Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Защитное действие от окислительных повреждений головного мозга антиоксидантов и модуляторов активности глутаматных рецепторов

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Защитное действие от окислительных повреждений головного мозга антиоксидантов и модуляторов активности глутаматных рецепторов"

На правах рукописи

ДОБРОТВОРСКАЯ Ирина Сергеевна

ЗАЩИТНОЕ ДЕЙСТВИЕ ОТ ОКИСЛИТЕЛЬНЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА АНТИОКСИДАНТОВ И МОДУЛЯТОРОВ АКТИВНОСТИ ГЛУТАМАТНЫХ

РЕЦЕПТОРОВ

Специальность 03.00.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

□0348 1361

Москва-2009

003481361

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научном центре неврологии РАМН

Научный руководитель:

Доктор биологических наук

Федорова Татьяна Николаевна

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор

Орлова Валентина Сергеевна

Доктор биологических наук, профессор

Коденцова Вера Митрофановна

Ведущая организация

Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН

Защита диссертации состоится «20» ноября 2009 г в.....часов на заседании

диссертационного совета Д 212.203.13 при Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.8

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.6.

Автореферат диссертации разослан

Ученый секретарь

диссертационного совета № Д 212.203.13 доктор биологических наук, профессор

Лукашева Б.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Окислительный стресс играет важную роль в патологии головного мозга и может развиваться как на фоне уже существующего заболевания, усугубляя тяжесть его протекания, так и выступать ключевым фактором в развитии патологического процесса.

К факторам, отягощающим степень развития окислительного стресса, относят гомоцистеин и продукты его аутоокисления, главным образом гомоцистеиновую кислоту. Концентрация в кровяном русле общего уровня гомоцистеина резко возрастает при нарушениях мозгового кровообращения (Зорилова, 2006; Mauler et al., 2003), при развитии нейродегенеративных процессов, таких как болезнь Альцгеймера и болезнь Паркинсона (Seshadri et al., 2002; Mattson et al., 1999; Boldyrev and Johnson, 2007). Кроме того, в настоящее время повышенный уровень гомоцистеина расценивают как самостоятельный независимый фактор риска сердечнососудистых и нейродегенеративных заболеваний. Являясь структурным аналогом глутамата, гомоцистеин так же, как и продукты его окисления, способен связываться с NMDA-рецепторами (Shi et al., 2003), чрезмерная активация которых приводит к запуску целого каскада реакций индукции нейрональной смерти.

Поэтому до сих пор остается актуальной проблема поиска нейропротекторов, способных корригировать окислительные нарушения в условиях действия отягощающих факторов (гипергомоцистеинемия). Перспективным направлением в нейропротекции является применение природных антиоксидантов, нетоксических синтетических антиоксидантов и модуляторов активности глутаматных и каннабиноидных рецепторов, вовлекающихся в регуляцию окислительного стресса в головном мозге (Nagayamaet al.,

В настоящей работе проведен сравнительный анализ протекторных свойств 3 соединений: нейропептида карнозина (Болдырев, 1999), синтетического агониста каннабиноидных рецепторов Win 5521-2 (Ferraro et al., 2001; Kim et al., 2006), способного модулировать активность NMDA-рецепторы (Shen et al., 1996), дипептида N-ацетиласпартилглутамата (NAAG), широко представленного в ЦНС млекопитающих и являющегося агонистом метаботропных глутаматных рецепторов mGluR2/3, активация которых в экспериментальных моделях ишемии головного мозга давала выраженный нейропротекторный эффект (Cai, 2002), синтетического антиоксиданта мексидола, являющегося структурным аналогом соединений группы витамина Вб и показавшего свою эффективность при коррекции окислительных нарушений при гипоксии/ишемии головного мозга (Дюмаев и соавт., 1995; Федорова и соавт., 1999; Поварова и соавт., 2004).

В настоящем исследовании были разработаны экспериментальные модели окислительного повреждения головного мозга крыс, окислительный стресс в которых вызывался комбинацией ряда повреждающих факторов. Такие экспериментальные модели, по нашему мнению, наиболее приближены к реальным условиям окислительного стресса, развивающегося у пациентов с нейродегенеративными заболеваниями.

В экспериментальных и клинико-биохимических исследованиях показана вовлеченность окислительного стресса в патогенез болезни Паркинсона (БП) (Schapira, 1997; Koziorowski et al., 1999; Gatto et al., 2002). Однако в литературе данные об эффективности антиоксидантной терапии при БП представлены противоречиво. Поэтому оценка эффективности применения антиоксидантов в комплексном лечении пациентов с БП является важной научно-практической задачей.

Целью исследования явилась характеристика окислительных повреждений головного мозга на экспериментальных моделях окислительного стресса в условиях гипергомоцистеинемни п анализ защитного действия потенциальных

нейропротекторов в экспериментальных и клинпко-биохпмических исследованиях.

В соответствии с целью были сформулированы следующие задачи:

2001).

1. характеристика окислительных повреждений головного мозга крыс на модели пренатальной гипоксии и оценка протекторного действия карнозина, мексидола и агониста mGluR2/3 NAAG;

2. характеристика модели окислительного стресса головного мозга крыс, индуцированного 3-сосудистой ишемией, отягощенной гомоцистеиновой кислотой;

3. оценка протекторного действия карнозина и агониста каннабиноидных рецепторов Win 5521-2 на модели 3-сосудистой ишемии головного мозга на фоне введения гомоцистеиновой кислоты;

4. исследование влияния антиоксидантов карнозина и мексидола на окислительные повреждения липопротеинов крови и эффективность лечения пациентов с болезнью Паркинсона.

Научная новизна. В работе описана новая экспериментальная модель 3-сосудистой ишемии головного мозга, отягощенной повышенным уровнем гомоцистеина в крови.

На модели пренатальной гипоксии проведено сопоставление эффективности антиоксидантов карнозина и мексидола, и показана их способность восстанавливать антиоксидантную защиту головного мозга.

Впервые показано протекторное действие карнозина на модели 3-сосудистой ишемии головного мозга в условиях повышенного уровня гомоцистеина в крови экспериментальных животных.

Впервые проведено исследование клинической эффективности действия карнозина и мексидола в комплексной терапии БП. Показано, что введение карнозина и мексидола в схему лечения пациентов с болезнью Паркинсона усиливает эффективность базисной лекарственной терапии на фоне улучшения антиоксвдантного статуса организма.

Научно-практическая значимость. Представленные данные о защитном действии карнозина и мексидола на физиологическое состояние животных и развитие окислительного стресса в условиях пренатальной гипоксии и глобальной ишемии головного мозга, отягощенной введением гомоцистеиновой кислоты, позволяют рекомендовать использование этих антиоксидантов в комплексной терапии заболеваний ЦНС, сопровождающихся развитием окислительного стресса.

Результаты проведенного клинико-биохимического исследования указывают, что включение карнозина и мексидола в схемы лечения пациентов с болезнью Паркинсона существенно усиливает эффективность базисной терапии, что сопровождается улучшением общей двигательной активности и снижением частоты выявляемых побочных эффектов базисного лечения.

Основные положения, выносимые на защиту. Карнозия и мексидол способны корригировать окислительные нарушения головного мозга животных, перенесших пренатальную гипоксию. Защитное действие агониста метаботропных глутаматных рецепторов 2 класса NAAG в данных условиях менее выражено.

Гомоцистеиновая кислота является важным фактором, усугубляющим развитие окислительного стресса при ишемии головного мозга экспериментальных животных. Карнозин в этих условиях проявляет нейропротекторное действие, корригируя окислительные нарушения ткани мозга на фоне повышенного уровня гомоцистеина в крови. Агонист каннабиноидных рецепторов Win 5521-2 проявляет нейропротекторное действие только при нормальном уровне гомоцистеина в крови.

Введение карнозина в схему лечения пациентов БП усиливает эффективность традиционной лекарственной терапии и нормализует двигательные нарушения на фоне активации эндогенной антиоксидантной системы защиты. Мексидол в этих условиях также усиливает эффект базисной терапии и снижает степень выраженности побочных эффектов традиционной лекарственной терапии.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на конференции «Актуальные проблемы экологии и природопользования» (экологический факультет РУДН) в 2006 г., на Международном конгрессе «Molecular basis of neurological and psychiatric

disorders» (Мартин, Словакия, 2006), на XVII Международном конгрессе «Parkinsonism and related disorders» (Амстердам, Нидерланды, 2007), на III Евроазиатской конференции «Hazardous waste and human health» (Стамбул, Турция, 2008), на конференции «Нейрохимические механизмы формирования адаптивных и патологических состояний мозга» (Санкт-Петербург, Россия, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе 3 статьи в журналах, входящих в список ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация представлена на 106 страницах машинописного текста, содержит 10 таблиц и 12 иллюстраций. Работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, раздела, посвященного результатам собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, состоящего из 46 отечественных и 139 зарубежных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Экспериментальные и клинико-биохимические исследования

Модель пренатальной гипоксии. В эксперименте было использовано потомство, полученное от 10 крыс-самок линии Вястар, содержавшихся в стандартных условиях вивария. Острую гипоксическую гипоксию моделировали на 10-11 день беременности крыс в барокамере проточного типа, понижая давление до 169 мм рт. ст. Сразу после гипоксической атаки беременных крыс случайным образом разделили на несколько групп. Животные одной группы получали карнозин (100 мг/кг массы тела), животные другой - мексидол (100 мг/кг массы тела). Карнозин и мексидол животные обеих групп получали с питьевой водой ежедневно в течение оставшегося периода беременности (11-13 дней) и последующих дней жизни потомства. Животным третьей группы интраперитонеально вводили NAAG (2 мг/кг массы тела) дважды (через 1 и 3 часа после перенесенной гипоксической атаки). После достижения 12-дневного возраста часть животных использовали для оценки биохимических параметров. У оставшихся животных в возрасте 22 дней оценивали двигательную активность в тесте «открытое поле». В возрасте 30 дней у животных проверяли способность к обучаемости в Т-образном лабиринте.

Модель З-сосуднстой ишемии головного мозга, отягощенной гомопистеиповой кислотой. Нами разработана новая модель окислительного стресса, вызванного 3-сосудистой ишемией головного мозга и развивающегося на фоне гипергомоцистеинемии. В эксперименте были использованы самцы крыс линии Вистар массой 250-300 г. Гипергомоцистеинемию создавали путем шпралеритонеального введения животным гомоцистеиновой кислоты (ГЦК) в дозе 350 мг/кг массы тела ежедневно в течение 6 дней до ишемии и в последующие 3 дня после ишемии. Моделирование З-сосудистой ишемии головного мозга проводили в два этапа с последующей 5-дневной реперфузией (Pulsinelli, Brierley, 1979). В первый день животным пережигали левую позвоночную артерию, а на следующий день создавали 15-мин окклюзию обеих сонных артерий. Одной группе животных (п=10) вводили карнозин (100 мг/кг массы тела) интраперитонеально по следующей схеме: за 1ч и за 15 мин до ишемии, через 6 и 24 ч после ишемии. Другой группе животных (п=10) вводили Win 5521-2 (1 мг/кг массы тела) интраперитонеально за 1час до ишемии, через 6 и 24 ч после ишемии. Контролем служили ложнооперированные животные (п=10), которые в соответствии с протоколом эксперимента получали физиологический раствор. За 1 сутки до ишемии и через 3 суток после ишемии животных тестировали в водном лабиринте Морриса (Махро и соавт., 2008). После декапитации животных ткани мозга использовали для проведения биохимических исследований. Экспериментальные исследования этого раздела частично выполнены в рамках гранта Вышеградского фонда на кафедре медицинской биохимии университета им. Я. Комениуса (Мартин, Словакия).

Применение карнознна и мексидола в комплексной терапии болезни Паркиисона (БЩ. В работе представлены результаты клинико-биохимического обследования пациентов с БП (п=69). Была проведена биохимическая оценка эффективности применения

антиоксидантов карпозина и мексидола в комплексной терапии пациентов с БП. Постановку диагноза, анализ клинической картины заболевания и лечение пациентов проводили сотрудники отделения нейродегенеративных и наследственных заболеваний нервной системы НЦН РАМН (заведующий - д.м.н., профессор Иванова-Смоленская И.А.). Все пациенты с БП получали базисную терапию, включавшую леводопа-содержащие препараты и агонисты дофаминовых рецепторов, дозы которых подбирались индивидуально в зависимости от состояния пациентов и тяжести клинической симптоматики.

В группу пациентов, получавших базисную терапию, входило 38 человека; в группу пациентов, получавших дополнительно к базисной терапии карнозин, - 20 человек (женщины и мужчины). Возраст пациентов обеих групп составил от 46 до 68 лет. В группу пациентов, получавших дополнительно к базисной терапии мексидол, входило 27 человек (женщины и мужчины) в возрасте от 58 до 65 лет. Общая продолжительность лечения составила 30 дней для группы, получавшей карнозин, и 20 дней для группы, получавшей мексидол. Обследование больных проводилось до начала лечения (1-й визит) и через 20 или 30 дней (2-й визит) после начала терапии - либо только базисной, либо базисной в сочетании с карнозином или мексидолом.

В качестве источника карнозина использовали таблетированную биологически активную пищевую добавку «Севигин» (Медгехника, Россия). Каждая таблетка, содержащая 0,25 г карнозина, была покрыта кислотоустойчивой оболочкой. Суммарная суточная доза карнозина в составе «Севитина» составляла 1,5 г (прием по 2 таблетки 3 раза в день).

В качестве мексидола использовали коммерческий препарат мексидант - структурный аналог аигиоксиданта мексидола, который пациенты получали по следующей схеме: с 1-го по 10-й день внутривенно капельно (200 мг в сутки); в течение последующих 10 дней -внутримышечно 2 раза в сутки по 2 мл утром и вечером (200 мг в сутки). Препарат изготовлен на Экспериментальном производстве медико-биологических препаратов Российского кардиологического научно-производственного комплекса Минздравсоцразвития России.

Биохимическое методы исследования

Активность супероксиддисмутазы в митохопдриальной фракции мозга крыс (Мп-СОД) и в эритроцитах человека fCu/Zn-СОД) определяли по подавлению скорости восстановления питросинего тегразолия при генерации супероксидного анион-радикала в процессе окисления ксангина ксантиноксидазой на спектрофотометре при длине волны 560 нм (Mishra and Fridovich, 1972). Содержание белка определяли в пробах по методу Лоури (Lowry et al., 1951). Определение концентрации гемоглобина в крови человека проводили гемоглобин-цианидным методом (набор ДИАГЕМ-Т).

Хемилюминесиетшю (Х1Г) липопротеипов сыворотки крови человека или гомогената мозга животных, индушгоованпую иопами двухвалентного железа (Vladimirov, 1996; Федорова и соавт., 1999) измеряли на хемшпоминометре 1251, LKB (Швеция). В работе регистрировали следующие параметры ХЛ: быструю вспышку, интенсивность которой характеризует уровень липидных гидроперекисей; лаг-период, длительность которого определяет окислительную резистентность изучаемого биологического образца; скорость окисления (тангенс угла наклона кривой).

Определение гомопистеииа в плазме крови крыс проводили иммунофлуоресцентным методом с помощью набора реактивов фирмы Axis™ (Axis-Shield, Великобритания).

Статистическую обработку данных проводили, используя программу «Statistica 5.0». Достоверность получаемых различий оценивали по непараметрическим критериям Вилкоксона, Крускала-Уоллиса и Данна. Достоверными считали различия при р<0.05. Результаты экспериментов представлены в виде среднеарифметического и стандартного отклонения (M±SD).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В экспериментальных исследованиях дана характеристика окислительного стресса, развивающегося в условиях нарушенного кровообращения головного мозга у лабораторных животных (пренатальная гипоксия, глобальная ишемия головного мозга), а также при отягощении этих патологических состояний гипергомоцистеинемией -фактором, усиливающим развитие окислительного стресса. В результате этих исследований были получены данные, позволившие предложить возможные пути нейропротекции за счет сохранения и восстановления эндогенной антиоксидантной системы организма.

1. Биохимическая характеристика окислительного стресса на экспериментальных

моделях in vivo

1.1. Оценка окислительного стресса в мозге крыс в условиях нейрохимических и физиологических нарушений, обусловленных пренатальной гипоксией

На экспериментальной модели пренатальной гипоксии у крыс 12-дневного возраста в качестве маркеров окислительного стресса была определена активность митохондриальной Mn-СОД и дана характеристика параметров Ре2+-индуцированного окисления тканевых гомогенатов мозга.

Пренатальная гипоксия, перенесенная на 10-11 день беременности, достоверно снижает количество крысят в помете. Родившиеся животные медленнее набирали вес в процессе развития — в течение первых 12 дней отставание по массе относительно контрольных животных составляло 30%. На кожных покровах животных, перенесших пренатальную гипоксию, в области шеи, задних конечностей и вдоль позвоночника выявлялись синюшные пятна. По данным физиологических тестов такие животные даже в возрасте 30 дней, когда они догоняют в весе животных контрольной группы, отличаются пониженной исследовательской и повышенной двигательной активностью в тесте «открытое поле».

В Т-образном лабиринте после первых 10 дней обучения различий между группами не наблюдалось. Однако после 3-дневного перерыва в обучении на 13 день число успешных попыток в группе животных, перенесших пренатальную гипоксию, резко сокращалось (Рис. 1). Однако после перерыва в 20 дней на 35 день тестирования гипоксические животные по количеству успешных попыток приближались к группе контроля. Полученные результаты позволяют сделать вывод о том, что у животных, подвергшихся пренатальной гипоксии, в первый месяц жизни существенно нарушены процессы долговременной памяти.

День обучения

Рис. 1. Обучение животных в Т-образном лабиринте. Темный столбик - контроль, светлый столбик - животные, перенесшие пренатальную гипоксию (знак «*» соответствует достоверному отличию от группы контроля, р<0,05).

Тканевые гомогенаты мозга животных исследуемых групп существенно различались по устойчивости к Ре2+-индуцированному окислению. Из Таблицы 1 видно, что у животных, перенесших пренатальную гипоксию, уровень предобразованных гидроперекисей был увеличен на 50%, а резистентность ткани мозга к окислению -снижена на 25%. Эти изменения сопровождались повышением скорости окисления тканевого гомогената мозга.

Несмотря на то, что регистрируемые параметры Ре2+-индуцировагаюй хемилюминесценции подтвердили развитие окислительного стресса в мозге животных, перенесших пренатальную гипоксию, достоверных изменений активности Мп-СОД выявлено не было. В мозге как контрольных, так и животных, перенесших пренатальную гипоксию, активность СОД составляла 3,9 - 4,2 ед/мг белка. Вероятно, что в данных экспериментальных условиях изменения активности СОД после гипоксической атаки, если и происходили, носили срочный характер и были нивелированы последующим периодом адаптации.

Таблица 1. Характеристика Ре2+-индуцированной хемилюминесценции тканевого гомогената мозга исследуемых групп животных (данные представлены в виде \liSD, знак «*» соответствует достоверному отличию от группы контроля, р<0,05)

Экспериментальные группы Параметры Ке2+-индуцированной хемилюминесценции

Гидроперекиси, отн. ед. Лаг- период, с Скорость окисления, отн. ед.

1. Контрольные животные (п=7) 2. Пренатальная гипоксия (п=7) 129±36 253±73* 103±17 77±16* 5,1±0,8 6,9±0,5*

Таким образом, в мозге животных, перенесших пренатальную гипоксию, происходит повышение уровня липидных гидроперекисей и снижение эффективности эндогенной антиоксидантной системы защиты, что свидетельствует о развитии окислительного стресса. Полученные результаты позволяют рассматривать описанную модель пренатальной гипоксии как удобный экспериментальный подход для оценки защитного

действия на мозг антиоксидантов, предотвращающих развитие окислительного стресса за счет усиления антиоксидантной системы защиты.

1.2. Экспериментальная 3-сосудистая ишемия головного мозга крыс, отягощенная гомоцистеиновой кислотой

Для исследования окислительного стресса в условиях, приближенных к реальным патологическим состояниям ЦНС, сопровождающимся развитием окислительного стресса, в нашей лаборатории была разработана экспериментальная модель окислительного стресса, при которой ишемическое повреждение мозга протекает на фоне выраженной гипергомоцистеинемии.

Ишемическое повреждение мозга крыс приводило к существенному снижению активности Мп-СОД в митохондриальной фракции мозга (Рис. 2), к понижению резистентности ткани мозга к Ре2+-индуцированному окислению (Таблица 2), а также к выраженным нарушениям памяти, при которых время поиска платформы животными в тесте Морриса возрастало на 80% (Таблица 3).

Рис. 2. Активность Мп-СОД в митохондриальной фракции головного мозга экспериментальных животных. Данные представлены в процентном соотношении к группе контроля. 1 -ложнооперированные животные (контроль, п=10), 2 - животные, получавшие ГЦК (п=10), 3 -животные, перенесшие ишемию (п=10), 4 - животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК (п=10). Знак «*» соответствует достоверному отличию данных от группы контроля, р<0,05

Систематическое введение ГЦК интактным животным приводило к повышению уровня общего гомоцистеина в крови до 130% от контроля (Рис. 3), вызывало понижение активности Мп-СОД (Рис. 2), увеличение в мозге уровня предобразованных гидроперекисей на 21% и снижение резистентности ткани мозга к Ре2+-индуцированному окислению. Введение ГЦК вызывало снижение способности животных к обучению и запоминанию, сопоставимое с животными, перенесшими ишемическое повреждение мозга.

Рис. 3. Содержание общего гомоцисгеина в плазме крови экспериментальных животных, мкмоль/л. Данные представлены в виде 1 - ложнооперированные животные (контроль); 2 -

животные, получавшие ГЦК; 3 - животные, перенесшие ишемию, 4 - животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК. Знак «*» соответствует достоверному отличию от группы контроля, р<0,05)

Введение ГЦК животным, перенесшим ишемию головного мозга, не вызывало дополнительного снижения активности Мп-СОД в митохондриях мозга (Рис. 2), дополнительного роста уровня предобразованных гидроперекисей или уменьшения резистентности к Ре2+-индуцированному окислению (Таблица 2). Вместе с тем для животных, перенесших ишемию на фоне повышенного уровня гомоцистеина, было характерно более выраженное снижение способности к обучению и запоминанию - время поиска платформы увеличилось и составляло по отношению к группе «ишемия» 120% (Рис. 4). Это обстоятельство позволяет заключить, что гипергомоцистеинемия является фактором, отягощающим развитие повреждений мозга, коррелирующих с нарушением когнитивных функций мозга.

Таблица 2. Параметры Ре2+-индуцированной хемилюминесценции в исследованных экспериментальных группах (данные представлены в виде М±80, знак «*» соответствует достоверному отличию величины от контроля, р<0,05)

Экспериментальные группы Параметры Ре2+индуцированной хемилюминесценции

Гидроперекиси, отн. ед. Лаг-период окисления, с

Ложнооперированные животные (контроль)(п=10) 65±9 81±8

Животные, получавшие ГЦК (и=10) 82±13* 6Ш0*

Животные, перенесшие ишемию (п=10) 7&Ь5 61±7*

Животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК (п=9) 84±9 * 63±3*

Во всех исследуемых группах животных не наблюдалось смертности, и не была выявлена неврологическая симптоматика.

Рис. 4. Время поиска платформы в тесте Морриса животными различных экспериментальных групп (данные представлены в виде М±80). 1 - ложнооперированные животные (контроль); 2 -животные, получавшие ГЦК; 3 - животные, перенесшие ишемию; 4 - животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК; (* - достоверное отличие от группы контроля, р<0,05)

Таиш образом, результаты экспериментальных исследований позволяют заключить, что развитие окислительных повреждений головного мозга у животных, перенесших пренатальную гипоксию и 3-сосудистую ишемию головного мозга имеет сходные закономерности. В обоих случаях наблюдается значительное снижение резистентности ткани мозга к окислению и накопление липидных гидроперекисей, более выраженное у животных с гипергомоцистеинемией (на фоне ишемии или без нее).

2. Оценка защитного действия карнозина, мексидола и КААС на крыс, перенесших

пренатальную гипоксию

На основании проведенных экспериментов, был сделан вывод, что пренатальная гипоксия является удобной моделью для количественной оценки окислительного стресса и защитного действия потенциальных протекторов мозга. Данная модель была использована для сравнительной оценки коррекции окислительных повреждений мозга животных, перенесших пренатальную гипоксию, с помощью перспективных, с нашей точки зрения, соединений: природного антиоксиданта карнозина; синтетического антиоксиданта мексидола и агониста метаботропных глутаматных рецепторов т01иИ2/3 М-ацетиласпартилглутамата.

Анализ параметров Ре2+-индудированной хемилюминесценцшг тканевых гомогенатов мозга животных всех экспериментальных групп выявил существенные различия. Из Таблицы 3 видно, что у животных, перенесших пренатальную гипоксию, уровень предобразованных гидроперекисей был увеличен в 2 раза по отношению к контролю. Карнозин или мексидол предотвращали повышение этого параметра: уровень предобразованных гидроперекисей в мозге животных, получавших антиоксиданты, практически не отличался от контроля. В группе животных, получавших NAAG, уровень предобразованных гидроперекисей был на 74% ниже, чем в группе «пренатальная гипоксия», однако оставался существенно более высоким, чем в контрольной группе.

Резистентность к перекисному окислению, отражающая состояние общей эндогенной антиоксидантной активности, в группе животных, перенесших пренатальную гипоксию, была ниже на 75% по отношению к контрольным животным. В группах животных, получавших карнозин и мексидол, резистентность к перекисному окислению сохранялась на уровне контрольных значений. В группе животных, получавших КААО,

резистентность к окислению была выше, чем в группе «пренатальная гипоксия» па 120%, хотя и оставалась ниже контрольного уровня.

Таблица 3. Характеристика Ре2+-индуцированной хемшпоминесценции тканевых гомогенатов мозга исследуемых групп животных. Данные представлены в виде М±80, знак «*» соответствует достоверному отличию величин от контроля, р<0,05, знак «**» - достоверному отличию от данных группы «гипоксия», р<0,05.

Экспериментальные группы Параметры Ге2+-индуцнрованной хемшпоминесценции

Гидроперекиси, отн. ед. Лаг-период, с Скорость окисления, отн. ед.

1. Контрольные животные (t>=7) 129±36 103±17 5,1±0,8

2. Пренатальная гипоксия (п=7) 253±73* 77±16* 6,9±0,5*

3. Пренатальная гипоксия -Исарнозин 115±37** 100±14** 4,7±0,3**

(п=7)

4. Пренатальная гипоксия +мексидол 119±24** 100±8** 6,1±0,9**

(п=6)

5. Пренатальная гипоксия +NAAG 187±55** 93±7** 5,2±0,2**

(п=6)

Повышенная на 73% скорость окисления тканевых гомогенатов мозга животных, перенесших пренатальную гипоксию, снижалась под действием карнозина, мексидола и NAAG до уровня контрольных значений.

Достоверных изменений активности Mn-СОД в группах животных, получавших карнозин, мексидол или NAAG не наблюдалось.

Таким образом, протекторный эффект карнозина, мексидола и NAAG проявлялся в снижении уровня продуктов перекисного окисления липидов и скорости окисления тканевых гомогенатов мозга, в повышении резистентности к Ре2+-индуцированному окислению.

Интересно отмстить, что NAAG, не обладающий прямым аптиоксидантным действием, но способный защищать нейроны от экзайтотоксического действия глутамата (Cai е t а 1., 2002), препятствовал повышению уровня липидных гидроперекисей, но не оказывал достоверного влияния на состояние эндогенной антиоксидантпой защиты.

Полученные данные свидетельствуют о том, что антиоксидантная терапия, проведенная непосредственно после гипоксической атаки, перенесенной в период внутриутробного развития, способна защитить мозг формирующегося организма от окислительных повреждений. При этом используемые соединения проявляли разную эффективность - в выбранных нами экспериментальных моделях окислительного стресса карнозин и мексидол проявляли более выраженное автиоксидантное действие, чем NAAG.

3. Оценка защитного действия карнозина и агониста канпабиноидных рецепторов

Win 5521-2 на модели 3-сосудистой ишемии головного мозга, отягощенпой гомоцистеиповой кислотой

Разработанную в нашей лаборатории модель окислительного стресса, вызванного экспериментальной 3-сосудистой ишемией головного мозга в условиях гипергомоцистеипемии, мы использовали для оценки способности корригировать окислительные повреждения головного мозга и восстанавливать когнитивные функции животных с помощью природпого нейропептида карнозина и синтетического агониста каннабиноидных рецепторов Win 5521-2, который по литературным данным также может способствовать ослаблению окислительного стресса в мозге (Kim et al. 2005, Parmentier-Batteur et al., 2002).

Уровень общего гомоциетеина в крови животных, перенесших ишемию головного мозга на фоне введения ГЦК, был достоверно выше по отношению к группе контроля (10,5±0,2 мкмоль/л и 7,4±0,6 мкмоль/л соответственно). Введение карнозина и Win 5521-2 не приводило к снижению повышенного уровня гомоциетеина в крови.

Таблица 4. Параметры Ре^-индуцированой хемилюминесценции в исследованных экспериментальных группах (данные представлены в виде \liSD, знак «*» отмечает достоверное отличие от контроля, р<0,05; «#» - достоверное отличие от группы «ишемия+ГЦК», р<0,05)_

Экспериментальные группы Параметры Ре2*ввдуцированной хемилюминесценции

Гидроперекиси, отн. ед. JIar-период, с

Ложнооперированные животные (контроль) (п=10) 65±9 81±8

Животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК (п=10) 84±9 * 63±3*

Животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК и карнозин (п=9) 7W 85±11*

Животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК и Win 5521-2 (п=9) 80±13* 75±8*

В группе животных, перенесших ишемию на фоне введения ГЦК и получавших карнозин, резистентность тканевых гомогенатов мозга к Ре2+-индуцированному окислению была выше на 35% относительно группы животных, перенесших ишемию и получавших ГЦК, и не отличалась от контрольных значений (Таблица 4). Введение Win 5521-2 также приводило к увеличению резистентности ткани мозга к Fe2+-индуцированному окислению на 20% по сравнению с группой животных, перенесших ишемию и получавших ГЦК. Так Win 5521-2 увеличивал резистентность ткани мозга к окислению, восстанавливая ее до уровня контроля. Введение харнозипа приводило к достоверному снижению уровня накопленных гидроперекисей. Таким образом, карнозин препятствовал развитию окислительного стресса в мозге животных, a Win 5521-2 способствовал только активации эндогенной антиоксидантной системы защиты.

Активность Mn-СОД в ipyrnie животных, перенесших ишемическую атаку на фоне повышенного содержания гомоциетеина, достоверно понижалась по отношению к контролю на 40%. У животных, получавших карнозин, активность фермента возвращалась к контрольному уровню и даже немного превышала его (64±5 ед/мг белка при уровне контроля 57±4 ед/мг белка). Оценить влияние Win 5521-2 на активность Mn-СОД в условиях данного эксперимента вследствие лимитированного количества биологического материала было невозможно.

Рис. 5. Время поиска платформы в тесте Морриса животными различных экспериментальных групп (данные представлены в виде M±SD). 1 - ложнооперированные животные (контроль); 2 -животные, перенесшие ишемию, 3 - животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК; 4 -животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК и карнозин; 5 - животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК и Win 5521-2 (* - достоверное отличие от группы контроля, р<0,05, ** - достоверное отличие от группы ишемия+ГЦК, р<0,05)

Карнозин оказывал положительное влияние и на способность животных к обучению - время достижения платформы у животных, получавших карнозин на фоне ишемии и гипергомоцистеинемии, снижалось более чем вдвое и не отличалось от контроля (Рис. 5). Win 5521-2 не оказывал влияния на время достижения платформы.

Таким образом, карнозин препятствовал развитию окислительного стресса, индуцированного ишемией головного мозга в условиях гипергомоцистеинемии, путем восстановления антиоксидантной системы защиты мозга, а также сберегал когнитивные функции мозга животных.

Win 5521-2 не оказывал положительного влияния на когнитивные функции мозга животных, что, возможно, было связано с повышенным уровнем гомоцистеина в крови. Положительное действие Win 5521-2 как эффективного нейропротектора описано в литературе в условиях нормального уровня гомоцистеина (Martinez-Oigado et al., 2003; Nagayama et al., 1999).

В специальной серии экспериментов мы оценили влияние Win 5521-2 на обучаемость животных, перенесших ишемию в условиях нормального уровня гомоцистеина в крови. Животные получали интраперитонеалъно ГЦК в дозе (180 мг/кг в течение 5 дней), не вызывающей повышение содержания общего уровня гомоцистеина в крови.

На Рис. 6 видно, что у животных, перенесших ишемию в условиях нормального уровня гомоцистеина в крови, время поиска платформы было значительно выше аналогичного параметра контрольных животных. Win 5521-2, как и карнозин способствовал более быстрому нахождению животными платформы в этих условиях.

Таким образом, можно заключить, что нейропротекторный эффект карнозина реализуется независимо от повышенного уровня гомоцистеина в крови, тогда как Win 5521-2 оказывает протекторный эффект только при нормальном уровне гомоцистеина в крови. Важным обстоятельством является и то, что защитный эффект карнозина проявляется не в устранении гипергомоцистеинемии, а в защите мозга от токсического действия гомоцистеина.

Рис. 6. Время поиска платформы в тесте Морриса животными различных экспериментальных групп (данные представлены в ввде M±SD). 1 - ложнооперированные животные (контроль); 2 -животные, перенесшие ишемию, 3 - животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК; 4 -животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК и карнозин; 5 - животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК и Win5521-2 (* - достоверное отличие от группы контроля, р<0,05, # - достоверное отличие от группы ишемия+ЩК, р<0,05)

Подводя итог экспериментальных исследований на моделях in vivo, можно заключить, что природный антиоксидант харнозин и синтетический антиоксидант биогенного типа мексидол в равной степени оказывают протекторное действие на мозг путем предотвращения окислительных повреждений, развивающихся на фоне окислительного стресса. Это обстоятельство дает основание рассматривать возможность применения антиоксидантов карнозина и мексидола в качестве протекторов окислительного стресса при лечении нейродегенеративных заболеваний.

4. Влияние антиоксидантной терапии на эффективность лечения болезни

Паркивсона

Хронический окислительный стресс, развивающийся при болезни Паркинсона, расценивается как один из основных патологических факторов, приводящих к прогрессирующей и необратимой гибели дофаминергических нейронов в черной субстанции среднего мозга. Основная лекарственная терапия при БП - заместительная, которая заключается в назначении препаратов леводопы - биологического предшественника дофамина. Однако как сам леводопа, так и его метаболиты при длительном применении могут усиливать состояние окислительного стресса (Muiler et al., 2004), протекающего на фоне выраженной гипергомоцистеинемии (Muller and Kuhn, 2009; Rodriguez-Oroz et al., 2009).

В связи с этим особый интерес представляет изучение целесообразности включения в схему лечения пациентов с БП препаратов, обладающих антиоксидантным и нейропротекторным действием. Мы оценили действие карнозина и мексидола на состояние эндогенного антиоксидантного статуса (активность эритроцитарной Cu/Zn-СОД, параметры Ре2+-индуцированной хемилюминесценции липопротеинов плазмы крови) и проявление неврологической симптоматики у пациентов с БП.

4.1 Характеристика параметров окислительного стресса у пациентов с БП

Исследование окисляемости липопротеинов плазмы крови пациентов с БП выявило определенные закономерности. Уровень липидных гидроперекисей в липопротеинах плазмы крови пациентов с БП достоверно не отличался от аналогичного параметра,

измеренного у здоровых доноров. Было выявлено достоверное снижение резистентности к индуцированному окислению у пациентов с БП, что отражает угнетенное состояние эндогенной антиоксидантной системы. Скорость окисления липопротеинов в группе пациентов с БП также была достоверно выше по отношению к скорости окисления липопротеинов здоровых доноров.

У пациентов с БП было выявлено небольшое, хотя и достоверное (р<0,05) уменьшение активности Си/йьСОД по сравнению со здоровыми донорами: у пациентов с БП активность СОД составляла 2,94±0,01 ед/мг гемоглобина, тогда как у здоровых доноров активность СОД была 3,21±0,04 ед/мг гемоглобина.

4.2. Влияние карнозина на параметры окислительного стресса и неврологическую симптоматику при БП

Пациенты с БП были разделены на 2 группы методом случайной выборки, сопоставимые по возрасту, длительности и тяжести заболевания. Динамика клинических показателей оценивали по стандартной международной унифицированной рейтинговой шкале оценки тяжести паркинсонизма, ЮТЖ8. На начало исследования неврологическая симптоматика составляла 40,8±14,6 баллов у пациентов с базисной терапией и 37,3±15,0 баллов у пациентов, получавших дополнительно к базисной терапии карнозин.

Через 30 дней лечения в обеих группах было отмечено достоверное уменьшение степени выраженности неврологической симптоматики (Таблица 5). При этом наибольшее улучшение суммарного балла наблюдалось в группе пациентов, получавших карнозин. Различие между группами больных было статистически значимо (р=0,02). В группе пациентов, получавших дополнительно к базисной терапии карнозин, было отмечено значительное улучшение общей двигательной активности.

Таблица 5. Динамика неврологического статуса пациентов с БП на фоне лечения (по шкале ЦРРЯБ)___

Лечение Суммарный балл по шкале иРИКЭ Улучшение суммарного балла, %

до лечения после лечения

Базисная терапия 40,8±14,6 32,5±12,0 (р=0,05) 20,4

Базисная терапия + карнозин 37,3±15,0 24,9±8,1 (Р=0,01) 33,2* (р=0,02)

* - различия значимы по отношению к группе пациентов, не получавших карнозин

Активность Си/гп-СОД в эритроцитах пациентов с БП, получавших только базисную терапию, через 30 дней после начала исследования статистически незначимо понижалась. Введение в схему лечения карнозина приводило к достоверному увеличению активности Си/Ип-СОД относительно величин, измеренных до начала курса лечения (Таблица 6).

Уровень окисленных гидроперекисей в группах пациентов, получавших на фоне базисной терапии карнозин, достоверно не изменялся, равно как и в группе больных, получавших только базисную терапию (Таблица 6). Базисная терапия не оказывала существенного влияния на резистеность липопротеинов крови к индуцированному окислению. В то же время, введение в протокол лечения карнозина значительно увеличивало резистентность липопротеинов плазмы крови пациентов к окислению (Таблица 6).

Таблица 6. Влияние проводимого лечения на активность СиЖп-СОД и на параметры Ге2т-индуцированной хемилюминесценции липопротеинов плазмы крови пациентов с БГГ * - достоверность различий по сравнению с нормой, **- достоверность различий до и после лечения__

Группы пациентов Ca/Zn-СОД, ед/мг гемоглобина Параметры Ге2+-нцд>цированной хемилкшииесцепцин

Гидроперекиси, отн. ад. JIar-перпод, с Скорость окисления, отн. зд.

Клиническая норма 3,21±0,04 111±16 78±14 2,2±0,4

До лечения 3,0±0,1 107±25 42±15* р=0,05 2,8±0,4* р=0,02

Базисная терапия 2,7±0,07 114±30 44±11* р=0,05 2,7±0,6* р=0,02

Базисная терапия + карнозин 3,4±0Д+* 94±18 6Ш6** р=0,015 2,3±0,5** р=0,001

Скорость окислительного повреждения липопротеинов крови пациентов, получавших карнозин, достоверно снижалась и приближалась к контрольным значениям.

Способность карнозина не только восстанавливать резистентность липопротеинов крови к окислительным повреждениям и снижать неврологическую симптоматику, но и сберегать активность СОД является важным фактором, обеспечивающим более полноценное лечение. Все это демонстрирует, что действие карнозина in vivo не ограничено защитой СОД, а может распространяться и на другие системы ангиоксидантной защиты организма, увеличивая его устойчивость к окислительному стрессу.

Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о клинической эффективности карнозина, применяемого в сочетании с базисной терапией у пациентов с БП. Улучшение клинической симптоматики выявляется на фоне значительного улучшения антиоксидантного статуса организма. На основании полученных результатов можно сделать заключение о целесообразности введения карнозина в качестве дополнительного средства в схему лечения БП. Карнозин также может оказаться перспективным соединением и при лечении других нейродегенеративных заболеваний, течение которых сопровождается развитием окислительного стресса.

4.3. Влияние мексидола на параметры окислительного стресса и неврологическую симптоматику при БП

В данном исследовании пациенты с БП были разделены на 2 группы методом случайной выборки, и так же, как и при применении карнозина, находились на базисном лечении леводопа-содержащими препаратами.

На начало исследования неврологическая симптоматика у пациентов обеих групп была сопоставима по степени тяжести: в группе больных, получавших базисную терапию, исходная тяжесть симптомов составлял 50,1±4,7 баллов, в группе больных, получавших дополнительно к базисной терапии мексидол - 44,7±3,1 баллов (Таблица 7).

Таблица. 7. Динамика неврологического статуса пациентов с БП на фоне лечения (по шкале

иргау___'__

Лечение Суммарный балл по шкале ЦРГЖв Улучшепие суммарного балла, %

до лечения после лечения

Базисная терапия 50,1 ±4,7 39,2 ±4,0 21,8

Базисная терапия + мексидол 44,7 ±3,1 32,7 ±3,2 26,8

Через 20 дней лечения в обеих группах пациентов произошло достоверное (р=0,0001) снижение неврологической симптоматики. При этом более выраженное улучшение неврологической симптоматики было отмечено в группе пациентов, получавших мексидол, и составляло в процентном соотношении 26,8%, тогда как в группе, пациентов, получавших только базисную терапию - 21,8%. Наиболее значимым эффектом мексидола в комплексной терапии явилось достоверное (р<0,03) уменьшение выраженности осложнений леводопа-терапии относительно пациентов, получавших базисную терапию.

Активность Си/гп-СОД у пациентов с БП получавших только базисную терапию через 20 дней после начала исследования достоверно не изменялась. Изначально невысокая активность Си/2п-СОД после приема мексидола несколько возрастала, но все же оставалась пониженной (Таблица 8).

В Таблице 8 представлены параметры Ре2+-индуцированной хемилюминесценции липопротеинов плазмы крови пациентов с БП. Видно, что уровень предобразованных гидроперекисей на фоне базисной терапии не изменялся. Резистентность к Ре2+-индуцированному окислению была ниже значений нормы, а скорость окисления липопротеинов была достоверно выше аналогичного параметра у здоровых доноров. Введение в курс лечения мексидола препятствовало росту предобразованных гидроперекисей и достоверно (на 42%) увеличивало резистентность липопротеинов к окислению.

Таблица 8. Влияние проводимого лечения на активность СчЙп-СОД и динамику параметров Ре2+-индуцированной хемилюминесценции липопротеинов плазмы крови пациентов с БП. * - р<0,05 (достоверность отличий до и после лечения), ** - р<0,02 (достоверность отличий после лечения мексидолом относительно базовой терапии).

Группы пациентов Си/гп-СОД, ед/мг гемоглобина Параметры Ре1+-индуцированяой хемилюминесценции

Гидроперекиси, отн. ед. Лаг-период, с Скорость, окисления отн. ед.

Клиническая норма 3,21±0,04 111±16 78±14 2,2±0,4

Базисная терапия до 2,94±0,01 111±29 44±11 2,8±0,4

после 2,75±0,1 114±30 44±11 2,7±0,6

Базисная терапия + мексидол ДО 2,94±0,01 104±19 40±13 2,7±0,6

после 3,04±0,1 89±18 59±1б*' ** 2,4±0,3*

Таким образом, результаты клинико-биохимической части работы свидетельствуют, что мексидол способен нейтрализовать рост липидных гидроперекисей и повышать уровень эндогенной антиоксидантной защиты в липопротеинах крови пациентов с БП. Несмотря на то, что клинические эффекты мексидола при терапии БП оказались менее

выражены по сравнению с карнозином, мексидол существенно снижал степень выраженности осложнений леводопа-терапии.

На основании полученных результатов сделано заключение о целесообразности включения мексидола в терапевтическую схему лечения БП. Детальное сопоставление эффективности карнозина и мексидола оказалось невозможным из-за различных протоколов их применения в данном исследовании.

ВЫВОДЫ

1. Карнозин и мексидол в равной степени защищают головной мозг экспериментальных животных от повреждений, вызванных окислительным стрессом на модели прснатальной гипоксии. Эти антиоксиданты препятствуют росту предобразованных гидроперекисей и повышению скорости окисления ткани головного мозга.

2. Нейропептид NAAG препятствует повышению скорости образования липидных гидроперекисей, хотя не способен предотвратить их накопление в условиях окислительного стресса, индуцированного пренатальной гипоксией. В этом отношении NAAG менее эффективен, чем карнозин и мексидол.

3. Ишемия головного мозга на фоне повышенного уровня общего гомоцистеипа в крови вызывает угнетение активности Mn-СОД и понижение резистентпости ткани мозга к Fe2+ -индуцированному окислению. Повышенный уровень гомоцистеина в крови усугубляет проявления окислительного стресса и усиливает нарушения долговременной памяти экспериментальных животных.

4. Карнозин предотвращает развитие окислительных повреждений, вызванных ишемией, в мозге экспериментальных животных и сохраняет их когнитивные функции на фоне повышенного уровня гомоцистеина.

5. Win 5521-2 способен сохранять когнитивные функции животных в условиях ишемии только при нормальном уровне гомоцистеина в крови.

6. Использование карнозина н мексидола при лечении пациентов с БП повышает эффективность эндогенной антиоксвдантной системы защиты и одновременно приводит к положительной динамике неврологических симптомов заболевания.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Добротворская И.С. Коррекция карнозином последствий гипоксического воздействия, перенесенного в пренатальный период. // Актуальные проблемы экологии и природопользования. Вып.8 (часть 1). Системная экология. М., РУДН -2006. с.74-76

2. Dobrotvorskaya I.S., Stepanova M.S., Fedorova T.N., Maklecova M.G., Boldyrev A.A. Antioxidant correction of prenatal hypoxia in rats. // International congress "Molecular basis of neurological and psychiatric disorders", September 6-10, 2006, Martin Slovak Republic, p.33

3. Добротворская И.С., Степанова M.C., Маклецова М.Г., Федорова Т.Н. Антноксидашная коррекция окислительных повреждений головного мозга крыс, перенесших пренатальную гипоксию. // Вестник РУДН, серия Экология и безопасность жизнедеятельности, №3,2007. с.13-18

4. A. Boldyrev, Т. Fedorova, S. Stvolinsky, М. Stepanova, I. Dobrotvorskaya, E. Kozlova, G. Bagueva, I. Ivanova-Smoleoskaya, S. Illarioshkin. Ca mosine increases efficiency of L-DOPA therapy of parkinsonics. // Parkinsonism and related disorders, the XVIIWFN World congress on Parkinson's disease and related disorders, Amsterdam, 9-13 December 2007, p.99

5. Boldyrev A, Stepanova M, Dobrotvorskaya I., Carpenter DO Melatonin and carnosine protect neuronal cells from excitotoxic effect of NMD A. // The 3Iá euro-asian conference on hazardous waste and human health, March 27-30,2008, Istambul, Turkey, p. 19

6. Болдырев A.A., Владыченская E.A., Карпова Л.В., Брюшкова Е.А., Аккуратов Е.Е., Беляев М.С., Добротворская И.С., Трунова О.А Роль природных факторов в защите мозга от окислительного стресса. И Конф. «Нейрохим. механизмы формирования адаптивных и патологических состояний мозга». Санкт-Петербург-Колтуши, 10-12 сентября 2008, с. 19

7. Стволинский С.Л., Федорова Т.Н., Степанова М.С., Добротворская И.С., Багыева Г.Х., Болдырев А.А. Влияние карнозина на состояние эндогенной антиоксидантной системы организма в условиях развития окислительного стресса. // Конф. «Нейрохим. мех.формир. адаптивных и патологич.сост. мозга».Санкт-Петербург-Колтуши, 10-12 сентября 2008, с.135

8. Boldyrev A., Fedorova Т., Stepanova М., Dobrotvorskaya I., Kozlova Е., G. Bagueva, Boldanova N. Ivanova-Smolenskaya 1., Illarioshkin S. Carnosine increases efficiency of DOPA therapy of Parkinson's disease: a pilot stady. // Rejuvenation research, 2008, V.ll, №4, p.821-827

9. Федорова Т.Н., Багыева Г.Х., Степанова M.C., Добротворская И.С., Иванова-Смоленская И.А., Полевая Е.В., Болдырев А.А., Иллариошкин С.Н. Карнозин повышает эффективность лекарственной терапии при болезни Паркинсона. // Неврологический вестник, 2009, Т. XLI, В.1, с.24-29

Добротворская Ирина Сергеевпа (Российская Федерация) «Защитное действие от окислительных повреждений головного мозга аитиоксидантов и модуляторов активности глутаматлых рецепторов»

В диссертационной работе показан защитный эффект карнозина и мексидола от окислительных повреждений головного мозга, вызванных пренатальной гипоксией. Применение аитиоксидантов сразу после гипоксической атаки, перенесенной в период внутриутробного развития, корригирует окислительные нарушения головного мозга, путем активации антиоксидантной системы защиты. Показано также защитное действие от окислительных повреждений активации метаботропных рецепторов mGIuR2/3 на модели пренатальной гипоксии.

Карнозин предотвращает развитие окислительного стресса и потерю когнитивных функций животных после ишемии на фоне гипергомоцистеинемии. Агонист каннабиноидных рецепторов Win 5521-2 проявляет протекторное действие только при нормальном уровне гомоцистеина в крови.

Введение карнозина и мексидола в схему лечения пациентов с болезнью Паркинсона повышает эффективность леводопа-терапия. Карнозин активирует основной фермент антиоксидантной системы защиты, супероксиддисмутазу, и улучшает двигательную активность пациентов на фоне проводимого лечения. Мексидол повышает уровень эндогенной антиоксидантной системы и снижает степень выраженности осложнений леводопа-терапии.

На основании полученных результатов было сделано заключение о целесообразности включения мексидола и карнозина в терапевтическую схему лечения болезни Паркинсона.

Irina Dobrotvorskaya (Russian Federation) "The protective effects of antioxidants and glutamate rcceptors activity modulator from

brain oxidative damages"

The protective effect of camosine and mexidol form brain oxidative damage induced by prenatal hypoxia have been shown in the work. The antioxidants therapy shortly after hypoxic episode undergone during prenatal development alters brain oxidative damage by means of the activation of endogenous antioxidant system. The protective action of glutamate receptors mGluR2/3 activation from oxidative damage on the model of prenatal hypoxia was shown.

Camosine prevent the oxidative stress and the loss of cognitive functions of animals suffered from ischemia aggravated by hyperhomocysteinemia. Agonist cannabinoid receptors Win 5521-2 demonstrates its protective effect only in conditions of normal level of homocysteine in the peripheral blood.

The introduction of camosine and mexidol into the scheme of treatment of patients with Parkinson disease (PD) increases the efficiency of levodopa-therapy. Camosine activates the essential enzyme of antioxidative system - superoxide dismutase and improve motor activity of patients with PD. Mexidol increases the level of endogenous antioxidant system and decreases the degree of levodopa-therapy side effects.

The conclusion that introduction of camosine and mexidol into the scheme of PD therapy is favorable was based on the results obtained.

Подписано в печать: 12.10.2009

Заказ № 2714 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Добротворская, Ирина Сергеевна

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ СТРЕСС ПРИ ПАТОЛОГИЯХ ЦНС.

1.1.1 Окислительный стресс, индуцированный острой гипоксией и пренатальной гипоксией.

1.1.2 Окислительный стресс, индуцированный ишемией головного мозга

1.1.3 Окислительный стресс при болезни Паркинсона.

1.2 УЧАСТИЕ ГЛУТАМАТНЫХ РЕЦЕПТОРОВ В РЕГУЛЯЦИИ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА.

1.2.1 Экзайтотоксичность глутамата.

1.2.2 ионотропные и метаботропные глутаматные рецепторы.

1.3 КАННАБИНОИДНЫЕ РЕЦЕПТОРЫ В РЕГУЛЯЦИИ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА.

1.4 ГОМОЦИСТЕИН И ЕГО МЕТАБОЛИТЫ КАК ФАКТОРЫ, ОТЯГОЩАЮЩИЕ ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ СТРЕСС.

1.5 ВОЗМОЖНЫЕ ПУТИ НЕЙРОПРОТЕКЦИИ ПРИ ОКИСЛИТЕЛЬНОМ СТРЕССЕ.

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 экспериментальные модели окислительного стресса.

2.1.1 Лабораторные животные.

2.1.2 Экспериментальная модель пренаталъной гипоксии.

2.1.3 Оценка физиологической активности крыс.

2.1.4 Оценка способности животных к обучению в Т-образном лабиринте.

2.1.5 Оценка способности животных к обучению в водном лабиринте Морриса

2.1.6 Модель 3-сосудистой ишемии головного мозга, отягощенной гомоцистеиновой кислотой.

Двухэтапная окклюзия 3 магистральных сосудов головного мозга крысы.

Описнаие экспериментальной модели гипергомоцистеинемии.

2.2 Характеристика групп пациентов в клинико-биохимических исследованиях.

2.3 Биохимические исследования.

2.3.1 Подготовка тканей для биохимических исследований.

2.3.2 Приготовление тканевых гомогенатов головного мозга крыс.

2.3.3 Выделение митохондриальной фракции головного мозга крыс.

2.3.4 Определение содержания белка в пробах по методу JIoypu.

2.3.5 Определение содержания гомоцистеина в плазме крови.

2.3.6 Определение активности Мп-СОД в митохондриальной фракции мозга крыс.

2.3.7 Регистрация хемилюминисценции, индуцированной ионами Fe2+ в тканевых гомогенатах мозга.

2.3.8 Определение активности Cn/Zn-СОД в эритроцитах человека.

2.3.9 Определение концентрации гемоглобина в крови человека.

2.3.10 Регистрация хемилюминисцеиции, индуцированной ионами Fe в липопротеинах сыворотки крови человека.

2.4 Статистическая обработка данных.

ГЛАВА III РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1 Биохимическая характеристика окислительного стресса на экспериментальных моделях in vivo.

3.1.1 Оценка окислительного стресса в мозге крыс в условиях нейрохимических и физиологических нарушений, обусловленных пренатальной гипоксией.

3.1.2 Экспериментальная ишемия головного мозга крыс, отягощенная гомоцистеиновой кислотой.

3.2. Оценка защитного действия карнозина, мексидола и NAAG на крыс, перенесших пренатальную гипоксию.

3.3. Оценка защитного действия карнозина и агониста каннабиноидных рецепторов WIN 5521-2 на модели 3-сосудистой ишемии головного мозга, отягощенной гомоцистеиновой кислотой.

3.4. Влияние антиоксидантной терапии на эффективность лечения болезни

Паркинсона.

3.4.1 Характеристика параметров окислительного стресса у пациентов с болезнью Паркинсона.

3.4.2. Влияние карнозина на параметры окислительного стресса и неврологическую симптоматику при болезни Паркинсона.

3.4.3. Влияние мексидола на параметры окислительного стресса и неврологическую симптоматику при болезни Паркинсона.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Защитное действие от окислительных повреждений головного мозга антиоксидантов и модуляторов активности глутаматных рецепторов"

Актуальность проблемы

Окислительный стресс играет важную роль в патологии головного мозга и может развиваться как на фоне уже существующего заболевания, усугубляя тяжесть его протекания, так и выступать ключевым фактором в развитии патологического процесса. Причины, вызывающие возникновение окислительного стресса, включают в себя как экзогенные (неблагоприятное внешнее воздействие, пребывание в экстремальных условиях окружающей среды), так и эндогенные факторы (например, протекание какого-либо патологического процесса).

Головной мозг особо чувствителен к окислительному стрессу, что вызвано высоким потреблением кислорода, высоким содержанием полиненасыщенных жирных кислот — основного субстрата перекисного окисления липидов, и относительно низкой активностью эндогенной антиоксидантной системы защиты (Halliwell and Gutteridge, 1999). Это приводит к тому, что многие заболевания ЦНС (сосудистые, нейродегенеративные и др.) протекают в условиях хронического окислительного стресса (Иллариошкин, 2003; Boldyrev and Johnson, 2007).

К факторам, отягощающим степень развития окислительного стресса, относят гомоцистеин и продукты его аутоокисления, главным образом, гомоцистеиновую кислоту. Концентрация в кровяном русле общего уровня гомоцистеина резко возрастает при нарушениях мозгового кровообращения (Зорилова 2006; Mauler et al., 2002) при развитии нейродегенеративных процессов, таких как болезнь Альцгеймера и болезнь Паркинсона (Seshadri et al., 2002; Mattson et al., 1999; Boldyrev et Johnson 2007). Кроме того, в настоящее время повышенный уровень гомоцистеина расценивают как самостоятельный независимый фактор риска сердечно-сосудистых и нейродегенеративных заболеваний. Являясь структурным аналогом глутамата, гомоцистеин, так же, как и продукты его окисления, способен связываться с NMDA-рецепторами (Shi et al., 2003), чрезмерная активация которых приводит к запуску целого каскада реакций индукции нейрональной смерти.

Поэтому до сих пор остается актуальной проблема поиска нейропротекторов, способных корригировать окислительные нарушения в условиях действия отягощающих факторов (гипергомоцистеинемия). Перспективным направлением в нейропротекции является применение природных антиоксидантов, нетоксических синтетических антиоксидантов и модуляторов активности глутаматных и каннабиноидных рецепторов, вовлекающихся по литературным данным в регуляцию окислительного стресса в головном мозге (Nagayama et al., 1999).

В настоящей работе проведен сравнительный анализ протекторных свойств 4 соединений: нейропептида карнозина (Болдырев, 1999), синтетического агониста каннабиноидных рецепторов Win 5521-2 (Ferraro et al., 2001; Kim et al., 2006), оказывающего моделирующий эффект на NMDA-рецепторы (Shen et al., 1996), дипептида N-ацетиласпартилглутамата (NAAG), широко представленного в ЦНС млекопитающих и являющегося агонистом метаботропных глутаматных рецепторов mGluR2/3, активация которых в экспериментальных моделях ишемии головного мозга давала выраженный нейропротекторный эффект (Cai, 2002), а также синтетического антиоксиданта мексидола, являющегося структурным аналогом соединений группы витамина В6 и показавшего свою эффективность при коррекции окислительных нарушений при гипоксии/ишемии головного мозга (Дюмаев и соавт., 1995; Федорова и соавт. 1999; Поварова и соавт. 2004).

В настоящем исследовании были разработаны экспериментальные модели окислительного повреждения головного мозга крыс, окислительный стресс в которых вызывался комбинацией ряда повреждающих факторов. Такие экспериментальные модели, по нашему мнению, в большей степени приближены к реальным условиям окислительного стресса, развивающегося у пациентов с нейродегенеративными заболеваниями.

В экспериментальных и клинико-биохимических исследованиях показана вовлеченность окислительного стресса в патогенез болезни Паркинсона (БП) (Schapira, 1997; Koziorowski et al., 1999; Gatto et al., 2002). Однако в литературе данные об эффективности антиоксидантной терапии при БП представлены противоречиво. Поэтому оценка эффективности применения антиоксидантов карнозина и мексидола в комплексном лечении пациентов с БП является важной научно-практической задачей.

Цели и задачи исследования

Целыо исследования явилась характеристика окислительных повреждений головного мозга на моделях окислительного стресса в условиях гипергомоцистеинемии и анализ защитного действия потенциальных нейропротекторов в экспериментальных и клинико-биохимических исследованиях.

В соответствии с целью были сформулированы следующие задачи-.

1. характеристика окислительных повреждений головного мозга крыс на модели пренатальной гипоксии и оценка протекторного действия карнозина, мексидола и агониста mGluR2/3 NAAG;

2. характеристика модели окислительного стресса головного мозга крыс, индуцированного 3-сосудистой ишемией, отягощенной гомоцистеиновой кислотой;

3. оценка протекторного действия карнозина и агониста каннабиноидных рецепторов Win 5521-2 на модели 3-сосудистой ишемии головного мозга на фоне введения гомоцистеиновой кислоты;

4. исследование влияния антиоксидантов карнозина и мексидола на окислительные повреждения липопротеинов крови и эффективность лечения пациентов с болезнью Паркинсона.

Научная новизна. В работе описана новая экспериментальная модель 3-сосудистой ишемии головного мозга, отягощенной повышенным уровнем гомоцистеина в крови.

На модели пренатальной гипоксии проведено сопоставление эффективности антиоксидантов карнозина и мексидола и показана их способность восстанавливать антиоксидантную защиту головного мозга.

Впервые показано протекторное действие антиоксиданта карнозина на модели 3-сосудистой ишемии головного мозга в условиях повышенного уровня гомоцистеина в крови экспериментальных животных.

Впервые проведено исследование клинической эффективности действия карнозина и мексидола в комплексной терапии БП. Показано, что введение карнозина и мексидола в схему лечения пациентов с БП усиливает эффективность лекарственной терапии на фоне улучшения антиоксидантного статуса организма.

Научно-практическая значимость. Представленные данные о защитном действии карнозина и мексидола на физиологическое состояние животных и развитие окислительного стресса в условиях пренатальной гипоксии и глобальной ишемии головного мозга, отягощенной введением гомоцистеиновой кислоты, позволяют рекомендовать использование данных антиоксидантов в комплексной терапии заболеваний ЦНС, сопровождающихся развитием окислительного стресса.

Результаты проведенного клинико-биохимического исследования указывают, что включение карнозина и мексидола в схемы лечения пациентов с болезнью Паркинсона существенно усиливает эффективность базисной терапии, что сопровождается улучшением общей двигательной активности и снижением частоты выявляемых побочных эффектов базисного лечения.

Основные положения, выносимые на защиту. Карнозин и мексидол способны корригировать окислительные нарушения головного мозга животных, перенесших пренатальную гипоксию. Защитное действие агониста метаботропных глутаматных рецепторов II класса ЫААО в данных условиях менее выражено.

Гомоцистеиновая кислота является важным фактором, усугубляющим развитие окислительного стресса в условиях ишемии головного мозга экспериментальных животных. Карнозин в этих условиях проявляет нейропротекторное действие, корригируя окислительные нарушения ткани мозга на фоне повышенного уровня гомоцистеина в крови. Агонист каннабиноидных рецепторов Win 5521-2 проявляет нейропротекторное действие только при нормальном уровне гомоцистеина в крови.

Введение карнозина в схему лечения пациентов с БП усиливает эффективность традиционной лекарственной терапии и нормализует двигательные нарушения. Мексидол в этих условиях также усиливает эффект базисной терапии и снижает степень выраженности побочных эффектов традиционной лекарственной терапии.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на конференции «Актуальные проблемы экологии и природопользования» (экологический факультет РУДН, 2006), на Международном конгрессе «Molecular basis of neurological and psychiatric disorders» (Мартин, Словакия, 2006), на XVII Международном конгрессе «Parkinsonism and related disorders» (Амстердам, Нидерланды, 2007), на III Евроазиатской конференции «Hazardous waste and human health» (Стамбул, Турция, 2008), на конференции «Нейрохимические механизмы формирования адаптивных и патологических состояний мозга» (Санкт-Петербург, Россия, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе 3 статьи в журналах, входящих в список ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация представлена на 106 страницах машинописного текста, содержит 10 таблиц и 12 иллюстраций. Работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, раздела, посвященного результатам собственных исследований и их обсуждений, заключения, выводов и списка литературы, состоящего из 46 отечественных и 139 зарубежных источников.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Добротворская, Ирина Сергеевна

выводы

1. Карнозин и мексидол в равной степени защищают головной мозг экспериментальных животных от повреждений, вызванных окислительным стрессом на модели пренатальной гипоксии. Эти антиоксиданты препятствуют росту предобразованных гидроперекисей и повышению скорости окисления ткани головного мозга.

2. Нейропептид NAAG препятствует повышению скорости образования липидных гидроперекисей, хотя не способен предотвратить их накопление в условиях окислительного стресса, индуцированного пренатальной гипоксией. В этом отношении NAAG менее эффективен, чем карнозин и мексидол.

3. Ишемия головного мозга на фоне повышенного уровня общего гомоцистеина в крови вызывает угнетение активности Mn-СОД и понижение резистентности ткани мозга к Ре2+-индуцированному окислению. Повышенный уровень гомоцистеина в крови усугубляет проявления окислительного стресса и усиливает нарушения долговременной памяти экспериментальных животных.

4. Карнозин предотвращает развитие окислительных повреждений, вызванных ишемией в мозге экспериментальных животных, и сохраняет их когнитивные функции на фоне повышенного уровня гомоцистеина.

5. Win 5521-2 способен сохранять когнитивные функции животных в условиях ишемии только при нормальном уровне гомоцистеина в крови.

6. Использование карнозина и мексидола при лечении пациентов с БП повышает эффективность эндогенной антиоксидантной системы защиты и одновременно приводит к положительной динамике неврологических симптомов заболевания.

Благодарности

Я хотела бы выразить благодарность своему научному руководителю ведущему научному сотруднику лаборатории клинической и экспериментальной нейрохимии доктору биологических наук Федоровой Татьяне Николаевне за внимание и помощь в написании данной работы. Также хочу выразить благодарность руководителю лаборатории клинической и экспериментальной нейрохимии профессору Болдыреву Александру Александровичу за постоянное внимание и интерес к моей работе.

Благодарю всех сотрудников лаборатории клинической и экспериментальной нейрохимии НЦН РАМН за дружелюбие и теплое отношение. Также хочу высказать слова благодарности своим коллегам, совместно с которыми был проведен ряд экспериментов: Степановой Марии Сергеевне, Беляеву Михаилу Сергеевичу, Маклецовой Марине Геннадьевне. Приношу благодарность доктору отделения нейрогенетики НЦН РАМН Багыевой Гульбахар Ходжаевне за предоставление клинического материала и помощь в его анализе.

Отдельно хочу поблагодарить сотрудников кафедры биохимии медицинского факультета университета им. Я. Комениуса (Словакия) за добрую дружескую поддержку и заведующего кафедрой профессора Душана Доброту за предоставление возможности научного сотрудничества и полезные рекомендации.

Заключение

В настоящей работе мы провели количественную оценку параметров окислительного стресса на модели пренатальной гипоксии и 3-сосудистой ишемии головного мозга, отягощенной гомоцистеиновой кислотой, а также охарактеризовали проявления окислительных повреждений липопротеинов сыворотки крови пациентов с болезнью Паркинсона.

На модели пренатальной гипоксии было установлено, что однократная гипоксическая атака, перенсенная в период внутриутробного развития, вызывает рост уровня предобразованных гидроперекисей в ткани мозга животных первых месяцев жизни и снижение эндогенной антиоксидантной активности. Наряду с биохимическими нарушениями у этих животных наблюдались изменения поведенческих характеристик.

Была проведена оценка защитного действия нейропептида карнозина, синтетического антиоксиданта мексидола и нейропептида ЫААО от окислительных повреждений головного мозга, вызванных пренатальной гипоксией. Природный антиоксидант карнозин и синтетический антиоксидант биогенного типа мексидол в равной степени оказывают протекторное действие на мозг путем предотвращения окислительных повреждений, развивающихся на фоне окислительного стресса, вызванного пренатальной гипоксией. МААв проявлял менее выраженное защитное действие. Дальнейшее сравнение эффектвиности действия карнозина, мексидола и ЫААО провести было не возможно из-за различий в дозах и способах введения.

Нами была применена новая модель окислительного стресса — 3-сосудистой ишемии головного мозга на фоне гипергомоцистеинемии. С помощью этого подхода нам удалось выявить наиболее эффективные пути защиты ткани мозга и когнитивных функций животных от ишемических повреждений на фоне повышенного уровня гомоцистеина в крови. Данная модель развивающегося ишемического повреждения мозга при гипергомоцистеинемии, по нашему мнению, более приближена к реальным патологическим состояниям, наблюдаемым у пациентов.

В рамках этой модели мы провели оценку защитного действия природного антиоксиданта карнозина и агониста каннабиноидных рецепторов Win 5521-2. Было установлено, что карнозин предотвращает развитие ОС, препятствуя накоплению предобразованных гидроперекисей и сохраняя эндогенную антиоксидантную активность у животных, перенесших ишемию на фоне гипергомоцистеинемии. Карнозин, в отличие от Win 5521-2, способствовал сохранению когнитивных функций мозга животных после перенесенной ишемии головного мозга и на фоне гипергомоцистеинемии, тогда как Win 5521-2 препятствовал потере когнитивных функций животных только на фоне нормального уровня гомоцистеина в крови.

В клинико-биохимическом исследовании была проведена оценка клинической эффективности включения антиоксидантов карнозина и мексидола в схему лечения пациентов с болезнью Паркинсона. Было установлено, что у пациентов с болезнью Паркинсона понижен уровень эндогенной антиоксидантной системы защиты относительно клинически здоровых доноров. Результаты проведенного исследования свидетельствуют о клинической эффективности карнозина, применяемого в сочетании с базисной терапией у пациентов с БП. Улучшение клинической симптоматики выявляется на фоне значительного улучшения антиоксидантного статуса организма. Введение карнозина в схему лечения пациентов с БП способствовало улучшению двигательной активности пациентов.

Было показано, что мексидол способен нейтрализовать рост липидных гидроперекисей и повышать уровень эндогенной антиоксидантной защиты в липопротеинах крови пациентов с БП. Несмотря на то, что эффекты мексидола при терапии БП оказались менее выражены по сравнению с карнозином, мексидол существенно снижал степень выраженности осложнений леводопа-терапии (дискинезии).

На основании полученных результатов было сделано заключение о целесообразности включения мексидола и карнозина в терапевтическую схему лечения БП.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Добротворская, Ирина Сергеевна, Москва

1. Барабой В.А., Брехман И.И., Кудряшов Ю.Б. Перекисное окисление и стресс. СПб. - 1992, 231 с.

2. Болдырев A.A. Защита белков от окислительного стресса — новая иллюзия или стратегия? // Косметика и медицина. 2005. — №2. — с.4-12

3. Болдырев A.A. Карнозин и защита тканей от окислительного стресса. Изд. Московского Университета «Диалог», Москва, 1999, 364с

4. Болдырев A.A. Парадоксы окислительного метаболизма мозга. // Биохимия. 1995. -т.60. - с. 1536-1542

5. Болдырев A.A. Функциональные взаимодействия между глутаматными рецепторами разных классов. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2000. - т. 130, №9. - с.244 - 251

6. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты. // Вестн РАМН. 1998. - №7. - с.43-52

7. Граф A.B., Маслова М.В., Маклакова A.C., Соколова H.A., Сергеев В.И. Влияние острой нормабарической гипоксии на локальный мозговой кровоток беременных самок крыс: пептидная коррекция. // Нейрохимия. — 2003. т.20, №4. - с.287-289

8. Ю.Гусев Е.И., Гехт А.Б. Болезнь Паркинсона. Основные направления лечения (электрон.ресурс) — 2002. Режим доступа: httm://www.consilium-medicum.com/media/cjnsilium/n02/67.shtml

9. П.Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. М.: Медицина, 2001.-с. 244-245

10. Иллариошкин С.Н. Конформационные болезни мозга. М.: «Янус — К», 2003.-246с.

11. Катунина Е.А. Возможности антиоксидантной терапии у больных болезнью Паркинсона. // Экспер. и клин, фармак. 2005. — №5. - с. 16-18

12. Катунина Е.А., Малыхина Е.А., Кузнецов Н.В., Авакян Г.Н., Гусев Е.И., Неробкова JI.H., Воронина Т.А.,. Барсков И.В. Антиоксиданты в комплексной терапии болезни Паркинсона. // Журн. неврол. и психиат. им. С.С. Корсакова. 2006. - № 9. - с.22-28

13. Козлова JI.B., Короид O.A. Состояние вегетативной нервной и сердечно-сосудистой систем в раннем постнатальном периоде у детей, перенесших хроническую внутриутробную гипоксию. // Российский вестник перинатологии и педиатрии. 2000. - № 6. - с.56-57

14. Конвай В.Д., Лукошин A.B., Смирнова В.Б. О возможных механизмах перекисного окисления липидов печени крыс в восстановительном периоде механической асфиксии. // Вопр. мед. химии. 1982. - т.28, №14. - с.42-46

15. Кучеряну В.Г. Мексидол усиливает противопаркинсоническое действие L-ДОФА на модели МФТП-индуцированного паркинсонизма. // Экспериментальная и клиническая фармакология. — 2001. — т.64, №1. — с.22-25

16. Ланкин В.З., Вандышев Д.Б., Тихазе А.К. Влияние гипероксии на активность супероксидцисмутазы и глутатионпероксидазы в тканях мышей. // Докл. АН СССР. 1981. - т. 259, №1. - с.229-231

17. Ланкин В.З.,Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. Свободнорадикальные процессы в норме и при заболеваниях сердечно-сосудистой системы. — М.: РКНПК МЗ РФ, 2001. 78с.

18. Левитина Е.В. Влияние мексидола на клинико-биохимические проявления перинатальной гипоксии у новорожденных детей. // Экспериментальная и клиническая фармакология. — 2001. — т.64, №5. — с.34-35

19. Левитина Е.В. Состояние мембранодестабилизирующих процессов при перинатальном поражении нервной системы у детей. // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С.Корсакова. — 2002 — т.102, №5. — с.45-48

20. Лукьянова Л. Д., Романова В. Е., Чернобаева Г. Н. Особенности окислительного фосфорилирования в митохондриях мозга крыс с различной чувствительностью к кислородной недостаточности. // Бюлл. эксперим. биол. и мед. — 1991. т.112, № 7. - с. 49-51

21. Лукьянова Л.Д. Биоэнергетическая гипоксия: понятие, механизмы и способы коррекции. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1997. - т. 124, №9. - с.244-253

22. Лукьянчук В.Д., Савченкова Л.В. Антигипоксанты: состояние и перспективы. // Экспериментальная и клиническая фармакология. — 1998. — т.61, №4. с.72-79

23. Маслова М.В., Землянский К.С., Школьников М.В. Пептидергическая коррекция влияния острой гипобарической гипоксии беременных крыс на развитие потомства. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 2001. -т.131, №2. - с.136-140

24. Махро A.B., Булыгина Е.Р., Болдырев A.A. Влияние гомоцистеина и гомоцистеиновой кислоты на гранулярные клетки мозжечка. // Нейрохимия. 2006. - т.23, №2. - с.140-145

25. Махро A.B., Машкина А.П., Соленая O.A., Трунова О.В., Тюлина О.В., Булыгина Е.Р., Болдырев A.A. Карнозин защищает от окислительного стресса, вызванного гипергомоцистеинемией.// М., Нейрохимия. 2008. -т.25, №3. - с. 1-8

26. Поберезкина Н.Б., Осинская Л.Ф. Биологическая роль супероксидцисмутазы. // Укаинск. биохим. журнал. 1989.-t.61, №2. -с. 14-23

27. Практикум по биохимии под ред. Е.С. Северина и Г.А. Соловьевой: М., МГУ. 1989, с. 81-82

28. Соколова H.A., Маслова М.В., Маклакова A.C., Ашмарин И.П. Пренатальный гипоксический стресс: физиологические и биохимические последствия, коррекция регуляторными пептидами // Успехи физиологических наук. 2002. — т.ЗЗ, №2. - с.56-67

29. Стволинский С. JL, Федорова Т. Н., Юнева М. О., Болдырев А. А. Защита Cu/Zn СОД карнозином при нарушениях окислительного метаболизма в мозге in vivo. // М. Бюл. эксперим. биол. мед. — 2003. — т.135, №2. - с.151-154

30. Стволинский СЛ., Доброта Д. Противоишемическая активность карнозина (обзор). // Биохимия. 2000. - т.65, вып.7. - с.998-1005

31. Суслина З.А., Федорова Т.Н., Максимова М.Ю., Рясина Т.В.,. Стволинский C.JI, Храпова Е.В., Болдырев A.A. Антиоксидантная терапия при ишемическом инсульте // Журн. неврол. психиатр. 2000. — №10. -с.34-38

32. Федорова Т.Н. Окислительный стресс и защита головного мозга от ишемических повреждений. Дис. докт. биол. наук. М., 2004

33. Федорова Т.Н., Болдырев A.A., Ганнушкина И.В. Перекисное окисление липидов при экспериментальной ишемии мозга // Биохимия. — 1999.-№ 1. с.94-98

34. Федорова Т.Н., Стволинский С.Л., Доброта Д., Болдырев A.A. Терапевтическое действие карнозина при экспериментальной ишемии мозга. // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии. 2002. - №1. - с.41-44

35. Шалабодов АД., Гусева Н.В. Основы мембранного транспорта. — Т.: Изд-во ТГУ. 2001, 165с.

36. Яхно H.H., Павлова А.И., Роговина Е.Г. Ювенильный паркинсонизм.// Неврологический журнал. — 1996. — №2. — с.29-33

37. Abraham S., Soundararajan C.C., Vivekanandhan S. & Behari M. Erythrocyte antioxidant enzymes in Parkinson's disease. // Indian J. Med Res. — 2005.-v.121.-p.m-H5

38. Bao WL, Williams AJ, Faden AI, Tortella FC. Selective mGluR5 receptor antagonist or agonist provides neuroprotection in a rat model of focal cerebral ischemia. //Brain Res. -2001. v.20, N922(2). - p. 173-179

39. Barlow BK, Lee DW, Cory-Slechta DA, Opanashuk LA. Modulation of antioxidant defense systems by the environmental pesticide maneb in dopaminergic cells. // Neurotoxicology. 2005. - v.26, N1. - p.63-75

40. Blandini F, Greenamyre JT. Protective and symptomatic strategies for therapy of Parkinson's disease. // Drugs Today (Bare). — 1999. v.35, N6. — p.473-483

41. Boldyrev AA, Johnson P. Homocysteine and its derivatives as possible modulators of neuronal and non-neuronal cell glutamate receptors in Alzheimer's disease. // J. Alzheimers Dis. 2007. - v. 11, N2. - p.219-228

42. Bostantjopoulou S, Kyriazis G, Katsarou Z, Kiosseoglou G, Kazis A, Mentenopoulos G. Superoxide dismutase activity in early and advanced Parkinson's disease. // Funct Neurol. 1997. - v.12, N2. - p. 63-68

43. Bruno V, Battaglia G, Copani A, D'Onofrio M, Di Iorio P, De Blasi A, Melchiorri D, Flor PJ, Nicoletti F. Metabotropic glutamate receptor subtypes as targets for neuroprotective drugs. // J. Cereb Blood Flow Metab. 2001. — v.21, N9 -p.1013-1033

44. Bueler H. Impaired mitochondrial dynamics and function in the pathogenesis of Parkinson's disease. // Exp Neurol. 2009. - v.218, N2. -p.235-246

45. Buresh J., Bureshiva O., Huston J. Techniques and Basic Experiments for the study of Brain and Behavior. Amsterdam; N.Y.: Elsevier. 1983. — p. 326

46. Cai Z., Lin S., Rhodes P.G. Neuroprotective effects of N-acetylaspartyl glutamate in a neonatal rat model of hypoxia-ischemia. // Eur. J. Pharmacol. -2002. v.22, N437(3). - p. 139-145

47. Choi D.W. Excitotoxic cell death. // J. Neurobiol. 23, 1992. -p.1261-1276

48. Chung K.K, Dawson V.L, Dawson T.M. New insights into Parkinson's disease. // J. Neurol. 2003. - v.250 (Suppl.). - p. 15-24

49. Clark W.M., Rinker L.G., Lessov N.S., Lowery S.L., Cipolla M.J. Efficacy of Antioxidant Therapies in Transient Focal Ischemia in Mice. // Stroke. —2001. -v.32- p. 1000-1004

50. Conn P.J., Pin J.P. Pharmacology and functions of metabotrophic. // receptors. // Ann Rev Pharmacol Toxicol. 1997. - v.37. - p.205-237

51. Coyle J.T., Puttfarcken P. Oxidaive stress, glutamate, and neurodegenerative disorders. // Science. — 1993. v.262. — p. 689-695

52. Dauer W, Przedborski S. Parkinson's disease: mechanisms and models. // Neuron. 2003. - v. 11, N6. - p. 889-909

53. Dawson T.M., Dawson V.L. Molecular pathways of neurodegeneration in Parkinson's disease. // Science. -2003. v.31. -p.819-822

54. De Blasi A, Conn PJ, Pin J, Nicoletti F. Molecular determinants of metabotropic glutamate receptor signaling. // Trends Pharmacol Sci. — 2001. — v.22, N3.-p.l 14-120

55. Deadwyler SA, Hampson RE, Bennett BA, Edwards TA, Mu J, Pacheco MA, Ward SJ, Childers SR. Cannabinoids modulate potassium current in cultured hippocampal neurons. // Receptors Channels. 1993. - v.l, N2. — p.121-134

56. Dierkes P.W., Hochstrate P., Schlue W.R. Distribution and functional' properties of glutamate receptors in the leech central nervous system. //J. Neurophys. 1996. - v.75 - p.2312-2321

57. Dingledine R., McBain C.J. Excitatory amino acids transmitters. // In: Basic Neurochemistry. Siegal GJ, Agronoff RW, Albers BW, Molinof PB (eds). Raven Press, New York, 1994. p.367-387

58. Dobrota D., Fedorova T., Stvolinsky S., Strapkova A. Carnosine protects brain of the rats and mongolian gerbils against ischemic injury: after — stroke — effect. //Neurochem Res. 2005. - v.30, N10. -p.1283-1288

59. Ebadi M., Srinivasan S.K, Baxi M.D. Oxidative stress and antioxidant therapy in Parkinson's disease. // Prog. Neurobiol. 1996. - v.48, N1. — p. 1-19

60. Erecinska M. and Dagiani F. Relationships between the neuronal sodium/potassium pump and energy metabolism. // J. Gen. Physiol. 1990. — v.95. -p.591-616

61. Erecinska M., Nelson D., Silver I.A. Metabolic and energetic properties of isolated nerve ending particles (synaptosomes). // Biochim. Biophys. Acta. -1996.-v.1277-p. 13-34

62. Fariss M.W., Chan C.B., Patel M., Van Houten B., Orrenius S. Role of mitochondria in toxic oxidative stress. // Mol. Interv. — 2005. v.5, N2. - p.94-111

63. Ferraro L, Tomasini MC, Gessa GL, Bebe BW, Tanganelli S, Antonelli T. The cannabinoid receptor agonist WIN 55,212-2 regulates glutamate transmission in rat cerebral cortex: an in vivo and in vitro study. // Cereb Cortex. 2001. - v. 11, N8 - p.728-733

64. Fridovich I. Biological effects of superoxyde radical. // Arch, of biochem. and biophysics. 1986. - v.247, N1. - p. 1-11

65. Gatto EM, Riobo N, Carreras MC, Poderoso JJ, Micheli FE. Neuroprotection in Parkinson's disease; a commentary. // Neurotox Res. — 2002.-v.4, N2.-p.141-145

66. Gerdeman G, Lovinger DM. CB1 cannabinoid receptor inhibits synaptic release of glutamate in rat dorsolateral striatum. // J Neurophysiol. — 2001. — v.85, N1 -p.468-471

67. Gido G., Kristian T., Siesjo B.K. Extracellular potassium in a neocortical core area after transient focal ischemia. // Stroke. 1997, v. 28. - p.206-210

68. Gupta A., Hasan M., Chander R., Kapoor N.K. Age-related elevation of lipid peroxidation products: diminution of superoxide dismutase activity in the central nervous system of rats. // J. Gerontol. 1991. — v.37, N6. - p.305-309

69. Gutteridge J.M.C. Oxidative stress in neurobiology: an important role for iron. // Oxidative stress and aging. ed. by Cutler R.G., 1995, p.287-303

70. Halliwell B. and Gutteridge, J.M.C. Free radicals in biology and medicine. — 1999, 85lp.

71. Hankey GJ, Eikelboom JW. Homocysteine levels in patients with stroke: clinical relevance and therapeutic implications. // CNS Drugs. 2001 — v. 15, N6 - p.437-443

72. Hassan A, Hunt BJ, O'Sullivan M, Bell R, D'Souza R, Jeffery S, Bamford JM, Markus HS. Homocysteine is a risk factor for cerebral small vessel disease, acting via endothelial dysfunction. // Brain. 2004. - v. 127. - p.212-219

73. Hattori N, Sato S. Animal models of Parkinson's disease: similarities and differences between the disease and models. //Neuropathology. 2007. - v.27, N5. -p.479-483

74. Henry DJ, Chavkin C. Activation of inwardly rectifying potassium channels (GIRK1) by co-expressed rat brain cannabinoid receptors in Xenopus oocytes. // Neurosci Lett. 1995. - v. 17, N186 (2-3) - p.91-94

75. Hirsch E.C. Does oxidative stress participate in nerve cell death in Parkinson's disease? // Eur. Neurol. 1993. - v.33 (Suppl.). - p.52-59

76. Hoshino T., Ohta V., Jshigino J. The effect of sulfhydryl compounds on the catalytic activity of Cu,Zn-superoxide dismutase purified from rat liver. // Experientia. 1985. —v.41, N11. — p.1416-1419

77. Ischiropoulos H., Beckman J.S. Oxidative stress and nitration in neurodegeneration: cause, effect, or association? // J. Clin. Invest. 2003. -v.lll. —p.163-169

78. Janicke B. and Coper H. The effects of prenatal exposure to hypoxia on the behavior of rats during their life span. // Pharm. Biochem. and Behavior. — 1994. v.48, N4. - p.863-873

79. Javoy-Agid F. Dopamin cell death in Parkinso's disease. //L. Packer free radicals in the brain. 1992, p. 99-108

80. Jenner P, Olanow CW. Oxidative stress and the pathogenesis of Parkinson's disease. //Neurology. 1996. — v.47, N6 (Suppl 3). - p. 161-170

81. Jenner P. Oxidative mechanisms in nigral cell death in Parkinson's disease. // Mov Disord. 1998. - v.13 (Suppl 1). - p.24-34

82. Kaur D., Andersen J. Does cellular iron dysregulation play a causative role in Parkinson's disease? // Ageing Res. Rev. 2004. — v.3. - p.327-343

83. Kehrer J.P. Free radicals as mediators of tissue injury and disease. // Crit. Rev. Toxicol. 1993. - v.23. -p.21-48

84. Kellog E.W., Fridovich I. Superoxide dismutase in the rat and mouse as a function of age and jongevity. // J. Gerontol. 1986. - v.31, N4. — p.405-408

85. Khaspekov LG, Brenz Verca MS, Frumkina LE, Hermann H, Marsicano G, Lutz B. Involvement of brain-derived neurotrophic factor in cannabinoid receptor-dependent protection against excitotoxicity. // Eur J Neurosci. 2004. - v.19, N7. - p. 1691-1698.

86. Kim SH, Won S J, Mao XO, Jin K, Greenberg DA. Involvement of protein kinase A in cannabinoid receptor-mediated protection from oxidative neuronal injury. // J Pharmacol Exp Ther. 2005. - v.313, N1. - p.88-94

87. Kim SH, Won S J, Mao XO, Jin K, Greenberg DA. Molecular mechanisms of cannabinoid protection from neuronal excitotoxicity. // Mol Pharmacol. 2006. - v.69, N3 - p.691-696

88. Kinouchi H, Epstein CJ, Mizui T, Carlson E, Chen SF, Chan PH. Attenuation of focal cerebral ischemic injury in transgenic mice overexpressing CuZn superoxide dismutase. // Proc Natl Acad Sci USA.- 1999. v. 15, N88(24)-p.l 1158-11162

89. Kohno K, Higuchi T, Ohta S, Kohno K, Kumon Y, Sakaki S. Neuroprotective nitric oxide synthase inhibitor reduces intracellular calcium accumulation following transient global ischemia in the gerbil. // Neurosci Lett.- 1997. -v.7, N224(1) -p. 17-20

90. Koziorowski D, Jasztal J. Factors which can play important role in pathogenesis of Parkinson disease. // Neurol Neurochir Pol. — 1999. — v.33, N4. -p.907-921

91. Kruman II, Culmsee C, Chan SL, Kruman Y, Guo Z, Penix L, Mattson MP. Homocysteine elicits a DNA damage response in neurons that promotes apoptosis and hypersensitivity to excitotoxicity. // J Neurosci. — 2000.- v.l 5, N20(18). p.6920-6926

92. Larumbe R. Oxidative stress and Parkinson's disease. // An Sist Sanit Navar. 1998. - v.21, N2. - p. 187-196

93. Liou HH, Tsai MC, Chen CJ, Jeng JS, Chang YC, Chen SY, Chen RC. Environmental risk factors and Parkinson's disease: a case-control study in Taiwan. //Neurology. 1997. - v.48, N6. -p.583-588

94. Lipton P. Ischemic cell death in brain neurons. // Physiol Rev. 1999. -v.79 -p.1431-1568

95. Luzoun-Kaplan V, Zuckerman M, Perez-Polo J.R, Golan H.M. Prenatal hypoxia down regulates the GABA pathway in newborn mice cerebral cortex; partial protection by MgS04. // I J. of Develop. Neurosc. — 2008. — v.26, N1. — p.77-85

96. Mainprize T, Shuaib A, Ijaz S, Kanthan R, Miyashita H, Kalra J. GABA concentrations in the striatum following repetitive cerebral ischemia. // Neurochem Res. 1995. - v.20, N8. - p.957-961

97. Mann VM, Cooper JM, Daniel SE, Srai K, Jenner P, Marsden CD, Schapira AH. Complex I, iron, and ferritin in Parkinson's disease substantia nigra. // Ann Neurol. 1994. - v.36, N6. - p.876-881

98. Matsuda S, Umeda M, Uchida H, Kato H, Araki T. Alterations of oxidative stress markers and apoptosis markers in the striatum after transient focal cerebral ischemia in rats. // J. Neural Transm. — 2009. — v. 116, N4. — p.395-404

99. Matsuyama T, Michishita H, Nakamura H, Tsuchiyama M, Shimizu S, Watanabe K, Sugita M. Induction of copper-zinc superoxide dismutase in gerbil hippocampus after ischemia. // J. Cereb Blood Flow Metab. — 1993. -v.13, N1. — p.135-144

100. Mattson MP, Pedersen WA, Duan W, Culmsee C, Camandola S. Cellular and molecular mechanisms underlying perturbed energy metabolism and neuronal degeneration in Alzheimer's and Parkinson's diseases. // Ann N Y Acad Sci. 1999. - v.893. - p.154-175

101. Maurissen JP, Hoberman AM, Garman RH, Hanley TR Jr. Lack of selective developmental neurotoxicity in rat pups from dams treated by gavage with chlorpyrifos. // Toxicol Sci. 2000. - v.57, N2. - p.50-63

102. Meldrum B.S. The role of glutamate in epilepsy and other central nervous disorders. // Neurology. 1994. - v.44. - p. 14-23

103. Melis M, Pillolla G, Bisogno T, Minassi A, Petrosino S, Perra S, Muntoni AL, Lutz B, Gessa GL, Marsicano G, Di Marzo V, Pistis M.

104. Protective activation of the endocannabinoid system during ischemia in dopamine neurons. // Neurobiol Dis. 2006. - v.24, N1 - p.15-27

105. Mies G., Paschen W., Hossmann K.-A. Cerebral blood flow, glucose utilization, regional glucose, and ATP content during the maturation period of delayed ischemic injury in gerbil brain. // J. Cereb. Blood Flow Metab. — 1990. v.10. — p.638-645

106. Miller JW. Homocysteine, Alzheimer's disease, and cognitive function. //Nutrition. -2000. v. 16(7-8). -p.675-677

107. Miller S, Kesslak J.P., Romano C., Cotman C.W. Roles of metabotropic receptors in brain plasticity and pathology. //Ann NY Acad Sci. -1996.-v. 757. p.460-474

108. Misra H.P., Fridovich I. The role of superoxide anion in the autoxidation of epinephrine and a simple assay for superoxide dismutase. // Biochemistry. 1972. - v.247. - p.3170-3175

109. Moyanova SG, Kortenska LV, Mitreva RG, Pashova VD, Ngomba RT, Nicoletti F. Multimodal assessment of neuroprotection applied to the use of MK-801 in the endothelin-1 model of transient focal brain ischemia. // Brain Res. -2007.-v.ll,Nl 153.-p .58-67

110. Mukhin AG, Ivanova SA, Faden AI mGluR modulation of posttraumatic neuronal death: role of NMD A receptors. // Neuroreport. — 1997. — v.28, N8. -p.2561-2566

111. Muller T, Kuhn W. Homocysteine levels after acute levodopa intake in patients with Parkinson's disease. // Mov Disord. 2009. — v. 15, N24 — p. 1339-1343

112. Muller T, Renger K, Kuhn W. Levodopa-associated increase of homocysteine levels and sural axonal neurodegeneration. // Arch Neurol. — 2004. v.61, N5 - p.657-560

113. Nagayama T, Sinor AD, Simon RP, Chen J, Graham SH, Jin K, Greenberg DA. Cannabinoids and neuroprotection in global and focal cerebral ischemia and in neuronal cultures. // J. Neurosci. 1999. - v. 15, N19. -p.2987-2995

114. Naoi M, Maruyama W. Cell death of dopamine neurons in aging and Parkinson's disease. // Mech Ageing Dev. 1999. - v.l 11. - p. 175-188

115. Nedergaard M. and Hansen A.J. Characterization of cortical depolarizations evoked in focal cerebral ischemia. // J. Cereb. Blood Flow Metab. 1993. - v. 13.- p.568-574

116. Ogawa N., Mori A. Parkinson's disease, dopamine and free radicals. // Oxidative stress and aging, ed. by Cutler R.G. — 1995. — p.303-309

117. Olney J.W.E. // J. Neural. Transm. Suppi. 1994. - v.43. - p. 47-51.

118. Packer M.A. and Murphy M.P. Peroxynitrite formed by simultaneous nitric oxide and superoxide generation causes cyclosporin-a-sensitive mitochondrial calcium efflux and depolarization. // Eur. J. Biochem. — 1995. -v.8.-p.231-239

119. Parmentier-Batteur S, Jin K, Xie L, Mao XO, Greenberg DA. DNA microarray analysis of cannabinoid signaling in mouse brain in vivo. // Mol Pharmacol. 2002. - v.62, N4 - p.828-835

120. Perrm D., Mamet J., Scarna H., Roux J.C., Berod A., Dalmaz Y. Long-term prenatal hypoxia alters maturation of brain catecholaminergic systems and motor behavior in rats. // Synapse. 2004. - v.54, N2. - p.92-101

121. Peyronnet J., Roux J.C., Geloen A., Tang L.Q., Pequignot J. M., Lagercrantz H., Dalmaz Y. Prenatal hypoxia impairs the postnatal development of neural and functional chemoafferent pathway in rat. // J. Physiol. — 2000. — v.524, N2 — p.525-537

122. Phillis JW, O'Regan MH Mechanisms of glutamate and aspartate release in the ischemic rat cerebral cortex. // Brain Res. — 1996 — v. 19, N730. — p.150-164

123. Piantadosi C.A. and Zhang J. Mitochondrial generation of reactive oxygen species after brain ischemia in the rat. // Stroke. 1996. — v.27. — p.327-331

124. Piantadosi CA, Zhang J. Mitochondrial generation of reactive oxygen species after brain ischemia in the rat. // Stroke. — 1996. v.27, N2 - p.327-331

125. Pincemail J. Meurisse M., Limet R., Defraigne J.O. Fumée de cigarette : une source potentielle de production d'espèces oxygénées actives. // Medisphère. 1998. - v.78. -p.37-39

126. Prilipko L. The Possible Role of Lipid Peroxidation in the Pathophysiology of Mental disorders. // Free radicals in the brain aging, neurological and mental disorders. 1992, p. 146-153

127. Pulsinelli W.A., Brierley J.B. A new model of bilateral hemispheric ischemia in the unanesthetized rat.//Stroke. 1979. - v. 10, N3. - p.267-272

128. Rao AM, Hatcher JF, Dempsey RJ. Neuroprotection by group I metabotropic glutamate receptor antagonists in forebrain ischemia of gerbil. // Neurosci Lett. 2000. - v.20, N293. - p. 1-4

129. Sanzhieva LT, Graf AS, Maslova MV, Lelekova TV, Sokolova NA. Effect of acute hypoxia in pregnant females on contractile activity of lymphatic vessels in the offspring. // Bull Exp Biol Med. 2004. - v.138, N1. - p.12-13

130. Schoepp D.D. Novel functions for subtypes of metabotropic glutamate receptors. //Neurochem Int. 1994. - v.24, N5. -p.439-449

131. Seshadri S, Beiser A, Seihub J, Jacques PF, Rosenberg IH, DAgostino RB, Wilson PW, Wolf PA. Plasma homocysteine as a risk factor for dementia and Alzheimer's disease. // N Engl J Med. 2002. - v.14, N346. - p.476-478

132. Shapira A.H. Oxidative stress in Parkinson's disease // Neuropathol. Appl.Neurobiol. 1995. - v.21.-p. 3-9

133. Shapira AH. Pathogenesis of Parkinson's disease. // Baillieres Clin Neurol. 1997. -v.6, N1. - p. 15-36

134. Shen M, Piser TM, Seybold VS, Thayer SA. Cannabinoid: receptor agonists inhibit glutamatergic synaptic transmission in rat hippocampal cultures. // JNeurosci. 1996. - v. 15, N16 - p.4322-4334

135. Shen M, Thayer SA. Cannabinoid receptor agonist protect cultured rat hippocampal neurons from exitotoxity. // Mol Pharmacol. — 1998. — v.54, N3. — p.459-462

136. Shi Q, Hufeisen SJ, Wroblewski JT,Nadeau JH, Roth BL. L-homocysteine sulfinic acid and L-homocysteic acid stimulate phosphoinositide hydrolysis in rat cortical neurons. // Ann N Y Acad Sei. 2003. - v. 1003. -p.461-463

137. Solenski N.J., Kwan A.L., Yanamoto H., Bennett J.P.,. Kassell N.F, Lee K.S. Differential hydroxylation of salicylate in core and penumbra regions during focal reversible cerebral ischemia. // Stroke. 1997. - v.28. - p.2545-2552

138. Taylor C.P., Weber M.L., Gaughan C.L., Lehning E.J., R.M. Lopachin R.M. Oxygen/glucose deprivation in hippocampal slices: altered intraneuronal elemental composition predicts structural and functional damage. // J. Neurosci. 1999. - v. 19. - p.619-629

139. Terpstra M, Marjanska M, Henry PG, Tkac I, Gruetter R. Detection of an antioxidant profile in the human brain in vivo via double editing with MEGA-PRESS. // Magn. Reson. Med. 2006. - v.56, N6. -p.l 192-1199

140. Turrens J.F. Mitochondrial formation of reactive oxygen species. // J. Physiol. 2003. - v.522, N2. - p.335-344

141. Twitchell W, Brown S, Mackie K. Cannabinoids inhibit N- and P/Q-type calcium channels in cultured rat hippocampal neurons. // J. Neurophysiol. 1997.-v.78,Nl.-p.43-50

142. Ueland PM,Refsum H, Beresford SA, Vollset SE. The controversy over homocysteine and cardiovascular risk. // Am J Clin Nutr. 2000. - v.72, N2 — p.324-332

143. Vanella A., Geremia E., Durco J. Superoxide dismutase activity in aging rat brain. // Ital. J. Biochem. 1980. - v.29, N6. - p.405-408

144. Weber CA, Ernst ME. Antioxidants, supplements, and Parkinson's disease. // Ann. Pharmacother. 2006. - v.40, N5. - p. 935-938

145. Xue Q, Zhang L. Prenatal hypoxia causes a sex-dependent increase in heart susceptibility to ischemia and reperfusion injury in adult male offspring: role of protein kinase C epsilon. // J. Pharmacol Exp Ther. — 2009. — v.330, N2. -p.24-32.

146. Yamamoto M., Shima S., Uozumi T. A possible role of lipid peroxidation in cellular damage coused by cerebral ischemia and protective effect of a-tocopherol administration. // Stork. 1983 — v.14. - p.977-982

147. Yamashita H, Matsumoto M. Molecular pathogenesis, experimental models and new therapeutic strategies for Parkinson's disease. // Regen Med. -2007. v.2, N4. - p .447-455

148. Yang G., Chan P.H, Chen J. Human cooper-zinc superoxide dismutase transgenic mice are highly resistant to reperfiision injury after focal cerebral ischemia. // Stroke 1994. - v.25. - p. 165-170

149. Yoshioka H, Sugita M, Kinouchi H. Neuroprotective effects of group II metabotropic glutamate receptor agonist DCG-IV on hippocampal neurons in transient forebrain ischemia. // Neurosci Lett. 2009. - v.25, N461(3) — p.266-267

150. Young AJ, Johnson S, Steffens DC, Doraiswamy PM. Coenzyme Q10: a review of its promise as a neuroprotectant. // CNS Spectr. 2007. — v.12, Nl.-p.62-68

151. Zaidan E, Sims NR. The calcium content of mitochondria from brain subregions following short-term forebrain ischemia and recirculation in the rat. // J Neurochem. 1994. - v.63, N5 - p. 1812-1819

152. Zhang M, Martin BR,Adler MW,Razdan RK, Jallo JI, Tuma RF. Cannabinoid CB(2) receptor activation decreases cerebral infarction in a mouse focal ischemia/reperfusion model. // J. Cereb Blood Flow Metab. 2007. — v.27, N7. - p.1387-1396

153. Zhang Y.-L., Harting J.K., Lipton P. Calcium influx, but not release from internal stores induces MAP2 degradation during ischemia in the rat hippocampus: compartmentalization of calpian activation. // Soc. Neurosci. — 1996.-v.22.-p.2152

154. Zhuravin I.A., Dubrovskaya N.M., Tumanova N.L. Postnatal physiological development of rats after acute prenatal hypoxia. // Neurosc Behav Physiol. 2004. - v.34, N8. - p.809-816

155. Zini I, Tomasi A, Grimaldi R,Vannini V, Agnati LF. Detection of free radicals during brain ischemia and reperfusion by spin trapping and microdialysis. // Neurosci Lett. 1992. - v.27, N138. - p.279-282