Выделение и идентификация местных штаммов молочнокислых микроорганизмов и их использование в качестве пробиотиков

Рамонова, Элла Викторовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Выделение и идентификация местных штаммов молочнокислых микроорганизмов и их использование в качестве пробиотиков
ВАК РФ 03.02.14, Биологические ресурсы

Автореферат диссертации по теме "Выделение и идентификация местных штаммов молочнокислых микроорганизмов и их использование в качестве пробиотиков"

На правах рукописи

005001925

Рамонова Элла Викторовна

ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ МЕСТНЫХ

ШТАММОВ МОЛОЧНОКИСЛЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В КАЧЕСТВЕ ПРОБИОТИКОВ

Специальность 03.02.14 - биологические ресурсы

2 4 НОЯ 2011

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Владикавказ - 2011

005001925

Диссертационная работа выполнена на кафедре биологической и химической технологии ФГБОУ ВПО «Горский государственный аграрный университет»

Научный руководитель: заслуженный деятель науки РФ и РСО-Алания, доктор сельскохозяйственных наук, профессор Цугкиев Борис Георгиевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Биттиров Анатолий Мурашевич

доктор биологических наук, профессор Градова Нина Борисовна

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Кабардино-Балкарский государственный университет им. Х.М. Бербекова».

Защита диссертации состоится « » декабря 2011 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д.220.023.04 при ФГБОУ ВПО «Горский государственный аграрный университет» по адресу: 362040, РСО-Алания, г.Владикавказ, ул.Кирова, 37, факультет биотехнологии, зал заседаний диссертационного совета.

Тел./факс (8-8672) -53-99-26

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Горский государственный аграрный университет», с авторефератом на официальном сайте www.gorskigau.ru

Текст объявления о защите диссертации и автореферат диссертации отправлены в Минобрнауки РФ по адресу: referat_vak@mon.gov.ru «^» ноября 2011 г.

Автореферат диссертации разослан « Й » ноября 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д.220.023.04, к.б.н, доцент

Гревцова С.А.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Проблемы производства и потребления молока и молочных продуктов приобретают все большую актуальность и с нарастающей степенью входят в зависимость от общих тенденций развития мирового рынка продовольствия.

В последнее время возрос интерес к изучению молочнокислых бактерий. В большей степени это связано с развитием молочной промышленности в мире вообще и в России в частности и, как следствие этого, с производством новых кисломолочных продуктов, а также с поиском новых штаммов молочнокислых бактерий, пригодных для использования в составе заквасок.

Молочные продукты являются важнейшим компонентом в рационе питания человека. На их долю приходится до 20% удовлетворения потребности человека в белке и до 30% - в жире.

Молочнокислые бактерии выделяют из различных источников: самоквасных кисломолочных продуктов, частей растений, в частности цветов, а также с поверхности ягод, овощей и фруктов. Однако штаммы молочнокислых бактерий, выделенные из природных источников, отличаются по стабильности проявляемых свойств. Ценными считаются штаммы, длительно сохраняющие биохимическую активность, зависящую не только от внешних факторов (состава питательной среды, в частности молока, температуры и т.д.), но и от соотношения между биохимически активными и неактивными клетками в популяциях микроорганизмов, что определяет жизнеспособность культуры, ее практическую ценность.

Актуальным является эффективное проведение всех этапов выделения и идентификации штаммов молочнокислых микроорганизмов с последующим использованием их в составе заквасок для производства кисломолочной продукции.

Цель и задачи исследований. Целью диссертационной работы явилось выделение чистых культур молочнокислых бактерий из различных природных субстратов, установление их видовой принадлежности, изучение биологических особенностей и важнейших производственно-ценных свойств, а также определение эффективности их использования в качестве пробиотиков в кормлении молодняка свиней и цыплят-бройлеров. В задачи исследований входило:

- выделение чистых культур молочнокислых бактерий из различных природных источников;

- идентификация выделенных штаммов молочнокислых бактерий;

- депонирование идентифицированных штаммов в ВКПМ с присвоением им коллекционных номеров;

- апробация чистых культур изучаемых штаммов разных видов молочнокислых бактерий в составе заквасок для производства кисломолочных продуктов;

- апробация чистых культур изучаемых штаммов разных видов молочнокислых бактерий в качестве пробиотиков на молодняке свиней и цыплятах-бройлерах;

- расчет экономической эффективности практического использования местных штаммов молочнокислых бактерий.

Научная новизна работы заключается в том, что впервые, в условиях РСО-Алания, выделены, изучены биологические, технологические свойства, идентифицированы, депонированы во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) и апробированы на поросятах и цыплятах-бройлерах штаммы Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089, Enterococcus hirae ВКПМ В-10090, Lactobacillus paracasei ВКПМ В-10092, Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132, Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10133.

Практическая значимость работы состоит в том, что активные в технологическом отношении штаммы выделенных и идентифицированных видов лактобактерий Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089, Enterococcus hirae ВКПМ В-10090, Lactobacillus paracasei ВКПМ В-10092, Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132 и Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10133 могут использоваться в составе заквасок для различных отраслей пищевой промышленности, а также в животноводстве и птицеводстве.

Установлена экономическая эффективность использования молочнокислых микроорганизмов, как пробиотиков, в кормлении молодняка свиней и цыплят-бройлеров.

Основные научные положения диссертации, выносимые на защиту: - результаты идентификации наиболее технологически активных и стабильных производственно-ценных штаммов лактобактерий, выделенных из различных природных источников в РСО-Алания;

- показатели морфологических, тинкториальных, культуральных и физиолого-биохимических свойств выделенных штаммов молочнокислых микроорганизмов;

- результаты использования культур местных штаммов молочнокислых бактерий, депонированных в ВКПМ, при разработке технологий новых кисломолочных продуктов;

- результаты использования депонированных в ВКПМ штаммов молочнокислых бактерий в качестве пробиотиков при выращивании поросят и цыплят-бройлеров;

показатели экономической эффективности использования молочнокислых микроорганизмов в рационах молодняка свиней и цыплят-бройлеров.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены: на ежегодных научно-практических конференциях ФГБОУ ВПО «Горский государственных аграрный университет» (2006-2011 г.г.); Международной научно-практической конференции «Рациональное использование биоресурсов в АПК» (Владикавказ, 2008); Региональной научно-практической конференции «Аграрная наука производству» (Владикавказ, 2009); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы производства и переработки продукции животноводства (Ставрополь, 2010); Всероссийской научно-производственной конференции

«Новые направления в решении проблем АПК на основе современных ресурсосберегающих инновационных технологий» (Владикавказ, 2010); Международной конференции с элементами научной школы для молодежи «Новые технологии переработки сельскохозяйственного сырья в производстве продуктов общественного питания» (Владивосток, 2010); П-Международной научно-практической конференции «Молодые ученые в решении актуальных проблем науки» (Владикавказ, 2011); Международной научно-технической конференции «Современные достижения биотехнологии» (Ставрополь, 2011); Н-Международной научно-практической конференции «Актуальные достижения европейской науки» (София, 2011).

Материалы диссертационных исследований вошли в конкурсную научную работу «Практические аспекты использования промышленных микроорганизмов в развитии агропромышленного комплекса», которая удостоена Диплома лауреата премии Главы Республики Северная Осетия-Алания в области науки и техники для молодых ученых и специалистов в 2010 году, а также в конкурсную работу «Выделение и идентификация технологически перспективных штаммов промышленных видов микроорганизмов с последующим депонированием в ВКПМ и практические аспекты их использования в развитии агропромышленного комплекса», которая представлена на соискание премии Президента Российской Федерации в области науки и инноваций для молодых ученых за 2010 год.

Публикации результатов исследований. По результатам диссертационной работы опубликованы 18 научных работ, в том числе 5 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, получены 3 положительных решения на выдачу патентов на изобретения.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из 9 разделов и включает в себя: введение, обзор литературы, материал и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, предложения производству, библиографический список, приложения. Работа изложена на 190 страницах машинописного текста и содержит 47 таблиц, 6 рисунков, 16 диаграмм и 3 приложения. Библиографический список включает 242 наименования, в том числе 92 зарубежных источника.

2. ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Во введении обоснована актуальность выделения и идентификации штаммов молочнокислых микроорганизмов из различных природных источников, сформулированы научная новизна, практическая значимость и основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ В обзоре научной литературы приведена характеристика молочнокислых бактерий. Рассмотрены такие важнейшие производственно-ценные свойства лактобактерий как протеолитическая и липолитическая активность и ингибирующие свойства. Установлена эффективность использования технологически активных штаммов молочнокислых бактерий, в составе бактериальных заквасок.

Глава 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материал и методика исследований

Материалом для выделения чистых культур молочнокислых бактерий послужили пробы, отобранные из различных природных источников: силоса, квашеных овощей и различных частей растений, фекалий животных. В качестве питательной среды для первичного выделения штаммов молочнокислых бактерий использовали реализуемое в торговой сети молоко 0,5% жирности «Кубанская Буренка», разлитое в пробирки с ватными пробками по 10 мл и автоклавированное при 0,5 атм. в течение 40мин.

Направление исследований по теме диссертации представлено на рисунке 1.

В качестве пробиотиков в опытах на поросятах и цыплятах - бройлерах

Практическое использование молочнокислых бактерий

Депонирование идентифицированных штаммов лактобактерий в ВКПМ ФГУП ГосНИИ

генетика

При разработке технологий новых кисломолочных продуктов

Рис.1. Направление исследований

В молоке, используемом, для выделения культур лактобактерий и установления их технологических свойств определяли следующие показатели: сухое вещество - по ГОСТ 3626-73; массовая доля жира - по ГОСТ 5867-90; кислотность - по ГОСТ 3624-92; плотность - по ГОСТ 3625-84; степень чистоты - по ГОСТ 8218-89; микробиологические показатели - по ГОСТ 9225-84.

В сквашенном культурами изучаемых штаммов лактобактерий молоке определяли: органолептические показатели - по ГОСТ Р 51331-99; кислотность

- по ГОСТ 3624-92; микробное число - методом серийных разведений и по ГОСТ 10444.11; антибиотическую активность - методом диффузии в агар.

Определение видовой принадлежности выделенных местных штаммов молочнокислых микроорганизмов проводили по Л.А Банниковой (1975) и были изучены следующие показатели: морфологические, тинкториальные, культуральные и физиолого-биохимические свойства, в том числе: рост в молоке при различных температурах; устойчивость к поваренной соли; устойчивость к желчи; рост в мясо-пептонном бульоне; устойчивость к фенолу; терморезистентность; устойчивость к метиленовому голубому; активность кислотообразования; предел кислотообразования; способность сбраживать углеводы и спирты.

С целью изучения эффективности применения местных штаммов молочнокислых микроорганизмов в качестве пробиотиков при выращивании молодняка свиней, был проведен научно-хозяйственньш опыт на экспериментальной базе НИИ биотехнологии ФГБОУ ВПО "Горский государственный аграрный университет".

Для проведения научно-хозяйственного опыта по принципу пар-аналогов были сформированы 3 группы поросят в возрасте 2 месяцев: 1 - контрольная и 2 — опытные по 10 голов в каждой. Продолжительность опыта 6 месяцев. Схема опыта приведена в таблице 1.

Таблица 1. Схема научно-хозяйственного опыта

Группы поросят Количество голов Характеристика рациона

Контрольная 10 Основной рацион (ОР) + 0,5 л обезжиренного молока

1-опытная 10 ОР + 0,5л обезжиренного молока, сквашенного культурами Enterococcus hirae ВКПМ В-10090, Lactobacillus paracasei ВКПМ В-10092, Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10133

2-опытная 10 ОР + 0,5л обезжиренного молока, сквашенного культурами Streptococcus thennophilus ВКПМ В-10089, Lactobacillus paracasei ВКПМ В-10092, Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132

Условия содержания и кормления поросят были одинаковыми. Разница состояла только во включении в рационы кормления для поросят опытных групп обезжиренного молока, сквашенного разными культурами молочнокислых микроорганизмов.

В ходе проведения опыта были изучены следующие показатели:

> динамика живой массы путем ежемесячного индивидуального взвешивания (утром перед кормлением);

> промеры тела;

> морфологические и биохимические показатели крови (A.M. Смирнов, Г.Л. Дугин и др., 1978): количество эритроцитов и лейкоцитов подсчетом в счетной камере Горяева; гемоглобин по методу Сали; кислотная емкость -по Неводову; каротин - по В.Ф. Коромыслову и Л.А. Кудрявцевой; общий кальций - по Вичеву и Каракашову; неорганический фосфор - по Аммону

и Гинсбергу в модификации С.А. Ивановского; общий белок -рефрактометрическим методом.

С целью установления эффективности использования чистых культур лактобактерий местной селекции - Streptococcus thermophilic ВКПМ В-10089, штамм и Lactobacillus paracasei ВКПМ В-10092, а также Lactobacillus acidophilum ВКПМ В-842 из ВКПМ, нами был проведён научно-хозяйственный опыт на птицефабрике «Михайловская» РСО-Алания на цыплятах-бройлерах линии «Степняк» по схеме, представленной в таблице 2.

Таблица 2. Схема проведения опыта

п=100

Группы Состав рациона

Контрольная Основной рацион (ОР) + 10% молока обезжиренного

1 -опытная ОР +10% молока, сквашенного Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089

2-опытная ОР +10% молока, сквашенного Lactobacillus paracasei ВКПМ В-10092

3 -опытная ОР +10% молока, сквашенного Lactobacillus acidophilum ВКПМ В-842

Для проведения научно-хозяйственного эксперимента были отобраны 400 суточных цыплят, из которых по методу аналогов, с учётом биоконтроля инкубации, сформировали 4 группы: 1 контрольная и 3 опытных. При отборе цыплята всех групп были подвижными, крепко стоящими на ногах, пропорционально развитыми, с хорошей пуповиной. Основной рацион (ОР) был сбалансирован по всем питательным веществам в соответствии с нормами ВНИТИП (2000 г.).

Условия содержания для всех групп были одинаковые: типовые птичники, оборудование БКМ, цепная раздача корма. Продолжительность проведения научно-хозяйственного эксперимента составила 56 дней.

Экспериментальные данные, полученные в ходе исследований, были обработаны методом вариационной статистики по Стьюденту (Е.К. Меркурьева, 1970).

Научные исследования были завершены расчетом экономической эффективности применения в составе рационов животных молока, сквашенного ассоциациями культур лактобактерий.

Результаты проведенных нами идентификационных исследований были подтверждены Всероссийской коллекцией промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика выполнением анализа 168 РНК.

2.2. Результаты собственных исследований 2.2.1. Результаты селекции местных штаммов молочнокислых бактерий. Путем многократных пересевов нами были получены 43 чистых культур местных штаммов лактобактерий. выделенных из 20 природных источников: 37 от растений, 6 из фекалий поросят и телят.

Из 43 выделенных штаммов микроорганизмов, сквашиваемых молоко, 31 представляли собой бактерии кокковидной формы, а 12 - бактерии палочковидной формы.

С целью установления стабильности технологических свойств с использованием каждой культуры готовили закваску для приготовления кисломолочного продукта в 10-кратной повторности, что позволило нам

отобрать для дальнейших исследований 8 культур под номерами: З37, К45> Бк37, Оз7, Из:, Г37, О45, Л37, с которыми проводились идентификационные исследования.

Все отобранные штаммы были выделены из образцов растений: квашеная капуста, гвоздика песчаная, квашеный батат, мальва приземистая, квашеный огурец, рассол капусты, люцерна.

2.2.2. Идентификация молочнокислых бактерий. Каждый новый штамм микроорганизмов должен быть охарактеризован для получения полного набора данных о свойствах чистой культуры данного микроорганизма.

Для идентификации молочнокислых бактерий наиболее широкое распространение получил метод, основанный на изучении морфологических, культуральных и физиолого-биохимических свойств культур.

2.2.2.1. Культуральные свойства изучаемых штаммов. Культуральные признаки микроорганизмов определяются характером их роста на питательных средах. Они являются важными диагностическими признаками, так как постоянны для каждого вида бактерий.

Полученные результаты при изучении культуральных свойств отобранных штаммов микроорганизмов показали, что размер колоний молочнокислых бактерий мелкий, реже точечный и средний, форма круглая, характер контура края - ровный, рельеф - плоский у штаммов З37_ К45; выпуклый - Бк37 , О37 , 045, а также встречается плосковыпуклый рельеф -штаммы И37, Г37, Л37; поверхность - гладкая, блестящая; цвет - белый у штаммов - З37, Б«з7, О37, К45, Л37, сероватый отмечен у штаммов- И37,Г37 и бесцветный у штамма - 045; структура - однородная, за исключением штамма К45 - зернистая; консистенция пастообразная у штаммов - Бк37, Л37, К45; мазеобразная у- 037 и 045.

При изучении характера роста лактобактерий, как на плотной, так и в жидких питательных средах мы наблюдали равномерный рост, что указывает на то, что изучаемые штаммы микроорганизмов - факультативные анаэробы.

2.2.2.2. Морфологические свойства изучаемых штаммов. По данным микроскопии из отобранных штаммов микроорганизмов 2 культуры (Бк37, К45) имеют шарообразную форму клеток, остальные штаммы (З37, 037, И37, Г37, Л37, 045) относятся к палочковидным бактериям. Все испытуемые микроорганизмы грамположительные, неподвижные, наличие спор ни у одного из штаммов обнаружено не было.

При определении размеров клеток изучаемых штаммов лактобактерий установлено, что диаметр клеток кокков колеблется от 0,8 до 1,0мкм, а размеры палочек колебались в пределах 0,6-1,1 X 2,7-6,0мкм.

2.2.2.3. Физиоло1"о-биохимические свойства изучаемых штаммов микроорганизмов. По условиям культивирования и составу среды можно определить отличительные признаки микроорганизма, используемые в таксономии, экологическую нишу, выяснить возможность его использования для решения практических задач; управление ростом культур лежит в основе биотехнологических процессов. Все это подчеркивает важность изучения характера роста и питательных потребностей бактериальных культур.

Результаты исследования приведены в таблицах 3 и 4. Таблица 3. Идентификационные показатели шаровидных форм изучаемых _лактобактерий_ ■__

Показатели Штамм

БК37 К45

Окраска по Граму + +

Рост в молоке при температуре:

40°С + +

45°С + +

Рост в мясопептонном бульоне, при рН 9,2 +

9,6 + -

Рост в гидролизованном молоке, содержащем ЫаС1, % 2 + +

4 +

6,5 + -

Рост в гидролизованном молоке, содержащем желчь, % 20 + ' +

30 + -

40 + -

Рост в молоке, содержащем метиленовый голубой, % 0,01 + +

0,1 + -

Образование МНз из аргинина + -

Нагревание в течение 30 мин при температуре, °С 55 + +

60 + +

Скорость свертывания молока, ч 9 6

Предел кислотообразования, °Т 201 120

Сбраживание углеводов и спиртов

глюкоза + +

галактоза + +

лактоза + +

сахароза - +

мальтоза + -

маннит - -

арабиноза - +

ксилоза - +

раффиноза сорбит -

глицерин - -

декстрин +

крахмал - +

Обозначения: + положительный результат; - отрицательный результат.

Изучение морфологических, культуральных и физиолого-биохимических свойств позволило установить видовую принадлежность изучаемых штаммов лактобактерий. Штаммы О37 и JI37 идентифицированы как Lactobacillus plantarem; штамм З37 идентифицирован как Lactobacillus paracasei; штаммы И37 и Г37 отнесены к виду Lactobacillus gallinarum; другие штаммы отнесены к видам: 045 - Lactobacillus acidophilus; К45 - Streptococcus thermophilus; Бк37 -Enterococcus hirae.

Таблица 4. Идентификационные показатели палочковидных форм изучаемых _лактобактерий_

Штамм

3,7 037 И,7 IV Л,, о15

Окраска по Граму + + + + + +

Рост в молоке при температуре;

И'С + + - - - -

45°С - + . + + ■ +

48»С - - + + + -

Рост в гидролизовакном молоке, содержащем ЫаС1, %

2 + + + + +

4 + + + + + -

6 + + - - - -

Рост в гидролизованном молоке, содержащем желчь, %

20 + + + + + +

40 - . + - - - +

Рост в мясопептонном бульоне, при рН 8,3 + + + + + +

Рост в молоке с 0,4% фенола + - + + - +

Образование КН, из аргинина - - - -

Нагревание при температуре, "С

60 °С в течение 90 мин + - + + + -

65 °С в течение 30 мин + - + + + -

Скорость свертывания молока, ч 9 9 6 6 9 9

Предел кислотообразования, °Т 343 305 357 337 359 200

Сбраживание углеводов и спиртов

арабиноза - + - - - -

глюкоза + + + + + +

лактоза + + + + + +

сахароза + + - - + +

мальтоза + + + + + +

раффиноза - - - + -

маннит + + - - + -

Обозначения: + положительный результат; - отрицательный результат.

Следующим этапом диссертационного исследования явилось определение технологических свойств изучаемых штаммов микроорганизмов.

2.2.3. Результаты исследования исходного молока и молока, сквашенного культурами местных штаммов лактобактерий Органолептические, физико-химические, микробиологические и другие свойства кисломолочных продуктов зависят от видового состава заквасок, соотношения, активности, биохимических, технологических и других свойств отдельных культур, входящих в состав заквасок. Интенсивность развития общей микрофлоры продукта зависит от качества сырья, температуры и продолжительности пастеризации, сквашивания, созревания и охлаждения продукта.

В ходе исследований установлено, что по органолептическим показателям, как исходное молоко, так и сквашенное молоко соответствуют требованиям, предъявляемым к данному виду продукции.

При физико-химическом анализе исходного и сквашенного молока нами были определены следующие показатели качества:

- в свежем молоке: содержание жира, кислотность, плотность, содержание сухого вещества;

- в сквашенном молоке: содержание жира и сухого вещества, кислотность через каждый час, скорость сквашивания молока, показатель предельной кислотности.

Интенсификация процесса сквашивания молока при производстве кисломолочных продуктов, ускорение созревания и улучшение качества молочных продуктов могут быть достигнуты лишь при использовании в производстве штаммов молочнокислых бактерий с повышенной биохимической активностью.

В нашем эксперименте необходимо было установить время, в течение которого испытуемые культуры молочнокислых бактерий сквашивают молоко, т.к. известно, что высокая активность кислотообразования позволяет повысить производительность труда за единицу времени.

Результаты, полученные нами при определении скорости сквашивания молока культурами изучаемых штаммов лактобактерий приведены в таблице 5.

Таблица 5. Скорость сквашивания молока

п=10

Обозначение штамма Температура сквашивания молока, "С Скорость сквашивания молока (образования сгустка), час.

3,7 37 9±0,1Г

БК37 37 9±0,14

о„ 37 9±0,10

■■ Из, 37 6±0,08

Г„ ' 37 б±0,09

Л„ 37 9±0,11

^45 45 6±0,09

о„ 45 9±0,10

Анализ данных таблицы 5 показал, что из штаммов шаровидной формы наибольшей активностью кислотообразования обладают штамм К45 (Streptococcus thermophilus) , а из штаммов палочковидной формы - Г37 (Lactobacillus gallinarum) и И37 (Lactobacillus gallinarum), свертывающие молоко в течение б часов, что послужило предпосылкой для их более глубокого изучения.

Результаты, полученные нами при определении скорости образования сгустка и почасового повышения кислотности приведены в таблице 6.

Таблица 6. Скорость образования сгустка и почасовое накопление _ : • молочной кислоты __

№ штамма . Продолжительность инкубирования, час.

1 1 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | .10

Показатели кислотности "т

З37 26±0,71 26±0,41 30±0,71 32±0,00 34±0,71 36±0,82 37±0,71 40±0,71 68±0,82* -

БК37 25±1,08 26±0,82 28±0,71 31 ±0,71 34±0,41 37±0,71 39±0,00 42±0,82 91±0,82* -

Оз, 27±0,71 28±0,41 29±1,08 30±1,23 32±0,71 35±1,08 39±0,82 42±0,71 77±0,82* -

■ Из, ^ 25±0,82 29±1,48 35±1,08 43±0,00 65±0,71 84±1,48* - - - -

261,08 27±0,41 29±0,71 44±1,08 50±1,48 76±1,23* - - - -

Л„ 23±0,71 25±1,08 27±0,00 3341.08 35±1,08 39±0,82 40±1,42 44±1,48 96±1,42* -

К45 20±0,41 23±0,00 2б±0,41 29±1,48. 4б±1,48 70±2,17* . - . - - -

О45 23±0,00 24±1.08 2б±1,08 28±0,82 31 ±0,41 35±1,23 38±1,08 39±2,28 71±1,48* -

Примечание: * молоко свернулось (образовался сгусток)

Из анализа данных таблицы 6 следует, что в среднем кислотность сквашиваемого молока каждый час возрастала на 8,4°Т. Необходимо отметить, что кислотность молока, сквашиваемого штаммами шаровидной формы, каждый час возрастала в среднем на 9,1°Т, а штаммами палочковидной формы - на 8,2°Т.

Определение предельной кислотности в сквашенном молоке имеет важное технологическое значение. Это связано с тем, что от данного показателя зависят качество и условия хранения готового продукта.

Таблица 7. Определение предельной кислотности сквашиваемого _ молока,°Т __ •

№ штамма Продолжительность инкубирования, дни

2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | S

Показатели кислотности, °Т

3,7 102±0,71 140±1,48 252±1,64 312±1,88 343±1,42*

Б„17 101±0,82 132±1,08 187±1,48 201 ±0,41*

0,7 166±1,23 160±0,00 305±1,78*

И37 238±1,48 317±1,42 357±1,08*

Г,7 260±1 ,48 328±0,41 337±0,71»

Л37 134±0,00 235±1,48 290±0,82 310±1,42 323±1,48 359±0,82* -

К45 96±1,48 103±0,41 1[0±0,41 120±0,00* -

О« 110±0,82 120±1,48 137±0,00 160±1,08 200±0,82*

Примечание: 4 дальнейшее повышение кислотности не происходит

Установлено (табл.7), что по предельной' кислотообразующей способности изучаемые штаммы лактобактерий существенно разнятся при колебаниях данного показателя от 120 до 359°Т.

Таблица 8. Технологические свойства исследуемых штаммов

лактобактерий

№ штамма Скорость сквашивания молока, ч Кислотность сквашиваемого молока в момент свертывания, °Т Продолжительность нарастания кислотности в молоке, сутки Предельная кислотность,°Т

3,7 9 68 " . 6 343 .

Бк37 9 91 5 201

0,7 9 77 4 305 •

И,7 б 84 4 357

Г,7 б . 76 '4 ■ 337

Л37 9 96 " 7 359

К45 6 70 5 120 ■

045 9 71 6 200

Из анализа данных, приведенных в таблице 8 следует, что скорость сквашивания молока колеблется от 6 до 9 часов при кислотности 68 96°Т. Предельная минимальная кислотность отмечена у культуры штамма К45 (Streptococcus thermophilus) 120°Т, а максимальная - у культуры штамма Л37 (Lactobacillus gallinarum) - 359°Т.

2.2.4. Микробиологические показатели образцов молока, сквашенных культурами местных штаммов лактобактерий Количество микроорганизмов в 1 мл продукта определяли методом серийных разведений.

Установлено, что во всех образцах молока, сквашенного культурами местных штаммов лактобактерий, микробное число является достаточно высоким и находится в пределах 109 - 101 КОЕ, что позволяет считать молоко, взятое нами в качестве питательной среды, благоприятной средой для роста культур лактобактерий.

На основании проведенных исследований и полученных результатов наиболее перспективные изученные нами местные штаммы лактобактерий были отправлены во Всероссийскую коллекцию промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ГосНИИгенетика для подтверждения идентификации проведением анализа 16S РНК, в результате чего видовая принадлежность штаммов была подтверждена с присвоением им коллекционных номеров: штамм К45 - Streptococcus thermophilus - ВКПМ В-10089; штамм Бк37 - Enterococcus hirae - ВКПМ В-10090; штамм З37 -Lactobacillus paracasei - ВКПМ В-10092; штамм Г37 - Lactobacillus gallinarum -. ВКПМ В-10132; штамм HJ7 - Lactobacillus gallinarum - ВКПМ В-10133.

Одним из основных микробиологических показателей, по данным которого можно судить о лечебно-профилактических свойствах пробиотических препаратов, является изучение чувствительности патогенного или условно-патогенного микроба к ним. В связи с этим, целесообразным явилось изучение антагонистической активности молочнокислых бактерий местной селекции: Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089, Enterococcus hirae ВКПМ В-10090, Lactobacillus paracasei ВКПМ В-10092, Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132 и Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10133 по отношению к представителям патогенной и условно-патогенной микрофлоры: Moraxella catarrhalis, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Staphylococcus saprophiticus и Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus и Escherichia coli.

Таблица 9. Антагонистическая активность штаммов лактобактерий по

отношению к патогенным и условно патогенным - микроорганизмам

Зона стерильности, мм

Исследуемые штаммы Тест-микроб

лактобактерий Moraxella catarThalis Ps. aeruginosa Pr. vulgaris Staph, saprophiticus Staph, epidermidis Staph, aureus E. coli

Str. thermophilus ВКПМ В-10089 ■ IS 25 17 16 18 23 17

Ent hirae ВКПМ В-10090 ' 18 16 20 12 15 23 20

L. paracasei ВКПМ В-10092 13 12 15 18 12 22 26

L. gallinarum ВКПМ В-10132 32 26 29 25 28 23 28

L. gallinarum ВКПМ В-10133 28 21 17 16 24 21 25

Данные таблицы 9 свидетельствуют о том, что изучаемые штаммы молочнокислых микроорганизмов проявляют существенную антагонистическую активность при зоне стерильности (мм) по отношению к: Moraxella catarrhalis -от 13 до 32 мм; Ps. aeruginosa - от 12 до 26 мм; Р. vulgaris - от 15 до 29 мм; Staph, saprophiticus - от 12 до 25 мм; Staph.epidermidis - от 12 до 28 мм; Staph, aureus - от 21 до 23 мм и к Е. coli - от 17 до 28 мм.

2.2.5. Результаты использования штаммов лактобактерий собственной селекции при разработке технологий новых кисломолочных продуктов

Функциональное питание, в котором преобладают кисломолочные и растительные продукты, позволяет избавиться или нейтрализовать вредные факторы окружающей среды, потому что является основой для поддержания микрофлоры кишечника, профилактики многих заболеваний, а значит, и здоровья человека в целом.

2.2.5.1. Использование Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132 при производстве кефира. Согласно классический технологии нами готовились 2 образца кефира: 1-й образец готовился на грибках, используемых Владикавказским молочным заводом, а при приготовлении 2-го образца, наряду с кефирными грибками, в заквашиваемое молоко вносили чистую культуру Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132 нашей селекции.

По органолептическим показателям качества кефир, приготовленный по классической технологии и кефир, приготовленный с использованием в составе закваски культуры Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132, соответствуют требованиям ГОСТ Р 52093-2003.

Динамика нарастания кислотности кефира показала, что наиболее активно нарастание кислотности в кефире происходит при использовании культуры Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132(118°Т), а кефир, приготовленный с использованием грибков, взятых на Владикавказском городском молочном заводе, характеризуется меньшей кислотностью (92°Т).

Динамика накопления диоксида углерода в образцах кефира показала, что количество выделенного диоксида углерода в кефире, при производстве которого в составе закваски использована культура Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132 выше на 1г/л по сравнению с традиционно приготовленными образцами кефира и составляет через трое суток 11 г/л.

Установлено, что кефир, приготовленный с использованием совместно с кефирным грибком культуры Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132 обладает хорошей антагонистической активностью против E.coli и Staph, aureus с зоной подавления роста тест-культуры до 25 Мм.

2.2.5.2. Использование культуры Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089 в производстве шоколадного кислосливочного масла. Отличительной операцией технологии приготовления кислосливочного масла явилось использование бактериальной закваски из чистых культур местных штаммов лактобактерий и биологическое сквашивание сливок, основанное на молочнокислом брожении. Микрофлора бактериальной закваски была представлена культурой штамма Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089 нашей селекции и культурой Enterococcus durans ВКПМ В-8731 селекции сотрудников Горского ГАУ Цугкиева Б.Г. и Кабисова Р.Г.

Масло, изготавливаемое с использованием чистых культур указанных выше лактобактерий, имеет приятный специфический вкус, однородную консистенцию, пластично с наличием мельчайших капелек влаги, имеет цвет, свойственный шоколадному маслу. Массовая доля жира и влаги достигает 62%

и 16%,соответственно, а содержание сахара и какао-порошка - 18% и 2,5% соответственно, ванилина в 1кг масла содержится 0,015г.

Срок хранения полученного шоколадного кислосливочного масла выше, чем масла, произведенного по традиционной технологии, что, вероятно, объясняется присутствием в его составе культур лактобактерий.

2.2.5.3. Использование культуры Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089 в производстве медовухи «Аспирантская». Приоритетным направлением в молочной промышленности является разработка новых технологий продуктов без консервантов с высокими лечебно-диетическими свойствами. Исходя из этого, нами разработана технология производства ацидофильно-дрожжевого напитка - медовухи «Аспирантская». В качестве бактериальной закваски использованы культуры Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089 нашей селекции, в симбиозе с микроорганизмами селекции сотрудников Горского ГАУ Цугкиева Б.Г. и Кабисова Р.Г. (Lactobacillus casei ВКПМ В-8730), Цугкиева Б.Г. и Козыревой H.H.(LactobaciIlus gallinarum ВКПМ В-10131), Цугкиева Б.Г. и Рамоновой 3.r.(Sacharomyces cerevisiae ВКПМ Y-3414, Sacharomyces cerevisiae ВКПМ Y-3415).

Медовуха «Аспирантская», представляет собой приятный на вкус кислосладкий газированный напиток, в котором число КОЕ достигает Ю10; обладает высокой антагонистической активностью по отношению к условно-патогенным и патогенным микроорганизмам.

2.2.5.4. Использование культуры Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089 в производстве сметаны «Лакомка». Нами разработана технология нового вида молочнокислого продукта - сметаны «Лакомка», с использованием в качестве закваски чистых культур Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089 нашей селекции, а также Enterococcus durans ВКПМ В-8731 селекции сотрудников Горского ГАУ Цугкиева Б.Г. и Кабисова Р.Г.

Сметана «Лакомка» обладает выраженным ароматом, приятным вкусом, консистенция густая, однородная, цвет белый. Массовая доля жира а в ней составляет 20%, массовая доля белка - 2,5%, титруемая кислотность - 70° Т.

Сметана «Лакомка» обладает* высокой антагонистической активностью по отношению к патогенной и условно-патогенной микрофлоре. Срок хранения сметаны «Лакомка» при температуре 2-4°С - 5 дней. Количество живых микроорганизмов на конец срока годности - до 10ю живых клеток.

2.2.5.5. Использование культуры Enterococcus hirae ВКПМ В-10090 при квашении капусты. Введение чистых культур молочнокислых бактерий при квашении капусты приводит к снижению распада белков, уменьшению потерь аминокислот, сохранению до 90% витамина С от его исходного количества в подготовленном сырье и ускоряет процесс ферментации. Поэтому нами в составе бактериальной закваски, наряду со штаммами местной селекции, выделенных сотрудниками Горского ГАУ Цугкиевым Б.Г., Козыревой И.И. и Кабисовым Р.Г., была использована культура Enterococcus hirae ВКПМ В-10090 нашей селекции.

В ходе эксперимента мы использовали 4 варианта квашения капусты, которые отличались друг от друга составом вносимой бактериальной закваски.

Выявлено, что использование для стимулирования процесса биологического консервирования капусты в качестве бактериальной закваски культур местных штаммов микроорганизмов ускоряет процесс ферментации и продукт консервируется на 2-4 дня быстрее.

Глава 3. Результаты апробации культур местных штаммов лактобактерий на поросятах и цыплятах-бройлерах 3.1. Использование культур лактобактерий при выращивании поросят. С целью установления эффективности использования в животноводстве в качестве пробиотиков местных штаммов лактобактерий нами была проведена апробация выделенных и идентифицированных нами штаммов лактобактерий, депонированных в ВКПМ ФГУП ГосНИИ генетика (Streptococcus thermophilus - ВКПМ В-10089; Enterococcus hirae - ВКПМ В-10090; Lactobacillus paracasei - ВКПМ В-10092; Lactobacillus gallinarum - ВКПМ В-10132; Lactobacillus gallinarum - ВКПМ В-10133), на поросятах крупной белой породы в возрасте от 2 до 8 месяцев.

3.1.1. Динамика живой массы подопытных поросят. Целесообразным, на наш взгляд, является изучение эффективности включения молочнокислых бактерий в рационы кормления животных, в том числе и поросят. В ходе проведения исследований нами оценивались продуктивные показатели животных по результатам индивидуальных контрольных взвешиваний в начале опыта и ежемесячно до 8-месячного возраста.

Таблица 10. Динамика живой массы подопытных поросят ____п = 10

Группы животных Возраст, мес.

2 3 4 5 6 7 8

Контрольная 18,1±0,35 27,8±0,43 39,4±0,69 53,3±0,84 70,9£ 1,02 85,4± 1,38 101,0±1,64

1 - опытная 18,2±0,30 30,2±0,48 42,0±0,72 57,1±0,94 75,2*1,32 91,8±1,71 109,1±1,85

В % к контролю 100,6 108,6 106,6 107,1 106,1 107,5 108,0

Р <0,95 >0,99 >0,95 >0,99 >0,95 >0,99 >0,99

2 - опытная 18,3iO,34 30,9±0,52 43,0±0,77 58,5±1,09 77,0±1,45 94,0± 1,93 111,6± 1,76

В % к контролю 101,1 111,2 109,1 109,8 108,6 110,1 110,5

Р <0,95 >0,999 >0,99 >0,99 >0,99 >0,99 >0,999

Данные таблицы 10 свидетельствуют о том, что включение молока, сквашенного культурами молочнокислых бактерий нашей селекции, в рацион кормления подопытных поросят оказало положительное влияние на динамику живой массы животных опытных групп.

Абсолютный прирост живой массы за весь период опыта показал, что животные 1-опытной группы превзошли своих аналогов из контрольной группы на 8,0 кг или на 9,6%, а животные из 2- опытной группы превзошли своих аналогов на 10,4 кг, или 12,5% (Р > 0,999).

Включение в рационы животных опытных групп молока, сквашенного культурами лактобактерий нашей селекции, обусловило повышение энергии их роста, о чем свидетельствуют среднесуточные приросты. Так, в конце опыта по среднесуточным приростам живой массы наиболее высокие показатели были у животных 2- опытной группы - 519 г, которые превзошли контрольную группу, среднесуточный прирост в которой составил 461 г, на 58 г или на

12,6%. Животные 1-опытной группы по этому показателю (505 г) превзошли контрольную группу на 44 г, или на 9,5%.

Определение массы животного - простой и надежный метод учета изменения величины тела с возрастом, а промеры тела позволяют сделать экстерьерную оценку более объективной, так как одним из факторов, влияющих на линейный рост животных, являются условия питания и содержания.

К концу опыта в возрасте восьми месяцев преимуществом, по сравнению с контролем, пользовались животные опытных групп, превосходя по длине туловища своих аналогов на 1,0 и 1,8см, или на 0,86 и 1,54% (Р <0,95). Превосходство по высоте в холке составило 0,4 и 1,9см, или 0,68 и 3,21% (Р>0,99). Установлено, что промеры тела подопытных животных находились в соответствии с энергией их роста.

На основании данных промеров тела мы рассчитали индексы телосложения. Лучшим показателем индекса растянутости отличались животные опытных групп, а более массивными оказались животные контрольной группы.

3.1.2. Морфологические и биохимические показатели крови подопытных животных. Для нормальной деятельности всех органов необходимо постоянное снабжение их кровью. Кровь поддерживает постоянство внутренней среды, отражая динамику жизненных проявлений организма.

В связи с этим, нами изучены основные показатели крови подопытных животных.

Показатели содержания эритроцитов, гемоглобина и лейкоцитов в крови подопытных животных приведены в таблице 11.

Таблица 11. Содержание форменных элементов в крови подопытных животных

п = 6

- Показатель Возраст, мес. Группа

контрольная 1 - опытная 2 - опытная

2 6,42±0,03 6,45:10,11 6,4ft±0,04

Эритроциты, 1012/л 5 6,74±0,05 7,05±0,10 7,10±0,05

8 6,72±0,0б 7,02±0,10 7,05±0,06

2 103,010,93 102,6±1,50 103,2±1,65

Гемоглобин, г/л 5 10S,0±0,51 110,5±0,80 112,0*1,36

8 103,7±1,11 108,8±0,71 109,2±0,86

Лейкоциты, 10% 2 13,3±0,27 13,0±0,29 13,5±0,27

5 12,0±0,18 12,2±0,19 12,410,29

8 11,0±0,28 11,1 ±0,24 11,2±0,34

Согласно данным таблицы 11 содержание форменных элементов в крови животных опытных групп было несколько выше, хотя и находились в пределах физиологической нормы.

Наряду с форменными элементами крови нами были изучены: рН крови -один из наиболее постоянных обменных показателей; содержание каротина, при недостатке которого в рационах снижается продуктивность, замедляется рост молодняка, нарушается обмен веществ, и ослабляются защитные функции

организма; содержание общего кальция необходимого животным для регулирования реакции крови и тканевой жидкости, возбудимости мышечной и нервной ткани, свертывания крови; содержание неорганического фосфора, который участвует во всех процессах обмена; содержание общего белка, так как белки сыворотки крови являются одной из важнейших ее составных частей (табл. 12).

Таблица 12. Кислотная емкость крови, содержание каротина, общего, кальция, неорганического фосфора, общего белка в сыворотке крови

п = 6

Показатель Возраст, мес. Группа

контрольная 1 - опытная 2 - опытная

Кислотная емкость, мм оль/л 2 133,2*0,91 133,9±1,36 133,711,16

5 139,911,25 141,7±1,41 142,611,59

8 МЗДЫ,12 144,3*1,24 144,711,17

Каротин, мкмоль/л 1 0,088±0,001 0,09010,002 0,09010,001

5 0,12310,002 0,12910,003 0,13110,005

8 0,148±0,003 0,15910,004 0,16110,003

Общий кальций, ммоль/л 2 2,78±0,12 2,83±0,09 2,85±0,Ю

5 2,92*0,11 3,22±0,08 3,2410,07

8 3,0910,11 3,4310,04 3,46*0,03

Неорганический фосфор, ммоль/л 2 1,50Ю,06 1,52Ю,05 1,53Ю,07

5 1,6010,03 1,761-0,04 1,78±0,03

8 1,6710,04 1,8810,03 1,9010,02

Общий белок, г/л 2 73,710,61 74,210,64 74,610,70

5 76,610,96 81,710,76 82,110,72

8 77,410,91 84,210,51 84,910,07

Из материалов, приведенных в таблице 12 следует, что гематологические показатели подопытных животных, как контрольных, так и опытных, находятся в пределах физиологической нормы, хотя преимущество животных опытных групп очевидно, что свидетельствует о положительном влиянии молочнокислых бактерий на показатели крови подопытных животных, что в свою очередь сказалось на росте и развитии поросят.

3.2. Результаты использования молочнокислых микроорганизмов в

кормлении цыплят-бройлсров Известно, что эффективной профилактикой желудочно-кишечных заболеваний, а также фактором повышения сохранности поголовья является использование в рационах кормления живых культур молочнокислых микроорганизмов, что подтверждено и в нашем эксперименте.

В опытных группах цыплят-бройлеров отмечена более высокая сохранность поголовья, чем в контрольной группе.

Результаты проведённых нами исследований показывают, что включение молока, сквашенного местными штаммами лактобактерий, в рацион цыплят-бройлеров позволяет повысить среднесуточные приросты и абсолютную живую массу. Наиболее высокие показатели живой массы, абсолютного и среднесуточного приростов получены от цыплят-бройлеров 1-й и 2-й опытных групп. Так, среднесуточный прирост живой массы в этих группах составил 42,1 и 41,0 г против 38,5 г в контрольной группе, что на 9,4 и 6,5% больше. Среднесуточный прирост живой массы животных в 3-опытной группе составил

40,3 г, что на 1,8 и 0,7 г, или на 4,5 и 1,7% меньше, чем в 1 и 2 опытных группах.

По результатам проведенных нами исследований также установлено, что включение лактобактерий нашей селекции (Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089 и Lactobacillus paracasei ВКПМ В-10092) в рационы кормления цыплят-бройлеров улучшает общее усвоение как азотсодержащих компонентов кормов, так и кальция и фосфора.

3.3. Экономическая эффективность использования молочнокислых микроорганизмов при выращивании свиней и цыплят - бройлеров

За время проведения эксперимента установлено, что предубойная масса контрольной группы животных составила 101,0 кг, а в первой и во второй опытных группах -109,1 кг и 111,6 кг соответственно.

Себестоимость 1 кг прироста живой массы свиней 1-ой и 2-ой опытных групп составила 54,5 руб. и 53,4 руб., что меньше, чем у животных контрольной группы на 2,3 руб. и 3,4 руб. соответственно.

Применение пробиотиков привело к повышению уровня рентабельности в опытных группах, по сравнению с контрольной группой, и она составила 28,4%, 31,1% соответственно, против 23,2% в контрольной группе.

Начальная масса цыплят-бройлеров контрольной и опытных групп была одинаковой, а к концу опыта цыплята опытных групп превзошли своих аналогов из контрольной группы. Расход корма на 1 кг прироста у цыплят 1-й и 2-й опытных групп составила 2,45 и 2,46 кг против 2,51 кг в контроле, или на 2,39 и 1,99% меньше.

Установлено, что использование в кормлении цыплят-бройлеров штаммов лактобактерий экономически целесообразно, так как уровень рентабельности в контрольной группе составил 18,62%, а в 1-й, 2-й и 3-й опытных группах - 23,14%, 22,48% и 21,45% соответственно.

Таким образом, экспериментально установлена целесообразность выделения из различных природных источников, идентификации и практического использования культур штаммов разных видов молочнокислых бактерий.

Выводы

1. Выявлена обильная распространенность молочнокислых бактерий в окружающей среде РСО-Алания, что подтверждается выделением 43 штаммов из 20 различных природных источников растительного и животного происхождения, из которых отобраны 8 штаммов с наиболее стабильными технологическими свойствами, которые:

- свертывают молоко в течение 6-9 часов;

- повышают кислотность сквашиваемого молока через каждый час в среднем на 8,4°Т;

- предельная кислотообразующая способность у них колеблется от 120°Т до 359°Т;

- число КОЕ в 1 мл сквашенного молока составляет 10® - 10

2. Проведением анализа 16S РНК во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИгенетика,

подтверждены наши данные по определению видовой принадлежности изучаемых штаммов молочнокислых микроорганизмов, и они депонированы в ВКПМ под коллекционными номерами:

- Streptococcus thermophilus, штамм К45 - ВКПМ В-10089;

- Enterococcus hirae, штамм Бк37 - ВКПМ В-10090;

- Lactobacillus paracasei, штамм З37 - ВКПМ В-10092;

- Lactobacillus gallinarum, штамм Г37 - ВКПМ В-10132;

- Lactobacillus gallinarum, штамм И37 - ВКПМ В-10133.

3. Культуры Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089, Enterococcus hirae ВКПМ В-10090, Lactobacillus paracasei ВКПМ В-10092, Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132, Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10133 обладают значительной антагонистической активностью по отношению к Staph, aureus, E.coli, Moraxella catarrhalis, Ps. aeruginosa, P. vulgaris, Staph, saprophiticus и Staph.epidermidis.

4.Ha основе культур Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089 и Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132 разработаны технологии производства кисломолочных продуктов лечебно-профилактического и функционального питания: шоколадного кислосливочного масла, сметаны «Лакомка», медовухи «Аспирантская» и модифицирована технология производства кефира. Указанные продукты отличаются высоким содержанием живых клеток микроорганизмов - число КОЕ составляет Ю9-Ю10 на конец срока хранения.

5. Культуры Streptococcus thermophilus BKIIM В-10089, Enterococcus hirae ВКПМ B-10090, Lactobacillus paracasei ВКПМ B-10092, Lactobacillus gallinarum ВКПМ B-10132, Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10133, как в отдельности, так и в разных сочетаниях могут использоваться при консервировании овощей, в целях ускорения процессов ферментации.

6.Включение в рационы кормления молодняка свиней 0,5 л обезжиренного молока, сквашенного культурами штаммов молочнокислых бактерий нашей селекции, позволяет увеличить:

- живую массу к концу опыта на 10,6 кг или 10,5%;

- абсолютный прирост живой массы на 10,4кг или на 12,5%;

- обеспечивает получение среднесуточных приростов живой массы, равной 519 г, что на 58 г, или на 12,6% выше, чем у контрольных аналогов, а также положительно влияет на их линейный рост, показатели которого согласуются с динамикой массы животных подопытных групп.

Повышение интенсивности обмена веществ при включении молочнокислых микроорганизмов нашей селекции в состав рациона кормления свиней способствует улучшению морфологических и биохимических показателей крови в пределах физиологической нормы.

7.Установлено, что включение в рационы кормления цыплят-бройлеров 10% молока, сквашенного культурами Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089 и Lactobacillus paracasei ВКПМ В-10092 способствует достоверному увеличению их живой массы в среднем по группам на 7,5%, при повышении сохранности поголовья на 4%.

8.Использование культур молочнокислых микроорганизмов нашей селекции в качестве пробиотиков в кормлении поросят и цыплят-бройлеров экономически целесообразно, так как существенно повышает рентабельность производства свинины и мяса птицы.

Предложения производству

1. Рекомендовать предприятиям, осуществляющим переработку молока использовать при производстве кисломолочной продукции технологически и биологически активные штаммы молочнокислых микроорганизмов: Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089 , Enterococcus hirae ВКПМ В-10090, Lactobacillus paracasei ВКПМ В-10092, Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132 и Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10133, так как они позволят интенсифицировать технологический процесс, улучшить качество и расширить ассортимент кисломолочных продуктов и, как следствие, повысить экономическую эффективность производства.

2Делесообразно использовать штаммы молочнокислых микроорганизмов Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089 , Enterococcus hirae ВКПМ В-10090, Lactobacillus paracasei ВКПМ В-10092, Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132 и Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10133 в животноводстве и птицеводстве в качестве пробиотиков, так как они способствуют повышению интенсивности роста и сохранности молодняка, а также более полному усвоению организмом питательных веществ рационов кормления.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

1. Рамонова, Э.В. К характеристике молочнокислых микроорганизмов, выделенных в РСО-Алания / Э.В. Рамонова, Р.Г. Кабисов, Б.Г. Цугкиев // Рациональное использование биоресурсов в АПК: Матер. Междунар. научн.-практ. конф,- Владикавказ, 2008. - С. 212-214.

2. Рамонова, Э.В. Антагонистическая активность местных штаммов лактобактерий / Э.В. Рамонова, Р.Г. Кабисов // Рациональное использование биоресурсов в АПК: Матер. Междунар. научн.- практ. конф. - Владикавказ,

2008.-С. 214.

3. Рамонова, Э.В. Характеристика штаммов лактобактерий / Э.В. Рамонова, Р.Г. Кабисов, Б.Г. Цугкиев // Молочная промышленность. -

2009.-№2.-С. 43.

4. Кабисов, Р.Г. Влияние молочнокислых микроорганизмов селекции Горского ГАУ на сохранность цыплят-бройлеров / Р.Г. Кабисов, А.А. Мурзабеков, Э.В. Рамонова, И.И. Козырева // Вестник научных трудов молодых ученых ФГОУ ВПО «Горский ГАУ». - 2009. - Вып. 46. - С. 31-32.

5. Цугкиев, Б.Г. Результаты идентификации молочнокислых стрептококков по физиолого-биохимическим свойствам / Б.Г. Цугкиев, И.И. Козырева, Э.В. Рамонова // Аграрная наука производству: Тез. докл. Регион, науч.-практ. конф. - Владикавказ, 2009. - С. 100 - 102.

6. Кабисов, Р.Г. Производство шоколадного кислосливочного масла с использованием штаммов местной селекции Ent. durans и Str. thermophilus / Р.Г. Кабисов, Э.В. Рамонова, А.В. Стельмухов // Труды Всероссийской

научно-производственной конференции «Новые направления в решении проблем АПК на основе современных ресурсосберегающих инновационных технологий», посвященной 80-летию со дня рождения заслуженного деятеля науки Российской Федерации, профессора И. Д. Тменова. - Владикавказ, 2010. -С. 284-285.

7. Кабисов, Р.Г. Влияние пробиотиков на баланс азота, кальция и фосфора цыплят-бройлеров линии «Степняк» / Р.Г. Кабисов, A.A. Мурзабеков, Э.В. Рамонова, И.И. Козырева // Актуальные проблемы производства и переработки продукции животноводства.: Сб. науч. тр. по матер. Междунар. науч.-практ. конф. - Ставрополь, 2010. - С. 309 - 312.

8. Кабисов, Р.Г. Молочнокислые микроорганизмы в кормлении цыплят / Р.Г. Кабисов, Б.Г. Цугкиев A.A. Мурзабеков, Э.В. Рамонова, И.И. Козырева // Птицеводство. - 2010. - №7. - С. 28 - 29.

9. Цугкиев, Б.Г. Использование штаммов лактобакгерий селекции НИИ биотехнологии Горского ГАУ Ent. durans ВКПМ В-8731 и Str. thermophilus ВКПМ В-10089 для производства сметаны «Лакомка» / Б.Г. Цугкиев, Р.Г. Кабисов, Э.В. Рамонова // Известия Горского ГАУ. - 2010. -часть 1. - том 47. - С. 165 -166.

10. Кабисов, Р.Г. Медовуха «Аспирантская» / Р.Г. Кабисов, Э.В. Рамонова, З.Г. Рамонова, И.И. Козырева // Новые технологии переработки сельскохозяйственного сырья в производстве продуктов общественного питания: Сб. матер. Междунар. конф. с элементами научной школы для молодежи. - Владивосток, 2010. - С. 22-24.

11. Рамонова, Э.В. Эффективность использования пробиотиков в кормлении свиней / Э.В. Рамонова, Р.Г. Кабисов, Б.Г. Цугкиев // Аграрная наука. -2010. - №11. - С. 22-23.

12. Козырева, И.И. Сравнительный анализ кефира и биокефира / И.И. Козырева, Э.В. Рамонова, С.С. Гугкаева // Известия Горского ГАУ. -2010. -Т.47. - 4.2. - С. 259-261

13. Рамонова, Э.В. Совершенствование технологии квашения капусты с использованием чистых кулмур молочнокислых микроорганизмов селекции НИИ биотехнологии Горского ГАУ / Э.В. Рамонова, И.И. Козырева, З.Р. Томаева // Вестник научных трудов молодых ученых ФГОУ ВПО «Горский государственный аграрный университет». - Владикавказ, 2010. - Вып. 47. - С. 57-59.

14. Кабисов, Р.Г. Кисломолочный продукт функционального питания «Крепыш» / Р.Г. Кабисов, Э.Е. Рамонова, И.И. Козырева // Молодые ученые в решении актуальных проблем науки: Сб. работ молодых ученых Междунар. науч.-практ. конф. - Владикавказ, 2010. - С. 279-280.

15. Рамонова, Э.В. Антагонистическая активность молочнокислых бактерий селекции НИИ биотехнологии Горского ГАУ по отношению к Bacillus mesentericus / Э.В. Рамонова, Р.Г. Кабисов, И.И. Козырева // Молодые

ученые в решении актуальных проблем науки: Сб. работ молодых ученых II Междунар. науч.-практ. конф.-Владикавказ, 2011. - 4.1. - С. 436-440.

16. Кабисов, Р.Г. Селекция производственно-ценных штаммов лактобактерий / Р.Г. Кабисов, А.Г. Петрукович, Э.В. Рамонова, И.И. Козырева // Молодежь и инновации. - Горки, 2011. - 4.1. Раздел 2. - С. 370-373.

17. Кабисов, Р.Г. Сыр лечебно-профилактического назначения / Р.Г. Кабисов, Э.В. Рамонова // Междунар. науч.-техн. конф. «Современные достижения биотехнологии». - Ставрополь, 2011. - С.33-34.

18. Цугкиев, Б.Г. Антагонизм . лактобактерий по отношению к Staphylococcus aureus и Escherichia coli / Б.Г. Цугкиев, Р.Г. Кабисов, А.Г.

Петрукович, Э.В. Рамонова, И.И. Козырева // Матер. И-Междунар. науч.-практ. конф. «Актуальные достижения европейской науки - 2011». София, 2011,- Т. 32.-С. 69-72.

19. Штамм Streptococcus thermophilus, используемый для приготовления кисломолочных продуктов. - Решение о выдаче патента на изобретение от 27 апреля 2011г. Заявка № 2010119742/10(028111) от 17. 05. 2010г.

20. Штамм Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10131, используемый для приготовления кисломолочных продуктов. - Решение о выдаче патента на изобретение от 21 июля 2011г. Заявка № 2010119743/10(028112) от 17. 05.2010г.

21. Штамм Sacharomyces unisporus ВКПМ Y-3416, используемый для приготовления кисломолочных продуктов. - Решение о выдаче патента на изобретение от 21 июля 2011г. Заявка № 2010119744/10(028113) от 17. 05. 2010г.

Сдано в набор 09.11.11 г., подписано в печать 10.11.11 г. Гарнитура Тайме. Печать трафаретная. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Усл. печ. л. ¡,0. Тираж 100 экз. Заказ №220.

Типография ООО НПКП «МАВР», Лицензия Серия ПД №01107, 362040, г. Владикавказ, ул. Августовских событий, 8, тел. 44-19-31

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Рамонова, Элла Викторовна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Общая характеристика молочнокислых бактерий.

1.2. Диетические и лечебные свойства кисломолочных продуктов.

1.3. Важнейшие производственно-ценные свойства молочнокислых бактерий.

1.3.1. Протеолитическая активность.

1.3.2. Липолитическая активность.

1.3.3. Ингибирующие свойства молочнокислых бактерий.

1.4. Использование молочнокислых бактерий в народном хозяйстве.

Глава 2. Собственные исследования.

2.1. Материал и методика исследований.

2.2. Результаты собственных исследований.

2.2.1. Результаты селекции местных штаммов молочнокислых бактерий.

2.2.2. Идентификация молочнокислых бактерий.

2.2.2.1. Культуральные свойства изучаемых штаммов.

2.2.2.2. Морфологические свойства изучаемых штаммов.

2.2.2.3.Физиоло го-биохимические свойства изучаемых штаммов микроорганизмов.

2.2.3. Результаты исследования исходного молока и молока, сквашенного культурами местных штаммов лактобактерий.

2.2.4. Микробиологические показатели образцов молока, сквашенных разными культурами местных штаммов лактобактерий.

2.2.5. Результаты использования штаммов лактобактерий собственной селекции, депонированных в ВКПМ при разработке технологии новых кисломолочных продуктов.

2.2.5.1. Использование культуры Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132 при производстве кефира.

2.2.5.2. Использование культуры Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089 в производстве шоколадного кислосливочного масла.

2.2.5.3. Использование культуры Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089 в производстве медовухи «Аспирантская».

2.2.5.4. Использование культуры Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089 в производстве сметаны «Лакомка».

2.2.5.5. Использование культуры Enterococcus hirae ВКПМ В-10090 при квашении капусты.

Глава 3. Результаты апробации культур местных штаммов лактобактерий на поросятах и цыплятах-бройлерах.

3.1. Использование культур лактобактерий при выращивании поросят.

3.2. Динамика живой массы подопытных животных.

3.3. Промеры тела подопытных животных.

3.4. Морфологические и биохимические показатели крови подопытных животных.

3.5. Результаты использования молочнокислых микроорганизмов в кормлении цыплят-бройлеров.

3.6. Экономическая эффективность использования молочнокислых микроорганизмов при выращивании свиней и цыплят - бройлеров.

Обсуждение результатов.

Выводы.

Предложения производству.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Выделение и идентификация местных штаммов молочнокислых микроорганизмов и их использование в качестве пробиотиков"

Проблемы производства и потребления молока и молочных продуктов приобретают все большую актуальность и с нарастающей степенью входят в зависимость от общих тенденций развития мирового рынка продовольствия. На практике уже сейчас ощущаются изменения в развитии молочного дела, которые определяются процессами глобализации мировой экономики, изменениями социальных моделей питания населения, отражающихся на структуре агропродовольственных рынков, ростом уровня информационно-технического обеспечения, ухудшением экологической ситуации, достижениями мировой науки в данной области.

В последнее время возрос интерес к изучению молочнокислых бактерий. В большей степени это связано с развитием молочной промышленности в мире вообще и в России в частности и, как следствие этого, производством новых кисломолочных продуктов, а также поиском новых штаммов молочнокислых бактерий, пригодных для использования в составе заквасок.

Молочные продукты являются важнейшим компонентом в рационе питания человека. На их долю приходится 20% удовлетворения потребности человека в белке и 30% - в жире (В.Д. Косой и др., 2005).

Молочнокислые бактерии выделяют из различных источников: самоквасных кисломолочных продуктов, частей растений, в частности цветов, а также с поверхности ягод, овощей и фруктов. Проводя направленный отбор микроорганизмов, а также используя специальные методы селекции, можно получать штаммы бактерий, обладающие специальным комплексом биотехнологических свойств. Это позволяет проектировать и создавать новые продукты с направленным составом микрофлоры.

Однако штаммы молочнокислых бактерий, выделенные из природных источников, отличаются по стабильности проявляемых свойств. Одни штаммы сохраняют биохимическую активность, у других она резко и необратимо падает, у третьих заметно варьирует. Ценными считаются штаммы, длительно сохраняющие биохимическую активность, зависящую не только от внешних факторов (состава питательной среды, в частности молока, температуры и т.д.), но и от соотношения между биохимически активными и неактивными клетками в популяциях микроорганизмов, что определяет жизнеспособность культуры, ее практическую ценность.

Сегодня из широкого ассортимента продуктов питания покупатель зачастую выбирает те, которые обладают дополнительными свойствами и преимуществами, такими как натуральность, польза для здоровья, необычный вкус, удобство и др.

Многие мировые производители стремятся следовать данным тенденциям и предлагают новые решения для людей, которые хотят улучшить свое здоровье. Все более популярными становятся продукты, способствующие сокращению жировой ткани и содержащие пробиотические ингредиенты, витамины, минеральные вещества, пищевую клетчатку, жирные кислоты и т.д.

Таким образом, разнообразие кисломолочных продуктов обусловлено применением бактериальных заквасок, состав которых представлен различными видами молочнокислых бактерий. Специфика вкуса, консистенция и ряд других свойств кисломолочных продуктов зависят от штаммов, входящих в состав бактериальной закваски.

Научная новизна работы заключается в том, что впервые в условиях РСО-Алания выделены и изучены биологические, технологические свойства, идентифицированы, депонированы во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) и апробированы на животных и птице штаммы Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089, Enterococcus hirae

ВКПМ В-10090, Lactobacillus paracasei ВКПМ В-10092, Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132, Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10133.

Целью данной работы явилось выделение чистых культур молочнокислых бактерий из различных природных субстратов, установление их видовой принадлежности, изучение биологических особенностей и важнейших производственно-ценных свойств, а также определение эффективности их использования в качестве пробиотиков в кормлении молодняка свиней и цыплят-бройлеров. В задачи исследований входило:

- выделение чистых культур молочнокислых бактерий из различных природных источников;

- идентификация выделенных штаммов молочнокислых бактерий; депонирование идентифицированных штаммов в ВКПМ с присвоением им коллекционных номеров;

- расчет экономической эффективности практического использования местных штаммов молочнокислых бактерий.

Заключение Диссертация по теме "Биологические ресурсы", Рамонова, Элла Викторовна

Выводы

1.Выявлена обильная распространенность молочнокислых бактерий в окружающей среде РСО-Алания, что подтверждается выделением 43 штаммов из 20 различных природных источников растительного и животного происхождения, из которых отобраны 8 штаммов с наиболее стабильными технологическими свойствами, которые:

- свертывают молоко в течение 6-9 часов;

- повышают кислотность сквашиваемого молока через каждый час в среднем на 8,4°Т;

- предельная кислотообразующая способность у них колеблется от 120°Т до 359 °Т;

- число КОЕ в 1 мл сквашенного молока составляет 109 - Ю10.

2.Проведением анализа 16S РНК во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИгенетика, подтверждены наши данные по определению видовой принадлежности изучаемых штаммов молочнокислых микроорганизмов, и они депонированы в ВКПМ под коллекционными номерами:

- Streptococcus thermophilus, штамм К45 - ВКПМ В-10089;

- Enterococcus hirae, штамм Бк37 - ВКПМ В-10090;

- Lactobacillus paracasei, штамм З37 - ВКПМ В-10092;

- Lactobacillus gallinarum, штамм Г37 - ВКПМ В-10132;

- Lactobacillus gallinarum, штамм И37 - ВКПМ В-10133.

3.Культуры Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089, Enterococcus hirae ВКПМ В-10090, Lactobacillus paracasei ВКПМ В-10092, Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132, Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10133 обладают значительной антагонистической активностью по отношению к Staph, aureus, E.coli, Moraxella catarrhalis, Ps. aeruginosa, P. vulgaris, Staph, saprophiticus и Staph.epidermidis.

4.Ha основе культур Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089 и Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132 разработаны технологии производства кисломолочных продуктов лечебно-профилактического и функционального питания: шоколадного кислосливочного масла, сметаны «Лакомка», медовухи «Аспирантская» и модифицирована технология производства кефира. Указанные продукты отличаются высоким содержанием живых клеток микроорганизмов - число КОЕ составляет 109-Ю10 на конец срока хранения.

5. Культуры Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089, Enterococcus hirae ВКПМ В-10090, Lactobacillus paracasei ВКПМ В-10092, Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132, Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10133, как в отдельности, так и в разных сочетаниях могут использоваться при консервировании овощей, в целях ускорения процессов ферментации.

- живую массу к концу опыта на 10,6 кг или 10,5%;

- абсолютный прирост живой массы на 10,4кг или на 12,5%; -обеспечивает получение среднесуточных приростов живой массы, равной 518 г, что на 57 г, или на 12,4% выше, чем у контрольных аналогов, а также положительно влияет на их линейный рост, показатели которого согласуются с динамикой массы животных подопытных групп.

Предложения производству

2. Целесообразно использовать штаммы молочнокислых микроорганизмов Streptococcus thermophilus ВКПМ В-10089 , Enterococcus hirae ВКПМ В-10090, Lactobacillus paracasei ВКПМ В-10092, Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132 и Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10133 в животноводстве и птицеводстве в качестве пробиотиков, так как они способствуют повышению интенсивности роста и сохранности молодняка, а также более полному усвоению организмом питательных веществ рационов кормления.

IV. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

По результатам проведенного анализа секвенсов вариабельных участков 16$ рДНК тестируемый штамм Н37 можно отнести к виду Lactobacillus gallinarum (97%).

Для исследования использовалась следующая литература

ВыдечениеДНКдтПЦР PCR Protocols. A Guide to methods and applications. Innis M, Gelfand D., Sninsky J.p.14-15. 2. Условия ПЦР

Каталог MBI Fermentas 1998X1999,146-157.

Pavlicek A et al "Fre-Tree-freeware program for construction of phylogenetic trees on the basis of distance data and bootstrap\jackknife analysis of tree robustness." Application in the RAPD analysis of genus Frenkelia Folia Biol (Praha) 1999 45(3) 97-9.

3 Построение деревьев родства

Ribosomal Database Project И (http://www cme.msu.edu)

4. Идентификация при помощи видоспецифических праймеров

FEMS Microbiology Letters 187 (2000) 167-173

Директор ВКПМ Проф.

2.2.5. Результаты использования штаммов лактобактерий собственной селекции, депонированных в ВКПМ при разработке технологии новых кисломолочных продуктов

Кисломолочные продукты обладают целебными свойствами в большей степени, чем обычное молоко и они входят в рацион человека с древнейших времен.

На жизнедеятельность организма в современных условиях отрицательно влияют: экологическое неблагополучие, стрессовые воздействия, бесконтрольное массовое применение антибиотиков и химиотерапевтических препаратов, несбалансированное питание. Все эти факторы риска нарушают нормальный симбиоз кишечной микрофлоры.

2.2.5.1. Использование культуры Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132 при производстве кефира

Кисломолочные продукты занимают значительное место в питании человека и заслуженно пользуются признанием потребителей. Необходимо отметить, что по благоприятному влиянию на желудочно-кишечный тракт кефир заметно превосходит другие кисломолочные продукты.

В ходе испытания выделенных нами штаммов в составе заквасок для приготовления кисломолочных продуктов нами готовились 2 образца кефира: 1-й образец готовился на грибках, используемых Владикавказским молочным заводом, а при приготовлении 2-го образца наряду с кефирными грибками в заквашиваемое молоко вносили чистую культуру Lactobacillus gallinarum ВКПМ В-10132 нашей селекции.

Органолептические показатели качества двух опытных образцов кефира приведены в таблице 20.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Рамонова, Элла Викторовна, Владикавказ

1. Авраменко, И.Ф., Витковский, Ю.Ю., Пасько, М.М. Влияние ПАБК на развитие поросят после отъема / И.Ф. Авраменко, Ю.Ю. Витковский, М.М. Пасько // Журн. свиноводство. 1970. - № 5. - С. 8-9.

2. Ананьева, Н.В. Применение иммобилизованных форм пробиотических бактерий в производстве молочных продуктов / Н.В. Ананьева, В.И. Ганина, Н.В. Нефедова, Г.Р. Габрильян // Журн. молочная промышленность. 2006. -№11.-С. 46-47.

3. Анатовский, A.B. Биомолоко и его лечебные свойства / A.B. Анатовский, C.B. Патрушев. Орджоникидзе, 1956. - С. 3 - 15.

4. Ауэрман, Л.Я. Технология хлебопекарного производства / Л.Я. Ауэрман. 7-е изд., перераб. и доп. - М.: Пищевая промышленность, 1972. - 512 с.

5. Ахметзянов, Ф.К. Микрофлора желудочно-кишечного тракта свиней в норме и при некоторых заболевания: Автореф. канд. дисс. / Ф.К. Ахметзянов. Казань, 1966. - 18 с.

6. Банникова, JI.A. / JI.A. Банникова, А.К. Максимова // Журн. молочная промышленность. 1969. - №3. - С. 15.

7. Банникова, JI.A. Микробиологические основы молочного производства (справочник) / JI.A. Банникова, Н.С. Королева, В.Ф. Семенихина. М.: Агропромиздат, 1987. - 400 с.

8. Банникова, JI.A. Селекция молочнокислых бактерий и их применение в молочной промышленности / JI.A. Банникова. М.: Пищевая промышленность, 1975. -255 с.

9. Белов, А.Н., Овсяникова H.A., Щетинин М.П. Протеолитическая активность молочнокислых стрептококков / А.Н. Белов, H.A. Овсяникова, М.П. Щетинин // Журн. сыроделие и маслоделие. 2002. - №4. - С. 16-17.

10. Белозерский, А.Н. Практическое руководство по биохимии растений / А.Н. Белозерский, Н.И. Проскуряков. М.: Советская наука, 1951. - 378 с.

11. Бетляев, Р.О. «Силос РеескесЪьэффективное средство повышения продуктивного действия силоса / Р.О. Бетляев // Журн. молочная промышленность. 2006. - №6. - С. 101.

12. Богданов, В.М. Микробиология молока и молочных продуктов / В.М. Богданов. М.: Пищевая промышленность, 1969. - 367 с.

13. Богданов, В.М. Микробиология молока и молочных продуктов / В.М. Богданов. 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Пищепромиздат, 1957. - 296 с.

14. Буров, А.Д. Молочнокислые бактерии, их распространение в природе и значение / А.Д. Буров. М.: Наука, 1968. - С. 10.

15. Вальдман, А. Р. Витамины в питании животных / А. Р. Вальдман, П. Ф. Сурай, И. А. Ионов. Харьков, 1993. - 422 с.

16. Ван, Р.Х. Бродильное производство / Р.Х. Ван. М.: Пищепромиздат, 1959, 2.-359 с.

17. Войткевич, A.B. Применение ацидофильных культур в животноводстве / A.B. Войткевич // Доклады ВАСХНИЛ, 1948 в. 3. С. 15 - 20.

18. Выщепан, А.Г. Физико-химические основы соления и квашения овощей / А.Г. Выщепан, М.Е. Мельман . М.: Госторгиздат, 1952. - 158 с.

19. Ганбаров, Х.Г. / Х.Г Ганбаров, М.М. Джафаров // Журн. молочная промышленность. 2006. - №8. - С. 56.

20. Ганина, В.И. Пробиотики. Назначение, свойства и основы биотехнологии / В.И. Ганина // Монография. М.: Изд-во МГУПБ, 2001. -69с: ил.

21. Гибшман, М.Р. Молочнокислые стрептококки, продуцирующие антибиотики и влияние последних на молочнокислый процесс при варке сыра / М.Р. Гибшман // Труды ВНИИМСа. 1955. Вып. 3. - С. 54-57.

22. Глазачев, В.В. Технология кисломолочных продуктов / В.В. Глазачев. -М.: Наука, 1974.-356 с.

23. Глухов, Г.К. Использование заменителей молока при выращивании телят / Г.К. Глухов // Журн. сельское хозяйство. 1961. - №4. - С. 59 - 62.

24. Горбатова, К.К Физико-химические и биохимические основы производства молочных продуктов / К.К. Горбатова. СПб.: ГИФД, 2004. -352 е.: ил.

25. Гриневич, А.Г. Действие гамма и УФ - лучей на молочнокислые бактерии / А.Г. Гриневич. - Ташкент: Тан, 1967.

26. Гусейнов, Г.Г. Влияние биологического препарата ПАБК на продуктивность птиц / Г.Г. Гусейнов, K.M. Сафарова // уч. Записки аспирантов Азербайджанского с.-х. института. 1966. - №3. - С. 69 - 72.

27. Гусейнов, Г.Г. Изучение эффекта биологического препарата Витамина В,2 и ПАБК для повышения продуктивности и устойчивости птиц против кишечных заболеваний в условиях Азербайджанской ССР: Автореферат / Г.Г. Гусейнов. Киров, 1952. - 26 с.

28. Гутиев, М.Н. Советы по свиноводству/ М.Н. Гутиев, Г.М. Бажов, A.B. Гутиев. Владикавказ: Изд-во ИР, 1991.

29. Давыдов, Р.Б. Основные витамины в молоке и молочных продуктах / Р.Б. Давыдов, JI.E. Булько, М.Д. Ермакова. М. 1956.

30. Диланян, З.Х. Накопление свободных аминокислот протеолитически активными молочнокислыми палочками / З.Х. Диланян, В.А. Туманян // Биологический журнал Армении. 1968. - №8. - С. 37^12.

31. Диланян, З.Х. Основные направления селекции молочнокислых бактерий в молочной промышленности / З.Х. Диланян, С.Ш. Тер-Казарьян, Т.А. Иоанисян // Сб. М.:1970. С. 62-66.

32. Дмитриевский, С.П. Соление и квашение овощей / С.П. Дмитриевский. -М.: Экономика, 1966. -108 с.

33. Дьяченко, П.Ф. Труды Всес. н.-и. ин-та молочн. пром-сти / П.Ф. Дьяченко, В.П. Шидловская // 1970. Вып.27. - 9 с.

34. Ерзинкян, JI.A. Биологические особенности некоторых рас молочнокислых бактерий / J1.A. Ерзинкян. Ереван: Изд-во Армянской АН ССР, 1971.-236 с.

35. Залашко M.B. / М.В. Залашко, К.В. Мочалова // Молочная промышленность. 1969. - №3. - С. - 18.

36. Залашко, М.В. Подбор и использование в сыроделии активных рас молочнокислых бактерий / М.В. Залашко, К.В. Мочалова // Сб.: «Основные направления селекции молочнокислых бактерий в молочной промышленности». М. 1970. - С. 55-60.

37. Залашко, М.В. Подбор и использование в сыроделии протеолитически активных молочнокислых бактерий / М.В. Залашко // Сб.: «Основные направления селекции молочнокислых бактерий в молочной промышленности». М. 1970. - С. 55-56.

38. Звягинцев, В.И. Прикл. биохим. и микробиол. / В.И.Звягинцев. 1973. -С. 9,710.

39. Каменев, A.A. 10 лет Всес. научно-иссл. ин-та плодоовощной промышленности / под ред. A.A. Каменев, М.Ф. Листовничий // Юбил. сб. -Киев, 1940.- 160 с.

40. Камнев, А. Нежинское соленье и маринады / А. Камнев. М.: Мех.-техн. изд-во н.-т. отдела ВСНХ, 1918.

41. Канунникова, З.А. / З.А. Канунникова микробиол., 1954. - С. 23, 641.

42. Каплунова, Л. Промышленные методы производства продукции животноводства в Нечернозёмной зоне РСФСР/ Л. Каплунова // Сб. трудов под ред. Л. Каплунова. НИИСХ ЦРНЗ Москва, 1980. - С. 67 - 71.

43. Квасников, Е.И. / Е.И. Квасников, В.И. Суденко. Цитология и генетика, 1967а. - С. 1, 61.

44. Квасников, Е.И / Е.И. Квасников, А.Г. Гриневич, Е.А. Пантюхина -Труды ин-та микробиологии АНСССР, 1961. С. 10, 82

45. Квасников, Е.И. / Е.И Квасников. Изд-во АН У3ССР. - №3, 41. - 1951а.

46. Квасников, Е.И. / Е.И Квасников. Микробиол., 1952а. - С. 21, 160.

47. Квасников, Е.И. Бактериальные болезни крепких и десертных вин / Е.И. Квасников. Ташкент, Изд-во АН УзССР, 1949. - 201 с.

48. Квасников, Е.И. Биология молочнокислых бактерий / Е.И. Квасников. -Ташкент, Изд-во АН УзССР,1960. - 351 с.

49. Квасников, Е.И. Молочнокислые бактерии и пути их использования / Е.И. Квасников, O.A. Нестеренко. М.: Наука, 1975. - 384 с.

50. Квасников, Е.И., Суденко В.И.- МИсробюл.ж, 29,2,19676.

51. Кисленко, В.Н. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии / В.Н. Кисленко. М.: КолосС, 2005. - 232 е.: ил.

52. Климовский, И.И. / И.И. Климовский, В.И. Звягинцев, A.B. Гудков // Молочная промышленность. 1969. - №6. - С. - 10.

53. Климовский, И.И. Биохимические и микробиологические основы производства сыра / И.И. Климовский. М.: Пищевая промышленность, 1966. -с. 208.

54. Козьмина, Н.П. Биохимия хлебопечения / Н.П. Козьмина. М.: Пищевая промышленность, 1971. -439 с.

55. Королев, С.А. Основы технической микробиологии молочного дела / С.А. Королев. M.-JL: Сельхозгиз, 1932. - 592 с.

56. Королева, Н.С. / Н.С. Королева // Труды Всес. н.-и. ин-та молочн. промети. 1968. - Вып. 26. С. - 97.

57. Королева, Н.С. Выделение и сохранение свойств биологически активных ацидофильных бактерий: Автореф. на соискание ученой степени канд. биол. наук / Н.С. Королева. М., 1960. - 17 с.

58. Косой, В.Д. Контроль качества молочных продуктов методами физико-химической механики / В.Д. Косой, М.Ю. Меркулов, С.Б. Юдина. СПб.: ГИОРД, 2005.-208 е.: ил.

59. Красильников, H.A. Определитель бактерий и актиномицетов / H.A. Красильников. M.-JL: Изд-во АНСССР, 1949. - 830 с.

60. Красникова, JI.В. Биохимическая активность сухих концентратов молочнокислых бактерий, полученных методом непрерывного культивирования / JT.B. Красникова, и др.. // Прикл. биохимиямикробиология. - 1978. - Т. 14. - Вып.З. - С. 405 - 409.

61. Красникова, JI.B. Метаболизм молочнокислых бактерий / JI.B. Красникова, И.Е. Кострова, В.И. Шаробойко. М.:ЦНИТЭИ мясомолпром, 1980.-40 с.

62. Крусь, Г.Н., Храмцов А.Г., Волокитина З.В., Карпычев C.B. Технология молока и молочных продуктов / Г.Н. Крусь, А.Г. Храмцов, З.В. Волокитина, C.B. М.: КолосС, 2008. - 455 е.: ил.

63. Кугенев, В.П. Применение ацидофилина при выращивании молодняка / В.П. Кугенев // Молочное и мясное скотоводство. 1960. - № 3. - С. 24-26.

64. Кудрявцева, A.A. Лечебно профилактическое действие ацидофилина / A.A. Кудрявцева. 1937. - С. 162-164.

65. Кузнецов, В.Д. Микробиол. / В.Д. Кузнецов. 1957а. - С. 26, 367.

66. Кузнецов, В.Д. Микробиол. / В.Д. Кузнецов. 19576, С. 26, 481.

67. Кулев, Д.Х. Фосфаты, цитраты и лактаты в молочных продуктах / Д.Х. Кулев // Молочная промышленность. -2007. №10. - С. - 46.

68. Кухаркова, Л. Л. Европ. конгресс работников НИИ мясной промышленности, докл. 6 / Л.Л. Кухаркова, Е.М. Фрейдлин, З.Н. Кострулина, Л.А. Бушкова, Г.К. Еремина, A.A. Соколов // М. -1965.

69. Кухлинг, Э. Мясная индустрия СССР / Э. Кухлинг. 1963, 1965. - С. 5, 8.

70. Лабинская, A.C. Общая и санитарная микробиология с техникой микробиологических исследований: учебное пособие / A.C. Лабинская, Л.П. Блинкова, A.C. Ещина. М.: Медицина, 2004. - 576 е.: ил.

71. Леонович, В.В. Применение ацидофильного препарата в животноводстве / В.В. Леонович, М.С. Полонская // В книге использование микроорганизмов в сельском хозяйстве. Алма-Ата, 1961. - 380 с.

72. Леонович, В.В. Применение ацидофильных культур в животноводстве / В.В. Леонович, М.С. Полонская // Социалистическое жиовтноводство. -1950.-3 1.-С. 19,20.

73. Липинска, Е. Приспособление некоторых штаммов молочнокислых бактерий к низину / Е. Липинска, М. Стражалковска // В сб.: «XV Международный конгресс по молочному делу». М., 1961. - С.55-58.

74. Максимова, А.К. К вопросу изучения протеолитической активности молочнокислых стрептококков и палочек / А.К. Максимова // Труды ВНИМИ, 1968. Вып.26. - С.52-69.

75. Максимова, А.К. К вопросу интенсификации процесса производства кисломолочных продуктов. Труды Всес. н.-и. ин-та молочн. пром-сти / А.К. Максимова // 1970. Вып. 27. - С. 32-37.

76. Максимова, А.К. Протеолитическая активность в селекции молочнокислых стрептококков / Максимова А.К., Грудзинская Э.Е. // Тр. ВНИМИ, 1974. Вып. 33 - С.64-80.

77. Малахов, Т.И. Биологический препарат витамина В12 (ПАБК) и его применение в живоноводетве. Автореферат канд. дисс. / Т.И. Малахов. -Москва, 1963.-С. 11.

78. Малявин, А.Г. Об эффективности биологического препарата витамина В12 -ПАБК / А.Г. Малявин // Журн. Ветеринария. 1960. № 1. - С. 50-52.

79. Маршанин, В.П. Применение АБК в ветеринарии / В.П. Маршанин // Журн. ветеринария. 1958. - №4. - С. 66-67.

80. Машенцева, Н.Г. Функциональные стартовые культуры в мясной промышленности / Н.Г. Машенцева, В.В. Хорольский. М.: ДеЛи принт, 2008.-336 с.

81. Мельникова, Е.В. Разработка принципов подбора термофильных молочнокислых бактерий для симбиотических заквасок. Автореф. на соискание ученой степени канд. техн. наук / Е.В. Мельникова. М., 1973. -21с.

82. Михайлова, А.Е. Изучение роли молочнокислых батерий при посоле окороков. Автореф. канд. дисс. / А.Е. Михайлова. -М., 1968. -25с.

83. Михайлова, А.Е. Труды Всес. н.-и. ин-та мясной пром-сти /

84. A.Е.Михайлова, 1967.-С. 19, 117.

85. Михайлова, A.C. Труды Всес. н.-и. ин-та с. х. микробиол. / A.C. Михайлова, 1958.-С. 15, 192.

86. Мишустин, E.H., Трисвятский JI.A. Микробы и зерно / E.H. Мишустин, Л.А. Трисвятский. М., Изд-во АН СССР, 1963. - 292 с.

87. Мозгов, И.Е. Фармакологические стимуляторы в животноводстве / И.Е Мозгов. М.: 1964. - С. 34.

88. Насальская, Н.Е. Экспериментальное квашение огурцов чистыми культурами молочнокислых бактерий в заводских условиях / Н.Е. Насальская. Харьков - Киев.: Изд-во Наркомснаба УССР, 1934.

89. Непомняща, M.JI. Мкробюл. / M.JI Непомняща //. Ж. 1934. - №3-4. -С. 55.

90. Николаев, В.А. К микробиологии хлебных заквасок. Труды ВНИИХП /

91. B.А. Николаев // М.: 1932. - Вып. 1. - С.56.

92. Омелянский, B.JÏ. Избр. Труды Т.1, / B.JI. Омелянский // М.: Изд-во АН СССР, 1953а.-С. 501.

93. Омелянский, B.JI. Избр. Труды, Т.1, / В.Л. Омелянский // М.: Изд-во АН СССР, 19536.-С. 511.

94. Омелянский, В.Л. Избр. Труды, Т.2, / В.Л. Омелянский // М.: Изд-во АН СССР.- 1953в.-С. 279.

95. Орехова, И.С. Применение АБК при желудочно-кишечных заболеваниях молодняка с.-х. животных / И.С. Орехова. 1958. - С. 40, 41.

96. Остроумов, Л.А. Переработка сыворотки в низколактозные продукты / Л.А. Остроумов, С.Г. Козлов // Журн. молочная промышленность. -2006. -№6. С. 67-68.

97. Палагина, M.B. Напитки с рыбным белковым концентратом / М.В. Палагина, Ю.В. Приходько и др. // Журн. молочная промышленность. -2007. -№10.-С. 67-69.

98. Палладина, O.K. Биология возбудителей молочнокислого брожения / О.К Палладина. M.-JL: Пищепромиздат, 1941. - 192 с.

99. Перковец, М.В. Молочные продукты с инулином и олигофруктозой / М.В. Перковец // Журн. молочная промышленность. 2007. - №11. - С. 64-66.

100. Перова, П.В. Ацидофильно-бульонная культура АБК / П.В. Перова, Г.Я. Сергеева. 1952. - С. 59-62.

101. Подкопаев, В.М. Изучение кишечной микрофлоры телят и поросят, лечение диспепсии и обоснование профилактики / В.М. Подкопаев // В кн.: Материалы Всесоюзной конференции по болезням молодняка сельскохозяйственных животных и птиц. Мю, 1964. - С. 109-111.

102. Полонская, М.С. Антибиотические вещества ацидофильных бактерий / М.С Полонская // Микробиология. 1952. - Т. XXI. - вып.ХП. - С. 303-310.

103. Полонская, М.С. Антибиотические вещества ацидофильных бактерий / М.С. Полонская, В.В. Леонович, М.П. Бибердиева. Бюллетень научно-технической информации по сельскохозяйственной микробиологии, 1956, т.1.- С. 27- 29.

104. Полонская, М.С. Антибиотическое действие ацидофильных бактерий и их приживаемость в кишечнике / М.С. Полонская. В кн.: Микробиология на службе сельскому хозяйству. - М., 1959. - С. 175 -180.

105. Полонская, М.С. Концентрат бактериостатических веществ ацидофильных бактерий / М.С. Полонская, В.В. Леонович, М.П. Бибердиева. -В кн.: Доклады ВАСХНИЛ, 1953, 8. С. 21-25.

106. Пятницына, И.Н. Выделение молочнокислых стрептококков с низиноподобными свойствами. Труды Всес. н.-и. ин-та молочн. пром-сти /И.Н.Пятницына // 1968. Вып. 26. - С. 30-37.

107. Равич-Щербо, Ю.А. Труды Всес. н.-и. ин-та рыбного хозяйства и океанографии (ВНИРО) / Ю.А. Равич-Щербо, С.И. Иванова, 1952. С. 20, 266.

108. Речкин, С. А. Некоторые биохимические свойства ацидофильных культур и их применение в молочном деле: Автореф. кан. дис. / С. А. Речкин.- 1956.-21 с.

109. Рогов, И.А. Синбиотики в технологии продуктов питания / И.А. Рогов, Е.И.Титов, В.И. Ганина, Н.В. Нефедова, Г.В.Семенов, С.И. Рогов // Монография. М.: МГУПБ, 2006. - С. 218.

110. Рожкова, Т.В. Российский рынок заквасочных культур / Т.В. Рожкова // Журн. молочная промышленность. 2006. - № 3. - С. 23-25.

111. Романович, Т.Г. Антибиотические свойства молочнокислых бактерий / Т.Г. Романович // Журн. молочная промышленность. 1954. - №4. - С. 45^16.

112. Руш, К. Микробиологическая терапия: теоретические основы и практическое применение / К. Руш, Ф. Руш. М.: Арнебия, 2003. С. - 160.

113. Самойлов, В.А. Молочные продукты пробиотической направленности / В.А.Самойлов, П.Г. Нестеренко, O.A. Суюнчев // Журн. молочная промышленность. 2007. - №7. - С.45 - 46.

114. Селибер, Г.Л. Микробиол. / Г. Л. Селибер, А .Я. Пумпянский. 1959. - С. 28,287.

115. Сергеева, Т.Я. Применение биологического препарата витамина В12 в животноводстве / Т.Я. Сергеева, В.И. Пушкарева // Журн. ветеринария. 1959.- № 5. С. 29.

116. Скалон, И.С. / И.С.Скалон // Изв. Н.-И. ин-та им. П.Ф. Лесгафта, 1939. -С. 23.

117. Смирнов, A.M. Практикум по клинической диагностике внутренних незаразных болезней сельско-хозяйственных животных / A.M. Смирнов и др.. Ленинград: Колос, 1978. - 271 с.

118. Смирнова, И.А. Кисломолочные напитки с медом / И.А. Смирнова, H.A. Перова // Журн. молочная промышленность. 2007. - №10. - С. 76-77.

119. Соловьев, П.М. Выпаивание животным ацидофильной культуры / П.М. Соловьев, Т.Г. Кольцова // Сельское хозяйство Северо-Западной зоны. 1961. -№ 12. - С. 77-79.

120. Соловьева, Е.Е. Новая серия стабилизирующих систем «Гелеон» / Е.Е. Соловьева // Журн. молочная промышленность. 2007. -№11. - С. 40—41.

121. Сорокин, Ю.Ю. Исследование и выбор протеолитически активных штаммов молочнокислых бактерий для производства голландского сыра: Автореф. на соискание ученой степени канд. техн. наук / Ю.Ю Сорокин. -Вологда, 1967.-27 с.

122. Степаненко, П.П. Микробиология молока и молочных продуктов / П.П. Степаненко. М.: Сергиев Посад: ООО Все для вас - Подмосковье, 1999. - 415 с.

123. Степанова, Л.И. Справочник технолога молочного производства. Технология и рецептуры / Л.И. Степанова. Т.1. Цельно-молочные продукты. - 2-е изд. - СПб: ГИОРД, 2004. - 384 с.

124. Стоянов, Ив. В кн. «II конгресс по микробиол.» / Ив. Стоянов, М. Литвиненко // София, 1971. Ч. 4. - С. 165.

125. Сунгатулов, Н.И. Влияние кормогризина на кишечную микрофлору поросят и телят, его ростовой и лечебный эффект: Автореф. канд. дис. / Н.И. Сунгатулов. Казань, 1972.

126. Суслов, Н. / Н. Суслов // Журн. свиноводство. 1992. - № 2, 3. - С. 11 -12.

127. Сухова, Т.С. Влияние мезофильных молочнокислых бактерий на размножение кишечной палочки в молоке / Т.С. Сухова // Журн. молочная промышленность. 1971. - №6. - С. 24-26.

128. Твердохлеб, Г.В. Химия и физика молока и молочных продуктов / Г.В. Твердохлеб, Р.И. Раманаускас. М.:ДеЛипринт, 2006. -360 с.

129. Тевелевич, М.Б. Биологические свойства Str. lactis: Автореф. на соискание ученой степени канд. биол. наук. / М.Б.Тевелевич. Киев, 1961. -14 с.

130. Тепел, Я.С. Химия и физика молока / Я.С. Тепел. М.: Пищевая промышленность, 1979. - 623 с.

131. Тимошко М.А. Исследование взаимодействие бифидобактерий, молочнокислых бактерий и эшерихий в кишечнике с использованием гнотобиотических цыплят: Автореф. канд. дис. / М.А. Тимошко. Загорск, 1973.

132. Титоренко, Г.К. Сб. работ Всес. н.-и. ин-та плодоовощной промышленности за 1936 г. / Г.К. Титоренко. Киев, 1938.

133. Тменов, И.Д. Использование продуктов микробиологического синтеза в животноводстве / И.Д. Тменов, Б.Г. Цугкиев. Владикавказ, 1996. - С. 98 -109.

134. Тульчинский, М.Н. Бактерии кислого теста / М.Н. Тульчинский, З.И. Шмидт, И.С. Скалон. М. -JL: Пищепромизда, 1938. - 68 с.

135. Тульчинский, М.Н. Микробиол. / М.Н. Тульчинский, 1950. С. 19, 434.

136. Тутов, И.К. Основы биотехнологии ветеринарных препаратов: учеб. Пособие / И.К. Тутов, В.И. Ситьков. Ставрополь, 1997. - 253 с.

137. Уманский, М.С. Селективный липолиз в биотехнологии сыра / М.С Уманский. Барнаул, 2000. - 245 с.

138. Фокина, Н.З. Расчет рецептур кисломолочных напитков с учетом содержания жира и белка / Н.З. Фокина, Б.Н. Степанова // Журн. молочная промышленность. 2007. - №11. - С. - 22.

139. Фробишер, М. М. Основы микробиологии / М. М. Фробишер . М.: "Мир", 1965.-678 с.

140. Храмцов, А.Г. / А.Г. Храмцов, И.А. Евдокимов и др. // Журн. молочная промышленность. 2006. - №6. - С. 50-52.

141. Храмцов, А.Г. / Храмцов, А.Г., Емельянов С.А. и др. // Журн. молочная промышленность. 2006. - №2. - С. 18-21.

142. Цареградская, И.В. Подбор заквасок для творога: в сб.: "Основные направления селекции молочнокислых бактерий в молочной промышленности 7 И.В. Цареградская. М., 1970. - С. 51-54.

143. Цугкиев, Б.Г. Возрастная динамика нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта поросят и ее зависимость от фактора кормления / Б.Г. Цугкиев. Владикавказ: «Эра», 1996. - С. 84.

144. Шидловская, В.П. Ферменты молока / В.П. Шидловская. -М.:Агропромиздат, 1985. 152 с.

145. Шопмейер, Х.Х. Бродильные производства / Х.Х Шопмейер. М.: Пищепромиздат, 1959. - С. 1, 328.

146. Шугаевская, П.Г.: в сб. работ Всес. н.-и. ин-та плодоовощной пром-сти за 1937 г. / П.Г. Шугаевская. Киев, 1939. - 165 с.

147. Щедушнов, Е.В. / Е.В. Щедушнов, П.Ф. Дьяченко // Журн. молочная промышленность. 1972. - №9. - С. 13.

148. Эпштейн-Литвак, Р.В. Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника (Методические метериалы) / Р.В. Эпштейн-Литвак, Ф.Л. Вилыпанская. М., 1969. - С. 18-20.

149. Юргенсон, М.П. Биологические методы повышения качества хлеба / М.П. Юргенсон // Труды ВНИИХП. 1951. - Вып.4. - С. 9-13.

150. Abo-Elnaga, I.G. Zbl. Bakt. II. Abt. / I.G. Abo-Elnaga, O. Kandler. 1965a. -P. 119, 1.

151. Abo-Elnaga, I.G. Zbl. Bakt., II. Abt. / I.G. Abo-Elnaga, O. Kandler. 1965b. -P. 119, 117.

152. Axelsson, L. Lactic acid bacteria: Classification and Physiology. In Lactic acid bacteria. Microbiological and functional aspects. Edited by S. Salminen, A. von Wright & A. Ouwehand / L.Axelsson. New York: Marcel Dekker, Inc. - 2004. -P.l-66.

153. Barton-Wright, E.C. Microbiological assay of the vitamin В complex and amino acids / E.C. Barton-Wright. New York, 1952. - P. 12.

154. Bergey's manual of determinative bacteriology, By R.S. Breed Baltimore USA. 1957. - 1094 p.

155. Burkey, L.A. USDA BDI, Inf. / L.A. Burkey, J.T. Kroulik, M.P. Bryant,

156. H.G. Wiseman. -1953. P. 154.

157. Chander, H. Arch. Mikrobiol. / H. Chander, N.B. Chebbii, B. Ranganathan. -1973.-P. 92, 171.

158. Chfuvel, J. Les possibilities d'utilitsation du lactoserum pre concentre jar fe pors / J. Chfuvel. - Elevage Porcin, 1980. - P. 96, 23 - 26.

159. Citti, I.E. Comparison of slow and fast acid producing Streptococcus lactis /

160. E. Citti, W.E. Sandine, P.R. Elliker // "Dairy Sci". 1965. - V. 48. - №1. - P. 14 -18.

161. Costilow, R.N. Appl. Microbiol. / R.N. Costilow, F.W. Fabian. 1953. - P. 1, 314.

162. Cunningham, A. J. Dairy Res. / A. Cunningham, A.M. Smith. 1940. P. 11, 243.

163. Davis, G.H.G.-J.Gen. Microbiol. / Davis, G.H.G. 1964. - P. 34, 177.

164. Davis, G.H.G.-Lab.Practice / Davis, G.H.G.- 1959a. P. 8, 161.

165. Davis, J.G. The lactobacilli I. In'Trogress in industrial microbiology", 2. / J.G. Davis. - Heywood and Co. London, 1960. - P. 576.

166. Deibel, R.H. Appl. Microbiol. / R.H. Deibel, C.F. Niven. 1958. - P. 6, 323.

167. Frazier, W.C. Food Microbiology / W.C. Frazier. New York-Toronto-London, McGraw-Hill Book Company, INC. - 1958.

168. Fuller, R. Nutrition of Pigs and Poultry / R. Fuller. 1962. - P. 286 - 294.

169. Gaddi, A.A. Milk and Food Technol. / A.A. Gaddi, E.H. Marth. 1971. - P. 34, 124.

170. Garvie, E. Some observationsons on slow and fast acid producing variants of strains of Str. cremoris and Str. lactis used as cheese starter / E. Garvie // "Dairy Res." -1959. -V. 26. №3. - P.227-237.

171. Garvie, E.I. The genus Leuconostoc and its nomenclature / E.I. Garvie // "Dairy Res." 1960. - V. 27. - №2. - P.283-292.

172. Gemmell, M. Gen. Microbiol. / M. Gemmell, W.-J. Hodgkiss. 1964. - P. 35, 519.

173. Goldman, M. J.Bacteriol. / M. Goldman, R.H. Deibel, C.F. Niven. 1963. - P. 85, 1017.

174. Granwell, P. Nutrition Abstracts and Reviews / P. Granwell. 1968. - P. 38, 3,721-730.

175. Harrisson, A.P. J.Bacteriol. / A.P. Harrisson, P.A. Hansen. 1950a. - P. 59, 444.

176. Hays, G.L. Food Tech. Champaign / G.L. Hays, D.W. Reister. 1952. - P. 6, 386.

177. Henneberg, W. Gärungsbakteriologisches Praktikum, Betriebsuntersuchungen und Pilzkunde / W. Henneberg. Berlin. Paul Parev, 1909.

178. Herrmann, C. 1966. In "European Brewery convention, Proceedings of the congress" / C. Herrmann. Stockholm. Elsevier publishing Company. Amsterdam-London-New York, 1965.

179. Hill, J.R. Microbiology of pig and their environment in relation to weaning. / J.R. Hill, R. Kentworthy // «J.Apll. Bacteriol.». -1970. 33.2.299316.

180. Hofmann, K. J. Riol. Chem. / K. Hofmann, R.A. Lucas, S.M. Sax. 1952. - P. 195,473.

181. Hofmann, K. J. Riol. Chem. / K. Hofmann, S.M. Sax. 1953. - P. 205, 55.181. http://www.bacterio.cict.fr.

182. Hull, M.E. Studies of milk proteins. II. Colorimetric determination of the partial hydrolysis of the proteins in milk / M.E. Hull // "Dairy Sei". -1947, V.30. -№11.-P. 381-384.

183. Johnson, E.C. Appl. Microbiol / E.C. Johnson., S.F. Gilliland, M.L. Speck. -1971.-P.21,316.

184. Kandier O. Int. J. Syst. Bacteriol. / O. Kandier. 1970. - P. 20, 491.

185. Kavanagh, F. In "Analytical Microbiology" / F. Kavanagh. (Ed.) New York-London. Acad. Press, 1963a. P. 421.

186. Keddie, R.M. J. Appl. Bacteriol. / R.M. Keddie. 1959. - P. 22, 403.

187. Kitahara, K. J. Gen. Appl. Microbiol. / K. Kitahara, J. Suzuki. 1963. -P. 9, 59.

188. Knaut, T. Proteolytic properties of Lactobacilli / T. Knaut, H. Karnicka, I. Usaejwiez // «XVII Intern. Dairy Congr.» München. Sec. D. 1966. - P. 515 - 522.

189. Kodama, R. Dairy Sei. Abstr. / R. Kodama. 1953. - P. 15, 51.

190. Kornchild, H. Process of making sausage / H. Kornchild, R.H. Olsen (Dairy Technicks Inc.). 1971.

191. Kundrat, W. Zbl. Bakt., II. Abt. / W. Kundrat. 1958. - P. 111, 249.

192. Langston, C. J. Bacteriol. C.W. Langston, J. Gutierrez, C. Bouma. - 1960a. -P. 80, 693.

193. Langston, C. J. Dairy Sei. / C.W. Langston, C. Bouma, R.M. Conner. 1962. -P. 45,618.

194. Langston, C. J. Dairy Sei. / C.W. Langston, C. Bouma. 1960b. - P. 43, 1575.

195. Lund, D. J. Gen. Microbiol. / D.Lund. 1967. - P. 49, 67.

196. Mann, S.O. J. Gen. Microbiol. / S.O. Mann, A.E. Oxford. 1954. - P. 11, 83.

197. Mattick, A. Lancet. / A. Mattick, A. Hirsch. 1947. - P. 5, 253.

198. Mattick, A. Nature / A. Mattick, A. Hirsch. №3919. - 1944. - P. 557.

199. Mc Donald, I.J. J. Gen. Microbiol. / Mc Donald I.J. 1971. - P. 17, 897.

200. Meyer, F. Z. Krafttutter / F. Z. Meyer. 1968. - P. 12, 588.

201. Miller, I. Eiweisabbau und Anreicherung freier Aminosäuren durch Milchsäurebakterien in Milch. II. Die Anreicherung von fleier Aminosäuren durch Thermobakterien / I. Miller, O. Kandier // "Milchwissenschaft". H. 22. - №8. -1967. -S. 469-482.

202. Morishita, T. Microbiol. / T. Morishita, J. Jap. 1971. -P. 15, 531.

203. Niven, C.F. Food Manufacture / C.F. Niven. 1953. - P. 28, 401.

204. Orillo, C.A. Appl. Microbiol. / C.A. Orillo, C.S. Pederson. 1968. - P. 16, 1669.

205. Orla-Jensen, S. The lactic acid bacteria / S. Orla-Jensen. Copenhagen, Andr. Fred. Host and Son, 1919. - pp. 1-196.

206. Orla-Jensen, S. The lactic acid bacteria. 2-d ed., Kobenhavn, I Komission hos Ejnar Munksgaard / S. Orla-Jensen. 1942.

207. Oxford, A.E. Biochem. J. / A.E. Oxford. -1944. P. 38, 178.

208. Pederson, C.S. Appl. Microbiol. / C.S. Pederson, M.N. Albury. 1956. - P. 4, 259.

209. Pederson, C.S. J. Bacteriol. / C.S. Pederson, M.N. Albury. 1955. - P. 70, 702.

210. Pederson, C.S. New York State Agric / C.S. Pederson, L. Ward. Exptl Sta, Tech. Bull., 1949. - № 288. - P. 29.

211. Pederson, C.S. New York State Agric. / C.S. Pederson, M.N. Albury. Exptl Sta, Tech. Bull., 1950. -№ 744. - P. 31.

212. Pelshenke, P. Vorratspflege und Lebensmittelforschung, II / P. Pelshenke, E. Weimershaus, J. Svenson. 1939. - P. 591.

213. Rapp M. Milchwissenschaft. / M. Rapp. 1969. - P. 24, 208.

214. Reiter, B. J. Appl. Bacteriol. / B. Reiter, M.E. Sharpe. 1971. - P. 34, 63.

215. Reuter, G. Fleischwirtschaftt / G. Reuter. 1972. - P. 52, 465.

216. Rogosa M., Sharpe M.E. An approach to the classification of the lactobacilli / M. Rogosa, M.E. Sharpe // "Appl. Bacter.". 1959. - V. 22. - № 3. - P. 329 -340.

217. Rogosa, M. J. Bacteriol / M. Rogosa, R.F. Wiseman, J. A. Mitchell, M.N. Disraely, A.J. Beaman. 1953. - P. 65, 681.

218. Schormüller, J. Nahrung / J. Schormüller, M. Schilling. 1961. - P. 5, 18.

219. Schills, A. Die Bakterienflora des Vollkornschrotsauerteiges / A. Schuls. -Vorratspflege und Lebensmittelforschung, 1941. IV. - P. 74.

220. Seelemann, M. Biologie der Streptokokken / M. Seelemann Nürenberg Verlag Hans Carl, 1954. 525 S.

221. Sharpe, M.E. J. Gen. Microbiol. / M.E. Sharpe, M. J. Latham, E.A. Garvie, J. Zirngibl, O. Kandier. 1973. - P. 77, 37.

222. Shockman, G. D. In "Analytical microbiology". F. Kavanagh (Ed.) / G. D. Shockman. New York-London, Acad. Press, 1963. - P. 567.

223. Snell, E.E. In "Vitamin methods", V. I. P. György (Ed.) / E.E. Snell. New York. Acad. Press, 1950. -P. 327-505.

224. Spicher, G. Brot und Gebäck. Spicher G. 1957. - P. 9, 196.

225. Tewari, H.K. Indian J. Microbiol. / H.K. Tewari, S.R. Vyas. 1970. - P. 10, 69.

226. Tewari, H.K. J. Res. / H.K. Tewari, S.R. Vyas. 1971. - P. 8, 460.

227. Tewari, H.K. J. Res. / H.K. Tewari, S.R. Vyas. 1972. - P. 9, 80.

228. Thornley, M.J. J. Appl. Bacteriol. / MJ. Thornley, M.E Sharpe. 1959. - P. 22, 368.

229. Tittsler, R.P. Bacteriol. Revs. / R.P. Tittsler, C.S. Pederson, E.E. Snell, D. Hendlin, C.F. Niven. 1952. - P. 16, 227.

230. Van der Zant, W.C. Proteolysis by Str.lactis grown in milk with and without controlled pH / W.C. Van der Zant, F.E Nelson // "Dairy Sei." 1953. - V.36. -№10.-P. 1104-1111.

231. Vankova, J. Nature / J. Vankova. 1957. - P. 179, 204.

232. Vaughh, R. H. Calif. Agr. / R. H. Vaughh, H.C. Douglas, J.R. Gilliland. -Exptl Sta. Bull, 1943. -P. 678.

233. Vincent, J.G. J. Bacteriol. / J.G. Vincent, R.C. Veomett, R.F. Rilley. 1959. -P. 78, 477.

234. Watson, S.A. Cereal Chemistry / S.A. Watson, Y. Hirata, C.B. Williams. -1955.-P. 32,382.

235. Weixl-Hofmann, H. Milchwiss. Ber. / H. Weixl-Hofmann. 1958. - P. 8, 57.

236. Williamson, W.T. Extracellular proteinase of Streptococcus lactis / W.T. Williamson, S.B. Tove, M.L. Speck // " Bacteriology". 1964, 87. - №1. - P. 49 -53.

237. Williamson, W.T. Proteolysis and curd tension in milk associated starter culture growth / W.T. Williamson, M.L. Speck // "Dairy Sei." 1962. - V.54. -№2.-P. 164- 169.

238. Zant, W.C. van der J. Dairy Sei. / W.C. van der Zant, F.E. Nelson. 1954. -P. 37, 795.

Информация о работе

Рамонова, Элла Викторовна
кандидата биологических наук
Владикавказ, 2011
ВАК 03.02.14

Диссертация

Выделение и идентификация местных штаммов молочнокислых микроорганизмов и их использование в качестве пробиотиков - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы