Выявление противодифтерийных антибактериальных антител с помощью иммуноферментного анализа

Макарова, Светлана Игоревна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Выявление противодифтерийных антибактериальных антител с помощью иммуноферментного анализа
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Выявление противодифтерийных антибактериальных антител с помощью иммуноферментного анализа"

На правах рукописи

Макарова Светлана Игоревна

ВЫЯВЛЕНИЕ ПРОТИВОДИФТЕРИЙНЫХ АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ С ПОМОЩЬЮ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА

03.00.07 - микробиология 14.00.36 - аллергология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва, 2005 г.

Работа выполнена в Государственном учреждении «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского МЗ РФ»

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор Е.А. Шмелёва

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор JI.B. Козлов

кандидат медицинских наук В.В. Свиридов

Ведущая организация: Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. JI.A. Тарасевича

Защита состоится «3f » МО-> 2005 г. в часов на заседании

диссертационного совета Московского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского Министерства здравоохранения РФ по адресу: 125212, Москва, ул. адм. Макарова, 10.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Министерства здравоохранения Рф».

Автореферат разослан JJ ^eS^a/IJ. 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук С.Ю. Комбарова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

На современном этапе стратегия борьбы с дифтерийной инфекцией основывается на создании напряженного антитоксического иммунитета у населения. В то же время праюика показала, что антитоксический иммунитет, ликвидируя развитие тяжелых форм заболевания, не спасает от легких форм и носительства возбудителя дифтерии [Максимова Н.М., Маркина С.С., Корженкова М.П., 2002, 2003]. Свободная циркуляция С. сНрИШепае Юх+ в иммунных коллективах обусловливает скрытое течение эпидемического процесса [Сухорукова Н.Л., 1979, Фаворова Л.А., 1988]. Санация антибиотиками и антисептиками не предотвращает длительного и рецидивирующего носительства токсигенных коринебактерий дифтерии. Ясно, что антитоксический иммунитет не дает полного представления о противодифтерийной защите, поскольку при этом не учитывается участие в иммуногенезе антибактериальных антител, образующихся в ответ на бактериальные антигены коринебактерий дифтерии. Актуальность этой проблемы очевидна, и поэтому остро стоит вопрос об изучении не только антитоксических, но и антибактериальных антител с использованием современных иммунодиагностических тестов. В настоящее время иммуноферментный анализ является наиболее передовым и активно совершенствующимся методом для выявления иммуноглобулинов. Это обусловлено его высокой специфичностью, чувствительностью и возможностью дифференцированного определения иммуноглобулинов различных классов. Для выявления антитоксических противодифтерийных антител ИФА используется как в практической медицине, так в научных исследованиях.

Цель исследпмиия

Изучение особенностей формирования противодифтерийных антибактериальных иммуноглобулинов с помощью ИФА.

Задачи исследования

1. Разработать иммуноферментную тест-систему для выявления противодифтерийных антибактериальных антител 1£М, 1£А изотипов к бактериальным антигенам коринебактерий дифтерии (препарат Кодивак); 2. выявить противодифтерийные антитоксические и антибактериальные антитела и определить их содержание в сыворотках крови здоровых взрослых людей различных

3. оценить уровень противодифтерийных антитоксических и антибактериальных антител в сыворотках крови здоровых детей и подростков;

4. изучить уровень противодифтерийных антитоксических и антибактериальных антител в сыворотках крови здоровых людей из коллективов, в которых были выявлены носители

возрастов;

токсигенных С. (йрЫЬепае. РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ

БИЬЛЙОТЬКА С. Петербург

авв^рК

Научная новизна результатов исследования

1. Разработана иммуноферментная тест-система для выявления антибактериальных противодифтерийных антител Т{5М, изотипов, успешно прошедшая

лабораторные испытания в МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского;

2 С помощью ИФА в сыворотках крови людей выявлены образующиеся естественным путем антибактериальные противодифтерийные антитела разных изотипов;

3. Показано, что количественное содержание антибактериальных противодифтерийных антител в крови меняется в зависимости от возраста;

4. Выявлено, что в популяции здоровых взрослых людей (18 - 20 лет) распределение показателей антибактериальных противодифтерийных антител соответствует бимодальному. В коллективах, где были зарегистрированы носители возбудителя дифтерии, картина распределения антибактериальных антител не соответствовала бимодальному распределению.

Практическая значимость результатов исследования

1. С помощью разработанной иммуноферментной тест-системы можно оценить популяционный антибактериальный противодифтерийный иммунитет в различных коллективах детей и взрослых, а также провести его оценку у отдельных индивидуумов;

2. Полученные в результате работы сведения позволят выявлять группы риска по носительству С. (ИрЬЛепае 1ох+ и заболеванию дифтерией.

3. Результаты исследований включены в следующие опубликованные документы: Информационное письмо (№ 6) «Защищенность от дифтерийной инфекции населения Москвы в годы завершения эпидемического подъема», - Москва, 2002; Методические рекомендации (№ 16) «Оценка развития эпидемического процесса дифтерии в Москве в 2001 - 2002 годах и мероприятия по усилению иммунной защиты в очагах дифтерийной инфекции», - Москва, 2003.

Положения, выносимые на защиту:

1. разработанная иммуноферментная тест-система позволяет выявить в сыворотках крови специфические противодифтерийные антибактериальные антитела IgM,

изотипов;

2. в сыворотках крови здоровых взрослых в возрасте 18-20 лет присутствуют противодифтерийные антибактериальные антитела всех трех изотипов и антитоксические распределение которых в популяции соответствует бимодальному;

3. концентрация противодифтерийных антибактериальных иммуноглобулинов меняется в течение онтогенеза. У детей в возрасте от 3 до 15 лет в сыворотках крови определяется повышенное содержание антибактериальных IgM и низкое - IgA и IgG. К 18 годам концентрация антибактериальных антител достигает оптимума, после 30 лет показатели IgA и IgG начинают расти, a IgM падать. После 50 лет наблюдается снижение уровня специфических иммуноглобулинов всех трёх изотипов;

4. в коллективах контактных лиц, т.е. взрослых людей из очагов носительства С. diphtheria« tox+, наблюдается мономодальное распределение специфических антибактериальных IgM.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы представлены и обсуждены

на: научно-практической конференции Пермской Государственной Медицинской Академии - Пермь, - 2001г.; VII international meeting of the ELWGD, Vienna, Austria, - 2002,12-14 June; Vm International Meeting of the ELWGD & DIPNET, Copenhagen, Denmark, 2004, - 16 -18 June; Международном конгрессе «Ликвидация и элиминация инфекционных болезней -прогресс и болезни», С.-Петербург, 4-5 сентября 2003 г.

Диссертация апробирована на заседании секции Ученого Совета «Эпидемиология, микробиология, клиника инфекционных заболеваний» ГУ «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского» МЗ РФ, 9 декабря 2004 г.

Публикации. Материалы по теме диссертации были представлены в 13 публикациях.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 139 страницах машинописного текста, состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы (глава 1 и 2), материалы и методы (глава 3), собственные исследования (глава 4 и 5), обсуждение результатов (глава 6), выводы и список цитируемой литературы. Диссертация снабжена 22 рисунками и 6 таблицами. В библиографическом указателе приведен 231 источник, из них 145 на русском и 86 на иностранном языках.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы

В качестве исходных материалов для проведения исследований использовали:

препарат Кодивак 3 серии (57, 58 и 59) (вакцина дифтерийная субклеточная лиофилизированная, ФСП 420381232002), служащий антигеном в иммуноферментной тест-системе для определения антибактериальных противодифтерийных антител.

В каждой серии препарата для определения его биологической подлинности проводили контроль на содержание Сахаров по методу Биаля. Иммунологическую активность антигена определяли методом РПГА.

очищенный дифтерийный анатоксин (ГНИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им Л.А. Тарасевича (серия № 14 62)), служащий антигеном в иммуноферментной тест-системе для определения антитоксических

конъюгаты антител к ц и у - цепям иммуноглобулина человека, меченных пероксидазой хрена, для количественного определения антител 1§М и ^А изотипов использовались производства ГУ МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, приготовленные методом периодатного окисления.

Для определения противодифтерийных антибактериальных и антитоксических антител исследовали 631 сыворотку крови людей из следующих групп:

1) 100 здоровых взрослых в возрасте 18-20 лет;

2) 212 здоровья взрослых в возрасте 20 - 60 лет (три коллектива медицинских работников);

3) 50 детей в возрасте 3-4 лет; 50 детей в возрасте 8-10 лет; 50 детей в возрасте 10 -11 лет; 50 детей в возрасте 15 лет;

4) 44 военнослужащих в возрасте 18 - 20 лет;

5) 75 пациентов психиатрической больницы в возрасте 25 - 74 года.

Все образцы крови были исследованы непрямым ИФА с целью определения количества антибактериальных IgA и антитоксических

Количество антител в исследуемых группах выражали в % относительно показателей группы сравнения. Группой сравнения служил пул сывороток от 100 здоровых доноров 18 -20 лет.

В качестве других компонентов иммуноферментной тест-системы применяли разборные полистироловые планшеты с повышенной сорбционной емкостью (производство «Биомедикал»), 0,05 М натрий-карбонатный буферный раствор, рН 9,5; 0,02 М калий -фосфатный буферный раствор, рН 7.4, содержащий 0,5 % детергента (Твин-20). Субстратная смесь состояла из 0.03 % перекиси водорода в нитратно-фосфатном буфере рН 5,0 и ортофенилендиамина. В работе использовали следующее оборудование- ультразвуковой дезинте1ратор «вошйег», центрифуги высокоскоростные для больших (Т 24, М1ЛУ Запе1тк\), и малых объемов (СМ-50, ЕЬМ1), рН-метр «МеШег ТоЫо», спектрофотометр, мультипланшетный фотометр «Мультискан», вошер для промывания планшет «Проплан».

Определение концентрации антител проводили непрямым методом иммуноферментного анализа.

Для выявления антитоксических нами была модифицирована

иммуноферментная тест-система, предложенная Нижегородским НИИ эпидемиологии и микробиологии.

Статистические методы. Для расчета количества антител в сыворотке применяли компьютерную программу для ИФА «MSFL ELA.exe», разработанную ГОО «Микрофлора» при МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского [Козлов JI.B., 1985]. В алгоритме программы использовано двухпараметровое уравнение: Y=d/(x+c).

Реализация этого алгоритма в виде программы для ЭВМ позволила математически обработ ат ь полученные зависимости измеряемых оптических плотностей от разбавления экспериментальных проб при титровании сыворотки и получить в результате обработки концентрацию IgG, IgM, IgA в % в неразведенном образце.

Для оценки противодифтерийного иммунитета в коллективах был использован метод иопуляционного анализа, позволяющий охарактеризовахь и сравнить обследованные группы людей по распределению показателей концентрации антибактериальных антител в популяции. Расчет осуществляли с помощью биномиального вариационного ряда "распределения признаков" [Плохинский H.A., 1961].

Результаты исследования и их обсуждение Разработка иммуноферментной тест-системы

Выбор рабочей сенсибилизирующей дозы антигена и разведения конъюгатов.

Цель данного этапа работы выбрать минимальные рабочие сенсибилизирующие дозы антигена и максимальные разведения конъюгатов. За рабочее разведение препаратов принимали разведение, при котором отмечается максимальное значение оптической плотности на фоне минимального значения оптической плотности отрицательного контроля (оптическая плотность меньше 0,2).

Для определения рабочей дозы антигена готовили разведения препарата Кодивак в концентрациях 100; 50, 25,12,5, 6,2, 3,1, 1,55,0,77, 0,38, 0,19, 0,095 и 0,047 мкг/мл на 0,05 М натрий-карбонатном буфере, pH 9,5.

По результатам данного теста были выбраны следующие оптимальные рабочие концентрации антигена для выявления антител: IgG - 25 мкг/мл; IgM, IgA - 12,5 мкг/мл.

Оптимальные разведения конъюгатов определяли по точкам эквивалентности спектрофотометрических кривых титрования.

Анализ показал, что титры конъюгатов для данной тест-системы составляют для:

a-IgG - 1 :1200, a-IgM - 1 : 300, a-IgA - 1 : 300.

Выбор оптимальных значений рН буферных растворов, температурного режима и

времени инкубации

В качестве рабочих были выбраны наиболее часто используемые в ИФА буферные растворы: фосфатный - рН 7,4 карбонатный - рН 9,6.

Изучение влияния температуры и времени фиксации антигена на чувствительность реакции показало, что она достигает максимума после инкубации планшетов при 37°С в течение 1 часа и при 4°С - 14 часов.

Специфичность

Для определения специфичности тест-системы в соответствии с отработанными условиями проведения ИФА были исследованы сыворотки:

- людей - носителей С. (МрЫЬепае 1ох+, у которых была взята кровь до и через 10 дней после введения Кодивак - 7 человек;

- здоровых людей, у которых была взята кровь до и через 30 дней после введения АДСМ - 7 человек;

- здоровых детей, привитых менингококковой полисахаридной вакциной серогруппы А, у которых достоверно повышался уровепь специфических антител к менингококковому полисахариду серогруппы А после вакцинации через 10 дней -2 человека.

Результаты определения концентрации специфических антибактериальных антител в сыворотках крови обследованных людей представлены в табл. 1.

Таким образом, из представленных данных видно, что тест-система отражает изменение в сыворотках крови концентрации специфических антибактериальных иммуноглобулинов всех трех изотипов после введения вакцины Кодивак. В то же время ичмуч^ферментная теет-срстемя показывает, что введение АЛСМ анатоксина и менингококковой вакцины, в составе которых нет антигенов коринебактерий, не приводит к изменению их содержания в сыворотках крови. Следовательно, тест-система специфична.

Воспроизводимость

Установлен коэффициент вариации для воспроизводимости результатов 8,9% при норме не более 10% [Таранов А.Г., 2002].

Таким образом, проведенные исследования показали, что разработанная тест-система обладает хорошей воспроизводимостью и специфичностью и может быть использована для выявления антибактериальных противодифтерийных антител 1§М, 1§А изотипов в сыворотках крови людей.

Таблица 1. Показатели концентрации специфических антибактериальных антител в сыворотках привитых Кодивак, АДС-м анатоксином и менингококковой __полисахаридной вакциной серогруппы А_

№№ сывороток Концентрация антител до и после вакцинации (% от стандарта)

IgG IgM IgA

До | После До | После До | После

Кодивак

1 32 138 55 63 55 82

2 74 243 190 >1000 94 290

3 36 47 >1000 234 83 79

4 46 117 >1000 235 55 170

5 58 218 >1000 >1000 >1000 >1000

6 187 >1000 24 5 617 335

7 113 220 >1000 >1000 156 >1000

АДС-м анатоксин

1 158 205 66 47 26 20

2 58 69 47 62 10 9

3 639 597 80 160 81 75

4 243 265 >1000 >1000 206 168

5 80 130 71 62 45 50

6 78 80 386 201 154 151

7 375 407 90 52 46 41

Менянгококковая вакцина

1 178 169 75 66 25 28

2 96 114 16 15 31 28

3 58 54 88 79 22 20

4 102 93 95 87 15 19

5 45 39 55 61 41 36

Изучение противодифтерийных антител в сыворотках крови различных контингентов людей

Здоровые взрослые люди 18-20 лет

Осповные сведения о противодифтерийном иммунитете представлены данными о поствакцинальных антитоксических антителах, выявленных в сыворотках крови людей с помощью РПГА.

Наблюдения и экспериментальные исследования показывают, что при взаимодействии людей с циркулирующими С. diphtheriae tox+ в сыворотках их крови образуются как антитоксические, так и антибактериальные противодифтерийные антитела [Мазурова И.К., 1971, Бочкова В.А., 1978, Кондрапшна H.H., 1988, Шмелева Е.А., 1991].

Использование ИФА дает возможность определить более широкий спектр специфических иммуноглобулинов различных классов в ответ на искусственную (анатоксином) и естественную (бактериальными антигенами) стимуляцию.

В связи с этим нами были исследованы сыворотки крови здоровых взрослых людей в возрасте от 18 до 20 лет. В этих сыворотках методом ИФА было определено содержание противодифтерийных антитоксических IgG и антибактериальных антител IgG, IgM, IgA изотипов. Полученные результаты выявили существование индивидуальных различий уровней концентрации антител всех трех изотипов в сыворотках крови этой группы людей Статистическая обработка этих данных с помощью метода «биномиальный вариационный ряд распределения признаков» [Плохинский H.A., 1961] показала следующие результаты.

Большее количество лиц в этой группе обладали более низкой концентрацией антител (1-й модальный пик). У меньшего количества лиц содержание антител регистрировалось в более высоких концентрациях (2-й модальный пик). Т.е., распределение концентраций антитоксических IgG и антибактериальных IgG, IgM, IgA соответствовало бимодальному (рис. 1).

Каждый пик включал биномиальное распределение показателей, которое подчиняется закономерному проявлению эволюционно закрепленных биологических признаков.

В таблице 2 показаны результаты проведенного расчета средних арифметических по вариационному ряду (способ взвешенных вариаций) для каждого пика Видно, что в сыворотках крови здоровых людей антитела определяются как дискретные величины с широким диапазоном распределения. Для антитоксических IgG средняя частота распределения их концентраций в сыворотках людей колебалась в показателях от 16 до 109 , для антибактериальных IgG эта частота укладывалась в интервал от 18 до 114, для IgM - от 31 до 161 и для IgA-от 37 до 172.

Этот диапазон средних концентраций специфических противодифтерийных иммуноглобулинов каждого изотипа можно считать типичным для коллектиьа здоровых людей. Если у исследуемого индивидуума уровень специфических антител в сыворотке крови выходит за пределы диапазона в сторону уменьшения концентрации, это может свидетельствовать об их дефиците, и, как следствие, вероятности недостаточной специфической защиты. И, наоборот, если показатели концентрации антител выходят за пределами диапазона в сторону увеличения концентрации, то можно говорить об избыточном их синтезе и аномальном состоянии иммунной системы. Предложенное ранжирование позволило установить в изученном коллективе здоровых людей процент индивидуумов, входящих в труппы, которые характеризуются тремя описанными уровнями иммуноглобулинов (рис.2).

X 40

Я 30

3 г 20

о 10

9 щ 0

Й 40

ЯП

г 7П

р о 10

* « 0

3 М

--АТ!^

во

* * -V, 2 20

* п

§ 0

I 40

в г 30

о 10

9 0

31 56 83 109 135 Концентрация антител, %

161

187

-АБ^

28 53 79 105 131 Концентрация антител, %

157

«3

—— АК1оМ

15 48 85 122 15» 196

Концентрация антител, %

233

279

—АБ1вА. -н

31 57 83 109 135 Концентрация антител, %

1в1

186

Рис. 1. Профили вариационных рядов распределения показателей концентрации противодифтерийных антитоксических (АТ) и антибактериальных 1 (АБ) антител в сыворотках крови здоровых лиц (18 -20 лет)

Таблица 2. Уровень противодифтерийных антитоксических (АТ) и

антибактериальных (АБ) антител в сыворотках крови людей из различных групп

№ № Группы обследованных Кол-во Содержание иммуноглобулинов, % от стандарта

чел. АТДО АБДО АБ АБ

1 Здоровые взрослые (18 -20 лет) 100 30,4+14,0 96,6+12,3 33,7±16,2 93,8±19,9 51,6+21,0 136,6±23,9 62,1±25,1 153,7±17,9

2 Дети (3-4 года) 50 - 67,4±22,7 177,3±38,5 . 22,4Ш,1

3 Дети (8- 10 лет) 50 53,7±26,8 221,9±43,7 41,4120,3 100,8±18,7 102,7±21,6 264,2±39,9 34,1±8,7

4 Дети (10-И лет) 50 46,9+27,4 49,6±10,7 141,6±56,1 ; 33,«9,6

5 Дети (15 лет) 50 94,5±45,8 262,8+48,6 91,9+40,5 196,2±36,2 51,8±16,5 131,8±43,1

6 Сотрудники отд. 1 (20-60 лет) 52 33,54±23,7 153,5+8,52 52,5±15,2 180,0±17,2 59,33±24,7 147,88±28,8 91,61±40,7

7 Сотрудники отд. 2 (20-60 лет) 59 29,2±12,9 91,3±29,11 41,2±14,1 163,2+36,3 45,12±25,08 138,67+31,0 80,78±40,4 288,4±28,8

8 Сотрудники отд. 3 (20-60 лет) 100 30,1±14,0 92,6±10,9 62,8±33,2 157,4±17,2 40,4+15,9 122,8±21,9 59,6±27,2 183,3±39,5

9 ПБ, отд. 2 (25 - 71 лет) 25 - 56,1±35,9 210,0±17,3 80,7±39,8 181,3±30,7 67,7±26,5 166,2±30,8

10 ПБ, отд. 3 (30-78 лет) 50 - 100,0+49,7 394,1±104,9 ЗмрС 68,2±13,3 176,2±52,1 513,6±212,8

И Воинский коллектив (18-20 лет) 44 47,7±16,8 19,2±10,2 . 52,Ш5,(> ; 17,9±9,3 71,7±19,3 170,0±24,6

102,4+13,1 59,3±13,7

Содержание 1д

□ в пределах уел нормы

□ ниже усл. нормы

■ выше уел нормы

|0вАТ 1дСАБ (дМАВ (цАЛБ

Рис. 2. Распределение индивидуумов с различным содержанием противодифтерийных антитоксических (АТ) и антибактериальных (АБ) антител в популяции здоровых людей

В обследованном коллективе около 80 % индивидуумов содержали в сыворотках крови уровни противодифтерийных антител, укладывающиеся в типичный диапазон. У 10, 11, 11, 16 % лиц в этой же популяции противодифтерийные антитела определялись в концентрации ниже нормы, и примерно у такого же процента лиц (11, 15, 10, 6 %) содержались в гипервысоких количествах. Выявленные соотношения удельного веса лиц с низким, высоким и нормальным уровнем специфических антител отражают характерную для здоровых взрослых людей популяционную (коллективную) напряженность гуморального звена антибактериального противодифтерийного иммунитета. Такое соотношение в дальнейшем использовали в качестве эталонного для сравнения при обследовании других коллективов.

Таким образом, для здоровых людей молодого возраста (18 - 20 лет) характерны бимодальные профили распределения концентраций специфических иммуноглобулинов всех трех изотипов в популяции. Около 80% лиц в коллективе содержат нормальные уровни противодифтерийных антител и примерно по 10% лиц содержат эти антитела в гипервысоких и низких концентрациях.

До периода проведения массовой вакцинации дифтерийным анатоксином дифтерия традиционно считалась детской инфекцией, поэтому представлялось интересным изучение противодифтерийных антитоксических и антибактериальных антител в сыворотках крови детей.

Анализ полученных данных показал существенное отличие показателей концентрации всех трех изотипов антител в сыворотках детей от показателей этих антител в сыворотках крови взрослых из группы сравнения (табл. 2, рис. 3).

Здоровые дети

«-11 ям

«пег

1дС 1дМ >9Д АБ АБ АБ

1дб 1д6 1дМ 1дА АТ АБ АБ АБ

1д6 1дв 1дМ 1дД АТ АБ АБ АБ

1д6 1дС 1дМ 1дА АТ АБ АБ АБ

Содержание N1 □ ниже усл. нормы

ш выше усл. нормы

В в пределах усл. НОРНЫ

Рис. 3. Распределение индивидуумов с различным содержанием противодифтерийных антитоксических (АТ) и антибактериальных (АБ) антител в популяциях детей различных возрастных групп

Видно, что у детей в возрасте 8 - 10 и 15 лет антитоксические содержатся в гипервысоких концентрациях, распределение этих антител в популяции является бимодальным (табл. 2). Распределение уровней антитоксических антител в крови детей 10 -11 лет - мономодальное.

Изучение антибактериальных антител, прежде всего, выявило, что у детей 3 - 4, 8 - 10 и 10 - 11 лет в сыворотках крови определяются низкие показатели ^А (табл. 2, рис. 3). Распределение их в популяции было мономодальным и ограничивалось первым пиком распределения. Т.е., более половины (51-72 %) детей до 15 лет содержат в крови крайне низкие концентрации антибактериальных противодифтерийных \%А, играющих важную роль в устойчивости детского организма к респираторным инфекциям, в том числе, к дифтерии.

Антибактериальные также выявляли в низких концентрациях у детей 3-4, 10-11 и 15 лет в пределах первого пика распределения, то есть профиль их был мономодальным. В то же время у детей 8-10 лет содержание антибактериальных было повышенным, а распределение концентраций этих антител в этой группе детей было бимодальным (табл. 2). Таким образом, концентрации антибактериальных также характеризовались более низкими показателями, чем в группе сравнения.

В сыворотках крови всех групп детей от 3 до 15 лет отмечены повышенные концентрации антибактериальных распределение которых в популяциях было

бимодальным. В группах 3-4, 8 — 10 и 15 лет показатели антибактериальных 1$>М превышали показатели этих иммуноглобулинов у взрослых людей 18 - 20 лет (группа сравнения) (табл. 2). Обращает на себя внимание большой процент детей с содержанием в крови гипервысоких концентраций антибактериальных Так, у 19 % - 3 - 4 года, 46 % -

8-10 лет, 25 % - 10 - 11 лет, 55 % - 15 лет эти иммуноглобулины выявлялись в гипервысоких концентрациях (рис 3).

Таким образом, выявленные высокие показатели содержания специфических антибактериальных соогветствует, во-первых, общим закономерностям биологического синтеза макроглобулинов в этом возрасте и, во-вторых, подтверждают тесный контакт детского населения с продолжающими циркулировать и в настоящее время коринебактериями дифтерии. Впервые полученные сведения о динамике изменения синтеза антибактериальных противодифтерийных антител у детей в возрасте от 3 до 15 лет соответствуют изменению синтеза иммуноглобулинов, определенному онтогенезом, то есть постепенному переключению 1§М на и Выявленные особенности возрастпой динамики содержания антибактериальных противодифтерийных иммуноглобулинов представляют несомненный научный и практический интерес, предполагая дальнейшее изучение этого вопроса.

Здоровые взрослые люди в возрасте 20-60 лет

В начале 90-х годов на фоне массовой иммунопрофилактики детского населения, проявилась ранее неизвестная особенность дифтерийной инфекции, связанная с преобладающим вовлечением в эпидемический процесс взрослого населения (около 75 %). Традиционная детская инфекция приобрела характер болезни взрослых [Чистякова Г.Г., 2002]. Неблагоприятные сведения о напряженности антитоксического иммунитета среди взрослых [Максимова Н.М., Маркина С.С., 2002] определили наш дальнейший интерес к изучению антибактериального иммунитета у этого контингента.

Изучены сыворотки от 211 медицинских сотрудников из трех отделений городской клинической больницы г. Москвы. Возраст обследованных от 20 до 60 лет.

Результаты обследования показаны в табл. № 2 и на рис. 4.

Как видно из представленных данных, показатели содержания антитоксических в сыворотках крови медицинских сотрудников из отделений 1, 2, 3 практически не отличались от показателей антитоксических ^О в группе сравнения и также характеризовались бимодальным их распределением в популяции (табл. 2).

Содержание антибактериальных антител в сыворотках крови обследованных медицинских работников было не ниже соответствующих показателей в группе сравнения, (табл. 2). Пороговые показатели антител всех трех изотопов соответствовало показателям здоровых людей (1-й модальный пик с низкими концентрациями). Распределение антибактериальных антител всех трех изотопов в сыворотках обследованных людей соответствовало бимодальному. Исключение составило распределение антибактериальных

в отд. 1, где оно было мономодальным. Однако индивидуальный анализ сывороток

показал, что в 1, 2, 3 отделениях у 30%, 19%, 38% антибактериальные содержатся в гипервысоких концентрациях, а антибактериальные у 17, 5,12%, 17% соответственно.

Группирование сотрудников отд. 1 по возрастам с интервалом 10 лет позволило провести детальный анализ распределения индивидуумов с низкими, высокими и нормальными показателями специфических иммуноглобулинов (рис. 4). Видно, что с возрастом (20-29; 30-39; 40-49; 50 и выше лет) процент лиц с концентрацией антитоксических ниже условной нормы увеличивается -. 13%, 20%, 25%, 31%. Возрастает также и процент лиц с низким содержанием антибактериальных - 7%, 13%, 30%, 38%. В то время как в группах людей от 20 до 50 лег процент лиц, содержащих антибактериальных ^О и в высоких концентрациях, с возрастом увеличивался (20%, 25%, 31% и 7%, 6%, 40% соответственно).

20 - 29 лет

У- Ш Ш Ш

< < < <

О О 2 <

я О в я

30 - 39 лет

40 - 49 лет

(- Ш Ш Ш

< < < <

<5 о 5 <

о а ¡л а

50 пет и выше содержание^

I- Ш Ш Ш

< < < <

О О 5 <

га а о>

К 111 Ш 10

< < < <

о О 3 <

3 о а о

□ ниже усл. нормы

■ выше усл. нормы

я в пределах усл. нормы

Рис. 4. Распределение индивидуумов отд. 1 с различным содержанием противодифтерийных антитоксических (АТ) и антибактериальных (АБ) антител в коллективе здоровых взрослых по возрастам

Наиболее неблагополучной по уровню концентраций антител всех изотипов оказалась группа 50 лет и старше. В ней выявлен значительный процент лиц, в сыворотках крови которых содержались антитоксические и антибактериальные 1{>0 и 1{»М в концентрациях ниже условной нормы (31,38,38 % соответственно).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что в сыворотках крови взрослых людей количественное содержание антибактериальных иммуноглобулинов также подчиняется закономерностям его изменения в онтогенезе. Такая возрастная динамика выражается в увеличении по сравнению с детским возрастом индивидуумов (более 90 %), в сыворотках которых определяется нормальные и высокие концентрации антибактериальных и IgA. При этом наблюдается снижение количества лиц с нормальной и высокой концентрацией антибактериальных 1{£М.

С возрастом снижение концентрации антитоксических в сыворотках крови взрослых людей сопровождается увеличением концентрации антибактериальных ^С и (свыше 90 % взрослых до 50-ти лет содержат в сыворотках крови антибактериальные 1(?А и в нормальных и высоких концентрациях).

Кроме того, известно, что в результате возрастных и патологических изменений различных систем организма человека, а также под влиянием экзогенных воздействий -неблагоприятных экологических, социальных, антропогенных факторов, изменяется и иммунная реактивность. Она сопровождается, в частности, изменениями показателей уровней специфических иммуноглобулинов в сыворотках крови, что приводит к увеличению количества лиц, восприимчивых к различным инфекциям.

Изучение противодифтерийных антител в сыворотках крови людей из очагов носительства возбудителя дифтерии

В последние годы наибольшее количество носителей С. сЦрЬЛепае Ь>х+ в г. Москве было выявлено среди взрослых из организованных коллективов (психиатрические стационары, интернаты, воинские коллективы). В связи с этим, нами было проведено изучение сывороток пациентов психиатрической больницы г. Москвы и воинского коллектива, где были обнаружены носители возбудителя дифтерии.

Психиатрическая больница

Изучено 75 сывороток крови пациентов двух женских отделений (2 и 3) в возрасте от 25 до 74 лет. Носители выявлялись только в коллективе отд. 3, в отделении 2 носигельство не регистрировалось. Результаты анализа данных исследований приведены на рис. 5 (а и б) и в табл. 2.

Видно, что для коллектива пациентов отд. 2 отмечалось бимодальное распределение ангибактериальных и IgM (рис. 5 (а)). Значения показателей 1дМ были статистически значимо выше, чем в группе сравнения. Профиль распределения уровней ^О отличался от распределения антител этого изотипа в группе здоровых взрослых 18-20 лет.

Количество лиц с разными показателями ^О было почти одинаковым, и поэтому кривая распределения представляли собой сглаженное плато, пики отсутствовали (рис. 5 (а)).

Анализ индивидуальных показателей антибактериальных антител выявил, что коллективный антибактериальный иммунитет в этом отделении практически соответствовал показателям в группе сравнения.

а)

б)

Концевпрация антител, * о

—г -

|-АБ1вМ|

Концентрация антител. %

/ \

97 180 263 346

Концентрация антител, %

1 *

» - 9 8 14 1 ¡О 1 в 1 в 2

--- ,..... I ,

40 Л! 35 х 30 1 25 3 20

о 15 % 10 5 5

-ч 1 1

/ \ I - --

/ \ 1 __ --

4- \

/ ----

Концентрация анттел, %

133 215 301 385 469 : Концги||мц||| «тггел, %

Рис. 5. Профили вариационных рядов распределения показателей противодифтерийных АБ антител в сыворотках крови пациентов психиатрического стационара, а) отд. 2 и б) отд. 3

Однако, значительный процент индивидуумов отд. 2, содержащих высокие концентрации (выше установленной нормы) антибактериальных антител (20% - Т^, 16%-1{>М, 20 % - 1&А) свидетельствует, по нашему мнению, о плотной циркуляции коринебактерий дифтерии в этом коллективе.

У пациентов отд. 3, неблагополучного в отношении носительства С. сЦрМЬепае 1ох+, были выявлены значительные отличия в показателях концентраций антибактериальных антител по сравнению с показателями группы здоровых взрослых (18 - 20 лет) (рис. 5 (б)).

Так, для антител изотипа распределение было тримодальным, для изотипа -мономодальным. Антитела типа хотя и распределялись по двум пикам, но показатели их концентрации превышали показатели группы сравнения в 3, 4 раза (таблица 2), т.е. 55 % лиц содержали антибактериальные в концентрациях выше условной нормы. 46 % лиц содержали IgA с показателями выше условной нормы, при этом не оказалось ни одного человека с показателями ниже условной пормы. В то же время, у всех пациентов отд 3 определяли антибактериальные антитела ^М изотипа только в пределах I пика (28 % лиц содержали низкие концентрации и 68 % лиц - оптимальные). Эти данные, также как и в отд. 2, подтверждают факт существования плотной циркуляции коринебактерий дифтерии в этом коллективе.

Частые случаи носительства среди пациентов психиатрических стационаров можно объяснить особенностью функционирования их иммунной системы. В частности, иммугапле расстройства могут быть как результатом нейрогормональных нарушений, так и воздействия психотропных фармакологических средств на этих пациентов [АтиэттоукЬ N. 1999; Когаеуа Е., 1999].

Воинский коллектив

Следующим этапом наших исследований явилось изучение сывороток военнослужащих, в коллективе которых также были выявлены носители возбудителя дифтерии. На рис. бив таблице № 2 представлены результаты анализа показателей концентрации специфических противодифтерийных иммуноглобулинов в сыворотках крови военнослужащих.

Видно, что распределение уровней антитоксических антител среди солдат бьио бимодальным, т.е. соответствовало типичному распределению в группе здоровых взрослых людей. Показатели концентрации антитоксических находились в пределах защитного уровня.

Концентрация антител, %

к и я

а >

60 50 40 30 20 10 0 -10

Концентрация антител, %

[ ; х _ . . !... 1 _ .

--1.

9-1 5-. 3-9 т-и л-1- 1*-229-273--

Концентрация антител, %

1 - А±> А(

80 120 1вО

Концентрация антител, %

200

Рис. 6. Профили вариационных рядов распределения показателей концентраций противодифтерийных антитоксических (АТ) и антибактериальных (АБ) антител в сыворотках крови коллектива военнослужащих

Содержание антибактериальных антител в сыворотках этих же лиц отличалось от группы сравнения. Так, распределение антибактериальных было мономодальным (рис. 6). У всех соддаг определялись в пределах первого модального пика, т.е. только в низких концентрациях (52,0±25,б).

Распределение антибактериальных было тримодальным. У отдельных солдат определяли очень низкие, у других гипервысокие концентрации этих антител. Распределение показателей антибактериальных ^О хоть и было бимодальным, но их концентрации в пределах пиков была сниженными.

Индивидуальный анализ сывороток этих военнослужащих показал, что количество солдат с содержанием антитоксических в низких, высоких и нормальных концентрациях соотносилось с распределением аналогичных антител среди индивидуумов в группе сравнения. Распределение индивидуумов с различным содержанием антибактериальных иммуноглобулинов в этом коллективе существенно отличалось от показателей в группе сравнения. Почти половину коллектива представляли лица с дефицитом антибактериальных и н одну четвертую - с дефицитом

В тоже время 17 % и 19 % военнослужащих содержали в сыворотках крови гипервысокие концентрации и (при 10% и 6 % в группе сравнения). Усиленный синтез этих иммуноглобулинов у отдельных лиц является отражением реакции иммунной системы на раздражение слизистых оболочек верхних дыхательных путей антигенами коринебакгерий дифтерии, факт циркуляции которых был подтвержден бактериологическими анализами.

Следовательно, выраженная напряженность антитоксического иммунитета в коллективе военнослужащих не предотвратила персистенции С. <йрМ1епае Ь)х+, а наличие большого процента лиц, содержащих антибактериальных иммуноглобулинов ниже нормы, способствовало формированию процесса носительства.

Показатели антибактериального иммунитета у солдат из этого коллектива совпали с данными, полученными ранее при анализе сывороток из другого очага носительства (отделение № 3 психиатрической больницы). Как было описано ранее, отсутствие второго модального пика с высокими концентрациями антибактериальных ^М подтверждает наличие носительства С. сИрИйепае 1ох+ в этих коллективах. Т.о., мономодальное распределение антибактериальных 1§М можно считать прогностическим признаком, который предполагает его прямую функциональную связь с формированием носительства возбудителя дифтерии в данных коллективах.

Полученные в работе данные, подтверждают, что процесс персистирования и распространения самого возбудителя зависит от формирующегося естественным путем популяционного антибактериального иммунитета.

Итак, в представленном исследовании определены условия для проведения ИФА для выявления специфических противодифтерийных антибактериальных антител 1{5М, IgA и антитоксических изотипов в сыворотках крови людей.

Показано, что наряду с поствакцинальными антитоксическими в сыворотках крови людей присутствуют и образовавшиеся естественным путем антибактериальные 1|>С,

Выявлено, что в возрасте 18-20 лет у здоровых взрослых людей, когда в организме реализуется оптимальный иммунный ответ, содержатся антибактериальные ^О, ^М, ^А, распределение которых в популяции является бимодальным. У детей в возрасте от 3 до 15 лет отмечен дефицит антибактериальных IgA и при повышенном содержании Определено, что с увеличением возраста, начинах с 30 лет, происходило снижение концентрации антибактериальных и увеличение концентрации антибактериальных и ^А. Более чем у 90 % взрослых до 50 лет содержатся в крови антибактериальные и 1§А в оптимальных и гипервысоких концентрациях. Выявленные особенности синтеза противодифтерийных антибактериальных антител совпадают с общебиологическими закономерностями формирования гуморального ответа в онтогенезе.

Популяционный анализ распределения показателей концентрации антибактериальных иммуноглобулинов в сыворотках крови людей из очагов носительства С. (ИрМтепае показал, что отсутствие второго модального пика распределения антибактериальных с высокими концентрациями коррелирует с процессом носительства возбудителя дифтерии. Отсутствие П модального пика па фоне избытка синтеза антибактериальных и ^А можно считать прогностическим признаком при обследовании групп риска по носительству и заболеванию. Полученные данные углубляют наши знания об антибактериальных противодифтерийных антителах и их роли в противодифтерийном иммунитете.

ВЫВОДЫ

1 Разработанная иммуноферментная тест-система позволяет выявлять антибактериальные противодифтерийные антитела 1£М, IgA изотипов в сыворотках крови людей.

2 Определено, что сыворотки крови здоровых взрослых людей в возрасте 18 - 20 лет наряду с поствакцинальными антитоксическими содержат и образующиеся естественным путем антибактериальные IgA антитела, показатели концентраций которых в популяции характеризуются бимодальным распределением. Данная популяция распадается на две группы - со слабым и более сильным иммунным ответом на антигены коринебактерий дифтерии.

3. Показано, что в сыворотках крови здоровых детей в возрасте от 3-х до 15-ти лет существует дефицит специфических антибактериальных TgA при повышенном содержании антибактериальных ^М.

4. Выявлено, что с возрастом (после 30 лет) в сыворотках крови людей растёт концентрация специфических антибактериальных IgG и IgA и уменьшается -антибактериальных IgM.

5. Установлено, что процесс циркуляции возбудителя дифтерии зависит от показателей полуляционного антибактериального иммунитета: отсутствие второго модального пика распределения антибактериальных IgM с высокими концентрациями свидетельствует о возможности формирования в коллективе носительства возбудителя дифтерии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Шмелева Е.А., Корженкова М.П., Маркина С.С., Максимова Н.М., Макарова С.И, Чистякова Г.Г., Малышев H.A. Перспективы использования препарата Кодивак в профилактике дифтерии и ОРЗ / Сб. трудов МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского "Проблемы инфекционных болезней " -М. - 2000. - с. 70-74.

2. Макарова С.И., Шмелева Е.А., Баталова Т.Н. и др. Изучение дифтерийных антитоксических и антибактериальных антител различных изотипов в сыворотках крови лиц, вакцинированных АДС-м анатоксином и АДС-м анатоксином совместно с Кодивак/ Сб. работ Юбилейной конференции Казанского НИИЭМ. - Казань, - 2000 г. - с.56-57

3. Тарасова A.A., Костинов М.П., Миловидова О.В., Баталова Т Н., Макарова С И Состояние противодифтерийного иммунитета у непривитых реконвапесцентов дифтерии.// Сб. Проблемы инфекционных болезней (эпидемиология и профилактика) -М.-2000.-Ч. I.-с. 35-39.

4. Шмелева Е.А., Баталова Т.Н., Макарова С.И., Батурина И.Г., Корженкова М.П. Оценка антибактериального противодифтерийного иммунитета в сыворотках крови различных групп людей./ Сб. работ "Теоретические и прикладные проблемы эпидемиологии инфекционных и паразитарных болезней. Материалы научно-практической конф. Пермской гос. Мед. Академии - Пермь, - 2001. - с. 124 - 129.

5. Шмелева Е.А., Макарова С.И., Баталова Т.Н., Корженкова М.П., Батурина И.Г Содержание противодифтерийных антибактериальных антител в сыворотках крови различных групп людей.//Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2002. - № 4. - т. 1.-е. 174 -181.

6. Шмелева Е.А., Макарова С.И., Корженкова М.П. и др. Некоторые показатели иммунитета при дифтерийной инфекции.// Эпидемиол. и вакцинопроф. - 2002. - № 3 - 4 — с. 31 - 35.

7. Шмелева Е.А., Макарова С.И., Корженкова М.П,, Баталова Т.Н., Батурина И Г Оценка антибактериальных противодифтерийных антител с помощью метода популяционного

анализа.// Материалы VIII съезда всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - Москва. - 2002. - с. 282.

8 Шмелева Е.И., Макарова С.И., Батурина И.Г. Современный взгляд на старые истины о противодифтерийном иммунитете. // Эпвдемиол. и вакцинопроф. - 2003. - № 2(9). - с. 26 -31.

9. Шмелева Е.А., Макарова С.И., Батурина И.Г., Попкова С.М. Роль специфических антибактериальных иммуноглобулинов в противодифтерийном иммунитете. //Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2003. - № 1. - с. 174 - 181.

10. Е.А. Шмелева, С.И. Макарова, И.Г. Батурина, М.П. Корженхова, Г.Г. Чистякова. Участие антибактериальных иммуноглобулинов в формировании противодифтерийного иммунитета.//Материалы третьей международной конференции, посвященной 80-летию инсгитута им. Пастера «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями» С-Петербург. - 2003. - с. 37.

11. Е. А. Шмелева, С.И. Макарова, И.Г. Батурина, М.П. Корженкова, Г.Г. Чистякова, М.К. Ксенофоитова. Специфические иммуноглобулины и их роль в формировании противодифтерийного иммунитета. //Ж. микробиол. - 2005. - № 1. - с.

12. Е. A. Shmeleva, S. I. Makarova, T.N. Batalova, M. P Korzhenkova, IG Baturina. Use of cell wall antigens of non-toxic С diphtheriae in an ELISA to determine antidiphtheriae antibodies in human sera.// VII international meeting of the ELWGD, Vienna, Austria, - 2002. - p. 71.

13. E. Shmeleva, S. Makarova, I. Baturina, G. Chistyakova, M.P., Korzhenkova. Diphtheria immunity in children and adults.// 8й International Meeting of the ELWGD & DIPNET, Copenhagen, Denmark, 2004. - 16-18 June-p. 57.

¡ t

t. t

РНБ Русский фонд

2005-4 45459

1706

2 2 0 т^5

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Макарова, Светлана Игоревна

Список сокращений

Введение.

Обзор литературы

Глава 1. Фило- и онтогенетические механизмы гуморального иммунитета

1.1. Иммуноглобулины.

1.2. Кинетика антителообразования. Первичный и вторичный ответ. Иммунологическая память.

1.3. Иммунная реактивность

1.3.1. Иммунная реактивность в детском возрасте.

1.3.2. Иммунная реактивность при старении.

1.3.3. Иммунная реактивность при различных патологиях.

Глава 2. Противодифтерийный иммунитет

2.1. Ведущая роль антитоксического иммунитета.

2.2. Методы определения противодифтерийных антитоксических антител.

2.2.1. Реакция пассивной гемагглютинации.

2.2.2. Реакция нейтрализации токсина в культуре клеток Vero.

2.2.3. Иммуноферментный анализ.

2.3. Антибактериальный иммунитет

2.3.1. Проблемы, связанные с дифтерийной инфекцией.

2.3.2. Бактериальные антигены С. diphtheriae.

2.3.3. Особенности проявления антибактериального иммунитета.

Глава 3. Материалы и методы исследования.

3.1. Материалы исследования.

3.2. Методы исследования.

3.3. Статистические методы.

Собственные исследования

Глава 4. Разработка иммуноферментной тест-системы.

4.1. Выбор рабочей дозы антигена и разведения конъюгатов.

4.2. Выбор оптимальных значений рН буферных растворов.

4.3. Подбор оптимального температурного режима и времени инкубации.

4.4. Специфичность.

4.5. Воспроизводимость.

4.6. Выражение результатов ИФА.

4.7. Оптимальные условия постановки ИФА для определения антибактериальных противодифтерийных антител IgG, IgM, IgA изотипов в сыворотках крови различных групп людей.

Глава 5. Изучение противодифтерийных антител в сыворотках крови различных контингентов людей

5.1. Здоровые взрослые люди 18-20 лет (контрольная группа).

5.2. Дети.

5.3. Здоровые взрослые люди в возрасте 20 - 60 лет.

5.4. Изучение противодифтерийных антител в сыворотках крови людей из очагов носительства токсигенных коринебактерий дифтерии.

5.4.1. Пациенты психиатрической больницы.

5.4.2. Воинский коллектив.

Глава 6. Обсуждение результатов.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Выявление противодифтерийных антибактериальных антител с помощью иммуноферментного анализа"

На современном этапе стратегия борьбы с дифтерийной инфекцией основывается на создании напряженного антитоксического иммунитета у населения. В тоже время практика показала, что антитоксический иммунитет, ликвидируя развитие тяжелых форм, не спасает от легких форм заболевания, а также носительства возбудителя дифтерии [34, 99]

Свободная циркуляция С. diphtheriae tox+ в иммунных коллективах обуславливает скрытое течение эпидемиологического процесса [122]. Санация антибиотиками и антисептиками не предотвращает длительного и рецидивирующего носительства токсигенных коринебактерий дифтерии. Ясно, что антитоксический иммунитет не дает полного представления о противодифтерийной защите, поскольку при этом не учитывается участие в иммуногенезе антибактериальных антител, образующихся в ответ на бактериальные антигены коринебактерий дифтерии. Актуальность этой проблемы очевидна и поэтому остро стоит вопрос об изучении не только антитоксических, но и антибактериальных антител с использованием современных иммунодиагностических тестов. В настоящее время иммуноферментный анализ является наиболее передовым и активно совершенствующимся методом для выявления иммуноглобулинов. Это обусловлено его высокой специфичностью, чувствительностью и возможностью дифференцированного определения иммуноглобулинов различных классов. Для выявления антитоксических противодифтерийных антител ИФА используется как в практической медицине, так в научных исследованиях [32, 146, 147, 169, 182, 199, 204, 219].

Цель работы: Изучение особенностей формирования противодифтерийных антибактериальных иммуноглобулинов с помощью ИФА.

Задачи:

1) Разработать иммуноферментную тест-систему для выявления противодифтерийных антибактериальных антител IgG, IgM, IgA изотипов к бактериальным антигенам коринебактерий дифтерии (препарат Кодивак);

2) выявить противодифтерийные антибактериальные антитела и определить их количественное содержание в сыворотках крови здоровых взрослых людей молодого и старшего возраста;

3) оценить уровень противодифтерийных антибактериальных антител в сыворотках крови здоровых детей и подростков;

4) изучить уровень противодифтерийных антибактериальных антител в сыворотках крови здоровых людей из коллективов с выявленными носителями токсигенных С. diphtheriae.

Научная новизна

1. Разработана иммуноферментная тест-система для выявления антибактериальных противодифтерийных антител IgG, IgM, IgA изотипов, успешно прошедшая лабораторные испытания в МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского;

2. с помощью ИФА в сыворотках крови людей выявлены образующиеся естественным путем антибактериальные противодифтерийные антитела разных изотипов;

3. показано, что количественное содержание антибактериальных противодифтерийных антител в крови меняется в зависимости от возраста;

4. выявлено, что в популяции здоровых взрослых людей (18 - 20 лет) распределение показателей антибактериальных противодифтерийных антител соответствует бимодальному. В коллективах, где были зарегистрированы носители возбудителя дифтерии, картина распределения антибактериальных антител не соответствовала бимодальному распределению.

Практическая значимость

2. Полученные в результате работы сведения позволят выявлять группы риска по носительству токсигенных С. diphtheriae и заболеванию дифтерией.

3. Результаты исследований были включены в следующие опубликованные документы: Информационное письмо № 6. «Защищенность от дифтерийной инфекции населения Москвы в годы завершения эпидемического подъема», - Москва, 2002 г.; Методические рекомендации (№ 16) «Оценка развития эпидемического процесса дифтерии в Москве в 2001 - 2002 годах и мероприятия по усилению иммунной защиты в очагах дифтерийной инфекции». — Москва, 2003.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Глава 1

Фило- и онтогенетические механизмы гуморального иммунитета 1.1. Иммуноглобулины

Введение антигена (АГ) в организм вызывает защитную реакцию, включающую выработку антител (иммуноглобулинов (ИГ)), специфически взаимодействующими с этими АГ. Антитела практически идентичны гамма-глобулиновой фракции плазмы крови. Кроме того, антитела обнаруживают в других жидких средах организма, например в лимфе, молоке (особенно в молозиве), спинномозговой и тканевой жидкостях, в различных секретах и воспалительных выпотах [30, 44, 91, 106, 122]. Однако ИГ выявляют не только в свободном состоянии в жидкостях организма, но и на клетках лимфоидной системы, в основном - на В-лимфоцитах, где они выполняют роль антигенсвязывающих рецепторов [97].

ИГ принадлежат к полуфункциональным белкам, которые в качестве антител и рецепторов В-лимфоцитов, специфически распознают самые разнообразные лиганды (АГ), способны взаимодействовать с лимфоидными и другими клетками, компонентами комплемента и пр. [30, 116]. Структуры, ответственные за многообразные функции ИГ, находятся в разных участках молекул этих белков. Молекула ИГ состоит из 4 гликолизированных полипептидных цепей - 2 легких и 2 тяжелых, соединенных дисульфидными мостиками в симметричную структуру, открытую Р. Портером и Дж. Эдельманом в 1972 году [30, 44, 49, 97, 98, 145, 148] (рис.1). Согласно номенклатуре ВОЗ (1964) существуют 5 классов ИГ - IgG, IgM, IgA, IgD и IgE. Они различаются по типу тяжелых цепей. Легкие цепи могут быть только двух типов - к и X. Каждая молекула ИГ состоит из тяжелых цепей одного типа, соединенных с легкими цепями также только одного типа. ИГ одного класса могут содержать как к-, так и А,-цепи. Мономерные ИГ, например IgG, состоят из одной молекулы, полимерные - IgM, IgA — из нескольких. Помимо легких и тяжелых цепей молекулы полимерных ИГ включают J-цепь, а молекулы IgA — секреторный компонент. [39, 49, 145, 224]. Обе цепи ИГ имеют вариабельный (V) и константный (С) участки. Последовательность аминокислот константного участка PIT постоянна для каждого вида животных, а структура вариабельного участка отличается большой изменчивостью (до 100 ООО вариантов последовательности аминокислот). Но именно вариабельные участки каждой легкой и тяжелой цепей ИГ сообща образуют место связывания АГ [30, 97, 98]. При воздействии на ИГ протеолитических ферментов можно выделить два антигенсвязывающих фрагмента (англ. Fragment antigen binding Fab) и один кристаллизующийся фрагмент иммуноглобулина (fragment crystalline - Fc). Fab-фрагменты содержат вариабельные участки L- и Н-цепей вместе с активными центрами антитела. Именно эти участки ответственны за связь антитела с АГ.

В Fc-фрагменте расположены центры, ответственные за разнообразные биологические функции PIT: фиксацию на фагоцитах и лимфоцитах, связывание первого компонента системы комплемента, транспорт через плаценту и другие биологические мембраны [63, 122, 212].

В ходе становления иммунного ответа В-лимфоциты последовательно экспрессируют ИГ разных изотипов. Этот феномен последовательного переключения с одного изотипа иммуноглобулина на другой (изотипическое переключение) позволяет одному В-клеточному клону продуцировать антитела одной и той же специфичности, но с разными эффекторными функциями, соответствующими строению их тяжелых цепей [119, 122].

Рис. 1. Строение иммуноглобулина

Иммуноглобулин G

Это наиболее изученный класс антител. Содержатся в сыворотке крови в самой высокой концентрации и составляют 70 — 85% всех ИГ. 48% IgG находится вне кровяного русла, в том числе и в секретах. Это единственный ИГ, который способен проходить через плаценту [30, 83]. После введения АГ в организме преобладают IgM, а по мере развития иммунного ответа повышается аффинитет (активность) IgG-антител. Они двухвалентны, принимают участие в реакциях преципитации, агглютинации, опсонизации корпускулярных АГ, а также в реакциях лизиса (при наличии комплемента), обладают выраженным свойством нейтрализации токсинов, выдерживают нагревание до 70°С в течение 30 минут [122]. Для усиления синтеза IgG требуется более длительная стимуляция АГ, чем для синтеза IgM. [63, 91]. IgG играют важную роль в защите от многих бактериальных и вирусных инфекций [97, 98, 122].

Молекулы IgG способны связываться АГ и фиксированными клетками тканей, а также вызывать специфическую сенсибилизацию организма по типу реакции гиперчувствительности немедленного типа. PIT этого класса разделяют на 4 подкласса: IgGi( IgG2, IgG3, IgG4, различающиеся эффекторными функциями и специфичностью. Так, антитела против полисахаридов относятся преимущественно к подклассу IgG2, антирезусные антитела - к IgG4. Реакцией связывания комплемента обладают преимущественно подклассы IgGj и IgG3, кожной чувствительностью - IgGi и IgG4 [16, 30]. Аминокислотная последовательность подклассов очень сходна. В их константных областях на 95% наблюдается совпадение аминокислотных последовательностей. Различия, в основном, касаются последовательностей шарнирных участков и числа сульфидных связей [130].

Иммуноглобулин М

IgM первыми формируются как в фил о- и онтогенезе., так и в процессе формирования иммунного ответа организма [30, 39, 83, 145]. IgM, появившиеся на поверхности В-клеток, дают сигнал к дальнейшей дифференцировке клеток

Основное количество IgM сосредоточено в сыворотке крови, на их долю приходится до 10 % всех ИГ, в секретах они встречаются в минимальных количествах. IgM можно обнаружить только на ранних стадиях иммунного ответа. Как правило, они вырабатываются на корпускулярные АГ при первичном иммунном ответе [30, 49, 98]. Сывороточный IgM является пентамером, что обеспечивает множественность активных центров. IgM-пентамер ответственен, в основном, за защиту от бактериальных инфекций. IgM эффективно связывают комплемент и активируют его по классическому пути. Эти ИГ содержат основную массу антител против полисахаридных АГ и О-антигенов грамотрицательных бактерий, ревматоидный фактор, изогемагглютинины — естественные антитела к эритроцитарным антигенам А и В [16, 122]. IgM локализуются на мембранах В-лимфоцитов в качестве антигенсвязывающих рецепторов. IgM- антитела обладают преципитирующими, агглютинирующими, опсонизирующими и, при участии комплемента, лизирующими свойствами, но не участвуют в аллергических реакциях [30, 112, 145]. Они не проходят через плаценту, что важно для предупреждения гемолитической болезни у новорожденного, развитие которой возможно за счет «естественных» анти-А или анти-В групповых антител [93]. Антитела, относящиеся к этому классу, значительно активнее IgG по агглютинирующей и преципитирующей способности, а также по гемолитическому и опсонизирующему действию [113]. К классу IgM относятся почти все естественные (нормальные) антитела, вырабатываемые на микроорганизмы, заселяющие различные системы организма в раннем возрасте. Нормальные антитела еще называются постоянными или ранними. В отличие от иммунных IgM-антител нормальные антитела в сыворотке крови выявляются в низких концентрациях. Можно считать, что нормальные антитела класса IgM являются составной частью иммунитета, естественно приобретенного после рождении [122].

Иммуноглобулин А

Данный класс PIT по структуре тяжелых цепей подразделяется на два подкласса: сывороточный и секреторный, играющий важную роль в формировании местного иммунитета. IgA является основным классом ИГ в секреторных жидкостях человека: молозиве, слезах, слюне, кишечном соке и т.д. (до 80% общего белка секрета). Сывороточные IgA синтезируются в клетках лимфоидной ткани, циркулируют в крови, где составляют 15 - 20% от общего количества ИГ. 40% всех IgA содержится в крови, 60 % - в секретах [30,39,49, 97, 145, 177].

Секреторные IgA (SIgA), в отличие от сывороточных, являются почти исключительно димерами. При этом они содержат дополнительный гликопротеин с молекулярной массой 50000-85000 Да, (секреторный компонент), который соединен с а-цепью IgA в области Fc-фрагмента, что придает им высокую устойчивость к действию протеолитических ферментов. Секреторный компонент находится в эпителиальных клетках, выстилающих сами экзокринные железы и их протоки, где и связывается с молекулой IgA при выходе из клетки (16, 43, 122, 224). Секреторные IgA выполняют «местную» защитную функцию в слизистых оболочках кишечника, гениталий, дыхательных путей и других. Нейтрализующая функция slgA секретов резко снижается при нарушениях биоценоза слизистой (при дисбиозах). slgA появляется в слюне новорожденного раньше, чем сывороточный IgA. Особенно важное значение имеет высокая концентрация slgA в молозиве и грудном молоке, пассивно защищающих новорожденного от патогенных микроорганизмов [223].

IgA обладают неодинаковой активностью по отношению к различным АГ. Они вызывают агглютинацию АГ (бактерий, вирусов), но не вызывают их преципитацию. Комплексы антитело-антиген могут активировать комплемент только в присутствии лизоцима и вызывать антибактериальную (АБ) активность и нейтрализацию токсинов. IgA не проходят через плаценту и не фиксируются в тканях [30, 39,49, 97, 122, 145]. Иммуноглобулин D

IgD изучены недостаточно. Установлено, что в сыворотке крови человека содержание их не превышает 1% от общего количества ИГ или 0,3 — 40 мг/100 мл. Данные ИГ очень стойки к действию протеолитических ферментов. До 75% их общего количества обнаруживают в крови [30, 49, 97].

Как и IgM, они находятся в качестве антигенсвязывающего рецептора на мембранах В-лимфоцитов. Могут активировать комплемент, обладают антивирусной активностью. Отмечено увеличение их содержания в крови при миеломной болезни. Функциональные особенности IgD в значительной степени связаны с тем, что в его структуре содержится большое количество углеводов и пролина. Плазматические клетки, синтезирующие IgD, локализованы преимущественно в миндалинах, аденоидной ткани. IgD участвуют в дифференцировке В-лимфоцитов, способствуют развитию антиидиотипического ответа, участвуют в аутоиммунных процессах. [49, 63, 91].

Иммуноглобулин Е

Иммуноглобулины класса Е открыты в 1966 году, будучи выделенными из сывороток больных с атопией и множественной миеломой Ишизака с сотрудниками [189]. В 1968 г. ВОЗ определила IgE как самостоятельный класс ИГ [8, 119]. Они присутствуют в сыворотке крови и секретах человека. Содержание IgE в сыворотке крови здорового человека составляет 180 - 350 мг/мл. К этому классу ИГ относятся гомоцитотропные антитела, или так называемые реагины. Основой для их образования при инфекциях является антигенная общность между возбудителем и клетками организма [30, 48, 49, 122]. IgE синтезируются главным образом плазматическими клетками, локализующимися в слизистых оболочках. Несмотря на то, что происходит активная его секреция во внешнесекреторные жидкости, он не имеет специфического секреторного компонента, как, например, секреторный IgA. IgE также не фиксирует комплемент классическим путем, однако в агрегированном состоянии способен активировать альтернативный путь фиксации комплемента [44, 47, 64]. Основная биологическая роль IgE связана с его уникальной способностью связываться с поверхностью тучных клеток и базофилов человека. На других клетках (В-лимфоцитах, макрофагах, эозинофилах и тромбоцитах) были выявлены низкоафинные рецепторы для IgE [44, 129].

Содержание IgE в сыворотке крови возрастает постепенно с момента рождения человека до подросткового возраста. В пожилом возрасте уровень IgE может снижаться [47, 119, 154].

Таким образом, в качестве защитных факторов ИГ выполняют следующие эффекторные функции: 1) агглютинируют АГ, связываясь с соответствующими антигенными детерминантами; 2) в комплексе с компонентами комплемента участвуют в цитотоксических реакциях (комплемент-антителонезависимый цитолиз); 3) в комплексе с АГ (опсонизация) способствуют поглощению, переработке и элиминации АГ фагоцитами; 4) нейтрализуют токсины, вирусы и ферменты микроорганизмов. ИГ, являясь неотъемлемой частью ИС, играют важную роль в гуморальном иммунитете, защищая человека от различных инфекций.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Макарова, Светлана Игоревна

выводы

1. Разработана иммуноферментная тест-система для выявления АБ противодифтерийных антител в сыворотках крови людей.

2. Определено, что сыворотки крови здоровых взрослых людей в возрасте 18 — 20 лет наряду с поствакцинальными AT содержат и образующиеся естественным путем АБ IgG, IgM, IgA антитела, показатели концентраций которых в популяции характеризуются бимодальным распределением. Данная популяция распадается на две группы - со слабым и более сильным ИО на антигены коринебактерий дифтерии.

3. Показано, что в сыворотках крови детей в возрасте от 3-х до 15-ти лет существует дефицит специфических АБ IgA при повышенном содержании АБ IgM.

4. Выявлено, что с возрастом (после 30 лет) в сыворотках крови людей растёт концентрация специфических АБ IgG и IgA и уменьшаться — АБ IgM.

5. Установлено, что процесс циркуляции возбудителя дифтерии зависит от показателей популяционного АБ иммунитета: отсутствие второго модального пика распределения антибактериальных IgM с высокими концентрациями свидетельствует о возможности формирования в коллективе носительства.

Заключение.

Таким образом, проведенные исследования показали, что разработанная тест-система обладает хорошей воспроизводимостью и специфичностью и может быть использована для выявления АБ противодифтерийных антител IgG, IgM, IgA изотипов в сыворотках крови людей.

Глава 5.

Изучение противодифтерийных антител в сыворотках крови различных контингентов людей.

5.1. Здоровые взрослые люди 18-20 лет (группа сравнения).

Основные сведения о противодифтерийном иммунитете представляют данные о поствакцинальных AT антителах, выявленных в сыворотках крови людей с помощью РПГА.

Наблюдения и экспериментальные исследования показывают, что при взаимодействии людей с циркулирующими С. diphtheriae tox+ в сыворотках их крови образуются как AT, так и АБ противодифтерийные антитела.

Использование ИФА дает возможность определить более широкий спектр специфических ИГ различных классов в ответ на искусственную (анатоксином) и естественную (бактериальными АГ) антигенную стимуляцию.

Нами в качестве группы сравнения были исследованы сыворотки крови здоровых взрослых людей в возрасте от 18 до 20 лет. В этих сыворотках методом ИФА было определено содержание противодифтерийных AT IgG и АБ антител IgG, IgM, IgA изотипов. Полученные результаты показали наличие индивидуальных различий в уровнях концентраций антител всех трех изотипов в сыворотках крови этой группы людей. Статистическая обработка этих данных была проведена с помощью метода «биномиальный вариационный ряд распределения признаков» [86].

Результаты проведенного математического анализа показаны на рис. 6.

Рис. 6. Профили вариационных рядов распределения показателей концентрации противодифтерийных AT и АБ антител в сыворотках крови здоровых лиц (18-20 лет)

5? ьГ и са о 5 г

0 со 1 ч о X

40 35 30 25 20 15 10 5 О

AT IgG

S? 35 j

Ж» и л 25 о ?0

У 1Ь о Й 10

§ 5

К 0 >

31 56 83 109

Концентрация антител, %

135

161

187

- АБ IgG

105

Концентрация антител, %

131

157

183

Анализ полученных данных показал следующие результаты. Большее количество лиц в этой группе обладали более низкой концентрацией антител (1-ый модальный пик). У меньшего количества лиц содержание антител регистрировалось в более высоких концентрациях (2-ой модальный пик). Т.е., распределение концентраций AT IgG и АБ IgG, IgM, IgA соответствовало бимодальному (рис. 6). Каждый пик включал биномиальное распределение показателей, которое подчиняется закономерному проявлению эволюционно закрепленных биологических признаков.

В таблице 2 показаны результаты проведенного расчета средних арифметических по вариационному ряду (способ взвешенных вариаций) для каждого пика. Видно, что в сыворотках крови здоровых людей антитела определяются как дискретные величины с широким диапазоном распределения.

Для AT IgG диапазон распределения их концентраций в сыворотках людей колебался от 16 % до 109 %, для АБ IgG эта частота укладывалась в интервал от 18 % до 114 %, для IgM - от 31 % до 161 % и для IgA - от 37 % до 172 %.

Этот диапазон средних концентраций специфических противодифтерийных ИГ каждого изотипа можно считать типичным для коллектива здоровых людей. Если у исследуемого индивидуума уровень специфических антител в сыворотке крови выходит за пределы диапазона в сторону уменьшения концентрации, это может свидетельствовать об их дефиците, и, как следствие, вероятности недостаточной специфической защиты. И, наоборот, если показатели концентрации антител выходят за пределами диапазона в сторону увеличения концентрации, то можно говорить об избыточном их синтезе и аномальном состоянии иммунной системы. Предложенное ранжирование позволило установить в изученном коллективе здоровых людей процент индивидуумов, входящих в группы, которые характеризуются тремя описанными уровнями ИГ (рис.7).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Макарова, Светлана Игоревна, Москва

1. Аллергология и иммунология детского возраста. /Учебное пособие для студентов педиатрического фак. мед. ВУЗов/ Минздрав РФ под ред. С.Ф. Гнусаева. Тверь: РИЦ ТГМА, 2001. - 201 с.

2. Анохин В.А., Фаткуллина Г.Р., Сафина Н.А., Платонова О.А. и др. Эффективность гуморальной специфической защиты при различных клинических формах дифтерии.// Эпидемиол. и инф. болезни. 2004. - № 1. -с. 20-23.

3. Асфандиярова Н.С., Чайцев В.Г., Шатров В.В., Гончаренко JI.B., Букина Л.Я. Состояние системы иммунитета при дифтерии // Журн. микробиол. — 1998.-№4.-с. 77-80.

4. Басова Н.Н. Иммунитет населения как объект управления. В кн.: Элементы эпидемиологического надзора. Под ред. В. Ягодинского и И. Рейнарау.

5. Таллин. Валгус. 1987. - с. 203 - 220.

6. Бережная Н.М., Бобкова Л.П., петровская И.А., Ялкут С.И. Аллергология (словарь-справочник). Киев: Наукова думка, 1986. - 716 с.

7. Болотовский В.М. Дифтерия. // В кн. «Руководство по эпидемиологии инфекционных болезней». М. Медицина. — 1993. - с. 196 - 203.

8. Ю.Бондаренко В.М. Общий анализ представлений о патогенных и условно патогенных бактериях. // Журн. микробиол. 1997. - № 4. - с. 20 - 26.11 .Ботвиньева В.В. Развитие иммунной системы здорового ребенка.// Детский доктор. 1999. - № 3. - с. 26 - 30.

9. Бочкова В.А. АБ иммунитет при дифтерийной инфекции и его роль в патогенезе носительства токсигенных коринебактерий дифтерии./ Автореф. дисс. док. мед. наук. М. - 1978. - 34 с.

10. Бочкова В.А., Мазурова И.Е., Филиппова JI.M. Гуморальные показатели антимикробного иммунитета при дифтерии. // Журн. микробиол. 1971. - № 4. - с. 86 -89.

11. Брэдуэлл А., Кэтти Д., Дайне П., Грегори Дж. и др. Антитела. Методы. Книга 2-М.: Мир.-1991.-е. 154- 164, 172.

12. Вакцинопрофилактика (справочник для врачей) под ред. Таточенко В.К. и Озерецковского Н.А. М. - 1994. - с. 179.

13. Варламова Е.Ю. Основные представления о структуре, биосинтезе и генетике ИГ человека. // Клиническая онкогематология: рук-во для врачей — М. 2001.-е. 86-91.

14. Васенович М.И. Определение содержания дифтерийного антитоксина в гаммаглобулине крови человека с использованием культуры тканей. В кн.: научные основы производства вакцин и сывороток. - М.: Медицина. - 1965. -с. 240-244.

15. Васенович М.И., Баева Е.А., Сергеева J1.M. Определение в культуре ткани дифтерийного антитоксина в сыворотках привитых людей.// Журн. микробиол. 1967. - № 12. - с. 53.

16. Вертиев Ю.В. Езепчук Ю.В. Изучение химического рецептора для дифтерийного токсина в клеточных мембранах// Бюлл. Экспер. Биол. 1978. -т. 35. -№ 5.-с. 549-551.

17. Воробьев А.А., Хавкин Ю.А. Молекулярная биология дифтерийного токсина в связи с проблемой механизма действия токсичных белков.// Успехи современной биологии. 1978. - т. 86. - № 3. - с. 345 - 357.

18. Высоцкий В.В. К вопросу о строении поверхностных структур коринебактерий // Журн. микробиол. 1976. - № 7. - с. 112-119.

19. Газизова Г.Р. Цитотоксическое и антимитотическое действие дифтерийного токсина. / Казань, Мастер-лайн. 2000. - 247 с.

20. Гайц Б.М., Рахманова А.Г. вакцинопрофилактика (3 изд.). С-Пб.:Питер. -2001.-480 с.

21. Галазка А. Общая иммунология. Иммунологические основы иммуногенеза. Модуль 1. Спб. 1994. - 24 с.

22. Гервазиева В.Б., Воробьева H.JL, Сверановская В.В. Иммуноферментный метод количественного анализа IgG-антител к основному белку миелина.// Иммунология. 2000. - № 2. - с. 52 - 56.

23. Главные факторы, влияющие на результаты, полученные с применением твердофазного ИФА. Di-san Junui daxue xuebao = Acta acad. Med. Tertiae. -2001. 23, № 7 - p. 871 -872.

24. Гурвич A.E. Динамика антителообразования. В сб.: Иммуногенез и клеточная дифференцировка. М.: Наука. - 1978. - с. 128 - 158.

25. Деркач В.В. Чиркова JI.H., Нетесова С.Ю. и др. Особенности иммунного статуса детей с атопическим дерматитом // Иммунология, иммуногенетика и иммунопатология: Мат-лы 6-ой отчетной конф. ГУ НИИКИ СО РАМН., 2003.-с. 50-52.

26. Дифтерия. Сборник нормативно-методических материалов. М.: Грантъ. -1999.-64 с.

27. Дранник Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология. М.: МИА, 2003. -604 с.

28. Езепчук Ю.В. Биомолекулярные основы патогенности бактерий. — М.: Наука, 1977.-215 с.

29. ЗЗ.Заварзин Г.А. Несовместимые признаки в системе родов бактерий .// Ж.

30. Зуева Л.П., Яфаев Р.Х., Сухомлина Г.И., Дездарева Е.В. Популяционный иммунитет в эпидемическом процессе.// Эпидемиол. и вакцинопроф. — 2002. -№5.-с. 35-36.

31. Иванова В.В., Родионова О.В., Аксенов О.А. и др. Дифтерия у детей // Спб. -2000.-255с.

32. Игнатов П.Е. Иммунитет и инфекция. Возможность управления. М.: Время. -2002.-352 с.

33. Игнатова М.С. Современные проблемы детской нефрологии.// Росс. вест, перинатол. и педиатр. 2002. - 47. - № 5. - с. 33 - 38.

34. Иммунодефицитные состояния. Под ред. проф. Смирнова B.C. и проф. Фрейдлин И.С. С-Пб.: Фолиант. 2000. - 568 с.

35. Иммунологические методы под ред. Г. Фримеля. М. Медицина, 1987. — с. 216-218.

36. Иммунология инфекционного процесса. (Руководство) / Под ред. В.И. Покровского, С.П. Гордиенко, В.И. Литвинова. М., - 1994. - 305 с.

37. Иммунология. Пер. с англ./ Под ред. У. Пола. М.: Мир, 1987 - 1988. Т.1. -476 с.

38. Иммуноферментный анализ./ Нго Т.Т., Ленхофф Г.М., Яклич А. и др. М.: Мир. - 1988.-444 с.

39. Кветная А.С., Иванова С.С., Корженевская Т.Б., Родионова О.В. и др. Адаптационные механизмы формирования бактерионосительства С. diphtheriae. // Журн. микробиол. 2000 - № 4. - с. 31 — 46.

40. Клиническая иммунология и аллергология / Под ред. Л. Йегера. 2-е изд. -М.: Медицина, 1990. Т. 1. - 526 с.

41. Клиническая иммунология и аллергология. Под ред. А.В. Караулова. М. -МИА. 2002. - 651 с.

42. Клиническая иммунология и аллергология. Под ред. Г. Лорора-младшего, Т. Фишера, Д. Адельмана. М. Практика. - 2000. - 806 с.

43. Косенкова Т.В., Федоров Г.Н., Наперсников В.В., Григорьева В.Н. и др. Особенности формирования иммунитета при первичном комплексе иммунизации АКДС-вакциной. // Журн. микробиол. 2000. - № 3. - с. 55 -58.

44. Костюкова Н.Н. Микробиологические факторы, определяющие носительство при капельных инфекциях.// Журн. микробиол. 1997. - № 4. -с. 10-15.

45. Костюкова Н.Н. Дифтерийное бактерионосительство (микробиологическое и иммунологическое исследование).// Автореф. дисс. док. мед. наук. М. -1971.

46. Крылова М.Д. Биологические, генетические, эпидемиологические аспекты дифтерии и нормальная микрофлора человека.// Журн. микробиол. 1985. -№3.-с. 37-45.

47. Крюков В.Ю., Пичушков А.В. Современные аспекты эпидемиологии дифтерии.// Советская медицина. 1985. - № 7. - с. 57 - 58.

48. Кузнецова М., Кондратенко И., Оке Г., Фимер А., Эйби М., Эспаньол Т. и др. Агаммаглобуленемия с повышенным уровнем IgM: клиническая и иммунологическая характеристика. // Клиническая медицина (Москва). -2000.-78.-№9.-с 72.

49. Кулаков А.В., Карсонова М.И., Черноусое А.Д. Параметры гуморального антибактериального иммунитета у больных эхинококкозом с постоперационными гнойными осложнениями. // Иммунология. 2001. - № 1.-е. 52-54.

50. Кулаков А.В., Климова С.В., Серков И.Л., Серкова Н.А., Карсонова М.И.,

51. Черноусов А.Д. Особенности антибактериального иммунитета у здоровых и часто и длительно болеющих детей, проживающих в экологически неблагоприятных регионах. // Иммунология. 2ООО. - № 6. - с. 56 - 58.

52. Кульберг А .Я. Регуляция иммунного ответа. М.: Медицина. 1986 - с.37.

53. Либерман Ф., Кроуфорд Л. Лечение больных аллергией/ Пер. с англ. М.: Медицина, 1986. - 392 с.

54. Львова И.И., Фельдблюм И.В., Корюкина И.П. и др. Программа «вакцинопротекции» как один из способов повышения эффективности специфической профилактики дифтерии и кори у детей. Бюлл. Восточно-Сибирск. Научного центра - 2002. - № 4. - т. 1. - с. 62 - 65.

55. Ляшенко В.А. Мукозальные вакцины.//Иммунология 1997. - № 6. - с. 4 - 8.

56. Мазурова И.К. Разработка и применение реакции пассивной гемагглютинации для обнаружения дифтерийных противомикробных антител у больных дифтерией и бактерионосителей.// Автореф. дисс. канд. мед. наук.- М. 1971. - 27 с.

57. Максимова Н.М. Динамика напряженности иммунитета против дифтерии и столбняка при профилактических прививках у детей. Дисс. док. мед. наук. -М.- 1991. -271 с.

58. Максимова Н.М., Маркина С.С., Богатырева Э.Я., Лыткина И.Н. и др. Изучение причин заболеваемости дифтерией привитых детей. — Сборник науч. тр. «Проблемы эпидемиол., микробиол. и клиники капельных и кишечных инфекций». т.1. - 1996. - с. 20 - 26.

59. Максимова Н.М., Маркина С.С., Чистякова Г.Г. и др. Состояние антитоксического иммунитета к дифтерии после подъема заболеваемости.// Тезисы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиол., микробиол. и паразитол. М. - 2002. - т. 2. - с. 200.

60. Малашенкова И.К., Дидковский Н.А. Принципы иммунокоррегирующей терапии вторичных иммунодефицитов, ассоциированных с хроническойвирусно-бактериальной инфекцией.// Русский мед. журнал. 2002. - т. 10. -№21.-с. 973 -977.

61. Наркевич М.И., Тымчаковская И.М. Особенности распространения дифтерии в России на фоне массовой иммунизации детей.// Журн. микробиол. 1996. - № 2. - с. 25 - 29.

62. Никитюк Н.Ф. Иммунитет к дифтерии у взрослого населения Оренбургской области // Журн. микробиол. 2001. - № 3. - с. 53 - 56.

63. Новик А.А., Цыган В.Н. Иммунная система в проблеме психосоматических заболеваний.// Всеросс. Науч. Конф. С международным участием, посвящ. 150-летию со дня рождения ак. И.П. Павлова, С-Пб, 15-17 сент. 1999: Мат-лы конф. С-Пб. - 1999. - с. 236.

64. Новиков Д.К. Противобактериальный иммунитет.// Иммунопатол, аллергол., инфектол. 2002. - № 2. - с. 7 - 19.

65. Новиков Д.К., Новикова В.И., Сергеев Ю.В. и др. Иммунодефицитные болезни: первичные иммунодефициты. // Иммунопатол, аллергол., инфектол. -2003.-№ 1.-е. 8-23.

66. Павелкина В.Ф., Мамыкина В.М. Дифтерия. Учебное пособие // Саранск: Изд. Морд. Ун-та. 1999. - 63 с.

67. Пан И.Р., Матвеева JI.A., Федорова Т.С. Нарушения некоторых показателей иммунных процессов на слизистых оболочках дыхательных путей при бронхолегочных заболеваниях у детей. // Журн. микробиол. 2003. - № 1. -с. 72-74.

68. Першин Б.Б. Вакцинация и местный иммунитет. М. - Медицина. - 1980. -232 с.

69. Петров Р.В. Иммунология. Уч. для мед. институтов. - М.: Медицина. -1987.-414 с.

70. Петрухин Ю.П., Нелюбых О.В., Максимкина Е.В. и др. Особенности распределения тканевых HLA-антигенов при дифтерии.// Клиническое значение лейкоцитарных антигенов. JT. - 1984. — с. 44-66.

71. Пищальников А.Ю. Клинический полиморфизм селективной недостаточности IgA у детей// Аллергология. 2000. - № 2. - с. 23 - 26.

72. Плохинский Н.А. Биометрия. Изд. Сибирского отд. АН СССР. 1961.-е. 16 -21.

73. Полянина Э.З. Особенности состояния иммунной системы у новорожденных и детей первых месяцев жизни. / Астрах. Гос. Мед. акад. Астрахань, 2000, 17 с.

74. Покровский В.И., Авербах М.М., Литвинов В.И., Рубцов И.В. Приобретенный иммунитет и инфекционный процесс. М. 1979. - с. 72 - 73.

75. Попель И.Р. Гуморальный иммунитет и HLA-фенотипы при дифтерии у взрослых. // Автореф. дисс. канд. мед. наук: Военно-Мед. Акад. Спб. -1997.- 16 с.

76. Потемкина Е.Е. Позднякова Р.З., Манукян JI.M. Пособие по лабораторной клинической иммунологии с курсом практических занятий. М. — Изд-во РУДН.- 2003. -283 с.

77. Применение иммуноферментного анализа в медицине./ Тезисы докладов респ. Науч. Конф., 28 29 ноября 1989г. / Харьков: 1989. - 128 с.

78. Прокопенко В.Д. Структура и функции иммунной системы человека : Учебное пособие. М.: изд. РУДН - 2001. - 56 с.

79. Проскуряков С.Я., Бикетов С.И., Иванников А.И. Оксид азота в механизмах патогенеза внутриклеточных инфекций.// Иммунология. — 2000. № 4. — с. 9 -20.

80. Рамон Г. 40 лет исследовательской работы / Г. Рамон. М.: Медицина. -1962.

81. Реакция непрямой гемагглютинации. / Отв. Редактор Т.В. Перадзе. JT. -1981.-125 с.

82. Ройт А. Иммунология / М.: Мир. 2000. - 581 с.

83. Ройт А. Основы иммунологии. М. 1996.

84. Руденко А.В., Кругликов В.Т. Иммуноферментный анализ. 30 лет диагностической практики // Лаб. диагностика. 1999. - № 3. - с. 11 - 20.

85. Румянцев А.Г., Зиновьева Н.В., Продеус А.П., Резников Ю.П. и др. IgA дефицит: вопросы клиники и патогенеза // Педиатрия (Россия). 2001. - № 4. -с. 51-55.

86. Румянцев С.Н. Конституциональный иммунитет и его молекулярно-экологические основы. — Л. Наука. - 1983. — 210 с.

87. Савилов Е.Д., Жданова С.Н., Апшего В.П., Кохан С.Т., и др. Изучение уровня адаптации военнослужащих по показателям периферической крови// Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. 2003. - № 1. - с. 99 - 101.

88. Санитарно-эпидемиологическая ситуация в Российской Федерации в 2002 году.//Эпидемиол. и вакцинопроф. 2003 - № 1 - с. 3.

89. Светлов П.Г. Физиология (механика) развития. Внутренние и внешние факторы развития. Л.: Наука. — 1978. — т.2. 264 с.

90. Сенцова Т.Б. Ревякина В.А. и др. Состояние гуморального иммунитета и интерлейкинового статуса при атопическом дерматите у детей. // Росс, педиатр, ж. 2002. - № 5. - с. 8 - 12.

91. Сепиашвили Р.И. Основы физиологии иммунной системы. Медицина: Здоровье. 2003. - 240 с.

92. Сизова Г.В. Состояние некоторых факторов иммунитета у больных пневмониями. // // Материалы науч. Конф. Мордовского гос. Ун-та им. Н.П. Огарева, Саранск, 15-19 дек. 1998. Ч. 1. Мед. науки, биохимия, Химия. -Саранск, 1998.-е. 112-113.

93. Сизова Г.В., Сизов В.Н. Особенности иммунного статуса больных хроническим бронхитом. // Материалы науч. Конф. Мордовского гос. Ун-та им. Н.П. Огарева, Саранск, 15-19 дек. 1998. Ч. 1. Мед.науки, биохимия, Химия. Саранск, 1998. - с. 108 - 109.

94. Система иммунитета при заболеваниях внутренних органов. Под ред. И.М. Ганджи. Киев.: Здоровье. - 1985. - 276 с.

95. Сохин А.А. Иммунологическая реактивность и вакцинация детей раннего возраста. Киев: Здоровье. -1981.- с. 202 - 206.

96. Сохин А.А., Заплатников Л.Т., Кучерявенко B.C. и др. Зависимость частоты и длительности носительства дифтерийных бактерий от антимикробного иммунитета и групповых факторов крови. // Журн. микробиол. 1970 - № 7. - с. 76 - 80.

97. Стемпковская Н.И., Гнеток Т.С., Давыдова Л.И. Естественный ингибирующий фактор активности антител класса М при различных патологических состояниях организма человека. // Труды Астрах. Гос. Акад. 2000. - № 19 - с. 242 - 245.

98. Стефани Д.В., Вельтищев Ю.Е. Иммунология и иммунопатология детского возраста. М. - Медицина. - 1996. - 382 с.

99. Сухорукова H.JI. Эпидемиологическая оценка дифтерийной инфекции в условиях высокого уровня противодифтерийного иммунитета: Автореф. дисс. . .док. мед. наук. М., 1978. - 46 с.

100. Татишвили Н.И., Меунаргия В.В., Соселия Т.С. Молекулярные и клеточные аспекты иммунологического распознавания. Мецниереба. — Тбилиси. - 1988.-с. 6.

101. Тебякина А.Е. Об антибактериальном иммунитете при дифтерии.// Журн. микробиол. 1939. - № 1. - с. 12 - 14.

102. Томпсон Р.А. Последние достижения в клинической иммунологии. // Изд-во Медицина. 1983. - с. 418 - 420.

103. Тотолян А.А., Марфичева Н.А., Алешина JI.A. Иммуноглобулин Е в клинической практике. СПб: СПбГМУ, 1995. - 20с.

104. Триполитова А.А. О роли антибактериального фактора в иммунитете противодифтерийной инфекции.// Тр. Томского НИИВС, 1955. т. 6. - с 343 -345.

105. Турьянов М.Х., Беляева Н.М., Царегородцев А.Д. и др. Дифтерия // М.: Медикас. 1996. - 252с.

106. Тутов И.К. Характеристика антител, их природа, механизм и место образования (Обзор) // Вест, ветеринарии. 2000. - № 15. - с. 56 - 64.

107. Ундревич С.В. Роль антитоксического и антибактериального факторов в иммунитете при дифтерии. // Проблемы эпидемиологии и иммунологии. — М. 1936. - Кн.2. - с. 83 - 85.

108. Учайкин В.Ф., Шамшева О.В. Вакцинопрофилактика: настоящее и будущее. Москва: ГЭОСТАР МЕД - 2001. - 399 с.

109. Фаворова Л.А. Эпидемиологическое значение различных источников инфекции (на модели дифтерии и менингококкового менингита).// Автореф. дисс. док. мед. наук. М. - 1967. - 28 с.

110. Фаворова Л.А., Астафьева Н.В., Корженкова М.П. Дифтерия. М. -Медицина. - 1988. - 208 с.

111. Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях: Тезисы докладов 14 Рос. науч. Конф., Челябинск, 2000 / Ред. Долгулин И.И. Челябинск: Юж.-Урал. Кн. Изд-во, 2000.- 159 с.

112. Филимонов П.Н. Гаврилова Н.И., Иванов Г.Я., Шурупий В.А. Взаимосвязь активности гепатита, фиброза печени и иммунного статуса у детей с хроническим вирусным гепатитом В+С.// Журн. микробиол. 2004. -№ 2. - с. 50 - 56.

113. Фрейдлин И.С., Тотолян А.А. Роль изменений иммунной системы в формировании бронхиальной астмы // Бронхиальная астма. СПб: Мед. информ. агенство, 1996. - с. 54-69.

114. Фримель X., Брок Й. Основы иммунологии. М.: Медицина. - 1986. - 254 с.

115. Фукс И.М. Изучение антибактериального фактора в иммунитете к дифтерии // Дифтерия и коклюш: Сб.тр. МНИИЭМ, 1964. с. 62 - 66.

116. Хаитов P.M., Манько В.М., Алексеев Л.П. и др. Иммуногенетика и иммунология: резистентность к инфекциям. Ташкент: Изд. Ибн Сины. -1991.-454 с.

117. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. М.: Медицина. - 2000. - 429 с.

118. Ценёва Г.Я., Сабадаш Н.В., Гуцина Э.А., Щедеркина Е.Е. Дифтерийное бактерионосительство и состояние иммунной системы у детей и взрослых. //

119. VI Росс.-Ит. Науч. Конф. «Инфекционные болезни: диагностика, лечение, профилактика." » Спб. 2000. - с. 283.

120. Ценёва Г.Я., Рыкушин Ю.П., Быстрякова JI.B. Дифтерия (рекомендации для врачей). СПб.; Хельсинки, 1997. - с. 64.

121. Чередеев А.Н. Характеристика и функциональные свойства субпопуляций лимфоцитов человека // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. — Иммунология. 1984.-т. 13.-е. 108- 133.

122. Черкасова В.В., Сухорукова Н.Л., Маркина С.С. Биологические свойства коринебактерий дифтерии, циркулирующих в детском коллективе // Острые детские инфекции: Сб.тр. МНИИЭМ. М., 1975. - т. 16. - с. 45 - 49.

123. Чистякова Г.Г. Дифтерия у взрослых. Эпидемиология и вакцинопрофилактика.// Автореф. дисс. канд. мед. наук. М. - 2002. — 22 с.

124. Шляхов Э.Н. Иммунитет новорожденных детей. Кишинев: Штиица. -1986.-261 с.

125. Шмелева Е.А. Биологическая функция антигенов клеточной стенки C.diphtheriae и научно-производственная разработка иммуномодулирующего препарата Кодивак. Дисс. док. биол. наук. - М. - 1991. - 336 с.

126. Шмелева Е.А., Макарова С.И., Корженкова М.П. и др. Некоторые показатели иммунитета при дифтерийной инфекции.// Эпидемиол. и вакцинопроф. 2002. - № 3 - 4. — с. 31 - 35.

127. Шмелева Е.И., Макарова С.И., Батурина И.Г. Современный взгляд на старые истины о противодифтерийном иммунитете. // Эпидемиол. и вакцинопроф. 2003. - № 2(9). - с. 26 - 31.

128. Эпидемиологический надзор за дифтерийной инфекцией.// Методические указания, МУ, 3.1.1082-01 -М.-2002.

129. Ярилин А.А. Основы иммунологии. Учебник. М.: Медицина. 1999. -608 с.

130. Allagapan К., Rennie W., Kwiatkovski Th., Narang V. Antibody protection to diphtheria in geriatric patients: need for ED compliance with immunization guidelines // Ann. Emergency med. 1997. - 30. - № 4. - p. 455 - 458.

131. Allagapan K., Rennie W., Narang V., Auerbah C. Imuunologic response to tetanus toxoid in geriatric patients // Ann. Emergency med. 1997. - 30. - № 4. -p. 459-462.

132. Alzari P.M. et al. Three-demensional structure of antibodies// Annu. Rev. Immunol. 1988. - Vol. 6. - p. 555.

133. Artisimovich N., Galushina Т., Matvienko M. Immunity impairment as a result of neurohormonal disorders.// Russ. J. Immunol. 1999. - 4, № 4 - p. 343 - 345.

134. Barber C. Le tampon-veronal. Moyen, d'extraction des antigenes bacterieus // Arch. Roum. Pathol. Exp. Microbiol. 1961. - Vol. 20. - N 3. - p. 541 - 542.

135. Barber G., Bica Popii V. Sur les relations immunochemiques des C. diphtheriae et les Corynebacteries phytopatogeneus // Pathol. Mocrobiol. 1966. -V. 29.-p. 377-386.

136. Barksdale L. Immunobiology of diphtheria // Immunological Hum. Infection. Pt. 1.-1981.-p. 171-199.

137. Barksdale L. Corynebacterium diphtheriae and its relatives // Bacterid. Rev. -1970. -N. 34.-p. 378-422.

138. Basic Clinical Immunology // Ed. D.P. Stites, A.I. Terr, T.G. Parslow. New York, Appleton Lange, 1994.-821 c.

139. Camargo M. et al. // J. Clin. Microbiol. 1984. - V. 20. - p. 772 - 774.

140. Castle St.C. Clinical relevance of age-related immune dysfunction. // Clin. Infec. Diseases. 2000. - 31. - № 2. - p. 578 - 585.

141. Chapel H., Geha R., Rosen F. Primary immunodeficiency diseases: an update.// Clin. And Exp. Immunol. 2003. - 132. - № 1. - p. 9 - 15.

142. Christenson В., U. Hellsrom, S. Sylvan, L. Henriksson, M. Granstrom/ Impact of vaccination campaign on adult immunity to diphtheria.//Vaccine, 2000, 19:9-10.-p. 1133-1140.

143. Christopher Maple P.A., C.S. Jones E. Wall, A. Vyse/Immunity to diphtheria and tetanus in England and Wales// Vaccine, 2000, 19: 2-3. p. 167-173.

144. Clark R., Engvall E. Enzymelinked immunosorbent assay (ELISA). Theoretical and practical aspects. Enzyme-Immunoassay (E.T. Maggio ed.). Boca raton, Florida, 1981. p. 167- 179.

145. Collier B.J. Diphtheria toxin: mode of action and structure.// Bact. Reviews. 1975. -V. 15.-N2.-p. 162-174.

146. Cummins C., Harris H. MStudies of the cell wall composition and taxonomy actinomycetales and related group A // J. Microbiol. 1958. - V. 18. - p. 173 -209.

147. Cummins C. Chemical and antigenic studies on cell walls of Mycobacteria, Corynebacteria and Nocardia // Am. Rev. Resp. Dis. 1965. - V. 92. - p. 63 - 72.

148. De Melker H.E., Conyn van Spaendonk M.A.E. Immunosurveillance and the evaluation of national immunization programmes : a population-based approach // Epidemiol, and Infec. 1998. - 121. - № 3. - p. 637 - 643.

149. Dl-San junui daxue xuebao. Главные факторы, влияющие на результаты, полученные с применением твердофазного ИФА.// Acta acad. Med. Mil. Teniae. 2001. - 23. - № 7. - p. 871 - 872.

150. Dular V. Comparative studies of the in vitro toxin neutralization and the in vitro Vero cell assay methods for use in potency testing of diphtheriae component in combined vaccines toxoids.// Biologicals. 1993. - Vol. 21. - p. 53 - 59.

151. Egeneen A., Kurugol L., Aksit S., Ozacar T. Immunity to diphtheria in Izmir, Turkey. // Eur. J. Epidemiol. 2000. - 16. - № 11. - p. 1039 - 1042.

152. ELISA and other solid phase immunoassays: theoretical and practical aspects/ Ed. By D.M. Remenia S.J. Chicheste: WILEY, cop. 1988. - VIII, 367 p.

153. Engvall E. and Perellman P. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Qantitatie assay for immunoglobulin G. Immunochemistry, 1971, v.8, p. 871.

154. Frobisher M., Updyke E. Further studies in the immunization of rabbits to toxigenic Corynebacterium diphtheriae by infection of non-toxigenic diphtheria bacilli // J. Bacterid. 1947. -N 54. - p. 609 - 617.

155. Frobisher M., Parsone E. Studies on type-specific protection with somatic antigens of C. diphtheriae // Am. J. Hyg. 1950. - # 52. - p. 239 - 246.

156. Gasparini R., Pozzi Т., Fragapane E., Severini R. Immunity to diphtheria in Sienna // Epidemiol, and Infec. 1997. - 119. - № 2. - p. 203 - 208.

157. Grabowska K., Wang X., Jakobsson A., Dillner J. Evaluation of costprecision rations of different strategies for ELISA measurement of serum antibody levels // J. Immunol. Methods. 2002. - 271, № 1 - 2. - p. 1 - 15.

158. Granoff D.M., Мое G.R., Chiron S. Antibodies that define unique meningococcal В epitops and vaccine compositions. Children's Hospital Medical Center of Nothern California, №08/925002.

159. Griffiss J. Biologic function of the serum IgA system: modulation of complement-mediated antigenic mass.// Ann.N.Y.Acad.Scien. 1985. - Vol.143. - p. 32.

160. Gupta RK, Siber GR / Use of in vitro VERO cell assays and ELISA in the USA potency test of vaccines containing adsorbed diphtheria and tetanus toxoids//Dev. Biol. Stand 1996.- Vol. 86.- p. 207-215.

161. Hendriksen et al./ WHO, Geneva, 1993, № 2, p. 3.

162. Herbert W.J. Passive gemagglutination with special reference to tanned cell technique.// In: Handbook of experimental immunology/ Ed. D.W. Weir. Vol. 1. - chap. 20. - Oxford: Blackwell scientific publications. - 1973.

163. Holdsworth E.S. The nature of the cell wall of Corynebacterium diphtheriae. Isolation of an oligosaccharide // Biochem. Biophys. Acta. 1952. - Vol. 9. - p. 19-21.

164. Hoyer L.W., Trabolt N.C. The significance of erythrocytes antigen syte density.// J. Clin. Invest. 1970. - Vol. 49. - p. 87 - 95.

165. Hu V.W., Holmer R.C. Evidence for direct insertion of fragments A and В of diphtheriae toxin into model membrances.// J. Biol. Chem. 1984. - Vol. 259. -№ 19. -p. 12226- 12233.

166. Hunter W.M., Corrie J. Imunoassay // Edinburgh: Churchill Levingtone. -1983.-572 p.

167. Immunologic disorders in infants and children./Ed. E.R. Stiehm. 3rd ed. -Philadelfia: Saunders. 1989. - 829 p.

168. Ishikawa E. Enzyme Immunoassay. // Tokyo N.Y.: Igaku-Shoin/ - 1981. -281p.

169. Ishizaka Т., Ishizaka К. Biology of immunoglobulin E. Molecular basis of reagnic hypersensitivity. Progr. Allergy. V. 19. - Basel, 1975. - p. 60 - 121.

170. John T. Jacob, Samuel Reuben. Herd immunity and herd effect: new insights and definitions // Eur. J. Epidemiol. 2000. - 16. - № 7. - p. 601 - 606.

171. Karalnik B.V., Markova S.G., Denisova T.G., Savchenko E.Ya. Immuno-ecologic aspects of vaccination and a problem of rehabilitation // Int. J. Immunorehabil. 2000. - 2. - № 3. - p. 130 - 131.

172. Katial R., Hershey J., Purohit T. Cell mediated immune response to tuberculosis purified protein derivative: Comparition of ТВ skin testing to in vitro g-interferon production.// J. Allergy and Clin. Immunol. 2000. - № 1. - p. 305.

173. Knight et al./ WHO, Geneva, 1993, № 2, p. 3.

174. Korneva E. Contemporary topics in neuroimmunomodulation. // Russ. J. Immunol. 1999. - 4, № 4 - p. 340 - 342.

175. Kristiansen M., Aggerbeck H., Heron I. Improved ELISA for determination of anti-diphtheria and/or anti-tetanus antitoxin antibodies in sera. // APMIS. 1999. -Nov 105.-p. 843-853.

176. Kuchenbauer Т., Tympner K.D. Antibodies of the pentapeptide subunit of peptidoglican in human sera. // Biologicals properties of peptidoglycan. 1986. -Berlin - New-York.

177. Lagergard Т., Trollfors В., Claesson BA. Determination of neutralizing antibodies and specific immunoglobulin isotype levels in infunts after vaccination against diphtheria.// Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1992. - Apr. 11. - p. 341 -345.

178. Lautrop H. Studies on antigenic structure of Corynebacterium diphtheriae // Acta Pathol. Microbiol. Scand. 1950. - N 27. - p. 443 - 447.

179. Leikila J., Pasanen V. J. Influence of antigen receptor density on agglutination of red blood cells.// Int. Arch. Allergy Apple. Immunol. 1970. - v. 39. - p. 352 -360.

180. Lock R.J., Unsworth D.J. Immunoglobulins and Ig subclasses in the elderly// Ann. Clin. Biochem. 2003. - 40, № 2. - p. 143 - 148.

181. Malberg K. Methoden zum Nachweis und zur Bestimmung humoraler antikorper in der experimentellen Immunologic. Schriftenreihe der arztlichen Fortbildung. VEB Verlag Volk und gesundheit, Berlin, 1970. - B. 40. - p. 69 -86.

182. Maple PA, Jones CS, Wall EC, Vyseb A, Edmunds WJ, Andrews NJ / Immunity to diphtheria and tetanus in England and Wales.// Vaccine 2000 Sep 1519:2-3167-73

183. Marshall R.J., Johnson E. Corynebacteria: Incidence among samples submitted to a clinical laboratory for culture // Med. Lab. Sci. 1990. - V. 47. - N 1. - p. 47, 36-41.

184. Marshall-Clarke S., Keen D., Tasker L., Hassan J. Neonatal immunity: how will has it grown up?// Immunol. Today. 2000. -21. - № 1. - p. 35-41.

185. Martinetti L.M., Gruner E., Altwegg M. Rapid detection of diphtheriae toxin by the polymerase chain reaction// Med. Microbiol, lett. 1992. - vol. 1. - p. 276 -283.

186. Morgan E.L., Weigle W.O. Biological activities residing in the Fc portion of immunoglobulin.// Adv. Immunol. 1987. - Vol. 40. - p. 61.

187. Nicolay U., Girgsdies O.E., Banzhoff A., eta. Diphtherie-Antitoxik Spiegel zwei jahre nach auffrischimpfung. // Wien. Med. Wochenschr. - 2000. - 150. - № 22.-p. 435-439.

188. Nossal G.J. Kinetics of antibody formation and regulatory aspects of immunity. Acta endocrinol., 1975. - v. 78. - Suppl. N 194. - p. 96 - 110.

189. Pappenheimer A.M. Diphtheria toxin.//Ann. Rev. Biochem. 1977. - vol. 46. -p. 69-94.

190. Pappenheimer A.M., Murphy I.R. Studies on the molecular epidemiology of diphtheria // The lancet. 1983. - Vol. 10. - p. 923 - 926.

191. Portsmann T. Entwicklung eines Doppel-Sandwich-Enzymimmunoassays zum quantitative Nachweis von HbsAg (1. Mitteilung), Dt. Gesung 1980. - Vol. 35. -p. 598-600.

192. Rees B.W.G. An automated method for the coated red cell hemmagglutination technique.// Med. Lab. Techn. 1973. - Vol. 30. - p. 167 - 177.

193. Robinson D., Pseney A. The serologicals types amongst gravis strains of Corynebacterium diphtheriae and their distribution // J. Pathol. Bacteriol. 1936. -Vol. 43.-p. 403-418.

194. Rurka G. Bacteriocin typin of Corynebacterium diphtheriae // Canad. J. Med. Technol. 1974. - Vol. 36. - N 4. - p. 310 - 313.

195. Semenkov V., Artemyeva O., Urina Т., Borisova A., Kognowitskaya A. Immunoinflammatory reactions in centenarians. // Russ. J. Immunol. 2002. - 7. -№ l.-p. 66-68.

196. Shelly M., Pichichero M., Treanor J. Low baseline antibody level to diphtheria is associated with poor response to conjugated pneumococcal vaccine in adults.// Scand. J. Infec. Diseases. 2001. - 33. - № 7. - p. 542 - 544.

197. Skoura L., Efstratiou A., Tsakris A. Study on the use of an ELISA in determining human antibodies to diphtheria toxin as compared with a reference toxin neutralization assay. // Сотр. Immunol. Microbiol, infect. Dis. 1999. -july. - 22:3. - p. 181-186.

198. Sousa P. Et Evans, WHO, Geneva, 1993, № 2, p. 3.

199. V. Skogen. Detection of diphtheria antitoxin by four different methods. // Clin.

200. Microbiol. Infect. 1999:5. - p. 623 - 633.

201. Tomasi T.B., Kand Y.S., Galvanico N. Human secretory IgA // Feder. Proc. -1968.-vol. 27.-p. 617.

202. Underdown B.J., Schiff J.M. Immunoglobulin A: strategic defence initiative at the mucosal surface.// Annu. Rev. Immunol. 1986. - Vol. 4. - p. 389.

203. Vasques-Rosales J.G., Solorsano-Santos F., Bustamante-Calvillo M.E. Comparision of five methods for the detection of measles specific immunoglobulin G antibody.// Rev. Latinoamer. Microbiol. 1996. - 38, № 3 - 4. -p. 167- 175.

204. Vitek C.R., Brisgalov S.P., Bragina V.Y., Zhilyakov A.M. Epidemiology of epidemic diphtheria in three regions, Russia, 1994 1996. // Eur. J. Epidemiol. -1999.- 15.-№1.-p. 75-83.

205. Walory J., Grzesiowski P, Hriniewicz W./ Comparison of four serological methods for the detection of diphtheria anti-toxin antibody.// J Immunol Methods 2000 Nov 1 245:1-2 55-65

206. Walory J., Grzesiowski P., Hryniewicz W. / Immunity against diphtheria and tetanus in the adult Polish population// Pol. Merkuriusz Lek 2000. oct. 9. - vol. 52.-p. 687-692.

207. Wick G., Grubick-Loebenstein B. Immunobiology of aging: Abstr. Int. Eur. Congr. Biogerontol.: from molecules to humans, Saint-Petersburg. Aug. 25 28, 2000// Успехи геронтологии. - 2000. - № 5. - с. 16.

208. Yamaizumi M., Mekada E., Ushida T. One molecule of diphtheriae toxin fragment A introduced into a cell can kill the cell.// Ctll. 1978. - Vol. 15. - p. 245-250.

209. Гоц Ю.Д., Колесников M.M., Мохорт Г.А. Вивчення та оцшка iMMyHHOcii наслення i хворих на дифтер1ю в Kneei в перюд ешдемп (1996 1998). // Cyracrn шфекцн. - 2000. - № 1. - с. 17 - 20.

Информация о работе

Макарова, Светлана Игоревна
кандидата биологических наук
Москва, 2005
ВАК 03.00.07

Диссертация

Выявление противодифтерийных антибактериальных антител с помощью иммуноферментного анализа - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы