>А-В*50, НЬА-Сад*17 и НЬА-ОС>В1*03 проходят через 1. Этот факт свидетельствует о том, что значение риска учитывать нельзя и данная специфичность не может рассматриваться в качестве маркера ГЦ.

Таблица 1.

Основная группа. Группы аллелей (специфичности) с положительной ассоциацией: относительный риск развития заболевания, отношение шансов, этиологическая

фракция

IILA-специфичности RR Cl* OR Cl" EF(%) Cl*

В*08 3,265 1,712 -6,225 3,378 1,7236,622 13,83 2,641 -25,01

В*41 2,885 1,1757,083 2,975 1,1637,608 5,927 -1,80913,66

В*50 3,697 1,19511,44 3,87 1,16812,82 3,973 -2,0249,969

Cw*17 3,043 1,2417,459 3,151 1,2319,071 6,095 -1,62713,82

DRB1*03 3,764 2,0187,021 3,926 2,0427,594 15,97 4,45227,49

DRB1*07 2,062 1,1513,696 2,096 1,1513,817 14,01 1,026927,69

DQB1*02 2,733 1,621 -4,606 2,792 1,6364,784 27,54 11,0544,03

DQB1*03 1,404 0,8292,371 1,414 0,8256 -2,42 12,02 -7,34631,38

ОЙ. - величина отношения шансов, - величина относительного риска, ЕР - величина этиологической фракции, С1 - доверительный интервал, *- р<0,05

Для всех остальных вышеперечисленных специфичностей показатели RR, OR и EF достоверны (р<0,05) и доверительные интервалы не проходят через 1. При значениях RR и OR больше единицы можно говорить о том, что конкретная специфичность ассоциирована с заболеванием и чем больше эти величины, тем ассоциация более выражена. При кажущейся сопоставимости величин OR и RR, отчетливо видно, что отношение шансов во всех случаях немного превышает значения относительного риска. Необходимо отметить, что при условии OR>RR, фактор способствует развитию заболевания. Если эти показатели примерно равны, то заболевание встречается редко (Гланц С., 1999).

При сравнении частот встречаемости специфичностей не было выявлено достоверного отличия между основной и контрольной группами по специфичности DQB1*03. Однако, в связи с данными о протективном значении антигена HLA DQ8 (аллель HLA-DQB 1*0302) (Коровина Н.А., 2007), был произведен подсчет показателей относительного риска, отношения шансов и этиологической фракции для этой специфичности. Из таблицы 1 видно, что при значениях данных показателей >1 (RR=1,404; OR=l,414; EF=12,02%), доверительные интервалы всех параметров проходят через 1. Это указывает на низкую ассоциацию специфичности HLA-DQB1*03 с ГЦ.

Таким образом, проведенное исследование позволяет предполагать существование генетически детерминированной связи развития заболевания с выявленными статистически значимыми специфичностями.

Данные относительного риска развития заболевания, отношение шансов, этиологическая фракция для аллелей с положительной ассоциацией в группе сравнения представлены в таблице 2. Высокие значения этих показателей в 1руппе сравнения отмечены для специфичностей: НЬА-А*01 (Ш1=2,733; 011=2,776; ЕР=16,94%); НЬА-В*08 (№=10,28; 011=10,91; ЕР=40,07%); НЬА-С\у*07 (№=3,198; 011=3,247; ЕР=36,64%); Ш.А-ЦКВ1*03 (101=11,94; 011=12,8; ЕР=43,38%); ПЬА-1ЖВ1*07 (ЯК=2,810; ОЯ=2,846; ЕР=34,34%); НЬЛ-Ц(ЗВ1*02 (Ш*=11,69; 011=12,12; ЕР=70,16%).

Таблица 2.

Группа сравнения. Группы аллелей (специфичности) с положительной ассоциацией: относительный риск развития заболевания, отношение шансов, этиологическая фракция

НЬА-спсци фичности кк С1" ОК С1* ЕК(%) С1*

А*01 2,733 1,2865,809 2,776 1,2865,994 16,94 0,15133,72

В*08 10,28 5,291 -19,96 10,91 5,46821,76 40,07 22,1757,98

С\у*07 3,198 1,6396,242 3,247 1,6486,398 36,64 14,01 -59,26

ЭМИ* 03 11,94 6,17623,09 12,82 6,43225,46 4338 25,436133

БШИ* 07 2,081 1,091 -7,238 2,846 1,091 -7,424 3434 1,17767,51

0<ЗВ1* 02 11,69 5,31725,69 12,12 5,46326,91 70,16 52,0888,25

ОЯ - величина отношения шансов, КЯ - величина относительного риска, ЕР - величина этиологической фракции, С1 - доверительный интервал, *- р<0,05

Для всех специфичностей (кроме НЬА-А*01) эти показатели достоверны (р<0,05) и доверительные интервалы не проходят через единицу. Следует отметить высокое значение ЯЛ и ОЯ для специфичностей НЬА-В*08, НЬА-БКВ1*03 и НЬА-СОВ1*02 и значительное превышение единицы величин доверительных интервалов, что говорит о значительной выраженности ассоциации с ГЦ. Необходимо отметить, что все величины отношения шансов превышают величины относительного риска, что способствует развитию заболевания.

Несмотря на высокие показатели параметров для специфичности НЬА-А*01, доверительный интервал для этиологической фракции проходит через 1. Этот факт свидетельствует о том, что различия между группами по этому признаку недостоверны, значение риска учитывать нельзя и данная специфичность не может рассматриваться в качестве маркера ГЦ.

Результаты относительного риска развития заболевания, отношение шансов, этиологическая фракция для аллелей с отрицательной ассоциацией в основной группе представлены в таблице 3.

Таблица 3.

Основная группа. Группы аллелей (специфичности) с отрицательной ассоциацией: относительный риск развития заболевания, отношение шансов, превентивная

фракция

НЬА-спсцифичности 1Ш С1* ои С1* Рг% С1*

ШШ1*15 0,2469 0,0604 -0,1,009 0,2433 0,0591 -1,001 75,67 -0,143294,09

0(ЗВ1*06 0,2734 0,0992 -0,753 0,269 0,0969 -0,7464 73Д 25,36 — 90,31

011 - величина отношения шансов, ЯК - величина относительного риска, РР - величина превентивной фракции, С1 - доверительный интервал, *- р<0,05

Как видно из представленной таблицы 3, значения относительного риска и отношения шансов для специфичностей, выявленных в основной группе как статистически значимые отрицательные ассоциации, были меньше единицы: НЬА-Б1Ш1*15 (Ы1=0,2469; 011=0,2433); НЬА-БдВ1*06 (Ю1=0,2734; 011=0,269). Значения и ОЯ практически не отличались. Доверительные интервалы < 1, р < 0,05. В данной ситуации ассоциацию с ГЦ можно считать отрицательной. Величины превентивной фракции, напротив, были достаточно высоки: НЪА-01Ш1*15 - 75,67%; НЬА-Г>С)В1*06 - 73,1%. Однако, доверительный интервал превентивной фракции специфичности НЬА-01Ш1*15 имеет отрицательные значения и проходит через единицу. Следовательно, достоверно значимой можно считать только специфичность НЬА-В()В1*06. Такое сочетание низких показателей относительного риска и отношения шансов с высокими показателями превентивной фракции позволяет говорить об устойчивости к развитию ГЦ при наличии данной специфичности.

В таблице 4 представлены показатели относительного риска, отношения шансов и превентивной фракции для специфичностей, выявленных как статистически значимые отрицательные ассоциации в группе сравнения. Если специфичность в данной группе не встречалась (НЬА- А*24, НЬА- В*44, НЬА-ОЯВ1*13, НЬА-011В1*15, НЬА-ОС2В1*06), величины относительного риска и отношения шансов равнялись нулю, а доверительные интервалы стремились к нулю, р<0,05. Для специфичностей НЬА-ПС>В1*03 (1111=4),438; 011=0,435; РР=56,54%) и НЬА-0(}В1*05 (ЯК=0,110; 011=0,109; РР=89,09%) доверительные интервалы и ОЯ не проходили через единицу, р<0,05, что свидетельствовало об отрицательной ассоциацией с ГЦ. Однако, если доверительный интервал РГ специфичности НЬА-0(ЗВ1*05 не проходил через единицу, что позволяет говорить об устойчивости к развитию ГЦ при наличии данной специфичности, доверительный интервал РР специфичности НЬА-БОВ1*03 проходил через единицу и не позволял учитывать данную специфичность как отрицательный маркер. Следовательно, достоверно значимой можно считать только специфичность НЬА-В(5В1*05.

В результате проведенных исследований и сравнения данных обеих групп пациентов с ГЦ были выявлены отрицательные статистически значимые ассоциации (НЬА- 1Х)В1*05; НЬА-ВОВ1*06). Наличие таких НЬА-специфичностей в генотипе пациентов указывает на устойчивость к ГЦ.

Таблица 4.

Группа сравнения. Группы аллелей (специфичности) с отрицательной ассоциацией: относительный риск развития заболевания, отношение шансов, превентивная

фракция

НЬА-специфичности Ш1 С1# ок С1* РР(%) С1*

А*24 0,000 1,0001,290 0,000 0,989 -1,294 100 -

В*44 0,000 1,0001,236 0,000 0,9901,239 100 -

ОШИЧЗ 0,000 1,0000,815 0,000 0,989 -0,813 100 -

ОЮН*15 0,000 1,0000,884 0,000 0,989 -0,883 100 -

БОВГОЗ 0,438 0,1821,054 0,435 0,1791,053 56,54 -5,302 -82,06

0<ЗВ1*05 0,110 0,015 -0,806 0,109 0,015 -0,799 89,09 20,09 -98,51

ООВ1*Об 0,000 1,0000,432 0,000 0,989 -0,428 100 -

(Ж - величина отношения шансов, Ю1 - величина относительного риска, РБ - величина превентивной фракции, С1 - доверительный интервал,р<0,05

В результате проведенных исследований генотипа детей, больных ГЦ, были впервые, помимо БО (Парфенов А.И., 2007) выявлены НЬА-специфичности, которые можно характеризовать, как генетические маркеры этого заболевания: НЬА-В*08; НЬА-ВЯВ1*03; НЬА-БКВ1*07 и НЬА-0<ЗВ1*02.

В результате проведенных исследований генотипа взрослых, больных целиакией, также были выявлены НЬА-специфичности, являющиеся генетическими маркерами этого заболевания: НЬА-В*08; НЬЛ-Си-*07; НЬА-01Ф1*03; НЬА-ОЫМ*07 и НЬЛ-ПС>В1*02.

При сравнении частоты встречаемости специфичностей не было выявлено достоверного отличия между группами по специфичности П(2В1*03, несмотря на большое количество литературных данных (Парфенов А.И., 2007) о протективном значении антигена НЬА Б(£8 (аллель НЬА-ООВ 1*0302) в развитии ГЦ.

В результате подсчета величин относительного риска, отношения шансов и этиологической фракции и сравнения их у детей и взрослых, как генетические маркеры целиакии были охарактеризованы, выявленные статистически достоверные для обеих групп специфичности (НЬА-В*08; НЬА-1ЖВ1*03; НЬА-Б1Ш1*07 и НЬА-0(2В1*02).

Сочетание специфичностей в генотипе При исследовании НЬА-генотипов основной группы и группы сравнения было обнаружено, что некоторые специфичности, определяющиеся как статистически значимые положительные ассоциации, встречаются в определенных сочетаниях. Необходимо отметить, что при отсутствии информации о генотипах родителей пациентов обеих экспериментальных групп и родителях здоровых

испытуемых контрольной группы утверждать, что данные сочетания - гаплотипы не представляется возможным. Исходя из этого, статистическую обработку проводили без анализа величины неравновесного сцепления. Был произведен подсчет частот встречаемости подобных сочетаний, а также величин относительного риска и отношения шансов возникновения ГЦ при выявлении в генотипе следующих совместно встречающихся специфичностей:

1. Первая комбинация -НЬА-В*08; НЬА-ОЯВ1*03: НЬА-О0В1*02.

2. Вторая комбинация - НГА4ЖВ1*07; НГА-ЭОВ1 *02/НГА-ОрВ 1 *03.

Частота встречаемости групп специфичностей.

На рисунке 3 представлены графические изображения частоты встречаемости групп специфичностей в трех исследуемых группах.

HLA-DRB1-07; HLA-DQB1*02/HLA DQB1*03 (осн.тр. P«0,000i); (гр.сравн. P=0,00S)

я контрольная группа - группа сравнения в основная группа

| 70.59 _т_т_,

О 20 40 60 80

Рисунок 3. Частота встречаемости групп специфичностей.

Как видно из представленного рисунка 3, частота выявления обеих комбинаций специфичностей в основной группе очень высокая. Первая комбинация совместно встречающихся специфичностей определялась у 35,7% пациентов основной группы, тогда как у здоровых доноров контрольной группы -у 7,71% (Х2=28,836; р < 0,0001). Вторая комбинация совместно встречающихся специфичностей определялась у 35,71% пациентов основной группы, в контрольной группе - у 10,0% (Х2=19,519; р < 0,0001). Полученные результаты свидетельствуют о достоверном различии между сравниваемыми группами по данным признакам. Необходимо отметить, что у шести пациентов основной группы второй специфичностью в генотипе HLA-DQB*1 была аллель HLA-DQB1*0313, что обращает на себя особенное внимание. Сравнить этот показатель с контрольной группой не представляется возможным из-за отсутствия данных типирования по высокому разрешению (high resolution).

В группе сравнения, наблюдалась следующая ситуация. Первая комбинация совместно встречающихся специфичностей выявлялась у 70,59% пациентов группы сравнения, в контрольной группе - у 7,71% (Х2=87,174; р < 0,0001). Вторая комбинация совместно встречающихся специфичностей определялась у 23,53% пациентов группы сравнения, в контрольной группе - у 10,0% (Х2=6,989; р = 0,008). Полученные результаты свидетельствуют о достоверном отличии групп по изучаемым признакам.

HLA-B*08; HLA-DRB1-03; HLA-DQB1-02 (осн.гр. р<0,0001); (гр.сравн. р<0,0001)

Риск развития заболевания для двух групп совместно встречающихся специфи чностей.

В таблице 5 представлены величины относительного риска, отношения шансов и этиологической фракции для двух изучаемых комбинаций совместно встречающихся специфичностей при сравнении основной и контрольной групп.

Таблица 5.

Относительный риск развития заболевания, отношение шансов и этиологическая фракция для групп совместно встречающихся специфичностей в основной и контрольной группах

Совместно встречающиеся НЬА-специфичности К Я С1* ОН С1* ЕГ% С1#

НЬА-В*08; НЬА- ОКВГОЗ; НЬА-0(}В1*02 6,253 2,94313,28 6,654 3,0114,71 30,35 11,0949,6

ПЬА-1ЖВ1*07; НЬА-ООВ1*02Я1ЬА-ООВ1*ОЭ 4,778 2,2410,19 5,000 2,271 -11,01 28,57 8,82-48Д2

011 - величина отношения шансов, ИЛ - величина относительного риска, ЕР величина этиологической фракции, РР - величина превентивной фракции, С1 доверительный интервал,р<0,05

Следует отметить (табл. 5), что для обеих комбинаций специфичностей выявлены значения относительного риска и отношения шансов развития заболевания значительно превышающие единицу. Величины отношения шансов превышают величины относительного риска, что способствует развитию заболевания. Доверительные интервалы не проходят через 1. Значения этиологической фракции велико в обоих случаях (1-ая комбинация - 30,35%; 2-ая комбинация - 28,57%). Полученные данные достоверны (р < 0,05) и позволяют предполагать связь между наличием в генотипе одного или обоих вариантов совместно встречающихся специфичностей и развитием ГЦ.

Таблица 6.

Относительный риск развития заболевания, отношение шансов и этиологическая фракция для групп совместно встречающихся специфичностей в группе сравнения и контрольной группе

Совместно встречающиеся НЬА-специфичности С1* ОИ С1* ЕР% а*

НЬА-В*08; НЬЛ- 011В1*03; НЬА-БОВ1*02 26,42 9,44 -73,93 28,75 9,976105,2 68,13 44,6691,6

НЬАШВ1*07; НЬА-В(}В1*02/НЬА-ВОВ1*03 4,883 1,74613,65 5,032 1,74614,52 23,57 1,091947,04

ОЯ - величина отношения шансов, - величина относительного риска, ЕР величина этиологической фракции, РР - величина превентивной фракции, С1 доверительный интервал, р<0,05

Величины относительного риска, отношения шансов и этиологической фракции в группе сравнения, как показано в таблице 6, подтверждают связь двух комбинаций совместно встречающихся специфичностей с возможностью развития ГЦ. Величины относительных рисков и отношения шансов значительно превышают единицу, доверительные интервалы не проходят через 1. Значение этиологической фракции для первой комбинации - 68,13% (р < 0,05), для второй комбинации - 23,57% (р < 0,05). Это также как и при анализе основной группы позволяет говорить о том, что конкретные варианты совместно встречающихся специфичностей ассоциированы с заболеванием.

Таким образом, выявлены сочетания генетических маркеров заболевания ГЦ у детей и взрослых HLA-B*08; HLA-DRB1*03; HLA-DQB1*02 и HLA-DRB1*07; HLA-DQB1*02/HLADQB1*03, каждое из которых можно рассматривать как самостоятельный генетический маркер.

Ассоциации между HLA-специфичностями главного комплекса

гистосовместимости и клиническими формами ГЦ у пациентов основной

группы

Основную группу исследуемых составляли дети в возрасте от 1 года до 17 лет (средний возраст 7,53 + 4,9). Распределение детей, больных ГЦ, по полу - 11 (39,3%) девочек и 17 (60,7%) мальчиков. Распределение по полу в контрольной группе - 805 (47,35%) девочек и 895 (52,65%) мальчиков (т.е. практически в равных долях). При проведении анализа различий клинических форм в зависимости от пола в основной группе ассоциации между HLA-специфичностями главного комплекса гистосовместимости достоверности выявлено не было.

Для анализа клинических проявлений ГЦ в основной группе, все пациенты этой группы были разделены на 3 подгруппы.

• В первую подгруппу входили пациенты основной группы в генотипе которых был выявлен первый вариант совместно встречающихся специфичностей - HLA-B*08; HLA-DRB1*03; HLA-DQB1*02.

• Во вторую - пациенты основной группы с вторым сочетанием совместно встречающихся специфичностей - HLA-DRB1*07; HLA-DQB1 *02/HLA-DQBP03.

• Ив третью - дети, в генотипе которых были выявлены другие сочетания специфичностей, определяющиеся как статистически значимые положительные ассоциации, какая-либо одна из значимых специфичностей или не выявлено специфичностей, имеющих положительную ассоциацию с заболеванием.

При анализе специфичностей в третьей подгруппе у 7 (25%) детей были выявлены только специфичности DQB1*03, трое из них имели аллель не экспрессирующую серологически выявленную молекулу DQ8, т.е. не имели генетических маркеров ГЦ. Это подтвержает гипотезу, что мультифакториальные заболевания следует рассматривать как зависимые, а не сцепленнные с генетическим фактором.

В результате анализа клинических проявлений ГЦ в основной группе не было выялено статистической разницы между клиническими формами в зависимости от варианта совместно встречающихся HLA-специфичностей в генотипе пациентов.

Ассоциации между НЬА-специфичностями главного комплекса гистосовместимости и клиническими признаками ГЦ у пациентов группы

сравнения

В группе сравнения, также как и в основной группе, были проанализированы клинические проявления целиакии у пациентов с двумя вариантами сочетания совместно встречающихся специфичностей. Все взрослые пациенты были разделены на две подгруппы:

1. Первая подгруппа-НЬА-В*08; ПЬА-ОГШ1*03; НЬЛ-ПОВ1*02;

2. Вторая подгруппа - НЬЛ-ОКВ1*07; НЬА-ОСЖ1 *02/НЬА-СОВ 1*03;

Необходимо отметить, что в группу сравнения входили взрослые пациенты разного возраста (средний возраст - 48,4 ± 17,3). При распределении по полу взрослых пациентов было: 3 мужчины и 14 женщин. Статистический анализ не проводился из-за малочисленности группы.

В результате анализа клинических проявлений целиакии в группе сравнения не было выялено разницы между клиническими проявлениями в зависимости от варианта совместно встречающихся НЬА-специфичностей в генотипе пациентов.

Анализ клинических проявлений целиакии в основной группе и группе сравнения не показал зависимость от варианта совместно встречающихся НЬА-специфичностей в генотипе пациентов и клиническими проявлениями. Различия в течении заболевания целиакии у детей и взрослых были связаны с особенностями диагностики и клиническими проявлениями целиакии в разных возрастных группах.

Таким образом, в результате проведенных исследований были выявлены маркеры генетической предрасположенности к ГЦ и факторы риска возникновения заболевания ГЦ у детей и взрослых московской популяции с учетом иммуногенетических характеристик. Были охарактеризованы ассоциации специфичностей НЬА, частота встречаемости заболевания ГЦ у детей и взрослых московской популяции. Была показана необходимость современной молекулярной диагностики наряду с клиническими методами на ранних этапах развития заболевания ГЦ. Данные о распределении специфичностей системы НЬА у здорового детского населения и пациентов с ГЦ, характерные для московской популяции, полученные молекулярным методом ПЦР, необходимы для полной информации о больном и, в дальнейшем, для создания регистра больных ГЦ.

ВЫВОДЫ

1. В группе детей с ГЦ выявлены положительные ассоциации данного заболевания с НЬА-специфичностями: НЬА-В*08 - (£-0,1964; ЯЛ-3,265; 0113,378; ЕР=13,83%); НЬА-011В1*03 - (£-0,2143; Ы1-3,764; 011-3,926; ЕР=15,97%); ПЬА-Б11В 1*07 - (£-0,2500; 1111-2,062; 011-2,096; ЕБ =14,01%); НЬА-00>В1*02 - (£-0,4286; 1111-2/733; 011-2,798; ЕБ = 27,54%).

2. В группе взрослых пациентов с ГЦ выявлены положительные ассоциации данного заболевания с НЬА-специфичностями: НЬА-В*08 - (£-0,4412; Ы1-10,28; 011-10,91; ЕЕ=40,07%); НЬА-Сш*07 - (£-0,5294; №-3,198; 0Я-3,247; ЕЕ=36,64%); ПЬА-Ш1В1*03 - (£0,4706; ЯЯ-11,94; ОЯ-12,80; ЕР=43,38%); НЬА-ОЯВ1*07 - (£-0,2647; И1-2,810; 011-2,846; ЕЕ=34,34%); НЬА-ОС>В1*02 - (£-0,7647; ЮМ 1,69; 011-12,12; ЕР=70,16).

3. Генетическими маркерами ГЦ у взрослых и детей являются специфичности НЬА-В*08, НЬА-01Ш1*03, ПЬА-ПЯВ1*07 и НЬА-0<ЗВ1*02.

4. В группах детей и взрослых с ГЦ выявлены отрицательные ассоциации с данным заболеванием по специфичностям HLA- DQB1*05 и HLA-DQB1*06.

5. Генетическими маркерами ГЦ являются совместно встречающиеся HLA-специфичности, дающие статистически достоверную положительную ассоциацию с целиакией: HLA-B*08;HLA-DRB1*03;HLA-DQB1*02 (у детей - 37,7%; RR-6,253; OR-6,654; EF=30,35%; у взрослых - 70,59%; RR-26,42; OR-28,75; EF=68,13%); HLA-DRB1 *07;HLA-DQB 1 *02/HLADQBl *03 (y детей - 35,7%; RR-4,778; OR-5,000; EF=28,57%; у взрослых - 23,53%%; RR-4,883; OR-5,032; EF=23,57%).

6. Дети, имеющие в своем генотипе совместно встречающиеся специфичности HLA-B*08; HLA-DRB 1*03; HLA-DQB1*02 и/или HLA-DRB 1*07; HLA-DQB1*02/HLADQB1*03, являются группой повышенного риска и нуждаются в наблюдении.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные молекулярным методом ПЦР данные распределения генов HLA-системы у здорового детского населения и пациентов с ГЦ, характерные для московской популяции, рекомендуется использовать для проведения подобных исследований в медицинских учреждениях аналогичного профиля других регионов России для выявления групп риска и создания регистра больных ГЦ.

2. Полученные отдельные HLA-специфичности (HLA-B*08, HLA-DRB 1*03, HLA-DRB 1 * 07 и HLA-DQB1 *02) у детей и взрослых с ГЦ рекомендуется использовать в качестве маркеров при диагностике заболевания.

3. Полученные сочетания HLA-специфичностей (HLA-B*08; HLA-DRB1*03; HLA-DQB1*02 и HLA-DRB 1*07; HLA-DQB1 *02/HLADQB 1*03) в группах пациентов (у детей и взрослых) с ГЦ следует учитывать при анализе генотипов в качестве генетических маркеров при выявлении групп риска и диагностике заболевания.

4. Выявление у новорожденных детей специфических маркеров системы HLA молекулярным методом ПЦР рекомендуется учитывать как фактор риска развития заболевания и для генетического прогнозирования в семьях больных ГЦ.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ НАУЧНЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Пухпикова Т.В. Значение генетических факторов в развитии целиакии у детей. / Пухликова Т.В., Лебедева Л.Л., Потапова Т.Н., Рославцева Е.А., Астрелина Т.А., Яковлева М.В.: Тезисы докладов. XIV Конгресс педиатров России с международным участием «Актуальные проблемы педиатрии». - Москва. - 15-18 февраля 2010г.-№ 656. - с. 658.

2. Лебедева Л.Л. Иммуногенетические факторы предрасположенности и резистентности к острому лимфобластному лейкозу у детей. / Лебедева Л.Л., Потапова Т.Н., Пухликова Т.В., Ставцев Д.С., Астрелина Т.А., Яковлева М.В.: Тезисы докладов. XIV Конгресс педиатров России с международным участием «Актуальные проблемы педиатрии». - Москва. - 15-18 февраля 2010г. - № 478. -с.480.

3. Лебедева Л.Л. Ассоциации антигенов HLA системы с хроническим миелолейкозом у детей. / Лебедева Л.Л., Потапова Т.Н., Пухликова Т.В., Ставцев Д.С., Астрелина Т.А., Яковлева М.В.: Тезисы докладов. XIV Конгресс педиатров

России с международным участием «Актуальные проблемы педиатрии». - Москва. -15-18 февраля 201 Ог. - № 479. - с.481.

4. Лебедева JI.JT. Взаимосвязь антигенов HLA системы с различными морфологическими вариантами острого миелоидного лейкоза у детей. / Лебедева Л.Л., Потапова Т.Н., Пухликова Т.В., Ставцев Д.С., Астрелина Т.А., Яковлева М.В.: Тезисы докладов. XIV Конгресс педиатров России с международным участием «Актуальные проблемы педиатрии». Москва. - 15-18 февраля 2010г. - № 480. - с. 482.

5. Lebedeva L. Estabilishment of typing strategy in Moscow Stem Cell Bank. / Lebedeva L., Potapova T., Puchlikova T., Astrelina T., Yakovleva M.V. // Book of Abstracts & Scietific Program. 5th East-West Immunogenetics Conference. Pilsen, Czech Republic. -4-5 March, 2010.-p. 29.

6. Lebedeva L.L. Nature of HLA-associated factors of predisposition and resistency in acute lymphoblastic leukemia. / Lebedeva L.L., Potapova T. N., Puhlikova T.V., Stavtsev D.S., Skorobogatova E.V., Astrelina T.A., Yakovleva M.V. // Abstracts. Bone Marrow Transplantation, 36-st Annual Meeting of the European Group for Blood and Marrow Transplantation 26-st Meeting of the Nurses Group 9th Meeting of the EBMT Data Management Group, 2-nd EBMT Quality Management Meeting.- Vienna, Austria. -March 21-24,2010. - P - 409. -S85.

7. Puchlikova' T. Genetic factors in development of children coeliac diseases. / Puchlikova T., LebedevaL., Potapova T., Roslavtseva E., Astrelina T., Yakovleva M.V. // Abstracts. 26-th International Pediatric Association Congress of Pediatrics (IP A). - 2010. - South Africa. - 4-9 August 2010. - abstract &P.673.

8. Лебедева ЛЛ. Стратегия HLA-типирования в Московском банке стволовых клеток. / Лебедева Л.Л., Потапова Т.Н., Пухликова Т.В., Астрелина Т.А., Яковлева М.В.: Тезисы докладов. III научно-практическая конференция «Современные технологии и методы диагностики различных групп заболеваний, лабораторный анализ». - Москва -13-14 мая 2010..- Научное издание - тезисы докладов. - с. 19-20.

9. Пухликова Т.В. Значение генетических факторов в развитии целиакии у детей в г. Москве. / Т.В. Пухликова, Л.Л. Лебедева, Т.Н. Потапова, Е.А. Рославцева, Е.А. Сабельникова, Т.А. Астрелина, М.В. Яковлева: Тезисы докладов. III научно-практическая конференция «Современные технологии и методы диагностики различных групп заболеваний, лабораторный анализ». - Москва - 13-14 мая 2010..-Научное издание. - тезисы докладов. - с. 20-21.

10. Lebedeva L. Study on the corelation between of HLA genes and chronic myeloid leukemia in children. / Lebedeva L., Potapova T., Puchlikova T., Astrelina T. // Abstracts. 24-th European Immunogenetics and Histocompatibility Conference (EFI) and 17-th Annual Meetting of the Italian Society for Immunogenetics and Transplantation (AIBT). - Tissue Antigenes. - 2010. - Vol. 75(№5). - p. 636. - P.360.

11. Lebedeva L. Immunogenetic factors of predisposition in acute lymphoblastic leukemia. / Lebedeva L., Potapova T., Puchlikova T., Astrelina T. // Abstracts. 24-th European Immunogenetics and Histocompatibility Conference (EFI) and 17-th Annual Meeting of the Italian Society for Immunogenetics and Transplantation (AIBT). - Tissue Antigenes. - 2010. - Vol. 75(№5). - p. 636. - P361.

12. Lebedeva L. Communication of HLA assotiation genes in chronic children with acute myeloid leukemia. / Lebedeva L., Potapova T., Puchlikova T., Astrelina T. // Abstracts. 24-th European Immunogenetics and Histocompatibility Conference (EFI) and 17-th

Annua] Meeting of the Italian Society for Immunogenetics and Transplantation (AIBT). -Tissue Antigenes. - 2010. - Vol. 75(№5). - p. 636. - P359.

13. Пухликова T.B. Значение генетических факторов в развитии целиакии. / Т.В. Пухликова, JI.J1. Лебедева, Т.Н. Потапова, Е.А. Рославцева, Е.А. Сабельникова, Т.А. Астрелина, М.В. Яковлева / М.: Вопросы современной педиатрии. - 2010. - 9 (№4).-с. 24-27.

Список сокращений

ГУЗ «БСК ДЗМ» - Государственное учреждение здравоохранения города Москвы «Банк стволовых клеток Департамента здравоохранения города Москвы» ГЦ - глютенчувствительная целиакия ПЦР- полимеразная цепная реакция

ЦНИИ Гастроэнтерологии - Центральный научно-исследовательский институт

гастроэнтерологии

Cl - доверительный интервал

EF - этиологическая фракция

f- частота встречаемости специфичности

HLA - человеческие лейкоцитарные антигены (Human leukocyte antigen) МНС - главный комплекс гистосовместимости (Major Histocompatibility Complex) OR (odds ratio) - однофакторное отношение шансов PF - превентивная фракция

RR (relative risk) - относительный риск возникновения заболевания SSO (Sequence Specific Oligonucleotides) - метод гибридизации с помощью олигонуклеотидных зондов

SSP (Sequence Specific Primer) - метод ПЦР с помощью аллель-специфических праймеров

ПУХЛИКОВА ТАТЬЯНА ВЛАДИМИРОВНА (Россия)

Значение иммуногенетических факторов в развитии Глютенчувствительной целиакни

Проведен молекулярно-генетический анализ полиморфизма генов главного комплекса гистосовместимости (системы НЬА) у здорового детского населения московской популяции и у детей и взрослых пациентов, больных Глютенчувствительной целиакией (ГЦ). Выполнено генотипирование локусов НЬА-А, НЬА-В, НЬА-Сте, НЬА-01Щ1 и НЬА-Э0В1 на уровне групп аллелей НЬА-генов (специфичностей) в образцах периферической крови 28 детей и 17 взрослых пациентов с установленным диагнозом ГЦ, а также в 1700 образцах пуповинной крови новорожденных условно здоровых детей. Впервые изучен профиль распределения генов НЬА класса I и II у взрослого и детского населения с ГЦ московской популяции. Впервые выявлены НЬА-маркеры предрасположенности к заболеванию ГЦ, сочетания генетических маркеров, определяющие риск возникновения заболевания ГЦ и маркеры устойчивости к ГЦ. Результаты исследования рекомендуются к использованию в научных исследованиях и практической медицине для выявления групп риска, генетического прогнозирования и создания регистра больных ГЦ.

PUKHLIKOVA TATYANA VLADIMIROVNA The value of immunogenetic factors in the development of celiac disease

A molecular genetic analysis of gene polymorphism of Major Histocompatibility Complex (HLA system) was conducted in a healthy child population of Moscow and in children and adult patients with celiac disease (CD). The genotyping of loci HLA-A, HLA-B, HLA-Cw, HLA-DRB1 and HLA-DQB1 was completed on groups level of HLA-genes alleles (specificity) in peripheral blood samples of 28 children and 17 adult patients with established diagnosis of CD, and also among 1700 samples of umbilical cord blood of newborns of conditionally healthy childaen. First studied the distribution profile of genes of HLA class I and II in children and adult Moscow population with CD. For the first time HLA-markers of predisposition to CD was identified, a combination of genetic markers that determine the risk of CD and markers of resistance to CD. Results of the investigation are recommended for use in research and clinical practice for identifying of risk groups, genetic prediction and establishment of a database of patients with CD.

Подписано в печать:

08.10.2010

Заказ № 4248 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Пухликова, Татьяна Владимировна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Современные представления о строении и функциях МНС.

1.1.1.История МНС.

1.1.2. Строение главного комплекса тканевой совместимости.

1.1.3. HLAI класса.

1.1.4. HLAII класса.

1.1.5 Механизмы образования комплексов антигенных пептидов с молекулами МНС I и II классов.

1.1.6. Генетический полиморфизм и номенклатура главного комплекса гистосовместисости.

1.2. Глютенчувствительная целиакия.

1.2.1. История целиакии.

1.2.2. Распространенность целиакии.

1.2.3. Классификация и клинические формы глютенчувствительной целиакии.

1.2.4. Генетические факторы целиакии. Механизм запуска целиакии молекулами HLA-DQ2 и HLA-DQ8.

1.2.5. Значение cis - и trans - положения генов.

1.2.6. Роль гаплотипов HLA в развитии целиакии.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Материал исследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Получение материала.

2.2.2. Выделение ДНК из биоматериала.

2.2.3. Измерения характеристик ДНК на спектрофотометре.

2.2.4. Молекулярные методы типирования.

2.2.5.Генотипирование методом гибридизации с помощью олигонуклеотидных зондов.

2.2.6. Генотипирование методом ПЦР с помощью аллель-специфических праймеров.

2.3. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. Особенности НЬА - генотипов у пациентов с глютенчувствительной целиакией и здоровых доноров московской популяции.

3.1. Сравнение частоты встречаемости специфичностей локусов

НЬА у здоровых доноров и пациентов с целиакией.

3.2. Риск развития заболевания.

3.3. Сочетание специфичностей в генотипе.

3.3.1. Частота встречаемости групп специфичностей.

Риск развития заболевания.

3.4. Ассоциации между НЬА-специфичностями главного комплекса гистосовместимости и клиническими формами целиакии у пациентов основной группы.

3.5. Ассоциации между НЬА-специфичностями главного комплекса гистосовместимости и клиническими признаками целиакии у пациентов группы сравнения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Значение иммуногенетических факторов в развитии глютенчувствительной целиакии"

Большие успехи в конце прошлого столетия были достигнуты в диагностике заболевания Глютенчувствительная целиакия (ГЦ). До 80-х годов прошлого века ГЦ считалась редким заболеванием, распространенность ее составляла от 1 : 1000 до 1 : 3000 в общей популяции [8, 11, 12]. В настоящее время частота заболеваемости в Европе составляет около 0,4 - 1% населения [32, 44, 75]. Частота заболеваемости в различных странах закономерно возрастает с увеличением настороженности врачей по отношению к ГЦ, улучшением диагностики, применением скрининговых программ [55, 57, 100].

Известно, что более 5% населения имеет генетическую предрасположенность к ГЦ. Механизм наследования ГЦ относится к аутосомно-доминантному типу с неполной пенетрантностью [6; 11; 12]. В настоящее время выявлена ассоциация заболевания с антигенами главного комплекса гистосовместимости человека НЬА-БС)2 (Б(ЗА1*0501, БдВ1*0201) и НЬА-Од8 (БдА1*0301, Б(ДО*0302) [6; 11; 98; 107; 141]. Гетеродимер БС>2 обнаруживается приблизительно у 90-95% больных целиакией [11; 12; 98]. Он сформирован бетта цепочкой, кодируемой аллелями БС^В 1*0201 или БС^В 1*0202, и альфа цепочкой, кодируемой аллелями БС>А1*05. Однако аллель НЬА-БС)2 является распространенной в популяции, она определяется приблизительно у 30% белых европейцев без всяких признаков заболевания ГЦ [6; 11; 155]. Гетеродимер БС)8, связаный с целиакией, присутствует у 5-10% больных. Он также сформирован альфа и бетта цепочками, кодируемыми БС>В1*0302 и БС)А1*03 соответственно [6; 31]. Некоторые исследователи отмечают ассоциацию целиакии с антигенами В8 и БЫЗ [6].

Накоплено значительное количество данных о том, что при возникновении ГЦ важную роль играет наличие определенных антигенов и комбинация, генов НЪА I и II классов - гаплотипов [57; 108]. Во многих исследованиях отмечается, что именно комбинация гаплотипов дает более сильную ассоциацию с целиакией [57]. Однако суммарная роль НЬА-гаплотипов в определении клинических результатов глютеновой энтеропатии остается до сих пор не изученной.

Стратегия применения новых молекулярно-генетических диагностических методов исследования до сих пор еще не ясна. До настоящего времени предпринимались лишь, немногочисленные попытки изучения? генетической предрасположенности и риска возникновения заболевания ГЦ с учетом иммуногенетических характеристик. Не охарактеризованы частота встречаемости генетических факторов, связь их с клиническими формами, с возрастом-: и. полом? развития заболевания ГЦ у взрослой и детской популяции. Исходя из выше изложенного, настоящее исследование представляется актуальным:

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучить: , генетическую предрасположенность развития, ГЦ с учетом иммуногенетических характеристик и клинических форм у взрослых и детей.,

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Проанализировать частоту встречаемости всех групп аллелей (специфичностей) генов НЬА-системы у больных ГЦ и здоровой популяции, московского населения.

- 2. Выявить НЕА- маркеры диагностики заболевания у пациентов с ГЦ.'

3. Выявить сочетания НЬА,- маркеров ГЦ в генотипе у детей и взрослых пациентов:

4. Установить ассоциации между НЬА-специфичностями главного комплекса гистосовместимости и клиническими формами, возрастом и полом у пациентов, больных ГЦ.

5. Обосновать необходимость использования современных молекулярно-генетических методов исследования в качестве дополнительных при диагностике заболевания ГЦ.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые в московском регионе проведено НЬА - генотипирование детей и взрослых, больных ГЦ, современным молекулярно-генетическим методом ПЦР.

Впервые изучен профиль распределения генов НЬА класса I и II у взрослого и детского населения с ГЦ московской популяции. 1

Впервые выявлены генетические маркеры заболевания ГЦ НЬА-В*08, НЬА-ОКВ1*03, НЬАЛЖВ1*07 и НЬА-БС>В1*02 у взрослого и детского населения московской популяции, определяющие риск возникновения заболевания.

Впервые выявлены сочетания генетических маркеров заболевания ГЦ у детей и взрослых НЬА-В*08; НЬА-ВКВ1*03; НЬА-ОС>В1*02 и НЬА-ВЫВ1*07; НЬ А-БС)В 1 * 02/НЬ АБС>В 1*03, определяющие риск возникновения заболевания.

Выявлены отрицательные ассоциации с заболеванием ГЦ по группам аллелей НЬА-Б<ЗВ1*05 и НЬА-БС)В1*06.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

В результате исследования на основе тестирования с помощью молекулярно-генетического метода НЬА-типирования полиморфных НЬА-генов были выявлены маркеры диагностики ГЦ НЬА-В*08, НЬА-ОЫВ1*03, НЬА-ВШ31*07 и НЬА-ВС>В1*02 у детей и взрослых московской популяции. Показаны сочетания генетических маркеров заболевания ГЦ у детей и взрослых НЬА-В*08; НЬА-ВКВ1*03; НГА-Б(2В1*02 и НЬА-БКВ1*07; НЬА-ВрВ1*02/НЬАЕ)С)В1*03, каждое из которых можно рассматривать как генетический маркер. Вероятное прогнозирование риска развития ГЦ на основе анализа полиморфных НЬА-генов позволит верифицировать диагноз на начальных этапах её развития.

Данные о генетических маркерах заболевания ГЦ позволяют врачам-гастроэнтерологам, терапевтам и педиатрам своевременно диагностировать заболевание, выявлять группу риска и проводить генетическое прогнозирование в семьях больных ГЦ, что имеет большую практическую значимость. Результаты выполненной работы создают дополнительную базу для создания регистра больных ГЦ. Практическое значение работы подтверждает качество использованного молекулярного метода НЬА-типирования. Использование этого метода позволяет изучить характер распределения и частоту встречаемости генов НЬА-системы среди детей и взрослых, больных ГЦ, и здорового детского населения московской популяции.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Полиморфизм генов и их белковых продуктов МНС позволяет изучить характер распределения специфичностей НЬА-системы у детей и взрослых, больных ГЦ.

2. Изучение иммуногенетических особенностей у детей и взрослых, больных ГЦ, позволяет обнаружить маркеры НЬА-В*08, НЬА-ОКВ1*ОЭ, НЬА-01Ш1*07 и HLA-DQB1*02, определяющие риск к возникновению заболевания.

3. Изучение отдельных НЬА -специфичностей и сочетаний генетических маркеров заболевания ГЦ НЬА-В*08;НЬАЛЖВ1*03;НЬА-0<ЗВ1*02 и НЬ А-ОЯВ1 * 07 ;НЬ А-БС^В1 * 02/НЬ АБС^В 1*03 позволяет использовать их как дополнительный диагностический и прогностический признак у детей и взрослых.

4. Выявленные отрицательные ассоциации с ГЦ по группам аллелей НЬА-ОС)В1*05 и НЬА-ЭС)В1*06 свидетельствуют об устойчивости к заболеванию.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Пухликова, Татьяна Владимировна

ВЫВОДЫ

1. В группе детей с ГЦ выявлены положительные ассоциации данного заболевания с НЬА-специфичностями: НЬА-В*08 - (£-0,1964; 1111-3,265; (Ж-3,378; ЕР=13,83%); НЬА-БЫВ1*03 - (Г-0,2143; 141-3,764; (Ж-3,926; ЕР=15,97%); НЬА-БКВ1*07 - (£-0,2500; 141-2,062; (Ж-2,096; ЕР =14,01%); НЬА-ВС)В1*02 - (£-0,4286; 141-2,733; СЖ-2,798; ЕР = 27,54%).

2. В группе взрослых пациентов с ГЦ выявлены положительные ассоциации данного заболевания с НЬА-специфичностями: НЬА-В,*08 - (£-0,4412; 141-10,28; СЖ-10,91; ЕР=40,07%); НЬА-Сш*07 - (£-0,5294; 141-3,198; СЖ-3,247; ЕР=36,64%); НЬА-ББШ1*03 - (£-0,4706; 141-11,94; (Ж-12,80; ЕР=43,38%); НЬА-ОКВ1*07 - (£-0,2647; 141-2,810; (Ж-2,846; ЕР=34,34%); НЬА-Б(2В1*02 - (£-0,7647; 141-11,69; (Ж-12,12; ЕР=70,16).

3. Генетическими маркерами ГЦ у взрослых и детей являются специфичности НЬА-В*08, НЬА-Б1Ш1*03, НЬА-ОКВ1*07 и НЬА-Б(ЗВ1*02.

4. В группах детей и взрослых с ГЦ выявлены отрицательные ассоциации с данным заболеванием по специфичностям НЬА- БС>В1*05 и НЬА-БС)В1*06.

5. Генетическими маркерами целиакии являются совместно встречающиеся НЬА-специфичности, дающие статистически достоверную положительную ассоциацию с целиакией: НЬА-В*08; НЬА-ОЫВ1*03; НЬА-БдВ1*02 (у детей - 37,7%; 141-6,253; (Ж-6,654; ЕР=30,35%; у взрослых - 70,59%; 141-26,42; СЖ-28,75; ЕР=68,13%); НЬА-БКВ1*07; НЬ А-БС^В 1 *02/НЬ АБС^В1 *03 (у детей - 35,7%; Б41-4,778; СЖ-5,000; ЕР=28,57%; у взрослых - 23,53%; 141-4,883; СЖ-5,032; ЕР=23;57%).

6. Дети, имеющие в своем генотипе совместно встречающиеся специфичности НЬА-В*08; НЬА-ОКВ1*03; НЬА-ОС>В1*02 и/или НЬА-БКВ1*07; НЬА-В(2В1*02/НЬАВС>В1*03, являются группой повышенного риска и нуждаются в наблюдении.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные молекулярным методом ПЦР данные распределения генов НЬА - системы у здорового детского населения и пациентов с ГЦ, характерные для московской популяции, рекомендуется использовать для проведения подобных исследований в медицинских учреждениях аналогичного профиля других регионов России для выявления групп риска и создания регистра больных ГЦ.

2. Полученные отдельные НЬА-специфичности (НЬА-В*08, НЬА-ВКВ1*03, НЬА-БКВ1*07 и НЬА-ОС>В1*02) у детей и взрослых с ГЦ рекомендуется использовать в качестве маркеров при диагностике заболевания.

3. Полученные сочетания НЬА-специфичностей (НЬА-В*08; НЬА-БКВ1*03; НЬА-В(2В1*02 и НЬА-Б1Ш1*07; НЬА-ОС)В 1 * 02/НЬ АЕ)С)В 1*03) в группах пациентов (у детей и взрослых) с ГЦ следует учитывать при анализе генотипов в качестве маркеров при выявлении групп риска и диагностике заболевания.

4. Выявление у новорожденных детей специфических маркеров системы НЬА молекулярным методом ПЦР рекомендуется учитывать как фактор риска развития заболевания и для генетического прогнозирования в семьях больных ГЦ.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Пухликова, Татьяна Владимировна, Москва

1. Вохмянина, Н.В. Генетические маркеры целиакии: Материалы 10-го Славяно-Балтийского научного форума; С.-Пб.: Журнал «Гастроэнтерология Санкт-Петербурга». - 2008. - № 2-3. - С. М23.

2. Вохмянина; Н.В. Соврёменная концепция: диагностики целиакии. / Вохмянина Н.В., Эмануэль В.Л: С.-Пт.: Научно-практический журнал «Клинико-лабораторный консилиум». - 2006. - С.20-22.

3. Генофонд и геногеография народонаселения. /Под ред. Ю. Г. Рычкова: // Том 1. Генофонд населения России и сопредельных стран. СПб.:. Наука: -2000:- 611 с. Электронный ресурс. http://pc601s.vigg.ru/atlas/Cl27.htm.

4. Зарецкая Ю:М. HLA 50 лет: 1958-2008. / Зарецкая Ю.М., Леднев Ю.А. -Тверь: Триада. 2008;-152с. - С. 24-53.

5. Клиническая иммунология и аллергология: Учеб. Пособие. / Под ред., A.B.Караулова. М.: МИА. - 2002. - С. 54-157.

6. Клинические аспекты целиакии у детей: пособие • для практикующих врачей педиатров. / H.A. Коровина, И.Н.Захарова, Ю.А. Лысиков и др. - М.: МсдЭксперт! Ipecc, 2007. - 79 с. - С. 8-25.

7. Орешко, JI.C. Роль главного комплекса гистосовместимости при целиакии. / Орешко, JI.C. С.-Пб.: Журнал «Вестник Санкт - Петербургского университета». 2007 - Сер. 11. Вып. 4. - С. 53-56.

8. Парфенов, А.И. Современная концепция, дефиниция и классификация целиакии. / А.И. Парфенов, JI.M. Крумс, Е.А. Сабельникова // Материалы V съезда Научного общества гастроэнтерологов России. — М.: Анахарсис, 2005.- С. 473-475.

9. Парфенов, А.И. Целиакия. Эволюция представлений о распространенности, клинических проявлениях и значимости этиотропной терапии. / А.И. Парфенов. М.: Анахарсис, 2007. - 376 с. С. 14-50, 126-148.

10. Подолъная, М.А. Показатели и методика расчета эпидемиологических характеристик риска. / Подольная М.А., Кобринский Б.А. // Московский НИИ педиатрии и детской хирургии Минздрава РФ. Электронный ресурс. http://nature.web.ru/db/msg.htm.

11. Роит А. Основы иммунологии. / Ройт А. М.: Мир. 1991. - 328 с. - С. 48-64.

12. С. Гланц. Медико-биологическая статистика. / С. Гланц М.: Практика 1999. - 462с. - С. 122-220.

13. Система HLA и патология человека. / Под редакцией A.A. Баранова, Б.С. Каганова, С.А. Шер, А.Е. Богорад. М.: Изд. Дом «Династия». - 2003. -С. 10-25, 73-87.

14. Солдатенкова, В. Почему исследования методом случай — контроль не показали взаимосвязи между синдромом внезапной младенческой смерти и прививками. / Солдатенкова В. // Medical Veritas 4 (2007). P. - 1411-1413. Перевод автора.

15. Хаитов, P.M. Иммунология: учебное пособие. / Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. М.: Медицина. - 2002. - 536 с.

16. Хаитов, P.M. Иммунология: Учебник. / Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. М.: Медицина, 2000. - 432 с. Стр. 126-142.

17. Ярилин, А.А. Основы иммунологии: Учебник. / Ярилин, А.А. М.: Медицина, 1999. - 608 с. - С. 212-230.

18. Abbas, А.К. Cellular and Molecular Immunology. / Abbas A.K., Lichtman A.H., Pillai S. // 6th ed. Philadelphia: Saunders Elsevier. 2007. - 566 p.

19. Agostoni, C. Complementary feeding: a commentary by the ESPGHAN Committee on Nutrition. / Agostoni C, Decsi T, Fewtrell M, et al. // J. Pediatr Gastroenterol Nutr. 2008. Vol. 46. - P. 99-110.

20. Akobeng, A.K. Effect of breast feeding on risk of coeliac disease: a systematic review and meta-analysis of observational studies. / Akobeng A.K., Ramanan A.V., Buchan I., et al. // Arch. Dis. Child. 2006. - Vol. 91. - P. 39-45.

21. Alper, C.A. Extended major histocompatibility complex haplotypes in patients with gluten-sensitive enteropathy. / Alper C.A., Fleischnick E., Awdeh Z. Et al. //J. Clin. Invest. 1987. - Vol.79. - P. 251-256.

22. Anderson, R.P. Coeliac disease. / Anderson, R.P. // Aust. Fam. Physician. -2005. Vol. 34(4). - P. 239-242.

23. Anderson, O. D. Identification of several new classes of low-molecular-weight wheat gliadin-related proteins and genes. / Anderson, O. D., Hsia, С. C.,

24. Adalsteins, A. E., Lew, E. J.-L., and Kasarda, D. D. // Theor. Appl. Genet. 2001. -Vol.103.-P. 307-315.

25. Arentz-Hansen, H. The intestinal T cell response to a-gliadin in adult celiac disease is focused on a single deamidated glutamine targeted by tissue transglutaminase. / Arentz-Hansen H., et al. // J. Exp. Med. 2000. - Vol. — 191. -P. 603-612.

26. Baldas, V. Development of a novel rapid non-invasive screening test for celiac disease. / Baldas V., Tommasini A., Trevisiol C., Berti I., Fasano A., Sblattero D., Bradbury A., Marzari R., Ventura A., Not T.// Gut. 2000. - Vol. 47. -P 628-631.

27. Bjorkman, P.J. Structure, function and diversity of class I major histocompatibility complex molecules. / Bjorkman P.J., Parham P. // Ann. Rev. Biochem. 1990. - Vol. 59. - P. 253-88.

28. Bjorkman, P.J. The foreign antigen binding site and T cell recognition regions of class I histocompatibility antigens. / Bjorkman P.J., Saper M.A., Samraoui B., Bannett W.S., Strominger J.L. Wiley D.C. // Nature. 1987. - Vol. 329.-P. 512 - 8 -b.

29. Bonamico, M. Radioimmunoassay to detect antitransglutaminase autoantibodies is the most sensitive and specific screening method for celiac disase. / Bonamico M, Tiberty C, Picarelli A, et al. // Am. J. Gastroenterol. -2001.-Vol. 96.-P. 1536-1540.

30. Borghans, J. A. MHC polymorphism under host-pathogen coevolution. / Borghans J.A., Beltman J.B., De Boer R.J. // Immunogenetics. 2004. - Vol. 55(11). - P. 732-739. Epub 2004 Jan 13.

31. Bronstein, H. D., Haeffner, L. J., and Kowlessar, O. D. / Enzymatic digestion of gliadin: The effect of the resultant peptides in celiac disease. // Clin. Chim. Acta. 1966. - Vol. 14. - P. 141-155.

32. Brown, J.N. Three-dimensional structure of the human class II histocompatibility antigen HLA-DR1. / Brown J.N., Jardetzky T.S., Gorga J.C., Stern L.J., Urban R.G., Strominger J.L., Wiley D.C. // Nature. 1993. - Vol. 364(6432).-P. 33-39.

33. Browning, M. HLA and MNC: genes, molecules and function. / Browning M., McMichael A. // Oxford: BIOS Scientific Publishers Ltd. 1996. - P.353-73.

34. Carbone, F.R. The role of dendritic cell subsets in immunity to viruses. / Carbone F.R., Heath W.R. // Curr. Opin. Immunol. 2003. - Vol. 15(4). - P. 416420.

35. Catassi, C. Association of celiac disease and intestinal lymphomas and other cancers. / Catassi C., Bearzi I., Holmes G.K. // Gastroenterology. 2005. -Vol. 128.-P. 79-86.

36. Catassi, C. The coeliac iceberg in Italy: a multicentre antigliadin antibodies screening for coeliac disease in schoolage subjects. / Catassi C., Fabiani E., Ratsch I.M., et al. // Acta Paediatr. Suppl. 1996. - Vol. 412. - P. 29-35.

37. Cella, M. Origin maturation and antigen presenting function of dendritic cells. / Cella M., Sallusto F.3 Lanzavecchia A. // Curr. Opin. Immunol. 1997. -Vol. 9(1). -P.10-16.

38. Cobden I. Intestinal permeability and screening tests for celiac disease. / I. Cobden, J. Rothwell, A.T.R. Axon // Gut. 1980. - Vol. 21(6). - P.512-518.

39. Collin, P. Diagnosis of celiac disease in clinical practice: physician's alertness to the condition is essential. / Collin P, Huhtala H, Virta L, Kekkonen L, Reunala T. //J. Clin. Gastroenterol. 2007. - Vol. 41. - P. 152-156.

40. Collin, P. Infertility and coeliac disease. / Collin P, Vilska S, Heinonen PK, Hallstrom O, Pikkarainen P. // Gut. 1996. - Vol. 39. - P. 382-384.

41. Corazza, G.R. Coeliac disease in adults. / Corazza GR, Gasbarrini G. // Baillieres Clin. Gastroenterol. 1995. - Vol. 9. - P. 329-350.

42. Counsell, C.E. Coeliac disease and autoimmune thyroid disease. / Counsell C.E., Taha A., Ruddell W.S. // Gut. 1994. - Vol. 35. - P. 844-846.

43. Cronin, C.C. High prevalence of celiac disease among patients with insulin-dependent (type I) diabetes mellitus. / Cronin C.C., Feighery A., Ferriss J.B., Liddy C., Shanahan F., Feighery C. // Am. J. Gastroenterol. 1997. - Vol. 92. - P. 2210-2212.

44. Dausset, J. Iso-leuko-antibodies. / Dausset J. // Acta Haematol. 1958. -Vol. 20.-P. 156-166.

45. De Santis, A. Schizophrenic symptoms and SPECT abnormalities in a coeliac patient: regression after a gluten-free diet. / De Santis A., Addolorato G., Romito A., et al. // J. Intern. Med. 1997. - Vol. 242. - P. 421-423.

46. Dickey, W. Increasing numbers at a specialist celiac clinic: Contribution of serological testing in primary care. / Dickey W, McMillan S. // Dig. Liver Dis. -2005.-Vol. 37.-P. 928-33.

47. Dieterich, W. Pathomechanisms in Celiac Disease. / Dieterich W., Esslinger B., Schuppun D. // Int. Arch. Allergy Immunol. 2003. - Vol. 132. - P. 98-108.

48. Distefano, R. Prevalence of HLA haplotipes related to Celiac Desiase in the province of Ragusa (Sicili). / Distefano R., Bonomo L., Travali S., Scrofani E., Bonomo P. // Tissue Antigens. 2010. - Vol. 75. - P. 608.

49. Erlich, H.A. Utility of HLA population genetic studies. / Erlich H.A., Mack S.J. // In: Immunobiology of Human MHC. Proceedings of the 13th international histocompatibility workshop and congress. 2006. - P.71-80.

50. Evseeva, I. HLA profile of three ethnic groups living in the North-Western region of Russia. / Evseeva I., Spurkland A., Thorsby E., Smerdel A., Trenebjaerg L., Boldyreva M. et al. // Tissue Antigens. 2002. - Vol. 59(1). - P. 38-43.

51. Falth-Magnusson, K. Infant feeding history shows distinct differences between Swedish celiac and reference children. / Falth-Magnusson K, Franzen L, Jansson G, Laurin P, Stenhammar L. // Pediatr. Allergy Immunol. 1996. - Vol. 7. -P. 1-5.

52. Farrell, R.J. Celiac sprue. / Farrell R.J., Kelly C.P. // N. Engl. J. Med. -2002. Vol. 346. - P. 180-188.

53. Fasano, A. Coeliac disease in children. / Fasano A., Catassi C. // Best Pract. Res. Clin. Gastroenterol. 2005. - Vol. 19. - P. 467-78.

54. Fasano, A. Current approaches to diagnosis and treatment of celiac disease: an evolving spectrum. / Fasano A., Catassi C. // Gastroenterology. 2001. - Vol. 120.-P. 636-51.

55. Feighery, C. Fortnightly review: celiac disease. / Feighery, C. // BMJ -1999. Vol. 319. - P. 236-239.

56. Fleckenstein, B. Molecular characterization of covalent complexes between tissue transglutaminase and gliadin peptides. / Fleckenstein B., Qiao S.W., Larsen M.R. et al. // J.Biol. Chem. 2004. - Vol. 279. - P. 17607-17616.

57. Ford, A.C. Yield of diagnostic tests for celiac disease in individuals with symptoms suggestive of irritable bowel syndrome. / Ford A.C., Chey W.D., Talley N.J., et al. // Arch. Intern. Med. 2009. - Vol. 169(7). - P. 651-658.

58. Frazer, A. C. Gluten-induced enteropathy: The effect of partially digested gluten. / Frazer, A. C., Fletcher, R. F., Ross, C. A. C., Shaw, B., Sammons, H. G., and Schneider, R.// Lancet ii. 1959. - P. 252-255.

59. Gao, G.F. Crystal structure of the complex between human CD8 alfa and HLA A2. / Gao G.F., Tormo J., Gerth U.S., Wyer J.R., McMichael A.J., Stuart D.I. Bell J.I., Jones E.Y., Jakobsen B.K. // Nature. 1997. - Vol. 387 (6633). - P. 630634.

60. George, D. Snell. Studies in histocompatibility. / George D. Snell. // Nobel lecture, 8 Desember, 1980. P. 64-660.

61. Germain, R.N. Structure and function of murine class II major histocompatibility complex genes. / Germain R.N., Braunstein N.S., Brown M.A., Glimcher L.H., Lechler R.I., McCluskeu et al. // Mt. Sinai. J. Med. 1986. - Vol. 53(3).-P. 194-201.

62. Giannotti, A. Coeliac disease in Williams syndrome. / Giannotti A, Tiberio G, Castro M, Virgilii F, Colistro F, Ferretti F, Digilio MC, Gambarara M, Dallapiccola B. // J. Med. Genet. 2001. -Vol. 38. - P. 76-768.

63. Giustiniani, P. Prevalence of Celiac Desiase HLA susceptibility genes in pediatric patients with Down and Williams syndromes. / Giustiniani P., Antonelli E., Amicone E., Capolino R., Isacchi G. // Tissue Antigens. — 2010. Vol. 75. - P. 608.

64. Gobbi, G. Coeliac disease, epilepsy and cerebral calcifications. / Gobbi G., Bouquet F., Lambertini A., et al. // Lancet. 1992. - Vol. 340. - P. 439-352.

65. Green, P.K Celiac disease. / Green P.H., Cellier C. // N. Engl. J. Med. -2007.-Vol. 357.-P. 1731-1743.

66. Green, P.H. The many faces of celiac disease: clinical presentation of celiac disease in the adult population. / Green PH. // Gastroenterology. 2005. Vol. 128. -P. 74-78.

67. Heath, W.R. Cross-presentation, dendritic cells, tolerance and immunity. / Heath W.R., Carbone F.R. // Annu. Rev. Immunol. 2001. - Vol. 19. - P.47-64.a

68. Hill, J. A. Immunogenetics and genomics. / Hill J.A. // Lancet. 2001. - Vol. 357 (9273).-P. 2037-2041.

69. Hoffenberg, E. J. A trial of oats in children with newly diagnosed celiac disease. / Hoffenberg E. J., Haas J., Drescher A., Barnhurst R., Osberg I, Bao F, and Eisebarth G.// J. Pediatr. 2000. - Vol. 137. - P. 361-366.

70. Holmes, G. Malignancy in celiac disease effect of gluten free diet. / Holmes G, Prior P., Lane M., et al. // Gut. - 1989. - Vol. 30. - P. 333-338.

71. Howell, M.D. An HLA-D region restriction fragment length polymorphism associated with celiac disease. / Howell M.D., Austin R.K., Kelleher D., Nepom G.T., Kagnoff M.F. // J. Exp. Med. 1986. - Vol. 164. - P. 333-338.

72. Hung, J.C. Coeliac disease in children of West Indian Origin. / Hung J.C., Phillips A.D., Walker-Smith J.A. // Arch. Dis. Child. 1995. - Vol. 73. P. 166167.

73. Ivarsson, A. Breast-feeding protects against celiac disease. / Ivarsson A, Hernell O, Stenlund H, Persson LA. // Am. J. Clin. Nutr. 2002. - Vol. 75. - P. 914-921.

74. Jill, M. Risk of Celiac disease autoimmunity and timing of gluten introduction in the diet of infants at increased risk of disease. / Jill M. Norris,

75. Katherine Barriga, Edward J. Hoffenberg, et al. // JAMA. 2005. - Vol. 293 (19). -P. 2343-2351.

76. Johansen, B.H. Identification of a putative motif for binding of peptides to HLA-DQ2. / Johansen B.H., Vartdal F., Eriksen J.A., Thorsby E., Sollid L.M. // Int. Immunol. 1996. - Vol. 8. - P. 17-182.

77. Jones, E.Y. MHC class II proteins and disease: a structural perspective. / Jones E.Y., Fugger L., Strominger J.L., Siebold C. // Nat. Rev. Immunol. 2006. — Vol. 6. P. 271-282.

78. Kagnoff, M.F. HLA genes in coleac disease. / Kagnoff M.F. // Eds. S.G.L. Auricchio, L. Maiuri, R. Troncone. Naples, Italy. ///JCG Editions. - 2000. - P. 514.

79. Kagnoff, M. f Possible role for a human adenovirus in the pathogenesis of celiac disease. / Kagnoff, M. f., Austin, R. F., Hubert, J. J., Bernardin, J. E., and Kasarda, D. D. // J. Exp. Med. 1984. Vol. 160. - P. 1544-1547.

80. Kasarda, D. D. Celiac Disease. / Kasarda D. D. (Eds. K. F. Kiple and K. Conee Ornelas) // In: The Cambridge World History of Food. 2000. - Vol. I. - P. 1008-1022.

81. Kati, K. Dissecting genetic susceptibility to gluten sensitivity: HLA-linked risk factors in coeliac disease and dermatitis herpetiformis. / Kati K. // Academic dissertation. Helsinki. 2003. - P. 28-29.

82. Kim, C.Y. Structural,basis for HLA-DQ2-mediated presentation of gluten epitopes in celiac disease. / Kim C.Y., Quarsten H., Bergseng E., Khosla C., Sollid L.M. //Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. -2004. Vol. 101. - P. 4175-4179.

83. Koeleman, B.P.C. Genotype effects and epistasis in type 1 diabetes and HLA-DQ trans dimer associations with disease. / Koeleman B.P.C., et al. // Genes Immun. 2004. Vol. 5. - P. 381-388.

84. Krauss, N. Monitoring nonresponsive patients with celiac disease. / Krauss N, Schuppan D. // Gastrointest Endosc. Clin. N. Am. 2006. - Vol. 16. - P. 31727.

85. Lanzavecchia, A. Regulation of T cell immunity by dendritic cells. / Lanzavecchia A., Sallusto F. // Cell: 2001. - Vol. 106(3). - P. 263-266.

86. Larsen, C.E. The genetics of HLA associated disease. / Larsen C.E.,

87. Alper C.A. // Curr. Opin. Immunol. 2004. - Vol. 16(5). - P. - 660-667.

88. Leffler, D.A. Update on the evaluation and diagnosis of celiac disease. / Leffler D.A., Kelly C.P. // Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol. 2006. - Vol. 6(3).-P. 191-196.

89. Liu, E. Genetic testing for celiac disease. / Liu E. // MLO Med. Lab. Obs. — 2006.-Vol. 38.-P. 10-13.

90. Lo, W. Changing presentation of adult celiac disease. / Lo W., Sano K., Lebwohl B., Diamond B., Green P.H. // Dig. Dis. Sci. 2003. - Vol. 48. - P. 395398.

91. Lopez-Vazquez, A. MHC class I region plays a role in the development of diverse clinical forms of celiac disease in a Saharawi population. / Lopez-Vazquez A., Fuentes D., Rodrigo L., Gonzalez S., Moreno M., Fernandez E., Martinez

92. Borra J., Lopez-Larrea C. // Am. J. Gastroenterol. 2004. - Vol. Apr. 99(4). - P. 662-667.

93. Louca, A.S. HLA in celiac disease: unraveling the complex genetics of a complex disorder. /A.S. Louka, L.M. Sollid. // Tissue Antigens. 2003. - Vol. 61. -P. 105-117.

94. Lundin, K.E.A. Gliadin-specific, HLA-DQ (al*0501, 01*0201) restricted T cells isolated from the small intestinal mucosa of celiac disease patients. / Lundin K.E.A., et al. // J. Exp. Med. 1993. Vol. 178. - P. 18 -196.

95. Madden, D.R. The three-dimensional structure of peptide MHC complexes. / Madden D.R. // Annu. Rev. Immunol. 1995. - Vol. 13. - P.587-622.

96. Maki, M. Serological markers and HLA genes among healthy first-degree relatives of patients with coeliac disease. / Maki M., Holm K., Lipsanen V., et al. // Lancet. 1991.-Vol. 338.-P. 1350-1353.

97. Maki M., and Collin P. 1997. / Coeliac Disease. // Lancet 349:1755-1759.

98. Makovicky, P. Histopathological diagnosis of celiac disease in adults with functional dyspeptic syndrome. / Makovicky P, Makovicky P, Gregus M, et al. // Cesk. Patol. 2008. - Vol. 44(1). - P. 16-19.

99. Marsh, M. N. Intestinal lymphocyte responses to in vivo gluten challenge. // Marsh M. N., Morgan S., Moriarty K. J., and Ensari A. In: Coeliac Disease,

100. Proceedings of the 7th International Symposium on Coeliac Disease, 1996, Tampere, Finland), Eds., M. Maki, P. Collin, and J.K. Visakorpi. // Published by Coeliac Disease Study Group, Tampere. 1997. - P. 125-137.

101. Marsh S, G. E. The HLA Factsbook. / Marsh S. G. E., Parham P., Barber L. D. // Academic Press. 2000. - P. 398.

102. McGowan, K.E. Celiac disease and IgA deficiency: Complications of serological testing approaches encountered in the clinic. / McGowan K.E., Lyon M.E., Butzner J.D. // Clin. Chem. 2008. - Vol. 54(7). - P. 1203-1209.

103. Megiorni, F. A rapid and sensitive method to detect specific human lymphocyte antigen (HLA) class II alleles associated with celiac disease. /

104. Megiorni F., Mora B., Bonamico M., et al. // Clin. Chem. Lab. Med. 2008. - Vol. 46(2).-P. 193-196.

105. Meloni, G.F. The prevalence of coeliac disease in infertility. / Meloni G.F., Dessole S., Vargiu N., Tomasi P.A., Musumeci S. // Hum. Reprod. 1999. - Vol. 14.-P. 2759-2761.

106. Molberg, 0. Gliadin specific, HLA DQ2-restricted T cells are commonly found in small intestinal biopsies from coeliac disease patients, but not from controls. / Molberg 0., et al. // Scand. J. Immunol. 1997. - Vol. 46. - P. 103109.

107. Momburg, F. Generation and TAP-mediated transport of peptides for major histocompatibility complex class I molecules. / Momburg F., Hammerling G.J. // Adv. Immunol. 1998. - Vol. 68. - P. 191-256.

108. Murray, J. Effect of a gluten-free diet on gastrointestinal symptoms in celiac disease. / Murray J., Watson T., Beverlee C., Mitros F. // Am. J. Clin. Nutr. -2004. Vol. 79. - P. 669-673.

109. Murthy, V.L. The class II MHC protein HLA-DR1 in complex with an endogenous peptide: implications for the structural basis of the specificity of peptide binding. / V.L.Murthy, L.J.Stern. // Structure. 1997. - Vol.5/ - P. 13851396.

110. Nakagawa, T.Y. The role of lysosomal proteinases in MHC class II-mediated antigen processing and presentation. / Nakagawa T.Y., Rudensky A.Y. // Immunol. Rev.'-1999: Vol. 172. - P. 121-129.

111. Nelson, C.A. Structural principles of MHC class II antigen presentation. /Nelson C.A., Fremont D.H. // Rev. Immunogenet. 1999. - Vol. 1. - P. 47-59.

112. Nepom, B.S. Transcomplementation of HLA genes in IDDM. HLA-DQ a-and p-chains produce hybrid molecules in DR3/4 heterozygotes. / Nepom B.S., Schwarz D., Palmer J.P., Nepom G.T. // Diabetes. 1987. - Vol. 36. - P. 114— 117.

113. Nepom, G.T. MHC class-II molecules and autoimmunity. / Nepom G.T., Erlich H. // Annu. Rev. Immunol. 1991. - Vol. 9. - P. 493-525.

114. Norris, J.M. Risk of celiac disease autoimmunity and timing of gluten introduction in< the diet of infants at increased risk of celiac disease. / Norris J.M., Barriga K., Hoffenberg E.J., et al. // JAMA. 2005. Vol. 293. - P. 2343-2351.

115. Norris, J.M. Timing of initial cereal exposure in infancy and risk of islet autoimmunity. / Norris JM, Barriga K, Klingensmith G, et al. // JAMA. 2003/ -Vol. 290.-P. 1713-1720.

116. Olmos, M. Systematic review and meta-analysis of observational studies on the prevalence of fractures in coeliac disease. / Olmos M., Antelo M., Vazquez H., et al. // Dig. Liver Dis. 2008. - Vol. 40(1). - P. 46-53.

117. Otley, C. Dermatitis herpetiformis. / Otley C., Hall R.P. // Dermatol. Clin. 1990. - Vol. 8. - P. 759-769.

118. Ozgenc, F. Association between anti-endomysial antibody and total intestinal villous atrophy in children with coeliac disease. / Ozgenc F., Aksu G., Aydogdu S., et al. // J. Postgrad Med. 2003. - Vol. 49(1). - P. 21-24.

119. Pearce, A.B. Use of the anti-endomysial antibody test to diagnose coeliac disease in clinical practice. / Pearce A.B., Sinclair D., Duncan H.D., et al. // Clin. Lab. 2002. - Vol. 48(5-6). - P. 319-325.

120. Peter H. R. Green. Coeliac disease. / Peter H. R. Green, Bana Jabri. // The lancet. August 2, 2003. - Vol. 362. - P. 383-391.

121. Peters, U. A case-control study of the effect of infant feeding on celiac disease. / Peters U., Schneeweiss S., Trautwein E.A., Erbersdobler H.F. // Ann. Nutr.Metab.-2001.-Vol. 45.-P. 135-142.

122. Rammensee, H.G. Peptides naturally presented by MHC class I molecules. / Rammensee H.G., Falk K., Rotzschke O. // Annu. Rev. Immunol. 1993. - Vol. 11.-P. 231-44.

123. Rashtak S, Murray JA. / Tailored testing for celiac disease. // Ann. Intern. Med. 2007. - Vol. 147(5). - P. 339-341.

124. Reeves, G.E. The measurement of IgA and IgG transglutaminase antibodies in celiac disease: A comparison with current diagnostic methods. / Reeves G.E., Burns C., Hall S.T., et al. // Pathology. 2000. - Vol. 32(3). - P. 181-185.

125. Richard J. Farrell. Celiac Sprue. / Richard J. Farrell, M.D., Ciaran P. Kelly, M.D. // The New England Journal of Medicine. January 17, 2002. -Vol. 346 (3). P. 180-188.

126. Rivett, A.J. Proteasome function in antigen presentation: immunoproteasome complexes, peptide prodaction, and interactions with viral proteins. /Rivett A.J., Hearn A.R. // Curr. Protein Pept. Sci. 2004. - Vol. 5(3). -P. 153-161.

127. Schuppan, D. Current concepts of celiac disease pathogenesis. / Schuppan D. // Gastroenterology. 2000. Vol. 119. - P. 234-242.

128. Sciberras, C. The prevalence of coeliac disease in Down's syndrome in Malta. /Sciberras C., Vella C., Grech V. // Ann. Trop. Paediatr. 2004. - Vol. 24(1).-P. 81-83.

129. Segal, S. Genetic susceptibility to infectious disease. / Segal S., Hill A.V. // Trends Microbiol. 2003. - Vol. 11(9). - P. 445-448.

130. Setty, M. Celiac disease: Risk assessment, diagnosis, and monitoring. / Setty M., Hormaza L., Guandalini S. // Mol. Diagn. Ther. 2008. - Vol. 12(5). -P. 289-298.

131. Shan, L. Structural basis for gluten intolerance in celiac sprue. / Shan L., Molberg 0., Parro, I., Hausch F., Filiz F., Gray G. M., Sollid L. M., and Khosla C. // Science. 2002. - Vol. 297. - P. 2275-2279.

132. Sollid, L.M. HLA susceptibility genes in celiac disease: genetic mapping and role in pathogenesis. / Sollid L.M., Thorsby E. // Gastroenterol. — 1994. Vol. 106(4).-P. 1133.

133. Sollid, L.M. Institute of Immunology, Rikshospitalet, University of Oslo, N-0027 Oslo, Norway/ Molecular Basis of Celiac Disease. / Sollid L.M. // Annual Reviev of Immunology. 2000. - Vol. 18. - P.53-81. (Volume publication date April 2000).

134. Sturgess, R. Wheat peptide challenge in coeliac disease. / Sturgess R., Day P., Ellis H. J., Lundin K. E. A., Gjertson H. A., Kontakou M., and Ciclitira P. // Lancet. 1994. - Vol. 343. P. 758-761.

135. Thorsby, E. Invited Anniversary Review: HLA Associated Diseases. / Thorsby E. // Human. Immunol. 1997. Vol. 53. - P. 1-11.

136. Thoson, G. HLA Disease Associations: Models for the Study of Complex Human Genetic Disorders. / Thoson G. // Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. 1995. - Vol. 32(2).-P. 183-219.

137. Vader, W. The HLA-DQ2 gene dose effect in celiac disease is directly related to the magnitude and breadth of gluten-specific T cell responses. / Vader

138. W., Stepniak D., Kooy Y., Mearin L., Thompson A., van Rood J.J., Spaenij L., Koning F.//PNAS. 2003. -Vol. 100.-P. 12390-12395.

139. Vader, W. The gluten response in children with celiac disease is directed toward multiple gliadin and glutenin peptides. / Vader W., et al. // Gastroenterology. 2002. - Vol. 122. - P. 1729-1737.

140. Ventura, A. Duration of exposure to gluten and risk for autoimmune disorders in celiac patients. / Ventura A., Magazzu G., Greco L. // Gastroenterology. 1999. - Vol. 117. - P. 303-310.

141. Villadangos, J. A. Proteases involved in MHC class II antigen presentation. / Villadangos J.A., Bryant R.A., Deussing J., Driessen C., Lennon-Dumenil A.M.et al. // Immunol. Rev. 1999. - Vol. 172. - P. 109-20.

142. Walker-Smith, J. Revised criteria for diagnosis of coeliac disease. / Walker-Smith J., Guandalini S., Schmitz J., et al. // Arch. Dis. Child. 1990. -Vol. 65.-P. 909-911.

143. Wieser, H. Coeliac disease. / Wieser H. // Bailliere's Clinical Gastroenterology, 1995. Vol. 9(No. 2). - P. 191-207.

144. Zubillaga, P. HLA-DQA1 and HLA-DQB1 genetic markers and clinical presentation in celiac disease. / Zubillaga P., Vidales M.C., Zubillaga I., Ormaechea V., Garcia-Urkia N., Vitoria J.C. // J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. -2002. Vol. 34. - P. 548-554.