Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Высокоантагонистические штаммы лактобацилл, перспективные для конструирования новых пробиотических препаратов

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Червинец, Юлия Вячеславовна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Пробиотики

1.1.1 .Понятие пробиотиков.

1.1.2.Понятие бактериоцинов и микроцинов.

1.1.3.Характеристика антагонистически активных штаммов лактоба-цилл

1.1.3.1.Частота встречаемости бактерицинпродуцирующих штаммов лактобацилл.

1.1.3.2.Спектр антагонистической активности бактерицинпродуцирующих штаммов лактоба цилл.

1.1.3.3.Физико-химические характеристики бактериоцинов, синтезируемых лактобациллами.

1.1.3.4.Генетический контроль синтеза бактериоцинов.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВНИЯ

2.1. Характеристика исследуемого материала.

2.2. Выделение чистой культуры лактобацилл.

2.3. Идентификация лактобацилл.

2.4. Праймеры и постановка. ПЦР для видовой идентификации лактобацилл.

2.5. Изучение антагонизма микроорганизмов методом перпендикулярных штрихов.

2.6. Определение антагонистической способности микроорганизмов (продукция бактериоцинов).

2.7. Определение антагонистической способности лактобацилл (продукция микроцинов).

2.8. Определение антимикробной активности супернатантов, содержащих бактериоциноподобные вещества.

2.9. Совместное культивирование на поверхности твердой питательной среды.

2.10. Определение чувствительност лактобацилл к желчи.

2.11. Определение чувствительности лактобацилл к соляной кислоте.

2.12. Определение кислотопродуцирующей способности лактобацилл.

2.13. Определение признаков патогенности

2.13.1. Определение лецитиназной активности.

2.13.2. Определение казеинолитической активности.

2.13.3 Определение желатиназной активности.

2.13.4. Определение нуклеазной активности.

2.13.5. Определение каталазной активности.

2.13.6. Определение гемолитической активности.

2.13.7. Определение антилизоцимной активности.

2.14. Определения адгезивной способности микроорганизмов.

2.15. Определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (качественная).

2.16 Определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (количественная).

2.17. Определения чувствительности латобацилл к химиопрепаратам и хитозану.

2.18. Статистическая обработка материала.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Выделение и идентификация лактобацилл.

3.2. Антагонистическая активность лактобацилл

3.2.1. Бактериоцинная и микроцинная активность.

3.2.2. Антагонистическая активность прогретой культуры.

3.2.3. Межмикробный антагонизм.

3.3. Чувствительность лактобацилл к антимикробным препаратам.

3.4. Чувствительность лактобацилл к химиопрепаратам и хитозану.

3.5. Ферменты патогенности и адгезивная способность лактобацилл.

3.6. Чувствительность лактобацилл к соляной кислоте и желчи.

3.8. Кислотопродуцирующая способность лактобацилл.

3.9. Характеристика групп сравнения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Высокоантагонистические штаммы лактобацилл, перспективные для конструирования новых пробиотических препаратов"

Актуальность темы

В настоящее время в медицинской практике широко применяются пробиотические препараты, изготовляемые на основе штаммов лактоба-цилл. Пробиотические бактерии должны обладать набором свойств, позволяющих им конкурировать с патогенными и условно-патогенными микроорганизмами. К таким признакам относятся: антагонистическая активность, способностью к адгезии к эпителиоцитам кишечника, активность кислотообразования, определенный уровень резистентности к соляной кислоте и желчи, отсутствие факторов патогенности, т.е. безопасность при применении (Бондаренко В.М., Воробьев А.А., 2004). Известно, что представители рода Lactobacillus способны синтезировать антимикробные вещества, ассоциированные с синтезом бактериоцинов. Бактериоцины представляют собой комплексы, составной частью которых является белковый или полипептидный компонент, ответственный за бактерицидную активность. В отличие от антибиотиков, бактериоцины имеют сравнительно узкий спектр действия, направленный против родственных видов (Блинкова Л.П., 2003, Рыбальченко О.В. и др., 2006, Jack R.W., 1995, Ja-muna М., 2004).

В зависимости от штамма-продуцента, химической природы, способа воздействия на бактериальную клетку выделяют несколько групп бактериоцинов: 1) лантибиотики - это бактериальные термостабильные полипептиды молекулярной массы (ММ) от 3 до 7 кД , 2) микроцины - термостабильные пептиды низкой ММ 1,0 -2,0 кД, 3) высокомолекулярные термолабильные протеины ММ от 10 до 5000 кД и 4) комплексы протеинов, для проявления антимикробной функции которых необходимы углеводная или липидная составляющие (Петров JI.H. и др.,2006, Вахитов Т.Я. и др., 2006).

Описаны различные типы антибиотикоподобных полипептидов (бак-териоционов и микроцинов, в том числе: блокирующих белковый синтез в микробных клетках (микроцины А15, Al7, С 7, С51), подавляющих репликацию ДНК (микроцин В17, D93), ингибирующих транспорт лейцина и пролина (микроцины D140, D15), - изменяющих мембранный потенциал клетки (микроцин Е492), нарушающих процессы деления клетки (микроцин J25) или проницаемость бактериальной цитоплазматической мембраны, путем образования пор (Хмель И.А., 1999, Бондаренко В.М., 2006).

В связи с этим актуальной является селекция штаммов лактобацилл, синтезирующих микроцины с широким спектром антагонистической активности.

Цель исследования:

Целью настоящей работы явилось выделение, идентификация и изучение высокоантагонистически активных штаммов лактобацилл, продуцирующих бактериоциноподобные вещества с широким спектром антимикробного действия, перспективные для создания новых пробиотиче-ских препаратов.

Задачи исследования:

1. Выделить бактерицинпродуцирующие высокоантагонистические штаммы лактобацилл из кишечника здоровых детей и взрослых и провести их биохимическую идентификацию до вида с подтверждением при помощи полимеразной цепной реакции с видоспецифиче-скими праймерами, амплифицирующими последовательности гена 16S рРНК.

2. Определить спектр антимикробной активности, адгезивную и кислотообразующую способность бактерицинпродуцирующих штаммов лактобацилл.

3. Разработать комплексные подходы оценки безвредности потенциальных пробиотических штаммов лактобацилл по выявлению признаков, ассоциированных с наличием ферментов патогенности, определяемых в системе in vitro.

4. Определить чувствительность бактерицинпродуцирующих штаммов лактобацилл к желчи, соляной кислоте и антимикробным препаратам и характер взаимных отношений между выделенными и производственными пробиотическими штаммами бактерий различных таксономических групп. Научная новизна работы:

1. Выделены высокоантагонистические бактериоциногенные штаммы лактобацилл, подавляющие различные виды грамположительных и грамотрицательных патогенных и условно патогенных бактерий и грибов рода Candida.

2. Обоснована необходимость комплексного изучения апатогенно-сти изолятов, критериями отбора которых являются отсутствие гемолитической, протеолитической (желатиназной и казеинолитической), лецити-назной, гиалуронидазной, антилизоцимной, ДНК-ной и РНК-ной активности, определяемых in vitro.

3. Получена коллекция бесплазмидных высокоантагонистических бактериоциногенных штаммов лактобацилл, устойчивых к физиологической концентрации соляной кислоты и желчи, обладающих чувствительностью к ряду одних и резистентностью к ряду других химиотерапевтиче-ских препаратов, антибиотиков и хитозану.

4. Показана совместимость выделенных высокоантагонистических штаммов лактобацилл с бактериями производственных штаммов L.plantarum 8RA-3, L.fermentum 90-4Т, L.acidophilus 75D, B.bifidum 1 и Enterococcus l'aecium SF68.

5. Впервые выявлена ростстимулирующая активность 0,6% соляной кислоты в отношении антагонистически активных штаммов лактобацилл и энтерококков.

Практическая значимость

Установлено, что бактериоциногенные штаммы лактобациллы, выделенные из фекалий здоровых детей, обладают высокой антагонистической активностью в отношении патогенной и условно патогенной микрофлоры, не обладают признаками патогенности и могут быть использованы для разработки на их основе новых препаратов пробиотиков.

Показано, что антагонистически активные бесплазмидные штаммы лактобацилл обладают резистентностью к широкому спектру антимикробных препаратов, что открывает возможность их использования в комплексной терапии заболеваний, осложненных дисбактериозом кишечника.

Показано, что антагонистически активные штаммы лактобацилл не оказывают ингибирующего влияния на нормальную микрофлору кишечника и могут быть использованы совместно с другими препаратами про-биотиками, содержащими лактобациллы, бифидобактерии и энтерококки.

Положения, выносимые на защиту

Выделенные высокоантагонистические бактериоциногенные апато-генные, резистентные к соляной кислоте и желчи штаммы лактобацилл, подавляющие патогенную и условно патогенную микрофлору, могут быть использованы в качестве основы для создания новых эффективных препаратов пробиотиков. Штаммы лактобацилл с широким спектром антимикробной активности, обладающие высокой чувствительностью к ряду антибиотиков и биологически совместимые с известными пробиотическими штаммами бактерий различных таксономических групп, могут быть использованы для конструирования производственных консорциумов для комплексной терапии различных заболеваний ЖКТ.

Внедрение результатов в практику

По материалам диссертации было составлено пособие «Дисбакте-риозы кишечника и их коррекция». Экспресс метод определения степени дисбактериоза кишечника защищен патентом и внедрен в практику работы бактериологической лаборатории кафедры микробиологии Тверской

ГМА. Материалы диссертации используются в учебном процессе на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО Тверской ГМА МЗ РФ. Апробация работы

Основные положения работы были доложены на заседании Тверского отделения научно-практического общества микробиологов, эпидемиологов и паразитологов совместно с региональными научными обществами инфекционистов и иммунологов в марте 2005 г. (г.Тверь), на научной конференции клинических микробиологов в мае 2005 г. (г.Москва), на выездной сессии Всероссийского общества гастроэнтерологов ноябрь 2005г. (г.Тверь). Публикации

По теме диссертации опубликованы 15 печатных работ в местной и 2 в центральной печати, получен патент на 1 изобретение (Бондаренко В.М., Виноградов В.Ф., Червинец Ю.В. «Способ определения казеиноли-тической активности микроорганизмов при экспресс диагностике дисбак-териоза кишечника» Патент на изобретение № 2235324 от 25 августа 2004 г.) и 1 методическое пособие (Червинец В.М., Виноградов В.Ф., Смирнова Л.Е., Червинец Ю.В., Бондаренко В.М. Дисбактериоз кишечника: современные аспекты изучения проблемы, принципы диагностики и лечения. - Тверь, 2004,- 24 с.) Структура диссертации

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Червинец, Юлия Вячеславовна

Выводы:

1. Из фекалий 177 практически здоровых детей в возрасте 7-15 лет выделено и идентифицировано 20 высокоантагонистических штаммов лактобацилл с широким спектром антимикробной активности по отношению к патогенным и условно патогенным бактериям родов Staphylococcus, Pseudomonas, Salmonella, Shigella, Escherichia, Bacillus и грибам рода Candida

2. Индикаторные культуры В. subtilis и Р. aeruginosa проявили чувствительность к бактериоцинной продукции 75% лактобацилл, St. aureus и S. typhimurium 415- к 60%, Е. coli - к 55%, Sh. sonnei - к 45%, С. albicans - к 10%; культура Р. aeruginosa оказалась чувствительной к мик-роцинной активности 40 % лактобацилл, Е. coli - к 30%, S. typhimurium -к 25%, С. albicans -к 15%, Sh. Sonnei и St. aureus - к 10 % лактобацилл.

3. Выделенные антагонистически активные штаммы фенотипи-чески апатогенны, т.е. не обладали гемолитической, протеолитической, летициназной, гиалуронидазной, антилизоцимной, ДНК-ной и РНК-ной активностью, средний показатель адгезии составлял 2,54±1,19.

4. При исследовании чувствительности к антибиотикам выявлено, что 5 антагонистически активных штамма лактобацилл чувствительны к следующим антибиотикам: бензилпенициллин, хлорамфеникол, ампициллин, тетрациклин, амоксициллин, фромилид (кларитромицин), карбе-нициллин, эритромицин, левомицетин, бициллин-3, ванкомицину. К стрептомицину, мономицину, рифампицину и сульфодиметоксину был чувствителен только один штамм.

5. Для большинства штаммов лактобацилл минимальная ингиби-рующая концентрация соляной кислоты составила 1,25%. При исследовании чувствительности лактобацилл к желчи было выявлено, что при любой концентрации желчи наблюдалась стимуляция роста лактобацилл.

Наибольшими концентрациями желчи, стимулирующими рост лактоба-цилл, являлись: 0,625%, 2,5%, 5% и 10%, наименьшими - 1,25% и 20%.

6. Кислотопродуцирующая способность бульонных культур лак-тобацилл колебалась от 2 до 52 °Т в первые сутки, от 14 до 60 °Т в течение вторых суток и к третьим суткам составляла от 28 °Т до 52 °Т; глюкоза, после добавления ее в питательную среду, незначительно стимулировала продукцию молочной кислоты лактобациллами.

7. Селекционированные высокоантагонистические штаммы лак-тобацилл не обладают антагонизмом в отношении исследуемых производственных штаммов пробиотиков, устойчивы к действию соляной кислоты и желчи и обладают высокой степенью кислотообразования, что позволяет отнести их к пробиотическим, производственно перспективным.

Практические рекомендации

1. Обоснована необходимость комплексного изучения биологических свойств и установлены в системе in vitro критерии отбора пробиоти-ческих штаммов рода Lactobacillus, которые могут быть использованы в качестве основы для создания новых бактерийных препаратов.

2. Перспективными являются бактериоциногенные высокоантагонистические штаммы лактобацилл с широким спектром антимикробной активности по отношению к патогенным и условно патогенным микроорганизмам, не оказывающие ингибирующего действия на нормальную микрофлору кишечника и на микроорганизмы, содержащиеся в составе других пробиотиков.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Червинец, Юлия Вячеславовна,

1. Агапова О.В. Ферменты патогенности клинических штаммов Klebsiellapneumoniae /Агапова О.В., Бондаренко В.М., Поликарпов Н.А. и др.// Журн. микробиол. 1999. - № 2. - С. 5-8.

2. Блинкова Л.П. Бактериоцины: критерии, классификация, свойства, методы выявления /Блинкова Л.П.// Журн. микробиол. 2003. - №3. -С.109-113.

3. Блинкова Л.П. Битехнологические условия синтеза бактериоцинов /Блинкова Л.П., Машенцева Н.Г., Хорольский В.В., Горобец О.Б., Дорофеева Е.С.// Журн. микробиол. 2006.-№2.- С. 83-89.

4. Бондаренко В.М. Прикладные аспекты молекулярной биологии бифи-добактерий и лактобацилл /Бондаренко В.М.// Журн. микробиол. -2006.-№2.~ С. 89-97.

5. Бондаренко В.М. Факторы патогенности бактерий и их роль в развитии инфекционного процесса /Бондаренко В.М.// Журн. микробиол. 1999. -№ 5. - С. 34-39.

6. Бондаренко В.М. Дисбиозы и препараты с пробиотической функцией /Бондаренко В.М., Воробьёв А.А.// Журн. микробиол. 2004. - №1.1. С. 84-92.

7. Бондаренко В.М. Дисбактериозы кишечника у взрослых. /Бондаренко В.М., Грачева Н.М., Мацулевич Т.В.// М.: КМК Scientific Press, 2003. -220 с.

8. Бондаренко В.М. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры /Бондаренко В.М., Петровская В.Г.// Вестн. РАМН. 1997. - № 3. - С. 7-10.

9. Бондаренко В.М. Иммуностимулирующее действие лактобактерий, используемых в качестве основы препаратов пробиотиков /Бондаренко

10. B.М., Рубакова Э.И., Лаврова В.А. // Журн. микробиол. -1998. № 5.1. C.107-112.

11. Ю.Бондаренко В.М. Дисбиоз: современные возможности профилактики и лечения /Бондаренко В.М., Учайкин В.Ф., Мурашова А. О. и др.// М., 1995.

12. Бондаренко В.М. Пробиотики и механизмы их лечебного действия /Бондаренко В.М., Чупринина Р.П., Аладышева Ж.И. и др.// Эксперим. клин, гастроэнтерол. 2004. - №3. - С. 83- 87.

13. Брилис В.И. Методика изучения адгезивного процесса /Брилис В.И., Брилене Т.А., Ленцнер Х.П. и др.// Лаб. дело. 1986. - № 4. - С. 210212.

14. Бухарин О.В. Метод определения антилизоцимной активности микроорганизмов /Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Малышкин А.П. и др.// Журн. микробиол.— 1984 -№ 2 С. 27-28.

15. Бухарин О.В. Межбактериальные взаимодействия /Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Хуснутдинова Л.М.// Журн. микробиол. -2003. № 4. -С. 3-8.

16. Вахитов Т.Я. Перспективы создания пробиотических препаратов на основе «чувства кворума» у бактерий /Вахитов Т.Я., Петров Л.Н., Бондаренко В.М., Воробьев A.A.// Журн. микробиол. 2006. - №3. - С. 105113.

17. Воробьев A.A. Дисбактериозы актуальная проблема медицины /Воробьев A.A., Абрамов H.A., Бондаренко В.М., Шендеров Б.А.//' Вестн. РАМН. -1997. - №3. - С.4-7.

18. Воробьев A.A. Мир микробов /Воробьев A.A., Гинцбург А.Л., Бондаренко В.М.//Вестн. РАМН. -2000. -№11. С.11-14.

19. Воробьев A.A. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции /Воробьев A.A., Лыкова Е.А.// Журн. микробиол. -1999.-№6 С. 102-105.

20. Воробьев A.A. Дисбактериозы у детей. /Воробьев A.A., Пак C.T.II1 • Учебное пособие для врачей и студентов. М., 1998. 25 с.

21. Глушакова H.A. Биосовместимость пробиотических и резидентных лактобацилл. ГИУВ, Новокузнецк. Россия /Глушакова H.A., Блинов А.И. // Гастроэнтерол. С.-Петербург. - 2005. - №1 - 22с.

22. Горская Е.М. Протеолитическая активность содержимого толстой кишки в норме и при микроэкологичсеких нарушениях /Горская Е.М., Бон-даренко В.М., Шогенова Ю.Н. и др.// Журн. микробиол. 1995. - №3. -С.116-120.

23. Григорьев П.Я. Профилактика и лечение болезней органов пищеварения /Григорьев П.Я., Яковенко Э.П. // М., 2000. 109 с.

24. Коршунов В.М. Характеристика биологических препаратов и пищевых добавок для функционального питания и коррекции микрофлоры кишечника /Коршунов В.М., Ефимов Б.А., Пикина А.П.// Журн. микробиол. 2000. - №3. - С. 86-91.

25. Коршунов В.М. Диагностика, профилактика и лечение дисбактериозов кишечника /Коршунов В.М., Кафарская Л.И., Ефимов Б.А. и др.// М., МЗ СССР, 1991.-31с.

26. Крылов В.П. Принципы комбинированной терапии кишечного дисбак-териоза /Крылов В.П., Орлов В.Г., Малышева Т.В. и др.// Журн. микробиол. 1998. - №4. - С. 64-67. .

27. Лиходед В.Г. Микробиологическая характеристика дисбактериозов кишечника у детей и взрослых в г. Москве /Лиходед В.Г., Каверина К.Г., Кочурко Л.И. и др.// Журн. микробиол. 1999. - №4. - С.65-67.

28. Лыкова Е.А. Бактериальная эндотоксинемия у детей с дисбактериозом кишечника /Лыкова Е.А., Бондаренко В.М., Воробьёв A.A. и др.// Журн. микробиол. 1999. - №3. - С.67-70.

29. Лыкова Е.А. Коррекция пробиотиками микроэкологических и иммунных нарушений при гастродуоденальной патологии у детей /Лыкова Е.А., Бондаренко В.М., Изачик Ю.А. и др.// Журн. микроэкологии. -1996.-№2.-С. 88-91.

30. Лыкова Е.А. Нарушения микрофлоры кишечника и иммунитета у детей с аллергическими дерматитами и их коррекция /Лыкова Е.А., Мурашова А.О., Бондаренко В.М. и др. // Рос. педиатр, журн. 2000. - №2. -, С,20-24.

31. Никитин В.М. Справочник методов биохимической экспресс-индикации микробов /Никитин В.М.// Кишинев, 1986. -,294с.

32. Парфёнов А.И. Микробная флора кишечника и дисбактериоз /Парфёнов А.И.// Рус. мед. журн. 1998. - №6(18). - С. 1170-1173.

33. Постникова Е.А. Поиск перспективных штаммов бифидобактерий и лактобацилл для разработки новых биопрепаратов /Постникова Е.А., Ефимов Б.А., Володин H.H., Кафарская Л.И.// Журн. микробиол.2004. №2. - С. 64-69.

34. Постникова Е.А. Изучение качественного и количественного состава микрофлоры кишечника у клинически здоровых детей в раннем возрасте /Постникова Е.А., Пикина А.П., Кафарская Л.И., Ефимов Б.А.// Журн. микробиол. 2004. - №1. - С. 62-67.

35. Приказ МЗ РФ №388 "О Государственной стандартизации качества лекарственных средств". M., 1/XI 2001.

36. Тюрин М.В. К механизму антагонистической активности лактобацилл /Тюрин М.В., Шендеров Б.А., Рахимова Н.Г., Поспелова В.В., Лагода И.В.// Журн. микробиол. 1989. - №3. - С. 3-8.

37. Усенко Д.В. Пробиотики и пробиотические продукты: возможности и перспективы применения /Усенко Д.В., Горелов A.B.// Вопросы современной педиатрии. 2004. - том 3. - № 2. - С. 50-54.

38. Хмель И.А. Микроцины пептидные антибиотики энтеробактерий: генетический контроль синтеза, структура, механизм действия /Хмель И.А.// Генетика. - 1999. - № 35(1). - С. 5-16.

39. Хмель И.А. Характеристика энтеробактерий, продуцирующих антибиотики широкого спектра действия микроцины /Хмель И.А., Манохина И.М., Басюк Е.И. и др.// Генетика. 1993. - №29(5). - С.768-776.

40. Червинец В.М. Изменение микробиоценоза при воспалительных и эро-зивно-язвенных поражениях пищевода, желудка и 12-перстной кишки и пути его коррекции /Червинец В.М.// Автореф. дис. докт. мед. наук. Тверь, 2002.-40 с.

41. Черкасов C.B. Роль биологических свойств лактобацилл в процессе колонизации /Черкасов C.B., Забирова Т.М., Сгибнев A.B., Черкасов И.В. // Журн. микробиол. 2003. - № 4. - С. 61-64.

42. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том I: Микрофлора. человека и животных и ее функции /Шендеров Б.А.// М.: Грант, 1998.

43. Шендеров Б.А. Медицинска микробная экология и функциональное питание. Том 3: Пробиотики и функциональное питание /Шендеров Б.А.// М.: Грант, 2001.

44. Щербаков П.Л. Микроэкология желудочно-кишечного тракта /Щербаков П.Л., Иваников И.О., Кудрявцева Л.В., Митрохин С.Д., Филин В.П., Зазьян В.Г.// Росс. мед. журнал. 2001. - № 2. - С.41-43.

45. Altermann Е. Complete genome sequence of the probiotic lactic acid bacterium Lactobacillus acidophilus /Altermann E., Russell W.M., Azcarate-Peril M.A. et al.// NCFM. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005. - № 102(11). -P.3906-12.

46. Atrih A. Detection and characterization of a bacteriocin produced by Lactobacillus plantarum C19 /Atrih A., Reknif N., Milliere J.B. et al.// Can. J. Microbiol. 1993. -№ 39. - P.1173-1179.

47. Baguero F. The microcins /Baguero F., Morreno F.// FEMS Microbiol. Lett. 1984. - № 23(2-3). - P.117-124.

48. Barefoot S.F. Identification and purification of a protein that induces production of the Lactobacillus acidophilus bacteriocin lactacin В /Barefoot S.F., Chen Y.R., Hughes T.A. et al.// Appl. Environ. Microbiol. 1994. -№ 60. - P. 3522-3528.

49. Chang CS. Small intestinal bacterial overgrowth versus antimicrobial capacity in patients with spontaneous bacterial peritonitis /Chang CS., Yang SS., Kao CH, Yeh HZ., Chen GH.// Scand. J.Gastroenterol. 2001 an. - № 36(1).-P. 92-96.

50. Complete genome sequence of Lactobacillus plantarum WCFS1 //Proceedings of Sciences of the United States of America. Microbiology. -2003 February 18. № 100 (4). - P. 1990-1995. wwwme^WCi;S:n 1.

51. Collins M.D. Probiotics, prebiotics, and synbiotics: approaches for modulating the microbial ecology of the gut /Collins M.D., Gibson G.R.// Am. J. Clin. Nutr. 1999. - № 69(5). - P. 1052-1057.

52. Daeschel A.S. Bactericidal activity of Lactobacillus plantarum C-ll /Daeschel A.S., Mackenny M.C. and MacDonald L.C.// Food Microbiol. -1990. -№ 7. P. 91-98.

53. Dai D. Protective nutrients and bacterial colonization in the immature human gut /Dai D., Walker W.A.// Adv. Pediatr. 1999. - № 46. - P.353-382.

54. Drisco JA. Probiotics in health maintenance and disease prevention /Drisco JA, Giles CK, Bischoff BJ.// Altern Med Rev. 2003 May. - № 8(2). -P.143-55.

55. Farrell R.J. Microbial factors in inflammatory bowel disease /Farrell R.J., LaMont J.T.// Gastroenterol. Clin. North. Am.- 2002. №31 (1).- P.41-62.

56. Floch M.H. Probiotics and functional foods in gastrointestinal disorders /Floch M.H., Hong- Curtiss // J. Curr. Gastroenterol. Rep. 2001. - № 3(4). -P. 343-350.

57. Folwaszny C. Probiolics for prevention of uncerative colitis recurrens: alternative medicine added to standard treatment /Folwaszny C. // J. Gastroenterology. 2000.- №38(6).- P. 547-550.

58. Fremaux C. Molecular analysis of lactacin F operon /Fremaux C., Ahn C., Klaenhammer T.R.// Appl. Environ. Microbiol. 1993. - № 59. - P. 39063915.

59. Fricourt B.V. Detection and activity of plantaricin F, an antibacterial substance from Lactobacillus plantarum BF001 isolated from processed channel catfish /Fricourt B.V.,Barefoot S.F.,Testin R.F. et al. // J. Food Prot. 1994. -57. -P.698-702.

60. Fuller R. Probiotics: prospects of use in opportunistic infections /Fuller R.// N.Y., 1995.

61. Garver K.I. Detection, identification and characterization of bacteriocin-producing lactic acid bacteria from retail food products. Inter /Garver K.I. and Muriana P. M. // J. of Food Microb. 1993. - № 19. - P. 241-258.

62. Gibson G.R. Aspects of In Vitro and In Vivo Research Approaches Directed Toward Identifying Probiotics and Prebiotics for Human Use /Gibson G.R., Fuller R.// J. Nutrition. 2000. - №130. - P.391-395.

63. Haskel Y. Liquid enteral diets induce bacterial translocation by increasing cecal flora without changing intestinal motility /Haskel Y., Udassin R., Freund HR., Zhang JM., Hanani M.// JPEN. J. Parenter Enteral Nutr. 2001 Mar-Apr. - № 25(2). - P. 60-4.

64. Hoesl C.E. The probiotic approach: an alternative treatment option in urology Hoesl C.E., Altwein J.E.// Eur. Urol. 2005 Mar. - № 47(3). - P. 28896.

65. Holo H. Microbiol. Plantaricin W from Lactobacillus plantarum belongs to a new family of two-peptide lantibiotics /Holo H., Jeknic Z., Daeschel M. et al.// Microbiol. 2001. - № 147. - P. 643-651.

66. Isolauri E. Probiotics: effects of immunity /Isolauri E., Sutas Y., Kankaan-paa H. et al.// Am. J. Clin. Nutr. 2001. - № 73(2). - P. 444-450.

67. Jack R.W. Bacteriocins of gram-positive bacteria /Jack R.W.,Tagg J.R.,Ray B.// Microbiol. Rev. 1995. - № 59(2). - P. 171-200.

68. Jamuna M. Isolation and characterization Lactobacilli from some traditional fermented foods and evaluation of the bacteriocins /Jamuna M., Jeevaratnam K.// J. Gen. Microbiol. 2004. - № 50(2). - P. 79-90.

69. Jimenez-Diaz R. Plantaricin S and T, two new bacteriocins produced by Lactobacillus plantarum LPCOIO isolated from a green olive fermentation /Jimenez-Diaz R., Rios-Sanchez, Desmazeaud M. et al.// Appl. Environ. Microbiol. 1993. - № 59. - P. 1416-1424.

70. Joerger M.C. Characterization and purification of helveticin J and evidence for chromosomally determined bactcriocin produced by Lactobacillus helveticus 481 /Joerger M.C. and Klaenhammer T.R.// J. Bacteriol. 1986. -№ 167. - P. 439-446.

71. Kaiser A.L. The influence of pH and growth rate on production of the bacte-riocin, bavaricin MN, in batch and continuous fermentations /Kaiser A.L., Montville T.J. // J. Appl. Bacteriol. 1993. - № 75. - P. 536-540.

72. Katsunori K. Analysis of Fecal Populations of Bifidobacteria and Lactobacilli and Investigation of the Immunological Responses of Their Human Hosts to the Predominant Strains /Katsunori K., McCartney A.L., McConell

73. M.A., Tannock G.W.// Appl. Environment. Microbiol. 1997 Sept. - №60. -P. 3394-3398.

74. Kennedy R.J. Probiotic therapy fails to improve gut permeability in a hapten model of colitis /Kennedy R.J., Hoper M., Dejodhar K., Kirk S.J., Gardiner KR.// Scand J. Gastroenterol. 2000 Dec. - № 35(12). - P. 1266-71.

75. Kitler M.E. Lactiol and Lactulose. An in vivo and in vitro comparison of their effects on human intestinal flora /Kitler M.E., Luginbughl M., Lang O. et al.// Drug invest. 1992. - № 4(1). - P. 73-82.

76. Klaenhammer T.R. Genetics of bacteriocins produced by lactic acid bacteria /Klaenhammer T.R.// FEMS. Microbiol. Rew. 1993. - № 12. - P. 39-86.

77. Leal-Sanchez M.V. Optimization of bacteriocin production by batch fermentation of Lactobacillus plantarum LPCOIO /Leal-Sanchez M.V., Jimenez-Diaz R., Maldonado-Barragan A. et al.// Appl. Environ. Microbiol. 2002. - № 68(9).- P. 4465-4471.

78. Lebenthal E. Probiotics: an important therapeutic concept awaiting validation /Lebentlial E., Lebenthal Y.// IMAJ. 2002. - № 4. - P. 374-375.

79. Lidbeck A. Lactobacilli and the normal human intestinal microflora /Lidbeck A., Nord C.E.// Clin. Infect. Dis. 1993. - № 1:16(4). - P. 181187.

80. Liu C. Effects of nutrient supplements on simultaneous fermentation of nisin and lactic acid from cull potatoes /Liu C., Liu Y., Chen S.// Appl. Biochem. Biotechnol. 2005. - № 124. - P. 475-83.

81. Loguercio C. Beneficial effects of a probiotic VSL#3 on parameters of liver dysfunction in chronic liver diseases /Loguercio C., Federico A., Tuccillo

82. C., Terracciano F., Dvauria MV., De Simone C., Blanco CD.// J. Clin. Gastroenterol. 2005 Jul. - № 39(6). - P. 540-543.

83. Lozo J. Characterization and antimicrobial activity of bacteriocin 217 produced by natural isolate Lactobacillus paracasei BGBUK2-16 /Lozo J., Vu-kasinovic M., Strahinic I. et al.// J. Food Prot. 2004. - № 67(12). - P. 2727-2734.

84. McCartney A.L. Molecular Analysis of the Composition of the Bifidobacteria! and Lactobacillus Microflora of Humans /McCartney A.L., Wenzhi W., Tannock G.W.// Appl. Environment. Microbiol. 1996. - № 62. - P. 46084613.

85. Mc. Naught C.E. A prospective randomized trial of probiotics in critically ill patients /Mc. Naught C.E., Woodcock N.P., Anderson A.D., MacFie// J. Clin. Nutr. 2005 Apr. - № 24(2). - P. 211-9.

86. Muriana P.M. Conjugal transfer of plasmid-encoded determinants for bacteriocin production and immunity of Lactobacillus acidophillus 88 /Muriana P.M., Klaenhammer T.R.// Appl. Environ. Microbiol. 1987. - № 53. - P. 553-560.

87. Naylor G. Role of bacterial overgrowth in the stomach as an additional risk factor for gastritis /Naylor G, Axon A.// Can. J. Gastroenterol. 2003 Jun. - № 17. - P. 13-17.

88. Biochemical and genetic characteristics of bacteriocins of food-associated lactic acid bacteria /Nettles C.G. and Barefoot S.F. // J. Food Prot.- 1993. № 56. - P. 338-358.

89. Okerke A. Bacteriocin inhibition of Clostridium botulinum spores by lactic acid bacteria /Okerke A., Montville T. // J. Food Prot. 1991. - № 54.- P. 349-353.

90. Perdigon G. Lactic acid bacteria and their effect on the immune system /Perdigon G., Fuller R., Raya R. // Curr. Issues Intest. Microbiol. 2001. -№ 2(1). - P. 27-42.

91. Piard J.C. Inhibiting factors produced by lactic acid bacteria. Bactericins and other antibacterial substances /Piard J.C. and Desmazeaud M. // Lait. -1992. -№ 72.-P. 113-142.

92. Reid G. Probiotics for urogenital health /Reid G.// Nutr. Clin. Care. -2002.-№5(1).- P. 3-8.

93. Rolfe RD. The role of probiotic cultures in the control of gastrointestinal health /Rolfe RD. // J. Nutr. 2000 Feb. - № 130(2). - P. 396-402.

94. Ruiz-Barba J.L. Plasmid profile and curring of plasmids in Lactobacillus plantarum trains isolated from green olive fermentations /Ruiz-Barba J.L., Piard J C. and Jimenez-Diaz KM J.' Appl. Bacteriol. 1991. - № 71. - P. 417-421.

95. Sablon E. Antimicrobial peptides of lactic acid bacteria: mode of action, genetics and biosynthesis /Sablon E., Contreras B., Vandamme E.// Adv. Biochem. Engin. Biotechnol. 2000. - № 68. - P. 21-60.

96. Salminen S. Lactulose, lactic acid bacteria, intestinal microecology and . mucosal protection. Scand /Salminen S., Salminen E.// J. Gastroenterol. -1997. -№ 222. P. 45-48.

97. Salminen S. Gut flora in normal and disordered states /Salminen S., Iso-lauri E., Onnela T. // Chemotherapy. 1995. - № 41(1). - P. 5-15.

98. Sartor R.B. Probiotic therapy of intestinal inflammation and infections /Sartor R.B. // Curr. Opion Gastroenterol. 2005 Jan. - № 21(1). - P. 44-50.

99. Scardovi V. IX Bergeys Manual of Systematic Bacteriology /Scardovi V. // Baltimore. 1986. - № 2. - P. 1418-1434.

100. Singh VV. Small bowel bacterial overgrowth: presentation, diagnosis, and treatment /Singh VV, Toskes PP.// Curr. Gastroenterol Rep. 2003 Oct. - № 5(5). - P. 365-72.

101. Strus M. The range of antagonistic effects of Lactobacillus bacterial strains on etiologic agents of bacterial vaginosis /Strus M., Malinowska M.// Med. Dosw. Microbiol. 1999. - № 51(1-2). - P. 47-57.

102. Tagg J.R. Bacteriocins of Gram-positive bacteria /Tagg J.R., Dajani A.S. and Wannamaker N.W. // Bact. Rev. 1976. - № 40. - P. 722-756.

103. Tannock G.W. Probiotics /Tannock G.W.// A critical review. Horizon Sci. Press, Norfolk, England, 1999.

104. Vanderhoof J.A. Lactobacillus GG in the prevention of antibiotic-associated diarrhea in children /Vanderhoof J.A., Whitney D.B., Antonson D.L. et al.// J. Pediatr. 1999. - № 135(5). - P. 535-537.

105. Van der Waaij D. Evidence of immunoregulation of the composition of intestinal microflora and its practical on sequences /Van der Waaij D.// Eur. J. Clin. Microbiol. 1988. - № 7(1). - P. 101-106.

106. West CA. Plantaricin B, a bacteriocin produced by Lactobacillus plan-tarum NCDO 1193 /West CA., Warner P.J.// FEMS Microbiol. Lett. 1988. -№ 49. - P. 163-165.