Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Модуляция физиологических ответов глутаматрецептивных нейронов поли- и моноклональными антилелами и олигопептидами

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Маргулис, Михаил Наумович

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА I. ГЕТЕРОГЕННОСТЬ РЕЦЕПТОРОВ ГЛУТАМАТА.

1.1. Взаимоотношения структура-активность агонистов Ь-глутамата и их рецепторов.

1.2. Фармакологические подтипы рецепторов глутамата.

1.2Л. Класс NMDA рецепторов.

1.2.2. Класс HeNMDA рецепторов.

1.2.3. Другие типы рецепторов глутамата.

1.3. Характеристика глутаматных рецепторов моллюсков.

ГЛАВА 2. РЕГУЛЯЦИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ОТВЕТОВ НЕЙРОНОВ ПРИРОДНЫМИ СОЕДИНЕНИЯМИ.

2.1. Модификация рецепторной функции природными токсинами.

2.2. Влияние моно- и политональных антител на рецепторные функции нейронов.

2.3. Действие глутаматсодержащих пептидов на функциональные ответы нейронов.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1. Характеристика объекта.

3.2. Приготовление препарата.

3.3. Экспериментальная установка.

3.4. Методика эксперимента на ЦНС лягушки.

3.5. Гистохимические методики.

3.6. Некоторые свойства антител, полученных к ГМБ головного мозга крысы и человека.

3.7. Схема инкубации препаратов с МКАТ.

3.8. Материалы.

3.9. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 4. ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

НЕЙРОННЫХ МОДЕЛЕЙ.

4.1. Морфологическая и функциональная характеристика идентифицированных нейронов моллюска.

4.2. Иммуногистохимическая характеристика нейронов моллюска.

4.3. Иммуногистохимические свойства глутаматергических синапсов ЦНС лягушки.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ ПОЛИ- И МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ НА ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ НЕЙРОНОВ, ЧУВСТВИТЕЛЬНЫХ К ГЛУТАМАТУ.

5.1. Действие МКАТ ЗСП на нейроны моллюска.

5.2. Действие МКАТ 7С5 и 8Е12 на нейроны моллюска.

5.3. Действие поликлональной антисыворотки (ПКС) на нейроны моллюска.

5.4. Эффекты МКАТ 7С5 и МКАТ 8Е12 на нейроны спинного мозга лягушки.

ГЛАВА 6. ЭФФЕКТЫ ДЕЙСТВИЯ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ ГЛУТАМАТСОДЕРЖАЩИХ СОЕДИНЕНИИ НА НЕЙРОНЫ МОЛЛЮСКА.

6.1. Действие веществ ряда глутамат- и аспартат-содержащих дипептидов.

6.2. Модификация ответов нейронов на ГЛУ при воздействии фактора, ингибирующего связывание (ФИС) L-ГЛУ.

6.3. Действие сдвоенных производных ГЛУ на глутаматчувствительные нейроны моллюска.

6.4. Модулирующее действие диэтилового эфира глутаминовой кислоты на ответы нейронов при аппликации ГЛУ.

ГЛАВА 7. ДЕЙСТВИЕ ПЕПТИДНЫХ ФРАКЦИИ ЛИКВОРА И ПЛАЗМЫ КРОВИ НА НЕЙРОНЫ МОЛЛЮСКА.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Модуляция физиологических ответов глутаматрецептивных нейронов поли- и моноклональными антилелами и олигопептидами"

Актуа^ностьпроблемы.

В настоящее время прочно утвердилась концепция, что большое число синапсов ЦНС использует возбуидаедие аминокислоты (ВАК) как нейромедиаторы (Monoghan et al, 1989). Рецепторы ВАК опосредуют синаптическую передачу в возбуждающих путях ЦНС, принимая участие в самых разнообразных видах деятельности (память, обучение, эмоции и др.). Полагают, что механизмы регуляции синаптической эффективности связаны с модификацией синаптических процессов: облегчением нейромедиаторной передачи, изменением количества активируемых рецепторов или даже сменой их подтипа,- и обусловлены вкладом именно рецепторов ВАК (Крышталь и др., 1988', Davies et al,, 1989). В то же время при некоторых неврологических заболеваниях гипервозбудимость рецепторов ВАК может приводить к нейрональной дегенерации и вызывать гибель клеток в ткани мозга (Engelsen,1986).

В последние годы отмечаются несомненные успехи в изучении механизмов действия рецепторов ВАК. Так, обнаружены селективные агонисты и конкурентные антагонисты, представлены характеристики ВАК-активируемых ионных каналов и найдены рецепторы ВАК, связанные со вторичными посредниками (Sugijama,1987; Palmer et aL,1989; Магазаник,1989). Наибольшее внимание исследователей сосредоточено на изучении структуры и функции одного из важнейших классов рецепторов ВАК - рецепторов глутамата (ГЛУ) (Дамбинова,1989). Вместе с тем, вопросы, связанные с гетерогенностью и разнообразными функциями подтипов глутаматных рецепторов, их молекулярной организацией и топографией на мембране нейронов, а также механизмами модификации их физиологических ответов только начинают проясняться. 7

Несмотря на то, что фармакологический скрининг нейротропных конформационных аналогов ГЛУ в модельных системах является традиционным подходом к изучению указанных проблем, электрофизиологические эффекты действия глутаматсодержащих соединений, как модуляторов рецепторов ВАК, остаются еще мало изученными. Детальный анализ их эффектов и сопоставление с физиологическими ответами глутаматных рецепторов при действии известных агонистов и антагонистов необходим как для теоретического построения структуры рецептора и его узнающих центров, так и для понимания механизмов регуляции рецепторной функции.

В этом плане представляют интерес вопросы эндогенной модуляции глутаматных рецепторов. Известно, что в ткани мозга существуют разнообразные эндогенные вещества: антитела, пептиды, вторичные посредники и их активаторы и др.,- которые способны влиять на функционирование мембранных рецепторов. Полагают, что эти соединения могут выступать в качестве антагонистов аллостерического действия, либо являться модификаторами эффектов нейромедиаторов, либо обратимыми блокаторами, способными изменить конформацию рецепторно-канальных комплексов (Ашмарин,1979; Долго-Сабуров,1987; Kandel et aL,1988). Элементы такого влияния могут лежать в основе как нормальных физиологических процессов, так и патологических реакций в нервной системе.

Известны факты принципиального характера, подтверждающие наличие механизмов взаимодействия нервной, иммунной и эндокринной систем, в которых существенное внимание уделяется регуляторной роли нейропептидов (Дамбинова,1989). Некоторые аспекты этих проблем, вероятно, могут быть проанализированы на экспериментальных моделях при непосредственном воздействии 8 указанных соединений на рецепторы глутамата. Так, исследование влияния моноклональных антител (МКАТ) на функциональные ответы нейронов не только позволяет расширить круг новых зондов-лигавдов для выяснения структуры рецепторов ГЛУ, но и важно в связи с выявляемой в последние годы вовлеченностью аутоиммунных процессов в патогенез неврологических заболеваний (Демина,1990).

Представляет интерес действие эндогенных олигопептидов и, в частности, глутаматсодержащнх пептидов, на функцию глутаматных рецепторов ЦНС. Недавно появились сведения об участии факторов пептидной природы в формировании устойчивых патологических состояний, были получены первые результаты использования эндогенных глутаматсодержащнх олигопептидов в лечении двигательных нарушений (Бехтерева и др. ,1984). Предполагается, что эти олигопептиды имеют отношение к обеспечению регуляции синаптической эффективности и межнейрональных взаимодействий при сложных видах деятельности мозга (Бехтерева,1988). Однако интерпретация феноменов, полученных в клинике нервных болезней, имеет ряд трудностей как медико-этического, так и методического характера. Вышесказанное определяет актуальность исследования нейротропных эффектов ряда эндогенных глутаматсодержащнх олигопептидов при биотестировании на адекватных экспериментальных клеточных моделях.

Исследование структуры и функции глутаматных рецепторов в Отделе нейрофизиологии человека НИЙЭМ АМН СССР проводится в рамках программы "Фундаментальные науки - медицине" по разделу 02.11.08 (изучение механизмов функционирования хеморецептивных мембран) и "Мозг" по разделу 4.1.3 (физиолого-биохимические основы устойчивых патологических состояний ЦНС). 9

Целью настоящей работы явилось изучение модификации физиологических ответов глутаматрецептивных нейронов поли- и моноклональными антителами к глутаматсвязывающим мембранным белкам (ГМБ) и олигопептидами.

Были поставлены следующие задачи:

I.Охарактеризовать глутаматчувствительные нейроны в разных экспериментальных клеточных моделях.

2.Изучить влияние поли- и моноклональных антител к ГМБ головного мозга крысы и человека на ответы идентифицированных нейронов моллюска при аппликации: глутамата.

3.Исследовать модулирующее действие поли- и моноклональных антител к ГМБ мозга человека на функциональные ответы (ДК ВПСП) мотонейронов лягушки.

4.Изучить эффекты действия синтетических низкомолекулярных глутаматсодержащих соединений на глутаматчувствительные идентифицированные нейроны моллюска.

5.Определить возможные влияния эндогенных глутаматсодержащих олигопептидов с мол. массой около 2500 Да на электрофизиологические параметры нейронов.

1.МКАТ ЗСП, полученное к ГМБ с мол.массой 56-60 кДа из мозга крысы, изменяет соотношение амплитуд Б- и Н-фаз ответа идентифицированных нейронов моллюска ПапогЬагшз согаеив при аппликации ГЛУ. МКАТ 7С5, полученное к ГМБ с мол. массой 68-70 кДа из мозга человека, обратимо уменьшает на 70% в среднем Ю-ответы при аппликации глутамата на идентифицированные нейроны моллюска. Поликлональные антитела (АТ), полученные к ГМБ мозга человека, обратимо уменьшают глутаматные Б- и Н-ответы

10 нейронов моллюска.

2.Моноклональные антитела к ГМБ мозга человека вызывают различные изменения компонентного состава ДК ВПСП мотонейронов лягушки Кала ridibunda: МКАТ 8EI2 незначительно потенцирует поздние (полисинаптические) компоненты функционального ответа, с латентностью более 10 мс, а МКАТ 7С5 сильно и долговременно их блокирует.

3. Величина возбуждающей активности синтезированных глутаматсодержащих дипептидов при аппликации на нейроны моллюска определяется конформационными особенностями и наличием полярных группировок в соединении. Зависимость степени активности сдвоенных производных глутаминовой кислоты от расстояния между группами С00Н- указывает на оптимальный интервал, соответствующий 0,8 нм между повторяющимися участками связывания ГЛУ на рецепторном комплексе.

4.Выявлена различная степень нейротропной активности природных глутаматсодержащих олигопептидов, выделенных из биологических жидкостей человека. Эндогенные олигопептиды с мол.массой около 2500 Да, изолированные из фракций плазмы крови и цереброспинальной жидкости (ЦСЖ), способны модифицировать импульсную активность идентифицированных нейронов моллюска и модулировать ответы нейронов на аппликацию ГЛУ.

Научнаяновиз^

В диссертационной работе впервые применен иммунофизиологический подход для анализа функции одного из важнейших классов нейрорецепторов ЦНС - рецепторов глутамата. Модификация функциональных нейрональных ответов, опосредованных рецепторами глутамата, изучена в различных модельных системах при воздействии поли- и моноклональных

II антител к ГМБ из мозга крысы и человека. Полученные данные свидетельствуют в пользу наличия общих антигенных детерминант на некоторых компонентах глутаматрецепторного комплекса у различных видов: моллюска, лягушки, крысы и человека. Впервые обнаружено, что МКАТ ЗСП и 7С5 способны влиять на функцию рецепторов неШЛА типа, при этом МКАТ 7С5 избирательно взаимодействует с функциональными участкими этих рецепторов, выделяя их среди других типов.

Впервые получены данные о соотношении между структурой синтезированных глутаматсодержащих соединений и их способностью активировать рецепторы ГЛУ, выявлены закономерности усиления нейротропной активности этих соединений. Это расширяет общетеоретические представления о топохимии узнающих участков рецепторов ГЛУ. Из 25 синтезированных соединений выявлены наиболее функционально активные, действие которых на глутаматчувствительные нейроны моллюска описано впервые. Проведен анализ нейротропной активности эндогенных глутаматсодержащих олигопептидов, содержащихся в низкомолекулярных фракциях биологических жидкостей человека.

Научно=практическоезначениепш^еншхрезультатов.

Модуляция физиологических ответов глутаматчувствительных нейронов с помощью эндогенных веществ имеет важное практическое значение для разработки новых фармакологических подходов к лечению заболеваний нервной системы. Выявленные свойства поли- и моноклональных антител дают основания использовать их не только в качестве новых инструментов исследования структуры и функции глутаматных рецепторов, но и для выяснения детальных механизмов аутоиммунных процессов при некоторых неврологических заболеваниях, в частности, эпилепсии. Обнаружение эффектов

12 модуляторного действия поли- и моноклона льных антител на возбуждающие пути головного мозга открывает новые перспективы для поиска биологически активных соединений, избирательно воздействующих на глутаматергичеекие синапсы. Эти вещества могут создать основу для направленного конструирования новых противоэпилептических и противоишемических лекарственных средств, влияющих на функцию рецепторов возбуждающих аминокислот.

Прикладную ценность имеют полученные в работе экспериментальные данные по функциональному тестированию эндогенных глутаматсодержащих олигопептидов, выделенных из биологических жидкостей человека. Показано, что изменения хемо- и электровозбуждающих свойств низкомолекулярных фракций плазмы крови и ликвора, полученных от неврологических больных с двигательными расстройствами, коррелируют с изменениями клинических проявлений заболевания. Предполагается, что полезным прогностическим критерием восстановительной терапии у больных может оказаться динамика нейротропной активности изолированных и очищенных пептидных фракций.

Применение нейронных клеточных моделей для такого анализа позволяет повысить эффективность лечебных мероприятий, например, аутогемоликворотрансфузии (АГЛТ). Этот лечебный прием переноса глутаматсодержащих пептидов из собственной крови больного в ликвор эффективно используется в настоящее время в нейрохирургической клинике НИИЭМ АМН СССР. Последующий детальный анализ механизмов мембранного действия эндогенных глутаматсодержащих олигопептидов будет способствовать созданию пролекарств на их основе.

13

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Маргулис, Михаил Наумович

125 ВЫВОДЫ.

1. Моноклональные антитела и олигопептиды модифицируют функциональные ответы синоптических и вне синаптиче ских глутаматных рецепторов в модельных системах: на идентифицированных нейронах беспозвоночного (моллюска ) и на мотонейроне ЦНС позвоночного (лягушки).

2. Моноклональное антитело 3CII модулирует функциональный

-В,ответ идентифицироанных нейронов моллюска на аппликацию ГЛУ, изменяя соотношение амплитуд D- и Н-фаз.

3. Моноклональное антитело 7С5 на нейронах моллюска блокирует D-фазу функционального ответа при аппликации ГЛУ, проявляя способность к селективному воздействию на один (D- ) подтип рецепторов. Поликлональные антитела блокируют оба подтипа рецепторов ГЛУ.

4. Моноклональное антитело 7С5 вызывает блокирование поздних, с латентностью более 10 мс, компонентов ДК ВПСП мотонейронов лягушки, вычленяя из полисинаптических компонентов суммарного вклада ответов различных рецепторов ВАК вклад рецепторов неМША типа.

5. Моноклональные антитела на нейронных моделях оказывали антагонистическое действие на рецепторы неЖОА типа, локализация которых совпадает с локализацией имму норе активных зон.

6. На основании исследования нейротропной активности синтезированных глутаматсодержащих дипептидов и сдвоенных производных глутаминовой кислоты, имеющих оптимальный интервал в 0,8 нм между полярными группировками соединений, определено вероятное расстояние между активными центрами на рецепторе глутамата.

126

7. Сравнительный анализ нейротропной активности биологических жидкостей больных с двигательными расстройствами выявил, что низкомолекулярные фракции, содержащие олигопептиды, оказывают возбуждающее и модулирующее действие на глутаматчувствительные нейроны моллюска. Предлагаемая модель имеет адекватные свойства для целей дополнительной диагностики и оптимизации лечения неврологических больных.

127

121 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Изучение механизмов эндогенной регуляции глутаматных рецепторов необходимо для понимания общих закономерностей функционирования нейромедиаторных систем мозга (Дамбинова, 1989). Как было показано в обзоре литературы, большое внимание исследователей уделяется регуляторным функциям различных эндогенных соединений. Данные о функциональной роли эндогенных регуляторов белково-пептидной природы, в том числе собственных антител организма, проявляющих нейрорегуляторные свойства, крайне немногочисленны, а порой и противоречивы (Ашмарин,1979).

Общий недостаток практически всех экспериментальных исследований в этой области - это скудность молекулярных инструментов для исследования рецепторных механизмов. В частности, иммунонейрологических исследований функций глутаматных рецепторов и, в особенности, с применением МКАТ, в известной нам литературе - единицы.

В настоящей работе применены две модели глутаматных рецепторов: внесинаптических и синоптических, на беспозвоночном и позвоночном. И в том? и в другом случае было показано, что моноклональные антитела : МКАТ ЗСП к ГМБ из мозга крысы и МКАТ 7С5 к ГМБ из мозга человека,- могут модулировать, модифицировать и/или блокировать функциональные ответы глутаматчувствительных нейронов.

Одним из предположительных механизмов такого влияния является антагонистическое, неконкурентное, аллостерическое действие МКАТ на рецепторы ГЛУ и, возможно, блокирующее действие на глутаматактивируемые ионные каналы.

На наших моделях показано, что примененные МКАТ могут

122 выявлять различные подтипы рецепторов: Б- и Н-рецепторы ГЛУ на моллюске, а также тип неШОА рецепторов ВАК на моллюске и лягушке, тем самым демонстрируя уникальные свойства тонких молекулярных зондов.

Среди различных эндогенных веществ антителам отводят в последнее время особую "новую" роль агентов, которые осуществляют не только иммунологический, контролирующий надзор за антигенным статусом, но и, в том числе> надзор регулирующий, в частности, существующий при некоторых нарушениях нейрорецепторных механизмов (Демина,1990). Поэтому весьма важным является изучение ключевого звена аутоиммунной патологии: взаимодействия АТ с нейрорецепторами. Направление этих исследований является перспективным и в плане дальнейшей разработки методов диагностики различных аутоиммунных заболеваний нервной системы, например, эпилепсии.

Непосредственное отношение к регуляции функции глутаматных рецепторов имеют эндогенные глутаматсодержащие олигопептиды, обнаруживаемые в ткани мозга и в биологических жидкостях (ЦСЖ и крови) человека и животных (Бехтерева,1984). На основании данных литературы можно предположить, что эндогенная регуляция глутаматных рецепторов включает процессы модуляторного и/или медиаторного действия этих пептидов. При прохождении нервного импульса Ь-ГЛУ высвобождается в синаптическую щель, возможно, одновременно с эндогенными пептидами, например, такими, как ЫААС, которые могут как конкурировать за участки связывания на рецепторе с медиатором, так и дополнительно, за счет более длительного своего действия, стабилизировать активность функции синаптического аппарата, проявляя гомеоетатическое действие.

123

В наших экспериментах аналоги эндогенного глутаматсодержащего дипептида (а- и р-изомеры ИМС и др.) оказывали однозначно возбуждающее действие на глутаматчуветвительную мембрану нейрона, совпадающее по направленности действия Ь-ГЛУ на Б-рецепторы глутамата. Анализ соотношения структура-активность для таких и других глутаматсодержащих соединений, например, сдвоенных производных глутаминовой кислоты, перспективен в плане поиска эффективно действующих на ЦНС веществ в этих рядах. При этом топография узнающих центров рецептора может быть исследована при рассмотрении "зеркальной", комплементарной конформации тестируемых веществ. Поиск оптимальных структур веществ, избирательно воздействующих на глутаматрецептивные системы, важен также и для создания лекарственных средств.

Иные глутаматсодержащие олигопептиды, например, такие как ФИС, могут участвовать в изменении эффективности синатичеекой передачи. В опытах по связыванию 3Н-Ь-ГЛУ было показано, что ФИС ингибирует специфическое связывание, т.е. конкурирует с ГЛУ при взаимодействии с рецепторами. Выло предположено, что ФИС, являясь регуляторной единицей, варьирует число участков связывания, возможно, за счет уменьшения дееенеитизации рецептора глутамата (Городинский, 1985). В наших экспериментах ФИС действительно влиял на степень дееенеитизации мембраны нейрона моллюска, поскольку отмечались его различные эффекты в зависимости от наличия или отсутствия дееенеитизации рецепторов глутамата. Не исключено, что направленность эффектов эндогенного пептида ФИС реализуется через конформационные перестройки, приводящие к изменению степени дееенеитизации.

124

Перечисленные функциональные изменения рецепторов могут происходить при повышении синаптической эффективности. Ее механизмы связывают со сложными интегративными процессами мозга, к которым относят обучение, память, пластичность при развитии мозга в норме, а также при восстановлении функций мозга после повреждения, например, деафферентации.

Различные регулирующие функции на уровне синаптических структур, как предполагают, создают основу для формирования матрицы, ответственной, в частности, за устойчивое патологическое состояние (Бехтерева, 1984). К факторам, обусловливающим стабильность механизмов мозга человека по обеспечению двигательной активности, относят эндогенные олигопептиды, различный спектр которых обнаруживается в биологических жидкостях неврологических больных с двигательными нарушениями и здоровых пациентов (Дамбинова, Гурчин, 1988). Низкомолекулярные фракции из цереброспинальной жидкости и крови, в которые предположительно входят глутаматсодержащие олигопептиды, в наших экспериментах на нейронной модели осуществляли не только активацию глутаматчувствительных нейронов, но и оказывали модулирующее действие на рецепторы глутамата. Степень активности биопроб на испытанной модели коррелировала с клиническими показателями, что оправдывает применение в перспективе предложенной модели в целях уточнения диагноза и оптимизации лечения неврологичеких больных.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Маргулис, Михаил Наумович, Ленинград

1. Ашмарин И. П. Нейромедиаторы и нейромодуляторы: Эволюция соединений и эволюция гипотез. Ж. звол. биохим. физиол. ,1979, Т.15, с. 278-282.

2. Бехтерева Н.П., Дамбинова С.А., Гурчин Ф.А., Смирнов В.М., Корольков A.B., Пивоваров А.М. Нейрохимические аспекты лечебной электрической стимуляции. Физиол. журнал СССР, 1984, т. 70, с. 1092 - 1099.128

3. Большаков и др.) Bol shako v V.Ju., Gapon S.A., Magazanik L.G. Glutamate receptors in mollusc isolated and identiiie/d neurons. Neurochem. Int.,19906, v.16, Supp.1.,p.74.

4. Гапон С.А. Действие медиаторных веществ на идентифицированные нейроны брюхоногого моллюска роговой катушки. Дисс. на соискание ученой степени канд. биол. наук. - Л., 1981.129

5. Гапон С.А. Действие медиаторных веществ на идентифицированные нейроны брюхоногого моллюска Planorbarius corneus. Ж. эвол. биохимии и физиол., 1983, т.19, с.38-45.

6. Году хин О.В. Модуляция синаптической передачи в мозге. М. : Наука, 1987, 160 с.

7. Гришин Е.В., Волкова Т.М., Арсеньев A.C. Антагонисты глутаматных рецепторов из яда паука Argiopa lobata. Биоорганич. химия,1301988, т. 14. с. 883 892.

8. Дамбинова С.А. Нейрорецепторы глутамата. Л.: Наука, 1989. - 190 с.

9. Дамбинова С.А., Беседин В.й., Городинский А.И., Маргулис М.Н., Павлова О.И. Функции глутаматных рецепторов в мембранных везикулах, протеолипосомах и гибридных клетках нейробластомы NI8Tg2a Физиол. журнал СССР им. И.М.Сеченова, 1984, т. 70, с. 952 - 960.

10. Дамбинова С.А., Сурнина М.В., Павлова О.И. Иммунохимический анализ структурной организации глутаматных рецепторов ЦНС. В сб. Вопросы структурной и медиаторной организации ЦНС., Л., 1985, с. 56 - 62.

11. Дамбинова С.А., Хромов-Борисов Н.В. Применение метода Фишера к анализу структуры глутаматных рецепторов ЦНС. Докл. АН СССР,1311983, т. 274, с. 467 470.

12. Дейко Л. И., Варлыго К. В. Структурные факторы, определяющие взаимодействие дикарбоновых а-аминокислот с глутаматными рецепторами. В сб. Физиология и биохимия глутаматергических синапсов. - Л.: Наука, 1989, с. 25 - 36.

13. Демина М.Н. Глутаматсвязывающие мембранные белки головного мозга и пароксизмальная активность. Автореф. канд. дисс., Л., 1990. Догель В.А. Зоология беспозвоночных. - М.: Высшая школа, 1981. -606 с.

14. Калинина Н.И., Курчавый Г.Г., Шупляков О.В., Веселкин Н.П., Антонов С.М., Магазаник Л. Г. Гетерогенность возбуждающих синаптических входов в спинальных мотонейронах лягушки Rana ridibunda. Ж. эвол. биохимии и физиол., 1989, т. 25, с. 755 -762.

15. Кискин Н.И., Крышталь O.A., Цындренко А.Я., Мандельштам Ю.Е., Баранов Г.М., Дейко Л. И. Модифицированное влияние эфиров L-глутаминовой кислоты на рецепторы возбуждающих аминокислот132мембраны нейронов гшшокампа. Биол. мембраны, 1987, т. 4, с. 937 - 946.

16. Кискин Н.И., Крышталь О.А., Волкова Т.М., Гришин Е.В. Аргиопин, аргиопинины и пеевдоаргиопинины блокаторы глутаматных рецепторов в нейронах гиппокампа. - Нейрофизиология, 19896, т. 21, с. 748 - 756.

17. Кричевская А.А., Лукаш А.И., Шугалей B.C., Бондаренко Т.Н. Аминокислоты, их производные и регуляция метаболизма. Ростов, Изд. РГУ, 1983. - 112 с.

18. Крышталь О.А., Смирнов С.В., Осипчук Ю.В. Влияние глутамата и аспартата на синаптическую передачу в гиппокампе крысы. В сб. Исследование глутаматергических синапсов., Л.: Наука, 1987, с. 15.

19. Крышталь О.А. и др.) Krishtal О.A., Smirnov S.V., Osipchuk Yu.V. Changes in the state of the excitatory synaptic system in the hippocampus on prolonged exposure to excitatory amino acids and antagonists. Neurosci.Lett., 1988, v. 85, p. 82 - 88.133

20. Крышталь O.A., Цыондренко А. Я. Электрофизиологические исследования возбуждающих аминокислот. (Итоги науки и техники. Сер. Физиология человека и животных). ВИНИТИ, 1989, т. 36, с. 53 - III.

21. Кудряшова Н.И., Городинский А.И., Дамбинова С.А. Синтез сдвоенных производных глутаминовой кислоты и их влияние на рецепторное связывание 3Н-Ь-глутамата. Хим.-фарм. журнал, 1987, т. 6, с. 655 - 659.

22. Ruffier S.W., Nicholls J.G.) Куффлер С., Николе Дж. От нейрона к мозгу. М.: Мир, 1979. - 439 с.

23. Макаров А.Ю. Клиническая ликворология. Л.: Медицина, 1984. -215 с.

24. Мандельштам Ю.Е. Нейрон и мышца насекомого. Л,: Наука, 1983. -147 с.

25. Мандельштам Ю.Е., Мареничев В.В. Структура и функция134глутаматергических синапсов членистоногих. В сб. Физиология и биохимия глутаматергических синапсов. - Л. : Наука, 1989, с. 78 -87.

26. Матюшкин Д.П. Обратная связь в синапсе. -Л.: Наука, 1989. 77 с.

27. Орлова Е.А., Калантаров Г.Ф., Смирнова Т.М., Дамбинова С.А. Глутаматные рецепторы мозга человека, визуализированные с помощью моноклональных антител. Докл. АН СССР, 1989, т. 3076 с. 495 -496.

28. Орлова Е.А. Иммунохимическая идентификация глутаматных рецепторов HeNMDA типа коры головного мозга человека. Автореферат канд. диссертации, Л.,1990.

29. Перекалин В.В., Дейко Л.И. Структурные факторы, определяющие взаимодействие дикарбоновых а-аминокислот с глутаматными рецепторами. В сб. Иследование глутаматергических синапсов,. Л.: Наука, 1987, с. 34 - 35.

30. Пиотровский Л.В., Думпис М.Н., Иоффе Д.В., Городинский А.И., Дамбинова С. А. Взаимодействие N- и О-производных аминодикарбоновых кислот с глутаматными рецепторами ЦНС. Докл. АН СССР, 1986, т. 286, с. 235 - 238.

31. Пиотровский Л.В., Думпис М.Н., Позднякова Л.Н., Горяев А.П. Поиск лекарственных средств в ряду производных возбуждающих аминокислот. В сб. Фармакология клинике, Л.: АМН СССР, 1988а, с. I03-121.

32. Сторожук В.М. Нейронные механизмы обучения. Киев: Наукова думка, 1986, 264 с.

33. Ташмухамедов Б.А. Действие нейротоксинов различных пауков на хемо- и электровозбудимые мембраны и модельные системы. В сб. Биологические мембраны. Структура и функция. - Ташкент, 1983. с.56.

34. Шаповалов А.И., Ширяев Б.й. Передача сигналов в межнейронных синапсах. Л.: Наука, 1987. - 173 с.

35. Шупляков О.В., Антонов С.М., Веселкин Н.П., Магазаник Л.Г. Способность аргиопина блокировать глутаматергические синапсы в спинном мозгу лягушки. Журн. эвол. биохимии и физиол., 19876 т 23, с. 275 - 276.

36. Adams D.J., Gillespie J.I. The actions of L-glutamate at the postsynaptic membrane of the squid giant synapse. J. Exp. Biol., 1988, v. 140, p. 535 - 548.

37. Adams M.E., Carney R.L., Enderlin F.E., Fu E.T., Jarema M.A. Structures and biological activities of the synaptic antagonists from orb weaver spider venom. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1987, v. 148, p. 678 - 683.

38. Agid Y., Taquet H., Cesselin F., Epelbaum J., Javoy-Agid F. Neuropeptides and Parkinson's disease. Progr. Brain Res., 1986, v. 66, p. 107 - 116.

39. Andreasen M., Lambert J.D.C., Jensen S. Effects of new non- NMDA antagonists in the rat in vitro hippocampus. J. Physiol., 1988, v. 403, p. 57.137

40. Aramaki Y., Yasuhara T., Higaschijima T., Miwa A., Kawai N., Nakajima T. Chemical characterization of spider toxin NSTX. -Biomed. Res., 1987, v. 8, p. 167 183.

41. Backus K.H., Kettenmann H., Schachner M. Pharmacological characterization of the glutamate receptor in cultured astrocytes. J. Neurosci. Res., 1989, v. 22, p. 274-282. Barnes D.M. NMDA receptor trigger excitement. - Science, 1988, v. 239, p. 254 - 256.

42. Bateman A., Boden P., Dell A., Duce J.R., Quicke D.L.J., Usherwood P.N.R. Postsynaptic block of a glutamatergic synapse by low molecular wieght fractions of spider venom. Brain Res., 1985, V. 339, p. 237 - 247.

43. Band J., Fagg G.E. Glutamate-containing dipeptides do not modulate ligand binding at excitatory amino acid receptors. -Neurosci. Lett., 1986, v. 70, p. 228 233.138

44. Baudry M., Lynch G. Regulation of hyppocampal glutamate receptors: evidence for the involvement of calcium activated protease. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v. 77, p. 2298 -2302.

45. Beesley P.W. Immunological approaches to the study of synaptic glycoproteins. Comp. Biochem. Physiol., 1989, v. 93, p. 255 -266.

46. Bertolino M., Stefano V., Mazzetta J., Costa E. Phencyclidine and glycine modulate NMDA-activated high conductance cationic channels by acting at different sites. Neurosci. Lett., 1988, v. 84, p. 351 - 355.

47. Bliss T.V.P., Errington M.L., Evan G., Hunt S.P. Induction of C-fos-like protein in rat hippocampus following electrical stimulation. J. Physiol., 1988, v. 398, p. 96. Bokish A.J.,139

48. Brodbeck U. Multiple molecular form of acetylcholinesterase and their possible role in the degradation of neurohormones. In: 36 Colloquim - Mosbach 1985. Neurobiochemistry, Springer Verlag, Berlin - Heidelberg, 1985, p. 22 - 32.

49. Collingridge G.L., Blisss T.V. NMDA receptors their role in long-term potentiation. - Trends Neurosci., 1987, v. 10, p. 288 -294.

50. Cotman C.W., Iversen L.L. Exctatory amino acids in the brain-focus on NMDA receptors. Trends Neuroscl., 1987, v. 10, p. 263-265.

51. Curatolo A., D'Archangelo P., Lino A. Distribution of N- acetyl-aspartic and N-acetyl-aspartyl-glutamic acids in nervous tissue. J. Neurochem., 1965, v.12, p. 339 - 342.

52. Curtis D.R., Watkins J.C. The excitation and depression of spinal neurones by structurally related amino acids. J. Neurochem.,1411960, v. 6, p. 117 141.

53. Danysz W., Wroblewski J.T., Brooker G., Costa E. Modulation oi glutamate receptors by phencyclidine and glycine in the rat cerebellum: cGMP increase in vivo. Brain Res., 1989, v.479, p. 270 - 276.

54. Davidolf R.A., Hackman J.C., Holohean A.M., Vega J.L., Zhang D.X. Primary afferent activity, putative excitatory transmitters and extracellular potasium levels in frog spinal cord. J. Physiol.,1988, V. 397, p. 291 306.

55. De Santis A., Messenger J.B. New evidence that L-glutamate is a transmitter at the squid giant synapse. Q. J. Exp. Physiol.,1989, V. 74, p. 219 222.

56. Engelsen B. Neurotransmitter glutamate: its clinical importance.- Acta Neurol. Scand., 1986, v. 74, p. 337 355.

57. Eusebi F., Miledy R., Parker I., Stinnakre J. Post-synaptic calcium influx at the giant synapse of the squid during activation by glutamate. J. Physiol., 1985, v. 369, p. 183 -197.

58. Fonnum F. Glutamate: a neurotransmitter in mammalian brain. J. Neurochem., 1984, v. 42, p. 1 - 11.

59. Foster A.C. Quisqualate receptor antagonists. Nature, 1988, v. 335, p. 669 - 670.

60. Foster A.C., Fagg G.E. Taking apart NMDA receptors. Nature, 1987, v. 329, p. 395 - 396.

61. Foster A.C., Kemp J.A. Glycine modulate excitement. Nature, 1989, V. 338, p. 377 - 378.

62. Garthwaite J., Santham E., Anderton M. A kainate receptor linked to nitric oxide synthesis from arginine. J. Neurochem., 1989, V. 53, p. 1952 - 1954.

63. Gregor P., Mano I., Maoz I., Mc Keown M., Teichberg V.I. Molecular structure of the chick cerebellar kainate-binding subunit of a putative glutamate receptor. Nature, 1989, v. 342, p. 689 - 692.

64. Jahr G.E., Steven C.F. Glutamate activities multiple single channel conductances in hippocampal neurons. Nature, 1987, v. 325, p. 522 - 525.

65. Javitt D.C., Zukin S.R. Bioexponential kinetics of 3H3MK- 801 binding: evidence for access to closed and open N- methyl-D-aspartate receptor channels. Mol. Pharmacol., 1989, v. 35, p. 387 - 393.

66. Johnson J.W., Ascher P. Glycine potentiates the NMDA response in cultured mouse brain neurons. Nature, 1987, v. 325, p. 529 -531.

67. Jones A.W., Smith D.A.S., Watkins J.C. Structure-activity relations of dipeptide antagonists of excitatory amino acids. -J. Neurosci., 1984, v. 13, p. 573 581.

68. Kano M., Kato M. Quisqualate receptors are specifically involved in cerebellar synaptic plasticity. Nature, 1987, v. 325, p. 276 - 279.147

69. Kehoe J.S. Transformation be concanavalin A of the response of molluscan neurones of L-glutamate. Nature, 1978, v. 274, p. 866 - 869.

70. Kessler M., Baudry M., Lynch G. Quinoxaline derivatives are high-affinity antagonisms of the NMDA receptor-associated glycine148sites. Brain Res., 1989, v. 489, p. 377 - 382.

71. King W.M., Carpenter D.O. Voltage-clamp characterization of 01conductance gated by GABA and L-glutamate in single neurons of

72. Aplysia. J. Neurophysiol., 1989, v. 61, p. 892 - 899.

73. King W.M., Carpenter D.O. Distinct GABA and glutamate receptorsmay share a common channel in Aplysia neurons. Neurosci. Lett.,1987, V. 82, p. 343 348.

74. Kohler G. The technique of hybridoma production. Immunol Meth., 1981, V. 11, p. 285 - 308.

75. Malmgren K. On premotoneuronal integration in cat and man. Acta Physiol. Scand., 1988, Suppl.,576, p. 53.

76. Martinez-Soler R., Mas R., Menendez R. El efecto antagonista de acidos dicarboxilicos sobre receptores al L-glutamato. Cienc. Biol., 1980, v. 4, p. 36 - 45.150

77. Marvizon J-C.G., Lewin A.H., Skolnick Ph. L-Aminocycloprpane carboxylic acid: a potent and selective ligand for glycine modulatory site of N-methyl-D-aspartate receptor complex. J. Neurochem., 1989, v. 52, p. 992-994.

78. McCrimmon D.R., Smith J.C., Feldman J.L. Involvement of excitatory amino acids in neurotransmission of inspiratory drive to spinal respiratory motoneurons. J. Neurosci., 1989, v. 9, p. 1910 - 1921.

79. McLennan H., Marshall K.C., Huffman R.D. The antagonism of glutamate action on central neurones. Experientia, 1971, v. 27, p. 1116.

80. Miyamoto E., Kakimoto Y., Sano I. Identification of N- acetyl-aspartylglutamic acid in the bovine brain. J. Neurochem., 1966, v. 13, p. 999 - 1003.

81. Miller R., Slaughter M. Excitatory amino acid receptors of the retina: diversity of subtypes and conductance mechanisms. -Trends Neurosci., 1986, v. 9, p. 211 218.

82. Miwa A., Kawai N., Vi M. Pertussis toxin blocks presynaptic glutamate receptors a novel "glutamatep" receptor in the lobster neuromuscular synapse. - Brain Res., 1987, v. 416, p. 162 - 165.

83. Mody I., Heinemann U. NMDA receptors of dentate gyrus granule cells participate in synaptic transmission following kimdling. -Nature, 1987, v. 326, p. 701 704.

84. Monoghan D.T., Bridges R.J. Cotman C.W. The excitatory amino acidreceptors: their classes, pharmacology, and distinct propertiesin the function of the central nervous system. Annu. Rev.

85. Pharmacol, and Toxicol., 1989, v. 29, p. 365-402.-a

86. Monoghan D.T., Cotman C.W. Distribution of H-kainic acid binding sites in rat CNS as determined by autoradiography. Brain Res., 1982, v. 252, p. 91 - 100.

87. Muller D., Larson J.s Linch G. The NMDA receptor-mediated components of responses evoked by patterned stimulation are not increased by long-term potentiation. Brain Res., 1989, v. 477, p. 396 - 399.2+

88. Murphy S.N., Miller R.J. A glutamate receptor regulates Ca mobilization in hippocampal neurons. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1988, v. 85, p. 8737 - 8741.

89. Naegele J.R., ArimatsuY., Schwartz P., Barnstable C.J. Selective staining of a subset of GABAergic neurons in cat visual cortex by monoclonal antibody VC1.1. J. Neurosci., 1988, v. 8, p. 79 -81.

90. Nawy S., Copenhagen D.R. Multiple classes of glutamate receptor on depolarizing bipolar cells in retina. Nature, 1987, v. 325, p. 56 - 58.

91. Nicoletti F., Wroblewski J.T., Alho H., Eva C., Fadda E. Lesions of putative glutamatergic pathways potentiate the increase of inositol phospholipid hydrolysis elicited by excitatory amino153acids. Brain Res., 1987, v. 436, p. 103 - 112.

92. Nistri A., Constandi A. Pharmacological characterization oidifferent types of GABA and glutamate receptors in vertebratesand invertebrates. Progr. Neurobiol., 1979, v. 13, p. 117 235.

93. Novell i A., Nicoletti P., Wroblewski J.T., Alho H., Costa E., Guidotti A. Excitatory amino acid receptors coupled with guanylate cyclase in primary cultures of cerebellar granule cells. J. Neurosci., 1987, v. 7, p. 40 - 47.

94. Nowak L., Bregestovsky P., Ascher P. Magnesium gates glutamate-activated channels in mouse central neurones. Nature, 1984, v. 307, p. 462 - 465.

95. Parker I., Miledi R. Inositol triphosphate activates a voltage-dependent calcium influx in Xenopus oocytes. Proc. R. Sco. London Ser. B, 1987, v. 321, p. 27 - 36.

96. Pin J.-P., Van V.B.J., Bockaert J. Complex interaction between qusqualate and kainate receptors as revealed by measurement of GABA release from striatal neurons in primary cultures. Eur. J. Pharmacol., 1989, v. 172, p. 81 -91.

97. Pin J.-P., Bockaert J., Recasens M. The binding of acidic amino acids to snail Helix aspersa periesophagic ring membranes reveals a single high-affinity glutamate/kainate sites. Brain Res., 1986, V. 366, p. 290 - 299.

98. Raiteri M., Levi G. Antisynaptosome antibodies effect synaptosomal permeability to neurotransmitters. Nature New Biol., 1973, v. 245, p. 89-91.

99. Roy S., Michaelis E.K. Antibodies against the bovine brain glutamate binding protein. J. Neurochem. , 1984, v. 42, p. 838 -841.

100. S.-Rozsa K. The pharmacology oi mollusc an neurones. Progr. Neurobiol., 1984, v. 23, p. 79 - 150.

101. Saito M., Kawai N., Miwa A., Yamagushi J. Evidence for L-glutamate as the neurotransmitter of the squid giant synapse. ~ Neurosci. Res., 1985, v. 2, p. 297 307.

102. Saito M., Kawai N., Miwa A., Pan-Hou H., Yoshioka M. Spider toxin (JSTX) blocks glutamate synapse in hippocampal pyramidal neurons.- Brain Res., 1985, v. 346, p. 397 399.

103. Schmutz M., Klebs K., Olpe H.-R., Fagg G.E., Algleier H., et.al. Gompetetive NMDA receptor antagonists with potent oral anticonvulsant activity. Soc. Neurosci., 1988, v. 14, p. 864-941.

104. Sekiguchi M., Okamoto K., Sakai L. Excitatory action of N-acetylaspartylglutamate in Purkinje cell in guinea pig cerebellar slices: an intrasomatic study. Brain Res., 1987, v. 423, p. 23- 33.

105. Sherwin A., Robitaile Y., Quesney F., Oliver A., Villemure J., Leblane R., Fiendel W., Andermann E., Godman Y., Anderman F., Ethier R., Kish S. Excitatory amino acids are elevated in human epileptic cerebral cortex. Neurology, 1988, v. 38, p. 9209ii3 s

106. Shiells R.A., Falk G. Joro spider venom: glutamate agonist and antagonist on the rod retina of the dogfish. Neurosci. Lett., 1987, V. 77, p. 221 - 225.

107. Shinozaki H., Ishida M. A new potent channal blocker: effects on156glutamate responses at the crayfish neuromuscular junction. -Brain. Ras., 1986, v. 372, p. 260-268.

108. Shudo K., Endo Y., Hashimoto Y., Aramaki Y., Nakajima T., Kawai N. Newly synthesized analogues of the spider toxin block the crustacean glutamate receptor. Neurosci. Res., 1987, v. 5, p. 82 - 85.

109. Smith M.A., Margiotta J.F., Franco A., Lindstrom J.M., Berg D.K. Cholinergic modulation of an acetylcholine receptor- like antigen on the surface of chick olivary ganglion neurons in cell culture.- J. Neurosci., 1986, v. 6, p. 946 953.

110. Stevens C.F. A finger on brain receptors. Nature, 1989, v. 342, p. 620 - 621.

111. Stollberg J., Whiting J.P., Lindstrom J.M., Berg D.K. Functional blockade of neuronal acetylcholine receptors by antisera to a putative receptor from brain. Brain Res., 1986, v. 378, p. 179- 182.

112. Stone T.W. Comparison of hynurenic acid and 2-APV suppression of epileptiform activity in rat hippocampal slices. Neurosci. Lett., 1988, v. 84, p. 234 - 238.

113. Strange P.G. The structure mechanism of neurotransmitter receptors. Implication for the structure and function of the central nervous system. Biochem. J., 1988, v. 249, p. 309 -318. Streit P. Do K.O., Zollinger M., Grandes P., Liu C.-J., Matute157

114. Tieman S.B., Cangro C.B., Neale J.H. N-Acetylaspartylglutamate immunoreactivity in neurons of the cat's visual system. Brain Res., 1987, v. 420, p. 188 - 193.

115. Tyler C.B., Bidlack J.M. Inhibition of (+)H-3.SKF-10047 binding158to rat brain membranes by Fab fragments from a monoclonal antibody directed against the opioid receptor. Neurochem. Res., 1988, V. 13, p. 729 - 737.

116. Tzartos S.J., Lindstrom J.M. Monoclonal antibodies used to probe acetylcholine receptor structure: localization of the main immunogenic region and detection of similarities between subunits. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v. 77, p. 755 -759.

117. Tzartos S.J., Rand D.E., Einarson B.E. Lindstrom J.M. Mapping of surface structures of Electrophorus acetylcholine receptor using monoclonal antibodies. J. Biol. Chem., 1981, v. 256, p. 8635 -8645.

118. Victorica J., Park D., Chin G., De Bias A.L. Monoclonal antibodies and conventional antisera to the GABA receptor/benzodiazepine receptor/Cl- channel complex. J. Neurosci., 1988, v. 8, p. 615 - 622.

119. Vyklicky L, Jr., Krusek J., Vyklicky L., Vyskocil F. Spider venom of Araneus opens and desensitizes glutamate channels in chick spinal cord neurones. Neurosci. Lett., 1986, v. 68, p. 227231.

120. Villanueva S., Orrego F. Endogenous ligands for the quisqualate receptor: presence in rat brain cortex synaptic vesicles. Brain Res., 1988, v. 440, p. 363 - 365.

121. Walker R.J. The action of kainic acid and quisqualate acid on the glutamate receptors of three identifiable neurones from the brain of the snail Helix aspersa. Comp. Biochem. Physiol., 1976, v. 55C, p. 61 - 67.

122. Walker R.J., James V.A., Roberts C.J., Kerkut G.A. Studies on amino acid receptors of Hirudo, Helix, Limulus and Periplaneta. -Adv. Physiol., 1980, v. 22, p. 161 190.

123. Wan K.K., Lindstrom J.M. Effetcs of monoclonal antibodies on the function of acetylcholine receptors purified from Torpedo californica and reconstituted into vesicles. Biochemistry, 1985, v. 24, p. 1212 - 1221.

124. Wroblewski J.T., Danysz Modulation of glutamate receptors:molecular mechanisms and functional implications. Ann. Rev.

125. Pharmacol. Toxicol., 1989, v. 29, p. 441 474.

126. Yarowsky P.J., Carpenter D.O. Aspartate: distinct receptors on

127. Aplysia neurons. Science, 1976, v. 192, p. 807 - 809.

128. Zorumski Ch. P., Yang J. AMPA, kainate, and quiqualate activate a common receptor channel complex on embryonic motoneurons. - J. Neurosci., 1988, v. 8, p. 4277 - 4286.

129. Zvulun E., Kanety H. Anti-idiotypes against a monoclonal anti-haloperidol antibody bind to dopamine receptor. Life Sci., 1988, V. 42, p. 1987 - 1994.